JP2023176574A

JP2023176574A - アミド結合の生成方法

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Publication number: JP2023176574A
Application number: JP2022088924A
Authority: JP
Inventors: 雄二郎林; Yujiro Hayashi; 小玲王; Xiaoling Wang
Original assignee: Tohoku University NUC
Current assignee: Tohoku University NUC
Priority date: 2022-05-31
Filing date: 2022-05-31
Publication date: 2023-12-13

Abstract

【課題】ペプチドやタンパク質のコンフォメーション、生物学的活性、薬学的プロファイルを改変させうる、立体的に混みあったペプチドの合成にも使用し得るアミド結合の生成方法、特にα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成に資するアミド結合の生成方法を提供する。【解決手段】特定の化学構造を有するシアニド化合物と、特定の化学構造を有するシステイン誘導体とを反応させ、前記シアニド化合物に由来するα，α－ジ置換アミノ酸と、前記システイン誘導体に由来するＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合を有するペプチド化合物を製造する、アミド結合の生成方法。【選択図】なし

Description

本発明は、アミド結合の生成方法に関する。

アミノ酸同士がペプチド結合を介して連結されたペプチドやタンパク質は、学術的にも産業的にも多くの分野で注目されている。ペプチドやタンパク質において、例えば、コンフォメーション、生物学的活性、薬学的プロファイルを改変させるツールとして、α，α－ジ置換アミノ酸や、Ｎ－置換アミノ酸が、通常のアミノ酸骨格の中に導入されることがある。ペプチドやタンパク質におけるα，α－ジ置換アミノ酸や、Ｎ－置換アミノ酸の導入に非常に大きな興味がもたれる一方、これらの立体的に混みあったペプチドの合成法はあまり知られていない。

立体的に混みあったペプチドの合成法、特にα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成としては以下の２法が知られている。

１）Ｓｃｈａｆｍｅｉｓｔｅｒ法（非特許文献１）

２）Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ法（非特許文献２）

ところで、比較的大きな分子量を有するオリゴペプチドとオリゴペプチドとの間におけるアミド結合生成では、官能基同士の望まない相互作用が増えるとともに、本来の反応点がオリゴペプチドの立体構造の内部に入り込み、アミド結合生成の反応性が低下することが広く知られている。すなわち、比較的大きな分子量を有するオリゴペプチド間では、アミド結合生成が容易ではない。このような不利なアミド結合の生成方法として、縮合剤を用いずに、水系の溶媒で進行するネイティブ・ケミカル・ライゲーション（Native Chemical Ligation）法が知られている。
具体的には、Ｃ末端にチオエステルを持つペプチドと、Ｎ末端に保護されていないシステインを持つペプチド間でアミド結合を生成させ、結合部（Ligation site）にシステイン残基を有するペプチドを製造することができる（非特許文献３）。

Ｅ．Ｓｃｈａｆｍｅｉｓｔｅｒｅｔａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００８、１３０、１４３８２Ｓ．Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙｅｔａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００９、１３１、１２９２４Ｖ．Ａｇｏｕｒｉｄａｓｅｔａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、２０１９、１１９、７３２８－７４４３

立体的に混みあったペプチドの合成法を開示する非特許文献１及び非特許文献２に記載された方法は、いずれの方法でも、反応を進行させるために、一方のアミノ酸に保護されていないカルボキシル基が必要であり、例えば、オリゴペプチド間でのアミド結合生成には応用できないなど、十分な汎用性があるとは言い難い。

比較的大きな分子量を有するオリゴペプチド間におけるアミド結合生成に資する非特許文献３に記載された方法は、チオエステルを持つペプチドのＣ末端がプロリン、イソロイシン、バリンである場合に、システインを持つペプチドのシステイン残基との反応が非常に遅いという問題を有することが明らかとなっている（非特許文献３のFigure 47）。

また、アミド結合生成において、反応によっては反応の進行に必要な反応中間体の形成が、アミド結合生成部位の近傍におけるアミノ酸α－位のラセミ化を起こす場合がある。化合物の立体化学が生物活性に大きな影響を及ぼすことがあることは非常によく知られたことであり、化学反応における立体化学の制御は、アミド結合生成においても重要な課題である。

上記の課題に鑑み、本発明の第一の態様においては、ペプチドやタンパク質のコンフォメーション、生物学的活性、薬学的プロファイルを改変させうる、立体的に混みあったペプチドの合成にも使用し得るアミド結合の生成方法、特にα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成に資するアミド結合の生成方法を提供する。
また、本発明の第二の態様においては、アミド結合生成部位の近傍におけるアミノ酸α－位のラセミ化を抑制できるアミド結合の生成方法を提供する。

本発明は、以下の要旨を有する。
［１］式（１）

（式中、Ｒ^１Ａは有機基を示し；
Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示す。）
で表されるシアニド化合物と、式（２）

（式中、Ｒ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。）
で表されるシステイン誘導体とを反応させ、式（３）

（式中、Ｒ^１Ａは有機基を示し；
Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。）
で表されるペプチド化合物を製造する、アミド結合の生成方法。

［２］Ｒ^１Ｂは、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、Ｃ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示す、［１］のアミド結合の生成方法。
［３］Ｒ^１Ｂは、置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^１Ｃは、Ｃ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、一方が水素原子、他方が有機基を示す、［２］のアミド結合の生成方法。
［４］Ｒ^１Ｂは、メチル、エチル、若しくはベンジルを示し；
Ｒ^１Ｃは、メチルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、Ｃ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示し；
Ｒ^２Ａは置換されていてもよいメチル、若しくはエチルを示す、［３］のアミド結合の生成方法。

［５］Ｒ^１Ｂは、水素原子、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは水素原子を示す、［１］のアミド結合の生成方法。
［６］Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、一方が水素原子、他方が有機基を示す、［５］のアミド結合の生成方法。

［７］前記有機基が、それぞれ同一又は異なって、シアニド基及びメルカプト基を有さない有機基である、［１］～［６］のいずれかのアミド結合の生成方法。
［８］前記有機基が、それぞれ同一又は異なって、シアニド基及びメルカプト基を有さないアミノ酸残基、若しくはシアニド基及びメルカプト基を有さない２～１００個のアミノ酸が連結したペプチド残基である、［７］のアミド結合の生成方法。

本発明の第一の態様におけるアミド結合の生成方法は、ペプチドやタンパク質のコンフォメーション、生物学的活性、薬学的プロファイルを改変させうる、立体的に混みあったペプチドの合成にも使用し得る。特にα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間のアミド結合生成にも使用し得る。
また、本発明の第二の態様におけるアミド結合の生成方法によれば、アミド結合生成部位の近傍におけるアミノ酸α－位のラセミ化を抑制できる。

以下、本発明の実施の形態を具体的に説明するが、本発明は、以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変更して実施できる。

本明細書においては、以下の用語は以下の意味を示す。
「Ｃ_１－４アルキル」とは、炭素数１～４の直鎖状若しくは分枝状のアルキルを意味する。例えば、メチル、エチル、プロパン－１－イル、プロパン－２－イル、ブタン－１－イル、ブタン－２－イル、２－メチルプロパン－２－イルが挙げられる。
「Ｃ_１－４アルキル」において許容される置換基としては、例えば、ヒドロキシル、－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、アミノ、－ＮＨ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１－４アルキル）－（Ｃ_１－４アルキル）、ニトロ、ハロゲン、オキソ、フェニル（メチル、エチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、及びハロゲンからなる群より選択される１～３の基で置換されていてもよい。）が挙げられ、これらの同一又は異なる１以上の基で置換されていてもよい。ある態様としては、フェニル、メトキシ、フルオロ、クロロが挙げられ、別の態様としては、フェニルが挙げられる。

「Ｃ_３－８環状基」とは、炭素数３～８の飽和若しくは不飽和の環状基を意味し、環状基の環を形成する炭素原子は一部が酸素原子、硫黄原子、窒素原子で置き換えられていてもよい。例えば、シクロプロパン－１，１－ジイル、シクロブタン－１，１－ジイル、シクロペンタン－１，１－ジイル、シクロペンテン－３，３－ジイル、シクロヘキサン－１，１－ジイル、シクロヘキセン－３，３－ジイル、シクロヘプタン－１，１－ジイル、シクロオクタン－１，１－ジイル、オキシラン－２，２－ジイル、オキセタン－３，３－ジイル、テトラヒドロフラン－３，３－ジイル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４，４－ジイル、ジヒドロ－２Ｈ－ピラン－４，４－ジイル、１，３－ジオキサン－２，２－ジイル、テトラヒドロチオフェン－３，３－ジイル、テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４，４－ジイル、ピロリジン－３，３－ジイル、ピペリジン－４，４－ジイルが挙げられる。
「Ｃ_３－８環状基」において許容される置換基としては、例えば、Ｃ_１－４アルキル、ヒドロキシル、－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、アミノ、－ＮＨ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１－４アルキル）－（Ｃ_１－４アルキル）、カルボキシル、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ベンジル（メチル、エチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、及びハロゲンからなる群より選択される１～３の基で置換されていてもよい。））、カルバモイル、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｃ_１－４アルキル）－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－４アルキル）、ニトロ、ハロゲン、オキソ、フェニル（メチル、エチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、及びハロゲンからなる群より選択される１～３の基で置換されていてもよい。）が挙げられ、これらの同一又は異なる１以上の基で置換されていてもよい。ある態様としては、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（フェニル）、メチル、ヒドロキシル、メトキシ、フルオロ、クロロが挙げられ、別の態様としては、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ベンジル）が挙げられる。

「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードを意味する。

＜アミド結合の生成方法＞
本発明のアミド結合の生成方法は、式（１）で表されるシアニド化合物と、式（２）で表されるシステイン誘導体とを反応させ、式（３）で表されるペプチド化合物を製造する、アミド結合の生成方法、あるいは、式（１）で表されるシアニド化合物と、式（２）で表されるシステイン誘導体とを反応させ、式（３）で表されるペプチド化合物を製造する方法である。
本明細書において、「式（１）で表されるシアニド化合物」を「化合物（１）」若しくは「シアニド化合物（１）」とも言い、「式（２）で表されるシステイン誘導体」を「化合物（２）」若しくは「システイン誘導体（２）」とも言い、「式（３）で表されるペプチド化合物」を「化合物（３）」若しくは「ペプチド化合物（３）」とも言う。
本明細書において化学式中に立体化学が表示されている場合、特定の言及がなければ相対配置を示すものと理解される。

本発明のアミド結合の生成方法おけるペプチド化合物（３）の製造（以下、単に「本発明の方法」とも言う。）においては、リン化合物の存在下で反応を行ってもよい。特に、後述する本発明の第一の態様においてリン化合物の存在下で行うことが好ましい。
本発明の方法においては、反応の進行にリン化合物が必須というものではないが、系中に存在しうる酸素によって、メルカプト基を有するシステイン誘導体が酸化的に２量化し、ジスルフィドを与える場合がある。リン化合物が存在することにより、副生したジスルフィドが還元され、システイン誘導体が再生するため、望む反応がスムーズに進行しやすく、反応の収率を上げやすい。

リン化合物としてはホスフィン化合物が好ましく、上述のように副生するジスルフィドを還元するために用いられるホスフィン化合物を用いることができる。例えば、トリブチルホスフィンのようなトリアルキルホスフィン、トリフェニルホスフィンのようなトリアリールホスフィン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、トリス（３－ヒドロキシプロピル）ホスフィン）が挙げられ、トリブチルホスフィン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン、トリス（３－ヒドロキシプロピル）ホスフィン）が好ましく、トリブチルホスフィンがより好ましい。

本発明の方法においてリン化合物を用いる場合、リン化合物の使用量はシアニド化合物（１）の１００モル％に対して、０モル％超５００モル％以下が好ましく、１０～２００モル％がより好ましく、３０～１２０モル％がさらに好ましく、４０～１１０モル％が特に好ましい。

本発明の方法においては、反応中におけるシステイン誘導体のメルカプト基の酸化を防止するため、酸化防止剤の存在下で反応を行ってもよい。特に、後述する本発明の第一の態様において酸化防止剤の存在下で行うことが好ましい。
本発明の方法においては、反応の進行に酸化防止剤が必須というものではないが、酸化防止剤が存在することにより、システイン誘導体のメルカプト基の酸化が抑制され、望む反応がスムーズに進行しやすく、反応の収率を上げやすい。

酸化防止剤としては、例えば、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸、エリソルビン酸、トコフェノール、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、葉酸、リノール酸、リノレン酸が挙げられ、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸、エリソルビン酸が好ましく、アスコルビン酸がより好ましい。

本発明の方法において酸化防止剤を用いる場合、酸化防止剤の使用量はシアニド化合物（１）の１００モル％に対して、０モル％超４００モル％以下が好ましく、５０～３００モル％がより好ましく、７０～２００モル％がさらに好ましく、１００～１５０モル％がことさら好ましく、１２０～１４０モル％が特に好ましい。

後述する本発明の第一の態様においては、リン化合物及び／又は酸化防止剤を用いることが好ましく、リン化合物及び酸化防止剤を用いることがより好ましく、リン化合物としてのトリブチルホスフィン及び酸化防止剤としてのアスコルビン酸を用いることがさらに好ましい。

原料として使用するシアニド化合物（１）やシステイン誘導体（２）は、それらが有する官能基によって、酸や塩基との塩として用いることもできる。その場合には、反応系中において酸や塩基との塩を中和するため、塩基や酸を加えてもよい。例えば、システイン誘導体（２）として塩酸塩を用いることができ、反応系中において中和するための塩基、例えば炭酸水素ナトリウムをおおよそ等モル量加えてもよい。

本発明の方法における反応温度は、例えば、シアニド化合物（１）及びシステイン誘導体（２）の各置換基の性質、用いる反応溶媒、反応時間によって選択すればよい。例えば、２０～７０℃であり、０～１２０℃であってもよい。
なお、反応温度によっては、生成したペプチド化合物（３）のシステイン残基が有するメルカプト基と原料であるシアニド化合物（１）が反応して生成する副生成物が生じる割合が増えることがある。そのため、反応が十分に進行する温度範囲内で、反応温度を上げすぎないことが有利な場合がある。
本発明の方法における反応時間は、例えば、シアニド化合物（１）及びシステイン誘導体（２）の各置換基の性質、用いる反応溶媒、反応温度によって選択すればよい。例えば、１０時間～１０日間であり、１分間～２０日間であってもよい。

本発明の方法に使用される反応溶媒としては、シアニド化合物（１）とシステイン化合物（２）との間でのアミド結合生成を阻害しない限り特に制限されない。
溶媒としては水を用いることが好ましく、シアニド化合物（１）及びシステイン誘導体（２）の水溶解性を考慮して、さらに有機溶媒を併用してもよい。併用し得る有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等のアルコール類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒；が挙げられ、アルコール系溶媒が好ましい。アルコール系溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノールが好ましく、メタノール、エタノールがより好ましく、メタノールがさらに好ましい。

本発明の方法に使用される反応溶媒としての水としては、反応系中のｐＨの急激な変化を防止するため、水系緩衝液を用いてもよい。特に、後述する本発明の第一の態様において水系緩衝液を反応溶媒として用いることが好ましい。
水系緩衝液としては、系中における望むｐＨに応じて、例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリスヒドロキシメチルアミノメタン緩衝液を用いることができ、リン酸緩衝液が好ましく、特にｐＨ７．２の０．２Ｍリン酸緩衝液を好ましく用いることができる。

本発明の方法に使用される反応溶媒として、水若しくは水系緩衝液とアルコール系溶媒を併用することが好ましく、水若しくは水系緩衝液とメタノールを併用することがより好ましい。本発明の第一の態様においては、水系緩衝液とアルコール系溶媒を併用することが好ましい。本発明の第二の態様においては、水とアルコール系溶媒を併用することが好ましい。
水若しくは水系緩衝液とアルコール系溶媒を併用する場合、その混合割合は、「水若しくは水系緩衝液の体積／アルコール系溶媒の体積」として、１／２０～２０／１が好ましく、１／１０～１０／１がより好ましく、１／５～５／１がさらに好ましく、１／３～１／１が特に好ましい。

本発明の方法に使用される反応溶媒の量は、十分な反応進行が確保される濃度となるように選択すればよい。例えば、系中のシアニド化合物（１）の濃度が０．００１～２Ｍとなるように調整されることが好ましく、０．０２～１Ｍがより好ましく、０．０４～０．６Ｍがさらに好ましく、０．０６～０．３Ｍがことさら好ましく、０．０８～０．１２Ｍが特に好ましい。

なお、反応系中のｐＨの急激な変化を防止するため、水系緩衝液を用いてもよい旨上述したが、この反応系中のｐＨの急激な変化の一つの原因として、反応の結果として生成する青酸（ＨＣＮ）によるｐＨの低下が考えられる。従って、このｐＨの低下を抑制するため、水系緩衝液の使用とともに、あるいは水系緩衝液の使用に代えて、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基、トリエチルアミンやジイソプロピルエチルアミン等の３級アミンを含む有機塩基の存在下で反応を行ってもよい。

シアニド化合物（１）及びシステイン誘導体（２）は、当業者に知られた反応、あるいは後述する製造例に記載された方法を参照して製造することができる。

本発明の方法においては、システイン誘導体（２）を用いてアミド結合を生成するため、生成したアミド結合部にシステイン残基を有するペプチド化合物（３）が製造される。システイン残基のメルカプト基は、常法に従って除去し、生成したアミド結合部にアラニン残基を有するペプチド化合物に変換することができる。例えば、Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 9248-9252や、Nat. Nanotechnol. 2018, 13, 381-385を参照し、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンを用いる方法を適用して、ペプチド化合物（３）のシステイン残基のメルカプト基を除去して、アラニン残基を有するペプチド化合物を製造することができる。

［第一の態様］
本発明の第一の態様は、ペプチドやタンパク質のコンフォメーション、生物学的活性、薬学的プロファイルを改変させうる、立体的に混みあったペプチドの製造に資するアミド結合の生成方法、特にα，α－ジ置換アミノ酸（特に、α，α－ジ置換－α－アミノ酸）とＮ－置換アミノ酸（Ｎ－置換システイン誘導体）との間でのアミド結合生成に資するアミド結合の生成方法である。
シアニド化合物（１）とシステイン誘導体（２）とを反応させ、ペプチド化合物（３）を製造できる。

本態様のアミド結合の生成方法は、前述のように特にα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成に資する。
本態様のアミド結合の生成方法は、α，α－ジ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成の他、α，α－ジ置換アミノ酸及びＮ－置換アミノ酸の一方又は両方を、それぞれグリシン若しくはα－モノ置換アミノ酸（例えば、グリシンを除く天然アミノ酸）及びＮ－無置換アミノ酸の一方又は両方に代えたアミド結合の生成に用いてもよい。ただし、グリシン若しくはα－モノ置換アミノ酸とＮ－置換アミノ酸との間でのアミド結合生成、及びα，α－ジ置換アミノ酸とＮ－無置換アミノ酸との間でのアミド結合生成においては、望む反応がスムーズに進行しない場合がある。

本態様においては、シアニド化合物としてα，α－ジ置換アミノ酸に相当するシアニド化合物を、システイン誘導体としてＮ－置換アミノ酸に相当するシステイン誘導体を用いることが好ましい。
すなわち、シアニド化合物として、Ｒ^１Ｂが、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し、Ｒ^１Ｃが、Ｃ_１－４アルキルを示し、あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示すシアニド化合物（１）を、システイン誘導体として、Ｒ^２Ａが置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示すシステイン誘導体（２）を用いることが好ましい。

（シアニド化合物）
本態様においては、ペプチド化合物（３）の製造のための原料として、シアニド化合物（１）を用いる。

（Ｒ^１Ａ）
シアニド化合物（１）におけるＲ^１Ａは有機基を示す。
有機基としては、化学構造上矛盾のない態様であれば特に制限されない。
本発明の方法は、シアニド化合物（１）が有するシアニド基と、システイン誘導体（２）が有するメルカプト基との高い反応性を利用している。そのため、例えば、水酸基やアミノ基等の活性水素原子を有する官能基がシアニド化合物（１）又はシステイン誘導体（２）の化学構造中に存在しても、本発明のアミド結合の生成に際して、それらの官能基は化学的に保護されても、保護されていなくてもよい。その一方で、シアニド化合物（１）の必須官能基としての（式（１）に表れている）シアニド基以外のシアニド基や、システイン誘導体（２）の必須官能基としての（式（２）に表れている）メルカプト基以外のメルカプト基が、シアニド化合物（１）又はシステイン誘導体（２）の化学構造中に存在しなければ、本発明の方法におけるアミド結合生成の反応系中が複雑になる恐れが低減されるため好ましい。
Ｒ^１Ａにおける有機基は、シアニド基及びメルカプト基を有さない有機基であることが好ましい。

Ｒ^１Ａにおける有機基は、化学構造上矛盾のない態様であれば特に制限されないが、その一方で、アミノ酸同士がペプチド結合を介して連結されたペプチドやタンパク質の学術的、産業的興味から、Ｒ^１Ａにおける有機基は、アミノ酸残基若しくは２～１００個のアミノ酸が連結したペプチド残基、好ましくはアミノ酸残基若しくは２～５０個のアミノ酸が連結したペプチド残基、より好ましくはアミノ酸残基若しくは２～３０個のアミノ酸が連結したペプチド残基、さらに好ましくはアミノ酸残基若しくは２～１０個のアミノ酸が連結したペプチド残基、特に好ましくはアミノ酸残基若しくは２～５個のアミノ酸が連結したペプチド残基であってもよい。アミノ酸残基は、例えば、アミノ酸誘導体残基やアミノ酸模倣物残基であってもよく、ペプチド残基は、例えば、連結するアミノ酸の一部又は全部がアミノ酸誘導体やアミノ酸模倣物に置き換えられていてもよい。
ペプチド残基において連結する複数のアミノ酸は、アミド結合を介して連結していることが好ましく、アミド結合以外の結合、例えば炭素－炭素二重結合やスルホンアミド結合、リン酸アミド結合等のペプチドミメティックスで用いられる結合様式を有していてもよい。
ペプチド残基において連結する複数のアミノ酸は、同一種類のアミノ酸残基であっても、それぞれ異なる種類のアミノ酸であってもよい。

それぞれのアミノ酸が有する官能基はペプチド合成の分野で常用される保護基によって保護されていてもよい。このような保護基としては、例えば、ウッツ（Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ）およびグリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、「Ｇｒｅｅｎｅ‘ｓＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（第４版、２００６年）」に記載の保護基を挙げることができ、反応条件に応じて適宜選択して用いればよい。保護基は必要に応じて、所望の段階で除去することができる。

ここでアミノ酸とは、アミノ基とカルボキシル基、及びこれらの基を連結する炭素鎖と、炭素鎖に置換する側鎖を有する化合物を意味し、α－アミノ酸に限られるものではない。なお、ここでは、プロリンのようなイミノ酸も含めてアミノ酸と言うものとする。

（Ｒ^１Ｂ、Ｒ^１Ｃ、Ｒ^１Ｄ）
シアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示す。
本態様におけるシアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｂが、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し、Ｒ^１Ｃが、Ｃ_１－４アルキルを示し、あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示すことが好ましく；
Ｒ^１Ｂが、置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し、Ｒ^１Ｃが、Ｃ_１－４アルキルを示し、あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示すことがより好ましく；
Ｒ^１Ｂが、置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し、Ｒ^１Ｃが、Ｃ_１－４アルキルを示し、あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し、Ｒ^１Ｄが、水素原子を示すこと（即ち、Ｒ^１Ｂが、Ｒ^１Ｄ及び隣接する窒素原子及び炭素原子とともに一体となってアゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を形成しないこと）がさらに好ましい。

Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示さない場合、Ｒ^１Ｂは、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖であることが好ましく；置換されていてもよいＣ_１－４アルキルであることがより好ましい。
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示さない場合、Ｒ^１Ｃは、Ｃ_１－４アルキルであることが好ましい。

シアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示す。Ｒ^１Ｄが、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、ピロリジン環を示すとは、これらの原子団がプロリンの部分構造を形成することを意味する。
本態様におけるシアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｄが、水素原子を示すことが好ましい。

Ｒ^１Ｂにおけるアミノ酸側鎖とは、アミノ酸におけるアミノ基とカルボキシル基とを連結する炭素鎖に置換する側鎖を意味し、例えば、α－アミノ酸であれば、α－アミノ酸のα－位の置換基を意味する（但し、グリシンを除く。）。
具体的には、天然アミノ酸の側鎖であってよく、さらに具体的には、例えば、アラニンにおけるメチル、バリンにおけるイソプロピル、ロイシンにおけるイソブチル、イソロイシンにおけるｓｅｃ－ブチル、フェニルアラニンにおけるベンジル、セリンにおけるヒドロキシメチル、スレオニンにおける１－ヒドロキシエチル、チロシンにおける４－ヒドロキシベンジル、アスパラギン酸におけるカルボキシルメチル、グルタミン酸における２－カルボキシルエチル、アスパラギンにおけるカルバモイルメチル、グルタミンにおける２－カルバモイルエチル、メチオニンにおける２－メチルスルファニルエチル、ヒスチジンにおけるイミダゾール－５－イルメチル、リジンにおける４－アミノブチル、アルギニンにおける３－グアニジノプロピル、トリプトファンにおけるインドール－３－イルメチルが挙げられる。

前述の通り、本発明の方法は、シアニド化合物（１）が有するシアニド基と、システイン誘導体（２）が有するメルカプト基との高い反応性を利用している。そのため、例えば、水酸基やアミノ基等の活性水素原子を有する官能基がシアニド化合物（１）又はシステイン誘導体（２）の化学構造中に存在しても、本発明のアミド結合の生成に際して、それらの官能基は化学的に保護されても、保護されていなくてもよい。その一方で、シアニド化合物（１）の必須官能基としての（構造式（１）に表れている）シアニド基以外のシアニド基や、システイン誘導体（２）の必須官能基としての（構造式（２）に表れている）メルカプト基以外のメルカプト基がシアニド化合物（１）又はシステイン誘導体（２）の化学構造中に存在しなければ、本発明の方法におけるアミド結合生成の反応系中が複雑になる恐れが低減されるため好ましい。
Ｒ^１Ｂにおけるアミノ酸側鎖は、シアニド基及びメルカプト基を有さないアミノ酸側鎖であることが好ましい。

Ｒ^１Ｂ及びＲ^１ＣにおけるＣ_１－４アルキルとしては、メチル、エチルが好ましく、メチルがより好ましい。
Ｒ^１ＢにおけるＣ_１－４アルキルが置換されている場合、許容される置換基としてはフェニルが好ましい。Ｒ^１ＢにおけるＣ_１－４アルキルは置換されていないことが好ましい。

Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃが、それぞれが結合する炭素原子と一体となって形成するＣ_３－８環状基としては、シクロプロパン－１，１－ジイル、シクロブタン－１，１－ジイル、シクロペンタン－１，１－ジイル、シクロヘキサン－１，１－ジイル、シクロヘプタン－１，１－ジイル、テトラヒドロフラン－３，３－ジイル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４，４－ジイル、テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４，４－ジイル、ピロリジン－３，３－ジイル、ピペリジン－４，４－ジイルが好ましく、シクロプロパン－１，１－ジイル、シクロペンタン－１，１－ジイル、シクロヘキサン－１，１－ジイル、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４，４－ジイル、ピペリジン－４，４－ジイルがより好ましい。
環状基の環を形成する炭素原子が窒素原子で置き換えられたＣ_３－８環状基でない場合、Ｃ_３－８環状基は置換されていないことが好ましい。
環状基の環を形成する炭素原子が窒素原子で置き換えられたＣ_３－８環状基である場合、Ｃ_３－８環状基は、置き換えられた窒素原子以外の環状基の環を形成する原子が置換されておらず、置き換えられた窒素原子が置換されていないか、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ベンジル（メチル、エチル、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、及びハロゲンからなる群より選択される１～３の基で置換されていてもよい。））からなる群より選択される基で置換されていることが好ましく；置き換えられた窒素原子以外の環状基の環を形成する原子が置換されておらず、置き換えられた窒素原子が置換されていないか、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ベンジル）からなる群より選択される基で置換されていることがより好ましく；置き換えられた窒素原子以外の環状基の環を形成する原子が置換されておらず、置き換えられた窒素原子が－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（Ｃ_１－４アルキル）、及び－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－（ベンジル）からなる群より選択される基で置換されていることがさらに好ましい。

Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃとしては、いずれもメチルであるか；
Ｒ^１Ｂがベンジル、Ｒ^１Ｃがメチルであるか；それぞれが結合する炭素原子と一体となって、シクロプロパン－１，１－ジイルを形成するか；
シクロペンタン－１，１－ジイルを形成するか；
シクロヘキサン－１，１－ジイルを形成するか；
テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４，４－ジイルを形成するか；
１－ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニルピペリジン－４，４－ジイルを形成するか；
１－ベンジルオキシカルボニルピペリジン－４，４－ジイルを形成する；ことが好ましい。

（システイン誘導体）
本態様においては、ペプチド化合物（３）の製造のための原料として、システイン誘導体（２）を用いる。

（Ｒ^２Ａ）
システイン誘導体（２）におけるＲ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示す。
本態様におけるシステイン誘導体（２）において、Ｒ^２Ａは置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示すことが好ましい。

Ｒ^２ＡおけるＣ_１－４アルキルとしては、メチル、エチル、ｎ－プロピルが好ましく、メチル、エチルがより好ましく、メチルがさらに好ましい。
Ｃ_１－４アルキルは置換されていないことが好ましい。

システイン誘導体（２）におけるＲ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃの一方が水素原子であり、他方が有機基を示すことが好ましい。
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃにおける有機基は、Ｒ^１Ａにおける有機基と同様である。

［第二の態様］
本発明の第二の態様は、アミド結合生成部位の近傍におけるアミノ酸α－位のラセミ化を抑制できるアミド結合の生成方法である。
シアニド化合物（１）とシステイン誘導体（２）とを反応させ、ペプチド化合物（３）を製造できる。

本態様のアミド結合の生成方法は、グリシン若しくはα－モノ置換アミノ酸とＮ－無置換アミノ酸との間でのアミド結合生成に資する。特に、シアニド化合物（１）のα－位のラセミ化を抑制できる観点から、好ましくはα－モノ置換アミノ酸とＮ－無置換アミノ酸との間でのアミド結合生成に資する。
従って、本態様においては、シアニド化合物としてグリシン若しくはα－モノ置換アミノ酸に相当するシアニド化合物を、システイン誘導体としてＮ－無置換アミノ酸に相当するシステイン誘導体を用いることが好ましい。
すなわち、シアニド化合物として、Ｒ^１Ｃが水素原子を示すシアニド化合物（１）を、システイン誘導体として、Ｒ^２Ａが水素原子を示すシステイン誘導体（２）を用いることが好ましい。

（Ｒ^１Ａ）
シアニド化合物（１）におけるＲ^１Ａは有機基を示す。
Ｒ^１Ａにおける有機基は、本発明の第一の態様のＲ^１Ａにおける有機基と同様である。

（Ｒ^１Ｂ、Ｒ^１Ｃ、Ｒ^１Ｄ）
シアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示す。
本態様におけるシアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｃが、水素原子を示すこと（即ち、Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を形成しない。）が好ましく（この場合、Ｒ^１Ｂは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｄと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示してもよい。）；
Ｒ^１Ｃは、水素原子を示し、Ｒ^１Ｂは、水素原子、又はアミノ酸側鎖を示すこと（この場合、Ｒ^１Ｂは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｄと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示してもよい。）がより好ましく；
Ｒ^１Ｃは、水素原子を示し、Ｒ^１Ｂは、アミノ酸側鎖を示すこと（この場合、Ｒ^１Ｂは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｄと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示してもよい。また、Ｒ^１Ｂが水素原子である態様を除く。）がさらに好ましい。

シアニド化合物（１）において、Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示す。Ｒ^１Ｄが、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、ピロリジン環を示すとは、これらの原子団がプロリンの部分構造を形成することを意味する。

Ｒ^１Ｃが水素原子を示す場合、Ｒ^１Ｂが水素原子であれば、シアニド化合物（１）がグリシン残基に相当するシアニド化合物であることを意味する。この場合、Ｒ^１Ｄは、水素原子を示す。
Ｒ^１Ｃが水素原子を示す場合、Ｒ^１Ｂがアミノ酸側鎖であれば、シアニド化合物（１）がグリシン残基やプロリン残基以外のα－アミノ酸に相当するシアニド化合物であることを意味する。この場合、Ｒ^１Ｄは、水素原子を示す。
Ｒ^１Ｃが水素原子を示す場合、Ｒ^１Ｂが、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｄと一体となって、ピロリジン環を示せば、シアニド化合物（１）がプロリン残基に相当するシアニド化合物であることを意味する。

Ｒ^１Ｂにおけるアミノ酸側鎖は、本発明の第一の態様のＲ^１Ｂにおけるアミノ酸側鎖と同様である。
特に、Ｒ^１Ｂにおけるアミノ酸側鎖が、バリンにおけるイソプロピル、イソロイシンにおけるｓｅｃ－ブチルである場合には、他の公知のアミド結合の生成方法と比較して、本発明の方法の優位性が高い。また、Ｒ^１Ｂが、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｄと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示す場合、他の公知のアミド結合の生成方法と比較して、本発明の方法の優位性が高い。

（Ｒ^２Ａ）
システイン誘導体（２）におけるＲ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示す。
本態様におけるシステイン誘導体（２）において、Ｒ^２Ａは水素原子を示すことが好ましい。

システイン誘導体（２）におけるＲ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃの一方が水素原子であり、他方が有機基を示すことが好ましい。
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃにおける有機基は、第一の態様のＲ^１Ａにおける有機基と同様である。

本態様における本発明の方法においては、弱酸の存在下で反応を行ってもよい。
本態様においては、反応の進行に弱酸が必須というものではないが、シアニド化合物（１）とシステイン誘導体（２）とが反応して生成するアンモニアが、Ｒ^１Ｃが水素原子を示す場合のシアニド化合物（１）のＲ^１Ｂに由来する置換基の結合する炭素原子におけるラセミ化を引き起こすことがある（メカニズムについては後述する。）。弱酸が存在することにより、系中のｐＨの増大を抑制するため、ラセミ化を抑制しやすい。
本態様においては、弱酸の存在下で反応を行うことが好ましい。

弱酸としては、アンモニア、１級アミン、２級アミン、及び３級アミンの強酸からなる塩を用いることができ、例えば、塩化アンモニウム、臭化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、メチルアミン塩酸塩、エチルアミン塩酸塩、ジメチルアミン塩酸塩、トリエチルアミン塩酸塩を挙げることができ、塩化アンモニウムが好ましい。

本態様において弱酸を用いる場合、弱酸の使用量はシアニド化合物（１）の１００モル％に対して、０モル％超１０００モル％以下が好ましく、５０～８００モル％がより好ましく、１００～５００モル％がさらに好ましく、２００～４００モル％が特に好ましい。

本態様においては、上述のとおり、Ｒ^１Ｃが水素原子を示すシアニド化合物（１）と、システイン誘導体として、Ｒ^２Ａが水素原子を示すシステイン誘導体（２）とを用いることが好ましい。この場合、シアニド化合物（１）とシステイン誘導体（２）とを、水を含む溶媒中で混合することにより、式（α）で示される中間体（以下、「中間体（α）」とも言う。）を生成する。この中間体（α）は、通常、単離することが可能である。

なお、中間体（α）が下記式に示す平衡状態にあると、シアニド化合物（１）のＲ^１Ｂに由来する置換基の結合する炭素原子におけるラセミ化を引き起こす。

Ｒ^１Ｃが水素原子を示すシアニド化合物（１）と、システイン誘導体として、Ｒ^２Ａが水素原子を示すシステイン誘導体（２）とを用いて得られた中間体（α）は、酸による加水分解を経てペプチド化合物（３）に変換することができる。

中間体（α）に対する酸の添加方法としては、中間体（α）を単離して、単離した中間体（α）と溶媒とを改めて混合して酸を添加してもよいし、シアニド化合物（１）とシステイン誘導体（２）とを反応させた系中に酸を添加してもよい。

中間体（α）を加水分解するために添加する酸としては、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸、テトラフルオロホウ酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、マンデル酸、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸を用いることができ、塩化水素酸、テトラフルオロホウ酸、ギ酸、p-トルエンスルホン酸が好ましく、塩化水素酸がより好ましい。

中間体（α）を加水分解するために添加する酸の使用量は、シアニド化合物（１）の１００モル％に対して、１～５００モル％が好ましく、３～２００モル％がより好ましく、５～１００モル％がさらに好ましく、１０～５０モル％がことさら好ましく、１０～３０モル％が特に好ましい。

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

なお、以下の反応はすべてアルゴン雰囲気下で行った。
また、各種スペクトルの測定に当たっては、以下の機器を用いた。
比旋光度：JASCO P-1020 polarimeter、JASCO DIP-370 polarimeter
FT-IRスペクトル：JASCO FT/IR-410 spectrometer、Perkin Elmer spectrum BX FT-IP spectrometer
¹H 及び ¹³C NMRスペクトル：Agilent-400 MR (400 MHz for ¹H NMR, 100 M Hz for ¹³C NMR) instrument（¹H NMRスペクトルにおいて、s = singlet, d = doublet, t = triplet, q = quartet, quintet = quin, septet = sep, dd = doublet of doublets, ddd = doublet of doublet of doublets, dt = double of triplets, td = triplet of doublets, m = multiplet, brs = broad singlet）
高分解能 ESI-TOF マススペクトル：Themo Orbi-trap LTQ XL instrument

製造例１ａ
tert-ブチル (S)-(1-((2-シアノプロパン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Phe-OH (3.98 g, 15.0 mmol)と、2-アミノ-2-メチルプロピオニトリル(1.26 g, 15.0 mmol；Bioorg. Med. Chem. Lett. 22, 7114-7118 (2012)に従って製造し、粗精製物として用いた。以下で用いる2-アミノ-2-メチルプロピオニトリルについても同様である。)と、塩化メチレン(60 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(3.45 g, 18.0 mmol)とHOBt・H₂O(230 mg, 1.50 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 67%/33%)で精製し、化合物1aを白色固体として収率62%（２工程）で得た。

m.p. 168-170 ℃．
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.40 - 7.17 (m, 5H), 5.91 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 3.13 (dd, J = 13.7, 6.5 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 13.6, 8.0 Hz, 1H), 1.57 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.43 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.3, 155.9, 136.5, 129.4, 128.6, 126.9, 120.5, 80.3, 55.8, 46.1, 38.6, 28.3, 27.0, 26.7.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₈H₂₅N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 354.1788; found: 354.1790.
FT-IR (neat): 3300, 2980, 1661, 1536, 1456, 1393, 1367, 1252, 1171, 1020, 757, 699 cm^-1
[α]^D ₂₃ -3.58 (c 1.9 CHCl₃)

製造例１ｂ
ベンジル (S)-(1-((2-シアノプロパン-2-イル)アミノ)-4-(メチルチオ)-1-オキソブタン-2-イル)カルバマート

L-Cbz-Met-OH (1.50g, 5.29 mmol)と、2-アミノ-2-メチルプロピオニトリル(445 mg, 5.29 mmol)と、塩化メチレン(21 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.22 g, 6.35 mmol)とHOBt・H₂O(81.0 mg, 0.530 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%)で精製し、化合物1bを無色油状物として収率72%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.51 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.20 (m, 5H), 5.02 and 5.01 (s, 2H), 4.13 - 4.02 (m, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.55 (s, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.0, 156.4, 137.4, 128.8, 128.2, 128.2, 122.0, 65.9, 54.1, 46.1, 32.1, 30.1, 26.9, 26.7, 15.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₇H₂₃N₃NaO₃S⁺ [M+Na]⁺: 372.1352; found: 372.1354.
FT-IR (neat): 3300, 3061, 2919, 2243, 1671, 1538, 1455, 1391, 1368, 1241, 1049, 741, 698 cm^-1
[α]^D ₂₅ -27.79 (c 2.2 CHCl₃)

製造例１ｃ
tert-ブチル (S)-(1-((2-シアノプロパン-2-イル)アミノ)-3-ヒドロキシ-1-オキソプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Ser-OH (1.00 g, 4.87 mmol)と、2-アミノ-2-メチルプロピオニトリル(410 mg, 4.87 mmol)と、塩化メチレン(19.5 mL, 0.25M)との混合物に、EDC・HCl(1.12 g, 5.85 mmol)とHOBt・H₂O(75.0 mg, 0.487 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%)で精製し、化合物1cを黄色固体として収率33%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.38 (s, 1H), 5.81 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.04 - 3.93 (m, 1H), 3.77 - 3.60 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.43 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.0, 156.5, 120.6, 80.8, 62.2, 55.1, 46.3, 28.2, 27.0, 26.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₂H₂₁N₃NaO₄ ⁺ [M+Na]⁺: 294.1424; found: 294.1428.
FT-IR (neat): 3307, 2981, 2247, 1676, 1532, 1393, 1368, 1250, 1168, 1062, 855, 759 cm^-1
[α]^D ₂₆ -86.02 (c 1.0 CHCl₃)

製造例１ｄ
tert-ブチル (2-((2-シアノプロパン-2-イル)アミノ)-2-オキソエチル)カルバマート

Boc-Gly-OH (1.20 g, 6.85 mmol)と、2-アミノ-2-メチルプロピオニトリル(576 mg, 6.85 mmol)と、塩化メチレン(27 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.58 g, 8.22 mmol)とHOBt・H₂O(105 mg, 0.685 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 35%/65%)で精製し、化合物1dを無色油状粘性体として収率70%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.13 (s, 1H), 5.66 (s, 1H), 3.76 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 1.66 (s, 6H), 1.42 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 169.5, 156.6, 120.8, 80.4, 46.3, 44.4, 28.3, 27.0.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₁H₁₉N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 264.1319; found: 264.1321.
FT-IR (neat): 3311, 2981, 2243, 1682, 1530, 1368, 1170, 1054, 948, 863, 734 cm^-1

製造例１ｅ
tert-ブチル (S)-(1-((1-シアノシクロプロピル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Phe-OH (1.00 g, 3.77 mmol)と、1-アミノシクロプロパンカルボニトリル塩酸塩(492 mg, 4.15 mmol)と、塩化メチレン(15mL, 0.25 M)との混合物に、トリエチルアミン（630 μL, 4.52 mmol）、EDC・HCl(867 mg,4.52 mmol)とHOBt・H₂O(58.0 mg, 0.377 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%)で精製し、化合物1eを白色固体として収率87%で得た。

m.p. 151-153 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.35 - 7.18 (m, 5H), 6.29 (s, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.28 - 4.18 (m, 1H), 3.12 (dd, J = 13.7, 6.5 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 13.7, 7.8 Hz, 1H), 1.53 - 1.44 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.14 - 1.06 (m, 1H), 1.04 - 0.95 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 172.8, 155.7, 136.2, 129.3, 128.6, 127.0, 119.7, 80.4, 55.5, 38.8, 28.3, 20.0, 16.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₈H₂₃N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 352.1632; found: 352.1624.
FT-IR (neat): 3289, 2979, 2243, 1669, 1527, 1367, 1300, 1169, 1049, 755, 700 cm^-1
[α]^D ₂₂ -2.47 (c 1.52 CHCl₃)

製造例１ｆ
tert-ブチル (S)-(1-((1-シアノシクロプロピル)アミノ)-3-(1H-インドール-3-イル)-1-オキソプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Trp-OH (1.00 g, 3.29 mmol)と、1-アミノシクロプロパンカルボニトリル塩酸塩(390 mg, 3.29 mmol)と、塩化メチレン(13 mL, 0.25 M)との混合物に、トリエチルアミン(550 μL, 3.94 mmol)、EDC・HCl(756 mg, 3.94 mmol)とHOBt・H₂O(50 mg, 0.329 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%)で精製し、化合物1fを黄色固体として収率50%で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 8.42 (s, 1H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.22 - 7.17 (m, 1H), 7.14 - 7.09 (m, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.27 (s, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.27 (dd, J = 13.7, 4.2 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 14.2, 7.9 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.37 - 1.30 (m, 2H), 1.00 - 0.81 (m, 2H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 173.0, 155.6, 136.2, 127.2, 123.7, 122.3, 119.8, 119.7, 118.5, 111.4, 109.7, 80.5, 55.1, 28.3, 20.0, 16.6, 16.5.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₀H₂₄N₄NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 391.1741; found: 391.1741.
FT-IR (neat): 3316, 2981, 2360, 2243, 1676, 1499, 1457, 1367, 1250, 1167, 1048, 746, 669 cm^-1
[α]^D ₂₅ +1.75 (c 0.98 CHCl₃)

製造例１ｇ
(9H-フルオレン-9-イル)メチル (S)-(1-((1-シアノシクロプロピル)アミノ)-1-オキソ-3-(1-トリチル-1H-イミダゾール-4-イル)プロパン-2-イル)カルバマート

1-アミノシクロプロパンカルボニトリル塩酸塩(383 mg, 3.23 mmol)と、塩化メチレン(13 mL, 0.25 M)との混合物に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(562 μL, 3.23 mmol)、L-Fmoc-His(NTrityl)-OH (2.00 g, 3.23 mmol)、EDC・HCl(756 mg, 3.94 mmol)とHOBt・H₂O(50.0 mg, 0.329 mmol)とを加え、室温で３時間攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 20%/80%～メタノール100%)で精製し、化合物1gを白色固体として収率73%で得た。

m.p. 135-137 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 9.42 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.79 - 7.71 (m, 2H), 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.16 (m, 4H), 7.47 - 7.16 (m, 6H), 7.47 - 7.16 (m, 3H), 7.15 - 6.93 (m, 6H), 6.75 (s, 1H), 6.26 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.89 - 4.79 (m, 1H), 4.41 - 4.30 (m, 1H), 4.17 - 4.03 (m, 2H), 3.40 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 15.0, 9.6 Hz, 1H), 1.60 - 1.45 (m, 2H), 1.43 - 1.25 (m, 2H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.2, 156.0, 143.9, 143.4, 141.2, 139.7, 134.9, 132.3, 129.5, 129.2, 128.7, 127.8, 127.8, 127.2, 127.1, 125.3, 125.0, 120.4, 120.0, 119.8, 78.4, 67.3, 53.9, 46.9, 31.5, 20.6, 16.7, 16.0.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₄H₃₈N₅O₃ ⁺ [M+H]⁺: 684.2969; found: 684.2966.
FT-IR (neat): 3161, 3015, 2953, 2242, 1687, 1618, 1524, 1448, 1247, 1129, 1046, 756, 702, 665 cm^-1
[α]^D ₂₇ +7.71 (c 1.22 CHCl₃)

製造例１ｈ
tert-ブチル (S)-(1-((1-シアノシクロペンチル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Phe-OH (2.00 g, 7.54 mmol)と、1-アミノシクロペンタンカルボニトリル(830 mg, 7.54 mmol；Bioorg. Med. Chem. Lett. 22, 7114-7118 (2012)に従って製造し、粗精製物として用いた。以下で用いる1-アミノシクロペンタンカルボニトリルについても同様である。)と、塩化メチレン(30 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.73 g, 9.05 mmol)とHOBt・H₂O(116 mg, 0.754 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 45%/55%)で精製し、化合物1hを白色固体として収率57%（２工程）で得た。

m.p. 135-136 ℃.
¹H NMR (measured at 84 ℃) (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.16 (s, 1H), 7.35 - 7.09 (m, 5H), 6.39 (s, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 1H), 2.93 (dd, J = 13.8, 5.9 Hz, 1H), 2.82 (dd, J = 13.8, 8.6 Hz, 1H), 2.20 - 1.93 (m, 4H), 1.77 - 1.53 (m, 4H), 1.33 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.3, 155.6, 138.0, 129.7, 128.4, 126.7, 121.8, 78.5, 55.8, 54.4, 38.3, 38.05, 37.99, 28.5, 22.9, 22.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₀H₂₇N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 380.1945; found: 380.1942.
FT-IR (neat): 3303, 2978, 2239, 1661, 1536, 1455, 1367, 1253, 1172, 1022, 860, 754, 700 cm^-1
[α]^D ₂₆ -11.46 (c 1.06 CHCl₃)

製造例１ｉ
ベンジル tert-ブチル (6-((1-シアノシクロペンチル)アミノ)-6-オキソヘキサン-1,5-ジイル)(S)-ジカルバマート

L-Boc-Lys(NHCbz)-OH² (1.10 g, 2.89 mmol)と、1-アミノシクロペンタンカルボニトリル(319 mg, 2.89 mmol)と、塩化メチレン(12 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(665 mg, 3.47 mmol)とHOBt・H₂O(44.0 mg, 0.289 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 35%/65%)で精製し、化合物1ｉを無色油状物として収率54%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.39 (s, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 5H), 7.20 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.91 - 3.80 (m, 1H), 2.99 - 2.88 (m, 2H), 2.17 - 1.98 (m, 4H), 1.76 - 1.59 (m, 4H), 1.53 - 1.43 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.42 - 1.26 (m, 2H), 1.26 - 1.13 (m, 2H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.0, 156.5, 155.7, 137.7, 128.8, 128.1, 121.9, 78.5, 65.5, 54.4, 40.5, 38.2, 38.1, 31.9, 29.5, 28.6, 28.4, 23.1, 22.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₅H₃₆N₄NaO₅ ⁺ [M+Na]⁺: 495.2578; found: 495.2577.
FT-IR (neat): 3315, 2943, 2239, 1696, 1530, 1455, 1367, 1251, 1168, 1026, 862, 753, 698 cm^-1
[α]^D ₂₅ -32.34 (c 1.0 CHCl₃)

製造例１ｊ
tert-ブチル (S)-(1-((1-シアノシクロペンチル)アミノ)-1-オキソ-5-(3-トシルグアニジノ)ペンタン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Arg(Tos)-OH (1.00 g, 2.33 mmol)と、1-アミノシクロペンタンカルボニトリル(257 mg, 2.33 mmol)と、塩化メチレン(9.3 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(537 mg, 2.80 mmol)とHOBt・H₂O(36.0 mg, 0.233 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 9%/91%)で精製し、化合物1jを白色固体として収率62%（２工程）で得た。

m.p. 102-104 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.76 (s, 1H), 7.73 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.50 (s, 2H), 6.31 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.26 - 4.15 (m, 1H), 3.36 - 3.12 (m, 2H), 2.50 - 2.41 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.32 - 2.19 (m, 2H), 2.18 - 2.04 (m, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.64 - 1.52 (m, 2H), 1.39 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 173.5, 157.0, 156.1, 142.3, 140.3, 129.3, 126.0, 121.4, 80.0, 54.9, 54.2, 40.1, 38.6, 38.5, 28.7, 28.3, 26.0, 23.0, 22.9, 21.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₄H₃₇N₆O₅S⁺ [M+H]⁺: 521.2541; found: 521.2542.
FT-IR (neat): 3329, 2978, 2239, 1677, 1548, 1367, 1254, 1168, 1132, 1082, 815, 755, 677, 560 cm^-1
[α]^D ₂₇ -15.12 (c 1.60 CHCl₃)

製造例１ｋ
tert-ブチル (S)-(1-((1-シアノシクロヘキシル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Phe-OH (2.92 g, 11.0 mmol)と、1-アミノシクロヘキサンカルボニトリル(1.24 g, 10.0 mmol；Bioorg. Med. Chem. Lett. 22, 7114-7118 (2012)に従って製造し、粗精製物として用いた。以下で用いる1-アミノシクロヘキサンカルボニトリルについても同様である。)と、塩化メチレン(40 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(2.53 g, 13.2 mmol)とHOBt・H₂O(153 mg, 1.00 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 60%/40%)で精製し、化合物1kを白色固体として収率80%（２工程）で得た。

m.p. 130-132 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.37 - 7.19 (m, 5H), 5.86 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 3.14 (dd, J = 13.8, 6.4 Hz, 1H), 3.01 (dd, J = 13.7, 7.9 Hz, 1H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.06 (m, 1H), 1.72 - 1.53 (m, 6H), 1.52 - 1.47 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.29 - 1.17 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 170.8, 155.8, 136.5, 129.4, 128.7, 127.0, 119.3, 80.4, 55.9, 51.3, 38.3 (2C), 35.2, 34.9, 28.3, 24.6, 21.8.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₁H₂₉N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺:394.2101; found: 394.2101.
FT-IR (neat): 3324, 2939, 2864, 2239, 1659, 1528, 1455, 1393, 1367, 1305, 1249, 1169, 1016, 866, 758,
698 cm^-1
[α]^D ₂₄ -10.83 (c 1.46 CHCl₃)

製造例１ｌ
tert-ブチル (2-((1-シアノシクロヘキシル)アミノ)-2-オキソエチル)カルバマート

Boc-Gly-OH (1.00 g, 5.71 mmol)と、1-アミノシクロヘキサンカルボニトリル(709 mg, 5.71 mmol)と、塩化メチレン(23 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.31 g, 6.85 mmol)とHOBt・H₂O(88.0 mg, 0.571 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%)で精製し、化合物1lを白色固体として収率69%（２工程）で得た。

m.p. 167-169 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 6.62 (s, 1H), 5.21 (s, 1H), 3.76 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.40 - 2.21 (m, 2H), 1.84 - 1.64 (m, 6H), 1.64 - 1.59 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.37 - 1.27 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 169.2, 156.6, 119.7, 80.5, 51.3, 44.8, 35.1, 28.2, 24.6, 21.8.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₄H₂₃N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 304.1632; found: 304.1634.
FT-IR (neat): 3312, 2937, 2243, 1685, 1527, 1455, 1366, 1249, 1166, 1053, 782, 553 cm^-1

製造例１ｍ
tert-ブチル (S)-(1-((4-シアノテトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

L-Boc-Phe-OH (1.00 g, 3.77 mmol)と、4-アミノテトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボニトリル(476 mg, 3.77 mmol；Bioorg. Med. Chem. Lett. 22, 7114-7118 (2012)に従って製造し、粗精製物として用いた。)と、塩化メチレン(15 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(867 mg, 4.52 mmol)とHOBt・H₂O(58.0 mg, 0.377 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%)で精製し、化合物1mを白色固体として収率31%（２工程）で得た。

m.p. 82-84 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.38 - 7.18 (m, 5H), 6.10 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 3.88 - 3.76 (m, 2H), 3.76 - 3.64 (m, 2H), 3.14 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 1H), 3.03 (dd, J = 13.8, 7.9 Hz, 1H), 2.32 - 2.14 (m, 2H), 1.79 - 1.64 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.4, 156.0, 136.3, 129.3, 128.7, 127.1, 118.6, 80.6, 63.5, 63.5, 55.9, 49.0, 38.2, 35.1, 34.8, 28.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₀H₂₇N₃NaO₄ ⁺ [M+Na]⁺: 396.1894; found: 396.1891.
FT-IR (neat): 3298, 2977, 2250, 1665, 1535, 1367, 1250, 1168, 1104, 1014, 733, 700 cm^-1
[α]^D ₂₇ -9.31 (c 2.46 CHCl₃)

製造例１ｎ
tert-ブチル (S)-4-(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)-4-シアノピペリジン-1-カルボキシラート

対応するα，α－ジ置換－α－アミノニトリルは、Bioorg. Med. Chem. Lett. 22, 7114-7118 (2012)に従って、tert-ブチル 4-オキソピペリジン-1-カルボキシラートから製造した。tert-ブチル 4-オキソピペリジン-1-カルボキシラートは、Chem. Sci. 4, 1053-1058 (2013)に従って、4-ピペリドン一水和物一塩酸塩から製造した。（製造例１ｏにおいて同様である。）
L-Boc-Phe-OH (1.30 g, 4.90 mmol)と、上記のα，α－ジ置換－α－アミノニトリル(1.32 g, 5.88 mmol；ただし、crude formとして用いた。)と、塩化メチレン(20 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.13 g, 5.88 mmol)とHOBt・H₂O(75.0 mg, 0.490 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 65%/35%)で精製し、化合物1nを白色固体として収率34%（３工程）で得た。

m.p. 90-92 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.38 - 7.18 (m, 5H), 6.14 (s, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 3.85 - 3.64 (m, 2H), 3.34 - 3.17 (m, 2H), 3.13 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 1H), 3.03 (dd, J = 13.8, 7.8 Hz, 1H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.19 - 2.09 (m, 1H), 1.65 - 1.54 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.42 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.2, 155.8, 154.2, 136.3, 129.3, 128.8, 127.1, 118.3, 80.7, 80.3, 55.9, 49.9, 39.6, 38.0, 34.3, 34.1, 28.3, 28.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₅H₃₆N₄NaO₅ ⁺ [M+Na]⁺: 495.2578; found: 495.2585.
FT-IR (neat): 3304, 2979, 2239, 1684, 1531, 1426, 1367, 1250, 1160, 1099, 860, 757, 700 cm^-1
[α]^D ₂₆ +2.90 (c 1.42 CHCl₃)

製造例１ｏ
tert-ブチル (S)-4-(5-(ベンジルオキシ)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-5-オキソペンタンアミド)-4-シアノピペリジン-1-カルボキシラート

L-Boc-Glu(Bn)-OH (1.00 g, 2.96 mmol)と、製造例１ｎで用いたα，α－ジ置換－α－アミノニトリル(668 mg, 2.96 mmol)と、塩化メチレン(12 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(682 mg, 3.56 mmol)とHOBt・H₂O(45.0 mg, 0.296 mmol)とを加え、室温で２時間攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%)で精製し、化合物1oをアモルファス固体として収率71%（３工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.46 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 5H), 7.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.62 - 3.48 (m, 2H), 3.25 - 3.14 (m, 2H), 2.37 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.18 - 2.04 (m, 2H), 1.93 - 1.72 (m, 2H), 1.93 - 1.72 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.35 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.5, 172.4, 155.8, 154.1, 136.6, 128.8, 128.4, 128.3, 119.9, 79.6, 78.7, 65.9, 53.9, 49.3, 33.6, 33.4, 30.5, 28.5, 28.4, 27.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₈H₄₀N₄NaO₇ ⁺ [M+Na]⁺: 567.2789; found: 567.2794.
FT-IR (neat): 3320, 2978, 2239, 1697, 1524, 1425, 1392, 1367, 1250, 1162, 1071, 861, 754, 698 cm^-1
[α]^D ₂₆ -15.62 (c 1.11 CHCl₃)

製造例１ｐ
α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｐ

α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｐは、以下のスキームに従って製造した。

製造例１ｄの化合物（Boc-Gly-Aib-CN (3.30 g, 13.67 mmol)）に、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(27.3 mL)を０℃で加え、室温で２０分間攪拌したところ、白色沈殿を生じた。反応混合物にトリエチルアミン(18 mL)を０℃でゆっくり加え、氷浴から外し、塩化メチレン(100 mL)を加えた。さらに、Boc-L-Lys(NHCbz)-OH² (1.93 g, 13.67 mmol)、EDC・HCl(3.15 g, 16.41 mmol)とHOBt・H₂O(210 mg, 1.370 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。反応を1M 塩酸で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99%/1%)で精製し、所望の化合物s1をアモルファス固体として収率70%で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.23 (s, 1H), 8.06 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 7.45 - 7.24 (m, 5H), 7.21 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.76 - 1.43 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.43 - 1.05 (m, 2H), 1.43 - 1.05 (m, 2H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.0, 169.2, 156.5, 156.0, 137.7, 128.8, 128.2 (2C), 121.9 (CN, deduced by HMBC), 78.6, 65.6, 54.9, 46.0, 42.2, 40.5 (overlapping with DMSO-d₆, deduced by HMQC), 31.8, 29.5, 28.6, 26.8, 23.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₅H₃₇N₅NaO₆ ⁺ [M+Na]⁺: 526.2636; found: 526.2634.
FT-IR (neat): 3314, 2938, 2243, 1688, 1525, 1455, 1392, 1367, 1251, 1169, 1027, 756, 699, 666 cm^-1
[α]^D ₂₆ -0.96 (c 2.1 CHCl₃)

得られた化合物s1（Boc-L-Lys(NHCbz)-Gly-Aib-CN (2.20 g, 4.35 mmol)）に、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(8.7 mL)を０℃で加え、室温で攪拌し、薄層クロマトグラフィーを用いて反応の完結を確認した後、反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン(6 mL)を０℃でゆっくり加え、氷浴から外し、塩化メチレン(50 mL)を加えた。
Boc-L-Leu-OH (1.01 g, 4.35 mmol)、EDC・HCl(1.00 g, 5.22 mmol)とHOBt・H₂O(334 mg, 2.17 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。反応を1M 塩酸で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99%/1%)で精製し、所望の化合物s2をアモルファス固体として収率67%で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.25 (s, 1H), 8.18 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.44 - 7.23 (m, 5H), 7.19 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.22 - 4.11 (m, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.73 (dd, J = 17.1, 6.1 Hz, 1H), 3.67 (dd, J = 17.0, 5.9 Hz, 1H), 3.01 - 2.89 (m, 2H), 1.83 - 1.49 (m, 1H), 1.83 - 1.49 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.48 - 1.03 (m, 2H), 1.48 - 1.03 (m, 2H), 1.48 - 1.03 (m, 2H), 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 8.0 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.2, 172.3, 169.1, 156.5, 155.8, 137.7, 128.8, 128.2 (2C), 121.9, 78.5, 65.5, 53.2, 53.1, 46.0, 42.1, 40.9, 40.6, 32.0, 29.5, 28.6, 26.9, 26.8, 24.7, 23.4, 22.9, 22.0.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₁H₄₈N₆NaO₇ ⁺ [M+Na]⁺: 639.3477; found: 639.3472.
FT-IR (neat): 3300, 2956, 2243, 1693, 1663, 1532, 1455, 1391, 1367, 1252, 1167, 1026, 755, 698 cm^-1
[α]^D ₂₃ -20.04 (c 1.05 CHCl₃)

得られた化合物s2（Boc-L-Leu-L-Lys(NHCbz)-Gly-Aib-CN (1.48 g, 2.40 mmol)）に、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(4.8 mL)を０℃で加え、室温で攪拌し、薄層クロマトグラフィーを用いて反応の完結を確認した後、反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン(3 mL)を０℃でゆっくり加え、氷浴から外し、塩化メチレン(25 mL)を加えた。
Boc-L-Ala-OH (0.450 g, 2.40 mmol)、EDC・HCl(0.550 g, 2.90 mmol)とHOBt・H₂O(182 mg, 1.20 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。反応を1M塩酸で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99%/1%)で精製し、所望の化合物1pを白色固体として収率48%で得た。

m.p. 100-102 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.23 (s, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 8.00 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.24 (m, 5H), 7.21 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.33 - 4.24 (m, 1H), 4.15 - 4.07 (m, 1H), 3.98 - 3.90 (m, 1H), 3.71 (dd, J = 16.7, 5.6 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 16.4, 5.3 Hz, 1H), 2.98 - 2.90 (m, 2H), 1.76 - 1.47 (m, 1H), 1.76 - 1.47 (m, 2H), 1.56 (s, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.47 - 1.15 (m, 2H), 1.47 - 1.15 (m, 2H), 1.47 - 1.15 (m, 2H), 1.12 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.0, 172.6, 172.3, 169.1, 156.5, 155.5, 137.7, 128.8, 128.2 (2C), 121.9, 78.5, 65.5, 53.3, 51.2, 50.0, 46.0, 42.2, 41.2, 40.6 (overlapping with DMSO-d₆, deduced by HMQC), 31.8, 29.6, 28.6, 26.9, 26.8, 24.4, 23.5, 23.0, 22.0, 18.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₄H₅₃N₇NaO₈ ⁺ [M+Na]⁺: 710.3848; found: 710.3847.
FT-IR (neat): 3286, 3067, 2934, 2243, 1691, 1633, 1540, 1455, 1367, 1251, 1169, 1024, 757, 697 cm^-1
[α]^D ₂₅ -15.62 (c 0.51 CHCl₃)

製造例１ｑ／製造例１ｒ
α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｑ／α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｒ

α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｑは、以下のスキームに従って製造した。

(S)-α-メチルフェニルアラニン一塩酸塩(500 mg, 2.53 mmol)を、1,4-ジオキサンと水の1/1混合溶媒(10 mL, 0.25 M)に室温で懸濁させ、1M 水酸化ナトリウム水溶液(2.6 mL)とBoc₂O (939 mg, 4.30 mmol)を加え、２４時間攪拌した。得られた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、反応を1M 塩酸で停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮した。
得られた粗生成物（Boc-(S)-α-メチルフェニルアラニン(400 mg, 1.43 mmol)）をテトラヒドロフラン(2.9 mL, 0.5 M)に溶解し、０℃に冷却し、トリエチルアミン(199 μL, 1.42mmol)を加え、１５分間攪拌し、クロロギ酸エチル（136 μL, 1.43mmol）を加えて、０℃で３０分間攪拌した。反応混合液に30% NH₃・H₂O (5 mL)を加え、氷浴から外して１時間攪拌した。得られた反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%)で精製し、所望の化合物(S)-s3を白色固体として収率30%（２工程）で得た。

[α]^D ₂₃ -57.45 (c 0.96 CHCl₃)

なお、(R)-α-メチルフェニルアラニン一塩酸塩を出発原料として、シリカゲルクロマトグラフィーの溶離液をヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%～メタノール100%とした以外は上記と同様にして、化合物(S)-s3の鏡像体である化合物(R)-s3（tert-ブチル (R)-(1-アミノ-2-メチル-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート）を白色固体として収率34%（２工程）で得た。

m.p. 66-68 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.33 - 7.22 (m, 3H), 7.20 - 7.12 (m, 2H), 6.34 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 4.88 (s, 1H), 3.37 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.12 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.43 (s, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 176.7, 154.7, 136.1, 130.5, 128.2, 126.9, 80.3, 59.9, 41.3, 28.4, 23.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₅H₂₂N₂NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 301.1523; found: 301.1519.
FT-IR (neat): 3322, 1689, 1496, 1366, 1167 cm^-1
[α]^D ₂₃ +51.81 (c 1.05 CHCl₃)

得られた化合物(S)-s3 (106 mg, 0.38 mmol) に、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(1.9 mL)を０℃で加え、室温で４０分間攪拌し、得られた反応混合物を減圧下濃縮した。
得られた粗生成物を塩化メチレン(2.5 mL, 0.15 M)に室温で溶解し、トリエチルアミン(130 μL, 0.95 mmol)、Boc-L-Phe-OH (100 mg, 0.38 mmol)、EDC・HCl(88.0 mg, 0.46 mmol)とHOBt・H₂O(29.0 mg, 0.19 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 30%/70%)で精製し、所望の化合物s4（tert-ブチル ((S)-1-(((S)-1-アミノ-2-メチル-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート）を白色固体として収率46%で得た。

m.p. 187-188 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.33 - 6.95 (m, 10H), 6.62 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.58 (s, 1H), 5.12 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 1H), 3.35 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 14.0, 5.9 Hz, 1H), 3.03 - 2.89 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.33 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 176.1, 170.9, 156.0, 136.4, 135.8, 130.3, 129.3, 128.8, 128.3, 127.2, 127.1, 80.7, 60.3, 56.8, 42.2, 37.3, 28.2, 23.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₄H₃₁N₃NaO₄ ⁺ [M+Na]⁺: 448.2207; found: 448.2200.
FT-IR (neat): 3311, 2979, 1668, 1497, 1455, 1367, 1248, 1168, 1029, 756, 702 cm^-1
[α]^D ₂₆ -48.27 (c 3.4 CHCl₃)

なお、化合物(S)-s3に代えて化合物(R)-s3を用いた以外は上記と同様にして、化合物s5（tert-ブチル ((S)-1-(((R)-1-アミノ-2-メチル-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート）を白色固体として収率55%（２工程）で得た。

m.p. 162-164 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.41 - 6.90 (m, 10H), 6.64 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.17 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.15 - 4.06 (m, 1H), 3.38 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 13.7, 6.9 Hz, 1H), 2.98 - 2.80 (m, 2H), 1.44 (s, 3H), 1.36 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 176.1, 171.0, 156.0, 136.5, 135.7, 130.4, 129.2, 128.8, 128.3, 127.2, 127.1, 80.7, 60.2, 57.2, 42.1, 37.7, 28.2, 23.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₄H₃₁N₃NaO₄ ⁺ [M+Na]⁺: 448.2207; found: 448.2201.
FT-IR (neat): 3276, 2978, 1671, 1542, 1394, 1237, 1178, 1023, 910, 738, 699, 582 cm^-1
[α]^D ₂₇ +18.05 (c 1.2 CHCl₃)

α，α-ジ置換－α－アミドニトリル１ｑは、得られた化合物s4を用いて、国際公開第WO 2010/148488号に従って、製造した。
得られた化合物s4 (64 mg, 0.15 mmol)とテトラヒドロフラン(0.8 mL, 0.2 M)との混合物に、トリエチルアミン(59 μL, 0.42 mmol)を０℃で加え、無水トリフルオロ酢酸(29 μL, 0.21 mmol)を滴下して加え、０℃で４０分間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%)で精製し、所望の化合物1q（tert-ブチル ((S)-1-(((S)-2-シアノ-1-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート）を白色固体として収率85%で得た。

m.p. 137-138 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.43 - 6.98 (m, 10H), 6.39 (s, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.36 - 4.23 (m, 1H), 3.21 - 2.93 (m, 2H), 3.21 - 2.93 (m, 2H), 1.50 (s, 3H), 1.39 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 170.9, 155.8, 136.4, 133.1, 130.5, 129.5, 128.8, 128.6, 127.8, 127.1, 119.7, 80.6, 55.8, 50.3, 43.6, 38.0, 28.2, 24.5.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₄H₂₉N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 430.2101; found: 430.2093.
FT-IR (neat): 3299, 2979, 2239, 1664, 1534, 1455, 1367, 1253, 1166, 1022, 757, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -38.69 (c 1.27 CHCl₃)

なお、化合物s4に代えて化合物s5を用いた以外は上記と同様にして、化合物1r（tert-ブチル ((S)-1-(((R)-2-シアノ-1-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート）を白色固体として収率77%で得た。

m.p. 53-55 ℃.
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.39 - 7.08 (m, 10H), 5.98 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.28 - 4.21 (m, 1H), 3.18 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.13 - 2.95 (m, 1H), 3.13 - 2.95 (m, 1H), 3.13 - 2.95 (m, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.40 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 170.8, 155.5, 136.4, 133.1, 130.4, 129.4, 128.8, 128.7, 127.9, 127.1, 119.6, 80.5, 56.0, 50.2, 44.0, 38.4, 28.2, 24.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₄H₂₉N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 430.2101; found: 430.2098.
FT-IR (neat): 3310, 3031, 2980, 2239, 1667, 1532, 1455, 1367, 1252, 1167, 1051, 758, 702 cm^-1
[α]^D ₂₄ +20.10 (c 0.54 CHCl₃)

製造例２ａ
Ｎ－置換システイン誘導体２ａ

Ｎ－置換システイン誘導体２ａは、以下のスキームに従って製造した。

N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-メチル-S-トリチル-L-システイン(6.55 g, 13.7 mmol)と、tert-ブチル L-フェニルアラニナート(3.04 g, 13.7 mmol)を、塩化メチレン(55 mL, 0.25 M)に室温で溶解し、EDC・HCl(3.16 g, 16.5 mmol)とHOBt・H₂O(210 mg, 1.37 mmol)とを加え、室温で６０時間攪拌した。得られた反応混合物に1M塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 60%/40%)で精製し、化合物s6（tert-ブチル N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-メチル-S-トリチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート）をアモルファス固体として収率90%で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.07 (s, 1H), 7.60 - 6.82 (m, 15H), 7.60 - 6.82 (m, 5H), 4.65 - 4.57 and 4.41 - 4.34 (m, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 3.02 - 2.94 (m, 1H), 2.88 (dd, J = 13.8, 9.3 Hz, 1H), 2.65 - 2.56 (m, 1H), 2.36 and 2.28 (s, 3H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.37 and 1.30 (s, 9H), 1.26 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 170.6 and 170.5 (1C), 169.4 and 169.3 (1C), 155.5 and 154.8 (1C), 144.6, 137.8, 129.4, 128.5, 128.5, 127.2, 126.8, 81.1, 79.8 and 79.7 (1C), 66.29 and 66.25 (1C), 58.0 and 56.5 (1C), 54.5, 36.5, 31.6 and 31.2 (1C), 30.5 and 30.2 (1C), 28.4, 27.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₁H₄₈N₂NaO₅S⁺ [M+Na]⁺: 703.3176; found: 703.3182.
FT-IR (neat): 3406, 3063, 2978, 2932, 1685, 1495, 1445, 1367, 1320, 1155, 846, 751, 701 cm^-1
[α]^D ₂₇ -34.66 (c 1.95 CHCl₃)

得られたs6 (8.40 g, 12.0 mmol)を塩化メチレン(120 mL, 0.1 M)に室温で溶解し、トリエチルシラン(2.2 mL, 14.0 mmol)と、トリフルオロ酢酸(4.8 mL, 4 v/v%)とを加え、室温で５０分間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 65%/35%)で精製し、所望の化合物s7（5.10 g）を無色油状物として得た。
得られたs7 (5.10 g, 12.0 mmol)を塩化メチレン(5 mL, 2.4 M)に溶解し、氷冷した後、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(24 mL)を０℃で加え、室温で１９分間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 30%/70%)で精製し、所望の化合物2a（tert-ブチルメチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート）をアモルファス固体として収率64%で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.24 - 7.05 (m, 5H), 4.75 - 4.67 (m, 1H), 3.08 (dd, J = 13.9, 5.8 Hz, 1H), 3.04 - 2.99 (m, 1H), 2.94 (dd, J = 13.9, 7.4 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 13.8, 4.1 Hz, 1H), 2.62 (dd, J = 13.9, 6.8 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.36 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.1, 170.4, 136.3, 129.4, 128.3, 126.8, 82.1, 65.4, 53.0, 38.2, 34.7, 27.9, 26.5.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₇H₂₇N₂O₃S⁺ [M+H]⁺: 339.1737; found: 339.1742.
FT-IR (neat): 3327, 2978, 2557, 1733, 1662, 1515, 1368, 1255, 1156, 846, 741, 700 cm^-1
[α]^D ₂₃ +1.77 (c 1.54 CHCl₃)

製造例２ｂ
Ｎ－置換システイン誘導体２ｂ

Ｎ－置換システイン誘導体２ｂは、以下のスキームに従って製造した。

Boc-L-Leu-OH 一水和物(2.09 g, 8.65 mmol)と、L-Ala-OBn 塩酸塩(1.87 g, 8.65 mmol)を塩化メチレン(35 mL, 0.25 M)に室温で溶解し、EDC・HCl(1.99 g, 10.4 mmol)とHOBt・H₂O(133 mg, 0.860 mmol)とトリエチルアミン(3.01 mL, 21.6 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%)で精製し、化合物s8を無色油状物として収率91%で得た。
NMRデータはChem. Sci. 10, 2465-2472 (2019) に記載されたデータと一致した。

4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(15.2 mL)を０℃とし、得られたs8 (3.00 g, 7.60 mmol)を０℃で加え、室温で３時間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮した。
得られた粗生成物(2.20 g, 7.50 mmol)を塩化メチレン(30 mL, 0.25 M)に室温で溶解し、N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-メチル-S-トリチル-L-システイン(3.60 g, 7.50 mmol)、EDC・HCl(1.70 g, 9.00 mmol)とHOBt・H₂O(114 mg, 0.750 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 65%/35%)で精製し、化合物s10（ベンジル N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-メチル-S-トリチル-L-システイニル-L-ロイシル-L-アラニナート; 2.00 g, 2.66 mmol）を白色固体として収率91%（２工程）で得た。

m.p. 69-71 ℃.
¹H NMR (measured at 64 ℃) (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.14 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.10 (m, 5H), 7.49 - 7.10 (m, 15H), 5.11 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.40 - 4.23 (m, 1H), 4.40 - 4.23 (m, 1H), 4.40 - 4.23 (m, 1H), 2.66 (dd, J = 12.4, 5.3 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.38 (dd, J = 12.2, 10.2 Hz, 1H), 1.57 - 1.41 (m, 1H), 1.57 - 1.41 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.29 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 172.2, 169.1, 155.6 and 154.8 (1C), 144.7, 136.3, 129.5, 128.8, 128.5, 128.4, 128.2, 127.2, 79.9, 66.3, 58.6 and 57.7 (1C), 51.0, 48.1, 41.3 and 41.2 (1C), 31.6, 31.0, 28.4, 24.4, 23.5, 21.9, 21.7, 17.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₄H₅₃N₃NaO₆S⁺ [M+Na]⁺: 774.3547; found: 774.3549.
FT-IR (neat): 3306, 3060, 2957, 1747, 1656, 1541, 1446, 1389, 1367, 1321, 1161, 752, 700 cm^-1
[α]^D ₂₅ -70.54 (c 1.35 CHCl₃)

得られたs10 (2.00 g, 2.66 mmol)を塩化メチレン(27 mL, 0.1 M)に室温で溶解し、トリエチルシラン(480 μL, 3.01 mmol)と、トリフルオロ酢酸(1.08 mL, 4 v/v%)とを加え、室温で８５分間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%)で精製し、所望の化合物s11（1.00 g）を白色固体として得た。
得られたs11 (1.00 g, 1.96 mmol)を０℃とし、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(24 mL)を０℃で加え、室温で１時間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 30%/70%)で精製し、所望の化合物2b（ベンジルメチル-L-システイニル-L-ロイシル-L-アラニナート）を無色油状物として収率68%で得た。

¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.44 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.48 - 7.16 (m, 5H), 5.09 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.05 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.44 - 4.36 (m, 1H), 4.34 - 4.26 (m, 1H), 3.07 - 3.00 (m, 1H), 2.65 (dd, J = 13.3, 5.3 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 13.2, 6.7 Hz, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.63 - 1.52 (m, 1H), 1.45 - 1.33 (m, 2H), 1.29 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 172.4, 172.1, 136.3, 128.8, 128.4, 128.2, 66.4, 65.6, 50.7, 48.1, 41.6, 34.4, 26.9, 24.5, 23.5, 21.8, 17.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₀H₃₂N₃O₄S⁺ [M+H]⁺: 410.2108; found: 410.2108.
FT-IR (neat): 3289, 3067, 2956, 2557, 1743, 1649, 1548, 1455, 1387, 1197, 1164, 1051, 962, 751, 698 cm^-1
[α]^D ₂₅ -78.52 (c 1.8 CHCl₃)

製造例２ｃ
Ｎ－置換システイン誘導体２ｃ

Ｎ－置換システイン誘導体２ｃは、以下のスキームに従って製造した。

Boc-L-Tyr-OH (5.00 g, 17.8 mmol)と塩化メチレン(71 mL, 0.25 M)との混合物に、HCl・NH₂-L-Val-OMe (2.98 g, 17.8 mmol)を室温で加え、EDC・HCl(4.09 g, 21.3 mmol)とHOBt・H₂O(273 mg, 1.78 mmol)とトリエチルアミン(3.7 mL, 26.7 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮した。
得られた粗生成物s12を塩化メチレン(35 mL, 0.5 M)に溶解し、トリフルオロ酢酸(13.6 mL, 178 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。一部のトリフルオロ酢酸を除去するため、得られた反応混合物を減圧下濃縮し、トリエチルアミンを加えて中和した。得られた混合物に塩化メチレン(71 mL)を加え、Boc-L-Ala-OH (3.36 g, 17.8 mmol)、EDC・HCl(4.09 g, 21.3 mmol)とHOBt・H₂O(273 mg, 1.78 mmol)を加え、室温で４時間攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 15%/85%)で精製し、化合物s14（メチル (tert-ブトキシカルボニル)-L-アラニル-L-チロシル-L-バリナート）を白色固体として収率77%（３工程）で得た。

m.p. 94-96 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 9.13 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 4.58 - 4.48 (m, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 1H), 3.93 - 3.84 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.86 (dd, J = 13.8, 3.7 Hz, 1H), 2.69 (dd, J = 13.0, 8.7 Hz, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.08 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.8, 172.1, 171.7, 156.2, 155.3, 130.6, 127.8, 115.2, 78.5, 57.8, 53.9, 52.1, 50.3, 37.3, 30.4, 28.6, 19.3, 18.6, 18.5.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₃H₃₅N₃NaO₇ ⁺ [M+Na]⁺: 488.2367; found: 488.2364.
FT-IR (neat): 3296, 2974, 1651, 1518, 1450, 1368, 1247, 1168, 1023, 758 cm^-1
[α]^D ₂₂ -29.18 (c 1.13 CHCl₃)

得られたs14（Boc-L-Ala-L-Tyr-L-Val-OMe）を塩化メチレン(27.6 mL, 0.5 M)に室温で溶解し、トリフルオロ酢酸(10.6 mL, 138 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。一部のトリフルオロ酢酸を除去するため、得られた反応混合物を減圧下濃縮し、トリエチルアミンを加えて中和した。得られた混合物に塩化メチレン(55 mL)を加え、Boc-Gly-OH (2.42 g, 13.8 mmol)、EDC・HCl(3.18 g, 16.6 mmol)とHOBt・H₂O(212 mg, 1.38 mmol)を加え、室温で４時間攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレン/酢酸エチル = 2/1の混合溶媒で抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 5%/95%)で精製し、化合物s16（メチル (tert-ブトキシカルボニル)グリシル-L-アラニル-L-チロシル-L-バリナート）を白色固体として収率61%（２工程）で得た。

m.p. 204-206 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 9.14 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.92 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.51 - 4.42 (m, 1H), 4.28 - 4.18 (m, 1H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.51 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.88 (dd, J = 13.9, 4.7 Hz, 1H), 2.66 (dd, J = 13.9, 9.3 Hz, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.11 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.3, 172., 171.8, 169.3, 156.2 (2C), 130.5, 128.1, 115.2, 78.5, 57.9, 54.3, 52.1, 48.4, 43.6, 36.9, 30.3, 28.6, 19.3, 18.8, 18.7.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₅H₃₈N₄NaO₈ ⁺ [M+Na]⁺: 545.2582; found: 545.2585.
FT-IR (neat): 3291, 2970, 1733, 1644, 1517, 1447, 1369, 1218, 1167, 756 cm^-1
[α]^D ₂₂ -19.05 (c 1.0 DMSO)

得られたs16 (Boc-Gly-L-Ala-L-Tyr-L-Val-OMe; 2.25 g, 4.31 mmol)に4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(17.2 mL)を０℃で加え、室温で１．５時間攪拌したところ、白色沈殿が生じた。得られた混合物を０℃とし、塩化メチレン(60 mL)で希釈し、ゆっくりトリエチルアミンを加えることにより反応を停止した。得られた混合物にNMe-L-Cys(S-trityl)-OH (2.06 g, 4.31 mmol)、EDC・HCl(991 mg, 5.17 mmol)とHOBt・H₂O(66.0 mg, 0.430 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加えて反応を停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(メタノール/塩化メチレン = 5%/95%)で精製し、化合物s18（メチル N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-メチル-S-トリチル-L-システイニルグリシル-L-アラニル-L-チロシル-L-バリナート）を白色固体として収率74%（２工程）で得た。

m.p. 128-130 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) (measured at 64 ℃) δ 8.92 (s, 1H), 7.81 - 7.61 (m, 1H), 7.81 - 7.61 (m, 1H), 7.81 - 7.61 (m, 1H), 7.81 - 7.61 (m, 1H), 7.47 - 7.09 (m, 15H), 6.97 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.49 - 4.43 (m, 1H), 4.42 - 4.32 (m, 1H), 4.25 - 4.20 (m, 1H), 4.16 (dd, J = 8.2, 6.3 Hz, 1H), 3.74 - 3.52 (m, 1H), 3.74 - 3.52 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.89 (dd, J = 14.0, 5.2 Hz, 1H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.38 (dd, J = 12.1, 10.6 Hz, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.12 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.3, 172.1, 171.7, 169.8 and 169.7 (1C), 168.6, 156.2 (ipso-C of phenol), 155.6 and 154.8 (1C), 144.7, 130.5, 129.5, 128.5, 128.1, 127.2, 115.3, 80.0 and 79.9 (1C), 66.3, 59.1 and 57.7 (1C), 57.9, 54.5, 52.1, 48.5, 42.6, 36.8, 31.6, 31.4 and 31.2 (1C), 30.4, 28.5 and 28.4 (3C), 19.3, 18.7 and 18.6 (1C), 18.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₈H₅₉N₅NaO₉S⁺ [M+Na]⁺: 904.3926; found: 904.3926.
FT-IR (neat): 3297, 2972, 1736, 1646, 1517, 1445, 1369, 1317, 1218, 1158, 755, 702, 667 cm^-1
[α]^D ₂₄ -48.64 (c 3.58 CHCl₃)

得られたs18 (2.10 g, 2.40 mmol)を塩化メチレン(24 mL, 0.1 M)に室温で溶解し、トリエチルシラン(430 μL, 2.70 mmol)と、トリフルオロ酢酸(0.96 mL, 4 v/v%)とを加え、室温で１．５時間攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、塩化メチレンで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(メタノール/塩化メチレン = 5%/95%)で精製し、所望の化合物s19（725 mg）を白色固体として得た。
得られたs19 (725 mg, 1.13 mmol)を０℃とし、4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(4.5 mL, 18 mmol)を加え、室温で１．５時間攪拌したところ、白色沈殿を生じた。反応混合物を塩化メチレンで希釈し、ろ取にて得られた残渣を塩化メチレンで洗浄し、減圧下乾燥し、所望の化合物2c（(4S,7S,10S,16R)-7-(4-ヒドロキシベンジル)-4-イソプロピル-17-メルカプト-N,10-ジメチル-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘプタデカン-16-アミニウムクロリド）を白色固体として収率45%（粗生成物、２工程）で得た。なお、化合物2cはこれ以上の精製をせずに次の反応に用いた。

¹H NMR (399 MHz, D₂O) δ 8.19 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.53 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.29 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.23 - 4.13 (m, 1H), 4.23 - 4.13 (m, 1H), 4.07 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.16 (dd, J = 15.0, 4.7 Hz, 1H), 3.09 (dd, J = 15.0, 5.9 Hz, 1H), 3.04 - 2.88 (m, 1H), 3.04 - 2.88 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.08 - 1.96 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 0.84 (d, J = 3.7 Hz, 3H).
HRMS (ESI) m/z of 2c's free amine form: Calcd for C₂₄H₃₈N₅O₇S⁺ [M+H]⁺: 540.2486; found: 540.2488.

製造例２ｄ
Ｎ－置換システイン誘導体２ｄ

Ｎ－置換システイン誘導体２ｄは、以下のスキームに従って製造した。

Org. Biomol. Chem. 11, 6090-6096 (2013)の記載に従って、S-トリチル L-システイン (1.00 g, 2.75 mmol)から、N-エチル-S-トリチル L-システインを合成した。得られた粗生成物はシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール/塩化メチレン = 11%/88%）で簡易精製した。
得られたN-エチル-S-トリチル L-システインを1,4-ジオキサン/水 = 1/1の混合溶媒(22 mL, 0.12 M)に溶解し、０℃とし、1M 水酸化ナトリウム水溶液(5.5 mL, 5.50 mmol)をゆっくり加え、さらにジ-tert-ブチルジカルボナート(1.20 g, 5.50 mmol)を加え、５０℃で一晩攪拌した。得られた反応混合物を０℃とし、酢酸エチルで希釈し、1M 硫酸水素カリウム水溶液を加えて反応を停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（メタノール/塩化メチレン = 11%/88%）で簡易精製し、化合物s20（700 mg）を得た。
0
得られた化合物s20 (700 mg, 1.42 mmol)を用いて、製造例２ａと同様にして、化合物s21、化合物s22を経て、所望の化合物2dを得た。

化合物s21（tert-ブチル N-(tert-ブトキシカルボニル)-N-エチル-S-トリチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート）：収率43%（３工程）、アモルファス固体
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) (measured at 64 ℃) δ 7.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 - 6.94 (m, 15H), 7.41 - 6.94 (m, 5H), 4.37 - 4.30 (m, 1H), 4.25 - 4.16 (m, 1H), 2.96 (dd, J = 12.9, 5.2 Hz, 1H), 3.00 - 2.88 (m, 1H), 2.91 (dd, J = 12.9, 6.7 Hz, 1H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.64 (dd, J = 12.2, 6.2 Hz, 1H), 2.32 (dd, J = 12.1, 8.8 Hz, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.30 (s, 9H), 0.80 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 170.5 (2C), 169.4, 144.7, 137.5, 129.5, 129.5, 128.6, 128.5, 127.2, 126.9, 81.3, 79.7, 66.5, 54.6 (2C), 39.9 (deduced by HMQC), 36.8, 31.9, 28.4, 27.9, 15.0 and 14.3 (1C).
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₂H₅₀N₂NaO₅S⁺ [M+Na]⁺: 717.3333; found: 717.3331.
FT-IR (neat): 2977, 1732, 1686, 1495, 1407, 1367, 1290, 1254, 1156, 847, 743, 701, 622 cm^-1
[α]^D ₂₃ -31.70 (c 1.03 CHCl₃)

化合物2d（tert-ブチルエチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート）：収率61%（２工程）、アモルファス固体
¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.31 - 7.09 (m, 5H), 4.76 - 4.69 (m, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 2.99 (dd, J = 13.9, 7.1 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 13.8, 4.1 Hz, 1H), 2.67 (dd, J = 13.8, 6.8 Hz, 1H), 2.60 - 2.48 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.04 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.7, 170.4, 136.2, 129.4, 128.3, 126.9, 82.1, 63.5, 53.0, 42.5, 38.3, 27.9, 27.1, 15.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₈H₂₉N₂O₃S⁺ [M+H]⁺: 353.1893; found: 353.1894.
FT-IR (neat): 3315, 2975, 2554, 1733, 1661, 1513, 1368, 1253, 1156, 845, 741, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -6.37 (c 2.35 CHCl₃)

実施例３ａ～３ｖ
実施例３ａ～３ｖの化合物は、以下の製造方法に従って製造した。

Ｎ－置換システイン誘導体（２）（1.5当量）、α－アミドニトリル（１）（1当量）、L-アスコルビン酸（1.3当量）を、メタノール及びpH 7.4の0.2M リン酸バッファーの混合溶媒（体積比2/1、0.1M）に溶解し、トリブチルホスフィン（0.5当量）をさらに加え、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返した。さらにこの混合物を別に示された条件で攪拌して反応させ、得られた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、硫酸ナトリウム（α－アミドニトリル0.1 mmolあたり、およそ5 g）のショートカラムでろ過することにより乾燥し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、目的物（３）を得た。

実施例３ａ：tert-ブチル N-(2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、７２時間で反応させ、化合物3aをアモルファス固体として収率87%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 48%/52%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.46 (s, 1H), 7.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 - 7.07 (m, 10H), 6.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.96 - 4.83 (m, 1H), 4.40 - 4.30 (m, 1H), 4.20 - 4.11 (m, 1H), 3.06 - 2.96 (m, 2H), 2.87 - 2.78 (m, 2H), 2.76 - 2.70 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.57 - 2.49 (m, 1H), 2.21 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 1.31 (s, 9H), 1.30 (s, 9H), 1.26 (s, 6H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.8, 171.9, 170.8, 169.3, 155.8, 138.3, 138.0, 129.7, 129.6, 128.5, 128.4, 126.8, 126.7, 81.1, 78.5, 61.6, 56.3, 56.0, 54.7, 37.6, 36.7, 32.4, 28.5, 28.0, 26.5, 25.4, 22.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₅H₅₀N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 693.3292; found: 693.3304.
FT-IR (neat): 3299, 2979, 2544, 1662, 1498, 1393, 1367, 1250, 1161, 1095, 847, 756, 700 cm^-1
[α]^D ₂₂ -68.95 (c 1.4 CHCl₃)

実施例３ｂ：tert-ブチル N-(2-((S)-2-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)-4-(メチルチオ)ブタンアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、３６時間で反応させ、化合物3bをアモルファス固体として収率81%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 35%/65%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.47 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.26 (m, 5H), 7.26 - 7.12 (m, 5H), 5.00 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 4.89 - 4.79 (m, 1H), 4.36 - 4.28 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 1H), 2.98 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.89 - 2.81 (m, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 2H), 2.21 - 2.16 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.84 - 1.73 (m, 2H), 1.33 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.29 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.9, 171.8, 170.8, 169.3, 156.5, 137.9, 137.3, 129.6, 128.7, 128.5, 128.2, 128.2, 126.8, 81.0, 66.0, 61.7, 56.4, 54.7, 54.1, 36.9, 32.6, 31.7, 30.2, 28.0, 26.4, 25.6, 22.3, 15.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₄H₄₈N₄NaO₇S₂ ⁺ [M+Na]⁺: 711.2857; found: 711.2864.
FT-IR (neat): 3310, 2979, 2546, 1720, 1655, 1525, 1394, 1367, 1241, 1155, 1045, 752, 699 cm^-1
[α]^D ₂₂ -78.74 (c 1.03 CHCl₃)

実施例３ｃ：tert-ブチル N-(2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパンアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、３３．５時間で反応させ、化合物3cをアモルファス固体として収率86%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 20%/80%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.37 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.30 - 7.12 (m, 5H), 6.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.87 - 4.80 (m, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.00 - 3.92 (m, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 2H), 2.98 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.60 - 2.51 (m, 1H), 2.20 - 2.13 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.52 - 1.30 (m, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.27 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.9, 170.8, 170.7, 169.3, 155.6, 137.9, 129.6, 128.5, 126.8, 81.0, 78.6, 62.0, 61.3, 57.1, 56.5, 54.9, 37.0, 32.2, 28.5, 27.9, 26.2, 26.0, 22.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₉H₄₆N₄NaO₈S⁺ [M+Na]⁺: 633.2929; found: 633.2931.
FT-IR (neat): 3313, 2979, 2550, 1715, 1660, 1525, 1394, 1367, 1251, 1160, 1091, 846, 754, 700 cm^-1
[α]^D ₂₅ -82.25 (c 1.00 CHCl₃)

実施例３ｄ：tert-ブチル N-(2-(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)アセトアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、２２時間で反応させ、化合物3dをアモルファス固体として収率82%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 30%/70%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.37 and 8.34 (s, 1H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.11 (m, 5H), 6.88 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 3.59 - 3.46 (m, 2H), 2.98 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 3.04 - 2.87 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 1.54 and 1.35 (s, 3H), 1.36 and 1.33 (s, 3H), 1.30 (s, 9H), 1.26 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.0, 170.7, 169.5, 169.3, 156.2, 137.8, 129.6, 128.5, 126.8, 80.9, 78.4, 61.5, 56.4, 54.8, 46.0, 43.3, 37.0, 32.4, 28.6 and 28.5 (3C), 27.9 and 26.9 (3C), 26.3 and 26.1 (1C), 22.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₂₈H₄₄N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺:603.2823; found: 603.2829.
FT-IR (neat): 3303, 2979, 2550, 1717, 1664, 1523, 1393, 1367, 1249, 1162, 1090, 849, 756, 701 cm^-1
[α]^D ₂₄ -41.00 (c 1.12 CHCl₃)

実施例３ｅ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)シクロプロパン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、２０．５時間で反応させ、化合物3eを白色固体として収率85%で得た。
精製方法：反応混合物（懸濁液）を遠心分離し、メタノール/水 = 1/1 の混合物で５回洗浄した。固体を集め、減圧下乾燥した。洗浄溶媒は、メタノールを除去するために減圧下濃縮し、酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を減圧下濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%）で精製した。得られた固体と、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した生成物を合わせた。
m.p. 180-182 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.56 (s, 1H), 7.77 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.12 (m, 10H), 7.07 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.85 - 4.74 (m, 1H), 4.41 - 4.31 (m, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 1H), 3.03 - 2.88 (m, 2H), 2.82 - 2.69 (m, 1H), 2.82 - 2.69 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.46 - 2.40 (m, 1H), 2.16 - 2.06 (m, 1H), 1.33 (s, 9H), 1.31 (s, 9H), 1.23 - 1.17 (m, 1H), 1.01 - 0.92 (m, 1H), 0.91 - 0.81 (m, 1H), 0.38 - 0.25 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.2, 171.2, 170.7, 169.3, 155.6, 138.2, 137.7, 129.7, 129.6, 128.6, 128.4, 126.9, 126.7, 81.3, 78.5, 60.7, 55.8, 54.4, 37.5, 36.7, 35.3, 31.8, 28.6, 28.0, 22.6, 14.1, 13.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃5H₄₈N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 691.3136; found: 691.3132.
FT-IR (neat): 3316, 2979, 2544, 1668, 1521, 1455, 1393, 1367, 1253, 1161, 1099, 847, 754, 700 cm^-1
[α]^D ₂₃ -118.63 (c 1.1 CHCl₃)

実施例３ｆ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-(1H-インドール-3-イル)プロパンアミド)シクロプロパン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、２３．５時間で反応させ、化合物3fを白色固体として収率83%で得た。
精製方法：反応混合物（懸濁液）を遠心分離し、メタノール/水 = 1/1 の混合物で５回洗浄した。固体を集め、減圧下乾燥した。洗浄溶媒は、メタノールを除去するために減圧下濃縮し、塩化メチレンで抽出し、得られた有機層を減圧下濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%）で精製した。得られた固体と、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した生成物を合わせた。
m.p. 170-172 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 10.78 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.76 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 - 6.70 (m, 10H), 4.86 - 4.74 (m, 1H), 4.42 - 4.30 (m, 1H), 4.16 - 4.04 (m, 1H), 3.08 - 2.88 (m, 2H), 3.08 - 2.88 (m, 1H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.48 - 2.42 (m, 1H), 2.12 (s, 1H), 1.32 (s, 9H), 1.30 (s, 9H), 1.16 - 1.07 (m, 1H), 1.04 - 0.94 (m, 1H), 0.94 - 0.82 (m, 1H), 0.44 - 0.30 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.8, 171.3, 170.6, 169.3, 155.6, 137.7, 136.4, 129.6, 128.6, 127.6, 126.9, 124.3, 121.3, 118.9, 118.6, 111.7, 110.3, 81.3, 78.5, 60.8, 55.3, 54.4, 36.8, 35.5, 31.8, 28.6, 28.0, 27.7, 22.6, 14.1, 13.6.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₇H₄₉N₅NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 730.3245; found: 730.3245.
FT-IR (neat): 3319, 2928, 2546, 1669, 1521, 1457, 1394, 1367, 1251, 1160, 1099, 741, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -94.95 (c 1.06 CH₂Cl₂)

実施例３ｇ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(1-トリチル-1H-イミダゾール-4-イル)-プロパンアミド)シクロプロパン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

４０℃、１３時間で反応させ、化合物3gを白色固体として収率75%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 20%/80%
シリカゲルクロマトグラフィーによる精製後に未反応のＮ－置換システイン誘導体が残存する場合には、1M 塩酸で洗浄する。
m.p. 118-120 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.95 and 8.77 (s, 1H), 7.87 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.60 (m, 2H), 7.55 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.45 - 7.09 (m, 4H), 7.45 - 7.09 (m, 3H), 7.45 - 7.09 (m, 6H), 7.45 - 7.09 (m, 5H), 7.08 - 6.93 (m, 6H), 6.77 and 6.76 (s, 1H), 4.79 - 4.69 (m, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 4.27 - 4.06 (m, 2H), 4.27 - 4.06 (m, 1H), 4.27 - 4.06 (m, 1H), 3.05 - 2.64 (m, 2H), 3.05 - 2.64 (m, 2H), 3.05 - 2.64 (m, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.60 - 2.51 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 1H), 1.50 - 1.40 (m, 1H), 1.30 (s, 9H), 1.07 - 0.99 (m, 1H), 0.96 - 0.84 (m, 1H), 0.56 - 0.44 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 171.4, 170.6, 169.4, 156.3 and 156.2, 144.3, 144.2 and 144.1, 144.1, 142.3, 141.1, 138.0, 137.6, 129.7, 129.6, 128.6, 128.6, 128.5, 128.1, 127.5 and 127.5, 126.9, 125.7, 125.6, 120.6, 119.7, 81.3, 75.4, 66.2, 60.8, 54.7, 54.5, 47.1, 36.8 and 35.5, 32.1, 30.4, 28.0, 22.6, 20.2, 14.3, 13.7.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₆₁H₆₃N₆O₇S⁺ [M+H]⁺:1023.4473; found: 1023.4482.
FT-IR (neat): 3296, 3017, 2565, 1673, 1521, 1448, 1396, 1368, 1249, 1155, 1036, 846, 757, 701, 663 cm^-1
[α]^D ₂₃ -43.18 (c 0.92 CHCl₃)

実施例３ｈ：ベンジル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)シクロプロパン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-ロイシル-L-アラニナート

３０℃、４０時間で反応させ、化合物3hを白色固体として収率91%で得た。
m.p. 170-172 ℃.
精製方法：反応混合物（懸濁液）を遠心分離し、メタノール/水 = 1/1 の混合物で５回洗浄した。固体を集め、減圧下乾燥した。洗浄溶媒は、メタノールを除去するために減圧下濃縮し、酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を減圧下濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン/酢酸エチル = 25%/75%）で精製した。得られた固体と、シリカゲルクロマトグラフィーで精製した生成物を合わせた。
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.60 (s, 1H), 8.38 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 5H), 7.27 - 7.10 (m, 5H), 7.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.85 - 2.66 (m, 1H), 2.84 - 2.66 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.17 - 2.08 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 1.61 - 1.05 (m, 2H), 1.61 - 1.05 (m, 2H), 1.28 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 1.01 - 0.90 (m, 1H), 0.89 - 0.82 (m, 1H), 0.78 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.75 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.47 - 0.34 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.1, 172.6, 172.1, 171.6, 169.1, 155.6, 138.2, 136.3, 129.7, 128.8, 128.4, 128.2, 126.7, 78.5, 66.3, 61.0, 55.9, 51.0, 48.1, 41.3, 37.6, 35.3, 32.3, 28.6, 24.5, 23.5, 22.6, 21.8, 17.2, 14.2, 13.8.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₈H₅₃N₅NaO₈S⁺ [M+Na]⁺: 762.3507; found: 762.3513.
FT-IR (neat): 3330, 2956, 2536, 1739, 1666, 1523, 1367, 1253, 1166, 1101, 1048, 751, 697, 508 cm^-1
[α]^D ₂₂ -75.49 (c 1.32 DMSO)

実施例３ｉ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)シクロペンタン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、１６時間で反応させ、化合物3iをアモルファス固体として収率85%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.40 (s, 1H), 7.86 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 - 7.06 (m, 10H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.96 - 4.85 (m, 1H), 4.40 - 4.32 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.05 - 2.93 (m, 2H), 2.83 - 2.73 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.42 (dd, J = 13.2, 6.9 Hz, 1H), 2.39 - 2.30 (m, 1H), 2.17 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 2H), 1.75 - 1.43 (m, 1H), 1.75 - 1.43 (m, 2H), 1.75 - 1.43 (m, 2H), 1.32 (s, 9H), 1.30 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.6, 171.7, 170.8, 169.4, 155.7, 138.3, 137.9, 129.6, 129.6, 128.5, 128.5, 126.8, 126.7, 81.2, 78.5, 66.1, 61.3, 55.7, 54.6, 37.7, 37.5, 36.7, 35.6, 32.2, 28.6, 28.0, 24.6, 24.2, 22.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₇H₅₂N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 719.3449; found: 719.3447.
FT-IR (neat): 3306, 2978, 2540, 1664, 1520, 1455, 1392, 1367, 1252, 1162, 1049, 846, 756, 700 cm^-1
[α]^D ₂₂ -94.17 (c 1.4 CHCl₃)

実施例３ｊ：tert-ブチル N-(1-((S)-6-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)ヘキサンアミド)-シクロペンタン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、１７時間で反応させ、化合物3jをアモルファス固体として収率85%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.31 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.41 - 7.26 (m, 5H), 7.26 - 7.14 (m, 5H), 6.81 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.95 - 4.85 (m, 1H), 4.38 - 4.29 (m, 1H), 3.86 - 3.78 (m, 1H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 2.95 - 2.87 (m, 2H), 2.85 - 2.75 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.16 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 2.08 - 1.37 (m, 2H), 2.08 - 1.37 (m, 2H), 2.08 - 1.37 (m, 4H), 2.08 - 1.37 (m, 4H), 1.35 (s, 9H), 1.31 (s, 9H), 1.26 - 1.13 (m, 2H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 172.3, 170.8, 169.4, 156.5, 155.8, 137.9, 137.7, 129.6, 128.8, 128.5, 128.1, 126.8, 81.1, 78.4, 66.1, 65.5, 61.3, 54.7, 54.4, 40.5, 37.4, 36.8, 35.7, 31.6, 29.5, 28.6, 28.0,
24.6, 24.2, 23.4, 22.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₂H₆₁N₅NaO₉S⁺ [M+Na]⁺: 834.4082; found: 834.4088.
FT-IR (neat): 3316, 2977, 2547, 1666, 1524, 1456, 1392, 1367, 1251, 1161, 1027, 847, 754, 700 cm^-1
[α]^D ₂₄ -80.73(c 1.2 CHCl₃)

実施例３ｋ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-5-(3-トシルグアニジノ)ペンタンアミド)シクロペンタン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、１７．５時間で反応させ、化合物3kをアモルファス固体として収率81%で得た。
精製方法：反応後の粗生成物はシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン/酢酸エチル = 10%/90%）で精製し、所望の精製物と原料であるＮ－置換システイン誘導体を含むフラクションを集め、減圧下濃縮した。濃縮物を酢酸エチルに溶解し、1M 塩酸で４回、水で３回洗浄した。有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、濃縮して化合物3kを得た。
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.34 (s, 1H), 7.83 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 - 7.10 (m, 7H), 7.01 (s, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.08 - 2.91 (m, 2H), 3.07 - 2.91 (m, 2H), 2.85 - 2.76 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.44 - 2.38 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 2H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.63 - 1.37 (m, 8H), 1.35 (s, 9H), 1.31 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 172.1, 170.8, 169.4, 157.0, 155.8, 141.5, 137.9, 129.6, 129.5, 128.5, 126.8, 126.0, 81.1, 78.5, 66.1, 61.2, 54.7, 54.0, 37.6, 36.7, 35.7, 32.2, 29.3, 28.6, 28.0, 24.6, 24.3, 22.4, 21.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₁H₆₁N₇NaO₉S2⁺ [M+Na]⁺: 882.3864; found: 882.3873.
FT-IR (neat): 3330, 2977, 2554, 1663, 1547, 1455, 1367, 1254, 1163, 1083, 815, 755, 680, 622, 562 cm^-1
[α]^D ₂₅ -59.26 (c 1.08 CHCl₃)

実施例３ｌ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)シクロヘキサン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、３６時間で反応させ、化合物3lをアモルファス固体として収率79%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 67%/33%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.14 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.39 - 7.23 (m, 5H), 7.23 - 7.08 (m, 5H), 7.00 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.96 - 4.82 (m, 1H), 4.40 - 4.27 (m, 1H), 4.40 - 4.27 (m, 1H), 3.04 - 2.95 (m, 2H), 2.91 - 2.80 (m, 2H), 2.77 - 2.71 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.52 - 2.45 (m, 1H), 2.15 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 1.96 - 1.87 (m, 1H), 1.85 - 1.71 (m, 2H), 1.69 - 1.41 (m, 6H), 1.31 (s, 9H), 1.30 (s, 9H), 1.25 - 1.06 (m, 1H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.9, 171.8, 170.7, 169.3, 155.8, 138.4, 137.9, 129.6, 128.5, 126.8, 126.7, 81.1, 78.6, 61.8, 58.8, 55.8, 54.7, 37.8, 36.8, 32.3 (2C), 32.0, 28.5, 28.0, 25.3, 22.2, 21.6, 21.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₈H₅₄N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 733.3605; found: 733.3601.
FT-IR (neat): 3307, 2933, 2540, 1665, 1498, 1455, 1367, 1252, 1162, 1046, 848, 757, 700 cm^-1
[α]^D ₂₅ -76.09 (c 1.0 CHCl₃)

実施例３ｍ：tert-ブチル N-(1-(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)アセトアミド)シクロヘキサン-1-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、３６時間で反応させ、化合物3mをアモルファス固体として収率82%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 43%/57%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.00 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.05 (m, 5H), 6.92 (s, 1H), 4.96 - 4.84 (m, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 1H), 3.66 - 3.50 (m, 2H), 2.97 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.60 - 2.51 (m, 1H), 2.12 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 1H), 1.82 - 1.38 (m, 9H), 1.36 and 1.31 (s, 9H), 1.27 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.1, 170.7, 169.4, 169.3, 156.2, 137.8, 129.6, 128.5, 126.8, 81.0, 78.5, 61.5, 58.8, 54.7, 43.4, 36.9 and 34.7 (1C), 32.7 (2C), 32.1, 28.6 and 28.5 (3C), 27.9, 25.2 and 24.6 (1C), 22.3 and 22.0 (1C), 21.4 (2C).
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₁H₄₈N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 643.3136; found: 643.3134.
FT-IR (neat): 3317, 2933, 2546, 1668, 1523, 1455, 1367, 1250, 1160, 1052, 853, 758, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -45.26 (c 1.18 CHCl₃)

実施例３ｎ：tert-ブチル N-(4-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)テトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、１９．５時間で反応させ、化合物3nをアモルファス固体として収率88%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 35%/65%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.47 (s, 1H), 7.91 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.47 - 7.08 (m, 10H), 7.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.33 - 4.23 (m, 1H), 3.72 - 3.60 (m, 2H), 3.61 - 3.49 (m, 1H), 3.24 - 3.13 (m, 1H), 3.07 - 2.91 (m, 2H), 2.89 - 2.66 (m, 2H), 2.89 - 2.67 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.45 - 2.36 (m, 1H), 2.21 - 2.03 (m, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 1H), 1.75 - 1.61 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 1.31 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 171.9, 171.8, 170.8, 169.2, 155.8, 138.3, 138.0, 129.6, 129.5, 128.5, 126.8, 81.2, 78.6, 63.5, 62.6, 61.7, 56.5, 55.8, 54.6, 37.8, 36.7, 32.5 (2C), 32.1, 28.5, 28.0, 22.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₇H₅₂N₄NaO₈S⁺ [M+Na]⁺: 735.3398; found: 735.3403.
FT-IR (neat): 3306, 2977, 2547, 1670, 1522, 1456, 1367, 1250, 1161, 1107, 1031, 845, 755, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -80.81 (c 1.03 CHCl₃)

実施例３ｏ：ベンジル N-(4-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)テトラヒドロ-2H-ピラン-4-カルボニル)-N-メチル-L-システイニル-L-ロイシル-L-アラニナート

６０℃、２２時間で反応させ、化合物3oをアモルファス固体として収率78%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 20%/80%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.50 (s, 1H), 8.32 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.13 (m, 10H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 1.3 Hz, 2H), 4.83 - 4.73 (m, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 1H), 4.37 - 4.24 (m, 1H), 3.67 - 3.59 (m, 2H), 3.59 - 3.53 (m, 1H), 3.24 - 3.14 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 3.00 - 2.83 (m, 2H), 2.82 - 2.74 (m, 1H), 2.67 - 2.57 (m, 1H), 2.24 - 2.18 (m, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.89 - 1.82 (m, 1H), 1.81 - 1.71 (m, 2H), 1.59 - 1.41 (m, 2H), 1.59 - 1.41 (m, 1H), 1.31 (s, 9H), 1.29 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 172.2 (2C), 171.9, 168.9, 155.8, 138.2, 136.3, 129.6, 128.8, 128.6, 128.4, 128.2, 126.8, 78.6, 66.3, 63.3, 62.7, 62.2, 56.8, 55.8, 51.2, 48.1, 41.1, 37.9, 33.1, 32.6, 32.3, 28.5, 24.4, 23.5, 22.5, 21.9, 17.2.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₀H₅₇N₅NaO₉S⁺ [M+Na]⁺: 806.3769, found: 806.3774.
FT-IR (neat): 3302, 2959, 2554, 1653, 1525, 1455, 1389, 1367, 1251, 1165, 1107, 1052, 755, 699, 580 cm^-1
[α]^D ₂₅ -88.84 (c 1.36 CHCl₃)

実施例３ｐ：tert-ブチル 4-(((R)-1-(((S)-1-(tert-ブトキシ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-3-メルカプト-1-オキソプロパン-2-イル)(メチル)カルバモイル)-4-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)ピペリジン-1-カルボキシラート

６０℃、２２時間で反応させ、化合物3pをアモルファス固体として収率84%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.40 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.44 - 7.12 (m, 5H), 7.44 - 7.12 (m, 5H), 7.06 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.95 - 4.85 (m, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 3.60 - 3.47 (m, 2H), 3.27 - 3.17 (m, 1H), 3.06 - 2.93 (m, 1H), 3.06 - 2.93 (m, 1H), 2.88 - 2.68 (m, 2H), 2.88 - 2.68 (m, 2H), 2.60 (s, 3H), 2.46 - 2.37 (m, 1H), 2.16 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.79 - 1.59 (m, 1H), 1.79 - 1.60 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.33 (s, 9H), 1.30 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.1, 171.7, 170.8, 169.1, 155.8, 154.2, 138.2, 138.0, 129.6, 129.5, 128.48, 126.8, 81.2, 79.1, 78.6, 61.6, 57.3, 55.7, 54.6, 37.7, 36.6, 32.1, 31.8 (2C), 28.5, 28.5, 28.0, 22.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₂H₆₁N₅NaO₉S⁺ [M+Na]⁺: 834.4082; found: 834.4086.
FT-IR (neat): 3308, 2978, 2544, 1671, 1522, 1427, 1393, 1367, 1250, 1158, 1048, 846, 756, 700 cm^-1
[α]^D ₂₅ -67.45 (c 1.02 CHCl₃)

実施例３ｑ：tert-ブチル 4-((S)-5-(ベンジルオキシ)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-5-オキソペンタンアミド)-4-(((R)-1-(((S)-1-(tert-ブトキシ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)アミノ)-3-メルカプト-1-オキソプロパン-2-イル)(メチル)カルバモイル)ピペリジン-1-カルボキシラート

６０℃、２１時間で反応させ、化合物3qをアモルファス固体として収率75%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 34%/66%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.34 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.51 - 7.26 (m, 5H), 7.26 - 7.07 (m, 5H), 6.99 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.95 - 4.85 (m, 1H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 1H), 3.66 - 3.53 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 1H), 3.07 - 2.89 (m, 1H), 3.07 - 2.89 (m, 2H), 2.85 - 2.76 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.46 - 2.30 (m, 1H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.17 - 2.10 (m, 1H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.92 - 1.65 (m, 1H), 1.92 - 1.65 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.35 (s, 9H), 1.32 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.5, 172.0, 171.7, 170.7, 169.1, 155.9, 154.2, 137.9, 136.6, 129.5, 128.8, 128.5, 128.4, 128.2, 126.8, 81.2, 79.1, 78.7, 65.9, 61.6, 57.3, 54.6, 53.8, 36.7, 31.8 (3C), 30.8, 28.53, 28.50, 28.0, 27.2, 22.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₅H₆₅N₅NaO₁₁S⁺ [M+Na]⁺: 906.4293; found: 906.4299.
FT-IR (neat): 3311, 2978, 2547,1685, 1522, 1455, 1426, 1392, 1367, 1250, 1160, 1048, 752, 700 cm^-1
[α]^D ₂₅ -72.51 (c 1.14 CHCl₃)

実施例３ｒ：メチル N-(2-(2-((S)-6-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)-2-((S)-2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-プロパンアミド)-4-メチルペンタンアミド)ヘキサンアミド)アセトアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニルグリシル-L-アラニル-L-チロシル-L-バリナート

化合物2c (86.4 mg, 0.15 mmol)、化合物1p (68.8 mg, 0.10 mmol)、L-アスコルビン酸(23.5 mg, 0.13 mmol)、炭酸水素ナトリウム(12.6 mg, 0.15 mmol)を、メタノール(667 μL)及びpH 7.4の0.2M リン酸バッファーの混合溶媒(333 μL)に溶解し、トリブチルホスフィン(12 μL, 0.05 mmol)をさらに加え、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返し、３０℃で４８時間攪拌した。得られた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、硫酸ナトリウムを乗せたろ紙でろ過し、得られたろ液を減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(塩化メチレン/メタノール = 95%/5%)で精製し、所望の化合物3rを白色固体として収率77%で得た。

m.p. 129-131 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 9.14 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.11 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.78 (m, 1H), 7.87 - 7.77 (m, 1H), 7.72 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.40 - 7.24 (m, 5H), 7.20 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.24 - 4.18 (m, 1H), 4.15 - 4.09 (m, 1H), 4.08 - 4.01 (m, 1H), 3.99 - 3.91 (m, 1H), 3.79 (dd, J = 16.5, 6.7 Hz, 1H), 3.71 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.51 (dd, J = 16.2, 4.4 Hz, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.86 (dd, J = 13.9, 4.9 Hz, 1H), 3.06 - 2.74 (m, 2H), 3.06 - 2.74 (m, 1H), 3.06 - 2.74 (m, 1H), 2.66 (dd, J = 13.9, 8.8 Hz, 1H), 2.22 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.77 - 1.15 (m, 1H), 1.77 - 1.15 (m, 2H), 1.77 - 1.15 (m, 2H), 1.77 - 1.15 (m, 2H), 1.77 - 1.15 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.35 (s, 9H), 1.13 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.13 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.00 - 0.66 (m, 6H), 1.00 - 0.66 (m, 6H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 173.4, 173.0, 173.0, 172.5, 172.2, 172.1, 171.7, 169.8, 169.6, 168.9, 156.5, 156.2 (ipso-C of phenol), 155.6, 137.7, 130.5, 128.8, 128.2, 128.0, 115.2, 78.5, 65.6, 63.2, 57.9, 56.5, 54.3, 53.8, 52.1, 51.1, 50.0, 48.6, 42.7, 42.2, 41.2, 40.5 (overlapping with DMSO-d6 deduced by
HMQC), 36.9, 34.9, 31.5, 30.4, 29.6, 28.6, 26.1, 26.0, 24.4, 23.5, 23.1, 22.6, 22.0, 19.3, 18.7, 18.4, 18.3.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₅₈H₈₉N₁₁NaO₁₆S⁺ [M+Na]⁺: 1250.6102; found:1250.6123.
FT-IR (neat): 3283, 3072, 2962, 2568, 1633, 1533, 1453, 1392, 1367, 1248, 1169, 1091, 1024, 756, 698 cm^-1
[α]^D ₂₅ +7.94 (c 0.8 CHCl₃)

実施例３ｓ：tert-ブチル N-(2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)-2-メチルプロパノイル)-N-エチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、９日間で反応させ、化合物3sをアモルファス固体として収率64%で得た。なお、反応開始から３日後に、使用したシアニド化合物（１）の１００モル％に対して２５モル％のⁿBu₃Pを追加した。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.68 (s, 1H), 7.71 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.33 - 7.07 (m, 5H), 7.33 - 7.07 (m, 5H), 6.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.39 - 4.31 (m, 1H), 4.28 - 4.21 (m, 1H), 3.90 - 3.74 (m, 1H), 3.90 - 3.74 (m, 1H), 3.32 - 3.25 (m, 1H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 3.07 - 3.00 (m, 1H), 2.93 (dd, J = 14.1, 7.4 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 13.8, 5.6 Hz, 1H), 2.75 (dd, J = 13.5, 9.2 Hz, 1H), 2.20 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 1.37 (s, 3H), 1.31 (s, 9H), 1.25 (s, 9H), 1.17 (s, 3H), 0.97 (t, J = 6.7 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.3 (2C), 170.8, 169.7, 155.4, 138.1, 137.9, 129.8, 129.8, 128.4, 128.4, 126.7, 126.7, 80.7, 78.5, 64.1, 56.6, 55.5, 55.3, 44.7, 38.4, 37.2, 28.5, 27.9, 26.8, 25.4, 23.5, 13.4.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₆H₅₂N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 707.3449; found: 707.3452.
FT-IR (neat): 3284, 2979, 2561, 1645, 1499, 1391, 1367, 1252, 1166, 1114, 1052, 847, 755, 700 cm^-1
[α]^D ₂₆ -53.23 (c 0.4 CHCl₃)

実施例３ｔ：tert-ブチル N-(1-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)シクロプロパン-1-カルボニル)-N-エチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

３０℃、１９時間で反応させ、化合物3tを白色固体として収率91%で得た。
なお、反応後に生成した白色沈殿を溶解するため、酢酸エチルを加えた。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 40%/60%
m.p. 78-80 ℃.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.71 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.40 - 7.02 (m, 10H), 6.88 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.26 - 4.04 (m, 1H), 4.26 - 4.04 (m, 1H), 3.54 - 3.41 (m, 1H), 3.31 - 3.20 (m, 1H), 3.03 - 2.65 (m, 2H), 3.03 - 2.65 (m, 2H), 3.03 - 2.65 (m, 2H), 2.19 - 2.11 (m, 1H), 1.29 (s, 9H), 1.28 (s, 9H), 1.06 - 0.65 (m, 3H), 1.06 - 0.65 (m, 2H), 1.06 - 0.65 (m, 1H), 0.56 - 0.40 (m, 1H).
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ 173.7, 170.8, 170.6, 169.4, 155.5, 138.1, 137.7, 129.7, 128.5, 128.4, 126.9, 126.7, 81.1, 78.5, 62.9, 55.7, 54.9, 42.5, 38.0, 37.1, 36.0, 28.5, 28.2, 27.9, 23.5, 14.3, 14.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₆H₅₀N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 705.3292; found: 705.3297.
FT-IR (neat): 3300, 2979, 2932, 2554, 1669, 1522, 1455, 1367, 1252, 1164, 1031, 846, 755, 700 cm^-1
[α]^D ₂₄ -61.19 (c 1.05 CHCl₃)

実施例３ｕ：tert-ブチル N-((S)-2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)-2-メチル-3-フェニルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、７２時間で反応させ、化合物3uをアモルファス固体として収率64%で得た。なお、反応開始から５７時間後に、使用したシアニド化合物（１）の１００モル％に対して５０モル％のⁿBu₃Pを追加した。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 67%/33%.
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.09 (s, 1H), 8.00 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.37 - 6.89 (m, 15H), 7.37 - 6.89 (m, 1H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.43 - 4.35 (m, 1H), 4.22 - 4.13 (m, 1H), 3.43 - 3.30 (m, 1H), 3.07 - 2.96 (m, 2H), 3.07 - 2.96 (m, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.77 - 2.71 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.49 - 2.43 (m, 1H), 2.25 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.27 (s, 9H), 1.25 (s, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.7, 171.7, 170.8, 169.3, 155.8, 138.8, 138.0, 137.5, 131.7, 129.6, 129.5, 128.6, 128.4, 128.2, 126.8, 126.8, 126.6, 81.2, 78.4, 62.1, 58.8, 55.7, 54.7, 41.6, 37.6, 36.7, 32.6, 28.6, 28.0, 22.5, 21.9.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₁H₅₄N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 769.3605; found: 769.3607.
FT-IR (neat): 3305, 2979, 2932, 2547, 1664, 1497, 1455, 1367, 1250, 1161, 1081, 847, 756, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -134.18 (c 0.9 CHCl₃)

実施例３ｖ：tert-ブチル N-((R)-2-((S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-フェニルプロパンアミド)-2-メチル-3-フェニルプロパノイル)-N-メチル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

６０℃、２６時間で反応させ、化合物3vをアモルファス固体として収率75%で得た。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーの溶離液: ヘキサン/酢酸エチル = 60%/40%
¹H NMR (399 MHz, DMSO-d₆) δ 8.43 (s, 1H), 7.82 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.45 - 7.06 (m, 15H), 7.02 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.03 - 4.90 (m, 1H), 4.43 - 4.35 (m, 1H), 4.32 - 4.24 (m, 1H), 3.21 - 2.86 (m, 2H), 3.21 - 2.86 (m, 2H), 3.21 - 2.86 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.76 - 2.61 (m, 2H), 2.24 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 1.30 (s, 9H), 1.27 (s, 9H), 1.18 (s, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ 172.4, 172.2, 170.7, 169.3, 155.8, 138.4, 138.0, 136.8, 131.7, 129.6, 128.6, 128.4, 128.3, 126.8, 126.7, 81.0, 78.5, 61.3, 59.2, 56.0, 54.9, 42.0, 37.8, 36.8, 32.7, 28.5, 27.9, 22.4, 22.1.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₄₁H₅₄N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 769.3605; found: 769.3604.
FT-IR (neat): 3303, 2979, 2932, 2550, 1665, 1497, 1455, 1368, 1251, 1160, 1073, 847, 755, 701 cm^-1
[α]^D ₂₅ -6.40 (c 0.8 CHCl₃)

製造例Ａ１
tert-ブチル ((S)-1-(((S)-1-シアノ-2-フェニルエチル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)カルバマート

(tert-ブトキシカルボニル)-L-フェニルアラニンから３工程（カルボキシル基のカルバモイル基への変換（J. Org. Chem. 2009, 74, 4177-4187）、カルバモイル基のシアノ基への変換（Tetrahedron Lett. 1997, 38, 4221-4222）、tert-ブトキシカルボニル基の除去（Bioorg. Med. Chem. 2019, 27, 115083））で製造した(S)-2-アミノ-3-フェニルプロパンニトリル(5.36 mmol；粗精製物として用いた。)と、L-Boc-Ala-OH (1.01 g, 5.36 mmol)と、塩化メチレン(21 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(1.23 g, 6.43 mmol)とHOBt・H₂O(82.3 mg, 0.536 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%)で精製し、化合物A1を白色固体として収率80%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.39 - 7.23 (m, 5H), 7.08 (s, 1H), 5.14 - 5.03 (m, 1H), 4.97 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.23 - 4.01 (m, 1H), 3.12 - 3.02 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 172.2, 155.7, 133.9, 129.4, 128.9, 127.9, 117.9, 80.7, 49.8, 41.8, 38.9, 28.3, 17.5.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₇H₂₃N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 340.1632; found: 340.1634.

製造例Ａ２
tert-ブチル L-システイニル-L-フェニルアラニナート

tert-ブチル L-システイニル-L-フェニルアラニナートは、以下のスキームに従って製造した。

L-Boc-thioproline (5.50 g, 24.9 mmol)と、L-Phe-OtBu (5.80 g, 24.9 mmol)と、塩化メチレン(100 mL, 0.25 M)との混合物に、EDC・HCl(5.72 g, 29.8 mmol)と、HOBt・H₂O(382 mg, 2.49 mmol)とを加え、室温で一晩攪拌した。溶媒を減圧下除去し、残渣を酢酸エチルで希釈し、1M 塩酸を加えた。有機層を集め、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、化合物AS1 (tert-ブチル (R)-4-(((S)-1-(tert-ブトキシ)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバモイル)チアゾリジン-3-カルボキシラート；9.60 g)を粗精製物として得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.33 - 7.09 (m, 5H), 4.80 - 4.70 (m, 1H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.13 (dd, J = 13.9, 6.0 Hz, 1H), 3.02 (dd, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 2.96 (dd, J = 13.8, 5.8 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 13.8, 4.1 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H).
¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.9, 170.6, 136.2, 129.5, 128.4, 126.9, 82.3, 55.9, 53.2, 38.3, 30.3, 28.0.
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₆H₂₅N₂O₃S⁺ [M+H]⁺: 325.1580; found: 325.1579.
FT-IR (neat): 3358, 2979, 2932, 2561, 1732, 1664, 1509, 1368, 1254, 1155, 845, 700 cm^-1
[α]^D ₂₄ +22.69 (c 1.4 CHCl₃)

4M 塩化水素－1,4-ジオキサン溶液(110 mL)を０℃とし、得られたAS1 (9.60 g, 22.0 mmol)を０℃で加え、薄層クロマトグラフィー分析により反応完結と判断できるまで室温で攪拌した。反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、酢酸エチルで抽出し、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮した。
得られた粗生成物(4.60 g, 13.7 mmol)をメタノール/水 = 2/1の混合溶媒(68 mL)に溶解し、O-メチルヒドロキシルアンモニウムクロリド(11.4 g, 137 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。揮発性化合物を減圧下除去し、反応を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で停止し、酢酸エチルで抽出し、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮しし、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 12%/88%の後、酢酸エチル/メタノール = 95%/5% to 酢酸エチル/メタノール = 90%/10%)で精製し、A2ダイマー(3.40 g)を得た。

A2ダイマー(3.40 g, 5.26 mmol)をメタノール/水 = 9/1の混合溶媒(52.5 mL)に溶解し、PⁿBu₃ (2.60 mL, 10.5 mmol)をアルゴン雰囲気下で加え、薄層クロマトグラフィー分析により反応完結と判断できるまで室温で攪拌した。揮発性化合物を減圧下除去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 50%/50%の後、酢酸エチル 100%)で精製し、化合物A2 (tert-ブチル L-システイニル-L-フェニルアラニナート；2.70 g, 8.32 mmol)を白色固体として収率33%（４工程）で得た。.

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.80 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.30 - 7.09 (m, 5H), 4.78 - 4.67 (m, 1H), 3.64 - 3.47 (m, 1H), 3.12 (dd, J = 13.9, 6.0 Hz, 1H), 3.06 - 2.98 (m, 1H), 2.95 (dd, J = 14.1, 5.8 Hz, 1H), 2.72 - 2.64 (m, 1H), 1.40 (s, 9H).
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₆H₂₅N₂O₃S⁺ [M+H]⁺: 325.1580; found: 325.1579.

実施例Ａ４
tert-ブチル (tert-ブトキシカルボニル)-L-アラニル-L-フェニルアラニル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

Ｎ－無置換システイン誘導体 A2 (0.12 mmol)と、α－モノ置換シアニド化合物 A1 (0.10 mmol)と、塩化アンモニウム(0.30 mmol)を、メタノール/水 = 3/2 の混合溶媒(1 mL)に溶解し、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返した。この混合物を５０℃で２４時間激しく攪拌した。
反応混合物にメタノール(0.9 mL)、水(0.1 mL)、及び11.78 M 塩酸(使用前に滴定して濃度を求めた。)(15.3 μL)を加え、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返した。この混合物を２３℃で２０時間激しく攪拌した。反応混合物をメタノールと酢酸エチルで希釈し、硫酸ナトリウム（α－アミドニトリル0.1 mmolあたり、およそ５ｇ）のショートカラムでろ過することにより乾燥し、メタノールと酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、目的物 A4 (キラルカラムを用いたHPLC分析（粗生成物をイソプロパノール溶液として注入した。IF、ヘキサン/イソプロパノール = 9/1、流速 1.0 ml/min, λ = 210 nm: t_major = 21.00 min, t_minor = 47.16 min）により測定したジアステレオマー比： > 96 : 4)を得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.35 - 7.11 (m, 5H), 7.35 - 7.11 (m, 5H), 7.08 - 6.88 (m, 1H), 7.08 - 6.88 (m, 1H), 6.77 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.79 - 4.47 (m, 1H), 4.79 - 4.47 (m, 1H), 4.79 - 4.47 (m, 1H), 4.10 - 3.95 (m, 1H), 3.27 - 2.96 (m, 1H), 3.27 - 2.96 (m, 1H), 3.27 - 2.96 (m, 1H), 3.27 - 2.96 (m, 1H), 2.93 - 2.56 (m, 1H), 2.93 - 2.56 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.39 (s, 9H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 3H).
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₃H₄₆N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 665.2979; found: 665.2982.

製造例Ａ５
tert-ブチル ((S)-1-((S)-2-シアノピロリジン-1-イル)-1-オキソ-3-フェニルプロパン-2-イル)カルバマート

((2S)-2-シアノピロリジン-1-イウム-1-イル)ジフルオロメチル-λ²-フルオランカルボキシラートを、tert-ブチル (S)-2-シアノピロリジン-1-カルボキシラートから合成した（Synthesis 2019, 51, 4106-4112）。tert-ブチル (S)-2-シアノピロリジン-1-カルボキシラートは、tert-ブチル (S)-2-カルバモイルピロリジン-1-カルボキシラートから合成した（Tetrahedron Lett. 1997, 38, 4221-4222）。(S)-2-カルバモイルピロリジン-1-カルボキシラートは、(tert-ブトキシカルボニル)-L-プロリンから合成した（J. Org. Chem. 2009, 74, 4177-4187）。
((2S)-2-シアノピロリジン-1-イウム-1-イル)ジフルオロメチル-λ²-フルオランカルボキシラート(14.7 mmol、おおよそ4 mL)を含む反応混合物に、トリエチルアミン(9.02 mL)を０℃でゆっくり加えることにより反応を停止した。得られた混合物に塩化メチレン(58 mL, 0.25 M)、L-Boc-Phe-OH (3.90 g, 14.7 mmol)、EDC・HCl(3.38 g, 17.6 mmol)、HOBt・H₂O(226 mg, 1.47 mmol)を加え、室温で一晩攪拌した。反応混合物に1M 塩酸を加え、有機層を集め、Na₂SO₄で乾燥し、減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 45%/55%の後、塩化メチレン/ジエチルエーテル = 80%/20%)で精製し、化合物A5を白色固体として収率36%（２工程）で得た。

¹H NMR (399 MHz, CDCl₃) δ 7.37 - 7.19 (m, 5H), 5.32 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 7.8, 3.0 Hz, 1H), 4.56 - 4.46 (m, 1H), 3.39 - 3.29 (m, 1H), 3.10 - 2.94 (m, 2H), 2.61 - 2.50 (m, 1H), 2.19 - 1.99 (m, 2H), 1.95 - 1.84 (m, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.42 (s, 9H).
HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₁₉H₂₅N₃NaO₃ ⁺ [M+Na]⁺: 366.1788; found: 366.1793.

実施例Ａ７
tert-ブチル (tert-ブトキシカルボニル)-L-フェニルアラニル-L-プロリル-L-システイニル-L-フェニルアラニナート

tert-ブチル (tert-ブトキシカルボニル)-L-フェニルアラニル-L-プロリル-L-システイニル-L-フェニルアラニナートは、以下のスキームに従って製造した。

Ｎ－無置換システイン誘導体 A2 (0.24 mmol, 1.2 equiv.)と、α－モノ置換シアニド化合物 A5 (0.20 mmol, 1 equiv.)と、塩化アンモニウム(0.60 mmol, 3.0 equiv.)を、メタノール/水 = 3/2の混合溶媒(2 mL)に溶解し、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返した。この混合物を５０℃で２２時間激しく攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、硫酸ナトリウム（シアニド化合物A5の0.1 mmolあたり、およそ５ｇ）のショートカラムでろ過することにより乾燥し、メタノールと酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、目的物 A6 (tert-ブチル ((R)-2-((S)-1-((tert-ブトキシカルボニル)-L-フェニルアラニル)ピロリジン-2-イル)-4,5-ジヒドロチアゾール-4-カルボニル)-L-フェニルアラニナート：キラルカラムを用いたHPLC分析（粗生成物をイソプロパノール溶液として注入した。IB-N5、ヘキサン/イソプロパノール = 9/1、流速 1.0 ml/min, λ = 210 nm: t_major = 10.71 min, t_minor = 7.87 min）により測定したジアステレオマー比： > 98 : 2)を得た。

HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₅H₄₆N₄NaO₆S⁺ [M+Na]⁺: 673.3030; found: 673.3035.

得られたtert-ブチル ((R)-2-((S)-1-((tert-ブトキシカルボニル)-L-フェニルアラニル)ピロリジン-2-イル)-4,5-ジヒドロチアゾール-4-カルボニル)-L-フェニルアラニナート(A6 : 65.1 mg, 0.10 mmol)をメタノール/水 = 3/1の混合溶媒(2 mL)に溶解し、1.02 M 塩酸(使用前に滴定して濃度を求めた。)(19.6 μL, 0.2 equiv.)を加え、この混合物をすぐに、液体窒素下で脱気してアルゴンで置換する操作を３回繰り返した。この混合物を２３℃で３６時間激しく攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、硫酸ナトリウム（化合物A6 0.1 mmolあたり、およそ５ｇ）のショートカラムでろ過することにより乾燥し、メタノールと酢酸エチルで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、目的物 A7 (キラルカラムを用いたHPLC分析（粗生成物をイソプロパノール溶液として注入した。IB-N5、ヘキサン/イソプロパノール = 9/1、流速 1.0 ml/min, λ = 210 nm: t_major = 7.55 min, t_minor = 8.20 min）により測定したジアステレオマー比： > 95 : 5)を収率70%で得た。

HRMS (ESI) m/z: Calcd for C₃₅H₄₈N₄NaO₇S⁺ [M+Na]⁺: 691.3136; found: 691.3139.

Claims

式（１）

（式中、Ｒ^１Ａは有機基を示し；
Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示す。）
で表されるシアニド化合物と、式（２）

（式中、Ｒ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。）
で表されるシステイン誘導体とを反応させ、式（３）

（式中、Ｒ^１Ａは有機基を示し；
Ｒ^１Ｂは、水素原子、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子、又はＣ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは水素原子、又は置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、それぞれ独立に、水素原子、又は有機基を示す。）
で表されるペプチド化合物を製造する、アミド結合の生成方法。
Ｒ^１Ｂは、置換されていてもよいＣ_１－４アルキル、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、Ｃ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示す、請求項１に記載のアミド結合の生成方法。
Ｒ^１Ｂは、置換されていてもよいＣ_１－４アルキルを示し；
Ｒ^１Ｃは、Ｃ_１－４アルキルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、置換されていてもよいＣ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、一方が水素原子、他方が有機基を示す、請求項２に記載のアミド結合の生成方法。
Ｒ^１Ｂは、メチル、エチル、若しくはベンジルを示し；
Ｒ^１Ｃは、メチルを示し；あるいは、
Ｒ^１Ｂ及びＲ^１Ｃは、それぞれが結合する炭素原子と一体となって、Ｃ_３－８環状基を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示し；
Ｒ^２Ａは置換されていてもよいメチル、若しくはエチルを示す、請求項３に記載のアミド結合の生成方法。
Ｒ^１Ｂは、水素原子、又はアミノ酸側鎖を示し；
Ｒ^１Ｃは、水素原子を示し；
Ｒ^１Ｄは、水素原子を示すか、あるいは、Ｒ^１Ｄが結合する窒素原子、Ｒ^１Ｂが結合する炭素原子、及びＲ^１Ｂと一体となって、アゼチジン環、ピロリジン環、又はピペリジン環を示し；
Ｒ^２Ａは水素原子を示す、請求項１に記載のアミド結合の生成方法。
Ｒ^２Ｂ及びＲ^２Ｃは、一方が水素原子、他方が有機基を示す、請求項５に記載のアミド結合の生成方法。
前記有機基が、それぞれ同一又は異なって、シアニド基及びメルカプト基を有さない有機基である、請求項１～６のいずれか一項に記載のアミド結合の生成方法。
前記有機基が、それぞれ同一又は異なって、シアニド基及びメルカプト基を有さないアミノ酸残基、若しくはシアニド基及びメルカプト基を有さない２～１００個のアミノ酸が連結したペプチド残基である、請求項７に記載のアミド結合の生成方法。