JP2022541453A - 生体イメージングのための蛍光系及びそれらの使用 - Google Patents

生体イメージングのための蛍光系及びそれらの使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、式Ｉの化合物【化１】JPEG2022541453000030.jpg40163（式中、Ｙ、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において定義されている）並びに様々な生体イメージング技術及び治療法におけるそれらの使用に関するものである。態様においては、本発明は、式Ｉの化合物を含むコンジュゲート並びにそれらの関連する使用及び治療的使用に関する。

Description

本発明は、式Ｉの化合物
Figure 2022541453000002
（式中、Ｙ、Ａｒ１、Ａｒ２、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は、本明細書において定義されている）並びに様々な生体イメージング技術及び治療法におけるそれらの使用に関するものである。本発明はまた、式Ｉの化合物を含むコンジュゲート並びにそれらの関連する使用及び治療的使用に関する。
蛍光イメージングは、生物学的プロセスを研究するための強力なツールとして、特に生細胞において、細胞事象をそれらの生理学的状況で観察することができるとして、急速に普及している。単一分子の可視化技術の開発により、そのような用途に対する蛍光顕微鏡の有用性は大きく向上し、タンパク質及び低分子をそれらの内因性環境で追跡することが可能になった。特定の分子を検出することができるプローブから、細胞内の特定の細胞小器官に局在する化合物まで、生体イメージングの分野は非常に新しい分野となっている。
ＷＯ２０１６／０５５８００Ａに記載されているような蛍光合成レチノイドは、蛍光イメージングの分野における研究ツールとして使用されており、細胞の取り込み及び局在化の追跡を介して、自然環境におけるレチノイドの活性及び代謝に関する貴重な洞察を提供している。しかしながら、レチノイドシグナル伝達の広範な生物学的性質により、レチノイドを用いた標的化が困難であり、それにより、蛍光プローブとしての、及び治療薬としてのその幅広い利用が制限されている。
また、非哺乳動物細胞型に対する信頼性の高いマーカーの開発も困難である。例えば、哺乳動物細胞の特定の細胞小器官を標的とした市販の蛍光プローブの中には、植物でも使用できるものがあるが、シグナルの質及び特異性が低い場合が多く、蛍光化合物の分子量が比較的大きいため、標識効率にも影響がある。加えて、既知の蛍光プローブは、クロロフィルと同様の励起範囲を持つことが多く、植物細胞のイメージングにおいてシグナル干渉を引き起こす。
したがって、これらの欠点の１つ又は複数を軽減し、様々なイメージング及びバイオ標的化技術において汎用性の高いフルオロフォアとして使用できる蛍光化合物を提供することができれば有利であろう。機能面での柔軟性を高めた化合物、すなわち、様々な標的化基若しくは反応基の結合を容易にし、又は発色団を操作して拡張する化合物は、良好な水溶性などの良好な物理的特性を有する化合物と同様に有益である。また、適切な波長の光で活性化されたときに光増感剤として作用する能力など、優れた光活性特性があれば、光線力学療法（ＰＤＴ）及び様々な細胞型を対象とした多様なＲＯＳ媒介性用途に活用することができる。
したがって、本発明は、概して、蛍光化合物並びに様々な生体イメージング及び標的化技術におけるそれらの使用に関するものである。
態様においては、本発明は、新規化合物それ自体及び生体プローブ、特に蛍光プローブとしてのそれらの使用に関するものである。
態様においては、本発明は、ラマンイメージング及び蛍光ラマンイメージング技術における本化合物の使用並びに関連するイメージング方法に関するものである。
態様においては、本発明は、化合物を脱保護してコンジュゲーション用脱保護化合物を形成する方法及びそれらの方法によって形成された脱保護化合物に関するものである。
態様においては、本発明は、式Ｉの化合物の特性を調節して、細胞局在のための標的化機能を組み込むことに関するものである。
態様においては、本発明は、本化合物を含むコンジュゲート並びにイメージング、治療的及び非治療的用途におけるこれらのコンジュゲートの使用に関するものである。コンジュゲートには、例えば、標的化剤若しくは活性剤に直接コンジュゲートされた本発明の化合物又はリンカー若しくはスペーサー基を用いてコンジュゲートされた本発明の化合物が含まれ得る。
態様においては、本発明は、そのような化合物及びコンジュゲートを含む医薬組成物並びに様々な状態又は疾患の治療におけるそのような化合物、コンジュゲート及び組成物の使用に関するものである。態様においては、治療的使用のための制御された活性酸素種（ＲＯＳ）生成用途のための本化合物の使用が含まれる。
態様においては、本発明は、そのような化合物及びコンジュゲートを含む製剤並びに植物、真菌及び細菌細胞での制御されたＲＯＳ生成用途におけるそのような化合物、コンジュゲート及び製剤の使用に関するものである。
本発明のさらなる態様及び実施形態は、特許請求の範囲で定義している通りであり、以下でより詳細に説明する。
本発明によれば、遊離形態又は塩形態の、式Ｉの化合物及びそれらのジアステレオ異性体が提供される。
Figure 2022541453000003
（式中、
Ｒ１は、Ｈまたは任意に１個以上のＮ原子で置換された１～１０個の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｒ２は、任意に１個以上のＮ原子で置換された１～１０個の炭素原子を有するアルキル基、－（ＣＨ２）ｎＲ３、－（ＣＨ２）ｎＮＨＲ３及び－（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３から選択され、ここで、ｎは、１～１０の整数であり、Ｒ３は、－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＯ２ＰｈＣＨ３または－ＣＯＯＨであり、またはＲ２は、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８もしくは－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－であり、ここで、Ｒ８は、－ＯＨまたは－ＮＨＯＨであり、ｎは、１～８の整数であり、ｍは、１～４の整数であり；又は
Ｒ１及びＲ２は、３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成し；
Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、芳香族基であり；
Ｘは、不飽和エステル、ケトン、カルボン酸、イミダゾロン、ピリジン、オキサゾロン、オキサゾリジノン、バルビツール酸及びチオバルビツール酸から選択され；
但し、Ａｒ１がフェニルであり、Ｒ１及びＲ２が３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成している場合、該複素環式基のＮは、式Ｉの化合物のアセチレン基に対してパラ位にある。）
一般的には、式Ｉの化合物は、一端にパラアミノ（電子供与基）を、他端にパラ電子吸引基を持つジフェニルアセチレン構造に例示されるジアリールアセチレンを全体として基本とし、電子共役により双極子系を形成している。
本発明者らは、式Ｉの化合物が生体イメージング技術において驚くべき有用性を有することを有利に発見した。例えば、この化合物は、哺乳動物、細菌、真菌及び植物の細胞に浸透することが実証されており、多数のイメージング用途に広く適用可能である。化合物の独特の構造は、系周辺の機能に関して柔軟性を与え、すなわち、標的化基又は反応性基を、特にＹ、Ｒ１又はＲ２部位のアミン基との反応を介して、Ｘ基などの他の位置にも結合させることができる。これにより、ｉｎ ｓｉｔｕ反応を可能にする光親和性標識などの反応性機能の組み込み、細胞内局在のための標的化モチーフの組み込みなどの標的化機能の取り付け及び／又は他の低分子薬剤及びペプチド、抗体などの生体分子とのコンジュゲーション若しくは結合が可能になる。これまでに知られている蛍光プローブに比べて化合物の分子量が小さいため、細胞内への浸透が容易になり、モデル薬剤であるボリノスタットで実証されているように、例えば抗がん剤などの部位を化合物にコンジュゲートさせても、変わらぬ標的化効果を発揮することができる。光増感剤として作用する化合物の能力は、ＲＯＳの制御を介して、例えば光線力学療法（ＰＤＴ）では、任意選択でコンジュゲートした薬物分子と組み合わせて、植物、真菌及び細菌の細胞では、例えば、標的除草剤の調製又は種子強化において、様々な有用な用途を提供することができる。また、モジュール性という観点からの分子構造の柔軟性により、異なる波長で励起できる第２のフルオロフォアを組み込むことも可能であり、多くのさらなる潜在的応用に通じる。また、この化合物の構造は、ラマンイメージング及び蛍光ラマンイメージングの技術にも利用することができる。本発明者らは、驚くべきことに、Ａｒ１がフェニルであり、Ｒ１及びＲ２が複素環式基Ｙの一部を形成している本発明の実施形態において、化合物の中心アセチレン基に対して複素環式基の窒素をパラ位に配置すると、オルト位に配置した同等のものと比較して、光物理的特性の面で著しく高い効率が示されることを示した。このことは、イメージング技術における使用に関して大きな利点がある。
本発明の化合物は、上記の式Ｉで示される一般構造を有する。
本明細書で使用される用語「ジアステレオ異性体」は、同一の構造を持ちながら、空間内の原子の配置が異なる異性体を指す。特に、用語「ジアステレオ異性体」は、アルケンジアステレオ異性体を包含することを意図している。
本明細書で使用される用語「複素環式基」は、３～１２個の環員を含み、任意選択で、式Ｉの窒素原子に加えて、Ｎ、Ｓ、ＳＯ２、Ｏ２及びＯからなる群より選択される１～３個のヘテロ原子又は官能基を含む単環式又は二環式基を意味する。本明細書で使用される場合、用語「複素環式基」には、芳香族環系、部分不飽和環系及び飽和環系が含まれる。非芳香族基の例としては、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジオキシドチオモルホリニル、ピロリジン－１－イル、ピロリジン－３－イル、アゼチジン－１－イル、アゼチジン－３－イル、アジリジン－１－イル、アゼパン－１－イル、アゼパン－３－イル、アゼパン－４－イルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。芳香族（ヘテロアリール）基の例としては、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジニル基、ピリミジニル基、インドリル基及びベンゾチアジアゾリル基などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。一実施形態では、複素環式基は、飽和環系である。複素環式基は、任意選択で置換されていてもよい。一実施形態では、複素環式基は、アルキル基、－ＣＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８又は－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－（－Ｒ８は－ＯＨ若しくは－ＮＨＯＨであり、ｎは１～８の整数であり、ｍは１～４の整数である）で置換されていてもよい。
「複素環式基のＮはアセチレン基に対してパラ位にある」とは、複素環式基Ｙの一部を形成しているＮが、化合物中でパラ置換されたドナー基であり、Ａｒ１がフェニルであるそれらの実施形態の式Ｉの化合物の中心アセチレン部位に対してパラ位にあることを意味する。誤解を避けるために、複素環式基が複数の窒素原子を含む場合、Ｎ原子の１つはそのようなパラ位にある。
本明細書で使用される用語「芳香族基」には、５～１９個の環原子、好ましくは５～１３個の環原子を含む炭素環式及び複素環式の不飽和環基の両方が含まれる。芳香族基は、単環式でも多環式でもよく、好ましくは単環式、二環式又は三環式であり、より好ましくは単環式又は二環式である。複素環式芳香族基では、環基は１つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳ原子を含んでいてもよい。好適な芳香族基の例としては、ピロール、フラン、ベンゾフラン、チオフェン、フェニル、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、チアゾール、オキサチアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン及びトリアジンが挙げられる。芳香族基は、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物及びヨウ化物などの基、アルキル基、アルケニル基、アミン基（－ＣＨ２－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ２）、ヒドロキシル基（－ＣＨ２－（ＣＨ２）ｎ－ＯＨ）及びカルボキシル基（－ＣＨ２－（ＣＨ２）ｎ－ＣＯＯＨ）（ｎは０～１０に等しくてもよい）又は芳香族基若しくはＰＥＧ由来の基で任意に置換されていてもよい。
一実施形態では、Ａｒ２は以下から選択される。
Figure 2022541453000004
一実施形態では、Ａｒ１は、フェニル基、ピリジン基、ピリミジン基、チオフェン基、フラン基、ベンゾフラン基、チアゾール基及びオキサチアゾール基から選択される。
一実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、フェニル基、ピリジン基、ピリミジン基、チオフェン基、フラン基、ベンゾフラン基、チアゾール基及びオキサチアゾール基から選択されてもよい。
一実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、フェニル基、チオフェン基、フラン基、ベンゾフラン基、チアゾール基及びオキサチアゾール基から選択されてもよい。
一実施形態では、Ａｒ１はフェニル基である。
一実施形態では、Ａｒ１はフェニル基であり、Ａｒ２はフェニル基、チオフェン基、フラン基、チアゾール基及びオキサチアゾール基から選択される。
Ｘは、電子不足基である。本明細書で使用される用語「電子不足基」は、式Ｉの分子の化学構造の残りの部分と比べて低下した電子密度を示す官能基を意味する。当業者には明らかであるように、式Ｉの分子の化学構造の残りの部分と比べて低下した電子密度を示すだけでなく、電子不足基は毒性を持つものであってはならない。これは、例えばニトロ基及びニトリル基が一般的に適切ではないことを意味する。
本発明によれば、Ｘは、不飽和エステル、ケトン、カルボン酸、イミダゾロン、ピリジン、オキサゾロン、オキサゾリジノン、バルビツール酸、チオバルビツール酸、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４（Ｒ４はＣ２－Ｃ１０アルキル若しくはアルケニル、アリール若しくはグリコール基である）、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５（－Ｒ５はＣ２－Ｃ１０アルキル若しくはアルケニル若しくはアリール基、－ＣＦ３又は－ＮＨ２である）、－（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ｎ（ｎ＝１～６）又は窒素含有複素環（任意選択でＮ含有複素環は５若しくは６個の環員を含む）から選択される。
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、完全飽和、分岐、非分岐又は環状の炭化水素部位、すなわち第一級、第二級若しくは第三級アルキル又は適切な場合にはシクロアルキル若しくはシクロアルキルで置換されたアルキルを指す。特に断りのない限り、アルキル基は１～１０個の炭素原子、好ましくは１～６個の炭素原子又はより好ましくは１～４個の炭素原子を含む。アルキル基の代表例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、３－メチルヘキシル、２，２－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルペンチル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル及びｎ－デシルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの二重結合を有する不飽和アルキル基を指す。
本明細書で使用される用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
「アリール」という用語は、水素及び炭素のみからなり、６～１９個の炭素原子、好ましくは６～１０個の炭素原子を含む芳香族単環式又は多環式炭化水素環系（環系は部分的に飽和していてもよい）を指す。アリール基には、フルオロフェニル、フェニル、インデニル及びナフチルなどの基が含まれるが、これらに限定されない。用語「アリール」には、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、アミノ、アミジン、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール又はヘテロアリールアルキルからなる群より選択される１つ若しくは複数の置換基で任意選択で置換されたアリールラジカルが含まれる。好ましいアルキル基は、任意選択で置換されたフェニル基又はナフチル基である。
本発明の一実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、複素環式基Ｙの一部を形成している。この実施形態では、複素環式基Ｙは、例えば、以下から選択されてもよい。
Figure 2022541453000005
（Ｒ７は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル基、－ＣＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８又は－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－（Ｒ８は－ＯＨ若しくは－ＮＨＯＨであり、ｎは１～８の整数であり、ｍは１～４の整数である）であってもよい。）
あるいは、Ｒ１は、Ｈ又は１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたものであってもよく、Ｒ２は、１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたもの、－（ＣＨ２）ｎＲ３、－（ＣＨ２）ｎＮＨＲ３及び（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３（ｎは１～１０の整数であり、Ｒ３は－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＯ２ＰｈＣＨ３若しくは－ＣＯＯＨである）から選択されてもよく、又はＲ２は、－ＣＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８若しくは－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－（Ｒ８は－ＯＨ若しくは－ＮＨＯＨであり、ｎは１～８の整数であり、ｍは１～４の整数である）であってもよい。本実施形態では、好ましくは、Ｒ１はＨ又は１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であり、Ｒ２は（ＣＨ２）ｎＲ３、－（ＣＨ２）ｎＮＨＲ３又は（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３（ｎは１～１０の整数であり、Ｒ３は－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＯ２ＰｈＣＨ３又は－ＣＯＯＨである）である。
一実施形態では、Ｘは、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ４（Ｒ４はＣ２－Ｃ１０アルキル、アルケニル、アリール若しくはグリコール基である）、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ５（－Ｒ５はＣ２－Ｃ１０アルキル、アルケニル若しくはアリール基、－ＣＦ３又は－ＮＨ２である）、－（ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）ｎ（ｎ＝１～６）又は窒素含有複素環（任意選択でＮ含有複素環は５若しくは６個の環員を含む）から選択される。
ＸがＮ含有複素環である場合、以下から選択することができる。
Figure 2022541453000006
（式中、Ｒ４及びＲ５は上記で定義した通りであり、Ｒ６はＨ又はアルキルである。）
一実施形態では、Ｘは以下から選択される。
Figure 2022541453000007
式Ｉの化合物において、Ａｒ１がフェニルであり、Ｒ１及びＲ２が複素環式基Ｙの一部を形成している実施形態では、複素環式基のＮは、式Ｉの化合物のアセチレン基に対してパラ位にある。Ａｒ１がフェニルであり、Ｒ１及びＲ２が複素環式基Ｙの一部を形成している一実施形態では、Ａｒ１に結合している複素環式基のＮは、式Ｉの化合物のアセチレン基に対してオルト位にはない。これは、式Ｉの化合物が、例えば、以下のようなものではないことを意味する。
Figure 2022541453000008
一実施形態では、式Ｉの化合物は、以下から選択される。
Figure 2022541453000009

Figure 2022541453000010
一実施形態では、式Ｉの化合物は、化合物６、化合物７、化合物４３、化合物５１、化合物５５、化合物５７、化合物５９、化合物６４、化合物６９又は化合物７１である。
一実施形態では、式Ｉの化合物は、化合物６、化合物７、化合物４３又は化合物６９である。
本発明による化合物は、本質的に蛍光性である。本発明の一態様によれば、蛍光イメージングに使用するための式Ｉの化合物が提供される。
式Ｉの化合物は、その柔軟な化学的性質により、細胞型及び／又は細胞局在の選択的な標的化が有利に可能であり、生体イメージングの強力なツールとなっている。例えば、本発明の化合物は、様々な標的化生体分子に容易にコンジュゲートさせることができ、蛍光イメージング技術を介した細胞の取り込み及び局在化に関する貴重な情報を提供することができる。
化合物構造のモジュール性のため、式Ｉの化合物の構築は、近赤外領域（ＮＩＲ）に近づく、又は到達するための発色団の拡張を可能とする様々な官能基での修飾によって実現可能である。近赤外領域（１，０００～１，７００ｎｍ）の蛍光は、深く浸透し、空間分解能が高く、生体蛍光が低いため、生物学的及び生物医学的イメージングに特に有用である（Ｓｔｏｌｉｋ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． Ｂ． ５７ （２００００）， ９０－９３）。
本発明の一態様によれば、ラマンイメージングにおいて使用するための式Ｉの化合物が提供される。
本発明の態様は、ラマンイメージングにおける式Ｉの化合物の使用に関するものである。
特に、式Ｉの化合物の内部アセチレン官能基は、「セルサイレント」ラマンウインドウ（１８００～２６００ｃｍ－１）、すなわち、内因性分子が振動しない領域に固有の振動周波数を与えるため、ラマンベースの技術を用いて、生体環境で関心のある特定の分子のイメージングに使用することができる。
態様においては、化合物は、デュアルモードのイメージング剤である。
本発明の態様は、蛍光とラマンを組み合わせたイメージング技術における本化合物の使用であって、例えば、環境情報を提供する蛍光と、定量的なマッピングを提供するラマンとを重ね合わせることで、複雑な生体系をイメージングするための強力なツールを作り出す本化合物の使用に関するものである。
本発明はまた、細胞分化又はアポトーシスなどの細胞の発達をモニタリングする方法に関するものである。実施形態では、そのような方法は、式Ｉの化合物の有効量を投与すること及び放出される蛍光を検出することを含むことができる。あるいは、細胞分化又はアポトーシスなどの細胞の発達をモニタリングする方法は、コヒーレント反ストークスラマン散乱（ＣＡＲＳ）及び誘導ラマン散乱（ＳＲＳ）を含むがこれらに限定されない技術によって誘導されたラマン散乱信号を検出することによって、式Ｉの化合物の分布を画像化することを含むことができる。
したがって、本発明の一態様においては、式Ｉの化合物を含むプローブが提供される。
式Ｉの化合物は、その柔軟な化学的性質により、細胞型及び／又は細胞局在の選択的な標的化が有利に可能であり、生体イメージングの強力なツールとなっている。
態様においては、本発明は、式Ｉの化合物の特性を調節して、細胞局在のための標的化機能を組み込むことに関するものである。例えば、化合物の反応性アミン基は、１段階のアシル化、アルキル化又はスルホニル化反応を経て、トリフェニルホスホニウムカチオン（ミトコンドリアマトリックスへの局在）及びトシルスルホンアミド基（小胞体（ＥＲ）への局在）などの細胞内局在のための標的化モチーフを導入することができる。
この方法はまた、化合物の不活性化された誘導体に関するものである。
当業者であれば理解できるように、例えば、アミン、ヒドロキシル又はカルボン酸基などの反応性官能基を組み込んだ化合物は、多くの場合、不活性化された誘導体、すなわち、アミド、エーテル又はエステルとして保護されて保存される。これらの化合物をさらに反応又はコンジュゲーションさせるために活性化するには、例えば、強酸性溶液（アミド→アミン）、強ルイス酸（エーテル→ヒドロキシル）及び強塩基性水溶液（エステル→カルボン酸）で処理することにより、保護基を除去する必要がある。あるいは、例えば、反応性アミン基をさらに誘導体化して、それらを活性化する官能基にアクセスすることで、親化合物ではアクセスできないコンジュゲーション反応に対してオルソゴナルな反応性を与えることができ、例えば、アミンをアクリルアミドに変換してチオールと反応させたり、アミンを環状無水物と反応させてカルボン酸を得て他のアミン又はヒドロキシルと反応させたり、アミンをアジドアセトアミドに変換してアジド／アルキン環付加反応させたりすることができる。
態様においては、本発明は、式Ｉの保護された化合物及び脱保護された化合物の両方に関するものである。
本発明の一態様によれば、式Ｉの化合物と、標的化剤又は活性剤とを含むコンジュゲートが提供される。標的化剤又は活性剤は、例えば、光親和性標識などの反応性基、ボリノスタット、メトトレキサート及びフルベストラントを含む抗がん剤などの低分子薬剤、ＲＧＤ（トリペプチドＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）などの細胞接着配列を含むタンパク質若しくはペプチドなどの生体分子、グルコース若しくは多糖類スクロースなどの炭水化物又はアプタマー、アフィマー若しくは抗体などの生物製剤であり得る。
例えば、標的化剤又は活性剤は、式Ｉの蛍光性化合物とは異なる波長で作用する光反応性機能を含み、光反応性リンカーを介した化合物の放出を可能にし、又は光親和性標識を活性化して標的タンパク質／受容体又は酵素をタグ付けすることができる。好適な光親和性標識には、式Ｉの化合物のアミン基に容易に結合することができるジアジリジン（ジアジリン）が含まれる。
標的化剤又は活性剤は、例えば、アミド結合若しくはエステル結合若しくはエーテル結合などによって、式Ｉの化合物に共有結合していてもよい。また、「クリックケミストリー」の技術、すなわち基質を生体分子につなげる技術を用いて、本発明のコンジュゲートを調製してもよい。標的化剤又は活性剤は、非対称（二官能性）ＰＥＧ又は他のスペーサー基などのリンカーを用いて、式Ｉの化合物に結合させることができる。利用できる好適な官能基化学には、カルボン酸での、アルコールとカルボン酸でのエステル形成、アルキル求核種とアルコールでのエーテル形成及びアルキルアジドとアセチレンでのクリック反応が含まれる。
一実施形態では、コンジュゲートは、以下の式の化合物を含む。
Figure 2022541453000011
標的化剤又は活性剤は、抗がん剤などの低分子薬剤であってもよい。
一実施形態では、コンジュゲートは、式６、式７、式４３、式５１、式５５、式５７、式５９、式６４、式６９又は式７１の化合物を含む。
一実施形態では、コンジュゲートは、式６、式７、式４３又は式６９の化合物を含む。
Figure 2022541453000012
Figure 2022541453000013
一実施形態では、コンジュゲートは、式６の化合物及び低分子薬剤を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、式６の化合物及び抗がん剤を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、式６の化合物及びボリノスタット又はその類似体を含む。
一実施形態では、コンジュゲートは、式７の化合物及び低分子薬剤を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、式７の化合物及び抗がん剤を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、式７の化合物及びボリノスタット又はその類似体を含む。
本発明はまた、イメージング、治療的及び非治療的用途におけるこれらのコンジュゲートの使用に関するものである。
態様においては、本発明は、前記化合物が光によって活性化されるときの活性酸素種（ＲＯＳ）の生成における式Ｉの化合物の使用に関するものである。
三重項状態の光増感剤（ＰＳ）は、通常、集光領域を含み、これは単一状態の電子が非放射的に三重項状態に移行することで、集光と項間交差の二重の機能を担っている。三重項励起状態のクエンチングは、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成、基底状態の分子酸素からのラジカルの生成又は周囲の分子との直接的な化学反応を引き起こす可能性がある。局所的なＲＯＳの生成は、病原体の攻撃に対応するために動物と植物の両方の系で採用されている免疫防御戦略である。動物、植物、真菌及び細菌の細胞内では、ＲＯＳはその生成速度と程度に応じて様々な調節効果を発揮し、高濃度ではアポトーシスが見られるが、低濃度では刺激反応が見られることが多い（Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ． ２０１０， １９， １３２１－１３３１）。
光力学療法（ＰＤＴ）は、光増感剤がＲＯＳを生成する能力を利用して、通常はがん細胞、病原性微生物及び／又は不要な組織をアポトーシスによって破壊する。一般的には、光増感化合物が特定の標的組織又は状態（例えば、微生物感染、新生物、腫瘍など）の近く／内部で励起されることで、大量のＲＯＳが発生し、その後、その組織が破壊される。低レベルのＲＯＳであれば、細胞増殖を引き起こすことができ、創傷治癒又はより一般的な組織再生治療への応用につながる。
このように、ＰＤＴは、感光性化合物が疾患組織の細胞などの所望の場所に蓄積するように標的化し、局所的に光を照射してＲＯＳ生成を活性化させることが重要である。ＰＤＴに使用する化合物は知られているが、吸光ピークが小さく、特に光の透過が困難な巨大な腫瘍では光活性化が困難になること、生物学的半減期が長く、治療後長期間にわたって皮膚光線過敏症になること、水への溶解性が低いなどの薬理学的特性が低いこと、標的化能力が低いこと（すなわち、特定の組織又は細胞を標的にして蓄積する能力が低く、重大なオフターゲット損傷につながること）など、様々な欠点があることが多い。
有利なことに、本発明の化合物は、未活性の状態では生物学的に不活性であるが、低～中エネルギーの短波長可視光を照射するとＲＯＳを発生する。
したがって、式Ｉの化合物を使用して、活性酸素種（ＲＯＳ）を生成し、それによって細胞の発達を制御する、すなわち、細胞の増殖、分化及びアポトーシスを制御することができ、様々な治療的及び非治療的な用途につながる。式Ｉの化合物は、効率的な標的化を実証し、オフターゲット効果を少なくすることができるため、ＲＯＳの制御によって媒介される用途に使用するのが特に有利である。また、様々な細胞型に合わせて調整することができ、選択的な標的化効果を得ることができる。
したがって、態様において、本発明は、光線力学療法（ＰＤＴ）における本発明の化合物又はコンジュゲートの使用に関するものである。
ＲＯＳの発生は、例えば、細胞を切除するためにアポトーシスを誘導し、創傷治癒のために増殖させ、又はこれらを組み合わせるなど、治療上の必要性に応じて制御することができる。例示的な実施形態では、例えば、創傷治療において、最初に高レベルのＲＯＳを発生させて、細菌及び／又は真菌の細胞のアポトーシスを引き起こし、その後低レベルのＲＯＳを発生させて、皮膚の再生を助けることができる。
本発明の態様においては、患者を光線力学療法（ＰＤＴ）で治療する方法が提供され、この方法は、式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートを投与することと、式Ｉの化合物を活性化してＲＯＳを発生させることとを含む。
本発明の別の態様においては、細胞の増殖、分化又はアポトーシスの制御から恩恵を受ける疾患又は状態の治療に使用する医薬品の製造において、式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートの使用が提供される。
本発明の別の態様では、細胞の増殖、分化又はアポトーシスの制御から恩恵を受ける疾患又は状態を有する患者の治療方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートを患者に投与することを含む方法が提供される。
細胞の増殖、分化又はアポトーシスの制御から恩恵を受ける疾患又は状態としては、例えば、がん、例えば神経新生物、ニキビなどの皮膚疾患並びに火傷、糖尿病性足潰瘍、ＵＶ損傷及び皮膚の老化などの皮膚創傷が挙げられる。
式Ｉの化合物は、細胞の発達を制御する能力、すなわち正常細胞及び腫瘍細胞の増殖、分化及びアポトーシスを制御する能力により、化学療法剤又は化学予防剤として作用し得る。特に、式Ｉの化合物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにおいて、正常細胞、前悪性細胞及び悪性細胞の増殖、分化及びアポトーシスを調節し得る。
本発明の実施形態では、本化合物は、皮膚、口腔、喉頭、肺、膀胱、外陰部、乳房、腎臓、肝臓、前立腺、眼若しくは消化管などの前がん状態若しくはがん状態の治療又は予防において、化学療法剤又は化学予防剤として作用し得る。
本化合物は、基底細胞癌、頭頸部を含む扁平上皮癌及び膀胱腫瘍の治療又は予防において、化学療法剤又は化学予防剤として作用し得る。
本化合物は、骨髄性白血病、特に急性前骨髄球性白血病などの白血病の治療又は予防において、化学療法剤又は化学予防剤として作用し得る。
式Ｉの化合物は、細胞の増殖、例えば皮膚細胞又は神経細胞の増殖を促進し、創傷治癒を補助するように作用し得る。式Ｉの化合物は、組織の健康及び発達の促進、特に、ヒト又は動物の身体の皮膚、骨、神経、歯、毛髪及び／又は粘膜の健康及び発達の促進において使用され得る。本発明の化合物は、老化の兆候（特にシワ及び老人斑）、ニキビ（特に重度及び／又は難治性のニキビ）、乾癬、ストレッチマーク、毛孔性角化症、肺気腫及び脱毛症などの皮膚症状の予防又は治療に使用され得る。
本発明の実施形態では、式ＩのコンジュゲートをＰＤＴで使用することができる。例えば、本発明の実施形態は、式Ｉと抗がん剤などの小分子治療薬とのコンジュゲートに関する。これまでのフルオロフォアと比べて比較的小さいという式Ｉの化合物の特質のため、抗がん剤は変化のない標的化を示すことができ、すなわちボリノスタットで実証されたように、バイオコンジュゲートは式Ｉの化合物が結合していないかのように振る舞い、その細胞毒性効果を保持することができる。したがって、コンジュゲートを関心のある部位に送達し、そこで薬剤が通常の作用を発揮できるようにしてから、コンジュゲートにＵＶ光を照射して、ＲＯＳの生成を制御することができる。例えば、抗がん剤の場合、薬剤の殺細胞効果をＲＯＳを介したアポトーシスで補うことができ、すなわち、抗がん剤は、がん細胞の初期死を引き起こし、その後、アポトーシスが誘発されて残りの細胞を殺傷することができる。
別の態様においては、本明細書で定義された式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートを、任意選択で１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて含む医薬組成物であって、細胞分化若しくはアポトーシスの制御から恩恵を受ける疾患又は状態の治療若しくは緩和に使用するための医薬組成物が提供される。本組成物は、任意選択で１つ又は複数の追加の治療剤を含んでいてもよい。
実施形態では、医薬組成物は、抗がん剤のような小分子薬剤などの治療薬にコンジュゲートした式Ｉの化合物を含んでいてもよい。
実施形態では、医薬組成物は、ボリノスタットにコンジュゲートした式Ｉの化合物又はその類似体を含んでいてもよい。
式６の化合物とボリノスタット又はその類似体を含むコンジュゲートは、ボリノスタットのヒドロキサム酸に由来する固有の細胞毒性を示し、この細胞毒性は、ＵＶ、４０５ｎｍ又は２光子８００ｎｍの光の照射によりさらに光活性化された殺細胞効果を誘発することで、補足及び増強することができる。
用語「治療有効」量又は「有効量」とは、所望の治療効果、改善効果、抑制効果又は予防効果をもたらすのに有効な本発明の化合物又は組成物の量を指す。
ヒト又は動物の体に投与する化合物又はコンジュゲートの投与量は、当業者であれば認識できるように、目的とする用途及び投与様式などの要因に左右される。
用語「医薬組成物」は、患者に投与するのに適した組成物を指す。したがって、「医薬組成物」という用語は、本発明の化合物又はそのコンジュゲート若しくは混合物又はそれらの塩、溶媒和物、プロドラッグ、異性体若しくは互変異性体を、任意選択で１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤と組み合わせて含む組成物を指す。また、「医薬組成物」という用語は、バルク組成物（すなわち、個々の投与単位にまだ形成されていない形態）及び個々の投与単位の両方を包含することが意図されている。そのような個々の投与単位には、錠剤、ピル、カプレット、アンプルなどが含まれる。
当業者であれば、本発明の化合物をプロドラッグ及び／又は溶媒和物に変換することができる例を認識するであろう。用語「プロドラッグ」は、ｉｎ ｖｉｖｏで変換されて本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくは溶媒和物を生じる化合物（例えば、薬物前駆体）を指す。この変換は、例えば、血液中の加水分解などの様々なメカニズム（例えば、代謝又は化学的プロセスによる）によって起こる可能性がある。
本発明の化合物は、非溶媒和であってもよく、又は水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒で溶媒和されていてもよい。例えば、１つ又は複数の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に組み込まれている場合など、溶媒和物は分離可能であり得ることが理解されよう。「溶媒和物」は、溶液相及び分離可能な溶媒和物の両方を包含する。好適な溶媒和物には、エタノール和物、メタノール和物、水和物などが含まれるが、これらに限定されない。
本発明で使用する化合物には、その塩が含まれており、本発明の化合物への言及は、特に断らない限り、その塩への言及を含むことを意図している。好適な塩には、例えば、無機及び／又は有機酸で形成された酸性塩、無機及び／又は有機塩基で形成された塩基性塩が含まれ、並びに形成され得る双性イオン（「分子内塩」）も、本明細書で使用される用語「塩（単数若しくは複数）」に含まれる。薬学的に許容される（すなわち、毒性がなく、生理学的に許容される）塩が好ましいが、他の塩も特定の状況では有用であり得る。有用であり得る例示的な酸付加塩としては、酢酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩（トシル酸塩とも呼ばれる）などが挙げられる。有用であり得る例示的な塩基性塩としては、アンモニウム塩、ナトリウム塩、リチウム塩及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン、ｔ－ブチルアミンなどの有機塩基（例えば、有機アミン）との塩並びにアルギニン、リジンなどのアミノ酸との塩などが挙げられる。塩基性窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物（例えば、メチル、エチル及びブチルの塩化物、臭化物及びヨウ化物）、硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル及び硫酸ジブチル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、デシル、ラウリル及びステアリルの塩化物、臭化物及びヨウ化物）、アリールアルキルハロゲン化物（例えば、臭化ベンジル及び臭化フェネチルのなど）などの薬剤で四級化され得る。
本発明で使用する化合物には、その薬学的に許容されるエステルが含まれ、ヒドロキシ基のエステル化によって得られるカルボン酸エステルを含んでもよく、その中でエステル基のカルボン酸部分の非カルボニル部位は、直鎖又は分岐鎖のアルキル（例えば、アセチル、ｎ－プロピル、ｔ－ブチル又はｎ－ブチル）、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えば、ベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）、アリール（例えば、フェニルであって、任意選択で、例えばハロゲン、Ｃ１－４アルキル若しくはＣ１－４アルコキシ又はアミノで置換されたもの）、（２）アルキル又はアラルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル）などのスルホン酸エステル、（３）アミノ酸エステル（例えば、Ｌ－バリル又はＬ－イソロイシル）、（４）ホスホン酸エステル及び（５）モノ－、ジ－又はトリリン酸エステルから選択される。
本発明の化合物の多形体並びに本発明の化合物の塩、溶媒和物、エステル及びプロドラッグの多形体は、本発明に含まれることが意図されている。
本発明の化合物を患者に投与する際の適切な投与量は、当業者、例えば主治医、薬剤師その他の熟練労働者が決定することができ、患者の体重、健康状態、年齢、投与頻度、投与方法、他の有効成分の存在及び化合物が投与される状態などの要因に応じて変化する場合がある。
賦形剤、希釈剤及び担体の例としては、緩衝剤のほか、デンプン、セルロース、糖類、マンニトール及びケイ酸誘導体などの充填剤並びに拡張剤が含まれる。また、結合剤が含まれる場合もある。また、アジュバントが含まれる場合もある。
任意選択で、式Ｉの化合物は、１つ又は複数の追加の治療剤と組み合わせて投与してもよい。１つ又は複数の追加の治療剤と組み合わせて使用する場合、本発明の化合物を一緒に投与してもよいし、逐次的に投与してもよい。
本組成物は、経口、非経口（皮下、静脈内、筋肉内及び腹腔内を含む）、直腸、皮膚、経皮、胸腔内、肺内、粘膜、眼内及び鼻腔内経路など、様々な経路で投与され得る。
好適な剤形は、当業者によって認識され、とりわけ、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、エアロゾル、アンプル、プレフィルドシリンジ、小量注入容器又は複数回投与容器、クリーム、ミルク、ゲル、分散液、マイクロエマルジョン、ローション、含浸パッド、軟膏、点眼薬、点鼻薬、トローチなどが挙げられる。
式Ｉの化合物及びそのコンジュゲートを使用して、非治療的用途におけるＲＯＳの生成を制御することができる。有利なことに、式Ｉの化合物は、植物細胞などの他の細胞型に浸透することが示されており、標的除草剤、種子強化及び成長強化の用途など、他の様々な用途につながる。
したがって、本発明の態様は、式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートを、任意選択で１つ又は複数の製剤成分と組み合わせて含む製剤に関するものである。そのような製剤成分には、防腐剤、増粘剤、消泡剤などが含まれるが、これらに限定されない。そのような製剤成分には、任意選択で除草剤などの追加の有効成分も含まれ得る。
態様においては、本発明は、そのような化合物及びコンジュゲートを含む製剤並びに植物、菌類及び細菌における制御されたＲＯＳ生成用途におけるそのような化合物、コンジュゲート及び製剤の使用に関するものである。
態様においては、本発明は、式Ｉの化合物に関するものである。
Figure 2022541453000014
（式中、
Ｒ１は、Ｈ若しくは１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたものであり、Ｒ２は、１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたもの、－（ＣＨ２）ｎＲ３、－（ＣＨ２）ｎＮＨＲ３及び－（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３（ｎは１～１０の整数であり、Ｒ３は－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＯ２ＰｈＣＨ３若しくは－ＣＯＯＨである）から選択され、又は
Ｒ１及びＲ２は、３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成し（但し、Ｒ１及びＲ２が３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成している場合、複素環式基のＮは、式Ｉの化合物のアセチレン基に対してパラ位にある）、
Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、芳香族基であり；
Ｘは、電子不足基であり、
及びそれらのジアステレオ異性体であって、
遊離又は塩形態のものである。）
態様においては、本発明は、式Ｉの化合物に関するものである。
Figure 2022541453000015
（式中、
Ｒ１は、Ｈ若しくは１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたものであり、Ｒ２は、１～１０個の炭素原子を含むアルキル基であって、任意選択で１個若しくは複数個のＮ原子で置換されたもの、－（ＣＨ２）ｎＲ３及び－（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３（ｎは１～１０の整数であり、Ｒ３は－ＮＨ２、－ＯＨ若しくは－ＣＯＯＨである）から選択され、又は
Ｒ１及びＲ２は、３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成し、
Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、芳香族基であり；
Ｘは、電子不足基であり、
及びそれらのジアステレオ異性体であって、
遊離又は塩形態のものである。）
以下、添付の図を参照しながら、本発明を例示的に説明する。
カップリングパートナーと参照化合物７７の合成を示す図である。 式Ｉの例示化合物の合成を示す図である。 本発明の化合物及び参照化合物の吸収及び発光スペクトルを示す図である。 （ａ）ＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体である化合物３７、（ｂ）化合物６とコンジュゲートしたＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体である化合物３８及び（ｃ）化合物６とコンジュゲートした保護されていないボリノスタット類似体である化合物３９の合成を示す図である。 原発性ＨＰＶ陰性口腔扁平上皮癌細胞（ａ）細胞株ＳＪＧ－２６及び（ｂ）細胞株ＳＪＧ－４１のＣｅｌｌＴｉｔｒｅＧｌｏｗアッセイを用いた細胞生存率を示す図である。 （ａ）非照射及び（ｂ）照射アッセイのＭＴＴ生存率アッセイ結果を示す図である。 化合物７及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 化合物１３及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 化合物１４及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 化合物１２及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 化合物１５及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 化合物６及び様々な細胞小器官マーカーで処理したＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示す図である。 黒草細胞における化合物７（行Ａ）、１４（行Ｂ）、１２（行Ｃ）及び１５（行Ｄ）の細胞内局在のタイル蛍光画像を示す図である。 化合物７、１５、１２及び１４で処理した後、ＵＶ処理を行った後の黒草細胞の細胞生存率を示す図である。 （ｉ）は、化合物１２（１－１００μＭ）で処理したスメグマ菌の一晩増殖曲線を示す図であり、時間に対する細胞懸濁液の光学密度を示している。１５（ｉｉ）に示すように、サンプルの半分に４０５ｎｍの放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した。 放射線照射を伴わずに、及び放射線照射を伴って化合物６（１μＭ）で処理した表皮ブドウ球菌細胞であって、ヨウ化プロピジウム（非生細胞を示す）及びＳｙｔｏ ９（生細胞及び非生細胞のすべてを示す）で共染色したものを示す図である。画像は、広視野顕微鏡を用いて、列１～３にそれぞれ示される青（化合物６を画像化）、緑（Ｓｙｔｏ ９を画像化）及び赤（ヨウ化プロピジウムを画像化）のチャンネルで撮影したものである。 化合物６（１－１００μＭ）で処理した表皮ブドウ球菌の一晩増殖曲線を示す図であり、時間に対する細胞懸濁液の光学密度を示している。サンプルの半分に４０５ｎｍの放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した（Ｒ）。 放射線照射を伴わずに（図１８（ａ））、及び４０５ｎｍの放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射して（図１８（ｂ））化合物１２（１μＭ）で処理した枯草菌細胞であって、ヨウ化プロピジウム（非生細胞を示す）及びＳｙｔｏ ９（生細胞及び非生細胞のすべてを示す）で共染色したものを示す図である。画像は、広視野顕微鏡を用いて、青（化合物６を画像化）、緑（Ｓｙｔｏ ９を画像化）及び赤（ヨウ化プロピジウムを画像化）のチャンネル（それぞれ列１～３）で撮影したものである。 放射線照射を伴って（Ｒ）、及び放射線照射を伴わずに（ＮＲ）化合物１２（１－１００μＭ）で処理した枯草菌の一晩増殖曲線を示す図である。サンプルに４０５ｎｍの放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した（Ｒ）。 放射線照射を伴って、及び放射線照射を伴わずに化合物６（１０、５、１μＭ）で処理した枯草菌の一晩増殖曲線を示す図であって、時間に対する細胞懸濁液の光学密度を示している。サンプルの半分に４０５ｎｍの放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した（Ｒ）。 化合物１２（１０μＭ）で処理した枯草菌細胞を、共焦点顕微鏡を用いて４０５ｎｍのレーザー光で画像化したものである。画像の取り込みには、５００／５０ｎｍの発光スペクトルを用いた。後処理はＩｍａｇｅＪで行い、「輪郭検出」機能を用いて、細胞内での化合物の局在性を実証した。
（実施例１：例示的な式Ｉの化合物の合成）
（１．１ カップリングパートナーの合成）
（１．１．１．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート、３の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート（３）の合成を図１（ｉ）に示す。トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（２５０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。続いて、４－ブロモベンズアルデヒド（１８．５ｇ、１００．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１．４ｇ、２．００ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（０．３８ｇ、２．００ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルアセチレン（１５．２ｍＬ、１１０．０ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を室温（ＲＴ）で１６時間（ｈ）撹拌した。この懸濁液をヘプタンで希釈し、短いセライト／ＳｉＯ２プラグに通し、抽出液を蒸発させて、精製していない暗色固体（２４ｇ）を得た。これをクーゲルロール蒸留（１３０－１５０℃、９．０Ｔｏｒｒ）で精製し、化合物１をオフホワイト固体（２１．５ｇ、＞１００％）として得て、これをさらに精製することなく次の工程に進めた。無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）に、ｔｅｒｔ－ブチルジエチルホスホノアセテート（１４．４ｍＬ、６１．５ｍｍｏｌ）及びＬｉＣｌ（２．５４ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１５分間撹拌した後、化合物１（１０．１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）（８．２ｍＬ、５５．０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られたスラリーを室温で１６時間撹拌した。これを砕いた氷に注ぎ、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）で抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない白色固体（１８ｇ）を得た。これをヘプタンからの再結晶により精製し、化合物２を無色の結晶性固体として得た（１０．９９ｇ、７３％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 1.53 (s, 9H), 6.36 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.49 (m, 4H), 7.54 (d, J = 16.0 Hz, 1H). 化合物２（１０．９５ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（７．５５ｇ、５４．６ｍｍｏｌ）をメタノール（ＭｅＯＨ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）（２００ｍＬ、１：３）に加え、得られた溶液を室温で３時間撹拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた後、蒸発させて精製していない固体（８ｇ）を得た。これをヘプタンからの再結晶により精製し、化合物３を無色の結晶性固体として得た（５．９６ｇ、７２％）： 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 1.53 (s, 9H), 3.17 (s, 1H), 6.36 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.49 (m, 4H), 7.54 (d, J = 16.0 Hz, 1H); 13C NMR (151 MHz, cdcl3) δ 28.1, 79.0, 80.6, 83.2, 121.2, 123.5, 127.7, 132.5, 135.0, 142.4, 166.0; IR (ATR) vmax/cm-1 3281m, 3064w, 3000w, 2980w, 2936w, 1691s, 1641m, 1370m, 1296s, 1153s, 1002m, 980m, 832s; MS(ASAP): m/z = 228.1 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ１５Ｈ１６Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 228.1150, 実測値 228.1161.
（１．１．２ １－（４－ヨードフェニル）ピペラジン、４の合成）
１－（４－ヨードフェニル）ピペラジン（４）の合成を図１（ｉｉ）に示す。５５℃の酢酸（ＡｃＯＨ）／Ｈ２Ｏ（３：１、８４ｍＬ）中の１－フェニルピペラジン（２０．５ｍＬ、１３４．０ｍｍｏｌ）の機械的に撹拌した溶液に、ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：１、８４ｍＬ）中のＩＣｌ（２４．０ｇ、１４８．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。得られたスラリーをさらに１時間撹拌した後、室温に冷却し、さらに１時間撹拌した。スラリーを砕いた氷に注ぎ、２０％ＮａＯＨ水溶液をｐＨ１３になるまで加えた。その後、溶液をＤＣＭで抽出し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない暗色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製して淡黄色固体を得て、これをさらにＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）から再結晶し、化合物４をベージュ色固体として得た（１８．５ｇ、４８％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 2.97 - 3.03 (m, 4H), 3.07 - 3.14 (m, 4H), 6.65 - 6.69 (m, 2H), 7.48 - 7.52 (m, 2H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 45.9, 49.9, 81.4, 118.0, 137.7, 151.3; IR (ATR) vmax/cm-1 3032w, 2955w, 2829m, 1582m, 1489m, 1243s, 914m, 803s; MS(ASAP): m/z = 289.0 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ１０Ｈ１３Ｎ２Ｉ ［Ｍ］＋の計算値: 288.0124, 実測値 288.0114.
（１．１．３ ２－クロロ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルアセトアミド、８の合成）
２－クロロ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルアセトアミド（８）の合成を図１（ｉｉｉ）に示す。４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン（１３．９ｇ、５９．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、その後塩化クロロアセチル（５．２ｍＬ、６５．７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．２ｍＬ、６５．７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合液を室温（ＲＴ）で１６時間撹拌した 。次いで、この溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（８：２、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物８をオフホワイト固体として得た（８．２６ｇ、４５％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.28 (s, 3H), 3.83 (s, 2H), 6.95 - 7.06 (m, 2H), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 2H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 37.9, 41.2, 93.9, 129.0, 139.3, 142.4, 166.1; IR (ATR) vmax/cm-1 2996w, 2947w, 1664s, 1480m, 1371m, 1260m, 1009m, 824m, 552s; MS (ASAP) m/z = 310.0 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ９Ｈ１０ＯＮＩＣｌ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 309.9496, 実測値 309.9494.
（１．１．４ ２－アミノ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルアセトアミド、１０の合成）
２－アミノ－Ｎ－（４－ヨードフェニル）－Ｎ－メチルアセトアミド（１０）の合成を図１（ｉｖ）に示す。化合物８（８．２３ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）及びフタルイミドカリウム（７．３９ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（４０ｍＬ）に溶解し、得られた混合液を１２０℃に加熱して５時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過により分離し、Ｈ２Ｏで洗浄した後、エタノール（ＥｔＯＨ）からの再結晶により、化合物９を白色固体として得た（９．２６ｇ、８３％）。化合物９（９．２ｇ、１１．５１ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（５０ｍＬ）に溶解し、得られた混合液を加熱還流し、その後ヒドラジン水和物（６４％、１．２２ｍＬ、２４．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合液を還流下で３時間撹拌した。その後、懸濁液を冷却し、得られた沈殿物を濾過した。濾液を蒸発させて、精製していない油状固体（７ｇ）を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ含有）で精製し、化合物１０を結晶性の白色固体として得た（５．９７ｇ、９４％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 3.13 (s, 2H), 3.25 (s, 3H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 37.3, 44.1, 93.3, 129.1, 139.1, 142.4, 172.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3365m, 3301w, 3055w, 2947w, 2885w, 1649s, 1570m, 1486m, 1423m, 1345m, 1109m, 1013m, 892s; MS(ES): m/z = 291.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ９Ｈ１２Ｎ２ＯＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 290.9994, 実測値 291.0012.
（１．１．５ Ｎ－（２－アミノエチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン、１１の合成）
Ｎ－（２－アミノエチル）－４－ヨード－Ｎ－メチルアニリン（１１）の合成を図１（ｖ）に示す。
化合物１０（５．７２ｇ、１９．７２ｍｍｏｌ）をＮ２下で無水トルエン（５０ｍＬ）に溶解し、その後ＢＨ３．Ｍｅ２Ｓ（２．０Ｍ、１０．３５ｍＬ、２０．７０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を還流下で１６時間撹拌した。溶液を冷却し、１０％Ｎａ２ＣＯ３を加え、１０分間激しく撹拌した。その後、溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、精製していない黄色油状物（４．４ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、０．５％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、化合物１１を黄色油状物として得て（３．４６ｇ、６４％）、これを直ちに次の工程に進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.90 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.93 (s, 3H), 3.36 (t, J = 665 Hz, 2H), 6.47 - 6.57 (m, 2H), 7.41 - 7.49 (m, 2H).
（１．１．６ （４Ｚ）－２－メチル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オン、１６の合成）
（４Ｚ）－２－メチル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オン（１６）の合成を図１（ｖｉ）に示す。化合物１（５．０ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）、Ｎ－アセチルグリシン（３．４６ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）（２．４３ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）を無水酢酸（２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を８０℃で１６時間撹拌した。溶液を冷却し、氷水を加え、橙色沈殿物を得た。これを濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、化合物１６を橙色／茶色固体（６．９２ｇ、９１％）として得て、これをさらに精製することなく次の工程に進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.27 (s, 9H), 2.42 (s, 3H), 7.09 (s, 1H), 7.47 - 7.53 (m, 2H), 7.98 - 8.04 (m, 2H).
（１．１．７ ４Ｚ）－１－（２－メトキシエチル）－２－メチル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、１７の合成）
（４Ｚ）－１－（２－メトキシエチル）－２－メチル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン（１７）の合成を図１（ｖｉｉ）に示す。化合物１６（５．５０ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）及び２－メトキシエチルアミン（１．６８ｍＬ、１９．４ｍｍｏｌ）をピリジン（４０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で０．５時間撹拌した。Ｎ，Ｏ－ビストリメチルシリルアセトアミド（９．４９ｍＬ、３８．８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１１０℃で１６時間撹拌した。その後、溶液を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない暗色油状物（７．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（Ｅｔ２Ｏ）で精製し、化合物１７を薄茶色固体として得た（４．０３ｇ、６１％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.26 (s, 9H), 2.42 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.53 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 3.77 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 7.43 - 7.51 (m, 2H), 8.02 - 8.11 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ -0.1, 16.0, 41.0, 59.0, 70.5, 96.8, 105.0, 124.5, 125.8, 131.8, 132.1, 134.3, 139.0, 163.9, 170.6; IR (ATR) vmax/cm-1 2957w, 2896w, 2833w, 2154m, 1710s, 1645s, 1599m, 1562s, 1405s, 1357s, 1249s, 1126m, 862s, 841s; MS(ES): m/z = 341.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１９Ｈ２４Ｎ２Ｏ２Ｓｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 341.1685, 実測値 341.1681.
（１．１．８ （４Ｚ）‐４‐［（４‐エチニルフェニル）メチリデン］‐１‐（２‐メトキシエチル）‐２‐メチル‐４，５‐ジヒドロ‐１Ｈ‐イミダゾール‐５‐オン、１８の合成）
（４Ｚ）‐４‐［（４‐エチニルフェニル）メチリデン］‐１‐（２‐メトキシエチル）‐２‐メチル‐４，５‐ジヒドロ‐１Ｈ‐イミダゾール‐５‐オン（１８）の合成を図１（ｖｉｉｉ）に示す。化合物１７（３．６ｇ、１０．５７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２．９２ｇ、２１．１４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１、５０ｍＬ）に加え、得られた懸濁液を２０時間急速に撹拌した。この懸濁液をＤＣＭ及びＨ２Ｏで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない茶色油状物（３．２ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１：１、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物１８を黄色固体として得た（１．９９ｇ、７０％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 3.20 (s, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.53 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 7.03 (s, 1H), 7.49 - 7.54 (m, 2H), 8.07 - 8.12 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 16.0, 41.0, 59.0, 70.5, 79.2, 83.6, 123.4, 125.6, 131.8, 132.3, 134.7, 139.2, 164.1, 170.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3285m, 3241m, 2986w, 2933w, 2891w, 2831w, 2104w, 1704s, 1643s, 1600m, 1592s, 1404s, 1356s, 1125s, 838m; MS(ES): m/z = 269.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１６Ｈ１７Ｎ２Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 269.1290, 実測値 269.1290.
（１．１．９．（４Ｚ）－２－フェニル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オン、２０の合成）
（４Ｚ）－２－フェニル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オン（２０）の合成を図１（ｉｘ）に示す。化合物１（１２．５ｇ、６１．７ｍｍｏｌ）、ベンゾイルアミノエタン酸（馬尿酸）（１３．３ｇ、７４．０ｍｍｏｌ）及びＮａＯＡｃ（６．０７ｇ、７４．０ｍｍｏｌ）を無水酢酸（８０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１００℃で１８時間加熱した。この溶液を冷却し、水で希釈すると、黄色の沈殿物が生成した。これを濾過し、乾燥させ、精製していない黄色固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２０を明るい黄色固体として得た（２３．２５ｇ、＞１００％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.28 (s, 9H), 7.20 (s, 1H), 7.50 - 7.58 (m, 4H), 7.63 (ddt, J = 8.4, 6.7, 1.4 Hz, 1H), 8.11 - 8.17 (m, 2H), 8.16 - 8.21 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ -0.1, 97.9, 104.7, 125.5, 125.8, 128.4, 129.0, 130.5, 132.1, 132.3, 133.4, 133.5, 133.7, 163.8, 167.4; IR (ATR) vmax/cm-1 3063w, 2959w, 2898w, 2155m, 1768s, 1654s, 1598m, 859s; MS(ES): m/z = 346.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２１Ｈ２０ＮＯ２Ｓｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 346.1263, 実測値 346.1266.
（１．１．１０ （４Ｚ）－１－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－２－フェニル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、２１の合成）
（４Ｚ）－１－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－２－フェニル－４－（｛４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝メチリデン）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン（２１）の合成を図１（ｘ）に示す。化合物２０（１０．３６ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）及び４－（２－アミノエチル）モルホリン（３．９３ｍＬ、３０．０ｍｍｏｌ）をピリジン（６５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で０．５時間撹拌した。Ｎ，Ｏ－ビストリメチルシリルアセトアミド（１４．６７ｍＬ、６０．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１１０℃で１８時間撹拌した。その後、溶液を冷却し、ＤＣＭで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない暗色固体を得た。これをＳｉＯ２ クロマトグラフィー（１：９、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２１をゆっくりと結晶化した濃赤色油状物として得て（１２．９１ｇ、９４％）、これをさらに精製することなく次の工程に進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.26 (s, 9H), 2.24 - 2.31 (m, 4H), 2.45 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.47 - 3.56 (m, 4H), 3.91 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.46 - 7.51 (m, 2H), 7.51 - 7.58 (m, 3H), 7.79 - 7.87 (m, 2H), 8.13 - 8.19 (m, 2H).
（１．１．１１ （４Ｚ）‐４‐［（４‐エチニルフェニル）メチリデン］‐１‐［２‐（モルホリン‐４‐イル）エチル］‐２‐フェニル‐４，５‐ジヒドロ‐１Ｈ‐イミダゾール‐５‐オン、２２の合成）
（４Ｚ）‐４‐［（４‐エチニルフェニル）メチリデン］‐１‐［２‐（モルホリン‐４‐イル）エチル］‐２‐フェニル‐４，５‐ジヒドロ‐１Ｈ‐イミダゾール‐５‐オン、２２の合成を図１（ｘｉ）に示す。化合物２１（１２．９１ｇ、２８．２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（７．８ｇ、５６．４２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（４：１、１００ｍＬ）に加え、得られた懸濁液を２０時間急速に撹拌した。この懸濁液をＤＣＭ及びＨ２Ｏで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２２を黄色固体として得た（７．６９ｇ、７１％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.24 - 2.30 (m, 4H), 2.44 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.21 (s, 1H), 3.43 - 3.57 (m, 4H), 3.91 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.49 - 7.59 (m, 5H), 7.78 - 7.85 (m, 2H), 8.14 - 8.21 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 39.0, 53.6, 56.6, 66.7, 79.5, 83.6, 123.6, 127.2, 128.4, 128.8, 129.9, 131.3, 132.2, 132.3, 134.7, 139.5, 163.4, 171.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3290w, 3238w, 2956w, 2854w, 2811w, 1705s, 1640s, 1597m, 1491s, 1446m, 1391s, 1351s, 1314m, 1115s, 868m; MS(ES): m/z = 386.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２４Ｈ２４Ｎ３Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 386.1869, 実測値 386.1858.
（１．１．１２ ５－ヨードチオフェン－２－カルバルデヒドの合成、２４）
５－ヨードチオフェン－２－カルバルデヒド２４の合成を図１（ｘｉｉ）に示す。５０℃のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の２－チオフェンカルボキシアルデヒド（９．３４ｍＬ、１００．０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ－ヨードスクシンイミド（２４．７５ｇ、１１０．０ｍｍｏｌ）及びｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１．９０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を５０℃で２０分間撹拌した後、１ＭのＨＣｌ（８０ｍＬ）を加え、混合液をＥｔＯＡｃで抽出し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、化合物２４をゆっくりと結晶化した黄色油状物として得た（２５．３４ｇ、＞１００％）：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.39 (s, 2H), 9.77 (s, 1H).
（１．１．１３ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）‐３‐（５‐ヨードチオフェン‐２‐イル）プロパ‐２‐エノエート、２５の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）‐３‐（５‐ヨードチオフェン‐２‐イル）プロパ‐２‐エノエート、２５の合成を図１（ｘｉｉｉ）に示す。無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）にｔｅｒｔ－ブチルジエチルホスホノアセテート（８．５ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）及びＬｉＣｌ（１．４９ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１５分間撹拌した後、化合物２４（６．９７ｇ、２９．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液にＤＢＵ（４．８２ｍＬ、３２．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られたスラリーを室温で１６時間撹拌した。これを砕いた氷に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない茶色油状物（１２ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１，ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２５を橙色油状物として得た（１０．９９ｇ，７３％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 1.51 (s, 9H), 6.07 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 7.58 (dd, J= 15.7, 0.6 Hz, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 28.2, 80.7, 119.8, 131.6, 134.7, 137.9, 145.7, 165.8; IR (ATR) vmax/cm-1 2976w, 2931w, 1698s, 1622s, 1417m, 1367m, 1256m, 1140s, 964m, 793m; MS(ES): m/z = 359.2 [M+H]+.
（１．１．１４ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート、２６の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルチオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート、２６の合成を図１（ｘｉｖ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（１５０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。化合物２５（８．４ｇ、２４．９８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．１７５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルアセチレン（４．１５ｍＬ、３０．０ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を室温で１６時間撹拌した。懸濁液をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で希釈し、短いセライト／ＳｉＯ２プラグに通し、抽出液を蒸発させて精製していない茶色油状物（８．８ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエートを橙色油状物として得て（８．５１ｇ、＞１００％）、これをさらに精製することなく次の工程に進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 1.51 (s, 9H), 6.12 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H)。ＭｅＯＨ／ＤＣＭ溶液（１：１０、１１０ｍＬ）に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエート（８．５１ｇ、２７．７６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（７．６７ｇ、５５．５５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合液をＮ２下で１６時間、室温で撹拌した。次いで、この溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない固体（３．６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２６を淡黄色油状物（３．５０ｇ、５４％）として得て、これを直ちに次の工程に進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.53 (s, 9H), 3.45 (s, 1H), 6.16 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 15.8, 0.6 Hz, 1H).
（１．１．１５ ４－（アゼチジン－１－イル）ベンズアルデヒド、２８の合成）
４－（アゼチジン－１－イル）ベンズアルデヒド（２８）の合成を図１（ｘｖ）に示す。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（５０ｍＬ）中の４－フルオロベンズアルデヒド（１．５２ｍＬ、１４．２ｍｍｏｌ）の溶液に、アゼチジン．ＨＣｌ（１．８１ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５．８９ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１１０℃で４０時間撹拌した。溶液を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃ（ｘ３）で抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２８を黄色の結晶性固体として得た（２．０４ｇ、８９％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.44 (pent, J = 7.4 Hz, 2H), 3.98 - 4.06 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 6.32 - 6.43 (m, 2H), 7.65 - 7.75 (m, 2H), 9.71 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 16.4, 51.4, 109.7, 125.7, 131.9, 155.0, 190.3; IR (ATR) vmax/cm-1 3040w, 3002w, 2921m, 2856m, 2730w, 1672s, 1586s, 1551s, 1523s, 1476m, 1435m, 1382s, 1301s, 1221s, 1154s, 818s, 683s; MS(ES): m/z = 162.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１０Ｈ１２ＮＯ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 162.0919, 実測値 162.0922.
（１．１．１６ １－（４－エチニルフェニル）アゼチジン、２９の合成）
１－（４－エチニルフェニル）アゼチジン（２９）の合成を図１（ｘｖ）に示す。Ａｒ下、無水ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の 化合物２８（１．０ｇ、６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．７１ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）及びジメチル－１－ジアゾ－２－オキソプロピルホスホネート（１．１２ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ）を加え、得られた懸濁液を室温で７２時間撹拌した。この溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、精製していない茶色油状物（１．１６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＰＥ：ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物２９を白色固体として得た（０．１９９ｇ、２０％）：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.37 (pent, J = 7.4 Hz, 2H), 2.97 (s, 1H), 3.90 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 6.31 - 6.36 (m, 2H), 7.31 - 7.37 (m, 2H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 16.7, 52.0, 74.7, 84.8, 109.6, 110.6, 133.0, 151.8; IR (ATR) vmax/cm-1 3287w, 2963w, 2918w, 2855w, 2099w, 1609s, 1514s, 1355m, 1171m, 1123m, 824m; MS(ES): m/z = 158.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１１Ｈ１２Ｎ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 158.0970, 実測値 158.0971.
（１．１．１７ （４Ｚ）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オンの合成、３１）
（４Ｚ）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１，３－オキサゾール－５－オン（３１）の合成を図１（ｘｖｉ）に示す。４－ブロモベンズアルデヒド（２８．４６ｇ、１５３．８ｍｍｏｌ）、馬尿酸（３５．８３ｇ、２００．０ｍｍｏｌ）及びＮａＯＡｃ（１６．４ｇ、２００．０ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１５０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１００℃で１８時間加熱した。この溶液を冷却し、水で希釈すると、黄色沈殿物が生成した。これをＤＣＭに溶解し、有機物を水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、精製していない黄色固体を得た。これをＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ（１：１）に懸濁し、得られた懸濁液を０．５時間撹拌した。沈殿物を濾過により回収し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄し、乾燥させ、化合物３１を明るい黄色固体として得た（４０．５ｇ、８０％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.17 (s, 1H), 7.51 - 7.58 (m, 2H), 7.59 - 7.67 (m, 3H), 8.05 - 8.11 (m, 2H), 8.15 - 8.22 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 167.3, 163.9, 133.8, 133.6, 133.6, 132.4, 132.2, 130.1, 129.0, 128.5, 125.9, 125.4; IR (ATR) vmax/cm-1 3088w, 3061w, 3044w, 1651s, 1580s, 1553m, 1483m, 1323s, 1298s, 1159m, 980m, 820s; MS(ES): m/z = 328.0, 330.0 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１６Ｈ１１ＮＯ２Ｂｒ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 327.9973, 実測値 327.9974.
（１．１．１８ ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛２－［（４Ｚ）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－５－オキソ－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－１－イル］エチル｝カルバメート、３２の合成）
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛２－［（４Ｚ）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－５－オキソ－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－１－イル］エチル｝カルバメート（３２）の合成を図１（ｘｖｉ）に示す。化合物３１（１５．０ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－アミノエチル）カルバメート（７．２４ｍＬ、４５．７ｍｍｏｌ）をピリジン（８０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で０．５時間撹拌した。Ｎ，Ｏ－ビストリメチルシリルアセトアミド（２２．３５ｍＬ、９１．４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１１０℃で１８時間撹拌した。次いで、溶液を冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、有機物を５％ＨＣｌ、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない赤色油状物を得た。これをＳｉＯ２ クロマトグラフィー（７：３、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物３２を橙色／赤色固体として得て（１８．６９ｇ、８７％）、これをさらに精製することなく次の工程に直接進めた：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.37 (s, 9H), 3.40 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 3.90 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.81 - 4.88 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.50 - 7.62 (m, 5H), 7.76 - 7.88 (m, 2H), 8.01 - 8.14 (m, 2H).
（１．１．１９ （４Ｚ）－１－（２－アミノエチル）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、３３の合成）
（４Ｚ）－１－（２－アミノエチル）－４－［（４－ブロモフェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン（３３）の合成を図１（ｘｖｉ）に示す。化合物３２（７．０ｇ、１４．８８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ＤＣＭ（１：３、８０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。その後、溶液を蒸発させて精製していない油状物（１６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、化合物３３を不純な赤色固体として得た（８．８９ｇ、＞１００％）。これをＥｔＯＡｃに懸濁し、０．５時間撹拌した後、得られた沈殿物を濾過し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄して、化合物３３を明るい黄色固体として得た（２．３９ｇ、４３％）：1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 2.98 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.95 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.58 - 7.71 (m, 5H), 7.60 - 7.80 (br, 2H), 7.83 - 7.88 (m, 2H), 8.20 - 8.29 (m, 2H).
（１．１．２０ ５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－カルバルデヒド、４０の合成）
５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－カルバルデヒド（４０）の合成を図１（ｘｖｉｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（４００ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、５－ブロモピリジン－２－カルボキシアルデヒド（２０．０ｇ、１０８ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（１６．５ｍＬ、１１９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（７００ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１９０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を室温で１８時間撹拌した。混合液をＥｔ２Ｏで希釈し、セライト／ＳｉＯ２に通し、化合物４０を橙色固体として得た（２３ｇ、＞１００％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.28 (s, 9H), 7.90 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 8.81 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 10.06 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ -0.3, 100.6, 102.7, 120.8, 124.6, 139.8, 151.0, 152.8, 192.5; IR (ATR) vmax/cm-1 3039w, 2961w, 2835w, 2158w, 1710s, 1575m, 1468w, 1425w, 1233s, 1217s, 839s; MS (ES) m/z = 204.0 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１１Ｈ１３ＮＯＳｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 204.0839, 実測値 204.0839.
（１．１．２１ メチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート、４１の合成）
メチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート（４１）の合成を図１（ｘｖｉｉｉ）に示す。トリメチルホスホノアセテート（２１．０ｍＬ、１２９．８ｍｍｏｌ）及びＬｉＣｌ（５．５ｇ、１２９．８ｍｍｏｌ）を０℃の無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）に加え、得られた溶液を１５分間撹拌した後、化合物４０（２２．０ｇ、１０８．２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液にＤＢＵ（１９．４ｍＬ、１２９．８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られたスラリーを室温で１６時間撹拌した。これを砕いた氷に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない茶色固体（３１．５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製し、化合物４１を白色固体として得た（１６．２ｇ、５８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 3.79 (s, 3H), 6.90 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ -0.3, 51.8, 100.1, 101.3, 120.7, 122.6, 123.2, 139.4, 142.6, 151.6, 152.8, 166.9; IR (ATR) vmax/cm-1 3020w, 2955w, 2901w, 2160w, 1717s, 1644m, 1582m, 1547m, 1473m, 1318s, 1204s, 842s; MS (ES) m/z = 260.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１４Ｈ１７ＮＯ２Ｓｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 260.1101, 実測値 260.1101.
（１．１．２２ メチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、４２の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（４２）の合成を図１（ｘｉｘ）に示す。化合物４１（５．０ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）の混合液に溶解し、Ｋ２ＣＯ３（５．３ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた懸濁液を室温で１６時間撹拌した後、ＤＣＭ及びＨ２Ｏで希釈した。有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、精製していない白色固体（３．４ｇ）を得た。これを石油エーテルからの再結晶により精製し、化合物４２を白色固体として得た（３．０６ｇ、８５％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.31 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 6.93 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 1.7 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 51.9, 80.3, 82.1, 119.7, 123.0, 123.3, 139.7, 142.5, 152.1, 153.0, 166.9; IR (ATR) vmax/cm-1 3245m, 3015w, 2970w, 2951w, 2104w, 1738m, 1609s, 1632w, 1443m, 1368m, 1293m, 1272s, 869m; MS (ES) m/z = 188.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１１Ｈ１０ＮＯ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 188.0706, 実測値 188.0706.
（１．１．２３ （２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸、４４の合成）
（２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エン酸（４４）の合成を図１（ｘｘ）示す。化合物４１（５．４１ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解し、２０％水溶液ｗ／ｖのＮａＯＨ（１０ｍＬ）を加え、混合液を還流下で１８時間撹拌した。得られた懸濁液を冷却し、Ｈ２Ｏ及びＥｔＯＡｃで希釈し、２０％ＨＣｌを用いてｐＨを１に調整した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、化合物４４をオフホワイト固体として得た（４．１４ｇ、＞１００％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.33 (s, 1H), 6.93 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H).
（１．１．２４ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、４５の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－エチニルピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（４５）の合成を図１（ｘｘ）に示す。化合物４４（４．１４ｇ、２３．９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６０ｍＬ）に溶解し、その後Ｋ２ＣＯ３（６．６ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）及び１－ブロモ－２－メチルプロパン（５．２ｍＬ、４７．８ｍｍｏｌ）を加え、得られた懸濁液を室温で１８時間撹拌した。これをＤＣＭ及びＨ２Ｏで希釈し、有機物を飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない茶色油状物（５．２３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物４５を白色固体として得た（１．０３ｇ、１９％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3 δ 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.96 - 2.05 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 3.30 (s, 1H), 4.00 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 19.09, 27.78, 70.87, 80.29, 82.06, 119.61, 123.25, 123.50, 139.71, 142.20, 152.28, 152.97, 166.58; IR (ATR) vmax/cm-1 3238m, 2966w, 2953w, 2876w, 2108w, 1695s, 1640s, 1550m, 1313s, 1292s, 1160s; MS (ES) m/z = 230.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１４Ｈ１６ＮＯ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 230.1176, 実測値 230.1176.
（１．１．２５ ８－メトキシ－８－オキソオクタン酸、４７の合成）
８－メトキシ－８－オキソオクタン酸（４７）の合成を図１（ｘｘｉ）に示す。ジメチルスベレート（１１２．５ｇ、５５６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４００ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した後、ＫＯＨ（３１．２ｇ、５５６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。ジエチルエーテル（４００ｍＬ）及びＨ２Ｏを加え、有機層を分離して取っておいた。水層をｐＨ３に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していないワックス状固体を得た。これをヘキサンに懸濁し、０．５時間激しく撹拌した後、濾過した。濾液を蒸発させ、化合物４７を透明な油状物として得た（６０．５１ｇ、５８％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.27 - 1.42 (m, 4H), 1.57 - 1.69 (m, 4H), 2.30 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 10.25 (s, 1H).
（１．１．２６ メチル７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノエート、４８の合成）
メチル７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノエート（４８）の合成を図１（ｘｘｉ）に示す。化合物４７（４．０ｍＬ、２２．３ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（４．８８ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。４－メチルモルホリン（３．０６ｍＬ、２７．８ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加し、得られた溶液を０℃で２時間撹拌した後、Ｏ－（テトラヒドロピラン－２－イル）ヒドロキシルアミン（２．４８ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（２．７７ｍＬ、２６．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液をさらに１６時間撹拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色油状物（９．５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１：１、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物４８を透明な油状物として得た（５．２６ｇ、８６％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.27-1.32 (m, 4H), 1.54 - 1.70 (m, 7H), 1.71 - 1.87 (m, 3H), 2.09 (br, 2H), 2.28 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.57 - 3.63 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.86 - 3.98 (m, 1H), 4.92 (br, 1H), 8.59 (br, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.6, 25.0, 28.6, 33.9, 51.4, 62.6, 77.3, 102.4, 170.4, 174.2; IR (ATR) vmax/cm-1 3202br, 2940m, 2858w, 1736s, 1656s, 1455m, 1204m, 1064s. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.27-1.32 (m, 4H), 1.54 - 1.70 (m, 7H), 1.71 - 1.87 (m, 3H), 2.09 (br, 2H), 2.28 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.57 - 3.63 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.86 - 3.98 (m, 1H), 4.92 (br, 1H), 8.59 (br, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 24.6, 25.0, 28.6, 33.9, 51.4, 62.6, 77.3, 102.4, 170.4, 174.2; IR (ATR) vmax/cm-1 3202br, 2940m, 2858w, 1736s, 1656s, 1455m, 1204m, 1064s; MS(ES): m/z = 288.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１４Ｈ２６ＮＯ５ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 288.1805, 実測値 288.1805.
（１．１．２７ ７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸、４９の合成）
７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタン酸（４９）の合成を図１（ｘｘｉ）に示す。化合物４８（５．０ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（６０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）に溶解し、その後ＮａＯＨ（２．７８ｇ、６９．６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を５０℃で１８時間撹拌した。溶液を蒸発させ、残渣をＨ２Ｏに懸濁させた。５％ＨＣｌを用いてｐＨを注意深くｐＨ３／４に調整し、溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、化合物４９を透明な油状物として得た（４．２７ｇ、９０％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.28-1.40 (m, 4H), 1.52-1.69 (m, 7H), 1.74-1.84 (m, 3H), 2.11 (br, 2H), 2.32 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.58-3.66 (m, 1H), 3.88-4.00 (m, 1H), 4.93 (br, 1H), 8.96 (br, 1H), 10.12 (br, 1H); IR (ATR) vmax/cm-1 3200br, 2938, 2860w, 1707s, 1644s, 1455m, 1357m, 1204s, 1035s, 871s; MS(ES): m/z = 296.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１３Ｈ２３ＮＯ５Ｎａ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 296.1468, 実測値 296.1466.
（１．１．２８ メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、５０の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（５０）の合成を図１（ｘｘｉｉ）に示す。化合物４９（０．８８ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．７１ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を０℃でＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶解し、その後４－メチルモルホリン（０．４４ｍＬ、４．０３ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加した。得られた混合液を０℃で２時間撹拌した後、化合物４３（１．０７ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（０．４１ｍＬ、３．６３ｍｍｏｌ）を加え、混合液を室温で１６時間撹拌した。混合液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（１．３１ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９８：２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５０を黄色固体として得た（１．２５ｇ、６７％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 1.29 - 1.42 (m, 4H), 1.55 - 1.67 (m, 7H), 1.70 - 1.87 (m, 3H), 2.01 - 2.19 (m, 2H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.26 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.57 - 3.64 (m, 3H), 3.76 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.91 - 3.98 (m, 1H), 4.94 (s, 1H), 6.81 - 6.88 (m, 2H), 6.90 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.46 (m, 2H), 7.65 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz, 1H), 8.66 - 8.74 (m, 1H), 8.75 - 8.94 (m, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.7, 25.0, 25.2, 28.1, 28.7, 28.9, 33.1, 33.2, 41.3, 45.4, 48.3, 48.6, 52.0, 62.6, 85.2, 95.2, 102.5, 113.0, 115.5, 121.6, 122.3, 123.7, 133.1, 138.7, 143.0, 151.0, 151.1, 152.4, 167.3, 171.8; IR (ATR) vmax/cm-1 3217br, 3000w, 2945m, 2856w 2211w, 1738s, 1640s, 1605s, 1577m, 1516s, 1437s, 1366s, 1231s, 820s; MS(ES): m/z = 603.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３４Ｈ４２Ｎ４Ｏ６ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 603.3177, 実測値 603.3178.
（１．１．２９ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、５４の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（５４）の合成を図１（ｘｘｉｉｉ）に示す。化合物４９（０．５４ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．４５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を０℃でＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、その後４－メチルモルホリン（０．３２ｍＬ、２．９７ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加した。得られた混合液を０℃で２時間撹拌した後、化合物４６（０．５６ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（０．３２ｍＬ、２．９７ｍｍｏｌ）を加え、混合液を室温で１６時間撹拌した。混合液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（１．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９８：２、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５４を黄色固体として得た（０．５５ｇ、５９％）：1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 0.98 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 1.35 - 1.40 (m, 4H), 1.50 - 1.61 (m, 3H), 1.63 - 1.67 (m, 4H), 1.74 - 1.86 (m, 3H), 2.01 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 2.07 - 2.20 (m, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.24 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.61 - 3.64 (m, 3H), 3.78 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.92 - 3.97 (m, 1H), 4.00 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 4.95 (s, 1H), 6.85 - 6.89 (m, 2H), 6.93 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.48 (m, 2H), 7.66 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 19.1, 24.9, 25.0, 27.8, 28.0, 28.5, 28.7, 32.9, 41.2, 45.2, 48.2, 48.5, 62.5, 70.8, 85.0, 95.0, 102.4, 112.9, 115.4, 121.4, 122.7, 123.4, 133.0, 138.6, 142.5, 150.8, 151.1, 152.2, 166.7, 171.6; (ATR) vmax/cm-1 3191br, 2940m, 2857w, 2209w, 1708s, 1641s, 1605s, 1517s, 1234s, 1204s, 1021s, 753m; MS(ES): m/z = 645.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３７Ｈ４９Ｎ４Ｏ６ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 645.3647, 実測値 645.3647.
（１．１．３０ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２‐エノエート、５６の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２‐エノエート（５６）の合成を図１（ｘｘｉｖ）に示す。化合物４９（０．２２ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．１８ｇ、１．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。４－メチルモルホリン（０．１１ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加し、得られた溶液を０℃で２時間撹拌し、その後化合物６（０．３ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（０．１ｍＬ、０．９０ｍｍｏｌ）を加え、溶液をさらに１８時間撹拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．６２ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３～９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５６を黄色固体として得た（０．３０ｇ、６１％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.31 - 1.43 (m, 4H), 1.53 (s, 9H), 1.55 - 1.72 (m, 7H), 1.74 - 1.89 (m, 3H), 2.13 (s, 2H), 2.37 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.19 - 3.32 (m, 4H), 3.56 - 3.70 (m, 3H), 3.79 (t, J = 5.1 Hz, 3H), 3.87 - 4.01 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 6.37 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.39 - 7.53 (m, 6H), 7.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.5, 24.9, 25.0, 28.0, 28.2, 28.5, 28.7, 32.9, 33.1, 41.2, 45.3, 48.4, 48.7, 62.5, 80.6, 88.0, 91.9, 102.4, 113.8, 115.5, 120.6, 125.3, 127.8, 129.1, 130.4, 131.7, 132.8, 134.0, 142.7, 150.6, 166.2, 170.5, 171.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3218br, 2933m, 2855w, 2209w, 1700s, 1633s, 1596s, 1520s, 1518m, 1440m, 1325m, 1234s, 1207s, 1153s, 1159m, 1128m, 1036s, 820s; MS(ES): m/z = 644.4 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３８Ｈ５０Ｎ３Ｏ６ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 644.3700, 実測値 644.3675.
（１．１．３１ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２‐エノエート、５８の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２‐エノエート（５８）の合成を図１（ｘｘｖ）に示す。化合物４９（０．２２ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．１８ｇ、１．００ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。４－メチルモルホリン（０．１１ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加し、得られた溶液を０℃で２時間撹拌し、その後化合物２７（０．３ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（０．１ｍＬ、０．９０ｍｍｏｌ）を加え、溶液をさらに２０時間撹拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない橙色油状物（０．６ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３～９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５８を黄色油状物として得た（０．３２ｇ、６５％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.34 - 1.40 (m, 4H), 1.51 (s, 9H), 1.59 - 1.69 (m, 6H), 1.75 - 1.84 (m, 4H), 2.12 (s, 2H), 2.32 - 2.41 (m, 2H), 3.20 - 3.29 (m, 4H), 3.59 - 3.65 (m, 3H), 3.77 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.87 - 4.00 (m, 1H), 4.94 (s, 1H), 6.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.79 - 6.91 (m, 2H), 7.06 - 7.14 (m, 2H), 7.38 - 7.45 (m, 2H), 7.59 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 18.6, 24.9, 25.0, 25.2, 28.0, 28.1, 28.2, 28.2, 28.5, 28.7, 32.9, 33.0, 41.2, 45.2, 48.2, 48.5, 51.5, 56.0, 62.5, 63.8, 80.6, 81.4, 96.0, 102.4, 113.0, 115.4, 119.3, 126.2, 130.6, 132.0, 132.7, 135.5, 140.3, 150.7, 165.9, 170.5, 171.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3233br, 2934m, 2860w, 2203w, 1700s, 1674s, 1620s, 1604s, 1513m, 1442m, 1368s, 1232s, 1150s, 1036m, 655s; MS(ES): m/z = 650.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３６Ｈ４８Ｎ３Ｏ６Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 650.3264, 実測値 650.3262.
（１．１．３２ メチル（２Ｅ）－３－４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニルプロパ－２－エノエート、６０の合成）
メチル（２Ｅ）－３－４－［２－（トリメチルシリル）エチニル］フェニルプロパ－２－エノエート（６０）の合成を図１（ｘｘｖｉ）に示す。無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）をシュレンク丸底フラスコに加え、続いてメチル２－（ジエトキシホスホリル）アセテート（１．４ｍＬ、６ｍｍｏｌ）及びＬｉＣｌ（０．２５ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合液を０℃で１５分間撹拌した。次いで、化合物１（１ｇ、４．９ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（０．８１ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。反応混合液を室温に温め、さらに１６時間撹拌した。反応混合液を砕いた氷に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて薄茶色固体の精製していない生成物（１．４ｇ）を得た。この精製していない生成物をＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（石油Ｅｔ：ＥｔＯＡｃ、９：１を溶離液として）で精製し、化合物６０を白色固体として得た（８７．２ｍｇ、６９％）：1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 0.25 (s, 9H), 3.81 (s, 3H), 6.43 (d, J 16 Hz, 1H), 7.43-7.49 (m, 4H), 7.65 (d, J 16 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 167.38, 144.03, 134.45, 132.54, 127.99, 125.16, 118.69, 104.61, 96.87, 51.93, 0.32, 0.04.
（１．１．３３ メチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート、５の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート（５）の合成を図１（ｘｘｖｉ）に示す。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（１：３、２ｍＬ）を丸底フラスコに加え、続いて化合物６０（０．８７ｇ、３．４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（０．７ｇ、５．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を室温で３時間撹拌した。次いで、得られた溶液をＤＣＭで希釈し、有機物をＮＨ４Ｃｌ（飽和）及びＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて精製していない白色固体を得た。次いで、精製していない生成物をヘプタンからの再結晶により精製し、化合物５を白色の結晶性固体として得た（０．５ｇ、７７％）：1H NMR δ 3.18 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 6.42 - 6.46 (d, J 16.02 Hz, 1H), 7.48-7.50 (m, 4H), 7.64 - 7.68 (d, J 16.02 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 167.32, 143.89, 134.84, 132.73, 128.05, 124.09, 118.97, 83.28, 79.35, 51.96.
（１．１．３４ ２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート、６１の合成）
２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－（４－エチニルフェニル）プロパ－２－エノエート（６１）の合成を図１（ｘｘｖｉ）に示す。化合物５（２２．５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をジエチレングリコールモノメチルエーテル（２ｍＬ）に溶解し、続いてＫ２ＣＯ３（１ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応液を室温で２４時間撹拌した。得られた反応混合液をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出し、有機抽出物をＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、精製していない黄色油状物（１５７．８ｍｇ）を得た。次いで、精製していない生成物をクーゲルロール蒸留（７０－８０℃、９Ｔｏｒｒ）で精製し、化合物６１を黄色油状物として得た（２５．９ｍｇ、６２％）。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.18 (s, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.56 - 3.59 (m, 2H), 3.67 - 3.70 (m, 2H), 3.77 - 3.80 (m, 2H), 4.37 - 4.40 (m, 2H), 6.48 (d, J = 16 Hz, 1H), 7.45 - 7.51 (m, 4H), 7.67 (d, J = 16 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 101 MHz) δ 166.84, 144.06, 134.84, 132.73, 128.07, 124.08, 119.08, 83.28, 79.36, 72.05, 70.69, 69.42, 63.90, 59.27; MS (ESI) m/z = 275.1 [M+H]+; HRMS (ESI) Ｃ１６Ｈ１９Ｏ４ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 275.1283, 実測値 275.1286.
（１．１．３５ ２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－｛８－［（オキサン－２－イルオキシ）アミノ］オクタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、６３の合成）
２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－｛８－［（オキサン－２－イルオキシ）アミノ］オクタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート（６３）の合成を図１（ｘｘｖｉｉ）に示す。化合物４９（３２８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（２７０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４０ｍＬ）を入れた丸底フラスコに加え、得られた溶液を℃まで冷却した後、４－メチルモルホリン（１５６μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合液を、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジンが完全に消費されるまで０℃で撹拌した。化合物６２（５００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（１５６μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）を加え、次いで反応液を室温で１６時間撹拌した。得られた反応混合液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、精製していない橙色固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物６２を橙色固体として得た（０．５ｇ、６５％）。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 1.41-1.34 (m, 6H), 1.70-1.63 (m, 6H), 3.21-3.28 (m, 4H), 3.57-3.59 (m, 2H), 3.61-3.66 (m, 4H), 3.68-3.70 (m, 2H), 3.71-3.73 (m, 1H), 3.77 -3.81 (m, 4H), 3.83-3.86 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 4.36-4.41 (m, 2H), 4.95 (s, br, 1H), 6.48 (d J 15.9 Hz, 1H), 6.88 (d J 8.8 Hz, 2H), 7.44-7.46 (m, 2H), 7.47-7.51 (m, 4H), 7.68 (d J 15.9 Hz, 1H).
（１．１．３６ ６－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－３－カルバルデヒド、６５の合成）
６－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－３－カルバルデヒド（６５）の合成を図１（ｘｘｖｉｉｉ）に示す。２－クロロピリジン－３－カルボキシアルデヒド（１０ｇ、７０．６ｍｍｏｌ）、トリメチルシリルアセチレン（１３．７ｍＬ、９９．５ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＰｄＣｌ４ （０．４１ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（０．２ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、ＰｔＢｕ３ＨＢＦ４（０．８１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（１１．１３ｇ、１０５ｍｍｏｌ）を、あらかじめＡｒでスパージしたトルエン（１５０ｍＬ）を入れた丸底フラスコに加えた。反応混合液を１００℃で２０時間撹拌した。蒸発させた後、精製していない反応混合液をＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ、７：３を溶離液として）で精製し、化合物６５を茶色固体として得た（４．４ｇ、３１％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 0.30 (s, 9H), 7.60 (d J 7.5 Hz, 1H), 8.12 (dd J 8.1, 2.1 Hz, 1H), 9.0 (dd J 2.1, 0.8 Hz, 1H), 10.1(s, 1H).
（１．１．３７ ６－エチニルピリジン－３－カルバルデヒド、６６の合成）
６－エチニルピリジン－３－カルバルデヒド（６６）の合成を図１（ｘｘｖｉｉｉ）に示す。化合物６５（４．４ｇ、２１．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ：ＤＣＭ（１：３、１８０ｍＬ）に溶解し、続いてＫ２ＣＯ３（３．２３ｇ、２３．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を室温で２時間撹拌した。次いで、精製していない反応物をＤＣＭに溶解し、ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。１５０℃（９Ｔｏｒｒ）でクーゲルロール蒸留を行った後、純粋な化合物６６をオフホワイト固体として得た（１．４ｇ、４５％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 3.41 (s, 1H), 7.64 (d J 8.0 Hz, 1H), 8.15 (dd J 8.0, 2.1 Hz, 1H), 9.05 (dd J 2.1, 0.8 Hz, 1H), 10.12 (s, 1H).
（１．１．３８ ジエチル（（イソ－ブトキシカルボニル）メチル）ホスホネート、６７の合成）
ジエチル（（イソ－ブトキシカルボニル）メチル）ホスホネート（６７）の合成を図１（ｘｘｉｘ）に示す。無水トルエン（４０ｍＬ）を入れたＡｒ下のシュレンク丸底フラスコに２－メチル－１－プロパノール（０．７４ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）を加え、続いてジエチルホスホノ酢酸（１．３５ｍＬ、８．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．６２ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）及びプロピルホスホン酸無水物（６．６２ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合液を室温で４時間撹拌した。次いで、精製していない反応混合液をＨ２Ｏで希釈し、有機物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出液をＨＣｌ（１０％水溶液）、ＮａＨＣＯ３（飽和）及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。化合物６７（１．９２ｇ、９５％）を精製せずにさらに次の工程で使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 0.94 (d J 6.7 Hz, 6H), 1.34 (t J 14.1, 7.0 Hz, 6H), 1.90 - 2.00 (m, 1H), 2.97 (d J 21.6 Hz, 2H), 3.92 (dd J 6.7, 0.5 Hz, 2H), 4.13 - 4.21 (m, 4H).
（１．１．３９ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－エチニルピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート、６８の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－エチニルピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート（６８）の合成を図１（ｘｘｘ）に示す。化合物６７（１．９２ｇ、７．６ｍｍｏｌ）及びＬｉＣｌ（０．３１４ｇ、７．４１ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）を含むＡｒ下のシュレンク丸底フラスコに加え、得られた反応混合液を０℃に冷却し、１５分間撹拌した。その後、化合物６６（０．８１０ｇ、６．１８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（１．０１ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合液を室温に温め、さらに１６時間撹拌を続けた。精製していない反応液を砕いた氷に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。ＳｉＯ２カラムクロマトグラフィーで精製し、化合物６８を明るい黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 0.99 (d J 6.7 Hz, 6H), 1.97 - 2.07 (m, 1H), 3.27 (s, 1H), 4.01 (d J 6.7 Hz, 2H), 6.54 (d J 16.1 Hz, 1H), 7.50 (d J 8.2 Hz, 1H), 7.65 (d J 16.1 Hz, 1H), 7.82 (dd J 8.2, 2.2 Hz, 1H), 8.72 (d J 2.2 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.31, 149.86, 143.29, 139.98, 134.56, 130.11, 127.61, 121.54, 82.51, 79.33, 71.19, 27.95, 19.28; ); HRMS (ESI) Ｃ１４Ｈ１６ＮＯ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 230.1181, 実測値 230.1181.
（１．１．４０ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート、７０の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－｛２－［４－（４－｛７－［（オキサン－２－イルオキシ）カルバモイル］ヘプタノイル｝ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート（７０）の合成を図１（ｘｘｘｉ）に示す。化合物４９（３７０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）及び２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（３００ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解し、得られた溶液を０℃まで冷却した後、４－メチルモルホリン（２５０ｍＬ、２．２７ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合液を０℃で４時間撹拌し続けた。続いて、化合物６９（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及び４－メチルモルホリン（１０２ｍＬ、０．９２ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応混合液を室温に温めて一晩撹拌を続けた。得られた精製していない反応混合液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ 、蒸発させて精製していない黄色固体（１ｇ）を得た。次いで、これをＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、化合物７０を明るい黄色固体として得た（０．６ｇ、７２％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.99 (d J 6.7 Hz, 6H), 1.33 - 1.42 (m, 6H), 1.64 - 1.71 (m, 6H), 1.76 - 1.87 (m, 4H), 1.99 - 2.06 (m, 1H), 2.10 - 2.17 (m, 2H), 3.24 - 3.32 (m, 4H), 3.60 - 3.67 (m, 4H), 3.71 - 3.74 (m, 1H), 3.84 - 3.87 (m, 1H), 4.01 (d J 6.7 Hz, 2H), 4.95 (s, 1H), 6.53 (d J 16 Hz, 1H), 7.66 (d J 16 Hz, 1H), 7.52 - 7.56 (m, 1H), 7.84 (d J 8.3 Hz, 1H), 8.72 (d J 2.1 Hz, 1H), 6.89 (d J 8.8 Hz, 2H), 7.50 - 7.54 (m, 2H).
（１．１．４１ １－（４－ヨードフェニル）－４－メチルピペラジン、７２の合成）
１－（４－ヨードフェニル）－４－メチルピペラジン（７２）の合成を図１（ｘｘｘｉｉ）に示す。化合物４（２．８８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）をＡｒ下でＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、その後ヨードメタン（０．９３ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２．０９ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で７２時間撹拌した。Ｈ２Ｏを加え、得られた沈殿物を濾過して精製していないベージュ色固体（６．４ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、化合物７２をオフホワイト固体として得た（１．２２ｇ、４０％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.34 (s, 3H), 2.51 - 2.58 (m, 4H), 3.13 - 3.21 (m, 4H), 6.64 - 6.71 (m, 2H), 7.46 - 7.55 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 46.1, 48.6, 54.9, 81.3, 118.0, 137.7, 150.8; IR (ATR) vmax/cm-1 2959w, 2832m, 2793m, 1672m, 1490s, 1447m, 1390m, 1292s, 1235s, 1144s, 1009m, 908s, 811s; MS(ES): m/z = 303.0 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１１Ｈ１５Ｎ２Ｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 303.0353, 実測値 303.0351.
（１．１．４２ １－メチル－４－（２－ニトロフェニル）ピペラジン、７４の合成）
１－メチル－４－（２－ニトロフェニル）ピペラジン（７４）の合成を図１（ｘｘｘｉｉｉ）に示す。１－フルオロ－２－ニトロベンゼン（９ｍＬ、８５．０ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６０ｍＬ）に加え、その後Ｎ－メチルピペラジン（１８．９ｍＬ、１７０．０ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２３．４ｇ、１７０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた赤色溶液を１１０℃で２４時間撹拌した後、冷却し、Ｈ２Ｏで希釈した。混合液をＤＣＭ（３×）で抽出し、飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、化合物７４を赤色油状物として得て、これを次の工程に直接進めた（２１．０ｇ、＞１００％）：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 2.52 - 2.60 (m, 4H), 3.03 - 3.14 (m, 4H), 6.98 - 7.06 (m, 1H), 7.14 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.40 - 7.53 (m, 1H), 7.75 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H).
（１．１．４３ ２－（４－メチルピペラジン－１－イル）アニリン、７５の合成）
２－（４－メチルピペラジン－１－イル）アニリン（７５）の合成を図１（ｘｘｘｉｉｉ）に示す。化合物７４（２１．０ｇ、８５．０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２００ｍＬ）に溶解し、その後濃塩酸（濃ＨＣｌ）（２０ｍＬ）及びＳｎ（ＩＩ）Ｃｌ２（４８．４ｇ、２５５．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合液を還流下で１８時間撹拌した。混合液を冷却し、溶媒を蒸発させて精製していない残渣を得て、これをＤＣＭに溶解した。有機物を５％ＮａＯＨ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（４．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物７５を黄色固体として得た（３．０８ｇ、１９％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.36 (s, 3H), 2.45 - 2.65 (m, 4H), 2.95 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 3.96 (br, 2H), 6.68 - 6.77 (m, 2H), 6.93 (td, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 7.7, 1.2 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 46.2, 50.9, 55.9, 115.0, 118.5, 119.8, 124.5, 139.1, 141.4; IR (ATR) vmax/cm-13389m, 3294w, 2939w, 2980w, 1619s, 1503s, 1449s, 1283s, 1139s, 1011s, 927m.
（１．１．４４ １－（２－ヨードフェニル）－４－メチルピペラジン、７６の合成）
１－（２－ヨードフェニル）－４－メチルピペラジン（７６）の合成を図１（ｘｘｘｉｉｉ）に示す。化合物７５（２．０ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を濃ＨＣｌ（３ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１２ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を０℃に冷却した。ＮａＮＯ２（０．８６ｇ、１２．５ｍｍｏｌ、３ｍＬのＨ２Ｏ中の溶液）を２分かけてゆっくりと添加し、得られた懸濁液を０℃で２時間撹拌し、その後ＫＩ（３．４５ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、懸濁液を室温で７２時間撹拌した。懸濁液をＤＣＭで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３及び水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物７６を暗色固体として得た（２．６４ｇ、８４％）：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.54 (s, 3H), 2.90 (s, 4H), 3.18 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 6.81 (td, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 8.0, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 45.2, 51.0, 54.9, 98.0, 121.2, 125.9, 129.3, 139.9, 152.4; IR (ATR) vmax/cm-1 3006w, 2879m, 2833m, 1738w, 1579w, 1468s, 1461s, 1371s, 1289m, 1230s, 1145s, 1012s, 972m, 762m.
（１．１．４５ （３－クロロ－２－オキソプロピル）トリフェニルホスホニウムクロリド、７８の合成）
（３－クロロ－２－オキソプロピル）トリフェニルホスホニウムクロリド（７８）の合成を図１（ｘｘｘｉｖ）に示す。１，３－ジクロロアセトン（１５．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（３１．０ｇ、１１８ｍｍｏｌ）をトルエン（６０ｍＬ）に溶解し、その懸濁液を室温で７２時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、分離した固体をトルエン及びＥｔ２Ｏで洗浄し、化合物７８を白色固体として得た（４３．１ｇ、９４％）：1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 4.88 (s, 2H), 5.88 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 7.72 - 7.87 (m, 15H); その他のデータはすべて文献（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｐｏｌｙ．２０１４．１１．０２９）と一致した(doi:10.1016/j.poly.2014.11.029).
（１．１．４６ １－クロロ－３－（トリフェニルホスファニリデン）プロパン－２－オン、７９の合成）
１－クロロ－３－（トリフェニルホスファニリデン）プロパン－２－オン（７９）の合成を図１（ｘｘｘｉｖ）に示す。化合物７８（４３．１ｇ、１１０．７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（６０ｍＬ）に溶解し、その後Ｎａ２ＣＯ３（５．８７ｇ、５５．４ｍｍｏｌ、６０ｍＬのＨ２Ｏ中の溶液）を加え、得られた懸濁液を０．５時間急速に撹拌した。懸濁液を約３００ｍＬのＨ２Ｏで希釈し、混合液を濾過した。次いで、分離した固体をＤＣＭに溶解し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、化合物７９を白色固体として得た（３２．１ｇ、８２％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.01 (s, 2H), 4.29 (d, J = 24.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.51 (m, 6H), 7.54 - 7.60 (m, 3H), 7.61 - 7.69 (m, 6H)；その他のデータはすべて文献（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０２１／ｊｏ１０１８６４ｎ）と一致した。
（１．１．４７ （３Ｅ）－１－クロロ－４－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝ブタ－３－エン－２－オン、８０の合成）
（３Ｅ）－１－クロロ－４－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝ブタ－３－エン－２－オン（８０）の合成を図１（ｘｘｘｉｖ）に示す。化合物４０（７．５ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）及び化合物７９（１３．０ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶解し、溶液を室温で４８時間撹拌した。得られた暗色溶液を蒸発させ、精製していない固体をＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製して、化合物８０を白色固体として得た（７．６７ｇ、７５％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.27 (s, 9H), 4.32 (s, 2H), 7.40 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ -0.3, 47.8, 100.9, 101.2, 121.4, 124.4, 125.6, 139.5, 142.4, 151.1, 152.9, 191.2; IR (ATR) vmax/cm-1 3033w, 2959w, 2920w, 2157w, 1709s, 1622m, 1473w, 1399w, 1248m, 981m, 867s, 841s; MS(ES): m/z = 278.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１４Ｈ１７ＮＯＣｌ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 278.0768, 実測値 278.0769.
（１．１．４８ ４－［（Ｅ）－２－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝エテニル］－１，３－チアゾール－２－アミン、８１の合成）
４－［（Ｅ）－２－｛５－［２－（トリメチルシリル）エチニル］ピリジン－２－イル｝エテニル］－１，３－チアゾール－２－アミン（８１）の合成を図１（ｘｘｘｉｖ）に示す。化合物８０（８．５ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）及びチオ尿素（２．８ｇ、３６．７ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（７０ｍＬ）に溶解し、溶液を還流下で１８時間撹拌した。混合液を冷却し、蒸発させて精製していない残渣を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（１：１、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物８１をオフホワイト固体として得た（４．２４ｇ、４６％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.25 (s, 9H), 6.83 (s, 1H), 7.08 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 7.12 (s, 2H), 7.41 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.1, 0.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.58 (dd, J = 2.2, 0.8 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 0.2, 89.2, 91.1, 98.1, 102.5, 109.6, 116.8, 121.7, 127.2, 127.4, 139.2, 149.2, 154.8, 168.1; IR (ATR) vmax/cm-1 3305br, 3117br, 2959w, 2899w, 2157m, 1724m, 1628m, 1582m, 1536m, 1504m, 1471m, 1367m, 1249s, 860s, 842s, 758s; MS(ES): m/z = 300.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１５Ｈ１８Ｎ３ＳＳｉ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 300.0985, 実測値 300.0985.
（１．１．４９ ４‐［（Ｅ）‐２‐（５‐エチニルピリジン‐２‐イル）エテニル］‐１，３‐チアゾール‐２‐アミン、８２の合成）
４‐［（Ｅ）‐２‐（５‐エチニルピリジン‐２‐イル）エテニル］‐１，３‐チアゾール‐２‐アミン（８２）の合成を図１（ｘｘｘｉｖ）に示す。化合物８１（５．０ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解し、溶液を－４０℃に冷却した。テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）（１８．３ｍＬ、１８．３ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を滴加し、得られた溶液を－４０℃で１時間撹拌した後、室温に到達させた。この溶液をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない暗色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製し、化合物８２を黄色固体として得た（２．６８ｇ、７１％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.45 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 7.09 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 7.12 (s, 2H), 7.40 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 8.3, 2.2 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 2.2, 0.9 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 80.9, 84.3, 109.5, 116.4, 121.6, 127.3, 139.4, 149.2, 152.0, 154.9, 168.1; IR (ATR) vmax/cm-1 3284br, 3113br, 3016w, 2105w, 1738s, 1626s, 1581s, 1528m, 1468w, 1366s, 1217s, 917m; MS(ES): m/z = 228.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１２Ｈ１０Ｎ３Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 228.0590, 実測値 228.0588.
（１．１．５０ ４－（４－ヨードフェニル）モルホリン、８３の合成）
４－（４－ヨードフェニル）モルホリン（８３）の合成を図１（ｘｘｘｖ）に示す。４－フェニルモルホリン（１２．５ｇ、７６．６ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１０．３ｇ、１２２．６ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に懸濁し、混合液を約１２℃に冷却した。ヨウ素（２０．４ｇ、８０．４ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られた懸濁液を室温で４時間急速に撹拌した。飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を加え、沈殿した固体を濾過によって分離し、精製していない暗灰色固体（２７ｇ）を得た。これをＥｔＯＨからの再結晶により精製し、化合物８３を灰色固体として得た（１６．３ｇ、７４％）：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.07 - 3.16 (m, 4H), 3.80 - 3.89 (m, 4H), 6.61 - 6.72 (m, 2H), 7.47 - 7.58 (m, 2H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 48.8, 66.6, 81.7, 117.6, 137.8, 150.8; IR (ATR) vmax/cm-1 2966w, 2890w, 2856w, 2829w, 1583m, 1490m, 1258, 1234s, 1118s, 922s, 811s; MS(ES): m/z = 290.0 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ１０Ｈ１３ＮＯＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 290.0044, 実測値 290.0037.
（１．２ 参照化合物の調製）
（１．２．１ メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、７７の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（７７）の合成を図１に示す（ｘｘｘｉｉｉ）。Ｅｔ３Ｎ（２０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物７６（１７５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、化合物４２（１２０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２１ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で１８時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製して、化合物７７を黄色油状物として得た（１０５ｍｇ、５０％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.39 (br, 3H), 2.68 (br, 4H), 3.29 (br, 4H), 3.82 (s, 3H), 6.94 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.96 - 7.00 (m, 2H), 7.28 - 7.35 (m, 1H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 1.6 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 51.3, 51.9, 55.5, 91.2, 93.4, 115.7, 118.0, 121.4, 121.8, 122.4, 123.6, 130.3, 134.1, 138.6, 142.7, 151.3, 152.2, 154.3, 167.1; IR (ATR) vmax/cm-1 3006w, 2879m, 2833m, 1738w, 1579w, 1468s, 1461s, 1371s, 1289m, 1230s, 1145s, 1012s, 972m, 762m.
（１．３ 例示化合物の調製）
（１．３．１ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、６の合成）
例示化合物６の合成を図２（ｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（８０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。化合物４（２．１６ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、化合物３（１．８０ｇ、７．８８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （２６０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（７１ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で２４時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製した後、ＭｅＯＨからの再結晶により、化合物６を黄色固体として得た（２．１１ｇ、７２％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.53 (s, 9H), 3.22-3.28 (m, 4H), 3.38-3.45 (m, 4H), 6.37 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.77 - 6.95 (m, 2H), 7.33 - 7.53 (m, 6H), 7.56 (d, J = 15.9 Hz, 1H); IR (ATR) vmax/cm-1 2967w, 2916w, 2830w, 2212w, 1687s, 1629m, 1595m, 1518m, 1326m, 1241m, 1159m, 1128m, 986m, 831s, 819s; MS(ASAP): m/z = 389.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ２５Ｈ２９Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 389.2229, 実測値 389.2231.
（１．３．２ メチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、７の合成）
例示化合物７の合成を図２（ｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（１５０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物４（４．５０ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）、化合物５（３．０５ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（５５０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１５０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で２４時間撹拌した。その後、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製した後、ＭｅＯＨからの再結晶により、化合物７を黄色固体として得た（２．７４ｇ、５１％）：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 2.82-2.94 (m, 4H), 3.14-3.24 (m, 4H), 3.73 (s, 3H), 6.67 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 2H); 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 44.9, 47.5, 51.5, 87.6, 92.7, 110.7, 114.5, 118.3, 124.9, 128.6, 131.3, 132.5, 133.5, 143.6, 151.2, 166.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3039w, 2952w, 2909w, 2830w, 2204w, 2173w, 1698s, 1630s, 1593m, 1518m, 1312m, 1243s, 1168s, 987m, 831s, 817s; MS(ASAP): m/z = 347.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ２２Ｈ２３Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 347.1760, 実測値 347.1736.
（１．３．３ メチル（２Ｅ）－３－［４－（２－｛４－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］フェニル｝エチニル）フェニル］プロパ－２－エノエート、１２の合成）
メチル（２Ｅ）－３－［４－（２－｛４－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］フェニル｝エチニル）フェニル］プロパ－２－エノエート、１２の合成を図２（ｉｉ）に示す。化合物１１（３．４６ｇ、１２．５３ｍｍｏｌ）をＥｔ３Ｎ（１２０ｍＬ）に溶解し、溶液をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物５（２．５７ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （４４０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１２０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、０．５％Ｅｔ３Ｎ）で精製して、化合物１２を黄色固体として得た（２．４４ｇ、５８％）：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 2.94 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.97 (s, 3H), 3.56 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 6.67 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.47 - 7.54 (m, 2H), 7.67 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 13C NMR (151 MHz, DMSO-d6) δ 36.3, 38.1, 49.6, 51.5, 78.7, 79.0, 79.2, 87.4, 93.1, 108.6, 111.9, 118.2, 118.2, 125.1, 128.6, 131.2, 132.7, 133.3, 143.6, 148.9, 166.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3403br, 3042w, 2952w, 2888w, 2208m, 1698s, 1632m, 1608m, 1594s, 1522s, 1313s, 1169s, 1134s, 817s; MS(ASAP): m/z = 335.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ２１Ｈ２３Ｎ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 335.1760, 実測値 335.1743.
（１．３．４ メチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－アセチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、１３の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（４－アセチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、１３の合成を図２（ｉｉｉ）に示す。化合物７（０．３５ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、その後塩化アセチル（８６μＬ、１．２１ｍｍｏｌ）及びピリジン（９８μＬ、１．２１ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。溶液をＤＣＭで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．４ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７．５：２．５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物１３を黄色固体として得た（０．３８ｇ、９７％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 2.15 (s, 3H), 3.24 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.27 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.63 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 6.44 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.41 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.54 (m, 4H), 7.67 (d, J = 16.0 Hz, 1H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 21.3, 41.1, 45.9, 48.3, 48.6, 51.7, 88.0, 92.1, 113.8, 115.6, 118.1, 125.7, 128.0, 131.8, 132.9, 133.7, 144.0, 150.5, 167.3, 169.0; IR (ATR) vmax/cm-1 3039w, 2947w, 2836w, 2205w, 2173w, 1699m, 1627s, 1594m, 1521m, 1446m, 1425m, 1311m, 1236s, 1164s, 994s, 835s, 822s; MS(ASAP): m/z = 388.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ２４Ｈ２４Ｎ２Ｏ３ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 388.1787, 実測値 388.1793.
（１．３．５ （３－｛４－［４－（２－｛４－［（１Ｅ）－３－メトキシ－３－オキソプロパ－１－エン－１－イル］フェニル｝エチニル）フェニル］ピペラジン－１－イル｝プロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド、１４の合成）
３－｛４－［４－（２－｛４－［（１Ｅ）－３－メトキシ－３－オキソプロパ－１－エン－１－イル］フェニル｝エチニル）フェニル］ピペラジン－１－イル｝プロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド、１４の合成を図２（ｉｖ）に示す。化合物７（０．３５ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）をＡｒ下で無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、その後Ｋ２ＣＯ３（０．１６７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び（３－ブロモプロピル）トリフェニルホスホニウムブロミド（０．４７ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を８０℃で１６時間撹拌した。溶液を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、さらにＤＣＭ／ヘプタン溶液からの再結晶により、化合物１４を黄色固体として得た（０．４４ｇ、６０％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 1.82-1.91 (m, 2H), 2.52-2.58 (m, 4H), 2.74 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.16-3.23 (m, 4H), 3.79 (s, 3H), 3.91-3.99 (m, 2H), 6.41 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.77 - 6.84 (m, 2H), 7.32 - 7.42 (m, 2H), 7.39 - 7.52 (m, 4H), 7.64 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.66-7.73 (m, 6H), 7.75-7.81 (m, 3H), 7.81 - 7.90 (m, 6H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 19.8 (d, J = 3.2 Hz), 20.1 (d, J = 51.8 Hz), 47.9, 51.7, 52.7, 57.1 (d, J = 16.5 Hz), 87.6, 92.5, 112.7, 114.9, 117.9, 118.2, 118.7, 125.8, 127.9, 130.4 (d, J = 12.5 Hz), 131.7, 132.7, 133.4, 133.6 (d, J = 10.0 Hz), 135.0 (d, J = 3.1 Hz), 144.0, 150.8, 167.3; IR (ATR) vmax/cm-1 3362br, 2952w, 2876w, 2826w, 2206w, 1703m, 1630m, 1595s, 1519s, 1437s, 1425m, 1324m, 1240s, 1169s, 1111s, 996s, 823s; MS(ES): m/z = 649.4 [M]+; HRMS (ES) Ｃ４３Ｈ４２Ｎ２Ｏ２Ｐ ［Ｍ］＋の計算値: 649.2984, 実測値 649.2991.
（１．３．６ メチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛メチル［２－（４－メチルベンゼンスルホンアミド）エチル］アミノ｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート、１５の合成）
メチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛メチル［２－（４－メチルベンゼンスルホンアミド）エチル］アミノ｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート、１５の合成を図２（ｖ）に示す。化合物１２（０．３５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、その後ｐ－トルエンスルホニルクロリド（０．２４ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．１８ｍＬ、１．２６ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。この溶液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．５ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物１５を黄色固体として得た（０．４７ｇ、９２％）：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 2.92 (s, 3H), 3.15 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.48 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 4.78 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.57 - 6.62 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.34 - 7.39 (m, 2H), 7.45 - 7.52 (m, 4H), 7.66 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.74 (m, 2H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 21.5, 38.6, 40.3, 51.7, 52.2, 87.5, 92.8, 110.5, 112.0, 117.9, 126.0, 127.0, 128.0, 129.8, 131.6, 133.0, 133.3, 136.7, 143.6, 144.1, 148.8, 167.4; IR (ATR) vmax/cm-1 3241br, 2949w, 2921w, 2857w, 2210m, 1711m, 1632w, 1595s, 1524s, 1320m, 1156s, 1145s, 819s; MS(ASAP): m/z = 489.2 [M+H]+; HRMS (ASAP) Ｃ２８Ｈ２９Ｎ２Ｏ４Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 489.1848, 実測値 489.1866.
（１．３．７ （４Ｚ）－１－（２－メトキシエチル）－２－メチル－４－［（４－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、１９の合成）
（４Ｚ）－１－（２－メトキシエチル）－２－メチル－４－［（４－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、１９の合成を図２（ｖｉ）に示す。
Ｅｔ３Ｎ（９０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。化合物４（１．４３ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）、化合物１８（１．６０ｇ、５．９６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （１７５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（４８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、得られた懸濁液を６０℃で１８時間撹拌した。懸濁液をＣＨＣｌ３で希釈し、有機物を飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない橙色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９２．５：７．５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、化合物１９を明るい橙色固体として得た（１．６１ｇ、７６％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.43 (s, 3H), 2.95 - 3.10 (m, 4H), 3.15 - 3.27 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 3.53 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.78 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 6.81 - 6.91 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 7.37 - 7.48 (m, 2H), 7.48 - 7.56 (m, 2H), 8.06 - 8.17 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 16.0, 41.0, 45.8, 49.2, 59.0, 70.5, 88.3, 92.7, 113.0, 115.0, 125.4, 126.1, 131.5, 131.9, 132.8, 133.5, 138.7, 151.4, 163.5, 170.6; IR (ATR) vmax/cm-1 2943w, 2929w, 2206m, 1700s, 1639s, 1592s, 1561m, 1538m, 1519m, 1403m, 1357m, 1262s, 1136m, 835m; MS(ES): m/z = 429.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２６Ｈ２９Ｎ４Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 429.2291, 実測値 429.2279.
（１．３．８ （４Ｚ）－１－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－２－フェニル－４－［（４－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、２３の合成）
（４Ｚ）－１－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－２－フェニル－４－［（４－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、２３の合成を図２（ｖｉｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（９０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物４（２．００ｇ、６．９４ｍｍｏｌ）、化合物２２（３．２１ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （２５０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（６７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で４０時間撹拌した。懸濁液をＤＣＭで希釈し、有機物を飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて精製していない橙色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、化合物２３を明るい紅色固体として得た（２．８０ｇ、７４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.23 - 2.32 (m, 4H), 2.45 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.02 (s, 4H), 3.21 (s, 4H), 3.44 - 3.58 (m, 4H), 3.91 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 6.80 - 6.91 (m, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.40 - 7.47 (m, 2H), 7.48 - 7.65 (m, 5H), 7.75 - 7.89 (m, 2H), 8.13 - 8.23 (m, 2H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 39.0, 53.6, 56.6, 66.8, 88.3, 93.1, 112.7, 114.9, 125.8, 127.8, 128.4, 128.8, 130.0, 131.2, 131.5, 132.3, 132.8, 133.5, 139.0, 151.5, 162.9, 171.6; MS(ES): m/z = 546.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３４Ｈ３６Ｎ５Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 546.2869, 実測値 546.2824.
（１．３．９ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート、２７の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝チオフェン－２－イル）プロパ－２－エノエート、２７の合成を図２（ｖｉｉｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（７５ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物４（２．３１ｇ、８．００ｍｍｏｌ）、化合物２６（２．１１ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （２８０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（７６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６５℃で７２時間撹拌した。この懸濁液をＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させ、精製していない橙色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９２：８、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ）で精製し、化合物２７を明るい黄色／橙色固体として得た（１．４ｇ、４４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.52 (s, 9H), 3.35 - 3.43 (m, 4H), 3.53 - 3.61 (m, 4H), 6.13 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.10 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 3.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 15.7 Hz, 1H); 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 28.2, 44.9, 47.9, 80.6, 81.4, 96.0, 113.1, 115.4, 119.3, 126.2, 130.6, 132.0, 132.7, 135.5, 140.3, 150.8, 165.9; IR (ATR) vmax/cm-1 2977w, 2929w, 2820w, 2194w, 1698s, 1617m, 1602m, 1526w, 1323m, 1141s, 812w; MS(ES): m/z = 395.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２３Ｈ２７Ｎ２Ｏ２Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 395.1793, 実測値 395.1792.
（１．３．１０ メチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４（アゼチジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、３０の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４（アゼチジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート（３０）の合成を図２（ｉｘ）に示す。化合物２９（０．１８２ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）をＥｔ３Ｎ（３０ｍＬ）に溶解し、溶液をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、メチル（２Ｅ）－３－（４－ヨードフェニル）プロパ－２－エノエート（０．２８８ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （３５ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で１６時間撹拌した。この懸濁液をジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）で希釈し、セライト／ＳｉＯ２に通し、蒸発させ、精製していない黄色固体を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（８：２、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ）で精製し、さらにアセトニトリル（ＭｅＣＮ）からの再結晶により、化合物３０を明るい黄色の結晶性固体として得た（０．２０４ｇ、６４％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.38 (pent, J = 7.2 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.90 - 3.97 (m, 4H), 6.35 - 6.40 (m, 2H), 6.43 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.36 - 7.40 (m, 2H), 7.44 - 7.51 (m, 4H), 7.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 16.7, 51.7, 52.0, 87.2, 93.2, 110.4, 110.7, 117.8, 126.2, 127.9, 131.6, 132.7, 133.2, 144.1, 151.6, 167.3; IR (ATR) vmax/cm-1 2963w, 2922w, 2855w, 2207m, 1713s, 1632m, 1595m, 1522m, 1366m, 1325m, 1314m, 1173s, 820s, 731s; MS(ES): m/z = 318.1 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２１Ｈ２０ＮＯ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 318.1494, 実測値 318.1494.
（１．３．１１ （４Ｚ）－１－（２－アミノエチル）－４－［（４－｛２－［４－（アゼチジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン、３４の合成）
（４Ｚ）－１－（２－アミノエチル）－４－［（４－｛２－［４－（アゼチジン－１－イル）フェニル］エチニル｝フェニル）メチリデン］－２－フェニル－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－５－オン（３４）の合成を図２（ｘ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（５０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物３３（０．５２ｇ、１．４ｍｍｏｌ）、化合物２９（０．２５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （５６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（１５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で２０時間撹拌した。この溶液を蒸発させて精製していない残渣を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製して、化合物３４を赤色固体として得た（０．５２ｇ、８３％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.33 (p, J= 7.3 Hz, 2H), 2.66 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.73 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.87 (t, J= 7.3 Hz, 4H), 6.36 - 6.44 (m, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.34 - 7.38 (m, 2H), 7.51 - 7.57 (m, 2H), 7.58 - 7.66 (m, 3H), 7.89 - 7.94 (m, 2H), 8.24 - 8.33 (m, 2H).
（１．３．１２ メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、４３の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（４３）の合成を図２（ｘｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（１２５ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。化合物４（２．８８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、化合物４２（２．０５ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５～９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製して、化合物４３を明るい黄色固体として得た（３．１２ｇ、９０％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.08 - 3.40 (m, 4H), 6.91 (d, J = 15.7 Hz, 3H), 7.41 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 8.2, 0.8 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, DMSO) δ 51.8, 84.8, 95.7, 109.8, 114.3, 121.0, 121.5, 124.4, 132.7, 138.8, 143.0, 150.5, 151.6, 166.3; IR (ATR) vmax/cm-1 2950m, 2835w, 2209m, 1711s, 1639m, 1605s, 1577m, 1516s, 1319s, 821s; MS (ES) m/z = 348.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２１Ｈ２２Ｎ３Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 348.1707, 実測値 348.1707.
（１．３．１３ メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、４６の合成）
メチルプロピル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（４６）の合成を図２（ｘｉｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（６０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物４（０．７４ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、化合物４５（０．６５ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （９１ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５～９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、化合物４６を明るい黄色固体として得た（０．６２ｇ、６２％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.98 (d, J = 6.7 Hz, 6H), 2.01 (hept, J = 6.7 Hz, 1H), 2.93 - 3.07 (m, 4H), 3.17 - 3.28 (m, 4H), 4.01 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 2.1, 0.8 Hz, 1H); IR (ATR) vmax/cm-1 2959m, 2874w, 2834w, 2209m, 1709s, 1640m, 1605s, 1515s, 1203s, 1146s, 821s; MS (ES) m/z = 390.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２４Ｈ２８Ｎ３Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 390.2177, 実測値 390.2176.
（１．３．１４ メチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート、５１の合成）
メチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート（５１）の合成を図２（ｘｉｉｉ）に示す。化合物５０（０．７８ｇ、１．２９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：２、６０ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却し、その後ｐＴＳＡ．Ｈ２Ｏ（０．３２ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を０℃で２時間、室温でさらに３．５時間撹拌した後、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５～９：１ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５１を明るい黄色固体として得た（２８０ｍｇ、４２％）：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 - 1.28 (m, 4H), 1.44 - 1.49 (m, 4H), 1.92 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.32 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.29 (m, 2H), 3.58 (t, J = 5.4 Hz, 4H), 3.74 (s, 3H), 6.90 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.96 - 7.00 (m, 2H), 7.42 - 7.45 (m, 2H), 7.68 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 7.75 - 7.83 (m, 1H), 7.96 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.73 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 10.31 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO-d6) δ 24.6, 25.0, 28.4, 28.5, 32.2, 32.2, 40.5, 44.4, 46.9, 47.2, 51.7, 84.9, 95.4, 110.4, 114.7, 120.9, 121.5, 124.4, 132.7, 138.8, 142.9, 150.5, 150.8, 151.6, 166.3, 169.1, 170.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3241br, 2933w, 2910w, 2846w, 2212w, 1723m, 1650s, 1601s, 1514m, 1231m, 1207m, 1033m, 830m; MS(ES): m/z = 519.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２９Ｈ３５Ｎ４Ｏ５ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 519.2603, 実測値 519.2602.
（１．３．１５ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート、５５の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－２－イル｝プロパ－２－エノエート（５５）の合成を図２（ｘｉｖ）に示す。化合物５４（０．５５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：２、６０ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却し、その後ｐＴＳＡ．Ｈ２Ｏ（０．２１ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を０℃で２時間、室温でさらに３．５時間撹拌した後、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３及びＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色固体（０．７ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５５を明るい黄色固体として得た（３４０ｍｇ、７１％）：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6) δ 0.94 (d, J = 6.7 Hz, 6H), 1.23 - 1.30 (m, 4H), 1.46 - 1.51 (m, 4H), 1.90 - 2.01 (m, 3H), 2.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.29 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.59 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 3.97 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.96 - 7.01 (m, 2H), 7.40 - 7.48 (m, 2H), 7.68 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 (dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.74 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 10.32 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO-d6) δ 18.9, 24.6, 25.0, 27.3, 28.4, 28.5, 32.2, 32.2, 40.5, 44.4, 46.9, 47.2, 70.1, 84.9, 95.4, 110.4, 114.7, 120.8, 121.9, 124.3, 132.6, 132.8, 138.7, 138.9, 142.7, 142.8, 150.6, 150.8, 151.6, 151.6, 165.8, 169.1, 170.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3245br, 2933m, 2846m, 2212w, 1710m, 1649s, 1601s, 1544m, 1369m, 1231s, 1031m, 971m; MS(ES): m/z = 561.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３２Ｈ４１Ｎ４Ｏ５ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 561.3071, 実測値 561.3071.
（１．３．１６ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート、５７の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート（５７）の合成を図２（ｘｖ）に示す。化合物５６（０．１４ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：４、１２．５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、その後ｐＴＳＡ．Ｈ２Ｏ（１２．７ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を０℃で２時間、室温で２時間撹拌した。溶液を蒸発させて精製していない固体を得て、ＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５～９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物５７を黄色固体として得た（６７．５ｍｇ、５５％）：1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 - 1.30 (m, 4H), 1.46 - 1.50 (m, 12H), 1.93 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.4Hz, 2H), 3.19 - 3.24 (m, 2H), 3.24 - 3.29 (m, 2H), 3.58 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 6.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 8.66 (s, 1H), 10.33 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO-d6) δ 24.6, 25.0, 27.8, 28.4, 28.5, 32.2, 32.2, 40.6, 44.4, 47.0, 47.4, 80.0, 87.6, 92.4, 111.1, 114.8, 120.5, 124.6, 128.5, 131.4, 132.5, 133.7, 142.6, 150.6, 165.4, 169.1, 170.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3231br, 2929w, 2854w, 2206w, 1704m, 1653s, 1632m, 1598s, 1540m, 1324m, 1234s, 1154s, 1054m, 968m, 826s; MS(ES): m/z = 560.3 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３３Ｈ４２Ｎ３Ｏ５ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 560.3119, 実測値 560.3119.
（１．３．１７ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエート、５９の合成）
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｅ）－３－｛５－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］チオフェン－２－イル｝プロパ－２－エノエート（５９）の合成を図２（ｘｖｉ）に示す。化合物５８（０．３ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：４、１２．５ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却し、その後ｐＴＳＡ．Ｈ２Ｏ（２７ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を０℃で２時間、室温でさらに２時間撹拌した後、蒸発させて精製していない黄色油状物を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５～９：１）で精製し、化合物５９を明るい黄色固体として得た（４９ｍｇ、１９％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.21 - 1.30 (m, 4H), 1.43 - 1.56 (m, 13H), 1.93 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.18 - 3.26 (m, 2H), 3.26 - 3.31 (m, 2H), 3.54 - 3.64 (m, 4H), 6.18 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 15.7, 0.6 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 10.32 (s, 1H); 13C NMR (176 MHz, DMSO) δ 24.6, 25.0, 27.8, 28.4, 28.5, 32.2, 32.2, 40.5, 44.4, 46.8, 47.2, 80.2, 80.9, 96.6, 110.2, 114.7, 118.9, 125.3, 132.2, 132.5, 132.7, 135.6, 139.6, 150.8, 165.1, 169.1, 170.7; IR (ATR) vmax/cm-1 3235br, 2978w, 2928w, 2855w, 2832w, 2188w, 1704m, 1654s, 1603s, 1525m, 1249s, 1145s; MS (ES) m/z = 566.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ３１Ｈ３０Ｎ３Ｏ５Ｓ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 566.2689, 実測値 566.
（１．３．１８ ２－（２－メトキシエトキシ）エチル－（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（ピペラジン－１イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート、６２の合成）
２－（２－メトキシエトキシ）エチル－（２Ｅ）－３－（４－｛２－［４－（ピペラジン－１イル）フェニル］エチニル｝フェニル）プロパ－２－エノエート（６２）の合成を図２（ｘｖｉｉ）に示す。化合物４（７８８ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）、化合物６１（７８８．３ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（９１．２４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（２４．７５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、Ａｒ下のシュレンクフラスコに加えた。次に、脱気したＥｔ３Ｎ（１０ｍＬ）を加え、得られた懸濁液を６０℃で２４時間撹拌した。その後、溶媒を蒸発させて精製していない橙色固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物６２を橙色固体として得た（７９４ｍｇ、６７％）。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.16-3.24 (m, 2H), 3.4 (s, 3H), 3.46-3.51 (m, 4 H), 3.56-3.59 (m, 2H), 3.63-3.70 (m, 6H), 3.77-3.80 (m, 2H), 4.36-4.40 (m, 2H), 6.48 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.88 (dt, J 8.9, 2 Hz, 2H), 7.46-7.52 (m, 6H), 7.68 (d, J = 16 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.95, 144.31, 133.17, 132.01, 128.18, 116.68, 72.06, 70.69, 69.45, 63.87, 59.27, 46.51, 46.00, 43.47, 8.80; ; HRMS (ESI) Ｃ２６Ｈ３１Ｎ２Ｏ４ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値 435.2284, 実測値 435.2283.
（１．３．１９ ２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛４－［８－（ヒドロキシアミノ）オクタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート、６４の合成）
２－（２－メトキシエトキシ）エチル（２Ｅ）－３－｛４－［２－（４－｛４－［８－（ヒドロキシアミノ）オクタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］フェニル｝プロパ－２－エノエート（６４）の合成を図２（ｘｖｉｉｉ）に示す。化合物６３（３８４ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：２）に溶解し、得られた溶液を０℃まで冷却した後、パラトルエンスルホン酸一水和物（ｐＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ）（５６．３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。その後、反応混合液を室温で５時間撹拌した。追加のｐＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（５６．３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合液を室温でさらに１６時間撹拌し続けた。その後、精製していない反応液をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和）及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて精製していない橙色固体を得た。この精製していない生成物をＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９：１を溶離液として）で精製し、化合物６４を橙色固体として得た（６０．３ｍｇ、１８％）：1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 1.22-1.32 (m, 6H), 1.44-1.52 (m, 6H), 1.93 (t J 14.7 Hz, 7.3 Hz, 2H), 2.33 (t J 14.7 Hz, 7.3 Hz, 3H), 3.19-3.23 (m, 4H), 3.24 (s, 3H), 3.43-3.46 (m, 3H), 3.54-3.60 (m, 8H), 3.65-3.69 (m, 2H), 4.23-4.29 (m, 3H), 6.72 (d J 16 Hz, 1H), 6.97 (d J 8.9 Hz, 2H), 7.42 (d J 8.9 Hz, 2H), 7.52 (d J 8.4 Hz, 2H), 7.67 (d J 16 Hz, 1H), 7.7 (d J 8.4 Hz, 1H), 8.64-8.67 (m, 1H), 10.33 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 132.39, 128.49, 114.60, 71.04, 69.39, 57.88, 39.94, 39.73, 39.52, 39.31, 39.10, 38.89, 38.69, 32.03, 28.23, 24.83; HRMS (ESI) Ｃ３４Ｈ４４Ｎ３Ｏ７ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 606.3179 , 実測値 606.3193.
（１．３．２０ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート、６９の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－（６－｛２－［４－（ピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－３－イル）プロパ－２－エノエート（６９）の合成を図２（ｘｉｘ）に示す。化合物４（１．２１ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、化合物６８（１．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１４７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（３９ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）をＡｒ下のシュレンク丸底フラスコに加え、続いて、あらかじめＮ２で１時間スパージしたＥｔ３Ｎを加えた（５０ｍＬ）。得られた反応混合液を６０℃で２４時間撹拌した。ＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９：１）の後、化合物６９を明るい黄色固体として得た（１．１ｇ、６７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 0.99 (d J 6.7 Hz, 6H), 1.98 - 2.05 (m, 1H), 3.20 - 3.26 (m, 4H), 3.40 - 3.44 (m, 4H), 4.01 (d J 6.7 Hz, 2H), 6.52 (d J 16.0 Hz, 1H), 6.88 (d J 9.0Hz, 2H), 7.48 - 7.55 (m, 3H), 7.65 (d J 16.0 Hz, 1H), 7.81 (dd J 8.45, 2.2 Hz, 1H), 8.72 (d J 2.2 Hz, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 166.51, 151.05, 150.13, 144.99, 140.39, 138.20, 134.32, 133.67, 126.91, 120.65, 119.00, 115.71, 92.36, 88.06, 71.10, 44.61, 27.97, 19.29; HRMS (ESI) Ｃ２４Ｈ２８Ｎ３Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 390.2182, 実測値 390.2181.
（１．３．２１ ２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－｛６－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－３－イル｝プロパ－２－エノエート、７１の合成）
２－メチルプロピル（２Ｅ）－３－｛６－［２－（４－｛４－［７－（ヒドロキシカルバモイル）ヘプタノイル］ピペラジン－１－イル｝フェニル）エチニル］ピリジン－３－イル｝プロパ－２－エノエート（７１）の合成を図２（ｘｘ）に示す。化合物７０（５００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：２）に溶解し、得られた溶液を０℃まで冷却した。次いで、ｐＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（１９７．６ｍｇ、０．９８８ｍｍｏｌ）を加え、その後反応混合液を室温まで温め、６時間撹拌し続けた。精製していない反応混合液をＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３（飽和）及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、精製していない明るい黄色固体（０．３ｇ）を得た。これをＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９：１）で精製し、化合物７１を明るい黄色固体として得た（９０．４ｍｇ、２１％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.95 (d J 6.7 Hz, 6H), 1.22-1.31 (m, 6H), 1.44-1.53 (m, 6H), 1.91-1.95 (m, 2H), 1.96-2.00 (m, 1H), 3.55-3.62 (m, 4H), 3.97 (d J 6.6 Hz, 2H), 6.85 (d J 16.0 Hz, 1H), 7.01 (d J 9.0Hz, 2H), 7.44-7.52 (m, 3H), 7.72 (d J 16.0 Hz, 1H), 8.23 (dd J 8.4 Hz, 2.3 Hz, 1H), 8.88-8.91 (m, 1H), 10.34 (s, 1H); HRMS (ESI) Ｃ３２Ｈ４１Ｎ４Ｏ５ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 561.3077, 実測値 561.3087.
（１．３．２２ メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート、７３の合成）
メチル（２Ｅ）－３－（５－｛２－［４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）プロパ－２－エノエート（７３）の合成を図２（ｘｘｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（６０ｍＬ）をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物７２（１．１１ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）、化合物４２（０．７５ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （１２８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（３４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＡｒ下で加え、得られた懸濁液を６０℃で７２時間撹拌した。その後、溶媒を蒸発させて精製していない固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５～９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１％Ｅｔ３Ｎ）で精製し、続いてＭｅＣＮからの再結晶により、化合物７３を明るい黄色固体として得た（１．０２ｇ、７７％）： 1H NMR (700 MHz, CDCl3) δ 2.35 (s, 3H), 2.56 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 3.26 - 3.30 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 6.87 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.46 (m, 2H), 7.66 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 13C NMR (176 MHz, CDCl3) δ 46.1, 47.9, 51.8, 54.8, 84.8, 95.4, 111.9, 114.9, 121.6, 122.0, 123.5, 132.9, 138.5, 142.9, 150.8, 151.3, 152.2, 167.2; IR (ATR) vmax/cm-1 3066w, 3036w, 2878w, 2797w, 2212m, 1714s, 1640m, 1603m, 1543m, 1515s, 1305s, 1241s, 1190s, 1161s, 1006m; MS (ES) m/z = 362.2 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２２Ｈ２４Ｎ３Ｏ２ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 362.1863, 実測値 362.1863.
（１．３．２３ ４－［（Ｅ）－２－（５－｛２－［４－（モルホリン－４－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）エテニル］－１，３－チアゾール－２－アミン、８４の合成）
４－［（Ｅ）－２－（５－｛２－［４－（モルホリン－４－イル）フェニル］エチニル｝ピリジン－２－イル）エテニル］－１，３－チアゾール－２－アミン（８４）の合成を図２（ｘｘｉｉ）に示す。Ｅｔ３Ｎ（３０ｍＬ）及びＤＭＦ（６０ｍＬ）の混合液をＡｒで１時間スパージして脱気した。次いで、化合物８３（２．３ｇ、８．０ｍｍｏｌ）、化合物８２（２．０ｇ、８．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２ （２８１ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（７６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加し、得られた溶液を６０℃で７２時間撹拌した。懸濁液を冷却し、Ｈ２Ｏを加え、混合液を濾過して精製していない茶色固体を得た。これをＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／アセトン（１：１：１）の混合液に懸濁し、０．５時間撹拌し、濾過して化合物８４を淡黄色固体として得た（３．０３ｇ、＞１００％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3.18 - 3.23 (m, 4H), 3.73 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 6.82 (s, 1H), 6.97 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 7.06 - 7.17 (m, 3H), 7.36 - 7.45 (m, 3H), 7.49 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.64 (dd, J = 0.8 Hz, 1H).
（実施例２：例示化合物の吸収及び蛍光発光の測定）
化合物６、７、１２、１３、１４、１５、１９、２３、２７、３０及び３４の吸収ピーク波長並びに蛍光発光波長を様々な溶媒中で測定し、その結果を表１に示した。吸収測定は１０μＭの濃度で記録し、発光測定は１００ｎＭの濃度で記録した。発光スペクトルは、吸収のピークにおける励起で記録した（Ｓ０→Ｓ１）。
Figure 2022541453000016
（実施例３：パラ置換化合物及びオルト置換化合物の光物理的比較）
本発明のパラ置換化合物の光物理的挙動をオルト置換化合物と比較するために、化合物７３及び参照化合物７７を実施例１に準じて合成した。
Figure 2022541453000017
化合物７３及び７７の溶液を、クロロホルム中に１０μＭ及び１００ｎＭの濃度で調製した。ＣＡＲＹ１００ＵＶ－可視分光計を用いて、各化合物（１０μＭ）の吸収スペクトルを２００～８００ｎｍで記録し、溶媒バックグラウンド減算後のものを図３ａに示した。図３ａは、ドナー部位を７３のパラ位から７７のオルト位に移動させた結果として、実質的な浅色シフト及び吸光係数の減少を示している。また、図３ａには、細胞イメージング研究に使用される蛍光顕微鏡で一般的な４０５ｎｍの紫色励起レーザー光源の近似帯域幅も示されている。化合物７３はこの光源で効率よく励起されるが、７７はこの波長では非常に弱い吸収しか得られなかった。
この効果を評価し、７３及び７７の蛍光発光特性を比較するために、クロロホルム中の両化合物の溶液（１００ｎＭ）を３６０ｎｍ及び４０５ｎｍの両方で励起した。３６０ｎｍで励起した場合、この波長が両化合物の吸収極大に近いため、７３及び７７は高効率で励起された。図３ｂは、この波長ではどちらの化合物も励起できるが、量子収率が向上した結果、化合物７３が大幅に強い蛍光を発することを示している。また、化合物７３は、化合物７７に比べて顕著な深色シフトを示しており、これは、パラ置換化合物では電荷移動がより効率的に行われるため、分子内の双極子モーメントがより大きくなり、その結果、ストークスシフトが大きくなることを示している。
また、両化合物を４０５ｎｍで励起し、一般的な蛍光顕微鏡を用いたイメージングに対するそれぞれの適合性を比較した。図３ｃは、化合物７３が４０５ｎｍで励起されたときの発光は、３６０ｎｍで励起されたときと同程度の強度であったのに対し、化合物７７は４０５ｎｍで効率よく吸収しないため、４０５ｎｍでは非常に弱い蛍光発光しか示さなかったことを示している。そのため、化合物７７は、４０５ｎｍの励起光源を用いた細胞イメージング実験に好適なフルオロフォアではないと考えられる。
結論として、パラ置換ジフェニルアセチレンフルオロフォアは、対応するオルト置換化合物よりも、光の吸収が強く、長波長であり、電荷移動挙動が増強されてより効率的な蛍光発光を示すため、光物理的特性が改善されていることがわかった。
（実施例４：コンジュゲートの合成）
（４．１ 抗がん剤分子へのコンジュゲーション）
化合物６を、承認された抗がん剤であるボリノスタットとコンジュゲートした。ボリノスタットの活性に対するコンジュゲーションの影響を評価するために、３つの化合物を調製した：ＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体（化合物３７）、化合物６とコンジュゲートしたＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体（化合物３８）及び化合物６とコンジュゲートした保護されていないボリノスタット類似体（化合物３９）である。
（４．１．１ ＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体（化合物３７）の合成）
保護されたボリノスタット類似体の合成を図４（ａ）に示す。４－アミノ安息香酸エチル（１６．８７ｇ、１０２ｍｍｏｌ）をＮ２下で無水ＴＨＦに溶解した。オキサノン－２，９－ジオン（無水スベリン酸）（１５．９５ｇ、１０２ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。この懸濁液をＨ２Ｏで希釈し、沈殿物を濾過してＨ２Ｏで洗浄した。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３～１：１、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、化合物３５を白色固体（６．６２ｇ、２０％）として得て、これを次の工程に直接進めた：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.22 - 1.34 (m, 7H), 1.42 - 1.53 (m, 2H), 1.53 - 1.64 (m, 2H), 2.15 - 2.22 (m, 2H), 2.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 7.70 - 7.74 (m, 2H), 7.86 - 7.91 (m, 2H), 10.20 (s, 1H), 11.94 (br, 1H).化合物３５（１．８ｇ、５．６０ｍｍｏｌ）をＮ２下で無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）．ＨＣｌ（１．２８ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）及びヒドロキシベンゾチアゾール（ＨＯＢｔ）（水和物、０．９１ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を加え、得られた懸濁液を室温で０．５時間撹拌した。次いで、Ｏ－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）ヒドロキシルアミン（０．７８ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１．４６ｍＬ、８．４０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。溶液をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない薄黄色油状物を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３、ヘプタン／アセトン）で精製し、化合物３６をオフホワイト固体として得て（０．８１ｇ、３４％）、これをさらに精製することなく次の工程に直接進めた。化合物３６（０．６２ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及びＮａＯＨ（０．１３ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１８ｍＬ、２：１）に溶解し、得られた溶液を５０℃で１６時間撹拌した。溶液を冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ｐＨ４に酸性化した後、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、化合物３７を白色固体として得た（０．４４ｇ、７６％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.20 - 1.34 (m, 4H), 1.44 - 1.69 (m, 10H), 1.97 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.45 - 3.52 (m, 1H), 3.87 - 3.94 (m, 1H), 4.79 (br, 1H), 7.67 - 7.72 (m, 2H), 7.84 - 7.89 (m, 2H), 10.17 (s, 1H), 10.90 (s, 1H), 12.68 (br, 1H); 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 18.3, 24.7, 27.8, 28.3, 28.4, 32.1, 36.4, 61.3, 100.8, 118.2, 124.8, 130.4, 143.4, 166.9, 169.0, 171.8; IR (ATR) vmax/cm-1 3301w, 2972w, 2944w, 2855w, 1662s, 1593m, 1523m, 1405m, 1295m, 913m, 734s; MS(ES): m/z = 393.4 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ２０Ｈ２９Ｎ２Ｏ４ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 393.2026, 実測値 393.2027.
（４．１．２ 化合物６とコンジュゲートしたＴＨＰで保護されたボリノスタット類似体（化合物３８）の合成）
化合物３７（０．３６ｇ、０．９ｍｍｏｌ）をＮ２下で無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、その後ＥＤＣ．ＨＣｌ（０．１８ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（水和物、０．１２ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、得られた懸濁液を室温で０．５時間撹拌した。次いで、化合物６（０．３５ｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で４０時間撹拌した。溶液をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機物をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、精製していない黄色油状物（０．６９ｇ）を得た。これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９７：３、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、化合物３８を黄色固体として得た（０．５４ｇ、７９％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.20 - 1.35 (m, 4H), 1.52 (s, 9H), 1.53 - 1.70 (m, 7H), 1.72 - 1.82 (m, 3H), 2.02 - 2.12 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.25 (br, 4H), 3.57 - 4.00 (m, 6H), 4.95 (s, 1H), 6.36 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.41 - 7.50 (m, 6H), 7.54 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.67 (s, 1H), 9.36 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 18.5, 24.9, 25.0, 25.2, 28.0, 28.1, 28.3, 28.5, 32.9, 37.1, 48.6, 62.4, 80.6, 88.0, 91.8, 102.3, 114.0, 115.7, 119.5, 120.5, 125.2, 127.8, 128.1, 130.0, 131.7, 132.8, 133.9, 140.3, 142.7, 150.3, 166.2, 170.3, 170.7, 172.4; IR (ATR) vmax/cm-1 3252br, 2933w, 2858w, 2251w, 2210w, 1698m, 1666m, 1630m, 1596s, 1519s, 1436m,1235m, 1152s, 1136s, 731s; MS(ES): m/z = 763.5 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ４５Ｈ５５Ｎ４Ｏ７ ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 763.4071, 実測値 763.4086.
（４．１．３ 化合物６とコンジュゲートした保護されていないボリノスタット類似体（化合物３９）の合成）
化合物３８（０．３６ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２０ｍＬ、３：１）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、ｐ－トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ）．Ｈ２Ｏ（２９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で３時間急速に撹拌した。その後、さらにｐＴＳＡ．Ｈ２Ｏ（１４ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１時間撹拌した。溶液を蒸発させて精製していない黄色固体を得て、これをＳｉＯ２クロマトグラフィー（９５：５、ＤＣＭ／ＥｔＯＨから９：１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製して淡黄色固体を得て、これをさらにＥｔＯＨからの再結晶により化合物３９を淡黄色固体として得た（１３１ｍｇ、４１％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.21-1.35 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.51-1.64 (m, 4H), 1.94 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.25-3.42 (m, 4H), 3.62 (br, 4H), 6.54 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.40-7.43 (m, 4H), 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.66 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 10.33 (s, 1H); 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 25.0, 25.0, 27.9, 28.4, 32.3, 36.4, 47.3, 80.1, 87.7, 92.5, 111.3, 114.9, 118.4, 120.5, 124.7, 128.2, 128.5, 129.8, 131.4, 132.6, 133.7, 140.7, 142.7, 150.6, 165.5, 169.0, 169.1, 171.6; IR (ATR) vmax/cm-1 3285br, 2975w, 2931w, 2851w, 2822w, 2208w, 2167w, 1706m, 1655m, 1626m, 1596s, 1520s, 1391m, 1234m, 1154s, 1136s, 976m, 825s, 736s; MS(ES): m/z = 679.6 [M+H]+; HRMS (ES) Ｃ４０Ｈ４７Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値: 679.3496, 実測値 679.3510.
（実施例５：コンジュゲートアッセイ）
（５．１ 細胞生存率アッセイ）
細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｒｅＧｌｏ（登録商標）アッセイを製造元の指示に従って用いて測定した。２つの原発性ＨＰＶ陰性口腔扁平上皮癌細胞（ＳＪＧ－２６及びＳＪＧ－４１）を、化合物３７、化合物３８及び化合物３９で７２時間処理してからアッセイを行った。細胞には放射線を照射しなかった。ボリノスタット単独のＩＣ５０（図示せず）は１．６μＭであることがわかった。化合物３９のＩＣ５０はほぼ同じであった（ＳＪＧ－２６では１．３μＭ、ＳＪＧ－４１では１．４μＭ）。アッセイの結果を図５ａ（細胞株ＳＪＧ－２６）及び図５ｂ（細胞株ＳＪＧ－４１）に示す。
（５．２ ＭＴＴ細胞生存率アッセイ）
ＭＴＴアッセイを、次の手順に従って実施した。細胞を様々な濃度の化合物３７／３８／３９で３７℃／５％ＣＯ２で１時間処理した後、５６Ｊｍｍ－２の放射線を５分間照射した。その後、細胞を３７℃／５％で２４時間培養した。培養液を除去し、細胞をＰＢＳですすいだ。フェノールを含まない培地を加え、１２ｍＭのＭＴＴストック溶液を加え、３７℃で２時間培養した。さらにＤＭＳＯを加え、細胞を加湿チャンバーで３７℃で培養した。次いで、５４０ｎｍでの吸収測定を記録し、細胞生存率の程度を調べた。その結果を図６に示す。
アッセイ前に化合物３７、化合物３８、化合物３９及びボリノスタットで２４時間処理したＳＪＧ－４１細胞のＭＴＴ細胞生存率アッセイ。アッセイの測定値は、ＤＭＳＯ処理した細胞（破線）に対して正規化したことに留意すること。未照射の化合物３８は、細胞生存率に影響を与えず、一方、化合物３９は、ボリノスタット単独と同様の効力で細胞死を引き起こすことから、ボリノスタットと本発明の蛍光化合物とのコンジュゲーションは、ボリノスタットの細胞毒性に悪影響を与えないことが示唆された。しかし、放射線照射後、化合物３９及び化合物３８は著しい細胞死を引き起こす。未修飾のボリノスタットと比較した化合物３９の効力は、約１０倍強い。したがって、化合物３９は、ヒドロキサム酸に由来する固有の細胞毒性を示し、この細胞毒性は、ＵＶ、４０５ｎｍ又は２光子８００ｎｍの光の照射によりさらに光活性化された殺細胞効果を誘発することで、補足及び増強することができる。
（実施例６：哺乳動物細胞における化合物の局在化）
生体細胞内での化合物の局在を調べるために、生体細胞内で式Ｉの化合物と特定の細胞小器官マーカー（蛍光色素及び抗体）との共染色を行った。調査したのは、化合物６、７、１２、１３、１４及び１５の化合物である。
（実験：６．１ 細胞株及び培地）
以下の実験手順には、ＨａＣａＴケラチノサイト細胞株を用いた。細胞は、細胞培養液（９４％ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％ペニシリンストレプトマイシン溶液（Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ））で培養した。
（６．２ 細胞小器官色素での染色）
細胞を８ウェルプレートに２５，０００個／ｍｌの濃度でプレーティングした。各ウェルに２００μｌの細胞懸濁液を加え、細胞を２日間インキュベートした後、染色及びイメージングを行った。
ミトコンドリアを可視化するために、細胞をミトコンドリア色素のＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｄｅｅｐ Ｒｅｄでプローブした。染色する細胞を、１ウェル（Ｎ＝３）あたり２００μｌのＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｄｅｅｐ Ｒｅｄ溶液（細胞培養液中２００ｎＭのＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）及び１μＭの式Ｉ化合物）とともに３０分間インキュベートした。
Ｎｉｌｅ Ｒｅｄを使用して、細胞内の脂質を識別した。２００μｌのＮｉｌｅ Ｒｅｄ親油性色素（細胞培養液中の１０μｇ／ｍｌのＮｉｌｅ Ｒｅｄ及び１μＭの式Ｉ化合物）を各ウェルに加え（Ｎ＝３）、３０分間インキュベートした。
細胞内のリソソームの検出には、ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９色素を用いた。２００μｌのＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９（細胞培養液中５０ｎＭ ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）及び１μＭの式Ｉ化合物溶液）を各ウェル（Ｎ＝３）に加え、３０分間インキュベートした。
小胞体（ＥＲ）を可視化するために、細胞をＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄで染色した。２００μｌのＢＯＤＩＰＹ ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ（細胞培養液中１μＭのＢＯＤＩＰＹ（登録商標）及び１μＭの式Ｉ化合物溶液）を各ウェル（Ｎ＝３）に加え、３０分間インキュベートした。
インキュベーション後、色素を含む細胞培養液を除去し、細胞を２００μｌのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄した。洗浄後、２００μｌのＰＢＳを各ウェルに加えてイメージングを行った。
（６．３ 抗ラミンＡ／Ｃ抗体での染色）
核内ラミナを可視化するために、細胞を抗ラミンＡ／Ｃ抗体でプローブした。細胞を２２×２２ｍｍのカバースリップ上にプレーティングし（１０，０００細胞／ｍｌ）、染色前に２日間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄して余分な培地を除去した後、染色した。細胞を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で１０分間、室温で固定した後、ＰＢＳで５分間、２回洗浄した。洗浄後、ＰＢＳ中０．４％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で細胞を１０分間透過処理した。続いて、細胞をＰＢＳで５分間、３回洗浄した後、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中１％ＢＳＡ、０．１％魚ゼラチン及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）で１５分間、室温でインキュベートした。細胞を一次抗体（ブロッキングバッファー中のマウス抗ラミンＡ／Ｃ ＩｇＧ）中、室温で１時間インキュベートした。その後、細胞をブロッキングバッファーで２回洗浄し、二次抗体（ブロッキングバッファー中の抗マウスＡｌｅｘａ－５９４ ＩｇＧ）で３０分間、室温でインキュベートした。細胞をＰＢＳで１０分間、室温で２回洗浄した。
（６．４ 式Ｉの化合物での染色）
式Ｉの化合物による細胞染色のために、ＰＢＳ中５μＭの式Ｉの化合物を、室温で３０分かけて細胞に加えた。その後、細胞をＰＢＳで５分間、５回洗浄した。洗浄後、マウンティング培地としてカバースリップあたり６μｌのＭｏｗｉｏｌ（登録商標）を用いて、細胞を非帯電顕微鏡スライドにマウントした。
（６．５ イメージング）
Ｚｅｉｓｓ ８８０共焦点顕微鏡をすべてのイメージング作業に使用した。
Figure 2022541453000018
（６．６ 分析）
ＩｍａｇｅＪ Ｃｏｌｏｃ２ソフトウェアを用いて、式Ｉの化合物と細胞小器官マーカー画像との共局在性統計を算出した。各画像からバックグラウンドを減算し、関心領域（ＲＯＩ）を用いて分析の標的を設定した。各画像の点広がり関数（ＰＳＦ）を２．０として計算し、Ｃｏａｓｔｅｓの反復を１００に設定した。定量化した統計値は、Ｐｅａｒｓｏｎの相関係数（ＰＣＣ）である。ＰＣＣは＋１から－１までの数値を示し、１＝完全な共局在、０＝無関係、－１＝完全な反共局在とする。
（６．７ 結果）
各化合物について、各細胞小器官マーカーの別個の画像を撮影し、図７～１２に示した。左側の緑色の画像（列１）が式Ｉの化合物、中央の赤色の画像（列２）が細胞小器官マーカー、右側の画像（列３）が両画像のオーバーレイである。
図７は、化合物７と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物７を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物７（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物７のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物７の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物７のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物７の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物７の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
図８は、化合物１３と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物１３を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物１３（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物１３のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物１３の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物１３のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物１３の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物１３の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
図９は、化合物１４と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物１４を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物１４（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物１４のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物１４の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物１４のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物１４の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物１４の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
図１０は、化合物１２と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物１２を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物１２（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物１２のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物１２の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物１２のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物１２の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物１２の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
図１１は、化合物１５と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物１５を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物１５（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物１５のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物１５の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物１５のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物１５の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物１５の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
図１２は、化合物６と様々な細胞小器官マーカーでプローブしたＨａＣａＴケラチノサイトの共染色のタイル画像を示している。列１は緑で視覚化された化合物６を示し、列２は赤で視覚化された様々な細胞小器官マーカーを示し、列３は化合物６（緑）と細胞小器官マーカー（赤）の両方の染色のオーバーレイを示している。行Ａは、化合物６のミトコンドリアへの局在を調べるために使用したＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ染色（赤）を示している。行Ｂは、化合物６の親油性局在を調べるために使用したＮｉｌｅ Ｒｅｄ染色（赤）を示している。行Ｃは、化合物６のリソソームへの局在を調べるために使用したＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ（登録商標）Ｒｅｄ ＤＮＤ－９９染色（赤）を示している。列Ｄは、化合物６の小胞体（ＥＲ）への局在を調べるために使用したＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＥＲ－Ｔｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ（赤）を示している。行Ｅは、化合物６の核内ラミナへの局在を調べるために使用した抗ラミンＡ／Ｃ抗体染色（赤）を示している。
以下の表３～８は、各細胞小器官マーカーの平均ＰＣＣ値を示しており、それぞれ化合物７、１３、１４、１２、１５及び６との共局在の程度を示している。抗ラミンＡ／Ｃ抗体については、画像あたりの画素数が少なく、信頼性の高いデータを得ることができなかったため、ＰＰＣ値はない。
Figure 2022541453000019
Figure 2022541453000020
Figure 2022541453000021
Figure 2022541453000022
Figure 2022541453000023
Figure 2022541453000024
要約すると、化合物７は主にリソソームに局在するが、小胞体及びゴルジ装置にも若干の局在が見られ、若干の親油性染色も見られた。化合物１３は、細胞の周辺領域を染色するように見えるが、使用した細胞小器官マーカーとは検出可能な共局在を示していない。化合物１４は、ミトコンドリアと小胞体に局在し、若干の親油性染色も見られる。化合物１２は、主にリソソームに局在するようだが、小胞体にも若干局在し、親油性染色も見られる。化合物１５は、主に親油性の局在を示すように見える。化合物６は、主にリソソームに局在し、ＥＲの局在と親油性染色が若干あるように見える。
（実施例７：植物細胞内での化合物の局在）
（７．１ 黒草細胞浮遊培養の調製）
黒草細胞浮遊培養は、胚発生カルスから開始した。浮遊培養は１０日ごとに継代培養した。対数期の細胞（継代培養後５日目）をすべての実験で使用した。
（７．２ 標識）
化合物７、１４、１２及び１５をＤＭＳＯ（５ｍＭ）に再懸濁した。１０ｍＬの黒草細胞浮遊培養液に化合物（最終濃度１μＭ）を加え、室温で１時間標識した。細胞培養液を増殖培地で２回洗浄し、過剰な化合物を除去した。ＨＰ ＰＬ ＡＰＯ ６３ｘ対物レンズを用いて共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８）で細胞を観察した。画像は４０５／４６０－５４０ｎｍの励起／発光で取得した。取得した画像はＬａｓＸソフトウェア（Ｌｅｉｃａ）で処理した。
（７．３ 細胞毒性アッセイ）
黒草細胞浮遊培養液５ｍＬを、０．１、１、５及び１０μＭの化合物番号７、１４、１２及び１５で１時間、室温で処理した。０．１％ＤＭＳＯで処理した細胞を対照として使用した。細胞に５分間放射線（～３６５ｎｍ）を照射した後、２５℃、１５０ｒｐｍで２４時間インキュベートした。さらに、照射しない場合の化合物の細胞毒性も評価した。各濃度の５つの生物学的複製物の細胞生存率を、蛍光アッセイ（ＦＤＡ／ＰＩ）アッセイによって測定した。細胞生存率のパーセンテージは、以下の式を使用して算出した。
％生存率＝｛生細胞（ＦＤＡ）／（生細胞＋死細胞）｝×１００
細胞生存率のパーセンテージの統計分析は、ＳＰＳＳ ２３（ＩＢＭ、シカゴ、イリノイ州、米国）を用いた一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）とＴｕｋｅｙ ＨＳＤ事後検定により行った。
（７．４ 結果）
結果を図１３及び１４に示す。
（７．４．１ 化合物７）
化合物７は、黒草細胞浮遊培養で許容できるシグナルを発生させた。図１３に見られるように、化合物は細胞内膜を標識しているように見えたが、化合物７は細胞小胞（おそらく脂質小胞）でより強いシグナルを示していた。
（７．４．２ 化合物１４）
トリフェニルホスホニウム部位を示す化合物１４は、哺乳動物細胞のミトコンドリアを標的とすることが示されている。しかし、この化合物は、細胞内膜や小胞も標識しているようであった。ミトコンドリアは生体内で最も多く存在する細胞小器官であることを考慮すると、化合物１４は黒草細胞ではミトコンドリアを標識しなかったようである。
（７．４．３ 化合物１２）
化合物１２は、黒草細胞で強いシグナルを発生させた。原形質膜や細胞板を特異的に標識しているようであった。
（７．４．４ 化合物１５）
トシルスルホンアミド部位を組み込んだ化合物１５は、哺乳動物細胞で小胞体を標識することが示されている。しかし、この化合物は、黒草細胞では小胞を標識しているようであった。本発明らは、この化合物で標識された小胞はペルオキシソームではないかと推測した。
（７．４．５ 黒草細胞培養に対する化合物の細胞毒性）
上記の結果は、式Ｉの化合物が黒草細胞培養において様々な細胞小器官を標的としているようであることを示している。次に、これらの化合物の細胞生存率に対する負の効果が、放射線照射後に観察されるかどうかを確認するための試験を行った。細胞毒性を引き起こすためには照射が必要であることを確認するために、照射せずに化合物で処理した黒草細胞の細胞生存率のパーセンテージも評価した。
化合物７及び１５は、濃度や照射処理にかかわらず、黒草細胞の生存率を低下させなかった。逆に、１μＭの化合物１４で処理した場合には、黒草細胞の生存率が有意に低下した。この濃度での化合物１４の細胞毒性効果は、非照射処理でも細胞生存率の有意な低下が見られたことから、照射とは無関係であると考えられた。５μＭ及び１０μＭの化合物１２で処理した場合、黒草細胞の生存率は有意に低下した。さらに、化合物１２の細胞毒性効果は、放射線照射後にのみ観察された。
イメージング及び細胞毒性アッセイの結果から、化合物１２は、黒草細胞培養において原形質膜を特異的に標的とすることが示唆された。さらに、化合物１２は、高濃度（５μＭ及び１０μＭ）で適用すると、黒草細胞を死滅させることができた。以上のことから、化合物１２は、植物細胞における原形質膜の局在を示す信頼性の高いマーカーとなる可能性が高く、したがって、植物系においてＲＯＳを生成するための光増感剤として使用できる可能性があると考えられる。
（実施例８：細菌細胞内での化合物の局在）
（８．１ 細菌細胞培養の調製）
スメグマ菌、表皮ブドウ球菌及び枯草菌を以下の実験手順で使用した。
表皮ブドウ球菌のサンプルをプレート培養物から取り出し、ルリア培地に接種して３０℃で一晩、約１６時間培養した。
枯草菌のサンプルをプレート培養物から取り出し、ルリア培地に接種して３７℃で一晩、約１６時間培養した。
スメグマ菌のサンプルをプレート培養物から取り出し、Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ＡＤＣ増殖サプリメントを加えたＭｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ ７Ｈ９培地に接種して３７℃で一晩、約１６時間培養した。
（８．２ 細胞毒性アッセイ）
スメグマ菌、表皮ブドウ球菌及び枯草菌の培養液を以下のように調製した。
Figure 2022541453000025
サンプルを暗所で約２時間、室温でインキュベートした。次いで、黒い透明底Ｃｏｓｔａｒ（商標）９６ウェルプレートにサンプルを２００μｌずつ入れた。
細胞に放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した。照射しない場合の細胞毒性も評価した。
この９６ウェルプレートをプレートリーダーにセットし、以下のパラメータを使用して増殖曲線プロトコルを実行するように設定した。
・インキュベーション温度：３７℃
・ＯＤ読み取り波長：６００ｎｍ
・２５０サイクル、５分ごとの読取り
・５秒先行読取りのための振とう
これを一晩放置して、光学密度の読取りに基づく速度論的増殖曲線を得た。
（８．３ 化合物６及び化合物１２での染色）
スメグマ菌、表皮ブドウ球菌及び枯草菌を化合物６で染色した。枯草菌を化合物１２で染色した。
表９にしたがって調製したサンプルを、１０ｍＭのストック溶液を培地で希釈して１００μＭの濃度にすることで、化合物で処理した。この溶液をさらに１：１０及び１：１００に希釈し、化合物を含む１０μＭ及び１μＭの培地溶液を作成した。その後、５０μｌの細胞培養液を、１００μＭ、１０μＭ及び１μＭの化合物含有培地に添加した。
（８．４ ヨウ化プロピジウム及びＳｙｔｏ（商標）９での染色）
表９に概説した処理を行った後、Ｓｙｔｏ（商標）９及びヨウ化プロピジウムの別個の溶液を含むＢａｃｌｉｇｈｔ（商標）染色キットを用いて、３つの細菌株をそれぞれ染色した。各化合物０．１μＭで処理した１つの追加サンプルもこのアッセイに含まれていた。
スメグマ菌、表皮ブドウ球菌及び枯草菌をヨウ化プロピジウムで染色して非生細胞を表示し、Ｓｙｔｏ ９で染色してすべての細胞を表示した。
以下の染色手順を使用した。
１．各サンプル１ｍｌを１２ウェルプレートのウェルに溶出させた。
２．１２ウェルプレートの半分に放射線を約１５ｍＷ／ｃｍ２で５分間照射した。
３．各ウェルの内容物を別個のエッペンドルフに溶出し、１０，０００ｒ．ｐ．ｍ．で３分間遠心分離して培養ペレットを形成した。
４．その後培地を除去し、各ペレットを２００μｌの１Ｘ ＰＢＳに再懸濁させた後、１０，０００ｒ．ｐ．ｍ．で３分間遠心分離した。
５．１ｍｌの１ＸＰＢＳ、３μｌのヨウ化プロピジウム及び３μｌのＳｙｔｏ（商標）９を用いてＢａｃｌｉｇｈｔ（商標）染色液を作製した。
６．その後、ペレットを別個に２００μｌの染色液に再懸濁し、室温で１５分間インキュベートした。
７．その後、サンプルを１０，０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、１×ＰＢＳに再懸濁した。この工程を３回繰り返し、余分な染色液を除去した。
８．各サンプル２０μｌをポリ－Ｌ－リジンでコーティングしたカバースリップに滴下し、１５分間放置した後、余分なサンプルを除去し、１ＸＰＢＳで最終洗浄を行った。
９．キットに同梱されているＢａｃｌｉｇｈｔ（商標）マウンティングオイルを使って、カバースリップをスライドにマウントした。
（８．５ イメージング）
（８．５．１ 広視野蛍光イメージング）
画像の撮影には、Ｚｅｉｓｓ Ｃｅｌｌ ｏｂｓｅｒｖｅｒ広視野顕微鏡と６３倍及び１００倍の油浸レンズを使用した。青、緑及び赤のフィルターセットを用いて、それぞれ調査対象の化合物、Ｓｙｔｏ ９及びヨウ化プロピジウムの蛍光イメージングを行った（表１０参照）。
Figure 2022541453000026
（８．５．２ 共焦点イメージング）
Ｌｅｉｃａ ＳＰ５レーザー走査型共焦点顕微鏡を使用して、枯草菌の高解像度画像を取得した。１００倍の対物油浸レンズを使用し、さらにデジタル拡大した。励起波長４０５ｎｍ、発光波長４５０ｎｍ～６００ｎｍの範囲で蛍光画像を撮影した。
（８．６ 結果）
結果を図１５～２１に示す。
（８．６．１ スメグマ菌における化合物１２の細胞毒性）
図１５（ｉ）は、化合物１２で処理した後のスメグマ菌の一晩増殖曲線を示し、図１５（ｉｉ）は、化合物１２で処理したスメグマ菌の照射後の一晩増殖曲線を示す。
光活性化されていないサンプルは、処理された対照と未処理の対照の間で有意差を示さない。しかし、放射線を照射したサンプルは、１００μＭの濃度で若干の細胞毒性を示し始めた。
（８．６．２ 表皮ブドウ球菌における化合物６の細胞毒性）
図１６は、放射線照射の前後に化合物６で処理した表皮ブドウ球菌細胞を示している。化合物６で処理していない対照細胞も示している。化合物６は青で示され（列１）、Ｓｙｔｏ９は緑で示されて（列２）すべての生細胞と非生細胞を強調表示し、ヨウ化プロピジウムは赤で示されて非生細胞を強調表示する（列３）。
画像では、化合物６で処理すると、未処理の対照と比較して赤色蛍光細胞が増加していることがわかる。曲線は、各サンプルタイプのマイクロウェルＯＤ測定８回の平均値をとって生成した。エラーバーは、８ウェルの測定値の標準誤差を示す。１００及び１０μの濃度では、光活性化の有無にかかわらず、増殖は見られなかった。光活性化していない１μＭサンプルでは、未処理の対照と比較して誘導期（増殖が始まるまでの時間）が長くなり、増殖への影響はわずかであった。１μＭのサンプルを光活性化した場合、約２時間しか遅延しない未処理のサンプルに比べて、増殖の誘導期が約１５時間まで有意に増加した。
（８．６．３ 枯草菌における化合物６及び１２の細胞毒性）
図１８は、放射線照射の前後に化合物１２で処理した枯草菌細胞を示している（それぞれ図１８（ａ）及び図１８（ｂ））。化合物の蛍光は青色で示されている（ｉ）。細胞は、緑色（２）で示されてすべての細胞を強調表示するＳｙｔｏ ９で共染色されている。細胞は、赤（３）で示されて非生細胞を強調表示するヨウ化プロピジウムでも染色されている。
放射線照射した画像と放射線照射していない画像の両方で、青チャンネルに化合物１２の蛍光が見られ、細胞への接着／取り込みが確認された。照射後は、非照射のサンプルに比べて、非生細胞（赤）の割合が増加している。したがって、化合物１２の細胞毒性は枯草菌に存在すると考えられる。
図１９は、放射線照射の前後に化合物１２で処理した枯草菌細胞の一晩増殖曲線である。１００μＭ及び１０μＭの処理濃度では、光活性化にかかわらず増殖は見られなかった。未処理の対照サンプルはいずれも同程度の増殖を示した。放射線照射していない１μＭのサンプルでは、未処理のサンプルに比べて増殖がわずかに少なく、誘導時間も長くなっている。
図２０は、放射線照射の前後に化合物６で処理した枯草菌細胞の一晩増殖曲線である。照射していないサンプルは、０、５及び１μＭの濃度で同程度の増殖を示している。放射線を照射すると、これらのサンプルは若干の増殖抑制を示した。１０μＭの処理濃度では、増殖が抑制され、誘導時間が長くなり、この効果は放射線を照射したサンプルでより顕著であった。
化合物１２は、１０及び１μＭの両濃度で、化合物６よりも高い細胞毒性を示した。
（８．６．４ 枯草菌における化合物１２の局在）
図２１は、化合物１２で処理した枯草菌細胞を示している。化合物１２は、枯草菌細胞のペプチドグリカン領域への局在が増強されているように見える。
上述の試験では、グラム陽性細胞である表皮ブドウ球菌及び枯草菌において、化合物６及び１２の両方が細胞毒性を示すことが明らかになった。濃度にもよるが、これは光活性化を伴わない場合でも存在し得る。このように、これらの低分子化合物は、多くの生物が耐性を獲得しつつある従来の抗生物質に代わる有望な代替品となる。また、光活性化に対する反応は、皮膚疾患を治療する際に有利に働く可能性もあり、植物病原体の場合には殺虫剤として使用できる可能性もある。
枯草菌細胞が内部胞子へ接着することで、高分子薬剤ではしばしば課題となる細胞間取り込みが可能になる。そのような細菌の胞子形成サイクルは、過酷な環境や化学処理に対する生来の防御となるため、このプロセスを経る可能性のある病原体を根絶することは困難である。内部胞子を積極的に殺傷する方法は、胞子形成を行う病原体の細胞を殺傷する新しい方法となるであろう。
本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書及び図面を含む）に開示されているすべての特徴及び／又はそのように開示されている任意の方法若しくはプロセスのすべての工程は、そのような特徴及び／又は工程の少なくとも一部が相互に排他的である組み合わせを除き、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書及び図面を含む）に開示されている各特徴は、明示的に別段の記載がない限り、同じ、同等の又は類似の目的を果たす代替の特徴で置き換えることができる。したがって、明示的に別段の記載がない限り、開示された各特徴は、包括的な一連の同等又は類似の特徴の一例に過ぎない。本発明は、上述の実施形態（単数又は複数）の詳細に限定されるものではない。本発明は、本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書及び図面を含む）に開示された特徴の任意の新規の１つ又は任意の新規の組み合わせ又はそのように開示された任意の方法若しくはプロセスの工程の任意の新規の１つ又は任意の新規の組み合わせにまで及ぶ。

Claims (17)

  1. 遊離形態又は塩形態の、式Ｉの化合物およびそれらのジアステレオ異性体。
    Figure 2022541453000027
    （式中、
    Ｒ１は、Ｈまたは任意に１個以上のＮ原子で置換された１～１０個の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｒ２は、任意に１個以上のＮ原子で置換された１～１０個の炭素原子を有するアルキル基、－（ＣＨ２）ｎＲ３、－（ＣＨ２）ｎＮＨＲ３及び－（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３から選択され、ここで、ｎは、１～１０の整数であり、Ｒ３は、－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＯ２ＰｈＣＨ３または－ＣＯＯＨであり、またはＲ２は、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８もしくは－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－であり、ここで、Ｒ８は、－ＯＨまたは－ＮＨＯＨであり、ｎは、１～８の整数であり、ｍは、１～４の整数であり；又は
    Ｒ１及びＲ２は、３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成し；
    Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、芳香族基であり；
    Ｘは、不飽和エステル、ケトン、カルボン酸、イミダゾロン、ピリジン、オキサゾロン、オキサゾリジノン、バルビツール酸及びチオバルビツール酸から選択され；
    但し、Ａｒ１がフェニルであり、Ｒ１及びＲ２が３～１２個の環員を有する複素環式基Ｙの一部を形成している場合、該複素環式基のＮは、式Ｉの化合物のアセチレン基に対してパラ位にある）。
  2. Ｒ１及びＲ２が、複素環式基Ｙの一部を形成している、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
  3. 複素環式基Ｙが、以下から選択される、請求項２に記載の式Ｉの化合物。
    Figure 2022541453000028
    （式中、Ｒ７は、アルキル基、－ＣＯＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８又は－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－であり、ここで、Ｒ８は、－ＯＨまたは－ＮＨＯＨであり、ｎは、１～８の整数であり、ｍは、１～４の整数である。）
  4. Ｒ１が、Ｈまたは１～１０個の炭素原子を有するアルキル基であり、Ｒ２が、－（ＣＨ２）ｎＲ３及び－（ＣＨ２）２（ＣＯＣＨ２）ｎＲ３から選択され、ここで、ｎは、１～１０の整数であり、Ｒ３は、－ＮＨ２、－ＯＨまたは－ＣＯＯＨであり、又はＲ２が、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｓ（Ｏ）２（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８、－Ｓ＋（Ｏ－）（ＣＨ２）ｎＣ（＝Ｏ）Ｒ８若しくは－（ＣＨ２）ｎＰＰｈ３ ＋Ｂｒ－であり、ここで、Ｒ８は、－ＯＨまたは－ＮＨＯＨであり、ｎは、１～８の整数であり、ｍは、１～４の整数である、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
  5. Ａｒ１が、フェニル基、ピリジン基、ピリミジン基、チオフェン基、フラン基、ベンゾフラン基又はチアゾール基から選択される、先行請求項のいずれかに記載の化合物。
  6. Ａｒ２が以下から選択される、先行請求項のいずれかに記載の化合物。
    Figure 2022541453000029
    （式中、Ｒ１及びＲ２は、請求項１で定義した通りである。）
  7. 蛍光イメージングに使用するための、式Ｉの化合物。
  8. ラマンイメージングに使用するための、式Ｉの化合物。
  9. 式Ｉの化合物を含む、プローブ。
  10. 式Ｉの化合物と、標的化剤又は活性剤とを含む、コンジュゲート。
  11. 前記標的化剤又は活性剤が、低分子薬剤、ペプチド若しくはタンパク質、糖若しくは多糖、アプタマー若しくはアフィマー又は抗体から選択される、請求項１０に記載のコンジュゲート。
  12. 細胞発達の制御に使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物又は請求項１０若しくは請求項１１に記載のそのコンジュゲート。
  13. 光線力学療法に使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物又は請求項１０若しくは請求項１１に記載のそのコンジュゲート。
  14. 請求項１～６のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物又は請求項１０若しくは請求項１１に記載のそのコンジュゲートを、任意に１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
  15. 請求項１～６のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物又は請求項１０若しくは請求項１１に記載のそのコンジュゲートを、任意に１つ以上の共配合剤と組み合わせて含む、製剤。
  16. 細胞増殖、分化又はアポトーシスの制御が有効な疾患又は状態を有する患者の治療方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物又はそのコンジュゲートを患者に投与することを含む、方法。
  17. 蛍光イメージング、ラマンイメージング又は蛍光ラマンイメージングにおける式Ｉの化合物の使用。
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