JP2022537500A

JP2022537500A - バンコマイシンリポソーム組成物および方法

Info

Publication number: JP2022537500A
Application number: JP2021570935A
Authority: JP
Inventors: ヤーダブジャンガ、カールティク; ヒンゴラニ、トゥーシャー; マーチンリップマン、ジャック; ソッピマス、クマレシュ
Original assignee: ネバカーインジェクタブルズインコーポレイテッド
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2020-05-22
Publication date: 2022-08-26
Also published as: EP3975995A1; US20220296515A1; WO2020242996A1; EP3975995A4

Abstract

本発明の主題は、薬物動態を改善し、薬物負荷および溶液安定性を増強したリポソーム化バンコマイシンための組成物および方法に関する。【選択図】図５

Description

本出願は、２０１９年５月２８日に出願された連続番号６２／８５３，５９７の我々の同時係属する米国仮特許出願の優先権を主張し、参照により本明細書に組み込む。

技術分野
本発明の分野は、リポソーム製剤中のバンコマイシンを含み、特に薬物動態、薬物負荷、および経過中の高薬物負荷の維持が改善された注射可能なバンコマイシン組成物に関する、医薬組成物である。

背景説明は、本発明を理解するのに有用でありうる情報を含む。ここで提供される情報のいずれかが、先行技術またはここで特許請求される発明に関連すること、または具体的または暗黙的に参照される任意の刊行物が先行技術であることを認めるものではない。

バンコマイシンは、分枝した三環式でグリコシレート化した非リボソームペプチド抗生物質であり、従来の抗生物質に反応しなかった様々なグラム陽性菌（特に多剤耐性黄色ブドウ球菌）によって引き起こされる感染症の予防および治療に頻繁に使用される。

バンコマイシン

バンコマイシンは、分子量が～１４５０Ｄａの大きな糖ペプチドであるため、経口経路を介しては感知できるほどには吸収されず、したがって静脈内投与される。バンコマイシンは、様々な不都合な事象、特に血栓性静脈炎および痛みを回避するために、比較的遅い速度で（例えば、少なくとも１時間にわたって）投与される。腎機能の通常なヒトでは、バンコマイシンの半減期は約３から６時間である。それは主に腎臓経路を介して排除され、１回投与後２４時間以内に尿中で変化せずに＞８０％－９０％が回収される。

バンコマイシンは、依然として、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の治療のために選択される抗生物質である。バンコマイシンの通常の用量は、６時間毎に５００ｍｇまたは１２時間毎に１グラムのいずれかに分割した２グラムである。複数回の静脈内注入後、６０分にわたって注入された１グラムのバンコマイシンは、ヒトへの注入の終了１１時間後に、８μｇ／ｍＬの平均血漿濃度を生じさせる。ＭＲＳＡに冒された患者の臨床転帰を改善するためには、次の用量が投与される前の血漿レベルが１５μｇ／ｍＬから２０μｇ／ｍＬの間であることが推奨される。より高い最終血漿濃度を達成するために投与する必要がある用量の増加のために、バンコマイシン関連腎毒性の出現率は、残念ながら増加するであろう。

薬物動態および薬物力学をそのように強めるために、様々な薬物をリポソームに配合することができる。概念的には、バンコマイシンは、リポソームに封入された場合、薬物の腎臓への曝露を低減することができ、腎臓への曝露の低減は、おそらくバンコマイシン関連腎毒性を低減するであろう。しかしながら、バンコマイシンを封入する際の重要な課題は、投与する必要がある大量の用量である。さらに、バンコマイシンは以前にリポソームに封入されていたが、文献に報告されている薬物負荷は比較的低かった。これに関連して、バンコマイシンの低薬物負荷は、患者に投与されている大量の脂質に至り、それが次に患者のマクロファージ系を過負荷にすることを理解されたい。

例えば、特許文献１に記載されているように、極性の小さな親水性薬物をリポソームに封入することが知られている。本明細書中にあるすべての刊行物および特許出願は、刊行物または特許出願のそれぞれが参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合のように、参照により組み込まれる。組み込まれた参照における用語の定義または使用が、本明細書に提供されるその用語の定義と矛盾するかまたは反対である場合には、本明細書に提供されるその用語の定義が適用され、参照におけるその用語の定義は適用されない。特許文献１の組成物において、リポソームは、少なくとも１つの中性飽和リン脂質および少なくとも１つの荷電飽和脂質を含むように配合された。しかしながら、そのような製剤は、典型的には、５－ＦＵなどの小分子に限定され、バンコマイシンなどの大分子は、しばしば非常に低い負荷パラメータを有するであろう。さらに、ほとんどの従来のリポソームの循環時間は、多くの場合、依然として比較的短い。

リポソームの血液循環時間は、ＰＥＧ化によって増加させることができ、これはまた、標的組織の肺およびマクロファージにおけるバンコマイシン濃度を増加させうる。一例では、ＰＥＧ化したリポソーム化バンコマイシンが、ＭＲＳＡ肺炎の治療の有効性を改善するために提案された（非特許文献１）。ここで、バンコマイシンリポソームは、当初は薄膜水和法および硫酸アンモニウム勾配法を用いて調製され、封入効率および調製された製剤の安定性が不十分であった。後続の製剤は、脱水－再水和法で、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を３：１：０および３：１：０．０２のモル比で使用して調製した。残念ながら、負荷および安定性は望ましい程度には満たなかった。さらに、ＰＥＧ化リポソームおよび非ＰＥＧ化リポソームの薬物動態データは、実質的な差異を明らかにしなかった。特許文献２は同様のデータを示している。

さらに他のアプローチでは、バンコマイシン塩酸塩リポソーム（ＶＡＮＨ－Ｌｉｐｓ）は修正逆相蒸発法によって調製され、キトサンで包まれたバンコマイシン塩酸塩リポソーム（ｃ－ＶＡＮＨ－Ｌｉｐｓ）ナノ懸濁液は、静電沈着によって調製された（非特許文献２）。残念ながら、そのようなリポソーム調製物はまた、封入効率および薬物負荷が比較的低かった。ＰＥＧ化リポソーム組成物のさらに別の態様および例は、他（非特許文献３）で説明されているが、それらのほとんどは、低い薬物負荷および／または溶液の不安定性に悩まされている。

有意に高いバンコマイシン濃度は、特許文献３に開示され、リポソームは、比較的低い脂質対薬物比（例えば、３：１またはそれ未満）を有していた。ここでは、リポソームは、溶媒注入プロセスを用いて調製された。そのような方法は、改善された薬物負荷を有するリポソームをもたらしたが、リポソームの溶媒安定性は、は望ましい程度には満たなかった。実際、凝集および相分離は、典型的には、特許文献３のリポソーム製剤と関連していた。

したがって、様々なバンコマイシン組成物が当技術分野で知られているが、バンコマイシン組成物、好ましくは注射に適しており、かつ望ましい薬物動態および薬物負荷を示し、かつ望ましい溶液安定性を有する、リポソーム化バンコマイシン組成物が依然として必要である。

欧州特許出願公開第１７５７２７０号明細書米国特許第９５６６２３８号明細書米国特許出願公開第２００９／０１０４２５７号明細書

ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓＡｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、２０１１年１０月、ｐ．４５３７－４５４２ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、第４９５巻、２０１５年、ｐ．５０８－５１５ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００６年、第１巻、第３号、ｐ．２９７－３１５

本発明の主題は、注射に適し、望ましい薬物動態および薬物負荷を示す、リポソーム化バンコマイシン組成物およびそのための方法に関する。

本発明の主題の一態様では、本発明者らは、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含むバンコマイシンリポソーム組成物を企図し、ここで前記リポソームは、浸透圧調整剤を含む水溶液中に配置される。企図される組成物において、リポソームは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含み、ここで前記第１の脂質成分はＣ１４：０脂肪酸部分を含み、前記第２の脂質成分はＣ１６：０脂肪酸部分を含む。

いくつかの実施形態において、前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍであり、および／または前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である。さらに、前記浸透圧調整剤は、スクロースなどの非イオン性薬剤であることが企図される。

さらなる実施形態において、前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む。例えば、適する第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、および／または適する第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。ＰＥＧ化ジグリセリドは、好ましくは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を有し、および／または少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分を含む（例えば、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン）。したがって、リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含みうることが企図される。

さらに別の実施形態では、前記第１および第２の脂質成分のコレステロールに対する重量比は、２．２－３．２：１および１．１：１の間であり、および／または前記第１および第２の脂質成分のＰＥＧ化ジグリセリドに対する比は、１１．４－１６．６：１および５．６：１の間である。さらに、前記バンコマイシンは、企図される組成物中に、０．１－１００ｍｇ／ｍｌの間（例えば、５－６ｍｇ／ｍｌ）の濃度で存在する。加えて、企図されるリポソームは、総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．５５ｍｇまたは少なくとも０．８０ｍｇのバンコマイシンの薬物負荷を有しえ、そして前記組成物が注射用に製剤化されることが一般的に好ましい。したがって、前記組成物のエタノール濃度は、０．０５％（ｖ／ｖ）以下であろう。

したがって、異なる観点から見ると、企図されるバンコマイシンリポソーム組成物は、バンコマイシンを封入している複数のリポソーム、ここで前記リポソームは浸透圧調整剤を含む水溶液中に配置される、を含みうるか、または本質的にそれからなるであろう。例えば、そのようなリポソームは、第１の脂質成分として１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、任意の第２の脂質成分として１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドとして１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンを含みうる。必ずしもではないが、典型的には、前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍ（またはＤ_９０で４００－４５０ｎｍ±１５ｎｍ）であり、および／または前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である。浸透圧調整剤は、スクロースなどの非イオン性薬剤であることがさらに好ましい。

企図されるリポソームにおいて、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を有しえ、コレステロールに対する前記第１および第２の脂質成分の重量比が２．２－３．２：１および１．１：１の間でありえ、および／またはＰＥＧ化ジグリセリドに対する前記第１および第２の脂質成分との比は、１１．４－１６．６：１および５．６：１の間である。典型的には、バンコマイシンは、１－１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で前記組成物中に存在し、ここで前記組成物は、好ましくは、注射用に製剤化される。

本発明の主題の別の態様では、本発明者らは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む脂質アルコール溶液を調製する工程、およびバンコマイシン水溶液を調製するさらなる工程を含むバンコマイシンリポソーム組成物を製造する方法も企図する。さらに別の工程において、前記脂質アルコール溶液および前記バンコマイシン水溶液は、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含む生成物を形成するのに十分な流速で、静的ミキサーを備えるマイクロ流体チャネル内で混合される。さらに別の工程では、前記生成物を接線流濾過または透析に供して、アルコールおよび封入されていないバンコマイシンを除去する。

いくつかの実施形態において、前記接線流濾過または透析は、浸透圧調整剤（例えば、スクロース）を含む水溶液を用いて行われ、および／または水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である。最も典型的には、前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである。

さらなる実施形態において、前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む。例えば、前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンでありえ、前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンでありえ、前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、分子量が２０００±２００のＰＥＧ鎖を含みえ、および／または前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分（例えば、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン）を含む。

さらに、前記リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含み、コレステロールに対する前記第１および第２の脂質成分の重量比は、２．２－３．２：１および１．１：１の間であり、および／またはＰＥＧ化ジグリセリドに対する前記第１および第２の脂質成分の比は、１１．４－１６．６：１および５．６：１の間であることが企図される。必要な場合には前記脂質アルコール溶液はエタノールを含む。

本発明の主題のさらに他の局面において、本発明者らは、バンコマイシン製剤の腎毒性を低減する方法であって、バンコマイシンをリポソーム中に封入する工程を含み、ここで、前記リポソームは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む、方法を企図する。いくつかの実施形態では、前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分（例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分（例えば、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）を含む。さらなる実施形態において、前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、および／または前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である。

腎毒性の減少は、同量の非リポソーム化バンコマイシンの投与と比較した腎毒性を示す尿中バイオマーカーの減少によって測定できることが企図される。例えば、腎毒性の減少は、尿中バイオマーカーの測定値の、少なくとも１０％、または少なくとも３０％、または少なくとも５０％の減少でありうる。適切なバイオマーカーには、ＫＩＭ－１およびクラステリンが含まれる。あるいは、またはさらに、腎毒性の減少は、尿細管細胞損傷などの組織病理学的マーカーを使用して決定することもできる。

本発明の主題のさらに別の局面において、本発明者らは、バンコマイシンの薬物動態パラメータを増加させる方法であって、バンコマイシンをリポソーム中に封入する工程を含み、ここで、前記リポソームは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む、方法を企図する。いくつかの実施形態において、前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分（例えば、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分（例えば、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）を含む。さらなる実施形態において、前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、および／または前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である。

例えば、Ｃ_ｍａｘは、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍増加されえ、ＡＵＣは、少なくとも３０倍、または少なくとも６０倍増加されえ、および／またはＴ_１／２は、少なくとも２倍、または少なくとも４倍増加されうる。

本発明の主題の様々な目的、特徴、態様および利点は、添付の図面とともに、以下の、好ましい実施形態の詳細な説明からより明らかになるであろう。

スクロース濃度のリポソーム粒子サイズに及ぼす影響についての例示的な結果を示すグラフ。３．４２％スクロース濃度のｐＨのリポソーム粒子サイズに及ぼす影響についての例示的な結果を示すグラフ。本発明の主題によるリポソームからの薬物漏出についての例示的な結果を示すグラフ。本発明の主題によるリポソームを使用する選択された薬物動態パラメータの一組の例示的な結果を示すグラフ。本発明の主題によるリポソームを使用する選択された薬物動態パラメータの別の一組の例示的な結果を示すグラフ。腎毒性評価の試験手順の概略図。選択された薬物動態結果を示すグラフ。腎障害のマーカーについて選択された結果を示すグラフ。

本発明の主題は、注射に適しており、望ましい薬物動態、薬物負荷、および溶液安定性を示すリポソーム化バンコマイシン組成物に関する。さらに、本発明者らは、バンコマイシンリポソームが、概念的に単純であるが、高い薬物負荷／封入を伴う効果的な受動負荷アプローチで調製されうることも見出した。

より具体的に、そして以下により詳細に記載されるように、本発明者らは、バンコマイシンリポソームが、コレステロールおよびＰＥＧ化ジグリセリドと組み合わせて、比較的短い脂肪酸鎖部分を有する１つ以上の脂質成分から調製されうることを見出した。特に、そのようなリポソームは、有利な薬物負荷パラメータおよび溶液安定性を示しただけでなく、マイクロ流体工学技術などの拡大可能な製造プロセスを介して調製することもできた。

例えば、本発明者らは、マイクロ流体工学機器で（１）第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む脂質アルコール溶液を（２）バンコマイシン水溶液と、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含む生成物を形成する条件下で混合することにより、バンコマイシンリポソーム組成物を調製した。次に、生成物を接線流濾過（ＴＦＦ）または透析に供して、アルコールおよび封入されていないバンコマイシンを除去した。

前記第１および／または前記第２の脂質成分に関して、リポソームに適した多くの脂質成分が本明細書での使用に適切であると見なされることが企図されるが、前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含みうることが一般的に好ましい。例えば、および他の適切な選択の中で、前記第１および／または第２の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンおよび／または１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである。さらに、前記第１の脂質成分は、Ｃ１２、Ｃ１４、および／またはＣ１６脂肪酸部分を含みうる。同様に、前記第２の脂質成分は、Ｃ１４、Ｃ１６、および／またはＣ１８脂肪酸部分を含みうる。容易に理解されるように、第１および第２の脂質成分の間の比率は大幅に変化しうる。

しかしながら、典型的には、前記第１の脂質成分は、Ｃ－１４脂肪酸部分（典型的にはグリセロール部分でエステル化されている）、そして最も好ましくは２つのＣ－１４脂肪酸部分を含むことになると好ましい。さらに、一方または両方の脂肪酸部分は飽和脂肪酸となることが好ましい（しかし必須ではない）。あるいは、そして特により多くの柔軟性が望まれる場合、一方または両方の脂肪酸部分は、１つ、または２つ、または３つの二重結合を有しうる。

第２の脂質成分が存在する場合、前記第２の脂質成分は、Ｃ－１６脂肪酸部分（典型的にはグリセロール部分でエステル化されている）を含むことになると好ましく、２つのＣ－１６脂肪酸部分が最も好ましい。前述のように、前記第２の脂質成分中の一方または両方の脂肪酸部分は、飽和脂肪酸であることが好ましい（しかし必須ではない）。あるいは、そして特により柔軟性が望まれる場合、一方または両方の脂肪酸部分は、１つ、または２つ、または３つの二重結合を有しうる。他の態様では、前記第２の脂質成分はまた、１つまたは２つのＣ－１８またはより長い脂肪酸部分（典型的にはグリセロール部分でエステル化されている）を含みうる。これらのより長い脂肪酸は、任意の不飽和度を有することができ、したがって、１、２、３、またはそれより多くの二重結合（共役、シスまたはトランス配向でありうる）を含みうる。

したがって、企図されるリポソーム中の適切な脂質成分は、１つ以上のホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（Ｐｌ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、およびそれらのすべての合理的な混合物を含む。例えば、適切な脂質成分は、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）、卵ホスファチジルイノシトール（ＥＰＩ）、卵ホスファチジルセリン（ＥＰＳ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）、ホスファチジン酸（ＥＰＡ）、大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、大豆ホスファチジルグリセロール（ＳＰＧ）、大豆ホスファチジルセリン（ＳＰＳ）、大豆ホスファチジルイノシトール（ＳＰＩ）、大豆ホスファチジルエタノールアミン（ＳＰＥ）、大豆ホスファチジン酸（ＳＰＡ）、水素化卵ホスファチジルコリン（ＨＥＰＣ）、水素化卵ホスファチジルグリセロール（ＨＥＰＧ）、水素化卵ホスファチジルイノシトール（ＨＥＰＩ）、水素化卵ホスファチジルセリン（ＨＥＰＳ）、水素化ホスファチジルエタノールアミン（ＨＥＰＥ）、水素化ホスファチジン酸（ＨＥＰＡ）、水素化大豆ホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、水素化大豆ホスファチジルグリセロール（ＨＳＰＧ）、水素化大豆ホスファチジルセリン（ＨＳＰＳ）、水素化大豆ホスファチジルイノシトール（ＨＳＰＩ）、水素化大豆ホスファチジルエタノールアミン（ＨＳＰＥ）、水素化大豆ホスファチジン酸（ＨＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレイルホスファチジル－エタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルステアロイルホスファチジル－コリン（ＰＳＰＣ）、パルミトイルステアロールホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）、モノ－オレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）、トコフェロール、脂肪酸のアンモニウム塩、リン脂質のアンモニウム塩、グリセリドのアンモニウム塩、ミリスチルアミン、パルミチルアミン、ラウリルアミン、ステアリルアミン、ジラウロイルエチルホスホコリン（ＤＬＥＰ）、ジミリストイルエチルホスホコリン（ＤＭＥＰ）、ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）およびジステアロイルエチルホスホコリン（ＤＳＥＰ）、Ｎ－（２，３－ジ－（９－（Ｚ）－オクタデセニルオキシ）－プロプ－１－イル－Ｎ、Ｎ、Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２－ビス（オレオイルオキシ）－３－（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジル酸（ＤＭＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジル酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジル酸（ＤＳＰＡ）、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（ＤＭＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、およびそれらのすべての合理的な組み合わせでありうる。

企図されるリポソームにおける特に好ましい脂質成分には、１，２－ジミリストロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－リン酸一ナトリウム塩、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホル－ｒａｃ－（１－グリセロール）］ナトリウム塩、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－Ｌ－セリン］ナトリウム塩、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－グルタリルナトリウム塩、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－３－ホスファチジルコリン、および１，１’，２，２’－テトラミリストイルカルジオリピンアンモニウム塩、およびそれらのすべての合理的な組み合わせが含まれる。

ＰＥＧ化ジグリセリドに関して、典型的には、ＰＥＧ化ジグリセリドは、脂肪酸部分の少なくとも１つがＰＥＧ部分によって置換または修飾されている、上述の脂質化合物であることが好ましい。最も好ましくは、前記ＰＥＧは、平均分子量が約５００から約１０，０００ダルトンのポリエチレングリコールであり、これは、任意で、アルキル、アルコキシ、アシル、またはアリール部分に置換されうる。例えば、ＰＥＧは、末端ヒドロキシル位置でメチルに置換されうる。別の例では、ＰＥＧの平均分子量は、約７５０から約５，０００ダルトン、より好ましくは約１，０００から約５，０００ダルトン、最も好ましくは約１，５００から約３，０００ダルトンであろう。他の適したＰＥＧ化ジグリセリドの中でも、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を有する）などの、Ｃ１４および／またはＣ１６脂肪酸部分を有するものが特に好ましい。

同様に、コレステロール成分は大幅に変更しうる。しかしながら、最も典型的な実施形態では、前記コレステロール成分は、化学的に未修飾なコレステロールであろう。あるいは、前記コレステロールは、ブチレート部分またはフェニルアセテート部分、または炭水化物部分を含むように化学的に修飾されうる。

容易に理解されるように、企図されるリポソームは、前記第１および／または前記第２の脂質成分、ＰＥＧ化ジグリセリド、および／またはコレステロール成分を様々な比率で含みうる。しかしながら、通常、コレステロールは前記リポソーム中の少数成分であろうと企図される。したがって、コレステロール（またはその任意の誘導体）は、５０モル％以下、または４０モル％以下、または３０モル％以下、または２０モル％以下、または１５モル％以下、または１０モル％以下、または５モル％以下で存在しうる。別の観点から見ると、企図される製剤は、コレステロールに対する、前記第１と第２とを合わせた脂質成分の重量比が少なくとも２：１、または少なくとも２．５：１、または少なくとも３：１、または少なくとも３．５：１、または少なくとも４．０：１、またはさらに高くありうる。したがって、コレステロールに対する、前記第１と前記第２とを合わせた脂質成分の例示的な重量比は、２．５：１と３．０：１との間、または３．０：１と３．５：１との間、または３．５：１と４．０：１との間であろう。同様に、通常、ＰＥＧ化ジグリセリド成分は、少数成分であることに留意されたい。例えば、前記ＰＥＧ化ジグリセリドに対する、前記第１と前記第２とを合わせた脂質成分の企図される比率は、５：１と１０：１との間、または１０：１と２０：１との間、または２０：１と３０：１との間でありうる。

さらに、バンコマイシンが一般的に好ましいが、様々な他の糖ペプチド抗生物質もまた、本明細書での使用に適していると見なされることに留意されたい。例えば、本明細書で企図される糖ペプチド抗生物質は、アボパルシン、リストセチン、テイコプラニン、およびそれらの誘導体を含み、バンコマイシン誘導体も含む。例えば、バンコマイシンの誘導体は、多価バンコマイシン、ＰＥＧ化バンコマイシン複合体、ノルバンコマイシン、バンコマイシンジスルフィド、シンモニシン、モノ－またはジ－デクロロバンコマイシン、バンコマイシンのグルタミン類似体（例えば、Ａ５１５６８Ｂ、およびＭ４３Ｇ）、バンコマイシンのアスパラギン酸類似体（例えば、Ｍ４３Ｆ、Ｍ４３Ｂ）、バンコマイシンのデスバンコサミン誘導体（例えば、Ａ５１５６８ＡおよびＭ４３Ａ、ならびに対応するアグリコン）、バンコマイシンの塩素誘導体（例えば、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６Ａ（エレモマイシン）、オリエンチシンＡ、Ａ８２８４６Ｃ）、バンコマイシンのベンジルアミノ糖誘導体（例えば、Ａ８２８４６Ｂ）、Ｎ－アシルバンコマイシン、Ｎ－アラシルバンコマイシン、Ｎ－アルキルバンコマイシン（例えば、オクチルベンジル、オクチルオキシベンジル、ブチルベンジル、ブチルオキシベンジル、およびブチル、誘導体）、またはそれらの混合物を含む。

最も好ましくは、企図されるリポソーム組成物は、少なくとも０．１ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１．０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも５．０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、またはそれより多くの量のバンコマイシンを含むこととなる。例えば、適した組成物は、０．１と１ｍｇ／ｍｌとの間、または１．０と３．０ｍｇ／ｍｌとの間、または３．０と１０ｍｇ／ｍｌとの間、または１０と５０ｍｇ／ｍｌとの間、または３０と８０ｍｇ／ｍｌとの間、または５０と１００ｍｇ／ｌとの間の量のバンコマイシンを含みうる。したがって、さらなる例示的な組成物は、０．１と０．５ｍｇ／ｍｌとの間、または０．５と１ｍｇ／ｍｌとの間、または１と３ｍｇ／ｍｌとの間、または３と６ｍｇ／ｍｌとの間、または５と７ｍｇ／ｍｌとの間、または７と９ｍｇ／ｍｌとの間、または８と１０ｍｇ／ｍｌとの間、または１０と１５ｍｇ／ｍｌとの間、または１５と２５ｍｇ／ｍｌとの間、または２５と５０ｍｇ／ｍｌとの間の量のバンコマイシンを含みうる。

適したリポソーム組成物は、哺乳動物への投与に薬学的に許容される水溶液を含むであろう。好ましい資質水溶液は、主に水を含むか、または本質的に水からなるが、様々な水混和性共溶媒（例えば、短鎖アルコール、ギ酸または酢酸などの小有機酸、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ＮＭＰなど）もまた、本使用に適していると見なされる。最も典型的には、そのような共溶媒は、１５重量％以下、または１０重量％以下、５重量％以下、３重量％以下、または１重量％以下の量で存在するであろう。好ましくは、そのようなリポソーム溶液は、１ｍｇ／ｍｌ以下、または０．５ｍｇ／ｍｌ以下、または０．１ｍｇ／ｍｌ以下、または０．０１ｍｇ／ｍｌ以下の量の封入されていないバンコマイシンを含み、および／または溶液は、１％ｖ／ｖ以下、または０．５％ｖ／ｖ以下、または０．１％ｖ／ｖ以下、または０．０５％ｖ／ｖ以下の量の残留アルコールまたは他の非水溶媒を含む。最も典型的には、適した水溶液は、ｐＨが、ｐＨ５．５以下、またはｐＨ４．５以下、またはｐＨ３．５以下、ｐＨ３．０以下、またはｐＨ２．５以下であろう。別の観点から見ると、そのような溶液のｐＨは、２．５－４．０の間、または３．０－５．０の間、または４．０と５．５との間でありうる。好ましくはないが、より高いｐＨ値もまた企図される。

以下により詳細に記載されるように、リポソーム組成物の水溶液は、浸透圧調整剤をさらに含むことがさらに企図される。適した浸透圧調整剤に関して、そのような薬剤は、薬学的に許容される糖（例えば、様々な炭水化物および炭水化物誘導体）などの非イオン性薬剤、薬学的に許容される塩、および張性を増加させることが知られている様々な極性ポリマーでありうることが企図される。例えば、適した糖は、スクロース、マンニトール、ラクトース、およびデキストロース、グルコースなどを含み、一方、適した塩は、ＮａＣｌを含む。使用される張性調整剤の量は、リポソームおよびリポソーム組成物中の周囲の流体の浸透圧が実質的に一致（例えば、３０ｍＯｓｍ／ｋｇ以内、または２０ｍＯｓｍ／ｋｇ以内、または１０ｍＯｓｍ／ｋｇ以内）するように調整されうる。例えば、リポソームと周囲の流体との間の差は、０．１－２ｍＯｓｍ／ｋｇの間、または２－５ｍＯｓｍ／ｋｇの間、または５－１０ｍＯｓｍ／ｋｇの間、または１０－２０ｍＯｓｍ／ｋｇの間、または１０－２０ｍＯｓｍ／ｋｇの間、または２０－３，０ｍＯｓｍ／ｋｇの間でありうる。所望のオスモル濃度をえるために添加される張性調整剤の量をチェックし、および調整するために浸透圧計が使用されうる。

企図されるリポソーム製剤に緩衝液が含まれる場合、適した緩衝液は、一般に、バンコマイシンが正の正味電荷を有するｐＨ範囲またはその近傍、例えばｐＨ２．０と３．５との間、またはｐＨ３．５と４．０との間、またはｐＨ４．０と５．５との間に、企図される製剤のｐＨを安定化する緩衝液であることに留意されたい。したがって、企図される製剤のｐＨは、５．５以下、または４．０以下、または３．５未満、または３．０未満であろう。例えば、適切な組成物は、２．３（±０．２）のｐＨ、または２．５（±０．２）のｐＨ、または２．７（±０．２）のｐＨを有しうる。本発明の主題に限定されないが、緩衝液強度は、典型的には比較的低く、例えば、１００ｍＭ以下、７５ｍＭ以下、６０ｍＭ以下、５０ｍＭ以下、または５ｍＭから５０ｍＭの間（例えば、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、または５０ｍＭ）である。

したがって、例示的な実施形態では、緩衝液は、医薬組成物中、約１０ｍＭから約７５ｍＭ、または約１０ｍＭから約６０ｍＭ、または約０．１ｍＭから約６０ｍＭ、または約０．１ｍＭから約５５ｍＭ、または約０．１ｍＭから約５０ｍＭ、または約５ｍＭから約６０ｍＭ、または約０．１ｍＭから約１０ｍＭ、または約１ｍＭから約１０ｍＭ、または約９ｍＭから約２０ｍＭ、または約１５ｍＭから約２５ｍＭ、または約１９ｍＭから約２９ｍＭ、または約２４ｍＭから約３４ｍＭ、または約２９ｍＭから約３９ｍＭ、または約３４ｍＭから約４４ｍＭ、または約３９ｍＭから約４９ｍＭ、または約４４ｍＭから約５４ｍＭ、または約１９ｍＭから約５４ｍＭ、または約２５ｍＭから約５４ｍＭの濃度で存在する。当然、酸および酸の塩、第１および第２塩（例えば、一塩基性および二塩基性塩）、および両性緩衝液分子を含む緩衝液系を含む、当技術分野で知られている多くのタイプの緩衝液系および緩衝液があり、それらのすべてが本明細書での使用に適しているとみなされることを理解されたい。

また、さらに企図される態様では、医薬組成物は、１つ以上のキレート剤、特に金属イオンキレート剤も含みうる。例えば、適切なキレート剤は、様々なジカルボン酸、トリカルボン酸、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテル）－Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、およびペンタ（カルボキシメチル）ジエチレントリアミン（ＤＴＰＡ）などのアミノポリカルボン酸、ならびにそれらの塩および水和物を含む。本発明の主題に限定されないが、金属イオンキレート剤は、金属イオンで触媒された酸化および微生物の成長を遅くすることが企図されている。例えば、適切なキレート剤濃度は、１０μｇ／ｍｌと５０μｇ／ｍｌとの間、５０μｇ／ｍｌと２５０μｇ／ｍｌとの間、および１００μｇ／ｍｌと５００μｇ／ｍｌとの間でありうる。別の観点から見ると、０．０３重量％以下、または０．０２重量％以下、または０．０１重量％以下のキレート剤濃度が企図される。

したがって、適切なキレート剤は、ＥＤＴＡ、シクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）、ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ジメルカプトプロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、アミノトリメチレンホスホン酸（ＡＴＰＡ）、クエン酸、それらの眼科的に許容される塩、および前述のいずれかの組み合わせ、などのモノマーポリ酸を含む。さらに適切なキレート剤は、ピロリン酸塩、トリポリリン酸塩、およびヘキサメタリン酸塩、クロロキンおよびテトラサイクリンなどのキレート抗生物質、イミノ基内または芳香環内に２つ以上のキレート化窒素原子を含む窒素含有キレート剤（例えば、ジイミン、２，２’－ビピリジンなど）、およびサイクラム（１，４，７，１１－テトラアザシクロテトラデカン）、Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_３０アルキル）－置換サイクラム（例えば、ヘキサデサイクラム、テトラメチルヘキサデシルサイクラム）、ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡ）、スペルミン、ジエチルノルスペルミン（ＤＥＮＳＰＭ）、ジエチルホモスーペルミン（ＤＥＨＯＰ）、およびデフェロキサミン（Ｎ’－［５－［［４－［［５－（アセチルヒドロキシアミノ）ペンチル］アミノ］－１，４－ジオキソブチル］ヒドロキシ－アミノ］ペンチル］－Ｎ’－（５－アミノペンチル）－Ｎ－ヒドロキシブタンジアミド、デスフェリオキサミンＢおよびＤＦＯとしても知られている）などの様々なポリアミンを含む。

企図されるリポソーム組成物はまた、１つ以上の防腐剤を含みうることをさらに理解されたい。例えば、含まれうる防腐剤は、ベンザルコニウムクロリド、セトリミドまたはセトリモニウムクロリドまたはブロミド、ベンゾドデシニウムブロミド、ミラミン、セチルピリジニウムクロリド、ポリドロニウムクロリドまたはポリクオタニウム－１、ポリクオタニウム－４２（ポリキセトニウムとしても知られている）、セパゾニウムクロリド、フェニル水銀塩（酢酸塩、ホウ酸塩または硝酸塩）、水銀チオレートナトリウム（別名チオメルサールまたはチメロサール）およびメルクロブトールなどの水銀誘導体、クロルヘキシジンジグルコネートまたはポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）などのアミジン、クロロブタノールまたはフェニルエタノールまたはベンジルアルコールまたはフェノールまたはｍ－クレゾールまたはフェノキシエタノールなどのアルコール、パラヒドロキシ安息香酸、メチルパラベン、およびプロピルパラベンなどのパラベンまたはエステルである。最も典型的には、防腐剤は、微生物の増殖を低減または防ぐために有効な量で添加される。例えば、防腐剤は、組成物中０．０１－０．１重量％の間、または０．０５－０．５重量％の間、または０．１－１．０重量％の間に存在しうる。

本発明の主題のさらに別の態様では、大部分の既知のリポソーム形成プロセスは、本明細書での使用に適していると見なされ、そして企図されるプロセスは、能動的および受動的負荷プロセスを含むことを理解されたい。したがって、企図される組成物は、様々な乾式フィルム水和法、噴霧乾燥プロセス、様々な溶媒注入プロセスなどを用いて調製することができる。しかしながら、特に好ましい態様では、リポソームは、２つの溶媒（１つは有機溶媒に脂質相を含み、もう１つは水相にバンコマイシンを含む）が層流で混合部に供給されるマイクロ流体工学アプローチで形成され、静的混合を使用することが好ましい。例示的なマイクロ流体デバイスは、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ^ＴＭ（プレシジョンナノシステムズベンチトップモデル、プレシジョンナノシステムズ（９４０８０、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ、３９５オイスターポイント大通り１４５番地）から市販）として知られている。そのような方法において、脂質は、好ましくは、所望のまたは必要な濃度で脂質を完全に可溶化する溶媒中に供給されるであろう。例えば、適切な溶媒は、様々なアルコール（および特にエタノール）、クロロホルム、塩化メチレン、ヘキサン、シクロヘキサン、およびそれらのすべての合理的な組み合わせなどを含むが、バンコマイシンを含む溶媒は、特に水、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、アセトン、およびそれらのすべての合理的な組み合わせなどを含む。

容易に理解されるように、リポソーム形成の特定の方法は、少なくとも部分的に、１つ以上のプロセスパラメータ、特に薬物負荷／薬物対脂質比、および封入効率に影響を与えるであろう。以下により詳細に示されるように、本明細書で企図される方法は、総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．５ｍｇ、または総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．６ｍｇ、または総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．７ｍｇ、または総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．８ｍｇ、または総脂質１ｍｇあたり少なくとも０．８５ｍｇの薬物負荷を与えることが一般的に好ましい。同様に、本明細書で企図されるプロセスは、少なくとも７０％、または少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも８５の薬物封入効率を有することが典型的に好ましい。

本明細書で企図されるリポソームのサイズ分布に関して、リポソームは、８００ｎｍ以下、６００ｎｍ以下、または５００ｎｍ以下、または４００ｎｍ以下、または３００ｎｍ以下、または２００ｎｍ以下の平均粒子サイズを有することが典型的に好ましい。別の観点から見ると、リポソームのサイズ分布は、好ましくは、Ｄ_１０で１００－２００ｎｍの間（例えば、１００±２０ｎｍ、または１２０±２０ｎｍ、または１４０±２０ｎｍ、または１６０±２０ｎｍ、または１８０±２０ｎｍ、または）、Ｄ_５０で２００－３００ｎｍの間（例えば、２００±２０ｎｍ、または２２０±２０ｎｍ、または２４０±２０ｎｍ、または２６０±２０ｎｍ、または２８０±２０ｎｍ、または）、および／またはＤ_９０で４００－５００ｎｍの間（例えば、４００±２０ｎｍ、または４２０±２０ｎｍ、または４４０±２０ｎｍ、または４６０±２０ｎｍ、または４８０±２０ｎｍ、または）である。したがって、典型的な全体的平均粒子サイズは、約１５０±２０ｎｍ、または約１７５±２０ｎｍ、または約２００±２０ｎｍ、または約２２５±２０ｎｍ、または約２５０±２０ｎｍ、または約２７５±２０ｎｍ、または約３００±２０ｎｍ、または約３２５±２０ｎｍ、または約３５０±２０ｎｍである。

さらに、そして以下により詳細に示されるように、本発明者らは、凝集の実質的な欠如（例えば、室温で４週間の貯蔵後、１５％未満または１０％未満の凝集）および／または粒子サイズの増加（例えば、室温で４週間の貯蔵後、１５％未満または１０％未満の増加）を示す、および／またはリポソームからの薬物漏出によるバンコマイシンの実質的な損失がないこと（例えば、室温で４週間の貯蔵後の１０％未満または５％未満の損失）を示す、高薬物対脂質比（例えば、総脂質１ｍｇあたり、少なくとも０．５ｍｇ、または少なくとも０．６ｍｇ、または少なくとも０．７ｍｇ、または少なくとも０．８ｍｇの薬物）のリポソームおよびリポソーム製剤を特に企図する。最も注目すべきことに、そして以下により詳細に示されるように、これらのパラメータは、個々に、薬物負荷／封入効率の低下、薬物漏出の増加、およびリポソームの凝集の増加／サイズ増加をもたらすであろう特定の要因の組み合わせによって達成された。

企図される製剤の滅菌について、企図される製剤は、０．４５ミクロンフィルターを通す濾過、熱滅菌、オートクレーブ、放射線（例えば、ガンマ、電子ビーム、マイクロ波）を含む、すべての既知の滅菌方法を用いて滅菌されうることを理解されたい。

実施例
以下の例は、本発明の主題に係る製剤に至る実験のいくつかを示しているが、決して特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

製剤因子：

特に明記しない限り、リポソームを、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ^ＴＭプラットフォーム（プレシジョンナノシステムズベンチトップモデル、プレシジョンナノシステムズ（９４０８０、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ、３９５オイスターポイント大通り１４５番地）から市販）を用いる、エタノール性脂質相と、バンコマイシンを持ち運ぶ水相とのマイクロ流体混合プロセスを使用して調製した。以下に示すように脂質をエタノールに溶解し、バンコマイシンを約１５０ｍｇ／ｍｌで水に溶解した。流速は１０ｍｌ／分で一定のままであり、混合を、プレシジョンナノシステムズによって商業的に供給されたベンチトップカートリッジで実施した。水対有機比は４：１であった。プロセスの温度は３５℃であった。

比較的大きな親水性薬物をリポソームに載せることは困難であることが知られていたため、本発明者らは、薬物負荷、リポソーム安定性、リポソームからの薬物漏出などの様々な製剤因子に影響を与えるパラメータを調査することに着手した。そのために、本発明者らは、脂質中の異なる炭素鎖長の影響を調査し、例示的な結果を以下の表１に示す。

データから容易に分かるように、バンコマイシン負荷パラメータは、リン脂質鎖長が増加するにつれて減少した。これらの実験において、リン脂質のガラス転移温度（Ｔ_ｇ）は、以下の順位であった：Ｃ１８＞Ｃ１６＞Ｃ１４。脂質をエタノールに加え、脂質のガラス転移温度を超える温度にした。また、１５０ｍｇ／ｍＬのバンコマイシンＨＣｌ溶液を対応する脂質温度に加熱した。溶液を別々の注射器に移し、マイクロ流体ベンチトップモデルで混合して、リポソームを製造した。

バンコマイシンの総薬物量を、組み込まれていないバンコマイシンと対比してＨＰＬＣ法で決定することによって、薬物負荷を決定した。リポソームを、ＥＭＤミリポアから入手可能な１００，０００分子量遮断遠心濾過膜での遠心分離によって生産流体から分離し、濾液を遊離（組み込まれていない）薬物含有量について分析した。総薬物含有量から遊離薬物を差し引くことにより、封入された薬物を決定した。溶液の理論的脂質含有量に対する封入された薬物（ｍｇ）の比率を、本明細書では薬物負荷として示す。注目すべきことに、リポソーム中のバンコマイシン負荷は、脂質のＴ_ｇの増加とともに劇的に減少した。

Ｔｇを減少させながらバンコマイシン負荷を増加させるという注目すべき結果を受けて、本発明者らは、他の脂質の存在が薬物負荷にさらに影響を与えるかどうかをさらに調査することに着手した。そのために、Ｃ－１４リン脂質成分を様々な他の脂質およびコレステロールと組み合わせて使用してバンコマイシンリポソームを調製した。また、総脂質濃度も薬物負荷の変更因子として試験した。表２は、コレステロールの影響についての例示的な結果を示し、一方、表３は、総脂質濃度の影響についての例示的な結果を示す。

興味深いことに、コレステロールの濃度が増加するにつれて、バンコマイシン負荷パラメータは急激に減少した。結果から分かるように、８５モル％の脂質および１５モル％のコレステロールを有するバンコマイシンリポソームは、より良好なバンコマイシン負荷挙動を示した。さらに、本発明者らは、負荷パラメータに対する総脂質濃度の影響が有意であることを観察した。総脂質組成が増加するにつれて、バンコマイシン負荷パラメータは減少した。

さらなる実験において、本発明者らは、負荷パラメータに対するＰＥＧ化脂質の影響を試験し、例示的な結果を表４に示す。ここで、ＰＥＧ２０００分子でＰＥＧ化されたＣ－１４飽和脂質を使用して、ＰＥＧ化バンコマイシンリポソームを調製した。結果から分かるように、リポソーム中のバンコマイシン負荷は、ＰＥＧ化脂質濃度が増加するにつれて実質的に減少した。

不飽和脂質の影響は、負荷パラメータに関してさらに研究され、表５中の例示的な結果は、不飽和脂質がバンコマイシン負荷の減少をもたらしたことを立証している。

その上、さらなる実験において、本発明者らは、Ｃ－１４（ＤＭＰＣ）およびＣ－１６（ＤＰＰＣ）脂質の組み合わせの影響も調査した。以下の表６のデータから分かるように、および同様のコレステロールレベルで、Ｃ－１６脂質組成の増加は、リポソーム中のバンコマイシンの負荷を減少させた。注目すべきことに、Ｃ－１４リン脂質が使用された場合、薬物負荷は、ＰＥＧ化脂質の存在下でさえ（そしてより高濃度のコレステロールでさえ）比較的高かった。

加工因子：

本発明者らは、バンコマイシンリポソームの負荷に影響を与える可能性のある様々な加工因子を研究した。バンコマイシンの空のリポソームへの能動負荷などの従来の方法を使用することは、能動負荷が弱塩基性分子にとってより理想的であるため、不十分である。薬物が能動負荷によって封入されたとしても、バンコマイシンは形式電荷がゼロであるという事実のために、リポソーム内でのバンコマイシンの沈殿は困難であり、したがって、従来のリポソーム負荷（例えば、塩の形成および／またはｐＨを介して）で一般的に行われるように沈殿させることはできない。他方、バンコマイシンのサイズが大きいため、これまでに知られている技術における薬物負荷の結果から分かるように、受動リポソーム負荷もまた困難である。

リポソームを負荷するときの従来の技術の欠点を克服するための努力において、本発明者らは、マイクロ流体技術を介したリポソームの負荷を調査した。ここで、一般的な流路中に静的混合要素を含むマイクロ流体層流装置で、脂質アルコール溶液をバンコマイシン水溶液と混合することによって、バンコマイシンをリポソームに負荷した。より具体的には、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ^ＴＭ器具を、一定の水対有機流体の混合比４：１で、一定の温度（３５℃）で、使い捨てカセットとともに使用した。以下の例示的なデータでは、リポソーム形成および薬物負荷パラメータに対する流速の影響のみが試験され、典型的な結果が表７および８に示されている。

しかしながら、上記の表に示されるデータは、流速の上昇が薬物負荷パラメータを上昇させることを示したが、以下でより詳細に示されるように、系から遊離薬物を除去した後にえられた製剤では薬物負荷パラメータが低下し、初めの製造プロセスの間のリポソームの表面へのバンコマイシンの吸着を示唆していることに注意されるべきである。

さらなる一組の実験では、本発明者らは、２つの異なるプロセスである、透析および接線流濾過を比較しながらリポソーム製剤からの遊離薬物およびエタノールの除去を行った。これらのプロセスの例示的な結果をそれぞれ表９および１０に示す。容易に見られるように、４時間の洗浄後にもリポソーム製剤中に有意な量の遊離薬物が残っていた。薬物負荷パラメータの有意な低下は透析プロセスの間、観察された。バンコマイシンの分子量は高いので、１Ｋおよび１０Ｋの膜を通過できなかった。バンコマイシンリポソームから遊離薬物およびエタノールを除去するために接線流濾過（ＴＦＦ）技術を採用した。

ＴＦＦプロセスは、透析プロセスよりも有意に速かった。しかしながら、薬物負荷パラメータは有意に低下し、プロセスの間のリポソームからの薬物の漏出を示している。したがって、リポソーム中へのバンコマイシンのマイクロ流体受動負荷は、従来のバンコマイシンリポソーム製剤に関連する問題に対する魅力的な解決策を提供するように見えたが、表面吸着およびリポソーム安定性は、マイクロ流体混合を使用する受動負荷に対する交絡因子であるように思われた。

表面吸着を低減し、および／またはリポソームの安定性を高めるために、コレステロール組成を増やしてリポソームを調製した。表１１の結果は、ＴＦＦ（１００ＫＭＷＣＯ膜を使用）中の薬物負荷パラメータに対するリポソーム組成物中のコレステロールの増加の影響を示している。予想外に、コレステロールを最大３０モル％増加させると、最終的なリポソーム製剤の負荷パラメータが改善された。５０モル％のコレステロールで、薬物負荷は有意に減少した。しかし、残念ながら、すべてのリポソームは、ＴＦＦプロセスの終了までに沈降し、ＰＢＳ緩衝液中の凝集および／または粒子サイズの増加を示した。

したがって、本発明者らは、ＴＦＦ緩衝液としての水の、負荷パラメータおよび粒子サイズへの影響を調査し、例示的な結果を表１２に示す。特に、ＴＦＦプロセスの終了までにリポソーム内で薬物封入が有意に増加したが、薬物負荷は減少した。

遊離薬物の除去を示す、薬物封入をさらに改善するために、総脂質含有量を２倍にし、緩衝液として水を用いてＴＦＦについて試験し（１００ＫＭＷＣＯ膜を使用）、例示的な結果を表１３に示す。残念ながら、リポソームは、ＴＦＦプロセス中に沈降し、水中での凝集および／または粒子サイズの増加を示していた。

次に、本発明者らは、薬物負荷パラメータおよびリポソームの沈降に対する異なるＴＦＦ緩衝液の影響を試験することに着手し、例示的な結果を表１４に示す。注目すべきことに、ＴＦＦ流体としての生理食塩水中でのリポソームの負荷パラメータは、水中で観察されたものと比較して有意に増加し：～８０％の薬物封入は、遊離薬物の２０％のみが最終的なリポソーム製剤に残っていることを示唆した。残念ながら、リポソームは、ＴＦＦプロセス中に沈降し、生理食塩水中の凝集および／または粒子サイズの増加を示した。

凝集および／または粒子サイズの増加を低減または防ぐための試みにおいて、本発明者らはまた、リポソームの沈降に対するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の影響を調査した。注目すべきことに、そして表１５の結果から分かるように、リポソームに１モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含めることで、薬物負荷パラメータをある程度減少させたが、ＴＦＦプロセス中に沈降した非ＰＥＧ化リポソームとは異なり、ＴＦＦプロセス後に３時間沈降することなく安定したリポソームがえられた。

粒子サイズを分析するとき、本発明者らは、非ＰＥＧ化リポソームの粒子サイズが１３１８ｎｍであるのに対し、ＰＥＧ化リポソームは１９７ｎｍであることに注目した。その結果は、非ＰＥＧ化リポソームがＴＦＦの間に大きく成長したことを示唆し、これは、リポソームの沈降が粒子サイズの成長によるものであることを確認した。したがって、本発明者らは、粒子サイズの成長は、リポソーム二重層膜を横切る浸透圧の違いが、特に膜脂質中にＣ１４および／またはＣ１６脂肪酸成分を有するリポソームで、原因である可能性がある、と仮説を立てた。

その結果、本発明者らは、リポソームの沈降に対するＴＦＦ緩衝液中の浸透圧調整剤（ここではスクロース）の影響を調査した。以下の例では、バンコマイシンＨＣｌ溶液のｐＨおよび浸透圧は、それぞれ２．６５および１０３ｍＯｓｍｏｌであった。したがって、３．４２％ｗ／ｖのスクロース溶液をＴＦＦ緩衝液として調製して、二分子膜を横切って１０３ｍＯｓｍｏｌを維持した。また、バンコマイシンに正電荷を誘導するために、スクロース溶液のｐＨを２．６５に調整した。特に、そのような変更により、二分子膜を横切る薬物透過性は非常に低く、その結果、ＴＦＦ中および／またはＴＦＦ後の薬物漏出が実質的に減少した。例示的な結果を表１６に示す。

さらに、非ＰＥＧ化リポソームは、約４－５時間沈降することなく安定であるが、その後沈降することが観察された。対照的に、ＰＥＧ化リポソームは、少なくとも１週間にわたって沈降しなかった。したがって、１モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００がリポソームの粒子サイズの成長を抑えたことを理解されたい。さらに、浸透圧が調整され（例えば、３．４２％ｗ／ｖのスクロース溶液）およびｐＨが調整された（例えば、ｐＨ２．６５）、修正ＴＦＦプロセスは、遊離薬物およびエタノールを除去するのに効果的であった。

次に、スクロース濃度の影響を、リポソームの薬物負荷パラメータおよび粒子サイズ分布について試験し、例示的な結果を表１７に示す。ここで、薬物負荷パラメータは、１％ｗ／ｖのスクロース濃度で低いが、これらのパラメータは、３．４２－７．５％ｗ／ｖの間で有意に変化せず、１０％ｗ／ｖのスクロースでより高かった。

図１に見られるように、粒子サイズにおいて同様の傾向が認められた。粒子サイズ分布は、１－７．５％ｗ／ｖの間のスクロース濃度で変化しなかった。粒子サイズは、１０％ｗ／ｖのスクロース濃度で有意に高く、したがって、薬物負荷はより高かった。しかしながら、このスクロース濃度での薬物封入の低下は、より大きなリポソームからの薬物の漏出を示唆している。

さらに別の実験において、本発明者らは、薬物負荷パラメータおよび粒子サイズ分布に対する３．４２％ｗ／ｖのスクロース緩衝液のｐＨの影響を試験し、例示的な結果を表１８に示す。注目すべきことに、スクロース緩衝液のｐＨを１．０から５．５の範囲で変更することによって、薬物負荷パラメータに有意差は認められなかった。しかしながら、薬物負荷パラメータは、特にＴＦＦプロセス後、ｐＨ７．５で有意に低下した。実際、バンコマイシンについては、以下のｐＫａ値が注目された：ｐＫａ_１＝２．６；ｐＫａ_２＝７．２；ｐＫａ_３＝８．６；ｐＫａ_４＝９．６；ｐＫａ_５＝１０．５；ｐＫａ_６＝１１．７。結果として、ｐＨ７．５での低下は、リポソームの表面への、このｐＨでのイオン化していない形態のバンコマイシンの吸着に起因する可能性がある。図２に示されるように、粒子サイズは、スクロース緩衝液の他の任意のｐＨで観察されたものと比較して、ｐＨ２．６５でより低かった。

上記のデータを使用して、Ｃ－１４およびＣ－１６脂質の組み合わせを有するリポソームを調製し、ＴＦＦに供して、より良好な薬物負荷特徴を有するように製剤を最適化し、例示的な結果を表１９に示す。

データから分かるように、４４モル％のＣ－１４脂質および２０モル％のＣ－１６脂質を含み、３５モル％のコレステロールおよび１モル％のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を含むリポソームは、他の組成と比較して、より良好な負荷パラメータおよび粒子サイズ分布を示した。上記のデータおよび研究に基づき、２つのリポソーム組成物－１つはＣ－１４（６４ｍｏｌ％）脂質、コレステロール（３５ｍｏｌ％）およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（１ｍｏｌ％）を含み、もう１つはＣ－１４（４４ｍｏｌ％）およびＣ－１６（２０ｍｏｌ％）の脂質の組み合わせ、コレステロール（３５ｍｏｌ％）およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（１ｍｏｌ％）を含む、は、望ましい粒子サイズ分布で、より高い薬物負荷パラメータを示した。表２０は、追加のインビトロおよびインビボ実験でさらに試験した、例示的なバンコマイシンリポソーム組成物を示している。

「リポソーム１」組成中のリポソームは、総脂質１ｍｇあたり０．８７ｍｇのバンコマイシンの負荷、および以下の粒子サイズ分布を有した：１４３ｎｍ（Ｄ_１０において）、２４９ｎｍ（Ｄ_５０において）、および４５０ｎｍ（Ｄ_９０において）。「リポソーム２」組成中のリポソームは、総脂質１ｍｇあたり０．５６ｍｇのバンコマイシンの負荷、および以下の粒子サイズ分布を有した：１４３ｎｍ（Ｄ_１０において）、２４９ｎｍ（Ｄ_５０において）、および４５０ｎｍ（Ｄ_９０において）。

上記の２つのバンコマイシンリポソーム組成物のインビトロ薬物漏出挙動が試験され、図３は例示的な結果を示している。容易に明らかなように、少なくとも２４時間にわたって有意な薬物漏出は観察されなかった。対照群のバンコマイシン溶液と比較して、両方のリポソーム製剤は、ＰＢＳ中、３７℃で２４時間にわたって明らかな薬物漏出を示さなかった。加えて、試験された両方の製剤は、１週間、２－８℃で、薬物負荷パラメータおよび粒子サイズ分布のいかなる変化もなく、安定であった。両方の組成物中のリポソームの平均粒子サイズは約２３０ｎｍであった。

薬物動態研究：

上記の２つのリポソーム製剤をラットモデルで試験し、例示的な結果を図４および図５に示す。以下のグラフおよび表２１から容易に分かるように、リポソーム製剤は、血清半減期を有意に増加させ、曝露およびＣ_ｍａｘの有意な増加が観察され（図４、表２１）、そしてクリアランスはすべての製剤について線形であり、これは腎経路を示している（図５）。したがって、バンコマイシンは長期間利用可能であり、より低頻度の投与が可能である。

毒性研究：

リポソーム製剤の毒性を評価するために、ラットに１５０ｍｇ／ｋｇの試験製剤を５日間毎日投与した。これは、ヒト投与の用量では約１０倍（通常１ｇ）である。これらの実験のために、リポソーム１およびリポソーム２が使用され、上記の表２０に記載されるような組成を有していた。

腎臓損傷の評価項目は、尿中バイオマーカー（ＫＩＭ－１、クラステリン、オステオポンチン）、血漿バイオマーカー（クレアチニン）、および腎臓の病理組織学的所見であった。動物実験の一般的なフローチャートを図６に示す。ここで、血液採取を総量２ｍＬで実施し、臨床化学サンプルを、投薬前、３日目、および５日目（それぞれ０．２５ｍＬ）に採取し、薬物動態サンプルを、１日目（０．１２５ｍＬの４サンプル）、３日目（０．１２５ｍＬの４サンプル）、および５日目（０．１２５ｍＬの２サンプル）に採取した。各動物について、安楽死の時に、腎臓をホルマリン固定し、液体窒素で急速冷凍した。当技術分野で周知の標準的な手順を使用して、病理組織学的等級付けのためにサンプルを分析した。

本明細書に提示されるような、バンコマイシンおよび選択された製剤の毎日の投薬の例示的な薬物動態の結果を図７に示す。図７のグラフから容易に分かるように、本発明の主題によるリポソーム製剤は、バンコマイシン自体が投与されたものと比較して、有意に高いＣ_ｍａｘおよびＡＵＣを達成した。さらに、リポソーム製剤はまた、実質的により高いＴ_１／２および有意に減少したクリアランスを示した。図７をさらに参照すると、バンコマイシン半減期は、Ｃ_ｍａｘの７ー１２倍の増加とともに２．７－４．５倍増加した。バンコマイシン（ＡＵＣ）の曝露は、バンコマイシン単独投与と比較して、リポソーム製剤において３３－７１倍増加したが、体循環からのバンコマイシンのクリアランスは、７８倍減少した。

したがって、バンコマイシンを本明細書に提示されるようなリポソーム製剤に封入する場合、Ｃ_ｍａｘを、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、あるいはそれ以上に増加させることができ、一方、ＡＵＣによって測定される曝露を、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍増加させることができ、一方、Ｔ_１／２は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍、またはそれ以上増加させることができる。

選択された尿中マーカーについて、さらなる例示的な結果を、図８に示す。ここでは、マーカーは、ＫＩＭ－１、クラステリン、およびオステオポンチン（ＯＰＮ）を含んでいた。グラフから容易に明らかなように、生理食塩水対照群および空のリポソーム群ではマーカーの有意な上昇はなかったが、バンコマイシン治療群は全てのマーカーの有意な上昇を示した。他方、本発明の主題によるリポソーム組成物が使用された、両方の治療群において、マーカーは実質的に変化しないままであるか、または対照に対してやや上昇しただけであった。

実際、これらおよび他の実験に基づいて（データは示されていない）、本発明者らは、バンコマイシン製剤の腎毒性を、本明細書に提示されるようにバンコマイシンをリポソーム中に封入することによって低減できることを企図する。このように封入されたバンコマイシンは、等量の非リポソーム化バンコマイシンの投与と比較して、腎毒性を著しく減少させた。例えば、腎毒性の尿中バイオマーカーに基づいて腎毒性を分析した場合、これらの損傷に関連するバイオマーカーの劇的な減少を観察することができる。例えば、尿中バイオマーカーの典型的な減少（定量化されたマーカーの減少の百分率によって測定される）は、しばしば少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、またはそれより高い率である。場合によっては、偽薬（空のリポソーム）またはビヒクル対照群に対して統計的に有意な差は観察されないであろう。したがって、尿中バイオマーカーによって測定される腎毒性の典型的な減少は、１０－３０％の間の、または２０－４０％の間の、または３０－６０％の間の、または５０－８０％の間の、または７０－９０％の間の、およびさらにより高い範囲でありうる。

これらの結果は、様々な治療群の病理組織学的所見にも反映されていた。より具体的には、バンコマイシンを投与した群において、バンコマイシン腎損傷と一致する有意な近位尿細管細胞損傷および修復が観察された。他方、本明細書に示されるようなリポソーム製剤（リポソーム１および２）を投与する治療群において、糸球体変化は、メサンギウム拡大および毛細血管内泡沫細胞（脂質を持ったマクロファージ）を含み、これは腎脂質過負荷と一致する。リポソーム偽薬群は、メサンギウム拡大を伴うまたは伴わない糸球体カプセルの尿空間における泡状の最小染色物質を含む糸球体変化を示したが、生理食塩水対照群では、病理学的変化は観察されなかった。

したがって、そして異なる視点から見た場合、腎毒性の減少は、尿細管細胞損傷などの１つ以上の病理組織学的所見の重症度および発生率または頻度の低下によって定量化することができる。同じ投与量で与えられる非リポソーム化バンコマイシン対照群と比較したそのような減少は、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、またはさらにより高い率でありうる。場合によっては、偽薬（空のリポソーム）またはビヒクル対照群に対して統計的に有意な差は観察されないであろう。したがって、病理組織学的所見によって測定される腎毒性の典型的な減少は、１０－３０％の間の、または２０－４０％の間、または３０－６０％の間、または５０－８０％の間、または７０－９０％の間、およびさらにより高い範囲でありうる。

これらの結果に基づいて、企図されたリポソーム製剤は、バンコマイシン治療による近位尿細管損傷の初期バイオマーカーの著しい減少を有したこと、およびバンコマイシンのリポソーム封入は、バンコマイシンによる腎臓の観察された組織病理学的変化をもたらさなかったことを理解されたい。したがって、本明細書に示されるリポソーム製剤は、バンコマイシン誘発性腎毒性を劇的に減少させる（バンコマイシン誘発性近位尿細管損傷の、＞５０％減少）ことを認識すべきである。

本明細書の説明および以下の特許請求の範囲全体で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」の意味は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数の言及を含む。また、本明細書の説明で使用される場合、「ｉｎ」の意味は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、「ｉｎ」および「ｏｎ」を含む。

いくつかの実施形態では、本発明の特定の実施形態を説明および主張するために使用される、成分の量、濃度、反応条件などの特性を表す数字は、場合によっては「約（ａｂｏｕｔ）」という用語によって変更されると理解されるべきである。したがって、いくつかの実施形態では、書面による説明および添付の特許請求の範囲に記述されている数値パラメータは、特定の実施形態によってえられることが求められる所望の特性に応じて変化しうる近似値である。さらに、用語「約（ａｂｏｕｔ）」が数字と組み合わせて使用される場合、その数字±１０％の範囲（両端を含む）が企図される。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された有効桁数に照らして、そして通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。本発明のいくつかの実施形態の広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示される数値は、実行可能な限り正確に報告される。本発明のいくつかの実施形態で示される数値は、それらのそれぞれの試験測定で見出される標準偏差に必然的に起因する特定の誤差を含みうる。

しかしながら、当業者には、本明細書の本発明の概念から逸脱することなく、すでに説明したもの以外のさらに多くの修正が可能であることは明らかであるはずである。したがって、本発明の主題は、本開示の精神を除いて制限されるべきではない。当業者は、本発明の実施において使用されうる、本明細書に記載されたものと類似または同等の多くの方法および材料を認識するであろう。実際、本発明は、記載された方法および材料に決して限定されない。

さらに、開示を解釈する際に、すべての用語は、文脈と一致する可能な限り広い方法で解釈されるべきである。特に、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、非排他的な方法で要素、構成要素、またはステップを言及し、言及された要素、構成要素、またはステップが存在し、または利用されうることを示し、または明示的に言及されていない他の要素、構成要素、またはステップと組み合わされるものとして解釈されるべきである。

（付記）
（付記１）
水溶液中に配置されている、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含み、
前記リポソームは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、かつ前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含む、
バンコマイシンリポソーム組成物。

（付記２)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記３)
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記４)
前記水溶液は、浸透圧調整剤を含む、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記５)
前記浸透圧調整剤は、スクロースである、付記４に記載のリポソーム組成物。

（付記６)
前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記７)
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記８)
前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記９)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を含む、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１０)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分を含む、付記１から９のいずれか１つに記載のリポソーム組成物。

（付記１１)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１２)
前記リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含む、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１３)
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１４)
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１５)
前記バンコマイシンは、１－１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で前記組成物中に存在する、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１６)
前記リポソームの薬物負荷は、総脂質１ｍｇあたり少なくともバンコマイシン５５ｍｇである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１７)
前記リポソームの薬物負荷は、総脂質１ｍｇあたり少なくともバンコマイシン８０ｍｇである、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１８)
前記組成物は、注射用に製剤される、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記１９)
前記組成物のエタノール濃度は、０．０５％（ｖ／ｖ）以下である、付記１に記載のリポソーム組成物。

（付記２０)
本質的に、
水溶液中に配置されている、バンコマイシンを封入している複数のリポソーム、
からなり、
前記リポソームは、第１の脂質成分として１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、任意の第２の脂質成分として１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドとして１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンを含む、
からなるバンコマイシンリポソーム組成物。

（付記２１)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２２)
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２３)
前記水溶液は、浸透圧調整剤を含む、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２４)
前記１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を有する、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２５)
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２６)
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２７)
前記バンコマイシンは、１－１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２８)
注射用に製剤化される、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記２９)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_９０で４００－４５０ｎｍ±１５ｎｍである、付記２０に記載のリポソーム組成物。

（付記３０)
第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む脂質アルコール溶液を調製すること、
バンコマイシン水溶液を調製すること、
静的ミキサーを備えるマイクロ流体チャネル内で、前記脂質アルコール溶液を前記バンコマイシン水溶液と、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含む生成物を形成する流速で、混合すること、および、
アルコールおよび封入されていないバンコマイシンを除去するために前記生成物を接線流濾過または透析に供すること、
を含むバンコマイシンリポソーム組成物を製造する方法。

（付記３１)
接線流濾過または透析の工程は、浸透圧調整剤を含む水溶液を用いて行われる、付記３０に記載の方法。

（付記３２)
前記浸透圧調整剤は、スクロースである、付記３１に記載の方法。

（付記３３)
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、付記３１に記載の方法。

（付記３４)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、付記３０に記載の方法。

（付記３５)
前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む、付記３０に記載の方法。

（付記３６)
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記３０に記載の方法。

（付記３７)
前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記３０に記載の方法。

（付記３８)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を含む、付記３０に記載の方法。

（付記３９)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分を含む、付記３０に記載の方法。

（付記４０)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンである、付記３０に記載の方法。

（付記４１)
前記リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含む、付記３０に記載の方法。

（付記４２)
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、付記３０に記載の方法。

（付記４３)
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、付記３０に記載の方法。

（付記４４)
前記脂質アルコール溶液は、エタノールを含む、付記３０に記載の方法。

（付記４５)
バンコマイシン製剤の腎毒性を減少させる方法であって、
前記バンコマイシンを第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含むリポソーム中に封入することを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含む、
方法。

（付記４６)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、付記４５に記載の方法。

（付記４７)
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、および／または前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記４５に記載の方法。

（付記４８)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である、付記４５に記載の方法。

（付記４９)
前記腎毒性の減少は、同量の非リポソーム化バンコマイシンの投与と比較した腎毒性を示す、尿中バイオマーカーの減少によって測定される、付記４５に記載の方法。

（付記５０)
前記腎毒性の減少は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも１０％の減少である、付記４９に記載の方法。

（付記５１)
前記腎毒性の減少は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも３０％の減少である、付記４９に記載の方法。

（付記５２)
前記減少した腎毒性は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも５０％の減少である、付記４９に記載の方法。

（付記５３)
前記尿中バイオマーカーは、ＫＩＭ－１またはクラステリンである、付記４９～５２のいずれか１つに記載の方法。

（付記５４)
前記減少した腎毒性は、組織病理学的マーカーを使用して決定される、付記４５に記載の方法。

（付記５５)
前記組織病理学的マーカーは、尿細管細胞損傷である、付記５４に記載の方法。

（付記５６)
バンコマイシンの薬物動態パラメータを増加させる方法であって、
前記バンコマイシンを、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含むリポソーム中に封入することを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含み、
前記薬物動態パラメータは、血清中のバンコマイシンの最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）、経時的な血清中のバンコマイシン濃度（ＡＵＣ）、およびバンコマイシンの血清の半減期（Ｔ_１／２）からなる群から選択される、
方法。

（付記５７)
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、付記５６に記載の方法。

（付記５８)
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、および／または前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、付記５６に記載の方法。

（付記５９)
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である、付記５６に記載の方法。

（付記６０)
Ｃ_ｍａｘは、少なくとも５倍増加する、付記５６に記載の方法。

（付記６１)
Ｃ_ｍａｘは、少なくとも１０倍増加する、付記５６に記載の方法。

（付記６２)
ＡＵＣは、少なくとも３０倍増加する、付記５６に記載の方法。

（付記６３)
ＡＵＣは、少なくとも６０倍増加する、付記５６に記載の方法。

（付記６４)
Ｔ_１／２は、少なくとも２倍増加する、付記５６に記載の方法。

（付記６５)
Ｔ_１／２は、少なくとも４倍増加する、付記５６に記載の方法。

Claims

水溶液中に配置されている、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含み、
前記リポソームは、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、かつ前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含む、
バンコマイシンリポソーム組成物。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記水溶液は、浸透圧調整剤を含む、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記浸透圧調整剤は、スクロースである、請求項４に記載のリポソーム組成物。
前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を含む、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分を含む、請求項１から９のいずれか１項に記載のリポソーム組成物。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含む、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記バンコマイシンは、１－１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で前記組成物中に存在する、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記リポソームの薬物負荷は、総脂質１ｍｇあたり少なくともバンコマイシン５５ｍｇである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記リポソームの薬物負荷は、総脂質１ｍｇあたり少なくともバンコマイシン８０ｍｇである、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記組成物は、注射用に製剤化される、請求項１に記載のリポソーム組成物。
前記組成物のエタノール濃度は、０．０５％（ｖ／ｖ）以下である、請求項１に記載のリポソーム組成物。
本質的に、
水溶液中に配置されている、バンコマイシンを封入している複数のリポソーム、
からなり、
前記リポソームは、第１の脂質成分として１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、任意の第２の脂質成分として１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドとして１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンを含む、
バンコマイシンリポソーム組成物。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記水溶液は、浸透圧調整剤を含む、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を有する、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記バンコマイシンは、１－１０ｍｇ／ｍｌの間の濃度で存在する、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
注射用に製剤化される、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_９０で４００－４５０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項２０に記載のリポソーム組成物。
第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含む脂質アルコール溶液を調製すること、
バンコマイシン水溶液を調製すること、
静的ミキサーを備えるマイクロ流体チャネル内で、前記脂質アルコール溶液を前記バンコマイシン水溶液と、バンコマイシンを封入している複数のリポソームを含む生成物を形成する流速で、混合すること、および、
アルコールおよび封入されていないバンコマイシンを除去するために前記生成物を接線流濾過または透析に供すること、
を含むバンコマイシンリポソーム組成物を製造する方法。
接線流濾過または透析の工程は、浸透圧調整剤を含む水溶液を用いて行われる、請求項３０に記載の方法。
前記浸透圧調整剤は、スクロースである、請求項３１に記載の方法。
前記水溶液のｐＨは、ｐＨ５．５以下である、請求項３１に記載の方法。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項３０に記載の方法。
前記第１および／または前記第２の脂質成分は、ホスファチジルコリン部分を含む、請求項３０に記載の方法。
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項３０に記載の方法。
前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項３０に記載の方法。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、分子量２０００±２００のＰＥＧ鎖を含む、請求項３０に記載の方法。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、少なくとも１つのＣ１４：０脂肪酸部分を含む、請求項３０に記載の方法。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンである、請求項３０に記載の方法。
前記リポソームは、前記第１および前記第２の脂質成分を含む、請求項３０に記載の方法。
前記第１および第２の脂質成分対コレステロールの比は、３．０：１および３．４：１の間である、請求項３０に記載の方法。
前記第１および第２の脂質成分対前記ＰＥＧ化ジグリセリドの比は、１０：１および２０：１の間である、請求項３０に記載の方法。
前記脂質アルコール溶液は、エタノールを含む、請求項３０に記載の方法。
バンコマイシン製剤の腎毒性を減少させる方法であって、
前記バンコマイシンを第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含むリポソーム中に封入することを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含む、
方法。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項４５に記載の方法。
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、および／または前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項４５に記載の方法。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である、請求項４５に記載の方法。
前記腎毒性の減少は、同量の非リポソーム化バンコマイシンの投与と比較した腎毒性を示す、尿中バイオマーカーの減少によって測定される、請求項４５に記載の方法。
前記腎毒性の減少は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも１０％の減少である、請求項４９に記載の方法。
前記腎毒性の減少は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも３０％の減少である、請求項４９に記載の方法。
前記腎毒性の減少は、前記尿中バイオマーカーの測定値の少なくとも５０％の減少である、請求項４９に記載の方法。
前記尿中バイオマーカーは、ＫＩＭ－１またはクラステリンである、請求項４９～５２のいずれか１項に記載の方法。
前記減少した腎毒性は、組織病理学的マーカーを使用して決定される、請求項４５に記載の方法。
前記組織病理学的マーカーは、尿細管細胞損傷である、請求項５４に記載の方法。
バンコマイシンの薬物動態パラメータを増加させる方法であって、
前記バンコマイシンを、第１の脂質成分、任意の第２の脂質成分、コレステロール、およびＰＥＧ化ジグリセリドを含むリポソーム中に封入することを含み、
前記第１の脂質成分は、Ｃ１４：０脂肪酸部分を含み、前記第２の脂質成分は、Ｃ１６：０脂肪酸部分を含み、
前記薬物動態パラメータは、血清中のバンコマイシンの最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）、経時的な血清中のバンコマイシン濃度（ＡＵＣ）、およびバンコマイシンの血清の半減期（Ｔ_１／２）からなる群から選択される、
方法。
前記リポソームの粒子サイズは、Ｄ_５０で２４０ｎｍ±１５ｎｍである、請求項５６に記載の方法。
前記第１の脂質成分は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンであり、および／または前記第２の脂質成分は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンである、請求項５６に記載の方法。
前記ＰＥＧ化ジグリセリドは、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレンであり、前記ＰＥＧ化ジグリセリド中のＰＥＧ鎖の分子量は、２０００±２００である、請求項５６に記載の方法。
Ｃ_ｍａｘは、少なくとも５倍増加する、請求項５６に記載の方法。
Ｃ_ｍａｘは、少なくとも１０倍増加する、請求項５６に記載の方法。
ＡＵＣは、少なくとも３０倍増加する、請求項５６に記載の方法。
ＡＵＣは、少なくとも６０倍増加する、請求項５６に記載の方法。
Ｔ_１／２は、少なくとも２倍増加する、請求項５６に記載の方法。
Ｔ_１／２は、少なくとも４倍増加する、請求項５６に記載の方法。