JP2023093779A - 新規抗がん剤 - Google Patents

Abstract

【課題】Ｂ細胞を標的とする新規の抗がん剤およびがんの免疫療法を開発すること。【解決手段】本発明の抗がん剤は、ＧＡＢＡレセプター、特にＧＡＢＡＡレセプターを介するシグナル伝達を阻害する物質、例えば、フルマゼニルなどを含む。本発明のがんの治療方法は、前記ＧＡＢＡレセプター、特にＧＡＢＡＡレセプターを介するシグナル伝達を阻害する物質、例えば、フルマゼニルなどを投与することを含む。【選択図】なし

Description

本発明は新規の抗がん剤に関し、具体的には、Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞作用を阻害または低減する、新規の抗がん剤に関する。

Ｂ細胞はＴ細胞のうちヘルパーＴ細胞に刺激されて形質細胞に分化し大量の抗体を産生する。逆にＢ細胞がＴ細胞の機能を調節する現象は制御性Ｂ細胞によるＩＬ－１０等の抗炎症性サイトカイン分泌が知られている（非特許文献１）。前立腺がんのマウスモデルで、ＩｇＡ産生形質細胞が、免疫原性がある腫瘍細胞の細胞死による細胞傷害性リンパ球の活性化を阻害し、オキサリプラチン抵抗性の発生を促進することが報告された（非特許文献２）。また、ＰＤ－Ｌ１を発現するＩｇＡ陽性Ｂ細胞は、非アルコール性脂肪肝を発症している肝臓に蓄積して、肝臓で肝細胞がんの発症を防止している細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞を抑制することにより、肝細胞がんの進行を促進することも報告されている（非特許文献３）。

Ｓａｒｖａｒｉａ， Ａ． ら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｄｏｉ： １０．１０３８／ｃｍｉ．２０１７．３５． Ｓｈａｌａｐｏｕｒ， Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ， ５２１： ９４ （２０１５） Ｓｈａｌａｐｏｕｒ， Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ， ５５１： ３４０ （２０１７）

本発明の課題は、ＩｇＡ陽性Ｂ細胞のような制御性Ｂ細胞の機能を理解することでＢ細胞を標的とする新規の抗がん剤およびがんの免疫療法を開発することである。発明者らは、免疫細胞のメタボローム解析結果を詳細に検討し、ＩｇＡ陽性Ｂ細胞をはじめとする活性化Ｂ細胞に特徴的な低分子代謝物を突き止めることができた。そこで、当該低分子代謝物の代謝調節やシグナル伝達をモジュレーションすることにより、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞の作用を阻害または低減する、新規の抗がん剤およびがん治療方法を開発することも本発明の課題である。

本発明は、Ｂ細胞による細胞傷害性Ｔ細胞抑制作用を阻害または低減する、抗がん剤を提供する。

本発明の抗がん剤において、前記Ｂ細胞は抗原刺激により活性化されたＢ細胞とすることもできる。

本発明の抗がん剤は、Ｔ細胞におけるガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を介するシグナル伝達の阻害薬を含むこともできる。

本発明の抗がん剤において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、ヒトＴ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターの発現および／または機能を抑制または低減する阻害薬とすることもできる。

本発明の抗がん剤において、前記Ｔ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターは、ＧＡＢＡ_Ａレセプター、および、ＧＡＢＡ－ρレセプターのうちの少なくとも１つとすることができる。

本発明の抗がん剤において、前記Ｔ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターは、ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドからなることもできる。

本発明の抗がん剤において、前記ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドは、ヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類であってもよい。

本発明の抗がん剤において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のサブユニットポリペプチドの発現を抑制または低減する、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）誘導性核酸もしくはリボザイムまたはそれらの発現ベクターを含むことができる。

本発明の抗がん剤において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のＧＡＢＡレセプターのサブユニットポリペプチドと特異的に結合して、該ＧＡＢＡレセプターの機能を抑制または低減する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類とすることもできる。

本発明の抗がん剤において、前記ＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬は、フルマゼニル、Ｒｏ１５－４５１３、サルマゼニル、シクトキシン、エナントトキシン、ペンチレンテトラゾール、ピクロトキシン、ツジョン、リンデン、ビククリン、ガバジンおよびこれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１種類とすることもできる。

本発明の抗がん剤において、前記ＧＡＢＡ－ρレセプターの阻害薬は、（１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－４－イル）メチル・ホスフィン酸（ＴＰＭＰＡ）およびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種類とすることもできる。

本発明の抗がん剤は、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分泌の阻害薬、および／または、遊離ＧＡＢＡの捕捉薬を含むこともできる。

本発明の抗がん剤において、前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬はグルタミン酸デカルボキシラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１の発現および／または酵素活性の阻害剤とすることもでき、前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬は４－アミノ酪酸アミノ基転移酵素の発現および／または酵素活性の促進剤とすることもでき、前記遊離ＧＡＢＡの捕捉薬は、遊離ＧＡＢＡに特異的に結合するタンパク質、遊離ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類を含むこともできる。

本発明の抗がん剤は、ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーおよび／またはそれらの断片を含むこともできる。

本発明の抗がん剤は、Ｂ細胞に対する細胞傷害性を有する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片、および／または、Ｂ細胞の除去剤を含むこともできる。

本発明は、治療を必要とする患者におけるＢ細胞による細胞傷害性Ｔ細胞抑制作用を阻害または低減することを含む、がんの治療方法を提供する。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｂ細胞は抗原刺激により活性化されたＢ細胞とすることもできる。

本発明のがんの治療方法は、治療を必要とする患者にＴ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬を投与することを含むこともできる。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、ヒトＴ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターの発現および／または機能を抑制または低減する阻害薬とすることもできる。

本発明のがんの治療方法において、前記ＧＡＢＡレセプターは、ＧＡＢＡ_Ａレセプター、および、ＧＡＢＡ－ρレセプターのうちの少なくとも１つとすることができる。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｔ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターは、ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドからなることもできる。

本発明のがんの治療方法において、前記ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドは、ヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類であってもよい。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のサブユニットポリペプチドの発現を抑制または低減する、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸もしくはリボザイムまたはそれらの発現ベクターを含むことができる。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のＧＡＢＡレセプターのサブユニットポリペプチドと特異的に結合して、該ＧＡＢＡレセプターの機能を抑制または低減する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類とすることもできる。

本発明のがんの治療方法において、前記ＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬は、フルマゼニル、Ｒｏ１５－４５１３、サルマゼニル、シクトキシン、エナントトキシン、ペンチレンテトラゾール、ピクロトキシン、ツジョン、リンデン、ビククリン、ガバジンおよびこれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１種類とすることもできる。

本発明のがんの治療方法において、前記ＧＡＢＡ－ρレセプターの阻害薬は、（１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－４－イル）メチル・ホスフィン酸（ＴＰＭＰＡ）およびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種類とすることもできる。

本発明のがんの治療方法は、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分泌の阻害薬、および／または、遊離ＧＡＢＡの捕捉薬を、治療を必要とする患者に投与することを含むこともできる。

本発明のがんの治療方法において、前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬はグルタミン酸デカルボキシラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１の発現または酵素活性の阻害剤とすることもでき、前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬は４－アミノ酪酸アミノ基転移酵素の発現または酵素活性の促進剤とすることもでき、前記遊離ＧＡＢＡの捕捉薬は、遊離ＧＡＢＡに特異的に結合するタンパク質、遊離ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類を含むこともできる。

本発明のがんの治療方法は、ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーおよび／またはそれらの断片を、治療を必要とする患者に投与することを含むこともできる。

本発明のがんの治療方法は、Ｂ細胞に対する細胞傷害性を有する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片、および／または、Ｂ細胞の除去剤を、治療を必要とする患者に投与することを含むこともできる。

本発明の抗がん剤および／または本発明のがんの治療方法は、がん細胞を殺傷するか、がん細胞の増殖を抑制するか、あるいは、がん細胞のアポトーシスを誘導する、他の医薬を併用することもできる。本発明の抗がん剤および／または本発明のがんの治療方法は、がん細胞を殺傷するか、がん細胞の増殖を抑制するか、あるいは、がん細胞のアポトーシスを誘導する、他の治療方法と併用することもできる。

ＧＡＢＡおよび関連代謝物の合成および分解経路とこれらに関与する酵素を示す代謝マップ。ＧＡＢＡは、ＴＣＡ回路で生じるアルファケトグルタル酸（ａ－ＫＧ）由来のグルタミン酸からグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ１）により合成されるか、尿素回路またはスペルミジン／スペルミングルタミン由来の４－アミノブタナールからアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１（ＡＬＤＨ９Ａ１）により合成される。ＧＡＢＡは４－アミノ酪酸アミノ基転移酵素によりコハク酸セミアルデヒドに分解され、さらに酸化されてコハク酸としてＴＣＡ回路に入る。 野生型マウスから摘出され、フロー・サイトメトリー法で単離された各種リンパ球のＧＡＢＡ含量の棒グラフ。誤差棒は各リンパ球タイプの試料間の標本平均の標準誤差を表す。標本平均の標準誤差とは、母集団からある数の標本を選ぶとき、選ぶ組み合わせによって標本平均がどの程度ばらつくかを、全ての組み合わせについての標準偏差で表したものをいう。グラフ縦軸は、小腸ＩｇＡ形質細胞（ＳＩ ＩｇＡ ＰＣ）、パイエル板（ＰＰ）の胚中心（ＧＣ）または非ＧＣ（ｎｏｎＧＣ）Ｔ細胞およびＢ細胞、リンパ節（ＬＮ）のＢ細胞（Ｂ２２０）、樹状細胞（ＤＣ）、ＣＤ４またはＣＤ８陽性エフェクターメモリー（ＥＭ）またはセントラルメモリー（ＣＭ）Ｔ細胞、ＣＤ４またはＣＤ８が陽性または陰性のナイーブＴ細胞（ｎａｉｖｅ）、ＣＤ４またはＣＤ８が陽性でＣＤ４４陽性の細胞（ＣＤ４４）の各細胞を表す。グラフ横軸は各細胞のＧＡＢＡ含量をナイーブなＣＤ４Ｔ細胞のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。 野生型マウス（ＷＴ）、ＣＤ３欠失ホモノックアウトマウス（ＣＤ３^－／－）、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）、ＲＡＧ－１欠失ホモノックアウトマウス（ＲＡＧ－１^－／－）のそれぞれに免疫付与した後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のリンパ節組織のＧＡＢＡ含量を示す棒グラフ。誤差棒は各リンパ節組織の試料間のＧＡＢＡ含量の標準偏差を表す。グラフの縦軸は、各組織のＧＡＢＡ含量を野生型マウス反対側リンパ節のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。横軸は、各組織が由来したリンパ節を表す。図３の「＊＊」、すなわち、免疫付与した後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のＣＤ３欠失ホモノックアウトマウス（ＣＤ３^－／－）のリンパ節組織のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１１であった。図３の「＊＊＊＊」、すなわち、免疫付与した後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）の野生型マウスのリンパ節組織のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．０００１未満であった。「ｎｓ」は統計的な有意差は認められなかったことを示す。 免疫付与した野生型マウスの後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のリンパ節組織からフロー・サイトメトリー法で選別されたＣＤ４、ＣＤ８およびＢ２２０陽性細胞（それぞれ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＢ２２０）と、反対側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｃｏｎｔｒａ ＬＮ）、同側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｉｐｓｉ ＬＮ）および同側マクロファージ/樹状細胞（ｉｐｓｉ Ｍｆ／ＤＣ）とのＧＡＢＡ含量を示す棒グラフ。誤差棒は各選別細胞の試料間のＧＡＢＡ含量の標準偏差を表す。ＧＡＢＡ含量の縦軸は、各選別細胞のＧＡＢＡ含量を反対側ＣＤ４陽性細胞のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。横軸は、各選別細胞の種類を表す。図４の「＊」、すなわち、免疫付与した後肢足蹠と同側の全リンパ節組織から選別されたＣＤ４陽性細胞（ｉｐｓｉ ＣＤ４）および反対側のリンパ節組織から選別されたＣＤ４陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ ＣＤ４）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．０２３２であった。図４の「＊＊」、すなわち、同側の全リンパ節組織から選別されたＢ２２０陽性細胞（ｉｐｓｉ Ｂ２２０）および反対側のリンパ節組織から選別されたＢ２２０陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ Ｂ２２０）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１５であった。図４の「＊＊＊」、すなわち、同側の全リンパ節組織から選別されたＣＤ８陽性細胞（ｉｐｓｉ ＣＤ８）および反対側のリンパ節組織から選別されたＣＤ８陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ ＣＤ８）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１０であった。図４の「＊＊＊＊」、すなわち、反対側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｃｏｎｔｒａ ＬＮ）と同側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｉｐｓｉ ＬＮ）とのＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００６２であった。 Ｂ細胞分化不全がＳＰＦ環境下のマウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼす影響を示す折れ線グラフ。誤差棒は各測定日のマウス個体腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。 無菌条件下で飼育されたＢ細胞分化不全マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼす影響を示す折れ線グラフ。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。 無菌条件下で飼育されたＳＰＦ環境下のＢ細胞分化不全マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ徐放ペレット処置の影響を示す折れ線グラフ。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。 Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の活性化に及ぼす影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図。図８の左の上下はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））、中央および右はプラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））のフロー・サイトメトリーでＣＤ８陽性細胞をゲーティングした２パラメーターヒストグラム。上段は、縦軸がＣＤ９８の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度。下段は、縦軸がＳｃａ－１の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度。ボックスの左の数値は、各条件のＣＤ８陽性細胞のうちボックス内の蛍光強度の細胞の百分率を表す。 Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の細胞殺傷活性に及ぼす影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図。図９の左の上下はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））、中央および右はプラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））のフロー・サイトメトリーでＣＤ８陽性細胞をゲーティングした２パラメーターヒストグラム。上段は、縦軸がパーフォリンの蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度。下段は、縦軸がＧｒｚＢ（グランザイムＢ）の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度。ボックスの左の数値は、各条件のＣＤ８陽性細胞のうちボックス内の蛍光強度の細胞の百分率を表す。 図９の２パラメーターヒストグラムにもとづいて、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞のパーフォリン陽性細胞の割合に及ぼす影響を示す棒グラフ。縦軸は、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏまたはｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）のパーフォリン陽性細胞の百分率を表す。図１０Ａの「＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）とのパーフォリン陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００６であった。図１０Ａの「＊＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）とのパーフォリン陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００１２であった。 図９の２パラメーターヒストグラムにもとづいて、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞のグランザイム陽性細胞の割合に及ぼす影響を示す棒グラフ。プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏまたはｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）のグランザイム陽性細胞の百分率を表す。図１０Ｂの「＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）とのグランザイム陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．０２２であった。図１０Ｂの「＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）とのグランザイム陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００１２であった。 野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響を示す折れ線グラフ。縦軸はチアガビン（ＧＡＴ（トランスポーター）阻害剤）投与動物（Ｔｉａｇａｂｉｎ）、ＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）またはピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）の腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。最終測定日に最も腫瘍体積の大きい曲線はチアガビン（ＧＡＴ（トランスポーター）阻害剤）投与動物、２番目に腫瘍体積の大きい曲線はＰＢＳ投与動物、最も腫瘍体積の小さい曲線はピクロトキシン投与動物の腫瘍体積の経時的変化を示す。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。図１１の「＊＊＊」、すなわち、ＭＣ３８細胞接種後２３日に測定したＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）とピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は０．０００３であった。図１１の「＊＊＊＊」、すなわち、ＭＣ３８細胞接種後２５日および２７日に測定したＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）とピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は、いずれも、０．０００１未満であった。 野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響を示す折れ線グラフ。縦軸はフルマゼニル（ＧＡＢＡ_Ａレセプター阻害剤）投与動物またはＰＢＳ投与動物の腫瘍の体積（ｍｍ^３）。横軸は、腫瘍体積の測定日。最終測定日に最も腫瘍体積の小さい曲線はフルマゼニル投与動物（Ｆｌｕｍａｚｅｎｉｌ）の腫瘍体積の経時的変化を示し、最も腫瘍体積の大きい曲線はＤＭＳＯ投与動物（ＤＭＳＯ）の腫瘍体積の経時的変化を示す。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。図１２の「＊＊」、すなわち、最終測定日に測定したＤＭＳＯ投与動物（ＤＭＳＯ）とフルマゼニル投与動物（Ｆｌｕｍａｚｅｎｉｌ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は、０．００９２であった。 野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤するＣＤ８陽性細胞の組成に対するピクロトキシンの影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図。左はＣＤ８の蛍光強度を横軸に、ＣＤ４５－２の蛍光強度を縦軸に表す野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラム。右下は、ピクロトキシン処理した野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラム。右上は対照実験の野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラム。右上および右下は、ともに、側方散乱光の強度を縦軸に、前方散乱光の強度を横軸に表す。ゲーティング範囲の近傍の数字は測定された細胞全てのうちゲーティング範囲内の細胞の百分率を表す。 図１３の２パラメーターヒストグラムから算出した腫瘍浸潤ＣＤ８陽性で、かつ、側方散乱光および前方散乱光の強度も高いＴ細胞の百分率を示す棒グラフ。縦軸は側方散乱光および前方散乱光の強度も高いＴ細胞の百分率。左は対照実験のマウス（Ｃｔｒ）の腫瘍浸潤細胞の百分率、右はピクロトキシン処理マウス（Ｐｉｃ）の腫瘍浸潤細胞の百分率、誤差棒は各細胞集団の細胞数の標準偏差を表す。ピクロトキシン処理マウス（Ｐｉｃ）と対照実験のマウス（Ｃｔｒ）との腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の百分率のｐ値は０．０１５６であった。

本明細書においてＢ細胞とは、成熟Ｂ細胞だけでなく、最終分化した形質細胞や、ｐｒｅＢ細胞およびその前駆細胞を除く任意のＢ前駆細胞をも含む意味で用いられる。細胞表面マーカーの発現としては、ＩｇＭ^＋、ＩｇＤ^＋、ＩｇＧ^＋、ＣＤ１９^＋、Ｂ２２０^＋、ＣＤ２４^＋、ＣＤ４３^－、ＣＤ２５^－、ｃ－ｋｉｔ^－、ＩＬ－７Ｒ^－などにより特徴付けられる。

本明細書においてＴ細胞とは、主に胸腺内で分化、成熟するリンパ球で、成熟するとＴ細胞レセプターを細胞表面に発現するリンパ球であって、成熟したＴ細胞のほか、Ｔ細胞への分化能を有する任意のＴ前駆細胞をも含む。細胞表面マーカーの発現としては、Ｔ細胞レセプター^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋などにより特徴付けられる。

本明細書において細胞傷害性Ｔ細胞とは、ウイルス感染細胞やがん細胞など宿主にとって異物となる細胞を認識して破壊するＴ細胞の一種で、細胞表面マーカーＣＤ８^＋で特徴づけられる。細胞傷害性Ｔ細胞の細胞傷害活性は、細胞傷害物質であるパーフォリン、グランザイム等の存在で特徴付けられる。

本明細書において抗がん剤とは、がん細胞の増殖を抑制、阻害または停止させるか、がん細胞を特異的に殺傷するか、がん細胞にアポトーシスその他自ら死滅を誘導させる任意の活性を有する医薬を指す。本発明の抗がん剤は、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞の作用を阻害または低減する、すなわち、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制する、Ｂ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞との相互作用を阻害または低減するために用いる医薬を指す。

本明細書においてがんの治療方法とは、がん細胞の増殖を抑制、阻害または停止させるか、がん細胞を特異的に殺傷するか、がん細胞にアポトーシスその他自ら死滅を誘導させる任意の処置を行う方法をいう。本発明のがんの治療方法は、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞の作用を阻害または低減する、すなわち、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制する、Ｂ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞との相互作用を阻害または低減する医薬を投与することを含む。

本発明の抗がん剤またはがんの治療方法の対象となるがんの種類は、癌腫、扁平上皮癌（例えば、子宮頚管、瞼、結膜、膣肺、口腔、皮膚、膀胱、舌、喉頭および食道の扁平上皮癌）、腺癌（例えば、前立腺、小腸、子宮内膜、子宮頚管、大腸、肺、膵、食道、直腸、子宮、胃、乳房および卵巣の腺癌）を含む。さらに、肉腫（例えば、筋原性肉腫、骨肉腫、子宮筋腫）、白血病、神経腫、メラノーマおよびリンパ腫も含む。

本発明の抗がん剤またはがんの治療方法の対象となるがんは、例えば、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、悪性中皮腫等）、乳がん（例えば、浸潤性乳管がん、非浸潤性乳管がん、炎症性乳がん等）、前立腺がん（例えば、ホルモン依存性前立腺がん、ホルモン非依存性前立腺がん等）、膵がん（例えば、膵管がん等）、胃がん（例えば、乳頭腺がん、粘液性腺がん、腺扁平上皮がん等）、結腸がん（例えば、消化管間質腫瘍等）、直腸がん（例えば、消化管間質腫瘍等）、大腸がん（例えば、家族性大腸がん、遺伝性非ポリポーシス大腸がん、消化管間質腫瘍等）、食道がん、十二指腸がん、舌がん、咽頭がん（例えば、上咽頭がん、中咽頭がん、下咽頭がん等）、頭頚部がん、唾液腺がん、脳腫瘍（例えば、松果体星細胞腫瘍、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫等）、肝臓がん（例えば、原発性肝がん、肝外胆管がん等）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん、腎盂と尿管の移行上皮がん等）、胆嚢がん、胆管がん、膵臓がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、卵巣がん（例、上皮性卵巣がん、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣性胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍等）、膀胱がん、尿道がん、皮膚がん（例えば、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞がん等）、血管腫、悪性リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病等）、メラノーマ（悪性黒色腫）、甲状腺がん（例えば、甲状腺髄様がん等）、副甲状腺がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、陰茎がん、精巣腫瘍、小児固形がん（例えば、ウィルムス腫瘍、小児腎腫瘍等）、上顎洞腫瘍、骨腫瘍等が挙げられ、これらに限定されない。

本明細書において、ＧＡＢＡレセプターとは、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）と特異的に結合するレセプターを指す。哺乳類および霊長類では、ＧＡＢＡレセプターは、ＧＡＢＡ_ＡレセプターとＧＡＢＡ_Ｂレセプターとに分類される。ＧＡＢＡ_Ａレセプターは、ＧＡＢＡと結合すると塩素イオンを細胞内に透過させるイオンチャンネル型受容体で、ＧＡＢＡ_ＢレセプターはＧタンパク質結合型受容体である。ＧＡＢＡ－ρレセプターは、かつてはＧＡＢＡ_Ｃレセプターとして独立のクラスに分類されていたこともあった。しかし、サブユニットポリペプチド５本からなる５量体イオンチャンネル型受容体である点でＧＡＢＡ_Ａレセプターと共通で、遺伝子配列や構造、機能についてもρサブユニットは他のＧＡＢＡ_Ａレセプターサブユニットと類似の性質を持ち、ρサブユニットのみからなる点のみが異なることから、今ではＧＡＢＡ－ρレセプターはＧＡＢＡ_Ａレセプターのサブクラスに分類される。

本発明の抗がん剤がＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の場合には、その有効成分は、ビククリン、ガバジンなどのアンタゴニストと、フルマゼニル、Ｒｏ１５－４５１３、サルマゼニル、亜鉛などのネガティブアロステリック調節因子と、シクトキシン、エナントトキシン、ペンチレンテトラゾール、ピクロトキシン、ツジョン、リンデンなどの非競合的チャネルブロッカーと、これらの誘導体と、前記レセプターのサブユニットのうちヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のサブユニットの発現を抑制または低減する、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸もしくはリボザイムまたはそれらの発現ベクターとを含むが、これらに限定されない。

本発明の抗がん剤がＧＡＢＡ－ρレセプターの阻害薬の場合には、その有効成分は、（１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－４－イル）メチル・ホスフィン酸（ＴＰＭＰＡ）およびその誘導体を含むが、これらに限定されない。

Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成経路を、図１のＧＡＢＡおよび関連代謝物の合成および分解経路とこれらに関与する酵素を示す代謝マップを用いて説明する。ＧＡＢＡは、ＴＣＡ回路で生じるアルファケトグルタル酸（ａ－ＫＧ）由来のグルタミン酸からグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ１）により合成されるか、尿素回路またはスペルミジン／スペルミングルタミン由来の４－アミノブタナールからアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１（ＡＬＤＨ９Ａ１）により合成される。ＧＡＢＡは４－アミノ酪酸アミノ基転移酵素によりコハク酸セミアルデヒドに分解され、さらに酸化されてコハク酸としてトリカルボン酸（ＴＣＡ）回路に入る。Ｔ細胞およびＢ細胞におけるグルタミンの消費はいずれも抗原レセプターを介する活性化により増加する。Ｔ細胞もＢ細胞も、抗原刺激の２４時間後の細胞内グルタミン酸プールの８０％はグルタミン由来である。前記標識グルタミンは、プリンおよびピリミジンの前駆体を経て、活性化Ｂ細胞およびＴ細胞におけるヌクレオチド生合成に寄与する。また培養７２時間後のＢ細胞ではグルタチオンのほぼ９０％がグルタミン由来である。そして、グルタミン由来のアミノ酸のうち、グルタミン酸、または、ＴＣＡ回路経由で流れ込むグルタミンのいずれかからのアスパラギン酸合成はＢ細胞のほうが顕著である。Ｂ細胞ではＴＣＡ回路で酸化されるα－ケトグルタル酸のかなりの部分はグルタミン由来である。Ｂ細胞とＴ細胞とで明らかに異なるグルタミン由来代謝物のひとつが、神経伝達物質のγアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）である。抗原レセプターまたはｔｏｌｌ様レセプターを介する刺激の７２時間後、Ｂ細胞はＧＡＢＡを合成し細胞外に輸送するが、Ｔ細胞はＧＡＢＡ合成も細胞外輸送もしない。グルタミン分解経路の主要な酵素のＲＮＡ転写解析も、ＧＡＢＡ合成分解に関与する酵素の発現がＢ細胞とＣＤ４Ｔ細胞とで異なることを裏付ける。ＣＤ４Ｔ細胞と比較すると、グルタミン酸をＧＡＢＡに変換する酵素ＧＡＤ１と、グルタミントランスポーターのＳｌｃ３８ａ１、Ｓｌｃ３８ａ２およびＳｌｃ３８ａ５をコード化する遺伝子の発現はＢ細胞のほうがより多い。逆に、ＧＡＢＡを異化する酵素ＡＢＡＴをコード化する遺伝子の発現はＢ細胞のほうがより少ない。ヒトのＢ細胞もＧＡＢＡに変換する酵素ＧＡＤ１の発現はＴ細胞よりも高い。

本発明の抗がん剤が前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬の場合には、その有効成分は、グルタミン酸デカルボキシラーゼまたはアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１に対するアンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸もしくはリボザイムまたはそれらの発現ベクターを含むが、これらに限定されない。

本明細書において、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸またはリボザイムによって特異的に発現が抑制される、ヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のサブユニット、グルタミン酸デカルボキシラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１を以下では標的遺伝子という。また該標的遺伝子に対するアンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸またはリボザイムを標的遺伝子阻害核酸という。前記標的遺伝子に対するアンチセンス核酸は、前記標的遺伝子の転写産物（ｍＲＮＡまたは初期転写産物）を発現する細胞の生理的条件下で前記転写産物とハイブリダイズし得る塩基配列からなり、且つハイブリダイズした状態で前記転写産物にコードされるポリペプチドの翻訳を阻害し得るポリヌクレオチドをいう。アンチセンス核酸の種類はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよいし、あるいはＤＮＡ／ＲＮＡキメラであってもよい。アンチセンス核酸は、非修飾（天然型）のリン酸ジエステル結合を有するものであっても、分解酵素に安定なチオリン酸型（リン酸結合のＰ＝ＯをＰ＝Ｓに置換）や２’－Ｏ－メチル型等の化学修飾されたヌクレオチドであってもよい。アンチセンス核酸の設計に重要な他の要素として、水溶性および細胞膜透過性を高めること等が挙げられるが、これらはリポソームやマイクロスフェアを使用するなどの剤形の工夫によっても克服できる。アンチセンス核酸の長さは、前記標的遺伝子の転写産物と特異的にハイブリダイズし得る限り特に制限はなく、短いもので約６塩基程度、長いもので転写産物の全配列に相補的な配列を含むような配列であってもよい。合成の容易さや抗原性の問題等から、例えば約６塩基以上、好ましくは約１５～約４０塩基、より好ましくは約１５塩基～約３０塩基からなるオリゴヌクレオチドが例示される。さらに、アンチセンス核酸は、前記標的遺伝子の転写産物とハイブリダイズして翻訳を阻害するだけでなく、二本鎖ＤＮＡと結合して三重鎖（トリプレックス）を形成し、ｍＲＮＡへの転写を阻害し得るものであってもよい。

本明細書において、配列Ａと配列Ｂとの「相補性」とは、配列Ａの相補配列と配列Ｂとの同一性をいう。アンチセンス核酸と、該アンチセンス核酸の標的遺伝子との相補性は必ずしも１００％である必要はなく、生体細胞内で前記標的遺伝子のＤＮＡまたはＲＮＡと相補的に結合しうる程度でハイブリダイズして、ｍＲＮＡへの転写および／または翻訳を阻害できることを条件として、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、または、約９５％以上であってもかまわない。

前記ＲＮＡｉ誘導性核酸とは、細胞内に導入されることにより、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を誘導し得るポリヌクレオチドをいい、好ましくはＲＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡのキメラ分子である。ＲＮＡ干渉とは、ｍＲＮＡと同一の塩基配列（またはその部分配列）を含む２本鎖構造のＲＮＡが、当該ｍＲＮＡの発現を抑制する効果をいう。このＲＮＡｉ効果を得るには、例えば、少なくとも１９の連続する標的ｍＲＮＡと同一の塩基配列（またはその部分配列）を有する２本鎖構造のＲＮＡを用いることが好ましい。ただし、前記標的遺伝子の発現阻害作用を有していれば数塩基置換されているものであってもよく、１９塩基長よりも短いＲＮＡであってもよい。２本鎖構造は、センス鎖とアンチセンス鎖の異なるストランドで構成されていてもよいし、一つのＲＮＡのステムループ構造によって与えられる２本鎖（ｓｈＲＮＡ）であってもよい。ＲＮＡｉ誘導性核酸としては、例えばｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡなどが挙げられる。ｍｉＲＮＡは、前記標的遺伝子の３’ＵＴＲを認識して、該標的遺伝子のｍＲＮＡを不安定化するとともに翻訳抑制を行うことで前記標的遺伝子の発現を抑制する。

ＲＮＡｉ誘導性核酸は、転写抑制活性が強いという観点から、ｓｉＲＮＡが好ましい。前記標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡは、該標的遺伝子のｍＲＮＡの任意の部分を標的とすることができる。前記標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡ分子は、ＲＮＡｉ効果を誘導できる限り特に制限されないが、例えば１８～２７塩基長、好ましくは２１～２５塩基長である。前記標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二重鎖である。前記標的遺伝子に対するｓｉＲＮＡは、センス鎖、アンチセンス鎖の一方または双方の５’末端または３’末端においてオーバーハングを有していてもよい。オーバーハングは、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の末端における１～数個（例、１、２または３個）の塩基の付加により形成されるものである。ｓｉＲＮＡの設計方法は、当業者に公知であり、ｓｉＲＮＡの様々な設計ソフトウェアまたはアルゴリズムを用いて、上記塩基配列から適切なｓｉＲＮＡの塩基配列を選択することができる。

前記「リボザイム」とは核酸を切断する酵素活性を有するＲＮＡをいうが、最近では当該酵素活性部位の塩基配列を有するオリゴＤＮＡも同様に核酸切断活性を有することが明らかになっているので、本明細書では配列特異的な核酸切断活性を有する限りＤＮＡをも包含する概念として用いる。具体的には、リボザイムは、前記標的遺伝子をコードするｍＲＮＡまたは初期転写産物を、コード領域の内部（初期転写産物の場合はイントロン部分を含む）で特異的に切断し得る。リボザイムとして最も汎用性の高いものとしては、ウイロイドやウイルソイド等の感染性ＲＮＡに見られるセルフスプライシングＲＮＡがあり、ハンマーヘッド型やヘアピン型等が知られている。ハンマーヘッド型は約４０塩基程度で酵素活性を発揮し、ハンマーヘッド構造をとる部分に隣接する両端の数塩基ずつ（合わせて約１０塩基程度）をｍＲＮＡの所望の切断部位と相補的な配列にすることにより、標的ｍＲＮＡのみを特異的に切断することが可能である。さらに、リボザイムを、それをコードするＤＮＡを含む発現ベクターの形態で使用する場合には、転写産物の細胞質への移行を促進するために、ｔＲＮＡを改変した配列をさらに連結したハイブリッドリボザイムとすることもできる（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２９（１３）： ２７８０－２７８８ （２００１））。

本発明の抗がん剤は、前記標的遺伝子阻害核酸をコードするポリヌクレオチド、および当該ポリヌクレオチドに機能可能に連結されたプロモーターを含む、発現ベクターとして提供することもできる。前記プロモーターは、その制御下にある発現対象の核酸の種類により適宜選択され得るが、例えば、ｐｏｌＩＩＩプロモーター（例、ｔＲＮＡプロモーター、Ｕ６プロモーター、Ｈ１プロモーター）、哺乳動物用プロモーター（例、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＳＶ４０プロモーター）が挙げられる。本発明の発現ベクターはさらに、選択マーカー遺伝子（テトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシン、ハイグロマイシン、ホスフィノスリシン等の薬剤に対する抵抗性を付与する遺伝子、栄養要求性変異を相補する遺伝子等）をさらに含んでいてもよい。本発明の発現ベクターのバックボーン（ｂａｃｋｂｏｎｅ）としては、ヒト等の哺乳動物細胞中で前記標的遺伝子阻害核酸を産生できるものであれば特に制限されないが、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクターが挙げられる。哺乳動物への投与に好適なベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンドビスウイルス、センダイウイルス等のウイルスベクターが挙げられる。なかでも、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアウイルス由来のウイルスベクターが好ましい。

本発明の抗がん剤が遊離ＧＡＢＡの捕捉薬の場合には、その有効成分は、ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーおよび／またはそれらの断片を含むが、これらに限定されない。

本明細書において、抗体とは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体等の天然型抗体、遺伝子組換技術を用いて製造され得るキメラ抗体、ヒト化抗体や一本鎖抗体、ヒト抗体産生トランスジェニック動物等を用いて製造され得るヒト抗体、ファージディスプレイによって作製された抗体を指す。

本明細書において、特異的結合パートナーとは、特異的結合対のメンバーを指す。特異的結合対は、化学的または物理的手段によって互いに特異的に結合する２つの異なる分子を含む。従って、一般的な免疫反応の抗原と抗体との特異的結合対に加えて、他の特異的結合対としては、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）、炭水化物およびレクチン、相補的ヌクレオチド配列、エフェクターおよび受容体分子、補助因子および酵素、酵素および酵素阻害剤などを挙げることができるが、これらに限られない。さらに、特異的結合対としては、元の特異的結合メンバーの類似体であるメンバー、例えば、分析物類似体を挙げることができる。免疫反応特異的結合メンバーとしては、単離されているかまたは組換え的に生産されたかにかかわらず、抗原およびその断片と、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を含む抗体と、これらの複合体およびその断片を挙げることができる。

本明細書における「これらの断片」または「その断片」という文言は、抗体の断片を指す場合には、本発明の「これらの断片」または「その断片」は抗体の一部分の領域を意味する。具体的には、例えばＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ｓＦｖ、ｄｓＦｖ（ｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｆｖ）、ｄＡｂ（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を指すが、これらに限られない。本発明の「これらの断片」または「その断片」という文言が、抗体以外の特異的結合パートナーの断片を指す場合には、本発明の「これらの断片」または「その断片」は当該特異的結合パートナー分子の断片を意味する。

本明細書における抗体のクラスは、特に限定されず、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ等のいずれのアイソタイプを有する抗体をも包含する。好ましくは、ＩｇＧまたはＩｇＭであり、精製の容易性等を考慮するとより好ましくはＩｇＧである。

本明細書におけるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびこれらの断片は、既知の一般的な製造方法によって製造することができる。本明細書に記載の抗体は、例えばＧｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ｅ． Ａ．編、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、２０１４）に詳しく説明されている。

本発明の抗がん剤は、患者に対して経口的または非経口的に投与することができ、投与形態としては、経口投与、局所投与、静脈内投与、経皮投与などが挙げられ、必要に応じて、製薬学的に許容され得る添加剤と共に、投与に適した剤形に製剤化される。経口投与に適した剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などが挙げられ、非経口投与に適した剤形としては、例えば、注射剤、軟膏、ローション剤、クリーム剤、貼付剤などが挙げられる。これらは当該分野で汎用されている通常の技術を用い、調製することができる。本発明の抗がん剤は、患者のがんの増殖を抑制または軽減し、あるいは、がん組織の成長抑制、縮小または消滅する等のがんに対する治療効果を奏する限り、その投与経路および剤形は特に限定されないが、好ましい投与経路は局所投与であり、その剤形は注射剤、軟膏、ローション剤、クリーム剤または貼付剤である。また、本発明の抗がん剤は、これらの製剤の他に臓器内インプラント用製剤やマイクロスフェア等のＤＤＳ（ドラッグデリバリーシステム）化された製剤にすることもできる。さらに、本発明の抗がん剤を所望のがん組織（例えば、原発巣または転移がん組織）に到達させるためには、筋肉内局所投与、皮下局所投与、皮膚への直接塗布、貼付等の局所投与に限らず、静脈内注射（点滴）、皮下投与等の全身性投与であってもよい。

本発明の抗がん剤は、有効成分の種類とその投与経路に応じて、薬学的に許容される担体を含んでいてもよい。当業者であればかかる状況に適切な担体を適宜選択することができる。選択可能な担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤；セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤；デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム－グリコール－スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤；安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤；クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等のｐＨ調節剤；メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤；界面活性剤等の分散剤；水、生理食塩水、エタノール、プロピレングリコール等の溶解剤；グルコース、塩化ナトリウム、塩化カリウム等の等張化剤；カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどがあげられるが、それらに限定されるものではない。また、これらの担体は単独の作用に限定されず、複数の作用を発揮する目的で使用することができる。

例えば、本発明の抗がん剤を注射剤、軟膏、ローション剤、クリーム剤または貼付剤として用いる場合、安定剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエンなど）、溶解補助剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、マクロゴール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油など）、懸濁化剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなど）、乳化剤（例えば、ポリビニルピロリドン、大豆レシチン、卵黄レシチン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０など）、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、グルタミン酸、イプシロンアミノカプロン酸など）、粘稠剤（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどの水溶性セルロース誘導体、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、マクロゴールなど）、保存剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル類、エデト酸ナトリウム、ホウ酸など）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール、ソルビトール、ホウ酸、ブドウ糖、プロピレングリコールなど）、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、リン酸、酢酸など）、清涼化剤（例えば、ｌ－メントール、ｄ－カンフル、ｄ－ボルネオール、ハッカ油など）、軟膏基剤（例えば、白色ワセリン、精製ラノリン、流動パラフィン、植物油（オリーブ油、椿油、落花生油など）など）などを添加剤として加えることができる。これら添加剤の添加量は、添加する添加剤の種類、用途などによって異なるが、添加剤の目的を達成し得る濃度を添加すればよい。

本発明の抗がん剤は、前記標的遺伝子阻害核酸、または、該記標的遺伝子阻害核酸をコードするポリヌクレオチド、および当該ポリヌクレオチドに機能可能に連結されたプロモーターを含む、発現ベクターを、リポフェクション法を用いて製剤化することもできる。リポフェクション法には、通常ホスファチジルセリンからなるリポソームが用いられる。ホスファチジルセリンは陰電荷を有するため、ホスファチジルセリンの代用として、より安定したリポソームを作りやすいＮ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリエチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）という陽イオン性脂質（商品名：トランスフェクタム、リポフェクトアミン）を用いることが好ましい。これらの陽イオン性脂質と陰電荷を持つ核酸との複合体を形成させると、全体として正に荷電しているリポソームが、負に荷電している細胞の表面に吸着し、細胞膜と融合できることで核酸を細胞内に導入することができる。切開手術または回復手術のように皮膚、腹膜、胸膜等を切開してがんの病巣を露出するか、あるいは、内視鏡による経皮経管的にがんの病巣にアクセスするかして、前記標的遺伝子阻害核酸、または、該記標的遺伝子阻害核酸をコードするポリヌクレオチド、および当該ポリヌクレオチドに機能可能に連結されたプロモーターを含む、発現ベクターを、病巣に直接注射することもできる。このようながんの病巣への直接局所投与は、前記標的遺伝子阻害核酸、または、該記標的遺伝子阻害核酸をコードするポリヌクレオチド、および当該ポリヌクレオチドに機能可能に連結されたプロモーターを含む、発現ベクターを全身投与するのに比べて、オフターゲット効果のような副作用を軽減できることがある。

本発明の抗がん剤に含まれる前記有効成分の割合は、所望の効果を奏することができる範囲で適宜設定することができるが、通常、０．０１～１００重量％であり、好ましくは０．１～９９．９重量％、より好ましくは０．５～９９．５重量％である。

本発明の抗がん剤がＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分泌の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ再吸収の促進薬、および／または、遊離ＧＡＢＡの捕捉薬、ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーおよび／またはそれらの断片の場合には、中枢神経または末梢神経に作用して精神または神経機能を変容させる副作用を惹起するおそれがある。本発明の抗がん剤がＢ細胞に対する細胞傷害性を有する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片、および／または、Ｂ細胞の除去剤の場合には、体内の液性免疫機能を弱体化させる副作用を惹起するおそれがある。そこで、本発明の抗がん剤の治療上有効な量は、精神または神経機能を変容させたり、液性免疫機能を弱体化させたりする副作用よりも、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞の作用を阻害または低減する効果が上回る用量である。

投与される用量は、治療される個人の年齢、体重および状態と、投与経路、投与形態および方法とを考慮して注意深く調整されなければならず、そして正確な投与量は医師によって決定されなければならない。実際の投与量は医師の裁量の範囲内であり、望ましい治療効果を得るために本発明の特別な状況に対して用量を設定することにより変動することがある。しかし本発明の抗がん剤の投与量としては、有効成分の種類、投与対象の体重や年齢、症状などにより一概に規定されるものではないが、１回につき体重１ｋｇあたり０．０００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。本発明の治療薬の投与回数は、特に限定されるものではないが、通常、１日当たり１～５回程度である。また、投与期間は、数日～１週間程度の短期服用であっても、数週間～数ヶ月程度の長期服用であってもよい。なお、相当程度の間隔を置いて前記疾患が再発した場合、本発明の治療薬の再度の投与が可能である。

本発明の抗がん剤の投与回数は、特に限定されるものではないが、通常、１日当たり１～５回程度である。また、投与期間は、数日～１週間程度の短期服用であっても、数週間～数ヶ月程度の長期服用であってもよい。なお、相当程度の間隔を置いてがんが再発した場合、本発明の抗がん剤を再度投与することもできる。

本明細書において、「がん細胞を特異的に殺傷する」とは、がん細胞への殺傷効果ががん細胞以外の細胞への殺傷効果と比較して通常１.２倍以上、好ましくは、１.３倍以上、１.５倍以上、１.７倍以上、１.９倍以上、２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上、２００倍以上、５００倍以上、１０００倍以上、２０００倍以上、５０００倍以上、１００００倍以上高いことをいう。同様に、本発明の標的遺伝子阻害核酸について「特異的に発現が抑制される」とは、標的遺伝子阻害核酸を添加した場合の標的遺伝子の発現が標的遺伝子阻害核酸を添加しなかった場合の標的遺伝子の発現と比較して通常１.２倍以上、好ましくは、１.３倍以上、１.５倍以上、１.７倍以上、１.９倍以上、２倍以上、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上、２００倍以上、５００倍以上、１０００倍以上、２０００倍以上、５０００倍以上、１００００倍以上低いことをいう。

本明細書において、物質Ａが物質Ｂと「特異的に結合する」とは、物質Ａと物質Ｂとがかなり高い結合親和性を示し、かつ、物質Ａおよび物質Ｂ以外の物質との交差反応性を示さないことを指す。かなり高い結合親和性とは、１×１０^－７Ｍ以下、１×１０^－８Ｍ以下、さらに特に１×１０^－9Ｍ以下またはよりさらに１×１０^－10Ｍ以下の解離定数Ｋ_ｄでの結合を指す。本発明の技術分野における物質Ａおよび物質Ｂの結合親和性は、表面プラズモン共鳴法を利用する測定装置（例えばＢｉａｃｏｒｅシステム（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社））、反射型干渉分光法を利用する測定装置（例えばｆｏｒｔｅ－ＢＩＯシリーズ（日本ポール株式会社））を含むが、これらに限られない測定装置により測定することができる。また、物質Ａおよび物質Ｂについて「物質Ａおよび物質Ｂ以外の物質との交差反応性」は、例えば、競合結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ）を用いて決定することができる。

本発明の抗がん剤およびがんの治療方法について「治療」とは、本発明の抗がん剤およびがんの治療方法が効果を奏することを指し、がんが完全に消失した完全奏効または完全寛解（ＣＲ）と、部分奏効または部分寛解（ＰＲ、固形がんについてそのサイズが減少すること、血液がんではがん細胞の数が減少すること）と、腫瘍のサイズが変わらない「安定（ＳＤ）」状態とを含む。

本発明の抗がん剤およびがんの治療方法は、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制する、Ｂ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞との相互作用を阻害または低減することを作用機序とするため、化学療法剤、免疫療法剤、放射線照射療法等の既存の抗がん剤またはがんの治療方法と作用機序が異なる。したがって、本発明の抗がん剤およびがんの治療方法は、既存の任意の抗がん剤またはがんの治療方法と併用することができる。

本明細書において、Ｂ細胞に対する細胞傷害性を有する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片とは、単独で、あるいは、補体その他と複合体を形成して、Ｂ細胞を殺傷する能力を有する抗体か、特異的結合パートナーか、これらの断片を指す。

本明細書において、Ｂ細胞の除去剤とは、細胞傷害性Ｔ細胞のがん細胞殺傷活性を抑制するＢ細胞を除去する活性を有する任意の薬剤を指す。本明細書のＢ細胞の除去剤には、ＣＤ２０を細胞表面に発現するＢ細胞を特異的に除去する抗ＣＤ２０モノクローナル抗体や、該モノクローナル抗体に由来するタンパク質、例えば、リツキシマブおよびそのバイオシミラーの他、腸管特異的なＣＤ１１ｂ陽性ＩｇＡ産生細胞を除去する腸内細菌に対する抗生物質を含む。

本明細書において、本発明の抗がん剤および／または本発明のがんの治療方法と併用する他の医薬または治療方法には、以下が含まれるが、これらに限られない。
・がん細胞を物理的に摘出除去する外科手術療法、
・アルキル化薬、白金化合物、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼ阻害薬、微小管阻害薬、抗生物質を含むが、これらに限られない、化学物質を投与する化学療法および化学療法剤、
・がん細胞を非自己として免疫細胞が攻撃する免疫療法および免疫療法剤、および
・エックス線、電子線、ガンマ線、中性子線を含むがこれらに限られない放射線の照射によりがん細胞の増殖を阻害し、死滅させる放射線療法。

がんを治療するための化学療法薬には、６－Ｏ－（Ｎ－クロロアセチルカルバモイル）フマギロール、ブレオマイシン、メトトレキサート、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、アドリアマイシン、ネオカルチノスタチン、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、テトラヒドロフリル－５－フルオロウラシル、ピシバニール、レンチナン、レバミゾール、ベスタチン、アジメキソン、グリチルリチン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ヘプロマイシン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、塩酸イリノテカン、シクロフォスファミド、メルファラン、ブスルファン、チオテパ、塩酸プロカルバジン、シスプラチン、アザチオプリン、メルカプトプリン、テガフール、カルモフール、シタラビン、メチルテストステロン、プロピオン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、メピチオスタン、ホスフェストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸リュープロレリン、酢酸ブセレリン等を含む。

前記他の医薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含むこともできる。前記他の治療方法は、がん組織を外科的手術によって摘出除去すること、および／または、がん細胞を殺傷する放射線を照射することを含むこともできる。

本明細書において数値について修飾する連体詞「約」は、当該数値の９０％以上、かつ、１１０％以内の数値範囲であることを意味する。例えば、「約４０塩基」とは、３６塩基以上４４塩基以内の数値範囲の塩基を指す。

本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。

以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除および置換を行うことができる。

（１） 材料と方法
（1.1）マウス
マウス突然変異体のｍｕＭｔ^－／－、Ｃｄ３ｅ^－／－およびｒａｇ１^－／－（いずれもバックグラウンドはＣ５７ＢＬ／６Ｊ系統）と、野生型マウスとは、理化学研究所生命医科学研究センター（ＩＭＳ ＲＩＫＥＮ）においてＳＰＦ条件下で繁殖・維持された。無菌（ＧＦ）野生型マウスは理化学研究所生命医科学研究センターにおいてビニールアイソレータ内で出産維持された。Ｃ５７ＢＬ／６ＮまたはＣ５７ＢＬ／６Ｊ野生型マウスは日本クレアから購入した。解析には、同腹仔か、週齢／性別が適切にマッチしたマウスかを用いた。全ての動物実験は施設内の動物実験委員会から承認されたプロトコールに従って実施された。

（1.2）フロー・サイトメトリー
細胞は、以下の抗体で染色され、フロー・サイトメトリーはＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｉａ ＩＩフロー・サイトメトリーシステム（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）で実施された。抗ＣＤ８ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ Ｊａｐａｎ株式会社）、クローン５３－６．７）、抗ＴＣＲ－β（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＨ５７－５９７）、抗ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＲＭ４－５）、抗ＣＤ６２Ｌ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＭＥＬ－１４）、抗ＣＤ１１ｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＮ４１８）、抗ＣＤ１１ｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＭ１／７０）、抗ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン１４５－２Ｃ１１）、抗ＣＤ４５．２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン１０４）、抗Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＱＡ１６Ａ０２）、抗Ｐｅｒｆｏｒｉｎ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＳ１６００９Ｂ）、抗ＣＤ９８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＲＬ３８８）、抗ＩＦＮ－γ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）、クローンＸＭＧ１．２）、抗ＣＤ４４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローンＩＭ７）、抗Ｂ２２０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローンＲＡ３－６Ｂ２）、抗ＴＮＦ－α（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローンＭＰ６－ＸＴ２２）、抗ＩｇＤ（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローン１１－２６ｃ）、抗ＴＣＲ－β（ＢＤ（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）、クローンＨ５７－５９７）、抗ＩＬ－２（ＢＤ、クローンＪＥＳ６－５Ｈ４）、抗ＰＤ－１（ＢＤ、クローンＪ４３）、抗ＣＸＣＲ５（ＢＤ、２Ｇ８）、抗ＦＡＳ（ＢＤ、クローンＪｏ２）および抗ＩｇＡ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ（コスモ・バイオ株式会社）、ポリクローナル抗体）。細胞内サイトカイン産生を測定するために、ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（商標、ＢＤ（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社））存在下ＰＭＡおよびイオノマイシン（シグマ、シグマ アルドリッチ ジャパン合同会社）で細胞を4時間刺激した。細胞内染色はＦｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｋｉｔ（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いて実施した。データはＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いて解析した。

（1.3）セルソーティング
ＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｉａ ＩＩフロー・サイトメトリーシステム（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いて野生型マウスからナイーブなＣＤ4またはＣＤ8Ｔ細胞（ＣＤ１１ｃ^－、ＣＤ１１ｂ^－、Ｂ２２０^－、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋、ＣＤ４４^{ｉｎｔ／－}、ＣＤ６２Ｌ^＋）と、セントラルメモリー（ＣＭ）ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ１１ｃ^－、ＣＤ１１ｂ^－、Ｂ２２０^－、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋、ＣＤ４４^ｈｉｇｈ、ＣＤ６２Ｌ^＋）と、エフェクターメモリー（ＥＭ）ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ１１ｃ^－、ＣＤ１１ｂ^－、Ｂ２２０^－、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋、ＣＤ４４^ｈｉｇｈ、ＣＤ６２Ｌ^－）と、Ｂ細胞（ＣＤ１１ｃ^－、ＣＤ１１ｂ^－、ＣＤ４^－、ＣＤ８^－、Ｂ２２０^＋）と、ＣＤ１１ｂ／ｃ細胞（Ｂ２２０^－、ＣＤ１１ｃ^＋および／またはＣＤ１１ｂ^＋）を、（腋窩、上腕および鼠径）リンパ節から選別した。胚中心（ＧＣ）または非ＧＣＴ細胞（ＴＣＲ－β^＋、ＣＤ４^＋、ＰＤ－１^－またはＰＤ－１^＋、ＣＸＣＲ５^－またはＣＸＣＲ５^＋）、非ＧＣＢ細胞（Ｂ２２０^＋、ＩｇＤ^ｈｉｇｈ）またはＧＣＢ細胞（Ｂ２２０^＋、ＩｇＤ^－、ＦＡＳ^＋）をパイエル板（ＰＰ）から選別した。ＩｇＡ形質細胞（ＰＣ）を小腸固有層（ＳＩＬＰ）から選別した。選別された細胞は、代謝物の解析のために、ＰＢＳで洗浄し迅速に液体窒素で凍結した。

（1.4）代謝物の解析
代謝物の解析は、Miyajima, M.ら、（Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １８：１３４２ （２０１７））に記載のとおり実施された。簡潔には、凍結された組織または細胞は破砕され超純水に溶解した。ろ過後、溶媒は真空濃縮器（ＳｐｅｅｄＶａｃ、サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）を用いて除去した。濃縮されたろ液を超純水に溶解して、代謝物の解析に供した。

（1.5）^１３Ｃ_５－標識および／または^１５Ｃ_２－標識グルタミントレーサー法
^１３Ｃ標識および／または^１５Ｃ_２－標識グルタミントレーサー法には、グルタミン不含培地に^１３Ｃ_５－標識および／または^１５Ｃ_２－標識Ｌ－グルタミン（２ｍＭ、大陽日酸株式会社）を添加した。

（1.6）代謝物の解析
代謝物の解析には液体クロマトグラフィー質量分析を用いた。液体クロマトグラフィー質量分析は、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ－四重極（Ｏｒｂｉｔｒａｐ）ハイブリッド質量分析計（ＭＳ）（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）と連結したＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００－高速液体クロマトグラフィー（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）を用いて、Ｍｉｙａｊｉｍａ，Ｍ．ら、（Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：１３４２（２０１７））に記載のとおり実施した。

（1.7）培養下での活性化
リンパ節から全Ｔ細胞またはＢ細胞を選別して、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１×ＭＥＭ ＮＥＡＡ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５０μＭ ２－メルカプトエタノール、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリン、１００Ｕ／ｍＬ ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ１６４０培地（富士フイルム和光純薬株式会社）中で２４時間または７２時間培養した。抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍＬ、３７．５１、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）およびＩＬ－２（２０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄシステムズ、フナコシ株式会社）の存在下で、抗ＣＤ３ｅ（２．５μｇ／ｍＬ、１４５－２Ｃ１１、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）が固定化された９６穴プレートを用いてＴ細胞を刺激した。抗ＩｇＭ（８μｇ／ｍＬ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅｒｃｈ、富士フイルム和光純薬株式会社）単独か、抗ＩｇＭ（８μｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ４０（１μｇ／ｍＬ、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）か、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ、シグマ、シグマ アルドリッチ ジャパン合同会社）かでＢ細胞を刺激した。

（1.8）足蹠免疫付与
マウス左後肢足蹠に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）とニワトリオバルブミンとの１：１混合乳化物（個体あたり２０μｇ）で７日間免疫付与して、同側および反対側のリンパ節を単離して代謝物の解析に供した。

（1.9）ヒト細胞の単離
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）をＦｉｃｏｌｌ勾配遠心により単離した。ＰＢＭＣｓをビオチン標識抗ＣＤ２０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン２Ｈ７）およびビオチン標識抗ＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＨＩＢ１９）で染色して、抗ビオチンＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（ミルテニーバイオテク株式会社）と結合する分画をヒトＢ細胞として選別した。結合しない分画をヒトｐａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉt（ミルテニーバイオテク株式会社）を用いてヒトＴ細胞として選別した。

（1.10）腫瘍モデル
ＰＢＳ、ＤＭＳＯ、チアガビン（マウス１匹あたり８００μｇ、東京化成工業株式会社）、フルマゼニル（マウス１匹あたり１４μｇ、東京化成工業株式会社）またはピクロトキシン（マウス１匹あたり４０μｇ、アブカム株式会社）をマウスに１日おきに腹腔内注射した。あるいは、プラセボペレットまたはＧＡＢＡペレット（ペレットあたり３１．５ｍｇ、２１日間徐放用、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（ＩＲＡ））を挿入し、１日後に、ＭＣ３８がん細胞（５×１０^５個）を右側横腹に皮下注射した。第７日に腫瘍組織を回収し、フロー・サイトメトリー解析用にコラーゲナーゼ（富士フイルム和光純薬株式会社）で消化した。腫瘍体積を表記の日に測定し、以下の式を用いて計算した。
π × （長さ×幅×高さ）／６

（1.11）統計分析
統計分析をＰＲＩＳＭ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）で実行した。両側独立ステューデントｔ－検定または反復測定分散分析（ＮＯＶＡ）を用いて分析を行った。

（２）結果
（2.1）野生型マウスにおける各種リンパ球のＧＡＢＡ含量
図２は、野生型マウスから摘出され、フロー・サイトメトリー法で単離された各種リンパ球のＧＡＢＡ含量の棒グラフである。誤差棒は各リンパ球タイプの試料間の標本平均の標準誤差を表す。標本平均の標準誤差とは、母集団からある数の標本を選ぶとき、選ぶ組み合わせによって標本平均がどの程度ばらつくかを、全ての組み合わせについての標準偏差で表したものをいう。グラフ縦軸は、小腸ＩｇＡ形質細胞（ＳＩ ＩｇＡ ＰＣ）、パイエル板（ＰＰ）の胚中心（ＧＣ）または非ＧＣ（ｎｏｎＧＣ）Ｔ細胞およびＢ細胞、リンパ節（ＬＮ）のＢ細胞（Ｂ２２０）、樹状細胞（ＤＣ）、ＣＤ４またはＣＤ８陽性エフェクターメモリー（ＥＭ）またはセントラルメモリー（ＣＭ）Ｔ細胞、ＣＤ４またはＣＤ８が陽性または陰性のナイーブＴ細胞（ｎａｉｖｅ）、ＣＤ４またはＣＤ８が陽性でＣＤ４４陽性の細胞（ＣＤ４４）の各細胞を表す。グラフ横軸は各細胞のＧＡＢＡ含量をナイーブなＣＤ４Ｔ細胞のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。図２に示すとおり、小腸ＩｇＡ形質細胞のＧＡＢＡ含量は際立って多く、その次に多いパイエル板非胚中心Ｂ細胞のＧＡＢＡ含量の２倍を超える。

（2.2）活性化リンパ節のＧＡＢＡ含量に与えるＢ細胞およびＴ細胞の免疫不全突然変異の影響
末梢での抗原刺激に対するリンパ節での適応免疫応答とＢ細胞におけるＧＡＢＡ産生との関係を古典的な足蹠免疫プロトコールを用いて検討した。完全フロイントアジュバントに乳化したオバルブミンタンパク質を野生型Ｃ５７ＢＬ/６系統のマウス（ＷＴ）、ＣＤ３欠失ホモノックアウトマウス（ＣＤ３^－／－）、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）、および、ＲＡＧ－１欠失ホモノックアウトマウス（ＲＡＧ－１^－／－）のそれぞれに接種して７日後に、活性化（免疫した足蹠と同側（ｉｐｓｉ））リンパ節および非活性化（反対側（ｃｏｎｔｒａ））リンパ節の組織のＧＡＢＡ含量を比較した棒グラフを図３に示す。誤差棒は各リンパ節組織の試料間のＧＡＢＡ含量の標準偏差を表す。グラフの縦軸は、各組織のＧＡＢＡ含量を野生型マウス反対側リンパ節のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。横軸は、各組織が由来したリンパ節を表す。図３の「＊＊」、すなわち、ＣＤ３欠失ホモノックアウトマウス（ＣＤ３^－／－）の免疫付与した後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のリンパ節組織のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１１であった。図３の「＊＊＊＊」、すなわち、野生型マウス（ＷＴ）の免疫付与した後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のリンパ節組織のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．０００１未満であった。Ｔ細胞およびその細胞系譜に属する細胞がほとんど分化しないＣＤ３欠失ホモノックアウトマウス（ＣＤ３^－／－）では野生型マウス（ＷＴ）に次ぐＧＡＢＡ含量が検出されたが、Ｂ細胞およびその細胞系譜に属する細胞がほとんど分化しない、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）、および、ＲＡＧ－１欠失ホモノックアウトマウス（ＲＡＧ－１^－／－）では、同側リンパ節でも反対側リンパ節でも、ほとんどＧＡＢＡが検出されなかった。したがって同側リンパ節でＧＡＢＡを含む細胞は活性化Ｂ細胞またはその細胞系譜に属する細胞であることが示唆された。

（2.3）活性化リンパ節のさまざまな細胞タイプにおけるＧＡＢＡ含量
免疫付与した野生型マウスの後肢足蹠と同側（ｉｐｓｉ）および反対側（ｃｏｎｔｒａ）のリンパ節組織からフロー・サイトメトリー法で選別されたＣＤ４、ＣＤ８およびＢ２２０陽性細胞（それぞれ、ＣＤ４、ＣＤ８およびＢ２２０）と、反対側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｃｏｎｔｒａ ＬＮ）、同側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｉｐｓｉ ＬＮ）および同側マクロファージ/樹状細胞（ｉｐｓｉ Ｍｆ／ＤＣ）とのＧＡＢＡ含量を示す棒グラフを図４に示す。誤差棒は各選別細胞の試料間のＧＡＢＡ含量の標準偏差を表す。ＧＡＢＡ含量の縦軸は、各選別細胞のＧＡＢＡ含量を反対側ＣＤ４陽性細胞のＧＡＢＡ含量を１倍とする相対値を表す。横軸は、各選別細胞の種類を表す。図４の「＊」、すなわち、免疫付与した後肢足蹠と同側の全リンパ節組織から選別されたＣＤ４陽性細胞（ｉｐｓｉ ＣＤ４）および反対側のリンパ節組織から選別されたＣＤ４陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ ＣＤ４）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．０２３２であった。図４の「＊＊」、すなわち、同側の全リンパ節組織から選別されたＢ２２０陽性細胞（ｉｐｓｉ Ｂ２２０）および反対側のリンパ節組織から選別されたＢ２２０陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ Ｂ２２０）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１５であった。図４の「＊＊＊」、すなわち、同側の全リンパ節組織から選別されたＣＤ８陽性細胞（ｉｐｓｉ ＣＤ８）および反対側のリンパ節組織から選別されたＣＤ８陽性細胞（ｃｏｎｔｒａ ＣＤ８）のＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００１０であった。図４の「＊＊＊＊」、すなわち、反対側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｃｏｎｔｒａ ＬＮ）と同側全リンパ節（ｔｏｔａｌ ｉｐｓｉ ＬＮ）とのＧＡＢＡ含量の有意差のｐ値は、０．００６２であった。図４に示すとおり、活性化リンパ節の組織のさまざまな細胞タイプのうち、Ｂ２２０を発現する細胞、すなわち、Ｂ細胞およびその細胞系譜に属する細胞で最もＧＡＢＡ含量が多かった。そこで、活性化リンパ節組織のＧＡＢＡの主な供給源はＢ細胞およびその細胞系譜に属する細胞である。

（2.4）Ｂ細胞免疫不全がＳＰＦ環境下のＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に与える影響
図５は、ＳＰＦ環境下のＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）または野生型マウス（ＷＴ）に接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長（腫瘍病巣の体積）の経時的変化を調べた折れ線グラフである。誤差棒は各測定日のマウス個体腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。図５に示すとおり、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスのほうが野生型マウスより腫瘍の成長は抑制された。

（2.5）無菌条件下で飼育されたＢ細胞分化不全がマウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼす影響
図６は、無菌条件下で飼育されたＢ細胞分化不全がマウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長（腫瘍病巣の体積）に及ぼす影響を示す折れ線グラフである。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ）と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。図６に示すとおり、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスのほうが野生型マウスより腫瘍の成長を抑制した。

（2.6）無菌条件下で飼育されたＳＰＦ環境下のＢ細胞分化不全マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ徐放ペレット処置の影響
図７は、無菌条件下で飼育されたＳＰＦ環境下のＢ細胞分化不全マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ徐放ペレット処置の影響を示す折れ線グラフ。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。縦軸は、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））と、野生型マウス（ＷＴ）との腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。図７に示すとおり、野生型マウス（ＷＴ）と比較してプラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））では腫瘍の成長が抑制された。しかし、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））では、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））と比較して腫瘍の成長を促進した。すなわち、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスでの腫瘍の成長抑制効果をＧＡＢＡ徐放ペレットが阻害した。

（2.7）Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の活性化に及ぼす影響
図８は、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の活性化に及ぼす影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図である。図８の左の上下はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））、中央および右はプラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））のフロー・サイトメトリーでＣＤ８陽性細胞をゲーティングした２パラメーターヒストグラムである。上段は、縦軸がＣＤ９８の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度を表す。下段は、縦軸がＳｃａ－１の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度を表す。ボックスの近傍の数値は、各条件のＣＤ８陽性細胞のうちボックス内の蛍光強度の細胞の百分率を表す。図８に示すとおり、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））と比較してプラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））では、ＣＤ９８またはＳｃａ１陽性、かつ、ＴＣＲｂ陽性の腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞が増加した。しかし、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））では、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））と比較して、ＣＤ９８またはＳｃａ１陽性、かつ、ＴＣＲｂ陽性の腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞は減少し、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））よりも減少した。すなわち、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスによる腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の増加をＧＡＢＡ徐放ペレットが阻害した。

（2.8）Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の細胞殺傷活性に及ぼす影響
図９は、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の細胞殺傷活性に及ぼす影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図である。図９の左の上下はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ））、中央および右はプラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ（＋ｐｌａｃｅｂｏ）またはｍＭＴ（＋ＧＡＢＡ））のフロー・サイトメトリーでＣＤ８陽性細胞をゲーティングした２パラメーターヒストグラムである。上段は、縦軸がパーフォリンの蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度を表す。下段は、縦軸がＧｒｚＢ（グランザイムＢ）の蛍光強度、横軸がＴＣＲｂの蛍光強度を表す。ボックスの近傍の数値は、各条件のＣＤ８陽性細胞のうちボックス内の蛍光強度の細胞の百分率を表す。

図１０Ａは、図９の２パラメーターヒストグラムにもとづいて、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞のパーフォリン陽性細胞の割合に及ぼす影響を示す棒グラフである。縦軸はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍＭＴ＋ｐｌａｃｅｂｏまたはｍＭＴ＋ＧＡＢＡｐ）のパーフォリン陽性細胞の百分率を表す。図１０Ａの「＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）とのパーフォリン陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００６であった。図１０Ａの「＊＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）とのパーフォリン陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００１２であった。

図１０Ｂは、図９の２パラメーターヒストグラムにもとづいて、Ｂ細胞分化不全マウスへのＧＡＢＡ徐放ペレット処置が腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞のグランザイム陽性細胞の割合に及ぼす影響を示す棒グラフである。縦軸はプラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）、プラセボペレットまたはＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏまたはｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）のグランザイム陽性細胞の百分率を表す。図１０Ｂの「＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）とのグランザイム陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．０２２であった。図１０Ｂの「＊＊」、すなわち、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）とのグランザイム陽性細胞の割合の百分率の有意性のｐ値は０．００１２であった。

図９、図１０Ａおよび図１０Ｂに示すとおり、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）と比較してプラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）では、パーフォリンまたはグランザイム陽性、かつ、ＴＣＲｂ陽性の細胞傷害性腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞が増加した。しかし、ＧＡＢＡ徐放ペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ＧＡＢＡｐ）では、プラセボペレットを処置したＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウス（ｍｕＭＴ^－／－＋ｐｌａｃｅｂｏ）と比較して、パーフォリンまたはグランザイム陽性、かつ、ＴＣＲｂ陽性の細胞傷害性腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞は減少し、プラセボペレットを処置した野生型マウス（ＷＴ＋ｐｌａｃｅｂｏ）と同程度まで減少した。すなわち、ＩｇＭ欠失ホモノックアウトマウスによる細胞傷害性腫瘍浸潤ＣＤ８陽性細胞の増加をＧＡＢＡ徐放ペレットが阻害した。

（2.9）野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響
図１１は、野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響を示す折れ線グラフである。縦軸はチアガビン（ＧＡＴ（トランスポーター）阻害剤）投与動物（Ｔｉａｇａｂｉｎ）、ＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）およびピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）の腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。最終測定日に最も腫瘍体積の大きい曲線はチアガビン（ＧＡＴ（トランスポーター）阻害剤）投与動物の腫瘍体積の経時的変化を表し、２番目に腫瘍体積の大きい曲線はＰＢＳ投与動物の腫瘍体積の経時的変化を表し、最も腫瘍体積の小さい曲線はピクロトキシン投与動物の腫瘍体積の経時的変化を示す。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。図１１の「＊＊＊」、すなわち、ＭＣ３８細胞接種後２３日に測定したＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）とピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は０．０００３であった。図１１の「＊＊＊＊」、すなわち、ＭＣ３８細胞接種後２５日および２７日に測定したＰＢＳ投与動物（ＰＢＳ）とピクロトキシン投与動物（Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は、いずれも、０．０００１未満であった。図１１に示すとおり、チアガビンは腫瘍体積の増加にほとんど影響がないのに比べて、ピクロトキシンは腫瘍体積の増加を有意に抑制した。

（2.10）野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響
図１２は、野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍の成長に及ぼすＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬の影響を示す折れ線グラフである。縦軸はフルマゼニル（ＧＡＢＡ_Ａレセプター阻害剤）投与動物またはＰＢＳ投与動物の腫瘍の体積（ｍｍ^３）を表す。横軸は、腫瘍体積の測定日を表す。最終測定日に最も腫瘍体積の小さい曲線はフルマゼニル投与動物（Ｆｌｕｍａｚｅｎｉｌ）の腫瘍体積の経時的変化を示し、最も腫瘍体積の大きい曲線はＤＭＳＯ投与動物（ＤＭＳＯ）の腫瘍体積の経時的変化を示す。誤差棒は各測定日の腫瘍体積の標準偏差を表す。図１２に示すとおり、フルマゼニルは腫瘍体積の増加を抑制した。図１２の「＊＊」、すなわち、最終測定日に測定したＤＭＳＯ投与動物（ＤＭＳＯ）とフルマゼニル投与動物（Ｆｌｕｍａｚｅｎｉｌ）との腫瘍の体積の有意差のｐ値は、０．００９２であった。

（2.11）野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤するＣＤ８陽性細胞の組成に対するピクロトキシンの影響
図１３は、野生型マウスに接種されたＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤するＣＤ８陽性細胞の組成に対するピクロトキシンの影響を示す２パラメーターヒストグラムの組み合わせ図である。左はＣＤ８の蛍光強度を横軸に、ＣＤ４５－２の蛍光強度を縦軸に表す野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラムである。右下は、ピクロトキシン処理した野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラムである。右上は対照実験の野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞の２パラメーターヒストグラムである。右上および右下は、ともに、側方散乱光の強度を縦軸に、前方散乱光の強度を横軸に表す。ゲーティング範囲の近傍の数字は測定された細胞全てのうちゲーティング範囲内の細胞の百分率を表す。図１３に示すとおり、ピクロトキシン処理した野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞は、対照実験の野生型マウスに接種したＭＣ３８細胞由来の腫瘍に浸潤した細胞に比べて、側方散乱光も前方散乱光も強い細胞の割合が多かった。これはピクトロトキシン処理したマウスの腫瘍に浸潤したＣＤ８陽性細胞が対照実験のマウスの腫瘍に浸潤したＣＤ８陽性細胞に比べて、細胞が大きくおよび細胞内部構造が複雑であることを示す。

図１４は、図１３の２パラメーターヒストグラムから算出したＣＤ８陽性で、かつ、側方散乱光および前方散乱光の強度も高い腫瘍浸潤Ｔ細胞の百分率を示す棒グラフである。縦軸は、ＣＤ８陽性で、かつ、側方散乱光および前方散乱光の強度も高いＴ細胞の百分率を表す。左は対照実験のマウス（Ｃｔｒ）の腫瘍浸潤細胞の百分率を、右はピクロトキシン処理マウス（Ｐｉｃ）の腫瘍浸潤細胞の百分率を表す。誤差棒は各細胞集団の細胞数の標準偏差を表す。図１３及び１４の結果から、図１１に示されるピクトロトキシン処理による腫瘍体積増加の抑制は、腫瘍に浸潤したＣＤ８陽性細胞の大型化及び細胞構造の複雑化と関連することを示唆する。

本発明の抗がん剤およびがんの治療方法は、Ｂ細胞による細胞傷害性Ｔ細胞抑制作用を阻害または低減するという全く新しい治療機序に基づくため、従来のすべての抗がん剤およびがんの治療方法と併用することができる。また、従来神経伝達物質として広範に研究されてきたＧＡＢＡの阻害薬を用いるため、副作用のおそれが少ない点で優れている。

Claims (15)

1. Ｂ細胞による細胞傷害性Ｔ細胞抑制作用を阻害または低減する、抗がん剤。
2. 前記Ｂ細胞は抗原刺激により活性化されたＢ細胞である、請求項１に記載の抗がん剤。
3. Ｔ細胞におけるガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を介するシグナル伝達の阻害薬を含む、請求項１または２に記載の抗がん剤。
4. 前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、ヒトＴ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターの発現および／または機能を抑制または低減する阻害薬である、請求項３に記載の抗がん剤。
5. 前記Ｔ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターは、ＧＡＢＡ_Ａレセプター、および、ＧＡＢＡ－ρレセプターのうちの少なくとも１つである、請求項４に記載の抗がん剤。
6. 前記Ｔ細胞で発現するＧＡＢＡレセプターは、ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドからなる、請求項４または５に記載の抗がん剤。
7. 前記ヒトＴ細胞で発現するサブユニットポリペプチドは、ヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類である、請求項６に記載の抗がん剤。
8. 前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のサブユニットポリペプチドの発現を抑制または低減する、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ誘導性核酸もしくはリボザイムまたはそれらの発現ベクターを含む、請求項７に記載の抗がん剤。
9. 前記Ｔ細胞におけるＧＡＢＡを介するシグナル伝達の阻害薬は、前記ヒトＴ細胞で発現するヒトα１、α５、β１、πおよびρ２からなる群から選択される少なくとも１種類のＧＡＢＡレセプターのサブユニットポリペプチドと特異的に結合して、該ＧＡＢＡレセプターの機能を抑制または低減する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類を含む、請求項７に記載の抗がん剤。
10. 前記ＧＡＢＡ_Ａレセプターの阻害薬が、フルマゼニル、Ｒｏ１５－４５１３、サルマゼニル、シクトキシン、エナントトキシン、ペンチレンテトラゾール、ピクロトキシン、ツジョン、リンデン、ビククリン、ガバジンおよびこれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１種類である、請求項５に記載の抗がん剤。
11. 前記ＧＡＢＡ－ρレセプターの阻害薬が、（１，２，５，６－テトラヒドロピリジン－４－イル）メチル・ホスフィン酸（ＴＰＭＰＡ）およびその誘導体からなる群から選択される少なくとも１種類である、請求項５に記載の抗がん剤。
12. Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬、Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分泌の阻害薬、および／または、遊離ＧＡＢＡの捕捉薬を含む、請求項１または２に記載の抗がん剤。
13. 前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ生合成の阻害薬は、グルタミン酸デカルボキシラーゼおよびアルデヒドデヒドロゲナーゼ９ファミリーメンバーＡ１の発現および／または酵素活性の阻害剤であり、および／または、前記Ｂ細胞におけるＧＡＢＡ分解の促進薬は４－アミノ酪酸アミノ基転移酵素の発現および／または酵素活性の促進剤であり、および／または、前記遊離ＧＡＢＡの捕捉薬は、遊離ＧＡＢＡに特異的に結合するタンパク質、遊離ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片からなる群から選択される少なくとも１種類である、請求項９に記載の抗がん剤。
14. ＧＡＢＡと特異的に結合する抗体、特異的結合パートナーおよび／またはそれらの断片を含む、請求項１または２に記載の抗がん剤。
15. Ｂ細胞に対する細胞傷害性を有する、抗体、特異的結合パートナーまたはそれらの断片、および／または、Ｂ細胞の除去剤を含む、請求項１または２に記載の抗がん剤。

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