JP2022553378A - 過敏性腸症候群および機能性ディスペプシアを処置するための方法および組成物 - Google Patents

過敏性腸症候群および機能性ディスペプシアを処置するための方法および組成物 Download PDF

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Abstract

本開示は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／または機能性ディスペプシアの処置のための方法を提供する。特に、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体または前記抗体を含む組成物の投与による、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／または機能性ディスペプシアの処置のための方法を提供する。本開示はまた、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／または機能性ディスペプシアの処置のための、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製造物品またはキットを提供する。

Description

関連出願への相互参照
本願は、各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１９年１０月２４日に出願した米国仮出願第６２／９２５，７０４号および２０２０年８月１９日に出願した同第６３／０６７，７４３号、ならびに２０２０年２月１４日に出願した国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０１８４０５の優先権を主張する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ読み取り可能な形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７０１７１２００１４４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年１０月２２日、サイズ：１０６ＫＢ）。
発明の分野
本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体および前記抗体を含む組成物の投与によって、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）および／または機能性ディスペプシアを処置するための方法に関する。
背景
シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）のＣＤ３３関連ファミリーのメンバーであるＳｉｇｌｅｃ－８は、好酸球、肥満細胞およびより低いレベルであるが好塩基球の表面に選択的に発現される、制限された組織分布を有する膜貫通細胞表面タンパク質である。Ｓｉｇｌｅｃ－８は、３個の細胞外免疫グロブリン様ドメイン、膜貫通領域、および阻害機能を有する免疫受容抑制性チロシンモチーフを含む２個のチロシンベースのシグナル伝達モチーフを含有する細胞質テイルを含有する。肥満細胞におけるＳｉｇｌｅｃ－８の係合は、メディエーター放出の阻害をもたらすことができ、好酸球においては、アポトーシスを誘導することができる（Bochner, B. (2009) Clin. Exp. Allergy 39:317-324）。
ＩＢＳのための処置は一般に、患者の主症状を管理することを目標とする。多くの治療法は、個々の症状を改善するが、ごく少数の治療法が、全般的ＩＢＳ症状に利益をもたらすことが示された。gi.org/topics/irritable-bowel-syndromeを参照されたい。神経調節物質、プロトンポンプ阻害剤および腸管運動促進薬（prokinetics）を含む機能性ディスペプシアのための一部の処置を利用できるが、これらの処置に対する奏効率は、ロバストではない（Harer, K. and Hasler ,W.L. (2020) Gastroenterology & Hepatology 16:66-74）。
そのため、依然として、これらの障害のための有効な処置の必要がある。
特許出願、特許公報および科学文献を含む、本明細書で言及されるすべての参考文献は、個々の参考文献各々が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されているかのごとく、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Ｂｏｃｈｎｅｒ，Ｂ． Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ（２００９）３９：３１７～３２４ Ｈａｒｅｒ，Ｋ．およびＨａｓｌｅｒ，Ｗ．Ｌ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ＆ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（２０２０）１６：６６～７４
簡単な概要
この必要および他の必要を満たすために、本開示は、とりわけ、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体および／または前記抗体を含む組成物の投与によって、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置または予防する方法に関する。
したがって、本開示のある特定の態様は、個体における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を処置または予防するための方法であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の有効量を個体に投与するステップを含む方法に関する。一部の実施形態では、個体は、ＩＢＳを有するか、またはＩＢＳであると診断された。一部の実施形態では、組成物の投与に先立ち、個体は、ＩＢＳのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない。一部の実施形態では、個体におけるＩＢＳの１つまたは複数の症状（複数可）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。一部の実施形態では、個体における腹痛、腹部痙攣、ガス（gas）、悪心、腹部膨満、下痢、便秘、しぶり、切迫感（urgency）、大便失禁および粘液便（mucus in stool）のうち１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。
本開示の他の態様は、個体における機能性ディスペプシアを処置または予防するための方法であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の有効量を個体に投与するステップを含む方法に関する。一部の実施形態では、個体は、機能性ディスペプシアを有するか、または機能性ディスペプシアであると診断された。一部の実施形態では、組成物の投与に先立ち、個体は、機能性ディスペプシアのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない。一部の実施形態では、個体における機能性ディスペプシアの１つまたは複数の症状（複数可）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。一部の実施形態では、個体における腹部不快感または灼熱感、腹部膨満、食後の疼痛、げっぷ、早期満腹感、嘔吐および悪心のうち１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。
本明細書に記載のいずれか他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸または結腸粘膜から得られる試料における肥満細胞の数または活性のうち一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸または結腸粘膜から得られる試料における好酸球の数または活性のうち一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。
本明細書に記載のいずれか他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、組成物は、皮下注射によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、３カ月もしくはそれを超える月数にわたって月１回、４週間毎に、または２８日間毎に、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、１サイクル当たり１回を１、２、３、４、５または６サイクルにわたり、静脈内注入によって投与され、各サイクルは、１カ月間、４週間または２８日間である。一部の実施形態では、組成物は、皮下注射によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１または複数の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、および約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、１日目に約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、２６日目～３２日目の間に約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、５４日目～６０日目の間に約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、８２日目～８８日目の間に約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、１１０日目～１１６日目の間に約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および１３８日目～１４４日目の間に約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量を投与するステップを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第１の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、副腎皮質ステロイド薬を個体に投与するステップ、および副腎皮質ステロイド薬の投与の少なくとも６時間後に、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第１の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第１の用量を投与するステップを含み、副腎皮質ステロイド薬は、個体に、第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を投与するステップを含み、組成物の第１の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第１の用量の投与の少なくとも１２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第１の用量の投与前２４時間以内に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第１の用量の投与の１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである。一部の実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、８０ｍｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、６０ｍｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体により自己投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に経口投与される。一部の実施形態では、第１の用量の投与の少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクおよび／または重症度を低減させる。一部の実施形態では、第１の用量の投与の少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクおよび／または重症度を低減させる。一部の実施形態では、第１の用量の投与の１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクおよび／または重症度を低減させる。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、組成物の第１の用量は、個体に静脈内投与される。一部の実施形態では、組成物の第１の用量は、個体に皮下投与される。
一部の実施形態では、組成物の第１の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第１の用量の総体積の５０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第１の用量の総体積の３０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第１の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、約４時間にわたっての静脈内注入による組成物の第１の用量の投与は、約４時間未満である期間にわたっての静脈内注入による第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクを低減させる。一部の実施形態では、約４時間にわたっての静脈内注入による組成物の第１の用量の投与は、約４時間未満である期間にわたっての静脈内注入による第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）の重症度を低減させる。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、副腎皮質ステロイド薬を、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第１の用量の投与の１～２時間前に個体に投与される副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである。一部の実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、１ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、６０ｍｇまたは８０ｍｇのプレドニゾンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に経口投与される。一部の実施形態では、第１の用量の投与の１～２時間前に個体に投与される副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロンである。一部の実施形態では、１００ｍｇのメチルプレドニゾロンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に静脈内投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、セチリジンである。一部の実施形態では、１０ｍｇのセチリジンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、１０ｍｇのセチリジンが、個体に第１の用量の投与の１８０分前以降かつ４０分前以前に投与される。一部の実施形態では、１０ｍｇのセチリジンが、個体に第１の用量の投与の４０分～１８０分（例えば、４０分および１８０分を含めて）前に投与される。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、個体に経口投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、解熱薬は、アセトアミノフェンである。一部の実施形態では、９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、個体に第１の用量の投与の１８０分前以降かつ４０分前以前に投与される。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、個体に経口投与される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第２の用量を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の用量は、個体に第１の用量の約２８日後に投与される。一部の実施形態では、第２の用量は、個体に第１の用量の約４週間後に投与される。一部の実施形態では、組成物の第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第２の用量の総体積の５０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第２の用量の総体積の３０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第２の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第２の用量は、第２の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、個体に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第２の用量の投与の１～２時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第２の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである。一部の実施形態では、０．５ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、個体に第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンが、個体に第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、８０ｍｇのプレドニゾンが、個体に第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体により自己投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に経口投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量において約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量において１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇでおよび第２の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において３ｍｇ／ｋｇでおよび第２の用量において１０ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、組成物の第２の用量は、個体に静脈内投与される。一部の実施形態では、組成物の第２の用量は、個体に皮下投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の用量の投与の１～２時間前に個体に投与される副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロンである。一部の実施形態では、１００ｍｇのメチルプレドニゾロンが、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、１０ｍｇのセチリジンが、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、個体に経口投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、解熱薬は、アセトアミノフェンである。一部の実施形態では、９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、個体に第２の用量の投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、個体に経口投与される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第３の用量を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に第２の用量の約２８日後に投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に第２の用量の約４週間後に投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に第１の用量の約５６日後に投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に第１の用量の約８週間後に投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約２時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間１０ｍＬ／時、１５分間２５ｍＬ／時、１５分間４０ｍＬ／時、１５分間５５ｍＬ／時、１５分間７０ｍＬ／時、１５分間８５ｍＬ／時、および１６分間１００ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間２ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間２０ｍＬ／時、３０分間４０ｍＬ／時、および６４分間６０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間２４ｍＬ／時、および４５分間１２５．３ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、第３の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、個体に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第３の用量の投与の１～２時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１日目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を２９日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；および個体に組成物の第３の用量を５７日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１週目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を４週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；および個体に組成物の第３の用量を８週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の１、２、３またはそれよりも多い追加的な用量を投与するステップをさらに含み、追加的な用量（複数可）の第１のものは、第３の用量の約２８日後または約４週間後に個体に投与され、その後のいずれの追加的な用量（複数可）も、約２８日間または約４週間の間隔で個体に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第４の用量を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第３の用量の約２８日後に投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第３の用量の約４週間後に投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第２の用量の約５６日後に投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第２の用量の約８週間後に投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第１の用量の約８４日後に投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に第１の用量の約１２週間後に投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約２時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間１０ｍＬ／時、１５分間２５ｍＬ／時、１５分間４０ｍＬ／時、１５分間５５ｍＬ／時、１５分間７０ｍＬ／時、１５分間８５ｍＬ／時、および１６分間１００ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間２ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間２０ｍＬ／時、３０分間４０ｍＬ／時、および６４分間６０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第４の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間２４ｍＬ／時、および４５分間１２５．３ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１日目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を２９日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；個体に組成物の第３の用量を５７日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；および個体に組成物の第４の用量を８５日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第４の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１週目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を４週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；個体に組成物の第３の用量を８週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；および個体に組成物の第４の用量を１２週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第４の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１日目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を２９日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；個体に組成物の第３の用量を５７日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；個体に組成物の第４の用量を８５日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第４の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；個体に組成物の第５の用量を１１３日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第５の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；および個体に組成物の第６の用量を１４１日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第６の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に組成物の第１の用量を１週目に投与するステップであって、組成物の第１の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される（必要に応じて、副腎皮質ステロイド薬が個体に第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される）、ステップ；個体に組成物の第２の用量を４週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第２の用量が個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；個体に組成物の第３の用量を８週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第３の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；個体に組成物の第４の用量を１２週目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第４の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；個体に組成物の第５の用量を１６週日目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第５の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップ；および個体に組成物の第６の用量を２０週間目（±３日）に投与するステップであって、組成物の第６の用量が個体に静脈内注入により約１時間～約４時間、約２時間～約４時間、または約１時間、約２時間もしくは約４時間のいずれかにわたって（例えば、本明細書に記載されるように）投与される、ステップを含む。
本明細書に記載のいずれか他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、組成物における抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満は、フコース残基を含有する。一部の実施形態では、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも、フコース残基を含有しない。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４とを含む重鎖可変領域、および／または（ｂ）（１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４とを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４とを含む重鎖可変領域、および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４とを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４とを含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４とを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；または（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８、および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒである。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合し、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２またはドメイン３におけるエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、抗体４Ｆ１１とＳｉｇｌｅｃ－８への結合について競合する。一部の実施形態では、抗体は、抗体２Ｅ２とＳｉｇｌｅｃ－８への結合について競合しない。一部の実施形態では、抗体は、抗体２Ｅ２ではない。一部の実施形態では、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、抗体は、血中好酸球を枯渇させる、および／または肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させるように操作された。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を向上させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
本明細書に記載のいずれか他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、組成物は、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置または予防するための１つまたは複数の追加的な治療剤（複数可）と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、組成物は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、上述の実施形態のいずれか１つによるそれを必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む製造物品またはキットに関する。本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、上述の実施形態のいずれか１つによるそれを必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む製造物品またはキットに関する。
本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、一部またはすべてを組み合わせて本開示の他の実施形態を形成することができることは理解されよう。本開示のこれらのおよび他の態様は、当業者に明らかになる。本開示のこれらのおよび他の実施形態は、後続の詳細な説明によってさらに説明される。
詳細な説明
Ｉ．定義
本開示が特定の組成物にも生物システムにも限定されず、そのような組成物または生物システムは、当然のことながら変わることがあることを理解すべきである。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態の説明を目的にしたものに過ぎず、限定を意図したものでないことも理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容によるそうでない旨の明白な指示がない限り、複数の言及対象を含む。したがって、例えば、「１つの分子（ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれより多くのそのような分子の組合せ、およびこれに類するものを含む。
用語「約」は、本明細書で使用される場合、本技術分野における当業者には容易に分かるそれぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書での「約」ある値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に関する実施形態を含む（および記載する）。
本開示の態様および実施形態が、態様および実施形態を「含むこと」、それら「からなること」、およびそれら「から本質的になること」を包含することは理解されよう。
用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、多重エピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、および一本鎖分子）、および抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書では「抗体」と同義で使用される。
基本４本鎖抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成されているヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドとともに５つの基本ヘテロ四量体単位からなり、１０の抗原結合部位を含有するが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせて多価集合体を形成するように重合され得る２～５つの基本４本鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４本鎖単位は、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結されており、一方、２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに依存して１つまたは複数のジスルフィド結合により互いに連結されている。Ｈ鎖およびＬ鎖各々は、規則的な間隔で配置された鎖間ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、このドメインに、αおよびγ鎖の各々については３つの定常ドメイン（ＣＨ）、μおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインが続く。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、このドメインの反対側の末端に定常ドメインが続く。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖の可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位が形成される。異なる抗体クラスの構造および特性については、例えば、Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6を参照されたい。
任意の脊椎動物種からのＬ鎖を、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる重鎖をそれぞれ有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがある。γおよびαクラスは、ＣＨの配列および機能の比較的わずかな差異に基づいてサブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと呼ばれる複数の多型バリアントで存在することができ（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において概説されている）、これらのバリアントのいずれも、本開示における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚで表記されるものである。
「単離された」抗体は、その産生環境の成分から（例えば、天然にまたは組換えにより）同定、分離および／または回収されたものである。一部の実施形態では、単離されたポリペプチドには、その産生環境からの他の成分が一切付随していない。その産生環境の夾雑成分、例えば、組換えトランスフェクト細胞に起因する夾雑成分は、抗体の研究での使用、診断上の使用、または治療上の使用に概して干渉することになる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様または非タンパク質様溶質を含み得る。一部の実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えばローリー法により決定して抗体の９５重量％より高くまで、一部の実施形態では９９重量％より高くまで、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルー染色もしくは銀染色を使用する非還元もしくは還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一になるまで、精製される。単離された抗体は、その抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないことになるため、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含む。しかし、通常は、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る天然で生じる変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて、同一である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端で切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端で切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位に対するもの（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られる場合の抗体の特徴を示すものであり、この修飾語を、いずれかの特定の方法による抗体の産生を求めるものと解釈すべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体を様々な技法により作製することができ、そのような技法には、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部またはすべてを有するヒト抗体またはヒト様抗体を動物において産生するための技術が含まれる。
用語「ネイキッド抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「抗体全体」は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために同義で使用される。具体的には、抗体全体は、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。一部の場合には、インタクト抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有し得る。
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分、インタクト抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照されたい）；抗体断片から形成される一本鎖抗体分子および多重特異性抗体が挙げられる。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合性断片と、残りの「Ｆｃ」断片（この名称は、容易に結晶化できることを表す）とを生じさせた。Ｆａｂ断片は、全Ｌ鎖に加えてＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）および一方の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生じさせ、この断片は、ジスルフィドにより連結された異なる抗原結合活性を有する２つのＦａｂ断片にほぼ相当し、依然として抗原を架橋させることができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む少数の追加の残基をＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に有することによって、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、その間にヒンジシステインを有する対のＦａｂ’断片として、そもそも生成された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。
Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより一緒に保持されている両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域もまた、ある特定のタイプの細胞上に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される。
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが密接に非共有結合的に会合している二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングから６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖から各々３つのループ）が生じ、これらの超可変ループが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりは低い親和性でだが、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と略記されもする「一本鎖Ｆｖ」は、接続されて単一ポリペプチド鎖になっているＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖの概説については、PluckthunのThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照されたい。
本開示の抗体の「機能性断片」は、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域を一般に含むインタクト抗体の一部分を含むか、または改良されたＦｃＲ結合能力を保持するもしくは有する抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例としては、線状抗体、抗体断片から形成される一本鎖抗体分子および多重特異性抗体が挙げられる。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残部が、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）および、そのような抗体の断片も、それらが所望される生物学的活性を呈するのであれば、含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書における目的のキメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫化することにより産生された抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲからの残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことがある。これらの修飾は、結合親和性などの抗体の性能をさらに洗練するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域が、抗体の性能、例えば、結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含み得る、少なくとも１つの、および典型的には２つの、可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。一部の実施形態では、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖内に６以下、およびＬ鎖内に３以下である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも、必要に応じて含むことになる。さらなる詳細については、例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；およびPresta, Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596 (1992)を参照されたい。例えば、Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に対するものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に対するものである。代替ヒト化方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比較して）、抗原結合部位を含有する。
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」は、本明細書で使用される場合、配列が超可変性である、および／または構造的に定義されるループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。天然抗体の場合、Ｈ３およびＬ３は、６つのＨＶＲの中で最も大きい多様性を示し、Ｈ３は、特に、抗体に対する優れた特異性を付与する固有の役割を果たすと考えられている。例えば、Xu et al. Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科動物抗体は、軽鎖の非存在下でも機能的であり、安定している。例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)およびSheriff et al., Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)を参照されたい。
いくつかのＨＶＲ描写が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａ ＨＶＲは、その代わりに、構造的ループの位置を参照する（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、入手可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基が下に記述される。
Figure 2022553378000001
別段の指示がない限り、可変ドメインの残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域の残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従って番号付けされている。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されたＨＶＲ残基以外の可変ドメインの残基である。
「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」という表現、およびこれらの変形表現は、上掲のＫａｂａｔらにおける抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用された番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮または可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによれば残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、その抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同領域でのアラインメントにより決定され得る。
「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書では、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含む、フレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークもしくはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むこともあり、または既存のアミノ酸配列変化を含有することもある。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満である。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインし、必要に応じて、最大配列同一性パーセントを達成するようにギャップを導入した後の、いずれの保存的置換も配列同一性の一部と見なさない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野における技能の範囲内である様々な手法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメーターを決定することができる。例えば、所与のアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂを対照とする（ａｇａｉｎｓｔ）、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（その代わりに、所与のアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂを対照とする（ａｇａｉｎｓｔ）、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含む、所与のアミノ酸配列Ａと、表現されることもある）は、以下：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、そのプログラムのアラインメントで配列によるＡとＢとの同一マッチとしてのスコアを獲得したアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）として算出される。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくならないことは、理解されるであろう。
特定のポリペプチドにまたは特定のポリペプチド上のエピトープ「に結合する」、「に特異的に結合する」、または「に特異的である」抗体は、いずれの他のポリペプチドにも、いずれの他のポリペプチドエピトープにも、実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドにまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合するものである。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）の、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドへの結合は、当技術分野において公知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ））により測定して、抗体のＳｉｇｌｅｃ－８への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍまたはそれ未満、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
用語「抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体」または「ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体」は、いずれの他のポリペプチドにも、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドのエピトープにも、実質的に結合することなく、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体を指す。
用語「Ｓｉｇｌｅｃ－８」は、本明細書で使用される場合、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質を指す。この用語は、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントをはじめとする、Ｓｉｇｌｅｃ－８の天然に存在するバリアントも含む。例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列は、配列番号７２で示される。別の例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列は、配列番号７３で示される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメインを含む。免疫グロブリンＦｃ領域に融合された例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号７４で示される。配列番号７４における下線付きのアミノ酸配列は、Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列のＦｃ領域を示す。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８アミノ酸配列
Figure 2022553378000002
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８アミノ酸配列
Figure 2022553378000003
Figure 2022553378000004
Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列
Figure 2022553378000005
「アポトーシスを誘導する」抗体または「アポトーシス性」である抗体は、標準的なアポトーシスアッセイ、例えば、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の膨張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成により決定される、プログラム細胞死を誘導するものである。例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）のアポトーシス活性を、細胞をアネキシンＶで染色することにより示すことができる。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するその生物活性を指し、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；およびＢ細胞活性化が挙げられる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合している分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合すること、およびその後に、その標的細胞を細胞毒素で死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞に「武器を持たせる」ものであり、この機序により標的細胞を死滅させるために必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)の４６４頁の表３にまとめられている。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを増強する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイ、例えば、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものを、行うことができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性を、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)で開示されているものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変える他のＦｃバリアントとしては、Ghetie et al., Nat Biotech.15:637-40, 1997；Duncan et al, Nature 332:563-564, 1988；Lund et al., J. Immunol 147:2657-2662, 1991；Lund et al, Mol Immunol 29:53-59, 1992；Alegre et al, Transplantation 57:1537-1543, 1994；Hutchins et al., Proc Natl. Acad Sci USA 92:11980-11984, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett.44:111-117, 1995；Lund et al., FASEB J9:115-119, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett 54:101-104, 1996；Lund et al, J Immunol 157:4963-4969, 1996；Armour et al., Eur J Immunol 29:2613-2624, 1999；Idusogie et al, J Immunol 164:4178-4184, 200；Reddy et al, J Immunol 164:1925-1933, 2000；Xu et al., Cell Immunol 200:16-26, 2000；Idusogie et al, J Immunol 166:2571-2575, 2001；Shields et al., J Biol Chem 276:6591-6604, 2001；Jefferis et al, Immunol Lett 82:57-65.2002；Presta et al., Biochem Soc Trans 30:487-490, 2002；Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010, 2006；米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、同第５，６７７，４２５号、同第６，１６５，７４５号、同第６，２７７，３７５号、同第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，１９４，５５１号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，２７７，３７５号、同第７，３３５，７４２号、および同第７，３１７，０９１号により開示されているものが挙げられる。
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書では、天然配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端に及ぶように通常は定義される。本開示の抗体における使用に好適な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。組換えＩｇＧ４抗体において観察される不均一性をなくすために、単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔの番号付けによればＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと呼ばれる）を導入することができる。Angal, S. et al.(1993) Mol Immunol 30, 105-108を参照されたい。
「非フコシル化」抗体または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域に結合している炭水化物構造のフコースが低減されたか、またはフコースが欠如している、Ｆｃ領域を含む、グリコシル化抗体バリアントを指す。一部の実施形態では、フコースが低減されたか、またはフコースが欠如している抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。非フコシル化抗体またはフコース欠損抗体は、細胞系において産生された同じ抗体におけるフコースの量と比較してフコースが低減されている。一部の実施形態では、本明細書で企図される非フコシル化抗体組成物またはフコース欠損抗体組成物は、組成物中の抗体のＦｃ領域に結合しているＮ結合型グリカンの約５０％未満がフコースを含む、組成物である。
用語「フコシル化」または「フコシル化された」は、抗体のペプチド骨格に結合しているオリゴ糖内にフコース残基が存在することを指す。具体的には、フコシル化抗体は、抗体Ｆｃ領域に結合しているＮ結合型オリゴ糖の一方または両方における最も内側のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基に、例えば、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＡｓｎ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に、α（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンのわずかな配列変動に起因して、２９７位の約＋３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４～３００位の間に、位置することもある。
「フコシル化度（ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」は、当技術分野において公知の方法によって特定される、例えば、マトリックス支援レーザー脱離－イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ）により評価されるＮ－グリコシダーゼＦで処理された抗体組成物中の、すべてのオリゴ糖に対するフコシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全フコシル化抗体」の組成物では、本質的にすべてのオリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態では、完全フコシル化抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化度を有する。したがって、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域内の２つのＮ結合型オリゴ糖の各々にフコース残基を概して含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物には、フコシル化されているオリゴ糖が本質的になく、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域内の２つのＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含有しない。一部の実施形態では、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化度を有する。「部分フコシル化抗体」の組成物では、オリゴ糖の一部のみがフコースを含む。そのような組成物中の個々の抗体は、フコース残基を、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖のいずれにも含まないこともあり、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖の一方または両方に含むこともあるが、ただし、組成物が、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖内のフコース残基が欠如している本質的にすべての個々の抗体を含むわけでも、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含有する本質的にすべての個々の抗体を含むわけでもないことを条件とする。一実施形態では、部分フコシル化抗体の組成物は、約１０％～約８０％（例えば、約５０％～約８０％、約６０％～約８０％、または約７０％～約８０％）のフコシル化度を有する。
「結合親和性」は、本明細書で使用される場合、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の強度を指す。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８（これは、本明細書に記載のＳｉｇｌｅｃ－８－Ｆｃ融合タンパク質などの、二量体であることもある）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含む、当技術分野において公知の一般的な方法により測定することができる。
「結合アビディティー」は、本明細書で使用される場合、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との結合強度を指す。
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、それが産生された環境では通常それに付随している少なくとも１つの夾雑核酸分子から分離されている、核酸分子である。一部の実施形態では、単離された核酸には、産生環境に付随するいかなる成分も付随していない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体コードする単離された核酸分子は、それが自然界に見られる形態または状況のもの以外の形態のものである。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする核酸と区別される。
用語「医薬製剤」は、活性成分の生物活性が有効であることを可能にするような形態である調製物であって、製剤が投与されることになる個体にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は、無菌である。
「担体」は、本明細書で使用される場合、用いられる投薬量および濃度でそれに曝露される細胞または哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；抗酸化剤（アスコルビン酸を含む）；低分子量（例えば、約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシン；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；ならびに／または非イオン性表面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「処置」または「処置すること」は、臨床病理の過程で処置を受けている個体または細胞の自然経過を変えるように計画された臨床介入を指す。処置の望ましい効果としては、疾患進行速度の低下、病状の改善または緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、疾患（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシア）に関連する１つまたは複数の症状が軽減または消失した場合、個体は、成功裏に「処置」されている。例えば、処置が、罹患者の生活の質の向上、疾患を処置するために必要とされる他の投与薬の用量の減少、疾患の再発頻度の低減、疾患の重症度の低下、疾患の発症もしくは進行の遅延、および／または個体の生存の延長をもたらした場合、個体は、成功裏に「処置」されている。
本明細書で使用される場合、「と併せて」または「と組み合わせて」は、１つの処置モダリティを別の処置モダリティに加えて投与することを指す。したがって、「と併せて」または「と組み合わせて」は、１つの処置モダリティを、他の処置モダリティの個体への投与前、投与中または投与後に投与することを指す。
本明細書で使用される場合、用語「予防」または「予防すること」は、個体における疾患の発生または再発に対する予防法を提供することを含む。個体は、疾患があるとまだ診断されていないが、疾患にかかりやすい素因を有すること、疾患に罹患しやすいこと、または疾患を発症するリスクがあることがある。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、疾患（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシア）の発症を遅延させるために使用される。
本明細書で使用される場合、疾患（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシア）を発症する「リスクがある」個体には、検出可能な疾患もしくは疾患の症状があっても、なくてもよく、そのような個体は、本明細書に記載の処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示していたことがあっても、示していたことがなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、当技術分野において公知であるような、疾患（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシア）の発症と相関する測定可能なパラメーターである、１つまたは複数のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つまたは複数を有する個体は、疾患を発症する確率が、これらのリスク因子の１つまたは複数を有さない個体よりも高い。
「有効量」は、少なくとも、治療的または予防的結果を含む所望のまたは示される効果を必要な投薬量で必要な期間にわたって得るために有効な量を指す。有効量を１回または複数の投与で提供することができる。「治療有効量」は、少なくとも、特定の疾患の測定可能な改善を果たすのに必要な最低濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の病状、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘起する抗体の能力などの、因子によって変わり得る。治療有効量は、抗体のいかなる毒性または有害効果よりも、治療に有益な効果のほうが上回る量でもあり得る。「予防有効量」は、必要な投薬量で必要な期間にわたって所望の予防的結果を達成するのに有効な量を指す。必ずしもそうとは限らないが、通常は、予防用量は疾患の前にまたはより早期に個体に使用されるので、予防有効量は、治療有効量より少ない量であり得る。
「慢性」投与は、初期の治療効果（活性）を長期間にわたって維持するような、急性方式とは対照的な連続方式での医薬の投与を指す。「間欠」投与は、中断することなく連続的に行われる処置ではなく、むしろ事実上周期的である処置である。
用語「添付文書」は、治療製品の市販のパッケージ内に通例含まれている指示であって、そのような治療製品の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌および／または警告についての情報を含む指示を指すために使用される。
本明細書で使用される場合、「個体」または「被験体」は、哺乳動物である。処置を目的として「哺乳動物」は、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩用の動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む。一部の実施形態では、個体または被験体は、ヒトである。
ＩＩ．方法
個体におけるＩＢＳを処置および／または予防するための方法であって、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）または前記抗体を含む組成物の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書で提供される。個体における機能性ディスペプシアを処置および／または予防するための方法であって、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）または前記抗体を含む組成物の有効量を投与するステップを含む方法がさらに本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
一部の実施形態では、個体は、ＩＢＳを有する。一部の実施形態では、個体は、ＩＢＳと診断された。ＩＢＳは典型的に、除外診断である。例えば、一部の実施形態では、個体は、本明細書に開示されるようなＩＢＳの１つまたは複数の症状を有し、必要に応じて、１つまたは複数の他の状態を除外するために検査された。
一部の実施形態では、組成物の投与に先立ち、個体は、ＩＢＳのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない。
一部の実施形態では、個体は、機能性ディスペプシアを有する。一部の実施形態では、個体は、機能性ディスペプシアと診断された。ＩＢＳと同様に、機能性ディスペプシアは典型的に、除外診断である。例えば、一部の実施形態では、個体は、本明細書に開示されるような機能性ディスペプシアの１つまたは複数の症状を有し、必要に応じて、１つまたは複数の他の状態を除外するために、例えば、内視鏡検査によって検査された。一部の実施形態では、個体は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染について陰性であるか、または陰性であると検査された。
一部の実施形態では、組成物の投与に先立ち、個体は、機能性ディスペプシアのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない。
一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸または結腸粘膜から得られる試料における肥満細胞および／または好酸球の数または活性のうち一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。
一部の実施形態では、本明細書に記載のような個体（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを有する個体）に、本開示の組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）の有効量を投与するステップは、抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、個体における１つまたは複数の（例えば、１つまたは複数の、２つまたはそれよりも多い、３つまたはそれよりも多い、４つまたはそれよりも多い等の）症状を低下させる。
一部の実施形態では、個体におけるＩＢＳの１つまたは複数の症状（複数可）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。ＩＢＳの症状は、腹痛、腹部痙攣、ガス、悪心、腹部膨満、下痢、便秘、しぶり、切迫感、大便失禁および粘液便のうち１つまたは複数を含むがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、個体における機能性ディスペプシアの１つまたは複数の症状（複数可）は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低下する。機能性ディスペプシアの症状は、腹部不快感または灼熱感、腹部膨満、食後の疼痛、げっぷ、早期満腹感、嘔吐および悪心のうち１つまたは複数を含むがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与は、処置に対する持続した応答をもたらす。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体の投与は、処置に対する完全奏効をもたらす（例えば、処置の休止の後に、または抗体もしくは組成物の単一用量の後に）。
本明細書で互換的に使用される用語「ベースライン」または「ベースライン値」は、治療法（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）の投与前のまたは治療法の投与開始時の症状の測定値または特徴づけを指すことができる。ベースライン値は、本明細書で企図されるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアの症状の低下または改善を決定するために、参照値と比較することができる。参照値および／またはベースライン値は、１個体から、異なる２個体からまたは個体の群（例えば、２、３、４、５またはそれよりも多い個体の群）から得ることができる。
本明細書で互換的に使用される用語「参照」または「参照値」は、ＩＢＳも機能性ディスペプシアもない個体（またはこのような個体の群）における値または症状の測定値または特徴づけを指すことができる。「参照値」は、絶対値；相対値；上限および／もしくは下限を有する値；値の範囲；平均的な値（ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ）；中央値；平均値（ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ）；またはベースライン値と比較した値であり得る。同様に、「ベースライン値」は、絶対値；相対値；上限および／もしくは下限を有する値；値の範囲；平均的な値；中央値；平均値；または参照値と比較した値であり得る。参照値は、１個体から、異なる２個体からまたは個体の群（例えば、２、３、４、５またはそれよりも多い個体の群）から得ることができる。一部の実施形態では、参照値は、当該分野における標準またはベンチマーク値を指す。一部の実施形態では、参照値は、１または複数の個体（例えば、ＩＢＳも機能性ディスペプシアもない）からｄｅ ｎｏｖｏに計算された値を指す。
投与
疾患の予防または処置のため、活性薬剤の適切な投薬量は、上に定義されているような処置されるべき疾患の型、疾患の重症度および経過、薬剤が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、個体の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに担当医の裁量に依存するであろう。薬剤は、一度に、または一連の処置にわたって個体に好適に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）の投与間の間隔は、約１カ月間またはそれよりも長い。一部の実施形態では、投与間の間隔は、約１カ月間、約２カ月間、約３カ月間、約４カ月間、約５カ月間、約６カ月間またはそれよりも長い。本明細書で使用される場合、投与間の間隔は、抗体のある一投与および抗体の次の投与の間の期間を指す。本明細書で使用される場合、約１カ月間の間隔は、４週間を含む。したがって、一部の実施形態では、投与間の間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間またはそれよりも長い。一部の実施形態では、処置は、抗体の複数投与を含み、投与間の間隔は、変動し得る。例えば、第１の投与および第２の投与の間の間隔は、約１カ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３カ月間である。一部の実施形態では、第１の投与および第２の投与の間の間隔は、約１カ月間であり、第２の投与および第３の投与の間の間隔は、約２カ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３カ月間である。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、平坦な（flat）用量で投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約０．１ｍｇ～約１８００ｍｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇおよび１８００ｍｇのいずれかの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約１５０ｍｇ～約４５０ｍｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇおよび４５０ｍｇのいずれかの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、用量あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投薬量で個体に投与される。上述の投薬頻度のいずれかを使用することができる。上述のいずれの投薬頻度も、本明細書に記載の方法または組成物の使用において使用することができる。本明細書に記載の抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）による処置の有効性は、毎週～３カ月毎に及ぶ間隔で、本明細書に記載の方法論またはアッセイのいずれかを使用して評価することができる。一部の実施形態では、処置の有効性（例えば、１つまたは複数の症状の低下または改善）は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体の投与後に、約１カ月毎、約２カ月毎、約３カ月毎、約４カ月毎、約５カ月毎、約６カ月毎またはそれよりも長い間隔で評価される。一部の実施形態では、処置の有効性（例えば、１つまたは複数の症状の低下または改善）は、約１週間毎、約２週間毎、約３週間毎、約４週間毎、約５週間毎、約６週間毎、約７週間毎、約８週間毎、約９週間毎、約１０週間毎、約１１週間毎、約１２週間毎、約１６週間毎、約２０週間毎、約２４週間毎またはそれよりも長い間隔で評価される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約４．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１または複数の用量で、個体に投与される（例えば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１または複数の用量で、例えば、約０．３ｍｇ／ｋｇ抗体、約０．５ｍｇ／ｋｇ抗体、約１．０ｍｇ／ｋｇ抗体、約１．５ｍｇ／ｋｇ抗体、約２．０ｍｇ／ｋｇ抗体、約２．５ｍｇ／ｋｇ抗体または約３．０ｍｇ／ｋｇ抗体で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、２またはそれよりも多い用量（例えば、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）において、約２８日間の間隔で、個体に投与される（例えば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、毎月、２またはそれよりも多い用量（例えば、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）において個体に投与される（例えば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、２またはそれよりも多い用量（例えば、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）において、約４週間の間隔で、個体に投与される（例えば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、以下のスケジュールに従って、個体に投与される（例えば、静脈内注入によって）：１日目、２９日目、５７日目、８５日目、１１３日目および１４１日目。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、抗体は、以下のスケジュールに従って、静脈内注入によって個体に投与される：１日目の約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体、２９日目の約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、５７日目の約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、８５日目の約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、１１３日目の約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、および１４１日目の約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体。
一部の実施形態では、本開示の方法は、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体または組成物を、１または複数の用量において投与するステップを含む。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、組成物（すなわち、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む）の第１の用量の投与の少なくとも６時間前に、個体に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップ、次いで、副腎皮質ステロイド薬の投与の少なくとも６時間後に組成物（すなわち、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む）の第１の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に組成物の投与の少なくとも１２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に組成物の投与前２４時間以内に、例えば、投与の６～２４時間前または１２～２４時間前に、投与される。
一部の実施形態では、組成物の第１の用量は、約４時間の期間にわたる静脈内注入によって個体に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に組成物（すなわち、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む）の第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される。一部の実施形態では、方法は、個体に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップ、次いで、個体に副腎皮質ステロイド薬の投与の少なくとも６時間後に組成物（すなわち、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む）の第１の用量を投与するステップを含み、組成物の第１の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。
一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、またはデキサメタゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体での処置を受けている個体により自己投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、経口投与される。
一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、０．５ｍｇ／ｋｇより多い用量、または約１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、８０ｍｇの用量で投与される。例えば、一部の実施形態では、方法は、個体に、０．５ｍｇ／ｋｇより多いプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に、６０ｍｇまたは８０ｍｇのプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。
一部の実施形態では、組成物の第１の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第１の用量の総体積の５０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第１の用量の総体積の３０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第１の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第１の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ａに示されているスケジュールに従って投与される。
表A. 4時間注入のための注入速度スケジュール
Figure 2022553378000006
Figure 2022553378000007
一部の実施形態では、約４時間にわたっての静脈内注入による組成物の第１の用量の投与は、約４時間未満である期間にわたっての静脈内注入による第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクを低減させる。一部の実施形態では、約４時間にわたっての静脈内注入による組成物の第１の用量の投与は、約４時間未満である期間にわたっての静脈内注入による第１の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）の重症度を低減させる。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３．０ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７．０ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８．０ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９．０ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与される。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量で静脈内または皮下経路によって投与される。
一部の実施形態では、方法は、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップをさらに含む。すなわち、方法は、第１の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップ、および第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップを含み得る。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、ヒドロコルチゾン、またはデキサメタゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、経口投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、静脈内投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、０．５ｍｇ／ｋｇより多い用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、８０ｍｇの用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、メチルプレドニゾロン）は、１００ｍｇの用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。
一部の実施形態では、方法は、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップを含み得る。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、セチリジンである。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、経口投与される。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン）は、１０ｍｇの用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン）は、１０ｍｇの用量で、第１の用量の投与の４０分～１８０分前に投与される。
一部の実施形態では、方法は、個体に第１の用量の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に解熱薬またはＮＳＡＩＤを投与するステップを含み得る。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、アセトアミノフェンである。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、経口投与される。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤ（例えば、アセトアミノフェン）は、９７５～１０００ｍｇの用量で、第１の用量の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第２の用量を投与するステップをさらに含む。例えば、第２の用量を、第１の用量の投与の約２８日、約４週間または約１カ月後に投与することができる。一部の実施形態では、第２の用量は、第２の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、個体に投与される。すなわち、一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の、後続の用量ではなく、第１の用量のみの投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に、個体に投与される。
一部の実施形態では、組成物の第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第２の用量の総体積の５０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第２の用量の総体積の３０％未満は、個体に注入の最初の２時間で投与される。一部の実施形態では、第２の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第２の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ａに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ａに示されているスケジュールに従って投与される。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において０．１ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）において約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．０ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３．０ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４．０ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５．０ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６．０ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７．０ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８．０ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９．０ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの間でおよび第２の用量において約３ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間でおよび第２の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇでおよび第２の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において３ｍｇ／ｋｇでおよび第２の用量において１０ｍｇ／ｋｇで投与される。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）で静脈内または皮下経路によって投与される。
一部の実施形態では、第２の用量は、第２の用量の投与の少なくとも６時間前、投与の少なくとも１２時間前、投与前２４時間以内、投与の６～２４時間前、または投与の１２～２４時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、投与される。他の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第２の用量の投与の少なくとも６時間前、投与の少なくとも１２時間前、投与前２４時間以内、投与の６～２４時間前、または投与の１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、プレドニゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、またはデキサメタゾンである。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体での処置を受けている個体により自己投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、経口投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、０．５ｍｇ／ｋｇより多い用量、または約１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬（例えば、プレドニゾン）は、８０ｍｇの用量で投与される。例えば、一部の実施形態では、方法は、個体に、０．５ｍｇ／ｋｇより多いプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に１ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、個体に８０ｍｇのプレドニゾンを、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２の用量の投与の少なくとも６時間前（および必要に応じて２４時間以内）、少なくとも１２時間前（および必要に応じて２４時間以内）、６～２４時間前、または１２～２４時間前に投与するステップを含む。一部の実施形態では、第２の用量の投与の少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクを低減させる。一部の実施形態では、第２の用量の投与の少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクを低減させる。一部の実施形態では、第２の用量の投与の１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）のリスクを低減させる。一部の実施形態では、第２の用量の投与の少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも６時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）の重症度を低減させる。一部の実施形態では、第２の用量の投与の少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、少なくとも１２時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）の重症度を低減させる。一部の実施形態では、第２の用量の投与の１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与は、１２～２４時間前の副腎皮質ステロイド薬の投与を伴わない第２の用量の投与と比較して、個体における注入に伴う反応（ＩＲＲ）の重症度を低減させる。一部実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に第１および第２の用量の投与の少なくとも６時間前、投与の少なくとも１２時間前、投与前２４時間以内、投与の６～２４時間前、または投与の１２～２４時間前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイド薬は、個体に抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第１および第２の用量の投与の少なくとも６時間前、投与の少なくとも１２時間前、投与前２４時間以内、投与の６～２４時間前、または投与の１２～２４時間前に投与されるが、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の後続のいずれの用量の前にも投与されない。
一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与の１～２時間前に副腎皮質ステロイド薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第１の用量の投与の１～２時間前に個体に投与される副腎皮質ステロイド薬は、メチルプレドニゾロンである。一部の実施形態では、１００ｍｇのメチルプレドニゾロンは、個体に第１の用量の（例えば、静脈内）投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。
一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に抗ヒスタミン薬を投与するステップを含み得る。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、セチリジンである。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬は、経口投与される。一部の実施形態では、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン）は、１０ｍｇの用量で、第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。
一部の実施形態では、方法は、個体に第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に解熱薬またはＮＳＡＩＤを投与するステップを含み得る。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、アセトアミノフェンである。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤは、経口投与される。一部の実施形態では、解熱薬またはＮＳＡＩＤ（例えば、アセトアミノフェン）は、９７５～１０００ｍｇの用量で、第２の用量（および必要に応じて任意の後続の用量）の投与前１時間以内、投与の約１時間前、投与前２時間以内、投与の約２時間前、または投与の１～２時間前に投与される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第３の用量を（例えば、本明細書に記載されるような第２の用量の投与の後に）投与するステップをさらに含む。例えば、第３の用量を、第２の用量の投与の約２８日、約４週間もしくは約１カ月後に、および／または第１の用量の投与の約５６日、約８週間もしくは約２カ月後に、投与することができる。一部の実施形態では、第３の用量は、第３の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、個体に投与される。
一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約２時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間１０ｍＬ／時、１５分間２５ｍＬ／時、１５分間４０ｍＬ／時、１５分間５５ｍＬ／時、１５分間７０ｍＬ／時、１５分間８５ｍＬ／時、および１６分間１００ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｂに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間２ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間２０ｍＬ／時、３０分間４０ｍＬ／時、および６４分間６０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｃに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ａに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間２４ｍＬ／時、および４５分間１２５．３ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、第３の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｄに示されているスケジュールに従って投与される。
表B. 2時間注入のための注入速度スケジュール
Figure 2022553378000008

表C. 3時間注入のための注入速度スケジュール
Figure 2022553378000009

表D. 1時間注入のための注入速度スケジュール
Figure 2022553378000010
一部の実施形態では、組成物の第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与され、組成物の第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。例えば、一部の実施形態では、第１、第２および第３の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって、例えば表Ｃに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって、例えば表Ｂに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって、例えば表Ｄに従って投与される。例えば、第３の用量は、第１および／または第２の用量の投与後に起きる注入に伴う反応がないかまたはそれが軽度である場合、例えば医師の判断に従って、より短い注入時間にわたって個体に投与され得る。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第３の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第３の用量において１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第３の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第３の用量において１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇで、続いて第２および第３の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、方法は、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第４の用量を（例えば、本明細書に記載されるような第３の用量の投与の後に）投与するステップをさらに含む。例えば、第４の用量を、第３の用量の投与の約２８日、約４週間もしくは約１カ月後に、第２の用量の投与の約５６日、約８週間もしくは約２カ月後に、および／または第１の用量の投与の約８４日、約１２週間もしくは約３カ月後に、投与することができる。一部の実施形態では、第４の用量は、第３の用量の投与の少なくとも６時間、少なくとも１２時間、６～２４時間、または１２～２４時間前に個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、個体に投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の６用量またはそれより多くが個体に投与される（例えば、２８日毎に、４週間毎に、または毎月投与される）。
一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約２時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間１０ｍＬ／時、１５分間２５ｍＬ／時、１５分間４０ｍＬ／時、１５分間５５ｍＬ／時、１５分間７０ｍＬ／時、１５分間８５ｍＬ／時、および１６分間１００ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｂに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間２ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間２０ｍＬ／時、３０分間４０ｍＬ／時、および６４分間６０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｃに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ａに示されているスケジュールに従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間２４ｍＬ／時、および４５分間１２５．３ｍＬ／時に従って投与される。一部の実施形態では、組成物の第４および／または後続の用量は、個体に、静脈内注入により、表Ｄに示されているスケジュールに従って投与される。
一部の実施形態では、組成物の第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与され、組成物の第３および第４の用量は、個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される。例えば、一部の実施形態では、第１、第２、第３および第４の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３および／または第４の用量は、個体に静脈内注入により約３時間にわたって、例えば表Ｃに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３および／または第４の用量は、個体に静脈内注入により約２時間にわたって、例えば表Ｂに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって、例えば表Ａに従って投与され、第３および／または第４の用量は、個体に静脈内注入により約１時間にわたって、例えば表Ｄに従って投与される。一部の実施形態では、第１および第２の用量は、個体に静脈内注入により約４時間にわたって（例えば表Ａに従って）投与され、続いて、後続の４用量（例えば、２８日毎に、４週間毎に、または毎月投与される）が個体に静脈内注入により約１時間～約４にわたって（例えば、表Ｂ、ＣまたはＤに従って）投与される。例えば、第３、第４および／または後続の用量は、第１および／または第２、第３の用量の投与後に起きる注入に伴う反応がないかまたはそれが軽度である場合、例えば医師の判断に従って、より短い注入時間にわたって個体に投与され得る。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第４の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第４の用量において１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第４の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第４の用量において１ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇで、続いて第２、第３および第４の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、個体に第１の用量において１ｍｇ／ｋｇで、続いて、後続の５用量が３ｍｇ／ｋｇで投与される（例えば、２８日毎に、４週間毎に、または毎月投与される）。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載の抗体を、本明細書に記載の方法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。上述のそのような併用療法は、併用投与（この場合、２つまたはそれより多くの治療剤が同じまたは別個の製剤に含まれている）および別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本開示の抗体の投与を、１つまたは複数の追加の治療剤の投与の前に、その投与と同時に、および／またはその投与の後に行うことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与、および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月または約６カ月以内に行われる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与、および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１週間、約２週間または約３週間以内に行われる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与、および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、または約６日以内に行われる。
上に記すこのような併用療法は、組み合わせた投与（２種またはそれよりも多い治療剤が、同じまたは別々の製剤中に含まれる）および別々の投与を包含し、その場合、本開示の抗体の投与は、１つまたは複数の追加的な治療剤の投与の前に、それと同時におよび／またはその後に行うことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加的な治療剤の投与は、互いに約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月または約６カ月以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加的な治療剤の投与は、互いに約１週間、約２週間または約３週間以内に行う。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加的な治療剤の投与は、互いに約１日、約２日、約３日、約４日、約５日または約６日以内に行う。
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体および／または１つもしくは複数の追加的な治療剤は、経口投与、舌下投与、頬側投与、外用投与、直腸投与、吸入によるもの、経皮投与、皮下注射、皮内注射、静脈内（ＩＶ）注射、動脈内注射、筋肉内注射、心臓内注射、骨内注射、腹腔内注射、経粘膜投与、腟投与、硝子体内投与、関節内投与、関節周囲投与、局所投与、皮膚上投与またはこれらのいずれかの組合せを限定することなく含む、当技術分野において公知であるいずれか好適な投与経路により投与することができる。
抗体
本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する単離された抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を有する：（１）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する、（２）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメインに結合する、（３）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性で結合する、（４）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高いアビディティーで結合する、（５）サーマルシフトアッセイで約７０℃～７２℃またはそれよりも高いＴｍを有する、（６）低減したフコシル化度を有するか、またはフコシル化されていない、（７）好酸球上に発現されたヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する、（８）肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞を枯渇させるかまたは肥満細胞の数を低減させる、（９）肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（例えば、ヒスタミン放出、ＰＧＤ２放出、Ｃａ２＋フラックス、および／またはβ－ヘキソサミニダーゼ放出など）を阻害する、（１０）ＡＤＣＣ活性を向上させるように操作されている、（１１）肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、ＡＤＣＣ活性（ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏ）により肥満細胞を死滅させる、（１２）ヒトおよび非ヒト霊長類のＳｉｇｌｅｃ－８に結合する、（１３）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３に結合するか、またはヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３を含むＳｉｇｌｅｃ－８ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質）に結合する、ならびに（１４）活性化好酸球をマウス抗体２Ｅ２または２Ｃ４のＥＣ５０よりも低いＥＣ５０で枯渇させる。米国特許第９，５４６，２１５号および／またはＷＯ２０１５０８９１１７に記載されている抗体のいずれも、本明細書で提供される方法、組成物、およびキットにおいての使用が見出され得る。
一態様では、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞を枯渇させるかまたは肥満細胞の数を低減させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞媒介活性を阻害する。
一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２におけるエピトープに結合し、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合し、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメインにおける線状エピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメインにおけるコンフォメーションエピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、好酸球上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞媒介活性を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、肥満細胞をＡＤＣＣ活性により死滅させる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、肥満細胞を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体は、活性化好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体（例えば、非フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）は、血中好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体（例えば、非フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）は、末梢血から好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する、単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。霊長類交差反応性を有する抗体の同定は、非ヒト霊長類における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の前臨床試験に有用であろう。一態様では、本発明は、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する、抗体を提供する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８は、配列番号１１８のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８は、配列番号１１９のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒ（例えば、Ｐａｐｉｏ Ａｎｕｂｉｓ）である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、マウス抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。
一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片である。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片を含む。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体のいずれも、精製されている。
一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体も提供される。Ｓｉｇｌｅｃ－８に対するマウス抗体である、２Ｅ２抗体および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号、米国特許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号、および米国特許第７，５５７，１９１号に記載されている。
一態様では、本明細書に記載の任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）とＳｉｇｌｅｃ－８への結合について競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、提供される。本明細書に記載の任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体も、提供される。
本開示の一態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドが、提供される。ある特定の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが、提供される。ある特定の実施形態では、そのようなベクターを含む宿主細胞が、提供される。本開示の別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物、または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が、提供される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアの処置のための医薬製剤である。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアの予防のための医薬製剤である。
一態様では、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、マウス抗体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。
一態様では、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、マウス抗体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２におけるエピトープに結合し、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合し、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２におけるエピトープに結合し、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合し、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む、および／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、いずれの好適なフレームワーク可変ドメイン配列を含んでいてもよいが、ただし、抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持することを条件とする。本明細書で使用される場合、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ－ＦＲ１～ＦＲ４」と呼ばれ、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ－ＦＲ１～ＦＲ４」と呼ばれる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号２６、３４、３８および４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＨＣ－ＦＲ１、ＨＣ－ＦＲ２、ＨＣ－ＦＲ３、およびＨＣ－ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号４８、５１、５５および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、およびＬＣ－ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号４８、５１、５８および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、およびＬＣ－ＦＲ４）を含む。
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列と超可変領域とを含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ－ＦＲ１～ＨＣ－ＦＲ４配列、それぞれ、配列番号２６～２９（ＨＣ－ＦＲ１）、配列番号３１～３６（ＨＣ－ＦＲ２）、配列番号３８～４３（ＨＣ－ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ－ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ－Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列と超可変領域とを含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ－ＦＲ１～ＨＣ－ＦＲ４配列、それぞれ、配列番号２６～２９（ＨＣ－ＦＲ１）、配列番号３１～３６（ＨＣ－ＦＲ２）、配列番号３８～４３（ＨＣ－ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ－ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ－Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ３は、配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列と超可変領域とを含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ－ＦＲ１～ＬＣ－ＦＲ４配列、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ－ＦＲ１）、配列番号５１～５３（ＬＣ－ＦＲ２）、配列番号５５～５８（ＬＣ－ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ－ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ－Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ３は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列と超可変領域とを含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ－ＦＲ１～ＬＣ－ＦＲ４配列、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ－ＦＲ１）、配列番号５１～５３（ＬＣ－ＦＲ２）、配列番号５５～５８（ＬＣ－ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ－ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ－Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、
a) HVR-H1 (IYGAH (配列番号61));
b) HVR-H2 (VIWAGGSTNYNSALMS (配列番号62)); および
c) HVR-H3 (DGSSPYYYSMEY (配列番号63); DGSSPYYYGMEY (配列番号 67); DGSSPYYYSMDY (配列番号68); DGSSPYYYSMEV (配列番号69); または DGSSPYYYGMDV (配列番号70))
を含む。
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、
a) HVR-H1 (SYAMS (配列番号88); DYYMY (配列番号89);またはSSWMN (配列番号90));
b) HVR-H2 (IISSGGSYTYYSDSVKG (配列番号91); RIAPEDGDTEYAPKFQG (配列番号92); または QIYPGDDYTNYNGKFKG (配列番号93)); およびc) HVR-H3 (HETAQAAWFAY (配列番号94); EGNYYGSSILDY (配列番号95); または LGPYGPFAD (配列番号96))
を含む。
一部の実施形態では、重鎖ＦＲ配列は、
a) HC-FR1 (EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLT (配列番号26); EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLT (配列番号27); QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS (配列番号28); または QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLT (配列番号29));
b) HC-FR2 (WVRQAPGKGLEWVS (配列番号31); WVRQAPGKGLEWLG (配列番号32); WVRQAPGKGLEWLS (配列番号 33); WVRQAPGKGLEWVG (配列番号34); WIRQPPGKGLEWIG (配列番号35); または WVRQPPGKGLEWLG (配列番号36));
c) HC-FR3 (RFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (配列番号38); RLSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (配列番号39); RLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (配列番号40); RFSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (配列番号41); RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR (配列番号42); または RLSISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCAR (配列番号43)); および
d) HC-FR4 (WGQGTTVTVSS (配列番号45); または WGQGTLVTVSS (配列番号 46))
を含む。
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、
a) HVR-L1 (SATSSVSYMH (配列番号64));
b) HVR-L2 (STSNLAS (配列番号65)); および
c) HVR-L3 (QQRSSYPFT (配列番号66); または QQRSSYPYT (配列番号71))
を含む。
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、
a) HVR-L1 (SASSSVSYMH (配列番号97); RASQDITNYLN (配列番号98); または SASSSVSYMY (配列番号99));
b) HVR-L2 (DTSKLAY (配列番号100); FTSRLHS (配列番号101); または DTSSLAS (配列番号102)); および
c) HVR-L3 (QQWSSNPPT (配列番号103); QQGNTLPWT (配列番号104); または QQWNSDPYT (配列番号105))
を含む。
一部の実施形態では、抗体は、
（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域、および／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域、および／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；または
（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域、および／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域
を含む。
一部の実施形態では、軽鎖ＦＲ配列は、
a) LC-FR1 (EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC (配列番号48); または EIILTQSPATLSLSPGERATLSC (配列番号49));
b) LC-FR2 (WFQQKPGQAPRLLIY (配列番号51); WFQQKPGQAPRLWIY (配列番号:52); または WYQQKPGQAPRLLIY (配列番号 53));
c) LC-FR3 (GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (配列番号55); GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC (配列番号56); GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC (配列番号57); または GIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC (配列番号58)); および
d) LC-FR4 (FGPGTKLDIK (配列番号60))
を含む。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）であって、抗体が重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、抗体が、
（ａ）
（１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、
（３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、
（５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、
（７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４と
を含む重鎖可変ドメイン、および／または
（ｂ）
（１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、
（３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、
（５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４と
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗体が本明細書で提供される。
一態様では、配列番号２～１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１６～２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号２～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１６～２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号２～１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号１１～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１６～２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号１１～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号６の重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
一態様では、配列番号１０６～１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１０９～１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号１０６の重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号１０７の重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一態様では、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを含む、および／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
一部の実施形態では、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、配列番号１０６～１０８から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比較して置換、挿入または欠失を含有するが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲ内で）生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１０６～１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、配列番号１０９～１１１から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比較して置換、挿入または欠失を含有するが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲ内で）生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１０９～１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
一態様では、本開示は、（ａ）表１で示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ ＨＶＲ、および／または（ｂ）表１で示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一態様では、本開示は、（ａ）表２で示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ ＨＶＲ、および／または（ｂ）表２で示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一態様では、本開示は、（ａ）表３で示されるものから選択される１つ、２つ、３つもしくは４つのＶＨ ＦＲ、および／または（ｂ）表３で示されるものから選択される１つ、２つ、３つもしくは４つのＶＬ ＦＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一部の実施形態では、表４で示される抗体、例えば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、ＨＡＫＣ抗体などの、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。
表1. 抗体のHVRのアミノ酸配列
Figure 2022553378000011
Figure 2022553378000012
表2. マウス1C3、1H10および4F11抗体由来のHVRのアミノ酸配列
Figure 2022553378000013
表3. 抗体のFRのアミノ酸配列
Figure 2022553378000014
Figure 2022553378000015
Figure 2022553378000016
表4. 抗体の可変領域のアミノ酸配列
Figure 2022553378000017
Figure 2022553378000018
Figure 2022553378000019
Figure 2022553378000020
Figure 2022553378000021
免疫グロブリンには、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる重鎖をそれぞれ有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがある。γおよびαクラスは、サブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと呼ばれる複数の多型バリアントで存在することができ（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において概説されている）、これらのバリアントのいずれも、本明細書の実施形態の一部における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚまたはこれらの組合せで表記されるものである。本明細書における実施形態のいずれにおいても、抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含み得る。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、休止好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、肥満細胞を枯渇させるかまたは低減させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、肥満細胞を枯渇させるかまたは肥満細胞の数を低減させる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、肥満細胞をＡＤＣＣ活性により死滅させる。一部の実施形態では、抗体は、組織内のＳｉｇｌｅｃ－８を発現する肥満細胞を枯渇させるかまたは低減させる。一部の実施形態では、抗体は、生体液中のＳｉｇｌｅｃ－８を発現する肥満細胞を枯渇させるかまたは低減させる。
１．抗体親和性
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較して、ほぼ同じまたはより高い親和性および／またはより高いアビディティーで、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍまたはそれ未満、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４より約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍高い親和性で、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、２５℃で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて約１０応答単位（ＲＵ）でＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することにより、測定することができる。簡単に言うと、カルボキシメチル化 デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。捕捉抗体（例えば、抗ヒトＦｃ）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈した後、３０μｌ／分の流量で注入し、さらに、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を固定化する。動態測定のために、二量体Ｓｉｇｌｅｃ－８の２倍段階希釈物を、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０（ＰＢＳＴ）を含有するＰＢＳに、２５℃で、おおよそ２５μｌ／分の流量で注入する。単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、結合および解離センソグラムの同時フィッティングにより、結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. Mol. Biol. 293:865-881を参照されたい。
別の実施形態では、バイオレイヤー干渉法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－８に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の親和性を決定することができる。例示的なアッセイでは、Ｓｉｇｌｅｃ－８－Ｆｃタグ付きタンパク質を、抗ヒト捕捉センサー上に固定化し、漸増濃度のマウス、キメラ、またはヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆａｂ断片とともにインキュベートして、例えばＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４ Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などの計器を使用して親和性測定値を得る。
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合親和性は、例えば、関連技術分野では周知の標準的な技法を使用してMunson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980) に記載されているスキャッチャード解析により、決定することもできる。Scatchard, G., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660 (1947)も参照されたい。
２．抗体アビディティー
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ１００を使用することによりＫｄまたはＫｄ値を測定することができる。捕捉抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＦｃおよびヤギ抗マウスＦｃ）をＣＭ５チップ上に固定化する。フローセルに抗ヒト抗体または抗マウス抗体を固定化することができる。ある特定の温度および流量、例えば、２５℃で、３０μｌ／分の流量で、アッセイを行う。二量体Ｓｉｇｌｅｃ－８を、アッセイ緩衝液中、様々な濃度で、例えば、１５ｎＭ～１．８８ｐＭの範囲の濃度で希釈する。抗体を捕捉し、高性能インジェクションを行い、それに続いて解離が起こる。フローセルを、緩衝液、例えば５０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５で、再生させる。結果を空の参照セルおよび複数回のアッセイ緩衝液インジェクションでブランク化し、１：１グローバルフィットパラメーターを用いて解析する。
３．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一のもしくは立体的にオーバーラップしているエピトープを認識することにより同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかを決定することができる。これらのアッセイは、当技術分野において公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞をマルチウェルプレート上に固定化し、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を測定する。そのような競合アッセイの一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、細胞（たとえば、肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載の２Ｅ２抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、細胞（例えば、肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合について、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、細胞（例えば、肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載の２Ｃ４抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、細胞（例えば、肥満細胞）の細胞表面に存在するエピトープへの結合について、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（米国特許第８，２０７，３０５号において見出されるような）と配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（米国特許第８，２０７，３０５号において見出されるような）とを含む抗体と競合する。
４．熱安定性
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８は、サーマルシフトアッセイにおいて少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃、または少なくとも約７２℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。例示的なサーマルシフトアッセイでは、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む試料を、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいてサイクル毎に１℃上昇させて７１サイクルにわたって蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）とともにインキュベートして、Ｔｍを決定する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較して、同様のまたはより高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較して、同様のまたはより高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを有する抗体と比較して、同じまたはより高いＴｍを有する。
５．生物活性アッセイ
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、好酸球を枯渇させ、肥満細胞を阻害する。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイ、例えば、アネキシンＶでの染色およびＴＵＮＮＥＬアッセイは、当技術分野において周知である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球をＡＤＣＣ活性により死滅させる。一部の実施形態では、組成物は、非フコシル化（すなわち、脱フコシル化）抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の非フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物は、部分フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－８発現好酸球に対するＡＤＣＣ活性を増強する。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、当技術分野において周知であり、本明細書に記載される。例示的なアッセイでは、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または細胞表面にＦｃ受容体を有する白血球、例えば、好中球、好酸球およびマクロファージが挙げられる。エフェクター細胞は、目的の疾患（例えば、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシア）を有する個体を含むいずれかの供給源から単離することができる。標的細胞は、評価すべき抗体が認識し得る抗原を細胞表面に発現する任意の細胞である。そのような標的細胞の例は、細胞表面にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球である。そのような標的細胞の別の例は、細胞表面にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する細胞系（例えば、Ｒａｍｏｓ細胞系）（例えば、Ｒａｍｏｓ ２Ｃ１０）である。標的細胞を、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識することができる。標識用の試薬の例としては、放射性物質、例えば、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４）が挙げられる。例えば、Immunology, 14, 181 (1968)；J. Immunol. Methods., 172, 227 (1994)；およびJ. Immunol. Methods., 184, 29 (1995)を参照されたい。
肥満細胞に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための例示的なアッセイでは、ヒト肥満細胞を、公開されているプロトコール（Guhl et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 2011, 75:382-384；Kulka et al., In Current Protocols in Immunology, 2001, (John Wiley & Sons, Inc.)）に従ってヒト組織もしくは生体液から単離するか、または例えば、Yokoi et al., J Allergy Clin Immunol., 2008, 121:499-505により記載されたように、ヒト造血幹細胞から分化させる。精製肥満細胞を滅菌９６ウェルＵ底プレート中の完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の存在または非存在下で３０分間、０．０００１ｎｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌの間の範囲の濃度でインキュベートする。試料をさらに４～４８時間、精製ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮なＰＢＬとともにおよび伴わずにインキュベートして、ＡＤＣＣを誘導する。肥満細胞を検出するために蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）を使用して、ならびに生細胞と死細胞または死にゆく細胞とを区別するためにアネキシン－Ｖおよび７ＡＡＤを使用して、フローサイトメトリーによりアポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞死滅を解析する。アネキシン－Ｖおよび７ＡＡＤでの染色は、製造業者の指示に従って行う。
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、肥満細胞により媒介される活性を阻害する。肥満細胞トリプターゼは、総肥満細胞数および活性化のバイオマーカーとして使用されている。例えば、総トリプターゼおよび活性トリプターゼ、ならびにヒスタミン、Ｎ－メチルヒスタミンおよび１１－ベータ－プロスタグランジンＦ２を、血液または尿において測定して、肥満細胞の低減を評価することができる。例示的な肥満細胞活性アッセイについては、例えば米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１０２９３６３１を参照されたい。
Ｅ．抗体調製
本明細書に記載の抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、抗体を生成するための当技術分野で利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法は、より詳細に以下の節で説明される。
１．抗体断片
本開示は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化などの旧来の手段により、または組換え技術により、生成することができる。ある特定の状況では、抗体全体ではなく、抗体断片を使用することに利点がある。ある特定の抗体断片の総説については、Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134を参照されたい。
様々な技法が、抗体断片の産生のために開発されてきた。伝統的には、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解性消化によって得られた（例えば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；およびBrennan et al., Science, 229:81 (1985)を参照されたい）。しかし、これらの断片を今では組換え宿主細胞により直接的に産生することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片は、すべて、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現され得、Ｅ．ｃｏｌｉから分泌され得るため、大量のこれらの断片の容易な産生が可能である。抗体断片を上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片を、Ｅ．ｃｏｌｉから直接的に回収し、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片を組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が延長されたＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかであろう。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域がないインタクト結合部位を有する唯一の種であり、したがって、これらは、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用中の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のどちらかでエフェクタータンパク質の融合を生じさせるように、ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築することができる。例えば、上掲のAntibody Engineering, ed. Borrebaeckを参照されたい。抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に例えば記載されているような、「線状抗体」であることもある。そのような線状抗体は、単一特異性であることもあり、または二重特異性であることもある。
２．ヒト化抗体
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法は、当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、これらの残基は、通常は「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Jones et al. (1986) Nature 321:522-525；Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536）に従って、超可変領域配列でヒト抗体の対応する配列を置換することにより、行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない可変ドメインが非ヒト種からの対応する配列により置換されている、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は、通常は、一部の超可変領域残基およびことによると一部のＦＲ残基がげっ歯類抗体の類似の部位からの残基により置換されたヒト抗体である。
ヒト化抗体の作製に使用されることになる、軽鎖および重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために重要であり得る。いわゆる「ベストフィット」法に従って、げっ歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列を公知ヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。次に、げっ歯類のものに最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のためのヒトフレームワークとして受入れる（Sims et al.(1993) J. Immunol. 151:2296；Chothia et al.(1987) J. Mol. Biol. 196:901）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285；Presta et al. (1993) J. Immunol., 151:2623）。
さらに、一般に、抗原に対する高度な親和性および他の好ましい生物学的特性を保持したまま抗体をヒト化することが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列および様々な概念上のヒト化産物の解析の過程によって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元コンフォメーション構造を図示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の調査により、候補免疫グロブリン配列が機能する上での残基の可能性の高い役割の解析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原への結合能力に影響を与える残基の解析が、可能になる。このようにして、所望の抗体特性、例えば標的抗原に対する親和性増加が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント配列および移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、抗原結合に影響を与えることに直接かつ最も大きく関与するのは、超可変領域残基である。
３．ヒト抗体
本開示のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を公知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をハイブリドーマ法により作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞系は、例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)により記載されている。
免疫化によって内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を、産生することができる。例えば、キメラおよび生殖細胞系変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖細胞系変異体マウスへのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993)；Jakobovits et al., Nature, 362: 255 (1993)；Bruggermann et al., Year in Immunol., 7: 33 (1993)を参照されたい。
遺伝子シャフリングを使用して、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体からヒト抗体を得ることができ、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体に類似した親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従って、本明細書に記載されるようにファージディスプレイ法により得られた非ヒト抗体断片の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のどちらかをヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換え、それによって、非ヒト鎖／ヒト鎖のｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団を作出する。抗原での選択によって、ヒト鎖が、一次ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖が除去されて破壊された抗原結合部位を修復する非ヒト鎖／ヒト鎖のキメラｓｃＦｖまたはＦａｂが単離されることになる、すなわち、エピトープがヒト鎖パートナーの選択を支配する。残存する非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ ＷＯ９３／０６２１３を参照されたい）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の旧来のヒト化とは異なり、この技法により、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も有さない完全ヒト抗体が得られる。
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方は、Ｓｉｇｌｅｃ－８に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－８の２つの異なるエピトープと結合することができる。二重特異性抗体を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する細胞に細胞傷害性剤を局在させることもできる。二重特異性抗体を完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野において公知である。Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、およびTraunecker et al., EMBO J., 10: 3655 (1991)を参照されたい。二重特異性抗体の生成に関するさらなる詳細については、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の一方をアビジンとカップリングさせることができ、他方をビオチンとカップリングさせることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋方法を使用して作製することができる。好適な架橋剤は、当技術分野において周知であり、いくつかの架橋技法とともに米国特許第４，６７６，９８０号において開示されている。
５．単一ドメイン抗体
一部の実施形態では、本開示の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分を含む、単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部分からなる。
６．抗体バリアント
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列の改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより、またはペプチド合成により、調製することができる。そのような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／または抗体のアミノ酸配列への残基の挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物に達するために欠失と挿入と置換とのいかなる組合せを行ってもよいが、ただし、最終構築物が、所望の特性を有することを条件とする。アミノ酸の変更を、配列を作製する時点で対象抗体のアミノ酸配列に導入してもよい。
変異誘発に好ましい位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基、または標的残基の群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）が同定され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼすために中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えられる。次いで、置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置が、置換部位でのまたは置換部位に対するさらなるまたは他のバリアントの導入により洗練される。このようにして、アミノ酸配列変動を導入するための部位は事前に決定されるが、変異自体の性質を事前に決定する必要はない。例えば、所与の部位における変異の性能を解析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異誘発が標的コドンまたは領域において行われ、発現された免疫グロブリンが所望される活性についてスクリーニングされる。
アミノ酸配列挿入は、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入ばかりでなく、１残基から１００またはそれより多くの残基を含有するポリペプチドまで長さに幅があるアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合も含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体のＮまたはＣ末端に、抗体の血清半減期を延長させる酵素またはポリペプチドが融合したものを含む。
一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端で切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端で切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体の短縮形態を組換え技術により作製することができる。
ある特定の実施態様では、本開示の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。ポリペプチドのグリコシル化は、通常は、Ｎ結合型またはＯ結合型のどちらかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－トレオニン（ここで、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内のこれらのどちらかのトリペプチド配列の存在は、潜在的グリコシル化部位を生じさせる。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトースまたはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸への結合を指し、ヒドロキシアミノ酸は、最も一般的にはセリンまたはトレオニンであるが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリシンが使用されることもある。
抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、上記トリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位についての）の１つまたは複数が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、好都合に果たされる。元の抗体の（Ｏ結合型グリコシル化部位についての）配列に対する１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、欠失、または置換により、変更を加えることもできる。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合されている炭水化物を変更することができる。例えば、フコースが欠如している成熟炭水化物構造が抗体のＦｃ領域に結合されている抗体が、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。ＵＳ２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合された炭水化物内にバイセクティングＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）がある抗体は、Ｊｅａｎ－ＭａｉｒｅｔらのＷＯ２００３／０１１８７８およびＵｍａｎａらの米国特許第６，６０２，６８４号において言及されている。抗体のＦｃ領域に結合されたオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基がある抗体は、ＰａｔｅｌらのＷＯ１９９７／３００８７において報告されている。変更された炭水化物がそのＦｃ領域に結合されている抗体に関するＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も、参照されたい。改変されたグリコシル化を有する抗原結合分子についてのＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）も、参照されたい。
ある特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域を含み、このＦｃ領域に結合している炭水化物構造は、フコースが欠如している。そのようなバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。必要に応じて、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位および／または３３４位（残基のＥｕ番号付け）における置換をさらに含む。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５号、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞系の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号；およびＡｄａｍｓらのＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、特に、実施例１１）、およびノックアウト細胞系、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004））、ならびにβ１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（acetylglycosminyltransferase）ＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）およびゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
野生型ＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体上のフコースの量と比較して低減されたフコースを有する抗体が、本明細書で企図される。例えば、抗体は、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然グリコシル化パターンを生じさせるＣＨＯ細胞、例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞）により他に産生された場合に有することになる量よりも少ない量のフコースを有する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体上のＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％または１％未満がフコースを含む、抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体上のいずれのＮ結合型グリカンもフコースを含まない抗体、すなわち、抗体は、完全にフコースなしであるか、またはフコースを有さないか、またはフコシル化されていないか、または脱フコシル化されている。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析により測定してＡｓｎ２９７に結合されているすべての糖構造（例えば、複合構造、ハイブリッド構造、または高マンノース構造）の総和に対する、糖鎖内のＡｓｎ２９７におけるフコースの平均量を算出することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変動に起因して２９７位の約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４～３００位の間に位置することもある。一部の実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。
一実施形態では、抗体は、その血清半減期を改善するために変更される。抗体の血清半減期を延長させるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に組み込むことができる。本明細書で使用される場合、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期の延長を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７号）。
別のタイプのバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が、異なる残基に置き換えられている。置換変異誘発のための目的の部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。保存的置換は、表５に「好ましい置換」という見出しで示される。そのような置換が生物活性の望ましい変化をもたらす場合には、表５で「例示的置換」と表示される、またはアミノ酸クラスに関連して下記でさらに説明されるような、より実質的な変化を導入することができ、その産物をスクリーニングすることができる。
表5.
Figure 2022553378000022
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくはヘリックスコンフォメーションのような構造の維持、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性の維持、またはｃ）側鎖の嵩の維持に対するそれらの効果が有意に異なる置換を選択することにより、果たされる。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性によって分類することができる（A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)において）：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
あるいは、天然に存在する残基を、共通の側鎖特性に基づいて群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのクラスのメンバーを別のクラスと交換することを必然的に伴うことになる。そのように置換された残基を、保存的置換部位に、または残りの（非保存）部位に導入することもできる。
１つのタイプの置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換を含む。一般に、さらなる開発に選択される、結果として生じるバリアントは、それらが生成される親抗体と比較して改変された（例えば、改善された）生物学的特性を有することになる。そのような置換バリアントを生成するための好都合な手法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。手短に述べると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）を変異させて、可能なあらゆるアミノ酸置換を部位毎に生じさせる。このようにして生成された抗体は、各粒子内にパッケージングされたファージコーティングタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部との融合体として、繊維状ファージ粒子により提示される。次いで、ファージにより提示されたバリアントを、それらの生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。改変のための候補超可変領域部位を特定するために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接点を特定するために抗原－抗体複合体の結晶構造を分析することは有益であり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書で詳述されるものをはじめとする当技術分野において公知の技法による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されたら、バリアントのパネルを、本明細書に記載のものを含む当技術分野において公知の技法を使用するスクリーニングに供し、１つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有した抗体を、さらなる開発のために選択することができる。
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当技術分野において公知の様々な方法により調製される。これらの方法としては、天然供給源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）からの単離；または抗体の前に調製されたバリアントもしくは非バリアントバージョンのオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発およびカセット変異誘発による調製が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入することによって、Ｆｃ領域バリアントを生成することが、望ましいことがある。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインの修飾を含む１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って番号付けされている。
この説明、および当技術の教示に従って、一部の実施形態では、本開示の抗体は、野生型対応物抗体と比較して、例えばＦｃ領域に、１つまたは複数の変更を含み得ると考えられる。それにもかかわらず、これらの抗体は、それらの野生型対応物と比較して、治療的有用性のために求められる同じ特性を実質的に保持することになる。例えば、ＷＯ９９／５１６４２に例えば記載されているように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善または減少のどちらか）をもたらすことになる、ある特定の変更をＦｃ領域に行うことができると考えられる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988)、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）には、ＦｃＲへの結合が改善または減少した抗体バリアントが記載されている。これらの特許公報の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。例えば、Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)も参照されたい。半減期が延長された抗体、および胎児への母性ＩｇＧの伝達を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)、およびKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）への結合が改善された抗体が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変更されたおよびＣ１ｑ結合能力が増加または減少されたポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、特に、参照により本明細書に組み込まれる。Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照されたい。
７．ベクター、宿主細胞、および組換え方法
本開示の抗体の組換え産生のために、本開示の抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のためにまたは発現のために複製可能なベクターに挿入される。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、シーケンシングされる。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、一部で、使用される宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）のどちらかの起源である。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常領域を含む、任意のアイソタイプの定常領域を、このために使用することができること、ならびにそのような定常領域を任意のヒトまたは動物種から得ることができることは、理解されるであろう。
原核生物宿主細胞を使用する抗体の生成
ａ）ベクター構築
本開示の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技術を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列をハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離し、シーケンシングすることができる。あるいは、ポリヌクレオチドを、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られたら、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製することおよび発現することができる組換えベクターに挿入される。当技術分野において利用可能かつ公知である多数のベクターを、本開示のために使用することができる。適切なベクターの選択は、主として、ベクターに挿入される核酸のサイズ、およびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に依存することになる。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、または両方）、およびそれが存在する特定の宿主細胞との適合性に依存して、様々な成分を含有する。ベクター成分としては、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサート、および転写終結配列が挙げられるが、これらに限定されない。
一般に、宿主細胞に適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、および形質転換された細胞において表現型選択を生じさせることができるマーキング配列も有する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的には、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性をコードする遺伝子を含有し、したがって、形質転換細胞を同定するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その誘導体、または他の微生物プラスミドもしくはバクテリオファージはまた、微生物により内在性タンパク質の発現のために使用され得るプロモーターを含有し得るか、またはそのようなプロモーターを含有するように改変され得る。特定の抗体の発現に使用されるｐＢＲ３２２誘導体の例は、Ｃａｒｔｅｒらの米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
加えて、宿主微生物に適合するレプリコンおよび制御配列を含有するファージベクターを、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用することができる。例えば、λＧＥＭ．ＴＭ．－１１などのバクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターの作製に利用され得る。
本開示の発現ベクターは、ポリペプチド成分の各々をコードする２つまたはそれより多くのプロモーター－シストロン対を含み得る。プロモーターは、シストロンに対して上流（５’）に位置し、その発現をモジュレートする非翻訳制御配列である。原核生物プロモーターは、典型的には、誘導性プロモーターおよび構成プロモーターという２つのクラスに分類される。誘導性プロモーターは、その制御下にあるシストロンの転写を培養条件の変化、例えば、栄養素の存在もしくは非存在または温度の変化に応じて増加したレベルで開始させる、プロモーターである。
可能性のある様々な宿主細胞により認識される多数のプロモーターが周知である。選択されたプロモーターを、軽鎖または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに、制限酵素消化によって供給源のＤＮＡからプロモーターを除去することおよび単離されたプロモーター配列を本開示のベクターに挿入することにより、作動可能に連結させることができる。天然プロモーター配列も、多数の異種プロモーターも、標的遺伝子の増幅および／または発現を導くために使用することができる。一部の実施形態では、異種プロモーターは、一般に、天然標的ポリペプチドプロモーターと比較して発現標的遺伝子のより多くの転写、およびより高い収量を可能にするので、異種プロモーターが利用される。
原核生物宿主での使用に好適なプロモーターとしては、ＰｈｏＡプロモーター、β－ガラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター、例えば、ｔａｃまたはｔｒｃプロモーターが挙げられる。しかし、細菌において機能する他のプロモーター（例えば、他の公知の細菌プロモーターまたはファージプロモーター）もまた好適である。それらのヌクレオチド配列は、公開されており、それによって、当業者は、それらを、標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンに、任意の必要な制限部位を供給するためにリンカーまたはアダプターを使用して作動可能にライゲーションすることができる（Siebenlist et al. (1980) Cell 20: 269）。
本開示の一態様では、組換えベクター内の各シストロンは、膜を横断する発現されたポリペプチドのトランスロケーションを導く分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはシグナル配列は、ベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部であり得る。本開示のために選択されるシグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものでなければならない。異種ポリペプチドに本来備わっているシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡおよびＭＢＰからなる群より選択される、原核生物シグナル配列により置換される。本開示の一実施形態では、発現系の両方のシストロンにおいて使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
別の態様では、本開示による免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において起こり得るものであり、したがって、各シストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。その関連で、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、細胞質内で、発現され、フォールディングされ、組み立てられて、機能性免疫グロブリンが形成される。ある特定の宿主株（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｘＢ株）は、ジスルフィド結合の形成に好ましい細胞質条件を提供し、それによって、発現されたタンパク質サブユニットの正しいフォールディングおよび組立てを可能にする。Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995)。
本開示の、分泌され正しく組み立てられた抗体の収量を最大にするために、発現されるポリペプチド成分の定量的な比をモジュレートすることができる発現系を使用することにより、本開示の抗体を産生することもできる。そのようなモジュレーションは、少なくとも一部において、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時にモジュレートすることにより果たされる。
翻訳強度をモジュレートするための１つの技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号において開示されている。この技法は、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所与のＴＩＲについて、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントをある範囲の翻訳強度で作出することができ、それによって、この因子を特定の鎖の所望の発現レベルに調整するための好都合な手段が得られる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を変更し得るコドン変化を生じさせる結果となる従来の変異誘発技術により生成することができる。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列の変化は、サイレントである。ＴＩＲの変更は、例えば、シャイン・ダルガーノ配列の数または間隔の変更に加えてシグナル配列の変更も含み得る。変異体シグナル配列を生成するための１つの方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コード配列の出発点における「コドンバンク」の生成である。この方法は、各コドンの３番目のヌクレオチド位置を変化させることにより遂行され得る。加えて、一部のアミノ酸、例えば、ロイシン、セリンおよびアルギニンには、複数の１番目および２番目の位置を有し、このことがバンク作製に複雑性を追加し得る。この変異誘発方法は、Yansura et al. (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158に詳細に記載されている。
一実施形態では、ベクター内の各シストロンに対してある範囲のＴＩＲ強度を有する、１セットのベクターが、生成される。この限られたセットにより、各鎖の発現レベルの比較、および様々なＴＩＲ強度の組合せのもとで所望の抗体産物の収量ももたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されているようにレポーター遺伝子の発現レベルを定量することにより決定することができる。翻訳強度の比較に基づいて、所望の個々のＴＩＲを選択して、本開示の発現ベクター構築物において組み合わせる。
本開示の抗体の発現に好適な原核生物宿主細胞は、古細菌および真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物を含む。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本開示のための宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｗ３１１０株（Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219;ATCC Deposit No. 27,325）およびその派生株が挙げられ、派生株には、遺伝子型Ｗ３１１０ ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ ｌａｃＬ８ ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ－ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎＲを有する３３Ｄ３株（米国特許第５，６３９，６３５号）が含まれる。他の株およびそれらの派生株、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉλ １７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ ３１，６０８）も、好適である。これらの例は、制限するものではなく例示的なものである。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のいずれかについての派生株を構築するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Bass et al., Proteins, 8:309-314 (1990)に記載されている。一般に、細菌の細胞におけるレプリコンの複製能を考慮に入れて適切な細菌を選択する必要がある。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０などの周知のプラスミドを使用してレプリコンを供給する際には、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を宿主として好適に使用することができる。通常は、宿主細胞は、分泌するタンパク質分解酵素の量が最小限であるべきであり、追加のプロテアーゼ阻害剤が、望ましくは細胞培養に組み込まれ得る。
ｂ）抗体産生
宿主細胞は、上記の発現ベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地で培養される。
形質転換とは、染色体外エレメントとしてまたは染色体組込み体によりＤＮＡを複製できるように、ＤＮＡを原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に依存して、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技法を使用して行われる。実質的な細胞壁バリアを含有する細菌細胞には、一般に、塩化カルシウムを用いるカルシウム処置が使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、電気穿孔である。
本開示のポリペプチドを産生するために使用される原核生物細胞は、当技術分野において公知であり、選択された宿主細胞の培養に好適な培地で増殖される。好適な培地の例としては、必要な栄養サプリメントを加えたルリアブロス（ＬＢ）が挙げられる。一部の実施形態では、培地は、発現ベクターを含有する原核生物細胞の増殖を選択的に可能にするために発現ベクターの構築に基づいて選ばれた選択剤も含有する。例えば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の増殖のために、アンピシリンが培地に添加される。
炭素、窒素および無機リン酸塩供給源の他に、任意の必要なサプリメントも、単独で導入して、または複合窒素供給源などの別のサプリメントもしくは培地との混合物として導入して、適切な濃度で含まれ得る。必要に応じて、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリトリトールおよびジチオトレイトールからなる群より選択される１つまたは複数の還元剤を含有することができる。
原核生物宿主細胞は、好適な温度で培養される。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ増殖について、増殖温度は、約２０℃～約３９℃、約２５℃～約３７℃、または約３０℃の範囲である。培地のｐＨは、主として宿主生物に依存して、約５～約９の範囲の任意のｐＨであり得る。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉについて、ｐＨは、約６．８～約７．４、または約７．０である。
誘導性プロモーターが本開示の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質の発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下で誘導される。本開示の一態様では、ポリペプチドの転写を制御するためにＰｈｏＡプロモーターが使用される。したがって、形質転換宿主細胞は、誘導のためにリン酸制限培地で培養される。ある特定の実施形態では、リン酸制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Simmons et al., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147を参照されたい）。当技術分野において公知であるように、用いられるベクター構築物に応じて、様々な他の誘導因子を使用することができる。
一実施形態では、本開示の発現されたポリペプチドは、宿主細胞のペリプラズムに分泌され、そのペリプラズムから回収される。タンパク質回収は、一般に浸透圧ショック、超音波処理または溶解などの手段により、微生物を破壊することを典型的には伴う。細胞が破壊されると、細胞デブリまたは細胞全体を遠心分離または濾過により除去することができる。タンパク質を、例えば親和性樹脂クロマトグラフィーにより、さらに精製することができる。あるいは、タンパク質は、培養培地に輸送し、それをそこで単離することができる。細胞を培養物から除去し、産生されたタンパク質のさらなる精製のために培養上清を濾過し、濃縮することができる。発現されたポリペプチドを、一般に公知の方法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウェスタンブロットアッセイを使用して、さらに単離し、同定することができる。
本開示の一態様では、抗体の産生は、発酵プロセスにより大量に行われる。様々な大規模流加発酵手順が、組換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模発酵は、少なくとも１０００リットルの容量を有し、ある特定の実施形態では、約１，０００～１００，０００リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコース、を分配するために攪拌翼を使用する。小規模発酵は、容積容量（volumetric capacity）がおおよそ１００リットル以下であり、約１リットル～約１００リットルの範囲であり得る発酵槽における、発酵を一般に指す。
発酵プロセスでは、タンパク質発現の誘導は、細胞が好適な条件下で所望の密度、例えば約１８０～２２０のＯＤ５５０まで増殖した後に典型的には開始され、この段階で、細胞は、初期定常期にある。当技術分野において公知であるように、および上記の通り、利用されるベクター構築物に応じて、様々な誘導因子を使用することができる。誘導前に細胞を増殖させる期間は、より短くてもよい。細胞を通常は約１２～５０時間誘導するが、より長いまたは短い誘導時間を使用してもよい。
本開示のポリペプチドの産生収量および品質を改善するために、様々な発酵条件を修正することができる。例えば、分泌される抗体ポリペプチドの正しい組立ておよびフォールディングを改善するために、シャペロンタンパク質、例えば、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／またはＤｓｂＧ）、またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルシス，トランスイソメラーゼ）を過剰発現する追加のベクターを使用して、宿主原核生物細胞を同時形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生される異種タンパク質の正しいフォールディングおよび溶解度を助長することが実証されている。Chen et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:19601-19605；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０８３，７１５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０２７，８８８号；Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105；Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113；Arie et al. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210。
発現された異種タンパク質（特に、タンパク質分解感受性のもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク質分解酵素が欠損しているある特定の宿主株を本開示に使用することができる。例えば、宿主細胞株を、公知の細菌プロテアーゼ、例えば、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩおよびこれらの組合せをコードする遺伝子の遺伝的変異を生じさせるように、改変することができる。一部のＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損株が利用可能であり、例えば、上掲のJoly et al. (1998)；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，２６４，３６５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，５０８，１９２号；Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)に記載されている。
一実施形態では、タンパク質分解酵素が欠損しており、１つまたは複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ株が、本開示の発現系において宿主細胞として使用される。
ｃ）抗体精製
一実施形態では、本明細書において産生される抗体タンパク質は、さらなるアッセイおよび使用のための実質的に均一である調製物を得るために、さらに精製される。当技術分野において公知の標準的なタンパク質精製方法を用いることができる。以下の手順は、好適な精製手順の例示となるものである：免疫親和性カラムまたはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカでの、またはカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿法、および例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過。
一態様では、固相に固定化されたプロテインＡが、本開示の抗体産物の免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合する、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓからの４１ｋＤ細胞壁タンパク質である。Lindmark et al (1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、または制御細孔ガラス（controlled pore glass）カラム、またはケイ酸カラムであり得る。一部の適用では、カラムは、ことによると夾雑物の非特異的な付着を防止するために、グリセロールなどの試薬でコーティングされる。
精製の第１のステップとして、上記の細胞培養に由来する調製物を、プロテインＡが固定化された固相に適用して、目的の抗体をプロテインＡに特異的に結合させる。次いで、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した夾雑物を除去する。最後に、目的の抗体を、溶出により固相から回収する。
真核生物宿主細胞を使用する抗体の生成：
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、一般に、次の非限定的な成分の１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
ａ）シグナル配列成分
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、成熟タンパク質または目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドも含有し得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞における発現では、哺乳動物シグナル配列、およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルも、利用可能である。そのような前駆体領域のＤＮＡは、リーディングフレーム内で、抗体をコードするＤＮＡにライゲーションされる。
ｂ）複製起点
一般に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ない。例えば、ＳＶ４０起点は、単に初期プロモーターを含有するという理由で、典型的には使用され得る。
ｃ）選択遺伝子成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能なマーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止する薬物を利用する。異種遺伝子で成功裏に形質転換される細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、したがって選択レジメンに生き残る。そのような優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸およびハイグロマイシンを使用する。
哺乳動物細胞の好適な選択可能マーカーの別の例は、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするもの、例えば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－ＩおよびＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
例えば、一部の実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞が、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地においてすべての形質転換体を培養することにより、先ず同定される。一部の実施形態では、野生型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）である。
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、および別の選択可能なマーカー、例えばアミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列で形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）を、選択可能なマーカーの選択剤、例えば、アミノグリコシド系抗生物質、例えばカナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８を含有する培地における細胞増殖により、選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞としては、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶまたは派生株を挙げることができ、派生株には、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）が欠損した細胞系が含まれる。哺乳動物細胞のために選択可能なマーカーとしてＧＳを使用するための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
ｄ）プロモーター成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、宿主生物により認識され、目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されているプロモーターを、通常含有する。真核生物についてのプロモーター配列は公知である。例えば、事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始部から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域（ここで、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）である。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、ＡＡＴＡＡＡ配列があり、この配列は、コーディング配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のためのシグナルであり得る。ある特定の実施形態では、これらの配列のいずれかまたはすべてを、真核生物発現ベクターに好適に挿入することができる。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターにより制御されるが、ただし、このようなプロモーターが、宿主細胞系に適合することを条件とする。
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として好都合に得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号において開示されている。この系の改変は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ－インターフェロンｃＤＮＡの発現を記載している、Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982)も、参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列を、プロモーターとして使用することができる。
ｅ）エンハンサーエレメント成分
高等真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増加される。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、およびインスリン）からの多くのエンハンサー配列が、今では公知である。しかし、典型的には、真核生物細胞ウイルスからのエンハンサーを使用することになる。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントを記載しているYaniv, Nature 297:17-18 (1982)も、参照されたい。エンハンサーは、ベクター内の抗体ポリペプチドをコードする配列の５’または３’側の位置にスプライシングされ得るが、一般的にプロモーターから５’側の部位に位置する。
ｆ）転写終結成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写に終結のためにおよびｍＲＮＡを安定させるために必要な配列も含有し得る。そのような配列は、一般に、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域から、および低頻度に３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこで開示されている発現ベクターを参照されたい。
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターでのＤＮＡのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、脊椎動物宿主細胞を含む本明細書に記載の高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖は、慣例的な手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓系統（２９３細胞、もしくは懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生株、およびヒト肝細胞癌系統（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
宿主細胞は、抗体産生のために上記発現またはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地で培養される。
ｈ）宿主細胞の培養
本開示の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養することができる。市販の培地、例えば、ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）は、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)、Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国特許再発行第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用することができる。これらのいずれの培地にも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬）、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物と定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源を、必要に応じて追加補充することができる。任意の他のサプリメントも、当業者には公知であろう適切な濃度で含まれ得る。培養条件、例えば、温度、ｐＨおよび同様のものは、発現に選択される宿主細胞に関して以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
ｉ）抗体の精製
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得るか、または培地内に直接的に分泌され得る。抗体が細胞内で産生された場合、第一のステップとして、宿主細胞または溶解断片のどちらかである微粒子状デブリを、例えば遠心分離または限外濾過により、除去することができる。抗体が培地内に分泌された場合、そのような発現系からの上清を、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを使用して、先ず濃縮することができる。前述のステップのいずれかにタンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を含めることができ、偶発的な夾雑物の増殖を防止するために抗生物質を含めることができる。
細胞から調製された抗体組成物を、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが好都合な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Lindmark et al., J. Immunol. Methods 62:1-13 (1983)）。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプにおよびヒトγ３に推奨されている（Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)）。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、アガロースであり得るが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば、制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースで達成され得るものより速い流量およびより短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。タンパク質精製のための他の技法、例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂またはカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿法も、回収すべき抗体に依存して利用可能である。
任意の予備的な精製ステップの後、目的の抗体と夾雑物とを含む混合物を、例えば、低い塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で行われる、約２．５～４．５の間のｐＨの溶出緩衝液を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによる、さらなる精製に供すことができる。
一般に、上記の方法論と整合する、および／または当業者により目的の特定の抗体に適切であると判断されるような、研究、試験および臨床用途に使用される抗体を調製するための様々な方法論は、当技術分野において十分に確立されている。
非フコシル化抗体の産生
低減したフコシル化度を有する抗体を調製するための方法が、本明細書で提供される。例えば、本明細書で企図される方法としては、タンパク質フコシル化が欠損している細胞系（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジμ－マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、および抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログの添加が挙げられるが、これらに限定されない。Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願第２００３／０１５７１０８Ａ１号；ＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１つまたは複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤としては、α－グルコシダーゼＩ、α－グルコシダーゼＩＩ、およびα－マンノシダーゼＩが挙げられる。一部の実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α－マンノシダーゼＩの阻害剤（例えば、キフネシン）である。
本明細書で使用される場合、「コアフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法により産生される抗体およびそれらの組成物も、提供される。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合している複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が、低減される。本明細書で使用される場合、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、典型的にはアスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号による）に結合されるが、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖が他のアスパラギン残基に連結されることもある。「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、マンノースのみがコア構造の非還元末端に組み込まれている高マンノース型の糖鎖が除外されるが、１）コア構造の非還元末端側にガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の１つまたは複数の枝があり、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側に、必要に応じて、シアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミン、もしくはこれらに類するものがある、複合型、または２）コア構造の非還元末端側に、高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖と複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖との両方の枝がある、ハイブリッド型を含む。
一部の実施形態では、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側に、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の枝が全くないか、または１つもしく複数あり、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側に、必要に応じて、シアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンまたはこれらに類するものなどの構造がさらにある、複合型を含む。
本方法によれば、典型的にはごくわずかな量のフコースしか複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれない。例えば、様々な実施形態では、組成物中、抗体の約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、組成物中、抗体の実質的にいずれも（すなわち、約０．５％未満）、フコースによるコアフコシル化を有さない。一部の実施形態では、組成物中、抗体の約４０％より多く、約５０％より多く、約６０％より多く、約７０％より多く、約８０％より多く、約９０％より多く、約９１％より多く、約９２％より多く、約９３％より多く、約９４％より多く、約９５％より多く、約９６％より多く、約９７％より多く、約９８％より多く、また約９９％より多くが、フコシル化されていない。
一部の実施形態では、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも（すなわち、約０．５％未満）フコース残基を含有しない抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない抗体が、本明細書で提供される。
上記のように、様々な哺乳動物宿主発現ベクター系を、抗体を発現させるために利用することができる。一部の実施形態では、培養培地にフコースが追加補充されない。一部の実施形態では、有効量のフコースアナログが、培養培地に添加される。この文脈での「有効量」は、抗体の複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖へのフコースの組込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％減少させるのに十分である、アナログの量を指す。一部の実施形態では、本方法により産生された抗体は、フコースアナログの非存在下で培養された宿主細胞から産生された抗体と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％非コアフコシル化（例えば、コアフコシル化が欠如している）タンパク質を含む。
フコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合していない糖鎖の、フコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合している糖鎖に対する含有量（例えば、比）は、例えば、実施例で説明するように、決定することができる。他の方法としては、ヒドラジン分解または酵素消化（例えば、Biochemical Experimentation Methods 23: Method for Studying Glycoprotein Sugar Chain (Japan Scientific Societies Press), edited by Reiko Takahashi (1989)を参照されたい）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位体標識および次いで標識された糖鎖のクロマトグラフィーによる分離が挙げられる。また、放出された糖鎖の組成を、ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ法（例えば、J. Liq Chromatogr. 6:1557 (1983)を参照されたい）により鎖を解析することによって決定することができる。（一般に、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照されたい）。
ＩＩＩ．組成物
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）のいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も、本明細書で提供される。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満がフコース残基を含有する、組成物が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、または約１５％未満が、フコース残基を含有する。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれもフコース残基を含有しない、組成物が本明細書で提供される。
治療用製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分と必要に応じた薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤とを混合することにより、保管用に調製される（Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams & Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, Pa. 2000）。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、これらには、緩衝液、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、ピロ亜硫酸ナトリウムを含む、抗酸化剤、保存剤、等張剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；キレート剤、例えばＥＤＴＡならびに／または非イオン性表面活性剤が含まれる。
緩衝液は、特に、安定性がｐＨ依存性である場合、治療有効性を最適化する範囲内にｐＨを制御するために使用することができる。緩衝液は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本開示での使用に好適な緩衝化剤には、有機酸と無機酸の両方、およびそれらの塩が含まれる。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩。加えて、緩衝液は、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、例えばＴｒｉｓ、から構成されることもある。
保存剤は、微生物の増殖を防止するために添加することができ、通常は約０．２％～１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本開示での使用に好適な保存剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールが挙げられる。
「安定剤」として知られていることもある張度剤(tonicity agent)は、組成物中の液体の張度を調整または維持するために存在し得る。タンパク質および抗体などの大きい荷電生体分子とともに使用される場合、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それによって分子間相互作用および分子内相互作用の可能性を低下させることができるため、「安定剤」と呼ばれることが多い。張度剤は、他の成分の相対量を考慮して、約０．１重量％～約２５重量％の間または約１～約５重量％の間の任意の量で存在し得る。一部の実施形態では、張度剤は、多価糖アルコール、三価またはそれより高い価数の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールを含む。
追加の賦形剤には、次のうちの１つまたは複数としての機能を果たすことができる作用物質が含まれる：（１）増量剤、（２）溶解度向上剤、（３）安定剤、および（４）変性または容器壁への付着を防止する作用物質。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（myoinisitose）、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクトース、ガラクシトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、例えば、ラフィノース；ならびに多糖類、例えば、デキストリンまたはデキストランが挙げられる。
非イオン性表面活性剤または界面活性物質（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤の可溶化を助けるためばかりでなく、治療用タンパク質を撹拌により誘導される凝集から保護するためにも存在することがあり、これらによって、活性治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく製剤をせん断表面応力に曝露することも可能になる。非イオン性表面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。一部の実施形態では、非イオン性表面活性剤は、約０．００１％～約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％～約０．０２５％ｗ／ｖの範囲で存在する。
好適な非イオン性表面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性物質としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性物質としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
製剤をｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するためには、製剤は、無菌でなければならない。製剤を、滅菌濾過膜による濾過によって無菌にすることができる。本明細書における治療用組成物は、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針により穴を開けることができるストッパーを有するバイアルに、一般に入れられる。
投与経路は、公知の、受入れられている方法、例えば、単回もしくは複数回のボーラス、または好適な様式での長期間にわたる注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または持続放出もしくは延長放出手段による方法に従う。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、３カ月またはそれを超える月数にわたって月１回、静脈内注入により投与される。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、１サイクル当たり１回（例えば、１日目に）を１、２、３、４、５または６サイクルにわたり、静脈内注入によって投与され、各サイクルは、１カ月間、４週間または２８日間である。
本明細書における製剤は、処置されることになる特定の適応症のために活性化合物、好ましくは、互いに有害に作用しない補完的活性を有するものを、必要に応じて１つより多く含有することもできる。そのような活性化合物は、意図された目的に有効である量で組み合わせて適切に存在する。
ＩＶ．製造物品またはキット
別の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製造物品またはキットが、提供される。製造物品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、個体におけるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置および／または予防するための方法であって、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の有効量を投与するステップを含む方法におけるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造物品は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置および／または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを有する個体における１つまたは複数の症状を低下させるのに有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、個体は、抗体を含む医薬の投与前に、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアと診断される。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。
製造物品またはキットは、容器をさらに含むことができる。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル（例えば、二室式バイアル）、シリンジ（例えば、一室または二室シリンジ）および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器により製剤が保持される。
製造物品またはキットは、容器上にあるかまたは容器に付随し、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示すことができる、ラベルまたは添付文書をさらに含むことができる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体におけるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置および／または予防するための皮下、静脈内または他の投与機序に有用であるまたは意図されることをさらに示すことができる。製剤を保持する容器は、単回使用バイアルであることもあり、または再構成された製剤の反復投与を可能にする複数回使用バイアルであることもある。製造物品またはキットは、好適な希釈剤を含む第二の容器をさらに含むことができる。製造物品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用のための指示を伴う添付文書を含む、商業上の、治療上の、および使用者の観点から望ましい他の材料を、さらに含むことができる。
特定の実施形態では、本開示は、単回用量投与単位のためのキットを提供する。そのようなキットは、一室式充填済みシリンジまたは多室式充填済みシリンジの両方を含む、治療用抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な充填済みシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
別の実施形態では、オートインジェクターデバイスでの投与のための本明細書に記載の製剤を含む製造物品またはキットが、本明細書で提供される。オートインジェクターは、作動させると患者または管理者による追加の必要な行動なしにその内容物を送達することになる注射デバイスであると説明され得る。これらは、送達速度が一定でなければならず、送達時間がしばらくかかる場合の、治療用製剤の自己投薬に特に適している。
別の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製造物品またはキットが提供される。製造物品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、個体におけるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の有効量を投与するステップを含む方法における、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、ＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置および／または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。
本開示はまた、個体におけるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置または予防するための、１つまたは複数の追加的な医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製造物品またはキットを提供する。製造物品またはキットは、本開示の方法における１つまたは複数の追加的な医薬と組み合わせた抗体の使用のための指示をさらに含むことができる。例えば、本明細書における製造物品またはキットは、必要に応じて、第２の医薬を含む容器をさらに含み、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、第１の医薬であり、この製造物品（article）またはキットは、有効量の第２の医薬で個体を処置するためのラベルまたは添付文書上の指示をさらに含む。よって、ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、個体におけるＩＢＳおよび／または機能性ディスペプシアを処置または予防するための方法における１つまたは複数の追加的な医薬と組み合わせたヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬（例えば、第１の医薬）と、１つまたは複数の追加的な医薬と、１つまたは複数の追加的な医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた第１の医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む。
本明細書に記載の態様および実施形態が、例示を目的としたものに過ぎないこと、ならびにそれらを考慮して様々な修飾または変更が当業者に示唆されることになり、そのような修飾または変更が本願の趣旨および権限内に含まれ、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることになることは、理解されよう。
配列
別段の断り書きがない限り、すべてのポリペプチド配列をＮ末端からＣ末端に向かって提示する。別段の断り書きがない限り、すべての核酸配列を５’から３’に向かって提示する。
マウス２Ｅ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000023
 ２Ｅ２ ＲＨＡ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000024
 ２Ｅ２ ＲＨＢ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000025
 ２Ｅ２ ＲＨＣ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000026
 ２Ｅ２ ＲＨＤ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000027
 ２Ｅ２ ＲＨＥ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000028
 ２Ｅ２ ＲＨＦ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000029
 ２Ｅ２ ＲＨＧ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000030
 ２Ｅ２ ＲＨＡ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000031
 ２Ｅ２ ＲＨＢ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000032
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｓ－Ｇ変異体重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000033
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｅ－Ｄ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000034
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｙ－Ｖ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000035
 ２Ｅ２ ＲＨＥトリプル変異体重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000036
 マウス２Ｅ２軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000037
 ２Ｅ２ ＲＫＡ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000038
 ２Ｅ２ ＲＫＢ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000039
 ２Ｅ２ ＲＫＣ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000040
 ２Ｅ２ ＲＫＤ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000041
 ２Ｅ２ ＲＫＥ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000042
 ２Ｅ２ ＲＫＦ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000043
 ２Ｅ２ ＲＫＧ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000044
 ２Ｅ２ ＲＫＡ Ｆ－Ｙ変異体軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000045
 ２Ｅ２ ＲＫＦ Ｆ－Ｙ変異体軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000046
 ＨＥＫＡ重鎖およびＨＥＫＦ重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000047
Figure 2022553378000048
 ＨＥＫＡ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000049
 ＨＥＫＦ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000050
 ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022553378000051
 ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022553378000052
 Ｉｇカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022553378000053
 マウス２Ｃ４および２Ｅ２ ＩｇＧ１重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000054
 マウス２Ｃ４カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000055
 マウス２Ｅ２カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000056
 キメラ２Ｃ４および２Ｅ２ ＩｇＧ１重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000057
Figure 2022553378000058
 キメラ２Ｃ４カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000059
 キメラ２Ｅ２カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022553378000060
 ＨＥＫＡ ＩｇＧ４重鎖のアミノ酸配列（ＩｇＧ４は、Ｓ２２８Ｐ変異を含有する）
Figure 2022553378000061
 マウス１Ｃ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022553378000062
 マウス１Ｈ１０重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022553378000063
 マウス４Ｆ１１重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022553378000064
 マウス１Ｃ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000065
 マウス１Ｈ１０軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000066
 マウス４Ｆ１１軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022553378000067
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１のアミノ酸配列
Figure 2022553378000068
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン２のアミノ酸配列
Figure 2022553378000069
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン３のアミノ酸配列
Figure 2022553378000070
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022553378000071
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１および２融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022553378000072
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１、２および３融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022553378000073
Figure 2022553378000074

Claims (126)

  1. 個体における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を処置または予防するための方法であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の有効量を前記個体に投与するステップを含む、方法。
  2. 前記個体が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有するか、またはＩＢＳであると診断された、請求項１に記載の方法。
  3. 前記組成物の投与に先立ち、前記個体が、ＩＢＳのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記個体におけるＩＢＳの１つまたは複数の症状（複数可）が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記個体における腹痛、腹部痙攣、ガス、悪心、腹部膨満、下痢、便秘、しぶり、切迫感、大便失禁および粘液便のうち１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
  6. 個体における機能性ディスペプシアを処置または予防するための方法であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の有効量を前記個体に投与するステップを含む、方法。
  7. 前記個体が、機能性ディスペプシアを有するか、または機能性ディスペプシアであると診断された、請求項６に記載の方法。
  8. 前記組成物の投与に先立ち、前記個体が、機能性ディスペプシアのための１つまたは複数の標準治療による処置に失敗したか、またはこれによって適切に制御されない、請求項６または請求項７に記載の方法。
  9. 前記個体における機能性ディスペプシアの１つまたは複数の症状（複数可）が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項６から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記個体における腹部不快感または灼熱感、腹部膨満、食後の疼痛、げっぷ、早期満腹感、嘔吐および悪心のうち１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項６から８のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記個体の胃、十二指腸、空腸、回腸または結腸粘膜から得られる試料における肥満細胞の数または活性のうち一方または両方が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記個体の胃、十二指腸、空腸、回腸または結腸粘膜から得られる試料における好酸球の数または活性のうち一方または両方が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低下する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記組成物が、皮下注射によって投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記組成物が、静脈内注入によって投与される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記組成物が、３カ月またはそれを超える月数にわたって月１回、静脈内注入によって投与される、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記個体に、前記組成物の第１の用量を投与するステップを含み、前記組成物の前記第１の用量が、約４時間の期間にわたる静脈内注入によって前記個体に投与される、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
  17. 前記第１の用量の総体積の５０％未満が、前記注入の最初の２時間で前記個体に投与される、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記第１の用量の総体積の３０％未満が、前記注入の最初の２時間で前記個体に投与される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記第１の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
  20. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第１の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される、請求項１６から１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第１の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される、請求項２０に記載の方法。
  22. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第１の用量において１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項２０に記載の方法。
  23. 前記組成物の投与の少なくとも６時間前に、副腎皮質ステロイド薬を前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記組成物の第１の用量を前記個体に投与するステップを含み、前記第１の用量の投与の少なくとも６時間前に、副腎皮質ステロイド薬を前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記副腎皮質ステロイド薬が、前記第１の用量の投与の少なくとも１２時間前に、前記個体に投与される、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記副腎皮質ステロイド薬が、前記第１の用量の投与に先立つ２４時間以内に、前記個体に投与される、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
  27. 前記副腎皮質ステロイド薬が、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンまたはプレドニゾロンである、請求項２３から２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. ８０ｍｇのまたは０．５ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、前記第１の用量の投与の少なくとも６時間前に、前記個体に投与される、請求項２７に記載の方法。
  29. ８０ｍｇのプレドニゾンが、前記第１の用量の投与の少なくとも１２時間前かつ前記第１の用量の投与に先立つ２４時間未満に、前記個体に投与される、請求項２７に記載の方法。
  30. 前記副腎皮質ステロイド薬が、前記個体によって自己投与される、請求項２３から２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記副腎皮質ステロイド薬が、前記個体に経口投与される、請求項２３から３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記第１の用量の投与の１～２時間前に、副腎皮質ステロイド薬を前記個体に投与するステップをさらに含む、請求項１６から３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記第１の用量の投与の１～２時間前に前記個体に投与される前記副腎皮質ステロイド薬が、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである、請求項３２に記載の方法。
  34. ８０ｍｇのまたは０．５ｍｇ／ｋｇより多くのプレドニゾンが、前記個体に前記第１の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
  35. 前記第１の用量の投与の１～２時間前に前記個体に投与される前記副腎皮質ステロイド薬が、メチルプレドニゾロンである、請求項３２に記載の方法。
  36. １００ｍｇのメチルプレドニゾロンが、前記個体に前記第１の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項３２または請求項３５に記載の方法。
  37. 抗ヒスタミン薬を前記個体に、前記第１の用量の投与の１～２時間前に投与するステップをさらに含む、請求項１６から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記抗ヒスタミン薬が、セチリジンである、請求項３７に記載の方法。
  39. １０ｍｇのセチリジンが、前記個体に前記第１の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項３８に記載の方法。
  40. １０ｍｇのセチリジンが、前記個体に前記第１の用量の投与の４０分～１８０分前に投与される、請求項３８に記載の方法。
  41. 前記抗ヒスタミン薬が、前記個体に経口投与される、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記個体に前記第１の用量の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む、請求項１６から４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記解熱薬が、アセトアミノフェンである、請求項４２に記載の方法。
  44. ９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、前記個体に前記第１の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項４３に記載の方法。
  45. ９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、前記個体に前記第１の用量の投与の１８０分前以降かつ４０分前以前に投与される、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記解熱薬またはＮＳＡＩＤが、前記個体に経口投与される、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第２の用量を投与するステップをさらに含み、前記第２の用量が、前記個体に前記第１の用量の約２８日または約４週間後に投与される、請求項１６から４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記第２の用量が、前記第２の用量の投与の６～２４時間前に前記個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、前記個体に投与される、請求項４７に記載の方法。
  49. 副腎皮質ステロイド薬が、前記個体に前記第２の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される、請求項４７に記載の方法。
  50. 前記組成物の前記第２の用量が、前記個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記第２の用量の総体積の５０％未満が、前記注入の最初の２時間で前記個体に投与される、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記第２の用量の総体積の３０％未満が、前記注入の最初の２時間で前記個体に投与される、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記第２の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される、請求項５１または請求項５２に記載の方法。
  54. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第２の用量において０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される、請求項４７から５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第２の用量において約１ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇの間で投与される、請求項５４に記載の方法。
  56. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第２の用量において１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項５５に記載の方法。
  57. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する前記抗体が、前記個体に前記第１の用量において１ｍｇ／ｋｇでおよび前記第２の用量において３ｍｇ／ｋｇで投与される、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
  58. 副腎皮質ステロイド薬を前記個体に、前記第２の用量の投与の１～２時間前に投与するステップをさらに含む、請求項４７から５７のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記第２の用量の投与の１～２時間前に前記個体に投与される前記副腎皮質ステロイド薬が、プレドニゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはプレドニゾロンである、請求項５８に記載の方法。
  60. １００ｍｇのメチルプレドニゾロンが、前記個体に前記第２の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項５８または請求項５９に記載の方法。
  61. 抗ヒスタミン薬を前記個体に、前記第２の用量の投与の１～２時間前に投与するステップをさらに含む、請求項４７から６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記抗ヒスタミン薬が、セチリジンである、請求項６１に記載の方法。
  63. １０ｍｇのセチリジンが、前記個体に前記第２の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記抗ヒスタミン薬が、前記個体に経口投与される、請求項６１から６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記個体に前記第２の用量の投与の１～２時間前に解熱薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与するステップをさらに含む、請求項４７から６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記解熱薬が、アセトアミノフェンである、請求項６５に記載の方法。
  67. ９７５～１０００ｍｇのアセトアミノフェンが、前記個体に前記第２の用量の投与の１～２時間前に投与される、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記解熱薬またはＮＳＡＩＤが、前記個体に経口投与される、請求項６５から６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の第３の用量を投与するステップをさらに含み、前記第３の用量が、前記個体に前記第２の用量の約２８日または約４週間後に投与される、請求項４７から６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記第３の用量が、前記第３の用量の投与の６～２４時間前に前記個体に副腎皮質ステロイド薬を投与することなく、前記個体に投与される、請求項６９に記載の方法。
  71. 副腎皮質ステロイド薬が、前記個体に前記第３の用量の投与の少なくとも６時間前に投与される、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約２時間～約４時間にわたって投与される、請求項６９から７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約２時間にわたって投与される、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記第３の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間１０ｍＬ／時、１５分間２５ｍＬ／時、１５分間４０ｍＬ／時、１５分間５５ｍＬ／時、１５分間７０ｍＬ／時、１５分間８５ｍＬ／時、および１６分間１００ｍＬ／時に従って投与される、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約３時間にわたって投与される、請求項７２に記載の方法。
  76. 前記第３の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：３０分間２ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間２０ｍＬ／時、３０分間４０ｍＬ／時、および６４分間６０ｍＬ／時に従って投与される、請求項７５に記載の方法。
  77. 前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、請求項７２に記載の方法。
  78. 前記第３の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間１ｍＬ／時、１５分間５ｍＬ／時、３０分間１０ｍＬ／時、３０分間１５ｍＬ／時、３０分間２５ｍＬ／時、３０分間３０ｍＬ／時、３０分間３５ｍＬ／時、および６２分間４０ｍＬ／時に従って投与される、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約１時間にわたって投与される、請求項６９から７１のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記第３の用量が、前記個体に、静脈内注入により、時系列で、以下のスケジュール：１５分間２４ｍＬ／時、および４５分間１２５．３ｍＬ／時に従って投与される、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記個体に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物の１、２、３またはそれよりも多い追加的な用量を投与するステップをさらに含み、前記追加的な用量（複数可）の第１のものが、前記第３の用量の約２８日後または約４週間後に、前記個体に投与され、その後のいずれの追加的な用量（複数可）も、約２８日間または約４週間の間隔で、前記個体に投与される、請求項６９から８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記個体に前記組成物の第１の用量を１日目に投与するステップであって、前記組成物の前記第１の用量が、前記個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；
    前記個体に前記組成物の第２の用量を２９日目に投与するステップであって、前記組成物の前記第２の用量が、前記個体に静脈内注入により約４時間にわたって投与される、ステップ；および
    前記個体に前記組成物の第３の用量を５７日目に投与するステップであって、前記組成物の前記第３の用量が、前記個体に静脈内注入により約１時間～約４時間にわたって投与される、ステップ
    を含む、請求項１から８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 副腎皮質ステロイド薬を前記個体に、前記第１の用量の投与の少なくとも６時間前に投与するステップをさらに含む、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記抗体が、Ｆｃ領域および前記Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、前記組成物における前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項１から８３のいずれか一項に記載の方法。
  85. 前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも、フコース残基を含有しない、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含み、そして前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含み、そして前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  89. 前記抗体が、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２３～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記抗体が、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  91. 前記抗体が、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記抗体が、
    （ａ）
    （１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、
    （３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、
    （５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、
    （７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４と
    を含む重鎖可変領域、および
    （ｂ）
    （１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、
    （３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、
    （５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４と
    を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記抗体が、
    （ａ）
    （１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、
    （３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、
    （５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、
    （７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４と
    を含む重鎖可変領域、および
    （ｂ）
    （１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、
    （３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、
    （５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４と
    を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  94. 前記抗体が、
    （ａ）
    （１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、
    （３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、
    （５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３と、
    （７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４と
    を含む重鎖可変領域、および
    （ｂ）
    （１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１と、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、
    （３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２と、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、
    （５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３と、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３と、
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４と
    を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記抗体が、
    （ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；
    （ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域；または
    （ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１と、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２と、（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３とを含む重鎖可変領域；および（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１と、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２と、（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３とを含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記抗体が、
    配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
    配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記非ヒト霊長類が、ヒヒである、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項９７に記載の方法。
  100. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３におけるエピトープに結合し、ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項９７に記載の方法。
  101. 前記抗体が、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する、請求項９７に記載の方法。
  102. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２またはドメイン３におけるエピトープに結合する、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  103. ドメイン２が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記抗体が、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する、請求項１０２に記載の方法。
  105. ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項１０２に記載の方法。
  106. 前記抗体が、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する、請求項１０２に記載の方法。
  107. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１におけるエピトープに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合に関して抗体４Ｆ１１と競合する、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合に関して抗体２Ｅ２と競合しない、請求項１０７に記載の方法。
  109. 前記抗体が、抗体２Ｅ２ではない、請求項１０８に記載の方法。
  110. ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載の方法。
  111. 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項８６から１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記抗体が、血中好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する、請求項８６から１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記抗体が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項８６から１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項１１３に記載の方法。
  115. 前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域が、フコシル化されていない、請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、請求項１１３に記載の方法。
  117. 前記ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基が、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って番号付けされている、請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善させるように操作された、請求項８６から１１０のいずれか一項に記載の方法。
  119. 前記抗体が、前記Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を改善させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項１１８に記載の方法。
  120. 前記抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つが、フコシル化されていない、請求項８６から１１２のいずれか一項に記載の方法。
  121. 前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号７６または７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１から８５のいずれか一項に記載の方法。
  122. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記組成物が、ＩＢＳまたは機能性ディスペプシアを処置または予防するための１つまたは複数の追加的な治療剤（複数可）と組み合わせて投与される、請求項１から１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記個体が、ヒトである、請求項１から１２３のいずれか一項に記載の方法。
  125. 前記組成物が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である、請求項１から１２４のいずれか一項に記載の方法。
  126. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、請求項１から１２５のいずれか一項によるそれを必要とする個体における前記医薬の投与のための指示を含む添付文書とを含む、製造物品。
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