JP2023024618A

JP2023024618A - がんの処置のためのトランス－［テトラクロロビス（１ｈ－インダゾール）ルテネート（ｉｉｉ）］の使用

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Publication number: JP2023024618A
Application number: JP2022204252A
Authority: JP
Inventors: ベイクウェルスザンヌ; Bakewell Suzanne; セスラマンジョティ; Sethuraman Jyothi
Original assignee: Bold Therapeutics Inc
Current assignee: Bold Therapeutics Inc
Priority date: 2016-03-01
Filing date: 2022-12-21
Publication date: 2023-02-16
Also published as: IL261384B2; US11633380B2; KR20180130509A; WO2017151775A1; US20240091196A1; CN109195600A; JP7513574B2; EP3423055A4; JP2021167360A; KR20220075450A; KR102413412B1; JP2019507166A; US10821095B2; WO2017151775A9; WO2017151762A1; IL299223A; JP6997919B2; US20190038601A1; AU2017227705A9; IL261384A

Abstract

【課題】がんの処置のためのトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテネート（ＩＩＩ）］の使用の提供【解決手段】ＩＴ－１３９（ナトリウムトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテネート（ＩＩＩ）］）は、静脈内投与される小分子化合物である。前臨床抗腫瘍および作用機序の研究では、ＩＴ－１３９は、標準抗がん剤（例えば、白金、ビンカアルカロイド、タキサン、アントラサイクリン）に対して抵抗性である腫瘍タイプを含む幅広い範囲の腫瘍タイプに対して活性を示した。この活性は、ＧＲＰ７８経路を標的とする、ＩＴ－１３９の新規な作用機序から生じると考えられる。ＧＲＰ７８の上方制御は、非常に重要ながん細胞生存経路であることが見出された。ＩＴ－１３９を使用してＧＲＰ７８を下方制御することによって、この抵抗経路を除去して、化学療法およびがん免疫療法剤を、がんの処置においてより有効にすることができる。【選択図】なし

Description

発明の分野
本発明は、一般に、トランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテネート（ＩＩＩ）］およびがんの処置におけるその使用に関する。

発明の背景
近年、がんの処置には多くの進歩が遂げられている。しかし、転移性疾患のほとんどの場合、腫瘍細胞は、抗がん剤によって引き起こされた損傷を克服して生き残る機序を発達させるので、処置は根治的ではない。腫瘍細胞のこれらの生存／抵抗機序を標的とし、克服することは、活発な研究の対象である抗がん標的化の領域である。したがって、がん、特に抵抗性を処置するための治療剤を開発する未だに対処されていない必要性が依然としてある。

発明の概要
本発明の化合物およびそれらの組成物は、がんの処置に有用であり、特に腫瘍細胞の生存および抵抗性の機序を標的とするのに有用であることが今や見出された。

より具体的には、ＩＴ－１３９は、腫瘍細胞におけるストレスによるＧＲＰ７８の上方制御を抑制することが今や見出された。この効果は、ＩＴ－１３９が正常細胞におけるＧＲＰ７８発現に影響を及ぼさないので、腫瘍細胞に特異的である。ストレスを受けていない条件およびストレスを受けた条件下の、ＩＴ－１３９を用いる正常細胞の処置によって、１）ＩＴ－１３９は、非ストレス状態の正常細胞では、基礎ＧＲＰ７８レベルに影響を及ぼさないこと、および２）ＩＴ－１３９は、これらの同じ正常細胞において、ストレスに起因するＧＲＰ７８の上方制御に影響を及ぼさないことが示された。したがって、ＩＴ－１３９は、ストレス条件にかかわらず、正常細胞におけるＧＲＰ７８レベルに影響を与えないと考えられる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
がんの処置を必要とする患者においてがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、化学療法用剤またはＰＤ－１抗体以外のがん免疫療法剤と組み合わせて投与することを含む、方法。
（項目２）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記化学療法用剤と組み合わせて投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記がん免疫療法剤と組み合わせて投与される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記化学療法用剤または前記がん免疫療法剤が前記患者に投与された後に、前記患者に投与される、項目１、２または３のいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記化学療法用剤が、ゲムシタビン、ナノ粒子アルブミンパクリタキセル、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ソラフェニブ、エベロリムスおよびベムラフェニブからなる群から選択される、項目１または２のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記がん免疫療法剤が、サイトカイン、チェックポイント阻害剤、およびＰＤ－１抗体ではない抗体からなる群から選択される、項目１、３または４のいずれかに記載の方法。（項目７）
前記がん免疫療法剤が、インターフェロン、インターロイキン、ＰＤ－Ｌ１抗体、アレムツズマブ、イピリムマブ、ペンブロリズマブ，オファツムマブ、アテゾリズマブおよびリツキシマブからなる群から選択される、項目１、３または４のいずれかに記載の方法。（項目８）
前記がんが、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、精巣、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞癌、未分化癌、乳頭状癌、精上皮腫、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝癌および胆汁道、腎癌、骨髄障害、リンパ系障害、ホジキン、ヘアリー細胞、頬側口腔および咽頭（口腔）、唇、舌、口、咽頭、小腸、結腸－直腸、大腸、直腸、脳および中枢神経系、ならびに白血病から選択されるから選択される、項目１、２、３、４、５、６または７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物の前記投与が、前記化学療法用剤単独または前記がん免疫療法剤単独の投与と比較してＧＲＰ７８の量の低減をもたらす、項目１、２、３、４、５、６または７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記がんが、膵臓がんである、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記がんが、神経内分泌がんである、項目８に記載の方法。
（項目１２）
前記化学療法用剤が、ゲムシタビンである、項目２に記載の方法。
（項目１３）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記ゲムシタビンと同時に前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物、および前記ゲムシタビンが、互いに約２４時間以内に前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記ゲムシタビンが前記患者に投与される前に、前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記ゲムシタビンが前記患者に投与される少なくとも約１２時間前に、前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１７）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記ゲムシタビンが前記患者に投与される少なくとも約２４時間前に、前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１８）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記ゲムシタビンが前記患者に投与される少なくとも約４８時間前に、前記患者に投与される、項目１２に記載の方法。
（項目１９）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記がん免疫療法剤が前記患者に投与される前に、前記患者に投与される、項目３に記載の方法。
（項目２０）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記がん免疫療法剤が前記患者に投与される少なくとも約１２時間前に、前記患者に投与される、項目３に記載の方法。
（項目２１）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記がん免疫療法剤が前記患者に投与される少なくとも約２４時間前に、前記患者に投与される、項目３に記載の方法。
（項目２２）
前記ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物が、前記がん免疫療法剤が前記患者に投与される少なくとも約４８時間前に、前記患者に投与される、項目３に記載の方法。

図１は、Ａ）ストレスを受けていない細胞、およびＢ）タプシガルギンでストレスを受けた細胞における、ＩＴ－１３９を用いる処置前および処置後のＧＲＰ７８タンパク質レベルを示す。

図２は、Ａ）非ストレスを受けていない細胞、およびＢ）タプシガルギンでストレスを受けた細胞における、ＩＴ－１３９を用いる処置前および処置後のＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベルを示す。

図３は、ＩＴ－１３９およびＰＤ－１抗体を用いる処置後の、皮下同系モデルからの結果を示す。

図４は、Ａ）対照未処理細胞、およびＢ）ＩＴ－１３９で処理されたＨＣＴ１１６細胞における、ＨＣＴ１１６細胞の透過型電子顕微鏡法画像を示す。

図５は、Ａ）ｃｈｉｐシーケンスの結果、Ｂ）ゲル電気泳動法によるＰｏｌＩＩプライマーの定量、およびＣ）ＧＲＰ７８プライマーの定量における、ＧＲＰ７８プロモーターへのＲＮＡポリメラーゼＩＩの結合に対するＩＴ－１３９の効果を示す。

図６は、Ａ）食塩水、およびＢ）ＩＴ－１３９で（ｅｘｖｉｖｏ）処理したＨＴ－２９腫瘍の免疫組織化学染色を示す。

図７は、ＩＴ－１３９処理を伴うおよび伴わない、ストレスを受けた条件およびストレスを受けない条件における腎臓２９３Ｔ細胞の処置を示す。

図８は、Ａ）ＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベル、およびＢ）相対的なＧＲＰ７８のｍＲＮＡ発現に関する、ＩＴ－１３９処理を伴うおよび伴わない、ストレスを受けた条件およびストレスを受けていない条件における腎臓２９３Ｔ細胞の処理を示す。

図９は、複数の細胞株におけるＩＴ－１３９を用いる処理後のミトコンドリア電位の効果を示す。

図１０は、ＩＴ－１３９を用いる処理後の正常な末梢血単核細胞の細胞生存能を示す。

図１１は、ＩＬ－２またはＩＬ－２およびＩＴ－１３９を用いる処理後の正常な末梢血単核細胞の細胞生存能を示す。

図１２は、レーン１～５についてはそれぞれ、ＤＭＳＯで処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９で処理した場合、１μＭのタプシガルギン（Ｔｇ）で処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９と１μＭのＴｇで同時に処理した場合、１μＭのＴｇで６時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で２４時間処理した場合、ならびに１５０ｍＭのＩＴ－１３９で２４時間、その後１ｍＭのＴｇで２４時間処理した場合のＧＲＰ７８タンパク質の発現レベルを示す。レーン６～１２は、同じ処理を、さらに２４時間インキュベートしたものである。

図１３は、ｉｎｖｉｔｒｏで４８時間、ＤＭＳＯ（対照）で処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９で処理した場合、５μＭのゲムシタビンで処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９と５μＭのゲムシタビンで同時に処理した場合、５μＭのゲムシタビンで２４時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で処理した場合、ならびに１５０μＭのＩＴ－１３９、その後５μＭのゲムシタビンで２４時間処理した場合のＡＳＰＣ２０細胞を示す。

図１４は、ｉｎｖｉｔｒｏで４８時間、ＤＭＳＯ（対照）で処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９で処理した場合、５μＭのゲムシタビンで処理した場合、１５０μＭのＩＴ－１３９と５μＭのゲムシタビンで同時に処理した場合、５μＭのゲムシタビンで２４時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で処理した場合、ならびに１５０μＭのＩＴ－１３９、その後５μＭのゲムシタビンで２４時間処理した場合のＰＡＮＣ－１細胞を示す。

図１５は、Ａ２０マウスモデルにおける８つの処理グループの腫瘍体積中央値を示す。

図１６は、腫瘍におけるエフェクターＴ細胞の中央値％を示す散布図を示す。

図１７は、腫瘍における制御因子Ｔ細胞の中央値％を示す散布図を示す。

本発明のある特定の実施形態の詳細な説明
１．一般的説明
ＩＴ－１３９（ナトリウムトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテネート（ＩＩＩ）］）は、静脈内投与される小分子化合物である。ＩＴ－１３９は、ＫＰ１３３９またはＮＫＰ１３３９としても公知である。前臨床抗腫瘍および作用機序研究において、ＩＴ－１３９は、標準抗がん剤（例えば、白金、ビンカアルカロイド、タキサン、アントラサイクリン）に対して抵抗性である腫瘍タイプを含む幅広い腫瘍タイプに対して活性を示した。この活性は、ＧＲＰ７８経路を標的とする、ＩＴ－１３９の新規な作用機序から生じると考えられる。

ＢｉＰまたはＨＳＰＡ５とも呼ばれるＧＲＰ７８（グルコース制御タンパク質７８）は、小胞体（ＥＲ）ストレス応答の主な制御因子である。ＧＲＰ７８は、腫瘍細胞の生存、抗アポトーシスおよび治療抵抗性においても、非常に重要な役割を果たしている。正常細胞では、ＧＲＰ７８は、低レベルで見出され、小胞体の内腔に位置している。ストレスを受けた細胞では、ＧＲＰ７８は著しく上方制御され、ＥＲの外側の細胞質内、核、ミトコンドリア内、細胞表面上にも見出され、分泌される。多種多様ながんタイプにおけるＧＲＰ７８発現の増大は、腫瘍細胞の増殖、転移、血管新生、ならびに腫瘍細胞の生存および抵抗性の増大と相関するとされている。高レベルのＧＲＰ７８タンパク質は、シスプラチン、５－ＦＵ、テモゾロミド、ビンブラスチン、パクリタキセル、ボルテゾミブ、ソラフェニブ、カンプトテシン、エトポシド、およびドキソルビシンなどの薬剤に対する抵抗性と相関するとされている。さらに、これらの薬剤のいくつかによって腫瘍細胞株を処理すると、ＧＲＰ７８タンパク質がさらに上方制御されることになる。これらの抗がん薬物とは対照的に、ＩＴ－１３９は、腫瘍細胞におけるＧＲＰ７８の上方制御を抑制する。ＩＴ－１３９は、ＧＲＰ７８の転写を抑制する。この抑制は、腫瘍細胞に対して選択的であり、ストレス下の腫瘍細胞において最も顕著である。ＩＴ－１３９は、ストレスを受けていない条件下であろうとストレスを受けた条件下であろうと、正常細胞においてはＧＲＰ７８レベルに対して効果がない。ＧＲＰ７８の上方制御は、抵抗性の非常に重要な原因の１つなので、ＩＴ－１３９は、他の抗がん剤と組み合わされると相乗作用を示すと予想された。前臨床研究では、ＩＴ－１３９は、現在までに試験されたあらゆる異なるクラスの抗がん薬物と組み合わせて使用されると、著しい相乗作用を有することが示されている。

ＧＲＰ７８は、Ｈｓｐ７０ファミリーの熱ショックタンパク質のメンバーである。正常細胞では、ＧＲＰ７８は、主に小胞体（ＥｎｄＲｅｔ）に局在し、そこでＥＲ膜を介する移行および分解のためのミスフォールドタンパク質の標的化を含むタンパク質の正しいフォールディングおよびアセンブリを容易にする。Sitia, R.およびI. Braakman、Quality control in the endoplasmic reticulum protein factory. Nature、２００３年、４２６巻（６９６８号）：８９１～４頁、ならびにXu, C.、B. Bailly-Maitre、およびJ.C. Reed、Endoplasmic reticulum stress: cell life and death decisions. J Clin Invest、２００５年、１１５巻（１０号）：２６５６～６４頁を参照されたい。、ストレスを受けていない正常細胞は、低レベルのミスフォールドタンパク質を有し、低い基礎レベルのＧＲＰ７８を発現する。ストレスを受けた条件下では、より高いレベルのミスフォールドタンパク質が産生され、アンフォールドタンパク質応答（ＵＰＲ）が活性化される。ＵＰＲは、プロテインキナーゼＲＮＡ様小胞体キナーゼ（ＰＥＲＫ）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）およびイノシトール要求性酵素１（ＩＲＥ１）の３つのＥｎｄＲｅｔ膜貫通受容体によって媒介される。ストレスを受けていない細胞では、３つすべてのＥＲストレスシャペロンは、ＧＲＰ７８の結合によって不活性形態で維持される。Ma, Y.およびL.M. Hendershot、The role of the unfolded protein response in tumour development: friend or foe? Nat Rev Cancer、２００４年、４巻（１２号）：９６６～７７頁を参照されたい。

ストレス下では、ミスフォールドタンパク質の数が増大し、ＧＲＰ７８は、それらのミスフォールドタンパク質に結合して、これらの膜貫通タンパク質を放出し、その結果、ＥＲストレス標的遺伝子の翻訳減弱および上方制御を含む下流活性のカスケードが開始する。Lai, E.、T. Teodoro、およびA. Volchuk、Endoplasmic reticulum stress: signaling the unfolded protein response. Physiology (Bethesda)、２００７年、
２２巻、１９３～２０１頁を参照されたい。これらの機能によって、ＧＲＰ７８は、ストレス条件下での細胞生存の主な制御因子となる。

ｉｎｖｉｖｏモデルでは、ホモ接合性ＧＲＰ７８（－／－）ノックアウトが胚致死性であり、一方で、ヘテロ接合性のＧＲＰ７８（＋／－）ノックアウトマウスが作製され、正常に機能することが示されている。これらのデータは、いくつかのＧＲＰ７８が胚発生に必要であるが、正常細胞は、有害作用なしに高度なＧＲＰ７８下方制御に耐え得ることを示唆している。Luo, S.ら、GRP78/BiP is required for cell proliferation and protecting the inner cell mass from apoptosis during early mouse embryonic development. Mol Cell Biol、２００６年、２６巻（１５号）：５６８８
～９７頁を参照されたい。

腫瘍細胞では、ＧＲＰ７８は、非常に重要な腫瘍細胞の生存および抵抗性因子の役割を担う。がん細胞におけるＧＲＰ７８は、ＧＲＰ７８レベルが、ストレスを受けた正常細胞よりも腫瘍細胞において著しく高く、ＧＲＰ７８の局在パターンが、ストレスを受けた正常細胞のパターンとは異なっているという点で、正常細胞とは異なる。ＧＲＰ７８が主にＥｎｄＲｅｔに限局されたままである正常細胞とは異なり、腫瘍細胞は、細胞質、核、ミトコンドリア、および細胞表面において著しいレベルのＧＲＰ７８を有する。さらに、腫瘍細胞は、ＧＲＰ７８を腫瘍周辺環境に分泌する。がん細胞におけるＧＲＰ７８の高いレベルと異常な局在の組合せによって、腫瘍細胞増殖が増大する。腫瘍におけるＧＲＰ７８発現レベルの増大は、肺、胃、乳房、肝細胞、甲状腺、メラノーマ、神経膠腫、結腸直腸、膵臓、膀胱および様々な白血病を含む多種多様ながんのタイプにおいて示されている（表１）。これらの腫瘍タイプでは、ＧＲＰ７８を検出するための方法は可変であり、腫瘍から誘導された細胞株または患者腫瘍検体のいずれかにおいて、ＧＲＰ７８タンパク質レベルについては免疫組織化学（ＩＨＣ）分析、ウエスタンブロット分析、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベルについてはノーザンブロット分析またはＲＴ－ＰＣＲが利用されてきた。

腫瘍生検研究では、腫瘍細胞におけるＧＲＰ７８発現レベルは、隣接する非がん性組織と比較して高かった。

肝細胞癌（ＨＣＣ）研究では、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡは、隣接する非がん性組織と比較して、１３のＨＣＣ組織のうち１１において著しく高かった（ｐ＜０．０５）［１４］。さらに、ソラフェニブに対するＨＣＣ細胞の感受性は、ＧＲＰ７８のｓｉＲＮＡ実験によって決定されたところ、ＧＲＰ７８レベルと相関している。Chiou, J.F.ら、Glucose-regulated protein 78 is a novel contributor to acquisition of resistance
to sorafenib in hepatocellular carcinoma. Ann Surg Oncol、２０１０年、
１７巻（２号）：６０３～１２頁を参照されたい。

脳腫瘍では、ＩＨＣおよびウエスタンブロット研究によって、ＧＲＰ７８は、正常な成体脳と比較して、悪性神経膠腫検体およびヒト悪性神経膠腫細胞株において著しく増大することが明らかになっている。この研究では、高いＧＲＰ７８レベルが、腫瘍細胞増殖の速度増大と相関することも示された。Pyrko, P.ら、The unfolded protein response regulator GRP78/BiP as a novel target for increasing chemosensitivity
in malignant gliomas. Cancer Res、２００７年、６７巻（２０号）：９８０９～１６頁およびVirrey, J.J.ら、Stress chaperone GRP78/BiP confers chemoresistance to tumor-associated endothelial cells. Mol Cancer Res、２００８年、６巻（８号）：１２６８～７５頁を参照されたい。

新しい生検単離物を使用するメラノーマ研究では、メラノーマ腫瘍細胞は、正常なメラニン形成細胞と比較して、増加したＧＲＰ７８を発現することが示された。さらに、新しいメラノーマ腫瘍単離物は、ウエスタンブロットによると、培養したメラノーマ細胞株と比較して最大４倍高いレベルのＧＲＰ７８を有していた。Jiang, C.C.ら、Glucose-regulated protein 78 antagonizes cisplatin and adriamycin in human melanoma
cells. Carcinogenesis、２００９年、３０巻（２号）：１９７～２０４頁を参照されたい。

乳がん研究では、ＩＨＣによると、前処理腫瘍検体のおよそ６５％が高レベルのＧＲＰ７８を発現した。Lee, E.ら、GRP78 as a novel predictor of responsiveness to chemotherapy in breast cancer. Cancer Res、２００６年、６６巻（１６号）：７８４９～５３頁を参照されたい。このことは、Fernandezらによって過去に公開され
た報告書と一致しており、Fernandezらは、０／５の良性乳房病変と比較して、３／５の
エストロゲン受容体陽性乳腺腫瘍および６／９のエストロゲン受容体陰性乳腺腫瘍において、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡの１．８～２０倍過剰発現を実証した。Fernandez, P.M.ら、Overexpression of the glucose-regulated stress gene GRP78 in malignant but not benign human breast lesions. Breast Cancer Res Treat、２０００
年、５９巻（１号）：１５～２６頁を参照されたい。

甲状腺がんの研究では、Wangらは、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲおよびウエスタンブロットによって査定される通り、甲状腺がん細胞が、高い基礎レベルのＧＲＰ７８を発現することを示した。さらに、プロテオソーム阻害に対する甲状腺がん細胞の感受性は、ＧＲＰ７８のｓｉＲＮＡ実験によって決定されたところ、ＧＲＰ７８のレベルと相関する。Wang, H.Q.ら、Different induction of GRP78 and CHOP as a predictor of sensitivity to proteasome inhibitors in thyroid cancer cells. Endocrinology、２００７年、１４８巻（７号）：３２５８～７０頁。

腫瘍生検における高いＧＲＰ７８発現レベルと、低い生存率の相関が、胃がんおよび結腸直腸がんにおいて示された。Xing, X.ら、Overexpression of glucose-regulated protein 78 in colon cancer. Clin Chim Acta、２００６年、３６４巻（１～２
号）：３０８～１５頁を参照されたい。Zhangらは、原発性胃がんを有する８６人の患者
由来の生検のＩＨＣ分析を報告しており、ＧＲＰ７８が、腫瘍を含まない隣接する胃粘膜と比較すると、腫瘍細胞において過剰発現したことを実証している。Zhang, J.ら、Association of elevated GRP78 expression with increased lymph node metastasis and poor prognosis in patients with gastric cancer. Clin Exp Metastasis、２００６年、２３巻（７～８号）：４０１～１０頁を参照されたい。腫瘍ＧＲＰ
７８染色の強度を、陰性、弱または強と類別した。ＧＲＰ７８発現レベルのレベルは、全生存期間中央値との有意な相関を示し、陰性、弱、または強として染色された腫瘍を有する患者の生存期間中央値は、それぞれ２４８９日、１２４２日、および４３２日であった（強いＧＲＰ７８腫瘍発現と比較して陰性の全生存期間についてｐ＜０．００１）。同様に、リンパ節におけるＧＲＰ７８発現は、全生存率の低さと相関していた（リンパ節における任意のＧＲＰ７８発現と比較して陰性の全生存率についてｐ＝０．０３７）。

より近年の研究では、Tsunemiらは、胃がん組織および正常な胃粘膜におけるＧＲＰ７８発現の局在を、ＩＨＣによって査定した。正常な胃粘膜では、ＧＲＰ７８染色は、深部固有層腺（propria gland）に時々観測されるが、表層上皮には観測されなかった。胃がん組織において、ＧＲＰ７８は、表面からの深さにかかわらず、がん細胞の細胞質に高レベルで発現した。同じ研究では、循環ＧＲＰ７８タンパク質が、胃がんを有する患者および正常な個体の両方の血清において査定された。組換えＧＲＰ７８に対するウエスタンブロットでは、胃がんを有する患者の１７／６０（２８．３％）および健康な個体の０／２０（０．０％）からの血清において反応性が示された。Tsunemi, S.ら、Proteomics-based identification of a tumor-associated antigen and its corresponding autoantibody in gastric cancer. Oncol Rep、２０１０年、２３巻（４号）：９４
９～５６頁を参照されたい。

ＩＴ－１３９は、様々な抵抗性腫瘍細胞株におけるその活性のために選択され、したがってその標的（複数可）は、抵抗性に影響を及ぼすものであると予測された。ＩＴ－１３９の一次標的は、ＧＲＰ７８であると今や同定された。驚くべきことに、ＩＴ－１３９は、腫瘍細胞におけるストレスによるＧＲＰ７８の上方制御を抑制することが今や見出された。ＩＴ－１３９は、正常細胞におけるＧＲＰ７８発現には影響を及ぼさないので、この効果は、腫瘍細胞に特異的である。ストレスを受けていない条件およびストレスを受けた条件下の、ＩＴ－１３９を用いる正常細胞の処理によって、１）ＩＴ－１３９は、ストレスを受けていない正常細胞では、基礎ＧＲＰ７８レベルに影響を及ぼさないこと、および２）ＩＴ－１３９は、これらの同じ正常細胞において、ストレスに起因するＧＲＰ７８の上方制御に影響を及ぼさないことが示された。したがって、ＩＴ－１３９は、ストレス条件にかかわらず、正常細胞におけるＧＲＰ７８レベルに影響を与えないと考えられる。

いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、ＩＴ－１３９は、ＵＰＲの全般的な阻害剤ではなく、むしろＧＲＰ７８誘導の特異的抑制剤であると考えられる。ＧＲＰ７８誘導の主な経路は、転写を介する経路である。ＧＲＰ７８のＩＴ－１３９による抑制は、ＩＴ－１３９で処理した腫瘍細胞のノーザンブロット分析によって分かる通り、転写レベルにおいて用量依存方式で生じる。一部の実施形態では、本発明は、ＩＴ－１３９が、ストレス誘導剤によってＧＲＰ７８の誘導を抑制するという知見を包含する。

驚くべきことに、ＩＴ－１３９は、誘導ＸＢＰ－１スプライス形態、ＡＴＦ６の誘導、プロセシングおよび核内輸送、ならびにｅＩＦ２ａのリン酸化などのＵＰＲの他のアームをブロックしないことが見出された。したがって、ＩＴ－１３９は、ＥＲストレスおよびＵＰＲの一部を引き起こすが、ＧＲＰ７８の誘導を抑制する（ＵＰＲの生存アーム）。

転写レベルでのＧＲＰ７８誘導のＩＴ－１３９による抑制は、ＧＲＰ７８プロモーターの研究によって確認される。細胞内のＧＲＰ７８タンパク質レベルの制御は、ＧＲＰ７８プロモーターが、小胞体ストレスエレメント（ＥＲＳＥ）の複数のコピーを含有するという事実に起因して、主に転写調節を介して行われる。ＥＲＳＥは、ストレス誘導転写因子の結合部位である。ＩＴ－１３９は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子に連結したＧＲＰ７８プロモーターフラグメント（－１６９～－２９；３つのＥＲＳＥを含有する）のストレス誘導を抑制することが示されている。

ＧＲＰ７８誘導は、ストレス条件下での細胞の生存応答である。ＧＲＰ７８誘導は、細胞が細胞自体を修復し、アポトーシスを防止しようとする、細胞の試みである。したがって、ＧＲＰ７８誘導は、細胞がストレスを受け／死ぬときに見られる。腫瘍細胞におけるＧＲＰ７８のＩＴ－１３９による抑制は、ストレス状態にある腫瘍細胞において最も顕著である。腫瘍細胞は、ｉｎｖｉｖｏで常に様々な種類のストレスを受けている。ｉｎｖｉｔｒｏによるストレスを受けていない腫瘍細胞では、ＩＴ－１３９は、異なる腫瘍株において、ＧＲＰ７８レベルを様々なレベルに抑制する。

高レベルのＧＲＰ７８タンパク質は、シスプラチン（Jiang, C.C.ら、Glucose-regulated protein 78 antagonizes cisplatin and adriamycin in human melanoma cells. Carcinogenesis、２００９年、３０巻（２号）：１９７～２０４頁）、５－ＦＵ（Pyrko, P.ら、The unfolded protein response regulator GRP78/BiP as a novel target for increasing chemosensitivity in malignant gliomas. Cancer
Res、２００７年、６７巻（２０号）：９８０９～１６頁）、テモゾロミド（Pyrko、２００７年）、ビンブラスチン（Wang, J.ら、Blockade of GRP78 sensitizes breast
cancer cells to microtubules-interfering agents that induce the unfolded protein response. J Cell Mol Med、２００９年、１３巻（９Ｂ号）：３８８
８～９７頁）、パクリタキセル（Mhaidat, N.M.ら、Inhibition of MEK sensitizes
paclitaxel-induced apoptosis of human colorectal cancer cells by downregulation of GRP78. Anticancer Drugs、２００９年、２０巻（７号）：６０１～６頁）、ボルテゾミブ（Kern, J.ら、GRP-78 secreted by tumor cells blocks the
antiangiogenic activity of bortezomib. Blood、２００９年、１１４巻（１８号）：３９６０～７頁）、ソラフェニブ（Chiou, J.F.ら、Glucose-regulated protein 78 is a novel contributor to acquisition of resistance to sorafenib in hepatocellular carcinoma. Ann Surg Oncol、２０１０年、１７巻（２号）：６
０３～１２頁）、カンプトテシン（Reddy, R.K.ら、Endoplasmic reticulum chaperone protein GRP78 protects cells from apoptosis induced by topoisomerase
inhibitors: role of ATP binding site in suppression of caspase-7 activation. J Biol Chem、２００３年、２７８巻（２３号）：２０９１５～２４頁）、
エトポシド（Wang, Y.ら、Down-regulation of GRP78 is associated with the sensitivity of chemotherapy to VP-16 in small cell lung cancer NCI-H446 cells. BMC Cancer、２００８年、８巻：３７２頁）およびドキソルビシン（Jiang,
C.C.ら、Glucose-regulated protein 78 antagonizes cisplatin and adriamycin in human melanoma cells. Carcinogenesis、２００９年、３０巻（２号）：１９７～２０４頁）などの薬剤に対する抵抗性と相関するとされている。さらに、これらの薬剤のいくつかによって腫瘍細胞株を処理すると、ＧＲＰ７８タンパク質レベルがさらに上方調節される。Jiang ２００９年およびReddy ２００３年を参照されたい。抗がん剤によって誘導されたこのＧＲＰ７８のさらなる上方制御は、腫瘍細胞の生存および抵抗性の重要な決定因子であると考えられる。ＩＴ－１３９が、「ストレスを受けた」腫瘍細胞におけるＧＲＰ７８誘導を優先的に防止するということは、ＩＴ－１３９が、多くの異なるクラスの抗がん剤と組み合わせて使用されると、相乗作用を示すことを示唆した。

ＮＦ－Ｙ、ＴＦＩＩ－Ｉ、ＡＴＦ６α、およびＹＹ－１を含む複数のＧＲＰ７８転写因子は、ストレス誘導後にもたらされる。ＮＦ－Ｙ結合は、ストレスを受けたおよびストレスを受けていないＧＲＰ７８転写において保存される。ＴＦＩＩ－Ｉ結合は、ストレスを受けた転写において増強される。ＡＴＦ６は、タプシガルギン（Ｔｇ）によるストレス処理の１時間以内にＡＴＦ６αに切断され、ＥＲストレス後にのみ生じる。この複合体（ＡＴＦ６α／ＹＹ１）は、ＰＲＭＴ１を、メチル化ヒストンＨ４、ｐ３００、ＧＣＮ５およびヒストンアセチルトランスフェラーゼと共に、プロモーターに動員する。ＡＴＦ６αは、メディエーターおよび複数のヒストンアセチルトランスフェラーゼ複合体（Ｓｐｔ－Ａｄａ－Ｇｃｎ５アセチルトランスフェラーゼ（ＳＡＧＡ）およびＡｄａ－Ｔｗｏ－Ａを含有する（ＡＴＡＣ）複合体）を含むＲＮＡポリメラーゼＩＩ共制御複合体の収集物を、ＥＲストレス応答エンハンサーエレメントに動員することによって（少なくとも部分的に）機能する。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、本発明者らは、ＩＴ－１３９が、ＧＲＰ７８プロモーター領域上へこのＰＯＬＩＩ複合体をローディングすることを阻害することを提唱する。

本発明の一実施形態は、ＩＴ－１３９の作用機序が、ＧＲＰ７８の転写に対して効果があるということである。本発明の別の実施形態は、ＩＴ－１３９が、ＧＲＰ７８のストレス誘導性転写を阻害するということである。ＧＲＰ７８の転写活性化は、アンフォールドタンパク質応答の指標である。ＵＰＲは、ヌクレオソームの特異的アセチル化およびメチル化修飾を誘導する。ＥＲＳＥは、ＧＲＰ７８プロモーターのストレス誘導を媒介する最も重要なエレメントであると理論づけられる。

本発明の別の態様は、がんの処置を必要とする対象のがんを処置する方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、１つまたは複数のがん免疫治療薬と組み合わせて投与することを含む、方法である。腫瘍媒介性ＥＲストレスは、第一原理として、腫瘍浸潤性の骨髄細胞、抗腫瘍免疫の非常に重要な調節因子としての腫瘍ＵＰＲの強調、およびがんにおける免疫モジュレーションのための新しい標的に帰する炎症／抑制特徴のいくつかを再現する表現型に、ＢＭＤＣをインプリントする（Mahadevanら、PlosONe、２０１２年１２月を参照されたい）。慢性リンパ球性白血病細胞による、ＮＫＧ２ＤリガンドであるＭＩＣＡの脱落は、小胞体内在性（resident）タンパク質ＥＲｐ５およびＧＲＰ７８が腫瘍細胞表面に移行すると、誘導され得る（Cancer Immunol Immunother（２０１２年）６１巻：１２０１頁を参照されたい）。表面ＬＡＰ／ＴＧＦ－βは、
ＧＲＰ７８と複合体を形成し、ＧＲＰ７８のノックダウンは、Ｔｒｅｇ上での表面ＬＡＰ／ＴＧＦ－βの発現レベルを低減する（Hum. Immunol. ６２巻、７６４～７７０頁、２００１年を参照されたい）。したがって、いかなる理論にも束縛されることを望まないが、本発明者らは、ＩＴ－１３９およびがん免疫療法剤（immuno-oncology agent）を含む組合せ治療が、がん免疫療法剤単独よりも有効な処置をもたらすと考える。

２．定義
本明細書に記載される場合、がん免疫療法剤という語句は、がんを処置するために免疫系を活用する任意のがん免疫療法剤を指す。このような薬剤には、抗体、ＰＤ－１療法剤（PD-1 therapy）、ＰＤ－Ｌ１療法剤（PD-L1 therapy）、サイトカイン治療剤、およ
びチェックポイント阻害剤が含まれるが、それらに限定されない。具体例として、ニボルマブ、アレムツズマブ、アテゾリズマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、ペンブロリズマブ、リツキシマブ、インターフェロン、およびインターロイキンが挙げられるが、それらに限定されない。がん免疫療法剤の標的には、ＣＤ５２、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ２０、またはＰＤ－１受容体が含まれるが、それらに限定されない。

本明細書に記載される場合、化学療法剤（chemotherapy agent）または化学療法用剤
（chemotherapeutic agent）という語句は、がんを処置するために使用される化学物質
を記載する。このような薬剤には、細胞傷害性薬物および細胞増殖抑制性（cytostostatic）薬物が含まれる。化学療法剤または化学療法用剤は、抗体またはモノクローナル抗体
（ＭＡＢ）を指すこともできる。化学療法用剤のクラスには、タキサン、アントラサイクリン、白金含有薬物、エポチロン、抗有糸分裂剤、カンプトテシン、葉酸誘導体、ＨＤＡＣ阻害剤、有糸分裂阻害剤、微小管安定剤、ＤＮＡインターカレーター、トポイソメラーゼ阻害剤、または分子標的治療剤が含まれるが、それらに限定されない。化学療法剤または化学療法用剤という語句は、がんを処置するために一緒に組み合わされた１つまたは複数の化学物質を指すこともできる。この非限定的な一例として、ゲムシタビンおよびナノ粒子アルブミンパクリタキセルを挙げることができる。

本明細書で使用される場合、ＩＴ－１３９という用語は、ナトリウムトランス－［テトラクロロビス（１Ｈ－インダゾール）ルテネート（ＩＩＩ）］を指す。ＩＴ－１３９は、ＫＰ１３３９またはＮＫＰ１３３９としても公知である。

ビンカアルカロイドは、文献から周知であり、一連の抗有糸分裂剤である。ビンカアルカロイドには、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンが含まれ、ビンカアルカロイドは、微小管の形成を防止するように作用する。例示的なビンカアルカロイドを、以下に示す。

抗腫瘍性植物アルカロイドであるカンプトテシン（ＣＰＴ）は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩを標的とする広範なスペクトルの抗がん剤である。ＣＰＴは、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで有望な抗腫瘍活性が示されているが、治療有効性が低く、重症の毒性があるので、臨床では使用されていない。ＣＰＴ類似体の中でも、塩酸イリノテカン（ＣＰＴ－１１）は、最近、結腸直腸がん、肺がん、および卵巣がんに対して活性であることが示されている。ＣＰＴ－１１自体は、プロドラッグであり、ｉｎｖｉｖｏでカルボキシルエステラーゼによって、ＣＰＴ－１１の生物学的に活性な代謝産物である７－エチル－１０－ヒドロキシ－ＣＰＴ（ＳＮ－３８として公知）に変換される。いくつかのカンプトテシン誘導体が開発中であり、それらの構造を、以下に示す。

いくつかのアントラサイクリン誘導体が生成されており、白血病、ホジキンリンパ腫、ならびに膀胱がん、乳がん、胃がん、肺がん、卵巣がん、甲状腺がん、および軟組織肉腫の処置のための診療所（clinic）での用途が見出されている。このようなアントラサイクリン誘導体には、ダウノルビシン（ダウノマイシンまたはダウノマイシンセルビジンとしても公知）、ドキソルビシン（ＤＯＸ、ヒドロキシダウノルビシン、またはアドリアマイシンとしても公知）、エピルビシン（エレンス（Ellence）またはファルモルビシン（Pharmorubicin）としても公知）、イダルビシン（４－デメトキシダウノルビシン、ザベドス（Zavedos）、またはイダマイシンとしても公知）、およびバルルビシン（Ｎ－トリフル
オロアセチルアドリアマイシン－１４－バレレートまたはバルスター（Valstar）として
も公知）が含まれる。

白金をベースとする治療剤は、文献から周知である。白金治療剤は、腫瘍学において広く使用されており、ＤＮＡに架橋するように作用し、それによって細胞死（アポトーシス）をもたらす。カルボプラチン、ピコプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチンは、例示的な白金治療剤であり、構造を、以下に示す。

さらなる分子標的治療剤も開発中である。例として、Ｅ７０１６、ＸＬ７６５、ＴＧ１０１３４８、Ｅ７８２０、エリブリン、ＩＮＫ１２８、ＴＡＫ－３８５、ＭＬＮ２４８０、ＴＡＫ７３３、ＭＬＮ－４９２４、モテサニブ、イキサゾミブ、ＴＡＫ－７００、ダコミチニブ、およびスニチニブが挙げられる。それぞれの構造を、以下に示す。

分子標的治療剤のさらなる例として、クリゾチニブ、アキシチニブ、ＰＦ０３０８４０１４、ＰＤ０３２５９０１、ＰＦ０５２１２３８４、ＰＦ０４４４９９１３、リダフォロリムス（ridaforlimus）、ＭＫ－１７７５、ＭＫ－２２０６、ＧＳＫ２６３６７７１、ＧＳＫ５２５７６２、エルトロンボパグ、ダブラフェニブ（dabrefenib）、およびフォレチニブが挙げられる。それぞれの構造を、以下に示す。

分子標的治療剤のまたさらなる例として、ラパチニブ、パゾパニブ、ＣＨ５１３２７９９、ＲＯ４９８７６５５、ＲＧ７３３８、Ａ０３７９、エルロチニブ、ピクチリシブ、ＧＤＣ－００３２、ベムラフェニブ（venurafenib）、ＧＤＣ－０９８０、ＧＤＣ－００６
８、ａｒｒｙ－５２０、パシレオチド、ドビチニブ、およびコビメチニブ（cobmetinib）が挙げられる。それぞれの構造を、以下に示す。

分子標的治療剤のさらなる例として、ブパルリシブ、ＡＶＬ－２９２、ロミデプシン、ａｒｒｙ－７９７、レナリドミド、サリドマイド、アプレミラスト、ＡＭＧ－９００、ＡＭＧ２０８、ルカパリブ、ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５、ＡＵＹ９２２、ＬＤＥ２２５、およびミドスタウリンが挙げられる。それぞれの構造を、以下に示す。

３．例示的な実施形態の説明
本発明は、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、化学療法用剤またはがん免疫療法剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。

別の実施形態によれば、本発明は、乳房、卵巣、子宮頸部、前立腺、精巣、泌尿生殖器、食道、喉頭、膠芽腫、神経芽細胞腫、胃、皮膚、角化棘細胞腫、肺、類表皮癌、大細胞癌、小細胞癌、肺腺癌、骨、結腸、腺腫、膵臓、腺癌、甲状腺、濾胞癌、未分化癌、乳頭状癌、精上皮腫、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝癌および胆汁道、腎癌、骨髄障害、リンパ系障害、ホジキン、ヘアリー細胞、頬側口腔および咽頭（口腔）、唇、舌、口、咽頭、小腸、結腸－直腸、大腸、直腸、脳および中枢神経系、ならびに白血病から選択されるがんを処置する方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、化学療法用剤またはがん免疫療法剤と組み合わせて投与するステップを含む、方法に関する。

別の実施形態は、ＩＴ－１３９の投与後のがん細胞におけるＧＲＰ７８の量を低減することによって、がんを処置するための方法を提供する。

別の実施形態によれば、本発明は、ＩＴ－１３９を化学療法剤またはがん免疫療法剤と組み合わせて投与した後に、がん細胞におけるＧＲＰ７８の量を低減することによってがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物の投与が、化学療法剤またはがん免疫療法剤単独の投与と比較してＧＲＰ７８の量の低減をもたらす、方法を提供する。

治療剤の投与順序は、注意深く考慮されるべきである。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、ＧＲＰ７８の作用機序および下方制御は、最大限の治療上の利益のためには、任意の化学療法薬が最初に投与され、その後ＩＴ－１３９が投与されるべきであることを指示している。前述の通り、ある範囲の化学療法用剤を用いる処置によって、ＥＲストレスの増大がもたらされ、それによってＧＲＰ７８の生成が誘導される。この過程は、細胞生存機序である。ＩＴ－１３９の投与は、ストレス誘導性のＧＲＰ７８レベルの低減をもたらし、それによって細胞生存経路を除去する。最終的には、がん細胞死が増大し、抗腫瘍効果が増大する結果となる。

本発明の一実施形態によれば、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、
１）患者に、化学療法剤を投与するステップと、
２）その後、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、患者に投与するステップと、
３）必要に応じて、ステップ１および２を繰り返すステップと
を含む、方法が提供される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の１日後に投与される。他の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の１週間後に患者に投与される。さらなる他の実施形態では、ＩＴ－１３９は、化学療法剤の１日後～７日後の間に患者に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤と同時に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物、および化学療法剤は、互いに約２０～２８時間以内、または互いに約２２～２６時間以内、または互いに約２４時間以内に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の前に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約８～１６時間前、または化学療法剤の少なくとも約１０～１４時間前、または化学療法剤の少なくとも約１２時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約２０～２８時間前、または化学療法剤の少なくとも約２２～２６時間前、または化学療法剤の少なくとも約２４時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約４４～５２時間前、または化学療法剤の少なくとも約４６～５０時間前、または化学療法剤の少なくとも約４８時間に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約６４～８０時間前、または化学療法剤の少なくとも約７０～７４時間前、または化学療法剤の少なくとも約７２時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の前に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約８～１６時間後、または化学療法剤の少なくとも約１０～１４時間後、または化学療法剤の少なくとも約１２時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約２０～２８時間後、または化学療法剤の少なくとも約２２～２６時間後、または化学療法剤の少なくとも約２４時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約４４～５２時間後、または化学療法剤の少なくとも約４６～５０時間後、または化学療法剤の少なくとも約４８時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、化学療法剤の少なくとも約６４～８０時間後、または化学療法剤の少なくとも約７０～７４時間後、または化学療法剤の少なくとも約７２時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、化学療法薬は、ゲムシタビン、ナノ粒子アルブミンパクリタキセル、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ソラフェニブ、エベロリムスおよびベムラフェニブからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、化学療法薬は、ゲムシタビンである。

本発明の一実施形態によれば、膵臓がんの処置を必要とする患者における膵臓がんを処置するための方法であって、
１）ゲムシタビンおよびアルブミンナノ粒子パクリタキセルを投与するステップと、
２）その後、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を投与するステップと、
３）必要に応じて、ステップ１および２を繰り返すステップと
を含む、方法が提供される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、ゲムシタビンと同時に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物、およびゲムシタビンは、互いに約２０～２８時間以内、または互いに約２２～２６時間以内、または互いに約２４時間以内に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、ゲムシタビンの前に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、ゲムシタビンの少なくとも約８～１６時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約１０～１４時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約１２時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、ゲムシタビンの少なくとも約２０～２８時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約２２～２６時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約２４時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、ゲムシタビンの少なくとも約４４～５２時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約４６～５０時間前、またはゲムシタビンの少なくとも約４８時間前に投与される。

本発明の一実施形態によれば、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、がん免疫療法剤と組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。ある特定の実施形態では、がん免疫療法剤は、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物の投与の前に、患者に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤と同時に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物、およびがん免疫療法剤は、互いに約２０～２８時間以内、または互いに約２２～２６時間以内、または互いに約２４時間以内に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の前に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約８～１６時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約１０～１４時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約１２時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約２０～２８時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約２２～２６時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約２４時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約４４～５２時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約４６～５０時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約４８時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約６４～８０時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約７０～７４時間前、またはがん免疫療法剤の少なくとも約７２時間前に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の後に投与される。ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約８～１６時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約１０～１４時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約１２時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約２０～２８時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約２２～２６時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約２４時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約４４～５２時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約４６～５０時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約４８時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物は、がん免疫療法剤の少なくとも約６４～８０時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約７０～７４時間後、またはがん免疫療法剤の少なくとも約７２時間後に投与される。

ある特定の実施形態では、がん免疫療法剤は、サイトカイン、チェックポイント阻害剤、およびＰＤ－１抗体以外の抗体からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、がん免疫療法剤は、インターフェロン、インターロイキン、ＰＤ－Ｌ１抗体、アレムツズマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、アテゾリズマブおよびリツキシマブからなる群から選択される。

本発明の一実施形態によれば、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、ＰＤ－１抗体と組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。ある特定の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその製剤の投与の前に投与される。

本発明の一実施形態によれば、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。ある特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその製剤の投与の前に投与される。

本発明の一実施形態によれば、がんの処置を必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその組成物を、ＰＤ－１抗体以外のがん免疫療法剤と組み合わせて投与することを含む、方法が提供される。ある特定の実施形態では、ＰＤ－１抗体以外のがん免疫療法剤は、ＩＴ－１３９、または薬学的に許容され得るその製剤の投与の前に投与される。

本明細書に記載される本発明がより完全に理解され得るように、以下の実施例を記載する。これらの実施例は、単に例示目的のものであり、本発明をいかなる方式でも制限すると解釈されるべきでないことを理解される。

例示
（実施例１）
すべてのヒト原発性および転移性細胞株を、ＡＴＣＣによって記載される通り維持した。細胞を、６ウェルプレートに播種した後、培地単独（対照）、ＩＴ－１３９（２００μＭ）単独、タプシガルギン単独（３００ｎＭ、細胞ストレスを誘導するため）またはＩＴ－１３９にタプシガルギンを加えたもので処理した。細胞溶菌物を１６時間目に収集し、ウエスタンブロットによって抗ＧＲＰ７８抗体について分析し、ＧＡＰＤＨによって正規化した。図１に示される結果によって、ＩＴ－１３９は、ストレスを受けていない細胞に対する効果がほとんどまたはまったくないが（図１Ａ）、ストレスを受けた細胞におけるＩＴ－１３９を用いる処理（ＩＴ－１３９にタプシガルギンを加えたもの）では、ストレス状態の細胞に存在するＧＲＰ７８の量が低減した（図１Ｂ）ことが実証される。

（実施例２）
すべてのヒト原発性および転移性細胞株を、ＡＴＣＣによって記載される通り維持した。細胞を、６ウェルプレートに播種した後、培地単独（対照）、ＩＴ－１３９（２００μＭ）単独、タプシガルギン単独（３００ｎＭ、細胞ストレスを誘導するため）またはＩＴ－１３９にタプシガルギンを加えたもので処理した。細胞溶菌物を２４時間目に収集し、総ＲＮＡを抽出した。ＧＲＰ７８転写産物の定量リアルタイムＰＣＲ分析を、ＧＡＰＤＨに対して正規化した。図２に示される結果によって、ストレスを受けていない細胞におけるＩＴ－１３９処理は、一般に、ｇｒｐ７８のｍＲＮＡレベルに対する影響がほとんどないが（図２Ａ）、ストレスを受けた細胞におけるＩＴ－１３９を用いる処理（ＩＴ－１３９にタプシガルギンを加えたもの）では、ＧＲＰ７８のｍＲＮＡ発現量が低減した（図２Ｂ）ことが実証される。

（実施例３）
ＣＴ２６細胞（１００万個）を、正常免疫能（immunocompetent）マウスに皮下移植し
、触知できる腫瘍が確立されるまで（３日目）、増殖させた。１グループ当たり４匹のマウスのグループを、１）食塩水、２）ＩＴ－１３９単独（ＫＰ１３３９、３０ｍｇ／ｋｇ）、３）ＲＰＭ１－１４（ＰＤ－１抗体、５ｍｇ／ｋｇ）、または４）ＲＰＭ１－１４およびＩＴ－１３９（それぞれ５ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの、合計４用量で週２回処置した。ＩＴ－１３９は静脈内投与し、ＲＰＭ１－１４は腹腔内投与した。投与は、同日に行った。１８日目まで、腫瘍体積を測定した。ＰＤ－１抗体を用いる処置では、食塩水対照からの変化が示されなかった。ＩＴ－１３９は、抗腫瘍活性が実証されているが、ＰＤ－１抗体とＩＴ－１３９の組合せでは、ＰＤ－１抗体単独またはＩＴ－１３９単独のいずれと比較しても、抗腫瘍活性の増大が実証された。図３に示される結果は、ＩＴ－１３９が、ＰＤ－１抗体の抗腫瘍有効性を増大することを実証している。

（実施例４）
ＨＣＴ１１６細胞株を播種した翌日、ＡＴＣＣガイドラインに従って処理した。ＩＴ－１３９（２００μＭ）を用いた処理の２４時間後に、処置細胞および未処理細胞を、電子顕微鏡法で評価するために固定した。図４に示される通り、ＩＴ－１３９で処理したＨＣＴ１１６細胞（図４Ｂ）は、未処理細胞（図４Ａ）と比較して、ＥＲストレスを示唆する、著しい空胞形成、ＥＲ拡張および細胞内小器官の組織崩壊を示した。

（実施例５）
クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイを実施して、ＩＴ－１３９処置を伴うストレスを受けた細胞およびストレスを受けていない細胞における、ＰｏｌＩＩおよびＧＲＰ７８プロモーター領域へのポリメラーゼＩＩの結合を試験した。ＨＣＴ１１６細胞を、８０％コンフルエンスまで増殖させ、次に１．５μｇ／ｍＬのツニカマイシンおよび２００μＭのＩＴ－１３９またはＤＭＳＯで１６時間処理した。クロマチンを、ホルムアルデヒドを使用して架橋した。細胞を、トリプシンを用いて回収し、単離された核を超音波処理して、２００～１０００ｂｐの間のフラグメントを得た。等量のクロマチンを、抗Ｐｏｌ
ＩＩ抗体と共に一晩インキュベートし、次にＳｔａｐｈＡ細胞を用いてプルダウンした。架橋を逆転させ、ＤＮＡを、Ｓｉｇｍａ製のＧｅｎｅＥｌｕｔｅＰＣＲクリーンアップキットを使用して精製した。精製したＤＮＡおよびインプット試料を、Ｇｒｐ７８およびＰｏｌＩＩのプロモーター領域を増幅するプライマーを用いて３０サイクルのＰＣＲに供した。生成物を、４％アガロースゲル上で泳動させ、臭化エチジウム染色により可視化した。ＩＴ－１３９は、ストレスを受けていない細胞において、ＰｏｌＩＩプロモーターへのポリメラーゼＩＩの結合に対して最小限の効果があったが、この結合は、Ｔｕによってストレスを受けた細胞では、４０％に低下した。際だったことに、ＩＴ－１３９は、ストレスを受けていない細胞とＴｕによってストレスを受けた細胞の両方において、Ｇｒｐ７８プロモーターへのポリメラーゼＩＩの結合をゼロに低下させた。これらの結果は、図５Ａ～Ｃに示されている。

（実施例６）
免疫組織化学分析を実施して、３０ｍｇ／ｋｇのＩＴ－１３９で（ｑ４ｄ）処置したＨＴ－２９異種移植腫瘍におけるＧＲＰ７８の発現を、食塩水で処置した腫瘍と比較して分析した。食塩水で処置した腫瘍では、ＧＲＰ７８の強力な免疫染色が観測された（図６Ａ）のと比較して、ＩＴ－１３９で処置した腫瘍では染色が非常に弱かった（図６Ｂ）。これらの結果によって、ＩＴ－１３９は、ＧＲＰ７８の発現をｉｎｖｉｖｏで阻害することが示された。

（実施例７）
正常なヒト胚腎臓２９３Ｔ細胞を、ストレスを受けていない（正常培地で処理した）またはストレスを受けた（３００ｎＭのＥｎｄＲｅｔストレスおよびＧＲＰ７８誘導物質であるタプシガルギンで処置した）のいずれかにした。細胞培養物を、薬物なし（対照）または２００μＭのＩＴ－１３９のいずれかで処理した。ＧＲＰ７８レベルをウエスタンブロットによってアッセイした。β－アクチンはローディング対照である。結果は、図７に示されている。

（実施例８）
前立腺がんＬｎＣａＰ－ＦＧＣ細胞を、未処理（ＤＭＳＯだけの対照）とするか、または３００ｎＭのタプシガルギン（Ｔｇ）で処理した。細胞を、指示濃度のＩＴ－１３９と共にインキュベートし、細胞溶菌物についてノーザンブロット分析を実施した。β－アクチンは、ローディング対照である。図は、ノーザンブロットを示す。バンドを定量し、棒グラフによって、β－アクチンローディング対照に対して正規化されたＧＲＰ７８のｍＲＮＡレベルの相対的レベルを示す。ＧＲＰ７８のＩＴ－１３９による抑制は、ＩＴ－１３９で処置した腫瘍細胞のノーザンブロット分析によって分かる通り、転写レベルにおいて用量依存方式で生じる。結果は、図８に示されている。

（実施例９）
すべてのヒト原発性および転移性細胞株を、ＡＴＣＣによって説明されている通り維持した。すべての細胞株（ＨＣＴ１１６、ＨＴ－２９、ＬＮＣａＰ、Ａ５４９およびＡ３７５）を、６ウェルプレートに播種し、その２４時間後にＩＴ－１３９単独で処理した。すべての細胞株を、３０ｕＭ、５０ｕＭ、１００ｕＭおよび２００ｕＭで処置し、ただし例外として、ＨＣＴ１１６およびＨＴ２９細胞株では、３０ｕＭおよび２００ｕＭを用いる処置はそれぞれ省略した。薬物による２４時間のインキュベーション後、細胞をトリプシン処理し、温かいＰＢＳに再懸濁させ、暗室中、３７℃で３０分間、ＪＣ－１色素で染色した。次に、細胞を洗浄し、温かいＰＢＳに再懸濁させた。ＪＣ－１色素の蛍光を、、４８８ｎｍで色素を励起し、ＪＣ－１モノマーを、５３０ｎｍにおけるその発光によって検出し、ＪＣ－１凝集体を５８０ｎｍで測定することにより、フローサイトメトリー分析によって測定した。すべての細胞株を、陽性対照として５０ｕＭのアンチマイシンＡで処理した。結果は、ＨＣＴ１１６細胞株およびＨＴ２９細胞株の両方が、それぞれ５０μＭおよび３０μＭという低濃度のＩＴ－１３９で、ミトコンドリア電位喪失の増大を示したことを示している。しかし、前立腺（ＬＮＣａＰ）、肺（Ａ５４９）およびメラノーマ（Ａ３７５）細胞は、高濃度のＩＴ－１３９で、ミトコンドリア脱分極の増大を示した。データは図９に示されている。

（実施例１０）
前立腺がん細胞株であるＭｉａＰａｃａ２を、ＡＴＣＣによって説明されている通り維持した。漸増濃度のＩＴ－１３９（５０μＭ、１００μＭおよび２００μＭ）で２４時間処理した正常な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と共に培養したＭｉａＰａｃａ２細胞は、図１０に示される通り、細胞生存能に対していかなる効果も示さなかった。ＭｉａＰａｃａ２細胞を、未処理とするか、またはＩＴ－１３９（１００μＭ）で予め処理し、様々な用量のＩＬ－２活性化ＰＢＭＣと共に培養した。ＰＢＭＣを、６０００ＩＵのＩＬ－２を使用して２４時間活性化した。ＩＴ－１３９は、図１１に示される通り、活性化ＰＢＭＣと共に培養したＭｉａＰａｃａ２細胞において細胞死の増大を示した。

（実施例１１）
ＩＴ－１３９とゲムシタビン（ＧＥＭ）の組合せ処置は、ＡＳＰＣマウスモデルにおける生存期間中央値および全生存期間の両方を延長する。同様に、ＡＳＰＣ－１細胞において、ｉｎｖｉｔｒｏでＩＴ－１３９と組み合わせた４８時間のゲムシタビン組合せ投与では、ＩＴ－１３９を最初に投与すると、生存期間が著しく変化する。ＡＳＰＣ２０細胞を、ｉｎｖｉｔｒｏで４８時間にわたり、ＤＭＳＯ（対照）で処置するか、１５０μＭのＩＴ－１３９で処置するか、５μＭのゲムシタビンで処置するか、１５０μＭのＩＴ－１３９と５μＭのゲムシタビンで同時に処置するか、５μＭのゲムシタビンで２４時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で処置するか、または１５０μＭのＩＴ－１３９、その後５μＭのゲムシタビンで２４時間処置する。細胞を回収し、トリパンブルーによってカウントして、生存細胞に対する死細胞の数を算出する。ＡＳＰＣ２０細胞では、ストレスを誘導するためのタプシガルギン（Ｔｇ）をＩＴ－１３９と組み合わせて投与する順序は、３０時間目のＧＲＰ７８発現レベルに影響を及ぼす。結果は、図１２に示されている。さらに、投与の順序は、ゲムシタビンの前にＩＴ－１３９を投与すると細胞死の増大が観察される通り、細胞死の量にも影響を及ぼす。結果は、図１３に示されている。ＰＡＮＣ－１細胞を、ｉｎｖｉｔｒｏで４８時間にわたり、ＤＭＳＯ（対照）で処置する、１５０μＭのＩＴ－１３９で処置する、５μＭのゲムシタビンで処置する、１５０μＭのＩＴ－１３９と５μＭのゲムシタビンで同時に処置する、５μＭのゲムシタビンで２４時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で処置する、ならびに１５０μＭのＩＴ－１３９、その後５μＭのゲムシタビンで２４時間処置する、ＤＭＳＯ（対照）で処置する、１５０μＭのＩＴ－１３９で処置する、５μＭのゲムシタビンで処置する、１５０μＭのＩＴ－１３９と５μＭのゲムシタビンで同時に処置する、５μＭのゲムシタビンで２４時間、その後１５０μＭのＩＴ－１３９で処置する、ならびに１５０μＭのＩＴ－１３９、その後５μＭのゲムシタビンで２４時間処置する。結果は、図１４に示されている。ＰＡＮＣ－１細胞では、４８時間目における細胞傷害性（cytoxicity）作用によって、ゲムシタビンおよびＩＴ－１３９の投与順序による差異はないことが実証される。

（実施例１２）
Ａ２０リンパ腫マウスモデルでは、１０４匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、マウスの右側腹部においてリンパ腫Ａ２０細胞を皮下接種した。腫瘍が平均体積８０～１２０ｍｍ^３に達したら、マウスをマウス１０匹ずつの８つのグループに無作為化した。マウスを、挙動および生存について１日１回モニタリングし、体重および腫瘍成長について週２回モニタリングした。腫瘍を、マトリゲルを含有するＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬ（５０：５０、ｖ：ｖ、参照：３５６２３７、ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、フランス）中、Ａ２０細胞５×１０^６個を、１０４匹のＢａｌｂ／Ｃマウスの右側腹部に皮下注射することによって誘導した。チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１（クローン１０Ｆ．９Ｇ２；参照：Ｂｉｏｘｃｅｌｌアイソタイプ（isoptype）ラットＩｇＧ２ｂ）、および抗ＣＴＬＡ４抗体（クローン９Ｈ１０；参照：ＢＥ０１３１、ｂｉｏｘｃｅｌｌ；アイソタイプハムスターＩｇＧ１）であり、共に３日ごとに１０ｍｇ／ｋｇでｉ．ｐ．投与した。ＩＴ－１３９を、４日ごとに３０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。投与スケジュールは、以下の表１に示されている。実験過程にわたる平均腫瘍体積は、図１５に示されている。ＦＡＣＳ分析のために、各グループから５個の腫瘍を収集した（４０個の腫瘍試料）。１つのパネルは、ＴｒｅｇおよびＴエフェクター細胞（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８およびＦｏｘＰ３）について、１つのパネルは、ＭＤＳＣ（ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ－１、Ｌｙ－６ｇ、Ｌｙ－６Ｃ、Ａｒｇ１、ＮＯＳ２）について、１つのパネルは、腫瘍関連マクロファージ（ＣＤ５４、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ－１、ＣＤ６８、ＣＤ８０、およびＣＤ２０６）について実施したものであった。ＰＤ－Ｌ１を２４時間投与した後にＩＴ－１３９を投与した場合、図１６および図１７に示される通り、著しい抗腫瘍有効性があり、腫瘍のエフェクターＴ細胞浸潤が１０％増大した。この効果は、その他のグループのいずれにも見られなかった。この組合せグループにおける腫瘍成長の低減により、抗ＰＤ－Ｌ１抗体による免疫調節効果の証拠が存在する。

本発明者らは、本発明のいくつかの実施形態を説明してきたが、本発明者らの基本的な実施例は、本発明の化合物および方法を利用する他の実施形態を提供するために変更され得ることは明らかである。したがって、本発明の範囲は、例示的に提示されている特定の実施形態によってではなく、添付の特許請求の範囲によって定義されることが理解される。

Claims

図面に記載の発明。