JP2022520105A - マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置するための方法および組成物 - Google Patents

マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置するための方法および組成物 Download PDF

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Abstract

本開示は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の処置のための方法を提供する。特に、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体または前記抗体を含む組成物の投与による、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の処置のための方法を提供する。本開示は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の処置のための、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製品またはキットも提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、そのそれぞれの開示が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１９年２月１５日に出願した米国仮出願第６２／８０６，６０４号、および２０１９年１０月２４日に出願した同第６２／９２５，７０４号に対する優先権を主張する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７０１７１２００１０４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年２月１３日、サイズ：１０６ＫＢ）。
本開示は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体および前記抗体を含む組成物の投与によって処置するための方法に関する。
シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）のＣＤ３３関連ファミリーのメンバーであるＳｉｇｌｅｃ－８は、好酸球、マスト細胞の表面上に、および低レベルで好塩基球上に選択的に発現される、組織分布の限定された膜貫通細胞表面タンパク質である。Ｓｉｇｌｅｃ－８は、３種の細胞外免疫グロブリン様ドメイン、膜貫通領域、および阻害機能を有する免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｍｏｔｉｆ）を含む２種のチロシン系シグナル伝達モチーフを含有する細胞質側末端を含有する。マスト細胞におけるＳｉｇｌｅｃ－８の結合により、メディエーター放出の阻害がもたらされる場合があり、好酸球においては、アポトーシスが誘導される場合がある（Bochner, B. (2009) Clin. Exp. Allergy 39:317-324）。
マスト細胞増加に伴う胃炎および／または胃腸炎に関するＦＤＡに認可された処置は存在しない。これらの患者に対する現在の治療法および疾患管理は、プロトンポンプ阻害剤、抗ヒスタミン薬、栄養制限食／成分栄養、マスト細胞安定剤、全身または経口コルチコステロイド、および免疫調節生物製剤の時折の適応外使用を含む、多くの様々なアプローチを含む。そのため、これらの障害および関連する障害に関する有効な処置に対する必要性が残っている。
本明細書において引用されているすべての参考文献は、特許出願、特許公開、および科学文献を含め、それぞれ個々の文献が、具体的かつ個別に参照により組み込まれるのと同様に、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Bochner, B. (2009) Clin. Exp. Allergy 39:317-324
この必要性およびその他の必要性を満たすために、本開示は、とりわけ、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体および／または前記抗体を含む組成物の投与によって処置または予防する方法に関する。これらの方法は、組織マスト細胞の上昇を有する食道炎、胃炎、腸炎、十二指腸炎、および／または胃腸炎（たとえば、好酸球性食道炎、胃炎、大腸炎、十二指腸炎、腸炎、および／または胃腸炎に対する臨床基準を満たさない）の１つまたは複数の症状を有する個体の処置を可能にする。
したがって、本開示のある特定の態様は、個体における胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、またはマスト細胞性胃腸炎を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、（ａ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。
本開示の他の態様は、個体における胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、またはマスト細胞性胃腸炎を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料は、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有する。一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第２の試料は、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない。
本明細書に記載される任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料は同じである。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料は、同じ種類の組織に由来する。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料の一方または両方は、胃または十二指腸の生検に由来する。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料の一方または両方は、生検による食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）に由来する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも３つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも３つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも３つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも２つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも２つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも２つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つの強拡大視野（ＨＰＦ）を有する。一部の実施形態では、第１の試料は、２５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つの強拡大視野（ＨＰＦ）を有する。一部の実施形態では、第１の試料は、２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つの強拡大視野（ＨＰＦ）を有する。一部の実施形態では、マスト細胞は、トリプターゼ、ＣＤ１１７（ｃ－ｋｉｔ）、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される。一部の実施形態では、第２の試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第２の試料は、個体の胃粘膜から得られ、第２の試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、第２の試料は、個体の十二指腸粘膜から得られ、第２の試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも３つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、第１の試料におけるマスト細胞の数は、組成物の投与の４５日またはそれより前に検出される。
本明細書に記載される実施形態のいずれかによる一部の実施形態では、個体は、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤に対して不応性である。一部の実施形態では、個体は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、機能性消化不良を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、腹痛、腹部けいれん、悪心、嘔吐、下痢、腹部膨満、および特定可能な原因を有さない早期満腹感のうちの１つまたは複数を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、薬理学的介入および／または食事介入に対して不応性および／または非応答性である。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃炎を以前に有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると診断された（たとえば、その既往歴を有する）が、現在は、好酸球の上昇を有さない症候性である。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃炎を有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃炎の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃腸炎を以前に有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると診断された（たとえば、その既往歴を有する）が、現在は、好酸球の上昇を有さない症候性である。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃腸炎を有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃腸炎の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体は、好酸球性腸炎を有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性腸炎の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体は、好酸球性十二指腸炎を有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性十二指腸炎の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体は、機能性消化不良を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数または活性のうちの一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、胃炎または胃腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置が失敗しているか、またはそれで適切に制御されていない。一部の実施形態では、胃炎または胃腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置は、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）処置、コルチコステロイド処置、および食事処置からなる群から選択される。一部の実施形態では、個体における胃炎または胃腸炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、個体における胃炎、十二指腸炎、腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％低減される。一部の実施形態では、個体における腹痛、悪心、嘔吐、食欲喪失、腹部けいれん、食事を終える前の満腹感、腹部膨満、下痢、および液状または水様便のうちの１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。
本開示の他の態様は、個体における食道炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の食道粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の食道粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性食道炎を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の食道粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の食道粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、食道炎の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、（ａ）個体の食道粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の食道粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。
本開示の他の態様は、個体における食道炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性食道炎を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、食道炎の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、食道炎の粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。一部の実施形態では、個体の食道粘膜から得られた第１の試料は、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有する。一部の実施形態では、個体の食道粘膜から得られた第２の試料は、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない。
一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料は、同じである。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料の一方または両方は、食道の生検試料に由来する。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料の一方または両方は、生検による食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）に由来する。一部の実施形態では、第１の試料は、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第１の試料は、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、マスト細胞は、トリプターゼ、ＣＤ１１７（ｃ－ｋｉｔ）、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり１０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり１０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有するＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり１５個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり１５個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有するＨＰＦを有さない。
一部の実施形態では、個体の食道粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数、活性、または位置のうちの１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、食道炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置が失敗しているか、またはそれで適切に制御されていない。一部の実施形態では、個体における食道炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、個体における食道炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％低減される。一部の実施形態では、個体における胸焼け、悪心、嚥下障害／嚥下困難、嘔吐、腹痛、咳、食片圧入、早期満腹感、食欲喪失、胸部痛、哺乳不耐（ｆｅｅｄｉｎｇ ｉｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ）または哺乳拒否（ｆｅｅｄｉｎｇ ｒｅｆｕｓａｌ）、および胃食道逆流のうちの１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。
本開示の他の態様は、個体における大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の結腸粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の結腸粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）を処置または予防するための方法であって、（ａ）個体の結腸粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の結腸粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。本開示の他の態様は、大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、（ａ）個体の結腸粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、（ｂ）個体の結腸粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、（ｃ）第１の試料がマスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、第２の試料が好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合に、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップとを含む、方法に関する。
本開示の他の態様は、個体における大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、個体におけるマスト細胞性大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）を処置または予防するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。本開示の他の態様は、大腸炎（たとえば、潰瘍性大腸炎）の１つまたは複数の症状を有する個体を処置するための方法であって、個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、個体が、マスト細胞の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加を有し、個体が、好酸球の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加を有さない、方法に関する。一部の実施形態では、個体の結腸粘膜から得られた第１の試料は、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有する。一部の実施形態では、個体の結腸粘膜から得られた第２の試料は、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない。
一部の実施形態では、第１の試料は、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個もしくはそれを上回るか、２５個もしくはそれを上回るか、３０個もしくはそれを上回るか、または２０～３０個のマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり６０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、第２の試料は、ＨＰＦ当たり６０個を上回る好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、第１の試料と第２の試料は、同じである。一部の実施形態では、マスト細胞は、トリプターゼ、ＣＤ１１７、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される。一部の実施形態では、第１の試料におけるマスト細胞の数は、組成物の投与の４５日またはそれより前に検出される。一部の実施形態では、個体は、好酸球性大腸炎を有していたか、またはそれであると以前に診断されており、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性大腸炎の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体の結腸粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数または活性のうちの一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、組成物の投与前に、個体は、大腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置が失敗しているか、またはそれで適切に制御されていない。一部の実施形態では、個体における大腸炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、個体における大腸炎の１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％低減される。
本明細書に記載される任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、組成物は、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、３ヶ月またはそれを上回る間、１ヶ月に１回、４週間ごと、または２８日ごとに静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、１サイクルに１回、１、２、３、４、５、または６サイクルの間、静脈内注入によって投与され、ここで、各サイクルは、１ヶ月、４週間、または２８日である。一部の実施形態では、組成物は、皮下注射によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１回または複数の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、本方法は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、および約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量を投与するステップを含む。一部の実施形態では、本方法は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量を１日目に、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量を２６日目から３２日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量を５４日目から６０日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量を８２日目から８８日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量を１１０日目から１１６日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量を１３８日目から１４４日目の間に投与するステップを含む。
本明細書に記載される任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、ここで、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの５０％未満が、フコース残基を含有する。一部の実施形態では、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および（７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、（５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域；（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域；または（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒである。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２またはドメイン３内のエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合について、抗体４Ｆ１１と競合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合について、抗体２Ｅ２と競合しない。一部の実施形態では、抗体は、抗体２Ｅ２ではない。一部の実施形態では、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、抗体は、血中好酸球を枯渇させ、かつ／またはマスト細胞活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させるように操作されている。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を向上させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
本明細書に記載される任意の他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、組成物は、胃炎、胃腸炎、または食道炎を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、胃炎、胃腸炎、または食道炎を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤は、ＰＰＩ、全身的コルチコステロイド、局所的コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬、マスト細胞安定剤、Ｈ－２ブロッカー、抗ＩｇＥ抗体、カルシニューリン阻害剤、免疫調節剤、および免疫抑制剤からなる群から選択される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、組成物は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、前述の実施形態のいずれか１つによるそれを必要とする個体におけるその医薬の投与のための説明を含む添付文書とを含む、製品またはキットに関する。本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、前述の実施形態のいずれか１つによるそれを必要とする個体におけるその医薬の投与のための説明を含む添付文書とを含む、製品またはキットに関する。
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、またはすべてを組み合わせて、本開示の他の実施形態を形成することができることを、理解されたい。本開示のこれらおよび他の態様は、当業者には明らかであろう。本開示のこれらおよび他の実施形態は、以下の詳細な説明によってさらに説明される。
図１は、好酸球性胃腸疾患（ＥＧＩＤ）の発病を例示する概略図を提供する。
図２Ａおよび２Ｂは、ＥＧ／ＥＥｎを有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２相研究に関する粘膜好酸球増加症に関する組織病理学的参加基準を満たさなかった、ＥＧ／ＥＥｎを疑われた症候性患者の分布（図２Ａ）およびベースラインの特徴（図２Ｂ）を示す。図２Ｂでは、ａ＝喘息、鼻炎、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、季節性アレルギー、環境アレルギー、または花粉アレルギーのスクリーニングにおける病歴。 図２Ａおよび２Ｂは、ＥＧ／ＥＥｎを有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２相研究に関する粘膜好酸球増加症に関する組織病理学的参加基準を満たさなかった、ＥＧ／ＥＥｎを疑われた症候性患者の分布（図２Ａ）およびベースラインの特徴（図２Ｂ）を示す。図２Ｂでは、ａ＝喘息、鼻炎、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、季節性アレルギー、環境アレルギー、または花粉アレルギーのスクリーニングにおける病歴。
図３Ａおよび３Ｂは、症候性患者の胃（図３Ａ）および十二指腸（図３Ｂ）生検において、マスト細胞が一貫して上昇することを示す。水平の陰付き部分は、正常なマスト細胞のレベルを示す（たとえば、Hahn et al. (2007) Am. J. Surg. Pathol. 31:1669-1676；Tison et al. (2010) J. Allergy Clin. Immunol. 125:AB182；Walker et al. (2009) Aliment. Pharmacol. Ther. 29:765-773；Martinez et al. (2013) Gut 62:1160-1168；およびDoyle et al. (2014) Am. J. Surg. Pathol. 38:832-843を参照されたい）。 図３Ａおよび３Ｂは、症候性患者の胃（図３Ａ）および十二指腸（図３Ｂ）生検において、マスト細胞が一貫して上昇することを示す。水平の陰付き部分は、正常なマスト細胞のレベルを示す（たとえば、Hahn et al. (2007) Am. J. Surg. Pathol. 31:1669-1676；Tison et al. (2010) J. Allergy Clin. Immunol. 125:AB182；Walker et al. (2009) Aliment. Pharmacol. Ther. 29:765-773；Martinez et al. (2013) Gut 62:1160-1168；およびDoyle et al. (2014) Am. J. Surg. Pathol. 38:832-843を参照されたい）。
図４は、ｈｐｆ当たり３０個以上の好酸球を有する患者（ｎ＝７１；明）またはｈｐｆ当たり３０個を下回る好酸球しか有さないが、ｈｐｆ当たり３０個以上のマスト細胞を有する患者（ｎ＝１６；暗）に関する８種の症状のそれぞれについてのスクリーニング中の平均症状強度（０～１０）を示す。ｈｐｆ当たり３０個以上の好酸球を有するコホートでは、１名の患者が症状のデータを紛失し、参加しなかった。
図５Ａおよび５Ｂは、２名の個々の患者の症例研究を示す。 図５Ａおよび５Ｂは、２名の個々の患者の症例研究を示す。
図６Ａおよび６Ｂは、マスト細胞の増加した活性化が、マスト細胞のみが上昇した（好酸球は上昇しない）組織において見られることを示す。図６Ａでは、ヒトの胃生検組織を単一細胞へと処理し、その後、フローサイトメトリーによってマスト細胞（ＣＤ１１７＋ Ｓｉｇｌｅｃ－８＋）および好酸球（ＣＤ１１７－ Ｓｉｇｌｅｃ－８＋）を定量した。図６Ｂでは、図６Ａにおいて特定したマスト細胞をフローサイトメトリーを使用して、活性化および脱顆粒マーカーＣＤ６３についてさらに分析した。ＣＤ６３に対して特異的な抗体または対照抗体による染色を示す。
図７は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の最終投与後２週間の、１日の平均スコアに対するベースライン（スクリーニング期間の１日の平均）からの総症状スコアの変化の平均および中央値を示す。
Ｉ．定義
本開示は、特定の組成物または生物学的系に制限されるものではなく、当然ながら、変動し得ることを理解されたい。本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のものにすぎず、限定することを意図するものではないこともまた、理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、内容により別途明確に指示されない限り、複数形の参照物を含む。したがって、たとえば、「１つの分子」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれを上回るそのような分子の組合せなども含む。
「約」という用語は、本明細書において使用されるとき、当該技術分野の当業者に容易に理解される、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において、「約」ある値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（また、それについて記載する）。
本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含むこと」、それら「からなること」、およびそれら「から本質的になること」を含むことが理解される。
「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子）、ならびに抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）が含まれる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において、「抗体」と互換可能に使用される。
基本的な４本鎖の抗体ユニットは、２つの同一な軽鎖（Ｌ）および２つの同一な重鎖（Ｈ）から構成されるヘテロ四量体の糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と称される追加のポリペプチドを伴う、基本的なヘテロ四量体ユニット５つからなり、１０個の抗原結合部位を含むが、一方でＩｇＡ抗体は、基本的な４本鎖ユニット２～５個からなり、これらが重合して、Ｊ鎖との組合せで多価集合体が形成され得る。ＩｇＧの場合は、４本鎖ユニットは、一般に、約１５０，０００ダルトンである。それぞれのＬ鎖は、１つの共有結合ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結され、一方で、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプに応じて１つまたは複数のジスルフィド結合によって互いに連結されている。それぞれのＨ鎖およびＬ鎖はまた、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有する。それぞれのＨ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて、α鎖およびγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）を有し、μおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。それぞれのＬ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて、その反対側の末端に、定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖および重鎖の可変ドメイン間の接合部を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬの対が、一緒になって、単一の抗原結合部位を形成する。様々なクラスの抗体の構造および特性については、たとえば、Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6を参照されたい。
任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖には、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと称される明確に異なる２つの種類のうちの１つが割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンには、異なるクラスまたはアイソタイプが割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと表記される重鎖を有する。γおよびαのクラスは、さらに、ＣＨの配列および機能における比較的わずかな違いに基づいて、サブクラスに分割され、たとえば、ヒトは、以下のサブクラスを示す：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと称される複数の多型性バリアントで存在し得（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において考察されている）、それらのいずれも、本開示における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、ａ、ｆ、ｎ、ｚという文字で表記されるものである。
「単離された」抗体は、特定され、その産生環境の成分から（たとえば、天然または組換えにより）分離および／または回収されているものである。一部の実施形態では、単離されたポリペプチドは、その産生環境に由来するすべての他の成分と関係がない。その産生環境の混入成分、たとえば、組換えでトランスフェクトした細胞から生じるものは、抗体の研究、診断上、または治療上の使用を典型的に妨害するであろう材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を挙げることができる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、（１）たとえば、ローリー法によって判定した場合に、抗体の９５重量％を上回って、また一部の実施形態では、９９重量％を上回って、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー染色もしくは銀染色を使用して、非還元もしくは還元条件下において、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均質となるまで、精製される。単離された抗体は、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないことになるため、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含む。通常は、しかしながら、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用されるとき、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る可能性のある天然の変異および／または翻訳後修飾（たとえば、異性化、アミド化）を除き、同一である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｃ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において、切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｎ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において、切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異性であり、単一の抗原性部位に指向されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異性であり、複数の抗原性部位に指向されている（たとえば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が、実質的に均質な抗体集団から得られているという特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。たとえば、本開示に従って使用しようとするモノクローナル抗体は、たとえば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部またはすべてを有するヒトもしくはヒト様抗体を動物において産生するための技術を含め、様々な技法によって、作製することができる。
「ネイキッド抗体」という用語は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「完全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指して、互換可能に使用される。具体的には、完全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然の配列の定常ドメイン（たとえば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。一部の事例では、インタクトな抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有し得る。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、インタクトな抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、およびＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照されたい）；一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一な抗原結合性断片と、その残りの容易に結晶化する能力を反映した表記である「Ｆｃ」断片とが得られた。Ｆａｂ断片は、１つの全長Ｌ鎖に、一方の重鎖のＨ鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）および第１の定常ドメイン（ＣＨ１）が付随したものからなる。それぞれのＦａｂ断片は、抗原結合に関しては、１価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が得られるが、これは、おおまかには、異なる抗原結合活性を有する２つのＦａｂ断片がジスルフィド結合したものに相当し、依然として抗原に架橋することが可能である。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含め、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にいくつかの追加の残基を有することが、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた、公知である。
Ｆｃ断片は、両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分がジスルフィドによって一緒に結合されたものを含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域は、ある特定の種類の細胞において見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される領域でもある。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む、最小限の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインが緊密な非共有結合で結合した二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングにより、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つずつのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性ではあるものの、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、ＶＨおよびＶＬ抗体ドメインが、単一のポリペプチド鎖に接続されたものを含む、抗体断片である。一部の実施形態では、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のために所望される構造を形成するのを可能にする、ポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの考察に関しては、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照されたい。
本開示の抗体の「機能性断片」は、一般にはインタクトな抗体の抗原結合領域もしくは可変領域を含む、インタクトな抗体の一部分、またはＦｃＲ結合能力を保持するかもしくはそれが修飾されている抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例としては、線形抗体、一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的に、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であり、一方で鎖の残りの部分が、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体の断片における対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含むが、それらが、所望される生物学的活性を呈する場合に限る（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書における目的とされるキメラ抗体としては、抗体の抗原結合領域が、たとえば、マカクザルに目的の抗原で免疫付与を行うことによって産生された抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が挙げられる。本明細書において使用されるとき、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
非ヒト（たとえば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、キメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲに由来する残基が、所望される特異性、親和性、および／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲに由来する残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性など、抗体の性能をさらに洗練するためになされ得る。一般には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになり、ここで、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域は、抗体の性能、たとえば、結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する、１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含み得る。一部の実施形態では、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖では６つを上回らず、Ｌ鎖では３つを上回らない。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。さらに詳細については、たとえば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。たとえば、Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原性部位に指向されている。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原性部位に指向されている。代替的なヒト化の方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端側のドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」および「ＶＬ」と称され得る。これらのドメインは、一般に、抗体のもっとも可変的な部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含む。
「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書において使用されるとき、配列が超可変であり、かつ／または構造的に定義されるループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然の抗体の場合、Ｈ３およびＬ３は、６つのＨＶＲの中でもっとも多様性を示し、Ｈ３は、特に、抗体に対する細かい特異性を付与する固有の役割を果たすと考えられている。たとえば、Xu et al. Immunity 13:37-45 (2000);Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然のラクダ抗体は、軽鎖の不在下においても機能性であり、安定である。たとえば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)およびSheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照されたい。
いくつかのＨＶＲの表記が使用されており、本明細書において包含される。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、もっとも一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)）。ＣｈｏｔｈｉａのＨＶＲは、代わりに、構造的ループの位置に言及する（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を、以下に示す。
Figure 2022520105000002
別途示されない限り、可変ドメインの残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域の残基）は、Ｋａｂａｔら（上記）に従って番号付けされている。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるＨＶＲ残基以外の可変ドメインの残基である。
「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるようなアミノ酸位置の番号付け」という表現、およびそれらの変化形は、Ｋａｂａｔら（上記）において、抗体のコンピレーションの重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されている番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮形に相当する、より少ないアミノ酸を含み得るか、またはそれへの挿入に相当する、追加のアミノ酸を含み得る。たとえば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に、単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に、挿入された残基（たとえば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体に関するＫａｂａｔの残基番号付けは、その抗体の配列の相同性の領域における、「標準的な」Ｋａｂａｔで番号付けした配列とのアラインメントによって、決定され得る。
本明細書の目的での「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含む、フレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、または既存のアミノ酸配列変化を含んでもよい。一部の実施形態では、既存のアミノ酸の変化の数は、１０個もしくはそれよりも少ない、９個もしくはそれよりも少ない、８個もしくはそれよりも少ない、７個もしくはそれよりも少ない、６個もしくはそれよりも少ない、５個もしくはそれよりも少ない、４個もしくはそれよりも少ない、３個もしくはそれよりも少ない、または２個もしくはそれよりも少ない。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインし、最大の配列同一性パーセントが達成されるように、必要に応じてギャップを導入した後に、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義され、いずれの保存的置換も、配列同一性の一部とは考えない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、当業者の技能の範囲内である様々な手段で、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。たとえば、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、またはアミノ酸配列Ｂに対する、アミノ酸配列同一性％（これは、代替として、所与のアミノ酸配列Ａが、所与のアミノ酸配列Ｂへ、アミノ酸配列Ｂと、またはアミノ酸配列Ｂに対して、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含むとして表記することができる）は、以下のように計算される：
１００を分数Ｘ／Ｙに乗じる
ここで、Ｘは、配列によるそのプログラムでのＡとＢとのアラインメントにおいて、同一なマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合には、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが、理解されるであろう。
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに「結合する」、「特異的に結合する」、または「特異的である」抗体とは、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合するものである。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）の、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドへの結合は、当該技術分野において公知の方法（たとえば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって測定した場合、その抗体のＳｉｇｌｅｃ－８への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（たとえば、１０－８Ｍもしくはそれを下回る、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、たとえば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
「抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体」または「ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体」という用語は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のポリペプチドまたはエピトープに、任意の他のポリペプチドまたは無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドのエピトープに実質的に結合することなく、結合する抗体を指す。
「Ｓｉｇｌｅｃ－８」という用語は、本明細書において使用されるとき、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質を指す。この用語はまた、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含め、Ｓｉｇｌｅｃ－８の天然に存在するバリアントを含む。例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列は、配列番号７２に示されている。別の例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列は、配列番号７３に示されている。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメインを含む。例示的な免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号７４に示されている。配列番号７４において下線で示されているアミノ酸配列は、Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列のＦｃ領域を示す。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
Figure 2022520105000003
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
Figure 2022520105000004
Figure 2022520105000005
 Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022520105000006
「アポトーシスを誘導する」かまたは「アポトーシス性」である抗体とは、標準的なアポトーシスアッセイ、たとえば、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞の縮小、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス体と称される）の形成によって判定される、プログラム細胞死を誘導するものである。たとえば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、細胞をアネキシンＶで染色することによって示すことができる。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属し得る生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて変動する。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（たとえば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、分泌されたＩｇが、ある特定の細胞傷害性細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合することにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒素により標的細胞を殺滅させることを可能にする、細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「装備（ａｒｍ）」し、この機序による標的細胞の殺滅に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞におけるＦｃの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを強化する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイ、たとえば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号に記載されているものを、行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、たとえば、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)に開示されているものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変化させる他のＦｃバリアントとしては、Ghetie et al., Nat Biotech. 15:637-40, 1997；Duncan et al, Nature 332:563-564, 1988；Lund et al., J. Immunol 147:2657-2662, 1991；Lund et al, Mol Immunol 29:53-59, 1992；Alegre et al, Transplantation 57:1537-1543, 1994；Hutchins et al., Proc Natl. Acad Sci USA 92:11980-11984, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett. 44:111-117, 1995；Lund et al., FASEB J9:115-119, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett 54:101-104, 1996；Lund et al, J Immunol 157:4963-4969, 1996；Armour et al., Eur J Immunol 29:2613-2624, 1999；Idusogie et al, J Immunol 164:4178-4184, 200；Reddy et al, J Immunol 164:1925-1933, 2000；Xu et al., Cell Immunol 200:16-26, 2000；Idusogie et al, J Immunol 166:2571-2575, 2001；Shields et al., J Biol Chem 276:6591-6604, 2001；Jefferis et al, Immunol Lett 82:57-65. 2002；Presta et al., Biochem Soc Trans 30:487-490, 2002；Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010, 2006；米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、同第５，６７７，４２５号、同第６，１６５，７４５号、同第６，２７７，３７５号、同第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，１９４，５５１号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，２７７，３７５号、同第７，３３５，７４２号、および同第７，３１７，０９１号によって開示されているものが挙げられる。
「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、天然配列のＦｃ領域およびバリアントのＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、多様であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０位から、そのカルボキシル末端までの一片として定義される。本開示の抗体において使用するのに好適な天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれる。単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔの番号付けによるＳ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Ｐｒｏと表記される）が、組換えＩｇＧ４抗体において観察される異種性をなくすために導入され得る。Angal, S. et al. (1993) Mol Immunol 30, 105-108を参照されたい。
「フコシル化されていない」または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域に結合される炭水化物構造が、低減されたフコースを有するかまたはフコースが欠如している、Ｆｃ領域を含むグリコシル化抗体バリアントを指す。一部の実施形態では、低減されたフコースを有するかまたはフコースが欠如している抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。フコシル化されていない抗体またはフコース欠損抗体は、細胞株において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて、低減されたフコースを有する。一部の実施形態では、本明細書において企図されるフコシル化されていない抗体またはフコース欠損抗体の組成物は、組成物中の抗体のＦｃ領域に結合したＮ結合型グリカンのうちの約５０％未満がフコースを含む、組成物である。
「フコシル化」または「フコシル化された」という用語は、抗体のペプチド骨格に結合したオリゴ糖内におけるフコース残基の存在を指す。具体的には、フコシル化された抗体は、抗体のＦｃ領域に結合したＮ結合型オリゴ糖の一方または両方において、もっとも内側のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基、たとえば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインの２９７位のＡｓｎ（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に、α（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンにおけるわずかな配列変動性に起因して、２９７位からアミノ酸約３個分上流または下流に、すなわち、２９４位と３００位との間に、位置する場合もある。
「フコシル化度」は、当該技術分野において公知の方法によって特定される、たとえば、マトリックス支援レーザー脱離－イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ）によって評価される、Ｎ－グリコシダーゼＦで処置した抗体組成物中の、すべてのオリゴ糖に対するフコシル化されたオリゴ糖の割合である。「完全フコシル化抗体」の組成物においては、本質的にすべてのオリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態では、完全フコシル化抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化度を有する。したがって、そのような組成物中の個々の抗体は、典型的に、Ｆｃ領域における２つのＮ結合型オリゴ糖のそれぞれに、フコース残基を含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物においては、オリゴ糖は本質的にすべてがフコシル化されておらず、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域における２つのＮ結合型オリゴ糖のいずれにも、フコース残基が含まない。一部の実施形態では、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化度を有する。「部分フコシル化抗体」の組成物においては、オリゴ糖の一部のみが、フコースを含む。そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含まなくてもよく、またはそれらの一方もしくは両方に含んでもよいが、ただし、この組成物が、本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖にフコース残基が欠如しているものから構成されるのでも、本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含むものから構成されるのでもないことを条件とする。一実施形態では、部分フコシル化抗体の組成物は、約１０％～約８０％（たとえば、約５０％～約８０％、約６０％～約８０％、または約７０％～約８０％）のフコシル化度を有する。
「結合親和性」とは、本明細書において使用されるとき、ある分子（たとえば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（たとえば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の強度を指す。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８（これは、本明細書に記載されるＳｉｇｌｅｃ－８－Ｆｃ融合タンパク質など、二量体であってもよい）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書において記載されるものを含め、当該技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。
「結合アビディティー」とは、本明細書において使用されるとき、ある分子（たとえば、抗体）の複数の結合部位と、その結合パートナー（たとえば、抗原）との結合の強度を指す。
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、特定され、それが産生された環境において通常関連性のある少なくとも１つの混入核酸分子から分離された、核酸分子である。一部の実施形態では、単離された核酸は、産生環境と関連するすべての成分と関係がない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または環境ではない形態をしている。したがって、単離された核酸分子は、細胞において天然に存在している本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする核酸とは区別される。
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効となるのを許容するような形態にあり、製剤が投与されるであろう個体にとって、許容できないほどに毒性である追加の成分を含まない、調製物である。そのような製剤は、滅菌である。
「担体」には、本明細書において使用されるとき、用いられる投薬量および濃度において、それに曝露される細胞または哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液であることが多い。生理学的に許容される担体の例としては、緩衝物質、たとえば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、たとえば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、たとえば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；キレート剤、たとえば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、たとえば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成対イオン、たとえば、ナトリウム；ならびに／または非イオン性表面活性物質、たとえば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が挙げられる。
本明細書において使用されるとき、「処置」または「処置すること」という用語は、臨床病理の過程において、処置されている個体または細胞の天然の経過を変化させるように設計される臨床介入を指す。処置の望ましい作用としては、疾患進行速度の減少、疾患状態の緩和または軽減、ならびに寛解または予後の改善が挙げられる。個体は、たとえば、疾患（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎）と関連する１つまたは複数の症状が、軽減または排除された場合、「処置」が成功している。たとえば、個体は、処置が、疾患を患っているものの生活の質の向上、疾患を処置するために必要とされる他の医薬の用量の減少、疾患の再発頻度の低減、疾患の重症度の減少、疾患の発症もしくは進行の遅延、ならびに／または個体の生存の延長をもたらす場合、「処置」が成功している。
本明細書において使用されるとき、「と併せて」または「と組み合わせて」とは、１つの処置モダリティを、別の処置モダリティに加えて、投与することを指す。そのため、「と併せて」または「と組み合わせて」とは、１つの処置モダリティを、他の処置モダリティを個体に投与する前、最中、または後に投与することを指す。
本明細書において使用されるとき、「予防」または「予防すること」という用語には、個体における疾患の発症または再発に関して、予防法を提供することが含まれる。個体は、疾患の素因を有するか、疾患に罹患しやすいか、または疾患を発症する危険性にある可能性があるが、まだ疾患であると診断されていない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を使用して、疾患（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、および／またはマスト細胞制胃腸炎）の発症を遅らせる。
本明細書において使用されるとき、疾患（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎）を発症する「危険性にある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有しても有さなくてもよく、本明細書に記載される処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示しても示さなくてもよい。「危険性にある」は、個体が、当該技術分野において公知のように、疾患（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎）の発症と相関する測定可能なパラメーターである１つまたは複数の危険因子を有することを示す。これらの危険因子のうちの１つまたは複数を有する個体は、これらの危険因子のうちの１つまたは複数を有さない個体よりも、疾患を発症する確率が高い。
「有効量」とは、少なくとも、必要とされる投薬量および期間で、治療的結果または予防的結果を含め、所望されるかまたは示される作用を達成するのに有効な量を指す。有効量は、１回または複数回の投与で提供され得る。「治療有効量」は、少なくとも、特定の疾患の測定可能な改善を達成するのに必要な最小限の濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびに抗体が個体において所望される応答を誘起する能力に応じて、変動し得る。治療有効量はまた、抗体の任意の毒性または有害な作用を、治療上有益な作用が上回るものであり得る。「予防有効量」は、必要とされる投薬量および期間で、所望される予防的結果を達成するのに有効な量を指す。予防的用量は、疾患の前または早期段階において個体に使用されるため、典型的には、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなるが、必ずしもそうでなくてもよい。
「慢性的な」投与とは、初期の治療的作用（活性）を長期間維持することができるような、急性とは対照的な連続的な様式での医薬の投与を指す。「間欠的な」投与とは、中断することなく連続的に行われるのではなく、周期的な性質である処置である。
「添付文書」という用語は、治療製品の商用パッケージに慣例的に含まれる説明を指して使用され、そのような治療製品の使用に関する適応症、使用法、投薬量、投与、組合せ療法、禁忌、および／または警告についての情報を含む。
本明細書において使用されるとき、「個体」または「対象」は、哺乳動物である。処置の目的での「哺乳動物」には、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、競技用、もしくは愛玩用の動物、たとえば、イヌ、ウマ、ウサギ、畜牛、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどが含まれる。一部の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
ＩＩ．方法
個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性大腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置および／または予防するための方法であって、個体に、有効量の、本明細書に記載されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）または前記抗体を含む組成物を投与するステップを含む、方法が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に含まれる。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性胃炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性胃腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性胃炎およびマスト細胞性胃腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性胃炎およびマスト細胞性腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎およびマスト細胞性胃炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎およびマスト細胞性胃腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎およびマスト細胞性腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性胃炎、およびマスト細胞性胃腸炎を有する。一部の実施形態では、個体は、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性胃炎、およびマスト細胞性腸炎を有する。
一部の実施形態では、本方法は、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜（たとえば、マスト細胞性胃炎またはマスト細胞性胃腸炎に関する）から得られた１つまたは複数の試料に由来するマスト細胞の数および好酸球の数を検出するステップを含む。一部の実施形態では、本方法は、個体の食道粘膜（たとえば、マスト細胞性食道炎に関する）から得られた１つまたは複数の試料に由来するマスト細胞の数および好酸球の数を検出するステップを含む。
Ａ．マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎
本開示のある特定の態様は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を有する個体に関する。本開示は、少なくとも部分的に、臨床研究患者の亜集団が、好酸球性胃炎／胃腸炎の症状を有するにもかかわらず、好酸球性胃炎／胃腸炎を診断するために典型的に使用される胃および／または十二指腸の粘膜における好酸球の数の増加を有さないという発見に基づく。代わりに、これらの患者は、胃および／または十二指腸の粘膜において、マスト細胞の実質的数（ほとんどの事例では、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個を上回るマスト細胞）を有することが見出された。正常レベルは、ＨＰＦ当たりおよそ２０個未満のマスト細胞であることが測定されており（Doyle et al., Am. J. Surg. Pathol. (2014) 38:832-843；Jakate et al., Arch. Pathol. Lab. Med. (2006) 130:362-367；Tison et al., Allergy Clin. Immunol. (2010) Abstract 714）、これらの患者においてマスト細胞の上昇が、消化管の総体症状の原因である可能性を示唆している。
一部の実施形態では、個体は、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）を有するか、またはそれであると診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤による処置に対して不応性である。たとえば、個体における１つまたは複数のＧＥＲＤ症状は、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤による処置に対して不応性であり得るか、または個体は、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤による処置に対して不応性であるＧＥＲＤを有し得る。一部の実施形態では、個体は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃炎を以前に有していたか、またはそれであると診断された（たとえば、その既往歴を有する）が、好酸球の上昇を有さない症候性である（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）。一部の実施形態では、個体は、腹痛、腹部けいれん、悪心、嘔吐、下痢、腹部膨満、および特定可能な原因を有さない早期満腹感のうちの１つまたは複数を有したか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）、またはそれであると以前に診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）。一部の実施形態では、個体は、薬理学的介入および／または食事介入に対して不応性および／または非応答性である（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃炎を有したか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃炎（たとえば、症候性である）の１つまたは複数の症状を有する。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃腸炎を以前に有していたか、またはそれであると診断された（たとえば、その既往歴を有する）が、好酸球の上昇を有さない症候性である（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に）。一部の実施形態では、個体は、好酸球性胃腸炎を有していたか（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、またはそれであると以前に診断されており（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）、個体は、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃腸炎（たとえば、症候性である）の１つまたは複数の症状を有する。たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置前に、個体は、好酸球の上昇を呈さない場合があるが（たとえば、本明細書に記載される生検に由来する）、好酸球性胃炎または好酸球性胃腸炎の既往歴または診断を有したことがある場合がある。一部の実施形態では、個体は、機能性消化不良を有するか、またはそれであると診断されている（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置の前に）。理論に束縛されることを望むものではないが、マスト細胞の上昇が、ＧＥＲＤ、ＩＢＳ、および機能性消化不良などの疾患状態における総体症状の原因である可能性があり、たとえば、胃および／または十二指腸の粘膜における好酸球の数が（たとえば、本明細書において議論される生検に由来する）、好酸球性疾患／合併症に対する臨床標準を満たさない場合であっても、好酸球性胃炎／胃腸炎に似た症状を有すると考えられる。
一部の実施形態では、個体は、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加（たとえば、マスト細胞の参照と比較して）を有するが、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜（たとえば、マスト細胞性胃炎またはマスト細胞性胃腸炎）の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加（たとえば、好酸球の参照と比較して）を有さない。一部の実施形態では、個体は、食道粘膜の少なくとも一部分において、マスト細胞の数の増加（たとえば、マスト細胞の参照と比較して）を有するが、食道粘膜（たとえば、マスト細胞性食道炎）の少なくとも一部分において、好酸球の数の増加（たとえば、好酸球の参照と比較して）を有さない。
一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた試料は、たとえば、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有するが、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた試料は、たとえば、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない（たとえば、マスト細胞性胃炎またはマスト細胞性胃腸炎に関する）。一部の実施形態では、試料は、同じ試料である。一部の実施形態では、試料は、異なる試料である。一部の実施形態では、試料は、同じ種類の組織に由来する。一部の実施形態では、個体の食道粘膜から得られた試料は、たとえば、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有するが、個体の食道粘膜から得られた試料は、たとえば、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない（たとえば、マスト細胞性食道炎に関する）。一部の実施形態では、試料は、同じ試料である。一部の実施形態では、試料は、異なる試料である。
一部の実施形態では、胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜に由来する試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料からの２つまたはそれを上回るＨＰＦから得られたマスト細胞数のピークは、ＨＰＦ当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞である。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料からの２つまたはそれを上回るＨＰＦから得られたマスト細胞数のピークは、ＨＰＦ当たり１５個またはそれを上回るマスト細胞である。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（食道粘膜に由来する試料に関して）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料に関して）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（食道粘膜に由来する試料に関して）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料に関して）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０～３０個のマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料に関して）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。
一部の実施形態では、試料におけるマスト細胞の数は、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与の約１４日未満、約２８日未満、約３５日未満、約４５日未満、または約９０日未満前に検出される。
一部の実施形態では、胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、胃粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも３つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有する場合（胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料に関して）、かつその個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が好酸球の増加を有さない場合、たとえば、胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合（たとえば、胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合、または胃、十二指腸、空腸、または回腸の粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。たとえば、好酸球試料は、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＨＰＦ、または試験されるすべてのＨＰＦを有してもよく、好酸球性疾患に対する臨床基準を満たすことができなくてもよい。
一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり６０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも３つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも２つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、結腸粘膜に由来する試料は、６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有するＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０、３０個、またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有する場合（結腸粘膜に由来する試料に関して）、かつその個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、好酸球の増加を有さない場合、たとえば、結腸粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合（たとえば、結腸粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有さない場合）、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。たとえば、好酸球試料は、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＨＰＦ、または試験されるすべてのＨＰＦを有してもよく、好酸球性疾患に対する臨床基準を満たすことができなくてもよい。
一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり１０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり１０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有する場合（食道粘膜に由来する試料に関して）、かつその個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、好酸球の増加を有さない場合、たとえば、食道粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり１０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。たとえば、好酸球試料は、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＨＰＦ、または試験されるすべてのＨＰＦを有してもよく、好酸球性疾患に対する臨床基準を満たすことができなくてもよい。
一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり１５個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する。一部の実施形態では、食道粘膜に由来する試料は、それぞれがＨＰＦ当たり１５個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、４つ、または５つのＨＰＦを有さない。一部の実施形態では、個体は、その個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、それぞれが強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１５個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有する場合（食道粘膜に由来する試料に関して）、かつその個体から得られた試料（たとえば、生検試料）が、好酸球の増加を有さない場合、たとえば、食道粘膜に由来する試料が、それぞれがＨＰＦ当たり１５個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのＨＰＦを有さない場合、処置のために選択される（たとえば、本開示の方法のいずれかを使用して）。たとえば、好酸球試料は、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＨＰＦ、または試験されるすべてのＨＰＦを有してもよく、好酸球性疾患に対する臨床基準を満たすことができなくてもよい。
一部の実施形態では、複数のＨＰＦ（たとえば、本明細書に記載される２つ、３つ、４つ、または５つのＨＰＦ）は、単一の生検から得ることができるか（Caldwell, J.M. et al. (2014) J. Allergy Clin. Immunol. 134:1114-1124を参照されたい）、または一部の事例では、複数の生検から得ることができる。本開示のＨＰＦは、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの試料（たとえば、個々の生検）から得ることができる。換言すると、例として、５つのＨＰＦは、合計２つの試料に由来していてもよい（たとえば、２つの試料のそれぞれから５つずつのＨＰＦを必要とするのではなく、３つのＨＰＦが１つの試料に由来し、２つが他の試料に由来する）。
一部の実施形態では、マスト細胞および／または好酸球を計数するために使用される試料は、胃または十二指腸の生検から得られる。一部の実施形態では、マスト細胞および／または好酸球を計数するために使用される試料は、食道の生検から得られる。一部の実施形態では、マスト細胞および／または好酸球を計数するために使用される試料は、生検による食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）から得られる。一部の実施形態では、複数の試料は、単一の生検から得られてもよい。たとえば、食道の生検は、食道の異なる部分を表す４～６個の試料を含有してもよい（たとえば、食道の近位から２つの試料、食道の真中から２つの試料、および食道の遠位から２つの試料）。
一部の実施形態では、マスト細胞の数は、マスト細胞の参照と比較される。一部の実施形態では、好酸球の数は、好酸球の参照と比較される。一部の実施形態では、マスト細胞または好酸球の参照は、食道炎、胃炎、大腸炎、または胃腸炎を有さない個体から得られた試料を指す。一部の実施形態では、マスト細胞または好酸球の参照は、マスト細胞性または好酸球性食道炎、胃炎、大腸炎、または胃腸炎を診断するのに有用な閾値の数値を指す（たとえば、上述のように、診断における閾値として使用される、必要に応じてＨＰＦ当たりの、マスト細胞または好酸球の数）。一部の実施形態では、マスト細胞または好酸球の参照は、複数の試料から得られたマスト細胞または好酸球の平均値を指す。本明細書において留意されるように、参照値および／またはベースライン値は、１つの個体から、２つの異なる個体からまたは個体の群（たとえば、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれよりも多くの個体の群）から、得ることができる。
一部の実施形態では、試料におけるマスト細胞の数は、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色によって検出される。一部の実施形態では、試料におけるマスト細胞の数は、限定することなく、トリプターゼ、ＣＤ１１７（ｃ－ｋｉｔ）、またはＩｇＥ受容体を含むマスト細胞マーカーに関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される。一部の実施形態では、マスト細胞の活性化は、トリプターゼに関するＩＨＣ染色およびマスト細胞の脱顆粒を定量することによって検出される（たとえば、活性化マスト細胞が検出される）。一部の実施形態では、マスト細胞活性化は、たとえば、フローサイトメトリーまたはＩＨＣによって、マスト細胞活性化（限定することなく、ＣＤ６３および／またはＣＤ１０７ａを含む）のマーカーに関する染色によって検出される（たとえば、活性化マスト細胞が検出される）。
ＩＨＣおよび組織試料を使用するマスト細胞および好酸球の検出について上述されているが、マスト細胞の負荷および／または活性化は、血清、血液、または尿におけるバイオマーカーを測定することによってもアッセイされ得る。一部の実施形態では、これらのアッセイのうちの１種または複数において異常に高いレベルに対して試験し、必要に応じて、高レベルの好酸球について試験しない個体は、本開示の方法を使用して処置され得る。一部の実施形態では、個体におけるマスト細胞の数および／または活性は、血清中トリプターゼまたはベータトリプターゼによってアッセイされる。一部の実施形態では、個体におけるマスト細胞の数および／または活性は、トリプターゼ、ヒスタミン、ロイコトリエンｅ４、プロスタグランジンＤ２、および／またはヘパリンの血中レベルによってアッセイされる。一部の実施形態では、個体におけるマスト細胞の数および／または活性は、Ｎ－メチル－ヒスタミン、プロスタグランジンＦ２アルファ、および／またはプロスタグランジンＤ２の尿中レベルによってアッセイされる。
Ｂ．処置に対する応答
一部の実施形態では、本明細書に記載されるように、個体（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を有する個体）に、有効量の、本開示の組成物またはヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載される抗体（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）を投与することによって、抗体の投与前のベースラインレベルと比較して、個体における１つまたは複数（たとえば、１つまたは複数、２つまたはそれを上回る、３つまたはそれを上回る、４つまたはそれを上回るなど）の症状が低減される。
マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を有する個体における処置に対する応答は、様々な方法によって評価され得る。たとえば、試料におけるマスト細胞の数、活性、および／または位置は、処置後に変更され得る。一部の実施形態では、処置後に個体から得られた試料におけるマスト細胞の数は、処置前に得られた試料におけるマスト細胞の数と比較して、低減される。一部の実施形態では、処置後の個体または処置後の個体から得られた試料におけるマスト細胞の活性は、処置前の個体または処置前に得られた試料におけるマスト細胞の活性と比較して、低減される。一部の実施形態では、個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数または活性のうちの一方または両方は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、本開示の組成物の投与後に低減される。一部の実施形態では、個体の食道粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数、活性、または位置のうちの１つまたは複数は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、本開示の組成物の投与後に低減される。
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体による処置に対する応答は、個体から得られた試料（たとえば、血清試料）における１つまたは複数の遺伝子またはポリペプチドの発現レベルによって評価される。たとえば、一部の実施形態では、個体に由来する血清中トリプターゼ；ベータトリプターゼ；トリプターゼ、ヒスタミン、ロイコトリエンｅ４、プロスタグランジンＤ２、および／またはヘパリンの血中レベル；および／またはＮ－メチル－ヒスタミン、プロスタグランジンＦ２アルファ、および／またはプロスタグランジンＤ２の尿中レベルは、たとえば、組成物もしくは抗体の投与前に個体から得られたベースラインレベルと比較して、または好適な参照値と比較して、低減される。
一部の実施形態では、個体における１つまたは複数の症状は、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に低減される。胃炎および胃腸炎の症状としては、限定することなく、腹痛、悪心、嘔吐、食欲喪失、腹部けいれん、食事を終える前の満腹感、腹部膨満、下痢、および液状または水様便が挙げられる。食道炎の症状としては、限定することなく、胸焼け、悪心、嚥下障害／嚥下困難、嘔吐、腹痛、咳、食片圧入、早期満腹感、食欲喪失、胸部痛、哺乳不耐または哺乳拒否、および胃食道逆流が挙げられる。一部の実施形態では、１つまたは複数の症状は、たとえば、毎日完了され得る患者報告予後（ＰＲＯ）アンケートを使用してモニタリングされる。一部の実施形態では、１つまたは複数の症状は、一定期間、たとえば、１週間、２週間、３週間、４週間／１ヶ月などにわたって得られた、毎日の患者報告予後（ＰＲＯ）アンケートからのスコアを加算または平均することによってモニタリングされる。一部の実施形態では、個体における１つまたは複数の症状は、たとえば、ＰＲＯアンケートスコアによって測定される場合に、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％低減される。たとえば、一部の実施形態では、個体における１つまたは複数の症状は、たとえば、１週間、２週間、３週間、または４週間／１ヶ月にわたる平均または中央値ＰＲＯアンケートスコアによって測定される場合に、組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、組成物の投与後に、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％低減される。
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与によって、処置に対する維持された応答がもたらされる。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗体の投与によって、処置に対する完全奏功がもたらされる（たとえば、処置の停止後、または抗体もしくは組成物の単回用量の後に）。
本明細書において互換可能に使用される「ベースライン」または「ベースライン値」という用語は、治療薬（たとえば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）の投与の前または治療薬の投与の開始時における、症状の測定値または特徴付けを指し得る。本明細書において企図されるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の症状の低減または改善を決定するために、ベースライン値を参照値と比較することができる。参照値および／またはベースライン値は、１つの個体から、２つの異なる個体からまたは個体の群（たとえば、２つ、３つ、４つ、５つもしくはそれよりも多くの個体の群）から、得ることができる。
本明細書において互換可能に使用される「参照」または「参照値」という用語は、マスト細胞性胃炎またはマスト細胞性胃腸炎を有さない個体（またはそのような個体の群における）における値または症状の測定値または特徴付けを指し得る。「参照値」は、絶対値、相対値、上限および／または下限を有する値、値の範囲、平均値（ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ）、またはベースライン値と比較した値であり得る。同様に、「ベースライン値」は、絶対値、相対値、上限および／または下限を有する値、値の範囲、平均値（ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ）、中央値、平均値（ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ）、または参照値と比較した値であり得る。参照値は、１つの個体から、２つの異なる個体から、または個体の群（たとえば、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくはそれよりも多くの個体の群）から、得ることができる。一部の実施形態では、参照値は、当該技術分野における標準値またはベンチマーク値を指す。一部の実施形態では、参照値は、１つまたは複数の個体（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、またはマスト細胞性胃腸炎を有さない）からｄｅ ｎｏｖｏで計算された値を指す。
Ｃ．投与
一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与前に、個体は、食道炎、胃炎、および／または胃腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置が失敗しているか、またはそれで適切に制御されていない。食道炎、胃炎、または胃腸炎に対する例示的な標準的な治療処置としては、限定することなく、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）処置、コルチコステロイド処置、および食事処置が挙げられる。
疾患の予防または処置について、活性薬剤の適切な投薬量は、上記に定義されるような処置しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、薬剤が予防目的で投与されるのか治療目的で投与されるのか、これまでの治療歴、個体の臨床病歴および薬剤に対する応答、ならびに担当医師の裁量に依存するであろう。薬剤は、好適には、１回、または一連の処置にわたって、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）の投与間の間隔は、約１ヶ月間であるか、またはそれよりも長い。一部の実施形態では、投与間の間隔は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間であるかまたはそれよりも長い。本明細書において使用されるとき、投与間の間隔とは、抗体の１回の投与と、抗体の次回の投与との間の期間を指す。本明細書において使用されるとき、約１ヶ月間の間隔には、４週間が含まれる。したがって、一部の実施形態では、投与間の間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間であるか、またはそれよりも長い。一部の実施形態では、処置には、抗体の複数回の投与が含まれ、ここで、投与間の間隔は、変動してもよい。たとえば、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、後続の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態では、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、第２の投与と第３の投与との間の間隔は、約２ヶ月間であり、後続の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、固定用量で投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ～約１８００ｍｇの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり、およそで０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、および１８００ｍｇのうちのいずれかの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約１５０ｍｇ～約４５０ｍｇの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり、およそで１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、および４５０ｍｇのうちのいずれかの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの投薬量で、個体に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、およそで０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、または１０．０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかの投薬量で、個体に投与される。上記に記載される投薬頻度のうちのいずれかを、使用することができる。上記に記載される任意の投薬頻度を、本明細書に記載される方法および組成物の使用において、使用することができる。本明細書に記載される抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）での処置の有効性は、１週間ごとから３ヶ月間ごとの範囲の間隔で、本明細書に記載される方法またはアッセイのうちのいずれかを使用して、評価することができる。一部の実施形態では、処置の有効性（たとえば、１つまたは複数の症状の低減または改善）は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体の投与の後、約１ヶ月間ごと、約２ヶ月間ごと、約３ヶ月間ごと、約４ヶ月間ごと、約５ヶ月間ごと、約６ヶ月間ごと、またはそれよりも長い期間ごとに、評価される。一部の実施形態では、処置の有効性（たとえば、１つまたは複数の症状の低減または改善）は、約１週間ごと、約２週間ごと、約３週間ごと、約４週間ごと、約５週間ごと、約６週間ごと、約７週間ごと、約８週間ごと、約９週間ごと、約１０週間ごと、約１１週間ごと、約１２週間ごと、約１６週間ごと、約２０週間ごと、約２４週間ごと、またはそれよりも長い期間ごとに、評価される。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、約０．１ｍｇ／ｋｇから約４．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む１回または複数の用量で、個体に投与される（たとえば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体、たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体、約０．５ｍｇ／ｋｇの抗体、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、約１．５ｍｇ／ｋｇの抗体、約２．０ｍｇ／ｋｇの抗体、約２．５ｍｇ／ｋｇの抗体、または約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む１回または複数の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約２８日の間隔で、２回またはそれを上回る用量で（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）、投与される（たとえば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、個体に、２回または複数の用量で（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）、毎月投与される（たとえば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約４週間の間隔で、２回またはそれを上回る用量で（たとえば、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の抗体を含む）、投与される（たとえば、静脈内注入によって）。一部の実施形態では、抗体は、個体に、以下のスケジュールに従って投与される（たとえば、静脈内注入によって）：１日目、２９日目、５７日目、８５日目、１１３日目、および１４１日目。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、抗体は、個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第２の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第３の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第４の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第５の用量、および約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体を含む第６の用量で、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、抗体は、個体に、以下のスケジュールに従って、静脈内注入によって投与される：１日目に約０．３ｍｇ／ｋｇの抗体、２９日目に約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、５７日目に約１．０ｍｇ／ｋｇの抗体、８５日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、１１３日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体、および１４１日目に約１．０ｍｇ／ｋｇまたは約３．０ｍｇ／ｋｇの抗体。
本明細書に記載されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、単独または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで、本明細書に記載される方法において使用することができる。たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、胃炎、食道炎、および／または胃腸炎を処置および／または予防するための１つまたは複数の（たとえば、１つまたは複数、２つまたはそれを上回る、３つまたはそれを上回る、４つまたはそれを上回るなどの）追加の治療剤と、共投与されてもよい。胃炎、食道炎、および／または胃腸炎を処置および／または予防するための追加の治療剤としては、限定することなく、ＰＰＩ、全身的コルチコステロイド、局所的コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬、マスト細胞安定剤、Ｈ－２ブロッカー、抗ＩｇＥ抗体、カルシニューリン阻害剤、免疫調節剤、および免疫抑制剤（たとえば、アザチオプリン、６－ＭＰ、ＭＭＦ、およびｍＴＯＲ阻害剤）が挙げられる。
上記に示されるような組合せ療法には、組合せ投与（２つまたはそれを上回る治療剤が、同じかまたは別個の製剤に含まれる）および別個の投与が包含され、別個の投与の場合には、本開示の抗体の投与は、１つまたは複数の追加の治療剤の投与の前、それと同時、および／またはその後に、生じ得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、約２ヶ月以内、約３ヶ月以内、約４ヶ月以内、約５ヶ月以内、または約６ヶ月以内に生じる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１週間以内、約２週間以内、または約３週間以内に生じる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与および１つまたは複数の追加の治療剤の投与は、互いに約１日以内、約２日以内、約３日以内、約４日以内、約５日以内、または約６日以内に生じる。
抗Ｓｉｇｌｅｃ８抗体および／または１つもしくは複数の追加の治療剤は、当該技術分野において公知の任意の好適な投与経路によって投与することができ、これには、経口投与、舌下投与、頬側投与、局所投与（ｔｏｐｉｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、直腸投与、吸入によるもの、経皮投与、皮下注射、経皮注射、静脈内（ＩＶ）注射、動脈内注射、筋肉内注射、心臓内注射、骨内注射、腹腔内注射、経粘膜投与、膣内投与、硝子体内投与、関節内投与、関節周囲投与、局所投与（ｌｏｃａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、皮膚上投与、またはこれらの任意の組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｄ．抗体
本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する単離された抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を有する：（１）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合すること、（２）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメインに結合すること、（３）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に、マウス抗体２Ｅ２および／もしくはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性で結合すること、（４）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に、マウス抗体２Ｅ２および／もしくはマウス抗体２Ｃ４よりも高いアビディティーで結合すること、（５）サーマルシフトアッセイにおいて、約７０℃～７２℃もしくはそれよりも高いＴｍを有すること、（６）低減されたフコシル化度を有するか、もしくはフコシル化されていないこと、（７）好酸球上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導すること、（８）マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞を枯渇させるかもしくはその数を低減させること、（９）マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（たとえば、ヒスタミンの放出、ＰＧＤ２の放出、Ｃａ２＋灌流、および／もしくはβ－ヘキソサミニダーゼの放出など）を阻害すること、（１０）ＡＤＣＣ活性を向上させるように操作されていること、（１１）マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅させること（ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／もしくはｉｎ ｖｉｖｏで）、（１２）ヒトおよび非ヒト霊長類のＳｉｇｌｅｃ－８に結合すること、（１３）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３に結合するか、またはヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１、ドメイン２、および／もしくはドメイン３を含むＳｉｇｌｅｃ－８ポリペプチド（たとえば、本明細書に記載される融合タンパク質）に結合すること、ならびに（１４）マウス抗体２Ｅ２または２Ｃ４のＥＣ５０よりも低いＥＣ５０で、活性化された好酸球を枯渇させること。米国特許第９，５４６，２１５号および／または国際公開第ＷＯ２０１５０８９１１７号に記載されている抗体のうちのいずれも、本明細書に提供される方法、組成物、およびキットにおいて使用を見出し得る。
一態様では、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞を枯渇させるか、またはその数を低減させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。
一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメイン内の線形エピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメイン内の立体構造エピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、好酸球上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞上に発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合し、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅させる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マスト細胞を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体は、活性化された好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体（たとえば、フコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）は、血中好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、本明細書における抗体（たとえば、フコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）は、末梢血に由来する好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する単離された抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。霊長類交差反応性を有する抗体の特定は、非ヒト霊長類における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の前臨床試験に有用であろう。一態様では、本発明は、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一態様では、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８は、配列番号１１８のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８は、配列番号１１９のアミノ酸配列またはその一部分を含む。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、ヒヒ（たとえば、Ｐａｐｉｏ Ａｎｕｂｉｓ）である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合する。さらなる実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、マウス抗体である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。
一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片を含む。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。一態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体のいずれかは、精製されている。
一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体もまた、提供される。Ｓｉｇｌｅｃ－８に対するマウス抗体である２Ｅ２抗体および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号、米国特許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号、および米国特許第７，５５７，１９１号に記載されている。
一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合について、本明細書に記載される任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と競合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、提供される。本明細書に記載される任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１、２Ｃ４、２Ｅ２）と同じエピトープに結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体もまた、提供される。
本開示の一態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドが、提供される。ある特定の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが、提供される。ある特定の実施形態では、そのようなベクターを含む宿主細胞が、提供される。本開示の別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が、提供される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の処置のための医薬製剤である。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎の予防のための医薬製剤である。
一態様では、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。
一態様では、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＨＶＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１５のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、配列番号１１７のアミノ酸を含む融合タンパク質に結合するが、配列番号１１６のアミノ酸を含む融合タンパク質には結合しない。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン３は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、ここで、ドメイン１は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
一態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
別の態様では、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、任意の好適なフレームワーク可変ドメイン配列を含み得るが、ただし、抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持することを条件とする。本明細書において使用されるとき、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ－ＦＲ１～ＦＲ４」と表記され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ－ＦＲ１～ＦＲ４」と表記される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号２６、３４、３８、および４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＨＣ－ＦＲ１、ＨＣ－ＦＲ２、ＨＣ－ＦＲ３、およびＨＣ－ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号４８、５１、５５、および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、およびＬＣ－ＦＲ４）を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号４８、５１、５８、および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、およびＬＣ－ＦＲ４）を含む。
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号２６～２９（ＨＣ－ＦＲ１）、配列番号３１～３６（ＨＣ－ＦＲ２）、配列番号３８～４３（ＨＣ－ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ－ＦＲ４）のＨＣ－ＦＲ１～ＨＣ－ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号２６～２９（ＨＣ－ＦＲ１）、配列番号３１～３６（ＨＣ－ＦＲ２）、配列番号３８～４３（ＨＣ－ＦＲ３）、および配列番号４５または４６（ＨＣ－ＦＲ４）のＨＣ－ＦＲ１～ＨＣ－ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｈ３は、配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ－ＦＲ１）、配列番号５１～５３（ＬＣ－ＦＲ２）、配列番号５５～５８（ＬＣ－ＦＲ３）、および配列番号６０（ＬＣ－ＦＲ４）のＬＣ－ＦＲ１～ＬＣ－ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ３は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、フレームワーク配列および超可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、ここで、フレームワーク配列は、それぞれ、配列番号４８または４９（ＬＣ－ＦＲ１）、配列番号５１～５３（ＬＣ－ＦＲ２）、配列番号５５～５８（ＬＣ－ＦＲ３）、および配列番号６０（ＬＣ－ＦＲ４）のＬＣ－ＦＲ１～ＬＣ－ＦＲ４配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ－Ｌ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ－Ｈ１（ＩＹＧＡＨ（配列番号６１））；
ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２（ＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳ（配列番号６２））；および
ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３（ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹ（配列番号６３）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＧＭＥＹ（配列番号６７）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＤＹ（配列番号６８）；ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＶ（配列番号６９）；またはＤＧＳＳＰＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号７０））。
一部の実施形態では、重鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ－Ｈ１（ＳＹＡＭＳ（配列番号８８）；ＤＹＹＭＹ（配列番号８９）；またはＳＳＷＭＮ（配列番号９０））；
ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２（ＩＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＳＤＳＶＫＧ（配列番号９１）；ＲＩＡＰＥＤＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９２）；またはＱＩＹＰＧＤＤＹＴＮＹＮＧＫＦＫＧ（配列番号９３））；およびｃ）ＨＶＲ－Ｈ３（ＨＥＴＡＱＡＡＷＦＡＹ（配列番号９４）；ＥＧＮＹＹＧＳＳＩＬＤＹ（配列番号９５）；またはＬＧＰＹＧＰＦＡＤ（配列番号９６））。
一部の実施形態では、重鎖ＦＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＣ－ＦＲ１（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴ（配列番号２６）；ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号２７）；ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳ（配列番号２８）；またはＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴ（配列番号２９））；
ｂ）ＨＣ－ＦＲ２（ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号３１）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＧ（配列番号３２）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＬＳ（配列番号３３）；ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号３４）；ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号３５）；またはＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧ（配列番号３６））；
ｃ）ＨＣ－ＦＲ３（ＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３８）；ＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号３９）；ＲＬＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４０）；ＲＦＳＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４１）；ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４２）；またはＲＬＳＩＳＫＤＮＳＫＮＱＶＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号４３））；および
ｄ）ＨＣ－ＦＲ４（ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４５）；またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６））。
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ－Ｌ１（ＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号６４））；
ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２（ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号６５））；および
ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３（ＱＱＲＳＳＹＰＦＴ（配列番号６６）；またはＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号７１））。
一部の実施形態では、軽鎖ＨＶＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＨＶＲ－Ｌ１（ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号９７）；ＲＡＳＱＤＩＴＮＹＬＮ（配列番号９８）；またはＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹ（配列番号９９））；
ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２（ＤＴＳＫＬＡＹ（配列番号１００）；ＦＴＳＲＬＨＳ（配列番号１０１）；またはＤＴＳＳＬＡＳ（配列番号１０２））；および
ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３（ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号１０３）；ＱＱＧＮＴＬＰＷＴ（配列番号１０４）；またはＱＱＷＮＳＤＰＹＴ（配列番号１０５））。
一部の実施形態では、抗体は、
（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域
を含む。
一部の実施形態では、軽鎖ＦＲ配列は、以下を含む。
ａ）ＬＣ－ＦＲ１（ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号４８）；またはＥＩＩＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号４９））；
ｂ）ＬＣ－ＦＲ２（ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号５１）；ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＷＩＹ（配列番号５２）；またはＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号５３））；
ｃ）ＬＣ－ＦＲ３（ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５５）；ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５６）；ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５７）；またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号５８））；および
ｄ）ＬＣ－ＦＲ４（ＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫ（配列番号６０））。
一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）が、本明細書において提供され、ここで、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、抗体は、
（ａ）重鎖可変ドメインであって、
（１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
（３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
（５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および
（７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変ドメイン、
ならびに／または
（ｂ）軽鎖可変ドメインであって、
（１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、
（５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変ドメイン
を含む。
一態様では、配列番号２～１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６～２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号２～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６～２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号２～１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１１～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６～２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１１～１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
一態様では、配列番号１０６～１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９～１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０７の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一態様では、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
一部の実施形態では、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、配列番号１０６～１０８から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入、または欠失を含むが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１０６～１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、配列番号１０９～１１１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入、または欠失を含むが、そのアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失（たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１０９～１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
一態様では、本開示は、（ａ）表１に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ ＨＶＲ、および／または（ｂ）表１に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一態様では、本開示は、（ａ）表２に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ ＨＶＲ、および／または（ｂ）表２に示されるものから選択される１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ ＨＶＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一態様では、本開示は、（ａ）表３に示されるものから選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのＶＨ ＦＲ、および／または（ｂ）表３に示されるものから選択される１つ、２つ、３つ、もしくは４つのＶＬ ＦＲを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を提供する。
一部の実施形態では、表４に示される抗体、たとえば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、ＨＡＫＣ抗体などの重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。
表1.抗体のHVRのアミノ酸配列
Figure 2022520105000007
Figure 2022520105000008
表2.マウス1C3、1H10、および4F11抗体に由来するHVRのアミノ酸配列
Figure 2022520105000009
 表3.抗体のFRのアミノ酸配列
Figure 2022520105000010
Figure 2022520105000011
Figure 2022520105000012
Figure 2022520105000013
 表4.抗体の可変領域のアミノ酸配列
Figure 2022520105000014
Figure 2022520105000015
Figure 2022520105000016
Figure 2022520105000017
Figure 2022520105000018
免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと表記される重鎖を有する。γおよびαのクラスは、さらに、サブクラスに分割され、たとえば、ヒトは、以下のサブクラスを示す：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと称される複数の多型性バリアントで存在し得（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において考察されている）、それらのいずれも、本明細書における実施形態の一部における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、ａ、ｆ、ｎ、ｚという文字、またはそれらの組合せで表記されるものである。本明細書における実施形態のいずれでも、抗体は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含み得る。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、休止中の好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化された好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マスト細胞を枯渇させるかまたは低減させ、マスト細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マスト細胞を枯渇させるかまたはその数を低減させる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅させる。一部の実施形態では、抗体は、組織におけるＳｉｇｌｅｃ－８を発現するマスト細胞を枯渇させるかまたは低減させる。一部の実施形態では、抗体は、生物学的流体におけるＳｉｇｌｅｃ－８を発現するマスト細胞を枯渇させるかまたは低減させる。
１．抗体の親和性
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較して、およそ同じかまたはより高い親和性および／またはより高いアビディティーで、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（たとえば、１０－８ Ｍもしくはそれを下回る、たとえば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、たとえば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも、約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、または約１０倍高い親和性で、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイによって、判定することができる。たとえば、ＫｄまたはＫｄ値は、固定化された抗原ＣＭ５チップにより、約１０の応答ユニット（ＲＵ）で２５℃においてＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することによって、測定することができる。簡単に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）を、供給業者の説明書に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させる。捕捉抗体（たとえば、抗ヒトＦｃ）を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈した後、３０μｌ／分の流速で注入し、さらに、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を固定化する。動態測定のために、二量体Ｓｉｇｌｅｃ－８の２倍連続希釈物を、２５℃において、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ中に注入する。結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な一対一のラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、結合および解離のセンサグラムを同時に当てはめることによって、計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。たとえば、Chen, Y., et al., (1999) J. Mol. Biol. 293:865-881を参照されたい。
別の実施形態では、バイオレイヤー干渉法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－８に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の親和性を判定してもよい。例示的なアッセイにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ－８－Ｆｃタグ化タンパク質を、抗ヒト捕捉センサーに固定化し、漸増濃度のマウス、キメラ、またはヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ Ｆａｂ断片とともにインキュベートして、たとえば、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４ Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などの機器を使用して親和性測定値を得る。
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合親和性は、たとえば、関連技術分野において周知の標準的な技法を使用して、Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)に記載されているスキャッチャード解析によっても判定することができる。Scatchard, G., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660 (1947)もまた、参照されたい。
２．抗体のアビディティー
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン共鳴アッセイによって、判定することができる。たとえば、ＫｄまたはＫｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ１００を使用することによって測定することができる。捕捉抗体（たとえば、ヤギ抗ヒトＦｃおよびヤギ抗マウスＦｃ）を、ＣＭ５チップに固定化する。フローセルには、抗ヒト抗体または抗マウス抗体を固定化することができる。アッセイは、ある特定の温度および流速、たとえば、２５℃において３０μｌ／分の流速で、行われる。二量体Ｓｉｇｌｅｃ－８を、様々な濃度、たとえば、１５ｎＭ～１．８８ｐＭの範囲の濃度で、アッセイ緩衝液中に希釈する。抗体が捕捉され、高性能注入を行った後、解離が行われる。フローセルは、緩衝物質、たとえば、５０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５により再生される。結果は、空の参照細胞および複数回のアッセイ緩衝液注入についてはブランクとし、１：１の全体適合パラメーターを用いて分析する。
３．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一もしくは立体的にオーバーラップするエピトープを認識することによって同じエピトープに結合するか、または１つの抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかを判定することができる。これらのアッセイは、当該技術分野において公知である。典型的に、抗原または抗原を発現する細胞を、複数ウェルのプレートに固定化し、未標識抗体が、標識されている抗体の結合を遮断する能力を、測定する。そのような競合アッセイの一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載される２Ｅ２抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、本明細書に記載される２Ｃ４抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ある細胞（たとえば、マスト細胞）の細胞表面上に存在するエピトープへの結合について、配列番号２（米国特許第８，２０７，３０５号に見出される）のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号４（米国特許第８，２０７，３０５号に見出される）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
４．熱安定性
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８は、サーマルシフトアッセイにおいて、少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃、または少なくとも約７２℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。例示的なサーマルシフトアッセイにおいて、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む試料は、Ｔｍを判定するために、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいて、１サイクル当たり１℃の増加で７１サイクルの間、蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ）とともにインキュベートされる。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較して、同様または高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較して、同じかまたは高いＴｍを有する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と比較して、同じかまたは高いＴｍを有する。
５．生物学的活性のアッセイ
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、好酸球を枯渇させ、マスト細胞を阻害する。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイ、たとえば、アネキシンＶでの染色およびＴＵＮＮＥＬアッセイは、当該技術分野において周知である。
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性によって、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球を殺滅させる。一部の実施形態では、組成物は、フコシル化されていない（すなわち、非フコシル化）抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるフコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球に対するＡＤＣＣ活性を強化させる。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、当該技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイでは、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または細胞表面上にＦｃ受容体を有する白血球、たとえば、好中球、好酸球、およびマクロファージが挙げられる。エフェクター細胞は、目的の疾患（たとえば、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎）を有する個体を含め、任意の供給源から単離することができる。標的細胞は、評価しようとする抗体が認識することができる抗原を細胞表面上に発現する任意の細胞である。そのような標的細胞の例は、細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球である。そのような標的細胞の別の例は、細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する細胞株（たとえば、Ｒａｍｏｓ細胞株）である（たとえば、Ｒａｍｏｓ ２Ｃ１０））。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識することができる。標識するための試薬の例としては、放射活性物質、たとえば、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４）が挙げられる。たとえば、Immunology, 14, 181 (1968);J. Immunol. Methods., 172, 227 (1994)；およびJ. Immunol. Methods., 184, 29 (1995)を参照されたい。
マスト細胞に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための例示的なアッセイにおいて、ヒトマスト細胞は、公開されているプロトコールに従ってヒト組織もしくは生物学的流体から単離されるか（Guhl et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 2011, 75:382-384；Kulka et al., In Current Protocols in Immunology, 2001, (John Wiley & Sons, Inc.)）、またはたとえばYokoi et al., J Allergy Clin Immunol., 2008, 121:499-505によって記載されているように、ヒト造血幹細胞から分化される。精製されたマスト細胞を、滅菌の９６ウェルＵ底プレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地中に再懸濁させ、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の存在下または不在下において、３０分間、０．０００１ｎｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌの範囲の濃度で、インキュベートする。試料を、ＡＤＣＣを誘導するために、精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新しいＰＢＬありおよびなしで、さらに４～４８時間インキュベートする。アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞の殺滅は、マスト細胞を検出するための蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）、ならびに生存細胞および死細胞または死滅していく細胞を区別するためのアネキシン－Ｖおよび７ＡＡＤを使用して、フローサイトメトリーによって分析する。アネキシン－Ｖおよび７ＡＡＤでの染色は、製造業者の説明に従って行われる。
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マスト細胞により媒介される活性を阻害する。マスト細胞トリプターゼは、マスト細胞の総数および活性化のバイオマーカーとして使用されている。たとえば、総トリプターゼおよび活性トリプターゼ、ならびにヒスタミン、Ｎ－メチルヒスタミン、および１１－ベータ－プロスタグランジンＦ２を、血液または尿において測定して、マスト細胞の低減を評価することができる。例示的なマスト細胞活性アッセイについては、たとえば、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。
Ｅ．抗体の調製
本明細書に記載される抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、抗体を生成するための当該技術分野において利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法は、以下の節においてより詳細に記載されている。
１．抗体断片
本開示は、抗体断片を包含する。抗体断片は、従来的な手段、たとえば、酵素消化によって、または組換え技法によって、生成することができる。ある特定の状況では、全抗体ではなく、抗体断片を使用することに利点がある。ある特定の抗体断片の考察については、Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134を参照されたい。
抗体断片の産生のために、様々な技法が開発されている。従来的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解による消化を介して導出されていた（たとえば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；およびBrennan et al., Science, 229:81 (1985)を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、現在では、組換え宿主細胞によって、直接的に産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片は、すべて、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現されＥ．ｃｏｌｉから分泌され得るため、これらの断片を大量に容易に産生することが可能である。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接的に回収することができ、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)）。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかであろう。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第ＷＯ９３／１６１８５号、米国特許第５，５７１，８９４号、および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域がないインタクトな結合部位を有する唯一の種であり、したがって、これらは、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用中に、非特異的な結合を低減させるのに好適であり得る。ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに、エフェクタータンパク質の融合をもたらすように、ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築することができる。Antibody Engineering, ed. Borrebaeck（上記）を参照されたい。抗体断片はまた、たとえば、例として、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されている、「線形抗体」であってもよい。そのような線形抗体は、単一特異性であっても二重特異性であってもよい。
２．ヒト化抗体
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、当該技術分野において公知である。たとえば、ヒト化抗体は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、非ヒトである供給源から導入されていてもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と称されることが多く、これらは、典型的に、「インポート」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Jones et al. (1986) Nature 321:522-525；Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536）に従って、超可変領域配列を、ヒト抗体の対応する配列と置換することによって、行われ得る。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ないものが、非ヒト種に由来する対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部の超可変領域残基および可能性としては一部のＦＲ残基が、げっ歯類抗体における類似の部位に由来する残基によって置換された、ヒト抗体である。
ヒト化抗体を作製するのに使用しようとする、軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために重要であり得る。いわゆる「最良適合」方法によると、げっ歯類（たとえば、マウス）抗体の可変ドメインの配列が、公知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対して、スクリーニングされる。げっ歯類の配列にもっとも近いヒト配列が、次いで、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして許容される（Sims et al. (1993) J. Immunol. 151:2296；Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る（Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol., 151:2623）。
さらに、一般には、抗体を、抗原に対する高い親和性の保持および他の望ましい生物学的特性を伴ってヒト化することが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によると、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および様々な概念上のヒト化産物の分析のプロセスによって、調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者には熟知されている。選択された候補免疫グロブリン配列の予測される三次元立体構造を図示および表示する、コンピュータプログラムが、利用可能である。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の予測される役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が、可能となる。このようにして、所望される抗体の特徴、たとえば、標的抗原に対する親和性の増加が達成されるように、ＦＲ残基を、レシピエントおよびインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基が、抗原結合への影響に、直接的かつもっとも実質的に、関与している。
３．ヒト抗体
本開示のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を、公知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることによって、構築することができる。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ハイブリドーマ方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について、たとえば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)によって、説明されている。
免疫付与した場合に、内因性免疫グロブリン産生の不在下においてヒト抗体の全レパートリーを産生することができる、トランスジェニック動物（たとえば、マウス）を産生することが、可能である。たとえば、キメラおよび生殖系変異体マウスにおける抗体の重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが、説明されている。そのような生殖系変異体マウスにおけるヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入により、抗原負荷した場合に、ヒト抗体の産生が生じるであろう。たとえば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993)；Jakobovits et al., Nature, 362: 255 (1993)；Bruggermann et al., Year in Immunol., 7: 33 (1993)を参照されたい。
また、遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト（たとえば、げっ歯類）抗体から、ヒト抗体を導出させることができるが、ここで、このヒト抗体は、出発物である非ヒト抗体に類似する親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング（ｅｐｉｔｏｐｅ ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」とも称されるこの方法によると、本明細書に記載されるファージディスプレイ技法によって得られた非ヒト抗体断片の重鎖または軽鎖いずれかの可変領域が、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖のｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団が作製される。抗原での選択により、非ヒト鎖／ヒト鎖のキメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離が生じ、ここで、ヒト鎖は、初代ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖の除去の際に破壊された抗原結合部位を修復する、すなわち、エピトープにより、ヒト鎖パートナーの選択が決定される。残りの非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ国際公開第ＷＯ９３／０６２１３号を参照されたい）。従来的なＣＤＲグラフトによる非ヒト抗体のヒト化とは異なり、この技法では、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も有さない、完全ヒト抗体が生じる。
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、Ｓｉｇｌｅｃ－８に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－８の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、細胞傷害性剤を、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する細胞に局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（たとえば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として、調製することができる。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野において公知である。Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、およびTraunecker et al., EMBO J., 10: 3655 (1991)を参照されたい。二重特異性抗体を生成することに関するさらなる詳細については、たとえば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。二重特異性抗体には、架橋型抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体も含まれる。たとえば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方が、アビジンに結合され得、他方がビオチンに結合され得る。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の従来的な架橋方法を使用して作製することができる。好適な架橋剤は当該技術分野で周知であり、多数の架橋技法とともに米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
５．単一ドメイン抗体
一部の実施形態では、本開示の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分を含む、単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；たとえば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照されたい）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部分からなる。
６．抗体バリアント
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾が、企図される。たとえば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切な変更を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製することができる。そのような修飾としては、たとえば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失および／または挿入および／または置換が挙げられる。最終的な構築物に到達するように、欠失、挿入、および置換の任意の組合せを行うことができるが、ただし、最終的な構築物が、所望される特徴を有することを条件とする。アミノ酸の改変は、配列が作製される時点で、対象抗体のアミノ酸配列に導入され得る。
変異生成に好ましい位置である、抗体のある特定の残基または領域の特定に有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085によって記載されている「アラニンスキャニング変異生成」と称される。本明細書では、残基または標的残基の群が特定され（たとえば、荷電残基、たとえば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）、中性または負に荷電したアミノ酸（たとえば、アラニンまたはポリアラニン）と置き換えられて、アミノ酸と抗原との相互作用への影響が生じる。置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置は、次いで、置換の部位にまたはそれに代えて、さらなるバリアントまたは他のバリアントを導入することによって、洗練される。したがって、アミノ酸配列の変動を導入するための部位は事前に決定されるが、変異自体の性質は、事前に決定されるわけではない。たとえば、所与の部位における変異の性能を分析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異生成が、標的コドンまたは領域において行われ、発現される免疫グロブリンが、所望される活性についてスクリーニングされる。
アミノ酸配列の挿入には、長さが１個の残基から、１００個もしくはそれを上回る残基を含むポリペプチドまでの範囲に及ぶ、アミノ末端および／またはカルボキシ末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、抗体のＮ末端またはＣ末端の、酵素または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合体が挙げられる。
一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｃ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において、切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖に、Ｎ末端切断を有する。たとえば、１個、２個、３個、４個、または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において、切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体の短縮形態は、組換え技法によって作製することができる。
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的に、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、炭水化物部分の、アスパラギン残基の側鎖への結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニンは、炭水化物部分の、アスパラギン側鎖への酵素結合の認識配列であり、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である。したがって、これらのトリペプチド配列のうちのいずれかがポリペプチドに存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトース、またはキシロースのうちのいずれかが、ヒドロキシアミノ酸に結合することを指し、ヒドロキシアミノ酸は、もっとも一般的にはセリンまたはスレオニンであるが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリシンも使用可能である。
抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、便宜上、（Ｎ結合型グリコシル化部位については）上述のトリペプチド配列のうちの１つまたは複数が、作製されるかまたは除去されるように、アミノ酸配列を改変させることによって、達成される。改変はまた、（Ｏ結合型グリコシル化部位については）１つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基の、元の抗体の配列への付加、欠失、または置換によって、作製することもできる。
抗体がＦｃ領域を含む場合は、そこに結合する炭水化物を、改変してもよい。たとえば、フコースが欠如している成熟炭水化物構造が抗体のＦｃ領域に結合している抗体が、米国特許出願第２００３／０１５７１０８号（Presta, L.）に記載されている。また、同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合した炭水化物において分枝Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、Ｊｅａｎ－ＭａｉｒｅｔらのＷＯ２００３／０１１８７８およびＵｍａｎａらの米国特許第６，６０２，６８４号において言及されている。オリゴ糖における少なくとも１つのガラクトース残基が抗体のＦｃ領域に結合している抗体が、ＷＯ１９９７／３００８７、Patel et al.に報告されている。変更された炭水化物がそのＦｃ領域に結合している抗体に関するＷＯ１９９８／５８９６４（Raju, S.）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Raju, S．）もまた、参照されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合性分子については、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Umana et al.）もまた、参照されたい。
ある特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域を含み、ここで、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造は、フコースが欠如している。そのようなバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。必要に応じて、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、たとえば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位における置換（残基のＥｕ番号付け）をさらに含む。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する刊行物の例としては：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願第２００３／０１５７１０８号Ａ１、Presta, L；およびＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１、Adams et al.、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、たとえば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004））、およびβ１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（acetylglycosminyltransferase）ＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）およびゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
野生型ＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて、低減されたフコースを有する抗体が、本明細書において企図される。たとえば、抗体は、天然のＣＨＯ細胞（たとえば、天然のグリコシル化パターンをもたらすＣＨＯ細胞、たとえば、天然のＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞）によって産生された場合に有するであろうものよりも低い量のフコースを有する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、そのＮ結合型グリカンのうちの約５０％よりも少ない、４０％よりも少ない、３０％よりも少ない、２０％よりも少ない、１０％よりも少ない、５％よりも少ない、または１％よりも少ないものがフコースを含む、抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、Ｎ結合型グリカンのうちのいずれも、フコースを含まない抗体、すなわち、抗体は、完全にフコースを含まないか、またはフコースを有さないか、またはフコシル化されていないか、または非フコシル化である。フコースの量は、たとえば、国際公開第ＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合しているすべての糖構造（たとえば、複合体構造、ハイブリッド構造、または高マンノース構造）の合計と比べて、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって判定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）、しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるわずかな配列の変動に起因して、２９７位からアミノ酸±約３個分上流または下流、すなわち、２９４位から３００位の間に、位置してもよい。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。
一実施形態では、抗体は、その血清半減期を改善するように改変される。抗体の血清半減期を増加させるために、たとえば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に組み込むことができる。本明細書において使用されるとき、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期を増加させることに関与する、ＩｇＧ分子（たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（米国出願公開第２００３／０１９０３１１号、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７号）。
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基が、異なる残基によって置き換えられている。置換による変異生成の目的とされる部位としては、超可変領域が挙げられるが、ＦＲの改変もまた、企図される。保存的置換は、表５において、「好ましい置換」の項目で示されている。そのような置換が、生物学的活性の望ましい変化をもたらす場合、表５において「例示的な置換」と表記されているか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに説明されている、さらなる実質的な変化を導入し、その産物をスクリーニングしてもよい。
表5.
Figure 2022520105000019
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）置換の範囲における、たとえば、シートもしくはヘリックス構成としてのポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはｃ）側鎖のかさ高さを維持することに対する作用が有意に異なる置換を選択することによって達成される。アミノ酸は、側鎖の特性における類似性によって分類することができる（A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)）。
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて群に分割することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちのいずれかのメンバーを、別のクラスと交換することを必要とするであろう。そのように置換された残基はまた、保存的置換部位、または残りの（保存されていない）部位に導入され得る。
１つの種類の置換バリアントは、親抗体（たとえば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる開発に選択される、結果として得られるバリアントは、それらが生成された親抗体と比べて、修飾された（たとえば、改善された）生物学的特性を有するであろう。そのような置換バリアントを生成するための便宜的な手段には、ファージディスプレイを使用した親和性成熟が含まれる。簡単に述べると、いくつかの超可変領域部位（たとえば、６～７個の部位）を、それぞれの部位においてすべての可能性のあるアミノ酸置換を生成するように変異させる。そのようにして生成した抗体は、それぞれの粒子内にパッケージングされたファージコーティングタンパク質（たとえば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部との融合体として、線維状ファージ粒子により提示される。ファージにより提示されたバリアントは、次いで、それらの生物学的活性（たとえば、結合親和性）について、スクリーニングされる。修飾の候補となる超可変領域部位を特定するために、スキャニング変異生成（たとえば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を特定することができる。代替として、または追加として、抗体と抗原との間の接触点を特定するために、抗原－抗体の複合体の結晶構造を分析することが、有益な場合がある。そのような接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳述されているものを含め、当該技術分野において公知の技法による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されると、バリアントのパネルを、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野において公知の技法を使用してスクリーニングに供し、１つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体を、さらなる開発に選択することができる。
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野において公知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、天然の源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）からの単離、またはオリゴヌクレオチドに媒介される（もしくは部位指向的）変異生成、ＰＣＲ変異生成、およびカセット変異生成による初期調製バリアントもしくは非バリアントバージョンの抗体の調製が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入し、それによって、Ｆｃ領域バリアントを生成することが、望ましい場合がある。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインのものを含む、１つまたは複数のアミノ酸位置において、アミノ酸修飾（たとえば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（たとえば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ここで、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている。
この説明および当該技術分野の教示によると、一部の実施形態では、本開示の抗体が、野生型対応物抗体と比較して、たとえば、Ｆｃ領域において、１つまたは複数の改変を含み得ることが、企図される。これらの抗体は、いずれにせよ、その野生型対応物と比較して、治療上の有用性に必要とされる同じ特徴を実質的に保持するであろう。たとえば、例として国際公開第ＷＯ９９／５１６４２号に記載されているように、改変された（すなわち、改善されたかまたは減少したかのいずれかの）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろうある特定の改変が、Ｆｃ領域に行われ得ることが、考えられる。また、Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988)、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Presta）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Lowman）は、ＦｃＲへの結合が改善または減少した抗体バリアントについて記載している。これらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)もまた、参照されたい。半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)およびKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Hinton et al.）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加もしくは減少したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１号Ｂ１、国際公開第ＷＯ９９／５１６４２号に記載されている。それらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)もまた、参照されたい。
７．ベクター、宿主細胞、および組換え方法
本開示の抗体の組換え産生のために、それをコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、複製ベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来的な手順を使用して（たとえば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離し、シーケンシングされる。多数のベクターが、利用可能である。ベクターの選択は、使用しようとする宿主細胞に、部分的に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）のいずれかを起源とする。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常領域を含め、任意のアイソタイプの定常領域を、この目的で使用することができること、ならびにそのような定常領域が、任意のヒトまたは動物種から得ることができることが、理解される。
原核生物宿主細胞を使用した抗体の生成
ａ）ベクターの構築
本開示の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技法を使用して、得ることができる。所望されるポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離し、シーケンシングすることができる。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技法を使用して、合成することができる。得られた後、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製し、発現することができる、組換えベクターに挿入される。当該技術分野において利用可能であり、公知である、多数のベクターを、本開示の目的で使用することができる。適切なベクターの選択は、主として、ベクターに挿入しようとする核酸のサイズ、およびベクターで形質転換しようとする具体的な宿主細胞に依存するであろう。それぞれのベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、またはその両方）およびそれが存在する具体的な宿主細胞との適合性に応じて、様々な成分を含む。ベクターの成分としては、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサート、および転写終結配列が挙げられるが、これらに限定されない。
一般に、宿主細胞と適合性のある種に由来するレプリコンおよび制御配列を含むプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、ならびに形質転換される細胞における表現型選択を提供することができるマーキング配列を有する。たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的に、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して、形質転換される。ｐＢＲ３２２は、遺伝子コーディングアンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性を含み、したがって、形質転換された細胞を特定する容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その誘導体、または他の細菌性プラスミドもしくはバクテリオファージはまた、細菌生物が内因性タンパク質の発現のために使用することができるプロモーターを含み得るか、またはそれを含むように修飾され得る。特定の抗体の発現に使用されるｐＢＲ３２２誘導体の例は、Ｃａｒｔｅｒらの米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
加えて、宿主微生物と適合性のあるレプリコンおよび制御配列を含むファージベクターを、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用することができる。たとえば、λＧＥＭ．ＴＭ．－１１などのバクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターの作製に有用であり得る。
本開示の発現ベクターは、ポリペプチド成分のそれぞれをコードする２つまたはそれを上回るプロモーター－シストロン対を含み得る。プロモーターは、シストロンに対して上流（５’）に位置し、その発現を調節する、非翻訳制御配列である。原核生物プロモーターは、典型的に、誘導的および構成的の２つのクラスに入る。誘導的プロモーターは、その制御下において、培養条件における変化、たとえば、栄養素の存在もしくは不在または温度の変化に応答して、増加したレベルのシストロンの転写を開始させる、プロモーターである。
可能性のある様々な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが、周知である。選択されたプロモーターは、制限酵素消化によって源ＤＮＡからプロモーターを取り出し、単離したプロモーター配列を本開示のベクターに挿入することによって、軽鎖または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに、作動可能に連結することができる。天然のプロモーター配列および多数の異種プロモーターの両方を、標的遺伝子の増幅および／または発現を誘導するために使用することができる。一部の実施形態では、異種プロモーターは、一般に、天然の標的ポリペプチドプロモーターと比較して、標的遺伝子のより多くの転写およびそのより高収率の発現が可能であるため、異種プロモーターが利用される。
原核生物宿主で使用するのに好適なプロモーターとしては、ＰｈｏＡプロモーター、β－ガラクタマーゼ、およびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター、たとえば、ｔａｃまたはｔｒｃプロモーターが挙げられる。しかしながら、細菌において機能する他のプロモーター（たとえば、他の公知の細菌プロモーターまたはファージプロモーター）も、同様に好適である。それらのヌクレオチド配列は、公開されており、それによって、当業者は、任意の必要とされる制限部位を提供するリンカーまたはアダプターを使用して、それらを、標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンに作動可能にライゲーションすることができる（Siebenlist et al. (1980) Cell 20: 269）。
本開示の一態様では、組換えベクター内のそれぞれのシストロンは、膜を越えて発現されるポリペプチドの転位を誘導する、分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはシグナル配列は、ベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部であり得る。本開示の目的で選択されるシグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものでなければならない。異種ポリペプチドにとって天然であるシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、たとえば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡ、およびＭＢＰからなる群から選択される、原核生物シグナル配列によって置換される。本開示の一実施形態では、発現系の両方のシストロンにおいて使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
別の態様では、本開示による免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において生じ得、したがって、それぞれのシストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。これに関して、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、細胞質内で、発現され、フォールディングされ、アセンブルされて、機能性免疫グロブリンが形成される。ある特定の宿主株（たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｘＢ株）は、ジスルフィド結合の形成に好ましい細胞質条件を提供し、それによって、発現されるタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびアセンブリを可能にする。Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995)。
本開示の抗体はまた、分泌され、適切にアセンブルされる本開示の抗体の収率を最大化させるために、発現されるポリペプチド成分の定量的な比を調節することができる発現系を使用することによって、産生することができる。そのような調節は、少なくとも部分的に、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時に調節することによって、達成される。
翻訳強度を調節するための１つの技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に開示されている。その技法は、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所与のＴＩＲについて、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントを、ある範囲の翻訳強度で作製し、それによって、特定の鎖の所望される発現レベルにこの因子を調節するための便宜的な手段を提供することができる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を改変させ得るコドンの変化をもたらす従来的な変異生成技法によって、生成することができる。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列における変化は、サイレントである。ＴＩＲにおける改変としては、たとえば、シグナル配列における改変とともに、シャインダルガーノ配列の数または間隔における改変を挙げることができる。変異体シグナル配列を生成するための１つの方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コーディング配列の開始時における「コドンバンク」の生成である。これは、それぞれのコドンの第３のヌクレオチド位置を変化させることによって達成することができ、追加として、一部のアミノ酸、たとえば、ロイシン、セリン、およびアルギニンは、第１および第２の位置が複数あり、そのため、バンク作製時に複雑さが加わり得る。この変異生成の方法は、Yansura et al. (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158に詳細に記載されている。
一実施形態では、ベクターのセットは、その中に含まれるそれぞれのシストロンに対してある範囲のＴＩＲ強度で生成される。この限定されたセットは、それぞれの鎖の発現レベルの比較、ならびに様々なＴＩＲ強度の組合せにおける所望される抗体産物の生成をもたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されている、レポーター遺伝子の発現レベルを定量することによって、判定することができる。翻訳強度の比較に基づいて、所望される個々のＴＩＲを選択して、それらを本開示の発現ベクター構築物において組み合わせる。
本開示の抗体の発現に好適な原核生物宿主細胞としては、古細菌および真正細菌、たとえば、グラム陰性またはグラム陽性生物が挙げられる。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（たとえば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（たとえば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本開示の宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｗ３１１０株（Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219;ATCC Deposit No. 27,325）およびその誘導体が挙げられ、遺伝子型Ｗ３１１０ ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ ｌａｃＬ８ ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ－ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎＲを有する３３Ｄ３株を含む（米国特許第５，６３９，６３５号）。他の株およびその誘導体、たとえば、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ λ １７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ ３１，６０８）もまた、好適である。これらの例は、制限するものではなく例示である。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちのいずれかの誘導体を構築するための方法は、当該技術分野において公知であり、たとえば、Bass et al., Proteins, 8:309-314 (1990)に記載されている。一般に、細菌の細胞におけるレプリコンの複製能を考慮して、適切な細菌を選択することが必要である。たとえば、周知のプラスミド、たとえば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７、またはｐＫＮ４１０を使用してレプリコンを供給する場合、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を、宿主として好適に使用することができる。典型的に、宿主細胞は、分泌するタンパク質分解酵素の量は最小限であるべきであり、追加のプロテアーゼ阻害剤が、細胞培養に組み込まれ得ることが望ましい。
ｂ）抗体の産生
宿主細胞に、上記の発現ベクターを形質転換し、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望される配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜修飾した従来的な栄養培地において培養する。
形質転換とは、ＤＮＡが複製可能となるように、染色体外エレメントとしてまたは染色体組込み体によって、ＤＮＡを、原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技法を使用して行われる。実質的な細胞壁関門を含む細菌細胞については、一般に、塩化カルシウムを用いたカルシウム処置が使用される。形質転換のための別の方法では、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、エレクトロポレーションである。
本開示のポリペプチドを産生するのに使用される原核生物細胞は、当該技術分野において公知の培地で増殖され、選択された宿主細胞の培養に好適なものである。好適な培地の例としては、ルリア培地（ＬＢ）に必要な栄養補充物質を加えたものが挙げられる。一部の実施形態では、培地はまた、発現ベクターを含む原核生物細胞の増殖を選択的に可能にするように、発現ベクターの構築に基づいて選択される、選択剤を含有する。たとえば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の増殖のために、アンピシリンが、培地に添加される。
単独で、または別の補充物質もしくは培地との混合物、たとえば、複合窒素源として導入される、炭素、窒素、および無機リン酸源以外の任意の必要な補充物質もまた、適切な濃度で含まれ得る。必要に応じて、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリスリトール、およびジチオスレイトールからなる群から選択される、１つまたは複数の還元剤を含有し得る。
原核生物宿主細胞は、好適な温度で培養される。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉの増殖について、増殖温度は、約２０℃～約３９℃、約２５℃～約３７℃、または約３０℃の範囲である。培地のｐＨは、主として宿主生物に応じて、約５～約９の範囲の任意のｐＨであり得る。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉについては、ｐＨは、約６．８～約７．４、または約７．０である。
誘導的プロモーターが、本開示の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質の発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下において誘導される。本開示の一態様では、ポリペプチドの転写を制御するために、ＰｈｏＡプロモーターが使用される。したがって、形質転換された宿主細胞は、誘導のために、リン酸制限培地において培養される。ある特定の実施形態では、リン酸制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（たとえば、Simmons et al., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147を参照されたい）。当該技術分野において公知のように、利用されるベクター構築物に応じて、様々な他の誘導物質を使用することができる。
一実施形態では、本開示の発現されるポリペプチドは、宿主細胞の周縁質内に分泌され、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的に、一般に、浸透圧ショック、超音波処理、または溶解などの手段によって、微生物を破壊することを伴う。細胞が破壊されると、細胞残屑または細胞全体を、遠心分離または濾過によって除去することができる。タンパク質は、たとえば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。あるいは、タンパク質を、培養培地へと移し、そこで単離することができる。細胞は、培養物から除去され得、培養上清は、産生されたタンパク質のさらなる精製のために、濾過および濃縮され得る。発現されるポリペプチドは、さらに、一般に知られている方法、たとえば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウエスタンブロットアッセイを使用して、単離および特定することができる。
本開示の一態様では、抗体の産生は、発酵プロセスによって大量に行われる。様々な大規模な流加発酵手順が、組換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模な発酵は、少なくとも１０００リットルの容積を有し、ある特定の実施形態では、約１，０００～１００，０００リットルの容積を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特に、グルコースを分配するために、撹拌インペラを使用する。小規模な発酵とは、一般に、容積がおよそ１００リットルを上回らず、約１リットル～約１００リットルの範囲であり得る発酵槽における発酵を指す。
発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は、典型的に、細胞が、好適な条件下において、所望される密度まで、たとえば、ＯＤ５５０の約１８０～２２０に、増殖した後に開始され、この段階では、細胞は、静止期初期にある。当該技術分野において公知であり、上述されているように、利用されるベクター構築物に応じて、様々な誘導物質を使用することができる。細胞は、誘導前に、より短い期間増殖させてもよい。細胞は、通常、約１２～５０時間誘導されるが、より長いかまたは短い誘導時間を使用してもよい。
本開示のポリペプチドの産生収率および品質を改善するために、様々な発酵条件を、修正することができる。たとえば、分泌される抗体ポリペプチドの適正なアセンブリおよびフォールディングを改善するために、シャペロンタンパク質、たとえば、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／もしくはＤｓｂＧ）、またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルシス、トランスイソメラーゼ）を過剰発現する追加のベクターを使用して、宿主原核生物細胞を共形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生される異種タンパク質の適正なフォールディングおよび可溶性を促進することが実証されている。Chen et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:19601-19605；Georgiou et al.、米国特許第６，０８３，７１５号；Georgiou et al.、米国特許第６，０２７，８８８号；Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105；Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113；Arie et al. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210。
発現される異種タンパク質（特に、タンパク質分解に感受性のもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク質分解酵素が欠損しているある特定の宿主株を、本開示に使用することができる。たとえば、宿主細胞株を、公知の細菌性プロテアーゼ、たとえば、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩ、およびこれらの組合せをコードする遺伝子における遺伝子変異を達成するように修飾することができる。一部のＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損株が、利用可能であり、たとえば、Joly et al. (1998)、上記；Georgiou et al.、米国特許第５，２６４，３６５号；Georgiou et al.、米国特許第５，５０８，１９２号；Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)に記載されている。
一実施形態では、タンパク質分解酵素が欠損しており、１つまたは複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドが形質転換されている、Ｅ．ｃｏｌｉ株が、本開示の発現系において宿主細胞として使用される。
ｃ）抗体の精製
一実施形態では、本明細書において産生される抗体タンパク質は、さらなるアッセイおよび使用のために、実質的に均質である調製物が得られるように、さらに精製される。当該技術分野において公知の標準的なタンパク質精製方法を、利用することができる。以下の手順は、好適な精製手順の例である：免疫親和性もしくはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカもしくはカチオン交換樹脂、たとえば、ＤＥＡＥでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈降、およびたとえば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用したゲル濾過。
一態様では、固相に固定化されたプロテインＡが、本開示の抗体産物の免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓに由来する４１ｋＤの細胞壁タンパク質である。Lindmark et al (1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラムであり得るか、または制御された細孔ガラスカラムもしくはケイ酸カラムであり得る。一部の適用では、カラムは、可能性として混入物質の非特異的な接着を予防するために、試薬、たとえば、グリセロールでコーティングされる。
精製の第１のステップとして、上述の細胞培養物に由来する調製物を、プロテインＡを固定化した固相に適用して、目的の抗体を、プロテインＡに特異的に結合させる。固相を、次いで、洗浄して、固相に非特異的に結合した混入物質を除去する。最後に、目的の抗体を、溶出によって、固相から回収する。
真核生物宿主細胞を使用した抗体の生成
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、一般に、以下の非限定的な成分のうちの１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
ａ）シグナル配列成分
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターはまた、成熟タンパク質または目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドを含み得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞における発現の場合、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、たとえば、単純ヘルペスｇＤシグナルが、利用可能である。そのような前駆体領域のＤＮＡを、リーディングフレームにおいて、抗体をコードするＤＮＡにライゲーションする。
ｂ）複製起点
一般に、複製起点の成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ない。たとえば、ＳＶ４０起点は、典型的に、初期プロモーターを含むという理由でのみ使用され得る。
ｃ）選択遺伝子成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能なマーカーとも称される、選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、たとえば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合には、栄養要求性欠損を補うタンパク質、または（ｃ）複合培地から利用可能ではない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
選択スキームの１つの例は、宿主細胞の増殖を停止させる薬物を利用する。異種遺伝子の形質転換が成功した細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、そのため、選択レジメンに生き残る。そのような優勢選択の例は、薬物であるネオマイシン、ミコフェノール酸、およびハイグロマイシンを使用する。
哺乳動物細胞の好適な選択可能なマーカーの別の例は、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の特定を可能にするもの、たとえば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－ＩおよびＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
たとえば、一部の実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子が形質転換された細胞は、まず、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地において、すべての形質転換体を培養することによって、特定される。一部の実施形態では、野生型ＤＨＦＲが利用される場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である（たとえば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）。
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、および別の選択可能なマーカー、たとえば、アミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列が形質転換または共形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、選択可能なマーカーの選択剤、たとえば、アミノグリコシド抗生物質、たとえば、カナマイシン、ネオマイシン、またはＧ４１８を含有する培地における細胞増殖によって、選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞としては、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶ、または誘導体を挙げることができ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）が欠損した細胞株が含まれる。哺乳動物細胞の選択可能なマーカーとしてＧＳを使用するための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
ｄ）プロモーター成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、目的のポリペプチド（たとえば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結される、プロモーターを含む。プロモーター配列は、真核生物については公知である。たとえば、事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始部から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、ＡＡＴＡＡＡ配列があり、これは、コーディング配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のシグナルであり得る。ある特定の実施形態では、これらの配列のうちのいずれかまたはすべては、好適なことに、真核生物発現ベクターに挿入することができる。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、たとえば、ウイルス、たとえば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（たとえば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、たとえば、アクチンプロモーターもしくは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られたプロモーターによって、制御されるが、ただし、このようなプロモーターが、宿主細胞系と適合性があることを条件とする。
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、便宜的に、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含む、ＳＶ４０制限断片として得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、便宜的に、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して、哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修正形は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982)もまた参照されたく、これは、単純ヘルペスウイルスに由来するチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ－インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載している。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長鎖末端反復配列を、プロモーターとして使用してもよい。
ｅ）エンハンサーエレメント成分
より高次の真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加することが多い。現在では、哺乳動物遺伝子に由来する多くのエンハンサー配列が、公知である（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、およびインスリン）。しかしながら、典型的には、真核生物細胞ウイルスに由来するエンハンサーを使用することになる。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載しているYaniv, Nature 297:17-18 (1982)もまた、参照されたい。エンハンサーは、スプライシングされて抗体ポリペプチドをコードする配列の５’または３’の位置でベクターに入り得るが、一般には、プロモーターの５’部位に位置する。
ｆ）転写終結成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含み得る。そのような配列は、通常、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’、場合によって３’の非翻訳領域から得ることができる。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第ＷＯ９４／１１０２６号およびそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターにおいてＤＮＡをクローニングまたは発現させるのに好適な宿主細胞としては、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載される高次真核生物細胞が挙げられる。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手技となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０を形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎臓株（２９３または懸濁培養における増殖のためにサブクローニングした２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞、または誘導体、ならびにヒト肝臓癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
宿主細胞に、抗体産生のための上記の発現ベクターまたはクローニングベクターを形質転換し、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望される配列をコードする遺伝子を増幅するために適宜修飾した従来的な栄養培地において培養する。
ｈ）宿主細胞の培養
本開示の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地において培養され得る。市販の培地、たとえば、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）が、宿主細胞を培養するのに好適である。加えて、Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)、Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、または同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国特許再発行出願第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用してもよい。これらの培地のいずれかには、必要に応じてホルモンおよび／または他の増殖因子（たとえば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子）、塩（たとえば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝物質（たとえば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（たとえば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（たとえば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬）、少量のエレメント（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源が、補充され得る。任意の他の補充物質もまた、当業者に公知であろう適切な濃度で含まれ得る。培養条件、たとえば、温度、ｐＨなどは、発現に選択される宿主細胞でこれまでに使用されているものであり、当業者には明らかであろう。
ｉ）抗体の精製
組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得るか、または培地内に直接的に分泌され得る。抗体が、細胞内で産生される場合、第１のステップとして、宿主細胞または溶解した断片のいずれかである微粒子残屑が、たとえば、遠心分離または限外濾過によって、除去され得る。抗体が培地内に分泌される場合、そのような発現系からの上清を、まず、市販のタンパク質濃縮フィルター、たとえば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを使用して、濃縮してもよい。タンパク質分解を阻害するために、プロテアーゼ阻害剤、たとえば、ＰＭＳＦが、前述のステップのうちのいずれかに含まれてもよく、偶発的な混入物質の増殖を予防するために、抗生物質が含まれてもよい。
細胞から調製された抗体組成物は、たとえば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して、精製され得るが、親和性クロマトグラフィーが、便宜的な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの好適性は、抗体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる（Lindmark et al., J. Immunol. Methods 62:1-13 (1983））。すべてのマウスアイソタイプおよびヒトγ３については、プロテインＧが推奨される（Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)）。親和性リガンドが結合するマトリックスは、アガロースであり得るが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、たとえば、制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースで達成できるものよりも高速の流速および短いプロセシング時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技法、たとえば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂またはカチオン交換樹脂（たとえば、ポリアスパラギン酸カラム）でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈降もまた、回収しようとする抗体に応じて利用可能である。
任意の予備的な精製ステップに続いて、目的の抗体および混入物質を含む混合物を、たとえば、約２．５～４．５のｐＨで溶出緩衝液を使用して、低い塩濃度（たとえば、約０～０．２５Ｍの塩）で行われる低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、さらなる精製に供してもよい。
一般に、上述の方法と一貫性がある、および／または当業者により目的とされる特定の抗体にとって適切であると考えられる、研究、試験、および臨床使用に使用するための抗体を調製するための様々な方法は、当該技術分野において十分に確立されている。
フコシル化されていない抗体の産生
低減されたフコシル化度を有する抗体を調製するための方法が、本明細書において提供される。たとえば、本明細書において企図される方法としては、タンパク質フコシル化が欠損している細胞株（たとえば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジμ－マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、ならびに抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコース類似体の添加が挙げられるが、これらに限定されない。Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Presta, Lの米国特許出願第２００３／０１５７１０８号Ａ１；ＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含量を低減させるためのさらなる技法には、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術が含まれる。抗体のフコース含量を低減させるためのさらなる技法には、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術が含まれる。抗体のフコース含量を低減させるためのさらなる技法にはまた、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１つまたは複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含まれる。グリコシダーゼ阻害剤としては、α－グルコシダーゼＩ、α－グルコシダーゼＩＩ、およびα－マンノシダーゼＩが挙げられる。一部の実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α－マンノシダーゼＩの阻害剤である（たとえば、キフネシン）。
本明細書において使用されるとき、「コアフコシル化」とは、Ｎ結合型グリカンの還元末端における、Ｎ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法によって産生される抗体およびその組成物もまた、提供される。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が、低減される。本明細書において使用されるとき、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号付けによる）に結合されるが、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖は、他のアスパラギン残基にも結合し得る。「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、マンノースのみがコア構造の非還元末端に組み込まれる高マンノース型の糖鎖は除外されるが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１つまたは複数の分枝を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、必要に応じて、シアル酸、分枝Ｎ－アセチルグルコサミンなどを有する、複合型、または２）コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有する、ハイブリッド型は含まれる。
一部の実施形態では、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側が、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）を有さないか、またはその１つもしく複数の分枝を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、必要に応じて、シアル酸、分枝Ｎ－アセチルグルコサミンなどといった構造をさらに有する、複合型を含む。
本方法によると、典型的に、ごくわずかな量のフコースが、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれる。たとえば、様々な実施形態では、組成物中、抗体のうちの約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、組成物中、抗体の実質的にすべてが（すなわち、約０．５％未満しか）、フコースによるコアフコシル化を有さない。一部の実施形態では、組成物中、抗体のうちの約４０％を上回る、約５０％を上回る、約６０％を上回る、約７０％を上回る、約８０％を上回る、約９０％を上回る、約９１％を上回る、約９２％を上回る、約９３％を上回る、約９４％を上回る、約９５％を上回る、約９６％を上回る、約９７％を上回る、約９８％を上回る、また約９９％を上回るものが、フコシル化されていない。
一部の実施形態では、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にすべてが（すなわち、約０．５％未満しか）、フコース残基を含まない抗体が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体の重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない抗体が、本明細書において提供される。
上述のように、様々な哺乳動物宿主発現ベクター系を、抗体を発現させるために使用することができる。一部の実施形態では、培養培地には、フコースが補充されていない。一部の実施形態では、有効量のフコース類似体が、培養培地に添加されている。この文脈において、「有効量」とは、抗体の複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖へのフコースの組込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％減少させるのに十分な、類似体の量を指す。一部の実施形態では、本方法によって産生される抗体は、フコース類似体の不在下において培養された宿主細胞から産生された抗体と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％の、コアフコシル化されていないタンパク質を含む（たとえば、コアフコシル化が欠如している）。
糖鎖の還元末端においてフコースがＮ－アセチルグルコサミンに結合していない糖鎖の、糖鎖の還元末端においてフコースがＮ－アセチルグルコサミンに結合している糖鎖に対する割合（たとえば、比）は、たとえば、実施例に記載のように判定することができる。他の方法としては、ヒドラジン分解または酵素消化（たとえば、Biochemical Experimentation Methods 23: Method for Studying Glycoprotein Sugar Chain (Japan Scientific Societies Press), edited by Reiko Takahashi (1989)を参照されたい）、放出された糖鎖を蛍光標識または放射性同位体標識した後に、クロマトグラフィーによって標識された糖鎖を分離することが挙げられる。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ方法により鎖を分析することによって、判定することができる（たとえば、J. Liq Chromatogr. 6:1557 (1983)を参照されたい）。（概して、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照されたい）。
ＩＩＩ．組成物
一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）のうちのいずれかを含む、組成物（たとえば、医薬組成物）もまた、本明細書において提供される。一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの約５０％未満が、フコース残基を含む、組成物が、本明細書において提供される。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、ここで、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、または約１５％未満が、フコース残基を含む。一部の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない、組成物が、本明細書において提供される。
治療用製剤は、所望される程度の純度を有する活性成分を、必要に応じて薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、保管用に調製される（Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams & Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, Pa. 2000）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これらには、緩衝物質、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤；保存剤、等張剤、安定剤、金属錯体（たとえば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；キレート剤、たとえば、ＥＤＴＡ、ならびに／または非イオン性表面活性物質が含まれる。
緩衝物質は、特に、安定性がｐＨ依存性である場合に、治療有効性を最適化する範囲にｐＨを制御するために使用することができる。緩衝物質は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本開示での使用に好適な緩衝剤としては、有機および無機両方の酸、ならびにそれらの塩が挙げられる。たとえば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩がある。加えて、緩衝物質は、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、たとえば、Ｔｒｉｓから構成されてもよい。
保存剤は、微生物の増殖を防止するために添加され得、典型的には、約０．２％～１．０％（重量／体積）の範囲で存在する。本開示での使用に好適な保存剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物（たとえば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、たとえば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールが挙げられる。
「安定剤」として知られていることも多い、等張剤は、組成物中の液体の等張性を調節または維持するために存在し得る。大型の荷電した生体分子、たとえば、タンパク質および抗体とともに使用される場合、それらは、荷電したアミノ酸側鎖群と相互作用し、それによって、分子間および分子内での相互作用の可能性を減少させることができるため、「安定剤」と称されることが多い。等張剤は、他の成分の相対的な量を考慮して、約０．１重量％～約２５重量％、または約１～約５重量％の任意の量で存在し得る。一部の実施形態では、等張剤としては、多価糖アルコール、三価またはそれを上回る価数の糖アルコール、たとえば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールが挙げられる。
追加の賦形剤としては、以下のうちの１つまたは複数の機能を果たし得る薬剤が挙げられる：（１）増量剤、（２）可溶性増強剤、（３）安定剤、および（４）変性または容器の壁部への付着を防止する薬剤。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、たとえば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど；有機糖または糖アルコール、たとえば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクシトール、グリセロール、シクリトール（たとえば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、たとえば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、たとえば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン；単糖類（たとえば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類（たとえば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、たとえば、ラフィノース；ならびに多糖類、たとえば、デキストリンまたはデキストランが挙げられる。
非イオン性表面活性物質または界面活性剤（「湿潤剤」としても知られている）は、治療剤を可溶化させるのを補助するため、ならびに治療用タンパク質を撹拌に誘導される凝集から保護するために、存在し得、これらは、活性な治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面応力に曝露することを可能にする。非イオン性表面活性物質は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。一部の実施形態では、非イオン性表面活性物質は、約０．００１％～約０．１％重量／体積または約０．０１％～約０．１％重量／体積または約０．０１％～約０．０２５％重量／体積の範囲で存在する。
好適な非イオン性表面活性物質としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油１０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
製剤を、ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するためには、製剤は、滅菌でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、滅菌にすることができる。本明細書における治療用組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、たとえば、皮下注射針による穿刺可能なストッパーを有する静注溶液バッグまたはバイアルに、入れられる。
投与の経路は、公知かつ許容されている方法に従い、たとえば、単回もしくは複数回のボーラス、または好適な様式での長期間にわたる注入、たとえば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、もしくは関節内の経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または持続放出もしくは徐放手段によるものがある。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、３ヶ月またはそれを上回る間、１ヶ月に１回、静脈内注入によって投与される。一部の実施形態では、本開示の組成物または抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、１サイクルに１回（たとえば、１日目に）、１、２、３、４、５、または６サイクルの間、静脈内注入によって投与され、ここで、各サイクルは、１ヶ月、４週間、または２８日である。
本明細書における製剤はまた、処置されている特定の適応症に必要に応じて、１つを上回る活性化合物、好ましくは、互いに有害に作用しない相補的な活性を有するものを含有してもよい。そのような活性化合物は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて存在することが好ましい。
ＩＶ．製品またはキット
別の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製品またはキットが、提供される。製品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための説明書をさらに含んでもよい。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量のヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を投与するステップを含む、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置および／または予防するための方法において、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を使用するための説明書を含む。ある特定の実施形態では、製品は、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置および／または予防するために、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、それを必要とする個体におけるその医薬の投与のための説明を含む添付文書とを含む。一部の実施形態では、添付文書は、処置が、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を有する個体における１つまたは複数の症状を、医薬の投与前のベースラインレベルと比較して、低減するのに有効であることをさらに示す。一部の実施形態では、個体は、抗体を含む医薬の投与前に、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、マスト細胞性腸炎、またはマスト細胞性胃腸炎を有すると診断されている。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。
製品またはキットは、さらに、容器を含み得る。好適な容器としては、たとえば、ボトル、バイアル（たとえば、二重チャンババイアル）、シリンジ（たとえば、単一または二重チャンバシリンジ）、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成することができる。容器により、製剤が保持される。
製品またはキットは、容器上または容器に付随し、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示し得る、ラベルまたは添付文書をさらに含み得る。ラベルまたは添付文書は、さらに、製剤が、皮下、静脈内、または他の投与様式で、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置および／または予防するのに有用であるか、またはそれに意図されることを示し得る。製剤を保持している容器は、単回使用のバイアルまたは複数回使用のバイアルであってもよく、後者は、再構成された製剤の反復投与を可能にする。製品またはキットは、さらに、好適な希釈剤を含む第２の容器を含み得る。製品またはキットは、他の緩衝物質、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、および使用の説明を伴う添付文書を含め、商業上、治療上、およびユーザーの視点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
特定の実施形態では、本開示は、単回用量の投与単位のキットを提供する。そのようなキットは、単一または複数チャンバの事前充填シリンジを含む、治療用抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な事前充填シリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
別の実施形態では、自動注射デバイスでの投与のための本明細書に記載される製剤を含む製品またはキットが、本明細書において提供される。自動注射装置は、作動されると、患者または投与者による追加の必要な作業なしに、その内容物を送達する、注射デバイスとして説明することができる。これらは、送達の速度が一定でなければならず、送達の時間が、いくらか長い場合の、治療用製剤の自己投薬に好適である。
別の態様では、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製品またはキットが、提供される。製品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための説明書をさらに含んでもよい。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量のヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を投与するステップを含む、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置または予防するための方法において、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を使用するための説明書を含む。ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬と、マスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置および／または予防するためにそれを必要とする個体に医薬を投与するための説明を含む添付文書とを含む。
本開示はまた、本明細書に記載される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（たとえば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置または予防するための１つまたは複数の追加の医薬（たとえば、第２の医薬）と組み合わせて含む、製品またはキットも提供する。製品またはキットは、本開示の方法において、抗体を、１つまたは複数の追加の医薬と組み合わせて使用するための説明書をさらに含んでもよい。たとえば、本明細書における製品またはキットは、必要に応じて、第２の医薬を含む容器をさらに含み、その場合、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、第１の医薬であり、その製品またはキットは、有効量の第２の医薬で個体を処置するためのラベルまたは添付文書での説明書をさらに含む。したがって、ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を、個体におけるマスト細胞性胃炎、マスト細胞性食道炎、マスト細胞性大腸炎、マスト細胞性腸炎、マスト細胞性十二指腸炎、および／またはマスト細胞性胃腸炎を処置または予防するための方法において、１つまたは複数の追加の医薬と組み合わせて使用するための説明書を含む。ある特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む医薬（たとえば、第１の医薬）、１つまたは複数の追加の医薬、および第１の医薬を１つまたは複数の追加の医薬（たとえば、第２の医薬）と組み合わせて投与するための説明を含む添付文書を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の治療剤としては、ＰＰＩ、全身的コルチコステロイド、局所的コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬、マスト細胞安定剤、Ｈ－２ブロッカー、抗ＩｇＥ抗体、カルシニューリン阻害剤、免疫調節剤、および免疫抑制剤（たとえば、アザチオプリン、６－ＭＰ、ＭＭＦ、およびｍＴＯＲ阻害剤）を挙げることができるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される態様および実施形態は、例示目的のものにすぎないこと、ならびにその様々な修正または変化が、当業者には示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれることが、理解される。
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解されるであろう。実施例は、しかしながら、本開示の範囲を限定するとみなされるものではない。本明細書に記載される実施例および実施形態は、例示目的のものにすぎないこと、ならびにその様々な修正または変化が、当業者には示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれることが、理解される。
（実施例１）
マスト細胞性胃炎および／またはマスト細胞性胃腸炎を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体処置の安全性、忍容性、および臨床利益を評価するための、第１ｂ相、非盲検、用量漸増、概念実証研究の構造
好酸球性胃炎および／または胃腸炎を有する患者の処置に関する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の有効性および安全性を評価する、進行中の研究によって、腹痛、悪心および／または下痢の症状基準を満たしているにもかかわらず、胃および／または十二指腸の粘膜において必要条件数の好酸球を有さなかった患者の亜集団が見られた。代わりに、これらの患者は、胃および／または十二指腸の粘膜において、相当数のマスト細胞（ほとんどの事例では、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個を上回るマスト細胞）を有することが見出された。正常レベルは、ＨＰＦ当たりおよそ２０個未満のマスト細胞であることが測定されており（Doyle et al., Am. J. Surg. Pathol. (2014) 38:832-843；Jakate et al., Arch. Pathol. Lab. Med. (2006) 130:362-367；Tison et al., Allergy Clin. Immunol. (2010) Abstract 714）、これらの患者におけるマスト細胞の上昇が、消化管の総体症状の原因である可能性を示唆している。患者は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の研究に関する患者と同じ症状基準を満たし、器官別大分類（ＳＯＣ）処置に失敗したかまたはそれで適切に制御されなかったため、よりよい処置を実質的に必要としている。
組織マスト細胞の数または活性化の低減は、中程度から重度の胃腸症状ならびにこの研究においてマスト細胞性胃炎および／または胃腸炎と称される状態である、胃および／または十二指腸におけるマスト細胞の数の増加を有する患者の処置に有用であり得る。
マスト細胞性胃炎および胃腸炎は、疾患の実体について比較的不十分にしか説明されていないため、食品医薬品局（ＦＤＡ）に認可された処置が存在しない。これらの患者に対する現在の治療法および疾患管理は、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）、栄養制限食／成分栄養、全身または経口コルチコステロイド、および免疫調節生物製剤の時折の適応外使用を含む、多くの様々なアプローチを含む。
この実施例において記載した研究は、マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体処置の安全性および有効性を試験するために設計されている。
用量選択
この研究では、マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者を、４週間ごとに投与される、最大６用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ（フコシル化されていないＩｇＧ１）抗体（「研究薬」とも称される）で処置する。用量は、１回目の注入では０．３ｍｇ／ｋｇ、２回目の注入では１ｍｇ／ｋｇ、その後の４回の注入では３ｍｇ／ｋｇである。
患者選択
この研究の集団は、１８から８０歳の間の年齢のマスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する成人男性および女性の患者である。
患者の組入れ基準は、以下のものを含む：
１）同意説明文書（ＩＣＦ）のサイン時に１８から８０歳の間の年齢の男性または女性の患者。
２）抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究スクリーニング期間中に実施した食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）からの胃粘膜（５つのＨＰＦにおいてＨＰＦ当たり３０個の好酸球を上回るかまたはそれに等しいと定義される）または十二指腸粘膜（３つのＨＰＦにおいてＨＰＦ当たり３０個の好酸球を上回るかまたはそれに等しいと定義される）について好酸球増加症の適格基準を満たさないために、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究に関するスクリーニングプロセスに失敗したこと。
３）３週間のうち少なくとも２週間の患者報告予後（ＰＲＯ）収集の間に、ＰＲＯアンケートで腹痛、下痢、または悪心について、３を上回るかそれに等しい（０～１０のスケールで）平均週間スコアが記録されていること。認定するための週ごとに、最低４つのアンケートを完了した。
４）以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究のスクリーニング期間中に実施したＥＧＤからの十二指腸および／または胃の粘膜において、少なくとも３つのＨＰＦにおいてＨＰＦ当たり３０個を上回るかまたはそれに等しいマスト細胞を有したこと。
５）ＥＧまたはＥＧＥの症状の標準的な治療処置（とりわけ、ＰＰＩ、全身もしくは局所的コルチコステロイド、および／または食事療法を挙げることができる）が失敗しているか、またはそれで適切に制御されない対象。
６）登用時にＥＧ、ＥＧＥ、またはＥｏＥの他の処置を受けている場合は、患者が、スクリーニングの前に少なくとも半減期５つ分の間、安定した用量を有しており、研究の期間中その用量で継続することを快諾していたこと。
７）患者が、既存の食事制限を受けていた場合は、患者が、可能な限り、研究全体を通してこれらの食事制限を維持することを快諾していること。
８）すべての研究手順に応じることができ、それを快諾していること。
患者の除外基準は、以下のものを含む：
１）研究薬の任意の構成成分に対して公知の過敏症であること。
２）治験責任医師によって臨床的に有意であると考えられる異常な臨床検査値の存在。
３）治験責任医師の意見では、対象へのリスクを増加させることになる任意の疾患、状態（内科的または外科的な）、または心臓の異常。
４）公知の、アルコール、薬物、または他の物質の乱用歴またはそれに対する依存歴。
５）研究薬の投与前３０日以内（または生物製剤品については、９０日もしくは半減期５つ分のいずれか長い方）に最後の治療介入が生じる同時の治療介入研究に参加していること。
６）研究に参加している間に妊娠しているか、授乳中であるか、または妊娠を計画中である女性。
研究設計
この研究は、マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者において毎月最大６用量を注入した場合に、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の安全性、忍容性、および臨床利益を評価するための、第１ｂ相、多施設、非盲検の研究である。この研究は、スクリーニングされ、胃粘膜において５つのＨＰＦでＨＰＦ当たり３０個を上回るかもしくはそれに等しい好酸球または十二指腸粘膜において３つのＨＰＦでＨＰＦ当たり３０個を上回るかもしくはそれに等しい好酸球を有するという基準を除いて、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究に対するすべての患者選択基準を満たした患者を含む。この研究に対して適格であるために、患者は、胃および／または十二指腸の粘膜において少なくとも３つのＨＰＦでＨＰＦ当たり３０個を上回るかまたはそれに等しいマスト細胞を有する。患者は、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究に関するスクリーニングに失敗した後、この研究について同意する。
この研究を以下のように設計する：
１）適格性についてのベースライン評価に関する４５日のスクリーニング期間。登用開始４５日以内に採取された場合、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究からのベースライン評価をこの研究に関するベースライン評価として使用することができる。症状が持続していた場合（組み入れ基準番号３に示したように）、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究からの食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）に由来するスクリーニング生検結果を使用することができる。
２）患者が、胃または十二指腸の粘膜においてＨＰＦ当たり３０個を上回るかまたはそれに等しい好酸球を有さないが、十二指腸および／または胃の粘膜において少なくとも３つのＨＰＦでＨＰＦ当たり３０個を上回るかまたはそれに等しいマスト細胞を有したために、以前の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体研究に関するスクリーニングに失敗している場合、患者は、この研究において、１日目、２９日目（±３日）、５７日目（±３日）、８５日目（±３日）、１１３日目（±３日）、および１４１日目（±３日）に、静脈内注入によって６用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を受ける。
３）生検による反復ＥＧＤを、１５５日目（±３日）または患者が早期に終了した場合には研究薬の最終投与のおよそ２週間後に実施する。
４）研究前の医薬および既存の食事制限は、研究全体を通して変更されないままである。患者は、食習慣、食事習慣／制限、および食物禁忌行動の標準化されたベースライン評価を受けており、研究全体を通して類似する習慣および制限を維持するよう求められる。
主要目的
この研究の主要目的は、マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の安全性および忍容性を評価することである。
副次目的
この研究の副次目的は、以下のパラメーターについて、マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の効果を評価することである：
１）胃および十二指腸の生検におけるＨＰＦ当たりのマスト細胞数の変化。
２）毎日の患者報告予後（ＰＲＯ）アンケートによって推定される胃腸症状スコアの変化。
３）絶対末梢血好酸球数の変化。
薬力学的評価項目
検証された酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体濃度の評価のために、血液（血清）を採取する。
有効性評価項目
胃および十二指腸の粘膜におけるマスト細胞数を評価する。さらに、食道粘膜における好酸球およびマスト細胞の数を、同時に好酸球性食道炎を有する患者において評価する。
この研究における他の有効性評価項目は、以下を含む：
１）マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者における、胃および／または十二指腸の粘膜におけるＨＰＦ当たりのマスト細胞数のベースラインからの変化パーセント。
２）ＰＲＯアンケートによって測定した胃腸総体症状の週ごとの平均のベースラインからの変化（以下の症状に関するものを含む全体および項目の１日ごとのスコア：腹痛強度、悪心強度、嘔吐強度、下痢頻度、腹部けいれん強度、腹部膨満強度、早期満腹感強度、および食欲喪失強度）。
３）マスト細胞性胃炎および／または胃腸炎を有する患者における、胃および／または十二指腸の粘膜におけるＨＰＦ当たり３０個未満のマスト細胞として定義される組織学的応答を有する患者の割合。
４）絶対末梢血好酸球数の数のベースラインからの変化。
５）同時に好酸球性食道炎を有する患者の食道生検におけるＨＰＦ当たりの好酸球およびマスト細胞の数のベースラインからの変化。
６）処置の前および後の胃および十二指腸の生検の形質学的評価。
７）体重のベースラインからの変化パーセント。
８）Patient-Reported Functional Health and Well-being Survey SF-36におけるベースラインからの変化。
試験薬、用量および投与
すべての患者は、研究中、Pharmacy Manualの研究において示されたように、注入ポンプを使用する単回末梢静脈内注入として投与される、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の６回の静脈内注入を受ける。正確な用量は、各注入前に、その時点の患者の体重に基づいて計算される。０．３ｍｇ／ｋｇの用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、患者の体重に従って調製され、１日目に投与される。１ｍｇ／ｋｇの用量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、患者の体重に従って調製され、２９日目（±３日）に投与される。３ｍｇ／ｋｇの用量のその後の注入は、患者の体重に従って調製され、５７日目（±３日）、８５日目（±３日）、１１３日目（±３日）、および１４１日目（±３日）に投与される。
安全性および忍容性は、有害事象（ＡＥ）をモニタリングおよび評価することによって、研究全体を通して評価され、その重症度は、ＮＣＩの有害事象共通用語規準（Common Terminology Criteria for Adverse Events）（ＣＴＣＡＥ）によって評価される。すべてのＡＥは重症度グレードを割り当てられ、これらが、臨床的に有意であり、研究薬に関連するか否かを判定するために評価される。
（実施例２）
好酸球性胃炎および／または腸炎が疑われる症候性患者は、好酸球増加症を伴わず粘膜のマスト細胞数の上昇を有する
好酸球の病理的蓄積および過活性化によって、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、胃炎（ＥＧ）、腸炎（ＥＥｎ）、および大腸炎を含むＧＩ管における複数の慢性炎症性疾患（好酸球性胃腸疾患、ＥＧＩＤと総称される）が示唆される（図１）。ＥＧＩＤを有する患者は、嚥下障害／嚥下困難、腹痛、悪心、嘔吐、および下痢などの衰弱性症状によって、生活の質を低下させている。
ＥＧＩＤの発病は、歴史的に、好酸球によって駆動されると考えられてきたが、ＥｏＥではマスト細胞も上昇することが示されている（Caldwell et al. (2014) J. Allergy Clin. Immunol. 134:1114-1124；Youngblood et al. (2019) JCI Insight 4(19)）。しかし、特にＥｏＥ以外のＥＧＩＤにおけるマスト細胞の役割は、未だに確立されていない。ＥＧおよびＥＥｎは、米国において４５，０００～５０，０００人の患者に罹患するが、この数は、かなり少なく見積もられている可能性がある。食事制限およびコルチコステロイドなどの現在の処置選択肢は、有効性が限定されているおよび／または慢性的使用に不適切である。そのため、新規標的化治療法に対する相当な満たされていない必要性が存在する。
実施例１に記載されたように、好酸球性胃炎および／または胃腸炎を有する患者の処置に関する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の有効性および安全性を評価する進行中の研究に対する登用中に、胃および／または十二指腸の粘膜において必要条件数の好酸球を有さなかったが、代わりに、胃および／または十二指腸の粘膜において、相当数のマスト細胞（ほとんどの事例では、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個を上回るマスト細胞）を有した患者の亜集団を特定した。この実施例は、ＥＧ／ＥＥｎを有する患者における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の第２相研究に関して、粘膜好酸球増加症に関する組織病理学的参加基準を満たさなかった、ＥＧ／ＥＥｎを疑われたこれらの症候性患者を特徴付ける。
スクリーニングプロトコール
ＥＧ／ＥＥｎであると以前に診断されたかまたは疑われた患者がスクリーニングに参加した。患者報告予後（ＰＲＯ）アンケートで２週間以上、腹痛、下痢、および／または悪心について、３以上（０～１０のスケールで）の強度の平均週間スコアを有する対象を、生検による上部内視鏡検査（ＥＧＤ）に対する適格とした。
標準化したプロトコールによって、各症候性対象から複数の生検を得た：８～１０個の胃生検、４～６個の十二指腸生検、および４～６個の食道生検（対象がＥｏＥの病歴を有した場合かまたはＥＧＤ中にＥｏＥの特徴が観察された場合にのみ）。参加基準は以下の通りであった：５強拡大視野（ｈｐｆ；０．２３７ｍｍ２の面積）において、ｈｐｆ当たり３０個以上の好酸球（ｅｏｓ）（胃）および／または３ｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個以上のｅｏｓ（十二指腸）；ならびにＧＩ症状または組織好酸球増加症に関する他の公知の原因がないこと。
毎日のＰＲＯアンケートによって、８つの症状を捉えた：腹痛、悪心、下痢、嘔吐、早期満腹感、食欲喪失、腹部けいれん、および腹部膨満。
結果
患者の分布を図２Ａに示す。１１３名の患者がスクリーニングに参加し、８８名が症候性であることが判明した。これらの８８名のうち、７１名（８１％）が、上記のようにスクリーニングした場合に３０個以上のｅｏｓと３０個以上のマスト細胞を有することが判明し、１６名（１８％）が、３０個以上のマスト細胞のみを有することが判明し、１名（１％）のみが３０個以上のｅｏｓのみを有することが判明した。したがって、８８名の症候性患者のうちの８７名が、マスト細胞数の上昇を有した。図２Ｂは、３０個以上のｅｏｓを有する患者（合計７２名）のベースライン特徴を、３０個以上のマスト細胞を有するが３０個を下回るｅｏｓしか有さない患者（合計１６名）と比較する。
胃（図３Ａ）または十二指腸（図３Ｂ）の生検のいずれかにおける好酸球とマスト細胞の数を図３Ａおよび３Ｂに示す。胃生検では（図３Ａ）、５つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個以上のｅｏｓを有する患者は、８９個の好酸球および６４個のマスト細胞の平均ピーク細胞数（５ｈｐｆ当たり）を有し、一方、５つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個以上のマスト細胞を有するが、５つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個を下回るｅｏｓしか有さない患者は、７個の好酸球および５２個のマスト細胞の平均ピーク細胞数（５ｈｐｆ当たり）を有した。十二指腸生検では（図３Ｂ）、３つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個以上のｅｏｓを有する患者は、６５個の好酸球および５６個のマスト細胞の平均ピーク細胞数（３ｈｐｆ当たり）を有し、一方、３つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個以上のマスト細胞を有するが、３つのｈｐｆにおいてｈｐｆ当たり３０個を下回るｅｏｓしか有さない患者は、１５個の好酸球および５１個のマスト細胞の平均ピーク細胞数（３ｈｐｆ当たり）を有した。図４は、早期満腹感、腹部膨満、腹痛、食欲喪失、腹部けいれん、悪心、下痢、および嘔吐（上から下へ）に関して、両患者集団に関する平均症状強度スコアを示す。類似する症状プロファイルを２つの群の間で観察した（すなわち、生検がｈｐｆ当たり３０個を下回るｅｏｓしか示さなかったが、ｈｐｆ当たり３０個以上のマスト細胞を示した患者に対する、生検がｈｐｆ当たり３０個以上のｅｏｓを示した患者）。
２つの個々の事例の研究を図５Ａおよび５Ｂに示す。事例研究Ａにおける患者（図５Ａ）は、２０１５年に、生検により確認されたＥＧであると診断された。この患者は、スクリーニング生検前に、局所的または全身的ステロイドを受けていなかった。事例研究Ｂにおける患者（図５Ｂ）は、以前にＥＧＩＤの診断を受けなかった。これらの症状は、スクリーニング時の少ない好酸球にもかかわらず、ＥＧおよび／またはＥＥｎと一致した。
さらに、ヒト胃生検組織の分析によって、マスト細胞の活性化の増加が、マスト細胞のみが上昇する（好酸球は上昇しない）ことが判明した組織において見られることが示された。ヒトの胃生検組織を単一細胞へと処理し、フローサイトメトリーによってマスト細胞（ＣＤ１１７＋ Ｓｉｇｌｅｃ－８＋細胞）および好酸球（ＣＤ１１７－ Ｓｉｇｌｅｃ－８＋細胞）を単離した（図６Ａ）。これらから、マスト細胞を、フローサイトメトリーを使用して、マスト細胞活性化および脱顆粒マーカーＣＤ６３についてさらに分析した（図６Ｂ）。マスト細胞が活性化されたかどうかを判定するために、細胞を抗ＣＤ６３および陰性対照抗体で染色した。これらの結果は、これらの組織におけるマスト細胞の活性化を実証する。
上記のＰＲＯアンケートからのアウトカムデータも分析した。図７は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の最終投与後２週間の、１日の平均スコアに対するベースライン（スクリーニング期間の１日の平均）からの総症状スコアの変化の平均および中央値を示す。この結果は、ベースラインと比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の最終投与後の総症状スコアにおける平均６４％および中央値６９％の低下を実証する。
結論
ＥＧおよび／またはＥＥｎを疑われ、ならびに活性症状を有する８８名の患者が、内視鏡検査および生検を受けた。８８名のうちの７２名が、本研究に関する組織学的好酸球基準を満たした。スクリーニングされた８８名のうち８７名（９９％）の患者が胃および／または十二指腸の組織生検においてマスト細胞数の上昇を有した。症状プロファイルは、組織好酸球増加症を有する患者とそれを有さない患者の間で類似した。
これらのデータは、マスト細胞が、ＥＧ／ＥＥｎを疑われた患者において重要な病原性の役割を果たし、マスト細胞に駆動される非好酸球性状態の可能性を高めることを示唆する。マスト細胞を阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の能力により、マスト細胞の上昇を有するが組織好酸球増加症を有さない患者は、非盲検の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の臨床試験に参加することを提案された。
配列
すべてのポリペプチド配列は、別途示されない限り、Ｎ末端からＣ末端の方向で提示する。
すべての核酸配列は、別途示されない限り、５’から３’の方向で提示する。
マウス２Ｅ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000020
 ２Ｅ２ ＲＨＡ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000021
 ２Ｅ２ ＲＨＢ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000022
 ２Ｅ２ ＲＨＣ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000023
 ２Ｅ２ ＲＨＤ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000024
 ２Ｅ２ ＲＨＥ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000025
 ２Ｅ２ ＲＨＦ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000026
 ２Ｅ２ ＲＨＧ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000027
 ２Ｅ２ ＲＨＡ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000028
 ２Ｅ２ ＲＨＢ２重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000029
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｓ－Ｇ変異体重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000030
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｅ－Ｄ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000031
 ２Ｅ２ ＲＨＥ Ｙ－Ｖ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000032
 ２Ｅ２ ＲＨＥトリプル変異体重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000033
 マウス２Ｅ２軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000034
 ２Ｅ２ ＲＫＡ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000035
 ２Ｅ２ ＲＫＢ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000036
 ２Ｅ２ ＲＫＣ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000037
 ２Ｅ２ ＲＫＤ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000038
 ２Ｅ２ ＲＫＥ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000039
 ２Ｅ２ ＲＫＦ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000040
 ２Ｅ２ ＲＫＧ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000041
 ２Ｅ２ ＲＫＡ Ｆ－Ｙ変異体軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000042
 ２Ｅ２ ＲＫＦ Ｆ－Ｙ変異体軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000043
 ＨＥＫＡ重鎖およびＨＥＫＦ重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000044
Figure 2022520105000045
 ＨＥＫＡ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000046
 ＨＥＫＦ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000047
 ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022520105000048
 ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022520105000049
 Ｉｇカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
Figure 2022520105000050
 マウス２Ｃ４および２Ｅ２ ＩｇＧ１重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000051
 マウス２Ｃ４カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000052
 マウス２Ｅ２カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000053
 キメラ２Ｃ４および２Ｅ２ ＩｇＧ１重鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000054
Figure 2022520105000055
 キメラ２Ｃ４カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000056
 キメラ２Ｅ２カッパ軽鎖のアミノ酸配列
Figure 2022520105000057
 ＨＥＫＡ ＩｇＧ４重鎖のアミノ酸配列（ＩｇＧ４は、Ｓ２２８Ｐ変異を含有する）
Figure 2022520105000058
 マウス１Ｃ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022520105000059
 マウス１Ｈ１０重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022520105000060
 マウス４Ｆ１１重鎖可変ドメインのアミノ酸配列（下線で示した残基は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによるＣＤＲ Ｈ１およびＨ２を構成する）
Figure 2022520105000061
 マウス１Ｃ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000062
 マウス１Ｈ１０軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000063
 マウス４Ｆ１１軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
Figure 2022520105000064
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１のアミノ酸配列
Figure 2022520105000065
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン２のアミノ酸配列
Figure 2022520105000066
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン３のアミノ酸配列
Figure 2022520105000067
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１の融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022520105000068
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１および２の融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022520105000069
 ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ドメイン１、２、および３の融合タンパク質のアミノ酸配列
Figure 2022520105000070
Figure 2022520105000071

Claims (106)

  1. 個体における胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、
    （ａ）前記個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、
    （ｂ）前記個体の胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、
    （ｃ）前記第１の試料が、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記第２の試料が、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップと
    を含む、方法。
  2. 個体における胃炎、腸炎、十二指腸炎、または胃腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、前記個体が、マスト細胞の参照と比較して、前記胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分においてマスト細胞の数の増加を有し、前記個体が、好酸球の参照と比較して、前記胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜の少なくとも一部分において好酸球の数の増加を有さない、方法。
  3. 前記個体の前記胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた第１の試料が、前記マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記個体の前記胃、十二指腸、空腸、回腸、結腸の粘膜から得られた第２の試料が、前記好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない、請求項２に記載の方法。
  4. 前記第１の試料と前記第２の試料が、同じである、請求項１または請求項３に記載の方法。
  5. 前記第１の試料と第２の試料の一方または両方が、胃または十二指腸の生検に由来する、請求項１、３、および４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記第１の試料と第２の試料の一方または両方が、生検による食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）に由来する、請求項１、３、および４のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記第１の試料が、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり２０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する、請求項１、３、および４から６のいずれか一項に記載の方法。
  8. マスト細胞が、トリプターゼ、ＣＤ１１７、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される、請求項７に記載の方法。
  9. 前記第２の試料が、それぞれ、ＨＰＦ当たり３０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する、請求項１、３、および４から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記第２の試料が、前記個体の前記胃粘膜から得られ、前記第２の試料が、それぞれ、ＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも５つのＨＰＦを有さない、請求項１、３、および４から８のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記第２の試料が、前記個体の前記十二指腸粘膜から得られ、前記第２の試料が、それぞれ、ＨＰＦ当たり３０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有する少なくとも３つのＨＰＦを有さない、請求項１、３、および４から８のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記第１の試料における前記マスト細胞の数が、前記組成物の投与の４５日またはそれより前に検出される、請求項１、３、および４から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記個体が、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）を有するか、またはそれであると診断されている、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記個体が、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤による処置に対して不応性である、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記個体が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有するか、またはそれであると診断されている、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記個体が、機能性消化不良を有するか、またはそれであると診断されている、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記個体が、好酸球性胃炎を有していたか、またはそれであると以前に診断されており、前記個体が、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃炎の１つまたは複数の症状を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記個体が、好酸球性胃腸炎を有していたか、またはそれであると以前に診断されており、前記個体が、好酸球の上昇を有さない好酸球性胃腸炎の１つまたは複数の症状を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記個体の前記胃、十二指腸、空腸、回腸、または結腸の粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数または活性のうちの一方または両方が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記組成物の投与前に、前記個体が、胃炎または胃腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置に失敗しているかまたはそれで適切に制御されていない、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 胃炎または胃腸炎に対する前記１つまたは複数の標準的な治療処置が、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）処置、コルチコステロイド処置、および食事処置からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記個体における胃炎、十二指腸炎、腸炎、または胃腸炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記個体における胃炎、十二指腸炎、腸炎、または胃腸炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に、少なくとも６０％低減される、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記個体における腹痛、悪心、嘔吐、食欲喪失、腹部けいれん、食事を終える前の満腹感、腹部膨満、下痢、および液状または水様便のうちの１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
  25. 個体における食道炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、
    （ａ）前記個体の食道粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、
    （ｂ）前記個体の前記食道粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、
    （ｃ）前記第１の試料が、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記第２の試料が、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップと
    を含む、方法。
  26. 個体における食道炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、前記個体が、マスト細胞の参照と比較して、食道粘膜の少なくとも一部分においてマスト細胞の数の増加を有し、前記個体が、好酸球の参照と比較して、前記食道粘膜の少なくとも一部分において好酸球の数の増加を有さない、方法。
  27. 前記個体の前記食道粘膜から得られた第１の試料が、前記マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記個体の前記食道粘膜から得られた第２の試料が、前記好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記第１の試料と前記第２の試料が、同じである、請求項２５または請求項２７に記載の方法。
  29. 前記第１の試料と第２の試料の一方または両方が、食道生検試料に由来する、請求項２５、２７、および２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記第１の試料と第２の試料の一方または両方が、生検による食道胃十二指腸内視鏡検査（ＥＧＤ）に由来する、請求項２５、２７、および２８のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記第１の試料が、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり１０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する、請求項２５、２７、および２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. マスト細胞が、トリプターゼ、ＣＤ１１７、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記第２の試料が、ＨＰＦ当たり１５個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する、請求項２５、２７、および２８から３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記第２の試料が、ＨＰＦ当たり１５個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有するＨＰＦを有さない、請求項２５、２７、および２８から３２のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記個体が、胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）を有するか、またはそれであると診断されている、請求項２５から３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記個体が、制酸剤、Ｈ２ブロッカー、および／またはプロトンポンプ阻害剤による処置に対して不応性である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記個体の前記食道粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数、活性、または位置のうちの１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項２５から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記組成物の投与前に、前記個体が、食道炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置に失敗しているかまたはそれで適切に制御されていない、請求項２５から３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記個体における食道炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記個体における食道炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に、少なくとも６０％低減される、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記個体における胸やけ、悪心、嚥下障害／嚥下困難、嘔吐、腹痛、咳、食片圧入、早期満腹感、食欲喪失、胸部痛、哺乳不耐または哺乳拒否、および胃食道逆流のうちの１つまたは複数が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
  42. 個体における大腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、
    （ａ）前記個体の結腸粘膜から得られた第１の試料に由来するマスト細胞の数を検出するステップと、
    （ｂ）前記個体の結腸粘膜から得られた第２の試料に由来する好酸球の数を検出するステップと、
    （ｃ）前記第１の試料が、マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記第２の試料が、好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない場合、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップと
    を含む、方法。
  43. 個体における大腸炎の１つまたは複数の症状を処置または予防するための方法であって、前記個体に、有効量の、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を投与するステップを含み、前記個体が、マスト細胞の参照と比較して、結腸粘膜の少なくとも一部分においてマスト細胞の数の増加を有し、前記個体が、好酸球の参照と比較して、前記結腸粘膜の少なくとも一部分において好酸球の数の増加を有さない、方法。
  44. 前記個体の前記結腸粘膜から得られた第１の試料が、前記マスト細胞の参照と比較して、マスト細胞の数の増加を有し、前記個体の前記結腸粘膜から得られた第２の試料が、前記好酸球の参照と比較して、好酸球の数の増加を有さない、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記第１の試料と前記第２の試料が、同じである、請求項４２または請求項４４に記載の方法。
  46. 前記大腸炎が、潰瘍性大腸炎である、請求項４２から４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記第１の試料が、強拡大視野（ＨＰＦ）当たり３０個またはそれを上回るマスト細胞のマスト細胞数を有する、少なくとも１つのＨＰＦを有する、請求項４２から４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. マスト細胞が、トリプターゼ、ＣＤ１１７、またはＩｇＥ受容体に関する免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって検出される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記第２の試料が、ＨＰＦ当たり６０個未満の好酸球の好酸球数を有する、１つまたは複数のＨＰＦを有する、請求項４２から４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記第２の試料が、ＨＰＦ当たり６０個またはそれを上回る好酸球の好酸球数を有するＨＰＦを有さない、請求項４２から４８のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記第１の試料における前記マスト細胞の数が、前記組成物の投与の４５日またはそれより前に検出される、請求項４２から５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記個体が、好酸球性大腸炎を有していたか、またはそれであると以前に診断されており、前記個体が、好酸球の上昇を有さない好酸球性大腸炎の１つまたは複数の症状を有する、請求項４２から５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記個体の前記結腸粘膜から得られた試料におけるマスト細胞の数または活性のうちの一方または両方が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項４２から５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記組成物の投与前に、前記個体が、大腸炎に対する１つまたは複数の標準的な治療処置に失敗しているかまたはそれで適切に制御されていない、請求項４２から５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記個体における大腸炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に低減される、請求項４２から５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記個体における大腸炎の前記１つまたは複数の症状が、前記組成物の投与前のベースラインレベルと比較して、前記組成物の投与後に、少なくとも６０％低減される、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記組成物が、静脈内注入によって投与される、請求項１から５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記組成物が、３ヶ月またはそれを上回る間、１ヶ月に１回、静脈内注入によって投与される、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記組成物が、皮下注射によって投与される、請求項１から５６のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記組成物が、約０．３ｍｇ／ｋｇから約３．０ｍｇ／ｋｇの間の前記抗体を含む１回または複数の用量で、静脈内注入によって投与される、請求項１から５６のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第１の用量、約１．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第２の用量、および約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第３の用量を投与するステップを含む、請求項１から５６のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記個体に、約０．３ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第１の用量を１日目に、約１．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第２の用量を２６日目から３２日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第３の用量を５４日目から６０日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第４の用量を８２日目から８８日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第５の用量を１１０日目から１１６日目の間に、約３．０ｍｇ／ｋｇの前記抗体を含む第６の用量を１３８日目から１４４日目の間に投与するステップを含む、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの５０％未満が、フコース残基を含む、請求項１から６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のうちの実質的にすべてが、フコース残基を含まない、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号６７～７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記抗体が、配列番号１１～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記抗体が、配列番号２～１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記抗体が、配列番号２～１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６～２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記抗体が、
    （ａ）（１）配列番号２６～２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
    （３）配列番号３１～３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
    （５）配列番号３８～４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および
    （７）配列番号４５～４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
    （ｂ）（１）配列番号４８～４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
    （３）配列番号５１～５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、
    （５）配列番号５５～５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記抗体が、
    （ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
    （３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
    （５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および
    （７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
    （ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
    （３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、
    （５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記抗体が、
    （ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、
    （３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、
    （５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、および
    （７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む、重鎖可変領域、ならびに／または
    （ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１、
    （２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
    （３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２、
    （４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、
    （５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３、
    （６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３、および
    （７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む、軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  74. 前記抗体が、
    （ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、
    （ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域、または
    （ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域、ならびに／もしくは（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  75. 前記抗体が、
    配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
    配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／もしくは配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８および非ヒト霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記非ヒト霊長類が、ヒヒである、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項７６に記載の方法。
  79. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン３内のエピトープに結合し、ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項７６に記載の方法。
  80. 前記抗体が、抗体４Ｆ１１と同じエピトープに結合する、請求項７６に記載の方法。
  81. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン２またはドメイン３内のエピトープに結合する、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  82. ドメイン２が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記抗体が、抗体１Ｃ３と同じエピトープに結合する、請求項８１に記載の方法。
  84. ドメイン３が、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む、請求項８１に記載の方法。
  85. 前記抗体が、抗体１Ｈ１０と同じエピトープに結合する、請求項８１に記載の方法。
  86. 前記抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のドメイン１内のエピトープに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合について、抗体４Ｆ１１と競合する、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ－８への結合について、抗体２Ｅ２と競合しない、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記抗体が、抗体２Ｅ２ではない、請求項８７に記載の方法。
  89. ドメイン１が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項８６に記載の方法。
  90. 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項６５から８９のいずれか一項に記載の方法。
  91. 前記抗体が、血中好酸球を枯渇させ、マスト細胞の活性化を阻害する、請求項６５から９０のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記抗体が、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項６５から９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域が、フコシル化されていない、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、請求項９２に記載の方法。
  96. 前記ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基が、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って番号付けされている、請求項９５に記載の方法。
  97. 前記抗体が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させるように操作されている、請求項６５から８９のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記抗体が、前記Ｆｃ領域に、ＡＤＣＣ活性を向上させる少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記抗体の前記重鎖のうちの少なくとも１つまたは２つが、フコシル化されていない、請求項６５から９１のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１から６４のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記組成物が、胃炎、胃腸炎、または食道炎を処置または予防するための１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１から１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 胃炎、胃腸炎、または食道炎を処置または予防するための前記１つまたは複数の追加の治療剤が、ＰＰＩ、全身的コルチコステロイド、局所的コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬、マスト細胞安定剤、Ｈ－２ブロッカー、抗ＩｇＥ抗体、カルシニューリン阻害剤、免疫調節剤、および免疫抑制剤からなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記個体が、ヒトである、請求項１から１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記組成物が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物である、請求項１から１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む組成物を含む医薬と、請求項１から１０５のいずれか一項に記載のそれを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明を含む添付文書とを含む、製品。
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