JP2022553017A - 腸内微生物叢によりｓｃｆａ産生を促進する方法 - Google Patents
腸内微生物叢によりｓｃｆａ産生を促進する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022553017A JP2022553017A JP2022523126A JP2022523126A JP2022553017A JP 2022553017 A JP2022553017 A JP 2022553017A JP 2022523126 A JP2022523126 A JP 2022523126A JP 2022523126 A JP2022523126 A JP 2022523126A JP 2022553017 A JP2022553017 A JP 2022553017A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- subject
- disease
- intestinal
- probiotic
- symprove
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 183
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 136
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 title claims abstract description 86
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims abstract description 51
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 title abstract 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 179
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 179
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 161
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims abstract description 117
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 70
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 claims abstract description 55
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 claims abstract description 42
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 113
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 93
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 claims description 85
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 74
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 66
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 50
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 47
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 47
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 45
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 43
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 42
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 41
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 38
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 38
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 36
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 claims description 36
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 35
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 35
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 33
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 33
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 33
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 33
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 28
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 claims description 25
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 claims description 25
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 24
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 23
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 23
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 23
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 22
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 22
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 22
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 20
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 18
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 18
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 18
- 241000605059 Bacteroidetes Species 0.000 claims description 16
- 241001112693 Lachnospiraceae Species 0.000 claims description 16
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 claims description 15
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 15
- 241000425347 Phyla <beetle> Species 0.000 claims description 14
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 14
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 13
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 13
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 13
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 11
- 241000192142 Proteobacteria Species 0.000 claims description 11
- 241000095588 Ruminococcaceae Species 0.000 claims description 11
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 11
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 claims description 10
- 241001430183 Veillonellaceae Species 0.000 claims description 10
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 9
- 241001430332 Bifidobacteriaceae Species 0.000 claims description 8
- 241001430149 Clostridiaceae Species 0.000 claims description 8
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000606126 Bacteroidaceae Species 0.000 claims description 6
- 241001584876 Synergistaceae Species 0.000 claims description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 6
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006339 Caliciviridae Infections Diseases 0.000 claims description 5
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 5
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims description 5
- 241000609971 Erysipelotrichaceae Species 0.000 claims description 5
- 241001112690 Eubacteriaceae Species 0.000 claims description 5
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 claims description 5
- 241000692845 Rikenellaceae Species 0.000 claims description 5
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 claims description 5
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 claims description 5
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 claims description 5
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 claims description 5
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-M 2-methylbutyrate Chemical compound CCC(C)C([O-])=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 241000909284 Acidaminococcaceae Species 0.000 claims description 4
- 241001272701 Akkermansiaceae Species 0.000 claims description 4
- 208000037384 Clostridium Infections Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009657 Clostridium difficile colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010054236 Clostridium difficile infection Diseases 0.000 claims description 4
- 241001657523 Coriobacteriaceae Species 0.000 claims description 4
- 241001215841 Eggerthellaceae Species 0.000 claims description 4
- 208000037942 Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 claims description 4
- 241001112692 Peptostreptococcaceae Species 0.000 claims description 4
- 241000390529 Synergistetes Species 0.000 claims description 4
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 claims description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 claims 1
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 claims 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 claims 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 113
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 80
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 48
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 48
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 42
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 41
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 40
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 36
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 32
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 31
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 30
- 241000894007 species Species 0.000 description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 27
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 23
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 23
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 23
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 23
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 23
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 22
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 22
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 21
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 21
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 20
- 210000004921 distal colon Anatomy 0.000 description 19
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 18
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 17
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 17
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 16
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 16
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 13
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 13
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 9
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 8
- 241000209219 Hordeum Species 0.000 description 8
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 8
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 7
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 7
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 description 6
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 6
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 210000005026 intestinal epithelial barrier Anatomy 0.000 description 6
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 6
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 6
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 241001468155 Lactobacillaceae Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 5
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 5
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 4
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 4
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-M isocaproate Chemical compound CC(C)CCC([O-])=O FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100518542 Arabidopsis thaliana OTU5 gene Proteins 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 241001609975 Enterococcaceae Species 0.000 description 3
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 3
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 3
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 3
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 3
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 3
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 3
- 239000008141 laxative Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 101100028299 Arabidopsis thaliana OTU11 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100028300 Arabidopsis thaliana OTU12 gene Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 2
- 241001134772 Bifidobacterium pseudocatenulatum Species 0.000 description 2
- 241000253402 Burkholderiaceae Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- 241000605980 Faecalibacterium prausnitzii Species 0.000 description 2
- 101100518559 Homo sapiens OTUB1 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241000604449 Megasphaera Species 0.000 description 2
- 208000009668 Neurobehavioral Manifestations Diseases 0.000 description 2
- 101150115940 OTU1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000260425 Parasutterella excrementihominis Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 241000605947 Roseburia Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000194018 Streptococcaceae Species 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100040461 Ubiquitin thioesterase OTUB1 Human genes 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 2
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 2
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 2
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229940125722 laxative agent Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000005949 negative regulation of histone deacetylation Effects 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 2
- 210000001186 vagus nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241001505572 Anaerostipes caccae Species 0.000 description 1
- 101100518556 Arabidopsis thaliana OTU7 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700029181 Bacteria lipase activator Proteins 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 241000186148 Bifidobacterium pseudolongum Species 0.000 description 1
- 241000131482 Bifidobacterium sp. Species 0.000 description 1
- 208000004652 Cardiovascular Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013654 Drug abuse Diseases 0.000 description 1
- 208000014540 Functional gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 101001033233 Homo sapiens Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100024573 Macrophage-capping protein Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001655310 Microbacteriaceae Species 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000869429 Muribaculaceae Species 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008457 Neurologic Manifestations Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 108010047320 Pepsinogen A Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 1
- 241000692844 Prevotellaceae Species 0.000 description 1
- 241001008612 Puniceicoccaceae Species 0.000 description 1
- 206010059604 Radicular pain Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040026 Sensory disturbance Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 201000001880 Sexual dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 241001136694 Subdoligranulum Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241001148134 Veillonella Species 0.000 description 1
- 241001533204 Veillonella dispar Species 0.000 description 1
- 241001148135 Veillonella parvula Species 0.000 description 1
- 241001331543 Veillonella sp. Species 0.000 description 1
- 241001261005 Verrucomicrobia Species 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 235000021068 Western diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001775 anti-pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N apomorphine Chemical compound C([C@H]1N(C)CC2)C3=CC=C(O)C(O)=C3C3=C1C2=CC=C3 VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- 229960004046 apomorphine Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000004251 balanced diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000005549 barrier dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 201000007637 bowel dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011198 co-culture assay Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000870 cognitive problem Toxicity 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L dithionite(2-) Chemical compound [O-]S(=O)S([O-])=O GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 208000018620 early-onset Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000003090 exacerbative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000004136 fatty acid synthesis Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007149 gut brain axis pathway Effects 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 230000004207 intestinal integrity Effects 0.000 description 1
- 210000005206 intestinal lamina propria Anatomy 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015141 kefir Nutrition 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002475 laxative effect Effects 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 231100000872 sexual dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 230000036299 sexual function Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000001256 steam distillation Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008718 systemic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pediatric Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本発明は、水性プロバイオティクス組成物を投与することによって、腸内微生物叢によりSCFA産生を促進する方法に関する。本発明の方法は、腸の健康を促進することに特に有効である。本発明はさらに、腸管バリアー完全性を促進する方法、免疫寛容原性腸表現型を促進する方法、およびパーキンソン病を処置する方法に関する。
Description
本発明は、液体の水性プロバイオティクス組成物を投与することによって、腸内微生物叢によりSCFA産生を促進する方法に関する。本発明の方法は、腸の健康を促進することに特に有効である。本発明はさらに、腸管バリアー完全性を促進する方法、免疫寛容原性腸表現型を促進する方法、およびパーキンソン病を処置する方法に関する。
短鎖脂肪酸(SCFA)は、宿主の上皮細胞や粘膜細胞の食物源として作用すること、また局所的なpH条件を調節することを含めて、ヒトの腸内微細環境においてさまざまな重要な役割を担っている。さらに、SCFAは微生物叢の細菌の食物源として作用し、SCFAの産生、代謝および交差摂取の複雑な相互関係が、腸内微生物叢の全体の構成および健康、ひいては腸自体に寄与する。
SCFA産生は一般的に、結腸での炭水化物代謝に起因する。最も多量に産生されるSCFAは、アセテート、プロピオネートおよびブチレートである。アセテートは、宿主のエネルギー源として、また体内の脂質合成のための潜在的な基質として使用され得る。プロピオネートは、肝臓でのコレステロールおよび脂肪酸の合成を低減し、代謝の恒常性に有益な効果を有すると考えられている。アセテートおよびプロピオネートは、他の腸内細菌によってエネルギー源として使用される場合もあり、多くの場合、代謝されてブチレートを産生する。
アセテート、プロピオネートおよびブチレートはまた、食事性肥満に対する予防効果も報告されている。これは、腸ホルモンの産生後の食欲不振(ブチレートまたはプロピオネートに反応)または中枢神経系に対する作用(アセテートの場合)に由来すると報告されている。
このような健康上の利点が考えられることから、プロバイオティクス細菌種を含有する製品や満足できる生活状態（ウェルビーイング）を改善するその可能性に消費者の関心が高まっている。しかし、ヒトの消化管の厳しい環境は、経口投与を目的としたプロバイオティクスサプリメントが、細菌を生存状態で小腸に送達することに失敗することが多いことを示している。したがって、健康が改善されたという感覚は、プラシーボ効果に貶められることが多々ある。さらに、プロバイオティクス種が定着された腸内微生物叢に影響を与える能力は証明されていない。むしろ、消化管を通過して生き残ったプロバイオティクス細菌は、短期間、腸の管腔コンパートメントにのみ存在するのであり、腸粘膜コンパートメントにコロニーを形成し、定着された腸内微生物叢に影響を与えることはない。この仮説によれば、多くのプロバイオティクスが腸の健康に長期的な効果を示すことができない理由を説明できる。
パーキンソン病は、運動系症候群およびさまざまな非運動症状を特徴とする神経変性疾患である。世界の広範囲の国で人口の平均年齢が上昇しており、パーキンソン病のような変性疾患はより重要性が増している。この状態を管理するには現状、有効性に限界があり、薬物療法は、重大な副作用を伴う。したがって、パーキンソン病を処置するための代替手段が必要である。
本発明は、腸内微生物叢によりSCFA産生を促進し、それにより腸の健康を促進する方法、およびパーキンソン病を処理または予防する方法を提供することによって、上記の、およびその他の問題に対処するものである。
腸内微生物叢がヒトの一般的なウェルビーイングに影響を及ぼすことの重要性は、ますます明白になってきている。健常人の場合、腸内微生物叢の変化は、ストレス、不安およびうつ病の時期と関連しており、体重増加や食事および医薬品に対する反応の変動を引き起こすことがある。これらの変化は、腸内微生物叢の組成の変化、代謝活性の変化、またはその両方であり得る。
例えば、ヒトの腸内微生物叢は、健康な腸と比べて異常である腸内細菌の種類および/または相対数を示す場合があり、これは「腸内毒素症(dysbiosis)」としても知られる状態である。不健康な腸は、SCFA産生の異常な変化によって示されることもあり、それ自体が腸内微生物叢の組成の変化に起因していることもある。
SCFAは、例えば、腸管管腔のpHを低下させることによって病原性細菌の成長を阻害し、および上皮細胞が病原性大腸菌感染を防御する能力を向上させることにより、ヒトの健康に寄与すると考えられている。また、ブチレートは、宿主の結腸細胞の主要なエネルギー源であり、これらの細胞を分化誘導し、これは、結腸癌の危険性を低減させると考えられている。ブチレートおよびプロピオネートは、ヒストン脱アセチル化の阻害を介して、制御性T細胞を分化誘導することが報告されている。
腸内毒素症を示している対象は、特定の疾患状態を有していなくても、腸内微生物叢がヒトのウェルビーイングが損なわれるほどに十分に不均衡である場合がある。腸内毒素症は、不快感や感染の危険性の増大につながることがある。腸内毒素症はまた、その他の点では健常人の不安、ストレス、またはうつ病の危険性と関係があるだけでなく、結腸癌などのGI癌の危険性の増大と関連している。
腸の健康障害は、その他の点では健常人のウェルビーイングに影響を与えるだけでなく、たとえ疾患の症状の一部でなくても、特定の疾患状態と関連していることがよくある。例えば、異常な腸内微生物叢は、肥満、糖尿病、および慢性疲労症候群を有する対象で報告されている。
したがって、健康な腸内微生物叢を促進することにより、ヒトが他の点で健康である場合と、ヒトが疾患または病態に苦しんでいる場合の両方において、ヒトの全体的なウェルビーイングおよび健康に重要な貢献をすることができる。
本明細書で実証されているように、プロバイオティクス細菌の集団を含む液体の水性プロバイオティクス組成物の投与により、定着された腸内微生物叢集団に影響を与えてSCFA産生のレベルを向上させることができ、また腸内微生物叢を構成する細菌分類群の割合を変動させることが示されている。
本発明によって投与される調製物のプロバイオティクス細菌は、腸粘膜および管腔の環境においてコロニーを形成しかつ増殖することが示され、ここで、定着された細菌集団との相互作用により、全体として微生物叢のバランスが再構成(リバランシング)される。このリバランシングは、腸内微生物叢によるSCFA産生の増加によって示される。リバランシングはさらに、門およびファミリーの分類学的レベルでの腸内微生物叢の組成の変化によって証明される。全体としての腸内微生物叢のバランスのこの改変は、プロバイオティクスの投与後における腸の健康の改善を示すものである。
プロバイオティクスの投与により、管腔および特に粘膜の両方において、定着された微生物叢にリバランスがもたらされるため、本発明の方法の利点は持続し、維持される。これは、多くのプロバイオティクスで認められる効果とは対照的であり、すなわち後者では、消化管を通るプロバイオティクス細菌の通過中にしか効果を現わせないため、腸内微生物叢に全体として影響を与えることができず、このことは、、あらゆる効果が管腔コンパートメントに対する一過性効果に制限されることを意味している。
したがって、第一態様において、対象において胃腸の健康を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用ベースの液体プロバイオティクス組成物を投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス組成物の投与により、該対象の腸内微生物叢による1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進し、それによって腸管の健康を促進する方法が提供される。
第二態様において、対象の腸内微生物叢による1つまたはそれ以上の短鎖脂肪酸(SCFA)の産生を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用ベースの液体プロバイオティクス組成物を該対象に投与することを含む方法が提供される。
さらなる態様において、対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えばベイロネラセアエ(Veillonellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)、オイバクテリアセアエ(Eubacteriaceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)、エリシペロトリカセアエ(Erysipelotrichaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法が提供される。
特定の好ましい実施態様において、成長は腸粘膜コンパートメントにある。特定の好ましい実施態様において、成長は腸管腔コンパートメントにある。特定の好ましい実施態様において、成長は管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントの両方にある。
好ましい実施態様において、本発明の方法は、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進する。
さらなる態様において、対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばコーリオバクテリアセアエ(Coriobacteriaceae)、エッゲルテラセアエ(Eggerthellaceae))、バクテロイデス門(Bacteroidetes)(例えばバクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)、リケネラセアエ(Rikenellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えば、アシダミノコッカセアエ(Acidaminococcaceae)、エンテロコッカセアエ(Enterococcaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae)、ペプトストレプトコッカセアエ(Peptostreptococcaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))、シネルギステス門(Synergistetes)(例えばシネルギスタセアエ(Synergistaceae))およびウェルコミクロビオ門(Verrucomicrobio)(例えばアッケルマンシアセアエ(Akkermansiaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を阻害する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法が提供される。
特定の好ましい実施態様において、成長は腸粘膜コンパートメント中で阻害される。特定の好ましい実施態様において、成長は腸管腔コンパートメント中で阻害される。特定の好ましい実施態様において、成長は管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントの両方中で阻害される。
好ましい実施態様において、本発明の方法は、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進する。
本発明の全ての態様の特定の好ましい実施態様において、本発明の方法により、ブチレート、プロピオネートおよびアセテートから選択される1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進する。特定の好ましい実施態様において、本発明の方法により、ブチレートの産生を促進する。
本発明によるプロバイオティクス調製物の投与後に産生されるSCFAは、「ポストバイオティクス」化合物、または単に「ポストバイオティクス」と考えることができる。ポストバイオティクスとは、プロバイオティクスの投与後に微生物叢により産生される健康関連化合物である。腸内微生物叢により健康関連SCFAの産生を促進することに基づけば、本発明に従ったプロバイオティクス調製物の投与は、「ポストバイオティクス」効果をもたらすと考えることができる。
従って、特定の実施態様において、本発明の方法は、SCFAなどのポストバイオティクス化合物の産生を促進する。
さらなる態様において、対象において腸管バリアー完全性を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該腸管バリアー完全性を促進する方法が提供される。このような特定の実施態様において、本発明の方法は、腸管バリアー完全性の喪失を予防または低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、腸管バリアーの修復を促進する。
さらなる態様において、対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該免疫寛容原性腸表現型を促進する方法が提供される。特定の実施態様において、本発明の方法は、腸管上皮細胞により抗炎症性分子の産生を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、腸管上皮細胞により炎症誘発性分子の産生を低減する。
本発明の特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は非治療的方法である。
本発明の特定の好ましい実施態様において、対象は健常人である。
本発明の方法の特定の好ましい実施態様において、対象は胃腸内毒素症(gastrointestinal dysbiosis)状態にある。
特定の好ましい実施態様において、対象は疾患または障害に苦しんでいる。特定の好ましい実施態様において、対象は、パーキンソン病、肝硬変、炎症性腸症候群(IBD)、クロストリジウム・ディフィシル感染症、MRSA感染症、大腸菌感染症、肥満、糖尿病、および慢性疲労症候群から選択される疾患または障害を有する。特定の好ましい実施態様において、対象はパーキンソン病を有する。特定の実施態様において、対象は肝硬変を有する。
パーキンソン病は、運動系症候群ならびに非運動症状の範囲を特徴とする神経変性疾患である。一部の国では人口の高齢化に伴い、パーキンソン病のような変性障害の重要性がますます高まっている。現在の管理は有効性が限られており、薬理学的療法は副作用を伴う。したがって、パーキンソン病を処置するための代替手段が必要とされている。
本明細書で報告されているように、本発明によるプロバイオティクス製剤を受けるパーキンソン病患者は、運動症状および非運動症状の改善を示す。実施例に示されているデータは、プロバイオティクス調製物が、PD患者により示される腸管バリアー完全性の喪失および炎症性腸表現型を低減することによって、パーキンソン病における健康な腸表現型を促進することができることをさらに示す。まとめると、これらのデータは、プロバイオティクス調製物の投与により、パーキンソン病患者の効果的な処置を提供することを示す。
したがって、さらなる態様において、対象においてパーキンソン病を処置または予防する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法が提供される。特定の実施態様において、該プロバイオティクス調製物の投与により、運動症状、非運動症状、全身性炎症マーカーから選択される1つまたはそれ以上を該対象において改善する。特定の実施態様において、該プロバイオティクス調製物の投与により、対象において非運動症状を改善し、例えば、対象において胃腸非運動症状を改善する。特定の実施態様において、該プロバイオティクス調製物の投与により、運動症状などのパーキンソン病症状の発症を遅らせるか予防する。
特定の好ましい実施態様において、対象は、胃内毒素症(gastrointestinal dysbiosis)の状態にある。特定の好ましい実施態様において、対象は、健康な対照と比較して、その腸内微生物叢において上昇したレベルのファーミキューテス門(Firmicutes)を示す。特定の好ましい実施態様において、対象は、健康な対照と比較して、その腸内微生物叢において低下したレベルのバクテロイデス門(Bacteroidetes)を示す。
全ての態様の特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)細菌の少なくとも1つを含む。特定の実施態様において、乳酸菌の集団は、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)細菌の少なくとも2つまたは少なくとも3つを含む。
特定の実施態様において、乳酸菌の集団は、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、およびラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)細菌を含む。
特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)細菌それぞれを含む。
詳細な説明
「プロバイオティクス」-本明細書で使用される場合、用語「プロバイオティクス」は、FAO/WHO共同報告およびプロバイオティクス使用のためのガイドラインに従って解釈され、この中でプロバイオティクスは、「十分量投与されると宿主に健康上の利益を与える生きている微生物」として定義されている。用語「プロバイオティクス細菌」とは、この「プロバイオティクス」の定義を満たすあらゆる細菌の菌株を意味する。
「プロバイオティクス」-本明細書で使用される場合、用語「プロバイオティクス」は、FAO/WHO共同報告およびプロバイオティクス使用のためのガイドラインに従って解釈され、この中でプロバイオティクスは、「十分量投与されると宿主に健康上の利益を与える生きている微生物」として定義されている。用語「プロバイオティクス細菌」とは、この「プロバイオティクス」の定義を満たすあらゆる細菌の菌株を意味する。
「乳酸菌(LAB)」-本明細書で使用される場合、用語「乳酸菌(LAB)」とは、炭水化物を乳酸に発酵させるグラム陽性、カタラーゼ陰性、非運動性嫌気性細菌の群を意味する。この群には、ラクトバチルス(Lactobacillus)属、ラクトバチルス(Lactococcus)属、ペジオコックス(Pediococcus)属、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属、およびエンテロコッカス(Enterococcus)属が含まれる。例示的なプロバイオティクス乳酸菌には、ラクトバチルス(Lactobacillus)属およびエンテロコッカス(Enterococcus)属のものが含まれるが、これらに限定されない。
「腸内毒素症」-本明細書で使用される「腸内毒素症」とは、個体が腸内で、健康な腸内の値と比較して異常な型および/または相対的数の細菌を示す状態を意味する。腸内毒素症を有する個体は健康であることがあり、すなわち、その個体は、腸内毒素症に関連する疾患、状態、または病理を有しない。あるいは、腸内毒素症を有する個体は、例えば、腸内毒素症を引き起こすかまたはそれによって引き起こされると考えられる疾患状態または病理などの疾患、状態または病理に苦しんでいることがある。
「胃腸の健康を促進する」-本明細書で使用される「胃腸の健康を促進する」とは、SCFA産生の向上によって示される、胃腸の微生物健康を改善することを意味する。胃腸の健康は、健常人において促進され、例えば、結腸癌の危険性の低減をもたらし得て、また、疾患、状態又は病理に苦しんでいる個体においても促進され得る。消化管の健康を促進することは、特に腸内毒素症を示す個人にとって重要である。
「複合炭水化物」-本明細書で使用される場合、用語「複合炭水化物」とは、オリゴ糖および多糖の両方を含む。「オリゴ糖」は3～10の糖類単位を含む糖類ポリマーであり；一方、用語「多糖」には、より長いポリマー構造、例えば、繰り返しの糖類(または二糖)単位から形成されるものが含まれる。
「糖(Simple sugars)」-本明細書で使用する場合、用語「糖」は、特に断りのない限り、単糖および二糖の両方を意味する。
「還元糖」-本明細書で使用される場合、用語「還元糖」とは、アルデヒド基を有するか、または異性化を介して溶液中でアルデヒド基を形成することができる糖類を意味する。還元糖の存在は、グルコースを参照標準として用いたNelson-Somogyi法によって決定され得る(Somogyi, M. (1052) Journal of Biological Chemistry., Vol. 195., p.19; reproduced in many standard textbooks of carbohydrate chemistry)。特定の複合炭水化物(例えばデンプン)は還元末端を含むことがあり、したがって「還元糖」の定義を満たすが、糖は複合炭水化物よりも単位質量当たりの還元末端の割合が高いため、Nelson-Somogyi法を用いた所定の試料(例えば、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物の試料)中の「還元糖」含有量の決定は、試料中の糖の量の近似値と見なされ得る。
「総炭水化物含有量」-本明細書で使用される場合、用語「総炭水化物」または「総炭水化物含有量」という用語は、所定の製品(例えば、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物)に存在する複合炭水化物および糖の総量を意味する。総炭水化物含有量は、参照標準としてグルコースを用いたフェノール-硫酸アッセイを用いて測定することができる(Dubois, M., Gilles, K. A., Hamilton, J. K., Rebers, P. A. and Smith, F. (1956) Analytical Chemistry, vol. 28., p. 350)。
本明細書において、総炭水化物含有量対液体ベースの製品(例えば、プロバイオティクス調製物において)の還元糖含有量の比率に言及する場合、これは、本明細書に記載のフェノール-硫酸法(mg/mlで示される結果)により測定される製品の総炭水化物含有量対本明細書に記載のNelson-Somogyi法(mg/mlで示される結果)により測定される製品の還元糖含有量の比率を計算することによって決定されるものである。
「乳成分不使用の」-本明細書で使用される場合、用語「乳成分不使用の」とは、当技術分野で認められている定義のとおりに、哺乳動物からの乳を含有せず、かつこれをベースとしない製品を意味する。したがって、乳成分不使用製品は、乳、バター、チーズ(植物性チーズを含む)、ヨーグルト、クリーム、粉乳、乳清、ラクトース、乳タンパク質(カゼインおよびカゼイネートを含む)、無水乳脂肪またはケフィア(kefir)を含有せず、かつこれらをベースとしないものである。
「対象」-本明細書で使用される場合、「対象」とは、プロバイオティクス調製物が投与される哺乳類、好ましくはヒトの対象を意味する。
以下の実施態様は、本発明の各態様による実施態様であり、特に明示しない限り、いずれの実施態様も他の実施態様と組み合わせることができる。
プロバイオティクスが効果的かつ最適に機能するためには、消化を誘発せずに、上部消化(GI)管の状態を切り抜けて生き残る必要がある。消化が誘発されると、胃酸がプロバイオティクス細菌を弱めるか、または破壊することができる。これは、胃酸、ペプシンおよびその他の消化化合物の産生を誘発することが知られているヨーグルト型の飲料に製剤化されたプロバイオティクスにとって特に問題となる。
対照的に、そして本明細書で実証されているように、本発明の方法における液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を投与すると、結果的に調製物中の細菌がGI管の条件を切り抜けて生き残り、腸(小腸および結腸を含む)の粘膜コンパートメントおよび管腔コンパートメントの両方に定着する。
プロバイオティクス細菌は、腸の粘膜コンパートメントおよび管腔コンパートメントに定着すると、組成および脂肪酸産生の両面において定着された腸内微生物叢を改変し、腸の健康改善に特徴的な有益なSCFAsの産生を促進することができる。
理論にとらわれることなく、プロバイオティクス細菌が管腔コンパートメント、特に粘膜に定着することができるため、コンパートメント効果を持続し維持することができるといった仮説が立てられている。これは、多くのプロバイオティクスで見られる効果とは対照的で、腸内微生物叢全体、特に粘膜微生物叢に影響を与えることができなく、これは、あらゆる効果が管腔コンパートメントへの一過性の効果に限定されることを意味する。このような代替プロバイオティクスのいずれかの効果は、プロバイオティクス細菌が消化管を通過する間にのみ引き起こすためである。
したがって、本発明によるプロバイオティクス調製物を投与することによって健康な腸内微生物叢を促進することは、ヒトが他の点で健康である場合にも、ヒトが疾患、障害または病態に苦しんでいる場合にも、ヒトの全体的なウェルビーイングおよび健康に対して重要な貢献をすることができる。
したがって、第一態様において、対象において胃腸の健康を促進する方法であって、
乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該対象の腸内微生物叢による1つまたはそれ以上のSCFAの産生する促進し、これによって胃腸の健康を促進する、方法が提供される。
乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該対象の腸内微生物叢による1つまたはそれ以上のSCFAの産生する促進し、これによって胃腸の健康を促進する、方法が提供される。
SCFAは、さまざまなメカニズム(例えば、腸管腔中のpHを低下させること、上皮細胞が病原性大腸菌感染を防御する能力を改善することにより、病原性成長を阻害する)を介してヒトの腸管の健康に寄与すると考えられている。さらに、ブチレートは宿主結腸細胞の主要なエネルギー源であり、これらの細胞の分化を誘導し、これは、結腸癌の危険性の低減に関連していると考えられている。ブチレートおよびプロピオネートは、ヒストン脱アセチル化の阻害を介して制御性T細胞を分化誘導し、結果的に腸バリアーの維持を改善することが報告されている。
アセテート、プロピオネートおよびブチレートには、食事性肥満に対する予防効果も報告されている。これは、腸内ホルモンの産生後の食欲不振(ブチレートまたはプロピオネートに反応する)、あるいは中枢神経系への作用(アセテートの場合)に起因するものと報告されている。
したがって、第二態様において、対象の腸内微生物叢により1つまたはそれ以上の短鎖脂肪酸(SCFA)の産生を刺激する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法が提供される。
特定の好ましい実施態様において、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を刺激することは、クロストリジウム・ディフィシル感染症、MRSA感染症、大腸菌感染症、肥満、糖尿病、および慢性疲労症候群などの状態を処置するか、または結腸癌を発症する可能性を低減するのに使用され得る。
個人の腸内微生物叢を構成するさまざまな細菌の相互作用は複雑であり、他の要因のうち、微生物叢に存在する他の細菌やその割合に大きく依存する可能性が高い。それでも、細菌門の広範な変化は、例えば炎症状態におけるファーミキューテス門(Firmicutes)レベルの低下などの、腸の健康の悪化または腸の完全性の水準以下と関連している。
したがって、対象の腸内微生物叢を形成するようになる細菌分類群の成長および割合を調節することは、腸の健康を促進するためのさらなるプロセスを示し得る。本明細書で実証されているように、本発明によるプロバイオティクス調製物の投与により、腸内微生物叢中の細菌分類群の調節をもたらし、いくつかの細菌分類群の相対的成長を促進し、他の細菌分類群を阻害する。特に、腸内微生物叢の組成の変化は、単に調製物中のプロバイオティクス細菌の数の増加に起因するものではないことである。むしろ、プロバイオティクス細菌は腸にコロニーを形成し、その後、他の微生物叢の細菌の相対的数およびバランスに変化をもたらすのである。
したがって、さらなる態様において、対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えばベイロネラセアエ(Veillonellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)、オイバクテリアセアエ(Eubacteriaceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)、エリシペロトリカセアエ(Erysipelotrichaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与すること含む方法が提供される。好ましくは、本発明の方法は、該細菌門の2つまたはそれ以上、好ましくは3つまたはそれ以上の成長を促進する。
さらなる態様において、対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばコーリオバクテリアセアエ(Coriobacteriaceae)、エッゲルテラセアエ(Eggerthellaceae))、バクテロイデス門(Bacteroidetes)(例えばバクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)、リケネラセアエ(Rikenellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えば、アシダミノコッカセアエ(Acidaminococcaceae)、エンテロコッカセアエ(Enterococcaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae)、ペプトストレプトコッカセアエ(Peptostreptococcaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))、シネルギステス門(Synergistetes)(例えばシネルギスタセアエ(Synergistaceae))およびウェルコミクロビオ(Verrucomicrobio)(例えばアッケルマンシアセアエ(Akkermansiaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を阻害する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法が提供される。好ましくは、本方法は、該細菌門の2つまたはそれ以上、好ましくは3つまたはそれ以上の成長を阻害する。
本発明の全ての態様の特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は非治療的方法である。
特定の好ましい実施態様において、対象は健常人である。
特定の好ましい実施態様において、対象は胃腸内毒素症の状態にある。
特定の好ましい実施態様において、対象は、疾患または障害にに苦しんでいるものである。そのような特定の実施態様において、疾患または障害に苦しんでいる対象は、該疾患または障害と関連している胃腸内毒素症の状態にある。
特定の好ましい実施態様において、対象は、パーキンソン病、肝硬変、炎症性腸症候群(IBD)、クロストリジウム・ディフィシル感染症、MRSA感染症、大腸菌感染症、サルモネラ感染症、ノロウイルス感染症、ランブル鞭毛虫症、セリアック病、慢性腎臓疾患、HIV/AIDS、嚢胞性線維症、Ｉ型糖尿病、肥満、過敏性腸症候群(IBS)、および慢性疲労症候群から選択される疾患または障害を有する。特定の好ましい実施態様において、対象はパーキンソン病を有する。特定の好ましい実施態様において、対象は肝硬変を有する。特定の実施態様において、患者はIBDを有する。
本発明の全ての態様の特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)、マイクロバクテリアセアエ(Microbacteriaceae)、ベイロネラセアエ(Veillonellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)、オイバクテリアセアエ(Eubacteriaceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)、エリシペロトリカセアエ(Erysipelotrichaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae)、エンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae)から選択される1つまたはそれ以上の細菌の成長を促進する。
本発明の全ての態様の特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、コーリオバクテリアセアエ(Coriobacteriaceae)、エッゲルテラセアエ(Eggerthellaceae)、バクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)、リケネラセアエ(Rikenellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)、アシダミノコッカセアエ(Acidaminococcaceae)、エンテロコッカセアエ(Enterococcaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae)、ペプトストレプトコッカセアエ(Peptostreptococcaceae)、エンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae)、シネルギスタセアエ(Synergistaceae)およびアッケルマンシアセアエ(Akkermansiaceae)から選択される1つまたはそれ以上の細菌の成長を阻害する。特に好ましい実施態様において、本発明の方法は、バクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)細菌の成長を阻害する。
好ましくは、細菌成長に対する効果は腸粘膜コンパートメントにある。
好ましくは、細菌成長に対する効果は腸管腔コンパートメントにある。
好ましくは、細菌成長に対する効果は近位結腸にある。
好ましくは、細菌成長に対する効果は遠位結腸にある。
好ましい実施態様において、本発明の方法は、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進する。
短鎖脂肪酸の産生
本発明の方法の全ての態様の好ましい実施態様において、本発明の方法は、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進し、ここで、SCFAは、アセテート、プロピオネート、およびブチレート(本明細書ではそれぞれ酢酸、プロピオン酸および酪酸と交換可能に使用される)から選択される。
本発明の方法の全ての態様の好ましい実施態様において、本発明の方法は、1つまたはそれ以上のSCFAの産生を促進し、ここで、SCFAは、アセテート、プロピオネート、およびブチレート(本明細書ではそれぞれ酢酸、プロピオン酸および酪酸と交換可能に使用される)から選択される。
本明細書の他の箇所に記載されているように、これらのSCFAの産生は、健康な消化管と関連しており、様々な健康およびウェルビーイングの利点と関係がある。したがって、SCFA産生の向上は、胃腸(GI)の健康の改善を示すことができる。
SCFA産生の増加はまた、腸内微生物叢の組成の変化を示し得る。例えば、アセテートは、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)spなどのアクチノバクテリア(Actinobacteria)を含む多くのさまざまな腸内微生物によって産生され得る。同様に、プロピオネートは、ベイロネラセアエ(Veillonellaceae)などのファーミキューテス門(Firmicutes)を含む広範な腸内微生物によって産生され得る。ブチレートは、主にクロストリジアセアエ(Clostridiaceae)などのファーミキューテス門(Firmicutes)細菌によって産生される。
SCFAsの産生は交差摂取をもたらすことができ、いくつかの微生物叢細菌によって産生されたアセテートおよびプロピオネートなどのSCFAは、これらをブチレートに変換させる他の細菌の食物源として作用する。このように、ブチレートそれ自体は、腸の上皮細胞の食物源として使用され得る。
ブチレートは特に、腸内微生物叢によって産生されると健康上の利点をもたらすと考えられている。したがって、特定の好ましい実施態様において、本方法は、腸内微生物叢によりブチレート産生を促進する。
逆に、イソブチレート、イソバレレートおよびイソカプロエートなどの分岐鎖脂肪酸(BCFA)、ならびにアンモニウム種は、タンパク質分解性細菌活性によって産生され、健康に有害であると考えられている。有利には、本発明による方法は、対象の腸内微生物叢により産生されるBCFAおよびアンモニウム種のレベルを低下させることができる。
したがって、特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、対象の腸内微生物叢により1つまたはそれ以上のBCFAの産生を低減する。特定の実施態様において、該1つまたはそれ以上のBCFAは、イソブチレート、イソバレレートおよびイソカプロエートから選択される。特定の実施態様において、本発明の方法は、イソブチレートの産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、イソバレレートの産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、イソカプロエートの産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、2-メチルブチレートの産生を低減する。
特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、対象の腸内微生物叢により1つまたはそれ以上のアンモニウム種の産生を低減する。
腸管バリアー完全性の促進
腸管上皮バリアーは、隣接する細胞を機械的に結合させ、細胞間空間を密閉する複雑なタンパク質-タンパク質ネットワークである細胞間タイトジャンクションによって形成される。健康な腸管上皮バリアーは、腸の透過性を調節し、分子の管腔空間から粘膜固有層や腸毛細血管などの粘膜深層部への移動を制御する。このように、腸管バリアー完全性は、胃腸の健康およびウェルビーイング全般にとって重要である。
腸管上皮バリアーは、隣接する細胞を機械的に結合させ、細胞間空間を密閉する複雑なタンパク質-タンパク質ネットワークである細胞間タイトジャンクションによって形成される。健康な腸管上皮バリアーは、腸の透過性を調節し、分子の管腔空間から粘膜固有層や腸毛細血管などの粘膜深層部への移動を制御する。このように、腸管バリアー完全性は、胃腸の健康およびウェルビーイング全般にとって重要である。
腸管バリアー完全性が破壊されると、腸透過性が向上し、腸管腔内容物の腸粘膜固有層への移動が調節不可になり、これは、消化管内で局所的におよび全身的にの両方で有害免疫反応につながることがある。したがって、腸管バリアー完全性を維持するか、またはバリアー完全性の喪失を修復して、全身および胃腸の健康を維持することは重要である。
以下の実施例に示されているように、本明細書で提供されるプロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアーの機能および完全性を促進する。これは、健康な腸管バリアー機能を維持する能力、および損傷または負傷後に腸管バリアーを修復する能力の両方によって実証されている。
したがって、さらなる態様において、対象において腸管バリアー完全性を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該腸管バリアー完全性を促進する、方法が提供される。
特定の実施態様において、本発明の方法は、健康な腸管バリアー完全性を維持する。つまり、本発明の方法は、対象おいて腸管バリアー機能の喪失を予防または低減する。
そのような特定の実施態様において、対象は健康な対象であっともよい。
あるいは、そのような特定の実施態様において、対象は、例えば、抗生物質療法、化学療法または放射線療法を受けているため、腸管バリアー完全性の喪失の危険性が高まっていることがある。特定の実施態様において、対象は、腸管バリアー機能の喪失と関連している状態を有するため、腸管バリアー完全性の喪失の危険性があることがある。
特定の実施態様において、対象は、サルモネラ感染症、ノロウイルス感染症、ランブル鞭毛虫症、セリアック病、慢性腎臓疾患、HIV/AIDS、嚢胞性線維症、肝硬変、パーキンソン病、およびI型糖尿病から選択される疾患と診断されているため、腸管バリアー機能の喪失の危険性があることがある。
本明細書で実証されているように、本発明で提供される方法は、パーキンソン病患者または肝硬変患者からの腸管バリアモデルに特に有効である。したがって、特定の実施態様において、対象は、パーキンソン病と診断されているため、腸管バリアー機能の喪失の危険性があることがある。特定の実施態様において、対象は、肝硬変と診断されているため、腸管バリアー機能の喪失の危険性があることがある。
特定の実施態様において、本発明の方法は、腸管バリアーの修復を促進する。腸管バリアーの修復を促進することは、対象がすでにバリアー機能不全を示す症状、例えば腸の局所的な炎症および/または全身性炎症反応を経験している場合に重要である。サルモネラ感染症、ノロウイルス感染症、ランブル鞭毛虫症、セリアック病、慢性腎臓疾患、HIV/AIDS、嚢胞性線維症およびI型糖尿病など、腸管バリアー機能を損傷する疾患は数多く知られている。
したがって、特定の実施態様において、本発明の方法は、サルモネラ感染症、ノロウイルス感染症、ランブル鞭毛虫症、セリアック病、慢性腎臓疾患、HIV/AIDS、嚢胞性線維症、肝硬変、過敏性腸疾患(IBS)、パーキンソン病、およびI型糖尿病から選択される1つまたはそれ以上の疾患に苦しんでいる対象において腸管バリアーの修復を促進する。
特定の実施態様において、本発明の方法は、パーキンソン病と診断されている対象において腸管バリアーの修復を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、肝硬変と診断されている対象において腸管バリアーの修復を促進する。
特定の実施態様において、本発明の方法は、炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎またはクローン病)と診断されている対象において腸管バリアーの修復を促進する。
特定の実施態様において、本発明の方法は、リーキーガット症候群にに苦しんでいる対象を処置する方法である。
腸管バリアー完全性を促進する方法に関連する上記の実施態様は、本明細書で提供される他の方法の態様に等しくかつ独立して適用されることが理解されるであろう。例えば、本明細書で提供される胃腸の健康を促進する方法は、腸内のSCFA産生を促進し得て、腸管バリアー機能も促進し得る。同様に、腸管バリアー完全性を促進する方法は、SCFA(例えばブチレート)産生を促進し得て、(またはそれによって)腸管バリアー機能の喪失も低減し得る。同様に、本明細書で提供されるパーキンソン病を処置する方法は、腸管バリアー機能および/または腸管バリアーの修復を促進し得る。
免疫寛容原性腸表現型の促進
以下の実施例に示されるデータは、本明細書で提供されるプロバイオティクス調製物がさまざまな免疫分子(例えばサイトカイン、ケモカイン、およびリガンド)の発現に影響を及ぼすことが可能であることを実証している。これらのデータは、プロバイオティクス調製物の投与により、腸管上皮細胞において「免疫寛容原性」表現型または「抗炎症性」表現型(以下、簡潔に「免疫寛容原性腸表現型」と称する)を促進できることを示している。この免疫寛容原性腸表現型は、免疫学的チャレンジ(例えばLPSチャレンジ)に反応して、1つまたはそれ以上の免疫寛容原性分子または抗炎症性分子(例えばIL-6およびIL-10)の産生の向上、および/または1つまたはそれ以上の炎症性分子(例えばTNFa、IL-8およびMCP-1)の産生の低減を特徴とする。
以下の実施例に示されるデータは、本明細書で提供されるプロバイオティクス調製物がさまざまな免疫分子(例えばサイトカイン、ケモカイン、およびリガンド)の発現に影響を及ぼすことが可能であることを実証している。これらのデータは、プロバイオティクス調製物の投与により、腸管上皮細胞において「免疫寛容原性」表現型または「抗炎症性」表現型(以下、簡潔に「免疫寛容原性腸表現型」と称する)を促進できることを示している。この免疫寛容原性腸表現型は、免疫学的チャレンジ(例えばLPSチャレンジ)に反応して、1つまたはそれ以上の免疫寛容原性分子または抗炎症性分子(例えばIL-6およびIL-10)の産生の向上、および/または1つまたはそれ以上の炎症性分子(例えばTNFa、IL-8およびMCP-1)の産生の低減を特徴とする。
したがって、さらなる態様において、対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該免疫寛容原性腸表現型を促進する、方法が提供される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、腸管上皮細胞により抗炎症性サイトカインおよび抗炎症性ケモカインなどの1つまたはそれ以上の抗炎症性分子の産生を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、IL-6の産生を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、IL-10の産生を促進する。
特定の好ましい実施態様において、本発明の方法は、腸管上皮細胞により炎症誘発性サイトカインおよび炎症誘発性ケモカインなどの1つまたはそれ以上の炎症誘発性分子の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、MCP-1の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、CXCL10の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、IL-8の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、TNFaの産生を低減する。
これらの実施態様において、本発明の方法は、腸管上皮細胞により炎症誘発性分子または抗炎症性分子の分泌を変化させる。特定の実施態様において、腸管上皮細胞による炎症誘発性分子または抗炎症性分子の分泌の変化は、例えば、洗浄によって腸管腔内で検出可能である。特定の実施態様において、腸管上皮細胞による炎症誘発性分子または抗炎症性分子の分泌の変化は、血液試料中で検出可能である。
特定の実施態様において、免疫寛容原性腸表現型を有する対象の免疫分子の相対的産生は、例えば、本明細書で提供される方法によってプロバイオティクス調製物が投与される前に対象の腸上皮細胞により示される免疫分子産生と比較され得る。あるいは、相対的産生は、本明細書で提供される方法によってプロバイオティクス調製物を投与されていない対照対象と比較され得る。あるいは、免疫分子の相対的産生は、既定の対照値、例えば、対照集団の産生の中央値レベルと比較され得る。
免疫寛容原性腸表現型を促進する方法に関連する上記の実施態様は、本明細書で提供される他の方法の態様に等しくかつ独立して適用されることが再び理解されるであろう。例えば、本明細書で提供される胃腸の健康を促進する方法は、腸上皮細胞により1つまたはそれ以上の抗炎症分子の産生を促進し得る。
特定の理論に拘束されるものでないが、本発明で提供される方法によって誘導される免疫寛容原性腸表現型は、プロバイオティクス調製物の投与によっても誘導される腸管バリアー完全性の向上によって得られるといった仮説が立てられている。特に、腸の透過性を低減することによって、より少ない巨大分子および微生物が、粘膜固有層などの粘膜免疫細胞に達することができる。巨大分子および微生物の粘膜固有層への通過は、炎症誘発性反応を誘発すると考えられている。したがって、腸管バリアー完全性を促進することによって、本明細書で提供される方法は、粘膜免疫細胞に達する炎症誘発性の誘発を低減し、それによって、よりよい免疫寛容原性または抗炎症性の腸表現型を促進するといった仮説が立てられている。
特定の実施態様において、本発明の方法は、パーキンソン病と診断されている対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、肝硬変と診断されている対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する。特定の実施態様において、本発明の方法は、炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎またはクローン病)と診断されている対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する。
そのような特定の実施態様において、本発明の方法は、リーキーガット症候群に苦しんでいる対象を処置する方法である。
特定の代替実施態様において、対象は健康な対象である。
本質的に適合しない限り、免疫寛容原性腸表現型を促進する方法に関連する上記の実施態様は、本明細書で提供される他の方法の態様に等しくかつ独立して適用されることが理解されるであろう。例えば、本明細書で提供される胃腸の健康を促進する方法は、腸内のSCFA産生を促進し得て、免疫寛容原性腸表現型も促進し得る。同様に、免疫寛容原性腸表現型を促進する方法は、SCFA(例えばブチレート)産生を促進し得て、(またはそれによって)免疫寛容原性腸表現型も促進し得る。同様に、本明細書で提供されるパーキンソン病を処置する方法は、免疫寛容原性腸表現型を促進し得る。
パーキンソン病
添付の実施例に報告されているように、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物を受けたパーキンソン病患者は、その疾患症状の改善を報告している。さらに、パーキンソン病患者の腸の詳細なインビトロモデルで評価すると、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物の投与により、SCFA産生の向上、腸管バリアー完全性の向上、腸管バリアーの修復の改善、および抗炎症性/免疫寛容原性の腸表現型へのシフトをもたらす。
添付の実施例に報告されているように、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物を受けたパーキンソン病患者は、その疾患症状の改善を報告している。さらに、パーキンソン病患者の腸の詳細なインビトロモデルで評価すると、本明細書に記載のプロバイオティクス調製物の投与により、SCFA産生の向上、腸管バリアー完全性の向上、腸管バリアーの修復の改善、および抗炎症性/免疫寛容原性の腸表現型へのシフトをもたらす。
理論に束縛されることを望むことなく、本明細書で提供されるデータは、プロバイオティクス調製物の投与によりパーキンソン病を処置するメカニズムについての仮説を提供するものである。パーキンソン病は、腸バリアー機能の障害、および腸の炎症の向上と関連している。この腸内環境の異常は、パーキンソン病で異常に沈着するタンパク質であるアルファ-シヌクレインのミスフォールディングを引き起こすことができる。ミスフォールディングしたアルファ-シヌクレインは迷走神経を介して脳に輸送され(脳腸相関が知られている)、それによってパーキンソン病の症状を引き起こすか、悪化させるといった仮説が立てられている。
実施例で実証されているように、プロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアー完全性の改善、抗炎症性/免疫寛容原性の環境、およびSCFA産生の向上をもたらす。これらの効果は、腸内環境を正常化し、それによってアルファ－シヌクレインのミスフォールディングを促進する状態を緩和し、腸の透過性を低減し、したがって、ミスフォールドしたタンパク質が脳へ移送される危険性を低減する。したがって、本発明によるプロバイオティクス調製物の投与により、パーキンソン病の中枢神経学的徴候の低減、ならびに胃腸の非運動症状の処置を提供する。
したがって、さらなる態様において、対象においてパーキンソン病を処置または予防する方法であって、乳酸菌の集団を含む液体の乳成分不使用のプロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む、方法が提供される。
特定の好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において運動症状、非運動症状、末梢血液炎症マーカーおよび腸炎症マーカーの1つまたはそれ以上、好ましくは2つまたはそれ以上、好ましくは全てを改善することによってパーキンソン病を処置する。特定の好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において運動症状を改善することによってパーキンソン病を処置する。特定の好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において非運動症状を改善することによってパーキンソン病を処置する。
特定の好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において末梢血液炎症マーカーおよび/または腸炎症マーカーを改善することによってパーキンソン病を処置する。特定の実施態様において、本発明の方法は、MCP-1の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、CXCL10の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、IL-8の産生を低減する。特定の実施態様において、本発明の方法は、TNFaの産生を低減する。
特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、運動症状などのパーキンソン病症状の発症を遅らせるかまたは予防する。
パーキンソン病症状の重症度、例えば、運動症状、非運動症状および認知症状を評価する技術は、当業者によく知られており、実施例3に提供されている。例えば、運動症状は、運動障害学会統一パーキンソン病評価スケール(Movement Disorder Society Unified Parkinson’s Disease Rating Scale, MDS-UPDRS)パートIIIおよびIVを用いて評価することができ、認知症状は、モントリオール認知評価(Montreal Cognitive Assessment, MoCA)基準で評価することができる。症状の重症度を評価するための更なる技術は、実施例3に詳述されている。
好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において1つまたはそれ以上の非運動症状を改善することによってパーキンソン病を処置する。パーキンソン病を有する対象により示され得る、本発明の方法によって改善され得る非運動症状には、心血管異常(例えば低血圧)、うつ病、不安、性機能異常、感覚障害、胃腸症状(例えば便秘)、および睡眠障害が含まれる。
パーキンソン病患者における非運動症状(NMS)の全体的評価は、添付の実施例に記載されているように、非運動症状スケール(NMSS)を用いて評価することができる。好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象のNMSSを改善することによって対象においてパーキンソン病を処置する。
好ましい実施形態において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において胃腸の非症状を改善することによって対象においてパーキンソン病を処置する。好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、便秘症状を改善することによって、例えば、1日当たりの排便回数を増加させることによって、および/または対象が服用する必要のある緩下剤の回数を減少させることによって対象においてパーキンソン病を処置する。
好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において運動症状の重症度を低減するかまたはその進行を遅らせる(つまり、重症度が向上する速度を遅らせる)ことによってパーキンソン病を処置または予防する。好ましい実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、運動症状の発症を遅らせるかまたは予防することによって対象においてパーキンソン病を処置または予防する。
本発明の方法の特定の好ましい実施態様において、対象は、胃腸内毒素症(gastrointestinal dysbiosis)の状態にある。特定の好ましい実施態様において、対象は、健康な対照と比較して、その腸内微生物叢中のてファーミキューテス門(Firmicutes)レベルの上昇を示す。特定の好ましい実施態様において、対象は、健康な対照と比較して、その腸内微生物叢中のバクテロイデス門(Bacteroidetes)レベルの低減を示す。
特定の実施態様において、本発明の方法は、対象から得られる腸内微生物叢の試料中のファーミキューテス門(Firmicutes)および/またはバクテロイデス門(Bacteroidetes)のレベルを測定する工程をさらに含み、対象が健康な対照と比較して上昇したファーミキューテス門(Firmicutes)レベルを示す場合および/または対象が健康な対照と比較してその腸内微生物叢中で低減したバクテロイデス門(Bacteroidetes)レベルを示す場合、該対象はプロバイオティクス調製物を投与される。
好ましい実施態様において、本発明の方法は、プロバイオティクスを対象に少なくとも1日1回投与することを含む。
好ましい実施態様において、本発明の方法は、プロバイオティクスを対象に少なくとも1週間、好ましくは少なくとも2週間、好ましくは少なくとも3週間、好ましくは少なくとも4週間投与することを含む。好ましい実施態様において、本発明の方法は、プロバイオティクスを対象に少なくとも1ヶ月間、好ましくは少なくとも2ヶ月間投与することを含む。好ましい実施態様において、本発明の方法は、プロバイオティクスを対象に少なくとも3ヶ月間投与することを含む。
本質的に適合しない場合を除き、本明細書で提供される本発明の他の方法の態様および実施態様は、本発明によるパーキンソン病を処置する方法に等しくかつ独立して適用されることが理解されるであろう。
例えば、パーキンソン病を処置する方法は、腸内のSCFA産生を促進し得て、腸管バリアー機能および/または免疫寛容原性腸表現型も促進し得る。
したがって、パーキンソン病を処置する方法の特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアー完全性を改善する。
パーキンソン病を処置する方法の特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアーの修復を改善する。
パーキンソン病を処置する方法の特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物の投与により、対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する。
プロバイオティクス調製物の組成物
本発明によって使用されるプロバイオティクス調製物は、乳成分不使用の液体製品(凍結乾燥されていない)である。好ましくは、プロバイオティクス調製物は水性である。
本発明によって使用されるプロバイオティクス調製物は、乳成分不使用の液体製品(凍結乾燥されていない)である。好ましくは、プロバイオティクス調製物は水性である。
プロバイオティクス調製物は、乳酸菌の集団を含有する。乳酸菌は、生存可能でかつ代謝的に活性なプロバイオティクス細菌であり、したがって、該調製物が飲み込まれた直後に「生きて」いて機能する準備ができているものである。
特定の実施態様において、プロバイオティクス細菌は、ラクトバチルス(Lactobacillus)属またはエンテロコッカス(Enterococcus)属である。特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)およびラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の1つまたはそれ以上を含む。
ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)に関しては、元々ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)として分類されていたが、現在はラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)として再分類されているいずれかの細菌の菌株を含むことを意図している。
特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)およびラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)の少なくとも2つまたは少なくとも3つを含む。特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)およびラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)を含む。
特定の好ましい実施態様において、乳酸菌の集団は、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)およびラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)それぞれを含む。
製品SymproveTM(エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)およびラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)を含有する)は、本明細書に記載の試験においてSCFA産生および腸の健康を促進するのに特に有効であることが示されている。SymproveTM中のラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)株は、元々ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)として特徴づけられていたが、現在は近縁種のラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)として再分類されている。
特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物中の代謝的に活性な細菌の総集団は、1ミリリットルあたり1.0x106～1.0x1010の生細胞の範囲、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x106～1.0x109の生細胞の範囲、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x107～1.0x109の生細胞の範囲であり得る。プロバイオティクス調製物中に存在する代謝的に活性な細菌の各個別株は、独立して、1ミリリットルあたり1.0x105～1.0x109の生細胞の範囲、より好ましくは1ミリリットルあたり1.0x107～1.0x109の生細胞の範囲で存在し得る。
ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の組み合わせ、またはエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、およびラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の組み合わせを含むプロバイオティクス調製物の場合、好ましくは、これらの株の少なくとも1つ、好ましくはこれらの株それぞれが、1ミリリットルあたり1.0x106～1.0x1010の生細胞の範囲、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x107～1.0x109の生細胞の範囲で存在する。
特定の実施態様において、L.アシドフィルスの集団は、含まれる場合、1ミリリットルあたり1.0x105の生細胞未満、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x102～1.0x105の生細胞の範囲、場合により1.0x102～1.0x104の生細胞であってもよい。
例示的な実施態様において、本発明の調製物は、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、およびラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の組み合わせを含み得て、ここで、これらの細菌の菌株それぞれの細菌数は、1ミリリットルあたり1.0x105～1.0x109の生細胞の範囲、より好ましくは1ミリリットルあたり1.0x107～1.0x109の生細胞の範囲である。L.アシドフィルスの集団は、含まれる場合、1ミリリットルあたり1.0x105の生細胞未満、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x102～1.0x105の生細胞の範囲、場合により1ミリリットルあたり1.0x102～to1.0x104の生細胞であってもよい。
特定の好ましい実施態様において、本発明の方法によって投与されるプロバイオティクス調製物の液体基質は、典型的には、多糖、オリゴ糖、二糖および単糖の混合物を含有する。
特定の実施態様において、プロバイオティクス調製物は、存在する多糖、オリゴ糖、二糖および単糖の複雑な混合物を反映して、該調製物の総炭水化物含有量対還元糖含有量の比率によって特徴付けられ得る。特定の実施態様において、調製物の総炭水化物含有量対還元糖含量の比は、8：1～2：1の範囲、より典型的には5：1～2.5：1の範囲、または4：1～3：1の範囲である。
プロバイオティクス調製物のさらなる例示的な実施態様において、調製物の総炭水化物 (多糖、オリゴ糖、二糖および単糖)含有量は20mg/ml～40mg/mlの範囲、または20mg/ml～30mg/mlの範囲であり得、総還元糖含有量は、5mg/ml～20mg/mlの範囲、または5mg/mg～10mg/mlの範囲であり得る。
プロバイオティクス調製物は、好ましくは、タンパク質およびペプチド成分も含む。典型的には、プロバイオティクス調製物に存在するタンパク質およびペプチドの総量は、0.01mg/ml～2mg/mlの範囲、好ましくは0.05mg/ml～2mg/mlの範囲である。好ましくは、高分子量ペプチド(5000ダルトン超の分子量)の総量は、10μg/ml～300μg/ml、好ましくは50μg/ml～200μg/mlの範囲である。特定の実施態様において、タンパク質およびペプチドの濃度は約1mg/ml～約2mg/mlであり得て、高分子量ペプチドの濃度は約250μg/mlであり得る。
これらの栄養成分の濃度を測定する手段は、WO2006/035218(この内容は引用により本明細書に包含される)に記載されている。
プロバイオティクス調製物は、さらなる成分、例えば、セルロース、デンプン、β-グルカン、ペントサン、ポリフェノール、リボ核酸、脂質、ホスフェート、フラボノイド、アミノ酸、ビタミン(B1、B2、CおよびE)、シリケートおよび微量元素を含有し得る。
プロバイオティクス調製物は、所望のプロバイオティクス細菌の菌株を含有する発芽大麦の抽出物を含み得る。
プロバイオティクス調製物は、所望のプロバイオティクス細菌の菌株を含有する発芽大麦の抽出物を含み得る。
プロバイオティクス調製物の例示的な実施態様において、発芽大麦の抽出物ならびにエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の組み合わせを含み、ここで、これらの細菌の菌株それぞれの細菌数は、1ミリリットルあたり1.0x105～1.0x1010の生細胞の範囲、より好ましくは1ミリリットルあたり1.0x107～1.0x109の生細胞の範囲であり、さらに、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)を1ミリリットルあたり1.0x105の生細胞、好ましくは1ミリリットルあたり1.0x102～1.0x105の生細胞の範囲、場合により1ミリリットルあたり1.0x102～1.0x104の生細胞の濃度で含有する。
おいしさを改善するために、香味料および/または着色料などの追加の成分をプロバイオティクス調製物に添加することができる。
本発明の調製物のpHは、適切な緩衝液または緩衝剤の組み合わせの添加により、都合よく制御することができる。好ましい緩衝液には、例えば、クエン酸三ナトリウムまたはリン酸塩緩衝液が含まっる。本明細書に記載の液体ベースの調製物のpHは、長期保存中に、典型的には3.8～4.5の範囲に、特に約pH4.0に維持される。プロバイオティクス調製物は、4℃から環境温度(約25℃)までの任意の温度で保存することができる。本明細書に記載のSymproveTM製品は、約4℃で保存した場合、少なくとも6ヶ月間、25℃で保存した場合、少なくとも4ヶ月間安定(細菌数の点から)を保持することを示す。
調製物は、例えば、滅菌されたソルビン酸カリウムなどの抗真菌物質および/またはビタミンCなどの抗酸化剤をさらに含み得る。
好ましい実施態様において、成長基質は、粒子状物質、例えば、直径が1mmを超えない粒子を含有し得る。
プロバイオティクス調製物の最も好ましい実施態様は、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)およびラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)の生存の代謝的に活性な細胞を含有するSymproveTMと示される製品であり、本明細書で提供される例によって調製され得る。SymproveTM中のラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)の菌株は、元々ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)として特徴づけられていたが、現在では近縁種のラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)として再分類されている。
投与
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は経口投与される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は経口投与される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、少なくとも週に1回投与される。特定の好ましい実施態様において、調製物は、少なくとも1日1回、好ましくは1日1回投与される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、患者の0.5mg/kgから患者の5mg/kgの範囲の用量で投与される。好ましい実施態様において、調製物は、患者の1mg/kgの用量で投与される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、少なくとも1週間、好ましくは少なくとも2週間、好ましくは少なくとも3週間、好ましくは少なくとも4週間投与される。特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、少なくとも1ヶ月間投与される。特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、少なくとも5週間、少なくとも6週間、少なくとも7週間、少なくとも8週間、少なくとも9週間、少なくとも10週間、少なくとも11週間または少なくとも12週間投与される。
特定の好ましい実施態様において、本発明の調製物は、患者の1mg/kgの用量で、少なくとも1日1回、少なくとも3週間、好ましくは少なくとも1ヶ月間投与される。
プロバイオティクス調製物の製造
本発明の方法によって使用するためのプロバイオティクス調製物は、例えば発芽大麦の抽出物などの液体成長基質中で1つまたはそれ以上のプロバイオティクス細菌の菌株を成長させることによって調製され得る。成長基質は、WO2006/035218に(その内容は引用により本明細書に包含される)に記載の製造方法を用いて、種子または麦芽試料大麦から出発してそれ自体が調製され得る。
本発明の方法によって使用するためのプロバイオティクス調製物は、例えば発芽大麦の抽出物などの液体成長基質中で1つまたはそれ以上のプロバイオティクス細菌の菌株を成長させることによって調製され得る。成長基質は、WO2006/035218に(その内容は引用により本明細書に包含される)に記載の製造方法を用いて、種子または麦芽試料大麦から出発してそれ自体が調製され得る。
活性成長工程を必要としないプロバイオティクス調製物を製造する代替方法は、単に成長基質(例えば、WO2006/035218に記載されているように調製される発芽大麦の抽出物)にプロバイオティクス細菌のスターター培養物(複数可)を接種することを含む。本方法のためのスターター培養物としては、例えば、凍結乾燥細菌または液体培養物がある。成長基質には、1つを超える細菌種が接種され得る。好ましくは、スターター培養物中の生細胞の濃度は、1ミリリットルあたり106を超える生細胞である。この方法は、WO2006/035218にも記載されている。プロバイオティクス調製物を製造するさらなる代替方法は、本明細書およびWO2006/035218にも記載されているプロバイオティクス調製物の栄養要求を満たす栄養基質をコンパイルし、該基質にプロバイオティクス細菌を接種することである。
本発明は、以下の非限定的な実験例を参照することにより、さらに理解されるであろう。
実施例1
3人の健康なヒトの腸内微生物叢に影響を及ぼすSymprove中のプロバイオティクス細菌の能力は、インビトロ腸内モデル(粘膜コンパートメントを備えたヒト腸管微生物生態系のシミュレーター(M-SHIME(登録商標)))を用い；3週間にわたるSymprove投与後の細菌多様性、SCFA産生および炎症マーカーへの効果を定量化した。Symproveの製造およびその栄養組成は、WO 2006/035218(引用により本明細書に包含される)にさらに提供されている。
3人の健康なヒトの腸内微生物叢に影響を及ぼすSymprove中のプロバイオティクス細菌の能力は、インビトロ腸内モデル(粘膜コンパートメントを備えたヒト腸管微生物生態系のシミュレーター(M-SHIME(登録商標)))を用い；3週間にわたるSymprove投与後の細菌多様性、SCFA産生および炎症マーカーへの効果を定量化した。Symproveの製造およびその栄養組成は、WO 2006/035218(引用により本明細書に包含される)にさらに提供されている。
2. 材料および方法
2.1. M-SHIME(登録商標)試験
SymproveTMはSymprove Ltdから入手し、受け取ったままの状態で使用した。実験はM-SHIME(登録商標)システムを用いて行った。簡単に言えば、このシステムは4つのリアクター(V)からなる。最初の2つのリアクターはfill-and-draw原理のものであり、食物の取り込みと消化の初期段階をシミュレートするものである。蠕動ポンプにより食物(140mL、1日3回)および膵臓/胆汁(60mL、1日3回)をそれぞれ胃(V1)および小腸(V2)に加え、定義された時間間隔後に各リアクターを空にする。残りの2つのリアクターは、近位(V3)結腸および遠位(V4)結腸の状態をシミュレートする。結腸の容器は常に撹拌し、所定の容量(PC=500mL；DC=800mL)を保持し、そのpHは一定(PC=5.6～5.9；DC=6.6～6.9)である。各容器中の培地の保持時間は、ヒトのインビボ条件を模倣するように選択する。結腸のリアクターには、健康なヒトドナー(欧米式の食事を摂取)からの糞便の微生物叢を接種し、2週間にわたって微生物群落を安定化させた。次に、さらに2週間の対照期間、微生物叢を維持させた。この期間中、ベースラインの微生物群落の組成および活性を記録した。この研究では、個人間の変動性に対処するために、3人のドナーを使用した。次に、3週間の処理段階を開始し；SymproveをV1に加え、V2を通過して進んで結腸の微生物叢に供給した。V1-V2容器1セット使用し、供給物質の変動性を最小化し、これは、近位結腸の容器に達する食物は全てのドナーで同一であったことを意味する。ムチンで覆われたマイクロコズムを全ての結腸の容器に加え、管腔の微生物叢、ならびに結腸領域の特定の粘膜微生物叢を維持することを可能にした。
2.1. M-SHIME(登録商標)試験
SymproveTMはSymprove Ltdから入手し、受け取ったままの状態で使用した。実験はM-SHIME(登録商標)システムを用いて行った。簡単に言えば、このシステムは4つのリアクター(V)からなる。最初の2つのリアクターはfill-and-draw原理のものであり、食物の取り込みと消化の初期段階をシミュレートするものである。蠕動ポンプにより食物(140mL、1日3回)および膵臓/胆汁(60mL、1日3回)をそれぞれ胃(V1)および小腸(V2)に加え、定義された時間間隔後に各リアクターを空にする。残りの2つのリアクターは、近位(V3)結腸および遠位(V4)結腸の状態をシミュレートする。結腸の容器は常に撹拌し、所定の容量(PC=500mL；DC=800mL)を保持し、そのpHは一定(PC=5.6～5.9；DC=6.6～6.9)である。各容器中の培地の保持時間は、ヒトのインビボ条件を模倣するように選択する。結腸のリアクターには、健康なヒトドナー(欧米式の食事を摂取)からの糞便の微生物叢を接種し、2週間にわたって微生物群落を安定化させた。次に、さらに2週間の対照期間、微生物叢を維持させた。この期間中、ベースラインの微生物群落の組成および活性を記録した。この研究では、個人間の変動性に対処するために、3人のドナーを使用した。次に、3週間の処理段階を開始し；SymproveをV1に加え、V2を通過して進んで結腸の微生物叢に供給した。V1-V2容器1セット使用し、供給物質の変動性を最小化し、これは、近位結腸の容器に達する食物は全てのドナーで同一であったことを意味する。ムチンで覆われたマイクロコズムを全ての結腸の容器に加え、管腔の微生物叢、ならびに結腸領域の特定の粘膜微生物叢を維持することを可能にした。
2.2. フローサイトメトリーによる生存可能な細菌および生存不可能な細菌の定量化
V1およびV2においてさまざまな時間間隔で異なる段階から試料を採取し、プロバイオティクス種の上部胃腸管の生存を研究した。最初にリン酸緩衝生理食塩水中で10倍希釈系列を調製した。細菌の生存可能な集団および生存不可能な集団の評価は、適切な希釈液をSYTO 24およびヨウ化プロピジウムで染色することによって行った。試料はBDFacs verseで、高流速で分析した。細菌の細胞は、SYTOチャンネルで200の閾値レベルを適用することにより、培地の残骸およびシグナルノイズから分離した。適切な親ゲートおよび娘ゲートを設定し、全ての集団を決定した。結果は、3つの独立した生物学的繰り返しの平均log(カウント)±sdとして報告する。
V1およびV2においてさまざまな時間間隔で異なる段階から試料を採取し、プロバイオティクス種の上部胃腸管の生存を研究した。最初にリン酸緩衝生理食塩水中で10倍希釈系列を調製した。細菌の生存可能な集団および生存不可能な集団の評価は、適切な希釈液をSYTO 24およびヨウ化プロピジウムで染色することによって行った。試料はBDFacs verseで、高流速で分析した。細菌の細胞は、SYTOチャンネルで200の閾値レベルを適用することにより、培地の残骸およびシグナルノイズから分離した。適切な親ゲートおよび娘ゲートを設定し、全ての集団を決定した。結果は、3つの独立した生物学的繰り返しの平均log(カウント)±sdとして報告する。
2.3. SCFA/BCFA、ラクテートおよびアンモニウムの測定
アセテート、プロピオネート、ブチレートおよび分枝SCFA(イソブチレート、イソバレレートおよびイソカプロエート)を含むSCFAレベルをモニターした。ラクテートの定量化は、市販の酵素アッセイキット(R-Biopharm, Darmstadt, Germany)を用いて、製造業者の説明書に従って行った。アンモニウムの分析は、最初に水蒸気蒸留を行うことによって定量化した。その後、蒸留物中のアンモニウムをHClで滴定的に測定した。
アセテート、プロピオネート、ブチレートおよび分枝SCFA(イソブチレート、イソバレレートおよびイソカプロエート)を含むSCFAレベルをモニターした。ラクテートの定量化は、市販の酵素アッセイキット(R-Biopharm, Darmstadt, Germany)を用いて、製造業者の説明書に従って行った。アンモニウムの分析は、最初に水蒸気蒸留を行うことによって定量化した。その後、蒸留物中のアンモニウムをHClで滴定的に測定した。
2.4. 微生物群落の分析
基準期間および処理期間中、微生物群落分析用試料を各結腸の容器から週に1回採取した。DNAは、1mLの管腔の試料または0.1gの粘液の試料に由来するペレット状細胞から単離した。プロバイオティクス種の数は、種特異的なプライマーおよびプローブを用いてqPCRプロトコルで決定した。プライマーは種であるが、菌株特異的ではなく、微生物叢はSymprove投与前に4週間にわたって定着され、したがって、処理期間中の菌種数の増加は、プロバイオティクス処理の結果であり、これは、菌株特異的なプライマーは必要ないことを意味する。QuantStudio 5 Real-Time PCRシステム(Applied Biosystems, Foster City, CA USA)を用いてqPCRを行った。各試料は三重で分析した。結果は、3回の技術的繰り返しの管腔の試料の平均log(コピー/mL)および粘膜試料の平均log(コピー/g)±sdとして報告する。
基準期間および処理期間中、微生物群落分析用試料を各結腸の容器から週に1回採取した。DNAは、1mLの管腔の試料または0.1gの粘液の試料に由来するペレット状細胞から単離した。プロバイオティクス種の数は、種特異的なプライマーおよびプローブを用いてqPCRプロトコルで決定した。プライマーは種であるが、菌株特異的ではなく、微生物叢はSymprove投与前に4週間にわたって定着され、したがって、処理期間中の菌種数の増加は、プロバイオティクス処理の結果であり、これは、菌株特異的なプライマーは必要ないことを意味する。QuantStudio 5 Real-Time PCRシステム(Applied Biosystems, Foster City, CA USA)を用いてqPCRを行った。各試料は三重で分析した。結果は、3回の技術的繰り返しの管腔の試料の平均log(コピー/mL)および粘膜試料の平均log(コピー/g)±sdとして報告する。
各結腸コンパートメントの微生物叢プロファイリングは、16S標的配列解析により確立した。Fermentas PCRキットで、Taq DNAポリメラーゼを用いて、製造業者の説明書(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)に従って品質検証PCRを行った。得られたPCR産物は2%アガロースゲル上でDNA抽出液に沿って100Vで30分間実行させた。元のゲノムDNA抽出液10μlをLGC genomics GmbH(ドイツ)に送って、上記のプライマーで、v3化学を用いたIllumina Miseqプラットフォームでライブラリー作成および配列決定を行った。
2.5. Caco-2/THP1-blueTM共培養モデル
共培養実験は、24ウェル半透過性インサート(孔径0.4μm)に1x105細胞/インサートの密度で播種したCaco-2細胞(HTB-37; American Type Culture Collection)を用いて実施した。Caco-2単層は、300Ωcm2を超える経上皮電気抵抗(TEER)を有する機能的単層が得られるまで、週に3回の培地交換で14日間培養した(Millicell ERS-2 epithelial volt-ohm meter, Milliporeで測定した)。細胞は、グルコース(25mM)およびグルタミン(4mM)を含有し、HEPES(10mM)および熱不活性化ウシ胎児血清(HI-FBS, 20%v/v)を添加したダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM)で維持させた。THP1-BlueTM細胞(InvivoGen)を24ウェルプレートに5×105細胞/ウェルの密度で播種し、ホルボール12-ミリステート13-アセテート(PMA)で48h処理し、グルコース(11mM)およびグルタミン(2mM)を含有し、HEPES(10mM)、ピルビン酸ナトリウム(1mM)およびHI-FBS(10% v/v)を添加したロスウェルパーク記念研究所(Roswell Park Memorial Institute, RPMI)1640培地で維持させた。
共培養実験は、24ウェル半透過性インサート(孔径0.4μm)に1x105細胞/インサートの密度で播種したCaco-2細胞(HTB-37; American Type Culture Collection)を用いて実施した。Caco-2単層は、300Ωcm2を超える経上皮電気抵抗(TEER)を有する機能的単層が得られるまで、週に3回の培地交換で14日間培養した(Millicell ERS-2 epithelial volt-ohm meter, Milliporeで測定した)。細胞は、グルコース(25mM)およびグルタミン(4mM)を含有し、HEPES(10mM)および熱不活性化ウシ胎児血清(HI-FBS, 20%v/v)を添加したダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM)で維持させた。THP1-BlueTM細胞(InvivoGen)を24ウェルプレートに5×105細胞/ウェルの密度で播種し、ホルボール12-ミリステート13-アセテート(PMA)で48h処理し、グルコース(11mM)およびグルタミン(2mM)を含有し、HEPES(10mM)、ピルビン酸ナトリウム(1mM)およびHI-FBS(10% v/v)を添加したロスウェルパーク記念研究所(Roswell Park Memorial Institute, RPMI)1640培地で維持させた。
共培養を設定する前に、Caco-2単層のTEERを測定した(空のインサートのTEERは、全ての読み取りから差し引いた)。次に、Caco-2を有するインサートを、PMA分化THP1-blueTM細胞の上に置いた。頂部コンパートメント(Caco-2細胞を含有)を、無菌-濾過した(0.22μm)結腸SHIME培地(Caco-2完全培地で1：5 v/vに希釈)で充填した。細胞を陽性対照としての酪酸ナトリウム(Sigma-Aldrich)で頂部処理した。基底側コンパートメント(THP1-blueTM細胞を含有)は、Caco-2完全培地で充填した。細胞を24時間処理し、その後TEERを測定した。次に、基底側の上清を廃棄し、細胞を超高純度リポポリサッカリド(LPS、大腸菌K12、InvivoGen)を含有するCaco-2完全培地で基底側を刺激した。また、対照として、ヒドロコルチゾン(HC, Sigma-Aldrich)と組み合わせたLPSおよびLPSを含まない培地で細胞を基底外側を刺激した。LPS刺激後(6h)、基底側の上清を集め、Luminex(登録商標)multiplex(Affymetrix-eBioscience)によるサイトカイン測定(ヒトIL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、CXCL10およびMCP-1)を行い、NF-κB活性に使用した。全ての測定は三重で行い、細胞は37℃で空気/CO2(95:5 v/v)の加湿雰囲気中でインキュベートした。
3.結果
3人の健康な成人ドナーから糞便試料を得て、それぞれ代表的なヒト微生物叢を有する3つの個別の腸内モデルを定着するのに使用した。2週間の安定化期間とさらに2週間の対照期間を設け、その間にドナーの微生物叢を定着させ、活性化させた後、3週間にわたってM-SHIME(登録商標)腸シミュレーターにSymproveを毎日投与した。これにより、細菌を胃酸条件に45分間曝露させ(インビボMRIイメージングでは、ヒトの純水(240mL)の半空時間は13±1分であることを示している)、その後、180分間小腸液に移した。図1のデータは、これらの相への曝露後の総細胞数および生細胞数；このチャレンジ中、細菌の99.3%が生存可能を保持したことを示している。これは、Symproveの水性製剤が、胃の低いpHと小腸に存在する高濃度の胆汁酸塩から細菌を保護したことを示しており、先のインビトロ耐酸性試験の結果と一致するものであった。この胃液および小腸液への曝露期間の後、3人の健康な成人ドナーから定着した微生物叢に細菌を移した。
3人の健康な成人ドナーから糞便試料を得て、それぞれ代表的なヒト微生物叢を有する3つの個別の腸内モデルを定着するのに使用した。2週間の安定化期間とさらに2週間の対照期間を設け、その間にドナーの微生物叢を定着させ、活性化させた後、3週間にわたってM-SHIME(登録商標)腸シミュレーターにSymproveを毎日投与した。これにより、細菌を胃酸条件に45分間曝露させ(インビボMRIイメージングでは、ヒトの純水(240mL)の半空時間は13±1分であることを示している)、その後、180分間小腸液に移した。図1のデータは、これらの相への曝露後の総細胞数および生細胞数；このチャレンジ中、細菌の99.3%が生存可能を保持したことを示している。これは、Symproveの水性製剤が、胃の低いpHと小腸に存在する高濃度の胆汁酸塩から細菌を保護したことを示しており、先のインビトロ耐酸性試験の結果と一致するものであった。この胃液および小腸液への曝露期間の後、3人の健康な成人ドナーから定着した微生物叢に細菌を移した。
図2は、プロバイオティクス種が近位結腸および遠位結腸の管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントにどのようにコロニーを形成したかを示している。L.アシドフィルスは、対照試料では検出されなかったが、これは、ヒトの微生物叢にもともと存在し、2週間後に近位結腸にのみ検出可能なレベルで出現したことを示している。投与期間中、遠位結腸の管腔、または近位結腸および遠位結腸の粘膜コンパートメントにはコロニー形成はなかった。これはおそらく、Symproveの製造中で、L.ラムノーサスの成長を助けるためにL.アシドフィルスを促進剤としてし、最終製品では104コピー/mLを超えて存在しないといった事実を反映している。L.ラムノーサスはまた、対照試料では検出されなかったが、Symproveを投与したら管腔コンパートメントに直ちにコロニーを形成し、1週間後には近位結腸で約106コピー/mL、遠位結腸で約107コピー/mLに達した。これらの濃度は、残りの投与期間中、検出可能なままであった。また、近位側結腸の粘膜コンパートメントにも直ちにコロニーを形成し、104コピー/gに達したが、遠位結腸の粘膜コンパートメントでは全く検出されなかった。L.プランタルムは対照期間中に近位側結腸の管腔では散発的に検出されたが、近位結腸の管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメント(管腔108コピー/mL、粘膜105コピー/g)および遠位結腸の管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメント(管腔107コピー/mL、粘膜105コピー/g)には直ちにコロニーを形成した。E.フェシウムは、対照期間中は全てのコンパートメントに多量に存在したが、Symproveを投与したらその数は増加し、管腔コンパートメントでは約108コピー/mL、粘膜コンパートメントでは約106コピー/gに達した。
図3は、Symprove投与前と投与中の近位結腸および遠位結腸のラクテートおよびSCFA濃度を報告するものである。ラクテートの濃度はSymprove投与後に上昇し、投与を継続することで向上した。ラクテートは、乳酸桿菌やビフィズス菌による炭水化物発酵の主要な副産物であるが、ベイロネラやメガスフェラなどのプロピオネート産生種、およびA.カッカエやE.ハリイなどのブチレート産生種によって消費されることも知られている。したがって、測定したラクテートの濃度は、産生と消費との間の正味の差である。
SCFAのデータでは、アセテートが最も多く(近位結腸および遠位結腸をわたって50.9%)、次にブチレートおよびプロピオネートであることを示す。これは、アセテートがヒトの糞便中で検出された総SCFAの半分を超える量を含むことを示すインビボデータと相関しており、バクテロイデス門(Bacteroidetes)や酢酸生成菌を含む多数の細菌群が糖分解発酵の副産物としてそれを産生するために生じる。アセテートはそれ自体がファエカリバクテリウム・プラウスニッツイ(Faecalibacterium prausnitzii)およびロゼブリア・spp.(Roseburia spp.)など多くのブチレート産生種の基質であり、ラクテートまたは炭水化物からブチレート合成を完了するために消費される必要のある必須補助基質である。したがって、ラクテートの場合と同様に、アセテートの濃度は産生と消費との間の正味の差である。プロピオネートレベルは、ドナーの微生物叢で変動でき、Symprove投与中も有意な変化は見られなかった。
ブチレート濃度は、近位結腸および遠位結腸の両方で、対照と比較して有意に向上した。アセテートやラクテートとは異なり、ブチレートは発酵の最終産物であるため、インビトロの腸内モデルでは消費されないが、インビボのブチレートは結腸細胞の主要なエネルギー源である(ブチレートは最大90%を利用し、高いブチレート濃度は一般的に健康改善と関連している(Tan et al., 2014, Rios-Covian et al., 2016))。
炭水化物を枯渇させると、結腸の微生物叢は糖分解発酵からタンパク質のタンパク質分解発酵に切り替わり、アンモニウム、分岐鎖脂肪酸(BCFA、典型的にはイソブチレート、2-メチルブチレートおよびイソバレレート)、各種アミン、フェノール/インドールおよびスルフィドの産生をもたらし；これらの化合物は一般的に結腸健康を障害するため、その存在は好ましくない。図4は、Symprove投与により、対照と比較して、BCFAおよびアンモニウムの両方のレベルが実際に低下したことを示している。
図5は、対照期間と投与期間中の3人のドナーの腸内微生物叢の多様性を、6つの主要な門で示すものである(門内の操作的分類単位(OTU)のファミリーの詳細は、図6および7に示す)。一般的に、Symprove投与により、ドナー1および2において、バクテロイデス門(Bacteroidetes)を犠牲にしながら、アクチノバクテリア(Actinobacteria)の近位管腔および遠位管腔のレベル、遠位粘膜のレベルを濃厚化した。特に、主にビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)は犠牲になっており、ドナー1および2ではビフィドバクテリウム・シュードカテヌラツム(Bifidobacterium pseudocatenulatum)が向上しており、ドナー3では、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescentis)が向上していた。また、ドナー2および3では、ビフィドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidum)の粘膜数が顕著に増加した。ビフィズス菌はアクチノバクテリア(Actinobacteria)に属するため、この門の増加は高いアセテート濃度を説明できるが、同時に高いブチレート濃度も説明でき、上記のブチレート産生菌とのアセテートによる交差摂取相互作用が介在しており、一方でバクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)の減少は低いプロピオネート濃度を説明できる。ファーミキューテス門(Firmicutes)の管腔レベルは、ドナー1および2の近位結腸と3人全ての遠位結腸で向上した。OTUレベルでは、主な変化はOTU33(L.プランタルム)およびOTU125(L.ラムノーサス)に起因し、これは、Symprove中のプロバイオティクス細菌によるコロニー形成の成功を反映している。
ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)の数は3人のドナー全てで増加し、OTU 64(F.プラウスニッツイ(F. prausnitzii))の数はドナー2(およびドナー全ての粘膜コンパートメント)で上昇し、OTU29(サブドリグラヌルム・spp.(Subdoligranulum spp.))はドナー1および3で上昇した。興味深いことに、ブチレート産生が強いファミリーであるラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)は、ドナー全ての粘膜コンパートメントで抑制された。ベイロネラセアエ(Veillonellaceae)の数はドナー全てで向上したが、特にドナー2(OTU1, メガスフェラ・spp.(Megasphaera spp.))で向上した。ブチレート産生菌の多くはファーミキューテス門(Firmicutes)に属すため、この門の割合の向上は、上記の議論したブチレートレベルの上昇とも相関している。Symprove投与後に増加した他のラクテート産生ファミリーとしては、E.フェシウムによる広いコロニー形成を反映した、ドナー1および3の管腔および粘膜近位結腸ならびに管腔遠位結腸中のエンテロコッカセアエ(Enterococcaceae)、およびドナー全てのコンパートメント全体中のストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)があり、これらの増加は、アクチノバクテリア(Actinobacteria)およびファーミキューテス門(Firmicutes phyla)の全般的な増加で明らかであった。シネルギステス門(Synergistetes)は、ドナー2および3の遠位結腸にコロニーを形成し、その数はSymprove投与後に増加した。
Caco-2-THP1-BlueTM共培養インビトロモデルを用いて、SHIME試料の炎症反応を評価した(対照およびSymprove投与後)。Symprove投与後、細胞培養モデルでは経上皮電気抵抗(TEER)の減少は見られず、これは、実験中に上皮の完全性が維持されたことを示している。図8は、抗炎症性サイトカイン(NK-κB、IL-6、IL-10およびIL-1β)および炎症性ケモカイン(MCP-1、CXCL10およびIL-8)のレベルを示すものである。Symprove投与により、NF-κBまたはIL-1βのレベルは変化しなかったが、IL-6とIL-10のレベルは向上し、MCP-1、CXCL10およびIL-8のレベルは低下した。
4. 検討
本明細書の報告のデータでは、Symprove中のプロバイオティクス種が、ヒトを模擬した条件下での経口送達というチャレンジを切り抜けて生き残ることができることを示している。胃酸に45分間、小腸液に3時間暴露させても、生菌数は有意に減少しなかった(生存率99.3%)。この安定性の主な要因は、おそらく、細菌が凍結乾燥のコンパクト/サッシェ剤または水中油型エマルジョン(ヨーグルトなど)ではなく、水性麦汁に懸濁されており；インビボでは、水の摂取は胃酸(主に、タンパク質を変性させ、ペプシノーゲンをペプシンに変換することによってそれを活性化することによってタンパク質の消化を促進するため主要分泌型)の産生を誘発することはない、といった事実である。実際、かなりの容量の水を摂取すると胃液が希釈され、pHが局所的に上昇する。実際、かなりの容量の水を摂取すると胃液が希釈され、局所のpHが上昇する。脂肪がないと、胃は小腸に水を急速に排出し(ヒトの半排出時間は13±1分)、そこで局所のpHが再び上昇する(小腸のpHはその長さに沿って約5.6から7.4に徐々に向上する)。乳酸桿菌はかなりの耐酸性があることが示されており；例えば、L.アシドフィルス株はpH3.5で生存可能であるが、L.ラムノーサス株はpH3で数時間生存可能であった。脂肪が摂取された食品の成分である場合、水は同じ速度で排出し、脂肪はより長期間保持される。グルコースが6% w/vを超えて存在する場合、胃内容排出はさらに遅延させる。
本明細書の報告のデータでは、Symprove中のプロバイオティクス種が、ヒトを模擬した条件下での経口送達というチャレンジを切り抜けて生き残ることができることを示している。胃酸に45分間、小腸液に3時間暴露させても、生菌数は有意に減少しなかった(生存率99.3%)。この安定性の主な要因は、おそらく、細菌が凍結乾燥のコンパクト/サッシェ剤または水中油型エマルジョン(ヨーグルトなど)ではなく、水性麦汁に懸濁されており；インビボでは、水の摂取は胃酸(主に、タンパク質を変性させ、ペプシノーゲンをペプシンに変換することによってそれを活性化することによってタンパク質の消化を促進するため主要分泌型)の産生を誘発することはない、といった事実である。実際、かなりの容量の水を摂取すると胃液が希釈され、pHが局所的に上昇する。実際、かなりの容量の水を摂取すると胃液が希釈され、局所のpHが上昇する。脂肪がないと、胃は小腸に水を急速に排出し(ヒトの半排出時間は13±1分)、そこで局所のpHが再び上昇する(小腸のpHはその長さに沿って約5.6から7.4に徐々に向上する)。乳酸桿菌はかなりの耐酸性があることが示されており；例えば、L.アシドフィルス株はpH3.5で生存可能であるが、L.ラムノーサス株はpH3で数時間生存可能であった。脂肪が摂取された食品の成分である場合、水は同じ速度で排出し、脂肪はより長期間保持される。グルコースが6% w/vを超えて存在する場合、胃内容排出はさらに遅延させる。
上部GIT通過後、3種のプロバイオティクス細菌(L.プランタルム、L.ラムノーサスおよびE.フェシウム)は近位結腸および遠位結腸の管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントで定着、コロニー形成、増殖可能であって、一方、L.アシドフィルスは管腔で増殖可能であった。重要なことは、プロバイオティクス種のうち3種が粘膜層にコロニー形成可能であったことを示している。これは、インビボでSymproveを摂取すると、管腔の数が一過性に増加するのではなく、プロバイオティクス種による腸内のコロニー形成につながることを示唆しており、これは、臨床試験で見られたプラスの長期的な効果を説明するのに役立つ。定着した活気がある微生物叢の存在にもかかわらず増殖が起こり、これは、プロバイオティクス種が栄養素に対して共生細菌に打ち負かされなかったことを示唆している。
プロバイオティクスは一旦定着すると、プラスの影響を及ぼし；主な効果はラクテート濃度の向上に起因するものであった。この基質からの交差摂取相互作用により、腸内常在菌(commensal gut bacteria)、特にファーミキューテス門(Firmicutes phyla)の細菌の成長を促進し、SCFAレベル、特にブチレートの向上を導いた。
全てのドナーで微生物叢の組成に変化が見られたが、ヒトの腸内微生物叢の複雑さおよび多様性の両方を反映して、その変化は様々であった。腸内微生物叢の広範な変化は、腸の疾患と関連しており；例えば、IBSでは一般的にファーミキューテス門(Firmicutes)およびアクチノバクテリア(Actinobacteria)のレベルの低下、IBDでは一般的にファーミキューテス門(Firmicutes)のレベルの低下とプロテオバクテリア(Proteobacteria)のレベルの上昇が見られる。
Symprove中のラクトバチルスspp.によって生産されるだけでなく、ビフィズス菌の数も増加することが見られ、これらはラクテートを産生することが知られている。1つの可能性は、Symprove中でプロバイオティクス細菌を産生および懸濁するために使用される麦汁は、発芽大麦の抽出物を含有するため、それ自体がビフィズス菌の栄養源であるということである。未処理の大麦は、成長期のブタおよび低脂肪食を与えたラットにおいて、ビフィドバクテリウムspp.(Bifidobacterium spp.)およびラクトバチルスspp.を増加させ、ブチレート濃度を向上されることが示されたおり、一方、大麦由来のキシロオリゴ糖は、シミュレーションGIT条件においてラクトバチルスspp.を向上させることが示されている。ビフィズス菌数の増加は、それ自体が一般的な健康に有益な影響を及ぼすと考えら；例えば、B.ビフィダムを4週間摂取すると、健康な成人の微生物叢を改変させ、これにより、プレボテラセアエ(Prevotella ceae)およびプレボテラ(Prevotella)の数が減少し、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)およびリケネラセアエ(Rikenellaceae)の数が増加し、ブチレート濃度が上昇する。
アセテートレベルは対照期間および投与期間を通じて比較的に一定であったが、アセテートの濃度の上昇は、アセテート産生菌(ビフィズス菌、バクテロイデス門(Bacteroidetes)および酢酸生成菌)の割合の向上により上昇したことを示唆した。しかし、アセテート濃度の測定値は常に産生と消費との間の正味の差を反映しているため、全体のレベルは有意に向上しなかった。
逆に、ブチレートの濃度は有意に高かったが、これは、ブチレートが発酵の終点であるためであり；インビボでは、ブチレートの大部分は利用されるが、インビトロの腸モデルではこれらが存在しないため、ブチレートは管腔の媒質に蓄積されるのである。
腸内毒素症はブチレート産生種の減少に関連しているため、ここで見られるブチレートの増加は、プラスの臨床効果をもたらすと期待されている。ヒトの健康に対するブチレートの多くのプラスの効果を考えると、ブチレートサプリメントを製剤化するために多くの試みがなされてきており；残念ながら、ブチレートは非常に不快な臭いがあり、上部GITに大部分吸収され、酪酸ナトリウムのコーティングされたペレットへの配合は、ラットの腸機能の調節に失敗することを証明した。本明細書に提示されているデータは、適切に製剤化したプロバイオティクスサプリメントが、栄養補助食品として供給するのではなく、既存の微生物叢を刺激してブチレートを産生する、良いアプローチであり得ることを示唆している。
炎症反応の調節に対するプロバイオティクスの効果も、それらの臨床的有効性に寄与し得る。ここで、インビトロ細胞培養モデルは、Symprove投与後にSHIME培地に曝露させた場合、上皮バリアーの完全性の低下、および炎症マーカーの減少を示さなかった。抗炎症性サイトカインのNK-κBおよびIL-1βのレベルは変化しなかったが、IL-6は向上し、IL-10は有意に向上した。付随して、炎症性ケモカインのMCP-1、CXCL10およびIL-8のレベルは低下した。
5．概要
データは、プロバイオティクス懸濁液がヒトの経口送達のチャレンジに対処するように製剤化した場合、生存プロバイオティクス種を腸に送達できることを示している。そこに到達すると、細菌は管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントに浸透し、コロニーを形成し、増殖することができる。ここで説明する細胞培養モデルは、免疫応答を調節しているのは微生物叢全体の変化であることを意味することを覚えておくことが重要である。これは重要な違いであり；世界保健機関(WHO)の定義では、プロバイオティクスは「宿主に健康上の利益をもたらす」必要があるが、プロバイオティクス種自体が何らかの代謝メカニズムによってインビボでプラスの効果を引き起こさなければならないことを実証しなければならないことを意味すると誤って解釈されることがよくある。本明細書に示されているデータは、プロバイオティクス種が既存の微生物叢に組込まれ、コロニーを形成し、利用可能な栄養素(ラクテート)が産生することで、主に有益な門の成長を促進することを明確に示唆しており、これは、細菌ファミリーのリバランスが、宿主に健康上の利益を与えることを意味する。このリバランシング効果は、微生物叢が3人の健康なドナーから得られたにもかかわらずここで見られており；上記のように、多くの腸疾患は腸内毒素症に関連しているため、個々のプロバイオティクス種からの影響ではなく、リバランスのメカニズムが臨床症状の改善の主な原因である可能性がある。また、データが腸健康にマイナスの影響を及ぼさないことも注目に値す。以前の研究では、ラクトバチルスspp.(Lactobacillus spp.)およびビフィドバクテリウムspp.(Bifidobacterium spp.)がクロストリジウム・ディフィシル(Clostridium difficile)に対して抗病原性作用を発揮することができることを示している。したがって、これらのプロバイオティクス種の送達は、糞便微生物叢移植などのより根本的な対策の前に、再発性腸感染症の患者に代替処置オプションを提供し得る。
データは、プロバイオティクス懸濁液がヒトの経口送達のチャレンジに対処するように製剤化した場合、生存プロバイオティクス種を腸に送達できることを示している。そこに到達すると、細菌は管腔コンパートメントおよび粘膜コンパートメントに浸透し、コロニーを形成し、増殖することができる。ここで説明する細胞培養モデルは、免疫応答を調節しているのは微生物叢全体の変化であることを意味することを覚えておくことが重要である。これは重要な違いであり；世界保健機関(WHO)の定義では、プロバイオティクスは「宿主に健康上の利益をもたらす」必要があるが、プロバイオティクス種自体が何らかの代謝メカニズムによってインビボでプラスの効果を引き起こさなければならないことを実証しなければならないことを意味すると誤って解釈されることがよくある。本明細書に示されているデータは、プロバイオティクス種が既存の微生物叢に組込まれ、コロニーを形成し、利用可能な栄養素(ラクテート)が産生することで、主に有益な門の成長を促進することを明確に示唆しており、これは、細菌ファミリーのリバランスが、宿主に健康上の利益を与えることを意味する。このリバランシング効果は、微生物叢が3人の健康なドナーから得られたにもかかわらずここで見られており；上記のように、多くの腸疾患は腸内毒素症に関連しているため、個々のプロバイオティクス種からの影響ではなく、リバランスのメカニズムが臨床症状の改善の主な原因である可能性がある。また、データが腸健康にマイナスの影響を及ぼさないことも注目に値す。以前の研究では、ラクトバチルスspp.(Lactobacillus spp.)およびビフィドバクテリウムspp.(Bifidobacterium spp.)がクロストリジウム・ディフィシル(Clostridium difficile)に対して抗病原性作用を発揮することができることを示している。したがって、これらのプロバイオティクス種の送達は、糞便微生物叢移植などのより根本的な対策の前に、再発性腸感染症の患者に代替処置オプションを提供し得る。
実施例2
重度の肝硬変または早期発症パーキンソン病(PD)に苦しんでいる患者からの腸内微生物叢に対するSymproveの効果を研究するために、さらなる実験を行った。実験は、Symproveによって処置されることが知られている炎症性腸疾患(IBD)を有する患者からの腸内微生物叢でも行った。
重度の肝硬変または早期発症パーキンソン病(PD)に苦しんでいる患者からの腸内微生物叢に対するSymproveの効果を研究するために、さらなる実験を行った。実験は、Symproveによって処置されることが知られている炎症性腸疾患(IBD)を有する患者からの腸内微生物叢でも行った。
肝硬変およびPDの病理は、一般的に、患者の腸内細菌集団とは関連していない。それにもかかわらず、以下のデータに示うように、PD患者および硬変患者の両方で腸の腸内毒素症(gut dysbiosis)を示す。さらに、2つの条件の間で異なる腸内菌共生バランス失調の変化が観察される。したがって、提示されたデータは、さまざまな腸内菌共生バランス失調の状態および疾患状態にわたって、腸内菌共生バランス失調の腸内微生物叢のより健康な状態へのリバランスを促進するSymproveの能力を実証している。
2.材料および方法
PD、肝硬変、またはIBDを有する患者からの糞便試料(疾患ごとに3人のドナー、並行して実行)得られた細菌接種源を用いて、実施例1に記載のM-SHIME(登録商標)システムを用いた短期アッセイを行った。これは、Symprove中のプロバイオティクス細菌の存在下または非存在下での、単一容器中の糞便試料の発酵を含む。簡単に説明すると、結腸に存在する基礎栄養素(5.9g/LのK2HPO4、18.3g/LのKH2PO4、2.3g/LのNaHCO3、2.3g/Lの酵母抽出物、2.3g/Lのペプトン、0.6g/Lのシステインおよび2.3ml/LのTween80)を含有する、pH6.5で緩衝化した糖枯渇栄養培地(56mL)を、発酵開始時に7mlのSymproveと同時投与した。対応する一連のブランク実験は、基礎栄養培地を蒸留水(Symproveの代わりに7mL)に加えることによって行った。ブランクデータとSymproveデータを比較することで、プロバイオティクス製剤の効果を決定することが可能になった。7.5%(w/v)糞便懸濁液は、嫌気性リン酸緩衝液(K2HPO4 8.8g/L;KH2PO4 6.8g/L;チオグリコール酸ナトリウム 0.1g/L;亜ジチオン酸ナトリウム 0.015g/L)で各ドナーから調製し、リアクターに接種し(7mL)、総量を70mLにした。最後に、ムチンで覆われた5つのマイクロコズムを全ての結腸の容器に加え、管腔の微生物叢だけでなく、結腸領域の特定の粘膜微生物叢を維持することを可能にした。各インキュベーションは3回行い、18回の独立したインキュベーションとなった。インキュベーションは、37℃、振盪(90rpm)および嫌気性条件下で48時間行った。インキュベーションは、強力な微生物発酵を可能にするためだけでなく、時間をかけて複数の試料を集めることを可能にするために、十分に高い容量(70mL)の完全に独立した閉鎖リアクターで行った。生物学的多様性を考慮して、各インキュベーションは3回行い、その結果、54の独立したインキュベーション(9人のドナー、ドナーごとのブランクと処理、3回)となった。
PD、肝硬変、またはIBDを有する患者からの糞便試料(疾患ごとに3人のドナー、並行して実行)得られた細菌接種源を用いて、実施例1に記載のM-SHIME(登録商標)システムを用いた短期アッセイを行った。これは、Symprove中のプロバイオティクス細菌の存在下または非存在下での、単一容器中の糞便試料の発酵を含む。簡単に説明すると、結腸に存在する基礎栄養素(5.9g/LのK2HPO4、18.3g/LのKH2PO4、2.3g/LのNaHCO3、2.3g/Lの酵母抽出物、2.3g/Lのペプトン、0.6g/Lのシステインおよび2.3ml/LのTween80)を含有する、pH6.5で緩衝化した糖枯渇栄養培地(56mL)を、発酵開始時に7mlのSymproveと同時投与した。対応する一連のブランク実験は、基礎栄養培地を蒸留水(Symproveの代わりに7mL)に加えることによって行った。ブランクデータとSymproveデータを比較することで、プロバイオティクス製剤の効果を決定することが可能になった。7.5%(w/v)糞便懸濁液は、嫌気性リン酸緩衝液(K2HPO4 8.8g/L;KH2PO4 6.8g/L;チオグリコール酸ナトリウム 0.1g/L;亜ジチオン酸ナトリウム 0.015g/L)で各ドナーから調製し、リアクターに接種し(7mL)、総量を70mLにした。最後に、ムチンで覆われた5つのマイクロコズムを全ての結腸の容器に加え、管腔の微生物叢だけでなく、結腸領域の特定の粘膜微生物叢を維持することを可能にした。各インキュベーションは3回行い、18回の独立したインキュベーションとなった。インキュベーションは、37℃、振盪(90rpm)および嫌気性条件下で48時間行った。インキュベーションは、強力な微生物発酵を可能にするためだけでなく、時間をかけて複数の試料を集めることを可能にするために、十分に高い容量(70mL)の完全に独立した閉鎖リアクターで行った。生物学的多様性を考慮して、各インキュベーションは3回行い、その結果、54の独立したインキュベーション(9人のドナー、ドナーごとのブランクと処理、3回)となった。
短期の結腸インキュベーション開始時に、結腸に存在する基礎栄養素(例えばムチンなどの宿主由来グリカン)を含有する糖枯渇栄養培地に、試験成分を製品の2倍量に相当する濃度で加えた。また、各ドナーには、糖枯渇栄養培地のみを含有するブランク(繊維を含まない)を含ませることで、細菌群集のバックグラウンド活性の評価を可能にした。
SCFA、BCFAおよびアンモニウム産生を測定するだけではなく、微生物叢組成の変化も16S rRNA分析によって評価した。微生物の配列を飽和レベルに達するまで増幅させる、Illumina PCRベースの配列決定法を使用した。そのため、結果は異なる系統的なレベル(微生物門、科、属およびOTUレベル)で示し、各試料内の配列総量に対する割合値として示すことで、半定量的な結果を提供する。適用した方法論は、16S rDNAの2つの超可変領域(V3-V4)にまたがるプライマーに関するものであり、ペアエンド配列決定を用いることで、2x250bpの配列決定により、424bpのアンプリコンを得る。
さらに、Caco-2/THP1共培養アッセイを上記のように行った。簡単に言うと、Caco-2細胞(HTB-37；American Type Culture Collection)を24ウェル半透過性インサートに播種した。Caco-2単層は、経上皮電気抵抗(TEER)を有する機能的な細胞単層が得られるまで、週に3回の培地交換で、14日間培養した。細胞は、グルコースおよびL-グルタミンを含有し、HEPESおよび20%(v/v)熱不活性化(HI)牛胎児血清(FBS)を添加したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)中で維持させた。細胞は、空気/CO2(95：5、v/v)の加湿雰囲気中、37℃でインキュベートした。
THP1-BlueTM(InvivoGen)細胞は、グルコースおよびグルタミンを含有し、HEPES、ピルビン酸ナトリウムおよび10%(v/v)HI-FBSを添加したRoswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培地で維持させた。THP1-BlueTMは、転写因子核因子カッパB(NF-κB)によって誘導可能なプロモーターの制御下で分泌型アルカリホスファターゼ(SEAP)遺伝子を発現するレポーターコンストラクトで安定的にトランスフェクトさせたTHP1ヒト単球である。TLRが活性化されると(例えば、リポポリサッカリド(LPS)；グラム陰性菌からの分離によって)、NF-κBが活性化され、SEAPの発現および分泌を誘導する。次に、QUANTI-Blue試薬(InvivoGen)を用いることによって、上清中でのSEAP活性を測定できる。THP1-BlueTM細胞を24ウェルプレートに播種し、該細胞の、接着が可能でTLRシグナル伝達に最も重要なマクロファージ様細胞への分化を誘導するPMAで処理した。細胞は、空気/CO2(95:5, v/v)の加湿雰囲気中、37℃でインキュベートした。
共培養では、Caco-2単層のTEERを測定した(=0hの時点)。空のインサートのTEERは、インサートの残留電気抵抗を考慮して、全ての読み取りから差し引いた。次に、Caco-2を有するインサートを、前述のように、PMAで分化したTHP1-BlueTM細胞の上に配置して、さらに実験を行った4,11。簡単に言うと、頂部コンパートメント(Caco-2細胞を含有する)は、無菌濾過した(0.22μm)結腸SHIME懸濁液で充填した。細胞をまた、陽性対照としての酪酸ナトリウム(NaB)(Sigma-Aldrich)で頂部を処理した。基底側コンパートメント(THP1-BlueTM細胞を含有する)には、Caco-2完全培地を充填した。
細胞はまた、対照としての両チャンバー中のCaco-2完全培地に曝露させた。細胞を24h処理した後、TEERを測定した(=24hの時点)。空のインサートのTEERを差し引いた後、全ての24h値はそれ自体の0h値に正規化し(異なるインサートの初期TEERの違いを考慮)、初期値の百分率として示した。次に、基底側の上清を廃棄し、細胞を基底外側で、超高純度LPS(エシェリヒア・コリ(Escherichia coli) K12, InvivoGen)を含有するCaco-2完全培地で刺激した。また、対照として、ヒドロコルチゾン(HC)(Sigma-Aldrich)と組み合わせたLPSおよびLPSを含まない培地(LPS-)で細胞を基底膜側で刺激した。LPS刺激後、基底側の上清を集め、サイトカイン測定(Luminex(登録商標)multiplex(Affymetrix-eBioscience)によるIL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、CXCL10、MCP-1)とNF-κB活性測定を製造業者の指示に従い行った。全ての処理は生物学的三重で行った。細胞は、空気/CO2(95:5, v/v)の加湿雰囲気中、37℃でインキュベートした。
さらに、スクラッチアッセイを行い、Symproveが腸管上皮バリアーの修復を促進する能力を評価した。インビトロでのスクラッチ創傷治癒アッセイは、24ウェルプレートに播種したT84細胞(Sigma-Aldrich)を用い、完全なコンフルエントな細胞単層が形成されるまで、週に3回の培地交換をしながら7日間培養して行った。細胞は、L-グルタミンおよびHEPESを含み、抗生物質-抗真菌剤および5%HI-FBSを添加したダルベッコ改変イーグル培地/栄養混合物F-12ハム(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham)中で維持させた。細胞は、空気/CO2(95:5, v/v)の加湿雰囲気中、37℃でインキュベートした。
7日間の培養後、T84細胞単層にスクラッチを作り、その後、無血清T84培地で1/10に希釈した結腸バッチ懸濁液で処理した。画像は、Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Readerを用いて、最初の時点(0h)および24h培養後に撮影した。
画像を比較して細胞の移動速度を定量化し、創傷部をImageJ(登録商標)を用いて測定した。無血清培地および5mM NaB(Sigma-Aldrich)をそれぞれ陰性対照および陽性対照として使用した。全ての処理は生物学的三重で行った。細胞は、空気/CO2(95:5、v/v)の加湿雰囲気中、37℃でインキュベートした。
3.結果
3.1 SCFA産生
肝硬変
Symproveの追加により、3人の肝硬変ドナーの腸内微生物叢に、SCFA産生の点から刺激的な効果があった(図9A)。SCFA産生は、主に6～48hの時間枠で起こった。全体として、Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーEおよびDで観察され、対応するブランクよりもそれぞれ28.0mMおよび26.9mM高いSCFA濃度を得た。
3.1 SCFA産生
肝硬変
Symproveの追加により、3人の肝硬変ドナーの腸内微生物叢に、SCFA産生の点から刺激的な効果があった(図9A)。SCFA産生は、主に6～48hの時間枠で起こった。全体として、Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーEおよびDで観察され、対応するブランクよりもそれぞれ28.0mMおよび26.9mM高いSCFA濃度を得た。
Symproveの追加により、3人の肝硬変ドナーのアセテート産生に刺激効果があった(図9B)。ドナーEは、最初の6hの間にすでにアセテートが強力に産生されることを特徴としており、これは、Symproveによって明らかに刺激されていた。全体として、アセテートの産生は主に6～24hの間に起こった。Symproveでの処理により、ドナーD(処理での濃度がブランクと比較して16.9mM高い)およびE(濃度が16.7mM高い)で最も明白なアセテート濃度の向上と関連していた。
Symproveの追加により、3人の肝硬変ドナーのインキュベーションにおいて、プロピオネート産生に刺激効果があった(図9C)。プロピオネート産生は6～48hの間に起こり、ドナーDでは48h後に最も高い濃度を得た。Symproveの最も強い刺激効果はドナーDでも観察され、対応するブランクよりも8.8mM高いプロピオネート濃度を得た。
ブチレートの産生により、ドナー全てで、特にドナーEおよびFで、Symproveの追加により促進された(図9D)。48h後の最も高いブチレート濃度は、ドナーFで得ており、これはおそらくアセテートの変換によるもので、したがって、アセテート濃度を低下させたことを説明する(図9B)。Symproveの追加により、ブチレートの産生は、ドナーFでは7.5mM、ドナーEでは3.9mM向上した。
パーキンソン病
シンプローブの追加により、3人のパーキンソン病ドナーの腸内微生物叢に、SCFA産生の点で刺激効果があった(図10A)。SCFA産生は、主に6～48hの時間枠で起こった。全体として、Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーHおよびIで観察され、対応するブランクよりもそれぞれ27.8mMおよび28mM高いSCFA濃度を得た。
シンプローブの追加により、3人のパーキンソン病ドナーの腸内微生物叢に、SCFA産生の点で刺激効果があった(図10A)。SCFA産生は、主に6～48hの時間枠で起こった。全体として、Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーHおよびIで観察され、対応するブランクよりもそれぞれ27.8mMおよび28mM高いSCFA濃度を得た。
Symproveの追加により、主に6～48時間の時間枠で、3人のパーキンソン病ドナーのアセテート産生にに刺激効果があった(図10B)。この刺激は、ブランクよりも処理において有意に高いアセテート濃度をもたらした。最も強い刺激はドナーIで観察された(処理において21.4mM高いアセテート濃度を得た)。3人のドナー全てにおいて、24～48hの時間枠の間に有意な量のアセテートが産生し、これは、24h後に基質を枯渇させなかったことを示している。
シンプローブの追加により、3人のパーキンソン病ドナーのうちの2人(GおよびH)でのインキュベーションにおいて、プロピオネート産生にタ刺激効果があった(図10C)。プロピオネート産生は6～48hの時間枠の間に起こったが、刺激効果は24～48hの時間枠の間に発揮された。48h後のプロピオネート濃度が最も高く、Symproveの刺激効果が最も強いのはドナーHで、対応するブランクよりも5.9mM高いプロピオネートを得た。
Symproveは、3人のドナーにおいてブチレート産生を刺激した(図10D)。刺激効果は24h後にすでに明らかであり、24～48hの時間枠の間継続した。48h後に最も高いブチレート濃度が得られたのは、ドナーGでの処理インキュベーションで、ブチレートレベルがブランクと比較して9.1mM向上した。Symproveの追加により、ブチレートの産生がドナーHでは7.5mM、ドナーIでは5.9mM向上した。
ラクテート濃度は6h後に大幅に上昇し、その後、残りの試験中に低下した。ラクテートは、Symprove中の乳酸菌による炭水化物発酵によって濃度が向上する最初の化合物であり；しかしながら、ベイロネラおよびメガスフェラなどのプロピオネート産生種、およびアアナエロスティペス・カッカエ(Anaerostipes caccae)およびE.ハリイなどのブチレート産生種によって消費されるため、実際にはシステム内に蓄積されることはない。
さらに、Symproveは、試験した3人のPDドナーにおいて、分岐CFA濃度(イソブチレート、イソバレレートおよび2-メチルブチレート)を対照インキュベーションと比較して低下させた。アンモニウム産生に関しては、Symproveが3人のドナーでアンモニウム濃度を対象インキュベーションと比較して低下させたことを見出した。
PD患者の微生物叢では、短鎖脂肪酸(SCFA)産生菌の数が減少しているのが一般的な特徴であるため、プロバイオティクス細菌投与後にSCFAレベルが上昇したことは、PD患者の処置の観点からも激励の徴候である。
IBD
Symproveの追加により、SCFAの産生に刺激効果があった(図11A)。SCFA産生は、試験成分の全体的な発酵を反映するものである。SCFAの生産は、6～24hの時間枠の間に始まり、ドナーAでは24h後に最も高い濃度を得て、24～48hの時間枠の間に継続した。インキュベーション終了時に、最も高いSCFA濃度は、ドナーAの処理で得た。Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーAでも観察され、対応するブランクよりも25.3 mM高いSCFA濃度を得た。
Symproveの追加により、SCFAの産生に刺激効果があった(図11A)。SCFA産生は、試験成分の全体的な発酵を反映するものである。SCFAの生産は、6～24hの時間枠の間に始まり、ドナーAでは24h後に最も高い濃度を得て、24～48hの時間枠の間に継続した。インキュベーション終了時に、最も高いSCFA濃度は、ドナーAの処理で得た。Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーAでも観察され、対応するブランクよりも25.3 mM高いSCFA濃度を得た。
Symproveの追加により、3人のIBDドナーでのインキュベーションにおいて、アセテート産生に刺激効果があった(図11B)。インキュベーションの最初の6hの間の産生はかなり低く；主に6～24hの時間枠の間に起こった。24h後の最も高い濃度は、ドナーAで得られた。このドナーでのアセテート産生は、24～48hの時間枠の間にさらに続き、インキュベーション終了時に3人のドナーの中で最も高いアセテート濃度を得た。Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーAでも観察され、対応するブランクよりも13.3mM高いアセテート濃度を得た。
ドナーCでの処理インキュベーションでは、アセテートが24～48hの時間枠の間に消費された。アセテートの消費は、群集のメンバー間の交差摂取を示すものである。
Symproveの追加により、3人のIBDドナーでのインキュベーションにおいて、プロピオネート産生に刺激効果があった(図11C)。産生はインキュベーションの最初の6hの間には起こらなかったが、6～48hの時間枠の間に起こった。48h後に最も高い濃度が得られたのは、ドナーAであった。Symproveの最も強い刺激効果は、ドナーAでも観察され、対応するブランクよりも9.7mM高いプロピオネート濃度を得た。
ブチレートは最初の6hのインキュベーションでは産生されなかった。ブチレート生産はアセテートおよび/またはラクテートの一次生産に依存することを考慮すると、一般的にはインキュベーションの後期段階で産生された。ブチレートの産生は6～24hの間に始まり、48h後にはブランクより高い濃度を示し、したがってSymproveのブチレート産生に対する刺激効果を示した。最も高いブチレート濃度はドナーBおよびCで得られ、それぞれ対応するブランクより10.9mMおよび12.6mM多くブチレートを得た。
3つの疾患条件全てにおいて、ラクテート産生の強力な向上はインキュベーションの最初の6hで観察され、その後、6時間～48時間にかけてラクテート濃度は低下した。これは、ラクテートがブチレートおよび/またはプロピオネートに変換されることを特徴とする交差摂取の相互作用を示しており、これらのSCFAsの増加が観察されたことによって裏付けられている。
3.2 微生物叢の組成の変化
3つの異なる群からの微生物叢をいずれかの処理前に比較した。16S-データでは以下の内容を示した：
アクチノバクテリア(Actinobacteria)の相対的存在率は、肝硬変患者(平均35.0%)でパーキンソン疾患患者(平均7.7%)と比較して有意に高かった。これは主に、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)(平均27.4%対PDで2.5%)の強いリプリゼンテーションに起因していた。
バクテロイデス門(Bacteroidetes)の相対的存在率は、PD患者(平均19.0%)でIBD患者(平均13.0%)と比較して有意に高かった。ファミリーレベルでは、主に、PD患者の腸内微生物叢にのみ存在するムリバクラセアエ(Muribaculaceae)に起因していた。
ファーミキューテス門(Firmicutes)の相対的存在率は、肝硬変患者(42.5%)で他の2つの疾患(IBDでは69.0%、PDでは70.3%)と比較して有意に低かった。ファミリーレベルでは、これは主に、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)(肝硬変患者における平均9.5%の存在率対IBDにおける15.6%の存在率およびパーキンソンにおける24.2%の存在率)、およびラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)(肝硬変患者における平均19.0%対IBDにおける40.3%およびPDにおける32.8%)に起因していた。
ベルコミクロビア(Verrucomicrobia)の相対的存在率は、PDの患者(0.4%)で肝硬変の患者(0.1%)と比較して有意に高かった。ファミリーレベルでは、これらの違いはアッケルマンシア科とプニセイコッカセアエ(Puniceicoccaceae)に起因していた。
3つの異なる群からの微生物叢をいずれかの処理前に比較した。16S-データでは以下の内容を示した：
アクチノバクテリア(Actinobacteria)の相対的存在率は、肝硬変患者(平均35.0%)でパーキンソン疾患患者(平均7.7%)と比較して有意に高かった。これは主に、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)(平均27.4%対PDで2.5%)の強いリプリゼンテーションに起因していた。
バクテロイデス門(Bacteroidetes)の相対的存在率は、PD患者(平均19.0%)でIBD患者(平均13.0%)と比較して有意に高かった。ファミリーレベルでは、主に、PD患者の腸内微生物叢にのみ存在するムリバクラセアエ(Muribaculaceae)に起因していた。
ファーミキューテス門(Firmicutes)の相対的存在率は、肝硬変患者(42.5%)で他の2つの疾患(IBDでは69.0%、PDでは70.3%)と比較して有意に低かった。ファミリーレベルでは、これは主に、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)(肝硬変患者における平均9.5%の存在率対IBDにおける15.6%の存在率およびパーキンソンにおける24.2%の存在率)、およびラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)(肝硬変患者における平均19.0%対IBDにおける40.3%およびPDにおける32.8%)に起因していた。
ベルコミクロビア(Verrucomicrobia)の相対的存在率は、PDの患者(0.4%)で肝硬変の患者(0.1%)と比較して有意に高かった。ファミリーレベルでは、これらの違いはアッケルマンシア科とプニセイコッカセアエ(Puniceicoccaceae)に起因していた。
肝硬変
Symprove製品に含有される両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、ドナーDおよびEの管腔および粘膜環境において有意に豊富になっており(図12)、これは、肝硬変患者の腸内微生物叢の存在下でこれらのプロバイオティクス菌株が増殖可能であることを示唆している。
Symprove製品に含有される両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、ドナーDおよびEの管腔および粘膜環境において有意に豊富になっており(図12)、これは、肝硬変患者の腸内微生物叢の存在下でこれらのプロバイオティクス菌株が増殖可能であることを示唆している。
Symproveでの処理により、試験した3人のドナーの管腔および粘液環境の両方において、アクチノバクテリア(Actinobacteria)が一貫して豊富化されていた。豊富化された
のは主に、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)の刺激によるものであったが(図13)、その原因となるOTUはドナー間で異なっていた(表8)。OTU5(ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum))およびOTU30(ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescentis))が、3人のドナー全てにおいて、Symproveによって有意に刺激されたことを見出した(図12)。
のは主に、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)の刺激によるものであったが(図13)、その原因となるOTUはドナー間で異なっていた(表8)。OTU5(ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum))およびOTU30(ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescentis))が、3人のドナー全てにおいて、Symproveによって有意に刺激されたことを見出した(図12)。
また、この処理により、3人のドナーの管腔においてファーミキューテス門(Firmicutes)集団を強く濃厚化させた。この刺激効果は、全てのドナーで統計的に有意であり、主にラクトバシラセアエ(Lactobacillaceae)およびベイロネラセアエ(Veillonellaceae)に特化していた(図13)。粘液環境においては、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)およびラクトバシラセアエ(Lactobacillaceae)が処理によって一貫して刺激された。OTU28(ベイロネラsp.(Veillonella sp.))は3つのドナーの内腔で一貫して濃厚化され；OTU11およびOTU12(両方ともクロストリジウム(Clostridium))XIVa sp.)は3人のドナーの粘液環境において一貫して濃厚化された(図12)。Symproveは、粘液環境においてプロテオバクテリア(Proteobacteria)に刺激効果があり、一方、管腔環境においては相対的存在率を低下させた。
最後に、Symproveで処理したら、管腔および粘液中のバクテロイデス門(Bacteroidetes)の相対的存在率は、ドナーの如何にかかわらず低下した。
パーキンソン病
Symprove製品の両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、3人のドナーの管腔および粘膜環境において有意に濃厚化されていた(図14)。これらに加えて、プロバイオティクス種であるOTU22(エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium))は、ドナーIの管腔および粘膜環境において有意に濃厚化されており(図14)、これは、上記のプロバイオティクス菌株はPD患者の腸内微生物叢が存在しても十分に増殖できることを示唆している。
Symprove製品の両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、3人のドナーの管腔および粘膜環境において有意に濃厚化されていた(図14)。これらに加えて、プロバイオティクス種であるOTU22(エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium))は、ドナーIの管腔および粘膜環境において有意に濃厚化されており(図14)、これは、上記のプロバイオティクス菌株はPD患者の腸内微生物叢が存在しても十分に増殖できることを示唆している。
Symproveの処理により、結果的に、試験した3人のドナーの管腔および粘液環境の両方において、一貫してアクチノバクテリア(Actinobacteria)が濃厚化された。全ての場合において、その効果は統計的に有意であった。濃厚化は、ビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)(図15)、より具体的にはフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)(図14)に近縁であると同定されたOTU5の刺激に起因するものであった。
処理により、3人のドナーの管腔およびドナーGおよびHの粘液環境においてファーミキューテス門(Firmicutes)集団が強力に濃厚化された。管腔において、刺激効果は3人のドナーにおいてオイバクテリアセアエ(Eubacteriaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ラクトバシラセアエ(Lactobacillaceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)およびベイロネラセアエ(Veillonellaceae)に特化したたものであった(図15)。粘液環境においての最も強力な濃厚化は、エリシペロトリカセアエ(Erysipelotrichaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)およびベイロネラセアエ(Veillonellaceae)で観察されたが、個人間の違いが観察された(図15)。OTU11、OTU12(両方ともクロストリジウム(Clostridium)XIVa sp.)、OTU7(ベイロネラ・パルブラ/ジスパル(Veillonella parvula / dispar))は、3人のドナーの管腔および粘膜環境において有意に濃厚化されていた(図14)。
上記のように、細菌集団の相対的存在率の低下は、別の細菌集団(この特定の場合では、例えば、ファーミキューテス門(Firmicutes)、アクチノバクテリア(Actinobacteria)およびプロテオバクテリア(Proteobacteria))の増殖(outgrowth)に起因するものであり得る。
IBD
Symprove製品に含有される両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、3人のドナーの管腔および粘液環境で有意に濃厚化されており(図16)、これは、IBD患者の腸内微生物叢が存在してもこれらのプロバイオティクス菌株は十分に増殖できることを示唆している。
Symprove製品に含有される両プロバイオティクス種であるOTU20(ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum))およびOTU21(ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus))は、3人のドナーの管腔および粘液環境で有意に濃厚化されており(図16)、これは、IBD患者の腸内微生物叢が存在してもこれらのプロバイオティクス菌株は十分に増殖できることを示唆している。
Symproveでの処理により、3人のドナーの管腔におけるアクチノバクテリア(Actinobacteria)レベルは一貫して向上した。ファミリーレベルでは、濃厚化は、主にビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae)に起因するものであった(図17)。この細菌ファミリーのOTUは、3人のドナー全てで有意に濃厚化されておらず(図16)、これは、特定の細菌群の刺激という点で処理に対する反応がドナーに依存することを示している。例えば、OTU5(B.ロンガム(B.longum)はドナーCで有意に濃厚化され、一方、ドナーBではOTU56(B.シュードロンガム(B.pseudolongum))が観察された刺激の原因であった。
さらに、Symprove処理により、3人のドナーの粘液中のファーミキューテス門(Firmicutes)集団は一貫して刺激された。濃厚化は、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)に特化したものであり、ラクトバシラセアエ(Lactobacillaceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)およびベイロネラセアエ(Veillonellaceae)で度合いが低下していた(図17)。管腔において、3人のドナーでラクトバシラセアエ(Lactobacillaceae)のみが有意に濃厚化されていた。ロゼブリア(Roseburia)種は、3人のドナーの粘液層において有意に濃厚化されていた(ドナーA/BではOTU13、ドナーCではOUT44)(図16)。
Symproveは、3人のドナーの粘液環境においてプロテオバクテリア(Proteobacteria)に対して軽度の刺激効果がある傾向があるが、管腔環境における相対的存在率は低下していた。刺激効果は主に、ドナーAおよびBのエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae)ならびにドナーBおよびCのブルコルデリアセアエ(Burkholderiaceae)に起因するものであった(図17)。管腔環境における低下効果は、主にドナーCにおけるブルコルデリアセアエ(Burkholderiaceae)(OTU52、パラスッテレラ・エキスクレメンチホミニス(Parasutterella excrementihominis))ならばにドナーAおよびBにおけるエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae)(OTU1、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli))に特化したものであった(図17)。
3.3 Caco-2/THP1-blue TM 共培養
肝硬変
Symprove処理後の全ての肝硬変ドナーの結腸試料は、その対照と比較して、共培養のTEERを有意に増加させ、一方、対照試料のTEERは、実験対照CMと比較してわずかに減少させた(図18)。したがって、肝硬変患者のSymprove結腸バッチ試料は、腸管上皮のバリアー機能および完全性に対して有意なプラス効果があると結論づけることができる。
肝硬変
Symprove処理後の全ての肝硬変ドナーの結腸試料は、その対照と比較して、共培養のTEERを有意に増加させ、一方、対照試料のTEERは、実験対照CMと比較してわずかに減少させた(図18)。したがって、肝硬変患者のSymprove結腸バッチ試料は、腸管上皮のバリアー機能および完全性に対して有意なプラス効果があると結論づけることができる。
LPS刺激後の炎症反応を評価すると、Symprove処理後の肝硬変結腸試料は、対照と比較して抗炎症性/免疫寛容原性の反応をより促進していた。
結腸肝硬変バッチ試料の処理では、LPS+対照と比較して、またそれら自身の対照と比較して、NF-kB活性が向上した(図19)。これらの差は、全ドナーの平均値をとると、有意になることを見出した。
抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10の分泌に関して、全てのドナーからのSymprove処理試料は、その対照と比較してIL-6およびIL-10レベルを向上させた(図(20))。
結論として、肝硬変ドナーからの結腸試料は、Symproveでの処理によりNF-kB活性を向上させ、それに伴い抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10が分泌されており、Symprove処理後の抗炎症性/免疫寛容原性の腸表現型を示している。
Symprove処理試料において、対照と比較して平均TNFaおよびCXCL10応答が上昇したが、これは統計的に有意ではなかった。
IL-8およびMCP-1の分泌に関して、1つを除く全ての肝硬変バッチ試料は、LPS+対照と比較して分泌を低下させ、全てのSymprove処理試料は、それぞれの対照と比較してIL-8およびMCP-1の分泌を低下させた(図21)。
結論として、Symproveにでの処理により、肝硬変ドナーからの結腸試料において、Symprove処理後の抗炎症性/免疫寛容原性の腸表現型を示すIL-8およびMCP-1の分泌が低下した。
パーキンソン病
パーキンソン患者からの対照バッチ試料のTEERは、実験対照CMと比較して低下し、一方、Symproveでの処理後、TEERは試験した3人のドナー全てにおいて、その対照と比較して有意に増加した(図22)。これは、Symproveが、パーキンソン病ドナーの結腸バッチ試料における炎症誘発性腸管上皮バリアー透過性に有意な保護効果あることを示している。
パーキンソン患者からの対照バッチ試料のTEERは、実験対照CMと比較して低下し、一方、Symproveでの処理後、TEERは試験した3人のドナー全てにおいて、その対照と比較して有意に増加した(図22)。これは、Symproveが、パーキンソン病ドナーの結腸バッチ試料における炎症誘発性腸管上皮バリアー透過性に有意な保護効果あることを示している。
全てのパーキンソン疾患ドナーのSymprove処理試料は、LPS+およびバッチ対照試料の両方と比較してNF-kB活性を向上させ、一方、対照試料は、NF-kB活性をLPS+対照のレベルに維持させた(図23)。バッチ対照と比較して向上したNF-kB活性の平均は統計的に有意であった。
全てのSymprove処理バッチ試料は、LPS+対照と比較して、抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10の分泌を向上させた(図24)。さらに、全てのドナーについて、IL-6およびIL-10の分泌の増加は、それらの対照と比較して有意に異なることを見出した。
このように、全てのパーキンソン病ドナーについて、Symprove処理結腸バッチ試料は、未処理の対照と比較して、NF-kB活性とそれに伴う抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10の分泌を向上させ、これらの処理試料における抗炎症性/免疫寛容原性の腸表現型を示している。
TNFa応答はドナー間で変動し、有意な平均応答は観察されなかった。全てのドナーについて、Symproveでの処理により、対照と比較してCXCL10レベルが有意に向上し、それによってLPS+対照と同じレベルに達した(図25)。
LPS+対照と比較して、全てのSymprove処理パーキンソン病バッチ試料は、IL-8レベルを低下された(図25)。全てのドナーについて、Symprove処理後のIL-8レベルは、それぞれの対照と比較して低下する傾向があった。
最後に、全てのパーキンソン疾患バッチ試料は、LPS+対照と比較してMCP-1レベルを低下させた(図25)。さらに、処理試料は、対照と比較してMCP-1レベルを低下させた。この効果は、対照試料における応答とは大幅に異なることを見出した。
このように、全てのパーキンソン病ドナーにおいて、Symprove処理結腸バッチ試料はケモカインのIL-8およびMCP-1の分泌を低下させ、CXCL10の分泌を向上させた。
IBD
細胞への対照結腸バッチ試料の追加は、実験対照CMと比較してTEERに影響を与えなかった(図26)。対照的に、Symproveで処理した試料は、対照と比較して3人のIBDドナー全てでTEERを増加させた。このように、全てのIBDドナーにおいて、Symproveで処理した結腸バッチ試料は、炎症誘発性腸管上皮バリアー透過性に対して軽度の保護効果を示した。
細胞への対照結腸バッチ試料の追加は、実験対照CMと比較してTEERに影響を与えなかった(図26)。対照的に、Symproveで処理した試料は、対照と比較して3人のIBDドナー全てでTEERを増加させた。このように、全てのIBDドナーにおいて、Symproveで処理した結腸バッチ試料は、炎症誘発性腸管上皮バリアー透過性に対して軽度の保護効果を示した。
全ての結腸バッチ処理試料は、LPS+対照と比較してNF-kB活性を向上させたが、対照試料ではLPS誘導性NF-kB活性に影響を与えなかった(図27)。さらに、Symproveでの処理により、それぞれの対照と比較して、全てのドナーでNF-kB活性を向上させた。
抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10の分泌に関して、全ての処理試料は、LPS+対照と比較して、IL-6およびIL-10の分泌を増加させたが、対照試料はそうではなかった(図28)。さらに、全てのドナーでは、Symproveでの処理により、その対照と比較して、IL-6およびIL-10のレベルの向上が観察された。
結論として、Symproveでの処理により、3人のIBDドナー全てにおいて、NF-kB活性および、それに伴う抗炎症性サイトカインのIL-6およびIL-10の分泌が向上した。
全ての対照IBDバッチ試料は、LPS+対照と比較して、炎症誘発性サイトカインのTNF-αのLPS誘導分泌を増加させたが、全ての処理試料では、それぞれの対照試料および/またはLPS+対照と比較してTNF-αレベルを低下させた(図29)。
ケモカインのCXCL10、IL-8、およびMCP-1の分泌に関して、LPS+対照と比較して、全てのIBDバッチ試料で処理した後、LPS誘導性CXCL10レベルの低下が観察された(図29)。ただし、全てのIBDドナーの平均では、CXCL10分泌の対照および処理の間に有意差はなかった。
LPS+およびバッチ試料対照の両方と比較して、全てのSymprove処理試料は、IL-8レベルを低下させることができた(図29)。さらに、Symprove処理後、IL-8分泌の減少は、対照および処理IBDバッチ試料間で有意に異なっていた。最後に、全てのIBDバッチ試料は、LPS+対照と比較して、MCP-1レベルを低下させた(図29)。
結論として、Symproveでの処理により、その対照のIBDバッチ試料と比較して、炎症誘発性サイトカインのTNF-αおよびケモカインのIL-8およびMCP-1の分泌を低下させた。
3.4 創傷治癒アッセイ
肝硬変
対照の肝硬変試料での24hの処理後、ドナーDおよびEの創傷部はCM対照よりも大きかったが、ドナーFはCMと同様に振る舞った(図30および図31)。Symprove処理試料での刺激後、全てのドナーでは、創傷部は対照と比較して有意に減少した。
肝硬変
対照の肝硬変試料での24hの処理後、ドナーDおよびEの創傷部はCM対照よりも大きかったが、ドナーFはCMと同様に振る舞った(図30および図31)。Symprove処理試料での刺激後、全てのドナーでは、創傷部は対照と比較して有意に減少した。
パーキンソン病
試験した両パーキンソン病ドナーのSymprove処理試料は、CM対照およびそれぞれのバッチ対照の試料と比較して創傷部を減少させたが、対照試料の創傷部はCM対照と同様であった(図32および図33)。
試験した両パーキンソン病ドナーのSymprove処理試料は、CM対照およびそれぞれのバッチ対照の試料と比較して創傷部を減少させたが、対照試料の創傷部はCM対照と同様であった(図32および図33)。
IBD
インキュベーションの24h後、結腸バッチ対照試料の創傷部は、陰性CM対照と同等であった。対照的に、全てのドナーの結腸IBDバッチSymprove処理試料での刺激により、対照と比較して創傷部を有意に減少させ、ドナーCで最大の効果が見られた。
インキュベーションの24h後、結腸バッチ対照試料の創傷部は、陰性CM対照と同等であった。対照的に、全てのドナーの結腸IBDバッチSymprove処理試料での刺激により、対照と比較して創傷部を有意に減少させ、ドナーCで最大の効果が見られた。
したがって、全ての疾患状態では、Symproveでの処理により、腸管上皮バリアー損傷のモデルにおいて創傷修復を促進した。
4. 結論
これらのデータでは、さまざまな疾患を示す微生物叢の腸内毒素症のさまざまな状態にもかかわらず、Symproveによりさまざまな患者群間で一貫した処理効果をもたらしたことを示している。
これらのデータでは、さまざまな疾患を示す微生物叢の腸内毒素症のさまざまな状態にもかかわらず、Symproveによりさまざまな患者群間で一貫した処理効果をもたらしたことを示している。
Symproveの投与により、アセテートの産生が増加し、プロピオネートの産生が増加し、ブチレートの産生が増加した。より健康な腸を示すSCFA産生へのこのシフトは、Symproveに存在するプロバイオティクス細菌の一時的な通過によって引き起こされていないと見える。代わりに、プロバイオティクス細菌は腸の管腔および粘膜の両方のコンパートメントに統合され、微生物叢集団の結果としてのリバランシングは、処理前に存在する腸内毒素症に対処し、より健康な腸を示すSCFAの産生を促進する。
腸上皮のCaco-2/THP1-blueTM共培養モデルにおいて、Symproveの投与により、腸免疫細胞の免疫反応性状態を変化させることもできることを示した。特に、Symproveで処理した抽出物で処理した細胞は、より免疫寛容原性または抗炎症性の表現型を示した。この表現型を示す細胞は、LPS刺激に対して、IL-6およびIL-10などの抗炎症性サイトカインをより多く産生し、IL-8などの炎症誘発性サイトカイン、およびMCP-1などのケモカインをより少なく産生することで応答した。Symproveによって誘導されたこの免疫寛容原性または抗炎症性の表現型は、健康なドナー、ならびに肝硬変、パーキンソン病またはIBDに苦しんでいるドナーの試料でも明らかであった。
IBD患者において、対照患者からの結腸試料が顕著な炎症誘発性効果があった場合、SymproveがTNFa産生を減少させたことも実証された。これは、未処理のIBD罹患者の腸に存在する一般的な炎症誘発性環境に明らかに対抗するため、Symproveの抗炎症効果をさらに示している。肝硬変試料では、TNFaレベルへの有意な効果は観察されなかったが、これは、おそらく、これらの患者からの対照試料には、高レベルのTNFa産生を誘導するのに十分な同じ一般的な炎症誘発性効果がなかったためである。
実施例3
実施例2は、パーキンソン病患者の腸内微生物叢が健康なドナーの腸内微生物叢とは異なるため、胃腸内毒素症(gastrointestinal dysbiosis)を示すものである。胃腸内毒素症がパーキンソン病の病理に関連しているかもしれないといった仮説が立てられている。具体的には、破壊された微生物叢は、炎症を導くか、および/または炎症によって引き起こされることがあり、それ自体が腸の透過性の向上(「漏出性腸」)につながる。腸の透過性の向上は、パーキンソン病に特徴的なタンパク質凝集体である、誤って折りたたまれた（ミスフォールド）アルファ-シヌクレインの発現および凝集の増加につながり得る。次に、アルファ-シヌクレインは、脳－腸軸の導管である迷走神経を介して脳に送達され得る。
実施例2は、パーキンソン病患者の腸内微生物叢が健康なドナーの腸内微生物叢とは異なるため、胃腸内毒素症(gastrointestinal dysbiosis)を示すものである。胃腸内毒素症がパーキンソン病の病理に関連しているかもしれないといった仮説が立てられている。具体的には、破壊された微生物叢は、炎症を導くか、および/または炎症によって引き起こされることがあり、それ自体が腸の透過性の向上(「漏出性腸」)につながる。腸の透過性の向上は、パーキンソン病に特徴的なタンパク質凝集体である、誤って折りたたまれた（ミスフォールド）アルファ-シヌクレインの発現および凝集の増加につながり得る。次に、アルファ-シヌクレインは、脳－腸軸の導管である迷走神経を介して脳に送達され得る。
さらに、腸内微生物叢の変化に続発する慢性腸管炎症は、全身性炎症および血液脳関門の変化につながり、これは、パーキンソン病の病態生理学的事情として知られている脳内炎症つながり得る。
実施例2では、Symproveの投与により腸内微生物叢の成長を調節し、また、パーキンソン病患者の腸内のSCFA産生を促進できることを示している。さらに、Symproveでの処理後、パーキンソン病患者の胃腸環境は、SCFA産生の改善、腸の完全性の改善、および炎症環境の減少を示す。
したがって、理論に縛られることを望まずに、Symproveにより、例えば、腸管の健康の促進、腸のSCFA産生の刺激、腸管腸内毒素症(intestinal dysbiosis)の処置、腸バリアー完全性の促進、および/または免疫寛容原性腸表現型の促進の1つもしくはそれ以上または全てによって、パーキンソン病を処置できるといった仮説が立てられている。そうすることで、凝集した誤って折りたたまれたアルファ－シヌクレインの形成を制限し、そのような凝集体の脳への送達を制限することが期待される。
したがって、Symproveは、神経症状または運動症状の発症を遅らせることができるパーキンソン病の処置を提供する。さらに、パーキンソン患者は、便秘などの腸の活動の乱れに苦しんでいることが知られている。したがって、本明細書で示されている腸の健康に対するSymproveの有益な効果は、パーキンソン病のこれらの非運動症状を緩和することもできる。
個々の症例研究からの報告では、Symproveを一定期間摂取すると、パーキンソン病の運動面および非運動面で改善されることを示唆している。
以下の第I相臨床試験により、Symproveでのパーキンソン病処置をさらに実証する：
主な仮説
本試験では、便秘を有するパーキンソン病(PwP)ヒトにおいて、以下の仮説について検証する。
プラセボ摂取とは対照的に、PwPにおける経口Symprove摂取により以下につながる：
1. 胃腸症状に特に焦点を当てた運動および非運動状態の改善;
2. 非運動症状(NMS)の全体性負担の改善;
3. 一連の全身性炎症マーカーに対する全身性抗炎症性の有益な効果。
4. クオリティ・オブ・ライフの改善。
本試験では、便秘を有するパーキンソン病(PwP)ヒトにおいて、以下の仮説について検証する。
プラセボ摂取とは対照的に、PwPにおける経口Symprove摂取により以下につながる：
1. 胃腸症状に特に焦点を当てた運動および非運動状態の改善;
2. 非運動症状(NMS)の全体性負担の改善;
3. 一連の全身性炎症マーカーに対する全身性抗炎症性の有益な効果。
4. クオリティ・オブ・ライフの改善。
調査計画
試験設計
本試験は、プラセボ-対照二重盲検試験である。参加者は、参加時に2つの処理群のいずれかに無作為に割り当てる：
a)「通常処置(UT)＋プラセボ」または
b)「UT+Symprove」。
UTは、試験期間中(3ヶ月間)、投与量が安定した薬物治療からなる。また、参加者は、食事および身体活動性も安定的に維持する。
試験設計
本試験は、プラセボ-対照二重盲検試験である。参加者は、参加時に2つの処理群のいずれかに無作為に割り当てる：
a)「通常処置(UT)＋プラセボ」または
b)「UT+Symprove」。
UTは、試験期間中(3ヶ月間)、投与量が安定した薬物治療からなる。また、参加者は、食事および身体活動性も安定的に維持する。
試験参加者
パーキンソンのN=60人の患者を試験に採用し、各処置群にn=30を割り当てる。
パーキンソンのN=60人の患者を試験に採用し、各処置群にn=30を割り当てる。
適格基準
a)包含：
・18歳以上
・Movement Disorder Societyの臨床基準およびPDに対するUK PD Brain Bankによるパーキンソン病(PD)の診断
・Hoehn Yarhr段階32≧2および≦4
・Rome IV基準および週に3回未満の排便による機能性便秘の診断。
b)除外：
・パーキンソニズムの他の原因の診断または気味
・進行期の治療(脳深部刺激、レボドパ十二指腸持続注入、およびアポモルヒネ皮下注入)
・炎症性腸疾患(クローン疾患および潰瘍性大腸炎)または結腸の疾患
・消化管の以前の手術
・緩下剤乱用の病歴
・継続的な人工栄養(経腸または非経腸)
・プロバイオティクスの定期的な使用(定期的なヨーグルトの消費を除く)
・プロバイオティクスに対する以前の不耐性および/または有害反応
・Symproveの以前の使用
・いずれかの抗生物質の最近または現在の使用(試験開始前4週間以内)
・液体の安全な摂取を妨げる嚥下の問題
・妊娠または授乳
・主要な全身性疾患(例えば心不全、腎不全、肝硬変、癌など)
・インフォームドコンセントを与える能力を妨げる状態
・別の同時調査試験への登録
a)包含：
・18歳以上
・Movement Disorder Societyの臨床基準およびPDに対するUK PD Brain Bankによるパーキンソン病(PD)の診断
・Hoehn Yarhr段階32≧2および≦4
・Rome IV基準および週に3回未満の排便による機能性便秘の診断。
b)除外：
・パーキンソニズムの他の原因の診断または気味
・進行期の治療(脳深部刺激、レボドパ十二指腸持続注入、およびアポモルヒネ皮下注入)
・炎症性腸疾患(クローン疾患および潰瘍性大腸炎)または結腸の疾患
・消化管の以前の手術
・緩下剤乱用の病歴
・継続的な人工栄養(経腸または非経腸)
・プロバイオティクスの定期的な使用(定期的なヨーグルトの消費を除く)
・プロバイオティクスに対する以前の不耐性および/または有害反応
・Symproveの以前の使用
・いずれかの抗生物質の最近または現在の使用(試験開始前4週間以内)
・液体の安全な摂取を妨げる嚥下の問題
・妊娠または授乳
・主要な全身性疾患(例えば心不全、腎不全、肝硬変、癌など)
・インフォームドコンセントを与える能力を妨げる状態
・別の同時調査試験への登録
盲検ランダム化は二重盲検で、1：1である(コンピューターで生成されたブロックランダム化は、試験に直接関与していないスタッフによって実行する)。
用量
Symprove経口溶液(70ml)の毎日の用量は、積極的な処置条件およびマッチングするプラセボのために3ヶ月間投与する。後者は外観および味が似た液体であり、プロバイオティクス製造業者から供給される。この用量のSymproveは、以前の試験で安全で忍容性がよいことが見出されている。
Symprove経口溶液(70ml)の毎日の用量は、積極的な処置条件およびマッチングするプラセボのために3ヶ月間投与する。後者は外観および味が似た液体であり、プロバイオティクス製造業者から供給される。この用量のSymproveは、以前の試験で安全で忍容性がよいことが見出されている。
評価
評価には以下が含まれる：
1. 人口統計学的および臨床的特徴
人口統計学的情報および臨床的特徴は、生年月日、性別、評価時年齢、PD発症時年齢、疾患期間、Hoehn and Yahr病期(PD運動病期)、投薬計画(緩下剤を含む)、「ON」状態までの時間(PD薬摂取後にPD症状を十分に制御するのに必要な時間)、社会人口統計学的データおよび腸内習慣を含む。
2. 毎日の便通日記
適格な患者には、処置の最後の2週間にわたってベースラインで2週間の便通日記を完了するように求める。
毎日の便通日記には、排便の頻度を記録し、ブリストル・スケールおよび他の関連する症状を用いて便通の一貫性を説明することが含まれる。
3. 栄養・身体活動評価
ベースラインおよび処置後の評価で、栄養および身体活動のプロフォーマを記入する。
評価には以下が含まれる：
1. 人口統計学的および臨床的特徴
人口統計学的情報および臨床的特徴は、生年月日、性別、評価時年齢、PD発症時年齢、疾患期間、Hoehn and Yahr病期(PD運動病期)、投薬計画(緩下剤を含む)、「ON」状態までの時間(PD薬摂取後にPD症状を十分に制御するのに必要な時間)、社会人口統計学的データおよび腸内習慣を含む。
2. 毎日の便通日記
適格な患者には、処置の最後の2週間にわたってベースラインで2週間の便通日記を完了するように求める。
毎日の便通日記には、排便の頻度を記録し、ブリストル・スケールおよび他の関連する症状を用いて便通の一貫性を説明することが含まれる。
3. 栄養・身体活動評価
ベースラインおよび処置後の評価で、栄養および身体活動のプロフォーマを記入する。
4. 有効な質問票およびスケール
a)運動障害学会統一パーキンソン病評価スケール(MDS-UPDRS)パートIIIおよびIV(ON)
MDS-UPDRSは4つのパートを有する：パートI(日常生活の非運動経験)、評価者ベースの6つの項目と、自己評価用の7つの項目を有する；パートII(日常生活の運動経験)、患者ベース13の項目を有する；パートIII(運動検査)、左、右、その他の体の分布により、18項目に基づいて33のスコアを有する；パートIV(運動合併症)、6つの項目を有する。各質問は、一般的に受け入れられている臨床用語にリンクされている5つの回答で固定する：0=正常；1=軽度、2=軽度、3=中程度、4=重度。各パートの合計スコアは、対応する項目のスコアの合計から得られる。
b)非運動症状スケール(NMSS)
NMSSは9つのドメインにグループ化した30項目からなる：心血管(2項目)、睡眠/疲労(4項目)、気分/認知(6項目)、認識問題/幻覚(3項目)、性機能(2項目)、および種々雑多(4項目)。各項目は、重症度(0～3)および頻度スコア(1～4)の倍数でスコア付ける。合計スコアは0～360である。
c)モントリオール認知評価(MoCA)
MoCAは、認知機能障害を検出するために広く使用されているスクリーニング評価である。これは、12項目からなり、最大スコアは30点で、スコアが高いほどパフォーマンスが優れていることを示す。
d)パーキンソン病の重症度指数の臨床的印象(CISI-PD)
CISI-PDは、0(まったくない)～6(非常に重度または重度の障害)と評価された4つの項目(運動徴候、障害、運動合併症、および認知状態)によって形成される重症度指数ある。合計スコアは、該項目のスコアを合計することによって計算する。
e)キングスパーキンソン病の痛みスケール(KPPS)
KPPSはPDのさまざまな種類の痛みを特定して評価する最初で唯一のスケールである：筋骨格、慢性、変動関連、夜間、口腔顔面、浮腫関連および神経根痛。
f)過敏性腸症候群重症度スコア(IBSSS)
IBSSSは、痛み、膨満、腸機能不全およびクオリティ・オブ・ライフ/グローバルウェルビーイングを包含する過敏性腸症候群のスコアリングシステムである。達成可能な最大スコアは500(各項目のスコアの合計)である。
g)パーキンソン病睡眠スケール2(PDSS2)
PDSS2は、元の15項目のPDSSの最新の検証および更新バージョンである。これは、0(まったくない)～4(非常に頻繁)の5つのカテゴリーの1つを用いて患者によって評価されるさまざまな睡眠および夜間障害に関する15項目からなる自己評価質問票である。PDSS-2の合計スコアは、0(障害なし)～60(最大夜間障害)の範囲である。
h)パーキンソン病質問票-8(PDQ-8)
PDQ-8は、PD患者の健康関連のクオリティ・オブ・ライフを評価するための特定の手段である。これには8つの項目が含まれ、各項目のスコアは0～4である。PDQ-8要約指標は、可能な最大スケールスコアでの各項目スコアの合計の百分率として示される。
i)病院不安・抑うつスケール(HADS)
HADSは、うつ病および不安の状態を検出するための自己評価スケールである。これは、不安およびうつ病の2つのサブスケールからなり、それぞれ0(最も深刻でない)～3(より深刻)でスコア化する7つの項目を有する。サブスコアは、各項目のスコアの合計から得られるサブスケールごとに計算する。
j)パーキンソン疲労スケール-16(PFS-16)
PFSは、疲労の身体的側面およびPD患者の日常機能への影響を評価する16項目の患者評価スケールである。項目反応オプションの範囲は、1つ(「非常にそう思わない」)～5つ(「非常にそう思う」)である。合計スコアは、各項目のスコアの合計に基づくものである。
k)患者のグローバルな変化の印象(PGIC)
PGICは、全体的な処置経験を評価するための自己評価の7点の評価手段である。
a)運動障害学会統一パーキンソン病評価スケール(MDS-UPDRS)パートIIIおよびIV(ON)
MDS-UPDRSは4つのパートを有する：パートI(日常生活の非運動経験)、評価者ベースの6つの項目と、自己評価用の7つの項目を有する；パートII(日常生活の運動経験)、患者ベース13の項目を有する；パートIII(運動検査)、左、右、その他の体の分布により、18項目に基づいて33のスコアを有する；パートIV(運動合併症)、6つの項目を有する。各質問は、一般的に受け入れられている臨床用語にリンクされている5つの回答で固定する：0=正常；1=軽度、2=軽度、3=中程度、4=重度。各パートの合計スコアは、対応する項目のスコアの合計から得られる。
b)非運動症状スケール(NMSS)
NMSSは9つのドメインにグループ化した30項目からなる：心血管(2項目)、睡眠/疲労(4項目)、気分/認知(6項目)、認識問題/幻覚(3項目)、性機能(2項目)、および種々雑多(4項目)。各項目は、重症度(0～3)および頻度スコア(1～4)の倍数でスコア付ける。合計スコアは0～360である。
c)モントリオール認知評価(MoCA)
MoCAは、認知機能障害を検出するために広く使用されているスクリーニング評価である。これは、12項目からなり、最大スコアは30点で、スコアが高いほどパフォーマンスが優れていることを示す。
d)パーキンソン病の重症度指数の臨床的印象(CISI-PD)
CISI-PDは、0(まったくない)～6(非常に重度または重度の障害)と評価された4つの項目(運動徴候、障害、運動合併症、および認知状態)によって形成される重症度指数ある。合計スコアは、該項目のスコアを合計することによって計算する。
e)キングスパーキンソン病の痛みスケール(KPPS)
KPPSはPDのさまざまな種類の痛みを特定して評価する最初で唯一のスケールである：筋骨格、慢性、変動関連、夜間、口腔顔面、浮腫関連および神経根痛。
f)過敏性腸症候群重症度スコア(IBSSS)
IBSSSは、痛み、膨満、腸機能不全およびクオリティ・オブ・ライフ/グローバルウェルビーイングを包含する過敏性腸症候群のスコアリングシステムである。達成可能な最大スコアは500(各項目のスコアの合計)である。
g)パーキンソン病睡眠スケール2(PDSS2)
PDSS2は、元の15項目のPDSSの最新の検証および更新バージョンである。これは、0(まったくない)～4(非常に頻繁)の5つのカテゴリーの1つを用いて患者によって評価されるさまざまな睡眠および夜間障害に関する15項目からなる自己評価質問票である。PDSS-2の合計スコアは、0(障害なし)～60(最大夜間障害)の範囲である。
h)パーキンソン病質問票-8(PDQ-8)
PDQ-8は、PD患者の健康関連のクオリティ・オブ・ライフを評価するための特定の手段である。これには8つの項目が含まれ、各項目のスコアは0～4である。PDQ-8要約指標は、可能な最大スケールスコアでの各項目スコアの合計の百分率として示される。
i)病院不安・抑うつスケール(HADS)
HADSは、うつ病および不安の状態を検出するための自己評価スケールである。これは、不安およびうつ病の2つのサブスケールからなり、それぞれ0(最も深刻でない)～3(より深刻)でスコア化する7つの項目を有する。サブスコアは、各項目のスコアの合計から得られるサブスケールごとに計算する。
j)パーキンソン疲労スケール-16(PFS-16)
PFSは、疲労の身体的側面およびPD患者の日常機能への影響を評価する16項目の患者評価スケールである。項目反応オプションの範囲は、1つ(「非常にそう思わない」)～5つ(「非常にそう思う」)である。合計スコアは、各項目のスコアの合計に基づくものである。
k)患者のグローバルな変化の印象(PGIC)
PGICは、全体的な処置経験を評価するための自己評価の7点の評価手段である。
5. パーキンソンKinetiGraph(PKG)の客観的記録
客観的記録は、7日間のパーキンソンKinetiGraph(PKG)モニタリングを用いて実施する。PKGは、患者の最も影響を受けた側の手首に装着するウェアラブル機器である。PKG報告には、以下に示すように、いくつかのスコアおよび測定が含まれる：
客観的記録は、7日間のパーキンソンKinetiGraph(PKG)モニタリングを用いて実施する。PKGは、患者の最も影響を受けた側の手首に装着するウェアラブル機器である。PKG報告には、以下に示すように、いくつかのスコアおよび測定が含まれる：
6. スマートベルトの客観的記録
スマートベルトは、消化中の排便を記録することを目的としたウェアラブルセンサーである。食事中に参加者の腹部周辺に簡単かつ快適に装着する。
スマートベルトは、消化中の排便を記録することを目的としたウェアラブルセンサーである。食事中に参加者の腹部周辺に簡単かつ快適に装着する。
7. 末梢炎症マーカーに関する臨床検査
末梢炎症マーカーを評価するために、ベースラインおよび処置後の評価時に血液試料を
採取する。
末梢炎症マーカーを評価するために、ベースラインおよび処置後の評価時に血液試料を
採取する。
8. 腸内微生物叢の分析
参加者は自宅で便試料を採取し、ベースラインおよび処置後の両方で分析用に送る。
評価はベースライン時および処理終了時(3ヶ月+/-1週間)に実施する。
参加者は自宅で便試料を採取し、ベースラインおよび処置後の両方で分析用に送る。
評価はベースライン時および処理終了時(3ヶ月+/-1週間)に実施する。
アウトカム測定
全てのアウトカムは、ベースラインから3ヶ月間の処置(Symprove/プラセボ)終了時までの変化として測定する。
主要アウトカム
変化：
-1週間あたりの排便(BM)回数
-NMSSの総スコア
副次的アウトカム
変化：
-1週間あたりの緩下剤使用回数
-IBSSS
-MDS-UPDRSパートIIIおよびIV(ON)
-「オン」状態になるまでの時間
-CISIPD
-PGIC
-PDQ-8
-PDSS 2
-PFS-16
-HADS
-MoCA
-KPPS
-末梢炎症マーカーレベル
-ウェアラブルセンサーに記録されたスコア(PKG、スマートベルトスコア)
-腸内微生物叢の変化
全てのアウトカムは、ベースラインから3ヶ月間の処置(Symprove/プラセボ)終了時までの変化として測定する。
主要アウトカム
変化：
-1週間あたりの排便(BM)回数
-NMSSの総スコア
副次的アウトカム
変化：
-1週間あたりの緩下剤使用回数
-IBSSS
-MDS-UPDRSパートIIIおよびIV(ON)
-「オン」状態になるまでの時間
-CISIPD
-PGIC
-PDQ-8
-PDSS 2
-PFS-16
-HADS
-MoCA
-KPPS
-末梢炎症マーカーレベル
-ウェアラブルセンサーに記録されたスコア(PKG、スマートベルトスコア)
-腸内微生物叢の変化
Symproveを受けた患者は、処置前と比較して、1つまたはそれ以上の主要アウトカム
および/または副次的アウトカムの改善を示す。
および/または副次的アウトカムの改善を示す。
Claims (37)
- 対象の腸内微生物叢により1つまたはそれ以上の短鎖脂肪酸(SCFA)の産生を刺激する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法。
- 対象において胃腸の健康を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該対象の腸内微生物叢による1つまたはそれ以上の短鎖脂肪酸(SCFA)の産生を促進し、それによって腸管の健康を促進する方法。
- 1つまたはそれ以上のSCFAが、ブチレート、プロピオネートおよびアセテートから選択され、好ましくはブチレートである、請求項1または2に記載の方法。
- 対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばビフィドバクテリアセアエ(Bifidobacteriaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えばベイロネラセアエ(Veillonellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ストレプトコッカセアエ(Streptococcaceae)、オイバクテリアセアエ(Eubacteriaceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae)、エリシペロトリカセアエ(Erysipelotrichaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を促進する方法であって、乳酸の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法。
- 対象の腸内微生物叢中のアクチノバクテリア門(Actinobacteria)(例えばコーリオバクテリアセアエ(Coriobacteriaceae)、エッゲルテラセアエ(Eggerthellaceae))、バクテロイデス門(Bacteroidetes)(例えばバクテロイダセアエ(Bacteroidaceae)、リケネラセアエ(Rikenellaceae)、ラクノスピラセアエ(Lachnospiraceae)、ルミノコッカセアエ(Ruminococcaceae))、ファーミキューテス門(Firmicutes)(例えば、アシダミノコッカセアエ(Acidaminococcaceae)、エンテロコッカセアエ(Enterococcaceae)、クロストリジアセアエ(Clostridiaceae)、ペプトストレプトコッカセアエ(Peptostreptococcaceae))、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)(例えばエンテロバクテリアセアエ(Enterobacteriaceae))、シネルギステス門(Synergistetes)(例えばシネルギスタセアエ(Synergistaceae))およびウェルコミクロビオ門(Verrucomicrobio)(例えばアッケルマンシアセアエ(Akkermansiaceae))から選択される1つまたはそれ以上の細菌門の成長を阻害する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法。
- １つまたはそれ以上の細菌門の成長に対する効果が、腸粘膜コンパートメントにある、請求項4または5に記載の方法。
- 1つまたはそれ以上の細菌門の成長に対する効果が、腸管腔コンパートメントにある、請求項4～6のいずれか一項に記載の方法。
- 対象において腸管バリアー完全性を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該腸管バリアー完全性を促進する方法。
- 対象において腸管バリアー完全性の喪失を予防するかまたは低減する、請求項8に記載の方法。
- 対象が、腸管バリアー完全性の喪失の危険性がある、請求項8または請求項9に記載の方法。
- 腸管バリアーの修復を促進する、請求項8に記載の方法。
- 対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含み、ここで、該プロバイオティクス調製物の投与により、該免疫寛容原性腸表現型を促進する方法。
- 非治療的方法である、請求項1～12のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、健常人である、請求項1～13のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が腸管腸内毒素症の状態にある、請求項1～14のいずれか一項に記載の方法。
- 治療的方法である、請求項1～12および15のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、パーキンソン病、肝硬変、炎症性腸疾患(IBD)、クロストリジウム・ディフィシル感染症、MRSA感染症、大腸菌感染症、サルモネラ感染症、ノロウイルス感染症、ランブル鞭毛虫症、セリアック病、慢性腎臓疾患、HIV/AIDS、嚢胞性線維症、I型糖尿病、肥満、および慢性疲労症候群から選択される状態を有する、請求項1～12および15～16のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、パーキンソン病を有する、請求項1～12および15～17のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、肝硬変を有する、請求項1～12および15～17のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、IBDを有する、請求項1～12および15～17のいずれか一項に記載の方法。
- 対象においてパーキンソン病を処置または予防する方法であって、乳酸菌の集団を含む、乳成分不使用の液体プロバイオティクス調製物を該対象に投与することを含む方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、対象において運動症状、非運動症状、全身性炎症マーカーの1つまたはそれ以上を改善する、請求項21に記載の方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、対象において非運動症状を改善し、場合により、対象において胃腸の非運動症状を改善する、請求項21または22に記載の方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアー完全性を改善する、請求項21～23のいずれか一項に記載の方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、腸管バリアーの修復を改善する、請求項21～24のいずれか一項に記載の方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、対象において免疫寛容原性腸表現型を促進する、請求項21～25のいずれか一項に記載の方法。
- プロバイオティクス調製物の投与により、対象において運動症状の重症度を低減するかその進行を遅らせることによって、または、運動症状の発症を遅らせるか予防することによって、パーキンソン病を処理または予防する、請求項21～25のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、胃腸内毒素症の状態にあり、場合により、対象が、健康な対照と比較して、その腸内微生物叢中のファーミキューテス門(Firmicutes)のレベルの上昇および/またはバクテロイデス門(Bacteroidetes)のレベルの低減を示す、請求項21～26のいずれか一項に記載の方法。
- 腸管上皮細胞により1つまたはそれ以上の抗炎症性分子の産生を促進し、場合により、ここで、該1つまたはそれ以上の抗炎症性分子は、IL-6およびIL-10から選択される、請求項1～28のいずれか一項に記載の方法。
- 腸管上皮細胞により1つまたはそれ以上の炎症誘発性分子の産生を低減し、場合により、ここで、該1つまたはそれ以上の炎症誘発性分子は、CXCL-10、TNFa、IL-8およびMCP-1から選択される、請求項1～29のいずれか一項に記載の方法。。
- 1つまたはそれ以上のSCFA、好ましくはアセテート、プロピオネートまたはブチレート、好ましくはブチレートの産生を促進する、請求項4～30のいずれか一項に記載の方法。
- 乳酸菌の集団が、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)細菌の1つまたはそれ以上を含む、請求項1～31のいずれか一項に記載の方法。
- 乳酸菌の集団が、ラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)およびエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)細菌それぞれを含む、請求項1～32のいずれか一項に記載の方法。
- 対象の腸内微生物叢により、1つまたはそれ以上の分枝鎖脂肪酸(BCFA)および/またはアンモニウムの産生を低減する、請求項1～33のいずれか一項に記載の方法。
- 1つまたはそれ以上のBCFAが、イソブチレート、イソバレレートおよび2-メチルブチレートから選択される、請求項34に記載の方法。
- プロバイオティクス組成物が、少なくとも週に1回、好ましくは1日に1回、対象に投与される、請求項1～35のいずれか一項に記載の方法。
- プロバイオティクス組成物が、少なくとも1ヶ月、少なくとも2ヶ月または少なくとも3ヶ月の期間、対象に投与される、請求項1～36のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1915144.8 | 2019-10-18 | ||
| GB201915144A GB201915144D0 (en) | 2019-10-18 | 2019-10-18 | Method of promoting SCFA production by gut microbiota |
| PCT/GB2020/052621 WO2021074649A2 (en) | 2019-10-18 | 2020-10-16 | Methods of promoting scfa production by gut microbiota |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022553017A true JP2022553017A (ja) | 2022-12-21 |
| JPWO2021074649A5 JPWO2021074649A5 (ja) | 2023-10-20 |
Family
ID=68728134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022523126A Pending JP2022553017A (ja) | 2019-10-18 | 2020-10-16 | 腸内微生物叢によりｓｃｆａ産生を促進する方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230053778A1 (ja) |
| EP (1) | EP4044830A2 (ja) |
| JP (1) | JP2022553017A (ja) |
| CN (1) | CN114745970A (ja) |
| AU (1) | AU2020368684A1 (ja) |
| BR (1) | BR112022007413A2 (ja) |
| CA (1) | CA3154083A1 (ja) |
| DE (1) | DE20796905T1 (ja) |
| ES (1) | ES2922359T1 (ja) |
| GB (1) | GB201915144D0 (ja) |
| MX (1) | MX2022004382A (ja) |
| WO (1) | WO2021074649A2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201915144D0 (en) * | 2019-10-18 | 2019-12-04 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Method of promoting SCFA production by gut microbiota |
| CN113875975B (zh) * | 2021-09-03 | 2023-06-30 | 许昌学院 | 一种利用小麦加工副产物制备后生元的发酵工艺 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6899872B1 (en) * | 1995-11-27 | 2005-05-31 | Standa Lab Sa | Absorbable dietary composition for improving the biological balance of intestinal tract flora |
| GB2418431A (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-29 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
| CN104206946A (zh) * | 2009-11-12 | 2014-12-17 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 用于促进肠微生物群平衡和健康的营养组合物 |
| US8591412B2 (en) * | 2009-11-18 | 2013-11-26 | Nohands, Llc | Method and system for preventing virus-related obesity and obesity related diseases |
| US9707207B2 (en) * | 2010-05-26 | 2017-07-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Method for diagnosing, preventing, and treating neurological diseases |
| US10548761B2 (en) * | 2011-02-04 | 2020-02-04 | Joseph E. Kovarik | Method and system for reducing the likelihood of colorectal cancer in a human being |
| US10512661B2 (en) * | 2011-02-04 | 2019-12-24 | Joseph E. Kovarik | Method and system for reducing the likelihood of developing liver cancer in an individual diagnosed with non-alcoholic fatty liver disease |
| US10842834B2 (en) * | 2016-01-06 | 2020-11-24 | Joseph E. Kovarik | Method and system for reducing the likelihood of developing liver cancer in an individual diagnosed with non-alcoholic fatty liver disease |
| US10086018B2 (en) * | 2011-02-04 | 2018-10-02 | Joseph E. Kovarik | Method and system for reducing the likelihood of colorectal cancer in a human being |
| GB201219873D0 (en) * | 2012-11-05 | 2012-12-19 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Diverticulitis treatment |
| US8889633B2 (en) * | 2013-03-15 | 2014-11-18 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional compositions containing a peptide component with anti-inflammatory properties and uses thereof |
| WO2015159125A1 (en) * | 2014-04-15 | 2015-10-22 | Compagnie Gervais Danone | Use of lactobacillus rhamnosus for promoting recovery of the intestinal microbiota diversity after antibiotic dysbiosis |
| FI3639834T3 (fi) * | 2016-02-04 | 2023-09-27 | Univ Gent | Mikrobiyhteisöjen käyttö ihmisen ja eläimen terveyttä varten |
| US10055534B2 (en) * | 2016-03-17 | 2018-08-21 | Applied Materials Israel Ltd. | System and method for design based inspection |
| JP7012377B2 (ja) * | 2016-04-11 | 2022-02-14 | ヴァーヘニンゲン ユニバーシテイト | 新規な細菌種 |
| US20180357375A1 (en) * | 2017-04-04 | 2018-12-13 | Whole Biome Inc. | Methods and compositions for determining metabolic maps |
| US11730749B2 (en) * | 2017-05-05 | 2023-08-22 | Plexus Worldwide, Llc | Compositions and methods for improving gut health |
| CA3072029A1 (en) * | 2017-08-07 | 2019-02-14 | Finch Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for decolonizing antibotic-resistant bacteria in the gut |
| JP6994116B2 (ja) * | 2018-02-02 | 2022-02-04 | コバイオラブス，インコーポレーテッド | ラクトバチルスプランタルムｋｂｌ３９６菌株およびその用途 |
| GB201915144D0 (en) * | 2019-10-18 | 2019-12-04 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Method of promoting SCFA production by gut microbiota |
| FR3136482A1 (fr) * | 2021-08-01 | 2023-12-15 | Snipr Biome Aps | Ingenierie du microbiote |
-
2019
- 2019-10-18 GB GB201915144A patent/GB201915144D0/en not_active Ceased
-
2020
- 2020-10-16 AU AU2020368684A patent/AU2020368684A1/en active Pending
- 2020-10-16 MX MX2022004382A patent/MX2022004382A/es unknown
- 2020-10-16 BR BR112022007413A patent/BR112022007413A2/pt unknown
- 2020-10-16 ES ES20796905T patent/ES2922359T1/es active Pending
- 2020-10-16 CA CA3154083A patent/CA3154083A1/en active Pending
- 2020-10-16 WO PCT/GB2020/052621 patent/WO2021074649A2/en unknown
- 2020-10-16 US US17/769,125 patent/US20230053778A1/en active Pending
- 2020-10-16 EP EP20796905.6A patent/EP4044830A2/en active Pending
- 2020-10-16 DE DE20796905.6T patent/DE20796905T1/de active Pending
- 2020-10-16 JP JP2022523126A patent/JP2022553017A/ja active Pending
- 2020-10-16 CN CN202080081506.3A patent/CN114745970A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2922359T1 (es) | 2022-09-13 |
| DE20796905T1 (de) | 2022-11-24 |
| CN114745970A (zh) | 2022-07-12 |
| CA3154083A1 (en) | 2021-04-22 |
| US20230053778A1 (en) | 2023-02-23 |
| MX2022004382A (es) | 2022-08-25 |
| EP4044830A2 (en) | 2022-08-24 |
| GB201915144D0 (en) | 2019-12-04 |
| WO2021074649A3 (en) | 2021-07-22 |
| BR112022007413A2 (pt) | 2022-07-05 |
| AU2020368684A1 (en) | 2022-05-19 |
| WO2021074649A2 (en) | 2021-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Benahmed et al. | Association between the gut and oral microbiome with obesity | |
| US20210015876A1 (en) | Use of pasteurized akkermansia for treating metabolic disorders | |
| Guida et al. | Effect of short-term synbiotic treatment on plasma p-cresol levels in patients with chronic renal failure: a randomized clinical trial | |
| Mercenier et al. | Probiotics as biotherapeutic agents: present knowledge and future prospects | |
| Hashemi et al. | Probiotics in early life: a preventative and treatment approach | |
| EP2650002A1 (en) | Bifidobacterium cect 7765 and use thereof in the prevention and/or treatment of excess weight, obesity and related pathologies | |
| US20160354418A1 (en) | Use of compositions comprising bifidobacterium animalis ssp. lactis lmg p-28149 | |
| Martinello et al. | Effects of probiotic intake on intestinal bifidobacteria of celiac patients | |
| Mikelsaar et al. | Biodiversity of intestinal lactic acid bacteria in the healthy population | |
| Ojima et al. | Ecological and molecular perspectives on responders and non-responders to probiotics and prebiotics | |
| JP2022553017A (ja) | 腸内微生物叢によりｓｃｆａ産生を促進する方法 | |
| Palani Kumar et al. | Effect of Lactobacillus fermentum MCC2760-based probiotic curd on hypercholesterolemic C57BL6 mice | |
| Arora et al. | Therapeutic potential of probiotics: A ray of hope or nightmare? | |
| Altomare et al. | The intestinal ecosystem and probiotics | |
| Beccati | Investigations of prebiotics and of inter-and intra-molecular glycan-protein interactions | |
| Robles-Alonso et al. | Probiotics—From Gut to Cognition | |
| Piazza | Intestinal permeability is associated with diet composition and metabolic markers in obese adults | |
| Alberda | Probiotic therapy in critically ill enterally fed patients | |
| EA041324B1 (ru) | Применение akkermansia muciniphila для лечения метаболических расстройств, увеличения расхода энергии и снижения веса, композиции, лекарственное средство |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231012 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20231012 |