JP2023123767A - 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット - Google Patents

脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット Download PDF

Info

Publication number
JP2023123767A
JP2023123767A JP2023108291A JP2023108291A JP2023123767A JP 2023123767 A JP2023123767 A JP 2023123767A JP 2023108291 A JP2023108291 A JP 2023108291A JP 2023108291 A JP2023108291 A JP 2023108291A JP 2023123767 A JP2023123767 A JP 2023123767A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
container
fat graft
fat
cryoprotectant
graft
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2023108291A
Other languages
English (en)
Other versions
JP7669058B2 (ja
Inventor
ジェイ．ピーター、ルビン
Peter Rubin J
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Pittsburgh
Original Assignee
University of Pittsburgh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Pittsburgh filed Critical University of Pittsburgh
Publication of JP2023123767A publication Critical patent/JP2023123767A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7669058B2 publication Critical patent/JP7669058B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/22—Means for packing or storing viable microorganisms
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5021—Test tubes specially adapted for centrifugation purposes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
    • C12M33/10—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus by centrifugation ; Cyclones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
    • C12M33/14—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus with filters, sieves or membranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
    • C12M45/05—Means for pre-treatment of biological substances by centrifugation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/4077—Concentrating samples by other techniques involving separation of suspended solids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/42—Low-temperature sample treatment, e.g. cryofixation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/02—Adapting objects or devices to another
    • B01L2200/021—Adjust spacings in an array of wells, pipettes or holders, format transfer between arrays of different size or geometry
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/02—Adapting objects or devices to another
    • B01L2200/026—Fluid interfacing between devices or objects, e.g. connectors, inlet details
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/02—Identification, exchange or storage of information
    • B01L2300/021—Identification, e.g. bar codes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0609—Holders integrated in container to position an object
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0681—Filter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
    • B01L7/50—Cryostats
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/4077—Concentrating samples by other techniques involving separation of suspended solids
    • G01N2001/4088—Concentrating samples by other techniques involving separation of suspended solids filtration

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

【課題】脂肪移植片組織などの生細胞又は生組織の洗浄又は凍結保存に使用するための方法、装置、およびキットを提供する。【解決手段】脂肪細胞又は脂肪組織を保持するフィルター３０で仕切られた内部チャンバーを規定する第１端と第２端とを有し、第２端とフィルターとの間の容積が少なくとも３ｍＬである容器と；第１の開口部を規定する容器の第１端にあるルアーロック又はスリップコネクターなどの第１のアダプター又はコネクター２２と；容器の第２端にあって、第２の開口部を規定するルアーロック又はスリップコネクターなどの第２のアダプター又はコネクター２４と；を含んでなる、細胞又は組織の単離、精製、及び保存装置とする。【選択図】図１

Description

関連出願の参照
本願は、２０１７年９月１日に出願された米国仮特許出願第６２／５５３，３２２号の
利益を主張するものであり、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。
頭蓋顔面外傷、頭蓋顔面変形、先天性異常、および癌治療に関連する変形の後の軟組織
の変形および体積／輪廓の変化は、補正が難しい。注射用ヒアルロン酸充填材は高価であ
り、小体積が充填できるにすぎず、経時的に分解し、反復処置を要する。シリコーンおよ
びポリエチレン移植材は永久的異物であり、長期感染および移動のリスクを有する。主要
な軟組織フラップ法は複雑であり、高い罹患率を有し、供与部位の著しい変形と供与部位
における合併症のリスクがある。自家脂肪移植は、供与部位の罹患を最小限にしつつ早期
回復する、軟組織の変形を処置する有効な手段として発展している。脂肪移植片はまた、
美容整形にも広範に使用される。本発明者らの臨床試験では、特に頭蓋顔面脂肪移植に関
して本療法の強い裏づけが得られている。自家脂肪移植は形成外科および再建外科の手法
で広く使用され、米国で２０１６年に実施された８０，０００件近くが形成外科によるも
のであった(American Society of Plastic Surgeons Data, https://www.plasticsurgery
.org/news/plastic-surgery-statistics)。
脂肪移植に伴う大きな障害は、癒合して長期間存続するのは移植片体積のおよそ６３％
であることであるが、このことは少なくとも処置を２回行えば最適な結果が得られること
を意味する。脂肪採取の侵襲性は最低限であるが、この手法に固有の時間、費用および回
復が存在する。さらに、この採取は通常、手術室の設定を要する。患者の不快と回復時間
を最小とするためには、費用対効果の良い装置および方法が必要とされる。
本発明の一態様によれば、細胞または組織の単離、精製、および保存装置が提供される
。この装置は、脂肪細胞または脂肪組織を保持するフィルターで仕切られた内部チャンバ
ーを規定する第１端と第２端とを有し、前記第２端と前記フィルターとの間の容積が少な
くとも３ｍＬである容器と；第１の開口部を規定する前記容器の第１端にあるルアーロッ
クまたはスリップコネクターなどの第１のアダプターまたはコネクターと；前記容器の第
２端にあって、第２の開口部を規定するルアーロックまたはスリップコネクターなどの第
２のアダプターまたはコネクターとを含んでなる。
本発明の別の態様によれば、脂肪移植片などの細胞の単離および保存において使用する
ためのキットが提供される。このキットは、２～２５の細胞または組織の保存装置（各保
存装置は、脂肪細胞または脂肪組織を保持するフィルターで仕切られた内部チャンバーを
規定する第１端と第２端とを有し、前記第２端と前記フィルターとの間の容積が少なくと
も３ｍＬである容器と；第１の開口部を規定する前記容器の第１端にあるルアーロックま
たはスリップコネクターなどの第１のアダプターまたはコネクターと；前記容器の第２端
にあって、第２の開口部を規定するルアーロックまたはスリップコネクターなどの第２の
アダプターまたはコネクターとを含んでなる）と；
少なくとも３ｍＬの脂肪移植片などの細胞または組織を凍結保存することができる量の
凍結保護剤を含んでなり、場合によりルアーロックまたはスリップコネクターなどのアダ
プターまたはコネクターを有する、少なくとも１つの容器とを含んでなる。
本発明のさらに別の態様によれば、脂肪移植片を調製する方法が提供される。この方法
は、脂肪組織を前記または本明細書のいずれかの態様による装置の第２の開口部から前記
装置の内部チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を凍結保存する
ために有効な量の凍結保護剤を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバーに
導入すること；前記脂肪組織を前記凍結保護剤と混合すること；および前記脂肪移植片を
０℃未満の温度に冷却することを含んでなる。
本発明の別の態様では、脂肪移植片を調製する方法が提供される。この方法は、脂肪組
織を前記または本明細書のいずれかの態様による装置の第２の開口部から前記装置の内部
チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量
の洗浄溶液を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入すること；前
記脂肪組織を前記洗浄溶液と混合すること；前記脂肪移植片を含有する装置を、前記第１
の開口部を下にして遠心して、前記洗浄溶液から前記脂肪移植片を分離すること；および
前記洗浄溶液を前記装置の第１端から排出することを含んでなる。
本発明の別の態様では、脂肪組織を前記または本明細書のいずれかの態様による装置の
第２の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪
移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液または前記脂肪移植片を凍結保存するために
有効な量の凍結保護剤を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入す
ること；および前記脂肪組織を前記洗浄溶液または前記凍結保護剤と混合すること；およ
び洗浄溶液が導入される場合には、前記脂肪移植片を含有する装置を、前記第１の開口部
を下にして遠心して、前記洗浄溶液から前記脂肪移植片を分離し、前記洗浄溶液を前記装
置の第１端から排出すること、または凍結保護剤が導入される場合には、前記脂肪移植片
を０℃未満の温度に冷却することを含んでなる、脂肪移植片を調製する方法が提供される
。
図１は、本明細書に記載の脂肪収集物および保存装置の一態様を、フィルターを示す部分切取図で模式的に示す。 図２は、本明細書に記載の脂肪収集物および保存装置の一態様を、フィルターを示す部分切取図で模式的に示す。 図３Ａは、図３Ｃとともに、本明細書に記載の脂肪移植片などの組織移植片を保存する方法の一態様を部分的に模式的に示す。 図３Ｂは、本明細書に記載の方法およびキットにおいて使用するための保存装置の一態様を模式的に示す。 図３Ｃは、図３Ａとともに、本明細書に記載の脂肪移植片などの組織移植片を保存する方法の一態様を部分的に模式的に示す。 図４Ａは、実施例３に記載されるように、トリパンブルー染色液を用いた生存率に関するＡＳＣ（脂肪由来幹細胞の分析結果を示す。 図４Ｂは、実施例３に記載されるように、トリパンブルー染色液を用いた生存率に関する脂肪細胞の分析結果を示す。 図５Ａは、実施例４に記載されるように、トリパンブルー染色液を用いたＡＳＣの生存率の分析結果を示す。 図５Ｂは、実施例４に記載されるように、トリパンブルー染色液を用いた脂肪細胞の生存率の分析結果を示す。
発明の具体的な説明
本願に特定される種々の範囲における数値の使用は、特に断りのない限り、記載の範囲
内の最小値と最大値の両方に「約」という言葉が付くかのような近似として記載される。
このように、その範囲内の値と実質的に同じ結果を達成するために、記載の範囲の上下の
若干の変動が使用可能である。また、特に断りのない限り、これらの範囲の開示は、最小
値と最大値の間の総ての値を含む連続的範囲として意図される。
本明細書で使用する場合、用語「右」、「左」、「上」、「下」、およびそれらの派生
語は、描かれている図面のその配向通りに本発明に関連付けるべきである。しかしながら
、本発明は様々な別の配向を仮定することができ、従って、このような用語は限定とみな
されるべきでないと理解されるべきである。また、そうではないことが明示される場合を
除き、本発明は様々な別の変形形態および段階の順序を仮定することができると理解され
るべきである。また、添付の図面に示され、下記の明細書に記載される特定の装置および
工程は例であると理解されるべきである。よって、本明細書に開示される実施形態に関連
する特定の寸法およびその他の物理的特徴は、限定とみなされるべきではない。
用語「遠位」および「近位」は、本明細書に記載の装置に関する方向を指し、「遠位」
は、皮下注射器の鋭利な針先（針の遠位端）に接近する方向など、装置の使用者から遠ざ
かる方向を指し、「近位」は、シリンジの近位端にある鋭利な針先とは反対の方向の皮下
注射器のプランジャーの末端に接近する方向など、装置の使用者へ向かう方法を指す。「
遠位」と「近位」、および他の空間的関係の用語は、本明細書に記載の装置の要素の、経
皮装置としての典型的な使用においての装置の末端使用に関する、または他の外部基準点
に関する相対的な位置、配向、および／または方向に対応するが、これらの記述子は、本
明細書に記載の装置の要素の、全体としての装置に関する、また、その要素に関する相対
的な位置、配向、および／または方向を表すために提供されるに過ぎず、特に断りのない
限り、これらの要素がいずれの時点であれそこに存在する、その位置にある、その配向に
ある、または末端使用者と何らかの物理的関係にあることを必要としない、または意味し
ない。図面は、特に断りのない限り、本質的に模式的であり、尺度に合わせて描かれてい
ないが、図面に描かれる装置の種々の要素間の関係を最も良く表すように描かれている。
本明細書で使用する場合、用語「含んでなる(“comprising”、“comprise”または“c
omprised”)」およびその変化形は、オープンエンドであることを意味する。用語「１つ
の（“a”および“an”）」は、１以上を指すことが意図される。
本明細書で使用する場合、ある病態、創傷、または欠損の「治療(“treatment”または
“treating”)」は、三尖弁または僧帽弁の修復および／または置換を含む所望の臨床／
医療エンドポイントを達成する目的での、組成物、装置または構造の、任意の好適な投与
計画、手順および／または投与経路による患者への投与を意味する。
本明細書で使用する場合、用語「患者」または「対象」は、限定されるものではないが
、ヒトを含む動物界のメンバーを指し、「哺乳動物」は、限定されるものではないが、ヒ
トを含む総ての哺乳動物を指す。
本明細書では、生脂肪細胞または生脂肪組織を保存する簡単で費用対効果の高い方法が
提供される。
シリンジ、カニューレ、ならびに本明細書に記載の装置およびキットとともに使用する
ための「流体コネクター」は、例えば、医療分野で広く知られている小口径流体コネクタ
ー（例えば、ＩＳＯ８０３６９）と呼ばれるいずれの好適な流体コネクターであってもよ
い。一般的なコネクターには、皮下注射器などの医療・実験器具または機器とともに使用
するために一般的であるように、スリップ式またはネジ式ルアーコネクターなどのスリッ
プ式またはネジ式コネクターが含まれる。コネクターは、装置の適正な配向および使用を
確保するために色または構造によって合わせることができる。
「シリンジ」は、本明細書で使用する場合、医療分野で広く知られているように医療用
または皮下注射器を指し、ガラス、プラスチック、セラミック、および／または任意の許
容される材料から製造することができる。シリンジの構造および機能、ならびにその部品
は広く知られている。「カニューレ」は、平滑末端を有する中空管であり、「針」は、本
明細書に記載の装置およびキットの目的では、組織、例えば、皮膚、血管、または他の組
織を容易に貫通するための鋭利なまたは尖った末端を有する中空管を指す。脂肪の吸引に
関しては、刺創の可能性を低減するためにカニューレが好ましいものであり得る。カニュ
ーレを使用する場合、針、またはその他の「鋭利な」装置がまず患者の皮膚を貫通するた
めに使用され得る。針およびカニューレは両方とも、広く知られているように、開口部と
、針の場合には、鋭利なまたは尖った端部を含んでなる遠位端（患者への挿入のため）と
を有する。それらは、シリンジの取り付けのためのルアーコネクターのなどの好適な流体
コネクターを含んでなる近位端も有する。脂肪採取用のカニューレは、１以上の開口部が
その遠位端と様々なパターンで隣接してカニューレの壁内にある、閉鎖端を含むことがで
きる。このようなカニューレは、とりわけ、Ｔｕｌｉｐ ＣｅｌｌＦｒｉｅｎｄｌｙ（商
標）カニューレおよびカリフォルニア州サンディエゴのＴｕｌｉｐ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔｓまたはバージニア州シャーロッツヴィルのＭｉｃｒｏＡｉｒｅから入手可
能な採取用カニューレなど、広く入手可能である。
「凍結保護剤」は、生細胞に添加して凍結温度、例えば、－２０℃または－８０℃など
の０℃未満の温度への曝露（例えば、凍結保存）から細胞を保護することができ、その結
果、細胞が凍結温度を受けた後に細胞の実質的生存率が得られる組成物である。凍結保護
剤は一般に、細胞の保存に使用される場合には非毒性である。ヒト細胞の保護のために有
用な好適な凍結保護剤には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン、
トレハロース、および前記のものの任意の有効な組合せを含み、場合により、さらに自己
血漿または自己血清も含む。１０％ｖ／ｖ ＤＭＳＯなどの凍結保護剤の有効量が当業者
に知られており、凍結保護剤の有効量または最適量は容易に確認される。同様に、脂肪移
植片の緩慢な冷却および解凍も採取した組織の良好な生存率を得る上で望まれ得る。脂肪
細胞の凍結保存については下記の実施例２を参照。
脂肪移植は、中空カニューレを介した皮下組織からの脂肪供与組織の吸引を含む外科的
手法である。腹部が一般的な供与部位である。脂肪移植片は注射可能であり、これにより
、採取手順と移植手順の両方が最小の侵襲性となる。脂肪移植片は、粘稠な注射可能スラ
リーを形成するおよそ２～５ｍｍ径という小粒子の脂肪組織から構成される。採取前にド
ナーの皮下組織にエピネフリンを含有する生理食塩水が注入される。この「湿潤溶液」の
注入は出血を最小限にするだけでなく、移植前に分離する必要のある採取組織に水性の流
体成分を与える。「コールマン法」と呼ばれる採取および移植の標準的技術では、１０ｃ
ｃルアーロックシリンジに取り付けた中空採取カニューレを使用する。外科医は小切開部
からカニューレを挿入し、プランジャーを後退させて陰圧をかける。カニューレが組織を
通過すると、脂肪の小粒子は採取カニューレの開口部に引き込まれ、カニューレの移動で
周囲組織から剥離され、注射筒に引き込まれる。水溶液は、湿潤溶液からの脂肪組織なら
びに溶解した脂肪細胞からの遊離脂質へ混合されるので、脂肪移植片材料は簡単な卓上血
液遠心機での穏やかな遠心分離によって他の画分から分離される。この装置は一般に脂肪
移植に適合され、この目的でほとんどの手術室に存在する。濃縮された脂肪移植片は１０
ｃｃシリンジからレシピエントの組織に注射することもでき、より厳密な注射のためによ
り小型のシリンジに移すこともできる。
注射のためには、採取カニューレによく似た中空カニューレを注射筒に取り付ける。一
般的な脂肪移植機器は総て、ルアーコネクターに取り付けられるように設計され、このこ
とは本明細書に記載の装置の一態様の設計においても考慮される。重要なこととして、外
科医は、脂肪をそのまま採取用に用いる１０ｃｃシリンジに入れて、手術室で遠心工程を
実施することになれている。シリンジプランジャーが単に取り外され、１０ｃｃの注射筒
が遠心機の無菌チューブに適合する。この点は、複数の態様で、記載の装置は標準的な、
例えば１０ｃｃの注射筒と同じ直径および基本長を有することから、装置設計に直接関連
する。よって、脂肪組織保存装置は、コンテナを変える必要なく解凍後の洗浄工程を容易
にするように遠心機に適合し得る。保存装置は、脂肪移植を実施する外科医により慣用さ
れる現行の器具および方法とシームレスに機能するように作製される。
自家脂肪移植の主要な欠陥は、初期癒合の際に脂肪移植片の吸収があり、癒合後に残存
するのは移植片の体積のおよそ６０％であるということである。従って、多くの場合複数
回の処置が必要である。脂肪移植片を得るためのドナー採取法は手術室の設定および脂肪
組織を処理するための特殊な器具を要するので、脂肪組織が手術の時点で後の使用のため
に保存できれば、費用、リスク、不快感が著しく軽減し、医療が改善される。組織は現場
において小アリコートで保存することができ、これを結果の精密化のために診療室の設定
で損傷部位に注入することができる。組織は現場で保存されるので、元の脂肪採取と元の
脂肪処理に最小の費用を追加するだけで複数回の処置が可能となる。
複数の態様で、装置は、凍結保存剤、ならびに脂肪移植片を凍結保存剤と混合するため
、保存のため、および解凍後の洗浄工程のために使用される特殊な多機能容器を含んでな
るキットで提供される。一例では、個々の容器はそれぞれおよそ１０ｃｃの移植片材料を
保持し、絶えず温度を記録し、継続保存のために他の容器を保存しながらアリコートを個
々に取り出すことを可能とする特殊な保存コンテナ内で一緒に保存される。個々の容器を
保持する大きな保存コンテナを各キットに含めてもよい。
複数の態様で、個々の使い捨て多機能容器は、そのシステムが脂肪移植に使用される標
準的なシリンジと接続できるようにルアーロックポートを有する。内蔵フィルターは、脂
肪移植片材料を取り出すことなく、凍結保護剤溶液と洗浄溶液の両方の注入および排出を
可能とする。脂肪移植片材料を添加する工程、凍結保護剤と混合する工程、冷凍庫で保存
する工程、解凍する工程、洗浄する工程、および濾過する工程は総て同じ容器で行う。こ
れはこのシステムの明白な利点である。ルアーロックコネクターに加え、装置は場合によ
り、所望により、またはルアーロックポートの閉塞が起こった場合に脂肪移植片を別の無
菌コンテナに注ぐことを可能とするために一端を開口することもできる。上記に示したよ
うに、一態様において、多機能容器は、標準的な１０ｃｃシリンジと同じ直径であり、ほ
ぼ同じ長さであり、それらは脂肪移植に既に使用されているものと同じ、手術室に一般に
見られる卓上遠心機で使用することができる。
本明細書に記載の装置、キットおよび方法の利点としては、下記が挙げられる：
組織移植片が現場において極めて簡単な調製かつ低コストで保存できること；
脂肪移植片のアリコートが保存場所から取り出せ、残っているアリコートがその後の使
用のために無傷で残されること；
脂肪移植片の混合、保存、および洗浄が総て同じ使い捨て多機能容器で行われること；
多機能容器が慣用される脂肪移植片器具および標準的シリンジとシームレスに機能する
ように設計されていること；および
この器具の使用が脂肪移植を実施するいずれの外科医にも極めて直感的に理解されるも
のであること。
よって、本明細書では、脂肪細胞および脂肪組織の採取および保存において使用するた
めの装置、キットおよび方法が提供される。一態様において、保存容器が提供される。図
１を参照すると、円筒装置１０が描かれている。装置１０およびその部品は、生理学的温
度（３７℃）から凍結保存条件下での保存まで、例えば、－２０℃、－８０℃、または－
１９６℃（液体窒素）までに及ぶ細胞および組織凍結保存条件に耐えるのに好適な材料、
凍結保存分野および遠心分離分野で知られているように、例えば、好適なポリカーボネー
トまたはポリプロピレン、および好適な金属スクリーンまたはフィルターから製造される
。複数の態様では、装置１０は、装置（例えば、チューブ、ボトル、またはシリンジ）を
遠心することができる典型的な臨床検査遠心機に適合する寸法とし、すなわち、一態様に
おいて、この装置は、例えば、典型的な５ｍＬ～１００ｍＬ、例えば、５ｍＬ、１０ｍＬ
、１５ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬ、もしくは６０ｍＬ医療用シリンジ、典型的な５ｍＬ～
５０ｍＬ、遠心管（例えば、円錐型遠心管）、または典型的な採血管としての寸法とし、
すなわち、５ｍｍ～２５ｍｍ、例えば、１２ｍｍ～２５ｍｍの外径、および７０ｍｍ～１
１０ｍｍの長さ（コネクターを除く胴長）を有する。例えば、１０ｍＬシリンジと併用す
るための保存容器は、１６．５ｍｍ～１８ｍｍの範囲の外径、および８０ｍｍ～９０ｍｍ
の範囲の胴長を有し得る。一例では、胴長と胴外径の比は、少なくとも４：１、例えば、
４：１～６：１である。複数の態様で、装置１０はカスタムサイズであるが、遠心機の、
カスタムもしくは標準ローターまたはカスタムもしくは標準ローターインサートのいずれ
かを有するローターに適合し、その容積は３ｍＬ～１００ｍＬの範囲であるか、またはそ
れより大きい。「１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有するチューブ、ボトル、またはシリンジ
を遠心することができる遠心機」とは、手術室、臨床検査室、外来患者施設、および診療
所に一般に見られる遠心機、またはカスタム遠心機であり、１０ｍＬ管など、１ｍＬ～４
Ｌの範囲内にある容積を有する装置を遠心することができるが、必ずしもその範囲の総て
の容積を遠心する能力を有していなくてもよい。例えば、「１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を
有するチューブ、ボトル、またはシリンジを遠心することができる遠心機」は、３ｍＬ～
３０ｍＬ、または１０ｍＬ～６０ｍＬの範囲のチューブのみを遠心することができ、範囲
外のチューブは遠心することができなくてもよい。
図１を再び参照し、装置１０は、壁面と内部チャンバー（すなわち、内部空洞、または
内腔）を有する円筒状のバレル２０として描かれる容器を含んでなる。この容器はバレル
として描かれるが、円筒状のバレル形状が好ましいが、いずれの好適な形状であってもよ
い。装置１０はまた、第１の流体コネクター２２を通ってバレル２０の内腔へ延伸する開
口部２３を含んでなる第１の流体コネクター２２を有する第１端と、第２の流体コネクタ
ー２４を通ってバレル２０の内腔へ延伸する開口部２５を含んでなる第２の流体コネクタ
ー２４を有する第２端とを含んでなる。第１の流体コネクター２２、バレル２０、および
第２の流体コネクター２４は一緒に、第１の流体コネクター２２の開口部と第２の流体コ
ネクター２４の開口部との間に閉流路を形成する。フィルター３０は、バレル２０内に、
第１の流体コネクター２２に隣接して配置され、第１の流体コネクター２２の開口部と第
２の流体コネクター２４の開口部との間の閉流路を通過する液体を濾過するように構成さ
れる。すなわち、フィルター３０は、第１の流体コネクター２２の開口部と第２の流体コ
ネクター２４の開口部との間の閉流路を通過する流体がフィルター３０を通過するように
、バレルの内腔の全横断面に及んでいる。フィルター３０は、例えば、－１９６℃～３７
℃の範囲の凍結保存温度に耐え得るいずれの好適な材料、例えば、金属メッシュ、例えば
、ステンレス鋼メッシュから製造することができる。このフィルターは、使用中に大部分
の脂肪組織がフィルターによって保持されるように、いずれの好適な孔径またはメッシュ
サイズであってもよく、例えば、５０ミクロン（μ）～２５０μの範囲のフィルター、ま
たはフィルター目的を果たす他の多孔質遮蔽物などであってもよい。バレル２０は、その
第２端とフィルター３０の間の内部容積が３ｍＬ～１００ｍＬの範囲、例えば、およそ５
ｍＬ、１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、また
は１００ｍＬであり、その間の刻みは、例えば、限定されない一例では、１０ｃｃシリン
ジを用いて得られる組織容積を収容するために９ｍＬ～１５ｍＬである。装置１０は場合
により、バレル２０の内部チャンバーに生細胞または生組織、例えば、生脂肪細胞または
生脂肪組織、例えば、脂肪移植片、例えば、ヒト脂肪移植片を含んでなる。
この装置は、生存脂肪移植片の洗浄およびペレット化に典型的な遠心条件に耐えるよう
、少なくとも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、または１５００ｇの
Ｇ力（地球表面での重力１ｇの倍数）に耐えるように設計および製造される。生存細胞を
もたらす脂肪移植片の調製に使用される一般的な遠心条件およびプロトコールは様々あり
、Ｇ力は１～５分の典型的回転持続時間で一般に４００ｇ～１５００ｇの範囲であり、例
えば、以下に示すように、３分間で１２００ｇである。
図２は、装置１１の第２の態様を示し、第１のバレル部分２６とスリップフィッティン
グ２９を含む第２のバレル部分２８に分かれる分離可能なバレルを有すること以外は図１
に示される装置１０と本質的に同一である。バレル部分２６と２８に分離可能である目的
は、万一装置が閉塞した場合に装置１１のバレルを開放して内容物を放出することを可能
とするためである。装置１１は、第１の流体コネクター２２からバレル２０の内腔へ延伸
する開口部２３を含んでなる第１の流体コネクター２２を有する第１端と、第２の流体コ
ネクター２４から第１のバレル部分２６と第２のバレル部分２８により形成されるバレル
の内腔へ延伸する開口部２５を含んでなる第２の流体コネクター２４を有する第２端とを
含んでなる。スリップフィッティング２９は、使用中にバレルを効果的に密閉し、バレル
部分２６と２８の分離を防ぐために第１のバレル部分の内面と係合するように構成される
。あるいは、使用中にバレル部分２６および２８の分離を防ぐためには、フィッティング
２９が、バレル部分２６と２８がかみ合うように、フィッティングの嵌合山と第１のバレ
ル部分２６の内面の谷などの好適な構造要素を含んでもよい。別の態様では、フィッティ
ング２９はネジ式であり、かつ、バレル部分が螺合し、第１のバレル部分２６を第２のバ
レル部分２８から分離するために互いに対してねじることができるように、第１のバレル
部分２６の内面はネジ式またはタップ式である。フィッティング２９は、第２のバレル部
分２６と一体として示され、あるいは、逆にすることもでき、すなわち、それは第１のバ
レル部分２９と一体である。
本明細書に記載され、図１の装置１０に例示される保存容器を用いて生脂肪細胞または
生脂肪組織（脂肪移植片）を処理および保存、例えば、凍結保存するための方法が提供さ
れる。図３Ａ～３Ｃは、脂肪移植片の保存、例えば、凍結保存に有用な方法およびキット
の要素を示す。図３ａを参照し、脂肪移植片１１３、すなわち、吸引したばかりの脂肪組
織および脂肪細胞を、シリンジ１１２に引き込む。脂肪移植片１１３を前記シリンジから
装置１１０、例えば、本質的には図１に示されるような装置１０（要素は図１の装置１０
に関して特定されるように参照）の第２端（フィルターとは反対の端部）に注入する。前
記容器をシリンジ１１２から取り外し、凍結保護剤１１４を装置１１０の第１端（フィル
ターを有する端部）に注入する１４２。装置１１０の第２端に蓋をして１４４、その後、
装置１１０の第１端に蓋をする１４６。その後、装置１１０を振盪して脂肪移植片と凍結
保護剤の混合物１１５を作成する。この工程を所望の回数繰り返し、例えば、患者から１
～２５本のチューブの脂肪（脂肪移植片）を採取し、その脂肪移植片を凍結保護剤と混合
する。次に、脂肪移植片を０℃未満の温度、例えば、－２０℃、－８０℃で、または液体
窒素中で保存する１５０。本明細書で使用する場合、「混合」は、振盪、倒置、振盪水浴
中に置く、ボルテックス混合機での穏やかな混合、または装置内で細胞の生存力に実質的
な影響を及ぼさない任意の好適な方法を含む、いずれの方法によってもよい。
図３Ｂは、脂肪移植片を保存するためのキットの一部として流通可能な例示的脂肪保存
コンテナ１５２を示す。コンテナ１５２は、示されているように、凍結保護剤を混合した
脂肪移植片を含有する５本の充填済み保存装置１１０を収容する。コンテナ１５２、患者
に関する表示を含む個々の患者ラベルを貼付した保存容器が示され、コンテナ１５２は、
安全シールならびに患者情報および脂肪移植片の保存日を含む表示を含む外ラベルも含む
。また、脂肪移植片の温度変化を追跡するために温度記録計（例えば、広く知られている
ように電気温度記録計または温度ロガー）も含まれる。コンテナは好適な数の保存装置１
１０を保持するのに十分ないずれの形状およびサイズとすることもでき、脂肪移植片の保
存に伴う温度変化に耐え得るいずれの好適な材料から製造されてもよい。
ここで図３Ｃを参照し、例えば、組織充填材としての脂肪移植片の使用に関して、脂肪
移植片と凍結保護剤の混合物１１５を含有する保存容器を、例えば、氷上、または冷蔵庫
、例えば、４℃などの適当な条件下で解凍し、脂肪移植片１１３’を凍結保護剤１１４’
から分離するために容器内で遠心し１５４、次いで、凍結保護剤１１４’を容器の第１端
から抜き取る１５６。本明細書の目的で、脂肪移植片を、移植片の生存力を保持、最適化
、または最大化しつつ、脂肪移植片が分散している液体（例えば、凍結保護剤または洗浄
溶液）のほとんどから脂肪移植片を効果的に分離するのに好適なＧ力を好適な時間生み出
すのに好適な速度（ＲＰＭ）で好適な時間遠心する。脂肪組織は凍結保護剤と洗浄溶液上
に浮遊しているので、これらの容器は第１端を下にして遠心する。
洗浄溶液１１５、例えば、生理食塩水、水、リン酸緩衝生理食塩水、無血清培地、また
は任意の好適な洗浄溶液を容器の第１端に導入し１５８、蓋をして振盪し１６０、洗浄溶
液と脂肪移植片の混合物１１６を作製する。この容器を上記のように遠心して（図示せず
）、細胞から洗浄溶液１１５’を分離し、洗浄溶液１１５’を容器から抜き取る１６２。
洗浄工程１５８、１６０、および１６２を、凍結保護剤、遊離脂質、および細胞屑を除去
するのに必要とされる回数、例えば、２～６回、例えば、３回繰り返す。遠心後、遊離脂
質が存在すれば、脂肪移植片の上層にある。遊離脂質は傾斜法で除去することができる。
容器を逆転させ、洗浄された脂肪移植片１１３’を容器からシリンジへ抜き取り１６４、
患者に注射する準備が整う。場合により、遊離脂質は、洗浄溶液１１５’の除去後、患者
に送達するために脂肪移植片１１３’’をシリンジに移す１６４および１６６前に脂肪移
植片から除去される。
遠心は特に効果的であり、迅速であるが、細胞または組織はいずれの有用な方法を用い
て液体から分離してもよい。例えば、限定されるものではないが、凍結保護剤または洗浄
溶液と混合された細胞もしくは組織材料は、例えば、限定されるものではないが、細胞ま
たは組織層を液層から分離するのに十分な時間、好適なラック内に装置を配置および保持
することにより（分離される液体の一層または複数層の場所によって、その後、液体が装
置から抜き取られるか、または傾斜法により除去される）、遠心機を用いずに分離するこ
ともできる。細胞または組織が脂肪移植片である場合、脂肪移植片は一般に凍結保護剤ま
たは洗浄溶液よりも低比重であり、この場合、分離されたところで、高密度の液体が装置
の第１の開口部から抜き取られる。脂肪移植片より低比重の無細胞脂質は、装置の第２の
開口部から傾斜法により除去することができる。
脂肪移植片を装置１１０に注入した後、脂肪移植片と凍結保護剤を混合する１４２前に
、脂肪移植片を上記のように（１５６、１５８、１６０、１６２）、ＰＢＳまたは生理食
塩水などの好適な洗浄溶液で洗浄することができ、遊離脂質を遠心後に除去、例えば傾斜
法により除去することができる。解凍および洗浄後、脂肪移植片を使用前に、移植片をコ
ラゲナーゼで処理し、濾過して構造断片を除去し、場合により、前駆細胞、例えば、脂肪
由来幹細胞（ＡＳＣ）を含んでなる間質血管画分（ＳＶＦ）を含む他の細胞要素から脂肪
細胞を分離するために遠心することにより、例えば、ＳＶＦの細胞をプラスチックに接着
させることによるなどで、さらに処理することができる。
一態様において、脂肪移植片などの移植片の保存において使用するためのキットが提供
される。このキットは、上記および本明細書の他所に記載される方法に記載されるように
、ボックス、成形コンテナまたはインサート、内容物を識別し、キットの要素の使用方法
を概説する好適な表示を含む、キットの要素に好適なパッケージングを含んでなる。少な
くとも、このキットは、本明細書に記載されるような、例えば、図１または図２に関して
記載されるような２以上の保存容器を含んでなる。このキットはまた、場合により、本明
細書に記載の凍結保護剤を、キットの容器に引き込まれ得る容積の移植片、例えば、脂肪
移植片を凍結保護するのに有効な量で含んでなる１以上の容器を含んでなる。例えば、１
０ｍＬシリンジに引き込まれる脂肪移植片とともに使用するための２つの１０ｍＬ保存容
器の場合、２０ｍＬの脂肪移植片材料の凍結保護に有効であろう量の凍結保護剤が提供さ
れる。上記のように、ＤＭＳＯ、ヒト血清アルブミン、またはトレハロース、または前記
のいずれかの有効な組合せなど、いずれの好適な凍結保護剤が容器に含まれてもよい。凍
結保護剤は、１つの多回使用容器に含むこともできるし、または個々に、単一の容器で吸
引組織を処理するのに十分な凍結保護剤だけを含有する単回使用容器に含むこともできる
。このキットはまた、好適な洗浄溶液を、キットの容器の数および大きさに適当な量で含
んでなる容器を含んでもよい。場合により凍結保護剤または洗浄溶液を含有するこれらの
容器は、シリンジと併用するための、ルアーコネクターなどの好適なコネクターを含んで
なる。このキットはまた、場合により、患者から脂肪サンプルを得るためのまたは本明細
書に記載の移植片を処理するための１以上の無菌シリンジを含んでなる。また、脂肪採取
カニューレもキットに含まれてよい。加えて、例えば、図３Ｂに関して示され、記載され
るように、保存コンテナがキットに含まれてよく、場合により、下記のうち１以上を含む
：保存容器用のラベル、保存コンテナ用のラベル、温度ロガー、またはコンテナの内容物
に対するいたずらを示すための安全シール。一例では、キットは、好適なパッケージング
内に、５、１０、１５、２０、または２５の保存容器、凍結保護剤を含んでなる１以上の
容器、洗浄溶液を含んでなる１以上の容器、および場合により温度ロガーを含む保存容器
を含んでなる。
実施例１
本明細書に記載の装置が処理に耐え、液体から脂肪を効果的に分離するか判定するため
に、図１、３Ａ、および３Ｃに示されるような装置および方法を使用し、１０ｍＬシリン
ジ、および示されているように装置の第１端に１００μステンレス鋼スクリーンが配置さ
れ、相互に溶媒溶着された２本の１０ｍＬシリンジの遠位端から作製された、本質的に図
１に示されるような保存容器を用いて、手術から回収した新鮮なヒト脂肪移植片組織廃棄
物を処理した。凍結保護剤および洗浄溶液の代わりにいずれも生理食塩水（０．９％生理
食塩水）を使用した。本プロトコールを通して、脂肪移植片を１２００ｇで３分間遠心し
た。最終洗浄の後、患者に移入するために脂肪移植片をシリンジに引き込む前に余分な脂
質を傾斜法により除去した。
実施例２
組織サンプル
ピッツバーグ大学の整形外科で５１歳の女性ドナーから腹部脂肪吸引術を行った。本試
験は治験審査委員会により承認された。
凍結保存溶液
５％および１０％（Ｖ／Ｖ）濃度のＰＢＳ中ジメチルスルホキシドＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍ
ａ）を細胞内凍結保護剤として使用した。細胞外凍結保存を達成するために、２％ヒトア
ルブミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を単独または０．２５Ｍトレハロース（Ｓｉｇｍａ）
と組み合わせて使用した。下記の４つの組合せの凍結保護剤溶液を、新鮮な非凍結保存脂
肪吸引物を用いて比較した。
１－１０％ＤＭＳＯ＋２％アルブミン
２－１０％ＤＭＳＯ＋２％アルブミン＋０．２５Ｍトレハロース
３－５％ＤＭＳＯ＋アルブミン
４－５％ＤＭＳＯ＋アルブミン＋０．２５Ｍトレハロース
凍結および解凍手順
細胞内氷晶の形成を避ける目的で脂肪吸引物を凍結保存するために２種類の異なる凍結
条件を用いた：（１）毎分１℃の低下速度で－８０℃まで制御凍結；および（２）－８０
℃の冷凍庫にて発泡スチロールボックスで凍結。脂肪吸引物を、５００ｇで５分間遠心す
ることによりリン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）で２回洗浄した。上の油
層と下の液層を取り出す。洗浄後、１０ｍＬの脂肪吸引物を５０ｍＬファルコンチューブ
に加え、等容量の氷冷凍結保存剤を加えた。制御凍結サンプルを－８０℃の冷凍庫に移し
た。４８時間後、サンプルを３７℃の水浴中で解凍した。解凍した組織サンプルをＰＢＳ
で２回洗浄して凍結保存剤を除去した。
脂肪吸引物の消化
新鮮な脂肪吸引物と解凍した脂肪吸引物を、コラゲナーゼ酵素を用いて消化した。簡単
に述べれば、１０ｍＬの脂肪吸引物を０．８ｍｇ／ｍｌのＩＩ型コラゲナーゼ（Ｗｏｒｔ
ｈｉｎｇｔｏｎ、ＮＪ）／３％ＢＳＡ／ＨＢＳＳ（Ｓｉｇｍａ）中、３７℃の振盪水浴内
で７５分間インキュベートした。消化溶液を無菌ガーゼに通して構造断片を除去し、２０
０ｇで５分間遠心した。上の脂肪細胞層を別のチューブに回収し、間質血管画分ペレット
をＡＣＫ赤血球溶解バッファーで処理し、７０μｍセルストレーナーに通し、遠心し（２
００ｇ、５分）、ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させた。
細胞生存率分析
脂肪細胞およびＳＶＦ細胞の生存率を、Ｃｏｕｎｔｅｓｓセルカウンター（Ｉｎｖｉｔ
ｒｏｇｅｎ）を製造者のプロトコールに従って用いて分析した。
細胞培養
間質血管画分細胞を２５ｃｍ２フラスコのＤＭＥＭ／１０％ＦＣＳ／ゲンタマイシン培
地中に、１００００細胞／ｃｍ２の割合で播種した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２の存在下
でインキュベートした。培地を２日毎に交換し、８日後に細胞を計数した。
組織学的研究
脂肪吸引物を１０％ホルマリン緩衝生理食塩水（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
）中で４８時間固定した。固定組織をパラフィンに包埋し、切断して３～５μｍの切片を
得た。ヘマトキシリンおよびエオジン染色を行って構造物を可視化した。
実施例３－凍結保存試験
方法：脂肪吸引物をＰＢＳで洗浄し、下の液層と上の脂肪層を取り出した。等量の脂肪吸
引物（１０ｍＬ）を制御された温度降下で凍結させ、発泡スチロールボックス内で－８０
℃にて冷凍した。凍結吸引物を４８時間後に３７℃で解凍し、ＰＢＳで洗浄した。コラゲ
ナーゼで消化した後、ＡＳＣ（図４Ａ）および脂肪細胞（図４Ｂ）を、トリパンブルー染
色液を用い、生存に関して分析した。新鮮脂肪から単離された生存細胞の％を１００％と
し、凍結保存後の生存細胞のパーセンテージを計算し、プロットした。Ａｌ＝アルブミン
、Ｔｈ＝トレハロース
実施例４－凍結保存試験
方法：脂肪吸引物をＰＢＳで洗浄し、下の液層と上の脂肪層を取り出した。等量の脂肪吸
引物（７ｍＬ）を液体窒素中で急速凍結させたか、または温度交換を引き下げるためにク
ライオボックス内で、－２０℃その後－８０℃で４時間を含む緩慢凍結を行った。両方の
凍結条件に関して、下記の凍結保存剤（ＣＰＡ）設定を用いた：１）ＣＰＡ無し；２）２
％アルブミン；および３）２％アルブミン＋５％ＤＭＳＯ。凍結吸引物を４８時間後に３
７℃で解凍し、ＰＢＳで洗浄した。コラゲナーゼで消化した後、ＡＳＣ（図５Ａ）および
脂肪細胞（図５Ｂ）を、トリパンブルー染色液を用い、生存に関して分析した。
下記に符番した項は、本発明の種々の限定されない態様を記載する。
１．脂肪細胞または脂肪組織を保持するフィルターで仕切られた内部チャンバーを規定
する第１端と第２端とを有し、前記第２端と前記フィルターとの間の容積が少なくとも３
ｍＬである容器と；第１の開口部を規定する前記容器の第１端にあるルアーロックまたは
スリップコネクターなどの第１のアダプターまたはコネクターと；前記容器の第２端にあ
って、第２の開口部を規定するルアーロックまたはスリップコネクターなどの第２のアダ
プターまたはコネクターと；
を含んでなる、細胞または組織の単離、精製、および保存装置。
２．例えば、チューブ、ボトル、シリンジ、または装置などのコンテナを遠心すること
ができる遠心機に適合する寸法であるか、または１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有する、第
１項に記載の装置。
３．少なくとも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、または１５００
ｇのＧ力での遠心に耐えるように作製された、第１項または第２項に記載の装置。
４．前記容器の内部チャンバーが５ｍＬ～１００ｍＬの範囲、例えば、５ｍＬ、１０ｍ
Ｌ、１５ｍＬ、３０ｍＬ、または５０ｍＬの容積を有する、第１項～第３項のいずれか一
項に記載の装置。
５．１ｍＬ～４Ｌの範囲内の容積を有する、例えば、チューブ、ボトル、またはシリン
ジなどのコンテナを遠心することができる遠心機に適合する寸法である、第１項～第４項
のいずれか一項に記載の装置。
６．前記フィルターが前記容器の第１端よりも前記容器の第２端に近接している、第１
項～第５項のいずれか一項に記載の装置。
７．前記容器が連続封止された容器を形成する２つの分離可能な部材を含んでなり、そ
れらの部材は、前記容器の第２端よりも前記容器の第１端に近接した箇所で、場合により
、前記容器の第１端に隣接してスリップコネクターまたはスクリューコネクターにより接
続されている、第１項～第６項のいずれか一項に記載の装置。
８．前記フィルターが１００ミクロン（μ）フィルターである、第１項～第７項のいず
れか一項に記載の装置。
９．前記第１のアダプターおよび／または前記第２のアダプターがルアーロックアダプ
ターである、第１項～第８項のいずれか一項に記載の装置。
１０．前記第１のアダプターおよび前記第２のアダプターがルアーロックアダプターで
ある、第１項～第９項のいずれか一項に記載の装置。
１１．円筒状の横断形状を有する、第１項～第１０項のいずれか一項に記載の装置。
１２．１０ｍＬ医療用注射筒の直径を有する、第１項～第１１項のいずれか一項に記載
の装置。
１３．前記容器が１６．５～１８ｍｍの範囲の外径と８０ｍｍ～９０ｍｍの範囲の長さ
を有する、第１２項に記載の装置。
１４．前記容器の、フィルターと容器の第１端の間の内部容積が５ｍＬ以上、例えば、
８ｍＬ～１０ｍＬの範囲である、第１項～第１１項のいずれか一項に記載の装置。
１５．前記容器が５ｍｍ～２５ｍｍの範囲の外径と７０ｍｍ～１１０ｍｍの範囲の長さ
を有する、第１項～第１１項のいずれか一項に記載の装置。
１６．前記容器のバレル長とバレル外径の比が少なくとも４：１、または４：１～６：
１である、第１項～第１５項のいずれか一項に記載の装置。
１７．生脂肪細胞などの生細胞と場合により凍結保護剤を、前記容器の内部チャンバー
の、前記容器の第１端と前記フィルターの間に含んでなる、第１項～第１６項のいずれか
一項に記載の装置。
１８．２～２５の細胞または組織の保存装置（各保存装置は、脂肪細胞または脂肪組織
を保持するフィルターで仕切られた内部チャンバーを規定する第１端と第２端とを有し、
前記第２端と前記フィルターとの間の容積が少なくとも３ｍＬである容器と；第１の開口
部を規定する前記容器の第１端にあるルアーロックまたはスリップコネクターなどの第１
のアダプターまたはコネクターと；前記容器の第２端にあって、第２の開口部を規定する
ルアーロックまたはスリップコネクターなどの第２のアダプターまたはコネクターとを含
んでなる）と；さらに
少なくとも３ｍＬの脂肪移植片などの細胞または組織を凍結保存することができる量の
凍結保護剤を含んでなり、場合によりルアーロックまたはスリップコネクターなどのアダ
プターまたはコネクターを有する、少なくとも１つの容器と；
を含んでなる、脂肪移植片などの細胞の単離および保存において使用するためのキット。
１９．前記装置が、１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有する、例えば、チューブ、ボトル、
シリンジ、または装置などのコンテナを遠心することができる遠心機に適合する寸法であ
る、第１８項に記載のキット。
２０．前記装置が少なくとも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、ま
たは１５００ｇのＧ力での遠心に耐えるように作製された、第１８項または第１９項に記
載のキット。
２１．前記容器の内部チャンバーが５ｍＬ～１００ｍＬの範囲、例えば、５ｍＬ、１０
ｍＬ、１５ｍＬ、３０ｍＬ、または５０ｍＬの容積を有する、第１８項～第２０項のいず
れか一項に記載のキット。
２２．１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有する、例えば、チューブ、ボトル、またはシリン
ジなどの遠心コンテナに適合する寸法である、第１８項～第２１項のいずれか一項に記載
の装置。
２３．保存容器および／または保存コンテナに表示を行うためのラベルを場合により含
む、前記２～２５の細胞または組織の保存装置を保存するように構成された保存コンテナ
をさらに含んでなる、第１８項～第２２項のいずれか一項に記載のキット。
２４．場合により前記保存コンテナに取り付けられてもよい温度ロガー（温度記録計）
をさらに含んでなる、第１８項～第２３項のいずれか一項に記載のキット。
２５．前記フィルターが前記２～２５の容器の１以上の、または総ての第１端よりも前
記容器の第２端に近接している、第１８項～第２４項のいずれか一項に記載のキット。
２６．前記２～２５の容器の１以上の、または総てが連続封止された容器を形成する２
つの分離可能な部材を含んでなり、それらの部材は、前記容器の第２端よりも前記容器の
第１端に近接した箇所で、場合により、前記容器の第１端に隣接して、スリップコネクタ
ーまたはスクリューコネクターにより接続されている、第１８項～第２５項のいずれか一
項に記載のキット。
２７．前記２～２５の容器の１以上の、または総てのフィルターが１００ミクロン（μ
）フィルターである、第１８項～第２６のいずれか一項に記載のキット。
２８．前記２～２５の容器の１以上の、または総ての第１のアダプターおよび／または
第２のアダプターがルアーロックアダプターである、第１８項～第２７項のいずれか一項
に記載のキット。
２９．前記２～２５の容器の１以上の、または総ての第１のアダプターおよび第２のア
ダプターがルアーロックアダプターである、第１８項～第２７項のいずれか一項に記載の
キット。
３０．前記２～２５の容器の１以上の、または総てが円筒状の横断形状を有する、第１
８項～第２９項のいずれか一項に記載のキット。
３１．前記２～２５の容器の１以上の、または総てが１０ｍＬ医療用注射筒の直径を有
する、第１８項～第３０項のいずれか一項に記載のキット。
３２．前記２～２５の容器の１以上の、または総ての、フィルターと容器の第１端の間
の内部容積が５ｍＬ以上、例えば、８ｍＬ～１０ｍＬの範囲である、第１８項～第３１項
のいずれか一項に記載のキット。
３３．前記２～２５の容器の１以上、または総てが５ｍｍ～２５ｍｍの範囲の外径と７
０ｍｍ～１１０ｍｍの範囲の長さを有する、第１８項～第３１項のいずれか一項に記載の
キット。
３４．前記２～２５の容器の１以上、または総てが１６．５～１８ｍｍの範囲の外径
と８０ｍｍ～９０ｍｍの範囲の長さを有する、第１８項～第３１項のいずれか一項に記載
のキット。
３５．前記２～２５の１以上、または総てのバレル長とバレル外径の比が少なくとも４
：１、または４：１～６：１である、第１８項～第３１項のいずれか一項に記載のキット
。
３６．前記凍結保護剤がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン、ト
レハロース、またはＤＭＳＯとｈＳＡの組合せなどの前記のいずれかの２種類以上の組合
せ、例えば、５％～１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯと２％（ｗ／ｖ）ｈＳＡの組合せを含んで
なる、第１８項～第３５項のいずれか一項に記載のキット。
３７．脂肪組織を第１項～第１６項のいずれか一項に記載の装置の第２の開口部から前
記装置の内部チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を凍結保存す
るために有効な量の凍結保護剤を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバー
に導入すること；前記脂肪組織を前記凍結保護剤と混合すること；および前記脂肪移植片
を０℃未満の温度に冷却することを含んでなる、脂肪移植片を調製する方法。
３８．前記装置が１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有する、例えば、チューブ、ボトル、シ
リンジ、または装置などのコンテナを遠心することができる遠心機に適合する寸法である
、第３７項に記載の方法。
３９．前記装置が少なくとも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、ま
たは１５００ｇのＧ力での遠心に耐えるように作製された、第３７項または第３８項に記
載の方法。
４０．前記脂肪移植片を冷却した後、前記脂肪移植片の温度を上げて前記脂肪移植片を
解凍することをさらに含んでなる、第３７項に記載の方法。
４１．凍結または解凍中の前記脂肪移植片の温度変化が毎分２℃以下、または毎分１℃
以下である、第３７項～第４０項のいずれか一項に記載の方法。
４２．前記脂肪移植片を前記凍結保護剤から分離すること；前記凍結保護剤を前記装置
の第１端から抜き取ること；および前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液
を前記装置の第１端に導入し、前記洗浄溶液を前記脂肪移植片と混合し、前記脂肪移植片
を前記洗浄溶液から分離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ることにより、
前記脂肪移植片を洗浄することをさらに含んでなる、第３７項～第４１項のいずれか一項
に記載の方法。
４３．解凍された脂肪移植片を含有する前記装置を、前記第１の開口部を下にして遠心
して、前記脂肪移植片を前記凍結保護剤から分離すること；前記凍結保護剤を前記装置の
第１端から抜き取ること；および前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液を
前記装置の第１端に導入し、前記洗浄溶液を前記脂肪移植片と混合し、前記脂肪移植片を
含有する装置を、前記第１の開口部を下にして遠心して、前記脂肪移植片を前記洗浄溶液
から分離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ることにより、前記脂肪移植片
を洗浄することをさらに含んでなる、第３７項～第４１項のいずれか一項に記載の方法。
４４．前記脂肪移植片が２～６回洗浄される、第４２項または第４３項に記載の方法。
４５．前記洗浄溶液がリン酸緩衝生理食塩水または生理食塩水（例えば、０．９％ｗ／
ｖ生理食塩水）である、第４２項～第４４項のいずれか一項に記載の方法。
４６．前記凍結保護剤がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ｈ
ＳＡ）、トレハロース、またはＤＭＳＯとｈＳＡの組合せなどの前記のいずれかの組合せ
、例えば、５％～１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯと２％（ｗ／ｖ）ｈＳＡの組合せを含んでな
る、第３７項～第４５項のいずれか一項に記載の方法。
４７．脂肪組織を第１項～第１５項のいずれか一項に記載の装置の第２の開口部から前
記装置の内部チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を洗浄するた
めに有効な量の洗浄溶液を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入
すること；前記脂肪組織を前記洗浄溶液と混合すること；前記脂肪移植片を含有する装置
を前記第１の開口部を下にして遠心して、前記脂肪移植片を前記洗浄溶液から分離するこ
と；および前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ることを含んでなる、脂肪移植片
を調製する方法。
４８．脂肪組織を第１項～第１５項のいずれか一項に記載の装置の第２の開口部から前
記装置の内部チャンバーに導入（例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を洗浄するた
めに有効な量の洗浄溶液または前記脂肪移植片を凍結保存するために有効な量の凍結保護
剤を前記装置の第１の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入すること；および前記
脂肪組織を前記洗浄溶液または前記凍結保護剤と混合すること；および洗浄溶液が導入さ
れる場合には、前記脂肪移植片を含有する装置を、前記第１の開口部を下にして遠心して
、前記洗浄溶液から前記脂肪移植片を分離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き
取ること、または凍結保護剤が導入される場合には、前記脂肪移植片を０℃未満の温度に
冷却することを含んでなる、脂肪移植片を調製する方法。
４９．洗浄溶液が、前記脂肪移植片が前記装置に導入された後に前記装置に導入され；
前記洗浄溶液と前記脂肪移植片が混合され；前記脂肪移植片を含有する装置が前記第１の
開口部を下にして遠心されて、前記脂肪移植片が前記洗浄溶液から分離され；前記洗浄溶
液が前記装置の第１端から抜き取られる、第４８項に記載の方法。
５０．前記凍結保護剤が、前記脂肪移植片が前記装置に導入された後に前記装置に導入
され；前記凍結保護剤と脂肪移植片が混合され、前記脂肪移植片が０℃未満の温度に冷却
される、第４８項に記載の方法。
これらの実施形態は様々な例に関して記載されている。以上の例を読み、理解すれば、
他者も修飾および変更に容易に想到するであろう。よって、以上の例は本開示の限定と解
釈されるべきでない。

Claims (31)

  1. 脂肪細胞または脂肪組織を保持するフィルターで仕切られた内部チャンバーを規定する
    第１端と第２端とを有し、前記第２端と前記フィルターとの間の容積が少なくとも３ｍＬ
    である容器と；第１の開口部を規定する前記容器の第１端にあるルアーロックまたはスリ
    ップコネクターなどの第１のアダプターまたはコネクターと；前記容器の第２端にあって
    、第２の開口部を規定するルアーロックまたはスリップコネクターなどの第２のアダプタ
    ーまたはコネクターと；
    を含んでなる、細胞または組織の単離、精製、および保存装置。
  2. 例えば、チューブ、ボトル、シリンジなどのコンテナを遠心することができる遠心機に
    適合する寸法であるか、もしくは１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有し、かつ／または少なく
    とも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、または１５００ｇのＧ力での
    遠心に耐えるように作製された、請求項１に記載の装置。
  3. 前記容器の内部チャンバーが５ｍＬ～１００ｍＬの範囲、例えば、５ｍＬ、１０ｍＬ、
    １５ｍＬ、３０ｍＬ、または５０ｍＬの容積を有する、請求項１に記載の装置。
  4. １ｍＬ～４Ｌの範囲内の容積を有する、例えば、チューブ、ボトル、またはシリンジな
    どのコンテナを遠心することができる遠心機に適合する寸法である、請求項１に記載の装
    置。
  5. 前記フィルターが前記容器の第１端よりも前記容器の第２端に近接している、請求項１
    に記載の装置。
  6. 前記容器が連続封止された容器を形成する２つの分離可能な部材を含んでなり、それら
    の部材は、前記容器の第２端よりも前記容器の第１端に近接した箇所で、場合により、前
    記容器の第１端に隣接して、スリップコネクターまたはスクリューコネクターにより接続
    されている、請求項１に記載の装置。
  7. 前記フィルターが１００ミクロン（μ）フィルターである、請求項１に記載の装置。
  8. 前記第１のアダプターおよび／または前記第２のアダプターがルアーロックアダプター
    である、請求項１に記載の装置。
  9. 円筒状の横断形状を有する、請求項１に記載の装置。
  10. １０ｍＬ医療用注射筒の直径を有し、前記容器は場合により１６．５～１８ｍｍの範囲
    の外径と８０ｍｍ～９０ｍｍの範囲の長さを有し、場合により、前記容器の、フィルター
    と容器の第１端の間の内部容積が５ｍＬ以上、例えば、８ｍＬ～１０ｍＬの範囲である、
    請求項１に記載の装置。
  11. 生脂肪細胞などの生細胞と場合により凍結保護剤を、前記容器の内部チャンバーの、前
    記容器の第１端と前記フィルターの間に含んでなる、請求項１に記載の装置。
  12. ２～２５の細胞または組織の保存装置（各保存装置は、脂肪細胞または脂肪組織を保持
    するフィルターで仕切られた内部チャンバーを規定する第１端と第２端とを有し、前記第
    ２端と前記フィルターとの間の容積が少なくとも３ｍＬである容器と；第１の開口部を規
    定する前記容器の第１端にあるルアーロックまたはスリップコネクターなどの第１のアダ
    プターまたはコネクターと；前記容器の第２端にあって、第２の開口部を規定するルアー
    ロックまたはスリップコネクターなどの第２のアダプターまたはコネクターとを含んでな
    る）と；
    少なくとも３ｍＬの脂肪移植片などの細胞または組織を凍結保存することができる量の
    凍結保護剤を含んでなり、場合によりルアーロックまたはスリップコネクターなどのアダ
    プターまたはコネクターを有する、少なくとも１つの容器と；
    を含んでなる、脂肪移植片などの細胞の単離および保存において使用するためのキット。
  13. 前記装置が、例えば、チューブ、ボトル、シリンジなどのコンテナを遠心することがで
    きる遠心機に適合する寸法であるか、もしくは１ｍＬ～４Ｌの範囲の容積を有し、かつ／
    または少なくとも５００ｇ、例えば少なくとも１０００ｇ、１２００ｇ、または１５００
    ｇのＧ力での遠心に耐えるように作製された、請求項１２に記載のキット。
  14. 前記容器の内部チャンバーが５ｍＬ～１００ｍＬの範囲、例えば、５ｍＬ、１０ｍＬ、
    １５ｍＬ、３０ｍＬ、または５０ｍＬの容積を有する、請求項１２に記載のキット。
  15. 保存容器および／または保存コンテナに表示を行うためのラベルを場合により含む、前
    記２～２５の細胞または組織の保存装置を保存するように構成された保存コンテナをさら
    に含んでなる、請求項１２に記載のキット。
  16. 場合により前記保存コンテナに取り付けられてもよい温度ロガー（温度記録計）をさら
    に含んでなる、請求項１２に記載のキット。
  17. 前記フィルターが前記２～２５の容器の１以上の、または総ての第１端よりも前記容器
    の第２端に近接している、請求項１２に記載のキット。
  18. 前記２～２５の容器の１以上の、または総てが連続封止された容器を形成する２つの分
    離可能な部材を含んでなり、それらの部材は、前記容器の第２端よりも前記容器の第１端
    に近接した箇所で、場合により、前記容器の第１端に隣接して、スリップコネクターまた
    はスクリューコネクターにより接続されている、請求項１２に記載のキット。
  19. 前記２～２５の容器の１以上の、または総てのフィルターが１００ミクロン（μ）フィ
    ルターである、請求項１２に記載のキット。
  20. 前記２～２５の容器の１以上の、または総ての第１のアダプターおよび／または第２の
    アダプターがルアーロックアダプターである、請求項１２に記載のキット。
  21. 前記２～２５の容器の１以上の、または総てが円筒状の横断形状を有する、請求項１２
    に記載のキット。
  22. 前記２～２５の容器の１以上の、または総てが１０ｍＬ医療用注射筒の直径を有し、前
    記２～２５の容器の１以上の、または総ての、フィルターと容器の第１端の間の内部容積
    が５ｍＬ以上、例えば、８ｍＬ～１０ｍＬの範囲であり、前記２～２５の容器の１以上、
    または総てが５ｍｍ～２５ｍｍの範囲の外径と７０ｍｍ～１１０ｍｍの範囲の長さを有し
    、前記２～２５の容器の１以上、または総てが１６．５～１８ｍｍの範囲の外径と８０ｍ
    ｍ～９０ｍｍの範囲の長さを有し、かつ／または前記２～２５の１以上、または総てのバ
    レル長とバレル外径の比が少なくとも４：１、または４：１～６：１である、請求項１２
    に記載のキット。
  23. 前記凍結保護剤がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン、トレハロ
    ース、またはＤＭＳＯとｈＳＡの組合せなどの前記のいずれかの２種類以上の組合せ、例
    えば、５％～１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯと２％（ｗ／ｖ）ｈＳＡの組合せを含んでなる、
    請求項１２に記載のキット。
  24. 脂肪組織を請求項１に記載の装置の第２の開口部から前記装置の内部チャンバーに導入
    （例えば、注入）すること；前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液または
    前記脂肪移植片を凍結保存するために有効な量の凍結保護剤を前記装置の第１の開口部か
    ら前記装置の内部チャンバーに導入すること；および前記脂肪組織を前記洗浄溶液または
    前記凍結保護剤と混合すること；並びに洗浄溶液が導入される場合には、前記脂肪移植片
    を含有する装置を、前記第１の開口部を下にして遠心して、前記洗浄溶液から前記脂肪移
    植片を分離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ること、または凍結保護剤が
    導入される場合には、前記脂肪移植片を０℃未満の温度に冷却することを含んでなる、脂
    肪移植片を調製する方法。
  25. 洗浄溶液が、前記脂肪移植片が前記装置に導入された後に前記装置に導入され；前記洗
    浄溶液と前記脂肪移植片が混合され；前記脂肪移植片が前記洗浄溶液から分離され、例え
    ば、前記脂肪移植片を含有する装置が前記第１の開口部を下にして遠心されて、前記脂肪
    移植片が前記洗浄溶液から分離され；前記洗浄溶液が前記装置の第１端から抜き取られる
    、請求項２４に記載の方法。
  26. 凍結保護剤が、前記脂肪移植片が前記装置に導入された後に前記装置に導入され、前記
    凍結保護剤と脂肪移植片が混合され、前記脂肪移植片が０℃未満の温度に冷却される、請
    求項２４に記載の方法。
  27. 前記凍結保護剤がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ｈＳＡ）
    、トレハロース、またはＤＭＳＯとｈＳＡの組合せなどの前記のいずれかの組合せ、例え
    ば、５％～１０％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯと２％（ｗ／ｖ）ｈＳＡの組合せを含んでなる、請
    求項２６に記載の方法。
  28. 前記脂肪移植片を冷却した後、前記脂肪移植片の温度を上げて前記脂肪移植片を解凍す
    ることをさらに含んでなる、請求項２６に記載の方法。
  29. 前記脂肪移植片を前記凍結保護剤から分離すること；前記凍結保護剤を前記装置の第１
    端から抜き取ること；および前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液を前記
    装置の第１端に導入し、前記洗浄溶液を前記脂肪移植片と混合し、前記脂肪移植片を前記
    洗浄溶液から分離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ることにより、前記脂
    肪移植片を洗浄することをさらに含んでなる、請求項２８に記載の方法。
  30. 解凍された脂肪移植片を含有する前記装置を、前記第１の開口部を下にして遠心して、
    前記脂肪移植片を前記凍結保護剤から分離すること；前記凍結保護剤を前記装置の第１端
    から抜き取ること；および前記脂肪移植片を洗浄するために有効な量の洗浄溶液を前記装
    置の第１端に導入し、前記洗浄溶液を前記脂肪移植片と混合し、前記脂肪移植片を含有す
    る装置を、前記第１の開口部を下にして遠心して、前記脂肪移植片を前記洗浄溶液から分
    離し、前記洗浄溶液を前記装置の第１端から抜き取ることにより、前記脂肪移植片を洗浄
    することをさらに含んでなる、請求項２８に記載の方法。
  31. 凍結または解凍中の前記脂肪移植片の温度変化が毎分２℃以下、または毎分１℃以下で
    ある、請求項２６に記載の方法。

JP2023108291A 2017-09-01 2023-06-30 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット Active JP7669058B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762553322P 2017-09-01 2017-09-01
US62/553,322 2017-09-01
JP2020512408A JP7402523B2 (ja) 2017-09-01 2018-08-31 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット
PCT/US2018/049083 WO2019046713A1 (en) 2017-09-01 2018-08-31 METHOD AND KIT FOR PRESERVING ADIPOSE TISSUE GRAFT

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020512408A Division JP7402523B2 (ja) 2017-09-01 2018-08-31 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023123767A true JP2023123767A (ja) 2023-09-05
JP7669058B2 JP7669058B2 (ja) 2025-04-28

Family

ID=65526073

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020512408A Active JP7402523B2 (ja) 2017-09-01 2018-08-31 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット
JP2023108291A Active JP7669058B2 (ja) 2017-09-01 2023-06-30 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020512408A Active JP7402523B2 (ja) 2017-09-01 2018-08-31 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット

Country Status (8)

Country Link
US (2) US12023664B2 (ja)
EP (1) EP3675881A4 (ja)
JP (2) JP7402523B2 (ja)
KR (1) KR102657717B1 (ja)
BR (1) BR112020003980A2 (ja)
CA (1) CA3074457A1 (ja)
MX (1) MX2020002281A (ja)
WO (1) WO2019046713A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111500444B (zh) * 2020-04-22 2021-12-07 天津大学 双层套管组织模型制作模具及制作方法
KR102827440B1 (ko) * 2020-12-24 2025-07-03 주식회사 로킷헬스케어 조직 재생 패치의 제조방법
US11679198B2 (en) 2021-04-28 2023-06-20 Chopra Gryskiewicz, LLC System and related methods for fat harvesting

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013526868A (ja) * 2010-05-20 2013-06-27 リポジェムズ インターナショナル ソシエタ ア レスポンサビリタ リミタータ 脂肪吸引により抽出された小葉脂肪から移植用の組織、特に脂肪組織、を準備するための装置及び方法

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3310205C2 (de) * 1983-03-21 1985-01-24 Rhodia Ag, 7800 Freiburg Vorrichtung zur Aufnahme, zum Transport und zur Gewinnung von Zellmaterial sowie zur Übertragung des gewonnenen Zellmaterials auf Objektträger
WO1996001085A1 (en) 1994-07-01 1996-01-18 Baxter International Inc. Methods for harvesting adipose tissue containing autologous microvascular endothelial cells
GB9426379D0 (en) * 1994-12-23 1995-03-01 Oxford Biosciences Ltd Particle delivery
JPH114682A (ja) * 1997-06-16 1999-01-12 Asahi Medical Co Ltd 有核細胞保存方法、有核細胞保存用組成物及び有核細胞分離方法
US7998731B2 (en) * 2003-03-17 2011-08-16 General Dynamics Advanced Information Systems, Inc. Portable sampling device for airborne biological particles
US7588732B2 (en) 2004-03-30 2009-09-15 Genesis Biosystems, Inc. Autologus tissue harvesting and irrigation device
EP1773117A1 (en) * 2004-07-23 2007-04-18 Amgen, Inc Delivery of high cell mass in a syringe and related methods of cryopreserving cells
US20060051865A1 (en) * 2004-08-31 2006-03-09 Higgins Joel C Systems and methods for isolating stromal cells from adipose tissue and uses thereof
WO2006123688A1 (ja) * 2005-05-17 2006-11-23 Universal Bio Research Co., Ltd. フィルタ処理方法、フィルタ封入チップ、およびフィルタ処理装置
US7989205B2 (en) 2005-10-06 2011-08-02 American Cryostem Corporation Cell culture media, kits and methods of use
KR100764640B1 (ko) * 2006-03-08 2007-10-10 세원셀론텍(주) 지방조직 수복용 키트
JP2010150219A (ja) 2008-12-26 2010-07-08 Nipro Corp 生物試料凍結保存システム及び生物試料凍結保存方法
KR100920914B1 (ko) * 2009-05-09 2009-10-12 주식회사 무한기업 분리가능한 원심분리기용 시험관
CA2768613A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 The General Hospital Corporation D/B/A Massachusetts General Hospital Methods and compositions for improving the viability of cryopreserved cells
US10575515B2 (en) * 2010-05-04 2020-03-03 The General Hospital Corporation Methods and compositions for preserving tissues and organs
WO2011156267A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Anthony Dudzinski Business method for collection, processing, cryogenic storage and distribution of a biological sample material
WO2013106655A1 (en) * 2012-01-11 2013-07-18 The Gid Group, Inc. Method for processing adipose tissue and processing apparatus
WO2012083260A2 (en) * 2010-12-16 2012-06-21 Alt Eckhard U Methods and apparatus for enhanced recovery of cells and of cell-enriched matrix from tissue samples
US10154664B2 (en) 2011-10-06 2018-12-18 David K Moscatello Systems and methods for the digestion of adipose tissue samples obtained from a client for cryopreservation
PL2775928T3 (pl) 2011-11-08 2019-09-30 Auxocell Laboratories Inc. Systemy i metody przetwarzania komórek
WO2013184978A2 (en) 2012-06-07 2013-12-12 David Moscatello Compositions and methods for collecting, washing, cryopreserving, recovering and return of lipoaspirates to physician for autologous adipose transfer procedures
US20140024011A1 (en) * 2012-07-23 2014-01-23 AdiCyte, Inc. Method for Preparing Adipose Tissue
WO2015059798A1 (ja) * 2013-10-24 2015-04-30 学校法人東京電機大学 細胞または組織の輸送装置
CN103651331A (zh) 2013-12-13 2014-03-26 青岛中天干细胞工程有限公司 脂肪干细胞库构建方法
US20160361476A1 (en) * 2014-02-28 2016-12-15 Bdbc Sciences Corp. System for tissue manipulation
US9839913B2 (en) * 2014-07-14 2017-12-12 Maria Lotosky-Compton Medical specimen container
CN107849529A (zh) 2014-12-31 2018-03-27 迈克尔·莫勒 用于人脂肪基质细胞临床生长的细胞培养基的人血清
US10927347B2 (en) 2015-05-15 2021-02-23 Black Tie Medical Inc. Device and method for breaking down and sizing harvested fat
US10188777B2 (en) * 2015-08-20 2019-01-29 Aurastem Llc Liposuction device and system and use thereof

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013526868A (ja) * 2010-05-20 2013-06-27 リポジェムズ インターナショナル ソシエタ ア レスポンサビリタ リミタータ 脂肪吸引により抽出された小葉脂肪から移植用の組織、特に脂肪組織、を準備するための装置及び方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CUI X. AND PU L. L. Q.: "The search for a useful method for the optimal cryopreservation of adipose aspirates: Part II. In vi", AESTHETIC SURGERY JOURNAL, vol. 30, no. 3, JPN7022003174, 2010, pages 451 - 456, ISSN: 0005427364 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019046713A1 (en) 2019-03-07
EP3675881A1 (en) 2020-07-08
KR102657717B1 (ko) 2024-04-17
BR112020003980A2 (pt) 2020-09-01
JP7669058B2 (ja) 2025-04-28
CA3074457A1 (en) 2019-03-07
US12023664B2 (en) 2024-07-02
EP3675881A4 (en) 2021-05-26
US20200346208A1 (en) 2020-11-05
US20240307866A1 (en) 2024-09-19
KR20200042521A (ko) 2020-04-23
JP7402523B2 (ja) 2023-12-21
JP2020532296A (ja) 2020-11-12
MX2020002281A (es) 2020-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7669058B2 (ja) 脂肪組織移植片の保存のための方法およびキット
EP2806914B1 (en) A system and method for obtaining a cellular sample enriched with defined cells such as platelet rich plasma(prp)
US8652169B2 (en) Clotting cascade initiating apparatus and methods of use and methods of closing wounds
KR101740518B1 (ko) 혈액으로부터 적어도 일 종의 화합물을 조제하는 방법 및 상기 방법의 실행시 사용되는 샘플링 장치
ES2912886T3 (es) Aparato mecánico y procedimiento para aislar la fracción vascular del estroma
US20140031772A1 (en) System and method for collecting stem cells
JP6636561B2 (ja) 組織コアを回収し保存するシステム
US20170260500A1 (en) Improvements in tissue processing
JP6445605B2 (ja) 保存アダプタシステムおよび組織保存システム
RU2343928C1 (ru) Способ получения ядросодержащих клеток из пуповинной крови
US20170224318A1 (en) Dual Syringe with Percutaneous Cannula
EP3302397B1 (en) Syringe for cell isolation
US20180042589A1 (en) Method for Harvesting and Transplanting Cells
ES2951644T3 (es) Un procedimiento para la crioconservación de muestras de tejido adiposo
RU2695364C1 (ru) Способ лечения нерубцовой алопеции
GB2532500A (en) Apparatus and method for storing tissue
JPH07187901A (ja) 臓器保存液注入器具および運搬用臓器収納器具

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230728

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230728

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230802

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20241001

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20241220

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20250311

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20250409

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7669058

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150