JP2022551165A

JP2022551165A - 心不全の治療のためのＳＥＲＣＡ２ａの純粋またはほぼ純粋な刺激剤としての活性を有するアンドロスタン誘導体

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Publication number: JP2022551165A
Application number: JP2022521426A
Authority: JP
Inventors: チェッリ，アルベルト; フェラーリ，パトリツィア; フェッランディ，マーラ; バッラッシ，パオロ; ビアンキ，ジュゼッペ; スー，シー－チェ; ペ－リ，フランチェスコ; ザザ，アントニオ; ロッケッティ，マルチェッラ; ルラーギ，アンドレア; トルレ，エレオノーラ; ロンキ，カルロッタ
Original assignee: Windtree Therapeutics Inc
Current assignee: Windtree Therapeutics Inc
Priority date: 2019-10-09
Filing date: 2020-10-08
Publication date: 2022-12-07
Also published as: KR20220079601A; BR112022003915A2; EP3805243A1; IL291412A; ES2970792T3; CN114466855A; PL3805243T3; WO2021069570A1; EP3805243B1; DK3805243T3; TW202128182A; MX2022003997A; AU2020363865A1; FI3805243T3; US20230009312A1; CA3149938A1

Abstract

ＳＥＲＣＡ２ａの活性化のための化合物および組成物が開示される。特に、Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅを穏やかに阻害するだけでありながら、ほぼ純粋または純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤として作用する化合物が提供される。一般的に、開示される化合物は、式（Ｉ）で示されるアンドロスタンの誘導体である。また、心不全の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物の１つ以上を含む医薬組成物が、本明細書において、開示される。TIFF2022551165000145.tif4261

Description

本発明は、医薬の分野、特に、急性心不全の治療に使用するためのアンドロスタン誘導体に関する。

心不全（ＨＦ）の有病率は、年齢に依存し、６０歳未満の人の２％未満から、７５歳以上の人の１０％以上までの範囲である（Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995）。ＨＦのほとんどの患者は、高血圧、冠状動脈疾患、心筋症、弁膜症、またはこれらの障害の組み合わせの病歴がある（Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995）。計算されたＨＦを発症する生涯リスクは増加すると予想され、高血圧症の人はより高いリスクがある（Lloyd-Jones DM et al., Circulation 2002, 106:3068-3072）。ＨＦの患者は予後が悪く、入院率と死亡率が高い。

ＨＦの臨床症状は、変力性異常となる心臓の二重の病理学的特徴によって引き起こされるものであり、収縮期排出の減少（収縮機能障害）、および、心室が静脈系から血液を吸引する能力が低下するコンプライアンス異常（拡張機能障害）をもたらす。これにより、収縮期収縮（左心室（ＬＶ）充満の障害）に利用できる血液量が減少する。収縮と弛緩の障害は、細胞内Ｃａ^２＋ストアである筋小胞体（ＳＲ）によるＣａ^２＋取り込みの減少に起因する、細胞内Ｃａ^２＋の異常な分布の結果である（Bers DM et al., Ann N.Y. Acad Sci 2006, 1080:165-177）。後者は、活発な膜輸送であるＳＲ膜のＣａ^２＋ＡＴＰａｓｅ（ＳＥＲＣＡ２ａ）によって操作される。ＳＥＲＣＡ２ａ活性は、ホスホランバン（ＰＬＮ）との相互作用によって生理学的に制限されており（Bers DM., Annu Rev Physiol 2008, 70:23-49; MacLennan DH & Kranias EG, Nat Rev Mol Cell Biol 2003, 4(7): 566-577）、このような制限は通常、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）によるＰＬＮリン酸化によって緩和され、これは、ＨＦリモデリングの結果として著しく抑制されるシグナル伝達経路である（Lohse M et al., Circ Res 2003, 93:896-906）。したがって、ＳＥＲＣＡ２ａ機能は、機能不全の心筋において損なわれ（Bers DM et al., Ann N.Y. Acad Sci 2006, 1080:165-177）、したがって、ＳＲによるＣａ^２＋取り込みの減少に主に関与している。筋細胞の収縮と弛緩への影響に加えて、異常なＣａ^２＋分布はまた、心不整脈を促進し（Zaza & Rocchetti, Curr Pharm Des 2015, 21:1053-1061）、長期的には、アポトーシスによる筋細胞の喪失を加速する（Nakayama H et al., J Clin Invest 2007, 117:2431-44）。ＳＥＲＣＡ２ａ機能の低下は、エネルギー効率の低いＮａ－Ｃａ交換体（ＮＣＸ）を介したＣａ^２＋放出の代償的な増加を必要とするため、収縮のエネルギーコストも増加させる（Lipskaya L et al., Expert Opin Biol Ther 2010, 10:29-41）。実質的なエビデンスにより、ＳＥＲＣＡ２ａ機能の正常化が、細胞内Ｃａ^２＋恒常性を回復し、心筋細胞とその場での心臓の収縮と弛緩を改善することが示されている（Byrne MJ et al., Gene Therapy 2008, 15:1550-1557; Sato et al., JBC 2001, 276:9392-99）。要約すると、ＨＦでのＳＥＲＣＡ２ａ機能の回復は、不整脈、心筋酸素消費、および筋細胞死を最小限に抑えながら、心臓の弛緩性、そしておそらく収縮性を改善する可能性がある（Lipskaya L et al., Expert Opin Biol Ther. 2010, 10:29-41）。これは、「純粋な」ＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤の必要性を浮き彫りにする。実際、ＳＥＲＣＡ２ａの活性化は、Ｃａ^２＋隔離の改善により、Ｃａ^２＋波を維持するＣａ^２＋－誘導－Ｃａ^２＋放出に負のフィードバックを及ぼすＣａ^２＋波の生成のＳＲ内閾値を上昇させる可能性がある（Fernandez-Tenorio M & Niggli E J, Mol Cell Cardiol 2018, 119:87-95）。したがって、純粋またはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａの活性化により、不整脈源性リスクが低下する可能性があり、したがって、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激作用を有する化合物に関心がもたれる。

結論として、ＳＥＲＣＡ２ａ機能を単独で増強できる新規分子は、ＨＦの全体的な心機能を改善する可能性がある。これは、そのような薬力学的プロファイルを有する新しい化合物を探索するための強い動機を提供する。

ＨＦの現在の長期治療は、「心筋リモデリング」の予防を目的としているが（例えば、ベータ遮断薬、ＡＣＥ阻害薬、アルドステロン拮抗薬）、それは、初期の損傷を増幅して、疾患の発症の根底となる、収縮性の低下に対する慢性的な不適応反応である（Heineke J & Molkentin D, Nat Rev 2006, 7:589-600）。このアプローチには議論の余地のないメリットがある一方、ＨＦを定義するとともにその症状の原因となる機能障害である、「収縮」と「弛緩」の障害を対象とはしていない。実際、特に進行した疾患のステージでは、心臓の収縮／弛緩を向上させる薬剤（「変力／変弛緩剤」）が、依然として広く使用されており、患者の管理に不可欠である（Metra M & Teerlink JR, Lancet 2017, 390:1981-1995）。これらには、交感神経様作用アミン（ドブタミン）、および強力な血管拡張作用を有するＣａ^２＋増感剤であるレボシメンダンが含まれる。残念ながら、これらの薬剤は、生命を脅かす不整脈の促進、心筋の酸素消費量の増加、および血管拡張によって引き起こされる血圧の低下によるすでに不十分な冠状動脈血流の障害など、潜在的に有害な要素を伴うメカニズムによって、作用する（Ashkar H, Makaryus AN StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2018 Jan-2017 Dec 19 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK470431/); Gong B. et al., J Cardiothorac Vasc Anesth 2015, 29: 1415-25 EDITORIAL）。これは、変力剤の使用を疾患期の後期に制限させるため、疾患経過の初期に収縮性を向上させるという潜在的な利点を失わせる。さらに、これらの薬剤は、患者の予後と生存を改善せず、それらの治療的使用を注意深く監視する必要がある（Ashkar H & Makaryus AN, StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2018 Jan-2017 Dec 19) (Gong B. et al., J Cardiothorac Vasc Anesth 2015, 29: 1415-25 EDITORIAL）。

陽性変力剤の中で、強心配糖体ジゴキシンは、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ酵素活性の阻害剤であり、これまでに最も一般的に処方された薬剤の１つである。しかしながら、ジゴキシンが０．９ｎｇ／ｍｌの閾値レベル（それ以上では、主に不整脈によって死亡のリスクが高まることが観察されている）に達することなく有益な効果を発揮する血清濃度範囲（０．５～０．７ｎｇ／ｍｌ）の範囲内にジゴキシンを維持することは困難なため、その使用は過去数十年にわたって減少している（Packer M, Journal of Cardiac Failure 2016, 22:726-730; Packer M, Eur J Heart Failure 2018, 20:851-852）。

陽性変力作用以外の作用機序を有するＨＦ薬の開発についても、精力的に研究が進行されている。多くの中で、最も調査され、臨床開発中の薬剤は、以下のもの：ＳＥＲＥＬＡＸＩＮ－組換えリラキシン２メディエーター；ＵＬＡＲＩＴＩＤＥ－組換えナトリウム利尿ペプチド；ＯＭＥＣＡＭＴＩＶＭＥＣＡＲＢＩＬ－心臓ミオシン活性化剤；ＢＭＳ９８６２３１－ＮＯドナー；ＡＤＲＥＣＩＺＵＭＡＢ－アドレノメデュリン阻害剤；ＡＮＸ－０４２－ＮＰのスプライスバリアント；ＴＤ１４３９－ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤、である。しかしながら、臨床第２～第３相試験で評価した場合、これらの新しい薬剤は、いずれも安全性の懸念なしに主要エンドポイントを満たしていない。

慢性ＨＦ（ＣＨＦ）の患者の臨床経過と予後は、急性ＨＦ（ＡＨＦ）の発症後、きわめて悪化する（Solomon SD et al., Circulation 2007, 116:1482-87）。ＡＨＦＳは、ＨＦの症状と徴候の新たな発症または再発として定義でき、緊急の評価と治療が必要であり、予定外のケアまたは入院をもたらす。ＡＨＦＳの患者の半数は、収縮機能（ＨＦｒＥＦ）が低下しており、将来の治療法のターゲットとなる可能性がある（Braunwald E. Lancet 2015; 385:812-24）。駆出率（ｒＥＦ）が低下した患者のＡＨＦＳの治療は、血管拡張薬、利尿剤、または限外濾過によるうっ血の緩和、あるいは、陽性変力薬による心拍出量の増加によるうっ血の緩和に、焦点を当てている。この治療戦略は、心臓突然死のリスクを減らしているものの、退院後のイベント率は、ＡＨＦＳで入院した患者において容認できないほど高いままである。多くの望ましくない心血管系の副作用は、利用可能な治療法によって引き起こされる可能性があり、変力療法に起因する心筋虚血、心臓損傷、および不整脈などが挙げられ、特に、冠状動脈疾患（ＣＡＤ）（Abraham WT et al., J Am Coll Cardiol 2005, 46:57-64; Flaherty JD et al., J Am Coll Cardiol. 2009, 53(3):254-63）、低血圧、および、血管拡張薬によって引き起こされる末梢臓器（腎臓）の低灌流の患者において、特に低血圧のＨＦ患者においてみられる。したがって、入院中の主な目標は、心臓および／または腎臓の損傷を引き起こすことなく心拍出量を改善することである。さらに、左心室（ＬＶ）拡張期弛緩障害の検査または治療にはほとんど焦点が当てられておらず、ＨＦであるがＥＦが維持された患者の残りの５０％において、ＨＦの症状の原因となっている。さらに、ＥＦが低下したＡＨＦＳの患者は、心機能の全体的な障害の一因となる心室弛緩の障害も有している。動物モデルとＨＦ患者の両方において、心臓弛緩能力を測定するために、さまざまな心エコー指標が開発されており（例えば、初期僧帽弁輪組織速度［ｅ’］の低下、および初期僧帽弁流入［Ｅ］減速時間［ＤＴ］の低下）、また、ＬＶ充満圧の増加の心エコーパラメーター（例えば、Ｅ／ｅ’比）も開発されている。単一の指標の変化の応答は、一部の動物モデルと患者において完全に重ね合わせることができないが、心室弛緩障害の動物モデルの全体的な変化は、確かにヒトの病状に翻訳可能であり、ＡＨＦＳにおける薬物効果の研究に使用される（Shah SA et al., Am Heart J 2009, 157:1035-41）。

近年、ＳＥＲＣＡ２ａ機能を向上させるさまざまな治療アプローチが研究されている。これらには、遺伝子導入によるＳＥＲＣＡ２ａの過剰発現（Byrne et al., Gene Therapy 2008, 15:1550-1557）、優性阻害性のある変異体の発現によるＰＬＮの不活性化（Hoshijima M et al., Nat. Med. 2002, 8: 864-871; Iwanaga Y et al., J Clin Investig 2004, 113: 727-736）、ＡｄＶ－ｓｈＲＮＡ（Suckau L et al., Circulation 2009, 119: 1241-1252）、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（Groβl et al., PLoS One 2014, 9: e92188）、または抗体（Kaye DM et al., J. Am. Coll. Cardiol. 2007, 50:253-260）が挙げられる。ＨＦにおいてＳＥＲＣＡ２ａ遺伝子送達を適用した最大の第ＩＩｂ相臨床試験（ＣＵＰＩＤ２）のネガティブな結果によって強調されるように、これらのアプローチは、構成物送達（ウイルスベクターなど）および解決にはほど遠い用量調整において、大きな問題に悩まされている（Hulot JS, Eur Heart J 2016, 19:1534-1541）。イスタロキシムとは構造的に異なる、ＰＬＮを阻害する小分子（ピリドン誘導体）が、最近報告されている（Kaneko M. et al., Eur J Pharmacol 2017, 814:1-7）。

したがって、小分子ＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤の開発は、ＨＦの治療に有利であり、依然として非常に有望な戦略を表している。

イスタロキシム（ｉｓｔａｒｏｘｉｍｅ）は、ＡＨＦＳの治療のために臨床開発中の新しい小分子薬である。イスタロキシムは、ＥＰ０８２５１９７、およびS. De Munariら（J. Med. Chem. 2003, 64:3644-3654）に開示されており、化合物（３Ｚ、５α）－３－［（２－アミノエトキシ）イミノ］アンドロスタン－６，１７－ジオン、である。イスタロキシムは、ＳＥＲＣＡ２ａを活性化しながら（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15）、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ポンプを阻害する（Micheletti et al., J Pharmacol Exp Ther 2002, 303:592-600）という、二重の作用機序を有している。同じレベルの変力作用では、イスタロキシムの催不整脈作用は、純粋なＮａ^＋／Ｋ^＋ポンプ阻害剤であるジゴキシンのそれよりもかなり低くなる（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15）。これは、細胞質ゾルからのＣａ^２＋クリアランスを改善することにより（Alemanni, J Mol Cell Cardiol 2011, 50:910-8）、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激が、その変力作用を維持しながら、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ポンプ遮断の催不整脈作用も最小限に抑える可能性があること（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15; Zaza & Rocchetti, Curr Parm Des 2015, 21:1053-1061）を示唆している。イスタロキシムによる催不整脈作用の低下は、臨床研究で確認されている（Gheorghiade M et al., J Am Coll Cardiol 2008, 51:2276-85）。

ＨＦ患者において、イスタロキシムの注入により、収縮機能と拡張機能の両方が改善されている（Ｈｏｒｉｚｏｎ研究）（Gheorghiade M et al., J Am Coll Cardiol 2008, 51:2276-85; Shah SA et al., Am Heart J 2009, 157:1035-41）。収縮機能の改善は、収縮組織速度（ｓ’）の増加、および収縮末期エラスタンスの勾配（ＥＳＰＶＲ勾配）の増加として検出され；拡張期コンプライアンスの増加は、拡張期組織速度（ｅ’）の増加、および拡張末期エラスタンス（ＥＤＰＶＲ勾配）の減少によって明らかになっている（Shah SA et al., Am Heart J 2009, 157:1035-41）。

優れた薬力学的プロファイルを有するものの、イスタロキシムは、胃腸（ＧＩ）での吸収性が低く、クリアランス率が高いため、長期の投与には最適ではない。したがって、イスタロキシムは、ＡＨＦＳの入院患者における静脈内注入用に開発されているだけであり、その投与には十分な訓練を受けた医療関係者が必要となっている（Dec GW, J Am Coll Cardiol. 2008, 51:2286-88; Shah SA et al., Am Heart J 2009, 157:1035-41）。

したがって、ポジティブな変弛緩作用を有し、好ましくは経口経路で投与できる、ＨＦの治療に使用するための化合物が、長い間必要とされている（Butler J et al., Eur J Heart Failure 2018, 20:839-841; Wagner S et al., Circ Res 2015, 116:1956-1970; Hasenfuss G & Teerlink JR., Eur Heart J. 2011, 32(15):1838-45）。

「純粋な」ＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤によって、拡張機能の改善が達成される可能性はある。しかしながら、ＳＥＲＣＡ２ａを選択的に活性化することを目的とした小分子または遺伝子治療の発見に関する精力的な研究にもかかわらず、これまでのところ有望な臨床的結果は達成されていない。

本発明は、上記の要求を満たし、先行技術の問題を克服するものである。

特定のアンドロスタン誘導体が、今、純粋またはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化を示すことが見出された。言い換えれば、本明細書で提供されるアンドロスタン誘導体は、ＳＥＲＣＡ２ａを有意に活性化するが、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプを阻害しないか、または穏やかにしか阻害しない。一般に、これらのアンドロスタン誘導体は、炭素－３（Ｃ３）での炭素リンカーを介して結合した官能基、および、Ｃ６および／またはＣ７での官能基を含む。これらの純粋なまたはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤の構造は、以下に示される一般式（Ｉ）：

［式中、
Ｘは、カルボン酸、カルボン酸エステル、およびそれらの生物学的等価体（硫酸塩、スルホン酸、リン酸塩、ホスホネート、またはトリアゾールおよびテトラゾールなどの窒素含有エーテル環式環）、第一級アルコール、エーテル、またはアミン基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）のいずれかであり；
ｎは、１、２、３、４、または５であり；
Ｃ３－Ｃ１’の破線は、Ｃ３－Ｃ１’の位置にある任意選択の環外二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ２－Ｃ３の破線は、任意選択の環内二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ６にあるＹは、α－配置またはβ－配置のヒドロキシル（ＯＨ）、またはα－配置のヒドロキシメチル（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｃ７にあるＺは、－Ｈ、またはα－配置の－ＯＨ、またはケトンのいずれかであり、破線は、その位置にある任意選択のカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）を表す。］
の構造を有している。
本明細書に開示される化合物は、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマー混合物；それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物；またはそれらの代謝物および代謝前駆体、を含み得る。

本発明の文脈において、代謝産物および代謝前駆体は、代謝反応によって変換されているが、薬理学的活性を実質的に維持または増加させる、式（Ｉ）の化合物を意味する。

代謝物または代謝前駆体の例は、ヒドロキシル化、カルボキシル化、スルホン化、グリコシル化、メチル化または脱メチル化、アセチル化された、または、グルクロン酸、グリシンおよび他のアミノ酸、グルタチオンに共有結合された、または、酸化または還元された、式（Ｉ）の化合物の誘導体である。

式（Ｉ）のいくつかの化合物、特にエステルも、活性形態のプロドラッグであり得る。

式（Ｉ）の化合物が互変異性を示すことができる場合、式は、すべての互変異性体を包含することを意図しており、本発明は、その範囲内に、すべての可能な立体異性体、ＺおよびＥ異性体、光学異性体、エナンチオマーおよびそれらの混合物を含む。

また、薬学的に許容される塩は、本発明の範囲に含まれる。薬学的に許容される塩は、ベースの化合物の生物学的活性を保持する塩であり、例えば、既知の薬理学的に許容される酸に由来し、酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、メタンスルホン酸、または安息香酸、および当技術分野で一般的に使用される他のもの、が挙げられる（例えば、Pharmaceutical Salts and Co-crystals, Editors: Johan Wouters, Luc Quere, RSC Publishing, 2011を参照）。

本発明のさらなる目的は、特にＨＦの治療のための医薬として使用するための、前記一般式（Ｉ）の化合物である。

いくつかの実施形態において、請求項１に記載の化合物は、（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－（４－アミノブチル）－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；（ＥＺ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸；（ＥＺ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（ＥＺ）－３－［２－（ピロリジン－３イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（ＥＺ）－３－［２－（アゼチジン－２－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（ＥＺ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（ＥＺ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン）－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；および、３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン、からなる群から選択される。

本発明のさらなる目的は、任意選択で他の治療活性成分と組み合わせてもよい、１つ以上の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物である。そして、これらの医薬組成物は、経口投与、静脈内または筋肉内注射、吸入、硝子体内注射などのために、製剤化され得る。特定の実施形態において、本明細書に開示される医薬組成物は、ＨＦの治療に使用される。

本発明の上記および他の目的は、実施例および図によっても、詳細に開示される。

図１は、ＳＴＺラットから単離されたラット心室筋細胞における、筋小胞体（ＳＲ）Ｃａ^２＋取り込みパラメーターに対する１μＭのＣＶｉｅ２１６の効果を示している（ローディングプロトコル）。ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込みパラメーターには、Ｃａ^２＋トランジェント（ＣａＴ）振幅（パネルＡ）；Ｃａ^２＋によって誘発されるＣａ^２＋放出（ＣＩＣＲ）ゲイン（パネルＢ）、およびＣａ^２＋減衰の時間の定数（τ）（パネルＣ）、が含まれる。対照（Ｎ＝１６～１８）とＣＶｉｅ２１６（Ｎ＝２０～２３）の曲線の差は、パネルＡ～Ｃにおいて統計的に有意であった（ｐ＜０．０５、二元配置分散分析）。

図２は、ＳＴＺラットから単離されたラット心室筋細胞における、筋小胞体（ＳＲ）Ｃａ^２＋取り込みパラメーターに対する１μＭのＣＶｉｅ２１４の効果を示している（ローディングプロトコル）。ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込みパラメーターには、Ｃａ^２＋トランジェント（ＣａＴ）振幅（パネルＡ）；Ｃａ^２＋によって誘発されるＣａ^２＋放出（ＣＩＣＲ）ゲイン（パネルＢ）、およびＣａ^２＋減衰の時間の定数（τ）（パネルＣ）、が含まれる。対照（Ｎ＝１４）とＣＶｉｅ２１４（Ｎ＝１１）の曲線の差は、パネルＢ（ｐ＜０．０５）において統計的に有意であり、パネルＣ（ｐ＝０．０５）において有意に近いものであった。

図３は、モルモット心室筋細胞のさまざまな刺激速度（Ｈｚ）での活動電位（ＡＰ）および活動電位持続時間（ＡＰＤ）の短期変動（ＳＴＶ）に対するＣＶｉｅ２１６の効果を示している。パネルＡでは、左から右に、基本条件（ＣＴＲ、黒丸；Ｎ＞１３）または１μＭのＣＶｉｅ２１６の存在下（白丸；Ｎ＞１１）での、９０％再分極（ＡＰＤ_９０）での活動電位持続時間（左パネル）、拡張膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）（中央パネル）、および最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）（右パネル）の速度依存性が示されている。対照群とＣＶｉｅ２１６群の間で測定された差は、すべてのパラメーターで統計的に有意ではなかった。パネルＢでは、ＳＴＶと平均ＡＰＤ_９０の間の線形相関が、対照群（ＣＴＲ、黒丸）およびＣＶｉｅ２１６群（白丸）について示されている。すべてのペーシングレートからのデータを各群においてプールして、ＳＴＶ評価を広いＡＰＤ範囲に拡張した。実線は、データポイントの線形フィットであり（対照勾配＝０．０１３に対し、ＣＶｉｅ２１６勾配＝０．０９、ＮＳ）、ＣＶｉｅ２１６がＡＰＤ延長に対するＳＴＶ感度を変更しなかったことを示している。

図４は、モルモット心室筋細胞のさまざまな刺激速度（Ｈｚ）での活動電位（ＡＰ）および活動電位持続時間（ＡＰＤ）の短期変動（ＳＴＶ）に対するＣＶｉｅ２１４の効果を示している。パネルＡでは、左から右に、基本条件（ＣＴＲ、黒丸；Ｎ＞１７）または１μＭのＣＶｉｅ２１４の存在下（白丸；Ｎ＞１７）での、９０％再分極（ＡＰＤ_９０）での活動電位持続時間（左パネル）、拡張膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）（中央パネル）、および最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）（右パネル）の速度依存性が示されている。対照群とＣＶｉｅ２１４群の間で測定された差は、すべてのパラメーターで統計的に有意ではなかった。パネルＢでは、ＳＴＶと平均ＡＰＤ_９０の間の線形相関が、対照群（ＣＴＲ、黒丸）およびＣＶｉｅ２１４群（白丸）について示されている。すべてのペーシングレートからのデータを各群においてプールして、ＳＴＶ評価を広いＡＰＤ範囲に拡張した。実線は、データポイントの線形フィットであり（対照勾配＝０．０１２に対し、ＣＶｉｅ２１４勾配＝０．０１４、ＮＳ）、ＣＶｉｅ２１４がＡＰＤ延長に対するＳＴＶ感度を変更しなかったことを示している。

本明細書において、心不全の治療に有用な組成物および方法が開示される。特に、本明細書において、新規のアンドロスタン誘導体を含む組成物が提供される。さらに、ＳＥＲＣＡ２ａを活性化する一方で、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプを穏やかに阻害するだけである、本明細書に記載の新規アンドロスタン誘導体の１つのグループがある。アンドロスタン誘導体のこのグループは、「ほぼ純粋な」ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤と称され、Ｃ３炭素にアミン含有官能基を有する一般式（Ｉ）で示されるものである。本明細書に記載される新規アンドロスタン誘導体の別のグループは、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプを有意に阻害することなしに、強力なＳＥＲＣＡ２ａ活性化を示す。このアンドロスタン誘導体のグループは、「純粋な」ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤と称され、Ｃ３炭素のスペーサーを介して並べられたカルボン酸／エステル含有官能基を有する一般式（Ｉ）で示されるものである。他の実施形態において、一般式（Ｉ）のほぼ純粋または純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤は、Ｃ３炭素に、アルコール、硫酸塩またはリン酸塩を含む官能基を含み得る。このように、これらの組成物は、ポジティブな変弛緩特性を有しており、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプ阻害の催不整脈作用を避けながら、ＳＥＲＣＡ２ａを選択的に活性化するために使用することができる。本明細書に開示される組成物および方法を、以下でより詳細に説明する。

定義
特に断りのない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。特に断りのない限り、標準的な技術が用いられる。本明細書に記載されているものと類似または同等の方法および材料が、本開示の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料は、以下に説明される。材料、方法、および実施例は、例示にすぎず、限定することを意図するものではない。本明細書に記載されているすべての発行物、特許、およびその他の文書は、参照によりその全体が組み込まれる。

本明細書において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数の指示対象を含む。

「約」との用語は、測定値を取得するために用いられる装置の一般的なエラー率に起因する、測定値の数値、例えば、体積、時間、圧力、濃度などの変動を意味する。一実施形態において、「約」との用語は、報告された数値の５％以内を意味し、好ましくは、「約」との用語は、報告された数値の３％以内を意味する。

「心不全」との用語は、構造的および／または機能的な心臓の異常によって引き起こされる徴候（例えば、頸静脈圧の上昇、肺雑音、および末梢浮腫）を伴い得る、典型的な症状（例えば、息切れ、足首の腫れ、および疲労）を特徴とし、安静時またはストレス時の心拍出量の低下および／または心臓内圧の上昇をもたらす、臨床症状を意味する。

「急性心不全」または「ＡＨＦ」との用語は、本明細書において互換的に使用され、一般に、即時の治療および入院を必要とするＨＦの症状および／または徴候の急速な発症または悪化を意味する。「急性心不全」の現在の定義は、かなり非特異的であり、さまざまな臨床症状、病因、増悪因子、治療アプローチ、および予後を特徴とするいくつかの表現型を伴う、広範囲の状態を含む可能性がある。さらに、患者の大部分は、入院の数日前に発症する可能性のあるＨＦの徴候および症状の進行性の悪化を伴う亜急性の疾患経過を有している。

「慢性心不全」または「ＣＨＦ」との用語は、本明細書において互換的に使用され、ＨＦおよび左心室駆出率（ＬＶＥＦ）の徴候および症状の存在に基づく、慢性ＨＦの現在の臨床分類を意味し、次の３つのカテゴリー：「駆出率が低下した心不全」すなわち「ＨＦｒＥＦ」（約４０％未満のＬＶＥＦを特徴とする）；「駆出率が軽度低下した心不全」すなわち「ＨＦｍＥＦ」または「ＨＦｍｒＥＦ」（約４０％～約４９％のＬＶＥＦを特徴とする）；および、「駆出率が保持された心不全」すなわち「ＨＦｐＥＦ」（約５０％と同じかそれ以上のＬＶＥＦを特徴とする）、が認識されている。「ＨＦｍｒＥＦ」および「ＨＦｐＥＦ」との用語には、２つの追加基準、すなわち、構造的および／または機能的な心臓疾患のエビデンス（左心室肥大、および／または左心房拡大、および／または拡張機能障害のエビデンス）に関連する、ナトリウム利尿ペプチドレベルの増加（ＢＮＰ＞３５ｐｇ／ｍｌ、および／またはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ＞１２５ｐｇ／ｍＬ）、が含まれる。ＨＦエビデンスに基づく薬物療法の有効性は、「ＨＦｒＥＦ」の患者でのみ確認されており、一方、「ＨｆｐＥＦ」では、有意な改善の結果を示す治療はなかった。

「代謝物」および「代謝前駆体」との用語は、代謝反応によって変換／修飾されているが、その薬理学的活性を実質的に維持するかまたはその増加を示す、化合物を意味する。

「治療する」との用語は、疾患または病気の治療または改善における成功の兆候を意味する。治療には、例えば、疾患または病気の１つまたは複数の症状の重症度を軽減または緩和することが含まれ得、あるいはそれは、疾患、不具合、障害、または悪い状態などの症状をヒト患者などの個体が経験する頻度を減らすことが含まれ得る。

「予防する」との用語は、ヒト患者などの個体における疾患または病気、例えば、急性心不全、の予防を意味する。例えば、心不全を発症するリスクのある個体が本発明の方法で処置され、後で心不全を発症しない場合、疾患はその個体において予防されている。

「治療または予防」との用語は、本明細書において、疾患または病気についてあるレベルの治療または改善をもたらす方法を意味するために使用されることがあり、その目的に向けられた一連の結果を企図するが、完全な病気の防止に制限されるものではない。

本明細書において、「薬学的に許容される担体」との用語は、一般式（Ｉ）を有するアンドロスタン誘導体またはその代謝産物などの活性化合物と組み合わせることができ、組み合わせたあとに、化合物を哺乳動物に投与するために使用できる、化学組成物を意味する。

本明細書において、「薬学的に許容される」塩、溶媒和物、水和物、またはエステルとの用語は、医薬組成物の他の成分と適合性があり、組成物が投与される対象に有害ではない、活性成分の、塩、溶媒和物、水和物、またはエステルの形態を意味する。「薬学的に許容される塩」との用語はさらに、塩基性化合物の生物学的活性を保持し、薬理学的に許容される酸により導かれる、化合物の塩の形態を意味する。

本明細書において、心臓機能の測定を意図する「パラメーター」との用語は、当技術分野で利用可能な適切な測定技術を用いて観察可能または測定可能な任意の心臓機能を意味する。心臓機能の「パラメーター」としては、これに限定されるものではないが、例えば、カルシウムトランジェント振幅（ＣａＴ）、カルシウム誘発性カルシウム放出（ＣＩＣＲ）、カルシウム減衰の時間の定数、９０％再分極での活動電位持続時間の速度依存性（ＡＰＤ_９０）、拡張期膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）、最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）、心拍数、血圧、拡張期弛緩、収縮期収縮、左心室駆出率（ＬＶＥＦ）、拡張期血圧、収縮期血圧、心拍出量、一回拍出量、収縮速度（ｓ’）、初期弛緩速度（ｅ’）、後期弛緩速度（ａ’）、左心室充満圧指数（Ｅ／ｅ’）、Ｅ波の減速時間（ＤＴ）、僧帽弁減速指数（ＤＴ／Ｅ）、減速勾配（deceleration slope）（Ｅ／ＤＴ）、心係数、僧帽弁流入血流速度などが挙げられる。当業者が理解するように、心臓機能の１つまたは複数の「パラメーター」を測定することは、平均的な正常「パラメーター」と比較して、心臓機能障害を検出するために用いることができ、また、治療中または後に心臓機能が改善したかどうかを決めるために使用することができる。

ＳＥＲＣＡ２ａの活性化または刺激に関連する「ほぼ純粋」との用語は、無細胞系（モルモット、イヌ、ラットなどから得られるＳＲ心臓ミクロソーム）において、ＳＥＲＣＡ２ａ活性を統計的に有意な方法で刺激する能力を有する一方で、無細胞系において精製されたイヌの腎臓Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅを穏やかにのみ阻害する（すなわち、ＩＣ_５０が、約０．５μＭより大きい、好ましくは約１μＭより大きい）、アンドロスタン誘導体などの化合物を意味する。

ＳＥＲＣＡ２ａの活性化または刺激に関連する「純粋な」との用語は、無細胞系（モルモット、イヌ、ラットなどから得られるＳＲ心臓ミクロソーム）において、ＳＥＲＣＡ２ａ活性を統計的に有意な方法で刺激する能力を有しており、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプの有意な阻害を示さない（すなわち、ＩＣ_５０が、約１００μＭより大きい）、アンドロスタン誘導体などの化合物を意味する。

「治療活性な」または「活性な」成分または化合物との用語は、物質が投与される個体に有益な効果を提供する物質を意味する。「治療有効量」または「治療有効用量」は、組成物または有効成分が投与される個体に有益な効果を提供するのに十分な組成物または活性成分の量である。

ほぼ純粋または純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激活性を有するアンドロスタン誘導体
本発明は、ほぼ純粋または純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激活性を有するアンドロスタン誘導体の発見に基づいている。言い換えれば、これらは、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプの阻害が少ないだけかまたはまったくない、ＳＥＲＣＡ２ａの刺激を示す誘導体である。

これらの新規アンドロスタン誘導体は、アミン含有またはカルボン酸／エステル含有の官能基などのさまざまな官能基を有する炭素リンカーによって、Ｃ－３炭素において機能化されている。さらに、これらの新規アンドロスタン誘導体はまた、ヒドロキシル、ヒドロキシメチル、またはケトン基などによって、Ｃ－６および／またはＣ－７炭素において機能化されている。好ましくは、本明細書において好適に用いられる新規アンドロスタン誘導体は、それぞれ、一般式（Ｉ）：

で示されるものである。

上記式中、Ｘは、カルボン酸、カルボン酸エステル、およびそれらの生物学的等価体（硫酸塩、スルホン酸、リン酸塩、ホスホネート、またはトリアゾールおよびテトラゾールなどの窒素含有エーテル環式環）、第一級アルコール、エーテル、またはアミン基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）、のいずれかであり；

Ｃ６にある炭素リンカーは、１～５の整数（例えば、１、２、３、４、または５）であるｎで表される１つ以上の炭素を有し；

破線は、任意選択の二重結合（Ｃ３－Ｃ１’またはＣ２－Ｃ３におけるＣ＝Ｃ）およびＣ７におけるＣ＝Ｏを表し；

Ｃ６にあるＹ基は、α配置またはβ配置のヒドロキシル（ＯＨ）、またはα配置のヒドロキシメチル（ＣＨ_２ＯＨ）であり、および、

Ｃ７にあるＺ基は、－Ｈ、またはα配置の－ＯＨのいずれか、またはケトン（Ｃ＝Ｏ）であり得る。

特定の実施形態において、ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤が望ましい場合がある。そのようなものとして、本明細書において使用に適したアンドロスタン誘導体は、Ｘが、アミン官能基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）である、一般式（Ｉ）で示されるものが含まれ得る。しかしながら、いくつかの実施形態において、純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激装置を選択することが望ましい場合がある。そのようなものとして、使用に適したアンドロスタン誘導体は、Ｘが、アミン官能基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）ではない、一般式（Ｉ）で示されるものが含まれ得る。好ましい実施形態において、純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤は、Ｘにカルボン酸またはカルボン酸エステルを有する、一般式（Ｉ）で示されるものである。

本明細書に開示されるアンドロスタン誘導体は、ＺまたはＹのいずれかまたは両方に、酸素含有官能基を含むことが好ましい。

本明細書において、一般式（Ｉ）によって表される化合物のエナンチオマーおよび／またはジアステレオマー混合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、および／または水和物、ならびにそれらの代謝物および／または代謝前駆体も、使用に適している。代謝物または代謝前駆体としては、例えば、ヒドロキシル化、カルボキシル化、スルホン化、アセチル化、グリコシル化、グルクロン酸化、メチル化または脱メチル化された、または、グルタチオン、グリシンまたは他のアミノ酸に共有結合された、または、酸化または還元された、式（Ｉ）の化合物の誘導体、が挙げられる。さらに、式（Ｉ）のいくつかの化合物、特にエステルもまた、活性形態のプロドラッグであり得る。薬学的に許容される塩としては、例えば、これに限定されるものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、メタンスルホン酸、または安息香酸の塩、および当技術分野で一般的に使用される他のものが挙げられる（例えば、Pharmaceutical Salts and Co-crystals, Editors: Johan Wouters, Luc Quere, RSC Publishing, 2011参照、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）。

式（Ｉ）の化合物が互変異性を示すことができる場合、式は、すべての互変異性体を包含することを意図しており、これに限定されるものではないが、すべての可能な立体異性体、ＺおよびＥ異性体、光学異性体、エナンチオマーおよびそれらの混合物が含まれる。

本明細書において使用に適した特定のアンドロスタン誘導体としては、以下が挙げられる：

（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０１）

（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０２）

（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０３）

（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０４）

（Ｅ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２０５）

（Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２０６）

（Ｅ）－３－（４－アミノブチル）－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩（ＣＶｉｅ２０７）

３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩（ＣＶｉｅ２０８）

（ＥＺ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２０９）

（Ｅ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２１０）

（Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２１１）

３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２１２）

エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）（ＣＶｉｅ２１３）アセテート

４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸（ＣＶｉｅ２１４）

４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸（ＣＶｉｅ２１５）

２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸（ＣＶｉｅ２１６）

４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート（ＣＶｉｅ２１７）

４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート（ＣＶｉｅ２１８）

４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸（ＣＶｉｅ２１９）

（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０１）

（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピロリジン－３イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０２）

（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－２－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０３）

（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０５）

（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン）－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ４０６）

３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０７）

３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ４０８）

３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４０９）

３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ４１０）

３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン（ＣＶｉｅ４１１）

３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ４１２）

また、本発明の目的は、ＳＥＲＣＡ２ａ活性化の低下に関連する疾患、例えば、心不全（ＡＨＦおよび／またはＣＨＦ）、の治療、改善、退行、症状の軽減または抑制、または予防のために、式（Ｉ）の化合物のＳＥＲＣＡ２ａ活性化特性を利用することである。欠陥のある細胞内Ｃａ^２＋分布は心筋リモデリングプロセスに関与しているため、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激によるその修正は、それに対抗する可能性がある。したがって、明らかな心不全の収縮性における初期に生じる異常の進展を防ぐことができる。

上記のように、本明細書に開示されるアンドロスタン誘導体は、純粋なまたはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤として作用する。以下の例に示すように、これらの化合物はＳＥＲＣＡ２ａの活性化を示す。ＣＶｉｅ２０１～２０４およびＣＶｉｅ２１３～２１９などの純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅを有意に阻害しない。例えば、これらの化合物は、単離されたイヌの腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅにおいて、１００μＭより大きいＩＣ_５０値を示した（実施例３を参照）。一方、ＣＶｉｅ２０５～２１２およびＣＶｉｅ４０１～４１２などのほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅを穏やかにしか阻害しない。例えば、これらの化合物は、単離されたイヌの腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅにおいて、少なくとも０．８μＭのＩＣ_５０値を示し、好ましくは、それらは、単離されたイヌの腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅにおいて、少なくとも１μＭのＩＣ_５０値を有するであろう（実施例３）。さらに、ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、イスタロキシムと比較して、約６分の１から約１７０分の１のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ阻害を示す。

いくつかの実施形態において、ほぼ純粋および純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、Ｃ３炭素リンカーに結合したそれらのそれぞれの官能基（すなわち、式（Ｉ）のＸ）によって区別することができる。いくつかの実施形態において、純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、Ｃ３炭素リンカーにカルボン酸またはカルボン酸エステルを有するものである。他の実施形態において、ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤は、Ｃ３炭素リンカーにアミン官能基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）を有するものである。

本明細書で提供される純粋なまたはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤化合物は、心不全を治療するために使用することができる。Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅを有意に阻害することなくＳＥＲＣＡ２ａを活性化するこの能力により、これらの化合物は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ阻害に関連する不整脈または心筋細胞損傷のリスクを高めることなく、心臓に変弛緩作用を与えて心臓機能を改善することができる。したがって、これらの化合物は、心不全（急性または慢性）の治療のための医薬として、および心不全を治療または予防する方法において、使用することができる。したがって、それらは、当業者の認識の範囲内で、合成および製剤化の技術を用いて異なる投与経路のために製剤化された医薬組成物に含まれ得る。本明細書に開示された純粋なまたはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ活性化剤を利用する医薬組成物および治療的処置の方法は、以下でさらに詳細に論じられるものである。

医薬組成物
治療剤としての式（Ｉ）の化合物は、単独で、または医薬製剤（組成物）の成分として投与することができる。したがって、本明細書において、本明細書に開示された式（Ｉ）の化合物またはその特定の誘導体のいずれかを、少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルおよび／または賦形剤と混合して含む、医薬組成物、が開示される。医薬組成物は、非経口、局所、皮下、筋肉内、経口によって、またはエアロゾルまたは経皮などの局所投与によって、個体に投与するために、製剤化され得る。特定の実施形態において、投与経路は、経口である。

医薬組成物は、任意の方法で製剤化することができ、病気または疾患、および疾患の程度、各患者の一般的な状態、結果として生じる好ましい投与方法などに応じて、様々な単位剤形で投与することができる。製剤化および投与の技術の詳細は、科学および特許の文献に詳しく説明されており、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton PAの最新版を参照されたい。

化合物は、ヒトまたは動物の医薬で使用するための任意の簡便な方法において投与するために、製剤化することができる。湿潤剤、乳化剤、および滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、および、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、緩衝剤、保存剤、および抗酸化剤もまた、組成物中に存在し得る。

本発明による組成物の製剤には、経口、経鼻、局所、非経口（例えば、筋肉内または静脈内注射による）、直腸、皮下、および／または膣内投与に適した製剤が含まれる。製剤は、単位剤形で、簡便に提供することができ、薬学分野でよく知られている任意の方法によって製造することができる。単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される対象および／または特定の投与様式に応じて変化するものである。単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる化合物の量である。

本明細書で提供される医薬製剤は、医薬品の製造のための当技術分野で知られている任意の方法に従って製造することができる。そのような製剤は、甘味剤、香味剤、着色剤、および保存剤を含むことができる。製剤は、製造に適した毒性のない薬学的に許容される賦形剤と混合することができる。製剤は、１つ以上の希釈剤、乳化剤、保存剤、緩衝剤、賦形剤などを含むことができ、液体、粉末、エマルジョン、凍結乾燥粉末、スプレー、クリーム、ローション、徐放性製剤、錠剤、ピル、ゲル、パッチ、インプラントなどの形態で提供することができる。

経口投与用の医薬製剤は、当技術分野でよく知られている薬学的に許容される担体を適切にかつ適切な用量で使用して、製剤化することができる。そのような担体は、医薬品を単位剤形で製剤化することを可能にし、患者による摂取に適した、錠剤、ゲルタブ（gel tabs）、ピル、粉末、糖衣錠、カプセル、液体、ロゼンジ、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などにすることができる。経口用途のための医薬製剤は、固体賦形剤として製剤化することができ、場合により得られた混合物を粉砕し、必要に応じて適切な追加の化合物を添加した後に顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠のコアを得てもよい。適切な固体賦形剤は、炭水化物またはタンパク質の充填剤であり、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールなどの糖；トウモロコシ、小麦、米、ジャガイモ、または他の植物由来のデンプン；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアガム、およびトラガントガムなどのガム；ゼラチン、およびコラーゲンなどのタンパク質、が挙げられる。架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）などの、崩壊剤または可溶化剤が加えられてもよい。

糖衣錠コアには、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、および／または適切な有機溶媒または溶媒混合物を含み得る、濃縮糖溶液などの適切なコーティングが提供される。製品の識別のため、または活性化合物の量（すなわち、用量）を特徴づけるために、染料または顔料が、錠剤または糖衣錠コーティングに加えられ得る。本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される医薬製剤は、例えば、ゼラチンで作られたプッシュフィットカプセル、ならびに、ゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどのコーティングで作られた密封ソフトカプセルを用いて、経口的に使用することもできる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースまたはデンプンなどの充填剤または結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および任意選択の安定剤と混合された、活性剤を含むことができる。ソフトカプセルでは、活性剤は、安定剤とともにあるいはなしに、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に、溶解または懸濁され得る。

水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合して、活性剤（例えば、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物）を含むことができる。そのような賦形剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアラビアガムなどの懸濁剤、および、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）などの分散剤または湿潤剤、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、または、エチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、が挙げられる。水性懸濁液はまた、エチルｐ－ヒドロキシベンゾエートまたはｎ－プロピルｐ－ヒドロキシベンゾエートなどの１つ以上の保存剤、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、および、スクロース、アスパルテーム、サッカリン、またはエリスリトールまたはレバウジオシドＡなどの１つ以上の甘味剤、を含むことができる。製剤は浸透圧を調整することができる。

油性薬剤は、本明細書で提供される使用および方法に適した疎水性活性剤を投与するために特に有用である。油性懸濁液は、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはココナッツ油などの植物油、または液体パラフィンなどの鉱油に、またはこれらの混合物に、活性剤を懸濁することによって製剤化することができる。例えば、経口投与された疎水性医薬化合物の生物学的利用能を高め、個体間および個体内の変動を低減するための精油または精油成分の使用を記載している、米国特許第５，７１６，９２８号を参照されたい。また、米国特許第５，８５８，４０１号も参照されたい。油性懸濁液は、蜜蝋、硬質パラフィン、セチルアルコールなどの増粘剤を含むことができる。グリセロール、ソルビトール、スクロース、エリスリトール、またはレバウジオシドＡなど、甘味料を添加して、口当たりの良い経口製剤を提供することができる。これらの製剤は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することによって、保存することができる。注射可能な油性ビヒクルの例としては、Minto J., Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 281:93-102を参照されたい。本明細書で提供される医薬製剤はまた、水中油型エマルジョンの形態であり得る。油相は、上記のような、植物油または鉱油、あるいはこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤としては、アカシアガムおよびトラガカントガムなどの天然に存在するガム；大豆レシチンなどの天然に存在するホスファチド；エステル；または、脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、およびこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど、が挙げられる。エマルジョンはまた、シロップおよびエリキシルの製剤のような場合、甘味料および香味料を含むことができる。そのような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、または着色剤を含むことができる。

本発明によれば、医薬化合物はまた、坐剤、吹き入れ、粉末およびエアロゾル製剤を含む、鼻腔内、眼内および膣内経路によって投与することができる（ステロイド吸入剤の例について、Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 1995, 35:1187-1193; Tjwa, Ann. Allergy Asthma Immunol. 1995, 75:107-111を参照、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。坐剤製剤は、薬物を、常温では固体であるが体温では液体であり、それにより体内で溶融して薬物を放出する適切な非刺激性の賦形剤と、混合することにより調製することができる。そのような材料は、カカオバター、およびポリエチレングリコールである。

本発明によれば、医薬化合物は、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、エマルジョン、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、化粧剤、粉末、およびエアロゾルとして製剤化され、局所経路によって、経皮的に送達することができる。

本発明によれば、式（Ｉ）の医薬化合物は、吸入によって送達することができる。例えば、代替となる実施形態において、吸入用の式（Ｉ）の化合物は、乾燥分散のために、例えば、有効成分（すなわち式（Ｉ）の化合物）を含む溶液を、例えば、米国特許第６，５０９，００６号；第６，５９２，９０４号；第７，０９７，８２７号；第６，３５８，５３０号（これらの各内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載された方法を用いて、噴霧乾燥することによって、調製される。乾燥粉末賦形剤としては、例えば、分散を助けるために式（Ｉ）の化合物と混合される低分子量の炭水化物またはポリペプチドが挙げられる。代替となる実施形態において、乾燥粉末分散用の担体として有用な種類の医薬賦形剤としては、有用な分散剤でもあるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの安定剤、炭水化物、アミノ酸およびポリペプチドなどの充填剤；ｐＨ調整剤または緩衝液；塩化ナトリウムなどの塩；などが挙げられる。これらの担体は、結晶形態またはアモルファス形態であり得るか、またはその２つの混合物であり得る。粉末またはエアロゾル製剤を送達するために使用することができるデバイスとしては、例えば、米国特許第５，６０５，６７４号および第７，０９７，８２７号に記載されているものが挙げられる。

本発明によれば、医薬化合物はまた、体内で徐放するためのナノ粒子またはマイクロスフェアとして送達することができる。例えば、ナノ粒子またはマイクロスフェアは、皮内または皮下注射により投与することができ、薬物がゆっくりと皮下に放出される；Rao J., Biomater, Sci. Polym. Ed. 1995, 7:623-645を参照；生分解性および注射可能なゲル製剤として、例えば、Gao, Pharm. Res. 1995, 12:857-863を参照；または、経口投与用のマイクロスフェアとして、例えば、Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 1997, 49:669-674を参照、これらのそれぞれの内容全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明によれば、式（Ｉ）の医薬化合物は、筋肉内（ＩＭ）または静脈内（ＩＶ）の投与、または体腔または臓器の内腔への投与などによって、非経口的に投与することができる。これらの製剤は、薬学的に許容される担体に溶解された活性剤の溶液を含み得る。使用できるビヒクルおよび溶媒は、水、デキストロース含有水、および等張性塩化ナトリウムであるリンゲル液である。さらに、滅菌不揮発油を溶媒または懸濁媒質として使用することができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の刺激の少ない不揮発油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も同様に注射剤の調製に使用することができる。これらの溶液は無菌であり、一般に望ましくない物質が含まれていない。これらの製剤は、従来のよく知られた滅菌技術によって滅菌することができる。製剤は、ｐＨ調整剤および緩衝剤、毒性調整剤、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどの、生理学的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容される補助物質を含み得る。これらの製剤中の活性剤の濃度は大きく変動する可能性があり、選択された特定の投与方法および患者のニーズに従って、主に液量、粘度、体重などに基づいて選択される。静脈内投与の場合、製剤は、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液などの、無菌の注射可能な製剤であり得る。この懸濁液は、それらの適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、製剤化することができる。無菌の注射可能な製剤はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば、１，３－ブタンジオールの溶液の、懸濁液であり得る。投与は、ボーラスまたは連続注入（例えば、所定の期間の血管への実質的に中断されない導入）によるものである。

本明細書で提供される医薬化合物および製剤は、凍結乾燥することができる。本明細書で提供される組成物を含む安定な凍結乾燥製剤が提供され、これは、本明細書で提供されるような薬剤および増量剤、例えば、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、およびスクロース、またはそれらの混合物を含む溶液を、凍結乾燥することによって製造することができる。その他の多くの従来の凍結乾燥剤がある。糖の中で、乳糖が最も一般的である。クエン酸、炭酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、ベンジルアルコール、グリシン、塩化ナトリウムなども使用される（例えば、Journal of Excipients and Food Chemistry Vol. 1, Issue 1 (2010) pp 41-54；米国特許出願公開第２００４００２８６７０号を参照）。

治療方法
本発明によれば、本明細書で提供される式（Ｉ）の化合物は、予防的および／または治療的な処置のために使用することができる。治療用途では、医薬組成物は、治療上有効な量で、すでに病気または疾患に罹患している対象に、投与される。他の実施形態において、本明細書で提供される医薬組成物は、それを必要とする個体において、病気または疾患を、治療、予防、または改善するのに十分な量で、投与される。この用途に有効な投薬スケジュールおよび量、すなわち「投薬レジメン」は、疾患または病気の段階、疾患または病気の重症度、患者の一般的な健康状態、患者の身体的状態、年齢などを含む、様々な要因に依存するものである。患者の投与レジメンの計算においては、投与方法も考慮される。

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、心不全を有する個体の治療に使用するためのものである。好ましい実施形態において、個体は、急性心不全の症状を示すか、または急性心不全と診断されている。個体は非ヒト動物であり得るが、好ましい実施形態において、個体は、ヒト患者であり、例えば、心不全に罹患したヒト患者である。他の実施形態において、本明細書で提供される化合物は、個体におけるＳＥＲＣＡ２ａの刺激に使用するためのものである。

一般に、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物および医薬組成物は、心不全または急性心不全の治療に使用することができる。治療方法は、心不全または急性心不全を有している個体を提供または提示することを含む。場合によっては、測定ステップが最初に実施されて、個体のベースライン心臓機能が決定される。測定ステップは、心臓機能の１つ以上のパラメーターの測定を含むことができ、これに限定されるものではないが、心拍数、血圧、拡張期弛緩、収縮期収縮、左心室駆出率（ＬＶＥＦ）、拡張期血圧、収縮期血圧、心拍出量、１回拍出量、減速勾配（Ｅ／ＤＴ）、収縮速度（ｓ’）、初期弛緩速度（ｅ’）、後期弛緩速度（ａ’）、左心室充満圧指数（Ｅ／ｅ’）、Ｅ／Ｅａ比またはＥ／Ａ比、Ｅａ比、Ｅ波の減速時間（ＤＴ）、僧帽減速指数（ＤＴ／Ｅ）、減速勾配（Ｅ／ＤＴ）、心係数、僧帽流入速度などが挙げられる。心不全または心機能障害のある個体において、測定されるパラメーターとしては、心拍数の低下、心臓圧力の低下、収縮期および／または拡張期の血圧の低下、左心室拡張末期／収縮期の容積および機能の低下（ＬＶＥＦ）、またはＥ／Ｅａ比またはＥ／Ａ比の増加、Ｅａ比の減少、１回拍出量の減少、の１つ以上を挙げることができる。測定ステップは、医薬組成物の投与の有効性（すなわち、心臓機能の回復または部分的回復）を決定するため、および／または治療中の個体の状態を監視するために、使用することもできる。したがって、測定ステップは、医薬組成物の投与前、投与中、または投与後に実施することができる。当業者が理解するように、測定ステップの時点で当業者が利用できる任意の適切な測定技術は、本明細書での使用に適しており、目的のパラメーターに対応する適切な測定技術を選択することは、当業者の認識の範囲内である。適切な測定装置／技術としては、これに限定されるものではないが、血液検査、心エコー検査（組織ドップラー法を含む）、心臓カテーテル検査、核ストレステスト、ＣＡＴスキャン、放射性核種心室造影スキャン、聴診器、血圧計などが含まれる。例えば、拡張期弛緩は、心エコー検査またはＰＣＷＰによって測定できる。

本明細書に開示される方法は、また、治療有効量の一般式（Ｉ）の化合物を個体に投与することを含む。好ましい実施形態において、化合物は、上記の組み合わせのいずれか１つなどの医薬組成物中にある。化合物は、本明細書の他の場所に開示されているように、治療に有効な用量で、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇで、投与される。より好ましい実施形態において、投与経路は、経口である。測定ステップは、投与ステップの前、その間、または後に実施することができる。例えば、治療中およびその後の一定期間、心臓機能のパラメーターの１つ以上を継続的に監視することが望ましい場合がある。

投与レジメンはまた、当技術分野でよく知られている薬物動態パラメーター、すなわち、活性剤の吸収速度、生物学的利用能、代謝、クリアランスなどを考慮に入れる（例えば、Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617; Groning (1996) Pharmazie 51:337-341; Fotherby (1996) Contraception 54:59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84:1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50:610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24:103-108; 最新のRemington’s、上記、を参照）。最先端の技術により、臨床医は、個々の患者、活性剤、および治療される疾患または病気のそれぞれのために、投与レジメンを決定することができる。医薬品として使用される類似の組成物に提供されるガイドラインは、本明細書に提供される方法を実施して投与される投与レジメン、すなわち、投与スケジュールおよび投与レベル、を決定するためのガイダンスとして、使用することができ、正確かつ適切である。

製剤の単回または複数回の投与は、必要に応じて、患者が許容できる投与量および頻度に応じて行うことができる。製剤は、本明細書に記載される病気、疾患または症状を効果的に治療、予防、または改善するのに十分な量の活性剤を提供すべきである。例えば、本明細書で提供される方法および使用を実施するために使用される組成物の経口投与のための例示的な医薬製剤は、１日あたり、約１μｇ／ｋｇから、約２０、５０、１００または１０００μｇ／ｋｇ体重またはそれ以上の、１日量であり得、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物の同等量であり得る。

代替となる実施形態において、それを必要とする個体に投与される、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物の等価物の有効量は、様々な投薬スケジュールの使用を含んでおり、例えば：Ａ）ＡＨＦＳの場合、入院患者を救済するために、式（Ｉ）の化合物を、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、またはそれ以上にわたって、1分あたり、０．１乃至０．５μｇ／ｋｇ～約１０、５０または１００μｇ／ｋｇ体重またはそれ以上の範囲の用量で、静脈内注入によって、投与することができる；Ｂ）ＡＨＦＳから救助され、退院した患者では、治療効果を維持するための投与スケジュールは、１日あたり、１、１０、５０、１００、または１０００ｇ／ｋｇ体重またはそれ以上の間の１日量であり得る。

本発明を実施するのに有用な式（Ｉ）の化合物は、１回のボーラスとして１ｎｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量を送達するように、または、１μｇ～約２０ｍｇの経口または静脈内用量を送達するように、または反復レジメン、または当業者によって容易に決定されるそれらの組み合わせを送達するように、投与され得る。特定の実施形態において、投薬量には、毎日または別の適切な定期的なレジメンにおいて、少なくとも０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．４ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．６ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．７ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．８ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも０．９ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも４ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも６ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも７ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも９ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも３０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも３５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも４０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも４５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ、が含まれる。

一実施形態において、本発明は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）の化合物の、約０．１２５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの治療有効用量での、例えば、０．１２５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．２５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．７５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．２５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．７５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．２５ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．７５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．２５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、５．７５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．２５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、６．７５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．２５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．７５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．２５ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．７５ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．２５ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．７５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇでの、静脈内または皮下投与を想定している。好ましい実施形態において、化合物は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの間である治療有効用量で、静脈内または皮下送達（例えば、注射または注入）を介して投与される。別の実施形態において、治療に有効な用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態において、治療に有効な用量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～４ｍｇ／ｋｇ、または約０．５ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇである。

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）を有する化合物の、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの治療有効用量での、例えば、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１３．５ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１４．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１５．５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１６．５ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１７．５ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１８．５ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、１９．５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２０．５ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２１．５ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２２．５ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２３．５ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２４．５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、３９ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４３ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４７ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、４９ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇでの、筋肉内投与を想定している。好ましい実施形態において、アンドロスタン誘導体は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇの間である治療有効用量で、筋肉内送達（例えば、注射）を介して投与される。別の実施形態において、治療に有効な用量は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇである。さらに別の実施形態において、治療に有効な用量は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇである。さらに他の実施形態において、治療に有効な用量は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇである。

さらに別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）を有する化合物の、約１μｇ～約１０ｍｇの治療有効用量での、例えば、１μｇ、１．２５μｇ、１．５μｇ、１．７５μｇ、２μｇ、２．２５μｇ、２．５μｇ、２．７５μｇ、３μｇ、３．２５μｇ、３．５μｇ、３．７５μｇ、４μｇ、４．２５μｇ、４．５μｇ、４．７５μｇ、５μｇ、５．２５μｇ、５．５μｇ、５．７５μｇ、６μｇ、６．２５μｇ、６．５μｇ、６．７５μｇ、７μｇ、７．２５μｇ、７．５μｇ、７．７５μｇ、８μｇ、８．２５μｇ、８．５μｇ、８．７５μｇ、９μｇ、９．２５μｇ、９．５μｇ、９．７５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ、２００μｇ、２５０μｇ、３００μｇ、３５０μｇ、４００μｇ、４５０μｇ、５００μｇ、５５０μｇ、６００μｇ、６５０μｇ、７００μｇ、７５０μｇ、８００μｇ、８５０μｇ、９００μｇ、９５０μｇ、１ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２ｍｇ、２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、または１０ｍｇでの、硝子体内投与を想定しており；好ましくは、用量は、約１μｇ～約２０００μｇ、例えば、約１μｇ～約２０００μｇ、または約１００μｇ～約１，５００μｇ、または約５００μｇ～約１，２００μｇ、または約５００μｇ～約１，０００μｇである。いくつかの実施形態において、硝子体内投与を介して送達される、化合物の治療有効用量は、少なくとも約０．０２ｍｇ、例えば、少なくとも約０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、または１ｍｇ、である。

別の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）を有する化合物の、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの治療有効用量での、例えば、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１３．５ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１４．５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１５．５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１６．５ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１７．５ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１８．５ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、１９．５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇでの、経口投与を想定している。好ましい実施形態において、化合物は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの間である治療有効用量で、経口送達を介して投与される。例えば、特定の一実施形態において、一般式（Ｉ）を有する化合物は、約１および５ｍｇ／ｋｇの用量でヒトに経口的に送達される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される経口用量は、１回で投与される。他の実施形態において、それは一日で投与される。

別の実施形態において、本明細書に記載の一般式（Ｉ）を有する化合物の治療有効量は、投与スケジュールに従って、例えば、約０．１～約０．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ～約５．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎで、例えば、０．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．３μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．４μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．６μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．７μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．８μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、０．９μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．３μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．４μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．６μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．７μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．８μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、１．９μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．３μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．４μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．６μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．７μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．８μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、２．９μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．３μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．４μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．６μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．７μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．８μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、３．９μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．１μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．３μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．４μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．６μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．７μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．８μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、４．９μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、または５．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎで、注入によって個体に投与される。例えば、いくつかの実施形態において、化合物は、約０．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ～約２．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、または約０．２μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ～約１．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、または約０．２５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ～約１．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ、または約０．５μｇ／ｋｇ／ｍｉｎ～約１．０μｇ／ｋｇ／ｍｉｎの有効用量で、注入によって投与される。

代替となる実施形態において、それを必要とする個体に投与される、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物の同等物の有効量は、肺動脈楔入圧（ＰＣＷＰ）、組織ドップラー法（ＴＤＩ）測定、呼吸困難、末梢および肺静脈うっ血、尿量、運動能力、血清バイオマーカー、例えば、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、および高感度心筋トロポニン（ｈｓ－ｃＴｎＴ）のモニタリングに基づいて、個別化される。

代替となる実施形態において、それを必要とする個体に投与される、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物の同等物は、呼吸困難にならずに通常の運動耐容能を維持するのに十分な量である。

代替となる実施形態において、有効量は、ＰＣＷＰ、起座呼吸、発作性夜間呼吸困難の低下、運動耐性の増加、肺雑音またはラ音などの末梢および肺の静脈うっ血の低下、足首の腫れの低下、バイオマーカーの尿出量、例えば、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、および高感度心筋トロポニン（ｈｓ－ｃＴｎＴ）などによって、実証される。

代替となる実施形態において、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物の同等物の低用量は、（例えば、経口、吸入または皮下との比較において）血流またはＩＶまたはＩＭに、例えば、ＩＶまたはＩＭ投与として投与される場合に、または体腔または臓器の内腔に投与される場合に、使用される。実質的に高用量は、局所、スプレー、吸入または経口投与、あるいは、粉末、スプレーまたは吸入による投与において、使用することができる。非経口のまたは非経口でない投与に可能な製剤を調製するための実際の方法は、当業者に知られているかまたは明らかであり、Remington'sのような出版物に詳細に記載されている（Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton PAを参照）。

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物の同等物は、例えば、診断の日から患者の生存の最後の日まで、または疾患が緩和するまで、慢性的に与えられる。代替となる実施形態において、用量調整は、特定の従来から知られているバイオマーカーまたは疾患の臨床的兆候の定期的なモニタリングを通じて、治療段階から維持期間に移行する必要がある。

代替となる実施形態において、治療、治療レジメン、または特定の投薬量の有効性を評価する際、または管理投与量に対して治療を与えるべきかどうかを決定する際に、個体、例えば、ＡＨＦまたはＣＨＦを患った患者は、臓器や組織の関与または損傷の存在と程度について、例えば、心臓（心室拡張、第３心音、心臓肥大）、倦怠感、疲労、運動耐性の低下、運動後の回復時間の増加、腎臓（腎不全、乏尿）、肺（起座呼吸、発作性夜間呼吸困難、頻呼吸）、足首の腫れ、頸静脈圧の上昇などについて、規則的に定期的なスクリーニングを受ける。徹底的な身体検査は、心血管疾患、特に心臓、肺、末梢循環機能に集中するＡＨＦまたはＣＨＦの治療の専門家が選択した時間間隔で、行うべきである。したがって、代替となる実施形態において、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物の同等物による治療は、症状の急速な進展を防ぐために、可能な限り早期に、好ましくは緊急に、開始され、患者の退院後数年にわたって、好ましくは患者の生涯を通じて、または少なくとも他の薬剤をＨＦで使用する方法と一致する期間、継続される。

本発明によれば、本明細書で提供される使用および方法は、他の薬剤または医薬品との同時投与をさらに含むことができる。実際、本発明は、低下した心臓の生化学的機能（すなわち、ＳＥＲＣＡ２ａ活性）を選択的に修正する。これは確かに既存のＨＦ臨床症状の緩和に貢献し、利用可能な治療法よりも望ましくない副作用が少なくする（上記の選択性のため）。しかしながら、ＣＨＦおよびＡＨＦは、複雑な臨床症候群であるため、本発明は、以下のような既存および将来の薬物分類および／または特定の薬剤に潜在的に関連している：ａ）薬物分類、例えば、ＡＣＥ阻害薬、ＡＩＲＢ、利尿剤、Ｃａ^２＋チャネル遮断薬、β－ブロッカー、ジギタリス、ＮＯドナー、血管拡張剤、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤、ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤、ミオシンフィラメント活性化剤、組換えリラキシン－２メディエーター、組換えＮＰタンパク質、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性化剤、アンジオテンシンＩＩ受容体のβ－アレスチンリガンド；ｂ）特定の薬剤：ヒドロクロロチアジド、フロセミド、ベラパミル、ジルチアゼム、カルベジロール、メトプロロール、ヒドララジン、エプレレノン、スピロノラクトン、リシノプリル、ラミプリル、ニトログリセリン、硝酸塩、ジゴキシン、バルサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、カンデサルタン、ロサルタン、エンレスト（ｅｎｔｒｅｓｔｏ）、オメカムチブ、サクビトリル、セレラキシン、ウラリチド、レボシメンダン、シナシグアト。

治療剤として、特にＨＦを治療するために使用される本発明の化合物は、同じ疾患の治療に使用される他の治療剤と組み合わせることができる。例示的な他の治療剤は、利尿剤、例えば、フロセミド、ブメタニド、およびトラセミド、メトラゾン、アルドステロンアンタゴニスト、例えば、スピロノラクトン、またはエプレレノン；チアジド系利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド、メトラゾン、クロルタリドンなどである。他の薬剤として、ＡＣＥ阻害剤、例えば、リシノプリルおよびラミプリルがある。また、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、例えば、バルサルタン、カンデサルタン、ロサルタンなども考慮に入れることができる。アンジオテンシン受容体／ネプリライシン阻害剤（ＡＲＮＩ）、例えばサクビトリルが挙げられる。他の薬剤は、ベータ遮断薬、例えば、カルベジロールおよびメトプロロールなど、または、血管拡張剤、例えば、任意選択で硝酸イソソルビドと組み合わせられるヒドララジン、硝酸塩、例えば、ニトログリセリン、アムロジピンおよびフェロジピン、非ジヒドロピリジン、例えば、ジルチアゼムまたはベラパミルなど、から選択することができる。本発明の化合物はまた、必要に応じて、ジゴキシンと組み合わせることができる。イバブラジンや他の抗凝固剤などの他の薬剤が考慮されてもよい。さらに、他の薬剤には、ＯＭＥＣＡＭＴＲＩＶＭＥＣＡＲＢＩＬが含まれてもよい。

本発明の化合物は、他の治療剤、特に心血管疾患の治療に有用な薬剤、より具体的にはＨＦの組合せ療法において、組み合わせることができる。組み合わせた有効成分は、医師が決定したさまざまなプロトコルに従って投与することができる。本発明の実施形態によれば、組合せ療法は、式（Ｉ）の化合物を、さらなる治療活性成分（複数の成分でもよい）と、同時にまたは異なる時間で、投与することによって実施することができる。同時投与の場合、本発明の化合物およびさらなる有効成分（複数の成分でもよい）は、各々、それぞれの医薬組成物に製剤化することができる。この場合、本発明は、特に心不全の治療のための、本発明の化合物およびさらなる有効成分（複数の成分でもよい）をそれぞれ含む別個の医薬組成物を含むキットを提供する。別の実施形態において、本発明は、特にＨＦの治療のための、本発明の化合物およびさらなる有効成分または複数の成分を含む、医薬単位剤形キットを提供する。

ナノ粒子、ナノリポ粒子およびリポソーム
本明細書で提供される化合物を含む、例えば、本明細書で提供されるような薬学的に活性な化合物および組成物（式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または水和物の同等物）を、それを必要とする対象に送達するための、ナノ粒子、ナノリポ粒子、ベシクル、およびリポソーム膜も提供される。代替となる実施形態において、これらの組成物は、例えば、所望の細胞種、例えば、筋細胞または心臓細胞、内皮細胞などを標的化するために、細胞表面ポリペプチドを含めたポリペプチドなどの生物学的分子を含む、特定の分子を標的とするように設計される。

本開示の方法を実施するために使用される化合物を含む多層リポソームが提供され、例えば、Ｐａｒｋらの米国特許公開第２００７００８２０４２号に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。多層リポソームは、スクアレン、ステロール、セラミド、中性脂質または油、脂肪酸およびレシチンを含む油相成分の混合物を使用して、粒子サイズが約２００～５０００ｎｍまでで、調製することができ、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物に封入することができる。

リポソームは、任意の方法を使用して製造することができ、例えば、米国特許第４，５３４，８９９号、米国特許公開第２００７００４２０３１号に記載されており、例えば、本発明による活性剤（または活性剤の組み合わせ）をカプセル化することによってリポソームを生成する方法であって、第１のリザーバーに水溶液を提供すること；第２のリザーバーに有機脂質溶液を提供し、次いで第１の混合領域で水溶液を有機脂質溶液と混合してリポソーム溶液を生成し、そこで有機脂質溶液を水溶液と混合して実質的に即時に活性剤をカプセル化するリポソームを生成すること；および、すぐにリポソーム溶液を緩衝液と混合して、希釈されたリポソーム溶液を生成することを含む方法などが挙げられる。

一実施形態において、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用されるリポソーム組成物は、例えば、本明細書で提供される方法を実施するために使用される化合物、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物の同等物の所望の細胞種への送達を標的化するために、置換アンモニウムおよび／またはポリアニオンを含み、例えば、米国特許公開第２００７０１１０７９８号に記載されている。

活性剤含有ナノ粒子（例えば、二次ナノ粒子）の形態の、本明細書に提供される使用および方法を実施するために使用される、本発明の化合物を含むナノ粒子が提供され、例えば、米国特許公開第２００７００７７２８６号に記載されている。一実施形態において、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される脂溶性活性剤、または、二価または三価の金属塩と作用する脂溶化水溶性活性剤を含む、ナノ粒子が提供される。

一実施形態において、固体脂質懸濁液を使用して、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物を製剤化し、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで、哺乳動物細胞に送達することができ、例えば、米国特許公開第２００５０１３６１２１号に記載されている。

本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物および製剤は、リポソームまたはナノリポソームの使用によって、送達することができる。リポソームを使用することにより、特にリポソーム表面が標的細胞に特異的なリガンドを運ぶか、あるいは特定の器官に優先的に指向する場合、インビボでの標的細胞への活性剤の送達についてフォーカスが可能となる。例えば、米国特許第６，０６３，４００号、第６，００７，８３９号；Al-Muhammed, J. Microencapsul. 1996, 13:293-306; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6:698-708; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 1989, 46:1576-1587を参照されたい。

送達ビヒクル
代替となる実施形態において、任意の送達ビヒクルを使用して、本明細書で提供される使用および方法を実施することができ、例えば、本明細書で提供される化合物を、それを必要とする対象に送達することができる。例えば、ポリカチオン、カチオン性ポリマー、および／またはポリエチレンイミン誘導体などのカチオン性ペプチドを含む送達ビヒクルを使用することができ、例えば、米国特許第２００６００８３７３７号に記載されている。

一実施形態において、乾燥ポリペプチド－界面活性剤複合体が、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物を製剤化するために使用され、例えば、米国特許公開第２００４０１５１７６６号に記載されている。

一実施形態において、本明細書で提供される使用および方法を実施するために使用される組成物は、細胞膜透過性ペプチドコンジュゲートを有するビヒクルを使用して、細胞に適用することができ、例えば、米国特許第７，３０６，７８３号、第６，５８９，５０３号に記載されている。一態様において、送達される組成物は、細胞膜透過性ペプチドにコンジュゲートされている。一実施形態において、送達される組成物および／または送達ビヒクルは、輸送媒介ペプチドにコンジュゲートされ、例えば、米国特許第５，８４６，７４３号に記載され、これは、高塩基性でポリホスホイノシチドに結合する輸送媒介ペプチドを記載している。

一実施形態において、電気透過処理は、任意のエレクトロポレーションシステムを使用して、組成物を細胞に送達するための主要なまたは補助的な手段として使用され、例えば、米国特許第７，１０９，０３４号、第６，２６１，８１５号、第５，８７４，２６８号に記載されている。

式（Ｉ）の化合物の製造
本発明の化合物は、有機化学の当業者に利用可能な多くの方法によって合成することができる。本発明の化合物を製造するための一般的かつ例示的な合成スキームを以下に説明する。これらのスキームは例示的なものであり、当業者が本明細書に開示される化合物を製造するために使用することができる可能な技術を制限することを意味するものではない。本発明の化合物を製造するための様々な方法は、当業者には明らかであろう。さらに、合成の様々な工程は、所望の１つまたは複数の化合物を得るために、代替の順序で実施することができる。

一般的なスキームに記載された方法に従って製造された本発明の化合物の例は、以下に記載される実施例の欄に示されている。

本発明の化合物は、有機合成化学の分野で知られている合成方法とともに、または当業者によって理解されるその変形とともに、以下に記載される方法を使用して、合成することができる。反応は、使用される試薬および材料に適切であって、行われる変換に適した、溶媒または溶媒混合物中で、実施される。有機合成の当業者は、分子上に存在する官能基が、提示された変換と一致すべきことを理解するであろう。

また、当業者は、上記で定義された置換基の任意の組み合わせを含むように、以下のスキームで例示される試薬および反応条件を容易に変更することができる。また、当業者は、各合成プロセスに対して交換可能な工程を容易に用いることができ、必要に応じて、単離および／または精製の工程を組み込むことができる。

本発明の化合物を製造するために有用な出発物質および中間体は、商業的に入手可能であるか、または周知の合成手法によって製造することができる。

以下に記載される合成によって得られる最終生成物は、分取クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、または結晶化などの当業者に一般に知られている技術を用いて、精製することができる。

本発明の化合物を合成するための例示的なプロセスを、ここに記載する。

以下の製造において、化合物、溶媒、反応物質、およびその他の任意の材料は、特に断りのない限り、商業的供給源からのものである。一般に、式（Ｉ）の化合物は、デヒドロエピアンドロステロン（プラステロン）から開始する多段階合成によって、製造することができる。デヒドロエピアンドロステロン（dehydroepiandrosterone）は、市販品であるか、４－アンドロステン－３，１７－ジオン（アンドロステンジオン）から出発して、よく知られた方法に従って、製造することができる。

５α－アンドロスタン－３β，６α，１７β－トリオールの製造

６－α－３，１７－アンドロスタンジオン（２）の合成に適した中間体は、ＤｅＭｕｎａｒｉら（J. Med. Chem., 2003, 46(17):3644-54）に記載のように、ヒドロホウ素化とそれに続く酸化によって、デヒドロエピアンドロステロン１から製造した。簡単に説明すると、デヒドロエピアンドロステロン１（５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（８５ｍＬ）の溶液を、Ａｒ下、－２０℃で撹拌した。次いで、１ＭのＢＨ_３・ＴＨＦ複合体のＴＨＦ液を撹拌溶液（４４ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、２．５当量）に加え、撹拌を室温で３時間続けた。Ｈ_２Ｏ（８５ｍＬ）を慎重に滴下して加え、続いてＮａＢＯ_３・４Ｈ_２Ｏ（５．４ｇ、３５ｍｍｏｌ、２当量）を滴下して加えた。室温で一晩撹拌した後、混合物を濾過した。固体をＴＨＦで洗浄し、次いで廃棄した。液体をＮａＣｌで飽和させ、ＴＨＦ（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、ＮａＣｌおよびＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。５α－アンドロスタン－３β，６α，１７β－トリオール２の粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２／１、１０ｍＬ／ｇ）により結晶化して、白色の固体を得た（３．８ｇ、７０％）。

６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオンの製造

中間体３は、Ｃ３およびＣ１７の位置での選択的酸化によって２から得られた。ＮＢＳ（３．４ｇ、１９．５ｍｍｏｌ、３当量）を、０℃で、５α－アンドロスタン－３β，６α，１７β－トリオール２（２ｇ、６．５ｍｍｏｌ、１当量）のジオキサン／Ｈ_２Ｏ／ピリジン（５４／１０／１ｍＬ）の撹拌溶液に加えた。添加後、混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。オレンジ色の溶液を水（５０ｍＬ）で希釈し、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３５０ｍｇ）でクエンチした。白色の固体が現れるまで、有機溶媒を真空下でエバポレートした。固体を濾過し、水で洗浄した。４０℃で乾燥した後、６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン３を白色の固体として得た（１．３ｇ、７０％）。

アドロスタン－３－メチレン－１７－オンの合成

次いで、６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３を、Ｃ３カルボニルでの選択的なウィッティヒ反応と、それに続く５－ペンテン酸によるクロスメタセシスカップリングにより、エキソメタン誘導体６（アドロスタン－３－メチレン－１７－オン）に変換した。ｔ－ＢｕＯＫ（６７０ｍｇ、６ｍｍｏｌ、４当量）を、－５℃で、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．６６ｇ、６ｍｍｏｌ、４当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ）の懸濁液に加えた。溶液はすぐに明るいオレンジ色に変わった。１０分後、温度を０℃未満に保ちながら、６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン３（４５０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。添加後すぐに、１ＭのＨＣｌ水溶液（１５ｍＬ）の添加により反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固させた。粗抽出物を、カラムクロマトグラフィー（溶離液ＥｔＯＡｃ：石油スピリット４：６）により精製して、３７６ｍｇ（８３％）のアドロスタン－３－メチレン－１７－オン６を白色のフォームとして得た。

クロスメタセシスによる前駆体６からの、ＣＶｉｅ２０１および２０２の直接合成

Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓ第２世代触媒（１２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、０．０５当量）をアンドロスタン－３－メチレン－１７－オン６（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液に加えた。次いで、溶液を還流加熱し、２０分ごとに、１０μＬの４－ペンテン酸（合計３３０μＬ、３．３ｍｍｏｌ、１０当量）で処理した。添加の終了後、混合物をさらに２時間還流した。反応混合物を真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（溶離液アセトン：石油スピリット３：７＋０．１％ＨＣＯ_２Ｈ）により精製して、２つの異なる白色の固体（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（４．８ｍｇ、４％）（ＣＶｉｅ２０１）、および、（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（７．２ｍｇ、６％）（ＣＶｉｅ２０２）を得た。

あるいは、ＣＶｉｅ２０１およびＣＶｉｅ２０２はウィッティヒ反応を変化させることによって得られた。１番目の方法（ルートＡ）では、ＤＭＳＯなどの極性溶媒とＮａＨなどの塩基を使用して、ベタイン中間体を安定化させた。２番目のアプローチ（ルートＢ）では、ＴＨＦなどの非プロトン性溶媒をベースとして使用して、シクロオキサホスフェタン中間体を安定化させることができた。ルートＡは、ジアステレオマーの混合物（６０％のＺ／ｓｙｎＣＶｉｅ２０２；３０％のＥ／ａｎｔｉＣＶｉｅ２０１）を生成し、一方、ルートＢは、シクロオキサホスフェート中間体に由来するＣＶｉｅ２０２を提供した。どちらの手法でも、以下に説明するように、ジアステレオマー７および／または８の生成が必要である。

ウィッティヒ反応による、ＣＶｉｅ２０１および２０２の代替的な合成
ルートＡ

６０％のＮａＨの鉱油液（１００ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、８当量）を、Ａｒ雰囲気下で乾燥ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に慎重に加えた。得られた溶液を、６０℃で２０分間撹拌した。室温で冷却した後、（３－カルボキシプロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド（５５０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。すぐに明るいオレンジ色が現れた。溶液を２時間撹拌した。次いで、６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン３（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１当量）を混合物に加えた。得られた溶液を室温でさらに４時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈した反応混合物を、１ＭのＨＣｌ水溶液（３×３０ｍＬ）で洗浄した。Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた有機層を蒸発乾固させて、２５ｍｇの粗物質を得た。

粗物質をまずＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解し、続いてＥＤＣ塩酸塩（１１５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、２当量）およびＤＭＡＰ（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。溶液を室温で３時間撹拌した。真空で濃縮した。粗固体をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、１ＭのＨＣｌ水溶液（３×１０ｍＬ）で洗浄した。粗生成物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（アセトン：石油スピリット３：７）により精製して、ジアステレオ異性体７および８の混合物を含む、２５ｍｇの透明な油（２０％）を得た。

ルートＢ

１ＭのＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ溶液（４０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ、１２当量）を、Ａｒ雰囲気下、－４０℃で、（３－カルボキシプロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド（８．５ｇ、２０ｍｍｏｌ、６当量）の乾燥ＴＨＦ（３３ｍＬ）懸濁液に慎重に加えた。明るいオレンジ色が現れるまで、溶液を－４０℃で撹拌した。次いで、６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン３（１ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１当量）を、－４０℃で溶液に加えた。室温で一晩撹拌した後、反応混合物を、１ＭのＨＣｌ水溶液（３００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×３５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固させた。

粗物質を無水ＥｔＯＨ（１７ｍＬ）に溶解し、次いで、ＥＤＣ塩酸塩（１．２６ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ、２当量）、およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈した反応物を、１ＭのＨＣｌ水溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄した。粗生成物をシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（アセトン：石油スピリット３：７）により精製して、９１０ｍｇ（７２％）の化合物８を得た。

メチル（またはエチル）エステルの最終の加水分解
１ＭのＬｉＯＨの水溶液（１５０μＬ、２．５当量）を、メチルエステル７および８（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（６００μＬ）および水（２００μＬ）の溶液に加えた。２時間後、反応物を水（１０ｍＬ）で希釈し、溶液がｐＨ１に達するまで１ＭのＨＣｌを添加して、クエンチした。水相をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固させた。粗製物をフラッシュクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ：石油スピリット７：３、１％ＨＣＯＯＨ）で精製した。Ｅ（７ｍｇ、３１％）およびＺ（１２ｍｇ、５４％）のジアステレオ異性体（それぞれＣＶｉｅ２０１およびＣＶｉｅ２０２）に対応する、２つの白色の固体が得られた。

ＣＶｉｅ２０３および２０４の合成方法：中間化合物１２の合成
ＣＶｉｅ２０３およびＣＶｉｅ２０４を製造するために、前駆体１２をまず６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３から生成した。６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３のカルボニルを、トルエン中の酸触媒（ｐ－ｔＳＡまたはカンフォスルホン酸）を組み合わせたエチレングリコールとの反応により、ジケタールとして保護し、化合物９を得た。化合物９をＰＣＣまたは他の酸化剤で酸化して、化合物１０を得て、これをＮａＢＨ_４またはＫＢＨ_４で還元して、β配置で選択的にＣ６－ヒドロキシル基を有する保護アルコール１１を生成した。アセトン中、ＤｅＭｕｎａｒｉら（J. Med. Chem., 2003, 46(17):3644-54）に記載されている、酸性処理による環状ジケタールの最終的な開裂により、前駆体１２を得た。

簡単に説明すると、６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン（１．５ｇ、４．９ｍｍｏｌ、１当量）、エチレングリコール（１０．５ｍＬ、８８ｍｍｏｌ、３６当量）、およびＰＴＳＡ（５６１ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ、０．６当量）のトルエン（１６０ｍＬ）溶液を、ディーンスタークトラップで、１２時間還流撹拌した。室温に冷却した後、混合物を５％ＮａＨＣＯ_３水溶液で中和した。有機層を分離し、Ｈ_２Ｏ（２×４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固して、３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６α－オール９を、白色の固体化合物として生成した（１．９ｇ、９８％）。

ＰＣＣ（１４８ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、４当量）を、０℃で、３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６α－オール（３ｇ、１４ｍｍｏｌ、１当量）９、およびアスコルビン酸ナトリウム（１．２ｇ、１４ｍｍｏｌ、４当量）の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２（８７ｍＬ）溶液に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を１ＭのＨＣｌ水溶液（３×３０ｍＬ）および水（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固させた。粗製物をシリカゲルのカラムでのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液アセトン：石油スピリット２：８）により精製した。３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６－オン１０を、白色の固体として得た（１．５３ｇ、９６％）。

ＮａＢＨ_４（１４４ｍｇ、３ｍｍｏｌ、１．２当量）を、０℃で、３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６－オン１０（１ｇ、２．５ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１３ｍＬ）の撹拌懸濁液に加えた。０℃で２時間後、Ｈ_２Ｏ（４０ｍＬ）を滴下して加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して、白色の固体として、３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６β－オール１１（９１５ｍｇ、９２％）を得た。

ＰＴＳＡ（２．２６ｇ、１１．５ｍｍｏｌ、５当量）を、３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６β－オール１１（９１０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ、１当量）のアセトン（４６ｍＬ）溶液に、５分かけて少量ずつ加えた。室温で１時間撹拌した後、ｐＨ７まで５％ＮａＨＣＯ_３水溶液を加えることにより、溶液をクエンチした。５分間撹拌した後、白色の固体が現れた。揮発性物質を真空で除去した。懸濁液をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、エバポレートした。得られた固体を、ｎ－ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、８／２（１０ｍＬ）で４５分間撹拌し、次いで、濾過により収集した。固体を４５℃で３時間乾燥させた。５６８ｍｇ（８１％）の白色の固体（すなわち、６β－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン１２）を得た。

１２の最終的なＣＶｉｅ２０３および２０４への変換

ＣＶｉｅ２０３およびＣＶｉｅ２０４は、ＣＶｉｅ２０１およびＣＶｉｅ２０２について上記で説明したのと同じ手法を用いて、ウィッティヒ反応を介して、前駆体１２から得た。Ｃ３－Ｃ１’の二重結合の配置は、ＮＯＥＳＹ実験によって、２つの異性体で特定された。

簡単に説明すると、６０％のＮａＨの鉱油液（１００ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、８当量）を、Ａｒ雰囲気下、乾燥ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に慎重に加えた。得られた溶液を６０℃で２０分間撹拌した。室温に冷却した後、（３－カルボキシプロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド（５５０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、４当量）を加えた。すぐに明るいオレンジ色が現れた。溶液を２時間撹拌した。次いで、６β－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン１２（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１当量）を、混合物に加えた。得られた溶液を室温でさらに４時間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ水溶液（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固させて、２５ｍｇの粗物質を得た。

次いで、粗物質をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に溶解した。ＥＤＣ塩酸塩（１１５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、２当量）、およびＤＭＡＰ（５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。溶液を室温で３時間撹拌した。真空で濃縮した。粗固体をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、１ＭのＨＣｌ水溶液（３×１０ｍＬ）で洗浄した。粗生成物を、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（アセトン：石油スピリット３：７）により精製して、ジアステレオ異性体１３および１４の混合物を、それぞれ１７％の収率および３０％の収率で得た。

反応混合物を真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（溶離液アセトン：石油スピリット３：７＋０．１％ＨＣＯ_２Ｈ）により精製して、２つの異なる白色の固体（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０３）、および、（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸（ＣＶｉｅ２０４）を得た。

水素化およびエステル加水分解による、ＣＶｉｅ２１４、ＣＶｉｅ２１５、およびＣＶｉｅ２１７の製造

化合物ＣＶｉｅ２１７は、上記のジアステレオマー７＋８の混合物から製造した。簡単に説明すると、ジアステレオマーのＣ３－Ｃ１’二重結合の水素化を、ＥｔＯＡｃ中、Ｐｄ－Ｃ触媒を用いて実施した。得られた化合物は、ＣＶｉｅ２１７であった。Ｃ３で形成された立体中心の配置は、ＮＯＥＳＹ実験によって特定された。次いで、化合物ＣＶｉｅ２１７を、１ＭのＬｉＯＨまたはＮａＯＨのＴＨＦ液で加水分解して、ＣＶｉｅ２１４を生成した。同様に、ジアステレオマー１３＋１４を、ＥｔＯＡｃ中、Ｐｄ－Ｃ触媒を用いて水素化して、エステル化合物１９を生成し、次いで、これを、１ＭのＬｉＯＨまたはＮａＯＨのＴＨＦ液で加水分解して、ＣＶｉｅ２１５を生成した。

ウィッティヒ反応とそれに続くＣ＝Ｃ水素化およびエステル加水分解による、ＣＶｉｅ２１３およびＣＶｉｅ２１６の製造

化合物６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３は、ホーナー・エモンズ反応によるＣＶｉｅ２１３およびＣＶｉｅ２１６の合成の開始点としても使用された。まず、トリエチルホスホノアセテート（６．５ｍＬ、３３ｍｍｏｌ、５当量）を、Ａｒ雰囲気下、０℃で、６０％のＮａＨの鉱油液（１．３ｇ、３３ｍｍｏｌ、５当量）を入れたＤＭＦ（２００ｍＬ）の懸濁液に、慎重に加えた。得られた溶液を室温に温め、２０分間撹拌した。次いで、６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３（２ｇ、６．５ｍｍｏｌ、１当量）を、０℃で加えた。室温で一晩撹拌した後、Ｈ_２Ｏ（１００ｍＬ）を慎重に加えることにより反応をクエンチし、Ｅｔ_２Ｏ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空でエバポレートした。粗製物をシリカゲルカラム（アセトン：石油スピリット３：７）でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、２．１ｇ（８６％）の２つのジアステレオ異性体（化合物２１）の透明な油の混合物を生成した。

Ａｒ雰囲気下、１０％Ｐｄ－Ｃ（７００ｍｇ）を、ジアステレオ異性体化合物２１（２ｇ、５．３ｍｍｏｌ、１当量）の脱気ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）溶液に加えた。真空／水素を３サイクル行った後、反応物を、Ｈ_２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。真空／Ａｒサイクルにより水素を除去した後、反応混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）で濾過した。濾過した溶液を蒸発乾固させた。ＣＶｉｅ２１３生成物は、１．８ｇ（９０％）で精製せずに得られた。さらに、１ＭのＬｉＯＨまたはＮａＯＨのＴＨＦ液で、ＣＶｉｅ２１３を加水分解することにより、ＣＶｉｅ２１６を生成した。

ウィッティヒ反応とそれに続くＣ＝Ｃ水素化およびエステル加水分解による、ＣＶｉｅ２１８およびＣＶｉｅ２１９の製造

同様に、６－α－３，１７－アンドロスタンジオン３を、適切なトリフェニルホスホニウム塩（例えば、５－カルボキシトリフェニルホスホニウムブロミド、ＬｉＨＭＤＳ、ＴＨＦ、次いでＥｔＯＨ（またはＭｅＯＨ））と反応させることにより、化合物２４を生成した。水素の存在下、Ｐｄ－Ｃ触媒を用いることにより、Ｃ－３位にＣ_６鎖を含んだ、ＣＶｉｅ２１８を生成した。１ＭのＬｉＯＨまたはＮａＯＨのＴＨＦ液によるＣＶｉｅ２１８の加水分解により、ＣＶｉｅ２１９を生成した。

Ｂｏｃ保護アミンとのメタセシス反応とそれに続くＢｏｃ脱保護による、前駆体６からの第一級アミン基を有する誘導体の合成

式（Ｉ）のＸ置換基として第一級アミン基を有する誘導体の合成のために、ＣＶｉｅ２０１およびＣＶｉｅ２０２の合成について上記したのと同じ実験条件を用いて、前駆体６に対してクロスメタセシス反応を実施した。

簡単に説明すると、Ｈｏｖｅｙｄａ－Ｇｒｕｂｂｓの第２世代触媒を、アンドロスタン－３－メチレン－１７－オン６のＤＣＭの溶液に加えた。次いで、アンドロスタン－３－メチレン－１７－オン６を、適切なＢｏｃ保護アミン（例えば、ｔｅｒｔ－ブチルペント－４－エン－１－イル－カルバメート、またはＮ－Ｂｏｃ－４－ペンチン－１－アミン）を含むエキソメチレン基と混合して、ジアステレオ異性体２５（２５％収率）を生成した。化合物２５（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、５００μＬの１：１混合のＴＦＡ／ＤＣＭトリフルオロ酢酸のＤＣＭ液で処理し、室温で撹拌して、Ｂｏｃ基を直接切断した。室温で１分間撹拌した後、反応物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固して、（ＥＺ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン（ＣＶｉｅ２０９）を、白色の固体として生成した（２８ｍｇ、７５％）。

あるいは、アルコール溶媒（例えば、ＭｅＯＨ）中で化合物２５をヨードトリメチルシランと反応させることにより、環外二重結合の移動を伴うＢｏｃ開裂が生じ、Ｃ２とＣ３との間に環内二重結合を有する、ＣＶｉｅ２０５を生成した。簡単に説明すると、１ＭのＴＭＳＩのＤＣＭ液（１００μＬ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）を、ジアステレオ異性体２５（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に室温で加えた。同じ温度で２時間撹拌した後、溶媒を真空で除去した。残渣にメタノール（２ｍＬ）を加え、室温で１時間放置した。真空中で溶媒を除去した後、ＣＶｉｅ２０７をさらに精製することなく得た。

環外不飽和を有する環状アミン誘導体：ＣＶｉｅ２０５、ＣＶｉｅ２０６、ＣＶｉｅ２１０およびＣＶｉｅ２１１、の合成

環状アミン誘導体は、適切なＮ－保護ホスホニウム塩を用いることで、ＣＶｉｅ２０３およびＣＶｉｅ２０４についての上記のような水素化ナトリウム（ＮａＨ）－ＤＭＳＯのウィッティヒ反応によって、合成し、例えば、Ｎ－Ｂｏｃ－４－（２－トリフェニルホスホニウムエチル）アゼチジンヨージドによって化合物２６および２７を生成し、あるいは、Ｎ－Ｂｏｃ－３－（２－トリフェニルホスホニウムエチル）ピペリジンヨージドによって化合物２８および２９を生成した。ジアステレオ異性体混合物を精製した後、ＴＦＡによる酸性加水分解によりＮ－Ｂｏｃ基を切断して、ＣＶｉｅ２０５、ＣＶｉｅ２０６、ＣＶｉｅ２１０、およびＣＶｉｅ２１１を生成した。

環内不飽和を有するＣＶｉｅ２０８の合成（Ｂｏｃ脱保護中のＣ＝Ｃ二重結合の移動）

さらに、ＣＶｉｅ２０７の合成について上記したように、化合物２８および２９をＴＭＳＩで処理することにより、ＣＶｉｅ２０８を生成した。

ＣＶｉｅ２１２を生成するためのＴＦＡによる水素化とＢｏｃ切断

あるいは、化合物２８および２９の二重結合の接触水素化（Ｈ_２、Ｐｄ－Ｃ、ＥｔＯＡｃ）により、化合物３０合成し、続いて、ＤＣＭ中、ＴＦＡによるＢｏｃ切断により、ＣＶｉｅ２１２を生成した。

６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオンを有する化合物の合成は、一般的な中間体３７から出発してなされた。化合物３７自体は、４－アンドロステン－３，１７－ジオン３１から出発し、環状アセタールによる２つのケトン部分の保護とそれと同時の二重結合の移動（３２）、二クロム酸ナトリウムによるアリル位置の酸化（３３）、シリルエノールエーテルの形成（３５）、Ｍｅ_３Ａｌおよびホルムアルデヒドによるヒドロキシメチル化（３６）、および、酸性条件下でのアセタールの最終開裂により、合成した。合成については、以降の段落で詳しく説明する。

化合物３２：（２０Ｓ，７Ｒ）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１２－エン、の合成

アンドロスト－４－エン－３，１７－ジオン３１（４００．０ｇ、１．４ｍｏｌ）、およびＰＴＳＡ・Ｈ_２Ｏ（１３．３ｇ、７０．０ｍｍｏｌ）の、エチレングリコール（８．０Ｌ）の混合物を、１００℃で、反応が終わるまで、撹拌した。約５．０Ｌのグリコールを、沸点が約８０～８５℃になるようにして、真空下で蒸留した。混合物を室温に冷却した。混合物をｐＨ～９に調整した。次いで、混合物を氷水に注いだ。混合物を濾過し、固体を水で洗浄し、収集し、アセトンで処理して、粗化合物３２（４６９．０ｇ、８９％）を黄色の固体として得た。

化合物３３：（２０Ｓ，７Ｒ）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１２－エン－１４－オン、の合成

化合物３２（４４０．０ｇ、１．２ｍｏｌ）、ＨＯＳＵ（５４１．２ｇ、４．７ｍｏｌ）、およびＮａ_２Ｃｒ_２Ｏ_７・Ｈ_２Ｏ（５２７．５ｇ、１．８ｍｏｌ）の、アセトン（８．０Ｌ）の混合物を、５０℃で２日間激しく撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＮａ_２ＳＯ_３水溶液でクエンチし、２０分間撹拌した。混合物を氷水に注いだ。得られた混合物を２０分間撹拌し、次いで濾過した。固体濾過物を水で洗浄し、収集し、真空で乾燥して、粗化合物３３（３９０．０ｇ、８５％）を黄色の固体として得た。

化合物３４：（７Ｓ，２０Ｓ）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１４－オン、の合成

化合物３３（５０．０ｇ、１２８．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１２５０ｍＬ）の混合物を、Ｐｄ／Ｃ（１６．０ｇ）に加えた。次いで、混合物を、Ｈ_２下、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２／１）により精製して、化合物３４（２５．０ｇ、５０．０％）を白色の固体として得た。

化合物３５：１－（（２０Ｓ，７Ｒ）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１３－エン－１４－イルオキシ）－１，１－ジメチル－１－シラエタン、の合成

化合物３４（２０．０ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１００．０ｍＬ）の混合物を－７８℃で撹拌し、次いで、１．５ＭのＬＤＡ（２０５．２ｍＬ、３０７．８ｍｍｏｌ）のトルエン液を滴下して加えた。同じ温度で１時間撹拌した後、Ｍｅ_３ＳｉＣｌ（５０．０ｍＬ、４００．１ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。－７０℃で３時間撹拌した後、温度を－３０℃に上げ、トリエチルアミン（３３．５ｇ、３３１．５ｍｍｏｌ）を加えた。同じ温度で１時間撹拌した後、混合物を室温まで温め、水（２００．０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００．０ｍＬ）を加えた。分離した水相をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝２／１）により精製して、化合物３５（１４．３ｇ、６０．３％）を白色の固体として得た。

化合物３６：（１３Ｓ，２０Ｓ，７Ｒ）－１３－（ヒドロキシメチル）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１４－オン、の合成

２，６－ジフェニルフェノール（１０．０ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（４５０．０ｍＬ）の混合物を、温度が室温を超えないように氷／水浴で冷却しながら、Ｍｅ_３Ａｌのトルエン溶液（４１．４ｍＬ、８２．９ｍｍｏｌ）に滴下して加えた。室温で１時間撹拌した後、溶液を０℃に冷却し、トリオキサン（２４．８ｇ、２７６．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１００．０ｍＬ）溶液を滴下して加えた。淡黄色の溶液を、０℃でさらに１時間撹拌し、次いで、温度を－７８℃に冷却した。化合物３５（１０．０ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１２５ｍＬ）溶液を加えた。－７８℃で１時間撹拌した後、温度を－２０℃に上げ、反応混合物をその温度で一晩撹拌した。５％ＮａＨＣＯ_３水溶液（８５．０ｍＬ）を室温で加えた。ゼリー状混合物を、ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）パッドを通して濾過し、ＤＣＭでよく洗浄した。分離した有機層を水で洗浄し、エバポレートした。約１ＭのＴＢＡＦのＴＨＦ（２４．０ｍＬ）液を残渣に加え、溶液を室温で１．５時間撹拌した。溶液を、水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物３６（６．５ｇ、７１．４％）を黄色の固体として得た。

化合物３７：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチルデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，７，１７（２Ｈ，４Ｈ，８Ｈ）－トリオン、の合成

化合物３６（８．０ｇ、１９．０ｍｍｏｌ）のアセトン（１００．０ｍＬ）の混合物を１０％ＨＣｌ水溶液（５０．０ｍＬ）に加えた。次いで、混合物を７０℃に１時間加熱した。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を５％ＮａＯＨ水溶液でクエンチし、ＤＣＭ（５０．０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を、ブライン（５０．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥＡ＝４／１）により精製して粗生成物を得て、これをエーテルで処理して純粋な生成物３７（３．３ｇ、５２．４％）を白色の固体として得た。

化合物３８：（１３Ｓ，１４Ｓ、２０Ｓ，７Ｒ）－１３－（ヒドロキシメチル）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１４－オール、の合成

ＮａＢＨ_４（４．０ｇ、１０４．８ｍｍｏｌ）を、０℃で、化合物３６（２２．０ｇ、５２．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０００．０ｍＬ）の混合物にゆっくりと加えた。次いで、混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を５％ＮａＨ_２ＰＯ_４水溶液（２２０．０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３００．０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を、ブライン（２００．０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥＡ＝４／１）により精製して粗生成物を得て、これをエーテルで処理して、化合物３８（７．５ｇ、３４．１％）を白色の固体として得た。

化合物３９：（８Ｓ，９Ｓ，１５Ｓ，２Ｒ）－９－ヒドロキシ－８－（ヒドロキシメチル）－２，１５－ジメチルテトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－５，１４－ジオン、の合成

化合物３８（５．７ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）のアセトン（７０．０ｍＬ）中の混合物に、１０％ＨＣｌ水溶液（３５．０ｍＬ）を加えた。次いで、混合物を７０℃に１時間加熱した。ＴＬＣは反応が完了したことを示した。混合物を５％ＮａＯＨ水溶液でクエンチし、ＤＣＭ（５０．０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥＡ＝４／１）により精製して粗生成物を得て、これをエーテルで処理して、純粋な生成物３９（１．８ｇ、４０．０％）を白色の固体として得た。

化合物４０：ｔｅｒｔ－ブチル－（２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）アゼチジン－１－カルボキシレート、の合成

ホスホニウム塩（２．５７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）の溶液に、ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ（２．５Ｍ、３．６ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）の溶液を－７８℃で加えた。混合物を３０℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３７（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、－２０℃で混合物に加え、次いで、３０℃に２時間温めた。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製して、粗化合物を得た。化合物を逆相カラムにより精製して、純粋な化合物４０（６０ｍｇ、８％）を白色の固体として得た。

化合物４１：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（２－（（３Ｓ，６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）アゼチジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物４０（６０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＥＡ（３ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（６０ｍｇ）を加えた。次いで、混合物を、Ｈ_２下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、化合物４１（５２ｍｇ、８６％）を白色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０７：（３Ｓ，６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－３－（２－（アゼチジン－３－イル）エチル）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチルドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４１（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物Ｃｖｉｅ４０７（１３ｍｇ、３２％）を白色の固体として得た。

化合物４２：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（（Ｅ）－２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）アゼチジン－１－カルボキシレート、の合成

ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（２．５Ｍ、０．７ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を、－７８℃で、化合物ホスホニウム塩（５１４ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に加えた。混合物を４０℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３９（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に加え、次いで、４０℃に一晩温めた。反応を９回繰り返した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（８０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４２（２０ｍｇ、１％）を黄色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０３：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－３－（２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチルドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４０（１３０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３でｐＨ８～９に塩基性化した。混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０３（１３ｍｇ、収率１３％）を黄色の固体として得た。

化合物４３：３－（２－（（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）アゼチジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物４２（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２０ｍｇ）、およびＰｄ（ＯＨ）_２（２０％、２０ｍｇ）の、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）の混合物を、Ｈ_２（バルーン）下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗化合物４３（２０ｍｇ、１００％）を褐色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０８：（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－３－（２－（アゼチジン－３－イル）エチル）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチルテトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７（２Ｈ）－オン
、の合成

化合物４３（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１：１、２ｍＬ）の混合物を、０℃で３０分間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０８（６．４ｍｇ、４０％）を黄色の固体として得た。

化合物４４：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）ピロリジン－１－カルボキシレート、の合成

ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（１．５Ｍ、１．５７ｍＬ、３．９４ｍｍｏｌ）を、－７８℃で、化合物ホスホニウム塩（１．５ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を３５℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３７の溶液（３５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を－２０℃で混合物に加え、室温に２時間温めた。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥＡ＝１：１）により精製して、粗化合物を得た。次いで、化合物を逆相カラムにより精製して、純粋な化合物４４（５３ｍｇ、１０％）を白色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０２：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピロリジン－３－イル）エチリデン）ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４４（８９ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ＝８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０２（３８ｍｇ、５３％）を白色の固体として得た。

化合物４５：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（２－（（３Ｓ，６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）ピロリジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物４４（５３ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）のＥＡ（３ｍＬ）溶液を、Ｐｄ／Ｃ（６０ｍｇ）に加えた。次いで、混合物を、Ｈ_２下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、化合物４５（５０ｍｇ、９４％）を白色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０９：（３Ｓ，６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピロリジン－３－イル）エチル）ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４５（５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０９（１２ｍｇ、３２％）を白色の固体として得た。

化合物４６：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（２－（（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）ピロリジン－１－カルボキシレート、の合成

ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（２．５Ｍ、０．７ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を、－７８℃で、化合物ホスホニウム塩（５２７ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を３５℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３９（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に加え、次いで、一晩３５℃に温めた。反応を４回繰り返した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（８０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４６（２６ｍｇ、３％）を白色の固体として得た。

化合物４７：ｔｅｒｔ－ブチル－３－（２－（（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）ピロリジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物４６（２６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％、３０ｍｇ）、およびＰｄ（ＯＨ）_２（２０％、３０ｍｇ）の、ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）の混合物を、Ｈ_２（バルーン）下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗化合物４７（２６ｍｇ、１００％）を黄色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４１０：（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピロリジン－３－イル）エチル）テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７（２Ｈ）－オン、の合成

化合物４７（２６ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１：２、２ｍＬ）の溶液を、０℃で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４１０（９ｍｇ、４３％）を黄色の固体として得た。

化合物４８：ｔｅｒｔ－ブチル－４－（２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート、の合成

ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（２．５Ｍ、２．９０ｍＬ、７．２０ｍｍｏｌ）を、－７８℃で、化合物ホスホニウム塩（２．１６ｇ、３．６０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６ｍＬ）の混合物に加えた。反応混合物を３０℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３７（４００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を－２０℃で混合物に加えた。混合物を－２０℃で３０分間撹拌し、次いで、３０℃に２時間温めた。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４８（２８ｍｇ、４％）を黄色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０５：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン）ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４６（８０ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で３０分間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で、ｐＨ＝８～９に塩基性化した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０５（３０ｍｇ、４６％）を黄色の固体として得た。

化合物４９：ｔｅｒｔ－ブチル－４－（２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物４８（２８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、およびＰｄ／Ｃ（１０％、５０ｍｇ）の、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）の混合物を、Ｈ_２（バルーン内）下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗化合物４９（２８ｍｇ、１００％）を黄色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４１１：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピペリジン－４－イル）エチル）ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物４９（２８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で３０分間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４１１（１０ｍｇ、４３％）を黄色の固体として得た。

化合物５０：ｔｅｒｔ－ブチル－４－（２－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート、の合成

ｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ（２．５Ｍ、０．７０ｍＬ、１．８０ｍｍｏｌ）液を、－７８℃で、ホスホニウム塩（５４０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を４０℃で１時間撹拌した。次いで、化合物３９（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に加え、次いで、４０℃に２時間温めた。反応を５回繰り返した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（８０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、粗化合物５０（３５ｍｇ、４％）を白色の固体として得た。

化合物５１：ｔｅｒｔ－ブチル－４－（２－（（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート、の合成

化合物５０（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１０％、４０ｍｇ）、およびＰｄ（ＯＨ）_２（２０％、４０ｍｇ）の、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）の混合物を、Ｈ_２（バルーン内）下、室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗化合物５１（３５ｍｇ、１００％）を褐色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４１２：（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（２－（ピペリジン－４－イル）エチル）テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７（２Ｈ）－オン、の合成

化合物５１（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１：２、２ｍＬ）の溶液を、室温で３０分間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈して、ｐＨ８～９に調整した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４１２（１３ｍｇ、４６％）を黄色の固体として得た。

化合物５２：ｔｅｒｔ－ブチル（（Ｅ）－５－（（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－７，１７－ジオキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）ペンチル）（メチル）カルバメート、の合成

Ｎ－Ｂｏｃ－Ｎ－メチル－５－トリフェニルホスホニウムペンテンアミンヨージド（４．２６ｇ、７．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）の混合物に、－７８℃で、ｎ－ＢｕＬｉ（３．１８ｍＬ、７．９５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合物を０℃で２０分間撹拌した。次いで、混合物を－３０℃に冷却した。次いで、化合物３７（８００ｍｇ、２．４１ｍｍｏｌ）を、反応混合物に加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏでクエンチし、濃縮した。残渣をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／２）により精製し、次いで、分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物５２（３６ｍｇ、２００ｍｇ）を無色の油として生成した。

ＣＶｉｅ４０１：（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，Ｅ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（５－（メチルアミノ）ペンチリデン）ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７，１７（２Ｈ，８Ｈ）－ジオン、の合成

化合物５２（６０ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の混合物を、室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を、濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮して、化合物ＣＶｉｅ４０１（３８ｍｇ、７９％）を黄色の油として得た。

化合物５３：ｔｅｒｔ－ブチル（５－（（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３（２Ｈ，４Ｈ，１０Ｈ）－イリデン）ペンチル）（メチル）カルバメート、の合成

Ｎ－Ｂｏｃ－Ｎ－メチル－５－トリフェニルホスホニウムペンテンアミンヨージド（４．３９ｇ、７．４５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）の混合物に、－７８℃で、ｎＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（４．４６ｍＬ、２．５Ｎ、１１．１６ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。次いで、混合物を０℃で２０分間撹拌した。混合物を－５０℃に冷却し、化合物３９（８３０ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＨ_２Ｏでクエンチし、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製し、次いで、分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物５３（８０ｍｇ、３００ｍｇ）を白色の固体として得た。

ＣＶｉｅ４０６：（６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－７－ヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチル－３－（５－（メチルアミノ）ペンチリデン）テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７（２Ｈ）－オン、の合成

化合物５３（８０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）のＴＦＡ／ＤＣＭ（１ｍＬ／２ｍＬ）の溶液を、室温で１０分間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で、ｐＨ＝８～９に塩基性化した。混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物ＣＶｉｅ４０６（６０ｍｇ、９４％）を黄色の固体として得た。

本発明は、以下の態様またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上において説明され得る。

態様１：式（Ｉ）

［式中、
Ｘは、カルボン酸、カルボン酸エステル、およびそれらの生物学的等価体（硫酸塩、スルホン酸、リン酸塩、ホスホネート、またはトリアゾールおよびテトラゾールなどの窒素含有エーテル環式環）、第一級アルコール、エーテル、またはアミン基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）のいずれかであり；
ｎは、１、２、３、４、または５であり；
Ｃ３－Ｃ１’の破線は、Ｃ３－Ｃ１’の位置にある任意選択の環外二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ２－Ｃ３の破線は、任意選択の環内二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ６にあるＹは、α配置またはβ配置のヒドロキシル（ＯＨ）、またはα配置のヒドロキシメチル（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｃ７にあるＺは、－Ｈ、または、α配置の－ＯＨ、またはケトンのいずれかであり、破線は、その位置にある任意選択のカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）を表す。］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物。

態様２：Ｘが、カルボン酸、カルボン酸エステル、一級アミン、第二級アミン、および環状アミンからなる群から選択される、態様１に記載の化合物。

態様３：Ｘが、カルボン酸、またはカルボン酸エステルである、態様１に記載の化合物。

態様４：Ｘが、第一級アミン、第二級アミン、および環状アミンではない、態様１に記載の化合物。

態様５：下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－（４－アミノブチル）－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；（ＥＺ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸；（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピロリジン－３イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－２－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン）－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；および、３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン、
からなる群から選択される、態様１に記載の化合物。

態様６：下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；および、４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸、
からなる群から選択される、態様１に記載の化合物。

態様７：４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸、および２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸、からなる群から選択される、態様１に記載の化合物。

態様８：薬学的に許容される塩が、塩化物塩、臭化物塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、メタン硫酸塩、および安息香酸塩から選択される、態様１～７のいずれか１つに記載の化合物。

態様９：少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルおよび／または賦形剤と組み合わせて、治療有効量の態様１～８のいずれか１つに記載の化合物のうちの１つ以上を含む、心不全の治療方法に使用するための医薬組成物。

態様１０：経腸投与、非経口投与、または吸入用に製剤化されている、態様９に記載の医薬組成物。

態様１１：経口投与用に製剤化されている、態様１０に記載の医薬組成物。

態様１２：約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様１１に記載の医薬組成物。

態様１３：静脈内注射用に製剤化されている、態様９に記載の医薬組成物。

態様１４：約０．１２５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様１３に記載の医薬組成物。

態様１５：筋肉内注射用に製剤化されている、態様９に記載の医薬組成物。

態様１６：約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様１５に記載の医薬組成物。

態様１７：少なくとも１日１回投与される、態様９～１６のいずれか１つに記載に記載の医薬組成物。

態様１８：１つ以上の追加の治療活性成分をさらに含む、態様９～１７のいずれか１つに記載に記載の医薬組成物。

態様１９：１つ以上の追加の治療活性成分が、ＡＣＥ阻害剤、ＡＩＲＢ、利尿剤、Ｃａ^２＋チャネル遮断薬、β遮断薬、ジギタリス、ＮＯドナー、血管拡張薬、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤、ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤、ミオシンフィラメント活性化剤、組換えリラキシン－２メディエーター、組換えＮＰタンパク質、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性化剤、およびアンジオテンシンＩＩ受容体のβ－アレスチンリガンド、からなる群から選択される、態様１８に記載の医薬組成物。

態様２０：利尿剤が、フロセミド、ブメタニド、トラセミド、メトラゾン、アルドステロンアンタゴニスト、チアジド利尿剤からなる群から選択される、態様１９に記載の医薬組成物。

態様２１：ＡＣＥ阻害剤が、リシノプリルまたはラミプリルである、態様１９に記載の医薬組成物。

態様２２：１つ以上の追加の治療活性成分が、バルサルタン、カンデサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、ロサルタン、サクビトリル、カルベジロール、オメカムチブ、およびメトプロロールからなる群から選択される、態様１８に記載の医薬組成物。

態様２３：医薬として使用するための、態様１～８のいずれか１つに記載の化合物。

態様２４：心不全の治療に使用するための、態様２３に記載の化合物。

態様２５：急性心不全の治療に使用するための、態様２４に記載の化合物。

態様２６：慢性心不全の治療に使用するための、態様２４に記載のの化合物。

態様２７：心不全を有する個体を治療する方法であって、該方法は、（１）心不全を有する個体を提供するステップ；（２）（ｉ）薬学的に許容される担体、および（ｉｉ）ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物を含む、治療有効量の医薬組成物を、個体に投与するステップ；および、（３）心臓機能の１つ以上のパラメーターを測定するステップ、を含み；ここで、医薬組成物の投与は、心臓機能の改善をもたらす、方法。

態様２８：ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤が、一般式（Ｉ）：

［式中、
Ｘは、カルボン酸、カルボン酸エステル、およびそれらの生物学的等価体（例えば、硫酸塩、スルホン酸、リン酸塩、ホスホネート、および、トリアゾールおよびテトラゾールなどの窒素含有エーテル環式環）、第一級アルコール、エーテル、またはアミン基（例えば、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミン）からなる群から選択され；
Ｙは、α－配置のヒドロキシル（ＯＨ）、β－配置のヒドロキシル（ＯＨ）、またはα－配置のヒドロキシメチル（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｚは、水素（Ｈ）、α－配置のヒドロキシル（ＯＨ）、およびケトン（Ｏ）からなる群から選択され；
ｎは、１～５であり；および、
点線は、任意選択の二重結合（Ｃ＝Ｃ）を表す。］
で示されるものである、態様２７に記載の方法。

態様２９：Ｘが、カルボン酸、カルボン酸エステル、第一級アミン、第二級アミン、および環状アミンからなる群から選択される、態様２８に記載の方法。

態様３０：Ｘが、カルボン酸またはカルボン酸エステルである、態様２８に記載の方法。

態様３１：Ｘが、第一級アミンでなく、第二級アミンでなく、および環状アミンでもない、態様２８に記載の方法。

態様３２：ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤が、下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－（４－アミノブチル）－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；（Ｅ，Ｚ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｅ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；（Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸；（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピロリジン－３イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－２－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン）－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；および、３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン、
からなる群から選択される、態様２８に記載の方法。

態様３３：ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤が、下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；および、４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸、
からなる群から選択される、態様２８に記載の方法。

態様３４：ほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤が、４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸、および２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸、からなる群から選択される、態様２８に記載の方法。

態様３５：薬学的に許容される塩が、塩化物塩、臭化物塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、メタン硫酸塩、および安息香酸塩から選択される、態様２８～３４のいずれか１つに記載の方法。

態様３６：医薬組成物が、経口投与される、態様２８～３５のいずれか１つに記載の方法。

態様３７：医薬組成物が、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様３６に記載の方法。

態様３８：医薬組成物が、静脈内投与される、態様２８～３５のいずれか１つに記載の方法。

態様３９：医薬組成物が、約０．１２５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様３８に記載の方法。

態様４０：医薬組成物が、筋肉内投与される、態様２８～３５のいずれか１つに記載の方法。

態様４１：医薬組成物が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約０．２５ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、態様４０に記載の方法。

態様４２：医薬組成物が、１つ以上の追加の治療活性成分を含む、態様２８～４１のいずれか１つに記載の方法。

態様４３：１つ以上の追加の治療活性成分が、ＡＣＥ阻害剤、ＡＩＲＢ、利尿剤、Ｃａ^２＋チャネル遮断薬、β遮断薬、ジギタリス、ＮＯドナー、血管拡張薬、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤、ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤、ミオシンフィラメント活性化剤、組換えリラキシン－２メディエーター、組換えＮＰタンパク質、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性化剤、およびアンジオテンシンＩＩ受容体のβ－アレスチンリガンド、からなる群から選択される、態様４２に記載の方法。

態様４４：利尿剤が、フロセミド、ブメタニド、トラセミド、メトラゾン、アルドステロンアンタゴニスト、チアジド利尿剤からなる群から選択される、態様４３に記載の方法。

態様４５：ＡＣＥ阻害剤が、リシノプリルまたはラミプリルである、態様４３に記載の方法。

態様４６：１つ以上の追加の治療活性成分が、バルサルタン、カンデサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、ロサルタン、サクビトリル、カルベジロール、オメカムチブ、およびメトプロロールからなる群から選択される、態様４２に記載の方法。

態様４７：個体がヒトである、態様２８～４６のいずれか１つに記載の方法。

態様４８：心臓機能の１つ以上のパラメーターが、Ｃａ^２＋トランジェント（ＣａＴ）振幅、Ｃａ^２＋誘導性Ｃａ^２＋放出（ＣＩＣＲ）、９０％再分極での活動電位持続時間の速度依存性（ＡＰＤ_９０）、拡張期膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）、最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）、心拍数、心臓圧力、収縮期血圧、拡張期血圧、ＬＶＥＦ、Ｅ／ｅ’比、Ｅ／Ｅａ比、Ｅ／Ａ比、および１回拍出量、からなる群から選択される、態様２８～４７のいずれか１つに記載の方法。

態様４９：測定ステップが、投与ステップの前、その間、および／または後に、実施される、態様２８～４８のいずれか１つに記載の方法。

以下の実施例により、本発明をさらに説明する。

実施例１：式（Ｉ）の化合物の製造
以下の実施例において、化合物、溶媒、反応物質、およびその他の任意の材料は、特に断りのない限り、商業的供給源からのものである。一般に、式（Ｉ）の化合物は、デヒドロエピアンドロステロン（プラステロン）から開始する多段階合成によって製造された。デヒドロエピアンドロステロン（dehydroepiandrosterone）は、市販品であるか、４－アンドロステン－３，１７－ジオン（アンドロステンジオン）から出発して、よく知られた方法に従って、製造することができる。

６－α－３，１７－アンドロスタンジオン（２）の合成に適した中間体は、ＤｅＭｕｎａｒｉら（J. Med. Chem., 2003, 46(17):3644-54）に記載（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）のように、ヒドロホウ素化とそれに続く酸化によって、デヒドロエピアンドロステロン１から製造した。簡単に説明すると、デヒドロエピアンドロステロン１（５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（８５ｍＬ）の溶液を、Ａｒ下、－２０℃で撹拌した。次いで、１ＭのＢＨ_３・ＴＨＦ複合体のＴＨＦ液を撹拌溶液（４４ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、２．５当量）に加え、撹拌を室温で３時間続けた。Ｈ_２Ｏ（８５ｍＬ）を慎重に滴下して加え、続いてＮａＢＯ_３・４Ｈ_２Ｏ（５．４ｇ、３５ｍｍｏｌ、２当量）を滴下して加えた。室温で一晩撹拌した後、混合物を濾過した。固体をＴＨＦで洗浄し、次いで、廃棄した。液体をＮａＣｌで飽和させ、ＴＨＦ（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を、ＮａＣｌおよびＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させた。５α－アンドロスタン－３β，６α，１７β－トリオール２の粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２／１、１０ｍＬ／ｇ）により結晶化して、白色の固体を得た（３．８ｇ、７０％）。

５α－アンドロスタン－３β，６α，１７β－トリオール２の分光データ

¹H NMR (DMSO-d6) δ 4.44 (m, 1H, OH), 4.42 (m, 1H, OH), 4.24 (d, 1H, OH), 3.42 (dt, 1H, 16-Ha), 3.26 (m, 1H, 3-H), 3.12 (m, 1H, 6-H), 0.72 (s, 3H, CH₃), 0.60 (s, 3H, CH₃). mp 232-234 ℃.

６α－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン３の分光データ

¹H NMR (acetone-d6) δ 3.61 (d, 1H, OH), 3.48 (m, 1H, 6-H), 1.11 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃). mp 204-206 ℃ lit. 206-207 (Hammerschmidt & Spiteller, 1973)

アドロスタン－３－メチレン－１７－オンの合成

アドロスタン－３－メチレン－１７－オン６の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.63 (dt, 2H, 3α-CH₂), 3.47 (td, 1H, 6-H), 2.55 (ddd, 1H, 16Ha), 2.44 (ddd, 1H, 16-Hb), 0.89 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.80 - 0.70 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 220.79 (17-C), 148.22 (3-C), 107.40 (3-CH₂), 69.85 (6-C), 13.79 (CH₃), 12.91 (CH₃).

ＣＶｉｅ２０１の分光データ

¹H NMR (Chloroform-d) δ 5.10 (t, J = 7.3 Hz, 1H, 3α-H), 3.50 (td, J = 10.3, 9.8, 6.0 Hz, 1H, 6-H), 2.91 (d, 1H, 16-Ha), 0.89 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.73 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.30 (17-C), 178.72 (CO₂), 139.71 (3-C), 119.89(3α-C), 69.95(6-C), 54.03 (5-C), 24.03 (16-C), 13.93(CH₃), 13.06(CH₃).

MS (ESI) C₂₃H₃₃O₄ ^-[M^-]で計算、計算値: 373,2.検出値: 373.4

ＣＶｉｅ２０２の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.10 (t, 1H, 3α -H), 3.50 (td, 1H, 6-H), 2.91 (d, 1H, 16-Ha), 0.89 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.73 (t, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 220.86 (17-C), 177.66 (CO₂), 139.84 (C-3), 119.47 (Ca), 70.08 (C-6), 13.78(CH₃), 12.91 (CH₃).

２つのジアステレオ異性体７および８の分光データ

¹H NMR (Chloroform-d) δ 5.16-4.96 (m, 1H, 3α-H), 3.66 (s, 3H, CH₃O), 3.47 (m, 1H, 6-OH), 0.89 (s, 3H,CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.74 (m, 1H, 5-H).

ルートＢ

化合物８の分光データ

¹H NMR (Chloroform-d) δ 5.07 (t, 1H, 3α-H), 4.10 (q, 2H, OCH₂), 3.47 (td, 1H, 6-H), 2.91 (d, 1H), 0.88 (s, 3H, CH₃), 0.85 (s, 3H, CH₃), 0.71 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 173.67 (17-C), 139.60 (3α-C), 119.94(3-C), 69.98 (6-C), 60.41 (OCH₂), 51.33 (5-C), 40.37 (CH₃), 13.92 (CH₃), 13.08 (CH₃).

¹H NMR (Chloroform-d) δ 5.12 (bt, 1H, 3α-H), 3.51-3.42 (m, 1H, 6-H), 0.90 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.79-0.69 (m, 1H, 5-H).

３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６α－オール９の分光データ

¹H NMR (DMSO-d6) δ4.25 (d, 1H, OH), 3.88-3.70 (m, 8H, OCH₂), 3.11 (m, 1H, 6-H), 0.74 (s, 3H, CH₃), 0.73 (s, 3H, CH₃).

３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６－オン１０の分光データ

¹H NMR (Acetone-d6) δ 3.97-3.76 (m, 8H, CH₂O), 2.19 (dd, 1H, 16-Ha), 0.84 (s, 3H, CH₃), 0.75 (s, 3H, CH₃).

３，３：１７，１７－ビス（エチレンジオキシ）アンドロスタン－６β－オール１１の分光データ

¹H NMR (acetone-d6) δ 3.95-3.75 (m, 8H, OCH₂), 3.70 (m, 1H, 6-H), 3.33 (d, 1H, 6-OH), 1.05 (s, 3H, CH₃), 0.84 (s, 3H, CH₃).

６β－ヒドロキシアンドロスタン－３，１７－ジオン１２の分光データ

¹H NMR (DMSO-d6) δ 4.47 (d, 1H, OH), 3.57 (m, 1H, 6-H), 1.13 (s, 3H, CH₃), 0.81 (s, 3H, CH₃).

１２の最終的なＣＶｉｅ２０３および２０４への変換

化合物１３の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.07 (bs, 1H, 3α-H), 3.85 (d, 1H, 6-H), 3.66 (s, 3H, OCH₃), 2.54 - 2.39 (m,2H, 3γ-H), 1.10 (s, 3H, CH₃), 0.89 (s, 3H,CH₃), 0.80 - 0.69 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 219.74 (17-C), 167.24 (CO₂), 140.38 (3-C), 119.60 (3α-C), 71.52 (6-C), 54.45 (5-C), 51.22 (OCH₃), 14.09 (CH₃), 13.86 (CH₃).

化合物１４の分光データ

1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.07 (s, 1H, 3α-H), 3.89 (d, 1H, 6-H), 3.66 (s, 3H, OCH₃), 2.46 (dd, 1H, 16-Ha), 1.10 (s, 3H, CH₃), 0.89 (s, 3H, CH₃), 0.79 - 0.64 (m, 1H, 5-H).

13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.21 (17-C), 176.10 (CO₂), 140.33 (3-C), 119.39 (3α-C), 71.75 (6-C), 54.49 (5-C), 51.20 (OCH₃) 15.24 (CH₃), 13.87 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２０３の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Acetone-d₆) δ 4.84 (bt, 1H, 3α-H), 3.55 (d, 1H, 6-H), 0.90 (s, 3H, CH₃), 0.61 (s, 3H, CH₃), 0.51 (ddd, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, acetone-d₆) δ 218.86 (17-C), 173.42(CO₂), 140.74 (3-C), 119.29(3α-C), 70.18 (6-C), 14.74 (CH₃), 13.18 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２０４の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.07 (s, 1H, 3α-H), 3.88 (s, 1H, 6-H), 1.08 (s, 3H, CH₃), 0.88 (s, 3H, CH₃), 0.72 (s, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, acetone) δ 216.39 (17-C), 173.80 (CO₂), 135.48(3-C), 113.80 (3α-C), 66.52 (6-C), 10.07 (CH₃), 8.70 (CH₃).

化合物１９の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.83 (bs, 1H, 6-H), 3.66 (bs, 3H, OCH₃), 2.44 (dd, 1H, 16-Ha), 2.28 (t, 2H, 3γ-H), 0.99 (s, 3H, CH₃), 0.88 (s, 3H, CH₃), 0.79 - 0.70 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.43 (17-C), 174.25 (CO₂), 71.96 (6-C), 51.25 (OCH₃), 15.74 (CH₃), 13.86(CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１４の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.43 (bt, 1H, 6-H), 2.44 (dd, 1H, 16Ha), 2.31 (t, 2H, 3γ-H), 0.84 (s, 3H, CH₃), 0.77 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.35 (17-C), 179.11 (CO₂), 69.90 (6-C), 13.78 (CH₃), 13.37(CH₃)

化合物ＣＶｉｅ２１５の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.85 (s, 1H, 6-H), 2.45 (dd, 1H, 16-Ha), 2.34 (t, 2H, 3γ-H), 1.00 (s, 3H, CH₃), 0.89 (s, 3H, CH₃), 0.74 (d, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.50 (17-C), 179.04 (CO₂H), 72.03 (6-C), 15.76 (CH₃), 13.87 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１７の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.09 (q, 2H, CH₂O), 3.40 (td, 1H, 6-H), 2.49 - 2.36 (dd, 1H, 16-Ha), 2.24 (t, 2H, 3δ-H), 0.83 (s, 3H, CH₃), 0.76 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 220.91 (17-C), 173.77 (CO₂), 69.63 (6-C), 60.14 (CH₂O), 14.23 (CH₃), 13.76 (CH₃), 13.36 (CH₃).

ジアステレオ異性体化合物２１の分光データ

¹H NMR (Chloroform-d) δ 5.60 (d,Hz, 1H, 3α-H), 4.08 (q, 2H, CH₂O), 3.45 (dq,1H, 6-H), 2.41 (dd, 1H, 16-Ha), 0.90 (s, 3H, CH₃), 0.82 (s, 3H, CH₃), 0.77-0.66 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 220.85 (17-C), 166.81 (CO₂), 161.87 (3-C), 113.75 (3α-C), 69.41 (6-C), 13.76 (CH₃), 13.00 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１３の分光データ

¹H NMR (Chloroform-d) δ 4.12 (q, 2H, OCH₂), 3.38 (td, 1H, 6-H), 2.42 (dd, 1H, 16-Ha), 2.27 (t, 2H, 3α-CH₂), 0.82 (s, 3H, CH₃), 0.76 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.03 (17-C), 172.93 (CO₂), 69.43 (6-C), 13.76 (CH₃), 13.32(CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１６の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.43 (td, 1H, 6-H), 2.45 (dd, 1H, 16-Ha), 2.28 (t, 3α-H), 0.85 (s, 3H, CH₃), 0.80 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, acetone) δ 220.44 (17-C), 174.27 (CO₂), 68.57 (6-C), 12.99 (CH₃), 12.59 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１８の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 4.15 - 4.05 (m, 2H, OCH₂), 3.40 (td, 1H, 6-H), 2.43 (dd, 1H, 16-Ha), 2.26 (td, 2H, 3ε-H), 0.84 (s, 3H, CH₃), 0.76 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 220.91 (17-C), 173.87 (CO₂), 69.81 (6-C), 60.14 (CH₂O), 14.24 (CH₃), 13.79 (CH₃), 13.39 (CH₃).

化合物ＣＶｉｅ２１９の分光データ

¹H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 3.47 - 3.39 (bt, 1H, 6-H), 2.44 (dd, 1H, 17-Ha), 2.33 (t, 2H, 3ε-H), 0.85 (s, 3H, CH₃), 0.77 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 221.06 (17-C), 178.93 (CO₂), 69.91 (6-C), 13.80 (CH₃), 13.39 (CH₃).

ジアステレオ異性体混合物２５の分光データ

1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.18 - 5.03 (m, 1H, 3α -H), 3.46 (td, 1H, 6-H), 1.44 (s, 9H, t-Bu), 0.90 (d, J = 1.8 Hz, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.74 (m, 1H, 5-H).

ＣＶｉｅ２０９の分光データ

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 5.13 (d, 1H, 3α-H), 3.40 (tt, 1H, 6-H), 3.35 - 3.28 (m, 2H, 3γ-H), 0.96 (s, 3H, CH₃), 0.87 (s, 3H, CH₃), 0.83 - 0.70 (m, 1H, 5-H).

¹³C NMR (101 MHz, CD₃OD) δ 224.41 (17-C), 143.00 (3A-C), 142.68 (3αB-C), 124.31 (3αA-C), 124.02 (3αB-C), 72.75 (C-6), 16.70 (CH₃), 15.78 (CH₃).

ＣＶｉｅ２０７の分光データ

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 5.36 (d, 1H, H-2), 3.44 (td, 1H, 6-H), 2.94 (t, 2H, 3γ-H), 2.45 (dd, 1H, 16-Ha), 0.88 (s, 3H, CH₃), 0.79 (s, 3H, CH₃).

¹³C NMR (101 MHz, CD₃OD) δ 222.35 (17-C), 134.89 (3-C), 119.69 (2-C), 70.31 (6-H), 12.75 (CH₃), 12.07 (CH₃).

（７Ｓ，２０Ｓ）－７，２０－ジメチルジスピロ［１，３－ジオキソラン－２，５’－テトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－１４’，２’’－１，３－ジオキソラン］－１４－オン３４、の分光データ

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 3.85-3.75 (m, 8H), 2.44-2.35 (m, 2H), 2.08-2.03 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 2H), 1.70-1.49 (m, 8H), 1.41-1.28 (m, 4H), 1.17-1.10 (m, 2H), 1.03 (s, 3H), 1.00-0.97 (m, 1H), 0.76 (s, 3H).

（６Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－１０，１３－ジメチルデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，７，１７（２Ｈ，４Ｈ，８Ｈ）－トリオン３７の分光データ

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 4.14 (t, 1H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.50-3.47 (m, 1H), 2.74-2.69 (m, 1H), 2.42-2.27 (m, 5H), 2.15-1.93 (m, 3H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.68-1.59 (m, 3H), 1.54-1.44 (m, 2H), 1.32-1.06 (m, 7H), 0.81 (s, 3H).

LCMS [移動相: 55%水(0.05% FA)および45% CH₃CN (0.05% FA)から、55%水(0.05% FA)および45% CH₃CN (0.05% FA)まで6.0 min, 最終的にこれらの条件を0.5 min], 純度は>90%, Rt = 2.514 min; MS計算値: 332.2; MS検出値: 333.2 [M+1]⁺.

（８Ｓ，９Ｓ，１５Ｓ，２Ｒ）－９－ヒドロキシ－８－（ヒドロキシメチル）－２，１５－ジメチルテトラシクロ［８．７．０．０＜２，７＞．０＜１１，１５＞］ヘプタデカン－５，１４－ジオン３９、の分光データ

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ4.37 (brs, 1H), 4.27 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.87-3.86 (m, 1H), 3.44-3.42 (m, 2H), 2.45-1.87 (m, 10H), 1.63-1.23 (m, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.81 (s, 3H).

LCMS [移動相: 55%水(0.05% FA)および45% CH₃CN (0.05% FA)から、55%水(0.05% FA)および45% CH₃CN (0.05% FA)まで6.0 min, 最終的にこれらの条件を0.5 min], 純度は>90%, Rt = 2.515 min; MS計算値: 334.2; MS検出値: 352.2 [M+18]⁺.

化合物４０のデータ：

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikwa Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 1.820 min; MS計算値: 499, MS検出値: 400 [M+H-Boc]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm,; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 1.911 min; MS計算値: 501, MS検出値: 402 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０７の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz):δ 3.86-3.82 (m, 2H), 3.71-3.67 (m, 1H), 3.54-3.47 (m, 2H), 2.78-2.67 (m, 2H), 2.56-2.39 (m, 3H), 2.15-2.06 (m, 1H), 1.85-1.50 (m, 12H), 1.21-1.14 (m, 9H), 1.07-1.01 (m, 2H), 0.88 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム: C18;カラムサイズ:4.6*50 mm; 移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 3.114 min; MS計算値:401, MS検出値: 402 [M+H]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikwa Diamonsil plus; 移動相: B (ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 1.945 min; MS計算値: 501, MS検出値: 402 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０３の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz):δ 5.00-4.96 (m, 1H), 3.92-3.81 (m, 3H), 3.66-3.62 (m, 1H), 3.54-3.52 (m, 2H), 2.77-2.73 (m, 1H), 2.67-2.61 (m, 2H), 2.49-2.43 (m, 2H), 2.38-2.29 (m, 2H), 2.23-2.18 (m, 2H), 2.06-1.96 (m, 2H), 1.83-1.76 (m, 2H), 1.71-1.61 (m, 3H), 1.51-1.35 (m, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.12-1.05 (m, 2H), 0.98-0.90 (m, 1H), 0.80 (s, 3H).

LCMSカラム: Rt = 3.964 min; MS計算値:399, MS検出値: 400 [M+H]+.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm,; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 1.978 min; MS計算値:503, MS検出値: 404 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０８の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 4.08 (s, 1H), 3.84 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.77-3.68 (m, 2H), 3.52-3.48 (m, 2H), 2.81-2.73 (m, 1H), 2.52-2.44 (m, 1H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.86-1.71 (m, 4H), 1.69-1.59 (m, 6H), 1.52-1.43 (m, 2H), 1.39-1.30 (m, 4H), 1.24-1.15 (m, 4H), 1.12-1.04 (m, 1H), 0.95-0.92 (m, 1H), 0.90(s, 3H), 0.87 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム: C18;カラムサイズ:4.6*50 mm ;移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 3.078 min; MS計算値:403, MS検出値: 404 [M+H]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 2.017 min; MS計算値: 513, MS検出値: 414 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０２の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 5.08-5.05 (m, 1H), 3.88-3.82 (m, 1H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.12-3.02 (m, 2H), 2.99-2.92 (m, 1H), 2.66-2.55 (m, 3H), 2.48-2.42 (m, 2H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.23-2.19 (m, 1H), 2.15-2.04 (m, 2H), 2.03-1.91 (m, 4H), 1.83-1.78 (m, 2H), 1.75-1.61 (m, 3H), 1.51-1.34 (m, 4H), 1.19-1.17 (m, 3H), 1.12-1.03 (m, 2H), 0.97-0.90 (m, 1H), 0.80 (s, 3H).

LCMSカラム: Rt = 3.060 min; MS計算値:413, MS検出値: 414[M+H]+.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 1.984 min; MS計算値: 515, MS検出値: 416 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０９の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz):δ 3.87-3.82 (m, 1H), 3.70-3.64 (m, 1H), 3.28-3.24 (m, 1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.11-3.04 (m, 1H), 2.72-2.62 (m, 2H), 2.57-2.51 (m, 1H), 2.47-2.39 (m, 2H), 2.17-2.05 (m, 3H), 1.85-1.70 (m, 5H), 1.66-1.49 (m, 8H), 1.38-1.34 (m, 2H), 1.25-1.19 (m, 6H), 1.14-1.10 (m, 2H), 0.88 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム:C18; カラムサイズ: 4.6*50 mm; 移動相: B(ACN) ： A(0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 3.180 min; MS計算値:415, MS検出値: 416 [M+H]⁺

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 2.000 min; MS計算値:515, MS検出値: 416 [M+H-Boc]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B (ACN) ： A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt =2.059 min; MS計算値:517, MS検出値: 418 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４１０の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 3.95 (s, 1H), 3.64-3.57 (m, 2H), 3.12-3.07 (m, 1H), 3.04-2.96 (m, 1H), 2.93-2.89 (m, 1H), 2.48-2.44 (m, 1H), 2.38-2.32 (m, 1H), 2.05-1.93 (m, 4H), 1.69-1.57 (m, 5H), 1.55-1.46 (m, 4H), 1.37-1.33 (m, 4H), 1.25-1.18 (m, 5H), 1.08-0.90 (m, 3H), 0.82-0.80 (m, 1H), 0.77 (s, 3H), 0.75 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム: C18;カラムサイズ:4.6*50 mm ; 移動相: B(ACN) ： A(0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 3.139 min; MS計算値:417, MS検出値: 418 [M+H]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B (ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-30-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 2.013 min; MS計算値: 527, MS検出値: 428 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４０５の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 5.14 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.88-3.80 (m, 1H), 3.74-3.66 (m, 1H), 3.09-3.06 (m, 2H), 2.67-2.49 (m, 6H), 2.45-2.38 (m, 1H), 2.33-2.26 (m, 1H), 2.19-2.04 (m, 2H), 2.01-1.83(m, 3H), 1.80-1.69 (m, 6H), 1.61-1.47 (m, 2H), 1.45-1.34 (m, 2H), 1.30-1.25 (m, 5H), 1.19-1.08(m, 4H), 1.04-0.90 (m, 1H), 0.88 (s, 3H).

LCMSカラム: Rt = 3.219 min; MS計算値:427, MS検出値: 428 [M+H]+.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm,; Dikwa Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins.Rt = 2.109 min; MS計算値:529, MS検出値: 430 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４１１の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 3.85-3.81 (m, 1H), 3.71-3.66 (m, 1H), 3.07-3.04 (m, 2H), 2.69 (t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.63-2.51 (m, 3H), 2.48-2.39 (m, 2H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.84-1.72 (m, 7H), 1.63-1.46 (m, 4H), 1.37-1.33 (m, 6H), 1.28-1.14 (m, 7H), 1.09-0.98 (m, 3H), 0.88 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム:C18; カラムサイズ:4.6*50 mm; 移動相: B (ACN) : A (0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 4.188 min; MS計算値:429, MS検出値: 430 [M+H]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 2.104 min; MS計算値: 529, MS検出値: 430 [M+H-Boc]⁺.

LCMSカラム: C18; カラムサイズ: 4.6*30 mm 5 μm; Dikma Diamonsil plus; 移動相: B(ACN)：A (0.02%NH₄Ac+5%ACN); グラジエント(B%)は3 min-5-95-POS; 流量1.5 mL/min, 停止時間3mins. Rt = 2.126 min; MS計算値:531, MS検出値: 432 [M+H-Boc]⁺.

ＣＶｉｅ４１２の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): δ 4.04 (s, 1H), 3.72-3.61 (m, 2H), 3.09-3.06 (m, 2H), 2.63 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.13-2.03 (m, 2H), 1.75-1.66 (m, 5H), 1.63-1.55 (m, 5H), 1.45-1.35 (m, 3H), 1.31-1.17 (m, 10H), 1.10-1.03 (m, 2H), 0.89 (s, 1H), 0.87 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).

LCMSカラム:カラム: C18; カラムサイズ:4.6*50 mm; 移動相: B(ACN) ： A (0.02%NH4Ac); グラジエント(B%)は6.5 min-5-95-POS; Rt = 3.203 min; MS計算値:431, MS検出値: 432 [M+H]⁺.

化合物５２の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): 5.16-5.12 (m, 1H), 3.89-3.85 (m, 1H), 3.77-3.73 (m, 1H), 3.22-3.19 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.75-2.60 (m, 2H), 2.60-2.50 (m, 2H), 2.46-2.41 (m, 1H), 2.33-2.27 (m, 1H), 2.15-2.02 (m, 4H), 1.90-1.79 (m, 2H), 1.77-1.71 (m, 3H), 1.60-1.52 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.45-1.42 (m, 1H), 1.34-1.29 (m, 2H), 1.26 (s, 3H), 1.24-1.21 (m, 1H), 1.19-1.05 (m, 2H), 1.05-0.99 (m, 1H).

ＣＶｉｅ４０１の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): 5.36 (s, 1H), 3.89-3.86 (m, 1H), 3.71-3.67 (m, 1H), 2.80-2.77 (m, 2H), 2.73-2.67 (m, 1H), 2.55-2.39 (m, 6H), 2.15-2.01 (m, 4H),1.92-1.85 (m, 1H),1.77-1.69 (m, 4H), 1.65-1.45 (m, 7H), 1.38-1.25 (m, 6H), 1.19 (s, 3H), 0.89 (s, 4H).

LCMS: Rt = 2.128 min, [M+1]⁺ = 416.

化合物５３の分光データ

¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz): 5.10-5.08 (m, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.23-3.20 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.56-2.53 (m, 1H), 2.48-2.41 (m, 1H), 2.12-2.10 (m, 1H), 2.07-2.00 (m, 5H), 1.85-1.81 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 10H), 1.49 (s, 9H), 1.39-1.30 (m, 4H), 1.21-1.18 (m, 1H), 1.08-1.04 (m, 1H), 0.96 (s, 3H), 0.88 (s, 3H).

LCMSカラム: Rt = 0.370 min;MS計算値:417, MS検出値: 418[M+H]⁺.

実施例２．生物活性を測定するための一般的な手法
動物の管理例
調査は、国立衛生研究所によって発行された実験動物の管理と使用のガイド（ＮＩＨ発行番号Ｎｏ．８５－２３、１９９６年改訂）、および参加機関によって承認された動物管理のガイドラインに従っている。

単離した左心室心筋細胞における測定
化合物は、酵素溶液による逆行性冠動脈灌流法によって、ラットおよびモルモットのそれぞれの心室から新たに分離された筋細胞において、（ｉ）ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込み機能、および、（ｉｉ）活動電位（ＡＰ）に対するその効果について、特性を調べた（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exper Therap 2005, 313(1):207-215）。

統計分析
動物全体の実験：データは平均±ＳＤとして報告されている。統計分析は、スチューデントのｔ検定（対応のあるｔ検定）によって実施した。

単離した筋細胞の実験：データは平均±ＳＥとして報告されている。複数の平均を含む曲線は、繰り返し測定のために二元配置分散分析によって比較され、全体的な曲線の急勾配における薬物誘発性の変化は、「第Ｘ因子の群」の相互作用の有意性に従って、定義された。Ｃａ^２＋減衰の単一指数関数的適合が不十分なため、ＣａＴデータが報告されているいくつかの細胞では、τ_{ｄｅｃａｙ}は推定されず、対応する図においてサンプルサイズ（Ｎ）が報告されている。平均ＡＰＤに対するＳＴＶの依存性は、線形回帰によって定量化された。Ｐ＜０．０５は、すべての比較で統計的に有意であるとみなした。

実施例３．式（Ｉ）の化合物のインビトロスクリーニング
イヌ腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ活性の阻害
本明細書に記載されているように、本発明の化合物は、純粋またはほぼ純粋なＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤である。そのため、これらの化合物は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅの酵素活性の阻害をほとんどまたはまったく示さないものである。したがって、これらの化合物について、イヌの腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ酵素に対するその阻害効果について試験した。

腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅの精製は、Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ（Methods Enzymol. 1988, 156:29-43）により記載された方法に従って実施した。１～３年齢のオスのビーグル犬（WuXi AppTec, Suzhou Co., Ltd. 1318 Wuzhong Ave., Wuzhong District Suzhou, 215104 P.R. China）から、ペントバルビタール麻酔（イタリア保健省からの輸入許可０００９１７１－０９／０４／２０１５－ＤＧＳＡＦ－ＣＯＤ＿ＵＯ－Ｐ、２０１５）の下、腎臓を切除した。腎臓をスライスし、髄質外層を解剖し、２５０ｍＭのスクロース、３０ｍＭのヒスチジン、および５ｍＭのＥＤＴＡを含んだ、ｐＨ７．２の、スクロース－ヒスチジン溶液に懸濁した（１ｇ／１０ｍｌ）。ＵｌｔｒａＴｕｒｒａｘホモジナイザーを使用して、組織をホモジナイズした。サンプルを、６，０００ｇで１５分間、遠心分離した。次いで、上澄みをデカントし、４８，０００ｇで３０分間、遠心分離した。ペレットを、スクロース－ヒスチジンバッファーに懸濁し、２５ｍＭのイミダゾールおよび１ｍＭのＥＤＴＡを含んだｐＨ７．５のグラジエントバッファーに溶解された、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の溶液で、２０分間インキュベートした。サンプルを、スクロースの不連続グラジエント（１０、１５、および２９．４％）の上に、層として重ね、６０，０００ｇで１１５分間、遠心分離した。ペレットを、グラジエント緩衝液に懸濁した。

Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ活性は、文献（Ferrandi M. et al., Hypertension 1996, 28:1018-25）に記載されているように、^３２Ｐ－ＡＴＰからの^３２Ｐの放出を測定することによって、インビトロでアッセイした。標準品ウアバインまたは試験化合物の濃度を上げながら、０．３μｇの精製されたイヌ腎臓酵素とともに、３７℃で１０分間、最終容量１２０μｌの、１４０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＭｇＣｌ_２、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ－Ｔｒｉｓ、３ｍＭのＡＴＰを含んだ、ｐＨ７．５の培地で、インキュベートした。次いで、１０ｍＭのＫＣｌおよび２０ｎＣｉの^３２Ｐ－ＡＴＰ（３～１０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を含む、１０μｌの溶液を加えた。反応を３７℃で１５分間続け、次いで、２０％ｖ／ｖの氷冷過塩素酸で酸性化することにより停止させた。活性炭（ＮｏｒｉｔＡ、Ｓｅｒｖａ）を用いた遠心分離により、^３２Ｐを分離し、放射活性をカウントした。阻害活性は、ウアバインまたは試験化合物の非存在下で実施した、対照サンプルのパーセントとして、表した。Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ活性の５０％阻害を引き起こす化合物の濃度（ＩＣ_５０）は、複数パラメーターの非線形回帰最適化プログラム（ＫａｌｅｉｄａｇｒａｐｈＴＭ、ＳｉｎｅｒｇｙＳｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、計算した。

化合物ＣＶｉｅ２０１、ＣＶｉｅ２０２、ＣＶｉｅ２０３、ＣＶｉｅ２０４、ＣＶｉｅ２１３、ＣＶｉｅ２１４、ＣＶｉｅ２１５、ＣＶｉｅ２１６、ＣＶｉｅ２１７、ＣＶｉｅ２１８、およびＣＶｉｅ２１９は、表１に示すように、精製Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅの酵素活性を阻害せず、そして、ＩＣ_５０は、μＭで表して、＞１００μＭであった。化合物ＣＶｉｅ２０５、Ｃｖｉｅ２０６、ＣＶｉｅ２０７、ＣＶｉｅ２０８、ＣＶｉｅ２０９、ＣＶｉｅ２１０、ＣＶｉｅ２１１、ＣＶｉｅ２１２、ＣＶｉｅ４０１、ＣＶｉｅ４０２、ＣＶｉｅ４０３、ＣＶｉｅ４０４、ＣＶｉｅ４０５、ＣＶｉｅ４０６、ＣＶｉｅ４０７、ＣＶｉｅ４０８、ＣＶｉｅ４０９、ＣＶｉｅ４１０、ＣＶｉｅ４１１、およびＣＶｉｅ４１２は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅを、おだやかに阻害しただけであった（ＩＣ_５０の範囲は０．８～２４μＭ）（表１）。

化合物は、参照薬剤であるジゴキシン（ＩＣ_５０、０．１８μＭ）およびイスタロキシム（ＩＣ_５０、０．１４μＭ）と比較されている（表１）。

表１．イヌ腎臓のＮａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅ阻害

正常なモルモットの心臓由来のＳＲミクロソームにおける、ＳＥＲＣＡ２ａＡＴＰａｓｅ活性
本明細書に開示の化合物について、また、１～２００ｎＭの濃度範囲において、正常なモルモット心臓組織に由来するＳＲミクロソームにおけるＳＥＲＣＡ２ａ活性を刺激する能力を試験した。心臓ＳＥＲＣＡ２ａミクロソームの調製には、２ヶ月齢のモルモット（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｕｄｉｎｅ、イタリア、３５０～４５０ｇ）を使用した。モルモットを、ペントバルビタール麻酔下で屠殺した。左心室（ＬＶ）をすばやく解剖し、すぐに液体窒素で凍結した。ＬＶ組織を、ＮｅｄｉａｎｉＣ．ら（J Biol Chem. 1996, 271:19066-7）によって記載された方法に従って処理した。組織を、１０ｍＭのＮａＨＣＯ_３、ｐＨ７、１ｍＭのＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌのアプロチニンおよびロイペプチンを含む４倍量のバッファーに懸濁し、ＵｌｔｒａＴｕｒｒａｘホモジナイザーを用いていホモジナイズした。サンプルを、１２，０００ｇで１５分間、遠心分離した。得られた上清を、濾過し、１００，０００ｇで３０分間、遠心分離した。ペレットを、０．６ＭのＫＣｌ、３０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ７、で懸濁し、さらに、１００，０００ｇで３０分間、遠心分離することにより、収縮性タンパク質を抽出した。最終ペレットを、０．３Ｍのスクロース、３０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ７、で再構成し、使用するまで－８０℃で、アリコートで保存した。

ＳＥＲＣＡ２ａ活性を、文献（Micheletti R. et al., Am J Card 2007, 99:24A-32A）に記載されているようにして、試験化合物の非存在下および存在下で、さまざまなＣａ^２＋濃度（１００～４０００ｎＭ）で、^３２Ｐ－ＡＴＰ加水分解として、インビトロで測定した。各化合物の濃度を上げて（１～２００ｎＭの範囲）、１００ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１μＭのＡ２３１８７、２０ｍＭのＴｒｉｓを含む、ｐＨ７．５の溶液８０μｌ中で、２μｇのＳＥＲＣＡ２ａ濃縮ミクロソームと、４℃で５分間、プレインキュベートした。次いで、５０ｎＣｉの^３２Ｐ－ＡＴＰ（３～１０Ｃｉ／ｍｍｏｌ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を含む５ｍＭのＴｒｉｓ－ＡＴＰを２０μｌ添加した。ＡＴＰ加水分解を、３７℃で１５分間継続し、１００μｌの２０％ｖ／ｖ氷冷過塩素酸で酸性化することにより、反応を停止させた。活性炭（ＮｏｒｉｔＡ、ＳＥＲＶＡ）を用いた遠心分離により、^３２Ｐを分離し、放射活性を測定した。ＳＥＲＣＡ２ａ依存性活性は、１０μＭのシクロピアゾン酸によって阻害される総加水分解活性の一部として同定された（Seidler NW et al., J Biol Chem. 1989, 264:17816-23）。

用量反応曲線は、シグモイド方程式を用いて適合され、最大速度（Ｖｍａｘ）での活性、およびＣａ^２＋についてのＫｄを計算した（ＳｙｎｅｒｇｙＳｏｆｔｗａｒｅＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ３．６）。正常なモルモットの検体における化合物の効果は、化合物の非存在下で実施された対照サンプルのＫｄ－Ｃａ^２＋の％減少（Ｃａ^２＋に対する親和性の増加を意味する）として表した（表２）。この効果は、化合物が生理学的範囲のＣａ^２＋濃度で、ＳＥＲＣＡ２ａ活性を増加させることを示している（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther. 2005, 313:207-15; Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther. 2008, 326:957-65; Ferrandi M et al., Br J Pharmacol 2013, 169:1849-1861）。データは、平均±ＳＤ、ｎ＝実験数、＊は少なくともｐ＜０．０５、である。

ナノモル濃度で、試験化合物は、モルモット心臓検体からのミクロソームにおけるＣａ^２＋用量反応曲線のＳＥＲＣＡ２ａ－Ｋｄ－Ｃａ^２＋を減少させた（表２）。これらの結果は、化合物が、生理学的範囲のＣａ^２＋濃度でＳＥＲＣＡ２ａ活性を増加させ、変弛緩作用を示唆することを示した。イスタロキシムは、ＳＥＲＣＡ２ａを刺激する能力を示す比較物質として使用している（表２）。これとは異なり、ジゴキシンは、ＳＥＲＣＡ２ａ活性を刺激できなかった（Ferrandi M et al., Br J Pharmacol 2013, 169:1849-61; Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther 2005, 313:207-215）。

表２．正常なモルモットの心臓由来のＳＲミクロソームにおける、ＳＥＲＣＡ２ａ－Ｋｄ－Ｃａ^２＋に対する試験化合物の効果

実施例４．単離された心室筋細胞における、ＣＶｉｅ２１４およびＣＶｉｅ２１６に関する研究
ラット心室筋細胞におけるＳＲ－Ｃａ^２＋取り込み機能
拡張機能障害のモデルにおける化合物の効果を試験するために、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ、５０ｍｇ／ｋｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）の単回尾静脈注射によって、オスのＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（１５０～１７５ｇ）を、糖尿病にした。ＳＴＺは、ｐＨ４．５の０．１Ｍクエン酸ナトリウムバッファーで新たに調製した。空腹時血糖を１週間後に測定し、値が＞３００ｍｇ／ｄｌのラットが糖尿病とみなされた。ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込み機能に対する薬物効果を、ＳＴＺ注射の９週間後に、単離した左心室筋細胞で評価した。筋細胞を、その細胞膜透過を確実にするために、特定の薬物の存在下で、少なくとも３０分間、インキュベートした。統計分析は、「グループ比較」モデルによって実施した。

ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込み速度に対する薬物の影響は、Ｎａ／Ｃａ交換体（ＮＣＸ）の寄与を除外し、低レベルのＳＲ－Ｃａ^２＋負荷から始まる取り込み速度を評価するために、特別に考案された、ＳＲ「ローディングプロトコル」で評価した。電位固定条件下、細胞内Ｃａ^２＋濃度を、落射蛍光（Ｆｌｕｏ４－ＡＭ）によって、動的に測定した。時間依存成分が主にＩ_ＣａＬを反映するものである膜電流を、同時に記録した。ＳＲローディングプロトコルは、短いカフェインパルスによってＳＲを空にし、次いで、筋線維鞘のＣａ^２＋チャネル（Ｉ_ＣａＬ）を介したＣａ^２＋流入を活性化する電圧ステップによってＳＲを徐々に補充することにより、構成されていた。ＮＣＸは、細胞内および細胞外の溶液からのＮａ^＋の省略によってブロックされていた。手法は公開されている方法と一致しているが、わずかな変更が加えられている（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exper Therap 2005, 313:207-215）。

ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込みに対する薬物の効果は、複数のパラメーター：１）Ｃａ^２＋トランジェント（ＣａＴ）振幅の速度、および、２）Ｃａ^２＋誘導Ｃａ^２＋放出（ＣＩＣＲ）ゲインがローディングプロトコル中に増加する速度（これはＳＲの補充速度と系のゲインが反映される）、および、３）各パルス内の細胞質ゾルＣａ^２＋減衰時間定数（τ_{ｄｅｃａｙ}）（これはＳＲ膜を通過する正味のＣａ^２＋輸送速度（ＳＥＲＣＡ２ａによる）が反映される）（τ_{ｄｅｃａｙ}の減少は強化されたＳＲ－Ｃａ^２＋取り込みに対応する）、を考慮して分析した。

ＳＥＲＣＡ２ａ活性化の検出における「ローディングプロトコル」の特異性は、Ｎａ^＋／Ｋ^＋ＡＴＰａｓｅポンプをブロックする変力剤であるが、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激作用がない、ジゴキシンの効果を検出しなかった、という観察によって、裏付けられた（Rocchetti M et al., J Pharmacol Exp Ther 2005, 313:207-215; Alemanni M et al., JMCC 2011, 50:910-918）。

ＣＶｉｅ２１６（１μＭ）は、ＳＲリロード中のＣａ^２＋トランジェント（ＣａＴ）増加率を増加させた（図１Ａ）。これは、ＣＩＣＲゲインの増加（図１Ｂ）とτ_{ｄｅｃａｙ}の減少（図１Ｃ）に関連していた。

ＣＶｉｅ２１４（１μＭ）は、ＣＶｉｅ２１６と同様にして、ＳＲローディングプロトコル中に、ＣａＴパラメーターを変化させた（図２）。ＣＩＣＲゲイン（図２Ｂ）とτ_{ｄｅｃａｙ}（図２Ｃ）は、ＳＥＲＣＡ２ａの強化から予想されるように、薬剤の影響を受けた。ＣＶｉｅ２１４は、ＳＲのリロード中にＣａＴの増加率を有意には増加させなかった（図２Ａ）。しかしながら、ＣＩＣＲゲインの増加は、これがＳＥＲＣＡ２ａに対する作用を否定するのではなく、同時に起こるＩ_ＣａＬ阻害を反映している可能性があることを示唆している。

図１および２の結果はまとまっており、ＣＶｉｅ２１６およびＣＶｉｅ２１４が、ＳＲによるＣａ^２＋取り込みを有意に増加させたことを示している。適用された実験条件下では、ＳＲ－Ｃａ^２＋取り込みは、ＳＥＲＣＡ２ａによって完全に支持されており、したがって、結果は、２つの薬剤によるＳＥＲＣＡ２ａの活性化と一致している。

活動電位測定
活動電位パラメーターに対するＣｖｉｅ２１６およびＣｖｉｅ２１４の効果は、モルモット筋細胞のＳＥＲＣＡ２ａを調節する１μＭの濃度で評価した。活動電位（ＡＰ）曲線は、膜イオンチャネルの統合機能の第１番目の推定値を提供し、その変化は、化合物の悪影響をもたらし得る補助的な作用を明らかにする可能性がある。レポーターとしてのＡＰ曲線の感度を高めるために、ＡＰパラメーターの速度依存性への影響もテストし、マルチパラメトリックな（より厳密な）アプローチが提供された。ＡＰ曲線がヒトのＡＰを再現するために、ＡＰは、モルモットの心室筋細胞で記録された。筋細胞を、薬剤の存在下、少なくとも３０分間、インキュベートし、長い曝露時間の後でも影響がないことを確実にした。統計分析は、「グループ比較」モデルによって実施した。

ＡＰは、モルモットの心室筋細胞において、３６．５℃の通常のタイロード液中で記録した。以下のパラメーター：拡張期膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）、最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）、活動電位持続時間（再分極の９０％でのＡＰＤ）を、４つの刺激速度（０．５、１、２、４Ｈｚ）で測定した。再分極安定性の指標である定常状態ペーシング中の短期ＡＰＤ変動（ＳＴＶ）は、ＡＰＤ_ｎｆＡＰＤ_ｎ＋１プロット（ポアンカレプロット）の同一線からの絶対直交偏差の合計として測定した（Altomare C et al., Circulation A&E 2015, 8:1265-1275）。

１μＭにおける、ＣＶｉｅ２１６（図３Ａ）およびＣＶｉｅ２１４（図４Ａ）は、活動電位持続時間（ＡＰＤ_９０）、拡張期膜電位（Ｅ_{ｄｉａｓｔ}）、最大脱分極速度（ｄＶ／ｄｔ_ｍａｘ）、およびそれぞれのＡＰパラメーターの速度依存性に影響を与えなかった。

短期ＡＰＤ変動（ＳＴＶ）は、電気的不安定性のマーカーであり、不整脈源性リスクと相関する。ＳＴＶは、平均ＡＰＤの関数であり、したがって、ＳＴＶを、複数のペーシングレート（０．５、１、２、および４Ｈｚ）で測定し、その評価を広いＡＰＤ範囲に拡張した。ＳＴＶおよび平均ＡＰＤへのその依存性は、ＣＶｉｅ２１６（図３Ｂ）およびＣＶｉｅ２１４（図４Ｂ）の両方の影響を有意に受けなかった。

まとめると、活動電位分析に使用されるマルチパラメトリックアプローチは、心臓の電気的活動に対する望ましくない薬物作用がないことを意味する。したがって、この分析によれば、ＣＶｉｅ２１６およびＣｖｉｅ２１４は、ＳＥＲＣＡ２ａ変調を選択的に発揮する（陽性変弛緩薬）。つまり、電気的活動および関与する膜電流に影響を与えることはない。

実施例５．ＣＶｉｅ２１４およびＣＶｉｅ２１６に関するインビボ試験
ラットにおけるバイオアベイラビリティ
ラットのバイオアベイラビリティは、中国のＳｕｎｄｉａＭｅｄｉＴｅｃｈＳｅｒｖｉｃｅによって測定した。特に、ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩のバイオアベイラビリティは、１ｍｇ／ｋｇの静脈内注射（ｉ．ｖ．）、および１０ｍｇ／ｋｇの経口投与（ｏｓ）の後に、ラットで測定した。試験化合物ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩の血漿中濃度を、０時間から２４時間の時間まで、インターバルで測定し、ＬＣ－ＭＳ法で検出した。Ｆ値（％）を計算し、ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩についてそれぞれ、４１．５％および１６．９％となった。

マウスの急性毒性
試験化合物ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩の急性毒性は、マウス（ＡｌｂｉｎｏＳｗｉｓｓＣＤ－１、体重３０ｇ）で測定された。化合物を、用量を増やしながら経口投与または静脈内注射して、５０％の死亡率を引き起こす用量を特定している。死亡は投与後３０分以内に発生し、生存は２４時間後である。

表３に、ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩の急性毒性の結果を報告する。比較として、参照化合物のジゴキシンおよびイスタロキシムの急性毒性も示している。ジゴキシンは、文献のデータを参照している（www.lookchem.com, 静脈内ジゴキシンのリファレンス: Afifi AM, Ammar EM. Pharmacological Research Communications. Vol. 6, Pg. 417, 1974; 経口ジゴキシンのリファレンス: Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. Vol. 153, Pg. 436, 1965）（表３）。

表３．マウスにおける、ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩の急性毒性（ＬＤ_５０）

ストレプトゾトシン糖尿病ラットの血行力学（心エコー検査２Ｍ－ドップラー－組織ドップラー）
ＣＶｉｅ２１４およびＣＶｉｅ２１６について、糖尿病ラットモデルで試験した。簡単に説明すると、ラットにストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を注射した。ＳＴＺ注射から７～９週間後、ラットを経胸壁心エコー検査にかけ、ウレタン麻酔下でドップラー評価を実施した。二次元誘導Ｍモード（Two-dimensionally guided M-mode）記録を用いて、アメリカ心エコー図学会ガイドライン（Lang RM et al., Eur J Echocardiography 2006, 7:79-108）に従って、左心室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、左心室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）、後壁（ＰＷ）および中隔壁（ＳＷ）の拡張期の厚さについて、短軸測定値を取得した。左室内径短縮率は、ＦＳ＝（ＬＶＥＤＤ－ＬＶＥＳＤ）／ＬＶＥＤＤ、として計算した。相対的な壁の厚さは、ＰＷＴｄ＋ＩＶＳＴｄ／ＬＶＥＤＤ、として計算した。僧帽弁流入は、僧帽弁の先端で、パルスドップラーによって、心尖部四腔断層像により測定し、早期および後期充満速度（Ｅ、Ａ）および早期充満速度の減速時間（ＤＴ）を取得した。減速勾配は、Ｅ／ＤＴ比として計算した。僧帽弁減速指数は、ＤＴ／Ｅ比として計算した。組織ドップラー法（ＴＤＩ）は、心尖部四腔断層像により評価し、中隔僧帽弁輪運動、すなわち、心筋収縮期のピーク（ｓ’）と拡張期の初期および後期の速度（ｅ’およびａ’）、を記録した。

血行力学のベースライン測定を行った後、ラットに、ジゴキシン、ＣＶｉｅ２１４、ＣＶｉｅ２１６を投与し、対照と比較した。参照薬剤として用いたジゴキシンは、０．１１ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎで、１５分間静脈内注入し、１時間後に心エコー検査パラメーターを測定した。ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩は、ＳＴＺ糖尿病ラットに、０．２ｍｇ／ｋｇ／ｍｉｎで、静脈内注入し、１５分および３０分後に心エコー検査パラメーターを測定した。

表４～６は、ジゴキシン、ＣＶｉｅ２１４－塩、およびＣｖｉｅ２１６－塩の、ＳＴＺ糖尿病ラットにおける血行力学的パラメーターを示している。表４～６に示されるデータは、平均±ＳＤであり、アスタリスクの付いた値は、少なくともｐ＜０．０５で統計的に有意である。

データは、ストレプトゾトシン糖尿病ラットモデルが、健康な対照ラットと比較して、拡張機能障害を特徴とすることを示している（対照はｎ＝１８のラット；ＳＴＺはｎ＝２０のラット）（表４）。特に、ＳＴＺラットは、ＤＴ、ＤＴ／Ｅの増加、および、Ｅ、ＤＴ／Ｅ、ｅ’、ＨＲの減少を示した。ＣＶｉｅ２１４－塩およびＣＶｉｅ２１６－塩は、対照に対してＳＴＺで悪化している拡張機能を改善しており（表４）、ＤＴ、ＤＴ／Ｅの有意な減少、および、ＳＶとＣＯの改善に関連するＥ／ＤＴとｅ’の増加が示された（表５～６）。Ｅ／ｅ’は、ＣＶｉｅ２１６－塩の注入から３０分後に、有意に減少した（表６）。ＣＶｉｅ２１４のみが、おだやかではあるが有意に、１５分後に、ｓとＨＲを増加させた（表５）。参照化合物として使用されたジゴキシンは、拡張機能を改善し、ＤＴ、ＤＴ／Ｅを減少させ、Ｅ／ＤＴ、ｅ’、および収縮機能（ＦＳ、ｓ’）を増加させたが、ＳＶやＣＯなどの全体的な心臓機能には影響しなかった（表４）。

表４．対照およびＳＴＺ糖尿病ラットの血行力学的パラメーター、およびＳＴＺラットにおけるジゴキシンのＩＶ注入の効果

ＦＳ（％）：左室内径短縮率、収縮機能。Ｅ（ｍ／ｓ）：僧帽弁流入の初期充満速度。A（ｍ／ｓ）：僧帽弁流入の後期充満速度。Ｅ／Ａ：ＬＶ機能の指数。ＤＴ（ｍｓ）：Ｅ波の減速時間。ＤＴ／Ｅ（ｓ２／ｍ）：僧帽弁減衰指数。Ｅ／ＤＴ（ｍ／ｓ２）：減速勾配。ｓ’（ｃｍ／ｓ）（ＴＤＩ）：収縮速度。ｅ’（ｃｍ／ｓ）（ＴＤＩ）：初期弛緩速度。ａ’（ｃｍ／ｓ）（ＴＤＩ）：後期弛緩速度。Ｅ／ｅ’：ＬＶ充満圧指数。ＣＯ（ｍｌ／ｍｉｎ）：心拍出量。ＨＲ（拍／分）：心拍数。ＳＶ（ｍｌ／拍）：一回拍出量。＊：少なくともｐ＜０．０５、対照とＳＴＺ、または、ＳＴＺプラス薬物とＳＴＺ前。

表５．ＳＴＺ糖尿病ラットにおける、ＣＶｉｅ２１４－塩のＩＶ注入後の血行力学的パラメーター

表６．ＳＴＺ糖尿病ラットにおける、ＣＶｉｅ２１６－塩のＩＶ注入後の血行力学的パラメーター

受容体結合アッセイ
受容体のパネルへの放射性リガンドの結合は、公開された手法に従い、適切な参照標準（Eurofin, Taiwan, compound code CVie216-3 (1226840), study # TW04-0004235, quote # TW04-0004235-Q04, for Cvie Therapeutics Limited, Taiwan）を用いることによって、粗膜検体に対して、Ｅｕｒｏｆｉｎにより、実施された。ＣＶｉｅ２１６－塩は、１０μＭの濃度でテストした。表７に示すように、受容体のパネルにおいて、有意な相互作用は記録されなかった。

表７．Ｃｖｉｅ２１６－塩の受容体結合アッセイ

注：ｂｏｖ＝ウシ（Ｂｏｖｉｎｅ）；ｈａｍ＝ハムスター；ｈｕｍ＝ヒト；＞５０％の刺激または阻害の有意性の基準を満たす項目はない。

Claims

式（Ｉ）

［式中、
Ｘは、カルボン酸、カルボン酸エステル、またはそれらの生物学的等価体、第一級アルコール、エーテル、およびアミン基からなる群から選択され、ここで、生物学的等価体は、硫酸塩、スルホン酸、リン酸塩、ホスホネート、または窒素含有エーテル環式環からなり、ここで、該アミン基は、任意選択で、第一級アミン、第二級アミン、または環状アミンを含み；
ｎは、１、２、３、４、または５であり；
Ｃ３－Ｃ１’の破線は、Ｃ３－Ｃ１’の位置にある任意選択の環外二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ２－Ｃ３の破線は、任意選択の環内二重結合Ｃ＝Ｃを表し；
Ｃ６にあるＹは、α配置またはβ配置のヒドロキシル（ＯＨ）、またはα配置のヒドロキシメチル（ＣＨ_２ＯＨ）であり；
Ｃ７にあるＺは、－Ｈ、または、α配置の－ＯＨ、またはケトンであり、破線はＺにおける任意選択のカルボニル基（Ｃ＝Ｏ）を表す。］
で示される化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、または水和物。
Ｘが、カルボン酸、カルボン酸エステル、第一級アミン、第二級アミン、および環状アミンからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｘが、カルボン酸、またはカルボン酸エステルである、請求項１に記載の化合物。
下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｅ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
（Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－３－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
（Ｅ）－３－（４－アミノブチル）－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；
３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスト－２－エン－１７－オン・ヨウ化水素酸塩；
（ＥＺ）－３－（４－アミノブチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
（Ｅ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
（Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；
４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；
２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；
４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸；
（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピロリジン－３イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（アゼチジン－２－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
（Ｅ，Ｚ）－３－［２－（ピペリジン－４－イル）エチリデン］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
（Ｅ，Ｚ）－３－（５－Ｎ－メチルアミノペンチリデン）－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
３β－［２－（アゼチジン－２－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；
３β－［２－（ピロリジン－３イル）エチル］６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン；
３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチルアンドロスタン－７，１７－ジオン；および、
３β－［２－（ピペリジン－４－イル）エチル］－６α－ヒドロキシメチル－７α－ヒドロキシアンドロスタン－１７－オン、
からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物。
下記：
（Ｅ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｚ）－４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｅ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
（Ｚ）－４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イリデン）酪酸；
エチル（６α－ヒドロキシ－１７－ケトアンドロスタン－３β－イル）アセテート；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；
４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸；
２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルブチロエート；
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）エチルカプロエート；および、
４－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）カプロン酸、
からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物。
４－（６α－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酪酸、および２－（６β－ヒドロキシ－１７－オキソアンドロスタン－３－イル）酢酸、からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
薬学的に許容される塩が、塩化物塩、臭化物塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、クエン酸塩、メタン硫酸塩、および安息香酸塩から選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルおよび／または賦形剤と組み合わせて、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物の１つ以上を含む、医薬組成物。
少なくとも１つの薬学的に許容されるビヒクルおよび／または賦形剤と組み合わせて、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物の１つ以上を含む、心不全の治療方法に使用するための医薬組成物。
静脈内注射、筋肉内注射、経腸投与、非経口投与、または吸入用に製剤化されている、請求項８または９に記載の医薬組成物。
経口投与用に製剤化されている、請求項８または９に記載の医薬組成物。
約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの用量で、任意選択でこの用量は約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇであってもよい用量で、投与される、請求項８～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
ＣＥ阻害剤、ＡＩＲＢ、利尿剤、Ｃａ^２＋チャネル遮断薬、β遮断薬、ジギタリス、ＮＯドナー、血管拡張薬、ＳＥＲＣＡ２ａ刺激剤、ネプリライシン（ＮＥＰ）阻害剤、ミオシンフィラメント活性化剤、組換えリラキシン－２メディエーター、組換えＮＰタンパク質、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）の活性化剤、およびアンジオテンシンＩＩ受容体のβ－アレスチンリガンド、からなる群から選択される１つ以上の追加の治療活性成分をさらに含む、請求項８～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
医薬として使用するための、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物。
心不全の治療に使用するための、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物。