JP2022553370A - Ｉｌ－２受容体作動薬の投与方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、とりわけ、IL-2受容体作動薬の投与に関する処置レジメンを提供する。本発明は、とりわけ、IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象の免疫応答を調節する方法に向けられる。いくつかの態様において、その免疫応答とは抗癌免疫応答である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2019年10月25日に出願された米国特許仮出願第62/926,302号及び2019年12月24日に出願された同第62/953,372号に対する優先権を主張するものであり、そのそれぞれを全体として参照により本明細書に援用する。
コンパクトディスクにより提出した「配列表」、表又はコンピュータプログラムリストの付録の参照

本出願は、ASCII書式で電子的に提出した配列表を包含するものであり、そしてそれを全体として参照により本明細書に援用する。2020年10月21日に作成した前記ASCIIコピーは、057318_501001WO_Sequence_Listing_ST25.txtと命名され、サイズが33.4キロバイトである。

本発明の背景
中央免疫サイトカインであるインターロイキンー2(IL-2)は、癌処置に関して大きな可能性を有する；しかしながら、IL2免疫療法は、様々な毒性に関係することが知られている。突然変異及び/又は化学修飾によってその処置特性を改善するための、及びIL-2作動薬活性を有する新薬を開発するための幾多の取り組みがなされてきた。毒性の軽減を助けるために、及びIL-2作動薬活性を有する薬物に関連する処置効果を改善するために最適な投薬レジメンを開発する必要が存在し続けている。

本発明の簡潔な概要
本発明は、とりわけ、IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象の免疫応答を調節する方法に向けられる。いくつかの態様において、その免疫応答とは抗癌免疫応答である。いくつかの態様において、その方法は、以下のステップ(a) 第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイル（unacceptable tolerability profile）を有するであろう目標用量レベルまで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量（priming doses）のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして(b) 目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む。いくつかの態様において、その方法は、IL-2受容体作動薬の用量レジメンを、それを必要としている対象に投与することを含む方法であって、1若しくは複数のプライミング用量レベルにて1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、続いて、目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を投与することを含む方法であり、ここで、該目標用量レベルは、プライミング用量レベルより高い。例示的な実施形態において、IL-2受容体作動薬は、長時間作用型IL-2受容体作動薬である。例示的な実施形態において、IL-2受容体作動薬は、βγc選択型IL-2受容体作動薬である。

本発明はまた、とりわけ、IL-2受容体作動薬を用いた、それを必要としている対象において癌を処置する方法にも向けられる。いくつかの態様において、その方法は、以下のステップ(a) 第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイルを有するであろう目標用量レベルまで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして(b) 目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む。いくつかの態様において、その方法は、IL-2受容体作動薬の用量レジメンを、それを必要としている対象に投与することを含む方法であって、1若しくは複数のプライミング用量レベルにて1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、続いて、目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を投与することを含む方法であり、ここで、該目標用量レベルは、プライミング用量レベルより高い。例示的な実施形態において、IL-2受容体作動薬は、長時間作用型IL-2受容体作動薬である。例示的な実施形態において、IL-2受容体作動薬は、βγc選択型IL-2受容体作動薬である。

本発明はまた、とりわけ、長時間作用型IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象において(i) 免疫応答を調節する方法、又は(ii) 癌を処置する方法であって、(i) 対象に投与するための目標用量とプライミング用量を選択し；ここで、該目標用量は、第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイルを伴っているが、プライミング用量後に投与された場合により好ましい耐容性プロファイルを有し、(ii) 目標用量レベルまで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む方法、にも向けられる。

「用量」及び「用量レベル」という用語は当該出願を通じて互換的に使用される。本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトを指す。「ポリペプチド」、「タンパク質」又は「ペプチド」という用語は、その長さ又は翻訳後修飾(例えば、グリコシル化反応又はリン酸化)にかかわらず任意のアミノ酸残基の鎖を指す。1キログラムあたりのマイクログラムはμg/kgによって表される。

図1は、CT-26細胞を移植し、かつ、用量を増やしたIL-2受容体作動薬を与えたBALB/cマウスの体重変化を示す。マウス(1群あたりN=8)には、試験10日目にビヒクル、又は150、300、600、若しくは1200μg/kgのIL-2受容体作動薬を与えた。第二の用量を、試験17日目に生き残っているマウスに投与した。150μg/kg、300μg/kg、又は600μg/kgの試験物品を与えたすべてのマウスが両方の用量を生き残ったが、その一方で、1200μg/kgを与えたすべてのマウスが、第二の用量前の14日目に死滅したか又は瀕死であるかのいずれかが見られた。600μg/kgがMTDであると決定された。

図2は、CT-26細胞を移植し、かつ、一律用量レジメン又はステップ用量レジメンのIL-2受容体作動薬を与えたBALB/cマウスの体重変化を示す。マウス(1群あたりN=10)には、9日目に500μg/kgのIL-2受容体作動薬、そして16日目に500μg/kg(一律用量レジメン)又は9日目に500μg/kgのIL-2受容体作動薬、そして16日目に1000μg/kgのいずれかを与えた。500μg/kgと1000μg/kgの両方を与えられたすべてのマウスが第二の用量を生き残った。

本発明の詳細な説明
本発明は、とりわけIL-2受容体作動薬の投与に関する処置レジメンを提供する。当該発明者らは、第一の用量として投与した場合に薬物の最大耐量(MTD)を超えているであろうIL-2受容体作動薬の用量が、1若しくは複数の低減された用量の薬物を用いて対象が最初に感作された場合、対象に安全に投与できるという驚くべき発見した。言い換えれば、1若しくは複数のプライミング用量を用いた処置が、第一の用量として投与した場合に許容しないであろう目標用量までの増大を可能にする。プライミング用量は、目標用量の投与のために対象を感作し、そして、各プライミング用量は、目標用量と比較して、常に低減される。1若しくは複数のプライミング用量は、IL-2受容体作動薬で処置を開始する。斯かる処置レジメンの利点としては、例えば、(i) それが処置を通じて用量を一定に保つレジメンと比較して、より高い用量の規定を可能にするので、処置の有効性が改善されること、及び/又は(ii) より高い用量を用いた処置開始と比較して、より低い用量を用いた処置開始が低減された毒性を伴うので、処置に伴う毒性が低減されること、が挙げられる。いくつかの態様において、最大処置効果に関して、プライミング用量レベル並びに目標用量レベルは、処置的に有効な用量レベルになる。
長時間作用型IL-2受容体作動薬

IL-2受容体作動薬という用語は、本明細書中で使用される場合、IL-2受容体媒介性シグナル伝達を活性化することができるポリペプチド又はタンパク質を指す。特定の好ましい態様において、IL-2受容体作動薬は、IL-2受容体βγc選択型IL-2受容体作動薬である。IL-2受容体βγc選択型IL-2受容体作動薬とは、本明細書中に使用される場合、IL-2受容体βγcに特異的に結合するIL-2受容体作動薬を指すが、天然IL-2と比較して、IL-2受容体αに対する結合親和力は低い。いくつかの態様において、IL-2受容体作動薬はα非依存性であって、それはIL-2受容体αに結合しないことを意味する。いくつかの態様において、本発明のIL-2受容体βγc選択型作動薬によるIL-2受容体αへの結合は、天然IL-2と比較して、少なくとも20倍、30倍、又は50倍低減されるが、その一方で、
IL-2受容体βγcに対する結合は、天然IL-2と比較して、増強されているか、実質的に同じであるか、又は約10倍以下しか低減されていないか、好ましくは約5倍以下しか低減されない。基準としてIL-2に対する結合親和力を計測する方法は当該技術分野で知られている。

例示的な実施形態において、IL-2受容体作動薬は、長時間作用型IL-2受容体作動薬である。長時間作用型によって、その作動薬が3時間以上又は好ましくは4時間以上の血漿又は血清中半減期を有することを意味する。いくつかの態様において、IL-2受容体作動薬は、9時間若しくは10時間以上、又は12時間以上の血清又は血漿中半減期を有する。タンパク質又はポリペプチドの半減期とは、適切なアッセイによって計測した場合に、ポリペプチドの濃度が50%減少するのに必要な時間を指す。短縮は、そのポリペプチドのインビボにおける分解、クリアランス、又は分離によって引き起こされ得る。IL-2受容体作動薬の半減期は、例えば、血中のIL-2受容体作動薬の濃度を計測することによるなど、本開示の観点から当該技術分野で知られている任意の様式によって決定できる。例えば、インビボにおけるタンパク質又はポリペプチドの半減期を計測するために、好適な用量のタンパク質又はポリペプチドが、温血動物に(すなわち、ヒトに、又はマウス、ウサギ、ラット、ブタ、イヌ、若しくは霊長目動物などの別の好適な哺乳類に)投与され；その動物から血液サンプル又は他のサンプルが採収され；そのサンプル中のタンパク質又はポリペプチドのレベル又は濃度が決定され；そして、そのポリペプチドのレベル又は濃度が50%低減されるまでの時間が、計測データに基づいて計算される。例えば、Kenneth, A et al., Chemical Half-life of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and Peters et al., Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996)を参照のこと。本明細書中に使用される場合、「半減期の延長」又は「より長い半減期」とは、対照と比較した場合に、例えば、t1/2-α、t1/2-βや曲線下面積(AUC)などのタンパク質半減期を説明するのに使用されるパラメーターのいずれか1若しくは複数の増大を指す。IL-2受容体作動薬の長時間作用型の性質は、それがIL-2ポリペプチドに結合又は融合される部分に起因し得る。

いくつかの態様において、IL-2受容体作動薬は、IL-2ポリペプチドである。本願発明との関係の範囲内において、「IL-2」という用語は、哺乳類起源を含めた、あらゆる起源のIL-2を示すので、天然であっても、又は微生物宿主によって産生された遺伝子組み換えIL-2ポリペプチドを含めた、遺伝子組み換え又は合成技術によって得られてもよい。「IL-2」という用語は、天然ポリペプチド配列を含むポリペプチド、並びに天然IL-2ポリペプチドの活性変異体を含む。いくつかの例示的な態様において、その活性変異体を含むIL-2ポリペプチドは、ヒト起源に由来し、かつ、組み換えヒトIL-2、特に微生物宿主によって産生された遺伝子組み換えヒトIL-2を含む。IL-2の活性変異体は、当該技術分野で知られている。天然IL-2の変異体は、その断片、類似体、及び誘導体であり得る。「断片」によって、完全なポリペプチド配列の一部だけを含むポリペプチドが意図される。「類似体」とは、1若しくは複数のアミノ酸置換、挿入、又は欠失を伴った天然ポリペプチド配列を含むポリペプチドを示す。アミノ酸置換又は挿入は、天然アミノ酸でもあり得、又は非天然アミノ酸でもあり得る。本明細書中に使用される場合、天然アミノ酸残基は、次のように略される：アラニン、(Ala；A)、アスパラギン(Asn；N)、アスパラギン酸(Asp；D)、アルギニン(Arg；R)、システイン(Cys；C)、グルタミン酸(Glu；E)、グルタミン(Gln；Q)、グリシン(Gly；G)、ヒスチジン(His；H)、イソロイシン(Ile；I)、ロイシン(Leu；L)、リジン(Lys；K)、メチオニン(Met；M)、フェニルアラニン(Phe；F)、プロリン(Pro；P)、セリン(Ser；S)、トレオニン(Thr；T)、トリプトファン(Trp；W)、チロシン(Tyr；Y)、及びバリン(Val；V)。本明細書中に使用される場合、「非天然アミノ酸」という用語は、タンパク質で天然に生じる20種類のアミノ酸以外のアミノ酸を指す。非天然アミノ酸は当該技術分野で知られている。「誘導体」としては、例えば、グリコシル化、リン酸化、別のポリペプチド若しくは分子への融合、又は重合化を含めたあらゆる修飾天然IL-2ポリペプチド又はその断片若しくは類似体が挙げられる。基準IL-2ポリペプチドの活性変異体は、概して、基準IL-2ポリペプチド(例えば、ヒトIL-2配列)のアミノ酸配列と少なくとも75%、好ましくは少なくとも85%と、より好ましくは少なくとも90%のアミノ酸配列同一性を有する。

変異IL-2ポリペプチドが活性であるか決定する方法は、例えば、STAT5リン酸化アッセイを介した方法は、当該技術分野で知られている。ヒトIL-2のアミノ酸配列は、例えば、Genbank ref P60568で開示されている。

本発明の例示的なIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられる。IL-2模倣体は、Silva et al., Nature 2019 Jan;565(7738):186-191に記載されている。当該方法で使用すべき例示的なIL-2模倣体としては、STAT5のリン酸化につながる、IL2Rβγcのヘテロ二量化が挙げられる。本発明のIL-2模倣体は、IL-2受容体βγcヘテロ二量体(IL2Rβγc)に結合し、そして、いくつかの態様において、4つのヘリックス構造ペプチド、X1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドである。X1、X2、X3、及びX4はまた、本明細書中でドメインとも呼ばれる。X1、X2、X3、及びX4は、ポリペプチド内で順不同であってもよく、及びアミノ酸リンカーがそのドメインいずれかの間に存在していてもよい。アミノ酸リンカーは、意図した用途に適切であると考えられる任意の長さのものであってもよい。アミノ酸の例示的な長さとしては、長さが1～200、1～100、1～50、1～20、1～15、1～10、2～20、2～15、又は2～10アミノ酸のリンカーが挙げられる。アミノ酸残基で許容される変異性及びドメイン順序の柔軟性と同様に、リンカーの柔軟性は、IL-2模倣体を構築するためのデノボタンパク質デザインの使用から生じる。これらの模倣体では、タンパク質折り畳みに対する貢献の大部分は、リンカーからというよりむしろ二次構造要素内の疎水性中心相互作用に由来する。少なくともその理由で、リンカーは、概して、タンパク質折り畳みを損なうことなく、修飾されている。

本発明のIL-2(-2)受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも25%の%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも60%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも60%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも60%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

X1、X3、及びX4は、任意の好適な長さであり得、各ドメインが、それぞれ配列番号1、2、及び3のアミノ酸に加えて、任意の好適な数の追加のアミノ酸を含み得ることを意味する。典型的には、X1、X3及びX4のそれぞれが、少なくとも8個のアミノ酸を含む。いくつかの態様において、X1、X3及びX4のそれぞれが、少なくとも21個のアミノ酸を含む。斯かるいくつかの態様において、X1、X3及びX4のそれぞれは、長さが200、100又は50アミノ酸以下である。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも75%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、アミノ酸配列PKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、アミノ酸配列LEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)を含むペプチドであり；X4は、アミノ酸配列EDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)を含むペプチドである。これらのIL-2模倣体のすべてに関して、X1、X2、X3、及びX4は、ポリペプチド内で順不同であってもよい。ドメインの例示的な順序は、X1-X3-X2-X4である。

IL-2模倣体に関する斯かるいくつかの態様において、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X1は、次の：第7残基におけるL、第8残基におけるH、第11残基におけるH、第14残基におけるY、第18残基におけるMのうちの1、2、3、4、又は5個すべてを含み：及び/又は(ii) X3は、次の：第3残基におけるD、第4残基におけるY、第6残基におけるF、第7残基におけるN、第10残基におけるL、第11残基におけるI、第13残基におけるユーロ、又は第14残基におけるEのうちの1、2、3、4、5、6、7、又は8個すべてを含む。さらなる実施形態において、(iii) X4は、第19残基におけるIを含む。X1に関して述べた位置は、配列番号4に準拠して付番され；X3に関して述べた位置は、配列番号5に準拠して付番され；及びX4に関して述べた位置は、配列番号6に準拠して付番される。

IL-2模倣体に関する斯かるいくつかの態様において、配列番号1に対するアミノ酸置換は、1E、4L、5Y、6D、及び8L位にて起こらず；配列番号2に対するアミノ酸置換は、1Y、4N、7L、及び8I位にて起こらず；配列番号3に対するアミノ酸置換は、1I、5Q、及び7W位にて起こらず；配列番号4に対するアミノ酸置換は、10E、13L、14Y、15D、及び17L位にて起こらず；配列番号5に対するアミノ酸置換は、1L、4Y、7N、10L、11I、及び15I位にて起こらず；配列番号6に対するアミノ酸置換は、12I、16Q、及び18W位にて起こらない。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；ここで、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列は、配列番号4の中に含まれており；YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列は、配列番号5の中に含まれており；及びITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列は、配列番号6の中に含まれている。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；ここで、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列は、配列番号4の中に含まれており；YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列は、配列番号5の中に含まれており；及びITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列は、配列番号6の中に含まれている。

ポリペプチド配列に関して本明細書中で使用される場合、同一性とは、2つの分子の間のアミノ酸配列同一性を指す。両分子のアミノ酸位置が同じアミノ酸によって占められているろき、その分子はその位置にて同一である。2つのポリペプチド間の同一性は、同一位置の数の一次関数である。一般に、配列は、最も高い程度の一致が得られる(必要であれば、ギャップを含む)ようにアラインされる。同一性は、公開された技術と、例えば、GCGプログラムパッケージ(Devereux et al., Nucleic Acids Res. 12:387, 1984)、BLASTP、FASTA(Atschul et al., J. Molecular Biol. 215:403, 1990)などの広く利用可能なコンピュータプログラムを使用して計算できる。配列の同一性は、例えば、その初期設定パラメーターを用いて、University of Wisconsin Biotechnology Center(1710University Avenue、Madison, WI53705)におけるGenetics Computer GroupのSequence Analysis Software Packageなどの配列分析ソフトウェアを使用して計測できる。本発明に関して同一性を決定するとき、IL-2受容体との結合境界の位置を考慮することもまた重要である。アミノ酸が付加又は欠失される場合、その結合パートナーへのタンパク質の提示及び二次構造を実質的に妨げないような方法で、それがおこなわれなければならない。一般的に、必須ではないが、参照ペプチドドメインに対するアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であることが好ましい。本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」とは、所与のアミノ酸を、同様の生理化学的特性を有する残基で置き換えることができることを意味し、例えば、1つの脂肪族残基を別の残基に置換すること(Ile、Val、Leu、又はAlaなどを互いに)、又は1つの極性残基を別の残基に置換すること(LysとArg間、GluとAsp間、又はGlnとAsn間など)である。他のこのような保存的置換、例えば、類似の疎水性特性を有する領域全体の置換が知られている。保存的アミノ酸置換を含むポリペプチドは、本明細書に記載されるアッセイのいずれか1つで試験して、所望の活性、例えば、天然又は参照ポリペプチドの抗原結合活性及び特異性が保持されていることを確認することができる。アミノ酸は、側鎖の特性の類似性に従って、グループ化することができる(A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)中)。(1)非極性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)、(2)非荷電極性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)、(3)酸性：Asp(D)、Glu(E)、(4)塩基性：Lys(K)、Arg(R)、His(H)。あるいは、天然の残基は、共通の側鎖特性に基づいたグループに分類することができる。(1)疎水性：ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile、(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln、(3)酸性：Asp、Glu、(4)塩基性：His、Lys、Arg、(5)鎖配向に影響を及ぼす残基：Gly、Pro、(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。非保存的置換では、これらのクラスのうちの1つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。特定の保存的置換には、例えば、AlaをGly若しくはSerに、ArgをLysに、AsnをGln若しくはHisに、AspをGluに、CysをSerに、GlnをAsnに、GluをAspに、GlyをAla若しくはProに、HisをAsn若しくはGlnに、IleをLeu若しくはValに、LeuをIle若しくはValに、LysをArg、Gln、若しくはGluに、MetをLeu、Tyr、若しくはIleに、PheをMet、Leu、若しくはTyrに、SerをThrに、ThrをSerに、TrpをTyrに、TyrをTrpに、及び／又はPheをVal、Ile、若しくはLeuに、が含まれる。いくつかの態様において、結合又は活性に必要ないアミノ酸は、システインによって置換されて、望ましい部分の付加を可能にする。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここで、
1位のアミノ酸は、Pであるか、或いは置換された場合、A、F、I、L、M、Q、R、S、又はWであり；
2位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、A、D、E、G、又はVであり；
3位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、D、E、F、又はWであり；
4位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、D、E、N、P、R、又はWであり；
5位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、D、E、H、K、L、M、又はSであり；
6位のアミノ酸は、Qであるか、或いは置換された場合、A、D、E、G、L、P、S、又はWであり；
7位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、D、E、Q、Y、又はIであり；
8位のアミノ酸は、Hであるか、或いは置換された場合、A、F、W、Y、M、又はTであり；
9位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、C、F、又はPであり；
10位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、C、D、F、K、又はPであり；
11位のアミノ酸は、Hであるか、或いは置換された場合、D、F、又はEであり；
12位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、D、E、P、S、T、又はVであり；
13位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、H、I、M、P、R、V、又はWであり；
14位のアミノ酸は、Yであるか、或いは置換された場合、F、R、W、又はKであり；
15位のアミノ酸は、Dであるか、或いは置換された場合、E、N、又はYであり；
16位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、C、L、M、又はSであり；
17位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、F、I、M、P、又はRであり；
18位のアミノ酸は、Mであるか、或いは置換された場合、G、Q、Y、又はSであり；
19位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、L、M、P、Q、又はVであり；
20位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、A、K、M、Q、R、又はSであり；
21位のアミノ酸は、Nであるか、或いは置換された場合、G、K、P、R、S、又はWであり；
22位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、D、E、K、M、N、W、又はYである。

斯かるいくつかの実施形態において、次のもの：7位はIであり、8位はM又はTであり、11位はEであり、14位はKであり、及び18位はSである、のうちの1、2、3、4、又は5つが当てはまらない。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここで：
1位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、Aであり；
2位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、D、G、K、M、又はTであり；
3位のアミノ酸は、Dであるか、或いは置換された場合、E、N、Y、又はRであり；
4位のアミノ酸は、Yであるか、或いは置換された場合、C、D、G、T、又はFであり；
5位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、F、H、S、V、W、又はYであり；
6位のアミノ酸は、Fであるか、或いは置換された場合、A、I、M、T、V、Y、又はKであり；
7位のアミノ酸は、Nであるか、或いは置換された場合、D、K、S、T、又はRであり；
8位のアミノ酸は、Fであるか、或いは置換された場合、A、C、G、L、M、S、又はVであり；
9位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、C、H、K、L、R、S、T、又はVであり；
10位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、F、I、M、Y、又はRであり；
11位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、L、N、T、又はYであり；
12位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、F、K、M、S、又はVであり；
13位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、A、D、F、G、I、N、P、Q、S、T、又はWであり；
14位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、A、F、G、H、S、又はVであり；
15位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、C、L、M、V、又はWであり；
16位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、D、G、S、T、又はVであり；
17位のアミノ酸は、Rであるか、或いは置換された場合、H、K、L、又はNであり；
18位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、C、D、G、I、Q、R、T、又はWであり；
19位のアミノ酸は、Fであるか、或いは置換された場合、D、M、N、又はWであり；
20位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、A、C、F、G、M、S、又はYであり；
21位のアミノ酸は、Sであるか、或いは置換された場合、D、E、G、H、L、M、R、T、V、又はWであり；
22位のアミノ酸は、Gであるか、或いは置換された場合、A、D、K、N、S、又はYである。

斯かるいくつかの実施形態において、次のもの：3位はRであり、4位はFであり、6位はKであり、7位はRであり、10位はRであり、11位はNであり、13位はWであり、及び14位はGである、のうちの1、2、3、4、5、6、7、又は8つすべてが当てはまらない。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここで：
1位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、D、G、K、又はVであり；
2位のアミノ酸は、Dであるか、或いは置換された場合、I、M、又はSであり；
3位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、G、H、又はKであり；
4位のアミノ酸は、Qであるか、或いは置換された場合、E、G、I、K、R、又はSであり；
5位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、A、D、G、H、S、又はVであり；
6位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、C、D、G、I、M、Q、R、T、又はVであり；
7位のアミノ酸は、Mであるか、或いは置換された場合、C、E、L、P、R、又はTであり；
8位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、F、L、M、又はWであり；
9位のアミノ酸は、Nであるか、或いは置換された場合、A、G、L、Q、R、又はTであり；
10位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、C、D、E、F、H、I、又はWであり；
11位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、M、N、S、V、又はWであり；
12位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、K、L、S、又はVであり；
13位のアミノ酸は、Tであるか、或いは置換された場合、C、L、M、R、又はSであり；
14位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、L、P、T、又はYであり；
15位のアミノ酸は、Lであるか、或いは置換された場合、F、G、I、M、N、又はVであり；
16位のアミノ酸は、Qであるか、或いは置換された場合、H、K、又はRであり；
17位のアミノ酸は、Sであるか、或いは置換された場合、C、F、K、W、又はYであり；
18位のアミノ酸は、Wであるか、或いは置換された場合、K、Q、又はTであり；
19位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、C、G、又はNであり；
20位のアミノ酸は、Fであるか、或いは置換された場合、C、G、L、又はYであり；及び
21位のアミノ酸は、Sであるか、或いは置換された場合、A、F、G、H、又はYである。

斯かるいくつかの実施形態において、19位はIではない。斯かるいくつかの態様において、19位は、C、G、又はNである。

本明細書中で注意したとおり、ドメインX2は構造ドメインであり、そのため、(ドメイン順により)関連する他のドメインを接続し、それらを折り畳むことを可能にする任意のアミノ酸配列を使用できる。必要とされる長さは、産生されるタンパク質の構造に依存するので、8アミノ酸以上の長さであり得、そして、いくつかの態様において、19アミノ酸以上の長さである。斯かるいくつかの態様において、X2は、長さが200、100又は50アミノ酸以下である。IL-2模倣体に関して本明細書中に提供されるいずれかの実施形態において、X2は、KDEAEKAKRMKEWMKRIKT(配列番号7)と、その長さに沿って、少なくとも20%、27%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、IL-2模倣体が挙げられ、ここで、X2は、KDEAEKAKRMKEWMKRIKT(配列番号7)と、その長さに沿って、少なくとも20%、27%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここで：
1位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、A、H、L、M、R、S、又はVであり；
2位のアミノ酸は、Dであるか、或いは置換された場合、A、E、Q、R、S、T、V、W、又はYであり；
3位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、C、G、K、L、N、Q、R、又はWであり；
4位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、F、G、N、S、T、V、又はYであり；
5位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、A、G、I、M、R、V、又はCであり；
6位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、C、E、L、N、R、又はVであり；
7位のアミノ酸は、Aであるか、或いは置換された場合、C、E、I、L、S、T、V、又はWであり；
8位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、H、L、M、S、T、W、又はYであり；
9位のアミノ酸は、Rであるか、或いは置換された場合、A、I、L、M、Q、又はSであり；
10位のアミノ酸は、Mであるか、或いは置換された場合、A、I、S、W、又はYであり；
11位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、C、I、L、S、又はVであり；
12位のアミノ酸は、Eであるか、或いは置換された場合、C、K、L、P、Q、R、又はTであり；
13位のアミノ酸は、Wであるか、或いは置換された場合、A、D、H、又はNであり；
14位のアミノ酸は、Mであるか、或いは置換された場合、A、C、G、I、L、S、T、又はVであり；
15位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、A、E、G、I、L、M、R、又はVであり；
16位のアミノ酸は、Rであるか、或いは置換された場合、G、H、L、S、T、V、又はCであり；
17位のアミノ酸は、Iであるか、或いは置換された場合、A、L、又はVであり；
18位のアミノ酸は、Kであるか、或いは置換された場合、A、C、D、E、G、H、I、M、又はSであり；及び
19位のアミノ酸は、Tであるか、或いは置換された場合、D、E、G、L、N、又はVである。

本発明の例示的なIL-2受容体作動薬は、配列番号8又は配列番号9に規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体である。配列番号8は、Silva et al., Nature 2019 Jan;565(7738):186-191に記載のNeo-2/15タンパク質のアミノ酸配列である。配列番号9は、リンカーアミノ酸が任意選択であり、かつ、存在する場合、そのリンカーの各アミノ酸残基が任意の天然又は非天然アミノ酸を含み得ることを除いて、配列番号8と同一配列である。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーは、すべての天然アミノ酸を含む。いくつかの態様において、アミノ酸リンカーは、1若しくは複数の非天然アミノ酸(例えば、1～3、1～2、又は1つの非天然アミノ酸)を含む。リンカーアミノ酸は、標識Xによって規定されて、かつ、下線を引かれる。例示的な実施形態において、アミノ酸は天然アミノ酸である。アミノ酸リンカーは、存在する場合、ドメインを接続する。アミノ酸リンカーは、用途に適切であると考えられる任意の長さのものであり得る。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号8又は9から選択されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられ、ここで、次のもの：7位はIであり、8位はT又はMであり、11位はEであり、14位はKであり、18位はSであり、33位はQであり、36位はRであり、37位はFであり、39位はKであり、40位はRであり、43位はRであり、44位はNであり、46位はWであり、及び47位はGである、のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14個のすべてが当てはまらない。さらなる実施形態において、次のもの：68位はIであり、及び98位はFである、のうちの一方又は両方が当てはまらない。熟練した開業医は、先に参照した位置が配列番号8に関することを理解する。配列番号9に関して、螺旋ドメインを分離するリンカーの長さが配列番号8と比較して異なっているとき、残基の付番は、それに応じて変更される。よって、配列番号9に関して、7位に対する言及は、配列番号8の7位に相当する配列番号9における位置を意味する。

本明細書中に記載したIL-2模倣体のシステイン残基は、ポリペプチドへの部分(例えば、PEG含有部分など水安定化(water stabilizing)部分などの安定性部分)の取り付けに使用できる。システイン部分は、X1、X2、X3、X4又は任意選択のリンカーのうちのいずれかであり得る。いくつかの態様において、システイン部分はX2にある。例えば、本発明の例示的なIL-2受容体作動薬は、Neo-2/15ポリペプチドであり、ここで、Neo-2/15のアミノ酸は、それへの部分(例えば、PEG含有部分などの水安定化部分などの安定性部分)の取り付けのためのシステイン残基に変異している。いくつかの態様において、本発明の例示的なIL-2受容体作動薬はNeo-2/15ポリペプチドであり、かつ、配列番号8に対する50、53、62、69、73、82、56、58、59、66、77、又は85位の1若しくは複数のアミノ酸は、それへの部分(例えば、PEG含有部分)の取り付けのためのシステイン残基に変異している。

従って、さらなる実施形態において、本発明の例示的なIL-2受容体作動薬は、配列番号8又は9完全長のアミノ酸配列と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のポリペプチドを含むが、次の突然変異：
D56C；
K58C；
D59C；
R66C；
T77C；
E85C；
R50C；
E53C；
E62C；
E69C；
R73C；及び/又は
E82C、
のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、又は12個すべてが存在する(付番は配列番号8に準拠する)。

本発明の例示的なIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33の任意のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、又は100%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。下線を引いた残基はリンカーであり、そして、リンカーの任意選択の及び各残基は、存在する場合、任意のアミノ酸を含み得る。以下の各変異体に関して、2種類の配列番号：第一の配列番号：示されたリンカーを伴った配列を列挙するもの、及び第二の配列番号：(配列番号9の形式に類似した)任意選択かつ可変のものとしてリンカー位置を含むもの、が提供される。リンカーアミノ酸は、標識Xによって規定され、そして、下線が引かれている。例示的な実施形態において、アミノ酸は天然アミノ酸である。R50C(又は列挙した突然変異)と同等な位置がリンカーの長さに依存して指定された位置に組み込まれることが、理解される。X1、X2、X3、及びX4ドメインに関するものを含めた、本明細書中に提供された教示は、当該技術分野の技能に伴って、当該方法でIL-2受容体作動薬として使用するための配列番号10～33に規定されるアミノ酸配列の変異体を含むIL-2模倣体を作製するのに使用できる。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも75%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも85%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも95%同一のポリペプチドを含むIL-2模倣体が挙げられる。本発明のIL-2受容体作動薬としては、配列番号10～33のいずれか1つに規定されるアミノ酸配列を含むIL-2模倣体が挙げられる。説明に役立つ斯かる実施形態において、変異システインが存在し(すなわち、D56C；K58C；D59C；R66C；T77C；E85C；R50C、E53C；E62C；E69C；R73C；及び/又はE82C)、そして、本明細書中に記載されるとき、安定性部分、例えば、PEG含有部分などの水安定化部分など、に任意選択で取り付けられる。任意のこれらの実施形態において、ポリペプチドはIL-2模倣体であり得、ここで、次のもの：7位はIであり、8位はT又はMであり、11位はEであり、14位はKであり、18位はSであり、33位はQであり、36位はRであり、37位はFであり、39位はKであり、40位はRであり、43位はRであり、44位はNであり、46位はWであり、及び47位はGである、のうちの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14個のすべてが当てはまらない(付番は配列番号8に準拠する)。さらなる実施形態において、次のもの：68位はIであり、及び98位はFである、のうちの一方又は両方が当てはまらない(付番は配列番号8に準拠する)。

IL-2模倣体に関して典型的には、次のもの：(i) X1は、ヒトIL-2受容体のβ及びγサブユニットに結合し；(ii) X2は、ヒトIL-2受容体に結合せず；(iii) X3は、ヒトIL-2受容体のβサブユニットに結合し；(iv) X4は、ヒトIL-2受容体のγサブユニットに結合し；(v) IL-2模倣体はヒト又はマウスIL-2受容体のαサブユニットに結合しない、のうちの1若しくは複数が当てはまる。受容体への結合は、例えば、生物学的関連濃度にて表面プラズモン共鳴法によって測定した場合に、特異的結合であり得る。いくつかの態様において、IL-2受容体βγcヘテロ二量体に結合する本明細書中に開示した任意の実施形態又は実施形態の組み合わせのIL-2模倣体ポリペプチドは、200nm以下、100nm以下、50nM以下、又は25nM以下の結合親和力でそのようになる。

本明細書中に記載したポリペプチド及びペプチドドメインは、N末端、C末端、又はその両方に追加の残基を含み得る。これらの追加の残基は、参照ポリペプチドに対する本開示のポリペプチド又はペプチドドメインのパーセント同一性の決定には含まれない。そのような残基は、限定されないが、検出タグ(すなわち、蛍光タンパク質、抗体エピトープタグなど)、アダプター、精製の目的に好適なリガンド(Hisタグなど)、ポリペプチドなどに機能性を付加する他のペプチドドメインを含む、意図された用途に好適な任意の残基であり得る。そのような基の結合に好適な残基は、システイン、リジン又はp-アセチルフェニルアラニン残基を含み得るか、又は米国特許第9,676,871号及び同第9,777,070号に開示されるトランスグルタミナーゼとの反応に好適なアミノ酸タグなどのタグであり得る。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、ジスルフィド結合を含まないか又は少なくとも1つのジスルフィド結合(すなわち、1、2、3、4又はそれ以上のジスルフィド結合)を有するIL-2模倣体が挙げられる。2つの異なるヘリックスを連結するジスルフィド結合などの、任意の好適なジスルフィド結合が使用され得る。一実施形態において、ジスルフィド結合としては、ヘリックス1(X1)とヘリックス4(X4)とを連結するジスルフィド結合が挙げられる。ジスルフィド結合は、例えば、2つのドメインを一緒に連結するジスルフィド結合が存在しない実質的に類似したポリペプチドと比較して、ポリペプチドの熱的安定性を改善し得る。いくつかの態様において、追加の残基は、ジスルフィド結合を可能にするように加えられ得る。例えば、一態様において、neoleukin-2/15のN及びC末端は、末端P及びS残基を取り除いた後に、それぞれN及びC末端に関して、タンパク質全体(付加配列CNSN(配列番号27)及びNFQC(配列番号28))を包含する単一のジスルフィド主要部分の導入を可能にするように再構築された。
コンジュゲートと融合

天然IL-2ポリペプチド、IL-2活性変異体、及びIL-2模倣体を含めた、本発明のIL-2受容体作動薬は、他の化合物に連結されて、インビボにおける延長された半減期を促進し得る。任意の斯かる化合物は、それらがヒト対象に投与できるくらい安全であれば、本発明に使用できる。例としては、アルブミン、ペグ化(1若しくは複数のポリエチレングリコール鎖の取り付け)、HES化、PAS化、グリコシル化反応、Fc融合又は脱免疫化変異体が挙げられる。斯かる連結は、共有結合であっても、又は非共有結合であってもよい。そのことに関して、単独のIL-2ポリペプチドと比較して、循環半減期を延長する水溶性ポリマー(例えば、PEG)との化学的コンジュゲーションを可能にするアミノ酸置換を有するIL-2変異体を開発した。「PEG」は、エチレングリコールの水溶性ポリマーであるポリ(エチレングリコール)分子である。PEGは、異なったサイズで入手でき、そしてまた、
タンパク質への共有結合的コンジュゲーションを可能にする化学反応基で誘導体化される化学活性化形態で商業的に入手することもできる。線形PEGは、5,000ダルトン、10,000ダルトン、20,000ダルトン、30,000ダルトン、及び40,000ダルトンの重量平均分子量のPEGポリマーなどの様々な分子量で製造される。分岐PEGポリマーもまた開発された。一般的に使用される活性化PEGポリマーは、N-ヒドロキシスクシンイミド基(リジン残基などの第一級アミンやタンパク質N末端へのコンジュゲーションのため)、アルデヒド基(N末端へのコンジュゲーションのため)、及びマレイミド又はヨードアセトアミド基(システイン残基などのチオールに連結するため)を用いて誘導体化されたものである。PEGへのコンジュゲーションのためのIL-2部分を設計する方法は、当該技術分野で知られている。例えば、ポリエチレングリコール(「PEG」)含有部分付加は、ポリペプチドのシステイン残基への、マレイミド基に連結されたPEG基(例えば、「PEG-MAL」)の取り付けを含んでもよい。PEG-MALの好適な例としては、これだけに限定されるものではないが、メトキシPEG-MAL 5kD；メトキシPEG-MAL 20kD；メトキシ(PEG)2-MAL 40kD；メトキシPEG(MAL)2 5kD；メトキシPEG(MAL)2 20kD；メトキシPEG(MAL)2 40kD；又は任意のそれらの組み合わせ、が挙げられる。米国特許第.8,148,109号もまた参照のこと。当業者は、本発明における使用のための長時間作用型IL-2受容体作動薬を設計するために本明細書中に記載した方法又は代替法を使用できる。

本発明の例示的なペグ化IL-2受容体作動薬としては、配列番号20(NEO2-15E62C)に規定されるアミノ酸配列を含むIL-2模倣体が挙げられ、ここで、62位のシステインがPEG化される。ポリエチレン基は、例えば、マレイミドを用いること、を含めて、任意の好適な取り付け化学反応を介して取り付けできる(例えば、マレイミド修飾PEG(PEG-MAL) 5kD；PEG-MAL 20kD；又はPEG-MAL 40kD)。いくつかの実施形態において、ペグ化は、PEG-MAL 30kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、ペグ化は、修飾PEG-MAL 40kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、配列番号20のペグ化ペプチド内のPEGユニットの反復に関する範囲は、約800～1000である。いくつかの実施形態において、配列番号20のペグ化ペプチド内のPEGユニットの平均反復数は約850～950である。当業者は、PEG部分が直鎖であり得るか又は分岐であり得ることを理解する。

本発明の例示的なペグ化IL-2受容体作動薬としては、配列番号30(NEO2-15 E82C)に規定されるアミノ酸配列を含むIL-2模倣体が挙げられ、ここで、82位のシステインがPEG化される。ポリエチレン基は、例えば、マレイミド修飾PEG(PEG-MAL) 5kD；PEG-MAL 20kD；又はPEG-MAL 40kDを用いること、を含めて、任意の好適な取り付け化学反応を介して取り付けできる。いくつかの実施形態において、ペグ化は、PEG-MAL 30kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、ペグ化は、修飾PEG-MAL 40kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、配列番号30のペグ化ペプチド内のPEGユニットの反復に関する範囲は、約800～1000である。いくつかの実施形態において、配列番号30のペグ化ペプチド内のPEGユニットの平均反復数は約850～950である。当業者は、PEG部分が直鎖であり得るか又は分岐であり得ることを理解する。

本発明の例示的なペグ化IL-2受容体作動薬としては、配列番号24(NEO2-15 E69C)に規定されるアミノ酸配列を含むIL-2模倣体が挙げられ、ここで、69位のシステインがPEG化される。ポリエチレン基は、例えば、マレイミド修飾PEG(例えば、PEG-MAL 5kD；PEG-MAL 20kD；又はPEG-MAL 40kD)を用いること、を含めて、任意の好適な取り付け化学反応を介して取り付けできる。いくつかの実施形態において、ペグ化は、PEG-MAL 30kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、ペグ化は、修飾PEG-MAL 40kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、配列番号24のペグ化ペプチド内のPEGユニットの反復に関する範囲は、約800～1000である。いくつかの実施形態において、配列番号24のペグ化ペプチド内のPEGユニットの平均反復数は約850～950である。当業者は、PEG部分が直鎖であり得るか又は分岐であり得ることを理解する。

本発明の例示的なペグ化IL-2受容体作動薬としては、配列番号26(NEO2-15 R73C)に規定されるアミノ酸配列を含むIL-2模倣体が挙げられ、ここで、73位のシステインがPEG化される。ポリエチレン基は、例えば、マレイミド修飾PEG(例えば、PEG-MAL 5kD；PEG-MAL 20kD；又はPEG-MAL 40kD)を用いること、を含めて、任意の好適な取り付け化学反応を介して取り付けできる。いくつかの実施形態において、ペグ化は、PEG-MAL 30kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、ペグ化は、修飾PEG-MAL 40kDを用いたものである。いくつかの実施形態において、配列番号26のペグ化ペプチド内のPEGユニットの反復に関する範囲は、約800～1000である。いくつかの実施形態において、配列番号26のペグ化ペプチド内のPEGユニットの平均反復数は約850～950である。当業者は、PEG部分が直鎖であり得るか又は分岐であり得ることを理解する。

本発明のIL-2受容体作動薬としては、例えば、IL-2受容体作動薬-Fc融合タンパク質、IL-2受容体作動薬-CD25融合タンパク質、IL-2受容体作動薬-標的ドメイン融合タンパク質又はIL-2受容体作動薬-標的ドメインコンジュゲートを含めた、IL-2受容体作動薬融合タンパク質及びIL-2受容体作動薬コンジュゲートが挙げられる。標的ドメインは、着目の標的に結合するポリペプチドドメイン又は小分子である。標的ドメインは、ポリペプチドに共有結合しても、又は非共有結合してもよい。標的ドメインがポリペプチドに非共有結合している実施形態において、ストレプトアビジン－ビオチンリンカーを含むがこれに限定されない、そのような非共有結合のための任意の好適な手段を使用することができる。別の実施形態において、標的ドメインは、存在する場合、IL-受容体作動薬との翻訳融合物である。この実施形態において、ポリペプチド及び標的ドメインは、翻訳融合物において互いに直接隣接してもよく、又は意図された目的に好適なポリペプチドリンカーによって連結されてもよい。このような例示的なリンカーとしては、これだけに限定されるものではないが、WO2016/178905、WO2018/153865、及びWO2018/170179に開示されているものが挙げられる。

標的ドメインは、例えば、細胞表面タンパク質又は免疫細胞表面マーカーに結合できる。細胞表面タンパク質に関して、細胞は、好適な標的ドメインによって結合され得る表面タンパク質を含む、目的とする任意の細胞型であり得る。一実施形態において、細胞表面タンパク質は、腫瘍細胞、腫瘍血管成分細胞、腫瘍微小環境細胞(例えば、線維芽細胞、浸潤性免疫細胞、又は間質要素)、他の癌細胞及び免疫細胞(CD8＋T細胞、制御性T細胞、樹状細胞、NK細胞、又はマクロファージを含むが、これらに限定されない)からなる群から選択される細胞の表面に存在する。細胞表面タンパク質が、腫瘍細胞、血管成分細胞、腫瘍微小環境細胞(例えば、線維芽細胞、浸潤性免疫細胞、又は間質要素)の表面に存在する場合、任意の好適な腫瘍細胞、血管成分細胞、又は腫瘍微小環境細胞の表面マーカーを、標的とし得る。

別の実施形態において、標的ドメインは、免疫細胞表面マーカーに結合できる。この実施形態において、標的は、任意の好適な免疫細胞の細胞表面タンパク質であり、該細胞は、CD8＋T細胞、制御性T細胞、樹状細胞、NK細胞又はマクロファージを含むが、これらに限定されない。標的ドメインは、任意の好適な免疫細胞表面マーカーを標的とし得る。

標的ドメインがポリペプチドであるとき、その標的ドメインは、1若しくは複数の着目の標的に結合し、かつ、IL-2ポリペプチドに取り付けられ得る又はIL-2模倣体を含めたIL-2ポリペプチドに関連し得る、好適なポリペプチドであり得る。非限定的な実施形態において、標的ドメインは、scFv、F(ab)、F(ab’)₂、B細胞受容体(BCR)、DARPin、アフィボディ、モノボディ、ナノボディ、ダイアボディ、抗体(単一特異性又は二重特異性の抗体を含む)を含み得るが、これらに限定されず、細胞標的化オリゴペプチドが、RGDインテグリン結合ペプチド、デノボ設計されたバインダー、アプタマー、二環ペプチド、コノトキシン、葉酸などの小分子、及び細胞表面に結合するウイルスを含むが、これらに限定されるものではない。IL-2融合タンパク質及びコンジュゲートを作製する方法は、当該技術分野で知られているので、本明細書中で詳細に考察しない。

いくつかの態様において、本発明のIL-2受容体作動薬は、標的化剤などの部分に融合又は結合される。いくつかの態様において、標的化剤は抗体である。他の態様において、標的化剤は、抗体以外の部分である。いくつかの実施形態において、IL-2受容体作動薬は、標的化されない。いくつかの態様において、本発明のIL-2受容体作動薬は、融合タンパク質である。他の態様において、本発明のIL-2受容体作動薬は、融合タンパク質でない。いくつかの態様において、本発明のIL-2受容体作動薬は、標的化剤に結合されるが、その標的化剤は線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)に対して向けられていない。
疾患状態

本開示は、とりわけ、本発明のIL-2受容体作動薬を対象に投与することによって対象の免疫応答を調節する方法を提供する。

本明細書中に使用される場合、調節された「免疫応答」は、刺激に対する、例えば、B細胞、T細胞(CD4又はCD8)、制御性T細胞、抗原提示細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、NKT細胞、NK細胞、好塩基球、好酸球、又は好中球などの免疫系の細胞による応答を指す。いくつかの実施形態において、応答は、特定の抗原に特異的であり(「抗原特異反応」)、それらの抗原特異的受容体を介してCD4T細胞、CD8T細胞、又はB細胞による応答を指す。いくつかの実施形態において、免疫応答は、例えば、CD4+応答又はCD8+応答などのT細胞応答である。これらの細胞による斯かる応答としては、例えば、細胞毒性、増殖、サイトカイン若しくはケモカイン産生、トラフィッキング、又は食作用を挙げることができ、応答を受ける免疫細胞の性質に依存し得る。本明細書中に記載した組成物及び方法のいくつかの実施形態において、調節される免疫応答は、T細胞に媒介される。免疫応答を計測する方法は、当該技術分野で知られおり、例えば、IL-6、IL-12及びTNF-αなどの炎症誘発性サイトカイン、並びにCD80、CD86、ケモカイン受容体などの共刺激分子を含む。

更なる態様において、本開示は、それを必要としている対象に本明細書中に記載した投薬レジメンを投与することを含む、癌を処置する方法を提供する。本明細書で使用される場合、「処置する」又は「処置すること」は、以下のうちの１つ以上を達成することを意味する。(a) 対象における腫瘍及び／又は転移のサイズ又は体積を低減する、(b) 対象における腫瘍及び／又は転移のサイズ又は体積の増加を制限する、(c) 生存率の向上する、(d) 癌に関連する症状の重症度を軽減する、(e) 癌に関連する症状の発生を制限又は予防する、(f) 癌に関連する症状の悪化を抑制する。処置的有効量又は処置的に有効な用量レベルという用語は、(例えば、患者を処置することによる)患者に対する利益を示すのに十分な量又は用量レベルである。

その方法は、任意の好適な癌の発生を処置又は制限するために使用することができ、これだけに限定されるものではないが、結腸癌、黒色腫、腎細胞癌、頭頸部扁平上皮癌、胃癌、尿路上皮癌、ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、膵臓癌、メルケル細胞癌、大腸癌、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、子宮頸癌、及び、マイクロサテライト不安定性、腫瘍遺伝子変異量(tumor mutational burden)、PD-L１発現レベル、又はイムノスコアアッセイ(Society for Immunotherapy of Cancerによって開発された)などの診断検査で選択された任意の腫瘍タイプ、が含まれる。いくつかの態様において、処置される癌は、固形腫瘍癌である。他の実施形態において、癌は血液悪性腫瘍である。

IL-2受容体作動薬は、1若しくは複数の他の予防薬又は処置薬と一緒に(すなわち、組み合わせて又は別々に)投与され得、これだけに限定されるものではないが、腫瘍切除術、化学療法、放射線療法、免疫療法などが挙げられる。
医薬組成物

医薬組成物は、患者への組成物の投与によってIL-2受容体作動薬が生物学的に利用可能になるように処方される。IL-2受容体作動薬は、溶液、懸濁液、乳濁液、マイクロ粒子、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル剤、液体を含むカプセル剤、散剤、徐放性製剤、坐剤、乳濁液、エアゾール、スプレー、懸濁液の形態、又は使用に好適なその他の形態をとることができる。好適な医薬担体の他の例は、E. W. Martinによって「Remington's Pharmaceutical Sciences」に記載されている。医薬組成物中の(単数若しくは複数の)活性成分の最適投薬量は、種々の要因に依存することは当業者には明白である。関連する要因としては、これだけに限定されるものではないが、以下の：動物のタイプ(例えば、ヒト)、IL-2受容体作動薬の特定の形態、投与の様式、及び利用される化合物、が挙げられる。

医薬として許容される担体又はビヒクルは、組成物が、例えば、錠剤又は粉末形態であるように、粒子であり得る。(単数若しくは複数の)担体は液体であり得、組成物は、例えば、経口シロップ又は注射用の液体である。加えて、(単数若しくは複数の)担体は、例えば、吸入投与に有用なエアゾール組成物を提供するために、ガス又は粒状であり得る。

経口投与が意図されるとき、IL-2受容体作動薬は、好ましくは固形又は液体であり、ここで、半固体、半液体、懸濁液、及びゲル形態が、本明細書中で固形又は液体のいずれかとみなされる形態の範囲内に含まれる。経口投与のための固体組成物として、その組成物は、散剤、顆粒剤、圧縮錠、丸薬、カプセル剤、チューインガム、ウエハー又は同様の形態に処方され得る。斯かる固体組成物は、典型的には、1若しくは複数の不活性な希釈剤を含んでいる。加えて、次のもの：カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、又はゼラチンなどの結合剤；デンプン、ラクトース若しくはデキストリンなどの賦形剤、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Primogel、トウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はSterotexなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロース又はサッカリンなどの甘味剤、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバーなどの着香料、並びに着色剤、のうちの1若しくは複数が提供され得る。

組成物がカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形態であるとき、それは、上記のタイプの材料、例えば、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン又は脂肪オイルなどの液体担体に加えて含まれ得る。その組成物は、液体の形態、例えば、エリキシル剤、シロップ、溶液、乳濁液又は懸濁液で存在し得る。その液体は、経口投与又は注射による送達に有用であり得る。経口投与が意図されるとき、組成物は、甘味剤、保存料、染料/着色料、及び調味料のうちの1若しくは複数を含み得る。注射による投与のための組成物中に、１種以上の界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝剤、安定剤、及び等張剤を含めることもできる。腸溶コーティングを伴うものを含めた、遅延放出カプセル剤もまた企図される。

液体組成物は、それらが溶液、懸濁液、又は他の同様な型であるかに関わらず、以下の：滅菌希釈液、例えば、注射用の水、塩類溶液、好ましくは、生理食塩水溶液、リンガー液、塩化ナトリウム等張液、固定油、例えば、溶媒又は懸濁媒体として働き得る合成モノ-又はジグリセリド、ポリプロピレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコール、又は他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩；及び等張性の調整のための剤、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロース、のうちの1若しくは複数を含むこともできる。非経口組成物は、ガラス製、プラスチック製、又は他の材料製のアンプル、使い捨てシリンジ、又は複数用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は例示的なアジュバントである。注射用組成物は好ましくは滅菌されている。

本開示は、本開示の作動薬のうちの1若しくは複数及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。「担体」という用語は、IL2受容体作動薬がそれと共に投与される希釈剤、アジュバント又は賦形剤を指す。医薬組成物は、例えば、本開示のIL-2受容体作動薬に加えて、(a)凍結乾燥保護剤(lyoprotectant)、(b)界面活性剤、(c)増量剤、(d)張度調整剤、(e)安定剤、(f)防腐剤、及び/又は(g)緩衝剤を含み得る。

一部の実施形態において、医薬組成物中の緩衝剤は、トリス緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、ホスフェート緩衝剤、シトレート緩衝剤、又はアセテート緩衝剤である。医薬組成物は、凍結乾燥保護剤、例えば、スクロース、ソルビトール、又はトレハロースも含み得る。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、防腐剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、ベンゼトニウム、クロロヘキシジン、フェノール、m-クレゾール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、o-クレゾール、p-クレゾール、クロロクレゾール、硝酸フェニル水銀、チメロサール、安息香酸、及びこれらの様々な混合物を含む。他の実施形態において、医薬組成物は、グリシンのような増量剤を含む。さらに他の実施形態において、医薬組成物は、界面活性剤、例えば、ポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-80、ポリソルベート-85、ポロキサマー-188、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、トリラウリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、又はこれらの組み合わせを含む。医薬組成物はまた、張度調整剤、例えば、製剤をヒトの血液と実質的に等張又は等浸透圧にする化合物も含み得る。例示的な張度調整剤には、スクロース、ソルビトール、グリシン、メチオニン、マンニトール、デキストロース、イノシトール、塩化ナトリウム、アルギニン、及び塩酸アルギニンが含まれる。他の実施形態において、医薬組成物は、安定剤、例えば、目的のタンパク質と組み合わせると、凍結乾燥又は液体の形態での目的のタンパク質の化学的不安定性及び/又は物理的不安定性を実質的に防止又は低減する分子、をさらに含む。例示的な安定剤には、スクロース、ソルビトール、グリシン、イノシトール、塩化ナトリウム、メチオニン、アルギニン、及び塩酸アルギニンが含まれる。

IL-2受容体作動薬は医薬組成物中の唯一の活性剤であり得るか、又は組成物は、用途に適した1つ以上の他の活性剤をさらに含み得る。
処置レジメン

Il-2受容体作動薬は、任意の従来法によって、例えば、輸液若しくはボーラス注入によって、上皮若しくは粘膜皮膚の内壁(例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘液など)を通した吸収によって投与できる。投与は、全身的であっても、又は局所的であってもよい。典型的な投与経路としては、これだけに限定されるものではないが、経口、局所、非経口、舌下、直腸、腟、眼、腫瘍内、及び鼻腔内が挙げられる。非経口投与としては、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射又は輸液技術が挙げられる。一態様において、IL-2受容体作動薬は、非経口的に投与される。更に別の態様において、IL-2受容体作動薬は、静脈内又は皮下に投与される。特定の実施形態において、処置を必要としている領域に局所的にIL-2受容体作動薬を投与することが望まれ得る。一実施形態において、投与は、癌、腫瘍又は新生物若しくは新生物発生前の組織の部位(又はかつての部位)における直接注入によってもよい。別の実施形態において、投与は、自己免疫疾患の発現部位(又はかつての部位)における直接注入であってもよい。局所的投与の例としては、カテーテルを介した輸液、例えば、嚢内輸液である。

本発明の方法は、1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬の投与、並びに目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の投与を提供する。対象へのプライミング用量と目標用量の投与前に、対象に投与されるべきプライミング用量と目標用量が選択される。本明細書で注意したように、プライミング用量は、目標用量と比較して、低減されている、又は言い換えれば、目標用量は、プライミング用量より常に大きい。

プライミング用量又はプライミング用量レベルという用語は、本明細書中に使用される場合、それぞれの個々のプライミング用量を指し、個々のプライミング用量の合計ではないことに気付くことが重要である。例えば、0.5μg/kgの2つのプライミング用量が対象に投与される場合、プライミング用量又はプライミング用量レベルは、1μg/kgではなく、第一のプライミング用量のための0.5μg/kgと第二のプライミング用量のための0.5μg/kgである。同様に0.5μg/kgと1μg/kgのプライミング用量が対象に投与される場合、プライミング用量又はプライミング用量レベルは、1.5μg/kgではなく、第一のプライミング用量のための0.5μg/kgと第二のプライミング用量のための1μg/kgである。いくつかの態様において、選択及び投与されるべき目標用量レベル及びプライミング用量レベルは、処置的に有効な用量レベルである。いくつかの態様において、目標用量レベルは、最大耐量(MTD)である。いくつかの態様において、最大処置効果のために、プライミング用量及び目標用量がMTDで提供され、そして、MTDが開始用量及び後続の送達用量と異なることを念頭に置いておく。いくつかの態様において、1種類のプライミング用量が対象に投与される。他の態様において、1～6、1～5、1～4、1～3、又は2種類のプライミング用量が対象に投与される。

いくつかの態様において、目標用量レベルは、最初のプライミング用量レベルより少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、又は少なくとも75%大きい。いくつかの態様において、目標用量レベルは、最初のプライミング用量レベルの2倍又は2倍超(例えば3倍)である。いくつかの態様において、目標用量レベルは、最初のプライミング用量レベルより少なくとも4～6倍大きい。いくつかの態様において、目標用量レベルは、最初のプライミング用量レベルより2倍以下又は3倍以下である。他の態様において、目標用量は、それぞれのプライミング用量レベルより少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、又は少なくとも75%高いレベルである。いくつかの態様において、目標用量レベルは、それぞれのプライミング用量レベルの2倍又は2倍超である。いくつかの態様において、目標用量レベルは、それぞれのプライミング用量レベルの2倍以下又は3倍以下である。

当該方法は、対象に目標用量レベルでの投与前に1種類のプライミング用量のみを与えられる実施形態を企図する。他の態様において、対象は、目標用量レベルでの投与前に2種類以上のプライミング用量が与えられる。いくつかの態様において、2種類以上のプライミング用量が、1～10、1～5又は1～3日間の期間にわたって投与される。いくつかの態様において、2種類以上のプライミング用量は、各用量の間に少なくとも7日間とって投与される。いくつかの態様において、2種類以上のプライミング用量は、各用量の間に少なくとも20日間とって投与される。プライミング用量レベルは、実質的に同じであっても、又はそれらは変更されてもよい。例えば、いくつかの態様において、2種類以上のプライミング用量は、徐々に高くなる用量レベルにて投与される。他の態様において、最初のプライミング用量は、後のプライミング用量より高い用量レベルである。目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与に続いて、後続の用量は目標用量レベルにて投与され得る。いくつかの態様において、少なくとも2～8回の後続の用量が、約7～約21日間の間隔で目標用量レベルにて投与される。いくつかの態様において、目標用量レベルでの薬物の投与に続いて、維持療法用量が、目標レベルと比較して、低い投薬レベルである、維持療法を対象に受けさせることが望まれ得る。いくつかの態様において、目標用量レベルでの薬物の投与に続いて、維持療法用量が、プライミング用量レベルと比較して、同じ投薬レベル又は低い投薬レベルである、維持療法を対象に受けさせることが望まれ得る。いくつかの態様において、対象での目標用量の投与前に、十分な時間により対象におけるリンパ球産生の増大が可能になる。

特定の障害又は状態の処置のために有効であるIL-2受容体作動薬の量は、その障害又は状態の性質に依存し、本願の教示と組み合わせて、標準的な臨床的技術によって決定することができる。加えて、インビトロ又はインビボアッセイが、最適な用量範囲の同定を補助するために任意に利用できる。利用できる正確な用量は、投与の経路、及び疾患又は障害の重篤度にも依存し、医師の判断及び各患者の状況に従って、本明細書中に記載した教示、特に、IL-2受容体作動薬の1若しくは複数のプライミング用量を対象に投与することによって、第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイルを有するであろう用量レベルが続いて投与され得るという教示を使用して、決定されるべきである。いくつかの態様において、プライミング用量は、0.01μg/kg～1mg/kg、0.1μg/kg～10μg/kg、0.1μg/kg～5μg/kg、0.1μg/kg～2μg/kg、0.5μg/kg～20μg/kg、0.5μg/kg～10μg/kg、又は0.5μg/kg～3μg/kgである。いくつかの態様において、目標用量レベルは、0.1μg/kg～2mg/kg、0.2μg/kg～1mg/kg、0.2μg/kg～50μg/kg、0.2μg/kg～20μg/kg、0.2μg/kg～50μg/kg、0.2μg/kg～10μg/kg、0.2μg/kg～8μg/kg、1μg/kg～50μg/kg、1.5μg/kg～30μg/kg、2μg/kg～35μg/kg、又は4μg/kg～20μg/kgである。いくつかの態様において、プライミング用量は、0.01μg/kg～1mg/kgであり、かつ、目標用量レベルは0.1μg/kg～2mg/kgである。いくつかの態様において、プライミング用量は、0.1μg/kg～10μg/kg、0.1μg/kg～5μg/kg、又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、目標用量レベルは、0.2μg/kg～1mg/kg、0.2μg/kg～50μg/kg、0.2μg/kg～20μg/kg、及び任意のその組み合わせであり、但し、その目標用量はプライミング用量より常にである。いくつかの態様において、プライミング用量は、0.1μg/kg～5μg/kg、又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、目標用量レベルは、0.2μg/kg～1mg/kg、0.2μg/kg～50μg/kg、0.2μg/kg～20μg/kg、0.2μg/kg～10μg/kg、又は0.2μg/kg～8μg/kg及び任意のその組み合わせであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい。他の態様において、プライミング用量は、0.5μg/kg～20μg/kg、0.5μg/kg～10μg/kg、又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、目標用量レベルは、1μg/kg～50μg/kg、又は2μg/kg～35μg/kg及び任意のその組み合わせであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい。他の態様において、プライミング用量は、0.5μg/kg～10μg/kg、又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、目標用量レベルは、1μg/kg～50μg/kg、2μg/kg～35μg/kg、又は4μg/kg～20μg/kg及び任意のその組み合わせであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい。いくつかの態様において、プライミング用量は0.25μg/kg～20μg/kgであり、かつ、目標用量レベルは1.5μg/kg～30μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい。いくつかの態様において、プライミング用量は、0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、及び20μg/kgから成る群から選択される。いくつかの態様において、目標用量レベルは、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、20μg/kg、及び30μg/kgから成る群から選択される。

いくつかの実施形態において、目標用量は1.5μg/kgであり、かつ、0.25μg/kgの1若しくは複数のプライミング用量が、1.5μg/kgの目標用量を投与する前に第一の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、目標用量は3μg/kgであり、かつ、それぞれ0.25μg/kg及び1.5μg/kgのプライミング用量が、3μg/kgの目標用量を投与する前に、第一の2回の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、目標用量は6μg/kgであり、かつ、それぞれ0.25μg/kg、1.5μg/kg、及び3μg/kgのプライミング用量が、6μg/kgの目標用量を投与する前に、第一の3回の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、目標用量は12μg/kgであり、かつ、それぞれ0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、及び6μg/kgのプライミング用量が、20μg/kgの目標用量を投与する前に、第一の4回の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、目標用量は20μg/kgであり、かつ、それぞれ0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、及び12μg/kgのプライミング用量が、20μg/kgの目標用量を投与する前に、第一の5回の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、目標用量は30μg/kgであり、かつ、それぞれ0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、及び20μg/kgのプライミング用量が、30μg/kgの目標用量を投与する前に、第一の6回の投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、1種類のプライミング用量だけが、投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、2種類のプライミング用量が、投薬サイクル中に投与される。いくつかの実施形態において、プライミング及び目標用量は、21日サイクルで投与される。例えば、斯かるいくつかの実施形態において、プライミング用量は、第一の21日サイクルの1日目に投与され、かつ、目標用量は、第二の21日サイクルの1日目に投与される。いくつかの実施形態において、プライミング及び目標用量は、21日サイクルの1及び8日目に投与される。例えば、斯かるいくつかの実施形態において、プライミング用量は、第一の21日サイクルの1及び8日目に投与され、かつ、目標用量は、第二の21日サイクルの1及び8日目に投与される。特に好ましい実施形態において、IL-2受容体作動薬は、本明細書中に記載したペグ化IL-2模倣体である。目標用量及びプライミング用量に関する本明細書中のすべての値に関して、各プライミング用量が、目標用量と比較して、常に低い用量であることは、熟練した開業医に理解される。例えば、プライミング用量が0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、及び20μg/kgから成る群から選択され、かつ、目標用量が1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、20μg/kg、及び30μg/kgから成る群から選択される実施形態において、目標用量が1.5μg/kgである場合、プライミング用量は0.25μg/kgである。プライミング用量は、1若しくは複数回投与され得る。同様に、目標用量が20μg/kgである場合、プライミング用量は、0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、又は12μg/kgから選択され得る。プライミング用量は、1若しくは複数回投与され得る。例えば、12μg/kgのプライミング用量は、20μg/kgの目標用量の前に2回投与される。

いくつかの態様において、目標用量レベル及びプライミング用量レベルは、処置的に有効な用量レベルになる。いくつかの態様において、目標用量レベルは最大耐量(MTD)である。斯かるいくつかの実施形態において、少なくとも1つのプライミング用量が、最大耐量にて提供され、そして、MTDが開始用量と後続の送達用量と異なることを念頭に置いておく。他の実施形態において、プライミング用量はMTDを下回る。

例示的なIL-2受容体作動薬としては、例えば、ベンペガルデスロイキン、MDNA109、THOR-707、RO6874281及び本明細書中に記載したIL-2模倣体(そのコンジュゲート、融合及び標的化バージョンを含む)が挙げられる。ベンペガルデスロイキン(NKTR-214とも称される)は、平均して6本の放出可能なポリエチレングリコール鎖に取り付けられたヒト組み換えIL-2であり、ベンペガルデスロイキンの総称を有する。THOR-707は、IL-2受容体α鎖の遮断関与を妨げるように設計された、1つの特定部位にてペグ化された組み換えヒトIL-2の変異体である。ALKS-4230(Alkermes)は、環状置換したIL-2及びIL-2受容体αの細胞外部分を含む遺伝子操作された融合タンパク質である。MDNA109(Medicenna)は、IL-2RBへの結合親和力を増強するための数個のアミノ酸置換を含むIL-2のバージョンである。

これらのIL-2受容体作動薬(例えば、ベンペガルデスロイキン、ALKS-4230、MDNA109、IL-2模倣体)、並びに本発明による他のIL-2受容体作動薬の投薬方法は、例えば、より高い目標用量の投与前に、IL-2受容体作動薬のプライミング用量を対象に投与することを含むであろう。例えば、プライミング用量レベルは、目標用量の90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%又は10%であり得る。別の形で表すと、例えば、目標用量レベルは、プライミング用量レベルより少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、又は少なくとも75%高くなり得る。

第一のプライミング用量の投与と目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の投与との間のタイミングは、変動し得る。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の投与は、第一のプライミング用量の投与の少なくとも5日、少なくとも6日、又は少なくとも7日後である。他の態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の投与は、第一のプライミング用量の投与の少なくとも7又は少なくとも8日後である。いくつかの態様において、目標用量レベルでの第一のIL-2受容体作動薬の投与は、第一のプライミング用量の投与後、5日目、6日目、7日目、又は8日目である。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与は、第一のプライミング用量の投与後、10日未満、14日未満、21日若しくは22日未満、30日未満、又は63日未満である。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与は、最後のプライミング用量の投与後、10日未満、14日未満、21日若しくは22日未満、30日未満、又は63日未満である。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与は、第一のプライミング用量の投与後、5～21、5～22、5～14、7～21、7～22、7～14、又は7～63日目のうちのいずれか一つである。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与は、最後のプライミング用量の投与後、5～21、5～22、5～14、7～21、7～22、7～14、又は7～63日目である。目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の投与後に、2種類超のIL-2受容体作動薬の用量が対象に投与されるいくつかの実施形態において、同様に、目標用量の投与の間のタイミングも変動し得る。例えば、投与は毎日であっても、又は毎週であってもよい。例えば、投与は、6～12時間毎に1回、2週間毎に1回、3週間毎に1回、4週間毎に1回、5週間毎に1回、6週間毎に1回、7週間毎に1回、又は8週間毎に1回であり得る。一実施形態において、投与は、例えば、21日サイクルの1日目などの3週間毎に1回である。別の実施形態において、例えば、投与は、3週間サイクルの1日目と8日目である。いくつかの態様において、用量は、互いに少なくとも7日間の時間が空いている。いくつかの態様において、用量は、互いに少なくとも8日間の時間が空いている。いくつかの態様において、用量は、互いに少なくとも21日間の時間が空いている。いくつかの態様において、用量は、互いに8日間未満、2週間未満、3週間未満又は4週間未満の時間が空いている。いくつかの態様において、目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与後、2～8回の後続の用量は、7～21日の間隔で目標用量レベルにて投与される。

ベンペガルデスロイキンに関して調査されている現在の投薬は、3週間毎の6μg/kgのIVである。本発明による投薬スケジュールの一例は、1日目の4μg/kgのIV、それに続く、15日目に始まる2週間毎の6μg/kgのIV、又はそれに続く、22日目を始まる3週間毎の8μg/kg；或いは1日目の2μg/kgのIV、それに続く、8日目に始まる1週間毎の4μg/kgのIV、であろう。ALKS-4230に関する現在の投薬は、5回の用量にわたる毎日の6μg/kgのIVである。本発明による投薬スケジュールの一例は、1日目の4μg/kgのIV及び2日目に始まる4回の用量にわたる毎日の8μg/kgのIVであろう。

いくつかの態様において、本明細書で提供する用量レジメンは、他の用量レジメンと比較して、処置に対する対象の応答確率を増大させる。いくつかの態様において、本明細書で提供する用量レジメンは、他の用量レジメンと比較して、(用量制限毒性を含む)対象が有害事象に煩わされる確率を低減する。例示的な比較用量レジメンは、開始及び最初の数カ月の処置を通じて同じ投与用量レベルを使用するものである。斯かる例示的な比較用量レジメンでは、プライミング用量は存在せず、目標用量が処置の開始にて投与される。本明細書中に使用される場合、「有害事象」とは、対象にIL-2受容体作動薬を投与することの有害効果、悪影響、及び/又は望ましくない効果を指す。有害事象は、毒性に対して等級づけされ、そして、様々な毒性等級が存在し、各グレードに関する定義を提供している。斯かる等級で例示は、National Cancer Institute Common Toxicity Criteria version 2.0, the World Health Organization or Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE)スケールの毒性スケールである。一般的に、スケールは、以下の：グレード1＝軽度の副作用；グレード2＝中程度の副作用；グレード3＝重度の副作用；グレード4＝命を脅かす又は支障をきたす副作用；グレード5＝致死、である。重症度のグレード付与は、医師又は他の医療従事者の技能の範疇にある。

許容できない耐容性プロファイルを有する用量レベルは、特定の期間内に許容できない副作用又は明白な毒性を引き起こすものである。例えば、斯かる毒性は、典型的にはグレード3以上(例えば、グレード3又は4)であり、かつ、病院での対症的な処置を必要とし得るが、それらには処置過程にわたって解消できない、かつ、プロトコール処置に従う患者の能力を制限する持続的なグレード2毒性が含まれ得る。臨床医は、特定の用量レベルが許容できない耐容性プロファイルに関連しているかどうかに関して、(毒性のタイプ及び頻度を含めた)データ全体に基づいて決定することができる。

いくつかの態様において、許容できない耐容性プロファイルを有する用量レベルは、最大耐量(MTD)を上回るものである。本発明は、長時間作用型IL-2受容体作動薬に関して、MTDは開始用量と後続の送達用量とが異なることがわかった。最大耐量は、許容できる副作用を伴う最高用量を見つけるまで、人々の様々な群に対して漸増用量を試験することによって、臨床実験において決定される。処置プロトコール、処置される疾患、投薬レジーム及び処置される特定の患者に依存するMTDを付与又は決定することは、熟練した医師の技能レベルの範疇にある。IL-2受容体作動薬の目標用量の前のプライミング用量の投与に関して本明細書中に提供された教示は、IL-2受容体作動薬の耐容性を改善するために使用できる。

いくつかの特定の好ましい実施形態において、IL-2受容体作動薬は、本明細書中に記載したペグ化IL-2模倣体であり、そして、プライミング及び目標用量は、以下のとおりである：
(i) 1若しくは複数のプライミング用量は、0.1μg/kg～10μg/kg、0.1μg/kg～5μg/kg、又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、目標用量は、0.2μg/kg～20μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；
(ii) 1若しくは複数のプライミング用量は、0.1μg/kg～5μg/kg又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、目標用量は、0.2μg/kg～20μg/kg、0.2μg/kg～10μg/kg、又は0.2μg/kg～8μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；
(iii) 1若しくは複数のプライミング用量は、0.5μg/kg～10μg/kg、又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、目標用量は2μg/kg～35μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；
(iv) 1若しくは複数のプライミング用量は、0.5μg/kg～10μg/kg又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、目標用量は2μg/kg～35μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；
(v) 1若しくは複数のプライミング用量は、0.5μg/kg～10μg/kg又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、目標用量は4μg/kg～20μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；
(vi) 1若しくは複数のプライミング用量は0.25μg/kg～20μg/kgであり、かつ、目標用量は1.5μg/kg～30μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい；或いは
(vii) 1若しくは複数のプライミング用量は0.25μg/kg～4.5μg/kgであり、かつ、目標用量は1.5μg/kg～10μg/kgであり、但し、目標用量はプライミング用量より大きい。

いくつかの特定の好ましい実施形態において、IL-2受容体作動薬は、本明細書中に記載したペグ化IL-2模倣体であり、そして、プライミング及び目標用量は、以下のとおりである：
(i) 目標用量は1μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、0.1μg/kg、0.15μg/kg、0.25μg/kg、0.3μg/kg、若しくは0.5μg/kg又はそれらの組み合わせである；
(ii) 目標用量は3μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせである；
(iii) 目標用量は6μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせである；
(iv) 目標用量は12μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせである；
(v) 目標用量は18μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、9μg/kg、4.5μg/kg、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg又はそれらの組み合わせである；
(vi) 目標用量は24μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、12μg/kg、9μg/kg、4.5μg/kg、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg又はそれらの組み合わせである；或いは
(vii) 目標用量は1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、20μg/kg、又は30μg/kgであり、かつ、1若しくは複数のプライミング用量は、0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、及び20μg/kgである(当業者は、目標用量が1.5μg/kgである場合、プライミング用量が1.5μg/kg未満の値から選択されることを理解する)。

特に好ましい投与レジメンは、(a) IL-2受容体作動薬を21日サイクルで提供し、ここで、プライミング用量は第一の21日サイクルの1日目と8日目に投与され、かつ、目標用量は2回以上の後続の21日サイクルの1及び8日目に提供されるか、或いは(b) IL-2受容体作動薬を21日サイクルで提供し、ここで、プライミング用量は第一の21日サイクルの1日目と8日目に投与され、かつ、目標用量レベルは2回以上の後続の21日サイクルの1日目に提供される。例えば、投与は、静脈内注入としてであり得る。

実施例1：CT-26マウス腫瘍モデルにおけるステップ投与
試験物品の第二の用量は、第一の用量に比べて良好に許容される
BALB/cマウスにCT-26細胞を移植した。腫瘍が触診可能になったときに(100mm³)、マウスを群に割り付け、そして、IL-2受容体作動薬(PEG化E62C NEO2-15)を用いた処置を始めた。試験10日目に、マウスに150、300、600、又は1200μg/kgの試験物品を投与した。試験17日目に、第二の用量を生き残っているマウスに投与した。体重及び腫瘍体積を、すべての生き残っている動物に対して毎週2回観察した。腫瘍体積が3000mm³に達したとき、又は15%超の体重減少を観察したとき、マウスを屠殺した。最大毒性の点は、この時点で体重減少が最大に達することによって証明されるように、用量投与後約4日で観察された。

150μg/kg、300μg/kg又は600μg/kgの試験物品を与えたすべてのマウスが、両方の用量を生き残り、その一方で、1200μg/kgを与えたすべてのマウスは、14日目には死滅するか又は瀕死であるかのいずれかであった。最大耐量は600μg/kgに定めた。生き残った動物に関して、試験物品の第一の用量は、＋3.66%(ビヒクル)、＋4.10%(150μg/kg)、－0.49%(300μg/kg)、又は－10.51%(600μg/kg)の14日目対10日目において体重の用量依存的変化をもたらした(図1を参照のこと)。対照的に、第二の用量後の最初の4日間(すなわち、17～21日目の間)、マウスには、＋4.80%(ビヒクル)、＋2.66%(150μg/kg)、＋1.77%(300μg/kg)、又は＋1.26%(600μg/kg)の平均体重変化があった(データ未掲載)。これらの結果は、試験物品の第二の用量が第一のものより良好に許容されることを実証する。
最も許容された第二の用量は、最も許容された第一の用量より高かった

CT-26腫瘍を担持するBALB/cマウスを、2つのコホート：9日目に500μg/kg及び16日目に500μg/kgを与える一群(ベースライン又は一律投与)、並びに9日目に500μg/kg及び16日目に1000μg/kgを与える一群(ステップアップ又はステップ投与)、に(試験の9日目に)群分けした。第一の用量後に、マウスには、13日目対9日目においてそれぞれ－3.87%(ベースライン)及び－5.58%(ステップ)の体重変化があった(図2)。第二の用量後に、500μg/kg(ベースライン)を与えたマウスには、20日目対16日目において＋1.10%の体重変化があり、その一方で、1000μg/kg(ステップアップ)を与えたマウスには－5.18%の平均体重量変化があった。500μg/kgと1000μg/kgの両方を受けたすべてのマウスが第二の用量を生き残った(図2を参照のこと)。この結果は、1000μg/kgの第二の用量は、500μg/kgの第一の用量とほぼ同程度に良好に許容されることを例示し、そして、最も許容された第二の用量が最も許容された第一の用量より高かったという観察を裏付けた。第一の用量に対して最も許容された第二の用量がより大きい理由は、第一の用量の投与の結果としての投与時におけるサイトカイン放出、サイトカイン受容体発現、及び/又は免疫細胞集団の性質に起因し得る。
ステップ投与による処置効果

第二の用量の増加が処置効果につながるか判断するために、腫瘍の大きさを、ベースライン及びステップアップコホートの両方において経時的に追跡した。ステップアップコホートの1匹のマウスが試験13日目(第二の用量前)に死滅したので、分析から除外した。ベースラインコホートのマウス10匹のうちの4匹(40%)が、試験55日目には(腫瘍体積制限に達する腫瘍体積を特徴とする)腫瘍抑制の消失を示し、その一方で、ステップアップコホートのマウス9匹のうちの2匹(22%)が、同じ期間にわたり腫瘍抑制の消失を示した。対照的に、ベースラインコホートのマウス10匹のうちの6匹(60%)が、(<1000mm³に達する腫瘍の大きさを特徴とする)腫瘍抑制を示し、その一方で、ステップアップコホートのマウス9匹のうちの7匹(77.7%)が、抑制された腫瘍を示した(データ未掲載)。対照治験群のすべてのマウスが腫瘍増殖のため死滅した。平均腫瘍体積は、ベースラインコホートで233＋/－61mm³及びステップアップコホートで161＋/－74mm³であった。より大きいコホートにおいて、及び/又はより長い処置持続期間を用いて、群間の腫瘍抑制の差がより際立つようになると考えられる。
実施例2：試験物品の調製：

単一のE62C突然変異(配列番号20)を有するNeo-2/15ストックをリン酸緩衝液(pH7.0)に透析し、1.0～2.0mg/mlに調整した。TCEPを、タンパク質に対して10：1のモル比で添加し、RTで10分間インキュベートして、ジスルフィドを還元した。マレイミド修飾PEG40k(PEG40k-MA)またはPEG30k(PEG30k-MA)粉末を、還元タンパク質溶液に、10：1のPEG：システインのモル比で直接添加し、撹拌しながら2時間インキュベートした。SDS-PAGE用に一定分量を、反応混合物から直接採取した。これらのデータは、予想される化学量論において、PEG40k-MAまたはPEG30k-MAとNeo-2/15システイン変異体との間の共有結合の迅速で、自発的で、かつほぼ定量的な形成を実証している。
実施例3：例示的な用量増加スキーム

この実施例では、投与のための2種類のスケジュールが存在する。投与は、21日サイクルの1日目又は21日サイクルの1及び8日目にある。スケジュールAの患者には、第一の21日サイクルの1及び8日目のプライミング用量と、後続のサイクルにわたる21日サイクル毎の1日目のレジューム投与を投与する。スケジュールBの患者は、21日サイクルの1及び8日目の投与を継続する。静脈内注入として投与をおこなう。薬物はPEG化E62C NEO2-15ポリペプチドである。この実施例のステップ投与に使用したサイクル1用量を、初回最大耐量(HTID) 、すなわち、そこで患者の<33%がDLTを経験する最高用量、の半分として計算する。後続のサイクルは、コホート目標用量(CTD)を達成するまで、1サイクル毎に1用量レベルずつ増加する。表3は、0.5μg/kgがHTIDであると仮定したステップ投与中に与えられる例示的な用量(μg/kg単位)を示す。

Claims (101)

1. IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象の(i) 免疫応答を調節するか、又は(ii) 癌を処置する方法であって、(a) 第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイル（unacceptable tolerability profile）を有するであろう目標用量レベル（target dose level）まで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量（priming doses）のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして(b) 目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む、方法。
2. 前記IL-2受容体作動薬が長時間作用型である、請求項1に記載の方法。
3. 長時間作用型IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象の(i) 免疫応答を調節するか、又は(ii) 癌を処置する方法であって、(a) 第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイルを有するであろう目標用量レベルまで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして(b) 目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む、方法。
4. IL-2受容体作動薬の用量レジメンを用いて、それを必要としている対象の(i) 免疫応答を調節するか、又は(ii) 癌を処置する方法であって、1若しくは複数のプライミング用量レベルにて1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、続いて、目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を投与することを含み、ここで、該目標用量レベルがプライミング用量レベルより高い、方法。
5. 前記IL-2受容体作動薬が長時間作用型である、請求項4に記載の方法。
6. 長時間作用型IL-2受容体作動薬の用量レジメンを用いて、それを必要としている対象の(i) 免疫応答を調節するか、又は(ii) 癌を処置する方法であって、1若しくは複数のプライミング用量レベルにて1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、続いて、目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を投与することを含み、ここで、該目標用量レベルがプライミング用量レベルより高い、方法。
7. 長時間作用型IL-2受容体作動薬を用いて、それを必要としている対象において(i) 免疫応答を調節するか、又は(ii)癌を処置する方法であって、(i) 対象に投与するための目標用量とプライミング用量を選択し；ここで、該目標用量は、第一の用量として対象に投与された場合に許容できない耐容性プロファイルを伴っているが、プライミング用量後に投与された場合により好ましい耐容性プロファイルを有し、(ii) 目標用量レベルまで増大可能にするために、1若しくは複数のプライミング用量のIL-2受容体作動薬を対象に投与し、そして目標用量レベルにてIL-2受容体作動薬を対象に投与することを含む方法。
8. 前記の目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与が、第一のプライミング用量の投与の少なくとも5、6又は7日後である、請求項1～7のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記の目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与が、プライミング用量の投与後21日未満である、請求項1～8のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記の目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与が、第一のプライミング用量の投与後21日未満である、請求項9に記載の方法。
11. 前記の目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与が、プライミング用量の投与後7～21、又は7～63日のいずれかである、請求項1～7のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記の目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与が、第一のプライミング用量の投与後7～21、又は7～63日のいずれかである、請求項11に記載の方法。
13. 1～6種類のプライミング用量が対象に投与される、請求項1～12のいずれか一項に記載の方法。
14. 1～3種類のプライミング用量が対象に投与される、請求項1～13のいずれか一項に記載の方法。
15. 2種類のプライミング用量が対象に投与される、請求項1～14のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記2種類のプライミング用量が対象に投与され、かつ、該プライミング用量が、第一の21日処置サイクルの1日目と8日目に投与される、請求項15に記載の方法。
17. 前記目標用量が、2回以上の後続の21日処置サイクルの1及び8日目に、又は2回以上の後続の21日処置サイクルの1日目に、対象に投与される、請求項16に記載の方法。
18. 2種類以上のプライミング用量が対象に投与され、そして、IL-2受容体作動薬のプライミング用量が増大する用量レベルのものである、請求項1～17のいずれか一項に記載の方法。
19. 2種類以上のプライミング用量が対象に投与され、そして、IL-2受容体作動薬のプライミング用量が同じ用量レベルのものである、請求項1～17のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記最初のプライミング用量が、後続のプライミング用量より大きい用量レベルのものである、請求項1～17のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記プライミング用量が1～10日間の期間にわたって提供される、請求項1～20のいずれか一項に記載の方法。
22. 1種類のプライミング用量が対象に投与される、請求項1～14のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記目標用量レベルが、最初のプライミング用量レベルより少なくとも25%、少なくとも50%、又は少なくとも75%大きい、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記目標用量レベルが、最初のプライミング用量レベルの2倍である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記目標用量レベルが、最初のプライミング用量レベルの2倍以下である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記目標用量レベルが、少なくとも最初のプライミング用量レベルの3倍である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記目標用量レベルが、最初のプライミング用量レベルの少なくとも4～6倍である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記目標用量レベルが、最初のプライミング用量レベルの少なくとも10倍である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記目標用量レベルが、それぞれのプライミング用量レベルと比べて少なくとも25%、少なくとも50%、又は少なくとも75%大きい、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記目標用量レベルが、それぞれのプライミング用量レベルの少なくとも2倍である、請求項1～22のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与に続いて、後続の用量が目標用量レベルにて投与される、請求項1～30のいずれか一項に記載の方法。
32. 目標用量レベルでのIL-2受容体作動薬の第一の投与に続いて、2～8回の後続の用量が、7～21日の間隔で目標用量レベルにて投与される、請求項1～31のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.01μg/kg～1mg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記目標用量レベルが0.1μg/kg～2mg/kgである、請求項1～33のいずれか一項に記載の方法。
35. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.1μg/kg～12μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.1μg/kg～10μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.1μg/kg～5μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.1μg/kg～2μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.5μg/kg～20μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.5μg/kg～10μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記1若しくは複数のプライミング用量が0.5μg/kg～3μg/kgである、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記目標用量レベルが0.2μg/kg～1mg/kgである、請求項1～32又は35～38のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記目標用量レベルが0.2μg/kg～50μg/kgである、請求項1～32又は35～38のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記目標用量レベルが0.2μg/kg～20μg/kgである、請求項1～32又は35～38のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記目標用量レベルが0.2μg/kg～10μg/kgである、請求項1～32又は35～38のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記目標用量レベルが0.2μg/kg～8μg/kgである、請求項1～32又は35～38のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記目標用量レベルが1μg/kg～50μg/kgである、請求項1～32又は35～41のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記目標用量レベルが1.5μg/kg～30μg/kgである、請求項1～32又は35～41のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記目標用量レベルが2μg/kg～35μg/kgである、請求項1～32又は35～41のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記目標用量レベルが4μg/kg～20μg/kgである、請求項1～32又は35～41のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.1μg/kg～10μg/kg、0.1μg/kg～5μg/kg、又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、前記目標用量が、0.2μg/kg～20μg/kgであるか；前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.1μg/kg～5μg/kg又は0.1μg/kg～2μg/kgであり、かつ、前記目標用量が、0.2μg/kg～20μg/kg、0.2μg/kg～10μg/kg、又は0.2μg/kg～8μg/kgであるか；前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.5μg/kg～10μg/kg、又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、前記目標用量が2μg/kg～35μg/kgであるか；前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.5μg/kg～10μg/kg又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、前記目標用量が2μg/kg～35μg/kgであるか；前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.5μg/kg～10μg/kg又は0.5μg/kg～3μg/kgであり、かつ、前記目標用量が4μg/kg～20μg/kgであるか；前記1若しくは複数のプライミング用量が0.25μg/kg～20μg/kgであり、かつ、前記目標用量が1.5μg/kg～30μg/kgであるか；或いは前記1若しくは複数のプライミング用量が0.25μg/kg～4.5μg/kgであり、かつ、前記目標用量が1.5μg/kg～10μg/kgであり；但し、該目標用量は該プライミング用量より大きい、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
52. 前記目標用量が1μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.1μg/kg、0.15μg/kg、0.25μg/kg、0.3μg/kg、若しくは0.5μg/kg又はそれらの組み合わせであるか；前記目標用量が3μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせであるか；前記目標用量が6μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせであるか；前記目標用量が12μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg/kg又はそれらの組み合わせであるか；前記目標用量が18μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、9μg/kg、4.5μg/kg、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg又はそれらの組み合わせであるか；前記目標用量が24μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、12μg/kg、9μg/kg、4.5μg/kg、6μg/kg、3μg/kg、1.5μg/kg、1μg/kg、0.5μg/kg、0.3μg/kg、0.25μg/kg、0.15μg/kg、若しくは0.1μg又はそれらの組み合わせであるか；或いは前記目標用量が1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、20μg/kg、又は30μg/kgであり、かつ、前記1若しくは複数のプライミング用量が、0.25μg/kg、1.5μg/kg、3μg/kg、6μg/kg、12μg/kg、及び20μg/kgであり、但し、該目標用量は該プライミング用量より大きい、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記IL-2受容体作動薬が、遺伝子組み換えによって操作されたIL-2受容体作動薬である、請求項1～52のいずれか一項に記載の方法。
54. 前記IL-2受容体作動薬が、6時間以上の血漿又は血清中半減期を有する、請求項1～53のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記IL-2受容体作動薬が、10時間以上の血漿又は血清中半減期を有する、請求項1～54のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記IL-2受容体作動薬がIL-2ポリペプチドである、請求項1～55のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記IL-2ポリペプチドが、ヒトIL-2のアミノ酸配列と少なくとも85%の配列同一性を有する、請求項56に記載の方法。
58. 前記IL-2受容体作動薬がIL-2ポリペプチド模倣体である、請求項1～57のいずれか一項に記載の方法。
59. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    (a) X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    (b) X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；
    (c) X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    (d) X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    ここで、X1、X2、X3、及びX4は、該ポリペプチド内で順不同であってもよく；
    ここで、アミノ酸リンカーが任意のドメイン間に存在してもよく；及び
    ここで、該ポリペプチドが、IL-2受容体βγcヘテロ二量体(IL-2Rβγc)に結合する、請求項58に記載の方法。
60. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    (a) X1は、EHALYDAL(配列番号1)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    (b) X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；
    (c) X3は、YAFNFELI(配列番号2)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    (d) X4は、ITILQSWIF(配列番号3)と少なくとも85%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    ここで、X1、X2、X3、及びX4は、該ポリペプチド内で順不同であってもよく；
    ここで、アミノ酸リンカーが任意のドメイン間に存在してもよく；及び
    ここで、該ポリペプチドが、IL-2受容体βγcヘテロ二量体(IL-2Rβγc)に結合する、請求項58に記載の方法。
61. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    X1は、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X2は、長さが少なくとも8アミノ酸のヘリックス構造ペプチドであり；
    X3は、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X4は、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、
    ここで、X1、X2、X3、及びX4は、該ポリペプチド内で順不同であってもよく；
    ここで、アミノ酸リンカーが任意のドメイン間に存在してもよく；及び
    ここで、該ポリペプチドが、IL-2受容体βγcヘテロ二量体(IL-2Rβγc)に結合する、請求項58、59、又は60に記載の方法。
62. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    X1が、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X3が、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X4が、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも70%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項61に記載の方法。
63. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    X1が、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X3が、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X4が、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項61に記載の方法。
64. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、ドメインX1、X2、X3、及びX4を含む非天然ポリペプチドであって、ここで、
    X1が、ペプチドPKKKIQLHAEHALYDALMILNI(配列番号4)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X3が、ペプチドLEDYAFNFELILEEIARLFESG(配列番号5)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり；
    X4が、ペプチドEDEQEEMANAIITILQSWIFS(配列番号6)と、その長さに沿って、少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項61に記載の方法。
65. 前記X2が、KDEAEKAKRMKEWMKRIKT(配列番号7)と、その長さに沿って、少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項59～64のいずれか一項に記載の方法。
66. 前記システイン残基が、ポリペプチド内に存在し、かつ、安定化部分に取り付けられる、請求項58～65のいずれか一項に記載の方法。
67. 前記X1、X2、X3又はX4のアミノ酸残基が、安定化部分の取り付けのためのシステイン残基への変異を受ける、請求項58～65のいずれか一項に記載の方法。
68. 前記システインがX2ドメイン内に存在する、請求項67に記載の方法。
69. 前記システインが、配列番号7に対してX2ドメインの1位(K58C)、2位(D59C)、5位(E62C)、9位(R66C)、12位(E69C)又は16位(R73C)に存在する、請求項68に記載の方法。
70. 前記安定化部分がPEG含有部分である、請求項66～69のいずれか一項に記載の方法。
71. 前記安定化部分がマレイミド修飾PEG部分である、請求項70に記載の方法。
72. 前記X1、X2、X3、及びX4の順序がX1-X3-X2-X4である、請求項58～71のいずれか一項に記載の方法。
73. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、配列番号8又は9に規定されるアミノ酸配列と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のポリペプチドを含む、請求項58～72のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、配列番号8又は配列番号9のアミノ酸配列の完全長と少なくとも25%、27%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は100%同一のポリペプチドを含むが、以下の残基：
    X2ドメインの第1、2、5、9、12、又は16アミノ酸残基、ここで、付番は配列番号7に準拠する、
    X3ドメインの第17又は20アミノ酸残基、ここで、付番は配列番号5に準拠する、
    X4ドメインの第3又は6アミノ酸残基、ここで、付番は配列番号6に準拠する、
    のうちの1つ、2つ、又はそれ以上がシステインに変異している、請求項58～72のいずれか一項に記載の方法。
75. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、配列番号10～33のうちのいずれか1つから選択されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、少なくとも80%同一のポリペプチドを含む、請求項58～77のいずれか一項に記載の方法。
76. 前記IL-2受容体作動薬模倣体が、配列番号10～33のうちのいずれか1つから選択されるアミノ酸配列と、その長さに沿って、同一のポリペプチドを含む、請求項75に記載の方法。
77. 前記ポリペプチドが、これだけに限定されるものではないが、ポリエチレングリコール(「PEG」)含有部分を含めた、安定化化合物に連結されている、請求項58～76のいずれか一項に記載の方法。
78. 前記安定化化合物が、ポリペプチド内のシステイン残基に連結されている、請求項77に記載の方法。
79. 前記安定化化合物がPEG含有部分である、請求項78に記載の方法。
80. 前記アミノ酸配列が配列番号20であり、及び62位にシステインが存在し、かつ、安定化化合物に連結されているか、
    前記アミノ酸配列が配列番号30であり、及び82位にシステインが存在し、かつ、安定化化合物に連結されているか、
    前記アミノ酸配列が配列番号24であり、及び69位にシステインが存在し、かつ、安定化化合物に連結されているか、又は
    前記アミノ酸配列が配列番号26であり、及び73位にシステインが存在し、かつ、安定化化合物に連結されている、請求項79に記載の方法。
81. 前記安定化化合物が、マレイミド基を介してシステイン残基に連結される、請求項77～80のいずれか一項に記載の方法。
82. 前記IL-2受容体作動薬が、水溶性ポリマーに結合される、請求項1～65のいずれか一項に記載の方法。
83. 前記IL-2受容体作動薬が、ペグ化される、請求項82に記載の方法。
84. 前記IL-2受容体作動薬が、標的化されない、請求項1～83のいずれか一項に記載の方法。
85. 前記IL-2受容体作動薬が、融合タンパク質ではない、請求項1～84のいずれか一項に記載の方法。
86. 前記IL-2受容体作動薬が、標的ドメインに結合される、請求項1～83のいずれか一項に記載の方法。
87. 前記標的ドメインが、抗体である、請求項86に記載の方法。
88. 前記方法が、免疫応答を調節するためのものである、請求項1～87のいずれか一項に記載の方法。
89. 前記免疫応答が、抗癌免疫応答である、請求項88に記載の方法。
90. 前記方法が、癌の処置のためのものである、請求項1～89のいずれか一項に記載の方法。
91. 前記癌が、転移癌である、請求項89又は90に記載の方法。
92. 前記癌が、腎細胞癌腫である、請求項89又は90に記載の方法。
93. 前記癌が、黒色腫である、請求項89又は90に記載の方法。
94. 前記癌が、結腸直腸癌、乳癌、肺癌、肉腫、頭頚部癌、肝臓癌又は膀胱癌である、請求項89又は90に記載の方法。
95. 前記癌が、固形腫瘍である、請求項89又は90に記載の方法。
96. 前記用量が、IV又は皮下注射によって投与される、請求項1～95のいずれか一項に記載の方法。
97. 前記IL-2受容体作動薬が、βγc選択型IL-2受容体作動薬である、請求項1～96のいずれか一項に記載の方法。
98. 前記IL-2受容体作動薬がペグ化され、及び前記PEG含有部分の反復PEGユニットの数が、約800～1000である、請求項1～97のいずれか一項に記載の方法。
99. 前記IL-2受容体作動薬がペグ化され、及び前記PEG含有部分の反復PEGユニットの平均数が、約850～950である、請求項1～98のいずれか一項に記載の方法。
100. 前記PEGが、直鎖PEGである、請求項98又は99のいずれか一項に記載の方法。
101. 前記PEGが、分岐PEGである、請求項98又は99のいずれか一項に記載の方法。

Images