JP2023109824A

JP2023109824A - ＧａｌＮＡｃ誘導体

Info

Publication number: JP2023109824A
Application number: JP2023076982A
Authority: JP
Inventors: グリャズノフ，セルゲイ; Gryaznov Sergei; ホン，ジン; Jin Hong; クマールラジワンシ，ヴィヴェック; Kumar Rajwanshi Vivek; パンディー，ラジェンドラ，ケー．; K Pandey Rajendra; レオニド，ベイグルマン; Beygelman Leonid
Original assignee: Janssen Biopharma Inc
Current assignee: Janssen Biopharma Inc
Priority date: 2017-09-14
Filing date: 2023-05-09
Publication date: 2023-08-08
Also published as: IL273137A; CN111527207B; WO2019053661A2; SG11202002149XA; MX2020002885A; EP3682007A2; KR20200100601A; WO2019053661A3; AU2018332216A1; BR112020004955A2; AU2018332216B2; CN111527207A; US20200270611A1; CA3075598A1; JP2020533009A; EA202090720A1

Abstract

【課題】ＧａｌＮＡｃ部分を有するオリゴヌクレオチド鎖を含むコンストラクトを提供する。【解決手段】直接又はリンカーを介してコンジュゲートされた、少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を有する、少なくとも１本のオリゴヌクレオチド鎖を含むコンストラクトであって、該オリゴヌクレオチド鎖に結合している、該各ＧａｌＮＡｃ部分が、独立して、ＧａｌＮＡｃ１～ＧａｌＮＡｃ１３から選択され、一態様として、該ＧａｌＮＡｃ部分が、ＧａｌＮＡｃ－２であるコンストラクトとする。【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、その全体が参照により本明細書に援用される、２０１７年９月１４日出願の
米国特許仮出願第６２／５５８，７７３号に対する優先権の利益を主張する米国特許出願
である。

アンチセンスオリゴヌクレオチド療法は、ウイルス性疾患、神経疾患、神経変性疾患、
線維性疾患、過剰増殖性疾患などの様々な疾患及び状態の治療又は予防に検討されてきた
。

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）などの特定のウイルス性疾患は、従来の治療法では依然と
して対処しにくく、かつ推定２億４千万人が感染（少なくとも６ヶ月間のＨＢＶ表面抗原
陽性と定義）し続けており、毎年６８６，０００人超の死亡の原因となっている。テノホ
ビル又はエンテカビルなどの経口抗ウイルス性ヌクレオチドアナログによる治療を含む従
来治療は、ウイルスの複製を抑制するにすぎず、ＨＢＶ感染を治癒させない。したがって
、現在のＨＢＶ療法で治療したとしても、その治療を生涯にわたって継続しなければなら
ない。

オリゴヌクレオチドは、相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ配列に結合できる。この特徴により、
代謝、分化、増殖、及び複製などの細胞内プロセス、並びにウイルス複製、例えば、ＨＢ
Ｖの複製に特定の観点において関与する特定の核酸標的に、オリゴヌクレオチドを結合さ
せることが可能になる。

Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）は、オリゴヌクレオチドをその意図され
る細胞標的に導き、当該オリゴヌクレオチドの当該細胞への取り込みを改善するのを支援
するために、直接又はリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートする。

当該技術分野では、その投与における特異性及び効率性が改善された新規療法を発見及
び開発する必要性が存在する。

本開示は、ＧａｌＮＡｃ部分、作製方法、及び当該部分がコンジュゲートされるオリゴ
ヌクレオチドの肝細胞などの細胞に対するターゲティングにおいて使用する方法に関する
。

本開示は、少なくとも１本のオリゴヌクレオチド鎖を含むコンストラクトであって、当
該鎖に結合している少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を有し、各ＧａｌＮＡｃ部分が、
独立して、ＧａｌＮＡｃ１～ＧａｌＮＡｃ１３から選択されるコンストラクトに関する。
いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、ＧａｌＮＡｃ－２である。いくつかの実
施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、ＧａｌＮＡｃ－６である。いくつかの実施形態では、
少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチド鎖のうちの
少なくとも１本にコンジュゲートしている。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｃ６
－ＮＨ_２リンカーである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド配列は、ＨＢＶ
ＲＮＡ転写物に対して親和性を有するか又は実質的に相補的である。いくつかの実施形
態では、当該コンストラクトは、一本鎖オリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態
では、当該コンストラクトは、二本鎖オリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態で
は、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチド鎖の３’末端及び５’末端に化学的に結合
している。

また、本開示は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の構造を有する化合物に関する：

［式中、Ｒ_１は、

であり、Ｒ_８は、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキル部分、１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１
_０アルキルオキシド部分、又は

であり、Ｒ_２は、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ
_１０アルキルオキシド部分であり、Ｒ_３は、Ｈ、ＰＧ’、

であり（式中、ＰＧ’は、保護基である）、Ｒ_４は、Ｈであり、Ｒ_５は、

である（式中、Ｒ_６は、保護基、あるいは任意のリンカー及び／又はホスホルアミダー
ト若しくはホスホジエステル結合を介したオリゴヌクレオチドへの結合であり、Ｒ_７は、
Ｈ、固体支持体リンカー（例えば、スクシネート）、又は－ＰＨ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮ
である）、あるいは、Ｒ_４及びＲ_５は、所望によりＣＨ_２ＯＰＧによって置換された５又
は６員環を一緒に形成し、ＰＧは、アルコール保護基であり、Ｌは、リンカー部分であり
、ａは、１～３の整数であり、ｂは、１～４の整数である］。いくつかの実施形態では、
Ｒ_２は、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、又はＣ１０アルキルである。いく
つかの実施形態では、Ｒ_８は、２～５個のエチレンオキシド部分を含むＣ３～Ｃ１０アル
キルオキシド部分である。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｃ６－ＮＨ_２リンカー
である。いくつかの実施形態では、ａは、１である。いくつかの実施形態では、ａは、３
である。いくつかの実施形態では、ｂは、２又は３である。いくつかの実施形態では、Ｐ
Ｇは、ＤＭＴｒである。いくつかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ）の化合物である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（ＩＩ）の化合物である。いくつかの実施形態で
は、Ｒ_８は、である。

いくつかの実施形態では、ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＭ
ＤＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリルエ
ーテル（ＴＩＰＳ）、モノメトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、４，４’－ジメトキシトリチ
ル（ＤＭＴｒ）、又はトリトリルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ_６は、リ
ンカー及び／又はホスホルアミダート若しくはホスホジエステル結合を介したオリゴヌク
レオチドへの結合である。いくつかの実施形態では、Ｒ_６は、ホスホルアミダート結合を
含む。いくつかの実施形態では、Ｒ_６は、ホスホジエステル結合を含む。

本開示は、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートしている１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分
を目的とする。本開示は、更に、ＧａｌＮＡｃ部分及びそのオリゴヌクレオチドへのコン
ジュゲーションを使用及び調製する方法を目的とする。

ＧａｌＮＡｃ部分のいくつかの実施形態は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を含む：

［式中、
Ｒ_１は、

であり、
Ｒ_８は、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分、１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０アルキ
ルオキシド部分、

であり、
Ｒ_２は、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０アル
キルオキシド部分であり、
Ｒ_３は、Ｈ、ＰＧ’、

であり、
Ｒ_４は、Ｈであり、
Ｒ_５は

であり（式中、
Ｒ_６は、保護基、あるいは任意のリンカー及び／又はホスホルアミダート若しくはホス
ホジエステル結合を介したオリゴヌクレオチドへの結合であり、
Ｒ_７は、Ｈ、固体支持体リンカー（例えば、スクシネート）、又は－ＰＨ（Ｏ）ＣＨ_２
ＣＨ_２ＣＮである）、
Ｒ_９は、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０アル
キルオキシド部分であり、
Ｒ_１０は、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０ア
ルキルオキシド部分であり、
あるいは、Ｒ_４及びＲ_５は、所望によりＣＨ_２ＯＰＧによって置換された５又は６員環
を一緒に形成し、
ＰＧは、アルコール保護基であり、
ＰＧ’は、保護基であり、
Ｌは、リンカー部分であり、
ａは、１～３の整数であり、
ｂは、１～４の整数であり、
ｃは、３～７の整数であり、
ｄは、０～４の整数である）。

いくつかの実施形態では、Ｒ_２、Ｒ_９、及び／又はＲ_１０は、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５
、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、又はＣ_１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｃ_３
～Ｃ_１０アルキルオキシド部分は、２～５個のエチレンオキシド部分を含む。例えば、Ｃ
_３～Ｃ_１０アルキルオキシド部分は、以下の繰り返し部分：

と、所望により追加のアルキレン部分（式中、ｅは１～５である）を含み得る。いくつ
かの実施形態では、ｅは、１、２、３、４、又は５である。いくつかの実施形態では、Ｒ
_８は、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、又はＣ_１０アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキルオキシド部分は、２～５個のエチレンオ
キシド部分を含む。例えば、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキルオキシド部分は、以下の繰り返し部分
：

と、所望により追加のアルキレン部分（式中、ｅは１～５である）を含み得る。いくつ
かの実施形態では、ａは、１である。いくつかの実施形態では、ａは、３である。いくつ
かの実施形態では、ｂは、２又は３である。いくつかの実施形態では、ｅは、１、２、３
、４、又は５である。

いくつかの実施形態では、Ｒ_８は、

である（式中、アルキレン鎖は、以下の数の炭素原子（ｃ、ｄ）を含有する：（３、０
）、（３、１）、（３、２）、（３、３）、（３、４）、（４、０）、（４、１）、（４
、２）、（４、３）、（４、４）、（５、０）、（５、１）、（５、２）、（５、３）、
（５、４）、（６、０）、（６、１）、（６、２）、（６、３）、（６、４）、（７、０
）、（７、１）、（７、２）、（７、３）、又は（７、４）。

いくつかの実施形態では、ＰＧは、アルコール保護基、例えば、シリル保護基（例えば
、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＭＤＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニ
ルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ））、又はモノメ
トキシトリチル（ＭＭＴｒ）、又は４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、又はト
リトリル、又はＷｕｔｓ，ＰｅｔｅｒＧＭ，ａｎｄＴｈｅｏｄｏｒａＷ．Ｇｒｅｅ
ｎｅ．Ｇｒｅｅｎｅ’ｓｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐｓｉｎｏｒｇａｎｉｃ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，２００６におけるものな
どの任意の他の好適な保護基を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＰＧ’は保護基であり、例えば、いくつかの例では、ＰＧ’
は、

を含み得る（式中、ｆは１～５の整数である）。いくつかの実施形態では、ｆは、１、
２、３、４、又は５である。

いくつかの実施形態では、Ｒ_３は、

である。オリゴは、特に限定されず、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡ
オリゴヌクレオチドなどの任意のオリゴヌクレオチドであってよい。いくつかの実施形態
では、任意のリンカーは、Ｃ_１～Ｃ_８－ＮＨ_２リンカー、例えば、Ｃ_６－ＮＨ_２リンカー
である。

いくつかの実施形態では、Ｒ_６は、リンカー及び／又はホスホルアミダート若しくはホ
スホジエステル結合を介したオリゴヌクレオチドへの結合である。いくつかの実施形態で
は、Ｒ_６は、ホスホルアミダート結合を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ_６は、ホスホ
ジエステル結合を含む。

いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は以下のうちの１つであり、理解されると
おり、波線（squiggled line）は、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドとカップリング
した後の最終切断点を表し、したがって、化合物の残りの部分は、最終的なＧａｌＮＡｃ
置換オリゴヌクレオチドには存在しない。これは、実施例に示される。

いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、スクシネート部分又は固体支持体リン
カーを含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、フルオロフェニルエステル
（例えば、ペンタフルオロフェニルエステル）を含み、オリゴヌクレオチドの３’又は５
’末端は化学的に結合されていてもよい。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は
、Ｈ－ホスホネートを含み、オリゴヌクレオチドの３’又は５’末端は化学的に結合され
ていてもよい。これらの部分の更なる詳細は、実施例に見出すことができる。

コンジュゲートしたＧａｌＮＡｃ
実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アミノアルキルリンカー（例えば、Ｃ６－ＮＨ
_２）などのリンカーを介してターゲティング部分に連結される。例えば、ＧａｌＮＡｃ１
～１３又は式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）は、この種のリンカーを介してオリゴヌクレオチド
に連結され得る。例えば、実施形態では、オリゴヌクレオチドの３’末端は、以下のコン
ストラクトに示すとおり、ＧａｌＮＡｃ１～１３などのＧａｌＮＡｃ又は式（Ｉ）若しく
は（ＩＩ）に更に連結されたＣ_６－アミノリンカーに、ホスホルアミダート又はホスホジ
エステル結合を介して結合される。

本開示のＧａｌＮＡｃ部分を含むオリゴヌクレオチドは、その全体が参照により本明細
書に援用される国際公開第２０１８／０５３１８５号に記載されているものなどの修飾又
は非修飾オリゴヌクレオチド配列を含んでいてもよい。

本開示のＧａｌＮＡｃ部分を含む例示的なオリゴヌクレオチドとしては、実施例に列挙
されるものが挙げられる。

本開示の態様では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド配列は、所望によりリンカー
部分を介して結合している本開示のＧａｌＮＡｃ部分によって、一方又は両方の末端でコ
ンジュゲート又は修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖は、任意
のリンカーを介して５’及び／又は３’末端でコンジュゲートしている本開示のＧａｌＮ
Ａｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレ
オチド鎖の３’末端でコンジュゲートされる。本開示の連結部分は、ＨＥＧリンカー又は
Ｃ６アミノリンカーを含んでいてもよい。

いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、肝細胞などの特定の細胞型によるオリ
ゴヌクレオチドの活性、細胞内分布、又は細胞内取り込みを増強する。

本発明の組成物及び方法の特定の実施形態では、リガンドは、結合している１つ以上の
ＧａｌＮＡｃ誘導体、例えば、それぞれ二価又は三価の分岐リンカーを介してオリゴヌク
レオチドに結合している２つ又は３つのＧａｌＮＡｃ誘導体である。

組成物
本開示はまた、本開示のＧａｌＮＡｃ置換オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物も包含
する。一実施形態は、本開示のオリゴヌクレオチドと、医薬的に許容される希釈剤又は担
体と、を含む、医薬組成物である。

いくつかの実施形態では、本開示のＧａｌＮＡｃ置換オリゴヌクレオチドを含有する医
薬組成物は、非経口送達による全身投与用に製剤化される。非経口投与は、静脈内、動脈
内、皮下、腹腔内、又は筋肉内への注射又は注入を含み、また、例えば、埋込型デバイス
を介した、真皮下投与も行われる。好ましい実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチド
を含有する医薬組成物は、皮下（ＳＣ）又は静脈内（ＩＶ）送達用に製剤化される。非経
口投与用の製剤として滅菌水溶液を挙げることができ、これには、緩衝剤、希釈剤、及び
当業者に理解されるようなその他薬学的に許容される添加剤を含んでもよい。静脈内用途
には、溶質の総濃度を制御して、製剤に等張にすることができる。

本開示のＧａｌＮＡｃ置換オリゴヌクレオチドを含有する医薬組成物は、例えば、ＨＢ
Ｖ遺伝子の発現又は活性に関連する疾患又は障害の治療に有用である。

使用方法
本技術の一態様は、ＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ関連疾患を有する疑いがある、又はそ
のリスクがあると診断された対象を治療する方法を含む。治療用途では、本技術のＧａｌ
ＮＡｃ置換オリゴヌクレオチドを含む組成物は、このような疾患の疑いがあるか又はこの
ような疾患に既に罹患している（例えば、対象の血清及び／若しくは肝臓中のＨＢＶ抗原
表面及びエンベロープ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇ）などが存在、又
は高ＨＢＶＤＮＡ若しくはＨＢＶウイルス量レベル）対象に、疾患の発症における合併
症及び中間の病理学的表現型を含む、疾患の症状を治癒させるか又は少なくとも部分的に
抑止するのに十分な量で投与される。

いくつかの実施形態では、本技術のＧａｌＮＡｃ置換オリゴヌクレオチドは、以下の表
Ａ中の領域又はＨＢＶＲＮＡ転写物のうち少なくとも１つに対して親和性を示す。

ＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ関連疾患に罹患している対象は、当該技術分野において既
知の診断又は予後アッセイのいずれか又は組み合わせによって同定することができる。例
えば、ＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ関連疾患の典型的な症状として、血清及び／又は肝Ｈ
ＢＶ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇ）の存在、ＡＬＴの上昇、ＡＳＴの
上昇、抗ＨＢＶ抗体の非存在又は低濃度、肝障害、肝硬変、Ｄ型肝炎、急性Ｂ型肝炎、急
性Ｂ型劇症肝炎、慢性Ｂ型肝炎、肝線維症、末期肝疾患、肝細胞癌、血清病様症候群、食
欲不振、悪心、嘔吐、微熱、筋肉痛、易疲労感、味覚力及び嗅覚異常（食物及びタバコへ
の嫌悪感）、右上腹部及び心窩部痛（断続的、軽度から中程度）、肝性脳症、傾眠、睡眠
パターン障害、精神錯乱、昏睡、腹水、消化管出血、凝固障害、黄疸、肝腫大（ゆっくり
と拡大、軟肝臓）、脾腫、手掌紅斑、くも状母斑、筋消耗、くも状血管腫、血管炎、静脈
りゅう出血、末梢性浮腫、女性化乳房、精巣萎縮、腹部側副静脈（メズサの頭）、アラニ
ンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（
ＡＳＴ）の高レベル（１０００～２０００ＩＵ／ｍＬの範囲内）、ＡＳＴ値より高いＡＬ
Ｔ値、γ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）及び／又はアルカリホスファター
ゼ（ＡＬＰ）濃度の上昇、アルブミン濃度の低下、血清鉄濃度の上昇、白血球減少（すな
わち、顆粒球減少）、リンパ球増加、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の上昇、赤血球寿命の短
縮、溶血、血小板減少症、国際標準化比（ＩＮＲ）の延長、血清ＨＢＶＤＮＡの存在、
アミノトランスフェラーゼの上昇（ＵＬＮの５倍未満）、ビリルビン濃度の上昇、プロト
ロンビン時間（ＰＴ）の延長、高グロブリン血症、抗平滑筋抗体（ＡＳＭＡ）又は抗核抗
体（ＡＮＡ）などの組織非特異的抗体の存在、甲状腺に対する抗体などの組織特異的抗体
の存在、リウマチ因子（ＲＦ）の濃度上昇、高ビリルビン血症、血小板数及び白血球数の
低値、ＡＬＴ値より高いＡＳＴ値、変性及び新生肝細胞の変化を伴う小葉性炎症、及び大
部分の小葉中心壊死が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本技術のオリゴヌクレオチド組成物で治療された対象は、次
の状態又は症状、すなわち、血清及び／又は肝ＨＢＶ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ及び／又
はＨＢｅＡｇ）の存在、抗ＨＢＶ抗体の非存在又は低濃度、肝障害、肝硬変、Ｄ型肝炎、
急性Ｂ型肝炎、急性Ｂ型劇症肝炎、慢性Ｂ型肝炎、肝線維症、末期肝疾患、肝細胞癌、血
清病様症候群、食欲不振、悪心、嘔吐、微熱、筋肉痛、易疲労感、味覚力及び嗅覚異常（
食物及びタバコへの嫌悪感）、右上腹部及び心窩部痛（断続的、軽度から中程度）、肝性
脳症、傾眠、睡眠パターン障害、精神錯乱、昏睡、腹水、消化管出血、凝固障害、黄疸、
肝腫大（ゆっくりと拡大、軟肝臓）、脾腫、手掌紅斑、くも状母斑、筋消耗、くも状血管
腫、血管炎、静脈りゅう出血、末梢性浮腫、女性化乳房、精巣萎縮、腹部側副静脈（メズ
サの頭）、ＡＳＴ値より高いＡＬＴ値、白血球減少（すなわち、顆粒球減少）、アルブミ
ン濃度の低下、血清鉄濃度の上昇、リンパ球増加、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）の上昇、赤
血球寿命の短縮、溶血、血小板減少症、国際標準化比（ＩＮＲ）の延長、血清ＨＢＶＤ
ＮＡの存在、プロトロンビン時間（ＰＴ）の延長、高グロブリン血症、抗平滑筋抗体（Ａ
ＳＭＡ）又は抗核抗体（ＡＮＡ）などの組織非特異的抗体の存在、甲状腺に対する抗体な
どの組織特異的抗体の存在、高ビリルビン血症、血小板数及び白血球数の低値、ＡＬＴ値
より高いＡＳＴ値、変性及び新生肝細胞の変化を伴う小葉性炎症、及び大部分の小葉中心
壊死のうち、１つ以上の改善又は排除を示す。

いくつかの実施形態では、本技術のオリゴヌクレオチド組成物で治療された対象は、Ｈ
ＢＶ感染及び／又はＨＢＶ関連疾患に罹患している未治療の対象と比較して、アラニンア
ミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ
）、γ－グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ
）、ビリルビン、及びリウマチ因子（ＲＦ）の中から選択される１つ以上のバイオマーカ
ーの発現レベルの低下を示す。

本開示は、有効量の本技術のオリゴヌクレオチド組成物を対象に投与することを含む、
ＨＢＶ感染及び／又はＨＢＶ関連疾患を有すると診断された又はその疑いのある対象を治
療するための方法を提供する。

本開示のオリゴヌクレオチド及び組成物は、アンチセンス療法で使用できる。例えば、
オリゴヌクレオチドは、例えばＨＢＶの既知のウイルスＤＮＡ又はＲＮＡ配列である標的
核酸配列に相補的つまりハイブリダイズする核酸塩基配列を含有してもよい。

いくつかの実施形態は、標的核酸を本開示のオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化
合物と接触させることによって、標的の発現を調節する方法を含む。いくつかの実施形態
では、標的核酸は、例えば、ヒトなどの動物において細胞内に存在する。

いくつかの実施形態は、本開示のオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物を動物
に投与することを含む、動物における標的ＲＮＡの発現を阻害する方法を含む。オリゴヌ
クレオチドは、標的ＲＮＡの一部に相補的でありつまりハイブリダイズすることができる
。

いくつかの実施形態は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物を、ウイ
ルス負荷の低減を必要とする対象に投与することを含み、それにより、対象におけるウイ
ルスのウイルス負荷を低減する、ウイルスに感染した対象におけるウイルス負荷の低減方
法を含む。オリゴヌクレオチドは、ウイルス中の標的ＲＮＡの一部に相補的でありつまり
ハイブリダイズすることができる。

いくつかの実施形態は、細胞を本開示のオリゴヌクレオチド若しくは組成物と接触させ
ること、又は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド若しくは組成物を、ウイルス遺
伝子発現の阻害を必要とする対象に投与することを含む、細胞又は対象におけるウイルス
遺伝子発現の阻害方法を含む。オリゴヌクレオチドは、ウイルス中の標的ＲＮＡの一部に
相補的でありつまりハイブリダイズすることができる。

他の実施形態は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物を、ウイルス抗
原レベルの低減を必要とする対象に投与することを含み、それにより、対象内のウイルス
抗原レベルを低減させる、ウイルスに感染した対象におけるウイルス抗原レベルの低減方
法を含む。オリゴヌクレオチドは、ウイルス中の標的ＲＮＡの一部に相補的でありつまり
ハイブリダイズすることができる。

本開示のオリゴヌクレオチド及び組成物を用いて、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ
）遺伝子の発現を阻害若しくは低減する、又は、ＨＢＶウイルスの複製を阻害する、又は
、ＨＢＶを有する対象を治療する、又は、ＨＢＶに感染した対象におけるＢ型肝炎ウイル
ス（ＨＢＶ）のウイルス負荷を低減することができる。実施形態では、開示されるキメラ
オリゴヌクレオチドを用いて、標的遺伝子においてＲＮａｓｅＨ活性を誘導する。

本開示のオリゴヌクレオチド及び組成物を用いて、例えば、ＨＣＶＲＮＡに対するマ
イクロＲＮＡ結合部位を競合させ、それによって複製を阻害できる。

本開示はまた、対象に送達するためのオリゴヌクレオチドを安定化する方法も目的とす
る。オリゴヌクレオチドの安定化は、本明細書では、オリゴヌクレオチドの融点、つまり
温度Ｔ_ｍを上昇させることを特徴とする［定量化される］。

開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、単独で、又は標的化された疾患のた
めの１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与されてもよい。開示されるオリゴヌクレ
オチドコンストラクトは、単独で、又はＨＢＶ感染のための１つ以上の追加の治療薬と組
み合わせて投与されてもよい。併用療法では、オリゴヌクレオチドコンストラクト及びＨ
ＢＶ感染向けの１つ以上の追加の治療法薬を、同じ組成物若しくは別個の組成物で同時に
投与されてもよく、又は別々に、同時若しくは連続的に投与されてもよいことが理解され
る。

いくつかの実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、ＨＢＶ複
製阻害剤若しくは免疫調節剤と組み合わせて、又はＨＢＶ複製阻害剤及び免疫調節剤の両
方と抗ＨＢＶオリゴヌクレオチド剤を組み合わせる投薬計画で投与される。実施形態では
、開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、ＨＢＶ感染のための標準治療法と組
み合わせて投与される。ＨＢＶ感染の標準治療法として、ヌクレオチド／ヌクレオチドア
ナログ（例えば、ラミブジン、テルビブジン、エンテカビル、アデホビル、テノホビル、
及びクレブジン、テノホビル・アラフェナミド（ＴＡＦ）、ＣＭＸ１５７、及びＡＧＸ－
１００９）及びインターフェロン（例えば、Ｐｅｇ－ＩＦＮ－２ａ及びＩＦＮ－ａ－２ｂ
、インターフェロンラムダ）などのウイルスポリメラーゼの阻害剤を挙げることができる
。実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、同時投与（併用）又
は連続投与のいずれかの後に、１種以上のオリゴヌクレオチドと組み合わせて投与される
。オリゴヌクレオチドとして、ＡＬＮ－ＨＢＶ、ＡＲＢ－１４６７、ＡＲＣ－５２０及び
ＡＲＣ－５２１などのｓｉＲＮＡ、ＲＧ６００４（ＬＮＡＨＢＶ）、Ｉｏｎｉｓ－ＨＢ
Ｖ_Ｒｘ及びＩｏｎｉｓ－ＨＢＶ－Ｌ_Ｒｘなどのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲ
ＮＡ模倣物若しくは阻害剤、アプタマー、立体的遮断剤、ｓａＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、免疫
調節剤、並びに／又は、ＲＥＰ２１３９及びＲＥＰ２１６５オリゴヌクレオチドなど
のＨＢｓＡｇ放出阻害剤を挙げることができる。実施形態では、開示されるオリゴヌクレ
オチドコンストラクトは、ウイルス複製阻害剤などの１種以上の抗ウイルス剤と組み合わ
せて投与される。実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、ＨＢ
Ｖカプシド阻害剤と組み合わせて投与される。ＨＢＶカプシド阻害剤として、ＮＶＲ３
－７７８、ＡＢ－４２３、ＧＬＳ－４、Ｂａｙｅｒ４１－４１０９、ＨＡＰ－１、及び
ＡＴ－１を挙げることができる。実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドコンスト
ラクトは、ＴＬＲアゴニストなどの１種以上の免疫調節剤と組み合わせて投与される。Ｔ
ＬＲアゴニストとして、ＧＳ－９６２０、ＡＲＢ－１５９８、ＡＮＡ９７５、ＲＧ７７９
５（ＡＮＡ７７３）、ＭＥＤＩ９１９７、ＰＦ－３５１２６７６、及びＩＭＯ－２０５５
を挙げることができる。実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドコンストラクトは
、ＨＢＶワクチンと組み合わせて投与される。ＨＢＶワクチンとして、Ｈｅｐｌｉｓｌａ
ｖ、ＡＢＸ２０３、及びＩＮＯ－１８００を挙げることができる。実施形態では、開示さ
れるオリゴヌクレオチドコンストラクトは、組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態は、細胞を本開示のオリゴヌクレオチド若しくは組成物と接触させ
ること、又は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド若しくは組成物を、ＨＢＶ遺伝
子発現の阻害を必要とする対象に投与することを含む、細胞又は対象におけるＨＢＶ遺伝
子発現の阻害を含む。

いくつかの実施形態は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物を、ＨＢ
Ｖ遺伝子の発現又は活性化に関連する疾患又は障害の治療を必要とする対象に投与するこ
とを含む、ＨＢＶ遺伝子の発現又は活性化に関連する疾患又は障害の治療を含む。

いくつかの実施形態は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物を、Ｂ型
肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のウイルス負荷の低減を必要とする対象に投与することを含み、
それにより、対象におけるＨＢＶのウイルス負荷を低減する、ＨＢＶに感染した対象にお
けるＨＢＶのウイルス負荷の低減方法を含む。いくつかの実施形態はまた、Ｄ型肝炎ウイ
ルス（ＨＤＶ）に感染した対象におけるＨＤＶのウイルス負荷の低減方法も提供する。

他の実施形態は、治療有効量の本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物を、Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＨＢＶ）抗原レベルの低減を必要とする対象に投与することを含み、それにより
、対象におけるＨＢＶ抗原レベルを低減する、ＨＢＶウイルスに感染した対象におけるＨ
ＢＶウイルス抗原レベルの低減方法を含む。いくつかの実施形態はまた、Ｄ型肝炎ウイル
ス（ＨＤＶ）に感染した対象におけるＨＤＶ抗原レベルの低減方法も提供する。いくつか
の実施形態では、ＨＢＶ抗原は、ＨＢｓＡｇ又はＨＢｅＡｇである。

一実施形態では、ＨＢＶを標的とする本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物は、ＨＢ
Ｖ感染又はＨＢＶ及びＨＤＶ両方の感染、並びに／又はＨＢＶ関連疾患を有する対象に投
与され、本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物が対象に投与されると、例えば、対象の
細胞、組織、血液、又は他の組織若しくは流体内の、１つ以上のＨＢＶ遺伝子の発現、Ｈ
ＢＶｃｃｃＤＮＡレベル、ＨＢＶ抗原レベル、ＨＢＶウイルス負荷レベル、ＡＬＴ、及
び／又はＡＳＴが、少なくとも約２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３
１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４
１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５
１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６
１％、６２％、６２％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７
１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８
１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９
１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは少なくとも
約９９％以上、又は、これらの数のうちの２つの間の値で低下する。いくつかの実施形態
では、ＨＢＶ抗原レベルは、上記量低減する。いくつかの実施形態では、抗原は、ＨＢｓ
Ａｇ又はＨＢｅＡｇである。いくつかの実施形態では、ＨＢＶウイルス負荷レベルは、上
記量低減する。

一実施形態では、ＨＢＶを標的とする本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物は、ＨＢ
Ｖ感染又はＨＢＶ及びＨＤＶ両方の感染、並びに／又はＨＢＶ関連疾患を有する対象に投
与され、本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物が対象に投与されるとき、例えば、対象
の細胞、組織、血液、又は他の組織若しくは流体内の、抗ＨＢＶ抗体レベルが、少なくと
も約２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４
％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４
％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４
％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６２％、６４
％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４
％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４
％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４
％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは少なくとも約９９％以上、又は、これら
の数のうちの２つの間の値で上昇する。

本開示の方法及び使用による本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物の投与は、ＨＢＶ
感染、又はＨＢＶ及びＨＤＶ両方の感染、並びに／又はＨＢＶ関連疾患を有する患者にお
ける、かかる疾患又は障害の重篤度、徴候、症状、及び／又はマーカーの低減をもたらし
得る。この文脈において「低減」とは、かかるレベルの統計的に有意な減少を意味する。
低減は、例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％
、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９５％、若しくは約１００％、又はこれらの数のうちの２つの間の値であり得
る。

本開示のオリゴヌクレオチド又は組成物の量は、医療専門家によって決定され得る。製
品の１日用量は、ヒト成人につき１日当たり０．００１～１，０００ｍｇ、又はこの内の
任意の範囲の幅広い範囲で異なり得る。経口投与については、好ましくは、処置すべき患
者への投薬量の対症調整のために０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５
、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０
、及び５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で組成物を提供する。薬物の有
効量は、通常、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、又はこ
の内の任意の範囲の投薬量レベルで供給される。好ましくは、範囲は、１日当たり約０．
０１～約５０．０ｍｇ／ｋｇ体重、又はこの内の任意の範囲である。より好ましくは、１
日当たり約０．０１～約１０．０ｍｇ／ｋｇ体重、又はこの内の任意の範囲である。より
好ましくは、１日当たり約０．０１～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重、又はこの内の任意の範囲
である。オリゴヌクレオチドは、１日当たり１～４回の投薬計画で投与されてもよい。例
えば、本開示のオリゴヌクレオチドは、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの１回
以上の用量で投与されてもよい。例えば、開示されるオリゴヌクレオチドは、約０．１、
０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．
２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、
２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．
３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、
４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．
４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、
６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．
５、７．６、７．７、７．８、７．９、８、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、
８．６、８．７、８．８、８．９、９、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．
６、９．７、９．８、９．９、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３
、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８
、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３
、２３．５、２４、２４．５、２５、２５．５、２６、２６．５、２７、２７．５、２８
、２８．５、２９、２９．５、３０、３１、３２、３３、３４、３４、３５、３６、３７
、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、
５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は約１００ｍｇ／ｋｇの用量
で投与されてもよい。列挙された値の中間の値及び範囲もまた、本開示の一部であること
が意図される。これらの値は、点滴静注及び／又は皮下送達に適用され得る。本明細書に
記載される他の形態の送達もまた、これらの用量で投与されてもよい。用量は、患者の要
求条件、治療を行う状態の重篤度、及び使用されるオリゴヌクレオチドに応じて異なり得
る。連日投与又は間欠投与のいずれを用いてもよい。

本開示のオリゴヌクレオチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４
、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は約２５分間など
の時間をかけて、点滴静注によって投与することができる。投与は、例えば、１ヶ月、２
ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、又はそれ以上にわたり、例えば週１回、２週間に１回（すなわち
、２週間毎）定期的に繰り返してもよい。初期治療の投薬計画後、頻度を減らして治療薬
を投与してもよい。例えば、３ヶ月にわたり週１回又は２週間に１回投与した後、６ヶ月
又は１年以上にわたって、月１回の投与を繰り返してよい。

本開示のオリゴヌクレオチドはまた、皮下送達によっても投与され得る。投与は、例え
ば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、又はそれ以上にわたり、例えば週１回、２週間に
１回（すなわち、２週間毎）定期的に繰り返してもよい。初期治療の投薬計画後、頻度を
減らして治療薬を投与してもよい。例えば、３ヶ月にわたり週１回又は２週間に１回投与
した後、６ヶ月又は１年以上にわたって、月１回の投与を繰り返してよい。

疾患の治療又は予防の有効性は、例えば、疾患の進行、疾患の寛解、症状の重篤度、疼
痛の低減、生活の質、治療効果を維持するために必要な薬剤の量、疾患マーカーのレベル
、又は、治療又は予防の標的とされているある疾患に対して適切な任意のその他測定可能
なパラメータを測定することによって評価することができる。このようなパラメータのい
ずれか１つ、又はパラメータの任意の組み合わせを測定することによって、治療又は予防
の有効性をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。例えば、ＣＨ
Ｂの治療の有効性は、例えば、ウイルス負荷及びトランスアミナーゼレベルの定期的なモ
ニタリングによって評価できる。初期値とその後の値を比較することによって、処置が有
効であるかどうかの指標が提供される。

定義
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的でのみ使用され、本発明
の範囲を制限することを意図しないと理解すべきである。以下の定義は、別途記載のない
限り適用されるものとする。

本明細書で使用するとき、用語「相補的」又は「相補性」は、ポリヌクレオチド（すな
わち、オリゴヌクレオチド又は標的核酸などのヌクレオチドの配列）に関して、塩基対合
則を指す。本明細書で使用するとき、核酸配列の相補体は、１つの配列の５’末端が他方
の３’末端と対になるように核酸配列と位置合わせされると、「逆平行に会合」するオリ
ゴヌクレオチドを指す。例えば、配列「５’－Ａ－Ｇ－Ｔ－３’」は、配列「３’－Ｔ－
Ｃ－Ａ－５’」に相補的である。天然に存在する核酸中に通常見られない特定の塩基は、
本明細書に記載の核酸に含まれてもよい。これらには、例えば、イノシン、７－デアザグ
アニン、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。相補性は
、完全である必要はなく、安定な二本鎖は、ミスマッチ塩基対、変性又は不一致塩基を含
有してもよい。核酸技術の当業者は、例えば、オリゴヌクレオチドの長さ、塩基組成、及
びオリゴヌクレオチドの配列、イオン強度、及び不適正塩基対の頻度などの多くの変数を
経験的に考慮して、二本鎖の安定性を判断することができる。相補配列はまた、ＤＮＡ配
列又はその相補配列に相補的なＲＮＡ配列であってよく、またｃＤＮＡであってもよい。

本明細書で使用するとき、用語「ハイブリダイズ」は、２本の実質的に相補的な核酸鎖
（少なくとも１４～２５ヌクレオチドにわたって少なくとも約６５％相補的、少なくとも
約７５％、又は少なくとも約９０％相補的）が、適切にストリンジェントな条件下で互い
にアニーリングし、相補的塩基対間の水素結合の形成によって二本鎖又はヘテロ二本鎖を
形成するプロセスを指す。ハイブリダイゼーションは、典型的にはかつ好ましくは、プロ
ーブ長の核酸分子、好ましくは長さ１５～１００ヌクレオチド、より好ましくは長さ１８
～５０ヌクレオチドで実施される。核酸ハイブリダイゼーションの手法は当該技術分野に
おいて周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＳｅｃｏｎｄＥ
ｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅ
ｗ，Ｎ．Ｙ．を参照されたい。ハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション強度
（すなわち、核酸間の会合の強度）は、核酸間の相補性の程度、使用する条件のストリン
ジェンシー、及び形成されるハイブリッド体の熱融点（Ｔ_ｍ）などの因子によって影響さ
れる。当業者は、少なくとも所望のレベルの相補性を有する配列が安定的にハイブリダイ
ズする一方で、より低い相補性を有するものはハイブリダイズしないように、ハイブリダ
イゼーション条件のストリンジェンシーを推定及び調節する方法を理解している。ハイブ
リダイゼーション条件及びパラメータの例については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ
ａｌ．，１９８９，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏ
ｒＰｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔａｌ
．１９９４，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏ
ｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｓｅｃａｕｃｕｓ，Ｎ．Ｊを参照され
たい。いくつかの実施形態では、特定のハイブリダイゼーションは、ストリンジェントな
ハイブリダイゼーション条件下で起こる。標的核酸に特異的なオリゴヌクレオチド又はポ
リヌクレオチド（例えば、プローブ又はプライマー）は、好適な条件下で標的核酸に「ハ
イブリダイズ」する。

用語「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、本明細書で使用するとき
、少なくとも以下と同程度ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件を指す：５０
％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭＮａＨ_２ＰＯ_４、ｐＨ６．８、０．５％ＳＤ
Ｓ、０．１ｍｇ／ｍＬ超音波処理済みサケ精子ＤＮＡ、及び５×デンハルト溶液中におい
て４２℃で一晩ハイブリダイゼーション；２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる４５℃で
の洗浄；並びに０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる４５℃での洗浄。別の例では、
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、２０個の連続ヌクレオチドにわたっ
て３つ以上の塩基が異なる、２本の核酸のハイブリダイゼーションを可能にしてはならい
。

本明細書で使用するとき、用語「実質的に相補的」は、２つの配列がストリンジェント
なハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることを意味する。当業者であれば
、実質的に相補的な配列は、その全長に沿ってハイブリダイズする必要がないことを理解
するであろう。具体的には、実質的に相補的な配列は、ストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件下で標的配列にハイブリダイズする塩基の連続配列に対して３’又は５’
に配置される、標的配列にハイブリダイズしない連続配列の塩基を含んでよい。

「薬学的に許容される」とは、生物学的又は別の理由で望ましくないわけではない材料
を指し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、又は含有
される組成物の他の成分のいずれかと有害に相互作用することなく、患者に投与される医
薬組成物に組み込まれてもよい。「薬学的に許容される」という用語が、医薬キャリア又
は賦形剤を指すために使用される場合、キャリア又は賦形剤は、毒性試験及び製造試験の
必要な基準を満たすか、又はそのキャリアが、米国医薬品局によって作製されたＩｎａｃ
ｔｉｖｅＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔＧｕｉｄｅに含まれることを意味する。

オリゴヌクレオチドの「コンストラクト」は、本開示のオリゴヌクレオチド、及び、例
えば、（１）コンジュゲート部分、例えば本明細書に記載されるもの（標的部分）又は（
２）修飾／未修飾ヌクレオチドのドメイン、例えば一部のキメラオリゴヌクレオチドを指
すことができる。

「キメラオリゴヌクレオチド」は、例えば、式（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）によって例示さ
れるような、２つ以上のドメインを有するオリゴヌクレオチドを指す。キメラオリゴヌク
レオチドは、追加の構成要素、例えば、リガンド標的化基又はファーマコフォア又は追加
のヌクレオチド、リンカーなどを含んでもよい。

「修飾ヌクレオシド」は、独立して、修飾された糖部分及び／又は修飾核酸塩基を有す
るヌクレオシドを指す。ヌクレオシドは、サブユニット間結合、例えば、リン酸ジエステ
ルサブユニット間結合、チオリン酸サブユニット間結合、ホスホロアミダートサブユニッ
ト間結合、及びチオホスホロアミダートサブユニット間結合を介して連結され、「改変ヌ
クレオチド」は、ヌクレオシドとサブユニット間結合を共に指し得ると理解される。

「未修飾」又は「天然」核酸塩基として、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニ
ン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ
）が挙げられる。「修飾核酸塩基」として、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－
ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニ
ン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロ
ピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン、及び２－チオシトシ
ン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ_３）ウラシル及び
シトシン及びピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及び
チミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ
、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグ
アニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル
及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－ア
ミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－
デアザアデニン及び３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンなどの、その他合成及び
天然核酸塩基が挙げられる。更なる修飾核酸塩基として、フェノキサジンシチジン（１Ｈ
－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン－２（３Ｈ）－オン）、フェノチ
アジンシチジン（１Ｈ－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾチアジン－２（３Ｈ）
－オン）、Ｇ－ｃｌａｍｐ、例えば、置換フェノキサジンシチジン（例えば、９－（２－
ａｍ－ｏｅｌｈｏｘｙ）－Ｈ－ピリミド［５，４－ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン－２
（３Ｈ）－オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ－ピリミド［４，５－ｂ］インドール－
２－オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ－ピリド［３，２，５］ピロロ［２，３－ｄ
］ピリミジン－２－オン）などの三環式ピリミジンが挙げられる。修飾核酸塩基はまた、
プリン塩基又はピリミジン塩基が他のヘテロ環で置換されたもの、例えば、７－デアザ－
アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン、及び２－ピリドンを含んでもよ
い。

いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、５－メチルシトシン、２，６－ジアミノプ
リン、５－メチルウラシル、及びｇ－ｃｌａｍｐからなる群から選択される。いくつかの
実施形態では、Ｇ－ｃｌａｍｐは、

である。

「リガンド標的化基」は、受容体結合を介して、ＨＢＶに感染した肝細胞へのオリゴヌ
クレオチドの送達を促進する部分を指す。これらの基としては、細胞表面受容体であるＡ
ＳＧＰＲ及び細胞表面上のＬＤＬ受容体をそれぞれ標的とする、ＧａｌＮＡｃなどの「受
容体標的化リガンド」が挙げられる。細胞表面上のこれらの受容体を標的とする他の受容
体標的リガンドもまた、この用語の範囲内である。

「ファーマコフォア」は、ＨＢＶ／ＨＤＶ又はＨＢＶ感染細胞内でＨＢＶのＤＮＡ又は
ＲＮＡ分子と相互作用し、抗ウイルス応答を引き起こすオリゴヌクレオチド薬物配列を指
す。

「立体配置的に制限されたヌクレオシド」は、架橋された又は二環式の糖構造を有する
ヌクレオシドを指し、ヌクレオシドの立体構造は、特定の立体配置に固定されてもよい。
例えば、立体配置的に制限されたヌクレオシドとして、固定されたＣ_３’エンド型の糖パ
ッカリングを有するものが挙げられる。例示的実施形態として、架橋核酸（ＢＮＡ）、例
えば、α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）ＬＮＡ、β－Ｄ－メチレンオ
キシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）ＬＮＡ、エチレンオキシ（４’－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－２
’）ＥＮＡ、２’，４’－ＢＮＡ^ＮＣ［ＮＨ］、２’，４’－ＢＮＡ^ＮＣ［ＮＭｅ］、２
’，４’－ＢＮＡ^ＮＣ［ＮＢｎ］、アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）
ＢＮＡ、及びオキシアミノ（４’－ＣＨ_２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡなどの２’、４
’－ＢＮＡヌクレオシドが挙げられる。別の例示的なＢＮＡ構造体として、糖の４’と２
’の位置の間に少なくとも１つの架橋を有するオリゴヌクレオチドが挙げられるが、これ
らに限定されず、このとき架橋のそれぞれは、独立して、－［Ｃ（Ｒ_１）（Ｒ_２）］_ｎ－
、－Ｃ（Ｒ_１）＝Ｃ（Ｒ_２）－、－Ｃ（Ｒ_１）＝Ｎ－、－Ｃ（＝ＮＲ_１）－、－Ｃ（＝Ｏ
）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｏ－、－Ｓｉ（Ｒ_１）_２－、－Ｓ（＝Ｏ）_ｘ－及び－Ｎ（Ｒ_１
）－から独立して選択される、１つ又は２～４つの連結基を含み、式中、ｘは０、１、又
は２であり、ｎは、１、２、３、又は４であり、各Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、Ｈ、保護
基、ヒドロキシル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、置換Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_１２ア
ルケニル、置換Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２～Ｃ_１２ア
ルキニル、Ｃ_５～Ｃ_２０アリール、置換Ｃ_５～Ｃ_２０アリール、複素環ラジカル、置換複
素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_５～Ｃ_７脂環ラジカル、置換Ｃ
_５～Ｃ_７脂環ラジカル、ハロゲン、ＯＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、ＳＪ_１、Ｎ_３、ＣＯＯＪ_１、ア
シル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）_２－Ｊ_１）、又は
スルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）－Ｊ_１）であり、各Ｊ_１及びＪ_２は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ
_１２アルキル、置換Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニル、置換Ｃ_２～Ｃ_１２
アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_５～Ｃ_２０アリ
ール、置換Ｃ_５～Ｃ_２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、複素環ラジ
カル、置換複素環ラジカル、Ｃ_１～Ｃ_１２アミノアルキル、置換Ｃ_１～Ｃ_１２アミノアル
キル、又は保護基である。ある種のＢＮＡは、特許文献及び科学文献において調製及び開
示されている（例えば、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第７，０５
３，２０７号、同第６，２６８，４９０号、同第６，７７０，７４８号、同第６，７９４
，４９９号、同第７，０３４，１３３号、同第６，５２５，１９１号、同第７，６９６，
３４５号、同第７，５６９，５７５号、同第７，３１４，９２３号、同第７，２１７，８
０５号、及び同第７，０８４，１２５号を参照）。「立体配置的に制限されたヌクレオチ
ド」は、サブユニット間結合を介して連結された、立体配置的に制限されたヌクレオシド
を指す。

いくつかの実施形態では、立体配置的に制限されたヌクレオシドは、任意に置換された
ＬＮＡ又は任意に置換されたＥＮＡから選択される。任意に置換されたＬＮＡ又はＥＮＡ
は、－ＣＨ_２－部分のうちの１つがアルキル部分、例えば、メチル又はエチルによって置
換されてもよい。

「発現を阻害する」とは、発現又は活性の低下又は遮断を指し、必ずしも発現又は活性
の完全な消失を示すものではない。

「ウイルスの複製を阻害する」とは、ウイルスの複製の低下又は遮断を指し、必ずしも
ウイルスの複製の完全な消失を示すものではない。

「対象／被検体」は哺乳類を指し、ヒト及び非ヒト哺乳類を含む。いくつかの実施形態
では、対象はヒト、例えば成人である。

対象における疾患を「治療する」又は疾患の「治療」とは、（１）その疾患にかかりや
すい若しくはその疾患の症状をまだ呈していない対象において疾患が発生するのを防ぐこ
と、（２）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を止めること、又は（３）疾患を寛
解させる若しくは退行を引き起こすことを指す。

「治療有効量」とは、対象に治療効果を提供する医薬品の量を意味する。

「薬学的に許容される塩」は、本開示の化合物の生理学的かつ薬学的に許容される塩、
すなわち、親オリゴヌクレオチド／化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ望まれな
い毒性作用を付与しない塩を意味する。

以下の略語を本開示で用いる。２’－Ｈ（デオキシリボース）ヌクレオシドは、核酸塩
基に対応する大文字で、例えば、Ａ、Ｃ、Ｇ及びＴと称される。２’－ＯＨ（リボース）
ヌクレオシドは、小文字ｒと核酸塩基に対応する大文字で、例えば、ｒＡ、ｒＣ、ｒＧ及
びｒＵと称される。２’－Ｏ－Ｍｅヌクレオシドは、小文字ｍと核酸塩基に対応する大文
字で、例えば、ｍＡ、ｍＣ、ｍＧ、及びｍＵと称される。２’－ＭＯＥヌクレオシドは、
小文字「ｍｏｅ」と核酸塩基に対応する大文字で、例えば、ｍｏｅＡ、ｍｏｅＣ、ｍｏｅ
Ｇ及びｍｏｅＵと称される。２’－リボ－Ｆヌクレオシドは、小文字「ｆ」と核酸塩基に
対応する大文字で、例えば、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ及びｆＵと称される。２’アラビノ－Ｆヌ
クレオシドは、小文字「ａｆ」と核酸塩基に対応する大文字で、例えば、ａｆＡ、ａｆＣ
、ａｆＧ及びａｆＵと称される。ｍＡ^＊は、３’－アミノ－２’－ＯＭｅ－２，６－ジア
ミノプリンである。Ａ^＊は、３’－アミノ－２－デオキシ－２，６－ジアミノプリンであ
る。ｆＡ^＊は、３’－アミノ－２’－Ｆ－２，６－ジアミノプリンである。ＬＮＡヌクレ
オシドは、「Ｌ」と核酸塩基に対応する大文字で、例えばＬＡ、ＬＣ、ＬＧ、ＬＴＡと称
される。

ヌクレオチドの主鎖又はサブユニット間結合について、リン酸ジエステルサブユニット
間結合は、「ＰＯ」と称されるか、又は一般に配列の詳細には含まれない。チオリン酸サ
ブユニット間結合は、小文字「ｐｓ」と略記される。ホスホロアミダートサブユニット間
結合は、小文字「ｎｐ」と略記される。チオホスホロアミダートサブユニット間結合は、
小文字「ｎｐｓ」と略記される。

Ｎ３’→Ｐ５’は、３’部分がＮを含有し（例えば、ＮＨ）、Ｐを介して連結される、
サブユニット間結合を有する修飾ヌクレオチドを指す。例えば、以下の構造は、Ｎ３’→
Ｐ５’結合を有する：

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、他に明記されない限り、
単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は複数の指示物を含むことに留意すること。特許
請求の範囲は、いずれかの任意要素を除外するように起案される場合もあることに更に留
意されたい。したがって、この記載は、特許請求の範囲の要素の列挙に関連する「だけ」
、「のみ」などの排他的な用語の使用、又は「否定的」限定の使用に対する先行的限定の
根拠として機能することを意図する。

用語「約」は、当業者には理解されるものであり、この用語が用いられる文脈によって
ある程度異なる。用いられるある文脈において当業者には明らかでなく用語が使用されて
いる場合、「約」は、特定の用語の最大プラスマイナス１０％を意味するであろう。特定
の範囲は、本明細書では、「約」という用語が先行する数値で示される。用語「約」は、
本明細書では、それが先行する正確な数、並びにその用語が先行する近似する又は大凡の
数の文字どおりの根拠を提供するために使用される。数が具体的に挙げられた数に近似す
るか、又はその大凡であるかどうかを判定する際には、近似する又は大凡の挙げられてい
ない数は、それが提示される文脈において、具体的に挙げられた数に実質的に相当するも
のを提供する数であり得る。

「リンカー部分」は、例えば、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有
するＣ_３～Ｃ_１０アルキルオキシド部分を含み得る。また、このリンカーは、リンカーの
末端に、又はリンカー内部、例えば、Ｃ_２～Ｃ_１０アルキル部分若しくはＣ_３～Ｃ_１０ア
ルキルオキシド部分の内部に、１つ以上のアミン部分を含み得る。

「固体支持体リンカー」は、化合物を樹脂などの固体支持体に連結させる化学部分とし
て当業者に理解されるであろう。固体支持体リンカーは、合成の最後に特定の条件下で容
易に切断することができなければならない。一般的なリンカーはスクシニルリンカーであ
り、これは、濃水酸化アンモニウムで処理することによって容易に切断することができる
。固体支持体リンカーという用語は、化学物質が固体支持体に結合している実施形態、及
び固体支持体リンカーが固体支持体を含まない実施形態を含む。

本明細書に記載される疾患又は病状の治療又は予防の様々な様式は、完全な治療又は予
防を含むが、完全な治療又は予防に満たず、ある程度の生物学的又は医学的に関連する結
果が達成される「実質的」なものを意味することが意図されることも理解されたい。治療
は、慢性疾患の治療のための継続的な長期治療であっても、急性状態の治療のための単回
又は数回の投与であってもよい。

ある範囲の値が提供される場合、その間の各値（文脈により明確に示されない限り、そ
の範囲及び他に記載された範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１まで、つま
り、その記載された範囲の間の各値）は、本発明に包含されると理解される。これらのよ
り小さい範囲の上限値及び下限値は、独立してその小さい範囲に含まれる場合もあり、記
載された範囲から任意の限界値が具体的に除外され得るものとして、やはり本発明の範囲
に含まれるものとする。記載された範囲が限界値の一方又は両方を含む場合、これらの含
まれた限界値の一方又は両方を除外する範囲もやはり本発明に含まれるものとする。

本開示は、記載される特定の実施形態に限定されるものではなく、したがって変更可能
である。本明細書に使用される専門用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためで
あり、制限されることを意図せず、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ制限される
ことが理解されるべきである。

本開示を読むことによって当業者には明白となるように、本明細書に記載し例示される
個々の実施形態はそれぞれ、本開示の範囲及び趣旨から逸脱することなく、他のいくつか
の実施形態のいずれかの特徴から容易に分離されるか、又はそれらの特徴と組み合わされ
得る、別個の構成要素及び特徴を有する。説明したいずれの方法も、説明した事象の順序
で、又は論理的に可能な他の任意の順序で実施することができる。

本明細書に引用される全ての刊行物及び特許は、各個々の刊行物又は特許が、参照によ
り組み込まれることが具体的かつ個々に示されているかのように参照により本明細書に組
み込まれ、その文献が引用されている方法及び／又は材料に関連して開示及び説明するた
めに、参照により本明細書に組み込まれる。いかなる刊行物の引用も、出願日前に開示さ
れているがためであり、本発明が先行発明のおかげでそのような刊行物を先行する権利を
持たないことを容認するものとして解釈されるべきではない。更に記載される刊行物の日
付は実際に公開された日付とは異なる可能性があり、これは別個に確認を要する場合があ
る。

以下の実施例は、当業者による本開示の実施を助けるための、本開示の特定の実施形態
を例示する。したがって、実施例は、決して本開示の範囲を限定するものとみなされない
。

製造方法
乾燥剤を用いて、全てのモノマーを真空デシケーター内で乾燥させた（ＫＯＨ及びＰ_２
Ｏ_５、ＲＴ、２４時間）。第１の５’残基に結合した合成固体担体（ＣＰＧ）を市販の供
給元から得た。その他全ての合成試薬及び溶媒を市販の供給元から入手し、そのように使
用した。合成後ワークフロー用の化学物質及び溶媒を市販の供給元から購入し、精製又は
処理をなんら行わずに使用した。合成中、溶媒（アセトニトリル）及び溶液（アミダイト
及び活性剤）をモレキュラーシーブ上で保存した。

この試験で使用した、対照であるヌクレアーゼ安定化３’－ＧａｌＮＡｃコンジュゲー
トアンチセンスオリゴヌクレオチドを、例えば表に示す。アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを、製造業者によって提示される標準的な９３段階サイクルを用いてＡＢＩ－３９４合
成装置で合成した。固体担体は制御された細孔ガラスとし、モノマーは標準的な保護基を
含有していた。各オリゴヌクレオチドを、市販の５’－Ｏ－（４，４’－ジメトキシトリ
チル）－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）ＤＮＡ、並びに又は
、６－Ｎ－ベンゾイルアデノシン（Ａ^Ｂｚ）、４－Ｎ－アセチルシチジン（Ｃ^Ａｃ）、２
－Ｎ－イソブチリルグアノシン（Ｇ^ｉＢｕ）、及びチミジン（Ｔ）の２’－Ｏ－Ｍｅホス
ホロアミダイトモノマーを用い、標準的な固相オリゴヌクレオチド合成プロトコールに従
って個々に合成した。ホスホロアミダイトは、市販の供給元から購入した。２’Ｏ－Ｍｅ
－２，６－ジアミノプリンホスホロアミダイトは、市販の供給元から購入した。ＤＤＴＴ
（（ジメチルアミノ－メチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾリン－３－チ
オンを、オリゴリボヌクレオチドホスホロチオエートの合成のためのイオウ移動剤として
使用した。ＣＨ_３ＣＮ中、５－（エチルチオ）－１Ｈ－テトラゾール活性剤の存在下にお
けるホスホロアミダイトの０．１Ｍ溶液の固体結合オリゴヌクレオチドへの延長カップリ
ング、続いて標準的なキャッピング、酸化及び脱保護を用いて、修飾オリゴヌクレオチド
を得た。全ての修飾ホスホロアミダイトの段階的なカップリング効率は、９８％超であっ
た。オリゴヌクレオチド担持固体担体を、アンモニア／エタノール（３：１）水溶液を用
いて５５℃で８時間加熱し、塩基不安定な保護基を脱保護した。

ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＡＳＯは、ヒドロキシプロリノール－ＧａｌＮＡｃ固体担
体から合成した。ＧａｌＮＡｃを、６－アミノヘキサノエート結合を介してトランス－４
－ヒドロキシプロリノールにつないでヒドロキシプロリノール－ＧａｌＮＡｃ部分を得て
、その後、固体担体を得るために官能化させた制御細孔ガラス（ＣＰＧ）に付着させた。

未コンジュゲート及びＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドを、陰イオン交換ＨＰＬＣ
によって精製した。緩衝液は、１０％ＣＨ_３ＣＮ中２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．
５（緩衝液Ａ）及び１０％ＣＨ_３ＣＮ、１．８ＭＮａＢｒ中２０ｍＭリン酸ナトリウム
、ｐＨ８．５（緩衝液Ｂ）とした。完全長のオリゴヌクレオチドを含有する画分をプール
し、脱塩し、凍結乾燥した。

ＧａｌＮＡｃ合成

オキサン－２，６－ジオン（１０００ｇ、８．７６ｍｏｌ、１．００当量）、４－ジメ
チルアミノピリジン（５３．５ｇ、４３７．９ｍｍｏｌ、０．０５当量）のジクロロメタ
ン（１００００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、室温で撹拌しながらフェニルメ
タノール（９００ｇ、８．３２モル、０．９５当量）を滴下して加えた。得られた溶液を
一晩、室温で撹拌した。得られた混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水層の
ｐＨ値を、１０％塩酸で１に調節した。得られた溶液を、３×２０００ｍＬの酢酸エチル
で抽出し、有機層を合わせた。得られた混合物を、２×３０００ｍＬの飽和塩化ナトリウ
ムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。
これにより、１２４０ｇ（６４％）のＧ－１を無色油として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ
］＋（ＥＳＩ）：２２３。

Ｇ－１（５８．５ｇ、２６３．２３ｍｍｏｌ、１．２０当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピ
ルエチルアミン（３４ｇ、２６３．５７ｍｍｏｌ、１．２０当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド（６００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、Ｏ－ベンゾトリアゾール－
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－ウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート（１００
ｇ、２６３．６９ｍｍｏｌ、１．２０当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で１
時間撹拌した。続いて、（２Ｒ）－３－アミノプロパン－１，２－ジオール（２０ｇ、２
１９．５２ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。得られた溶液を撹拌しながら、室
温で一晩反応させた。得られた溶液を、２０００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。得られた
混合物を、２×１０００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。混合物を、無水硫
酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。こ
れにより、３８．７ｇ（６０％）のＧ－２を明黄色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ
＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：２９６。

Ｇ－２（１０ｇ、３３．８６ｍｍｏｌ、１．００当量）のピリジン（１００ｍＬ）溶液
に、窒素の不活性雰囲気下で、１－［クロロ（４－メトキシフェニル）ベンジル］－４－
メトキシベンゼン（１２．６３ｇ、３７．２８ｍｍｏｌ、１．１０当量）を室温で加えた
。得られた溶液を一晩、室温で撹拌した。次いで、メタノール（１０ｍＬ）の添加によっ
て反応を停止させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた溶液を、１０００ｍ
Ｌの酢酸エチルで希釈した。得られた混合物を、２×５００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム
溶液で洗浄した。混合物を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣
を、シリカゲルカラム適用した。これにより、１０．２ｇ（５０％）のＧ－３を明黄色油
として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＥＳＩ）：６２０。

Ｇ－３（１０ｇ、１６．７３ｍｍｏｌ、１．００当量）のメタノール（１００ｍＬ）溶
液に、１０％パラジウム活性炭（１ｇ）を室温で加えた。フラスコを排気し、水素で５回
フラッシュした。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。固形物を濾別した。得られた
混合物を減圧下で濃縮した。これにより、７．６ｇ（８９％）のＧ－４を白色固形物とし
て得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＥＳＩ）：５３０。

Ｇ－４（８．９０ｇ、１７．５３ｍｍｏｌ、１．０５当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホルム
アミド（３００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチル
アミン（６．４７ｇ、５０．１６ｍｍｏｌ、３．００当量）を室温で加えた。これに、Ｏ
－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチル（etramethyl）－ウロニウム－ヘキサ
フルオロホスフェート（７．１０ｇ、１８．７３ｍｍｏｌ、１．１２当量）を室温で加え
た。得られた溶液を１５分間、室温で撹拌した。この混合物に、Ｇ－５Ｒｅｆ（Ｎｕｃ
ｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，４２，（１３）８７９６－８８０
７）、（３０ｇ、１６．７２ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。得られた溶液を
撹拌しながら、室温で一晩反応させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を
フラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、２０．１ｇ（５３％）のＧ－６を
白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：２２８３。

Ｇ－６（２５ｇ、１０．９６ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（７５０ｍＬ
）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、トリエチルアミン（４．９８ｇ、４９．２１ｍｍｏ
ｌ、４．４９当量）を室温で加えた。これに、４－ジメチルアミノピリジン（１．３３ｇ
、１０．８９ｍｍｏｌ、０．９９当量）を室温で加えた。この混合物に、オキソラン－２
，５－ジオン（３．２９ｇ、３２．８８ｍｍｏｌ、３．００当量）を室温で加えた。得ら
れた溶液を一晩、室温で撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラ
ッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、１５．８３ｇ（６１％）のＧ－７を白
色固形物として、アンモニウム塩として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ／２＋ＮＨ４］＋（ＥＳ
Ｉ）：１２１０。

ＨＢＴＵ／ＴＥＡを使用し、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．，１９８８Ｓｅｐ；６（
８）：７６８－７５に記載の手順に従ってＧ－７をＣＰＧにロードして、ＧａｌＮＡｃ－
２－ＣＰＧ（５３μｍｏｌ／ｇ）を得た。

Ｇ３－０（１２．８ｇ、２４．５７ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホル
ムアミド（５００ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９．０ｇ、６９
．６４ｍｍｏｌ、３．００当量）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチル
－ウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート（９．９ｇ、２７．０３ｍｍｏｌ、１．１０
当量）を加えた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。次いで、Ｇ３－１（４４ｇ、
２４．５７ｍｍｏｌ、１．００当量）を加えた。得られた溶液を、室温で１６時間撹拌し
た。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製
した。これにより、２２ｇ（４１％）のＧ３－２を明黄色固形物として得た。ＭＳｍ／
ｚ［Ｍ－Ｈ］^－（ＥＳＩ）：２２９５．Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：７．７
９－７．８３（ｍ，６Ｈ），７．７０－７．７３（ｍ，４Ｈ），７．３３－７．３５（ｍ
，２Ｈ），７．２６－７．３０（ｍ，２Ｈ），７．１９－７．２２（ｍ，５Ｈ），７．０
１（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．８７（ｍ，４Ｈ），５．１９－５．２０（ｄ，Ｊ＝４．
０Ｈｚ，３Ｈ），４．９３－４．９７（ｍ，３Ｈ），４．５８－４．５９（ｄ，Ｊ＝４．
０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６－４．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），３．９５－４．０
４（ｍ，９Ｈ），３．８２－３．８９（ｍ，３Ｈ），３．６７－３．７１（ｍ，９Ｈ），
３．４５－３．６１（ｍ，１２Ｈ），３．３６－３．４１（ｍ，３Ｈ），２．９４－３．
０９（ｍ，１６Ｈ），２．２４－２．２７（ｍ，６Ｈ），２．００－２．０８（ｍ，２９
Ｈ），１．８７（ｓ，９Ｈ），１．７５（ｓ，９Ｈ），１．６３－１．６９（ｍ，３Ｈ）
，１．４１－１．５１（ｍ，１９Ｈ）。

Ｇ３－２（２２ｇ、９．５８ｍｍｏｌ、１．００当量）、ＴＥＡ（４．４ｇ、４．５０
当量）、４－ジメチルアミノピリジン（１．１５ｇ、１．００当量）のジクロロメタン（
２２０ｍＬ）溶液に、オキソラン－２，５－ジオン（２．８７ｇ、２８．６８ｍｍｏｌ、
３．００当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で１８時間撹拌した。得られた混
合物を、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これに
より、１５．０１ｇ（６５％）のＧ３－３を白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ－
Ｈ］^－（ＥＳＩ）：２３９５．Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：７．９６－８．
１６（ｍ，１０Ｈ），７．２８－７．３６（ｍ，４Ｈ），７．２１－７．２３（ｍ，６Ｈ
），６．８６－６．８９（ｍ，４Ｈ），５．２１－５．２２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ
），４．９７－５．０３（ｍ，４Ｈ），４．５１－４．５３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），
４．０３（ｍ，９Ｈ），３．８５－３．９２（ｍ，３Ｈ），３．６９－３．７４（ｍ，９
Ｈ），３．５２－３．５９（ｍ，１２Ｈ），３．３８－３．４４（ｍ，４Ｈ），２．９５
－３．０４（ｍ，１５Ｈ），２．２３－２．２９（ｍ，１０Ｈ），２．１０（ｓ，９Ｈ）
，２．０４－２．０７（ｍ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１
．７８（ｓ，１０Ｈ），１．６３－１．６８（ｍ，３Ｈ），１．４５－１．５４（ｍ，１
８Ｈ）。

Ｇ４－０（１０．１３ｇ、１７．５３ｍｍｏｌ、１．０５当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド（３００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエ
チルアミン（６．４７ｇ、５０．０６ｍｍｏｌ、２．９９当量）を室温で加えた。これに
、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチル－ウロニウム－ヘキサフルオロホ
スフェート（７．１０ｇ、１８．７２ｍｍｏｌ、１．１２当量）を室温で加えた。得られ
た溶液を１５分間、室温で撹拌した。この混合物に、Ｇ４－１（３０ｇ、１６．７２ｍｍ
ｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。得られた溶液を撹拌しながら、室温で一晩反応さ
せた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（３０ｇ）をフラッシュ分取ＨＰＬ
Ｃにより精製した。これにより、２２．３ｇ（５７％）のＧ４－２を白色固形物として得
た。

Ｇ４－２（１５ｇ、６．３８ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（４５０ｍＬ
）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、トリエチルアミン（２．９０ｇ、２８．６６ｍｍｏ
ｌ、４．４９当量）を室温で加えた。これに、４－ジメチルアミノピリジン（７７７ｍｇ
、６．３６ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。この混合物に、オキソラン－２，
５－ジオン（１．９１ｇ、１９．０９ｍｍｏｌ、２．９９当量）を室温で加えた。得られ
た溶液を一晩、室温で撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１５ｇ
）をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、１０．８０４７ｇ（６９％）
のＧ４－３を明黄色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：２４５３
。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）：８．１０－７．９２（ｍ，１
０Ｈ），７．３５－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，５Ｈ），７．１０
－７．０１（ｍ，１Ｈ），６．８９－６．８７（ｍ，４Ｈ），５．２２－５．２１（ｄ，
Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ），４．００－４．９７（ｍ，４Ｈ），．４．５３－４．５１（ｍ
，３Ｈ），４．０４－３．９０（ｍ，９Ｈ），３．８７－３．３．８０（ｍ，３Ｈ），３
．７４－３．７０（ｍ，１０Ｈ），３．６９－３．３９（ｍ，１６Ｈ），３．０５－３．
０２（ｍ，１６Ｈ），２．５１－２．５０（ｍ，２Ｈ），２．３０－２．２７（ｍ，８Ｈ
），２．１１－１．９９（ｍ，２９Ｈ），１．８９（ｓ，９Ｈ），１．７７（ｓ，９Ｈ）
，１．５２－１．３２（ｍ，２２Ｈ），１．２０（ｓ，９Ｈ）。

Ｇ５－０（１０ｇ、１６．９０ｍｍｏｌ、１．０６当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムア
ミド（３００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルア
ミン（６．１８ｇ、４７．９６ｍｍｏｌ、３．０当量）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，
Ｎ，Ｎ－エトラメチル－ウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート（６．８４ｇ、１８．
０４ｍｍｏｌ、１．１３当量）を加えた。得られた溶液を室温で５分間攪拌した。次いで
、Ｇ５－１（２８．６８ｇ、１５．９９ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド（３００ｍＬ）溶液を加えた。得られた溶液を撹拌しながら、室温で一晩反応
させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（２０ｇ）をフラッシュ分取ＨＰ
ＬＣにより精製した。これにより、２０．４４ｇ（５４％）のＧ５－２を白色固形物とし
て得た。

Ｇ５－２（１２．５ｇ、５．２８ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（３７５
ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、４－ジメチルアミノピリジン（６５０ｍｇ、５
．３２ｍｍｏｌ、１．０１当量）、トリエチルアミン（２．４ｇ、２３．７６ｍｍｏｌ、
４．５０当量）、及びオキソラン－２，５－ジオン（１．５９ｇ、１５．８９ｍｍｏｌ、
３．０１当量）を順に加えた。得られた溶液を一晩、室温で撹拌した。得られた混合物を
減圧下で濃縮した。粗生成物（１５ｇ）をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これ
により、９．０ｇ（７３％）のＧ５－３を白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ
］－（ＥＳＩ）：２４６５．１Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，３００Ｈｚ）：８．１０－
７．９０（ｍ，１０Ｈ），７．３６－７．２０（ｍ，９Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），６
．８８－６．８５（ｍ，４Ｈ），５．２２－５．２０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，３Ｈ），４
．９９－４．９５（ｍ，４Ｈ），４．５２－４．４９（ｍ，３Ｈ），４．０２－３．８９
（ｓ，９Ｈ），３．８５－３．７３（ｍ，３Ｈ），３．７０－６８（ｍ，９Ｈ），３．６
５－３．５２（ｍ，１２Ｈ），３．５２－３．３８（ｍ，６Ｈ），３．０２－２．９４（
ｍ，１５Ｈ），２．３０－２．２５（ｍ，１０Ｈ），２．０９－１．９９（Ｍ，２９Ｈ）
，１．８８－（ｓ，９Ｈ），１．７７（ｓ，１１Ｈ），１．５２－１．４５（ｍ，２２Ｈ
），１．２３－１．１９（ｍ，９Ｈ）。

デカン二酸（１００ｇ、４９４．４ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（２０
００ｍＬ）溶液に、４－ジメチルアミノピリジン（１８．１ｇ、１４８．２ｍｍｏｌ、０
．３０当量）を室温で加えた。これに、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エ
チルカルボジイミド塩酸塩（１１４ｇ、５９４．７ｍｍｏｌ、１．２０当量）を室温で加
えた。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。混合物に、ベンジルアルコール（６４．
１ｇ）を、０℃で撹拌しながら滴下した。得られた溶液を撹拌しながら、室温で一晩反応
させた。得られた混合物を、塩化ナトリウム飽和水で洗浄した。混合物を、無水硫酸ナト
リウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物（１００ｇ）をフラッシュ分取ＨＰＬ
Ｃにより精製した。これにより、６０．７ｇ（４２％）のＧ－８を白色固形物として得た
。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：２９３。

Ｇ－８（４．４８ｇ、１５．３２ｍｍｏｌ、１．５０当量）のアセトニトリル（３２０
ｍＬ）溶液に、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチル－ウロニウム－ヘキ
サフルオロホスフェート（５．８４ｇ、１５．４０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、Ｎ，Ｎ－
ジイソプロピルエチルアミン（３．９６ｇ、３０．６４ｍｍｏｌ、３．００当量）を加え
た。得られた溶液を、２５℃で１時間攪拌した。これに続き、Ｇ－９（１８．４ｇ、１０
．２６ｍｍｏｌ、１．００当量）を加えた。得られた溶液を２５℃で１６時間撹拌し、次
いで真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュにより精製した。これにより、１２ｇ（５
７％）のＧ－１０を白色固形物として得た。Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ，ｐｐ
ｍ）：７．７４－７．８３（ｍ，９Ｈ）、７．３１－７．３７（ｍ，５Ｈ）、６．９７（
ｓ，１Ｈ）、５．２１（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ）、５．０７（ｓ，２Ｈ）、４．９８
（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３．４Ｈｚ，３Ｈ）、４．４９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ
）、４．０４（ｓ，９Ｈ）、３．８３－３．９９（ｍ，３Ｈ）、３．６７－３．７２（ｍ
，３Ｈ）、３．５２－３．５５（ｍ，１２Ｈ）、３．３７－３．４３（ｍ，３Ｈ）、２．
９９－３．０５（ｍ，１２Ｈ）、２．２５－２．３５（ｍ，８Ｈ）、２．１２（ｓ，９Ｈ
）、１．９９－２．１１（ｍ，１７Ｈ）、１．９２（ｓ，９Ｈ）、１．７７（ｓ，９Ｈ）
、１．４０－１．５３（ｍ，２２Ｈ）、１．１９－１．２５（ｍ，８Ｈ）。

Ｇ－１０（５ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、１．００当量）のメタノール／酢酸エチル（１０
０ｍＬ、ｖ／ｖ＝１：１）溶液に、１０％パラジウム炭素（１．５ｇ、１０％）を加えた
。フラスコを排気し、水素で５回フラッシュした。混合物を、室温にて水素雰囲気下で２
時間撹拌した。固形物を濾別した。得られた混合物を、真空下で濃縮した。これにより、
４ｇ（８２％）のＧ－１１を白色固形物として得た。

Ｇ－１１（６．３ｇ、３．１８ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムア
ミド（６３ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．０ｇ、７．９５ｍ
ｍｏｌ、２．５０当量）を加えた。この後、０℃で撹拌しながら、ペンタフルオロフェニ
ル２，２，２－トリフルオロアセテート（１．３３ｇ、４．７７ｍｍｏｌ、１．５０当量
）を滴下した。得られた溶液を、２５℃で３時間攪拌した。得られた混合物を、真空下で
濃縮した。粗生成物を、以下の条件でフラッシュにより精製した：Ｃ１８ゲルカラム、溶
離液Ａ水、溶離液Ｂアセトニトリル；勾配：１５分間以内に２０％から８０％まで、３分
間１００％で維持、検出器、ＵＶ２１０ｎｍ。これにより、５ｇ（７３％）のＧａｌＮＡ
ｃ－６を白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ／２＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：１０７３；
Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：７．７１－７．８０（ｍ，９Ｈ）、６
．９８（ｓ，１Ｈ）、５．２２（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ）、４．９９（ｄｄ，Ｊ＝１
１．１Ｈｚ，３．３Ｈｚ，３Ｈ）、４．５０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ）、４．０２（
ｓ，９Ｈ）、３．８２－３．９２（ｍ，３Ｈ）、３．６９－３．７４（ｍ，３Ｈ）、３．
５２－３．５６（ｍ，１２Ｈ）、３．３９－３．４４（ｍ，３Ｈ）、３．０３（ｓ，１２
Ｈ）、２．７５－２．７９（ｍ，２Ｈ）、２．２８（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ）、２．
００－２．１０（ｍ，２６Ｈ）、１．８９（ｓ，９Ｈ）、１．７７（ｓ，９Ｈ）、１．６
４－１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．２５－１．５３（ｍ，２８Ｈ）；Ｆ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ
，１６２ＭＨｚ，ｐｐｍ）：－１５３．６０、－１５３．６７、－１５３．６８、－１５
３．６９、－１５８．０５、－１５８．１４、－１５８．２２、－１６２．５３、－１６
２．６０、－１６２．６２、－１６２．６９、－１６２．７０。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された５０００ｍＬの四つ口丸底フラスコに、オ
キサン－２，６－ジオン（２５０ｇ、２．１９ｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン
（２．５Ｌ）溶液、４－ジメチルアミノピリジン（１１．１ｇ、９０．９１ｍｍｏｌ、０
．０５当量）を入れた。この後、フェニルメタノール（２２５ｇ、２．０８ｍｏｌ、０．
９５当量）を、撹拌しながら滴下した。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。得
られた溶液を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、水層を合わせた。溶液のｐＨ値を
、塩化水素（１ｍｏｌ／Ｌ）で１に調整した。得られた溶液を、酢酸エチルで抽出した。
有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。これにより、
２３０ｇ（４７％）のＧ７－１を得た。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された５Ｌの三つ口丸底フラスコに、Ｇ７－１（
１００ｇ、４４９．９７ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（２．０Ｌ）溶
液を入れた。この後、（ジメチル－３－スルファニル）ボラヌイド（４１ｇ、５３９．６
９ｍｍｏｌ、１．２０当量）を、撹拌しながら滴下した。得られた溶液を、２５℃で３時
間撹拌した。次いで、２００ｍＬのメタノールを添加することにより反応を停止し、真空
下で濃縮した。粗生成物をヘキサンから再結晶化することにより精製した。これにより、
５８ｇ（６２％）のＧ７－２を得た。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された１００００ｍＬの四つ口丸底フラスコに、
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アミノ－６－（ヒドロキシメチル）オキサン－２，４
，５－トリオールヒドロクロリド（３５０ｇ、１．６２ｍｏｌ、１．００当量）のピリジ
ン（３５００ｍＬ）溶液を入れた。この後、２５℃で無水酢酸（１２４６ｇ、１２．２ｍ
ｏｌ、７．５２当量）を滴下した。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。得られ
た混合物を、真空下で濃縮した。粗生成物を水／氷から再結晶化することにより精製した
。固形物を濾過により回収した。これにより、５０７ｇ（８０％）のＧ７－３を得た。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された５０Ｌの三つ口丸底フラスコに、Ｇ７－３
（２２０ｇ、５６５ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（２２Ｌ）溶液を入れた
。この後、塩化第二鉄（２７５ｇ）を２５℃で少しずつ添加した。得られた溶液を、２５
℃で２時間撹拌した。次いで、１７Ｌの水／氷を添加することにより反応を停止した。得
られた溶液を、水及び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。混合物を無水硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、真空下で濾過及び濃縮した。これにより、１２１ｇ（６５％）のＧ７－
４を得た。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された２０００ｍＬの丸底フラスコに、Ｇ７－４
（１１１ｇ、３３７．１ｍｍｏｌ、１．００当量）及びベンジル５－ヒドロキシペンタノ
エート（７０．２ｇ、４３８．２ｍｍｏｌ、１．３当量）の１，２－ジクロロエタン（１
１００ｍＬ）溶液、及び２２ｇの分子ふるいタイプ４Ａを入れた。得られた溶液を、２５
℃で３０分間攪拌した。この後、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（２
２．４８ｇ、１０１．１２ｍｍｏｌ、０．３当量）を１０分間で撹拌しながら滴下した。
得られた溶液を、２５℃で１５時間撹拌した。得られた溶液をジクロロメタンで希釈し、
水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、及び飽和塩化ナトリウム水溶液でそれぞれ洗浄した。
有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、フラッシ
ュにより精製した。これにより、１１０ｇ（５７％）のＧ７－５を得た。

５０００ｍＬの丸底フラスコに、Ｇ７－５（３３０ｇ、６１４ｍｍｏｌ、１．００当量
）の酢酸エチル（３３００ｍＬ）溶液、１０％無水パラジウム炭素（１００ｇ）（３０％
ｗ／ｗ）を入れた。フラスコを排気し、水素で５回フラッシュした。混合物を、水素雰囲
気下において室温で３時間撹拌した。固形物を濾過して取り除き、濾液を真空下にて濃縮
した。これにより、１８４ｇ（６７％）のＧ７－６を得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（
ＥＳＩ）：４４８；Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３Ｃｌ，３００Ｈｚ，ｐｐｍ）：δ ５．９９（ｄ
，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．２９（ｄｄ，
Ｊ＝１０．６，３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９１
－４．２１（ｍ，５Ｈ），３．５１－３．５６（ｍ，１Ｈ），２．３１－２．５２（ｍ，
２Ｈ），１．９１－２．２１（ｍ，１２Ｈ），１．７１（ｓ，４Ｈ）。

窒素の不活性雰囲気でパージ及び維持された１００ｍＬの三つ口丸底フラスコに、Ｇ７
－６（５ｇ、１１．１７ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液、ジクロロメタン（５０ｍＬ）
、ＤＩＥＡ（２．１７ｇ、１６．７９ｍｍｏｌ、１．５０当量）を入れた。この後、０℃
で撹拌しながら、ペンタフルオロフェニル２，２，２－トリフルオロアセテート（４．６
９ｇ、１６．７５ｍｍｏｌ、１．５０当量）を滴下した。得られた溶液を、２５℃で３時
間撹拌した。得られた混合物を、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した
。これにより、４ｇ（５８％）のＧ７－８を得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）
：６１４；Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）：δ ７．８５（ｄ，Ｊ＝９．
２Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９９（ｄｄ，Ｊ＝１１．
２，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ
），３．８７－３．９４（ｍ，１Ｈ），３．７４．３．７９（ｍ，１Ｈ），３．４５－３
．５１（ｍ，１Ｈ），２．７８－２．８１（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．０
６（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．８４（ｓ，３Ｈ），１．６６－１．７７（
ｍ，４Ｈ）；Ｆ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）：δ－１５３．６１，－１５
３．６６，－１５８．０４，－１５８．１６，－１６２．５８，－１６２．６４，－１６
２．７１。

デカン－１，１０－ジオール（１２５ｇ、７１７．２３ｍｍｏｌ、５．００当量）のジ
クロロメタン／Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２５０ｍＬ／２５０ｍＬ）溶液に、トリ
エチルアミン（２１．８ｇ、２１５．４４ｍｍｏｌ、１．５０当量）を加えた。この後、
４－トルオルスルホニルクロリド（２７．３ｇ、１４３．１９ｍｍｏｌ、１．００当量）
を２５℃で加えた。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。得られた混合物を真空
下で濃縮し、５００ｍＬのジクロロメタンで希釈した。固形物を濾別した。得られた溶液
を、３×５００ｍＬの水及び３×５００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム
適用した。これにより、４１ｇ（８７％）のＧ９－１を無色油状物として得た。

Ｇ９－１（３２．８ｇ、９９．８６ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホル
ムアミド（１５０ｍＬ）溶液に、アジ化ナトリウム（１３．０ｇ、１９９．９７ｍｍｏｌ
、２．００当量）を加えた。得られた溶液を、油浴中９０℃で３時間撹拌した。固形物を
濾別した。得られた溶液を５００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、３×５００ｍＬの飽和重炭
酸ナトリウム及び３×５００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。
これにより、１８ｇ（８３％）のＧ９－２を黄色油状物として得た。

Ｇ９－２（１０ｇ、５０．１８ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（１０
０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（１４．４ｇ、５４．９０ｍｍｏｌ、１．１０
当量）を加えた。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。得られた混合物を、真空
下で濃縮した。得られた溶液を５０ｍＬの水で希釈し、３×５０ｍＬのトルエンで洗浄し
た。水性層を真空下で濃縮し、シリカゲルカラムに適用した。これにより、８ｇ（８６％
）のＧ９－３を明黄色固形物として得た。

Ｇ９－３（９．９ｇ、２２．１３ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（１
００ｍＬ）溶液、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３ｇ、２２．２０ｍｍｏｌ、１．
００当量）に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（５．６ｇ、４４．３７ｍｍｏｌ
、２．００当量）を加えた。この後、０℃で撹拌しながら１０－アミノデカン－１－オー
ル（５ｇ、２８．８５ｍｍｏｌ、１．３０当量）を加えた。得られた溶液を、２５℃で１
６時間撹拌した。得られた混合物を、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュにより精
製した。これにより、９．３ｇ（６９％）のＧ９－４を白色固形物として得た。ＭＳｍ
／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：６０３，１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）
：δ ７．８１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）
，５．２２（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４
．４９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０
２（ｓ，３Ｈ），３．８６－３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６９－３．７２（ｍ，１Ｈ），
３．３４－３．４１（ｍ，３Ｈ），２．９７－３．０２（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｓ，３
Ｈ），２．００－２．０４（ｍ，５Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ）
，１．３６－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｓ，１２Ｈ）。

Ｇ９－４（３ｇ、４．９８ｍｍｏｌ、１．００当量）のアセトン（３０ｍＬ）溶液に、
０℃で撹拌しながら、Ｊｏｎｅｓ試薬（３．６ｍＬ、１．８７当量）を滴下した。得られ
た溶液を、０℃で２時間撹拌した。溶液のｐＨ値を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で６に
調整した。固形物を濾過し、濾液を３×５００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有
機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシ
ュにより精製した。これにより、２ｇ（６５％）のＧ９－５を白色固形物として得た。

Ｇ９－５（４ｇ、６．４９ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（４０ｍＬ）溶
液、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２．１ｇ、１６．２５ｍｍｏｌ、２．００当
量）に、ペンタフルオロフェニル２，２，２－トリフルオロアセテート（２．７３ｇ、９
．７５ｍｍｏｌ、１．５０当量）を０℃で撹拌しながら滴下した。得られた溶液を、２５
℃で３時間撹拌した。得られた混合物を、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュによ
り精製した。これにより、３ｇ（５９％）のＧ９－６を白色固形物として得た。ＭＳｍ
／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：７８３．１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）
δ ７．８１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），
５．２１（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．
４９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），３．８３－３．９０（ｍ，
１Ｈ），３．６７－３．７３（ｍ，１Ｈ），３．３７－３．４３（ｍ，１Ｈ），２．９７
－３．０２（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．７９（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），１
．９９－２．０４（ｍ，５Ｈ），１．８９（ｓ，３Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），１．６
２－１．６９（ｍ，２Ｈ），１．２５－１．５０（ｍ，１６Ｈ）；ＦＮＭＲ（ＤＭＳＯ
，４００Ｈｚ，ｐｐｍ）：δ－１５３．６５，－１５３．６６，－１５３．７１，－１５
８．０９，－１５８．１５，－１５８．２１，－１６２．５８，－１６２．６３，－１６
２．６４，－１６２．７０，－１６２．７１。

２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エタン－１－オー
ル（１９４ｇ、９９８．８４ｍｍｏｌ、１０．００当量）のジクロロメタン（１２０ｍＬ
）溶液に、トリエチルアミン（１５．１５ｇ、１４９．７２ｍｍｏｌ、１．５０当量）を
加えた。この後、４－トルオルスルホニルクロリド（１９．１ｇ、１００．１８ｍｍｏｌ
、１．００当量）を２５℃で添加した。得られた溶液を、１６℃で一晩攪拌した。得られ
た溶液を、１００ｍＬの水で希釈した。得られた溶液を、３×２００ｍＬのジクロロメタ
ンで抽出し、有機層を合わせた。得られた混合物を、３×１００ｍＬの５％クエン酸水溶
液で洗浄した。有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣
を、シリカゲルカラム適用した。これにより、３５ｇ（９３％）のＧ１０－１を白色固形
物として得た。

Ｇ１０－１（３４．８ｇ、９９．８８ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド（１８０ｍＬ）溶液に、アジ化ナトリウム（１３．０ｇ、１９９．９７ｍｍｏ
ｌ、２．００当量）を加えた。得られた溶液を、油浴中９０℃で３時間撹拌した。固形物
を濾別した。得られた溶液を５００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、３×５００ｍＬの飽和重
炭酸ナトリウム及び３×５００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を無水硫酸
ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した
。これにより、１７ｇ（７１％）のＧ１０－２を明黄色油状物として得た。

Ｇ１０－２（２．２ｇ、１０．０３ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（
２０ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（２．８８ｇ、１０．９８ｍｍｏｌ、１．１
０当量）を加えた。得られた溶液を、２５℃で１２時間撹拌した。得られた溶液を５０ｍ
Ｌの水で希釈し、３×５０ｍＬのトルエンで洗浄した。水性層を真空下で濃縮した。これ
により、１．７ｇ（８１％）のＧ１０－３を明黄色油状物として得た。

Ｇ１０－３（１０ｇ、２２．３５ｍｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（１
００ｍＬ）溶液に、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３ｇ、２２．２０ｍｍｏｌ、１
．００当量）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド（５．６２ｇ、４４．５３ｍｍｏ
ｌ、２．００当量）を加えた。この後、０℃で撹拌しながら、２－［２－［２－（２－ア
ミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エタン－１－オール（５．６ｇ、２８．９８ｍｍｏ
ｌ、１．３０当量）を加えた。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。得られた混
合物を、真空下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。粗生成物をフラッシュ
により精製した。これにより、８ｇ（５８％）のＧ１０－４を明黄色油状物として得た。
ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：６２３．，１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ
，ｐｐｍ）：δ ７．８２（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），５．２２（ｓ，１Ｈ），４．
９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，
１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．８３－３
．９１（ｍ，１Ｈ），３．６７－３．７３（ｍ，１Ｈ），３．４８－３．５１（ｍ，１０
Ｈ），３．３７－３．４２（ｍ，５Ｈ），３．１９－３．２０（ｍ，２Ｈ），２．１１（
ｓ，３Ｈ），２．０８－２．１０（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），１．８９（ｓ，
３Ｈ），１．７７（ｓ，３Ｈ），１．４０－１．６０（ｍ，４Ｈ）。

Ｇ１０－４（６ｇ、９．６４ｍｍｏｌ、１．００当量）のアセトン（６０ｍＬ）溶液に
、０℃で撹拌しながら、Ｊｏｎｅｓ試薬（６．７ｍＬ）を滴下した。得られた溶液を、０
℃で３時間撹拌した。溶液のｐＨ値を、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液で５に調整した。
固形物を濾過し、濾液を３×５００ｍＬの飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュにより精
製した。これにより、３ｇ（４９％）のＧ１０－５を固形物として得た。

Ｇ１０－５（１ｇ、１．５７ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（１０ｍＬ）
溶液に、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミドヒドロクロリ
ド（３６０ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ、１．２０当量）、２，３，５，６－テトラフルオロ
フェノール（３１０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１．２０当量）。得られた溶液を、２５℃
で３時間撹拌した。得られた混合物を、真空下で濃縮した。粗生成物をフラッシュにより
精製した。得られた溶液をクロロホルムで抽出し、有機層を合わせた。有機層を、硫酸ナ
トリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。これにより、０．５ｇ（４１％）が得
られ、他のバッチの生成物を合わせて、５．０４２２ｇのＧ１０－６を明黄色油状物とし
て得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：７８５．，１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ，
４００Ｈｚ，ｐｐｍ）：δ ７．３０－７．４０（ｍ，１Ｈ），６．４８－６．６０（ｍ
，２Ｈ），５．３０（ｓ，１Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，３．６Ｈｚ，１
Ｈ），４．５２－４．５９（ｍ，３Ｈ），４．０８－４．１３（ｍ，２Ｈ），３．９５－
３．９９（ｍ，２Ｈ），３．７６－３．７８（ｍ，３Ｈ），３．６０－３．６７（ｍ，６
Ｈ），３．４８－３．５９（ｍ，３Ｈ），３．３０－３．４８（ｍ，２Ｈ），２．１４－
２．１６（ｍ，５Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），１．８８（ｓ，
３Ｈ），１．５０－１．６０（ｍ，４Ｈ）．ＦＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ，４００Ｈｚ，ｐｐ
ｍ）：δ－１４０．７６，－１４０．７９，－１４０．８２，－１４０．８４，－１５４
．５２，－１５４．５４，－１５４．５７，－１５４．６０。

オキサン－２，６－ジオン（１０００ｇ、８．７６ｍｏｌ、１．００当量）、４－ジメ
チルアミノピリジン（５３．５ｇ、４３７．９ｍｍｏｌ、０．０５当量）のジクロロメタ
ン（１００００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、室温で撹拌しながらフェニルメ
タノール（９００ｇ、８．３２ｍｏｌ、０．９５当量）を滴下した。得られた溶液を一晩
、室温で撹拌した。得られた混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水層のｐＨ
値を、１０％塩酸で１に調節した。得られた溶液を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせ
た。得られた混合物を、飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウム
で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。これにより、１２４０ｇ（６４％）のＧ１１－
１を無色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：２２３。

Ｇ１１－１（５００ｇ、２．２４ｍｏｌ、１．００当量）のテトラヒドロフラン（４０
００ｍＬ）溶液に、０℃で撹拌しながら、ホウ素－メチルスルフィド錯体（２７０ｍＬ、
１．２０当量）を滴下した。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。次いで、２００ｍ
Ｌのメタノールを添加することにより反応を停止した。得られた混合物を減圧下で濃縮し
た。残渣を、シリカゲルカラム適用した。これにより、３１２ｇ（６７％）のＧ１１－２
を黄色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：２０９。

（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－２，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル
）オキサン－３－アミニウムクロリド（１０００ｇ、４．６３ｍｏｌ、１．００当量）の
ピリジン（１００００ｍＬ）溶液に、無水酢酸（３５６０ｇ、３４．９ｍｏｌ、７．５０
当量）を室温で加えた。得られた溶液を一晩、室温で撹拌した。得られた混合物を減圧下
で濃縮した。粗生成物を氷／水から再結晶化することにより精製した。これにより、１４
５０ｇ（８０％）のＧ１１－３を白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｅ
ＳＩ）：３９０。

Ｇ１１－３（１００ｇ、２５６．８４ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（１
０Ｌ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、塩化鉄（ＩＩＩ）（１２５ｇ、７７１．６０ｍ
ｍｏｌ、３．００当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で３時間撹拌した。得ら
れた混合物を、水及び飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで
乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。これにより、５２ｇ（６１％）のＧ１１－４を茶
色油状物として得た。その生成物を更に精製することなく、次工程で直接用いた。

Ｇ１１－４（５２ｇ、１５７．９１ｍｍｏｌ、１．００当量）、ベンジル５－ヒドロキ
シペンタノエート（４２．７ｇ、２０５．０４ｍｍｏｌ、１．３０当量）の１，２－ジク
ロロエタン（５００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、０℃で撹拌しながらトリメ
チルシリルトリフルオロメタンスルホネート（１０．５ｇ、４７．２４ｍｍｏｌ、０．３
０当量）を滴下した。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。氷／水を添加することに
より反応を停止した。得られた溶液を、ジクロロメタンで抽出し、有機層を合わせた。得
られた混合物を、水及び飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウム
で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。粗生成物
をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、４６．４ｇ（５５％）のＧ１１
－５を明黄色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：５３８。

Ｇ１１－５（１０ｇ、１８．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）の酢酸エチル（１００ｍＬ
）溶液に、１０％パラジウム活性炭（１ｇ）を加えた。フラスコを排気し、水素で５回フ
ラッシュした。得られた溶液を、室温で３時間撹拌した。固形物を濾過し、メタノールで
洗浄し、高真空下で一晩乾燥させた。これにより、６．８２ｇ（８２％）のＧ１１－６を
白色固形物として得た。

２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（３００ｇ、２．
４８ｍｏｌ、１．００当量）のＤＭＳＯ（５００ｍＬ）溶液に、１５℃の窒素の不活性雰
囲気下で、５．０Ｍ水酸化ナトリウム（４９．５ｍＬ、０．２４８ｍｏｌ、０．１当量）
を加えた。この後、ｔｅｒｔ－ブチルアクリレート（１０７９ｇ、８．４ｍｏｌ、３．４
当量）を、撹拌しながら滴下した。得られた溶液を、２５℃で２４時間撹拌した。得られ
た溶液を、４×３０００ｍＬの酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせた。得られた混合物
を、水及び飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、
濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。これにより、５２６ｇ
（４２％）のＧ１１－７を明黄色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ
）：５０６．６。

Ｇ１１－７（５０ｇ、９９．０ｍｍｏｌ、１．００当量）のＣＨ_２Ｃｌ_２（７５０ｍＬ
）溶液に、３６５ｍＬの２５％Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を撹拌しながら加えた。この後、ベン
ジルクロロホルメート（５０．５ｇ、０．２９７ｍｍｏｌ、３．００当量）を、室温で撹
拌しながら滴下した。得られた溶液を一晩、室温で撹拌した。得られた溶液を、ジクロロ
メタンで抽出し、有機層を合わせた。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラム適用
した。これにより、４２．４ｇ（６７％）のＧ１１－８を明黄色油状物として得た。ＭＳ
ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：６４０．４。

Ｇ１１－８（３００ｇ、４６８．９ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、ギ酸（３Ｌ、
９６％）を添加した。得られた溶液を、２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下
で濃縮した。溶液のｐＨ値を、水酸化ナトリウム（１ｍｏｌ／Ｌ）で１２に調整した。得
られた溶液を、３×６Ｌのエーテルで抽出し、水層を合わせた。塩化水素（２ｍｏｌ／Ｌ
）を用いて、水層のｐＨを４に調整した。得られた溶液を、４酢酸エチルで抽出した。有
機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。これにより
、１９８．９６ｇ（９０％）のＧ１１－９を黄色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋
Ｈ］＋（ＥＳＩ）：４７２。

Ｇ１１－９（２６４ｇ、５６０．５１ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン／ア
セトニトリル（１４００ｍＬ／１４００ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルア
ミン（５７８．４ｇ、４．４８４ｍｏｌ、８当量）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，
Ｎ－エトラメチル－ウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート（８４８ｇ、２．２３１ｍ
ｏｌ、４．００当量）を順に加えた。得られた溶液を、２５℃で３０分間撹拌した。この
後、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（３－アミノプロピル）カルバメート（３９０ｇ、２．２３８
ｍｍｏｌ、４．００当量）を２５℃で加えた。得られた溶液を、２５℃で６時間撹拌した
。得られた溶液を減圧下で濃縮した。残渣を、３０００ｍＬのジクロロメタンで希釈した
。有機層を飽和重炭酸ナトリウム溶液、飽和塩化アンモニウム、及び飽和塩化ナトリウム
でそれぞれ洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮
した。残渣を、シリカゲルカラム適用した。これにより、３３６ｇ（７０％）のＧ１１－
１０を白色泡状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：９４１。

Ｇ１１－１０（３５０ｇ、３７２．３ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（１
．４Ｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（３５０ｍＬ）を加えた。得られた溶液を、２５℃で
４時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、４７０ｇ（粗）のＧ
１１－１１を赤色油状物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋（ＥＳＩ）：６４１。

Ｇ１１－６（６６ｇ、１４７．５１ｍｍｏｌ、３．５０当量）及びＮ，Ｎ－ジイソプロ
ピルエチルアミン（３７ｇ、２８６．２９ｍｍｏｌ、６．７８当量）のジクロロメタン／
アセトニトリル（２００ｍＬ／２００ｍＬ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、１－ヒド
ロキシベンゾトリアゾール（２４．５ｇ、１８１．４８ｍｍｏｌ、４．３０当量）及びＯ
－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチル（etramethyl）－ウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（５６ｇ、１４７．６６ｍｍｏｌ、３．５０当量）を室温で加えた。
得られた溶液を３０分間、室温で撹拌した。この後、ベンジルＧ１１－１１（４１．４ｇ
、４２．２０ｍｍｏｌ、１．００当量）を、室温で加えた。得られた溶液を撹拌しながら
、室温で一晩反応させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた溶液を、ジクロ
ロメタンで希釈した。得られた混合物を、飽和重炭酸ナトリウム及び飽和塩化ナトリウム
でそれぞれ洗浄した。有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮
した。粗物質をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、４１．２ｇ（５１
％）のＧ１１－１２を明黄色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ／２＋Ｈ］＋（ＥＳＩ
）：９６５。

Ｇ１１－１２（２０ｇ、１０．３７ｍｍｏｌ、１．００当量）のメタノール（２００ｍ
Ｌ）溶液に、１０％パラジウム活性炭（２ｇ）を室温で加えた。フラスコを排気し、水素
で５回フラッシュした。得られた溶液を、室温で４時間撹拌した。固形物を濾別した。得
られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、１６．５ｇ（８９％）のＧ１１－１３を
白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ／２＋Ｈ］^＋（ＥＳＩ）：８９８。

Ｇ１１－０（１２．８ｇ、２４．５７ｍｍｏｌ、１．００当量）のＮ，Ｎ－ジメチルホ
ルムアミド（５００ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９．０ｇ、６
９．６４ｍｍｏｌ、３．００当量）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ－エトラメチ
ル－ウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート（９．９ｇ、２７．０３ｍｍｏｌ、１．１
０当量）を加えた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。次いで、Ｇ１１－１３（４
４ｇ、２４．５７ｍｍｏｌ、１．００当量）を添加した。得られた溶液を、室温で１６時
間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ分取ＨＰＬＣに
より精製した。これにより、２２ｇ（４１％）のＧ１１－１４を明黄色固形物として得た
。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］^－（ＥＳＩ）：２２９５．Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨ
ｚ）：７．７９－７．８３（ｍ，６Ｈ），７．７０－７．７３（ｍ，４Ｈ），７．３３－
７．３５（ｍ，２Ｈ），７．２６－７．３０（ｍ，２Ｈ），７．１９－７．２２（ｍ，５
Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），６．８４－６．８７（ｍ，４Ｈ），５．１９－５．２０（
ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ），４．９３－４．９７（ｍ，３Ｈ），４．５８－４．５９（
ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６－４．４８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，３Ｈ），３．
９５－４．０４（ｍ，９Ｈ），３．８２－３．８９（ｍ，３Ｈ），３．６７－３．７１（
ｍ，９Ｈ），３．４５－３．６１（ｍ，１２Ｈ），３．３６－３．４１（ｍ，３Ｈ），２
．９４－３．０９（ｍ，１６Ｈ），２．２４－２．２７（ｍ，６Ｈ），２．００－２．０
８（ｍ，２９Ｈ），１．８７（ｓ，９Ｈ），１．７５（ｓ，９Ｈ），１．６３－１．６９
（ｍ，３Ｈ），１．４１－１．５１（ｍ，１９Ｈ）。

Ｇ１１－１４（２ｇ、０．８７ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（２０ｍＬ
）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、ビス（ジイソプロピルアミノ）（２－シアノエトキ
シ）ホスフィン（７８６．７ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、３．００当量）を室温で加えた。
この後、ピリジントリフルオロアセテート（３３６．３ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ、２．０
０当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減
圧下で濃縮した。これにより、２．０ｇ（粗）のＧ１１－１５を黄色油状物として得た。
その生成物を更に精製することなく、次工程で直接用いた。

Ｇ１１－１５（２ｇ、０．８０ｍｍｏｌ、１．００当量）のアセトニトリル（２０ｍＬ
）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、水（４３ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、３．００当量）及
び４，５－ジシアノイミダゾール（１１３ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ、１．２０当量）を室
温で加えた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し
た。粗物質をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。生成物画分を、ジクロロメタンで
抽出した。得られた混合物を、飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を、無水硫酸ナト
リウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。これにより、１．０２５ｇ（５３％）の
Ｇ１１－１６を白色固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］^－（ＥＳＩ）：２４１２
．１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００Ｈｚ）：８．１０－７．９０（ｍ，１Ｈ），７
．８５－７．７．８１（ｍ，６Ｈ），７．７５－７．７２（ｍ，３Ｈ），７．３５－７．
２２（ｍ，９Ｈ），７．０５－７．００（ｍ，１Ｈ），６．８９－６．８７（ｍ，４Ｈ）
，５．２１－５．２０（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ），４．９８－４．９５（ｍ，３Ｈ）
，４．５０（ｓ，１Ｈ），４．４７－４．４０（ｍ，３Ｈ），４．０４－４．０１（ｓ，
１１Ｈ），３．８８－３．８５（ｍ，３Ｈ），３．７３－３．６９（ｍ，９Ｈ），３．５
５－３．５２（ｍ，１２Ｈ），３．４１－３．３９（ｍ，３Ｈ），３．２０（ｓ，２Ｈ）
，３．０４－３．００（ｍ，１４Ｈ），２．８５－２．７５（ｍ，２Ｈ），２．４９－２
．２９（ｍ，６Ｈ），２．１０－１．９９（ｍ，２８Ｈ），１．８９－１．７７（ｍ，１
１Ｈ），１．７７－１．７０（ｍ，９Ｈ），１．７０－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．５２
－１．４５（ｍ，１８Ｈ）．ＰＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００Ｈｚ）：７．９５７，７．
９２７。

Ｇ１２－１（４．０ｇ、１．７０ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（４０ｍ
Ｌ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、ビス（ジイソプロピルアミノ）（２－シアノエト
キシ）ホスフィン（９２２．６ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ、１．８０当量）を室温で加えた
。これに、ピリジントリフルオロアセテート（５２５ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ、１．６０
当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。得られた混合物を減圧
下で濃縮した。これにより、３．０ｇ（粗）のＧ１２－２を黄色油状物として得た。

Ｇ１２－２（３．０ｇ、１．１８ｍｍｏｌ、１．００当量）のアセトニトリル（３０ｍ
Ｌ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、水（１６６ｍｇ、９．２２ｍｍｏｌ、７．８５当
量）を室温で加えた。これに、４，５－ジシアノイミダゾール（６３．４ｇ、０．５４ｍ
ｍｏｌ、０．４６当量）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で１時間撹拌した。得ら
れた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（２．５ｇ）をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより
精製した。これにより、２．０５４２ｇ（７１％）のＧ１２－３を白色固形物として得た
。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－（ＥＳＩ）：２４６８．１Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４
００Ｈｚ）：７．９１－７．８０（ｍ，７Ｈ），７．７４－７．７１（ｍ，３Ｈ），７．
３８－７．３１（ｍ，４Ｈ），７．２９－７．２３（ｍ，５Ｈ），６．９７（ｓ，１Ｈ）
，６．８７－６．８１（ｍ，４Ｈ），５．２１（ｓ，３Ｈ），４．９８－４．９４（ｍ，
３Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），４．４９－４．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ），４
．２５－４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｓ，９Ｈ），３．８８－３．８５（ｍ，３Ｈ
），３．７３－３．６８（ｍ，９Ｈ），３．５５－３．５２（ｍ，１１Ｈ），３．５２－
３．４１（ｍ，３Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），３．０４－２．９２（ｍ，１３Ｈ），２
．９０－２．８９（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．１０（ｍ，６Ｈ），２．０９－１．９９
（ｍ，２８Ｈ），１．８９－１．８０（ｍ，９Ｈ），１．７７－１．７１（ｍ，９Ｈ），
１．５２－１．３７（ｍ，２３Ｈ），１．１９（ｓ，９Ｈ）．Ｐ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ
_６，４００Ｈｚ）：８．４５６。

Ｇ１３－１（４．０ｇ、１．７０ｍｍｏｌ、１．００当量）のジクロロメタン（４０ｍ
Ｌ）溶液に、窒素の不活性雰囲気下で、ビス（ジイソプロピルアミノ）（２－シアノエト
キシ）ホスフィン（６９０ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ、１．８０当量）を室温で加えた。こ
れに、ピリジントリフルオロアセテート（３９０ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ、１．６０当量
）を室温で加えた。得られた溶液を、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で
濃縮した。これにより、２．５ｇ（粗）のＧ１３－２を黄色油状物として得た。

Ｇ１３－２（２．３ｇ、０．９０ｍｍｏｌ、１．００当量）のアセトニトリル（２２ｍ
Ｌ）溶液及び水（５０ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ、３．００当量）に、４，５－ジシアノイ
ミダゾール（０．１２ｇ、１０１．６９ｍｍｏｌ、１．２０当量）を室温で加えた。得ら
れた溶液を、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（２
．３ｇ）をフラッシュ分取ＨＰＬＣにより精製した。これにより、２．０７６ｇ（９４％
）のＧ１３－３をオフホワイト固形物として得た。ＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋（ＥＳＩ
）：２５０６．１Ｈ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，３００Ｈｚ）：８．０５－７．９０（ｍ
，１Ｈ），７．８０－７．７１（ｍ，９Ｈ），７．３８－７．２２（ｍ，９Ｈ），６．９
５（ｓ，１Ｈ），６．８９－６．８６（ｍ，４Ｈ），５．２１（ｓ，３Ｈ），４．９９－
４．９４（ｍ，３Ｈ），４．６５－４．４０（ｍ，４Ｈ），４．０２（ｓ，１１Ｈ），３
．８８－３．８５（ｍ，３Ｈ），３．７３－３．６８（ｍ，９Ｈ），３．５６－３．５１
（ｍ，１２Ｈ），３．４２－３．３８（ｍ，３Ｈ），３．３２（ｓ，２Ｈ），３．０４（
ｓ，１４Ｈ），２．８４－２．８２（ｍ，２Ｈ），２．２９－２．２２（ｍ，６Ｈ），２
．１０－１．９９（ｍ，２８Ｈ），１．８９（ｓ，１０Ｈ），１．７７（ｓ，１０Ｈ），
１．５２－１．４５（ｍ，２２Ｈ），１．２２（ｓ，９Ｈ）．Ｐ－ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ
６，３００Ｈｚ）：７．８６７。

ＧａｌＮＡｃコンジュゲーション
次の修飾：２’－Ｆ－ＮＰＳ－ＰＳ－２’－Ｆ－ＮＰＳ；２’－Ｆ－ＮＰ－ＰＳ－２’
－Ｆ－ＮＰ；２’－ＯＭｅ－ＮＰ－ＰＳ－２’－ＯＭｅ－ＮＰ；２’－ＯＭｅ－ＮＰＳ－
ＤＮＡ－ＰＳ－２’－ＯＭｅ－ＮＰＳ、２’－ＯＥｔ－ＮＰＳ－ＤＮＡ－ＰＳ－２’－Ｏ
Ｅｔ－ＮＰＳ、及び２’－ＭＯＥ－ＮＰＳ－ＤＮＡ－ＰＳ－２’－ＭＯＥ－ＮＰＳを有す
る５’ＧａｌＮＡｃコンジュゲートオリゴマーの作製には、１０～２００μＭのスケール
で、５’から３’方向に、無水ＣＨ_３ＣＮで０．１Ｍの濃度に希釈した５’－ホスホロア
ミダイトモノマーを、５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール活性剤の存在下で用い
て（カップリング時間２．０～４．０分間）、ＧａｌＮａｃ２－ＣＰＧの合成を行った
。変更したプロトコールでのカップリングサイクルに続いて、標準的なキャッピング、酸
化、及び脱保護によって修飾オリゴヌクレオチドが得られた。段階的なカップリング効率
は、９８％超であった。ＤＤＴＴ（ジメチルアミノ－メチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，
２，４－ジチアゾリン－３－チオンを、オリゴリボヌクレオチドホスホロチオエートの合
成のためのイオウ移動剤として使用した。ルチジン：アセトニトリル（１：１）中０．２
Ｍフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）を大規模合成（ＡｋｔａＯＰ－１００）
において硫化剤として使用した。オリゴヌクレオチド担持固体担体を、振盪器内でアンモ
ニア／メチルアミン（１：１）溶液を用いて室温で３時間加熱して、担体から切断し、塩
基不安定な保護基を脱保護した。

３’－Ｃ６ＮＨ２－ＮＰＳ－ＰＳ－ＮＰＳ－（前駆体）合成
次の修飾：２’－Ｆ－ＮＰＳ－ＰＳ－２’－Ｆ－ＮＰＳ；２’－Ｆ－ＮＰ－ＰＳ－２’
－Ｆ－ＮＰ；２’－ＯＭｅ－ＮＰ－ＰＳ－２’－ＯＭｅ－ＮＰ；２’－ＯＭｅ－ＮＰＳ－
ＤＮＡ－ＰＳ－２’－ＯＭｅ－ＮＰＳ、２’－ＯＥｔ－ＮＰＳ－ＤＮＡ－ＰＳ－２’－Ｏ
Ｅｔ－ＮＰＳ、及び２’－ＭＯＥ－ＮＰＳ－ＤＮＡ－ＰＳ－２’－ＭＯＥ－ＮＰＳを有す
る３’ＧａｌＮＡｃコンジュゲートオリゴマーの作製には、汎用支持体（ローディング６
５μｍｏｌ／ｇ）を使用して、１０μｍｏｌスケールでＡＳＯを合成した。合成手順は、
上記と同じである。３’末端においてＣ６－ＮＨ_２リンカーを導入するために、０．１Ｍ
アセトニトリル中６－（４－モノメトキシトリチルアミノ）ヘキシル－（２－シアノエチ
ル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）－ホスホロアミダイトを、カップリング時間１０分間
で使用した。オリゴヌクレオチド担持固体支持体を、振盪器内でアンモニア／メチルアミ
ン（１：１）水溶液を用いて室温で３時間加熱して、支持体から切断し、塩基不安定な保
護基を脱保護した。ＩＥＸ精製及び脱塩後、Ｃ６－ＮＨ２修飾ＡＳＯを用いて、合成後コ
ンジュゲーションを行うことができる。

３’－ＧａｌＮＡｃＮＰＳ－ＰＳ－ＮＰＳ－ＡＳＯ合成（合成後コンジュゲーション
）
３’－Ｃ６－ＮＨ_２修飾ＡＳＯを、０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ８．５（０
．０１５ｍＭ）に溶解し、ＤＭＳＯに溶解した５～７モル当量のＧａｌＮＡｃ－６エステ
ルを加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した。サンプルを分析して、任意の未反応の
アミノ修飾ＡＳＯが存在するかを確認した。これに、アンモニア水溶液（２８重量％）を
添加し（５×反応体積）、室温で２～３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残
渣を水に溶解させ、強力な陰イオン交換カラムでＨＰＬＣにより精製した。

粗オリゴマーの定量又は原分析
サンプルを脱イオン水（１．０ｍＬ）に溶解させ、以下のとおり定量した：最初に水の
み（１．０ｍＬ）を用いてブランクを実施し、２０μＬのサンプル及び９８０μＬの水を
微量遠心管内で十分に混合し、キュベットに移し、２６０ｎｍの吸光度読み出し値を得た
。粗物質を乾燥させ、－２０℃で保管する。

粗ＨＰＬＣ／ＬＣ－ＭＳ分析
粗試料の０．１ＯＤを、粗ＭＳ分析に供した。粗ＬＣ－ＭＳデータを確認した後、精製
工程を行った。

ＨＰＬＣ精製
ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを含む及び含まないホスホロアミダート（ＮＰ）及びチオ
ホスホロアミダート（ＮＰＳ）修飾オリゴヌクレオチドを、陰イオン交換ＨＰＬＣによっ
て精製した。緩衝液は、１０％ＣＨ_３ＣＮ中２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８．５（緩
衝液Ａ）及び１０％ＣＨ_３ＣＮ、１．８ＭＮａＢｒ中２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ
８．５（緩衝液Ｂ）とした。完全長オリゴヌクレオチドを含有する画分をプールし、脱塩
し、凍結乾燥した。

精製オリゴマーの脱塩
次いで、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５Ｍ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）を使用して、精製した乾燥オリゴマーを脱塩した。カートリッジを、１０ｍＬの脱イ
オン水で３回コンディショニングした。最後に、ＲＮＡｓｅを含まない２．５ｍＬの水に
完全に溶解した精製オリゴマーをカートリッジにアプライし、極めて低速で一滴ずつ溶出
した。３．５ｍＬの脱イオン水を用いて、塩を含まないオリゴマーを直接スクリューキャ
ップバイアルに溶出した。

結合したオリゴヌクレオチドの安定性試験
実施形態では、開示されるオリゴヌクレオチドは、同じ配列の未修飾オリゴヌクレオチ
ドと比較して、標的核酸配列に対する親和性の上昇を呈する。例えば、いくつかの配列に
おいて、開示されるオリゴヌクレオチドは、同じ配列の未修飾オリゴヌクレオチドよりも
高い親和性で標的核酸配列に相補的でありつまりハイブリダイズする核酸塩基配列を有す
る。実施形態では、相補的標的核酸配列と複合体化した本開示のオリゴヌクレオチドは、
＞３７℃の融解温度Ｔ_ｍを有する。複合体は、生理的条件又はリン酸緩衝生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）中などのほぼ生理的条件下で形成され得る。実施形態では、複合体のＴｍは＞５０
℃である。実施形態では、複合体のＴｍは５０～１００℃である。実施形態では、生理的
条件又はほぼ生理的条件下で標的核酸配列と二本鎖形成した、本開示のオリゴヌクレオチ
ドのＴｍは、＞５０℃である。

特定の実施形態では、標的核酸配列は、ＨＢＶゲノムなどの既知のウイルスＤＮＡ又は
ＲＮＡ配列から選択してよい。

実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、ＨＢＶゲノム若しくはそのＲＮＡ等価
物の以下の６つの配列のうちの少なくとも１つに対して親和性を示す、及び／又はＨＢＶ
ゲノム若しくはそのＲＮＡ等価物のうちの少なくとも１つと複合体化して安定性を示す。
実施形態では、相補的ＨＢＶゲノムと複合体化したオリゴヌクレオチドは、＞３７℃の融
解温度（Ｔｍ）を有する。ＨＢＶゲノムは、ＤＲ－１及び／又はＤＲ－２のＲＮＡ配列な
どのＲＮＡ配列であってもよい。複合体は、生理的条件又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢ
Ｓ）中などのほぼ生理的条件下で形成され得る。実施形態では、複合体のＴｍは＞５０℃
である。実施形態では、複合体のＴｍは５０～１００℃である。実施形態では、生理学的
条件又はほぼ生理学的条件下でＨＢＶＲＮＡと二本鎖形成している、本開示のオリゴヌ
クレオチドのＴｍは、＞５０℃である。

オリゴヌクレオチドのｉｎｖｉｔｒｏ試験
２種類のＨＢＶ細胞株、ＨｅｐＧ２．２．１５（２２１５）及びＨｅｐＧ２．１１７（
２１１７）を使用して、オリゴヌクレオチドのｉｎｖｉｔｒｏ効力を評価した。Ｈｅｐ
Ｇ２．２．１５細胞を使用して、組織培養上清（ｓｕｐ）中のＨＢｓＡｇの低下、並びに
細胞毒性を測定した。上清及び細胞内画分におけるＨＢＶＤＮＡの低下は、ＨｅｐＧ２
．１１７細胞において測定した。

ＨｅｐＧ２．２．１５細胞株は、４種類の組み込まれたＨＢＶゲノムを有する安定な細
胞株である。１０％ＦＣＳ、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプト
マイシン、及び２％グルタミンを加えたダルベッコ改変イーグル培地中で、３７℃、５％
ＣＯ_２の雰囲気下で細胞を増殖させた。投与前日、細胞２．５×１０^４個／ウェルを、コ
ラーゲンをコーティングした９６ウェルプレートに撒き、一晩インキュベートした。投与
日に、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＲＮＡｉＭａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗ
ａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を製造業者のプロトコールに従って用い、段階的に希釈したオリゴ
マーを細胞にトランスフェクトした。各薬物濃度について２回実験を行い、各オリゴのＥ
Ｃ５０測定及びＣＣ５０測定の両方を設定した。トランスフェクションの３日後、上清（
ｓｕｐ）を回収し、ＥＣ５０を計算するため、ＨＢｓＡｇＥＬＩＳＡ（ＡｕｔｏＢｉｏ
，Ｃｈｉｎａ）で使用した。ＣＣ５０測定には、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標
）（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を製造業者の指示に従ってアッセイで使用
した。

ＨｅｐＧ２．１１７は、ＴｅｔＯＦＦの制御下（テトラサイクリン又はそのホモログで
あるドキシサイクリン非存在下での転写の誘導）で、組み込まれた１．０５コピーのＨＢ
Ｖゲノム（ａｙｗサブタイプ）を保有している安定な肝癌細胞株である。１０％ＦＣＳ、
１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２％グルタミン、
２５０μｇ／ｍＬＧ４１８、及び２μｇ／ｍＬテトラサイクリンを添加したＤＭＥＭ／
Ｆ１２培地中で、３７℃、５％ＣＯ_２の雰囲気下で細胞を増殖させた。投与前日、テトラ
サイクリンを含む細胞培地を除去し、細胞を洗浄して残留するテトラサイクリンを除き、
処理培地（Ｔｅｔシステムが認める２％のＦＢＳ１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、１００
μｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び２％グルタミンを含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２）と共
に、２．５×１０^４個の細胞／ウェルをコラーゲンをコーティングした９６ウェルプレー
トに播いた。次に、細胞を一晩インキュベートした。実験日に、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉ
ｎｅＲＮＡｉＭａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を製造業
者のプロトコールに従って用い、段階的に希釈したオリゴマーを細胞にトランスフェクト
した。各薬物濃度について２回実験を行い、ＥＣ５０測定及びＣＣ５０測定の両方につい
て各オリゴを設定した。トランスフェクションの４日後、ＨＢＶＤＮＡｑＰＣＲに直
接使用するため、上清を回収した。細胞由来のＨＢＶＤＮＡを、ＭａｇＭＡＸ（商標）
ＴｏｔａｌＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＩｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）で単離した後、テンプレートとしてｑＰＣＲに適用した。ＨＢＶサブタイ
プであるａｙｗのＤＮＡ（受入番号Ｖ０１４６０）配列を使用して、フォワードプライマ
ー（５’－ＴＴＧＣＣＴＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＴＴＣＣＴＴＣＴ－３’）
、リバースプライマー（５’－ＴＧＣＣＴＧＡＧＴＧＣＴＧＴＡＴＧＧＴＧ
ＡＧ－３’）、及び５’をＦＡＭ（６－カルボキシフルオレスセイン）で、かつ３’を
ＴＡＭＲＡ（６－カルボキシテトラメチルローダミン）でラベルした蛍光を発するＴａｑ
Ｍａｎ（登録商標）プローブ（５’－ＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＴＴＡＧＡＧＴＣ
ＴＣＣＴＧＡ－３’）を設計した（ＰｒｉｍｅｒＥｘｐｒｅｓｓ，Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）。これらのプライマー及びプローブを使用して、ＡｍｐｌｉＴａｑＧｏ
ｌｄＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ－ＥｌｍｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｗ
ａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いる定量的リアルタイムＰＣＲを行った。この反応の条件は次
のとおりとした。１サイクル、９５℃１０分間で加熱開始、続いて変性５０サイクル（９
５℃１５秒間）及びアニーリング／重合（５９℃１分間）。

初代ヒト肝細胞における感染性ＨＢＶ系
凍結保存した初代ヒト肝細胞（ＰＨＨ）を解凍し、２００，０００個／ウェルで２４ウ
ェルプレートに播種した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩回復させた。細胞を、ｍｏ
ｉ５０～１００のＨＢＶで一晩（３７℃／５％ＣＯ_２）感染させた。一晩感染させた後、
ウイルス接種材料を除去し、細胞を予熱した洗浄培地で３回洗浄する。次いで、新鮮なＰ
ＨＨ培養培地を再補充する。培地を、４５０μＬの新鮮培地と交換する。５０μＬのトラ
ンスフェクト混合物を加える。オリゴマーをＯｐｔｉ－ＭＥＭＩ（ＬｉｆｅＴｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃：３１９８５－０７０）で２０×最終濃度まで希釈し、Ｌｉｐ
ｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ＃：１３７７
８－１５０）を含有している等量のＯｐｔｉ－ＭＥＭＩと混合し、３回ピペッティング
して、室温で１０～２０分間インキュベートする。５０μＬのオリゴ：ＲＮＡｉＭＡＸ混
合物をウェルに加え、手を使って数回プレートをタップする。プレートをインキュベータ
ーに戻す。アッセイ日に、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇＥＬＩＳＡアッセイについては上
清を、細胞生存性アッセイについては細胞を回収する。ＨＢｓＡｇＥＬＩＳＡは、上記
の項に記載した。ＨＢｅＡｇには、ＡｕｔｏｂｉｏＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓの方法（Ｃ
Ｌ０３１２－２）を使用した。

オリゴヌクレオチドのｉｎｖｉｖｏ試験
ＡＡＶ／ＨＢＶは、複製可能なＨＢＶゲノムを保有する組換えＡＡＶである。遺伝子型
８のＡＡＶの肝臓指向性が高いという特徴を活かして、マウス肝細胞にＨＢＶゲノムを効
率的に送達することができる。免疫適格性のあるマウスをＡＡＶ／ＨＢＶで感染させると
、長期間のＨＢＶウイルス血症が生じ、患者における慢性ＨＢＶ感染症を再現する場合が
ある。ＡＡＶ／ＨＢＶモデルを使用して、様々な種類の抗ＨＢＶ薬のｉｎｖｉｖｏ活性
を評価することができる。マウスを、試験の－２８日目にＡＡＶ－ＨＢＶに感染させた。
０、２及び４日目に３回、試験物質又は陰性対照（ＰＢＳ）を、指定した用量で皮下投与
（別段の指定がない限り）した。又は、０日目に指定の用量で単回投与として注入しても
よい。ＨＢＶＤＮＡ（ＨＢＶ抗原ではない）に対する陽性対照であるエンテカビル（Ｅ
ＴＶ）を、毎日経口投与した。血清ＨＢＶＳ抗原（ＨＢｓＡｇ）及びＥ抗原（ＨＢｅＡ
ｇ）をＥＬＩＳＡによって、ＨＢＶＤＮＡをリアルタイムＰＣＲによって評価した。Ｅ
ＬＩＳＡ法及びｑＰＣＲ法は、上記のｉｎｖｉｔｒｏアッセイの項に記載されている。

以下の記載は、表１～２２のデータがどのように得られたかを説明するものである。ｉ
ｎｖｉｔｒｏでのＨＢｓＡｇ細胞株ＥＣ５０及びＣＣ５０データの全てについて、Ｈｅ
ｐＧ２．２．１５での方法を使用し、したがって、データが示されている列又は行には「
２２１５」と示した。ｉｎｖｉｔｒｏでのＨＢＶＤＮＡ細胞株ＥＣ５０及びＣＣ５０
データの全てについて、ＨｅｐＧ２．１１７での方法を使用し、したがって、データが示
されている列又は行には「２１１７」と示した。ＨＢＶ／ＰＨＨ感染系で試験したｉｎ
ｖｉｔｒｏでのＨＢｓＡｇ、並びにＨＢｅＡｇのＥＣ５０データの全てについて、ＰＨＨ
法を使用し、したがって、データが示されている列又は行には「ＰＨＨ」と示した。ｉｎ
ｖｉｖｏでのＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルの結果については、上記のｉｎｖｉｖｏの
項の方法を適用した。ＨＢｓＡｇ（又はＨＢｅＡｇ）の最大減少度は、ｎａｄｉｒ（単位
Ｌｏｇ減少度）として記載され、データが示されている列又は行にはｎａｄｉｒと示した
。２種類のＡＳＯは、多くの場合、それらのｎａｄｉｒについて比較した。ｎａｄｉｒ以
外の値が比較された場合、本文中に示される。

治療方法
ＨＢＶ感染症に罹患している成人に、本開示の治療に有効な化合物、例えば、表１～２
２から選択される化合物を静脈内投与する。ＨＢＶの１つ以上の症状が寛解するまで、又
は例えば、血清ＨＢＶＳ抗原（ＨＢｓＡｇ）及び／若しくはＥ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレ
ベルが低下するまで、治療を継続する。

ＨＢＶ感染症に罹患している成人に、本開示の治療に有効な化合物、例えば、表１～２
２から選択される化合物を皮下投与する。ＨＢＶの１つ以上の症状が寛解するまで、又は
例えば、血清ＨＢＶＳ抗原（ＨＢｓＡｇ）及び／若しくはＥ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレベ
ルが低下するまで、治療を継続する。

^＊配列２６０及び２６１も試験し、同様の結果を得た。

^＊５’－ＧａｌＮａｃ２－ｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＣｎｐｓｍｏｅＡｎｐｓｍｏｅＧｎｐ
ｓｍｏｅＡｎｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＡｐｓＧｐｓ（５ｍ）ＣｐｓＧｐｓＡ
ｐｓｍｏｅＡｎｐｓｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＵｎｐｓｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＣｎ－３’
及び５’－ＧａｌＮａｃ１－ｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＣｎｐｓｍｏｅＡｎｐｓｍｏｅＧｎ
ｐｓｍｏｅＡｎｐｓＧｐｓＧｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＡｐｓＧｐｓＣｐｓＧｐｓＡｐｓｍ
ｏｅＡｎｐｓｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＵｎｐｓｍｏｅＧｎｐｓｍｏｅＣｎ－３’についても
試験し、同様の結果が得られた。

^＊５’－ＧａｌＮＡｃ２－ｍＧｎｐｓｍＣｎｐｓｍＡｎｐｓｍＧｎｐｓｍＡｎｐｓＧｐ
ｓＧｐｓＴｐｓＧｐｓＡｐｓＡｐｓＧｐｓ（５ｍ）ＣｐｓＧｐｓＡｐｓｍＡｎｐｓｍＧｎ
ｐｓｍＵｎｐｓｍＧｎｐｓｍＣｎ－３’についても試験し、同様の結果が得られた。

上記から分かるように、ＭＯＥＮＰＳオリゴマーは、ｉｎｖｉｖｏでＭＯＥＰＳ
よりも活性が高く、ＯＭｅＮＰＳはＭＯＥＰＳオリゴマーと同様の活性であった。

１つ目がＯＥｔＮＰＳ置換を含み、２つ目がＭＯＥＮＰＳを含む２種類のオリゴヌ
クレオチドを、ｉｎｖｉｔｒｏ及びｉｎｖｉｖｏで試験した。以下の表４に、試験の
結果を要約する。

上記から分かるように、ＭＯＥＮＰＳオリゴマーは、ＯＥｔＮＰＳオリゴマーと同
様の活性を有していた。

１つ目はＭＯＥＰＳ置換を含み、２つ目はＭＯＥＮＰＳ置換を有し、３つ目はＯＭ
ＥＰＳ置換を有し、４つ目はＯＭＥＮＰＳを有する４種類のオリゴヌクレオチドを、
ｉｎｖｉｔｒｏで試験した。以下の表５に、試験の結果を要約する。

１つ目は５’ＧａｌＮＡｃ－２’－ＭＯＥＮＰＳ置換を含有し、２つ目は５’－Ｇａ
ｌＮＡｃ－６：ＭＯＥＰＳ置換を有する２種類のオリゴヌクレオチドを、ｉｎｖｉｖ
ｏで試験した。以下の表６に、試験の結果を要約する。

１つ目は３’－ＧａｌＮＡｃ－２’－ＭＯＥＮＰＳ置換を含有し、２つ目は３’－Ｇ
ａｌＮＡｃ－２’－ＭＯＥＰＳ置換を有する２種類のオリゴヌクレオチドを、ｉｎｖ
ｉｖｏで試験した。以下の表７に、試験の結果を要約する。

１つ目はＯＭＥＮＰＳ置換を含有し、２つ目はＯＭＥＰＳ置換を有する２種類のオ
リゴヌクレオチドを、ｉｎｖｉｖｏで試験した。

ＨＢＶマウスモデルにおいて、以下の配列を試験した。１×１０ｍｇ／ｋｇの用量で、
３’ＧａｌＮａｃＭＯＥＮＰＳは、５’ＧａｌＮａｃＭＯＥＰＳよりも０．８ｌ
ｏｇ（６倍）も良好な有効性を維持し、優位性は２１日間の試験のほとんどにわたって維
持された。５’ＧａｌＮａｃＭＯＥＮＰＳは、５’ＧａｌＮａｃＭＯＥＰＳより
も０．４ｌｏｇ（２．５倍）もの良好な有効性が維持され、優位性は２１日間の試験のほ
とんどにわたって維持された。３×３．３ｍｇ／ｋｇの用量で、３’ＧａｌＮａｃＭＯ
ＥＮＰＳ及び５’ＧａｌＮａｃＭＯＥＮＰＳは同様に作用し、両者とも５’Ｇａｌ
ＮａｃＭＯＥＰＳよりも０．６ｌｏｇ（４倍）も良好な有効性を維持し、優位性は２
１日間の試験のほとんどにわたって維持された。

ＨＢＶマウスモデルにおいて、以下の配列を試験した。

ＨＢＶマウスモデルにおいて、以下の配列を試験した。右列の値は、３×１０ｍｇ／ｋ
ｇで０、２、４日目に投与された、ＨＢｓＡｇの最大ＬＯＧ減少を示す。

ＦＮＰＳ化学物質を含有する３つのオリゴヌクレオチドをインビボで試験した。第１
のオリゴヌクレオチドは、５’末端にトリＧａｌＮａｃ部分を有し、第２のオリゴヌクレ
オチドは、２つのトリＧａｌＮａｃ部分を有し、一方は５’末端に、他方は３’末端に存
在する。第３のオリゴヌクレオチドは、５’末端にトリＧａｌＮａｃ部分を有し、３’末
端にモノＧａｌＮａｃを有する。以下の表２１は、試験の結果を要約する。

３×５ｍｋｐでは、５’末端及び３’末端の両方におけるＧａｌＮａｃコンジュゲーシ
ョンは、特定の時点において、５’末端のみにおけるコンジュゲーションよりも明らかに
優れており、インビボ活性が０．６ｌｏｇ良好である。

１つが５’末端にトリＧａｌＮａｃ部分を含有し、２つ目が５’末端にトリＧａｌＮａ
ｃ部分及び３’末端にトコフェロール部分を含有する、２つのオリゴヌクレオチドを３×
１０ｍｐｋの用量でインビボにおいて試験した。

いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドはまた、表１～４３に列挙され
る配列の修飾とは無関係に、表１～４３に列挙される核酸塩基配列から選択されるオリゴ
ヌクレオチドも含む。本開示のオリゴヌクレオチドはまた、表１～４３に列挙される配列
の修飾とは無関係に、表１～４３に列挙される配列から選択される核酸塩基配列と少なく
とも９０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドも含む。いくつかの実施形態では、
表１～４３に列挙される配列の修飾とは無関係に、表１～４３に列挙される配列とは１、
２、３、４、５個の核酸塩基が異なる。

いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドはまた、表１～４３に列挙され
る配列の核酸塩基とは無関係に、表１～４３に列挙されるヌクレオチド配列から選択され
るオリゴヌクレオチドも含む。本開示のオリゴヌクレオチドはまた、表１～４３に列挙さ
れる配列の核酸塩基とは無関係に、表１～４３に列挙される配列から選択される核酸塩基
配列と少なくとも９０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドも含む。いくつかの実
施形態では、表１～４３に列挙される配列の修飾とは無関係に、表１～４３に列挙される
配列とは１、２、３、４、５個の核酸塩基が異なる。

Claims

少なくとも１本のオリゴヌクレオチド鎖を含むコンストラクトであって、前記鎖に結合
している少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を有し、各ＧａｌＮＡｃ部分が、独立して、
ＧａｌＮＡｃ１～ＧａｌＮＡｃ１３から選択されるコンストラクト。
前記ＧａｌＮＡｃ部分が、ＧａｌＮＡｃ－２である、請求項１に記載のコンストラクト
。
前記ＧａｌＮＡｃ部分が、ＧａｌＮＡｃ－６である、請求項１に記載のコンストラクト
。
前記少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分が、リンカーを介して前記オリゴヌクレオチド
鎖のうちの少なくとも１本にコンジュゲートしている、請求項１～３のいずれかに記載の
コンストラクト。
前記リンカーが、Ｃ６－ＮＨ_２リンカーである、請求項４に記載のコンストラクト。
オリゴヌクレオチド配列が、ＨＢＶＲＮＡ転写物に対して親和性を有するか又は実質
的に相補的である、請求項１～５のいずれかに記載のコンストラクト。
一本鎖オリゴヌクレオチドを含む、請求項１～７のいずれかに記載のコンストラクト。
二本鎖オリゴヌクレオチドを含む、請求項１～７のいずれかに記載のコンストラクト。
前記ＧａｌＮＡｃ部分が、前記オリゴヌクレオチド鎖の３’末端及び５’末端に化学的
に結合している、請求項１～９のいずれかに記載のコンストラクト。
式（Ｉ）又は（ＩＩ）：

［式中、Ｒ_１は、

であり、
Ｒ_８は、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキル部分、１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０アルキ
ルオキシド部分、又は

であり、
Ｒ_２は、Ｃ_３～Ｃ_１０アルキル部分又は１～５個の酸素原子を有するＣ_３～Ｃ_１０アル
キルオキシド部分であり、
Ｒ_３は、Ｈ、ＰＧ’、

であり、
Ｒ_４は、Ｈであり、
Ｒ_５は

である
（式中、Ｒ_６は、保護基、あるいは任意のリンカー及び／又はホスホルアミダート若し
くはホスホジエステル結合を介したオリゴヌクレオチドへの結合であり、
Ｒ_７は、Ｈ、固体支持体リンカー、又は－ＰＨ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＮである）、
あるいは、Ｒ_４及びＲ_５は、所望によりＣＨ_２ＯＰＧによって置換された５又は６員環
を一緒に形成し、
ＰＧは、アルコール保護基であり、
ＰＧ’は、保護基であり、
Ｌは、リンカー部分であり、
ａは、１～３の整数であり、
ｂは、１～４の整数であり、
ｃは、３～７の整数であり、
ｄは、０～４の整数である］
の構造を有する化合物。
Ｒ_２が、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、又はＣ１０アルキルである、請
求項１１に記載の化合物。
Ｒ_８が、２～５個のエチレンオキシド部分を含むＣ３～Ｃ１０アルキルオキシド部分で
ある、請求項１１に記載の化合物。
前記リンカーが、Ｃ６－ＮＨ_２リンカーである、請求項１１に記載の化合物。
ａが、１である、請求項１１に記載の化合物。
ａが、３である、請求項１１に記載の化合物。
ｂが、２又は３である、請求項１１に記載の化合物。
ＰＧが、ＤＭＴｒである、請求項１１に記載の化合物。
式（Ｉ）の化合物である、請求項１１に記載の化合物。
式（ＩＩ）の化合物である、請求項１１に記載の化合物。
Ｒ_８が、

である、請求項１１に記載の化合物。
ＰＧが、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＭＤＳ）、ｔｅｒｔ－ブチル
ジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリイソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ）、モノ
メトキシトリチル（ＭＭＴｒ）、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）、又はトリ
トリルから選択される、請求項１１に記載の化合物。
Ｒ_６が、リンカー及び／又はホスホルアミダート若しくはホスホジエステル結合を介し
たオリゴヌクレオチドである、請求項１１に記載の化合物。
Ｒ_６が、ホスホルアミダート結合を含む、請求項２２に記載の化合物。
Ｒ_６が、ホスホジエステル結合を含む、請求項２２に記載の化合物。
５’末端及び３’末端の両方に、ＧａｌＮＡｃ１及び１３から選択される２つのＧａｌ
ＮＡｃ部分を含有するオリゴヌクレオチド。
末端のうちの一方におけるＧａｌＮＡｃ１～１３から選択されるＧａｌＮＡｃ部分と、
任意のリンカーを介して他方の末端に連結されたトコフェロール、パルミトイル、又はコ
レステロールなどの親油性部分と、を含有するオリゴヌクレオチド。
ジヌクレオチドリンカーを介してファーマコフォアアンチセンスオリゴヌクレオチドに
連結された、１～１３から選択されるＧａｌＮａｃ部分をいずれかに含有するオリゴヌク
レオチド。
エチレングリコール繰り返し部分を介してファーマコフォアアンチセンスオリゴヌクレ
オチドに連結された、１～１３から選択されるＧａｌＮａｃ部分をいずれかに含有するオ
リゴヌクレオチド。
式（Ｉ）の構造

［式中、Ｒ_１は、

であり、
Ｒ_８は、

であり（式中、ｃは４であり、ｄは１である）、
ａは、３であり、
Ｒ_２は、Ｃ_３アルキルであり、
Ｒ_３は、

であり（式中、Ｒ_４は、Ｈである）、
Ｒ_５は、
であり（式中、Ｒ_６は、保護基であり、前記保護基は４，４’－ジメトキシトリチルで
あり、
Ｒ_７は、固体支持体リンカーであり、前記リンカーは、スクシネートである）、
ｂは、１である］
を有する、請求項１０に記載の化合物。
式（Ｉ）の構造

［式中、Ｒ_１は、

であり、
Ｒ_８は、

であり（式中、ｃは４であり、ｄは１である）、
ａは、３であり、
Ｒ_２は、Ｃ_８アルキルであり、
Ｒ_３は、ＰＧ’であり、ＰＧ’は、

である（式中、ｆは、５である）］
を有する、請求項１０に記載の化合物。