JP2022544075A - 改良された免疫療法のための細胞およびその使用 - Google Patents

改良された免疫療法のための細胞およびその使用 Download PDF

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Abstract

本開示の主題は、改善された免疫療法のための細胞および組成物ならびにこのような細胞および組成物を使用する方法を提供する。本開示の主題は、リガンド認識受容体（例えば、抗原認識受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ））およびＩｇＧ分解酵素またはその断片を含む細胞に関する。ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧを迅速に切断する。ＩｇＧ分解酵素は、宿主体液性応答に対する生体分子シールドとしての役割を果たす。細胞は、宿主体液性応答（例えば、抗体に駆動される宿主体液性応答）に対する耐性を増加させ、これにより、細胞の持続性の延長が可能になり、細胞活性の増強がもたらされる。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１９年８月１日に出願された米国仮特許出願番号第６２／８８１，４６７号に対する優先権を主張する。
助成金情報
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）の国立がん研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から助成金番号Ｐ３０ ＣＡ００８７４７により政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
配列表
本出願は、ＥＦＳ－ＷｅｂによってＡＳＣＩＩ形式で提出され、これにより参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２０年７月２８日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、「０７２７３４＿１１０９＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称であり、５２，６４７バイトのサイズである。
１．緒言
本開示の主題は、改善された免疫療法のための細胞および組成物ならびにこのような細胞および組成物を使用する方法を提供する。本開示の主題は、リガンド認識受容体（例えば、抗原認識受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ））およびＩｇＧ分解酵素またはその断片を含む細胞に関する。ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧを迅速に切断する。ＩｇＧ分解酵素は、宿主体液性応答に対する生体分子シールドとしての役割を果たす。細胞は、宿主体液性応答（例えば、抗体に駆動される宿主体液性応答）に対する耐性を増加させ、これにより、細胞の持続性の延長が可能になり、細胞活性の増強がもたらされる。
２．発明の背景
合成免疫学および合成生物学では、免疫細胞を利用して腫瘍細胞を死滅させるか、または他の重要な疾患を処置する。合成免疫学および生物学において急速に成長した領域は、養子細胞移入、幹細胞移植、臓器移植、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集、遺伝子治療、およびＣＡＲ－Ｔ細胞療法の使用におけるものである。変更されたか、または操作された細胞が対象中に導入されるいずれの状況においても、宿主（対象）は、その細胞または組織に対する免疫応答を開始させる可能性があり、これは、その細胞または組織が外来のものであるか、または宿主内には通常見られない外来の遺伝子およびタンパク質を含有するためである。この免疫認識の結果は、治療効果の中和、組織もしくは細胞の拒絶、および／または治療意図の失敗などであり得る。したがって、宿主体液性応答に対する耐性の増加した操作された細胞が必要である。
３．発明の概要
本開示の主題は、（ａ）リガンド認識受容体、および（ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片を含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は分泌される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は膜結合性である。ある特定の実施形態では、細胞は、（ｃ）ＩｇＧ分解酵素に付着した膜貫通ドメインをさらに含む。膜貫通ドメインは、ＩｇＧ分解酵素のＣ末端に付着していてもよい。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素に付着した膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＳ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＺ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｅｑｕｉのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＥ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のエンドグリコシダーゼ（ＥｎｄｏＳ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の連鎖球菌システインプロテイナーゼ（ＳｐｅＢ）から選択される。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、外因性または内因性である。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、組換え発現される。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ベクターから発現される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ベクターから発現される。
ある特定の実施形態では、細胞は、応答性細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、応答性細胞、例えば、免疫応答性細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、活性化可能な細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、幹細胞、正常組織細胞（例えば、腎臓、肝臓、肺、骨髄、または膵臓に由来する）およびそれらの組合せから選択される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、抗原に結合する。抗原は、腫瘍抗原、病原体抗原、正常細胞抗原、ＨＬＡ抗原または同種抗原であってもよい。ある特定の実施形態では、抗原は、正常細胞抗原である。ある特定の実施形態では、同種抗原は、マイナー組織適合性同種抗原である。
ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９である。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ＣＡＲである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、またはこれらの組合せを含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激ドメインは、４－１ＢＢポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素はＩｇＧを切断し、それによって、ＩｇＧ抗体が細胞を死滅させるのを防ぐ。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素はＩｇＧを切断し、それによって、ＩｇＧの残りの断片の細胞への結合を保持させ、細胞を１つまたは複数の細胞傷害性抗体から保護する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の細胞傷害性抗体はＩｇＧと同じ部位に結合し、細胞を死滅させる。したがって、このプロセスは、保護シールドを生じる。
本開示の主題は、本明細書に記載の細胞を含む組成物も提供する。ある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物である。ある特定の実施形態では、組成物は、新生物を処置するためのものである。
さらに、本開示の主題は、本明細書に開示される細胞を生成するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、細胞内に、（ａ）リガンド認識受容体をコードする第１のポリヌクレオチド、および（ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片をコードする第２のポリヌクレオチドを導入するステップを含む。ある特定の実施形態では、（ａ）および／または（ｂ）は、遺伝的に細胞に導入される。ある特定の実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、プロモーターエレメントに必要に応じて作動可能に連結している。ある特定の実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、プロモーターエレメントに必要に応じて作動可能に連結している。ある特定の実施形態では、第１および第２のポリヌクレオチドの一方または両方は、ベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、第１および第２のポリヌクレオチドは、２つの異なるベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、ｍＲＮＡ分子内にコードされる。
本開示の主題は、核酸組成物をさらに提供する。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、（ａ）リガンド認識受容体をコードする第１のポリヌクレオチドおよび（ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、プロモーターエレメントに作動可能に連結している。ある特定の実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、プロモーターエレメントに作動可能に連結している。ある特定の実施形態では、第１および第２のポリヌクレオチドの一方または両方は、ベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、第１および第２のポリヌクレオチドは、２つの異なるベクター中に含まれる。ある特定の実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、ベクターは、ｍＲＮＡ分子内にコードされる。
また、本明細書に記載の核酸組成物を含むベクターも提供される。
本開示の主題は、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載の核酸組成物、または本明細書に記載のベクターを含むキットをさらに提供する。ある特定の実施形態では、キットは、新生物、病原体感染、および／または自己免疫障害を処置および／または防止するための書面の指示をさらに含む。
本開示の主題は、様々な方法も提供する。本開示の主題は、対象における腫瘍負荷を低減する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、対象に、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載の核酸組成物、または本明細書に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、対象において、腫瘍細胞の数を低減する、腫瘍サイズを低下させる、および／または腫瘍を根絶する。
本開示の主題は、新生物、病原体感染、および／または自己免疫障害を処置および／または防止する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、対象に、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載の核酸組成物、または本明細書に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む。
本開示の主題は、新生物、病原体感染、および／または自己免疫障害を有する対象の生存時間を延長する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、対象に、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載の核酸組成物、または本明細書に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む。
ある特定の実施形態では、新生物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、乳がん、卵巣がん、中皮腫、神経膠芽腫、結腸直腸がん、および膵臓がんから選択される。
本開示の主題は、臓器移植を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する方法を提供する。ある特定の実施形態では、移植は、同種異系移植（同種移植）である。ある特定の実施形態では、対象は、臓器移植前に、細胞、組成物、または核酸組成物を投与される。
本開示の主題は、細胞療法を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する方法をさらに提供する。ある特定の実施形態では、細胞および／または組織は、自家または同種異系である。ある特定の実施形態では、細胞および／または組織は、細胞療法において使用される。
ある特定の実施形態では、本方法は、本明細書に記載の細胞、本明細書に記載の組成物、本明細書に記載の核酸組成物、または本明細書に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む。
４．図面の簡単な説明
図１Ａおよび１Ｂは、本開示の主題のある特定の実施形態に従うベクターおよび細胞を示す。図１Ａは、本開示の主題のある特定の実施形態に従うベクターおよび細胞を示し、例えば、ＩｇＧ分解酵素は細胞上に存在する。図１Ｂは、本開示の主題のある特定の実施形態に従うベクターおよび細胞を示し、例えば、ＩｇＧ分解酵素は細胞から分泌される。
図２は、哺乳類細胞におけるＩｄｅＳ発現を示す。ＨＥＫ２９３ｔ細胞に、ＩｄｅＳの膜結合（ＩｄｅＳ－ｔｍ）および分泌（ＩｄｅＳ－ｓｅｃ）バージョンを一過的にトランスフェクトした。細胞溶解物および上清液は、抗ＨＡ抗体を使用してウエスタンイムノブロットによって分析し、ＩｄｅＳタンパク質をそれぞれ、細胞または分泌液中で検出した。形質導入されていないＨＥＫ２９３ｔ細胞は、ＩｄｅＳタンパク質を示さなかった。（各ゲルの左のレーンは分子量マーカーである）。
図３Ａ～３Ｃは、経時的に細胞で発現されたＩｄｅＳ切断活性を示す。ＨＥＫ ２９３ｔ細胞にＩｄｅＳ－ｔｍを一過的にトランスフェクトした。図３Ａは、トランスフェクションの４８時間後を示し、ここで、ＩｇＧを２４ウェルプレートのウェルに添加し、次いで、様々な時点で取り除き、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液を使用してクエンチした。試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。図３Ｂは、クマシーで染色したゲルを示す。切断されたＩｇは５分以内に出現し、経時的に増加した。図３Ｃは、抗ヒトＦｃ特異的抗体によるブロットを示す。Ｆｃ断片としての切断されたＩｇは５分以内に出現し、経時的に増加した。
図４Ａおよび４Ｂは、ＩｄｅＳによる切断を示す。ＥＬＩＳＡベースのアッセイを使用して、ＩｄｅＳによるＩｇＧの切断の程度を分析した。図４Ａは、組換えＩｄｅＳを使用するアッセイの標準曲線による検証を示す。図４Ｂは、様々な時点での、ウエスタンイムノブロットによるＨＥＫ２９３ｔ細胞におけるＩｄｅＳの発現およびＥＬＩＳＡによって評価した切断活性の確認を示す。
図５Ａ～５Ｂは、細胞から分泌されたＩｄｅＳが、隣接する細胞に結合した抗体を切断することができることを示す。Ｒａｊｉ細胞をリツキシマブと共に３０分間インキュベートした。次いで、Ｒａｊｉ細胞を、１９ＢＢｚ構築物単独、ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ、またはＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚを発現するＨＥＫ２９３ｔと共に一晩共培養した。切断の程度を、標識した抗Ｆｃ二次ａｂを使用して評価し、フローサイトメトリーによって測定した。図５Ａは、Ｒａｊｉ細胞の抗Ｆｃ蛍光の程度を示すヒストグラムを表す。図５Ｂは、各ヒストグラムに関する平均蛍光強度（ＭＦＩ）に関する棒グラフを示す。
図６は、本開示の主題の細胞による腫瘍細胞の殺滅を示す。形質導入されていないＴ細胞、１９ＢＢｚ ＣＡＲおよび膜結合ＩｄｅＳを含むＴ細胞、１９ＢＢｚ ＣＡＲを含み、かつＩｄｅＳを分泌するＴ細胞、ならびに１９ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を、ホタルルシフェラーゼを発現するＲａｊｉ細胞と共に１８時間インキュベートした。Ｒａｊｉ細胞の細胞生存率を、ルシフェリンを添加し、バイオルミネセンスを測定することによって評価した。ＩｄｅＳでシールドしたＣＡＲ Ｔ細胞は、シールドされていないＣＡＲ Ｔ細胞と同程度に機能的に活性であった。
図７は、本開示の主題の細胞が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に対して保護されたことを示す。形質導入されていないＴ細胞、１９ＢＢｚ ＣＡＲおよび膜結合ＩｄｅＳを含むＴ細胞、１９ＢＢｚ ＣＡＲを含み、かつＩｄｅＳを分泌するＴ細胞、ならびに１９ＢＢｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を、様々な濃度のウサギ抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）で処置し、その後、ウサギ血清を添加し、１時間インキュベートした。細胞生存率をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏによって測定した。１９ＢＢｚ ＣＡＲおよび膜結合ＩｄｅＳを含むＴ細胞ならびに１９ＢＢｚ ＣＡＲを含み、かつＩｄｅＳを分泌するＴ細胞は、ＩｇＧのＦｃ断片を切断して除去し、よって、ＣＤＣを回避し、生存したままであった。
図８は、本開示の主題の細胞の例示的な作用機序を示す。ＩｇＧ抗体は細胞表面抗原および受容体に結合し、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよびオプソニン作用によって細胞死をもたらす。本開示の主題の細胞は、ヒンジ領域の下でＩｇＧを切断し、Ｆｃ断片を放出する酵素であるＩｄｅＳを発現する。本開示の主題の細胞は、Ｆ（ａｂ’）２断片で被覆されたままであり、さらなる抗体が結合するのを妨げる。
図９は、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞の活性を示す。ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩｇＧ Ｆｃを切断し、Ｆ（ａｂ’）２シールドを維持した。ＣＡＲ Ｔ細胞を１μｇ／ｍＬの抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）で処置し、一晩インキュベートした。細胞を洗浄し、抗Ｆｃ（上）または抗Ｆａｂ（下）標識抗体のいずれかで分析した。蛍光強度の中央値を右側の棒グラフにプロットした。
図１０は、本開示の細胞が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対して保護されたことを示す。ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、ＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、およびＩｄｅＳを有さない１９ＢＢｚ Ｔ細胞を様々な用量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）で処置し、次に、ヒトＰＢＭＣで処置した。ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞は両方とも、ＩｄｅＳを有さない１９ＢＢｚ Ｔ細胞と比較して、溶解から保護された。
図１１Ａ～１１Ｃは、本開示の細胞が、腎臓移植患者由来の血清中ＩｇＧを切断することができ（ｃａｎ ｃｌｅａｖｅｄ）、ＣＤＣから保護したことを示す。図１１Ａは、拒絶を引き起こす抗ＨＬＡ抗体を含有する腎臓移植患者（患者２）に由来する血清が、Ａ０２＋細胞に結合することが、フローサイトメトリーによって示されたことを示す。図１１Ｂは、患者２由来の血清が、フローサイトメトリーによって検証されたように、Ａ０２＋ ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞によって切断されたことを示す。図１１Ｃは、Ａ０２＋ ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞が、患者２の血清によって媒介される補体殺滅（ＣＤＣ）からも保護されたことを示す。
図１２は、本開示の細胞が、ｉｎ ｖｉｖｏでヒトポリクローナルＩｇＧを切断したことを示す。ヒトＴ細胞に、ＩｄｅＳ ＣＡＲを有さない１９ＢＢｚ（左から１～２番目のレーン）またはＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ ＣＡＲ（膜貫通形態）（左から３～５番目のレーン）およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ（分泌形態）（左から６～８番目のレーン）を形質導入した。ＣＡＲ Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにｉ．ｐ．注射し、２４時間後に、ヒトポリクローナルＩｇＧもｉ．ｐ．注射した。ＩｇＧの切断は、ＰＢＳを使用してｉｐ洗浄を実施し、磁気プロテインＧビーズを使用して試料を精製し、抗ヒトＦｃ特異的ＨＲＰ二次抗体を使用してウエスタンブロットによって分析することによって評価した。未切断の重鎖は、５５ｋＤａ付近で観察することができ（９番目のレーン）、一方、切断されたＦｃ断片は、２５ｋＤａ付近に存在する（矢印）。
５．発明の詳細な説明
例として与えられるが、本開示の主題を記載された特定の実施形態に限定することを意図するものではない、以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて理解することができる。
本開示の主題は、リガンド認識受容体（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲ）およびＩｇＧ分解酵素またはその断片を含む遺伝子改変された免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を含む細胞、ならびにこのような細胞を含む組成物を提供する。本開示の主題は、このような細胞を生成する方法、ならびにこのような細胞およびそれらを含む組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅｒｅｏｆ）を使用する方法も提供する。本開示の主題は、対象における腫瘍負荷を低減するための、新生物、病原体感染、および／もしくは自己免疫障害を有する対象の生存時間を延長するための、新生物もしくは他の疾患／障害を処置および／もしくは防止するための、自己免疫疾患を処置および／もしくは防止するための、ならびに／または対象において細胞療法に使用される細胞および／もしくは組織の抗体媒介性拒絶を低減および／もしくは防止するための、このような細胞および組成物の使用も提供し、例えば、対象は、臓器移植または前記細胞療法を受ける。
本開示の主題は、少なくとも部分的に、ＩｇＧ分解酵素、例えば、ＩｄｅＳが、ＩｇＧを送達および切断することができ、それによって、細胞の宿主体液性応答に対する耐性を増加させることができ、これにより、細胞の持続性の延長および細胞のより強力な活性（例えば、抗腫瘍活性）がもたらされるという発見に基づく。細胞の持続性の延長は、このような細胞を含む療法、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の費用対効果を改善することもできる。
本開示の主題の非限定的な実施形態は、本明細書および実施例によって記載される。
本開示の主題の明確化のためであって、限定としてではなく、詳細な説明は、以下の下位項目に分けられる：
５．１．定義；
５．２．ＩｇＧ分解酵素；
５．３．抗原リガンド認識受容体
５．４．細胞；
５．５．組成物およびベクター；
５．６．ポリペプチドおよびアナログ；
５．７．投与；
５．８．製剤；
５．９．使用方法；ならびに
５．１０．キット。
５．１．定義
別段に規定されていなければ、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、当業者によって通常理解される意味を有する。以下の参考文献は、当業者に、本開示の主題において使用される用語の多くの一般的定義を提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （２ｎｄ ｅｄ． １９９４）；Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．， １９８８）；Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ５ｔｈ Ｅｄ．， Ｒ． Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ （１９９１）；およびＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ， Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９９１）。
本明細書で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者によって決定される特定の値に対して許容される誤差範囲内を意味し、これは、その値が測定または決定される方法、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野の実践ごとに、３または３を超える標準偏差内を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、例えば、最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に、生物系またはプロセスに関して、この用語は、値の１桁の範囲内、例えば、５倍以内または２倍以内を意味し得る。
「免疫応答性細胞」とは、免疫応答において機能する細胞または前駆体、またはその子孫を意味する。ある特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、リンパ系列の細胞または骨髄系列の細胞である。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、Ｂ細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る幹細胞（例えば、人工多能性幹細胞）が挙げられる。骨髄系列の細胞の非限定的な例としては、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、および骨髄細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。
「免疫応答性細胞を活性化する」とは、免疫応答の開始をもたらす細胞におけるタンパク質発現のシグナル伝達または変化の誘導を意味する。例えば、ＣＤ３鎖が、リガンド結合および免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＡＭ）に応答してクラスターを形成する場合、シグナル伝達カスケードが生じる。ある特定の実施形態では、内因性ＴＣＲまたは外因性ＣＡＲが抗原に結合する場合、結合受容体付近に多くの分子（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζなど）がクラスター形成することを含む免疫シナプスの形成が生じる。膜結合シグナル伝達分子のこのようなクラスター形成は、ＣＤ３鎖内に含有されるＩＴＡＭモチーフがリン酸化されるのを可能にする。このリン酸化は、次に、ＮＦ－κＢおよびＡＰ－１などの転写因子を最終的に活性化するＴ細胞活性化経路を開始する。これらの転写因子は、Ｔ細胞の全般的遺伝子発現を誘導し、Ｔ細胞媒介性免疫応答を開始するために、マスター調節因子Ｔ細胞タンパク質（ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）の増殖および発現のためのＩＬ－２産生を増加させる。
「免疫応答性細胞を刺激する」とは、強力かつ持続性の免疫応答をもたらすシグナルを意味する。様々な実施形態では、これは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）活性化後に起こるか、または、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－ｌＢＢ）、ＯＸ４０、ＣＤ４０およびＩＣＯＳを含むがこれらに限定されない受容体を介して同時に媒介される。複数の刺激シグナルを投与されることは、強力かつ長期Ｔ細胞媒介性免疫応答を開始するのに重要であり得る。Ｔ細胞は即座に阻害され、抗原に対して応答できなくなり得る。これらの共刺激シグナルの作用は様々であり得るが、これらは一般的に、遺伝子発現の増加をもたらし、完全かつ持続的な根絶のために抗原に強く応答する、長期生存性、増殖性、かつ抗アポトーシス性のＴ細胞を生成する。
用語「抗原認識受容体」は、本明細書で使用される場合、抗原への結合に応答して、免疫または免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することが可能である受容体を指す。
抗原結合性断片は、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦａｂを含む。無傷抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）２、およびＦａｂ断片。
ある特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に接続した少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略される）および重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略される）および軽鎖定常ＣＬ領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的である領域が点在した、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に、以下の順に配列した３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ４ｔｈ Ｕ． Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （１９８７）を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域に３つの重鎖および３つの軽鎖ＣＤＲまたはＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗体の抗原またはエピトープへの結合のための接触残基の大多数を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔシステムを使用して描写される（Ｋａｂａｔ， Ｅ． Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１－３２４２）。
本明細書で使用される場合、用語「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するために共有結合により連結された免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。ＶＨおよびＶＬは、直接的に接合されるか、またはペプチドをコードするリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって接合されるかのいずれかであり、これにより、ＶＨのＮ末端がＶＬのＣ末端に接続するか、またはＶＨのＣ末端がＶＬのＮ末端に接続する。リンカーは通常、可撓性に関してグリシンリッチであり、および可溶性に関してセリンまたはトレオニンリッチである。定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８５：５８７９－５８８３， １９８８）によって記載されるＶＨおよびＶＬコード配列を含む核酸から発現され得る。また、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号および同第４，９５６，７７８号；ならびに米国特許公開第２００５０１９６７５４号および同第２００５０１９６７５４号を参照されたい。阻害活性を有するアンタゴニストのｓｃＦｖが記載されている（例えば、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｈｙｒｂｉｄｏｍａ （Ｌａｒｃｈｍｔ） ２００８ ２７（６）：４５５－５１；Ｐｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃａｃｈｅｘｉａ Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ Ｍｕｓｃｌｅ ２０１２ Ａｕｇｕｓｔ １２；Ｓｈｉｅｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｕｎｏｌ２００９ １８３（４）：２２７７－８５；Ｇｉｏｍａｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２００７ ９７（６）：９５５－６３；Ｆｉｆｅ ｅｔａ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｓｔ ２００６ １１６（８）：２２５２－６１；Ｂｒｏｃｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９７ ３（３）：１７３－８４；Ｍｏｏｓｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９５ ２（１０）：３１－４０を参照されたい）。刺激活性を有するアゴニストのｓｃＦｖが記載されている（例えば、Ｐｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂｉｏｉ Ｃｈｅｒｎ ２００３ ２５２７８（３８）：３６７４０－７；Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １９９７ １５（８）：７６８－７１；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ１９９７ １７（５－６）：４２７－５５；Ｈｏ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＣｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ ２００３ １６３８（３）：２５７－６６を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、結合強度の尺度を意味する。親和性は、抗体結合部位（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｓｉｔｅ）と抗原決定基の間の立体化学的適合の密接度、これらの間の接触領域のサイズ、ならびに／または荷電基および疎水性基の分布に依存し得る。本明細書で使用される場合、用語「親和性」は、可逆的複合体形成後の抗原－抗体結合の強度を指す「アビディティ」も含む。抗原に対する抗体の親和性を計算するための方法は当技術分野で公知であり、様々な抗原結合実験、例えば、機能的アッセイ（例えば、フローサイトメトリーアッセイ）を含むがこれらに限定されない。
用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、本明細書で使用される場合、免疫または免疫応答細胞を活性化または刺激することが可能である細胞内シグナル伝達ドメイン、および膜貫通ドメインに融合した細胞外抗原結合ドメインを含む分子を指す。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖは、抗体の可変重鎖および軽鎖領域に融合することに由来し得る。あるいはまたはさらに、ｓｃＦｖは、Ｆａｂに由来し得る（抗体に由来する代わりに、例えば、Ｆａｂライブラリーから得られた）。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、膜貫通ドメインに融合し、次いで、細胞内シグナル伝達ドメインに融合する。
本明細書で使用される場合、用語「核酸分子」は、目的のポリペプチド（例えば、ＩＬ－３６ポリペプチド）またはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。このような核酸分子は、内因性核酸配列と１００％相同であるか、またはそれと同一である必要はないが、実質的同一性を示し得る。内因性配列に対する「実質的同一性」または「実質的相同性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることが可能である。「ハイブリダイズする」とは、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）、またはその部分間で二本鎖分子を形成する対を意味する。（例えば、Ｗａｈｌ， Ｇ． Ｍ． ａｎｄ Ｓ． Ｌ． Ｂｅｒｇｅｒ （１９８７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ， Ａ． Ｒ． （１９８７） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． １５２：５０７を参照されたい）。
例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常、約７５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび約７５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、例えば、約５００ｍＭ未満のＮａＣｌおよび約５０ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、または約２５０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび約２５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムである。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えば、ホルムアミドの非存在下で得ることができるが、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、例えば、少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含む。ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの包含または排除などの追加のパラメーターを変更することは、当業者に周知である。様々なレベルのストリンジェンシーが、必要とされる場合、これらの様々な条件を組み合わせることによって達成される。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中３０℃で行う。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性したサケの精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中３７℃で行う。ある特定の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中４２℃で行う。これらの条件に関する有用な変動は、当業者には容易に明らかである。
ほとんどの適用では、ハイブリダイゼーションの後の洗浄ステップも、ストリンジェンシーが異なる。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度および温度によって定義することができる。上記のように、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度を低下させること、または温度を上昇させることによって高めることができる。例えば、洗浄ステップに対するストリンジェントな塩濃度は、約３０ｍＭ未満のＮａＣｌおよび約３ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウム、例えば、約１５ｍＭ未満のＮａＣｌおよび約１．５ｍＭ未満のクエン酸三ナトリウムであり得る。洗浄ステップに対するストリンジェントな温度条件は、通常、少なくとも約２５℃、少なくとも約４２℃、または少なくとも約６８℃の温度を含む。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中２５℃で行う。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中４２℃で行う。ある特定の実施形態では、洗浄ステップは、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中６８℃で行う。これらの条件に関する追加の変動は、当業者には容易に明らかである。ハイブリダイゼーション技法は、当業者に周知であり、例えば、Ｂｅｎｔｏｎ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ （Ｓｃｉｅｎｃｅ １９６：１８０， １９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｒｏｇｎｅｓｓ （Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ７２：３９６１， １９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． （Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｍｅｌ （Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， １９８７， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。
「実質的に同一」または「実質的に相同」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか）または参照核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか）と少なくとも約５０％相同または同一であることを示すポリペプチドまたはポリヌクレオチドを意味する。ある特定の実施形態では、このような配列は、比較のために使用されるアミノ酸配列または核酸配列と、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％相同または同一である。
配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、 Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５のＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用することによって測定することができる。このようなソフトウェアは、相同性の程度を様々な置換、欠失、および／または他の改変に割り当てることによって、同一または類似する配列をマッチさせる。保存的置換には、典型的には、以下の群内の置換が含まれる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定することに対する例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ－３とｅ－１００の間の確率スコアは密接に関連する配列を示す。
「アナログ」とは、参照ポリペプチドまたは核酸分子の機能を有する構造的に関連するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。
用語「リガンド」は、本明細書で使用される場合、受容体に結合する分子を指す。ある特定の実施形態では、リガンドは別の細胞上の受容体に結合し、細胞間の認識および／または相互作用を可能にする。
用語「構成的発現」または「構成的に発現される」は、本明細書で使用される場合、すべての生理学的条件下での発現またはその条件下で発現されることを指す。
「疾患」とは、細胞、組織、または臓器の正常機能に損傷を与えるか、またはそれを妨害する任意の状態、疾患または障害、例えば、新生物、および細胞の病原体感染を意味する。
「有効量」とは、治療効果を有するのに十分な量を意味する。ある特定の実施形態では、「有効量」は、新生物の継続的な増殖、成長、または転移（例えば、侵襲、または遊走）を停止、軽快、または阻害するのに十分な量である。
「忍容性を強化すること」とは、移植された臓器または組織を標的とする自己反応性細胞または免疫応答性細胞の活性を防止することを意味する。
「内因性」とは、細胞または組織において正常に発現されるポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。
「外因性」とは、細胞において内因的に存在しないポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。したがって、用語「外因性」は、外来の、異種の、過剰発現される核酸分子およびポリペプチドなどの、細胞内で発現される任意の組換え核酸分子またはポリペプチドを包含する。「外因性」核酸とは、天然の野生型細胞には存在しない核酸を意味し、例えば、外因性核酸は、内因性のカウンターパートとは、配列、位置／場所、またはその両方によって異なり得る。明確化のために、外因性核酸は、その天然の内因性カウンターパートと比較して同じか、または異なる配列を有してもよく、遺伝子操作によって細胞自体またはその前駆体に導入されてもよく、必要に応じて、代替の対照配列、例えば、非天然のプロモーターまたは分泌配列に連結されてもよい。
「異種核酸分子またはポリペプチド」とは、細胞または細胞から得られる試料中に通常は存在しない核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）またはポリペプチドを意味する。この核酸は、別の生物に由来してもよく、または、例えば、細胞もしくは試料中で通常は発現されないｍＲＮＡ分子であってもよい。
「モジュレートする」とは、正に、または負に変更することを意味する。例示的なモジュレーションは、約１％、約２％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、または約１００％の変化を含む。
「増加させる」とは、少なくとも約５％、正に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、約１００％またはそれより多くまでであってもよい。
「低下させる」とは、少なくとも約５％、負に変更することを意味する。変更は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、またはさらに約１００％までであってもよい。
用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」は、天然の状態で見られるように、通常は付随する構成成分を様々な程度に含まない物質を指す。「単離する」は、元の供給源または環境からの分離の程度を示す。「精製する」は、単離よりも高度である分離の程度を示す。「精製された」または「生物学的に純粋な」タンパク質は、いずれの不純物もタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさず、他の有害な結果も引き起こさないように、他の物質を実質的に含まない。すなわち、核酸またはペプチドは、組換えＤＮＡ技法によって生成される場合には、細胞材料、ウイルス材料、および培養培地を、または化学的に合成される場合には、化学的前駆体や他の化学物質を実質的に含まないならば、精製されている。純度および均一性は、典型的には、分析化学の技法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを使用して決定される。用語「精製された」は、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲルにおいて本質的に１つのバンドを生じることを示し得る。改変、例えば、リン酸化またはグリコシル化に供され得るタンパク質では、様々な改変が様々な単離されたタンパク質に生じる可能性があり、これらを別々に精製することができる。
「単離された細胞」とは、天然に細胞に付随する分子および／または細胞構成成分から分離された細胞を意味する。
用語「抗原結合ドメイン」は、本明細書で使用される場合、細胞上に存在する特定の抗原決定基または抗原決定基のセットに特異的に結合することが可能なドメインを指す。
「新生物」とは、細胞または組織の病理学的増殖、およびその後の、他の組織または臓器への遊走またはその侵襲によって特徴付けられる疾患を意味する。新生物の成長は、典型的には、制御不能かつ進行的であり、正常細胞の分裂増殖（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を誘発しないか、またはその停止を引き起こす条件下で生じる。新生物は、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、卵管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、および膣からなる群から選択される臓器、またはその組織もしくは細胞型を含むがそれらに限定されない種々の細胞型、組織、または臓器に影響を及ぼし得る。新生物には、がん、例えば、肉腫、癌、または形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）が含まれる。
「受容体」とは、少なくとも１つのリガンドに選択的に結合する細胞膜上に存在するポリペプチドまたはその部分もしくは断片を意味する。ある特定の実施形態では、リガンドは、抗原である。抗原は、腫瘍抗原、病原体抗原、正常細胞抗原、ＨＬＡ抗原、または同種抗原（例えば、マイナー組織適合性同種抗原）であり得る。
「認識する」とは、標的、例えば、リガンド（例えば、抗原）に選択的に結合することを意味する。例えば、腫瘍を認識する細胞（例えば、Ｔ細胞）は、腫瘍抗原に結合する受容体（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲ）を発現することができる。
本明細書で使用される場合、用語「リガンド認識受容体」は、リガンドを認識することが可能である受容体を指す。
「参照」または「対照」とは、比較の標準物質を意味する。例えば、ＣＡＲおよびｓｃＦｖを発現する細胞によるｓｃＦｖ抗原結合のレベルは、ＣＡＲを単独で発現する対応する細胞におけるｓｃＦｖ抗原結合のレベルと比較され得る。
「分泌された」とは、例えば、小胞体、ゴルジ装置を介する分泌経路によって、および細胞形質膜において一過的に融合し、細胞の外側にポリペプチドを放出するベシクルとして、細胞から放出されるポリペプチドを意味する。
「特異的に結合する」とは、目的の生体分子（例えば、ポリペプチド）を認識し、それに結合するが、天然に本開示のポリペプチドを含む試料、例えば、生体試料中の他の分子を実質的に認識せず、それに実質的に結合しないポリペプチドまたはその断片を意味する。
用語「腫瘍抗原」は、本明細書で使用される場合、正常細胞または非ＩＳ新生物細胞と比較して、腫瘍細胞上に固有に、または差次的に発現される抗原（例えば、ポリペプチド）を指す。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、抗原認識受容体によって免疫応答を活性化もしくは誘導することが可能であるか（例えば、ＣＤ１９、ＭＵＣ－１６）、または受容体－リガンド結合によって免疫応答を抑制することが可能である（例えば、ＣＤ４７、ＰＤ－Ｌ１／Ｌ２、Ｂ７．１／２）腫瘍によって発現される任意のポリペプチドを含む。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、およびは、米国特許法においてそれらに与えられた広い意味を有することを意図し、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得る。
本明細書で使用される場合、「処置」は、処置される個体または細胞の疾患経過を変更することを試みる治療介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程中のいずれかに実施することができる。処置の治療効果は、限定されないが、疾患の発生または再発を防止すること、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移を防止すること、疾患進行速度を低下させること、疾患状態の軽快または緩和、および寛解または予後の改善を含む。疾患または障害の進行を防止することによって、処置は、罹患したか、もしくは診断された対象、または障害を有することが疑われる対象における障害による悪化を防止することができるが、また、処置は、障害に対するリスクにあるか、または障害を有することが疑われる対象における障害の開始または障害の症状を防止することができる。
「個体」または「対象」は、本明細書において、ヒトまたは非ヒト動物、例えば、哺乳類などの脊椎動物である。哺乳類は、ヒト、霊長類、農場動物、狩猟動物、齧歯類および愛玩動物を含むがこれらに限定されない。非ヒト動物対象の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスター、およびモルモットなどの齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、ならびに類人猿およびサルなどの非ヒト霊長類が挙げられる。用語「免疫不全状態の」は、本明細書で使用される場合、免疫不全を有する対象を指す。対象は、健康な免疫系を有する人において通常疾患を引き起こさないが、機能が乏しいか、または抑制された免疫系しか有さない人々を冒し得る生物によって引き起こされる感染症である日和見感染症に非常に罹り易い。
本開示の主題の他の態様は、以下の開示に記載され、本開示の主題の範囲内である。
５．２．ＩｇＧ分解酵素
本開示の細胞は、ＩｇＧ分解酵素を含む。
ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧを切断することが可能である。ＩｇＧは、ヒト免疫系において重要な保護的役割を果たすが、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性ループスなどのような疾患の病因にも関連し、ここで、ＩｇＧの除去をこれらの自己免疫疾患を処置するための治療手段として使用している（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ ＯＮＥ （２００８）；３：１－６；Ｂｅｒｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｏｒｇａｎｓ （１９９４）；１７：６０３－６０８、Ｓｔｕｍｍｖｏｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ （２００５）； ６４：１０１５－１０２１）。さらに、宿主のＩｇＧは、同種移植において重要な役割を果たし、ここで、ＨＬＡドナー間の不適合によって、同種移植片の抗体媒介性拒絶がもたらされる（Ｌｏｕｐｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１８）；３７９：１１５０－１１６０）。
ＩｄｅＳは、同種移植前の脱感作に関してヒトにおいて評価された。本研究では、２５人の患者のうちの２４人は、すべてのドナー特異的抗体を迅速に除去したＩｄｅＳによる処置後に、ＨＬＡ－不適合移植を受けることができた（Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１７）；３７７：４４２－４５３；Ｌｏｎｚｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ （２０１８）；２６８：４８８－４９６）。
研究は、ＩｇＧ分解酵素が正の治療結果を有することを示している。例えば、ＩｄｅＳは、特発性血小板減少症、グッドパスチャー病、および関節炎の動物モデルにおいて正の治療結果を有することが示されている（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ ＯＮＥ （２００８）；３：１－６；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （２０１０）；２５：２４７９－２４８６；Ｎａｎｄａｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ （２００７）；５６：３２５３－３２６０）。
ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧを切断することができ、それによって、ＩｇＧ抗体が細胞を死滅させるのを防ぐ。さらにまたはあるいは、ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧを切断することができ、それによって、ＩｇＧの残りの断片の細胞への結合を保持させ、細胞を１つまたは複数の細胞傷害性抗体から保護する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の細胞傷害性抗体は、ＩｇＧと同じエピトープ領域に結合し、または同じエピトープ領域への結合についてＩｇＧと交差競合し、それによって、細胞を死滅させる。したがって、このプロセスは、保護シールドを生じる。
ＩｇＧ分解酵素を使用して、リガンド認識受容体（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）を含む細胞を宿主体液性応答から保護することができる。宿主体液性応答の非限定的な例としては、抗体に駆動される宿主免疫応答（例えば、抗ＣＡＲ抗体）、新たなアミノ酸配列に向けられる宿主体液性応答、外来配列に対する宿主体液性応答（ｈｏｓｔ ｈｕｍｏｒａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｆｏｒｅｉｇｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）、融合点配列に対する宿主体液性応答、同種抗原に対する宿主体液性応答（例えば、マイナー組織適合性同種抗原）、ＨＬＡ抗原に対する宿主体液性応答、他の対立遺伝子に対する宿主体液性応答、タンパク質または炭水化物の発現変化に対する宿主体液性応答、タンパク質の翻訳後修飾に対する宿主体液性応答、宿主と注入された細胞の間の差異によって誘導される宿主体液性応答が挙げられる。これは、既存の応答または細胞の注入によって刺激された応答を含み得る。宿主体液性応答からの保護は、細胞の死もしくは中和を防止し、細胞に、持続性の増加、活性の改善（例えば、抗腫瘍活性、増殖、サイトカインの分泌、細胞溶解の関与、または細胞中に特異的に操作された他の機能を提供する。細胞の持続性および機能の増加は、細胞を含む任意の治療に対する費用の低下ももたらすことができる。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、非常に高い費用を伴い、例えば、１回の注入は、数十万ドルを超える（Ｌｉｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （２０１８）； ３６：３１９２－３２０２）。ＣＡＲ－Ｔ細胞の持続性を改善することによって、このタイプの処置の費用対効果を改善することができる。
ＩｇＧ分解酵素の非限定的な例としては、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＩｇＧ分解酵素（例えば、ＩｄｅＳ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＺ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｅｑｕｉ．のＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＥ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のエンドグリコシダーゼ（ＥｎｄｏＳ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の連鎖球菌システインプロテイナーゼ（ＳｐｅＢ）が挙げられる。
ＩｄｅＥおよびＩｄｅＺは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉに由来する（Ｌａｎｎｅｒｇａｒｄ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ （２００６）；２６２：２３０－２３５）。ＩｄｅＥおよびＩｄｅＺのそれぞれは、ＩｇＧのヒンジ領域の下のＦｃ領域を切断し、ここで、この領域は、部位ＬＬＧＧＰを含む。
ＥｎｄｏＳは、ＩｇＧのガンマ鎖上のグリカン部位を除去し、それによって、ＩｇＧのＦｃ受容体との相互作用を妨害するエンドグリコシダーゼである（Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． （２００１）；２０（１２）：３０４６－３０５５）。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧとＦｃ受容体の間の相互作用を妨害することが可能である。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、エンドペプチダーゼ、例えば、ＩｄｅＳ、ＩｄｅＺ、ＩｄｅＥ、およびＳｐｅＢである。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ＩｇＧ特異的エンドペプチダーゼ、例えば、ＩｄｅＳ、ＩｄｅＺ、およびＩｄｅＥである。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、エンドグリコシダーゼ、例えば、ＥｎｄｏＳである。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ＩｄｅＳである。細菌は、オプソニン作用およびファゴサイトーシスを避けるために、タンパク質分解酵素の放出などのヒト免疫系を回避する複雑な戦略を進化させている（Ｐｏｔｅｍｐａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． （２０１２）；３９３：８７３－８８８）。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓは、ＩｇＧ分解酵素を分泌し、これは、ヒンジ領域の下でＩｇＧを切断し、ＦａｂおよびＦｃ断片を生じる。
ＩｄｅＳは、免疫グロブリンＧに対して高い特異性を有するシステインプロテアーゼであり、これは、免疫グロブリンＡ、Ｍ、ＥおよびＤを切断しない（Ｖｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ （２００２）；２１：１６０７－１６１５、およびＪｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ ＯＮＥ （２００８）；３：１－６）。ＩｄｅＳはそれ自体潜在的に免疫原性であるが、この酵素は、その本来の目的であるその宿主免疫応答からもそれ自体を保護するはずである。ＩｄｅＳは、ヒンジ領域の下でＩｇＧを切断し、それによって、Ｆｃ断片を放出し、Ｆ（ａｂ’）２断片は無傷のままである（ｖｏｎ Ｐａｗｅｌ－Ｒａｍｍｉｎｇｅｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． （２００２）；２１（７）：１６０７－１５）。
ある特定の実施形態では、ＩｄｅＳは、以下に提供されるＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＥＪ３５１７７．１（配列番号１）を有するアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％もしくは少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を有する（本明細書において、相同性および同一性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定することができる）、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１または最大２または最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。ある特定の実施形態では、ＩｄｅＳは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、または少なくとも約７０、または少なくとも約１００、または少なくとも約２００、または少なくとも約３００、および最大３４１アミノ酸長である、配列番号１の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩｄｅＳは、配列番号１のアミノ酸１～３４１、３０～３４１、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～３４１のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＩｄｅＳは、配列番号１のアミノ酸３０～３４１を含むか、または有する。配列番号１は以下に提供される。
Figure 2022544075000002
配列番号１のアミノ酸３０～３４１をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号２に示される。
Figure 2022544075000003
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、細胞に結合している（「膜結合ＩｇＧ分解酵素」とも称される）。例えば、図１Ａを参照されたい。膜結合ＩｇＧ分解酵素では、酵素は、酵素を細胞に結合または付着させることが可能である膜貫通ドメインに融合または付着している。例えば、図１Ａを参照されたい。膜貫通ドメインは、ＩｇＧ分解酵素のＣ末端またはＮ末端に付着していてもよい。ある特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩｇＧ分解酵素のＣ末端に付着している。例えば、図１Ａを参照されたい。
膜貫通ドメインは、分子もしくはタンパク質の膜貫通ドメインまたはその部分であってもよい。膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド（例えば、ＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＣＤ３ζポリペプチド（例えば、ＣＤ３ζの膜貫通ドメインまたはその部分）、ＣＤ４ポリペプチド（例えば、ＣＤ４の膜貫通ドメインまたはその部分）、４－１ＢＢポリペプチド（例えば、４－１ＢＢの膜貫通ドメインまたはその部分）、ＯＸ４０ポリペプチド（例えば、ＯＸ４０の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＩＣＯＳポリペプチド（例えば、ＩＣＯＳの膜貫通ドメインまたはその部分）、合成ペプチド（免疫応答に関連するタンパク質をベースとしない）、またはこれらの組合せを含み得る。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素に融合した膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチドである。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号３に示されるアミノ酸配列または配列番号２７のアミノ酸１３７～２０７を含むか、または有する。配列番号３は以下に提供される。
Figure 2022544075000004
配列番号３のアミノ酸をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４に示される。
Figure 2022544075000005
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、細胞から分泌される（「分泌ＩｇＧ分解酵素」とも称される）。例えば、図１Ｂを参照されたい。分泌ＩｇＧ分解酵素では、酵素は、膜貫通ドメインに融合も付着もせず、それによって、酵素は、細胞から、細胞外環境または細胞の近傍に分泌または放出される。例えば、図１Ｂを参照されたい。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、シグナルペプチド（「リーダー配列」とも称される）に接続または融合されている。本明細書で使用される場合、「シグナル配列」または「リーダー配列」は、その輸送を指示するため、例えば、ＩｇＧ分解酵素を細胞膜に輸送するため、またはリガンド認識受容体（例えば、ＣＡＲ）を細胞膜に輸送するための、ポリペプチドもしくはタンパク質またはその断片のＮ末端に存在するペプチド配列（例えば、約５、１０、１５、２０、２５または３０個のアミノ酸）を指す。
例示的なシグナル配列としては、以下に限定されないが、ＣＤ４シグナルペプチド、ＩｇＧ重鎖シグナルペプチド、ＩＬ－２シグナル配列（例えば、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ－２シグナルペプチドまたは配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するマウスＩＬ－２シグナルペプチド）、カッパシグナル配列（例えば、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するヒトカッパシグナル配列または配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するマウスカッパシグナル配列）、ＣＤ８シグナル配列（例えば、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するヒトＣＤ８シグナルペプチドまたは配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する切断されたヒトＣＤ８シグナルペプチド）、アルブミンシグナル配列（例えば、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するヒトアルブミンシグナル配列）、およびプロラクチンシグナル配列（例えば、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するヒトプロラクチンシグナル配列）が挙げられる。配列番号５～１２は以下に提供される。
Figure 2022544075000006
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ＣＤ８シグナル配列に接続または融合されている。ある特定の実施形態では、ＣＤ８シグナル配列は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むか、または有する。
配列番号１０のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号１３に示される。
Figure 2022544075000007
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、ベクターから発現される。ＩｇＧ分解酵素の発現は、イムノブロット、ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、質量分析、およびフローサイトメトリーを含むがこれらに限定されない任意の好適な方法によって検出することができる。
５．３．リガンド認識受容体
本開示の細胞は、リガンド認識受容体を含む。リガンドに結合することが可能である任意の受容体は、本開示のリガンド認識受容体であり得る。リガンド認識受容体の非限定的な例としては、目的の抗原に結合する抗原認識受容体、細胞接着分子、サイトカイン受容体（例えば、ＦａｓリガンドまたはＴＧＦβ受容体などのインターロイキンまたはサイトカイン受容体、Ｔｒａｉｌ、ＴＣＲ、ＩｇＧ、ＣＡＲ、ＮＫ阻害受容体、ＥＧＦＲまたはＦＧＦＲなどの成長因子受容体、ペプチドリガンドまたは接着分子、炭水化物受容体、Ｇプロテイン受容体など）、およびＦｃ受容体が挙げられる。受容体は、一価または多価であり得る。リガンド認識受容体は、内因性または外因性であり得る。リガンド認識受容体は、組換え発現され得る。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ベクターから発現される。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、目的の抗原に結合する抗原認識受容体である。抗原認識受容体の非限定的な例としては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＩｇＧ、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥが挙げられる。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、抗原に結合する。抗原は、腫瘍抗原、病原体抗原、正常細胞抗原（例えば、自己免疫疾患または臓器移植に対する）、ＨＬＡ抗原、または同種抗原（例えば、マイナー組織適合性同種抗原）であり得る。
５．３．１．抗原
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、腫瘍抗原である抗原に結合する。任意の腫瘍抗原（抗原ペプチド）は、本明細書に記載の腫瘍に関連する実施形態において使用することができる。抗原の供給源には、がんタンパク質が含まれるがこれらに限定されない。抗原は、ペプチドとして、または無傷タンパク質もしくはその部分として発現され得る。無傷タンパク質またはその部分は、天然であっても、変異誘発されていてもよい。腫瘍抗原の非限定的な例としては、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡｌＸ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ２、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ４４Ｖ６、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に感染した細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、ＨＰＶ Ｅ６またはＥ７ペプチド、ＥＢＶペプチド、ＭＡＧＥペプチド、上皮糖タンパク質－２（ＥＧＰ－２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂ－Ｂ２，３，４（ｅｒｂ－Ｂ２，３，４）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、葉酸受容体－α、ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）、ガングリオシドＧ３（ＧＤ３）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、κ軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、Ｌｅｗｉｓ Ｙ（ＬｅＹ）、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１ＣＡＭ）、黒色腫抗原ファミリーＡ、１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、ムチン１６（ＭＵＣ１６）、ムチン１（ＭＵＣ１）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＲＢＢ２、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３、ＭＡＲＴ１、ＧＰ１００、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん－精巣抗原ＮＹ－ＥＳ０－１、腫瘍胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、血管内皮成長因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、およびウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、ＢＣＭＡ、ＮＫＣＳ１、ＥＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ－ＶＩＩＩ、ＣＤ９９、ＣＤ７０、ＡＤＧＲＥ２、ＣＣＲ１、ＬＩＬＲＢ２、ＰＲＡＭＥ、およびＥＲＢＢが挙げられる。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ＣＤ１９に結合する。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、マウスＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、マウスＣＤ１９ポリペプチドは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。
Figure 2022544075000008
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ヒトＣＤ１９ポリペプチドに結合する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ１９ポリペプチドは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。
Figure 2022544075000009
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ヒトまたはマウスのＣＤ１９タンパク質の細胞外ドメインに結合する。
ある特定の実施形態では、例えば、免疫不全状態の対象における、例えば、病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または防止する際に使用するためのリガンド認識受容体は、病原体抗原に結合する。病原体の非限定的な例としては、疾患を引き起こすことが可能なウイルス、細菌、真菌、寄生生物および原生生物が挙げられる。
ウイルスの非限定的な例としては、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒト免疫不全ウイルス、例えば、ＨＩＶ－１（ＨＤＴＶ－ＩＩＩ、ＬＡＶＥまたはＨＴＬＶ－ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ－ＩＩＩとも称される）；およびＨＩＶ－ＬＰなどの他の分離株）；Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス）；Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、コロナウイルス）；Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、エボラウイルス）；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルス）；Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ハンタンウイルス、ブニヤウイルス（ｂｕｎｇａ ｖｉｒｕｓ）、フレボウイルスおよびナイラウイルス（Ｎａｉｒａ ｖｉｒｕｓ））；Ａｒｅｎａ ｖｉｒｉｄａｅ（出血熱ウイルス）；Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ；Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ（Ｂ型肝炎ウイルス）；Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａ（パルボウイルス）；Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ（ほとんどのアデノウイルス）；Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、アフリカブタ熱ウイルス）；ならびに未分類ウイルス（例えば、デルタ肝炎の因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、非Ａ非Ｂ型肝炎の因子（クラス１＝内部感染、クラス２＝非経口感染（すなわちＣ型肝炎）；ノーウォークおよび関連ウイルスならびにアストロウイルス）が挙げられる。
細菌の非限定的な例としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられる。感染性細菌の具体例としては、以下に限定されないが、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ、Ｂｏｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ ｓｐｓ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ、Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ビリダンス群）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（嫌気性種）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、病原性Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｒａｃｉｓ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ．、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐ．、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、およびＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｌｉが挙げられる。
ある特定の実施形態では、病原体抗原は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中に存在するウイルス抗原、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）中に存在するウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）中に存在するウイルス抗原、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）中に存在するウイルス抗原、またはインフルエンザウイルス中に存在するウイルス抗原である。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ＨＬＡ分子などの同種抗原、およびマイナー組織適合性同種抗原に結合する。
５．３．２．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ＴＣＲである。ＴＣＲは、インバリアントＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現される２つの可変鎖からなるジスルフィド結合ヘテロ二量体タンパク質である。ＴＣＲは、Ｔ細胞表面に見られ、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子に結合したペプチドとしての抗原の認識を担う。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、アルファ鎖およびベータ鎖（それぞれ、ＴＲＡおよびＴＲＢによってコードされる）を含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、ガンマ鎖およびデルタ鎖（それぞれ、ＴＲＧおよびＴＲＤによってコードされる）を含む。
ＴＣＲの各鎖は、２つの細胞外ドメイン：可変（Ｖ）領域および定常（Ｃ）領域から構成される。定常領域は、細胞膜の近位に存在し、その後に、膜貫通領域および短い細胞質側末端が存在する。可変領域は、ペプチド／ＭＨＣ複合体に結合する。両鎖の可変ドメインはそれぞれ、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。
ある特定の実施形態では、ＴＣＲは、３つの二量体シグナル伝達モジュールＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／εおよびＣＤ２４７ ζ／ζまたはζ／ηと受容体複合体を形成することができる。ＴＣＲ複合体が、その抗原およびＭＨＣ（ペプチド／ＭＨＣ）と会合する場合、ＴＣＲ複合体を発現するＴ細胞は活性化される。
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、内因性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、外因性ＴＣＲである。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、組換えＴＣＲである。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、天然に存在しないＴＣＲである。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、少なくとも１つのアミノ酸残基で、いずれかの天然に存在するＴＣＲと異なる。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、少なくとも約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００またはそれより多いアミノ酸残基で、いずれかの天然に存在するＴＣＲと異なる。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、少なくとも１つのアミノ酸残基で、天然に存在するＴＣＲから改変される。ある特定の実施形態では、天然に存在しないＴＣＲは、少なくとも約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００またはそれより多いアミノ酸残基で、天然に存在するＴＣＲから改変される。
５．３．３．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、ＣＡＲである。ＣＡＲは、目的の特異性を免疫エフェクター細胞上に移植または付与する操作された受容体である。レトロウイルスベクターによりコード配列の移入を促進して、ＣＡＲを使用してモノクローナル抗体の特異性をＴ細胞上に移植することができる。
３つの世代のＣＡＲが存在する。「第１世代」のＣＡＲは、典型的には、細胞質／細胞内シグナル伝達ドメインに融合した膜貫通ドメインに融合した細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から構成される。「第１世代」のＣＡＲは、ｄｅ ｎｏｖｏ抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介性抗原提示とは無関係に、単一の融合分子において、それらのＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介してＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の活性化をもたらすことができる。「第２世代」のＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）由来の細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質側末端に付加し、さらなるシグナルをＴ細胞に提供する。「第２世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。「第３世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）と活性化（ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第１世代のＣＡＲである。ある特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第２世代のＣＡＲである。
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログが具体化される）は、約５×１０－７Ｍまたはそれ未満の解離定数（Ｋｄ）で抗原に結合する。ある特定の実施形態では、Ｋｄは、約５×１０－７Ｍもしくはそれ未満、約１×１０－７Ｍもしくはそれ未満、約５×１０－８Ｍもしくはそれ未満、約１×１０－８Ｍもしくはそれ未満、約５×１０－９Ｍもしくはそれ未満、約１×１０－９Ｍもしくはそれ未満、約５×１０－１０Ｍもしくはそれ未満、約１×１０－１０Ｍもしくはそれ未満、約５×１０－１１Ｍもしくはそれ未満、約１×１０－１１Ｍもしくはそれ未満、約５×１０－１２Ｍもしくはそれ未満、または約１×１０－１２Ｍもしくはそれ未満である。
細胞外抗原結合ドメインの結合（例えば、ｓｃＦｖまたはそのアナログにおいて）は、例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、表面プラズモン共鳴、ウエスタンブロットアッセイ、当技術分野で公知の他のアッセイによって確認することができる。これらのアッセイのそれぞれは、一般に、目的の複合体に対して特異的な標識された試薬（例えば、抗体、またはｓｃＦｖ）を用いることによって、特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖは、放射性標識され、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）において使用することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ， Ｂ．， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ， Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ， Ｍａｒｃｈ， １９８６を参照されたい）。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターの使用などの手段によって、またはオートラジオグラフィーによって検出することができる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーで標識される。蛍光マーカーの非限定的な例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、およびｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、セルリアン、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、シトリン、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）が挙げられる。
本開示の主題に従って、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含み得、細胞外抗原結合ドメインは、抗原、例えば、腫瘍抗原または病原体抗原に特異的に結合する。
５．３．３．１．ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化ｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、マウスｓｃＦｖである。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、必要に応じて架橋したＦａｂを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）２を含む。ある特定の実施形態では、前記分子のいずれかは、異種配列を含む融合タンパク質内に含まれ、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインを形成することができる。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、マウスｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖを含む。
ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、必要に応じて（ｉｉｉ）前記ＶＨと前記ＶＬの間のリンカー配列、例えば、リンカーペプチドを伴う。
「リンカー」は、本明細書で使用される場合、２つまたはそれより多くのポリペプチドまたは核酸を、これらが互いに接続されるように、共有結合により付着させる官能基（例えば、化学物質、またはポリペプチド）を指す。本明細書で使用される場合、「ペプチドリンカー」は、２つのタンパク質を一緒に連結するために（例えば、ＶＨドメインとＶＬドメインを連結するために）使用される１つまたは複数のアミノ酸を指す。
ある特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供される配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。
Figure 2022544075000010
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）相同または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４に示されるアミノ酸配列またはその保存的改変を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９に示される配列を有するアミノ酸を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、ヒトＣＤ１９ポリペプチド（例えば、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むヒトＣＤ１９ポリペプチド）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、配列番号２５のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２６に示される。
配列番号１６、１７、および１９～２６は以下に提供される。
Figure 2022544075000011
本明細書で使用される場合、用語「保存的な配列の改変」は、アミノ酸配列を含む本開示のＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン）の結合の特徴に有意に影響を及ぼさず、変更もしないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸の置換、付加および欠失を含み得る。改変は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発などの当技術分野で公知の標準的技法によって、本開示のＣＡＲのヒトｓｃＦｖ中に導入され得る。アミノ酸は、電荷および極性などのそれらの物理化学的特性に従って群に分類され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、同じ群にあるアミノ酸で置き換えられる置換である。例えば、アミノ酸は電荷によって分類することができる：正電荷アミノ酸には、リシン、アルギニン、ヒスチジンが含まれ、負電荷アミノ酸には、アスパラギン酸、グルタミン酸が含まれ、中性電荷アミノ酸には、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが含まれる。さらに、アミノ酸は、極性によって分類することができる：極性アミノ酸には、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンが含まれ、非極性アミノ酸には、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンが含まれる。よって、ＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸残基は、同じ群に由来する他のアミノ酸残基で置き換えることができ、変更された抗体は、本明細書に記載の機能的アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上記（ｃ）から（ｌ）に示される機能）について試験することができる。ある特定の実施形態では、指定された配列内またはＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が変更される。
特定の配列（例えば、配列番号１６および１７）に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％（例えば、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％）の相同性または同一性を有するＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、指定されたの配列（複数可）に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有し得るが、標的抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、特定の配列（例えば、配列番号１６および１７）において、置換、挿入および／または欠失される。ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、細胞外抗原結合ドメインのＣＤＲの外側の領域において（例えばＦＲにおいて）起こる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６および１７（その配列（配列番号１６および１７）の翻訳後修飾を含む）からなる群から選択されるＶＨおよび／またはＶＬ配列を含む。
本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントと同等である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要のあるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮に入れた、これらの配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。
２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み付き残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれるＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ． Ａｐｐｌ． Ｂｉｏｓｃｉ．， ４：１１－１７ （１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）中に組み込まれた、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４４－４５３ （１９７０））のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み付け、および１、２、３、４、５、または６の長さの重み付けを使用して決定することができる。
さらにまたはあるいは、本開示の主題のアミノ酸配列を「クエリー配列」としてさらに使用して、例えば、関連する配列を同定するために、公共のデータベースに対して検索を実施することができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に開示される指定された配列（例えば、ｓｃＦｖ ｍ９０３、ｍ９０４、ｍ９０５、ｍ９０６、およびｍ９００の重鎖および軽鎖可変領域の配列）と相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３により実施することができる。比較目的でギャップ付きアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されたギャップ付きＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。
５．３．３．２．ＣＡＲの膜貫通ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部分に及ぶ疎水性アルファヘリックスを含む。様々な膜貫通ドメインは、様々な受容体安定性をもたらす。抗原認識後に、受容体がクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド（例えば、ＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ＣＤ２８の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド（例えば、ＣＤ４の膜貫通ドメインまたはその部分）、４－１ＢＢポリペプチド（例えば、４－１ＢＢの膜貫通ドメインまたはその部分）、ＯＸ４０ポリペプチド（例えば、ＯＸ４の膜貫通ドメインまたはその部分）、ＩＣＯＳポリペプチド（例えば、ＩＣＯＳの膜貫通ドメインまたはその部分）、合成ペプチド（免疫応答に関連するタンパク質をベースとしない）、またはこれらの組合せを含み得る。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメインもしくはその部分、またはマウスＣＤ８の膜貫通ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供されるＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５．１（配列番号２７）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含むか、または有する（本明細書において、相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定することができる）、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２３５アミノ酸長である、配列番号２７の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１３７～２０７、１３７～２０９、１５０～２００、または２００～２３５のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２７のアミノ酸１３７～２０７を含むか、または有するＣＤ８ポリペプチドを含む。
Figure 2022544075000012
配列番号２７のアミノ酸１３７～２０７をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号２８に示される。
Figure 2022544075000013
ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、以下に提供されるＮＣＢＩ参照番号ＡＡＡ９２５３３．１（配列番号２９）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含むか、または有する（本明細書において、相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的ソフトウェアを使用して決定することができる）、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約６０、または少なくとも約７０、または少なくとも約１００、または少なくとも約２００、および最大２４７アミノ酸長である、配列番号２７の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号２９のアミノ酸１～２４７、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～２１９、または２００～２４７のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号２９のアミノ酸１５１～２１９を含むか、または有するＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号２９は以下に提供される。
Figure 2022544075000014
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメインもしくはその部分、またはマウスＣＤ２８の膜貫通ドメインを含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００６１３０（配列番号３０）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含むか、または有する、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２０アミノ酸長である、配列番号３０の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号３０のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号３０のアミノ酸１５３～１７９を含むか、または有するＣＤ２８ポリペプチドを含む。
配列番号３０は以下に提供される：
Figure 2022544075000015
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域をさらに含む。スペーサー領域は、抗原結合ドメインが、様々な方向に配向して、抗原認識を容易にすることが可能であるように十分に柔軟であり得る。スペーサー領域は、ＩｇＧ１由来のヒンジ領域、または免疫グロブリンのＣＨ２ＣＨ３領域およびＣＤ３の部分、ＣＤ２８ポリペプチドの部分（例えば、配列番号３０の部分）、ＣＤ８ポリペプチドの部分（例えば、配列番号２７または２９の部分）、それと少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％相同または同一である前記のいずれかの変形形態、あるいは合成スペーサー配列であり得る。
５．３．３．３．ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞を活性化または刺激することができる（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ＣＤ３ζは、３つのＩＴＡＭを含み、抗原が結合した後に、活性化シグナルを細胞（例えば、リンパ系列の細胞、例えば、Ｔ細胞）に伝達する。ＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインは、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要なトランスミッターである。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０（配列番号３１）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同であるアミノ酸配列、またはその断片を含むか、または有する、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大１６４アミノ酸長である、配列番号３１の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３１のアミノ酸１～１６４、１～５０、５０～１００、１００～１５０、または１５０～１６４のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３１のアミノ酸５２～１６４を含むか、または有するＣＤ３ζポリペプチドを含む。
配列番号３１は以下に提供される：
Figure 2022544075000016
ある特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１０６８６４．２（配列番号３２）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、もしくは約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含むか、または有する、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも約２０、または少なくとも約３０、または少なくとも約４０、または少なくとも約５０、または少なくとも約９０、または少なくとも約１００、および最大１８８アミノ酸長である、配列番号３２の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号３２のアミノ酸１～１６４、１～５０、５０～１００、５２～１４２、１００～１５０、または１５０～１８８のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３２のアミノ酸５２～１４２を含むか、または有するＣＤ３ζポリペプチドを含む。
配列番号３２は以下に提供される：
Figure 2022544075000017
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、以下に提供される配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むか、または有するＣＤ３ζポリペプチドを含む。
Figure 2022544075000018
配列番号３３をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３４に示される。
Figure 2022544075000019
ある特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、共刺激領域は、少なくとも１つの共刺激分子またはその部分を含む（例えば、共刺激分子の細胞内ドメインまたはその部分）。共刺激シグナル伝達領域は、細胞に最適なリンパ球活性化をもたらし得る。本明細書で使用される場合、「共刺激分子」は、目的の抗原に対する免疫応答細胞の効率的応答に必要とされる抗原認識受容体またはそれらのリガンド以外の細胞表面分子を指す。共刺激分子の非限定的な例としては、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ２、およびＮＫＧＤ２が挙げられる。共刺激分子は、その受容体に結合する際に共刺激応答、すなわち、抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）がその標的抗原に結合する場合に提供される刺激をもたらす細胞内応答を生じる細胞表面で発現されるタンパク質である、共刺激リガンドに結合することができる。共刺激リガンドとしては、以下に限定されないが、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、およびＩＣＯＳＬＧが挙げられる。一例として、４－１ＢＢＬは、活性化シグナルと組み合わせて、ＣＡＲ－Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する共刺激シグナルを与えるために、４－１ＢＢに結合し得る。４－１ＢＢ、ＩＣＯＳまたはＤＡＰ－１０を含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｕ．Ｓ．７，４４６，１９０に開示される。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその部分）を含む。４－１ＢＢポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１５５２（配列番号３５）を有する配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含み得るか、または有し得る、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２５５アミノ酸長である、配列番号３５の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、配列番号３５のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２５５のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３５のアミノ酸２１４～２５５を含むか、または有する４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。配列番号３５は以下に提供される。
Figure 2022544075000020
配列番号３５のアミノ酸２１４～２５５をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号３６に示される。
Figure 2022544075000021
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその部分）を含む。ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２９もしくは配列番号３０に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含み得るか、または有し得る、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２２０アミノ酸長である、配列番号３０の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号２９または配列番号３０のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１８０～２２０、または２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ２８は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％相同または同一であるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ２８は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０のアミノ酸１８０～２２０を含むか、または有するＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ＯＸ４０の細胞内ドメインまたはその分）を含む。ＯＸ４０ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００３３１８．１（配列番号３７）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含み得るか、または有し得る、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＯＸ４０ポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大２７７アミノ酸長である、配列番号３７の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＯＸ４０ポリペプチドは、配列番号３７のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、または２００～２７７を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０の細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＯＸ４０の細胞内ドメインまたはその部分を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ヒトＯＸ４０は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％相同または同一であるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ヒトＯＸ４０は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を有する。
配列番号３７は以下に提供される：
Figure 2022544075000022
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ＩＣＯＳの細胞内ドメインまたはその部分）を含む。ＩＣＯＳポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３６２２４．１（配列番号３８）を有する配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくは１００％相同もしくは同一であるアミノ酸配列、またはその断片を含み得るか、または有し得る、ならびに／あるいは、必要に応じて、最大１、または最大２、または最大３つの保存的アミノ酸置換を含んでもよい。非限定的なある特定の実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、少なくとも２０、または少なくとも３０、または少なくとも４０、または少なくとも５０、および最大１９９アミノ酸長である、配列番号３８の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、または有する。あるいはまたはさらに、非限定的な様々な実施形態では、ＩＣＯＳポリペプチドは、配列番号３８のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、または１５０～１９９のアミノ酸配列を含むか、または有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＣＯＳの細胞内ドメインを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＩＣＯＳの細胞内ドメインを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。ある特定の実施形態では、ヒトＩＣＯＳは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％相同または同一であるアミノ酸配列を有する。ある特定の実施形態では、ヒトＩＣＯＳは、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を有する。
配列番号３８は以下に提供される：
Figure 2022544075000023
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含み、第１の共刺激ドメインは、４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその部分を含み、第２の共刺激ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメインまたはその部分を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ヒト細胞において核酸配列を発現するための、誘導性プロモーターをさらに含む。ＣＡＲ遺伝子を発現する際に使用するためのプロモーターは、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターなどの構成的プロモーターであり得る。
５．３．３．４．例示的なＣＡＲ
ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、ＣＤ１９に結合する細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン（例えば、ヒトＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその部分）、およびＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメインおよび４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域（例えば、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメインまたはその部分）を含むＣＡＲを含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１９ＢＢｚ」として示される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９ＢＢｚ）は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む細胞外抗原結合ドメイン；配列番号３に示されるアミノ酸配列または配列番号２７のアミノ酸１３７～２０７を含むＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン；配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、および配列番号３５のアミノ酸２１４～２５５を含む４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９ＢＢｚ）は、以下に提供される配列番号３９に示されるアミノ酸配列と、少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％相同または同一であるアミノ酸配列を含む。
Figure 2022544075000024
配列番号３９のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４０に示される。
Figure 2022544075000025
Figure 2022544075000026
ある特定の実施形態では、ＣＡＲ（例えば、１９ＢＢｚ）は、ＣＤ８シグナルペプチドをさらに含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ８シグナルペプチドは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むか、または有する。配列番号１０のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４１に示される。
Figure 2022544075000027
ＣＤ８シグナルペプチドを含む１９ＢＢｚに関するアミノ酸配列は、以下に提供される配列番号４２に示される。
Figure 2022544075000028
配列番号４２のアミノ酸配列をコードする例示的な核酸配列は、以下に提供される配列番号４３に示される。
Figure 2022544075000029
Figure 2022544075000030
 ５．４．細胞
本開示の主題は、（ａ）リガンド認識受容体（例えば、項目５．３に開示されるリガンド認識受容体）、および（ｂ）ＩｇＧ分解酵素（例えば、項目５．２に開示されるＩｇＧ分解酵素）を含む細胞を提供する。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、細胞を活性化することが可能である。細胞がリガンド認識受容体およびＩｇＧ分解酵素を同時に発現するように、細胞に、リガンド認識受容体およびＩｇＧ分解酵素を形質導入することができる。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、細胞表面に付着されている。ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、細胞表面に付着されておらず、細胞から送達または放出される。
ある特定の実施形態では、細胞は、切断可能な（例えば、自己切断可能な）リンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａペプチド、Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、およびＦ２Ａペプチド）をさらに含む。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｐ２Ａペプチドをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、リガンド認識受容体とＩｇＧ分解酵素の間に位置する。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、以下に提供される配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むか、または有する：
Figure 2022544075000031
配列番号４４に示されるアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号４５に示される。
Figure 2022544075000032
ある特定の実施形態では、細胞は、応答性細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、応答性細胞、例えば、免疫応答性細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、活性化可能な細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、リンパ系列の細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、骨髄系列の細胞である。ある特定の実施形態では、細胞は、正常組織に由来する、例えば、腎臓、肝臓、肺、骨髄、または膵臓に由来する細胞である。
リンパ系列の細胞は、抗体の産生、細胞免疫系の調節、血中の外来の病原因子の検出、宿主に対して外来の細胞の検出などをもたらし得る。リンパ系列の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、およびリンパ系細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞、および人工多能性幹細胞）であってもよい。
ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、胸腺において成熟するリンパ球であってもよく、大部分が細胞媒介性免疫を担う。Ｔ細胞は、獲得免疫系に関与する。本開示の主題のＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）、および２型のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞を含む）、制御性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても公知）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ Ｔ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδ Ｔ細胞を含むがこれらに限定されない、いずれかの型のＴ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。患者自身のＴ細胞は、抗原認識受容体、例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲの導入によって、特定の抗原を標的とするよう遺伝子改変され得る。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部であり、自然免疫応答において作用するリンパ球であり得る。ＮＫ細胞は、標的細胞における細胞傷害性効果を発揮するために、事前の活性化を必要としない。
本開示の主題のヒトリンパ球の型としては、限定されないが、末梢ドナーリンパ球、例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ３：３５－４５（ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Ｍｏｒｇａｎ， Ｒ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． ２００６ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４：１２６－１２９（αおよびβヘテロ二量体を含む完全長腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現するよう遺伝子改変された末梢ドナーリンパ球を開示する）、Ｐａｎｅｌｌｉ， Ｍ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４９５－５０４；Ｐａｎｅｌｌｉ， Ｍ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ． ２０００ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４３８２－４３９２（腫瘍生検において腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に由来するリンパ球培養物を開示する）、およびＤｕｐｏｎｔ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． ２００５ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６５：５４１７－５４２７；Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ， Ｇ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｂｌｏｏｄ １０２：２４９８－２５０５（人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）またはパルスされた樹状細胞を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで選択的に拡大された抗原特異的末梢血白血球を開示する）に開示されたものが挙げられる。
細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自家、非自家（例えば、同種異系）であってもよく、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、操作された前駆体または幹細胞に由来してもよい。ある特定の実施形態では、細胞は、同種異系細胞である。
ある特定の実施形態では、細胞は、骨髄系列の細胞である。骨髄系列の細胞の非限定的な例としては、単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球、および骨髄細胞に分化し得る幹細胞が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、治療において使用される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、細胞療法において使用される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、遺伝子治療において使用される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子治療において使用される。細胞操作の分野は、特に、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術の使用が普及してきているため、および複数の外来タンパク質の細胞内への導入に関しては、細胞の免疫原性が重要な関心事となっているため、拡大している。免疫原性細胞は患者から迅速に排除され、それらの有効性が低下してしまう（Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１５）；７；Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． （２０１４）；３７１：１５０７－１５１７；Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１８：６０５０－６０５６）。遺伝子治療は、多くの場合、ウイルス遺伝子または他の外来のヘルパー遺伝子を伴う細胞へと外来遺伝子を挿入することに関与する。血友病処置および他の遺伝性障害において使用されるＡＡＶウイルス由来などのウイルスタンパク質は、数カ月または数年間患者において存続することができ、免疫応答の標的としての役割を果たす。
本開示の細胞は、外来の細胞の免疫原性を軽減することができる。
ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、免疫療法において使用される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、養子細胞移入（ＡＣＴ）において使用される。迅速に出現し、個別化されたタイプの免疫療法は、患者の免疫細胞が、患者のがんを処置するためのツールとして使用される、養子細胞移入（ＡＣＴ）である（Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ （２０１３）；３９：４９－６０）。Ｔ細胞は、腫瘍細胞を認識するように遺伝子操作され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大され、次いで、患者へと戻され得る。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）操作されたＴ細胞、および腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含むいくつかの種類のＡＣＴが存在する（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ （２００８）；８：２９９－３０８）。ＡＣＴでは、Ｔ細胞は、腫瘍細胞を認識するように遺伝子操作され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大され、次いで、患者へと戻され得る。
ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、２０１７年にＦＤＡに承認された２つの治療を含む臨床実践場面で進歩した（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ （２０１８）；２３：１１７５－１１８２）。この分野における継続的努力は、腫瘍の輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）および認識を改善し、それらの増殖および持続性を増加させ、それらの活性に対する本発明者らのコントロールを強化するために、ＣＡＲ Ｔ細胞療法の現在の限界を対象としている（Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ （２０１７）；１６８：７２４－７４０）。オフターゲット効果の低下および毒性の減少、ならびに全体的有効性の改善を伴うＡＣＴの改善が必要とされる。患者における体液性応答は、それらを投与される患者のＣＡＲ Ｔ細胞に対して観察されている。このような抗体は、ＣＡＲ構築物タンパク質、および形質導入に使用されるレトロウイルスベクター由来のプロウイルスタンパク質に対するものであった（Ｋｅｒｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （２００６）；１２：６１０６－６１１５；Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１７：７２－８２；Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （２０１０）；１６：１２４５－１２５６．７－９）。細菌タンパク質がＣＲＩＳＰＲ技術の使用によってＣＡＲ Ｔ細胞操作のために使用されるので、また重要なことには、同種異系のＣＡＲ Ｔ細胞がより普及しているので、免疫原性はより一般的な問題にもなり得る（Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｓ （２０１８）；４１：７１７－７２３；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌｓ （２０１８）；７：１５５）。
本開示の細胞は、ＡＣＴ有効性を改善することができる、および／またはＣＡＲ Ｔ細胞に対する抗原性に関連して毒性を低減することができる。
本開示の細胞は、体液性応答に対する耐性を増加させ、これにより、ＣＡＲ Ｔ細胞の末梢持続性の延長が可能になり、それによって、より強力な活性（例えば、抗腫瘍活性）がもたらされる。細胞の持続性の延長は、細胞療法の費用対効果も改善することができる（例えば、通常、非常に高い費用を伴うＡＣＴ）。
ＣＡＲ－Ｔ細胞への抗体の結合により、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によるＣＡＲ Ｔ細胞の溶解がもたらされ、よって、治療効果の低下が生じ得る。抗イディオタイプ抗体は、ＣＡＲ Ｔ細胞機能を中和させることが示されている（Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１７：７２－８２）。ＣＡＲ Ｔ細胞の制限された末梢持続性は、細胞応答にも寄与しており、ここで、ＣＡＲ Ｔ細胞は、内因性Ｔ細胞によって標的とされる（Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１７：７２－８２；Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （２０１０）；１６：１２４５－１２５６）。炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞モデルにおいて観察される抗ＣＡＲ免疫を担うエピトープが同定され、これには、ＣＡＲの相補性決定領域およびフレームワーク領域に由来するペプチド配列、またＳＦＧレトロウイルスベクターに由来するプロウイルス配列が含まれた（Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１７：７２－８２）。この問題に対処するためにとられた１つのアプローチは、ＣＡＲを非免疫原性にするために、ＣＡＲをヒト化することである（Ｇｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｔｕｍｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （２００５）；２６：３１－４３）。しかし、これは、ウイルスベクターに特異的な免疫応答の問題にも、同種異系細胞の問題にも対処しないであろう。本開示の細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法などの外来の細胞療法に対する体液性応答を克服することができ、抗細胞抗体による細胞活性の中和を妨げることができる。
文献には、抗ＣＡＲ抗体の形成に関する先行技術が存在するが、しかし、これらの療法の成功に対してはかなりの障害が存在する（Ｋｅｒｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ （２００６）；１２：６１０６－６１１５；Ｌａｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１１）；１１７：７２－８２；Ｊｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （２０１０）；１６：１２４５－１２５６；Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｓ （２０１８）；４１：７１７－７２３；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌｓ （２０１８）；７：１５５）。
宿主体液性応答に対する生体分子シールド（例えば、潜在的な抗体）としての役割を果たすＩｇＧ分解酵素（例えば、ＩｄｅＳ）を含む本開示の細胞（ｐｒｅｓｅｎｔｌｙ ｄｉｓｃｌｏｓｅｓ ｃｅｌｌｓ）。細胞におけるＩｇＧ分解酵素の発現によって、ａ）抗ＣＡＲ抗体を中和することからの保護、ｂ）細胞（例えば、操作されたＣＡＲ Ｔ細胞）の持続性の延長、およびｃ）治療活性ウインドウの延長がもたらされ、それによって、全体的により高い有効性が得られる。ＣＡＲ－Ｔ細胞の分野における他のアプローチは、例えば、ＨＬＡ ＩおよびＴＣＲを除去することによって、ＣＡＲ Ｔ細胞に対する細胞免疫応答に焦点を当てている（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （２０１８）；１１：１－９）。しかし、本発明者らの認識として、これは、抗体に駆動される宿主免疫応答に対処することを直接目的とする最初の研究である。
５．５．組成物およびベクター
本開示の主題（ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｄｉｓｃｌｏｓｅｓ ｓｕｂｊｅｃｔ ｍａｔｔｅｒ）は、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素（例えば、項目５．２に開示される）および本明細書に開示されるリガンド認識受容体（例えば、項目５．３に開示される）を含む組成物を提供する。このような組成物を含む細胞も提供される。
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ分解酵素は、第１のプロモーターに作動可能に連結している。ある特定の実施形態では、リガンド認識受容体は、第２のプロモーターに作動可能に連結している。
ある特定の実施形態では、組成物は、切断可能な（例えば、自己切断可能な）リンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａペプチド、Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、およびＦ２Ａペプチド）をさらに含む。ある特定の実施形態では、組成物は、Ｐ２Ａペプチドをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、リガンド認識受容体とＩｇＧ分解酵素の間に位置する。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含むか、または有する。
さらに、本開示の主題（ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｄｉｓｃｌｏｓｅｓ ｓｕｂｊｅｃｔ ｍａｔｔｅｒ）は、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素（例えば、項目５．２に開示される）をコードする第１のポリヌクレオチドおよび本明細書に開示されるリガンド認識受容体（例えば、項目５．３に開示される）をコードする第２のポリヌクレオチドを含む核酸組成物を提供する。このような核酸組成物を含む細胞も提供される。
ある特定の実施形態では、核酸組成物は、ＩｇＧ分解酵素に作動可能に連結した第１のプロモーターをさらに含む。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、リガンド認識受容体に作動可能に連結した第２のプロモーターをさらに含む。
ある特定の実施形態では、第１および第２のプロモーターの一方または両方は、内因性または外因性である。ある特定の実施形態では、外因性プロモーターは、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫプロモーター、およびメタロチオネインプロモーターから選択される。
ある特定の実施形態では、核酸組成物は、切断可能な（例えば、自己切断可能な）リンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａペプチド、Ｔ２Ａペプチド、Ｅ２Ａペプチド、およびＦ２Ａペプチド）をさらに含む。ある特定の実施形態では、核酸組成物は、Ｐ２Ａペプチドをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、リガンド認識受容体とＩｇＧ分解酵素の間に位置する。ある特定の実施形態では、Ｐ２Ａペプチドは、配列番号４５に示されるヌクレオチド配列を含むか、または有する。組成物および核酸組成物は、対象に投与することができる、および／または当技術分野で公知の方法によるかもしくは本明細書に記載されたように細胞内に送達することができる。
細胞（例えば、免疫応答性細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の遺伝子改変は、組換えＤＮＡ構築物を実質的に均一な細胞組成物に形質導入することによって達成することができる。ある特定の実施形態では、レトロウイルスベクター（ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルスのいずれか）が、核酸組成物の細胞内への導入に用いられる。例えば、ＩｇＧ分解酵素をコードする第１のポリヌクレオチドおよびリガンド認識受容体をコードする第２のポリヌクレオチドをレトロウイルスベクター中にクローニングすることができ、その内因性プロモーターから、レトロウイルスの長鎖末端反復配列から、または目的の標的細胞型に特異的なプロモーターから、発現が駆動され得る。非ウイルスベクターも同様に使用することができる。
リガンド認識受容体（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）を含むための細胞の最初の遺伝子改変のために、レトロウイルスベクターが、一般に、形質導入のために用いられるが、しかし、任意の他の好適なウイルスベクターまたは非ウイルス送達系も使用することができる。リガンド認識受容体およびＩｇＧ分解酵素は、単一のマルチシストロニック発現カセット、単一のベクターの複数の発現カセット、または複数のベクターにおいて構築することができる。ポリシストロニック発現カセットを生じるエレメントの例としては、以下に限定されないが、様々なウイルスおよび非ウイルスの配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－１ ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦ ＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩ ＩＲＥＳ、ＮＦ－κＢ ＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ ＩＲＥＳ、ｐ５３ ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペストウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳおよび脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）ならびに切断可能なリンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２ＡおよびＦ２Ａペプチド）が挙げられる。レトロウイルスベクターと適切なパッケージング系の組合せは、キャプシドタンパク質が、ヒト細胞に感染するのに機能的である場合にも好適である。様々なアンホトロピックウイルス産生細胞系が公知であり、以下に限定されないが、ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒ， ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ５：４３１－４３７）；ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒ， ｅｔ ａｌ． （１９８６） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６：２８９５－２９０２）；およびＣＲＩＰ（Ｄａｎｏｓ， ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４）が含まれる。非アンホトロピック粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４またはＧＡＬＶエンベロープおよび当技術分野で公知の任意の他のものでシュードタイプ化された粒子も好適である。
形質導入の可能な方法には、例えば、Ｂｒｅｇｎｉ， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｂｌｏｏｄ ８０：１４１８－１４２２の方法による、細胞の産生細胞との直接的共培養、あるいは例えば、Ｘｕ， ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｅｘｐ． Ｈｅｍａｔ． ２２：２２３－２３０；およびＨｕｇｈｅｓ， ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ８９：１８１７の方法によって、ウイルス上清単独と、または適切な成長因子およびポリカチオンありまたはなしの濃縮ベクターストックと培養することも含まれる。
他の形質導入ウイルスベクターを使用して、細胞を改変してもよい。ある特定の実施形態では、選択されたベクターは、感染の高い効率ならびに安定した組み込みおよび発現を示す（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：４２３－４３０， １９９７；Ｋｉｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：８３３－８４４， １９９６；Ｂｌｏｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６６４１－６６４９， １９９７；Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３－２６７， １９９６；およびＭｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９４：１０３１９， １９９７を参照されたい）。使用することができる他のウイルスベクターとしては、例えば、アデノウイルス、レンチウイルス、およびアデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、またはヘルペスウイルス、例えば、エプスタインバーウイルス（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １５－１４， １９９０；Ｆｒｉｅｄｍａｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５－１２８１， １９８９；Ｅｇｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６０８－６１４， １９８８；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １：５５－６１， １９９０；Ｓｈａｒｐ， Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ ３３７：１２７７－１２７８， １９９１；Ｃｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３６：３１１－３２２， １９８７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２６：４０１－４０９， １９８４；Ｍｏｅｎ， Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ １７：４０７－４１６， １９９１；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：９８０－９９０， １９８９；ＬｅＧａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９：９８８－９９０， １９９３；およびＪｏｈｎｓｏｎ， Ｃｈｅｓｔ １０７：７７Ｓ－ ８３Ｓ， １９９５のベクターも参照されたい）が挙げられる。レトロウイルスベクターは、特によく開発されており、臨床実践場面で使用されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ ３２３：３７０， １９９０；Ａｎｄｅｒｓｏｎらの米国特許第５，３９９，３４６号）。
非ウイルスアプローチも、細胞の遺伝子改変に用いることができる。例えば、リポフェクションの存在下で核酸を投与することによって（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８４：７４１３， １９８７；Ｏｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７：２５９， １９９０；Ｂｒｉｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｓｃｉ． ２９８：２７８， １９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １０１：５１２， １９８３）、アシアロオロソムコイド－ポリリシンコンジュゲーション（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６３：１４６２１， １９８８；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６４：１６９８５， １９８９）、または外科手術条件下でのマイクロインジェクション（Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１４６５， １９９０）によって、核酸分子を細胞内に導入することができる。遺伝子移入のための他の非ウイルスによる手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔、およびプロトプラスト融合を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクションが含まれる。ＤＮＡの細胞内への送達には、リポソームも潜在的に有益であり得る。正常な遺伝子の、対象の罹患組織への移植は、正常な核酸を、ｅｘ ｖｉｖｏで培養可能な細胞型（例えば、自家または異種の初代細胞またはその後代）に移入し、その後、細胞（またはその子孫）を標的化組織に注射するか、または全身的に注射することによって達成され得る。組換え受容体はまた、トランスポサーゼまたは標的化されたヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して誘導され得るか、または得ることができる。一過的発現は、ＲＮＡ電気穿孔によって得ることができる。
いずれかの標的化ゲノム編集方法を使用して、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素および／またはリガンド認識受容体を細胞または対象に送達することができる。ある特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムを使用して、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素および／またはリガンド認識受容体を送達する。ある特定の実施形態では、ジンクフィンガーヌクレアーゼを使用して、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素および／またはリガンド認識受容体を送達する。ある特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮ系を使用して、本明細書に開示されるＩｇＧ分解酵素および／またはリガンド認識受容体を送達する。
クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核細胞において発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集のために利用される場合、このシステムは、Ｃａｓ９（ｃｒＲＮＡをそのガイドとして利用してＤＮＡを改変することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ、Ｃａｓ９と活性複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般に、ヘアピンループ形態の）に結合する領域と一緒に、宿主ＤＮＡの正しいセクションにそれをガイドするためにＣａｓ９によって使用されるＲＮＡを含有する）、ｔｒａｎｓ活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡに結合し、Ｃａｓ９と活性複合体を形成する）、およびＤＮＡ修復鋳型（特定のＤＮＡ配列の挿入を可能にする細胞修復プロセスをガイドするＤＮＡ）の必要に応じたセクションを含む。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、標的細胞にトランスフェクトするためにプラスミドを用いることが多い。ｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９が、細胞内の標的ＤＮＡを特定し、それに直接結合するために使用する配列であるため、適用ごとに設計される必要がある。ＣＡＲ発現カセットを保有する修復鋳型も、それが、切断のいずれかの側の配列と重複し、かつ挿入配列をコードしなければならないため、適用ごとに設計される必要がある。複数のｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡを一緒にパッケージングして、単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成することができる。このｓｇＲＮＡは、Ｃａｓ９遺伝子と一緒に接合され、プラスミドにされ、細胞内にトランスフェクトされ得る。
ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される人工的制限酵素である。ジンクフィンガードメインは、特定のＤＮＡ配列を標的とするように操作されてもよく、それにより、ジンクフィンガーヌクレアーゼがゲノム内の所望の配列を標的とすることが可能になる。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、複数の個々のジンクフィンガーリピートを含有し、それぞれ、複数の塩基対を認識することができる。新たなジンクフィンガードメインを生成するための最も一般的な方法は、公知の特異性のより小さなジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。ＺＦＮにおける最も一般的な切断ドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩ由来の非特異的切断ドメインである。内因性相同組換え（ＨＲ）機構およびＣＡＲ発現カセットを保有する相同ＤＮＡ鋳型を使用すると、ＺＦＮを使用して、ＣＡＲ発現カセットをゲノム内に挿入することができる。標的化配列がＺＦＮによって切断されると、ＨＲ機構は、損傷を受けた染色体と相同ＤＮＡ鋳型の間の相同性を検索し、次いで、染色体の２つの破壊された末端の間の鋳型の配列をコピーし、それによって、相同ＤＮＡ鋳型がゲノム内に組み込まれる。
転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＤＮＡの特定の配列を切断するよう操作され得る制限酵素である。ＴＡＬＥＮシステムは、ＺＦＮとほとんど同じ原理で作用する。これらは、転写アクチベーター様エフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される。転写アクチベーター様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特定のヌクレオチドに対する強力な認識を有する２つの可変位置を有する３３～３４アミノ酸反復モチーフから構成される。これらのＴＡＬＥのアレイをアセンブルすることによって、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインを所望のＤＮＡ配列に結合するように操作し、それによって、ゲノム内の特定の場所で切断するようヌクレアーゼをガイドすることができる。ポリヌクレオチド治療方法において使用するためのｃＤＮＡ発現を、任意の好適なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、またはメタロチオネインプロモーター）から指示することができ、任意の適切な哺乳類調節エレメントまたはイントロン（例えば、伸長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節することができる。例えば、所望の場合、特定の細胞型において遺伝子発現を優先的に指示することが公知のエンハンサーを使用して、核酸の発現を指示することができる。使用されるエンハンサーとしては、限定されないが、組織または細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものを挙げることができる。あるいは、ゲノムクローンが治療用構築物として使用される場合、上記のプロモーターまたは調節エレメントのいずれかを含む、同族の調節配列によって、または所望の場合、異種供給源に由来する調節配列によって、調節が媒介され得る。
得られる細胞は、未改変細胞に関する条件に類似する条件下で成長することができ、それによって、改変細胞は拡大され、種々の目的で使用され得る。
ゲノム編集剤／システムを送達するための方法は、その必要性に応じて変化し得る。ある特定の実施形態では、選択されたゲノム編集方法の構成成分は、１つまたは複数のプラスミドにおいて核酸組成物（例えば、ＤＮＡ構築物）として送達される。ある特定の実施形態では、構成成分は、ウイルスベクターによって送達される。一般的な送達方法としては、以下に限定されないが、電気穿孔、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インパルフェクション（ｉｍｐａｌｅｆｅｃｔｉｏｎ）、静水圧、持続注入、超音波処理、マグネトフェクション、アデノ随伴ウイルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質シュードタイプ化、複製コンピテントベクターｃｉｓおよびｔｒａｎｓ作用エレメント、単純ヘルペスウイルス、および化学的ビヒクル（例えば、オリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子、および細胞透過性ペプチド）が挙げられる。
本明細書に開示される組成物または核酸組成物は、ゲノム内の任意の場所に配置され得る。ある特定の実施形態では、組成物または核酸組成物は、Ｔ細胞のゲノム内の部位に配置される。
５．６．ポリペプチドおよびアナログ
所望の目的のため、例えば、細胞内で発現される場合、それらの抗新生物および／または抗腫瘍活性を増強するための方法で改変される、本明細書に開示されるポリペプチド（例えば、ＣＤ１９、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、およびＩｇＧ分解酵素またはその断片）も本開示の主題に含まれる。本開示の主題は、配列において変更を生じさせることによってアミノ酸配列または核酸配列を最適化するための方法、ならびに改変されたアミノ酸配列および核酸配列を提供する。このような変更には、ある特定の変異、欠失、挿入、または翻訳後修飾が含まれてもよい。本開示の主題は、本明細書に開示される任意の天然に存在するポリペプチドのアナログをさらに含む。アナログは、アミノ酸配列の差異によって、翻訳後修飾によって、またはその両方によって、本明細書に開示される天然に存在するポリペプチドと異なり得る。アナログは、本開示の主題の天然に存在するアミノ酸配列（ａｍｉｎｏ， ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）のすべてまたはその一部と、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはそれより高い割合で相同であることを示し得る。配列比較の長さは、少なくとも５、１０、１５もしくは２０アミノ酸残基、例えば、少なくとも２５、５０、もしくは７５アミノ酸残基、または１００を超えるアミノ酸残基である。ここでもやはり、同一性の程度を決定することに対する例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ－３とｅ－１００の間の確率スコアは密接に関連する配列を示す。改変には、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの化学誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、またはグリコシル化が含まれ、このような改変は、ポリペプチドの合成もしくはプロセシング中に、または単離された改変酵素を用いた処理の後に起こり得る。アナログは、一次配列の変更によっても天然に存在するポリペプチドと異なり得る。これらには、自然の、および誘導された遺伝学的バリアントの両方（例えば、放射線照射もしくはエタンメチルスルフェートへの曝露によるランダム変異誘発からもたらされるか、またはＳａｍｂｒｏｏｋ， Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （２ｄ ｅｄ．）， ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ， １９８９、もしくはＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、上掲に記載されている部位特異的変異誘発による）が含まれる。例えば、Ｄ－アミノ酸または天然に存在しないかもしくは合成アミノ酸（例えば、βまたはγアミノ酸）のような、Ｌ－アミノ酸以外の残基を含有する環化ペプチド、分子、およびアナログも含まれる。
全長ポリペプチドに加えて、本開示の主題は、本明細書に開示されるポリペプチドのいずれか１つの断片も提供する。本明細書で使用される場合、用語「断片」は、少なくとも５、１０、１３、または１５アミノ酸を意味する。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも２０の連続するアミノ酸、少なくとも３０の連続するアミノ酸、または少なくとも５０の連続するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも６０～８０、１００、２００、３００またはそれより多くの連続するアミノ酸を含む。断片は、当業者に公知の方法によって生成されてもよく、または通常のタンパク質プロセシング（例えば、新生ポリペプチドからの、生物学的活性に必要とされないアミノ酸の除去、または選択的ｍＲＮＡスプライシングもしくは選択的タンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）から得られてもよい。
非タンパク質アナログは、本明細書に開示されるタンパク質（例えば、ＩｇＧ分解酵素）の機能的活性を模倣するように設計された化学構造を有する。このようなアナログは、元のポリペプチドの生理学的活性を超える場合がある。アナログ設計の方法は当技術分野で周知であり、アナログの合成は、得られたアナログが細胞内で発現された場合に、元のポリペプチドの抗新生物活性を増加させるように化学構造を改変することによって、このような方法に従って実施することができる。これらの化学的改変には、代替のＲ基を置換すること、および参照ポリペプチドの特定の炭素原子における飽和度を変更することが含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、タンパク質アナログは、ｉｎ ｖｉｖｏでの分解に対して比較的耐性であり、投与の際により延長された治療効果をもたらす。機能的活性を測定するためのアッセイには、以下の実施例に記載されるものが含まれるがこれらに限定されない。
５．７．投与
本開示の細胞を含む組成物は、抗原に対する免疫応答を誘導および／もしくは増強する、ならびに／または新生物、病原体感染、もしくは感染性疾患を処置および／もしくは防止するために、全身的または直接的に対象に与えられてもよい。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、目的の臓器（例えば、新生物に罹患した臓器）に直接注入される。あるいは、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍の血管系）への投与によって、目的の臓器に間接的に与えられる。増殖および分化剤（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで、細胞（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬ細胞）またはＮＫ細胞）の生成を増加させるために、細胞、組成物、または核酸組成物の投与前、その間またはその後に与えることができる。
本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、静脈内、皮下、リンパ節内、腫瘍内、髄腔内、胸腔内、腹腔内、および皮膚を含むがこれらに限定されない任意の好適な経路で投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物は、対象に、腹腔内投与される。通常、少なくとも約１×１０５個の細胞が投与され、最終的に約１×１０１０個またはそれより多くに達する。本開示の細胞は、細胞の不純な、または精製された集団を含み得る。当業者は、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などの様々な周知の方法を使用して、集団における本開示の細胞のパーセンテージを容易に決定することができる。本開示の細胞を含む集団における純度の好適な範囲は、約５０％～約５５％、約５％～約６０％、および約６５％～約７０％である。ある特定の実施形態では、純度は、約７０％～約７５％、約７５％～約８０％、または約８０％～約８５％である。ある特定の実施形態では、純度は、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、および約９５％～約１００％である。投薬量は、当業者によって容易に調整され得る（例えば、純度の低下には、投薬量の増加が必要とされ得る）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入することができる。細胞は、様々な系列の、１０９または最大１０１１個の細胞を含む臓器または組織から構成されていてもよい。
本開示の組成物は、本開示の細胞またはそれらの前駆体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であってもよい。投与は、自家または異種であってもよい。例えば、細胞、または前駆体は、１つの対象から得られ、同じ対象または異なる、適合性の対象に投与されてもよい。末梢血由来の細胞またはそれらの後代（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ由来）は、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を含む局所注射によって投与され得る。本開示の主題の治療用組成物（例えば、本開示の免疫応答性細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、これは、注射可能な単位剤形（液剤、懸濁剤、乳剤）に製剤化され得る。
５．８．製剤
本開示の細胞を含む組成物は、滅菌液体調製物、例えば、等張水性液剤、懸濁剤、乳剤、分散液剤、または粘性組成物（選択されたｐＨに緩衝され得る）として、好都合に提供され得る。液体調製物は、通常、ゲル剤、他の粘性組成物、および固体組成物よりも調製するのが容易である。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するのが、多少なりともより都合がよい。一方、粘性組成物は、適切な粘度範囲内で製剤化され、特定の組織とより長い接触期間を得ることができる。液体または粘性の組成物は、担体を含んでもよく、担体は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であってもよい。
滅菌注射用液剤は、所要量の適切な溶媒に、遺伝子改変された免疫応答性細胞を、所望の場合、様々な量の他の成分と共に組み込むことによって調製することができる。このような組成物は、好適な担体、希釈剤、または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、ブドウ糖などと混合されてもよい。組成物は、凍結乾燥されてもよい。組成物は、補助物質、例えば、所望の投与経路および調製物に応じて、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または増粘添加剤、防腐剤、着香剤、着色剤などを含有することができる。不要な実験をすることなく、好適な調製物を調製するために、参照により本明細書に組み込まれる、”ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ”， １７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８５などの標準的なテキストを参照してもよい。
抗微生物防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む、組成物の安定性および滅菌性を増強する様々な添加剤を添加してもよい。微生物活動の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実にすることができる。注射可能な医薬形態の吸収の延長は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本開示の主題によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤、または添加剤は、遺伝子改変された免疫応答性細胞またはそれらの前駆体と適合性でなければならない。
組成物は、等張性であってもよく、すなわち、これらは、血液および涙液と同じ浸透圧を有してもよい。組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、あるいは他の薬学的に許容される剤、例えば、ブドウ糖、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールまたは他の無機もしくは有機溶質を使用して達成することができる。塩化ナトリウムは、特に、ナトリウムイオンを含有する緩衝剤のためのものであり得る。
組成物の粘度は、所望の場合、薬学的に許容される増粘剤を使用して、選択されたレベルに維持することができる。例えば、メチルセルロースは、容易かつ経済的に利用可能であり、共に作用し易い。他の好適な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが挙げられる。増粘剤の濃度は、選択される剤に依存し得る。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、好適な担体および他の添加剤の選択は、正確な投与経路および特定の剤形、例えば、液体剤形の性質（例えば、組成物が、液剤、懸濁剤、ゲル剤または別の液体形態、例えば、持続放出（ｔｉｍｅ ｒｅｌｅａｓｅ）形態もしくは液体充填形態に製剤化されるべきかどうか）に依存する。
投与される細胞の量は、処置される対象に対して変化する。ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞の約１０４～約１０１０個の間、約１０５～約１０９個の間、または約１０６～約１０８個の間が対象（例えば、ヒト対象）に投与される。ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞の約１０４～約１０７個の間、または約１０５～約１０７個の間が対象（例えば、ヒト対象）に投与される。より効果的な細胞は、さらにより少ない数で投与される場合がある。ある特定の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞の少なくとも約１×１０８、約２×１０８、約３×１０８、約４×１０８、または約５×１０８個が対象（例えば、ヒト対象）に投与される。有効用量と考えられるものの正確な決定は、それらのサイズ、年齢、性別、体重、および特定の対象の状態を含む、各対象に固有の要因に基づいてもよい。投薬量は、本開示および当技術分野における知識から、当業者によって容易に確認され得る。
当業者は、組成物中の、および方法において投与されるべき、細胞ならびに必要に応じた添加剤、ビヒクル、および／または担体の量を容易に決定することができる。典型的には、任意の添加剤（活性細胞（複数可）および／または剤（複数可）に加えて）は、リン酸緩衝食塩水中、０．００１～５０％（重量）溶液の量で存在し、活性成分は、マイクログラムからミリグラムのオーダーで、例えば、約０．０００１～約５ｗｔ％、約０．０００１～約１ｗｔ％、約０．０００１～約０．０５ｗｔ％または約０．００１～約２０ｗｔ％、約０．０１～約１０ｗｔ％、または約０．０５～約５ｗｔ％で存在する。動物またはヒトに投与されるべき任意の組成物に関して、以下のものを決定することができる：好適な動物モデル、例えば、マウスなどの齧歯類において、致死用量（ＬＤ）およびＬＤ５０を決定することなどによる毒性；好適な応答を誘発する組成物（複数可）の投薬量、その中の構成成分の濃度および組成物（複数可）を投与するタイミング。このような決定は、当業者の知識、本開示および本明細書において引用される文書から、不要な実験を必要としない。そして、逐次的投与のための時間は、不要な実験を用いずに確認することができる。
５．９．使用方法
本開示の主題は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物を、例えば、処置または治療のために、対象に投与するための方法を提供する。処置または治療の非限定的な例としては、免疫療法（例えば、養子細胞移入）、細胞療法（ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ）（または細胞療法（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ））、幹細胞移植、臓器移植、遺伝子療法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集療法）、ウイルス注入（例えば、ＡＡＶ）、核酸、遊離核酸もしくはより安定化されたアナログ、ｍＲＮＡもしくは安定化されたｍＲＮＡを含有するナノ粒子、または対象の操作された細胞を含有する臓器もしくは組織が挙げられる。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、治療、処置、または医薬において使用することができる。ある特定の実施形態では、宿主体液性応答に対する増加した耐性、細胞の延長された持続性、および／または外来細胞の緩和された免疫原性が、治療または処置に対して望ましい。
本開示の主題は、対象における新生物を処置および／または防止するための方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象における新生物を処置および／または防止するために使用することができる。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、新生物を患っている対象の生存時間を延長するために使用することができる。
本開示の主題は、対象、例えば、免疫不全状態のヒト対象における病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象、例えば、免疫不全状態のヒト対象における病原体感染または他の感染性疾患を処置および／または防止するために使用することもできる。このような方法は、有効量で、本開示の細胞、本開示の組成物（例えば、医薬組成物）、または本開示の核酸組成物を投与し、所望の効果（たとえそれが、既存の状態の緩和または再発の防止であっても）を達成するステップを含む。
本開示の主題は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するためにも使用することができる。このような方法は、有効量で、本開示の細胞、本開示の組成物（例えば、医薬組成物）、または本開示の核酸組成物を、自己免疫疾患を有する対象に投与するステップを含む。
本開示の主題は、対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するための方法であって、対象が臓器移植を受ける、方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物を、対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するために使用することもでき、対象は臓器移植を受ける。このような方法は、有効量で、本開示の細胞、本開示の組成物（例えば、医薬組成物）、または本開示の核酸組成物を、臓器移植を受ける対象に投与するステップを含む。
本開示の主題は、対象における自家または同種異系細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するための方法であって、対象が細胞療法を受ける、方法を提供する。本開示の細胞、組成物、および核酸組成物を、細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するために使用することもでき、対象は細胞療法を受ける。このような方法は、有効量で、本開示の細胞、本開示の組成物（例えば、医薬組成物）、または本開示の核酸組成物を、細胞療法を受ける対象に投与するステップを含む。
処置では、投与される量は、所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量は、１回または一連の投与において与えることができる。有効量は、ボーラスで、または連続的潅流によって与えることができる。
「有効量」（すなわち、「治療有効量」）は、処置の際に、有益な、または所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１回または複数回の用量で対象に投与することができる。処置に関して、有効量は、疾患の進行を軽減するか、軽快させるか、安定化させるか、逆転させるか、もしくは遅らせる、またはそうでなければ、疾患の病理学的結果を低減させるのに十分な量である。有効量は、一般に、個々の場合に応じて医師によって決定され、当業者の技術の範囲内である。有効量を達成するために適切な投薬量を決定する場合には、典型的には、いくつかの要因が考慮される。これらの要因には、対象の年齢、性別および体重、処置される状態、状態の重症度ならびに投与される細胞の形態および有効濃度が含まれる。
抗原に特異的なＴ細胞を使用する養子免疫療法では、約１０６～１０１０（例えば、約１０９）個の範囲の細胞用量が、典型的に注入される。本開示の細胞の宿主への投与、およびその後の分化の際に、特異的抗原に対して特異的に方向付けられるＴ細胞が誘導される。
新生物
本開示の主題は、対象における新生物を処置および／または防止するための方法を提供する。本方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、新生物を有する対象に投与するステップを含み得る。
新生物の非限定的な例としては、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）、卵巣がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸がん、肝臓がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫、咽頭がん、黒色腫、神経芽腫、腺癌、神経膠腫、軟組織肉腫、および様々な癌（前立腺がんおよび小細胞肺がんを含む）が挙げられる。好適な癌は、腫瘍学の分野で公知の任意のものをさらに含み、以下に限定されないが、星状細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、乏突起神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、原始神経外胚葉腫瘍（ＰＮＥＴ）、軟骨肉腫、骨原性肉腫、膵管腺癌、小細胞肺腺癌および大細胞肺腺癌、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、扁平上皮癌、細気管支肺胞癌、上皮性腺癌、ならびにこれらの肝転移、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、ヘパトーマ、胆管癌、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、結腸癌、基底細胞癌、汗腺癌、乳頭状癌、脂腺癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽腫、網膜芽腫、白血病、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに重鎖病、乳房腫瘍（例えば、腺管および小葉腺癌）、子宮頸部の扁平上皮癌および腺癌、子宮上皮癌および卵巣上皮癌、前立腺腺癌、膀胱の移行扁平上皮癌、Ｂ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫（結節性およびびまん性）形質細胞腫、急性白血病および慢性白血病、悪性黒色腫、軟組織肉腫ならびに平滑筋肉腫を含む。ある特定の実施形態では、新生物は、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、膀胱がん、脳がん、結腸がん、腸がん、肝臓がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、皮膚がん、胃がん、神経膠芽腫、および咽頭がんから選択される。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、核酸組成物は、従来の治療介入を受けることができない、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫）または卵巣がんを処置および／または防止するために使用することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、核酸組成物は、固形腫瘍を処置および／または防止するために使用することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、組成物、核酸組成物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、乳がん、卵巣がん、中皮腫、神経膠芽腫、結腸直腸がん、および膵臓がんから選択される新生物を処置および／または防止するために使用することができる。
自己免疫疾患
本開示の主題は、対象における自己免疫疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。本方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、自己免疫疾患を有する対象に投与するステップを含み得る。自己免疫疾患の非限定的な例としては、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性ループス、グレーブス病、橋本甲状腺炎、全身性硬化症、胆汁性肝硬変、セリアック病、軸索型ニューロパチー、炎症性筋障害、小脳変性、１型糖尿病、および多発性筋炎が挙げられる。
米国には、自己免疫障害を有する２０００万人を超える患者が存在する。これらの多く、例えば、ループスおよび重症筋無力症は、患者自身の組織構成成分、ＤＮＡおよび細胞への抗体による攻撃に関与する。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｇｏｏｇｌｅ．ｃｏｍ／ｓｅａｒｃｈ？ｃｌｉｅｎｔ＝ｆｉｒｅｆｏｘ－ｂ－１－ｄ＆ｑ＝ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ＋ｏｕｔｉｍｍｕｎｅ＋ｄｉｓｅａｓｅ。これらの疾患には、有効なアプローチも治癒可能なアプローチも少ない。ＩｇＧは、ヒト免疫系において重要な保護的役割を果たすが、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性ループスなどのような疾患の病因にも関連し、ここで、ＩｇＧの除去をこれらの自己免疫疾患を処置するための治療手段として使用している（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ ＯＮＥ （２００８）；３：１－６；Ｂｅｒｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｏｒｇａｎｓ （１９９４）；１７：６０３－６０８；Ｓｔｕｍｍｖｏｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ （２００５）；６４：１０１５－１０２１）。本開示の細胞に含まれるＩｇＧ分解酵素は、宿主細胞を攻撃する機能的ＩｇＧを枯渇させ、それによって、自己免疫疾患を処置することができる。
抗体媒介性拒絶
本開示の主題は、対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象は、臓器移植を受ける。ある特定の実施形態では、移植は、同種異系移植（同種移植）である。ある特定の実施形態では、対象は、臓器移植前に、本開示の細胞、組成物、または核酸組成物を投与される。ある特定の実施形態では、対象は、細胞療法を受ける、例えば、細胞および／または組織（例えば、自家または同種異系の細胞および／または組織）は、細胞療法において使用される。
本方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、対象に投与するステップを含み得る。
腎臓、肝臓、肺、心臓および他の臓器に関するものなどの固形臓器移植は、米国において、１年に３６，０００人を超える患者で使用され、１００，０００人を超える人が移植を待っている。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｏｒｇａｎｄｏｎｏｒ．ｇｏｖ／ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ－ｓｔｏｒｉｅｓ／ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．ｈｔｍｌ。これらの臓器は、可能な限り患者に適合されるが、重篤な結果および時には致命的な結果を有する患者の免疫抑制は、高頻度であり一生続く。米国における費用は１００，０００，０００，０００ドルである。宿主のＩｇＧは、同種移植において重要な役割を果たし、ここで、ＨＬＡドナー間の不適合によって、同種移植片の抗体媒介性拒絶がもたらされる（Ｌｏｕｐｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１８）；３７９：１１５０－１１６０）。ＩｄｅＳは、同種移植前の脱感作に関してヒトにおいて評価された。本研究では、２５人の患者のうちの２４人は、すべてのドナー特異的抗体を迅速に除去したＩｄｅＳによる処置後に、ＨＬＡ－不適合移植を受けることができた（Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１７）；３７７：４４２－４５３；Ｌｏｎｚｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ （２０１８）；２６８：４８８－４９６）。本開示の細胞に含まれるＩｇＧ分解酵素は、機能的ＩｇＧ（例えば、宿主のＩｇＧ）を枯渇させ、ドナーの臓器細胞を攻撃し、それによって、臓器移植に伴う抗体媒介性拒絶を低減および／または防止することができる。
対象は、進行した形態の疾患を有する場合があり、この場合には、処置の目的は、疾患進行の軽減もしくは逆転、および／または副作用の軽快を含み得る。対象は、既に処置された状態の病歴を有する場合があり、この場合には、治療目的は、典型的には、再発リスクの低下または遅延を含む。
治療に対して好適なヒト対象は、典型的には、臨床基準によって識別され得る２つの処置群を含む。「進行した疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する対象は、臨床的に測定可能な腫瘍を有する対象である。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍量（ｔｕｍｏｒ ｍａｓｓ）に基づいて検出され得る腫瘍である（例えば、触診、ＣＡＴスキャン、ソノグラム、マンモグラムまたはＸ線によって；それら自体の正の生化学的マーカーまたは組織病理学的マーカーは、この集団を特定するのに不十分である）。医薬組成物は、これらの対象に投与され、これらの状態を軽減する目的で、抗腫瘍応答を誘発する。理想的には、腫瘍量の低減が結果として生じるが、いずれの臨床的改善も利益を構成する。臨床的改善には、進行のリスクもしくは速度の低下、または腫瘍の病理学的結果における低減が含まれる。
第２の群の好適な対象は、「アジュバント群」として当技術分野で公知である。これらは、新生物の病歴を有しているが、別の治療方式に対して応答性であった個体である。以前の治療には、外科的切除、放射線治療、および伝統的な化学療法が含まれ得るが、これらに限定されない。結果として、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有さない。しかし、これらは、元の腫瘍部位付近で、または転移によるかのいずれかで、疾患の進行に関するリスクがあると疑われる。この群は、高リスクの個体と低リスクの個体へとさらに細分することができる。細分は、初期の処置の前後に観察された特色（ｆｅａｔｕｒｅ）に基づいてなされる。これらの特色は、臨床の技術分野で公知あり、それぞれ異なる新生物に対して好適に定義される。高リスクサブグループの典型的な特色は、腫瘍が隣接する組織を侵襲しているか、またはリンパ節の関与を示すものである。
別の群は、新生物に対する遺伝的素因を有するが、新生物の臨床徴候を未だ明示していない。例えば、乳がんに関連する遺伝子変異に関する試験に陽性であるが、依然として妊娠可能年齢である女性は、予防手術を実施するのに好適となるまで、新生物の出現を防止するために予防的な処置において、本発明に記載の細胞の１つまたは複数を受けることを希望することができる。
リガンド認識受容体（例えば、腫瘍抗原に結合する抗原認識受容体）および細胞の活性（例えば、抗腫瘍活性）を増強するＩｇＧ分解酵素の発現の結果として、養子移入された細胞は、腫瘍部位で増大された選択的な細胞溶解活性を与えられる。さらに、腫瘍またはウイルス感染に対するそれらの局在化およびそれらの増殖に引き続いて、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、腫瘍またはウイルス感染部位を、生理学的抗腫瘍または抗ウイルス応答に関与する広範囲の免疫細胞（腫瘍浸潤リンパ球、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞、およびマクロファージ）に対する高度に伝導性の環境に変える。
さらに、本開示の主題は、対象、例えば、免疫不全状態の対象における病原体感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、寄生生物感染、または原生生物感染）を処置および／または防止するための方法を提供する。本方法は、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を、病原体感染を有する対象に投与するステップを含み得る。処置に感受性の例示的なウイルス感染としては、以下に限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびインフルエンザウイルス感染が挙げられる。
さらなる改変は、本開示の細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入され、免疫学的合併症（「悪性Ｔ細胞形質転換」として公知）、例えば、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスク、または健康な組織が腫瘍細胞と同じ標的抗原を発現する場合、ＧｖＨＤと同様の転帰をもたらすことのリスクを回避するかまたは最小限にすることができる。この問題に対する潜在的な解決は、本開示の免疫応答性細胞へ自殺遺伝子を操作することである。好適な自殺遺伝子としては、以下に限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導性カスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ－９）、および短縮型ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによってＴ細胞排除を可能にし得る。ＥＧＦＲｔは、本開示のＣＡＲの抗原認識受容体の上流に共有結合により接合されてもよい。自殺遺伝子は、本開示のＣＡＲをコードする核酸を含むベクター内に含まれてもよい。この方法では、悪性Ｔ細胞形質転換（例えば、ＧＶＨＤ）の間に自殺遺伝子を活性化するように設計したプロドラッグ（例えば、プロドラッグ（例えば、ｉＣａｓｐ－９を活性化し得るＡＰ１９０３））の投与は、自殺遺伝子活性化ＣＡＲ発現Ｔ細胞中でアポトーシスを誘発する。自殺遺伝子の本開示のＣＡＲへの組み込みにより、非常に短い期間内にＣＡＲ Ｔ細胞の大多数を排除する能力と共にさらなるレベルの安全性が与えられる。自殺遺伝子を組み込まれた本開示の細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後の所与の時点で先制して排除されるか、または毒性の最も早い徴候の時点で根絶され得る。
５．１０．キット
本開示の主題は、対象における新生物、または病原体感染、または自己免疫疾患を処置および／または防止するためのキット、ならびに対象における抗体媒介性拒絶を低減および／または防止するためのキットを提供し、対象は臓器移植を受ける。ある特定の実施形態では、キットは、本開示の細胞、本開示の組成物、または本開示の核酸組成物の有効量を含む。ある特定の実施形態では、キットは、滅菌容器を含み；このような容器は、ボックス、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック、または当技術分野で公知の他の好適な容器形態であり得る。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイル、または医薬を保持するために好適な他の材料から作製することができる。ある特定の非限定的な実施形態では、キットは、目的の抗原に対する抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）をコードする単離された核酸分子および発現可能な（および分泌可能な）形態でＩＬ－３６ポリペプチドをコードする単離された核酸分子（これらは、必要に応じて、同じかまたは異なるベクターに含まれてもよい）を含む。
所望の場合、細胞、組成物、または核酸組成物は、新生物、病原体感染、もしくは自己免疫疾患を有するかもしくは発症するリスクのある対象、または臓器移植を受ける対象に、細胞、組成物、または核酸組成物を投与するための指示と一緒に提供される。指示は、一般に、新生物または病原体感染、または自己免疫疾患の処置または防止のための細胞、組成物または核酸組成物の使用についての情報を含む。ある特定の実施形態では、指示は、以下のうちの少なくとも１つを含む：治療剤の説明；新生物、病原体感染、もしくは免疫障害またはその症状の処置または防止のための投薬スケジュールおよび投与；使用上の注意；警告；適応症；禁忌；過量情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；ならびに／あるいは参考文献。指示は、容器（存在する場合）に直接印刷されてもよく、あるいは容器に貼付されるラベルとして、または容器の中に、もしくは容器と一緒に供給される別個のシート、パンフレット、カード、もしくはフォルダーとして印刷されてもよい。
６．実施例
本開示の実践には、別段に指定されていない限り、十分に当業者の範囲内にある分子生物学（組み換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法が用いられる。このような技法は、”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”， ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ， １９８９）；”Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ” （Ｇａｉｔ， １９８４）；”Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ” （Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， １９８７）；”Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ” ”Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” （Ｗｅｉｒ， １９９６）；”Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ” （Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ， １９８７）；”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ” （Ａｕｓｕｂｅｌ， １９８７）；”ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”， （Ｍｕｌｌｉｓ， １９９４）；”Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ” （Ｃｏｌｉｇａｎ， １９９１）などの文献において十分に説明されている。これらの技法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの産生に適用可能であり、したがって、本開示の主題を作製および実践する際に考慮され得る。特定の実施形態に関する特に有用な技法は、以降の項目において議論される。
以下の実施例は、本開示の細胞および組成物を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために示されるものであり、本発明者らが自らの発明と考えるものの範囲の限定を意図するものではない。
（実施例１）
生成およびｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性
概要
２つの形態のＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞、すなわち、膜結合形態（ＩｄｅＳは、表面膜結合形態として発現された）および分泌形態（ＩｄｅＳは、細胞から分泌された）を生成した。以下に示されるように、両方の形態で、ＩｄｅＳは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＩｇＧを切断することに成功した。
結果
構築物および安定した株の生成
Ｂ細胞腫瘍の抗原であるＣＤ１９を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＦＤＡによって最近承認された（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ （２０１８）；２３：１１７５－１１８２）。ＣＤ１９は、Ｂ細胞に特異的であり、通常、他の細胞または組織上で発現されないため、理想的な抗原となる。４－１ＢＢ／ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ１９ ＣＡＲは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、および患者においてｉｎ ｖｉｖｏで十分に特徴付けられている（Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ． （２０１３）；５：１７７ｒａ３８；Ｐｅｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２０１２）；１１９：４１３３－４１４１；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１１）；３：１－１１）。
図１に示されるように、膜結合形態の構築物（「ＩｄｅＳ－ｔｍ」と称される；図１Ａを参照されたい）および分泌形態の構築物（「ＩｄｅＳ－ｓｅｃ」と称される；図１Ｂを参照されたい）を生成した。Ｔ細胞を操作して、４－１ＢＢポリペプチドおよびＣＤ３ζポリペプチドを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ８ポリペプチドを含む膜貫通ドメインを含むＣＤ１９標的化ＣＡＲを発現させた。ＣＡＲは、「１９ＢＢｚ」として示される。
構築物の設計は、ＳＦＧガンマレトロウイルスベクターを使用する以前に報告された方法に基づいた（Ｒｉｖｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ （１９９５）；９２：６７３３－７）。ＣＤ８シグナルペプチド配列を使用して、ＩｄｅＳを細胞膜に輸送した（図１Ａおよび１Ｂを参照されたい）。酵素の膜結合バージョンを生成するために、ＣＤ８の膜貫通ドメインを酵素のＣ末端に組み込んだ。次いで、ＣＡＲ構築物を自己切断ペプチド２Ａの後に付加した。図１Ａおよび１Ｂに示されるように、ＣＡＲ構築物は、ＣＤ８シグナルペプチド配列、抗原特異的ｓｃＦｖ（この場合、抗ＣＤ１９）、ＣＤ８膜貫通ドメイン、および４－１ＢＢ／ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲを発現するＴ細胞を生成するプロセスは、Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ． （２０１３）；５：１７７ｒａ３８；Ｐａｒｅｎｔｅ－Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ （２０１４）；１：７）に以前に記載された。Ｈ２９レトロウイルスパッケージング細胞系に、構築物を使用してトランスフェクトした。Ｈ２９細胞に由来するウイルスを使用して、安定なＰＧ１３レトロウイルスパッケージング細胞系を生成した。ＰＧ１３細胞は、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）粒子を産生し、これらを使用して、いずれかの細胞系、または初代細胞に形質導入した（Ｐａｒｅｎｔｅ－Ｐｅｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ （２０１４）；１：７）。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に形質導入して、ＣＡＲ Ｔ細胞を生成した。さらに、Ｇａｌｖ９産生細胞系を使用して、ウイルスを産生した。
発現およびｉｎ ｖｉｔｒｏでの活性
ＩｄｅＳの安定な発現を、ジャーカット細胞などのモデルの安定したＴ細胞系でイムノブロットを使用して試験した。Ｃ末端ＨＡタグがＩｄｅＳ構築物に含まれたため、この細胞系の細胞溶解物および上清を抗ＨＡ抗体を使用して試験した。図２に示されるように、ＩｄｅＳの発現を、ＨＥＫ２９３ｔ細胞の一過的トランスフェクトによって哺乳類細胞に首尾よく適合させることができる。ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を、ＩｄｅＳ活性に関して、またＣＡＲ活性に関しても評価した。
ＩｄｅＳの酵素活性を、ＩｇＧの切断の程度を評価することによって試験した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイおよびＥＬＩＳＡベースのアッセイを使用した。図３Ａ～３Ｃは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイの結果を示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイでは、ＨＥＫ ２９３ｔ細胞にＩｄｅＳ－ｔｍを一過的にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後に、ＩｇＧを２４ウェルプレートのウェルに添加し、次いで、様々な時点で取り除き、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液を使用してクエンチした。図３Ａを参照されたい。ヒトポリクローナルＩｇＧの切断を経時的に追跡し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥアッセイを使用して検出し、これを、クマシーとイムノブロットの両方で可視化した（図３Ｂおよび３ＣＣ）。図３Ｂおよび３Ｃに示されるように、ＨＥＫ２９３ｔ細胞から発現されるＩｄｅＳは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性であった。
図４Ａおよび４Ｂは、ＥＬＩＳＡベースのアッセイの結果を示す。適合したＥＬＩＳＡベースのアッセイ（Ｊａｅｒｎｕｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ （２０１７）；１６：１８８７－１８９７）を使用して、ＩｄｅＳによってＩｇＧの切断を検出した。組換えＩｄｅＳを使用して、切断ＥＬＩＳＡを検証した（図４Ａを参照されたい）。ＨＥＫ２９３ｔ細胞に、ＩｄｅＳの分泌バージョン（「ＩｄｅＳ－ｓｅｃ」）をトランスフェクトした。酵素の発現を、抗ＨＡを使用するイムノブロットによって上清液を試験することによって検証した（図４Ｂを参照されたい）。切断ＥＬＩＳＡを適用することによって、ＩｄｅＳ－ｓｅｃが、様々な時点でヒトポリクローナルＩｇＧを効率的に切断したことを確認した（図４Ｂを参照されたい）。
ＩｄｅＳが、細胞表面に結合した抗体を切断するのに成功できるかどうかを評価するために、共培養実験を設計した。共培養実験では、ＩｄｅＳ発現細胞を、ＣＤ２０を発現するＲａｊｉ細胞と、Ｒａｊｉ細胞に結合する抗体リツキシマブと共にインキュベートした。しかし、ＩｄｅＳは、抗体を切断し、Ｆｃ断片を放出した。図５に示されるように、ＩｄｅＳを分泌するＨＥＫ２９３ｔ細胞は、Ｒａｊｉ細胞に結合したリツキシマブのＦｃ断片を切断することに成功した。
ＣＡＲ Ｔ細胞による特異的溶解を、Ｄａｏ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２０１３）；５：１－１１に以前に開示された通り、ルシフェラーゼを発現する標的細胞に対する活性を試験することによって試験した。ＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞系を腫瘍モデルとして使用し、Ｒａｊｉ細胞の特異的溶解を測定した。Ｒａｊｉ細胞を改変してホタルルシフェラーゼを発現させ、ルシフェラーゼベースの殺滅アッセイを可能にする。図６に示されるように、ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ細胞とＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ細胞の両方が、ＩｄｅＳを有さない１９ＢＢ細胞と同程度まで、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＲａｊｉ細胞を死滅させた。よって、ＩｄｅＳのＣＡＲ Ｔ細胞への添加は、ＣＡＲ Ｔ細胞の殺滅活性を損なうものではない。
さらに、ＩｄｅＳ発現細胞が補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）から保護され得るかどうかを研究した。形質導入されていないＴ細胞、ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、ＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、およびＩｄｅＳを有さない１９ＢＢｚ Ｔ細胞を、様々な濃度のウサギ抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）で処置し、その後、ウサギ血清を添加し、１時間インキュベートした。細胞生存率をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏによって測定した。図７に示されるように、ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞とＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞の両方が、ＩｇＧのＦｃ断片を切断して除去し、よって、ＣＤＣを回避した。
さらに、ＩｄｅＳ発現細胞が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）から保護され得るかどうかを研究した。ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、ＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞、およびＩｄｅＳを有さない１９ＢＢｚ Ｔ細胞を様々な用量の抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）で処置し、次に、ヒトＰＢＭＣで処置した。細胞傷害性を５１Ｃｒ放出アッセイを使用して決定した。図１０に示されるように、ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞は両方とも、ＩｄｅＳを有さない１９ＢＢｚ Ｔ細胞と比較して、溶解から保護された。
さらに、本発明者らは、ＩｄｅＳ発現細胞が、腎臓移植患者由来の血清中ＩｇＧを切断し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）から保護することができるかどうかを研究した。図１１Ａに示されるように、拒絶を引き起こす抗ＨＬＡ抗体を含有する腎臓移植患者（患者２）に由来する血清が、Ａ０２＋細胞に結合することが、フローサイトメトリーによって示された。図１１Ｂに示されるように、患者２由来の血清が、フローサイトメトリーによって検証されたように、Ａ０２＋ ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞によって切断された。図１１Ｃに示されるように、Ａ０２＋ ＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ Ｔ細胞およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ Ｔ細胞が、患者２の血清によって媒介される補体殺滅（ＣＤＣ）からも保護された（右）。
作用機序
次いで、本発明者らは、ＩｄｅＳ発現細胞が、潜在的な抗体に対してそれら自体をシールドする方法について研究した。図８は、１つの提案される作用機序を示す。図８に示されるように、ＩｇＧ抗体は細胞表面抗原および受容体に結合し、ＣＤＣ、ＡＤＣＣおよびオプソニン作用によって、細胞死をもたらす。ＩｄｅＳは、ヒンジ領域の下でＩｇＧを切断し、Ｆｃ断片を放出する。ＩｄｅＳ発現細胞は、Ｆ（ａｂ’）２断片で被覆されたままであり、さらなる抗体が結合するのを妨げる。
膜に結合した酵素に対する、分泌された酵素の切断機序を理解することが重要である。膜結合形態は、より局所的な活性を可能にするが、しかし、図５に示されるデータは、分泌形態が、ｔｒａｎｓ系で抗体を切断するのにより有効であることを示唆する。ＩｄｅＳ発現細胞のｃｉｓまたはｔｒａｎｓ切断の機序も評価される。このために、ウサギ抗マウス（ｍｏｕｓｅ）抗体を使用し、その抗体は、ｓｃＦｖのマウス（ｍｕｒｉｎｅ）部分を標的とする。ＩｄｅＳの膜結合バージョンまたは分泌バージョンがより有利であるかどうかが評価される。
この酵素の機序の重要な側面は、それが、ヒンジ領域の下でＩｇＧを切断するため、Ｆ（ａｂ’）２断片は無傷のままであり、よって、細胞表面に結合したままであり得ることである。組換えＩｄｅＳを使用して、ＩｄｅＳの濃度を増加させると、Ｆｃ断片が細胞表面から取り除かれるが、一方、Ｆ（ａｂ’）２断片は表面に結合したままであることが観察された。図９に示されるように、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＩｇＧ Ｆｃを切断し、Ｆ（ａｂ’）２シールドを維持した。ＩｇＧ（ＡＴＧ）が、ＩｄｅＳ発現細胞（膜貫通形態または分泌形態のいずれか）に添加された後、ＩｇＧはＦａｂ形態として細胞に結合したままであり、Ｆｃは放出された。Ｆｃの欠如は、機能を排除したが、結合したＦａｂは、新たな細胞傷害性ＩｇＧが結合するのを妨げ、したがって、シールドとして機能した。ＩｄｅＳを含有しない細胞に関しては、これは起こらなかった。
このことは、残留したＦ（ａｂ’）２断片が、細胞周囲にシールドを生じ、これを、潜在的な将来の体液性応答から隠すことを示唆する。この仮定を、上記の安定した系（ｌｉｎｅ）において、膜結合ＩｄｅＳおよび細胞分泌ＩｄｅＳを使用することによって試験する。抗Ｆａｂ特異的抗体または抗Ｆｃ特異的抗体を使用して、ＩｇＧのどの部分が依然として細胞に結合しているかを検出する。切断後にどれくらいの間Ｆ（ａｂ’）２断片が結合したままであるか、およびこれらが、無傷ＩｇＧによる競合によって除去されるかどうかを理解するために、このプロセスのキネティクスについても検査する。
結論
この実施例に示される本発明者らのデータは、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞が、哺乳類細胞において首尾よく発現し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで有効な切断活性を示したことを実証する。さらに、ＩｄｅＳがＣＡＲ Ｔ細胞に含まれても、ＣＡＲのｉｎ ｖｉｔｒｏでの殺滅活性は損なわれない。さらに、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に対して保護された。
（実施例２）
ｉｎ ｖｉｖｏでの活性
概要
この実施例では、実施例１のＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの活性を調査する。これらの細胞のＩｇＧ切断活性および殺細胞活性を、ｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおいて調査する。これらの細胞を、これらが抗体によって標的とされる系（ｓｙｓｔｅｍ）で試験し、ＣＡＲ Ｔ細胞に対する体液性免疫原性のモデルを再現する。このモデルでは、細胞の持続性を、通常のＣＡＲ Ｔ細胞に対する腫瘍細胞の殺滅効率と共に試験する。これらの実験設計における１つの重要な懸念は、ＩｄｅＳがマウスＩｇＧを切断しないことである。よって、追加の異種抗体（例えば、ＩｄｅＳが作用するウサギまたはヒト、および潜在的に生着した免疫エフェクター細胞）と適合可能な高度に免疫不全のマウスモデルであるＮＳＧマウスを使用する。
ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞持続性
ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの持続性を、ＩｄｅＳを有さないＣＡＲ Ｔ細胞と比較し、試験する。ＮＳＧマウスに、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ Ｔ細胞またはＩｄｅＳを有さないＣＡＲ Ｔ細胞を腹腔内（ＩＰ）注射する。次いで、マウスに、ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とするヒト抗体、例えば、抗ＣＤ３、抗ＭＨＣクラスＩ抗体、またはＣＡＲを標的とする抗体をＩＰ注射する。ＩｄｅＳは、ウサギＩｇＧおよびヒトＩｇＧのすべてのアイソフォームを完全に切断するため、ウサギまたはヒト由来の抗体が使用される（Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ ＯＮＥ （２００８）；３：１－６；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ （２０１０）；２５：２４７９－２４８６；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ （２０１７）；２９１：１３４－１４０）。ＩｄｅＳ発現細胞は、ヒンジの下の抗体を切断し、よって、Ｆｃ断片を放出することが期待される。マウスから回収された腹水および末梢血を、以前に示されたイムノブロットまたはＥＬＩＳＡ（Ｒａｆｉｑ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （２０１８）；３６：８４７－８５８）によって様々な時点で分析し、ＩｇＧの切断を評価する（図３および４に示される）。ＣＡＲ Ｔ細胞の存在は、腹水を採取し、ＩｄｅＳ構築物に存在する抗ＣＤ１９ ＣＡＲおよび抗ＨＡタグを用いるフローサイトメトリーによって分析することによって決定する。Ｆａｂ断片が細胞表面に結合したままであるかどうか（機能的ＩｇＧのさらなる結合に対するシールドとして）を調査するために、抗Ｆａｂ特異的抗体を使用して、フローサイトメトリーによって残留する結合を分析する。残っている利用可能なＣＡＲ Ｔ細胞表面標的（すなわち、ＣＤ３またはＭＨＣ Ｉ）の存在も評価する。細胞および抗体の静脈内（ＩＶ）注入により、類似する実験が行われる（ｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ）。
ｉｎ ｖｉｖｏ有効性
ＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞系を腫瘍モデルとして使用し、Ｒａｊｉ細胞の特異的溶解を測定する。Ｒａｊｉ細胞を、ホタルルシフェラーゼを発現するように改変し、ルシフェラーゼベースの殺滅アッセイおよび腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏでのバイオルミネセンスイメージングを可能にする（Ｋｏｎｅｒｕ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （２０１５）；４：ｅ９９４４４６）。ＮＳＧマウスにＲａｊｉ細胞をＩＰ注入し、その後、ＩｄｅＳを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞またはＩｄｅＳを有さないＣＡＲ Ｔ細胞を注入し、Ｒａｊｉ細胞に結合しないＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする抗体（例えば、抗ＣＤ３または抗マウス抗体）を注射して、ＣＡＲを標的化する。腫瘍成長および疾患進行を、バイオルミネセンスイメージングを使用して評価する。ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性も、フローサイトメトリーを使用するこのシステムで、または代替の発光プローブを保有するＣＡＲ Ｔ細胞のイメージングによって評価する。ガウシアルシフェラーゼを発現するよう操作されたＣＡＲ Ｔ細胞を、ホタルルシフェラーゼに対して直交的に使用することができる（Ｓａｎｔｏｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ （２００９）；１５：３３８－３４４）。発光プローブを保有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性を経時的に追跡およびモニターすることが可能であるが、一方、腫瘍の追跡も可能である。細胞および抗体のＩＶ注入により、類似する実験が行われる。
（実施例３）
ヒトＴ細胞に、ＩｄｅＳ ＣＡＲを有さない１９ＢＢｚ（左から１～２番目のレーン）またはＩｄｅＳ－ｔｍ １９ＢＢｚ ＣＡＲ（膜貫通形態）（左から３～５番目のレーン）およびＩｄｅＳ－ｓｅｃ １９ＢＢｚ ＣＡＲ（分泌形態）（左から６～８番目のレーン）を形質導入した。２×１０６個のＣＡＲ Ｔ細胞を、ＮＳＧマウスにｉ．ｐ．注射し、２４時間後に、ヒトポリクローナルＩｇＧもｉ．ｐ．注射した。ＩｇＧの切断は、ＰＢＳを使用してｉ．ｐ．洗浄を実施し、磁気プロテインＧビーズを使用して試料を精製し、抗ヒトＦｃ特異的ＨＲＰ二次抗体を使用してウエスタンブロットによって分析することによって評価した。図１２に示されるように、未切断の重鎖は、５５ｋＤａ付近で観察され（９番目のレーン）、一方、切断されたＦｃ断片は、２５ｋＤａ付近に存在した（矢印）。
本開示の主題の実施形態
前記記載から、様々な使用および条件に本開示の主題を採用するために、本開示の主題に対して変更および修正がなされ得ることが明らかである。このような実施形態もまた、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
本明細書において、変数についてのいずれかの定義における要素の列挙についての記載は、任意の単一の要素または列挙された要素の組合せ（または下位の組合せ）としてのその変数の定義を含む。本明細書において、実施形態についての記載は、任意の単一の実施形態として、または任意の他の実施形態もしくはその部分と組み合わせた、その実施形態を含む。
この明細書において言及されるすべての特許および刊行物は、それぞれ独立した特許および刊行物が、具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (76)

  1. （ａ）リガンド認識受容体、および
    （ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片
    を含む細胞。
  2. 前記ＩｇＧ分解酵素が分泌される、請求項１に記載の細胞。
  3. 前記ＩｇＧ分解酵素が膜結合性である、請求項１に記載の細胞。
  4. （ｃ）前記ＩｇＧ分解酵素に付着した膜貫通ドメインをさらに含む、請求項３に記載の細胞。
  5. 前記膜貫通ドメインが、前記ＩｇＧ分解酵素のＣ末端に付着している、請求項４に記載の細胞。
  6. 前記ＩｇＧ分解酵素に付着した前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、必要に応じてＣＤ８の膜貫通を含む、請求項４または５に記載の細胞。
  7. 前記ＩｇＧ分解酵素が、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＳ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓのＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＺ）、Ｓ．ｅｑｕｉ ｓｕｂｓｐ．ｅｑｕｉ．のＩｇＧ分解酵素（ＩｄｅＥ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のエンドグリコシダーゼ（ＥｎｄｏＳ）、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の連鎖球菌システインプロテイナーゼ（ＳｐｅＢ）から選択される、請求項１から６のいずれか一項に記載の細胞。
  8. 前記リガンド認識受容体が、外因性または内因性である、請求項１から７のいずれか一項に記載の細胞。
  9. 前記リガンド認識受容体が、組換え発現される、請求項１から８のいずれか一項に記載の細胞。
  10. 前記リガンド認識受容体が、ベクターから発現される、請求項１から９のいずれか一項に記載の細胞。
  11. 前記ＩｇＧ分解酵素が、ベクターから発現される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の細胞。
  12. 応答性細胞または活性化可能な細胞である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の細胞。
  13. 免疫応答性細胞である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の細胞。
  14. Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、幹細胞、および正常組織細胞からなる群から選択される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の細胞。
  15. Ｔ細胞である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の細胞。
  16. 前記リガンド認識受容体が、抗原に結合する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の細胞。
  17. 前記抗原が、腫瘍抗原、病原体抗原、正常細胞抗原、ＨＬＡ抗原、および同種抗原から選択される、請求項１６に記載の細胞。
  18. 前記抗原が、腫瘍抗原である、請求項１６または１７に記載の細胞。
  19. 前記腫瘍抗原が、ＣＤ１９である、請求項１７または１８に記載の細胞。
  20. 前記抗原が、正常細胞抗原である、請求項１６または１７に記載の細胞。
  21. 前記抗原が、ＨＬＡ抗原または同種抗原である、請求項１６または１７に記載の細胞。
  22. 前記同種抗原が、マイナー組織適合性同種抗原である、請求項２１に記載の細胞。
  23. 前記リガンド認識受容体が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の細胞。
  24. 前記リガンド認識受容体が、ＣＡＲである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の細胞。
  25. 前記ＣＡＲが、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項２４に記載の細胞。
  26. 前記ＣＡＲの前記細胞外抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項２５に記載の細胞。
  27. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチドを含む、請求項２５または２６に記載の細胞。
  28. 前記ＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の細胞。
  29. 前記ＣＡＲの前記細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の細胞。
  30. 前記少なくとも１つの共刺激ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、またはこれらの組合せを含む、請求項２９に記載の細胞。
  31. 前記少なくとも１つの共刺激ドメインが、４－１ＢＢポリペプチドを含む、請求項２９または３０に記載の細胞。
  32. 前記ＩｇＧ分解酵素が、（ａ）ＩｇＧを切断し、それによって、ＩｇＧ抗体が前記細胞を死滅させるのを防ぐ、および／または（ｂ）ＩｇＧを切断し、それによって、前記ＩｇＧの残りの断片の前記細胞への結合を保持させ、前記細胞を１つまたは複数の細胞傷害性抗体から保護し、必要に応じて、前記１つまたは複数の細胞傷害性抗体が、前記ＩｇＧと同じエピトープ領域に結合し、前記細胞を死滅させる、請求項１から３１のいずれか一項に記載の細胞。
  33. 請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞を含む組成物。
  34. 薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物である、請求項３３に記載の組成物。
  35. 新生物を処置するためのものである、請求項３３または３４に記載の組成物。
  36. 細胞を生成するための方法であって、（ａ）リガンド認識受容体をコードする第１のポリヌクレオチド、および（ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片をコードする第２のポリヌクレオチドを、細胞内に導入するステップを含み、前記第１および第２の核酸配列のそれぞれが、必要に応じて、プロモーターエレメントに作動可能に連結している、方法。
  37. 前記第１および第２のポリヌクレオチドの一方または両方が、ベクター中に含まれる、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記ベクターが、レトロウイルスベクター、もしくはレンチウイルスベクターであるか、またはｍＲＮＡ分子中にコードされている、請求項３７に記載の方法。
  39. （ａ）リガンド認識受容体をコードする第１のポリヌクレオチドおよび（ｂ）ＩｇＧ分解酵素またはその断片をコードする第２のポリヌクレオチドを含む核酸組成物。
  40. 前記第１のポリヌクレオチドが、プロモーターエレメントに作動可能に連結している、請求項３９に記載の核酸組成物。
  41. 前記第２のポリヌクレオチドが、プロモーターエレメントに作動可能に連結している、請求項３９または４０に記載の核酸組成物。
  42. 前記第１および第２のポリヌクレオチドの一方または両方が、ベクター中に含まれる、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  43. 前記ベクターが、レトロウイルスベクター、もしくはレンチウイルスベクターであるか、またはｍＲＮＡ分子中にコードされている、請求項４２に記載の核酸組成物。
  44. 請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物を含むベクター。
  45. 請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターを含むキット。
  46. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫障害を処置および／または防止するための書面の指示をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
  47. 対象における腫瘍負荷を低減する方法であって、前記対象に、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む、方法。
  48. 前記対象において、腫瘍細胞の数を低減する、腫瘍サイズを低下させる、および／または前記腫瘍を根絶する、請求項４７に記載の方法。
  49. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を処置および／または防止する方法であって、対象に、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む、方法。
  50. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を有する対象の生存時間を延長する方法であって、前記対象に、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む、方法。
  51. 前記腫瘍または新生物が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、乳がん、卵巣がん、中皮腫、神経膠芽腫、結腸直腸がん、および膵臓がんから選択される、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記自己免疫疾患が、関節リウマチ、重症筋無力症、全身性ループス、グレーブス病、橋本甲状腺炎、全身性硬化症、胆汁性肝硬変、セリアック病、軸索型ニューロパチー、炎症性筋障害、小脳変性、１型糖尿病、および多発性筋炎から選択される、請求項４９または５０に記載の方法。
  53. 臓器移植を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する方法であって、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む、方法。
  54. 前記移植が、同種異系移植（同種移植）である、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記対象が、前記臓器移植前に、前記細胞、組成物、または核酸組成物を投与される、請求項５３または５４に記載の方法。
  56. 細胞療法を受ける対象において使用される細胞または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する方法であって、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物、または請求項４４に記載のベクターの有効量を投与するステップを含む、方法。
  57. 前記細胞および／または組織が、前記細胞療法に含まれる、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記細胞および／または組織が、自家または同種異系である、請求項５６または５７に記載の方法。
  59. 治療において使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  60. 腫瘍負荷を低減する際に使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  61. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫障害を処置および／または防止する際に使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  62. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を有する対象の生存時間を延長する際に使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  63. 臓器移植を受ける対象における細胞および組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  64. 細胞療法を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項１から３２のいずれか一項に記載の細胞。
  65. 治療において使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  66. 腫瘍負荷を低減する際に使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  67. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を処置および／または防止する際に使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  68. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を有する対象の生存時間を延長する際に使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  69. 臓器移植を受ける対象における細胞および組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  70. 細胞療法を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の組成物。
  71. 治療において使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  72. 腫瘍負荷を低減する際に使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  73. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を処置および／または防止する際に使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  74. 新生物、病原体感染、および／または自己免疫疾患を有する対象の生存時間を延長する際に使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  75. 臓器移植を受ける対象における細胞および組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
  76. 細胞療法を受ける対象における細胞および／または組織の抗体媒介性拒絶を低減および／または防止する際に使用するための、請求項３９から４３のいずれか一項に記載の核酸組成物。
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