JP2022545947A - Ｃｒ２結合タンパク質および医学的治療におけるそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ヒトＣＲ２に結合するＣＲ２結合タンパク質、前記ＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物、ならびに自己免疫性および／または炎症性病態、感染性疾患およびエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）に関連する悪性腫瘍の治療または予防におけるそれらの使用；ならびにワクチンアジュバント／抗原担体としてのそれらの使用を提供する。

Description

開示の分野
本発明は、補体受容体２（ＣＲ２またはＣＤ２１）に結合しそれらを中和するＣＲ２結合タンパク質に関する。本発明はまた、疾患または障害を前記ＣＲ２結合タンパク質で治療する方法およびＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物に関する。本発明のその他の側面は以下の説明から明らかになる。

開示の背景
補体系は、病原体の侵入に対する自然免疫応答の一部である、進化的に保存されている血漿タンパク質のセットである。補体のタンパク質分解の活性化は活性化表面で起こり、適応免疫応答の調節を含む一定範囲のエフェクター機能を有する活性補体成分の沈着をもたらす。ＣＤ２１としても知られる補体受容体２（ＣＲ２）は、主としてＢリンパ球および濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）で発現される１４５ｋＤａの膜結合糖タンパク質であり、自然と適応免疫の間の橋渡しとして働く。ＣＲ２は、共有結合した最小の補体成分３（Ｃ３）フラグメント、Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｄ（一緒にＣ３ｄ／ｇといわれる）の受容体であり、ｉＣ３ｂに対する結合が弱い。インターフェロンα、二本鎖ＤＮＡおよびエプスタイン－バーウイルスｇｐ３５０／２２０も、ＣＲ２のリガンドとして記載されている。

ＣＲ２は、１）オプソニン化抗原と結合し、それらをリンパ系組織に輸送して保持すること、２）Ｂ細胞活性化の閾値を引き下げること、および３）Ｂ細胞－ＦＤＣクロストークを介して親和性成熟および胚中心形成を駆動することによって、適応免疫応答において３つの中枢的役割を果たす。ヒトにおけるこれらのメカニズムの重要性は、ＣＲ２欠損という希な症例によって確認され、患者は、有意に少ない記憶Ｂ細胞を有し、抗体の多様性および血清免疫グロブリンのレベルが低下している。

胚中心（ＧＣ）および、自己免疫に関しては、一次リンパ器官および二次リンパ器官の外側に形成する異所性リンパ構造（ＥＬＳ）は、自己免疫応答に対する中枢である。ＧＣ、ＥＬＳの形成、維持、生産性におけるＣＲ２の役割はいくつかある（図１参照）。
１）循環中ならびにＧＣおよびＥＬＳ内の非コグネイトＢ細胞上のＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原の搬送；
２）ＧＣ／ＥＬＳ内のＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原によるＢ細胞活性化の閾値の低下；
３）ＣＲ２／ＢＣＲ共連結の下流のＢ細胞出力、例えば抗体生産の刺激；
４）Ｂ細胞への提示のためのＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原の保持；および
５）ＦＤＣ機能、例えば、サイトカイン生産の活性化。

これらのＣＲ２依存性メカニズムの破綻は、抗原の利用可能性の低下、ＦＤＣ：Ｂ細胞相互作用の破綻、抗原特異的抗体の減少、およびＢ細胞とのｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞クロストークの破綻を含む、ＧＣ／ＥＬＳに大きな影響を及ぼすと予測される。

多くの自己免疫性および／または炎症性病態は高レベルの自己抗体を特徴とし、免疫寛容の障害およびＢ細胞の活性化の調節不全を示唆する。シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）または関節リウマチ（ＲＡ）などの自己免疫疾患に関して、補体Ｃ３ｄ／ｇ－ＣＲ２相互作用をＣＲ２ブロック分子でブロックすると、Ｂ細胞の活性化閾値が上昇し、自己抗原に応答した自己抗体生産Ｂ細胞の活性化および増殖が阻止される。

ウイルス性疾患、例えば、ＨＩＶは、ＦＤＣおよびリンパ組織に長寿命のウイルスリザーバーが持続するために、治療することが困難であり得る。抗原結合、１年を超える保持、および提示は、Ｃ３フラグメント被覆抗原のＣＲ２依存性捕捉に大きく依存する。一旦、Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化抗原が、辺縁帯（ＭＺ）Ｂ細胞からＦＤＣに移動すると、無傷の抗原は、小さな非分解性エンドソーム小胞によって迅速に内在化される。次いで、これらの小胞は細胞表面に周期的に再循環され、そこで無傷の抗原および他のＦＤＣ表面タンパク質がコグネイトＢ細胞によって認識され、取得され得る。同様に、Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化ＨＩＶビリオンは、長寿命のウイルスリザーバーを表すこれらの非分解エンドソーム中に捕捉され、長期間保持される。

ＣＲ２に結合する分子をアジュバント／抗原担体として使用して免疫化に対する免疫応答を増幅することができる。抗ＣＲ２抗体に結合された低用量の抗原は、マウスおよびカニクイザルにおける迅速かつ持続的なＩｇＧ免疫応答を誘導することが見出されている(Whipple, E.C. et al., Mol. Immunol., 2007. 44(4): p. 377-388)。要約すると、自己免疫性および／または炎症状態、感染性疾患ならびにＢ細胞活性化もしくはＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄもしくはＣ３ｄｇオプソニン化抗原の保持が関与する他の障害もしくは病態の治療が必要とされている。さらに、別のワクチンアジュバントおよび抗原担体も必要とされている。

開示の概要
本発明は、ＣＲ２の新規なエピトープに結合し、リガンドのＣＲ２受容体への結合を阻止するＣＲ２結合タンパク質（以下、「ＣＲ２結合タンパク質」という）を提供する。

本発明はまた、ヒトＣＲ２の２つの短い補体反復ドメインの間のリンカー内および／またはＣ末端近傍の１以上の残基に結合するＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ヒトＣＲ２の、配列番号２および／または配列番号７１内の１以上のアミノ酸残基に結合する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ヒトＣＲ２の、配列番号２内の１以上のアミノ酸残基に結合する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ヒトＣＲ２の、配列番号７１内の１以上のアミノ酸残基に結合する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）を重水素交換から保護する。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）および／または残基１０４～１２７（配列番号７１）を重水素交換から保護する。

本発明はまた、抗体であるＣＲ２結合タンパク質を提供する。１つの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。別の実施形態において、モノクローナル抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。別の実施形態において、モノクローナル抗体はＩｇＧ１である。別の実施形態において、抗体は、その軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、抗体は、その重鎖可変領域に配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、抗体は、配列番号６に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、抗体は、配列番号５に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、抗体は、配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列および配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質がＡＤＣＣおよび／または補体活性化またはエフェクター機能が低減されるような定常領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質定常領域は、２３５および２３７（ＥＵインデックスナンバリング）の位置にアラニン残基による置換を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質定常領域は、２３４および２３５（ＥＵインデックスナンバリング）の位置にアラニン残基による置換を含んでなる。

本発明はまた、ヒト型、ヒト化型またはキメラ型であるＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、以下のＣＤＲ：配列番号５からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号６からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号６に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号５に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号６に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号５に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列および配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。

本発明はまた、以下のＣＤＲ：配列番号１７からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号１８からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１８に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１７に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１８に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号１７に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１６に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１５に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１６に示されるような軽鎖アミノ酸配列および配列番号１５に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。

本発明はまた、以下のＣＤＲ：配列番号２９からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号３０からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その軽鎖可変領域に配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、その重鎖可変領域に配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３０に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２９に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３０に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列および配列番号２９に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２８に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２７に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２８に示されるような軽鎖アミノ酸配列および配列番号２７に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる。

本発明はまた、抗原結合タンパク質－ＣＲ２相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）が０．１～１ｎＭであるＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、ＣＲ２との結合に関してＣＲ２結合タンパク質のいずれか１つと競合するＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質のいずれか１つをコードする核酸分子も提供する。１つの実施形態において、核酸分子配列は、重鎖をコードする配列番号１３および／または軽鎖をコードする配列番号１４を含んでなる。別の実施形態において、核酸分子配列は、重鎖をコードする配列番号２５および／または軽鎖をコードする配列番号２６を含んでなる。さらなる実施形態において、核酸分子配列は、重鎖をコードする配列番号３７および／または軽鎖をコードする配列番号３８を含んでなる。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質のいずれか１つをコードする核酸分子を含んでなる発現ベクターも提供する。１つの実施形態において、発現ベクターは、重鎖をコードする配列番号１３および／または軽鎖をコードする配列番号１４を含んでなる核酸分子配列 を含んでなる。別の実施形態において、発現ベクターは、重鎖をコードする配列番号２５および／または軽鎖をコードする配列番号２６を含んでなる核酸分子配列を含んでなる。さらなる実施形態において、発現ベクターは、重鎖をコードする配列番号３７および／または軽鎖をコードする配列番号３８を含んでなる核酸分子配列を含んでなる。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質のいずれか１つをコードする核酸分子を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞も提供する。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質のいずれか１つをコードする核酸分子を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞によって発現されるＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質の生産のための方法であって、ＣＲ２結合タンパク質を生産するための培地中で組換え宿主細胞を培養する工程、およびＣＲ２結合タンパク質を単離または精製する工程を含んでなる方法も提供する。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質および薬学上許容可能な担体または賦形剤を含んでなる医薬組成物も提供する。

本発明はまた、Ｃ３ｄ／ｇ被覆複合体との相互作用をブロックするＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、本発明は、ＢＣＲ：ＣＲ２の共連結の下流のシグナル伝達、活性化および抗体生産をブロックし、またＣ３ｄ／ｇ抗原のＦＤＣへの結合も阻止するＣＲ２結合タンパク質を提供する。

本発明はまた、療法における使用のためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、必要とする対象における自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。１つの実施形態において、必要とする対象におけるシェーグレン症候群の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における関節リウマチの治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における全身性紅斑性狼瘡の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における血管炎の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象における抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなるが提供される。

本発明はまた、必要とする対象における感染性疾患の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。１つの実施形態において、必要とする対象におけるＨＩＶの治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。

本発明はまた、必要とする対象において免疫化に対する免疫応答を増幅するための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。

本発明はまた、必要とする対象におけるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。

本発明はまた、自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。１つの実施形態において、シェーグレン症候群の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、関節リウマチの治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、全身性紅斑性狼瘡の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、血管炎の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態において、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。

本発明はまた、感染性疾患の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。１つの実施形態において、ＨＩＶの治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。

本発明はまた、免疫化に対する免疫応答を増幅するためのワクチンの製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。

本発明はまた、ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。

本発明はまた、自己免疫性および／または炎症性病態の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、シェーグレン症候群の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、関節リウマチの治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、全身性紅斑性狼瘡の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、血管炎の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。さらなる実施形態において、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。

本発明はまた、感染性疾患の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＨＩＶの治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。

本発明はまた、ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明はまた、免疫化に対する免疫応答の増幅における使用のためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。

本発明のその他の側面および実施形態は、以下の詳細な説明から明らかとなる。

図１は、ＧＣ／ＥＬＳの形成および生産性におけるＣＲ２の役割を示す。ＣＲ２依存的方法が示される。 図２は、ｍＡｂ １０５３の不在下および存在下のサンプル間のＣＲ２ペプチドのＨＤＸ－ＭＳに由来する差次的重水素化を示す。図２Ａは、平均の差次的取り込みをペプチド当たりのＤａで示し；図２Ｂは、ペプチド残基当たりに正規化した平均の差次的取り込みを、残基当たり１Ｄａの最大差次的重水素化に対するパーセンテージとして示す（ｎ個の非プロリン残基を有するペプチドが測定可能なプロトン交換を伴うｎ－２アミドを有していると仮定）。各ペプチドを、使用したＣＲ２構築物におけるその位置およびその配列とともに示す。バーは、重水素化バッファーに曝した時間によって色分けする（０．５分＝グレー；５分＝黒）。 図３：Ｃ３ｄｇオプソニン化抗原によるＢＣＲおよびＣＲ２の共連結を介したＢ細胞の相乗的活性化を示す。ＣＲ２リガンドＣ３ｄ／ｇでオプソニン化された抗原は、ＢＣＲおよびＣＲ２を共連結する。ＢＣＲはそのコグネイト抗原に結合し、ＣＲ２は抗原（Ａｇ）に共有結合されているＣ３ｄ／ｇに結合する。ＢＣＲおよびＣＲ２の共連結は、ＣＤ７９（ＢＣＲとの複合体）およびＣＤ１９（Ｂ細胞共受容体複合体の一部）の両方を介したシグナル伝達の増強をもたらし、下流シグナル伝達および相乗的Ｂ細胞の活性化をもたらす（出典Carroll and Isenman, 2012, Immunity, 37 (2). 119-207）。 図４：ｍＡｂ １０５３とのプレインキュベーションがモデルＣ３ｄｇオプソニン化リガンドの初代ヒト非コグネイトＢ細胞への結合を用量依存的に阻止することを示す。 図５：ｍＡｂ １０５３とのプレインキュベーションは、血清オプソニン化ＰｎＰＳ１４の初代ヒト非コグネイトＢ細胞への結合を用量依存的に阻止することを示す。 図６：結合していたモデルＣ３ｄｇオプソニン化リガンドを初代ヒト非コグネイトＢ細胞から迅速に競合解離させることを示す。 図７：ｍＡｂ １０５３は初代ヒトＢ細胞においてＣＲ２により媒介される細胞内のカルシウムフラックスを用量依存的に阻害することを示す。 ８ａおよび８ｂ：初代ヒトＢ細胞においてｍＡｂ １０５３はＣＲ２により媒介されるリン酸化タンパク質シグナル伝達を用量依存的に阻害することを示す。 図９：ｍＡｂ １０５３は初代ヒトＢ細胞においてＣＲ２により媒介されるＣＤ６９アップレギュレーションを用量依存的に阻害することを示す。 図１０：ｍＡｂ ９９６、ｍＡｂ ９９９およびｍＡｂ １０５３は、初代ヒトＢ細胞からのＣ３ｄｇ依存的免疫グロブリン分泌を用量依存的に阻害することを示す。 図１１：初代ヒト扁桃ＦＤＣへのｍＡｂ １０５３の標的会合を示す。 図１２：ｍＡｂ １０５３による初代ヒト扁桃ＦＤＣへのモデルＣ３ｄｇオプソニン化リガンド結合の用量依存的阻害を示す。

開示の詳細な説明
用語「抗原結合タンパク質」は、本明細書で使用する場合、ＣＲ２と結合し得る抗体およびその他のタンパク質構築物、例えば、ドメインを指す。用語「ＣＲ２結合タンパク質」および「抗原結合タンパク質」および「抗ＣＲ２抗原結合タンパク質」は、本明細書では互換的に使用される。

用語「抗体」は、本明細書では、免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を有する分子を指して広義で使用され、モノクローナル抗体、組換え抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体；単一可変ドメイン（例えば、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、抗原結合抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ＴＡＮＤＡＢＳなどおよび以上のいずれもの修飾型（別の「抗体」形式の概要としては、Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136を参照のこと）。

別の抗体形式は、抗原結合タンパク質の１以上のＣＤＲが好適な非免疫グロブリンタンパク質足場または骨格、例えば、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／０１６４３０１号）またはＥＧＦドメイン上に配置させることができる別の足場を含む。

用語「ドメイン」は、ポリペプチドの残りの部分に依存せずにその三次構造を保持する折り畳まれたポリペプチド構造を指す。一般に、ドメインは、ポリペプチドの別個の機能的特性を担い、多くの場合、タンパク質および／またはドメインの残りの部分の機能欠失を伴わずに他のポリペプチドに対して付加、除去または転移が可能である。

用語「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含んでなる折り畳まれたポリペプチドドメインを指す。従って、これにはＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬなどの完全な抗体可変ドメインならびに修飾抗体可変ドメイン、例えば、１以上のループが抗体可変ドメインに特徴的ではない配列で置換されたもの、または末端切断されているかもしくはＮ末端もしくはＣ末端延長を含んでなる抗体可変ドメイン、ならびに全長ドメインの少なくとも結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折り畳まれたフラグメントが含まれる。単一可変ドメインは、異なる可変領域またはドメインとは独立に抗原またはエピトープと結合し得る。「ドメイン抗体」または「ＤＡＢ」は、「単一可変ドメイン」と同じと考えてよい。単一可変ドメインはヒト単一可変ドメインであってよく、齧歯類（例えば、ＷＯ００／２９００４Ａ１に開示される通り）、テンジクザメおよびラクダ科動物ＶＨＨ ＤＡＢなどの他種に由来する単一可変ドメインも含む。ラクダ科動物ＶＨＨは、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体を生産するラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。このようなＶＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準技術に従ってヒト化してもよく、このようなドメインは「単一可変ドメイン」であると見なされる。本明細書で使用する場合、ＶＨにはラクダ科動物ＶＨＨドメインを含む。

抗原結合フラグメントは、非抗体タンパク質足場上に１以上のＣＤＲを配置することによって提供され得る。「タンパク質足場」としては、本明細書で使用する場合、限定するものではないが、４鎖抗体もしくは２鎖抗体であり得る、または抗体のＦｃ領域のみを含んでなり得る、または抗体由来の１以上の定常領域を含んでなってよく、それらの定常領域はヒト起源もしくは霊長類起源であり得る、またはヒト定常領域と霊長類定常領域の人工キメラであり得る免疫グロブリン（Ｉｇ）足場、例えば、ＩｇＧ足場が挙げられる。

タンパク質足場は、Ｉｇ足場、例えば、ＩｇＧ足場、またはＩｇＡ足場であり得る。ＩｇＧ足場は、抗体（すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、ＶＬ）のドメインの一部または全部を含んでなり得る。抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４ＰＥから選択されるＩｇＧ足場を含んでなり得る。例えば、足場はＩｇＧ１であり得る。足場は、抗体のＦｃ領域からなり得るかもしくは含んでなり得るか、またはその一部である。

タンパク質足場は、ＣＴＬＡ－４、リポカリン、プロテインＡ由来分子、例えば、プロテインＡのＺ－ドメイン（アフィボディ、ＳｐＡ）、Ａ－ドメイン（アビマー／マキシボディ）；ＧｒｏＥｌおよびＧｒｏＥＳなどの熱ショックタンパク質；トランスフェリン（トランスボディ）；アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）；ペプチドアプタマー；Ｃ型レクチンドメイン（テトラネクチン）；ヒトγ－クリスタリンおよびヒトユビキチン（アフィリン）；ＰＤＺドメイン；ヒトプロテアーゼ阻害剤のサソリ毒素ｋｕｎｉｔｚ型ドメイン；ならびにフィブロネクチン／アドネクチンからなる群から選択される足場の誘導体であってよく；これは抗原、例えば、天然リガンド以外の＜抗原＞への結合を得るためにタンパク質工学を受けている。

抗原結合部位は、抗原に特異的に結合し得る、抗原結合タンパク質上の部位を指し、これは単一可変ドメインであってもよいし、または標準的な抗体で見られ得るように対合したＶＨ／ＶＬドメインであってもよい。一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインもまた抗原結合部位を提供し得る。

用語「キメラ抗原受容体」（「ＣＡＲ」）は、本明細書で使用する場合、細胞外抗原結合ドメイン（通常、モノクローナル抗体、またはそのフラグメント、例えば、ｓｃＦｖの形態のＶＨドメインおよびＶＬドメインに由来する）、場合により、スペーサー領域、膜貫通領域、および１以上の細胞内エフェクタードメインからなる操作された受容体を指す。ＣＡＲは、キメラＴ細胞受容体またはキメラ免疫受容体（ＣＩＲ）ともいわれてきた。ＣＡＲを、Ｔ細胞の特異性を所望の細胞表面抗原に向け直すためにＴ細胞などの造血細胞に遺伝子導入するとＣＡＲ－Ｔ治療薬が得られる。

用語「スペーサー領域」は、本明細書で使用する場合、膜貫通ドメインを標的結合ドメインに連結する働きをするオリゴペプチドまたはポリペプチドを指す。この領域は、「ヒンジ領域」または「ストーク領域」ともいう場合がある。スペーサーの大きさは、ＣＡＲ：標的結合時にある設定距離（例えば、１４ｎｍ）を維持するために、標的エピトープの位置に応じて変更可能である。

用語「膜貫通ドメイン」は、本明細書で使用する場合、細胞膜を横切るＣＡＲ分子の部分を指す。

用語「細胞内エフェクタードメイン」（「シグナル伝達ドメイン」ともいう）は、本明細書で使用する場合、抗原結合ドメインが標的に結合した後に細胞内シグナル伝達を担う、ＣＡＲ内のドメインを指す。細胞内エフェクタードメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の通常のエフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解性性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。

本明細書に開示されるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインは、例えばｓｃＦｖの形態でＣＡＲ－Ｔ治療薬に組み込み得ることが当業者により認識されるであろう。

１つの実施形態において、本開示のＣＲ２結合タンパク質は、ヒトＣＲ２とカニクイザルＣＲ２などの別の種に由来するＣＲ２の間で交差反応性を示す。ある実施形態において、本発明のＣＲ２結合タンパク質は、ヒトＣＲ２およびカニクイザルＣＲ２に特異的に結合する。薬物開発は一般に、薬物をヒトで試験する前に動物系でのリード薬物候補の試験を必要とするので、これは特に有用である。ヒトおよびサル種に結合し得る薬物を提供することで、これらの系で結果を検定し、同じ薬物を用いたデータの対照比較を行うことが可能となる。これにより、動物ＣＲ２に作用する薬物とヒトＣＲ２に作用する別の薬物を発見する必要がなくなり、また、同一でない薬物を用いたヒトおよび動物の結果を比較する必要がなくなる。イヌまたはマウスなどの疾患モデルに用いられる他の種間の交差反応性も考えられる。

場合により、少なくともカニクイザルＣＲ２に対する抗原結合タンパク質の結合親和性およびヒトＣＲ２に対する結合親和性の違いは２または５倍以下である。

親和性は、「結合親和性」ともいわれ、単一の相互作用部位における、すなわち、ある分子、例えば、本発明のＣＲ２結合タンパク質の、別の分子、例えば、その標的抗原の単一の結合部位における結合の強度である。抗原結合タンパク質のその標的に対する結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または動態法（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）によって決定することができる。例えば、実施例３に記載されているＢＩＡＣＯＲＥ法を、結合親和性を測定するために使用することができる。

アビディティは、機能的親和性ともいわれ、複数の相互作用部位における結合の累積強度、例えば、２つの（または例えば二重特異性分子もしくは多重特異性分子の場合にはそれより多い）分子の、例えば相互作用の価数を考慮した、複数部位における互いに対する結合の強度の合計である。

ある実施形態において、抗原結合タンパク質－ＣＲ２相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、１ｎＭ以下である。別の実施形態において、抗原結合タンパク質－ＣＲ２相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、０．５ｎＭ以下である。あるいは、ＫＤは、０．１～１ｎＭ；または０．２～０．５ｎＭであり得る。当業者は、ＫＤの数値が小さくなるほど結合が強くなることを理解するであろう。ＫＤの逆数（すなわち、１／ＫＤ）は、Ｍ^－１を単位とする平衡会合定数（ＫＡ）である。当業者は、ＫＡの数値が大きくなるほど結合が強くなることを理解するであろう。

解離速度定数（ｋｄ）または「解離速度」は、抗原結合タンパク質－ＣＲ２複合体の安定性、すなわち、毎秒減衰する複合体の割合を表す。例えば、ｋｄ０．０１ｓ^－１は、毎秒１％の複合体が減衰することに相当する。ある実施形態において、解離速度定数（ｋｄ）は、１×１０^－４ｓ^－１以下、１×１０^－５ｓ^－１以下、または１×１０^－６ｓ^－１以下である。ｋｄは、１×１０^－５ｓ^－１～１×１０^－４ｓ^－１；または１×１０^－４ｓ^－１～１×１０^－３ｓ^－１であり得る。

会合速度定数（ｋａ）または「結合速度」は、抗原結合タンパク質－ＣＲ２複合体形成の速度を表す。ある実施形態において、会合速度定数（ｋａ）は、１×１０^８Ｍ^－１ｓ^－１以下である。別の実施形態において、Ｋａは、１×１０^７～１×１０^８Ｍ^－１ｓ^－１．であり得る。

用語「中和する」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、本明細書に記載の抗原結合タンパク質の存在下でＣＲ２の生物活性が、抗原結合タンパク質不在下のＣＲ２の活性と比較して低減またはブロックされることを意味する。中和は、ＣＲ２のそのリガンド（すなわち、Ｃ３ｄ／ｇ）への結合のブロック、ＣＲ２の活性化の阻止、ＣＲ２のダウンレギュレーション、またはエフェクター機能への作用のうち１以上によるものであってよい。例えば、実施例２、実施例４および実施例６～１１に記載の方法を、ＣＲ２結合タンパク質の中和能力を評価するために使用することができる。

生物活性の低減または阻害は、部分的または全面的であり得る。中和抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質の不在下のＣＲ２活性に比べて少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％Ｂ細胞活性化の閾値を引き下げることによってＣＲ２の活性を中和し得る。

中和は、当業者に公知のまたは本明細書に記載されるような１以上のアッセイを用いて決定または測定することができる。

「ＣＤＲ」は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。よって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、３つ総ての軽鎖ＣＤＲ、総ての重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲ、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。

本明細書において、全長抗原結合配列内、例えば、抗体重鎖配列または抗体軽鎖配列内の可変ドメイン配列および可変ドメイン領域内のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従って符番される。同様に、実施例で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。さらなる情報に関しては、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)を参照のこと。

可変ドメイン配列および全長抗体配列のアミノ酸残基のための別のナンバリング規則も存在することは当業者には自明であろう。例えば、Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883に示されているものなどのＣＤＲ配列のための別のナンバリング規則も存在する。抗原結合タンパク質の構造およびタンパク質折り畳みは、他の残基もＣＤＲ配列の一部と考えられることを意味すると思われ、当業者にはそうであることが理解されるであろう。

当業者に利用可能なＣＤＲ配列の他のナンバリング規則としては、「ＡｂＭ」（バース大学）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）法がある。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏチｔｈｉａ、ＡｂＭおよびｃｏｎｔａｃｔ法のうち少なくとも２つを用いた最小重複領域を決定して「最小結合単位」を示すことができる。最小結合単位は、ＣＤＲの下位部分であり得る。

以下の表１に、各ＣＤＲまたは結合単位に対して各ナンバリング規則を用いた場合の１つの定義を示す。Ｋａｂａｔナンバリングスキームは、表１で、可変ドメインアミノ酸配列を符番するために使用されている。ＣＤＲ定義は使用される個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。

よって、以下のＣＤＲ：配列番号５からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号６からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、以下のＣＤＲ：配列番号１７からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号１８からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。さらなる実施形態において、以下のＣＤＲ：配列番号２９からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号３０からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。

ＣＤＲまたは最小結合単位は、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失または付加によって修飾されてもよく、変異体抗原結合タンパク質は、ＣＲ２への結合などの、非修飾タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持している。

ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３のそれぞれは単独で修飾されてもよいし、または任意の他のＣＤＲといずれの順列もしくは組合せで組み合わせて修飾してもよいことが理解されるであろう。１つの実施形態において、ＣＤＲは、最大３個のアミノ酸、例えば１または２個のアミノ酸、例えば１個のアミノ酸の置換、欠失または付加によって修飾される。一般に、修飾は置換、特に、以下の表２に示されるように保存的置換である。

例えば、変異体ＣＤＲにおいて、最小結合単位のアミノ酸残基は同じままであるが、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｃｈｉａ定義の一部としてＣＤＲを含んでなる隣接する残基は、保存的アミノ酸残基で置換されていてもよい。

上記のような修飾されたＣＤＲまたは最小結合単位を含んでなるこのような抗原結合タンパク質は、本明細書では「機能的ＣＤＲ変異体」または「機能的結合単位変異体」という場合がある。

用語「エピトープ」は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質の特定の結合ドメインと接触される抗原の部分を指す。エピトープは、線状または立体配座的／不連続であり得る。立体配座的または不連続エピトープは、他の配列によって分離される、すなわち、抗原の一次配列では連続的配列ではないアミノ酸残基を含んでなる。エピトープ内に含まれる特定の残基は、コンピューターモデリングプログラムによってまたはＸ線結晶学などの当技術分野で公知の方法を介して得られる三次元構造から決定することができる。

本発明の１つの側面において、ヒトＣＲ２に、配列番号２の１以上のアミノ酸残基で結合するＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、ヒトＣＲ２に、ヒトＣＲ２の２つのＳＣＲドメインの間のリンカー内の１以上のアミノ酸残基で結合するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明の別の実施形態において、ヒトＣＲ２に、配列番号７１の１以上のアミノ酸残基で結合するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明のさらなる実施形態において、ヒトＣＲ２に、配列番号２および／または配列番号７１の１以上のアミノ酸残基で結合するＣＲ２結合タンパク質が提供される。

本発明の別の側面において、例えば実施例１に記載されるように、ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）を重水素交換から保護するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明のさらなる実施形態において、例えば実施例１に記載されるように、ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）および／または残基１０４～１２７（配列番号７１）を重水素交換から保護するＣＲ２結合タンパク質が提供される。

本発明の抗原結合タンパク質と参照抗原結合タンパク質、例えば、参照抗体との間の競合は、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢＩＡＣＯＲＥによって決定することができる。この競合にはいくつかの理由がある：これら２つのタンパク質は同じまたは重複するエピトープに結合する可能性があること、結合の立体的阻害が存在する可能性があること、または第１のタンパク質の結合が第２のタンパク質の結合を阻止するもしくは低下させる抗原の立体配座変化を誘導する可能性があること。

本発明は、ＣＲ２の新規なエピトープに結合してその活性化を阻止するＣＲ２結合タンパク質の同定に基づく。ＣＲ２の活性化の阻止はＢ細胞の活性化閾値を調節し、自己抗原に応答した自己抗体生産Ｂ細胞の活性化および増殖（自己免疫性および／または炎症性病態に関与する機構）を阻止し、ＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原の保持が減少する（ＨＩＶなどのウイルス性疾患および自己抗体の生成に関与する重要な機構）。

本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントは、Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化複合体の非コグネイトＢ細胞への結合を阻止し、それにより、胚中心内のＦＤＣでの複合体の保持およびＦＤＣへの移動を阻止する。

ヒト定常領域のいくつかのアイソタイプ、特に、ＩｇＧ４およびＩｇＧ２アイソタイプは、ａ）古典的経路による補体の活性化；およびｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の機能を本質的に欠く。所望のエフェクター特性に応じてエフェクター機能を変更するために、抗原結合タンパク質の重鎖定常領域に対して種々の修飾を行ってよい。Ｆｃ受容体への結合を低下させる、また、ＡＤＣＣおよびＣＤＣなどのエフェクター機能を低下させる特定の突然変異を含むＩｇＧ１定常領域が記載されている(Duncan et al. Nature 1988, 332; 563-564; Lund et al. J. Immunol. 1991, 147; 2657-2662; Chappel et al. PNAS 1991, 88; 9036-9040; Burton and Woof, Adv. Immunol. 1992, 51;1-84; Morgan et al., Immunology 1995, 86; 319-324; Hezareh et al., J. Virol. 2001, 75 (24); 12161-12168)。

本発明１つの実施形態において、ＡＤＣＣおよび／または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）の低減など、抗原結合タンパク質のエフェクター機能が低減されるような定常領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質が提供される。１つのこのような実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプの天然障害型の定常領域または突然変異を有するＩｇＧ１定常領域を含んでなってもよい。好適な修飾の例は、ＥＰ０３０７４３４に記載されている。一例は、２３５および２３７（ＥＵインデックスナンバリング）、すなわち、Ｌ２３５ＡおよびＧ２３７Ａ（一般に「ＬＡＧＡ」突然変異といわれる）の位置にアラニンによる置換を含んでなる。別の例は、２３４および２３５（ＥＵインデックスナンバリング）、すなわち、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（一般に「ＬＡＬＡ」突然変異といわれる）の位置にアラニンによる置換を含んでなる。

エフェクター機能を低下させるためのさらなる変更および突然変異としては、（特に断りのない限り、ＩｇＧ１を参照のこと）：グリコシル化Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ｇ；Ｌ２３５Ｅ；ＩｇＧ４：Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；およびキメラＩｇＧ２／ＩｇＧ４。ＩｇＧ２：Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、およびＩｇＧ２：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓは、ＦｃγＲおよびＣ１ｑ結合を低下させることができる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ． ２０１８および米国特許第８，９６１，９６７号）。

エフェクター機能を低下させる他の突然変異としては、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ；ヒトＩｇＧ２由来のＣＨ１およびヒンジ領域およびヒトＩｇＧ４由来のＣＨ２およびＣＨ３領域を用いて作出されたキメラ抗体；ＩｇＧ４から誘導された４つの重要なアミノ酸残基変化（Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ）を有する、ＩｇＧ２アイソタイプに基づくＩｇＧ２ｍ４；Ｆｃγ受容体およびＣ１ｑ補体タンパク質に対する親和性を排除するためにＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ置換を含むＩｇＧ２σ；ＩｇＧ２ｍ４（Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４への変化）；ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）；ｈｕＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＡＡ）；ｈｕＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ；ＩｇＧ１σ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）；ＩｇＧ４σ１（Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ）；およびＩｇＧ４σ２（Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／DＧ２３６／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、ここで、Dは欠失を表す）(Tam et al., Antibodies 2017, 6(3))が挙げられる。

本発明はまた、ヒト型、ヒト化型またはキメラ型であるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ヒト型である。

本発明はまた、配列番号９のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ３を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号８の重鎖ＣＤＲ２および配列番号７の重鎖ＣＤＲ１をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のＣＤＲ２および配列番号１２のＣＤＲ３のうち１つ、２つまたは３つをさらに含んでなってよい。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号７の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８の重鎖ＣＤＲ２、配列番号９の重鎖ＣＤＲ３、配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１の軽鎖ＣＤＲ２および配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ３を含んでなる。

本発明はまた、配列番号５の重鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号６の軽鎖可変領域をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号５の重鎖可変領域および配列番号６の軽鎖可変領域を含んでなる。

本発明はまた、配列番号５のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上の同一性または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される重鎖可変領域、および配列番号６のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列と９８％以上の同一性を有する重鎖可変領域および配列番号６のアミノ酸配列と９８％の同一性を有する軽鎖可変領域を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３の重鎖および配列番号４の軽鎖を含んでなる（特に断りのない限りＣＨＯによる発現された材料であるｍＡｂ １０５３）。

本発明はまた、配列番号２１のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ３を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２０の重鎖ＣＤＲ２および配列番号１９の重鎖ＣＤＲ１をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のＣＤＲ２および配列番号２４のＣＤＲ３のうち１つ、２つまたは３つをさらに含んでなってよい。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１９の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２０の重鎖ＣＤＲ２、配列番号２１の重鎖ＣＤＲ３、配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ２および配列番号２４の軽鎖ＣＤＲ３を含んでなる。

本発明はまた、配列番号１７の重鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１８の軽鎖可変領域をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１７の重鎖可変領域および配列番号１８の軽鎖可変領域を含んでなる。

本発明はまた、配列番号１７のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上の同一性または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、 配列番号１７のアミノ酸配列と９８％以上の同一性を有する重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列と９８％の同一性を有する軽鎖可変領域を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号１５の重鎖および配列番号１６の軽鎖を含んでなる（特に断りのない限りＣＨＯによる発現された材料であるｍＡｂ ９９６）。

本発明はまた、配列番号３３のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ３を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３２の重鎖ＣＤＲ２および配列番号３１の重鎖ＣＤＲ１をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３５のＣＤＲ２および配列番号３６のＣＤＲ３のうち１つ、２つまたは３つをさらに含んでなってよい。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３２の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３３の重鎖ＣＤＲ３、配列番号３４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３５の軽鎖ＣＤＲ２および配列番号３６の軽鎖ＣＤＲ３を含んでなる。

本発明はまた、配列番号２９の重鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号３０の軽鎖可変領域をさらに含んでなってよい。別の実施形態において、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２９の重鎖可変領域および配列番号３０の軽鎖可変領域を含んでなる。

本発明はまた、配列番号２９のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上の同一性または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される重鎖可変領域、および配列番号３０のアミノ酸配列と７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上または１００％の同一性を有するアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域を含んでなるＣＲ２結合タンパク質も提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列と９８％以上の同一性を有する重鎖可変領域および配列番号３０のアミノ酸配列と９８％の同一性を有する軽鎖可変領域を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、配列番号２７の重鎖および配列番号２８の軽鎖を含んでなる（特に断りのない限りＣＨＯによる発現された材料であるｍＡｂ ９９９）。

本明細書の開示は、このような重鎖可変領域および軽鎖可変領域のありとあらゆる組合せを含んでなるＣＲ２結合タンパク質を企図する。

本発明はまた、ＣＲ２結合タンパク質をコードする核酸分子も提供する。１つの実施形態において、配列番号１３の核酸配列が提供される。別の実施形態において、配列番号１４の核酸配列が提供される。別の実施形態において、配列番号２５の核酸配列が提供される。別の実施形態において、配列番号２６の核酸配列が提供される。別の実施形態において、配列番号３７の核酸配列が提供される。さらなる実施形態において、配列番号３８の核酸配列が提供される。

本発明はまた、本明細書に記載のＣＲ２結合タンパク質の重鎖および／または軽鎖をコードする、本明細書に記載の核酸分子を含んでなる発現ベクターも提供する。１つの実施形態において、同じベクターが重鎖および軽鎖の核酸配列を含む。別の実施形態において、別のベクターが重鎖および軽鎖の核酸配列を含み、すなわち、１つのベクターが重鎖をコードし、別のベクターが軽鎖をコードする。１つの実施形態において、配列番号１３の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。別の実施形態において、配列番号１４の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。別の実施形態において、配列番号２５の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。別の実施形態において、配列番号２６の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。別の実施形態において、配列番号３７の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。さらなる実施形態において、配列番号３８の核酸配列を含んでなる発現ベクターが提供される。

さらに、本発明は、このような発現ベクターを含み、前記ＣＲ２結合タンパク質を発現し得る組換え宿主細胞を提供する。１つの実施形態において、配列番号１３の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含有する組換え宿主細胞が提供される。別の実施形態において、配列番号１４の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。別の実施形態において、配列番号２５の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。別の実施形態において、配列番号２６の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。別の実施形態において、配列番号３７の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。さらなる実施形態において、配列番号３８の核酸配列を含んでなる発現ベクターを含む組換え宿主細胞が提供される。

本発明はまた、本明細書に記載されるような組換え宿主細胞によって発現されるＣＲ２結合タンパク質も提供する。

開示される配列の配列番号１～７４は、特に断りのない限りＫａｂａｔに従って定義される。

以下の例で、ヒト生物学に対する本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントの影響を理解するために開発された初代ヒトＢ細胞に対する一定の範囲のアッセイを説明する。考え合わせると、これらのデータは、本発明のＣＲ２結合タンパク質がＢ細胞に対する自己免疫のＣＲ２依存的機構を効果的に阻害することを裏付けるための実験的証拠を提供する。

本発明の１つの実施形態において、結合していたオプソニン化複合体の結合を阻止することによって、非コンジュゲートＢ細胞上のオプソニン化自己抗原の保持を阻害するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明の別の実施形態において、結合していたオプソニン化複合体との競合によって、非コンジュゲートＢ細胞上のオプソニン化自己抗原の保持を阻害するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明の別の実施形態において、オプソニン化自己抗原によってＢ細胞の活性化を阻止するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明の別の実施形態において、ヒトＢ細胞内のカルシウムフラックスを阻害するＣＲ２結合タンパク質が提供される。本発明の別の実施形態において、ヒトＢ細胞内のリンタンパク質シグナル伝達を阻害するＣＲ２結合タンパク質が提供される。さらなる実施形態において、ヒトＢ細胞内のＣＲ２依存的ＣＤ６９アップレギュレーションを阻害するＣＲ２結合タンパク質が提供される。

使用の記述
よって、本発明は、療法における使用のためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質は、ＣＲ２阻害剤が適応となる疾患または病態の治療において使用することができる。

１つの実施形態において、Ｂ細胞の活性化が関与する疾患の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ｂ細胞の活性化が関与する疾患の治療における使用のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象におけるＢ細胞の活性化が関与する疾患の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。

１つの実施形態において、ＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄまたはＣ３ｄｇオプソニン化抗原の保持に関連する疾患の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、ＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄまたはＣ３ｄｇオプソニン化抗原の保持に関連する疾患の治療における使用のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象におけるＦＤＣリザーバー内のＣ３ｄまたはＣ３ｄｇオプソニン化抗原の保持に関連する疾患の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与する工程を含んでなる方法が提供される。

自己免疫性および／または炎症性病態
胚中心反応の生成／維持におけるＣＲ２の役割のために、この機構のブロックは、シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡および関節リウマチなどの自己免疫性および／または炎症性病態の治療において有効であると思われる。さらに、シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡または関節リウマチ患者は、Ｃ３ｂ／ｉＣ３ｂまたはＣ３ｄを保持する循環免疫複合体を含むことが判明している。

ＣＲ２がＢ細胞の活性化の閾値の引き下げおよび抗体生産の促進に重要な役割を果たすことを考えれば、ＣＲ２のブロックは、Ｂ細胞により媒介される病理をリセットする優れた機会を与える。

シェーグレン症候群は、組織のリンパ球浸潤が外分泌腺の分泌不全および多系統炎症に至る自己免疫性リウマチ疾患である。疾患の重症度は、Ｂ細胞の活性化、循環自己抗体および外分泌組織における高頻度の胚中心巣と密接に関連している。シェーグレン症候群患者の、疾病活性が高く、自己抗体生産が広範囲に及んだサブグループは補体Ｃ３レベルが低く、シェーグレン症候群の病原に寄与する可能性のある高い補体活性化による消費が示唆される。

ＳＬＥは、慢性自己免疫疾患であり、その病因は知られていない。ＳＬＥは不治であり、治療は発赤の予防ならびにそれらが生じた際の重症度および持続期間の軽減を含む。治療としては、コルチコステロイド、細胞傷害薬、例えば、シクロホスファミド、ヒドロキシクロロキンおよびベリムマブが含まれる。

ＣＲ２はＳＬＥの病因に関連付けられており、いくつかの報告が、ＣＲ２が宿主免疫応答の際の外来ＤＮＡの認識に重要な役割を果たすことを示唆している。この認識機能が、ＳＬＥにおいてＤＮＡに対する自己免疫の発生に影響を及ぼす機構である可能性がある。

ＲＡにおいては、補体カスケードの種々の部分の活性化が長年知られていた。例えば、ＲＡ患者の滑液には、ＣＲ２リガンドであるＣ３ｄ／ｇのレベルが上昇している。また、複数の研究が、関節リウマチ（ＲＡ）患者の炎症滑膜における線維芽細胞様滑膜細胞（ＦＬＳ）におけるＣＲ２の存在を実証している。

ＣＲ２結合タンパク質は、限定するものではないが、関節リウマチ（ＲＡ）、シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ、例えば、狼瘡腎炎）、血管炎（例えば、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、全身性壊死性血管炎、結節性多発性動脈炎、アレルギー性血管炎および肉芽腫症、多発血管炎、ウェゲナー肉芽腫、リンパ腫様肉芽腫症、巨細胞性動脈炎、皮膚粘膜リンパ節症候群（ＭＬＮＳまたは川崎病）、孤発性ＣＮＳ血管炎、ベーチェット病、閉塞性血栓血管炎（バージャー病）および皮膚壊死性細静脈炎）、特発性膜性糸球体腎炎、重症筋無力症、天疱瘡、硬皮症、全身性硬化症、抗糸球体基底膜病、水疱性類天疱瘡、多発性硬化症、視神経脊髄炎、髄膜炎；脳炎、血友病インヒビター、酵素補充療法に対する抗体、ＩｇＡ腎症、多発性筋炎、皮膚筋炎、グレーブス病（例えば、自己免疫性甲状腺炎および橋本病）、抗リン脂質抗体症候群、１型真性糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、固形臓器移植、自己免疫性肺胞蛋白症、ブドウ膜炎；変形性関節症、自己免疫性溶血性貧血（例えば、自己免疫性溶血性貧血、免疫汎血球減少症、および発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫性慢性活動性肝炎、初代胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎および抗原抗体複合体介在疾患（例えば、肺の炎症、胸膜炎、肺胞炎、血管炎、肺炎、慢性気管支炎、気管支拡張症、びまん性汎細気管支炎、過敏性肺炎および特発性肺線維症（ＩＰＦ））を含む多様な自己免疫性および／または炎症性病態の治療において有用であり得る。

１つの実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、関節リウマチ（ＲＡ）、シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）および血管炎から選択される。別の実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、関節リウマチ（ＲＡ）である。別の実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、シェーグレン症候群である。別の実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）である。別の実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、血管炎である。さらなる実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態は、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎である。

１つの実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、関節リウマチ（ＲＡ）の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、シェーグレン症候群の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、血管炎の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。

１つの実施形態において、自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、関節リウマチ（ＲＡ）の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、シェーグレン症候群の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、血管炎の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。

また、必要とする対象における自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供される。別の実施形態において、必要とする対象における関節リウマチ（ＲＡ）の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるシェーグレン症候群の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における血管炎の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象における抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。好適には、それを必要とする対象は、哺乳動物、特にヒトである。

感染性疾患
多くのウイルス性疾患、例えば、ＨＩＶは、リンパ組織内のＦＤＣなど、長寿命のウイルスリザーバーの持続性のために治療が困難である。抗原結合、１年を超える保持、および抗原提示は、Ｃ３フラグメント被覆抗原のＣＲ２依存的捕捉に依存するところが大きい。Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化ＨＩＶビリオンは、表す非分解性エンドソーム中に捕捉され長期間保持され、これが長寿命のウイルスリザーバーである。

併用抗レトロウイルス療法（ｃＡＲＴ）による現在のＨＩＶ治療は、ウイルスの拡散およびＨＩＶ疾患を効果的に予防するが、潜在的にＨＩＶに感染した細胞と、長年にわたって持続可能な複製能のあるウイルスを保持することができる解剖学的または生理学的部位とを含む長寿命のウイルスリザーバーの持続性のために、ウイルスの根絶には至らない。

ＦＤＣにより捕捉されたウイルスは、リンパ組織内の感染性ウイルスの持続的な供給源を作り出すことによってリザーバーを補充するための重要な機構となり、これはｃＡＲＴの中止後に新たな感染およびウイルスの再燃を引き起こすことがあり、長期間のウイルス寛解およびＨＩＶの治癒を妨げる。

ＣＲ２結合タンパク質は、限定すれるものではないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ）ならびにエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ））、細菌感染、真菌感染、原生動物感染および寄生虫感染を含む感染性疾患の治療、予防または再活性化に有用であり得る。

１つの実施形態において、感染性疾患の治療または予防における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、ウイルス感染の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、ＨＩＶの治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、ＡＩＤＳの治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ａ型肝炎の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ｂ型肝炎の治療における使用のためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ｃ型肝炎の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ｄ型肝炎の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、Ｅ型肝炎の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、細菌感染の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、真菌感染の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、原虫感染の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。さらなる実施形態において、寄生虫感染の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。

１つの実施形態において、感染性疾患の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、ウイルス感染の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、ＨＩＶの治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、ＡＩＤｓの治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、Ａ型肝炎の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、Ｂ型肝炎の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、Ｃ型肝炎の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、Ｄ型肝炎の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、Ｅ型肝炎の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、細菌感染の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、真菌感染の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。別の実施形態において、原虫感染の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態において、寄生虫感染の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。

また、必要とする対象における感染性疾患の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供される。１つの実施形態において、必要とする対象におけるウイルス性疾患の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＨＩＶの治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＡＩＤｓの治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＡ型肝炎の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＢ型肝炎の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＣ型肝炎の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＤ型肝炎の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象におけるＥ型肝炎の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における細菌感染の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における真菌感染の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。別の実施形態において、必要とする対象における原虫感染の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象における寄生虫感染の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。好適には、それを必要とする対象は、哺乳動物、特にヒトである。

ワクチンアジュバントとしての使用
抗ＣＲ２抗体に結合された低用量の抗原は、マウスおよびカニクイザルにおいてＩｇＧ免疫応答を迅速に誘導し、持続させることが判明している(Whipple, E.C. et al., Mol. Immunol., 2007. 44(4): 377-388)。１つの実施形態において、免疫化に対する免疫応答を増幅するためのアジュバント／抗原担体として使用するためのＣＲ２結合タンパク質が提供される。別の実施形態において、免疫化に対する免疫応答の増幅のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態において、必要とする対象における免疫化に対する免疫応答の増幅のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法が提供される。好適には、それを必要とする対象は、哺乳動物、特にヒトである。

エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）に関連する悪性腫瘍
ＣＲ２は、エプスタイン－バーウイルス感染の主要な共受容体として特定されており、従って、ＥＢＶにより引き起こされるリンパ増殖性疾患の発症に役割を果たし得る(N. Neparidze et al.; Clinical Advances in Hematology & Oncology、12(6); June 2014: 358-371)。

本発明は、ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。本発明はまた、ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。本発明はまた、必要とする対象におけるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。

本発明はまた、Ｂ細胞リンパ増殖性障害、Ｔ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害および上皮悪性腫瘍から選択されるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質も提供する。

１つの実施形態において、本発明は、Ｂ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＦＤＣ肉腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＨＩＶ関連非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、免疫芽球性－形質細胞様、中心芽球性、バーキットリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫およびその固形変種、口腔型の形質芽球性リンパ腫、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、リンパ腫様肉芽腫症および慢性炎症関連ＤＬＢＣＬから選択されるＢ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、Ｔ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。別の実施形態において、本発明は、節外性鼻型ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、急速進行性ＮＫ細胞白血病／リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連皮膚Ｔ細胞リンパ増殖性障害、γδＴ細胞リンパ腫（肝脾および非肝脾）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫および慢性ＥＢＶ感染後Ｔ細胞リンパ増殖性障害から選択されるＴ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、上皮悪性腫瘍の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。別の実施形態において、本発明は、鼻咽頭癌および胃癌から選択される上皮悪性腫瘍の治療または予防において使用するためのＣＲ２結合タンパク質を提供する。

本発明はまた、Ｂ細胞リンパ増殖性障害、Ｔ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害および上皮悪性腫瘍から選択されるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用も提供する。

１つの実施形態において、本発明は、Ｂ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、ＦＤＣ肉腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＨＩＶ関連非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、免疫芽球性－形質細胞様、中心芽球性、バーキットリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫およびその固形変種、口腔型の形質芽球性リンパ腫、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、リンパ腫様肉芽腫症および慢性炎症関連ＤＬＢＣＬから選択されるＢ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、Ｔ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、節外性鼻型ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、急速進行性ＮＫ細胞白血病／リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連皮膚Ｔ細胞リンパ増殖性障害、γδＴ細胞リンパ腫（肝脾および非肝脾）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫および慢性ＥＢＶ感染後のＴ細胞リンパ増殖性障害から選択されるＴ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、上皮悪性腫瘍の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、鼻咽頭癌および胃癌から選択される上皮悪性腫瘍の治療または予防のための薬剤の製造におけるＣＲ２結合タンパク質の使用を提供する。

本発明はまた、必要とする対象におけるＢ細胞リンパ増殖性障害、Ｔ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害および上皮悪性腫瘍から選択されるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法も提供する。

１つの実施形態において、本発明は、必要とする対象におけるＢ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、必要とする対象におけるＦＤＣ肉腫、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、ＨＩＶ関連非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、免疫芽球性－形質細胞様、中心芽球性、バーキットリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫およびその固形変種、口腔型の形質芽球性リンパ腫、高齢者のＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、リンパ腫様肉芽腫症および慢性炎症関連ＤＬＢＣＬから選択されるＢ細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、必要とする対象におけるＴ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、必要とする対象における節外性鼻型ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、急速進行性ＮＫ細胞白血病／リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連皮膚Ｔ細胞リンパ増殖性障害、γδＴ細胞リンパ腫（肝脾および非肝脾）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫および慢性ＥＢＶ感染後のＴ細胞リンパ増殖性障害から選択されるＴ／ナチュラルキラー細胞リンパ増殖性障害の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、必要とする対象における上皮悪性腫瘍の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、必要とする対象における鼻咽頭癌および胃癌から選択される上皮悪性腫瘍の治療または予防のための方法であって、前記対象に治療上有効な量のＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる方法を提供する。

好適には、それを必要とする対象は、哺乳動物、特にヒトである。

薬組成物／投与経路／用量
本発明の医薬組成物は、治療または予防適用に使用することができる。本発明の１つの実施形態において、ＣＲ２結合タンパク質およびその薬学上許容可能な担体または賦形剤を含んでなる医薬組成物が提供される。別の実施形態において、１～５００ｍｇのＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。別の実施形態において、２０～３００ｍｇのＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。別の実施形態において、５０～２００ｍｇのＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。さらなる実施形態において、５０～２００ｍｇのＣＲ２結合タンパク質、すなわち、配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列および配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる抗体、を含んでなる医薬組成物が提供される。

好ましい実施形態において、医薬組成物は、非経口投与、経皮投与、管腔内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与および／または鼻腔内投与または組織への直接注射によるための組成物を含んでなる。前記医薬組成物注入または注射を介して患者に投与されることが想定される。好適な組成物の投与は、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所的または皮内投与などの種々の方法によって達成することができる。１つの実施形態において、静脈内投与用の、ＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。別の実施形態において、皮下投与用の、ＣＲ２結合タンパク質を含んでなる医薬組成物が提供される。

これらの医薬組成物は、好適な用量で対象に投与することができる。投与計画は主治医および臨床因子によって決定される。医学分野で周知のように、任意の患者の用量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される化合物、性別、時間、投与経路、健康状態、および同時に投与される他の薬物を含む多くの因子によって異なる。

略語
ＡＤＣＣ 抗体依存性細胞傷害
Ａｇ 抗原
Ａｋｔ タンパク質キナーゼＢ
ＡＮＣＡ 抗好中球細胞質抗体
ＡＰＣ アロフィコシアニン
ＢＣＲ Ｂ細胞受容体
ｃＡＲＴ 併用抗レトロウイルス療法
ＣＤＣ 補体依存性細胞傷害性
ＣＤＲ 相補性決定領域
ＣＤ２０ Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０
ＣＨＯ チャイニーズハムスター卵巣細胞
ｃＩＥＦ キャピラリー等電点電気泳動
ＣＬ クリアランス
ＣＲ１ 補体受容体１
ＣＲ２ 補体受容体２
ＣＯ_２ 二酸化炭素
ＣＴＬ 細胞傷害性Ｔリンパ球
Ｃｙｎｏ カニクイザル
ＤＬＳ 動的光散乱
ＤＭＡＲＤ 疾患修飾性抗リウマチ薬
ＤＭＥ 薬物代謝酵素
ＤＰ 医薬品
ＤＮＡ デオキシリボ核酸
ＥＢＶ エプスタイン－バーウイルス
ＥＬＳ 異所性リンパ構造
ＥＲＫｓ 細胞外シグナル調節キナーゼ
ＦＤＣ 濾胞樹状細胞
ＦＩＴＣ フルオレセインイソチオシアネート
ＦＬＳ 線維芽細胞様滑膜細胞
ＧＣ 胚中心
ｈＣＤ２ ヒト化ＣＲ２
ＨＥＫ ヒト胎児腎臓細胞
ＨＤＸ 水素重水素交換
ＨＤＭＳ 高精度質量分析
ＨＩＶ ヒト免疫不全ウイルス
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＩｇＧ 免疫グロブリンＧ
ＩｇＭ 免疫グロブリンＭ
ＩＶ 静脈内
ＫＯ ノックアウト
ＬＣ－ＭＳ 液体クロマトグラフィー質量分析
ｍＡｂ モノクローナル抗体
ＭＦＩ 平均蛍光強度
Ｍｇ／Ｋｇ ミリグラム／キログラム
ＭＲＴ 平均滞留時間
ＭＳ 質量分析
ＭＳＤ Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ
ＭＳＸ メチオニンスルホキサミン
ＭＷ 分子量
ＭＺ 辺縁帯
ＮａＣｌ 塩化ナトリウム
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
ＮＢ 非結合
ｎｇ／ｍＬ ナノグラム／ミリリットル
ＮＨＬ 非ホジキンＢ細胞リンパ腫
ＮＨＳ 正常ヒト血清
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＢＭＣｓ ヒト末梢単核細胞
ＰＢＰＫ 生理学的薬物動態
ＰＬＧＳ ｐｒｏｔｅｉｎＬｙｎｘ ｇｌｏｂａｌ ｓｅｒｖｅｒ
ＰＭＡ ミリスチン酸酢酸ホルボール
ＰｎＰＳ１４ 肺炎球菌多糖１４
ＲＡ 関節リウマチ
Ｓ／Ｃ 皮下
ＳＡＤ 単回用量漸増
ＳＣＲ ショートコンセンサスリピート
ｓＣＲ２ 可溶性ＣＲ２
ＳＣＳ 被膜下洞
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ サイズ排除クロマトグラフィー－高速液体クロマトグラフィー
ＳＥＭ 平均の標準誤差
ＳＬＥ 全身性紅斑性狼瘡
ＳＰＲ 表面プラズモン共鳴
ｔ_1/2 半減期
ＴＡ 標的会合
ＴＣＥＰ トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン
ＴＣＲ 組織交差反応性
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＦＦ タンジェンシャルフロー・フィルトレーション
Ｔｆｈ Ｔ濾胞ヘルパー
Ｔｈ Ｔヘルパー
ＴＬＲ ｔｏｌｌ様受容体
ＴＭＤＤ 標的介在性の薬物消失
Ｔｏｘ 毒性学
ＵＰＬＣ 超高速液体クロマトグラフィー

実施例１ ＨＤＸエピトープマッピング－ｍＡｂ １０５３に対するＣＲ２
ｍＡｂ １０５３（ＣＨＯにより発現）の存在下および不在下のＣＲ２（ＳＣＲ１および２ドメイン）の差次的重水素化を検討するためにＨＤＸ－ＭＳ分析を行った。

機器：
Ｗａｔｅｒｓ ＳＹＮＡＰＴ Ｇ２－Ｓｉ ＨＤＭＳ
ＡＣＱＵＩＴＹ Ｍ Ｃｌａｓｓ ＵＰＬＣ
ＬＥＡＰ Ｈ／Ｄ－Ｘ ＰＡＬロボット
溶液
急冷溶液：４００ｍＭリン酸カリウム、６Ｍ塩酸グアニジン、０．５ＭＴＣＥＰ ｐＨ２．５（サンプルとの１：１混合後 急冷溶液は混合時にこのｐＨとなるようにＮａＯＨでｐＨ調整した）。
希釈バッファー：水中、５０ｍＭリン酸ナトリウム １００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．０。
タンパク質
「ＣＲ２」＝ヒトＣＲ２抗原（２１－１５３）、タグなし；水中ＰＢＳ１３５ｕＭ。
「１０５３」＝ｍＡｂ；ＰＢＳ中８０．７ｕＭ。

ＨＤＸ
初期試験で、消化品質およびシグナル強度を確認するために、ＣＲ２を１回の実験で試験した。タンパク質を希釈バッファーで１０ｕＭに希釈し、標準１：２０希釈および急冷プロトコールを用いて実施した。

使用したＣＲ２ ｍＡｂ構築物のデータベースに対してＰＬＧＳを用いて検索し、ペプシン配列は、そのタンパク質が優れたタンパク質被覆率に十分なシグナルを与えたことを示した。同様の条件下、ＣＲ２サンプルでさらに２回実施し、ペプチド同定のための３反復の消化データを得た。

ＨＤＸ実験では、以下の２つのサンプルを調製した。
Ａｐｏ（対照サンプル）：７．４ｕｌ ＣＲ２、１０ｕｌ ＰＢＳ、ｐＨ７．４（ｍＡｂバッファーと適合させるため）、８２．６ｕｌ希釈バッファー。
＋ｍＡｂ：７．４ｕｌ ＣＲ２、１０ｕｌ ｍＡｂ １０５３、８２．６ｕｌ希釈バッファー（１０ｕＭ ＣＲ２、８ｕＭ ｍＡｂとする）。

ＨＰＬＣ溶媒Ａは、水中０．２％ギ酸＋０．０３％ＴＦＡであり、溶媒Ｂは、アセトニトリル＋０．２％ギ酸であった。クロマトグラフィーステップは総て０℃で実施した。

各タンパク質を周囲温度（２５℃）で保存した重水素化希釈バッファーで２０倍希釈し、２０℃で０、３０および３００秒のインキュベーション時間（０時点で非重水素化バッファーで希釈した）を用いた。インキュベーション後、サンプルを０℃にて１容量の急冷溶液で急冷した。１分後、サンプルを、１５℃に保持し、ＨＰＬＣバッファーＡ（Ｗａｔｅｒｓ ＥＮＺＹＭＡＴＥ ＢＥＨ、２．１ｍｍ×３０ｍｍ、Ｐａｒｔ ｎｏ：１８６００７２３３）で平衡化した固定化ペプシン消化カラムに注入し、溶出するペプチドを、０℃に維持したＣ１８ガードカラム（２．１×５ｍｍ Ｗａｔｅｒｓ ＶＡＮＧＵＡＲＤ ＢＥＨ Ｃ１８ １．８ｕｍ １３０Åガードカラム、Ｐａｒｔ ｎｏ １８６００３９７５）に、捕捉時間４分として捕捉した。次に、捕捉したペプチドを流速４０ｕｌ／分でガードカラムから分析Ｃ１８カラム（１．０×１００ｍｍ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、Ｐａｒｔ ｎｏ １８６００２３４６）へ、この場合にも０℃で溶出させ、以下の勾配に従った漸増濃度の溶媒Ｂを用いて分離した。

この相の間に、ペプシンカラムを取り外し、２ｍ塩酸グアニジン、０．８％ギ酸、５％アセトニトリル、５％プロパン－２－オール、ｐＨ２．５の２×１００ｕｌの注入で洗浄した。

溶出したペプチドを、エレクトロスプレーイオン源、および内部質量較正のために０．２％ギ酸、５０％アセトニトリル中の［Ｇｌｕｌ］－フィブリノペプチドＢを導入する第２ロックスプレーを備えたＷａｔｅｒｓ ＳＹＮＡＰＴ Ｇ２－Ｓｉ質量分析計に導入した。ｍ／ｚ範囲２６０～２０００にわたって正のイオン化を使用する「分解能」モードを使用して連続データを取得した。最初のペプチド同定サンプルについては、ＭＳ^ｅ取得を用い、低エネルギーおよび高エネルギー衝突セル条件下で交互にスキャンを取得して、それぞれ完全ペプチドデータと断片化ペプチドデータを生成した。重水素化サンプルは５回（３０秒および３００秒の時点）、または２回（０時点の重水素化サンプル）の反復としてデータの信頼性を高めた。

ＭＳ^ｅの初期のＣＲ２特性評価データを使用し、使用したＣＲ２構築物の配列を含むデータベースを検索するＰｒｏｔｅｉｎＬｙｎｘ Ｇｌｏｂａｌ Ｓｅｒｖｅｒ（ｖ３．０．２）を用いてペプチド検索リストを作成した。これらのペプチドリストを、信頼性の低い同定ペプチドを除去するフィルターをかけて使用して、ＤｙｎａｍＸ ｖ３．０にて、総ての時点からのサンプルのペプチドおよびそれらの重水素化度を特定した。ペプチドおよびイオンの割り当てを手作業で確認し、必要に応じて精密化した。

ペプチドレベルで差次的な（Ａｐｏ－ｍＡｂ複合体）重水素化データをＴＩＢＣＯ ＳＰＯＴＦＩＲＥ ｖ．７．０で再プロットした（記載のデータから））、図２Ａおよび２Ｂ参照。

結果
密接に関連のある２つのペプチドは、ｍＡｂ １０５３の存在下で一貫して低い重水素化レベルを示した。
ＦＮＫＹＳＳＣＰＥＰＩＶＰＧＧＹＫＩＲＧＳＴＰＹＲＨＧＤＳＶＴ（使用した構築物配列番号５８の残基６６～９６）
ＦＮＫＹＳＳＣＰＥＰＩＶＰＧＧＹＫＩＲＧＳＴＰＹＲＨＧＤＳＶＴＦ（使用した構築物配列番号５９の残基６６～９７）

これらのペプチドの長いものほど、重複するイオンからの干渉のために、重水素化の計算に大きな誤差を示し、これらのペプチドの短いものほど、ａｐｏとｍＡｂ １０５３サンプルの間の重水素化の違いが統計的に有意であるような、より鮮明なデータを示した。ペプチドＳＳＣＰＥＰＩＶＰＧＧＹＫＩＲＧＳＴＰＹＲＨＧＤＳＶＴ（使用した構築物配列番号６０の残基７０～９６）は、最初の４残基を欠くことだけが異なり、差次的シグナルがほとんどないことを示した。この違いの最も可能性のある理由は、ｍＡｂにより誘導される保護は主としてペプチドのＮ末端の５つのアミド［６６～９６］に局在しているというものである。残基６６～７０（配列番号２の配列ＦＮＫＹＳ）は、２つのＳＣＲドメイン間のリンカーに相当する。この領域は、ｍＡｂ １０５３のエピトープの最も可能性の高い候補である。

これらのペプチドの違いに加え、より低い保護を示す（しかし、より短いペプチド）さらなる領域が残基１０４～１２７（ＳＭＮＧＮＫＳＶＷＣＱＡＮＮＭＷＧＰＴＲＬＰＴＣ、配列番号７１）にわたるペプチドに相当するＣ末端付近に存在した。

Ｂ細胞へのＣ３ｄ／ｇオプソニン化リガンド結合に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響
実施例２：Ｃ３ｄｇリガンド結合に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
この実験は、Ｃ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣ複合体の非コグネイトＢ細胞への結合を阻止するｍＡｂ １０５３の能力を決定した。ストレプトアビジンおよびビオチン－Ｃ３ｄｇの蛍光標識複合体（組換え）をヒトＰＢＭＣとともにインキュベートし、複合体の結合をフローサイトメトリーによって評価した。

手順
蛍光標識されたＣ３ｄｇの４量体を、ビオチン化Ｃ３ｄｇおよびストレプトアビジン－ＡＰＣを用いて作出した。複合体は、ビオチン化Ｃ３ｄｇをストレプトアビジン－ＡＰＣとともに４：１比でインキュベートすることによって作出した。

ＰＢＭＣを、ヒト全血から密度勾配遠心分離によって単離した。ＰＢＭＣを示された濃度のＣＨＯ発現ｍＡｂ １０５３、アイソタイプ対照抗体とともにまたは抗体非含有で、３７℃、５％ＣＯ_２、加湿雰囲気下にて３０分間インキュベートした。次に、ＰＢＭＣをＣ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣ複合体とともにさらに３０分間インキュベートした。

続いての染色まで表面にリガンドを保存するために細胞を固定した。固定した細胞を、ＰＢＭＣ集団内のＢ細胞を識別するために抗ＣＤ２０－ＰＥとともにインキュベートした。染色したＰＢＭＣを固定した後、フローサイトメトリーによりＣＤ２０＋Ｂ細胞へのリガンド結合（ＡＰＣ蛍光）の定量を行った。

結果
ｍＡｂ １０５３とのプレインキュベーションは、１１．９ｐＭのＩＣ_５０で複合体の結合を用量依存的に阻止し（Ｎ＝４ドナー、２回の独立した実験、平均正規化ＭＦＩ±ＳＥＭ、単一の曲線が平均データに適合し、単一のＩＣ_５０が決定された）、一方、アイソタイプ対照抗体には効果はなかった（図４参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３はＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原のＢ細胞への結合を阻止することができ、それにより、それらのＦＤＣへのＣＲ２依存的輸送を妨げることを示す。

実施例３：２５℃におけるヒトおよびカニクイザルＣＲ２に対する抗ＣＲ２抗体の親和性
手順
組換え可溶性ヒトおよびカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＲ２への結合を、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面プラズモン共鳴装置を用いて評価した。プロテインＡをＣＭ５バイオセンサーチップに第一級アミンカップリングによって固定した。試験抗体（ＨＥＫにより発現）を５μｇ／ｍＬに希釈し、プロテインＡ表面に１２０秒間捕捉した後、１０μＬ／分で６０秒の解離時間を設けた。２６７ＲＵを達成するための捕捉時間は、各フローセルに対して各抗体を用いた場合の結合安定性報告点を用いて計算した。ヒトおよびｃｙｎｏ ＣＲ２抗原は、最高濃度２２ｎＭから１：３連続希釈で８点にわたって力価を調整し、流速３μＬ／分で６００秒間捕捉抗体に流した。結合曲線を二重参照するために、０ｎＭ（すなわち、バッファー単独）注入を使用した。ＣＲ２力価調整の各サイクル間に３０秒、２回の５０ｍＭ水酸化ナトリウム注入を用いてプロテインＡ表面を再生した。測定は２５℃でランニングバッファーとしてＨＢＳ－ＥＰを用いて行った。データは、グローバルＲ－ｍａｘを設定し、ＫＤ値の計算のためのＢＩＡＣＯＲＥ分析ソフトウエア固有の平衡モデルを用いて分析した。結果を表３に示す。

実施例４：血清オプソニン化ＰｎＰＳ１４結合に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
この実験は、「天然にオプソニン化された」リガンドの非コグネイトＢ細胞への結合を阻止するｍＡｂ １０５３の能力を決定した。使用したリガンドは、正常ヒト血清を用いてオプソニン化された肺炎球菌多糖タイプ１４（ＰｎＰＳ１４；肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)により発現される多糖抗原）であった。オプソニン化ＰｎＰＳ１４をヒトＰＢＭＣとともにインキュベートし、結合をフローサイトメトリーによって評価した。

手順
ＰｎＰＳ１４を１００％ＮＨＳ中、３７℃で１時間インキュベートしたところ、Ｃ３ｄｇを含むオプソニンＣ３フラグメントの共有結合的に沈着した。

ＰＢＭＣを、ヒト全血から密度勾配遠心分離によって単離した。ＰＢＭＣを示された濃度のＣＨＯ発現ｍＡｂ １０５３、アイソタイプ対照抗体とともにまたは抗体非含有で、３７℃、５％ＣＯ_２、加湿雰囲気下にて３０分間インキュベートした。次に、ＰＢＭＣを血清オプソニン化ＰｎＰＳ１４とともにさらに３０分間インキュベートした。

続いての染色まで表面にリガンドを保存するために細胞を固定した。固定した細胞を、ＰＢＭＣ集団内のＢ細胞を識別するために抗ＣＤ２０－ＰＥとともにインキュベートした。結合したＰｎＰＳ１４はＰｎＰＳ１４抗血清とともに検出され、次いで、抗ウサギＩｇＧ－ＦＩＴＣで染色した。染色したＰＢＭＣを固定した後、フローサイトメトリーによりＣＤ２０＋Ｂ細胞へのリガンド結合（ＦＩＴＣ蛍光）の定量を行った。

結果
ｍＡｂ １０５３とのプレインキュベーションは、血清オプソニン化ＰｎＰＳ１４の非コグネイトＢ細胞への結合を、３７．９ｐＭのＩＣ_５０で濃度依存的に阻止し（Ｎ＝４ドナー、２回の独立した実験、平均正規化ＭＦＩ±ＳＥＭ、単一の曲線が平均データに適合し、単一のＩＣ_５０が決定された）、一方、アイソタイプ対照抗体は結合を阻止しなかった（図５参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３はＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原のＢ細胞への結合を阻止することができ、それにより、それらのＦＤＣへのＣＲ２依存的輸送を妨げることを示す。

実施例５：結合していたＣ３ｄｇリガンド結合に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
この実験は、自己抗原置換モデルとして、結合していたリガンドを非コグネイトＢ細胞から競合解離させ得るかどうかを決定した。蛍光ストレプトアビジン：Ｃ３ｄｇ複合体をＰＢＭＣとともにインキュベートし、結合していないリガンドを洗い流した。ｍＡｂ １０５３またはアイソタイプ対照抗体を細胞に加え、結合したリガンドの量をフローサイトメトリーによって経時的に追跡した。

手順
蛍光標識されたＣ３ｄｇの４量体を、ビオチン化Ｃ３ｄｇおよびストレプトアビジン－ＡＰＣを用いて作出した。複合体は、ビオチン化Ｃ３ｄｇをストレプトアビジン－ＡＰＣとともに４：１比でインキュベートすることによって作出した。

ＰＢＭＣを、ヒト全血から密度勾配遠心分離によって単離した。ＰＢＭＣをＣ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣ複合体とともに、３７℃、５％ＣＯ_２、加湿雰囲気下にて３０分間インキュベートした。結合していないＣ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣ複合体を洗い流した。次に、ＰＢＭＣを１０ｎＭのＣＨＯにより発現されたｍＡｂ １０５３、アイソタイプ対照抗体とともに、または抗体非含有で０．５、２または１８．５時間インキュベートした。

続いての染色まで表面にリガンドを保存するために細胞を固定した。固定した細胞を、ＰＢＭＣ集団内のＢ細胞を識別するために抗ＣＤ２０－ＰＥとともにインキュベートした。染色したＰＢＭＣを固定した後、フローサイトメトリーによりＣＤ２０＋Ｂ細胞へのリガンド結合（ＡＰＣ蛍光）の定量を行った。

結果
ｍＡｂ １０５３は、結合していたＣ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣ複合体を非コグネイトＢ細胞から迅速に競合解離させたが、アイソタイプ対照抗体には効果がなかった。この効果の大部分は添加２時間以内に起こった。アイソタイプ対照抗体は、抗体非含有に比べて結合を低減しなかった（Ｎ＝４ドナー、２回の独立した実験、平均正規化ＭＦＩ±ＳＥＭ）（図６参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３はＣＲ２発現細胞から結合していたＣ３ｄｇオプソニン化抗原を迅速かつ強力に競合脱離させ得ることを示す。

実施例６～９：Ｂ細胞の活性化に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響
Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化抗原によるＣＲ２と抗原特異的ＢＣＲの共連結は、Ｂ細胞の活性化の閾値を引き下げる。非コグネイトＢ細胞を用いてこれをモデル化するために、Ｃ３ｄｇオプソニン化抗原のサロゲートとして働かせるために多量体複合体を作出した。ビオチン化抗ＢＣＲ試薬（λ鎖またはＩｇＭのいずれかを認識する）を、ＢＣＲとの抗原の相互作用を模倣するために使用し、ビオチン化組換えＣ３ｄｇをＣＲ２リガンドとして使用した。これらの成分をニュートラビジンとともに同時インキュベートし、抗ＢＣＲとＣ３ｄｇの両方を含む複合体；抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体を得た。

この系におけるＣＲ２の主要な役割はＢＣＲ活性化の閾値を引き下げることであるので、シグナルをほとんどまたは全く誘導しないレベルまで抗ＢＣＲ試薬の力価調整を行うことによってアッセイを最適化した。複合体にＣ３ｄｇが含まれると、ＣＲ２の共連結がＢ細胞の活性化の閾値を引き下げ、Ｃ３ｄｇ依存的な活性化ウインドウが得られた。

実施例６：初代ヒトＢ細胞におけるカルシウムフラックスおよびリンタンパク質シグナル伝達に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
ＣＲ２依存的ＢＣＲ活性化の下流のシグナル伝達事象をブロックするｍＡｂ １０５３の能力を評価するために、ＰＢＭＣを抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激した後にフローサイトメトリーによりＢ細胞における細胞内カルシウムフラックスをモニタリングした。

手順
ＰＢＭＣを、ヒト全血から密度勾配遠心分離により単離した。ＰＢＭＣにカルシウム応答性色素Ｆｌｕｏ－４を負荷し、Ｂ細胞を抗ＣＤ１９ ＢＶ４２１で識別した。ベースラインおよび刺激後のＦｌｕｏ－４蛍光をフローサイトメトリーによってリアルタイムでモニタリングした。ＢＣＲの下流の細胞内カルシウムのＣＲ２依存的放出を惹起するために、細胞を抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激した。示された濃度のＣＨＯにより発現されたｍＡｂ １０５３とともに室温で３０分間プレインキュベーションした後に刺激を行った。ｍＡｂ １０５３の不在下でのピークＣ３ｄｇ依存的応答の時間を外挿して、ｍＡｂ １０５３を含有するサンプルにおいてその時点で同等の応答値を得た。応答は、各データセットの最大応答＝１００％となるように正規化した。Ｎ＝４の個体、平均±ＳＤ。

結果
カルシウムフラックスシグナルの用量依存的低下がｍＡｂ １０５３で見られ、ＩＣ_５０は９．０ｐＭであった（図７参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３は初代ヒトＢ細胞においてＢＣＲ活性化のすぐ下流でカルシウムシグナル伝達を強力に阻害することができることを示す。

実施例７：初代ヒトＢ細胞におけるリン酸化タンパク質シグナル伝達に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
ＣＲ２依存的ＢＣＲ活性化の下流のシグナル伝達事象をブロックするｍＡｂ １０５３の能力を評価するために、ＰＢＭＣを抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激した後に細胞内フローサイトメトリーによってＢ細胞におけるリン酸化ＥＲＫ１／２（ｐＥＲＫ）およびリン酸化ＡＫＴ（ｐＡＫＴ）のレベルを測定した。

手順
ＰＢＭＣを、ヒト全血から密度勾配遠心分離により単離し、３７℃、５％ＣＯ_２、加湿雰囲気下で２時間インキュベートした。次に、ＰＢＭＣを示された濃度のＣＨＯにより発現されたｍＡｂ １０５３とともに３０分間プレインキュベートした。細胞を３７℃で１０分間、抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激し、固定により停止させ、透過処理を施し、－２０℃で一晩保存した。細胞を、Ｂ細胞を識別するための抗ＣＤ２０－ＰＥ、抗ｐＡＫＴ （ｐＳ４７３）－ＡＬＥＸＡ ６４７および抗ｐＥＲＫ－ＡＬＥＸＡ ４８８で染色した。フローサイトメトリーにより蛍光を評価し、ＣＤ２０＋細胞において正規化％ｐＥＲＫ＋およびｐＡＫＴ＋値を求めた。Ｎ＝４個体、平均±ＳＤ。

結果
ｍＡｂ １０５３レベルの力価調整によってｐＥＲＫ応答の強い阻害が生じ、ＩＣ_５０は２．７ｎＭであった（図８ａ）。同じＰＢＭＣアッセイにおける複合体により刺激されたリン酸化ＡＫＴシグナルの評価では、ｍＡｂ １０５３のＩＣ_５０は３．８ｎＭであった（図８ｂ）。これらのデータを考え合わせると、モデルＣＲ２／ＢＣＲリガンド複合体で刺激した後の、初代ヒトＢ細胞においてシグナル伝達を阻止するｍＡｂ １０５３の能力が示される。

ｍＡｂ １０５３はｐＥＲＫ応答を用量依存的に強く阻害し、ＩＣ_５０は２．７ｎＭであった（図８ａ参照）。ｐＡＫＴシグナル伝達も同様にｍＡｂ １０５３によって阻害され、ＩＣ_５０は３．８ｎＭであった（図８ｂ参照）。

これらのデータは、初代ヒトＢ細胞における、ＢＣＲ活性化の下流のリン酸化タンパク質シグナル伝達を阻止するｍＡｂ １０５３の能力を示す。

実施例８：ＣＤ６９のアップレギュレーションにより決定される初代ヒトＢ細胞の活性化に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
ＣＲ２依存的ＢＣＲ活性化の下流のシグナル伝達事象をブロックするｍＡｂ １０５３の能力を評価するために、ＰＢＭＣを抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激した後に、初代ヒトＢ細胞におけるＣＤ６９（活性化マーカー）の細胞表面発現をフローサイトメトリーによって測定した。

手順
合わせたドナーからの凍結ＰＢＭＣ（ヒト全血から密度勾配遠心分離によって単離）を解凍し、示された濃度のＨＥＫにより発現されたｍＡｂ １０５３またはアイソタイプ対照抗体とともに３７℃、５％ＣＯ２、加湿雰囲気下にて３０分間インキュベートした。細胞を抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激し、さらに４時間インキュベートした後に固定した。細胞を、Ｂ細胞を識別するための抗ＣＤ２０－Ａ６４７、および抗ＣＤ６９－ＰＥで染色した。蛍光をフローサイトメトリーにより評価し、ＣＤ２０＋細胞において正規化ＣＤ６９応答％を決定した。Ｎ＝４の独立評価、平均±ＳＤ。

結果
ｍＡｂ １０５３は、４．４ｎＭのＩＣ_５０でＣＤ６９のアップレギュレーションを強力に阻害したが、アイソタイプ対照抗体はそうではなかった（図９参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３が初代ヒトＢ細胞においてＢＣＲ活性化の下流の細胞表面ＣＤ６９のアップレギュレーションを阻止できることを示す。

実施例９：初代ヒトＢ細胞における抗体分泌に及ぼすｍＡｂ ９９６、ｍＡｂ ９９９およびｍＡｂ １０５３の影響を決定するためにアッセイ
初代ヒトＢ細胞において機能的応答をブロックするｍＡｂ １０５３の能力を評価するために、Ｂ細胞を抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体で刺激した後にＭＳＤによって、初代ヒトＢ細胞における分泌された免疫グロブリンレベルが測定された。

手順
Ｂ細胞を、単一ドナーの、従前に凍結されていてＰＢＭＣ（ヒト全血から密度勾配遠心分離により単離）から、非Ｂ細胞および形質細胞を除去する負の磁選によって単離した。細胞を、培養培地中で、５μｇ／ｍｌのＨＥＫにより発現されたｍＡｂ ９９６、ｍＡｂ ９９９、ｍＡｂ １０５３、アイソタイプ対照抗体とともに、またはｍＡｂを含まずに、３７℃、５％ＣＯ_２、加湿雰囲気下で３０分間プレインキュベートした。Ｂ細胞を、抗ＢＣＲ：Ｃ３ｄｇ複合体、またはＣ３ｄｇを含まない複合体（「Ｃ３ｄｇ非含有」対照）で刺激した。培養培地は、細胞の生存を維持するために最適下限のＩＬ－２１およびＣＤ４０Ｌを含有した。４日後に、細胞上清を採取し、ＭＳＤアッセイキットを用いてＩｇＡをアッセイした。ＩｇＡ濃度を標準曲線から計算し、「Ｃ３ｄｇ非含有」対照に対する増加倍率中央値をＣＲ２依存的活性化ウインドウとして計算した。Ｎ＝１１ドナー、平均±ＳＥ。

結果
ｍＡｂ ９９６、ｍＡｂ ９９９、およびｍＡｂ １０５３は、初代ヒトＢ細胞からのＣ３ｄｇ依存的ＩｇＡ分泌を強力に阻害したが、アイソタイプ対照抗体はそうではなかった（図１０参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ ９９６、ｍＡｂ ９９９、およびｍＡｂ １０５３が初代ヒトＢ細胞において免疫グロブリン分泌のＣ３ｄｇ依存的な機能的生産を阻止できることを示す。

実施例１０および１１：初代ヒト濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響
自己免疫におけるＦＤＣの重要な役割は、ＧＣ／ＥＬＳにおいてコグネイトＢ細胞へ持続的に抗原提示するための、Ｃ３ｄ／ｇオプソニン化抗原へのＣＲ２依存的結合およびＣ３ｄ／ｇオプソニン化抗原の保持である。

実施例１０：初代ヒトＦＤＣへのｍＡｂ １０５３の標的会合を判定するためのアッセイ
この実験は、初代ヒトＦＤＣに対するｍＡｂ １０５３の細胞上の結合親和性を判定した。非標識ｍＡｂ １０５３の力価をＦＤＣ富化ヒト扁桃消化物、次いで、過剰量の蛍光標識ｍＡｂ １０５３で測定した。フローサイトメトリーによって、ＦＤＣを識別し、抗体結合を評価した。

手順
単一ドナーからのヒト扁桃を機械的に破砕し、酵素消化によってＦＤＣを放出させ、これらの消化物から負の磁選によってＣＤ４５を除去した。ＣＤ４５を除去した扁桃消化物を、示された濃度の非標識の、ＣＨＯにより発現されたｍＡｂ １０５３とともに室温で２０分間プレインキュベートした。次に、細胞をフローサイトメトリーによりＦＤＣを識別するための抗体、および飽和濃度のＰＥ標識ｍＡｂ １０５３（ｍＡｂ １０５３－ＰＥ、１μｇ／ｍｌ）とともに３０分間インキュベートした。系統＋細胞は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４５、ＣＤ３１およびＣＤ３４を認識する抗体で識別した。細胞にＦＤＣを識別するためのゲートを設定した（系統－ｇｐ３８＋ＣＤ２１＋（非競合クローンＢｕ３２を使用））。阻害されていないｍＡｂ １０５３－ＰＥ染色の幾何平均を１００％とした。データは４名の独立したドナーの平均±ＳＥである。

結果
ＦＤＣへのｍＡｂ １０５３の標的会合は濃度依存的であり、細胞上の結合曲線から計算したＥＣ_５０は６２．２ｐＭであった（図１１参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３は初代ヒトＦＤＣ上に高親和性でＣＲ２標的を会合させることを示す。

実施例１１：初代ヒトＦＤＣへのＣ３ｄｇリガンドの結合に及ぼすｍＡｂ １０５３の影響を決定するためのアッセイ
この実験は、Ｃ３ｄｇリガンド複合体のヒトＦＤＣへの結合を阻止するｍＡｂ １０５３の能力を決定した。蛍光標識されたストレプトアビジンとビオチン－Ｃ３ｄｇの複合体（組換え）をヒト扁桃消化物とともにインキュベートし、複合体結合をフローサイトメトリーによって評価した。

手順
蛍光標識されたＣ３ｄｇの４量体を、ビオチン化Ｃ３ｄｇおよびストレプトアビジン－ＡＰＣを用いて作出した。複合体は、ビオチン化Ｃ３ｄｇをストレプトアビジン－ＡＰＣとともに４：１比でインキュベートすることによって作出した。

単一ドナーからのヒト扁桃を機械的に破砕し、酵素消化によってＦＤＣを放出させ、これらの消化物から負の磁選によってＣＤ４５を除去した。ＣＤ４５を除去した扁桃消化物を、示された濃度の非標識の、ＣＨＯにより発現されたｍＡｂ １０５３とともに室温で２０分間プレインキュベートした。次に、細胞をフローサイトメトリーによりＦＤＣを識別するための抗体、および１０μｇ／ｍｌ Ｃ３ｄｇ：ストレプトアビジン－ＡＰＣリガンド複合体とともに３０分間インキュベートした。系統＋細胞を、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４５、ＣＤ３１およびＣＤ３４を認識する抗体で識別した。細胞にＦＤＣを識別するためのゲートを設定した（系統－ｇｐ３８＋ＣＤ２１＋（非競合クローンＢｕ３２を使用））。Ｃ３ｄｇ（ＡＰＣ）染色の幾何平均を１００％とした。データは４名の独立したドナーの平均±ＳＥである。

結果
扁桃消化物をｍＡｂ １０５３とともにプレインキュベートすると、リガンド結合が４７．０ｐＭのＩＣ_５０で用量依存的に阻止された（図１２参照）。

これらのデータは、ｍＡｂ １０５３はＣ３ｄｇ－リガンドの初代ヒトＦＤＣへの結合を強力に阻害でき、それにより、補体オプソニン化抗原の保持を妨げることを示す。

生物学的データ
配列
配列番号１： ヒトＣＲ２配列
ISCGSPPPILNGRISYYSTPIAVGTVIRYSCSGTFRLIGEKSLLCITKDKVDGTWDKPAPKCEYFNKYSSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVTFACKTNFSMNGNKSVWCQANNMWGPTRLPTCVSVFPLECPALPMIHNGHHTSENVGSIAPGLSVTYSCESGYLLVGEKIINCLSSGKWSAVPPTCEEARCKSLGRFPNGKVKEPPILRVGVTANFFCDEGYRLQGPPSSRCVIAGQGVAWTKMPVCEEIFCPSPPPILNGRHIGNSLANVSYGSIVTYTCDPDPEEGVNFILIGESTLRCTVDSQKTGTWSGPAPRCELSTSAVQCPHPQILRGRMVSGQKDRYTYNDTVIFACMFGFTLKGSKQIRCNAQGTWEPSAPVCEKECQAPPNILNGQKEDRHMVRFDPGTSIKYSCNPGYVLVGEESIQCTSEGVWTPPVPQCKVAACEATGRQLLTKPQHQFVRPDVNSSCGEGYKLSGSVYQECQGTIPWFMEIRLCKEITCPPPPVIYNGAHTGSSLEDFPYGTTVTYTCNPGPERGVEFSLIGESTIRCTSNDQERGTWSGPAPLCKLSLLAVQCSHVHIANGYKISGKEAPYFYNDTVTFKCYSGFTLKGSSQIRCKADNTWDPEIPVCEKETCQHVRQSLQELPAGSRVELVNTSCQDGYQLTGHAYQMCQDAENGIWFKKIPLCKVIHCHPPPVIVNGKHTGMMAENFLYGNEVSYECDQGFYLLGEKKLQCRSDSKGHGSWSGPSPQCLRSPPVTRCPNPEVKHGYKLNKTHSAYSHNDIVYVDCNPGFIMNGSRVIRCHTDNTWVPGVPTCIKKAFIGCPPPPKTPNGNHTGGNIARFSPGMSILYSCDQGYLLVGEALLLCTHEGTWSQPAPHCKEVNCSSPADMDGIQKGLEPRKMYQYGAVVTLECEDGYMLEGSPQSQCQSDHQWNPPLAVCRSRSLAPVLCGIAAGLILLTFLIVITLYVISKHRARNYYTDTSQKEAFHLEAREVYSVDPYNPAS

配列番号２： ヒトＣＲ２エピトープ
FNKYS

配列番号３： １０５３重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHYSGSTYYNPPLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

配列番号４： １０５３軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISEYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSNLPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

配列番号５： １０５３可変重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSDSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHYSGSTYYNPPLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSS

配列番号６： １０５３可変軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISEYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSNLPITFGGGTKVEIK

配列番号７： １０５３ ＣＤＲＨ１のアミノ酸配列
SDSYYWG

配列番号８： １０５３ ＣＤＲＨ２のアミノ酸配列
SIHYSGSTYYNPPLES

配列番号９： １０５３ ＣＤＲＨ３のアミノ酸配列
EGGPRHGWS

配列番号１０： １０５３ ＣＤＲＬ１のアミノ酸配列
QASQDISEYLN

配列番号１１： １０５３ ＣＤＲＬ２のアミノ酸配列
DASNLET

配列番号１２： １０５３ ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列
QQDSNLPIT

配列番号１３： １０５３重鎖をコードする核酸配列
CAGCTCCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAACCCAGCGAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGAGCGGAGGCAGCATCAGCTCCGACAGCTACTACTGGGGCTGGATTAGGCAGCCTCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGAAGCATCCACTACAGCGGCAGCACCTACTACAACCCACCCCTGGAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTCACAGCAGCCGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGAGGGCGGACCCAGGCACGGCTGGAGCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCAAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGgccGGAGcCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

配列番号１４： １０５３軽鎖をコードする核酸配列
GACATCCAGATGACTCAGTCCCCCTCTAGCCTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGGACATCAGCGAGTACCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGACGCCTCAAACCTCGAGACCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGACAGCAACCTGCCCATCACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

配列番号１５： ９９６重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHNSGSTYYNPPLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

配列番号１６： ９９６軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISTFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSILPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC


配列番号１７： ９９６可変重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHNSGSTY
YNPPLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSS

配列番号１８： ９９６可変軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISTFLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPS
RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSILPITFGGGTKVEIK

配列番号１９： ９９６ ＣＤＲＨ１のアミノ酸配列
SSSYYWG

配列番号２０： ９９６ ＣＤＲＨ２のアミノ酸配列
SIHNSGSTYYNPPLKS

配列番号２１： ９９６ ＣＤＲＨ３のアミノ酸配列
EGGPRHGWS

配列番号２２： ９９６ ＣＤＲＬ１のアミノ酸配列
QASQDISTFLN

配列番号２３： ９９６ ＣＤＲＬ２のアミノ酸配列
DASNLET

配列番号２４： ９９６ ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列
QQDSILPIT

配列番号２５： ９９６重鎖をコードする核酸配列
CAGCTCCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAACCCAGCGAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGAGCGGAGGCAGCATCAGCTCCAGCAGCTACTACTGGGGCTGGATTAGGCAGCCTCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGAAGCATCCACAACAGCGGCAGCACCTACTACAACCCACCCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTCACAGCAGCCGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGAGGGCGGACCCAGGCACGGCTGGAGCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCAAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGgccGGAGcCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

配列番号２６： ９９６軽鎖をコードする核酸配列
GACATCCAGATGACTCAGTCCCCCTCTAGCCTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGGACATCAGCACCTTCCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGACGCCTCAAACCTCGAGACCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGACAGCATCCTGCCCATCACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

配列番号２７： ９９９重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHYSGSTYYNPPLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号２８： ９９９軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASHDISNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSILPITFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

配列番号２９： ９９９可変重鎖のアミノ酸配列
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIHYSGSTY
YNPPLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGGPRHGWSWGQGTLVTVSS

配列番号３０： ９９９可変軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASHDISNFLNWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLETGVPS
RFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQDSILPITFGGGTKVEIK

配列番号３１： ９９９ ＣＤＲＨ１のアミノ酸配列
SSSYYWG

配列番号３２： ９９９ ＣＤＲＨ２のアミノ酸配列
SIHYSGSTYYNPPLES

配列番号３３： ９９９ ＣＤＲＨ３のアミノ酸配列
EGGPRHGWS

配列番号３４： ９９９ ＣＤＲＬ１のアミノ酸配列
QASHDISNFLN

配列番号３５： ９９９ ＣＤＲＬ２のアミノ酸配列
DTSNLET

配列番号３６： ９９９ ＣＤＲＬ３のアミノ酸配列
QQDSILPIT

配列番号３７： ９９９重鎖をコードする核酸配列

CAGCTCCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAACCCAGCGAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGAGCGGAGGCAGCATCAGCTCCAGCAGCTACTACTGGGGCTGGATTAGGCAGCCTCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGAAGCATCCACTACAGCGGCAGCACCTACTACAACCCACCCCTGGAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTCACAGCAGCCGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGGAGGGCGGACCCAGGCACGGCTGGAGCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCAAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGGCCGGAGCCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG

配列番号３８： ９９９軽鎖をコードする核酸配列

GACATCCAGATGACTCAGTCCCCCTCTAGCCTGAGCGCTAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCACGACATCAGCAACTTCCTGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGACACCTCAAACCTCGAGACCGGCGTGCCTAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGATATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGGACAGCATCCTGCCCATCACCTTCGGCGGAGGCACCAAGGTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC

配列番号３９：
MISCGSPPPIL

配列番号４０：
MISCGSPPPILNGRISY

配列番号４１：
YSTPIAVG

配列番号４２：
YSTPIAVGT

配列番号４３：
YSTPIAVGTVIRYSCSGT

配列番号４４：
TVIRYSCSGT

配列番号４５：
TVIRYSCSGTF

配列番号４６：
VIRYSCSGT

配列番号４７：
FRLIGEKS

配列番号４８：
FRLIGEKSL

配列番号４９：
FRLIGEKSLL

配列番号５０：
RLIGEKSL

配列番号５１：
RLIGEKSLL

配列番号５２：
IGEKSLL

配列番号５３：
GEKSLLCITKDKVDGTWDKPA

配列番号５４：
CITKDKVDGT

配列番号５５：
CITKDKVDGTWDKPAPKCEY

配列番号５６：
KVDGTWDKPAPKCEY

配列番号５７：
WDKPAPKCEY

配列番号５８：
FNKYSSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVT

配列番号５９：
FNKYSSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVTF

配列番号６０：
SSCPEPIVPGGYKIRGSTPYRHGDSVT

配列番号６１：
YKIRGSTPYRHGDSVT

配列番号６２：
YKIRGSTPYRHGDSVTF

配列番号６３：
KIRGSTPYRHGDSVT

配列番号６４：
KIRGSTPYRHGDSVTF

配列番号６５：
FACKTNF

配列番号６６：
SMNGNKSVW

配列番号６７：
SMNGNKSVWC



配列番号６８：
SMNGNKSVWCQA

配列番号６９：
SMNGNKSVWCQANNM

配列番号７０：
SMNGNKSVWCQANNMWGPTRL

配列番号７１：
SMNGNKSVWCQANNMWGPTRLPTC

配列番号７２：
NNMWGPTRL

配列番号７３：
NNMWGPTRLPTCV

配列番号７４：
VSVFPLE

Claims (92)

1. ヒトＣＲ２に結合し、ヒトＣＲ２の２つの短い補体反復ドメインの間のリンカー内および／またはＣ末端近傍の１以上の残基に結合する、ＣＲ２結合タンパク質。
2. ヒトＣＲ２の、配列番号２および／または配列番号７１内の１以上のアミノ酸残基に結合する、請求項１に記載のＣＲ２結合タンパク質。
3. ヒトＣＲ２の、配列番号２内の１以上のアミノ酸残基に結合する、請求項２に記載のＣＲ２結合タンパク質。
4. ヒトＣＲ２の、配列番号７１内の１以上のアミノ酸残基に結合する、請求項２に記載のＣＲ２結合タンパク質。
5. ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）を重水素交換から保護する、ＣＲ２結合タンパク質。
6. ＨＤＸ－ＭＳ分析においてＣＲ２の残基６６～７０（配列番号２）および／または残基１０４～１２７（配列番号７１）を重水素交換から保護する、ＣＲ２結合タンパク質。
7. 抗体である、請求項１～６のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
8. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項７に記載のＣＲ２結合タンパク質。
9. 前記モノクローナル抗体がＩｇＧ１またはＩｇＧ４である、請求項８に記載のＣＲ２結合タンパク質。
10. 前記モノクローナル抗体がＩｇＧ１である、請求項９に記載のＣＲ２結合タンパク質。
11. 前記抗体のＡＤＣＣおよび／または補体活性化またはエフェクター機能が低減されるような定常領域を含んでなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
12. 前記定常領域が２３５および２３７（ＥＵインデックスナンバリング）の位置にアラニン残基による置換を含んでなる、請求項１１に記載のＣＲ２結合タンパク質。
13. 前記定常領域が２３４および２３５（ＥＵインデックスナンバリング）の位置にアラニン残基による置換を含んでなる、請求項１１に記載のＣＲ２結合タンパク質。
14. ヒト型、ヒト化型またはキメラ型である、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
15. ヒト型である、請求項１４に記載のＣＲ２結合タンパク質。
16. 以下のＣＤＲ：配列番号５からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号６からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
17. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
18. その軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項１７に記載のＣＲ２結合タンパク質。
19. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその重鎖可変領域に、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
20. その重鎖可変領域に配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項１９に記載のＣＲ２結合タンパク質。
21. 配列番号６に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～２０のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
22. 配列番号５に示されるような可変重鎖鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～２１のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
23. 配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
24. 配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１２または１４～２３のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
25. 以下のＣＤＲ：配列番号１７からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号１８からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
26. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその軽鎖可変領域に配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１５または２５のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
27. その軽鎖可変領域に配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項２６に記載のＣＲ２結合タンパク質。
28. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその重鎖可変領域に配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１５または請求項２５～２７のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
29. その重鎖可変領域に配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項２８に記載のＣＲ２結合タンパク質。
30. 配列番号１８に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または２５～２９のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
31. 配列番号１７に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または２５～３０のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
32. 配列番号１６に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または２５～３１のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
33. 配列番号１５に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１２、１４、１５または２５～３１のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
34. 以下のＣＤＲ：配列番号２９からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３および／または配列番号３０からのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３のいずれか１つまたは組合せを含んでなる、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
35. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその軽鎖可変領域に配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
36. その軽鎖可変領域に配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項３５に記載のＣＲ２結合タンパク質。
37. 前記ＣＲ２結合タンパク質がその重鎖可変領域に配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３、またはこれらのＣＤＲの１つもしくは総ての変異体を含んでなり、前記ＣＤＲ変異体は１、２または３個のアミノ酸修飾を有する、請求項１～１５、３４、３５または３６のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
38. その重鎖可変領域に配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項３７に記載のＣＲ２結合タンパク質。
39. 配列番号３０に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または３４～３８のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
40. 配列番号２９に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または３４～３９のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
41. 配列番号２８に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５または３４～４０のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
42. 配列番号２７に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１２、１４、１５または３４～４１のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
43. 抗原結合タンパク質－ＣＲ２相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）が０．１～１ｎＭである、請求項１～４２のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
44. ＣＲ２との結合に関して請求項１～４３のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質と競合するＣＲ２結合タンパク質。
45. Ｃ３ｄ／ｇ被覆複合体との相互作用をブロックする、請求項１～４４のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
46. ＢＣＲ：ＣＲ２の共連結の下流のシグナル伝達、活性化および抗体生産をブロックし、またＣ３ｄ／ｇ抗原のＦＤＣへの結合も阻止する、請求項４５に記載のＣＲ２結合タンパク質。
47. 軽鎖可変領域に配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる抗体。
48. その重鎖可変領域に配列番号７に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ２および配列番号９に示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ３を含んでなる、請求項４７に記載の抗体。
49. 配列番号６に示されるような可変軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項４７または請求項４８に記載の抗体。
50. 配列番号５に示されるような可変重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の抗体。
51. 配列番号４に示されるような軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項４７～５０のいずれか一項に記載の抗体。
52. 配列番号３に示されるような重鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項４７～５１のいずれか一項に記載の抗体。
53. 請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質をコードする核酸分子。
54. 配列が重鎖をコードする配列番号１３および／または軽鎖をコードする配列番号１４を含んでなる、請求項５３に記載の核酸分子。
55. 配列が重鎖をコードする配列番号２５および／または軽鎖をコードする配列番号２６を含んでなる、請求項５３に記載の核酸分子。
56. 配列が重鎖をコードする配列番号３７および／または軽鎖をコードする配列番号３８を含んでなる、請求項５３に記載の核酸分子。
57. 請求項５３～５６のいずれか一項に定義される核酸分子を含んでなる発現ベクター。
58. 請求項５７に定義される発現ベクターを含んでなる、組換え宿主細胞。
59. 請求項５８に定義される組換え宿主細胞によって発現される、ＣＲ２結合タンパク質。
60. ＣＲ２結合タンパク質を生産するための方法であって、ＣＲ２結合タンパク質を生産するための培地中で請求項５８に記載の組換え宿主細胞を培養する工程および前記ＣＲ２結合タンパク質を単離または精製する工程を含んでなる、方法。
61. 請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質および薬学上許容可能な担体または賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
62. 療法において使用するための請求項１～５２のいずれか一項に記載のＣＲ２結合タンパク質。
63. 必要とする対象における自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる、方法。
64. 前記自己免疫性および／または炎症性病態がシェーグレン症候群である、請求項６３に記載の治療のための方法。
65. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が関節リウマチである、請求項６３に記載の治療のための方法。
66. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が全身性紅斑性狼瘡である、請求項６３に記載の治療のための方法。
67. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が血管炎である、請求項６３に記載の治療のための方法。
68. 前記血管炎が抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎である、請求項６７に記載の治療のための方法。
69. 必要とする対象における感染性疾患の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる、方法。
70. 前記感染性疾患がＨＩＶである、請求項６９に記載の治療のための方法。
71. 必要とする対象において免疫化に対する免疫応答を増幅するための方法であって、前記対象に治療上有効な量の請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる、方法。
72. 必要とする対象におけるＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療のための方法であって、前記対象に治療上有効な量の請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質を投与することを含んでなる、方法。
73. 自己免疫性および／または炎症性病態の治療のための薬剤の製造における、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質の使用。
74. 前記自己免疫性および／または炎症性病態がシェーグレン症候群である、請求項７３に記載の使用。
75. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が関節リウマチである、請求項７３に記載の使用。
76. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が全身性紅斑性狼瘡である、請求項７３に記載の使用。
77. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が血管炎である、請求項７３に記載の使用。
78. 前記血管炎が抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎である、請求項７７記載の使用。
79. 感染性疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質の使用。
80. 前記感染性疾患がＨＩＶである、請求項７９に記載の使用。
81. 免疫化に対する免疫応答を増幅するためのワクチンの製造における、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質の使用。
82. ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療のための薬剤の製造における、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質の使用。
83. 自己免疫性および／または炎症性病態の治療における使用のための、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質の使用。
84. 前記自己免疫性および／または炎症性病態がシェーグレン症候群である、請求項８３に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
85. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が関節リウマチである、請求項８３に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
86. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が全身性紅斑性狼瘡である、請求項８３に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
87. 前記自己免疫性および／または炎症性病態が血管炎である、請求項８３に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
88. 前記血管炎が抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎である、請求項８７に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
89. 感染性疾患の治療において使用するための、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質。
90. 前記感染性疾患がＨＩＶである、請求項８９に記載の使用のためのＣＲ２結合タンパク質。
91. ＥＢＶに関連する悪性腫瘍の治療における使用のための、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質。
92. 免疫化に対する免疫応答の増幅における使用のための、請求項１～５２のいずれか一項に定義されるＣＲ２結合タンパク質。

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