JP2022533220A - ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製するための方法 - Google Patents
ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022533220A JP2022533220A JP2021569002A JP2021569002A JP2022533220A JP 2022533220 A JP2022533220 A JP 2022533220A JP 2021569002 A JP2021569002 A JP 2021569002A JP 2021569002 A JP2021569002 A JP 2021569002A JP 2022533220 A JP2022533220 A JP 2022533220A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- galnac
- protecting group
- phosphoramidite
- amine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- -1 GalNAc Phosphoramide Epimers Chemical class 0.000 title claims abstract description 60
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 34
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 21
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 25
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 17
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 claims description 16
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 14
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 12
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tripropyl-1,3,5,2$l^{5},4$l^{5},6$l^{5}-trioxatriphosphinane 2,4,6-trioxide Chemical group CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 11
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 9
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 9
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 claims description 8
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 7
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000004916 (C1-C6) alkylcarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 150000005619 secondary aliphatic amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- NLJMDXRARKRVIB-UHFFFAOYSA-N 2-diaminophosphanyloxypropane Chemical compound CC(C)OP(N)N NLJMDXRARKRVIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 53
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 13
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 125000005825 oxyethoxy group Chemical group [H]C([H])(O[*:1])C([H])([H])O[*:2] 0.000 description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 8
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 8
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 8
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 8
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 7
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N hexanamide Chemical compound CCCCCC(N)=O ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 125000006633 tert-butoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 4
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003820 Medium-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YQVISGXICTVSDQ-UHFFFAOYSA-O [c-]1nn[nH]n1.CC(C)[NH2+]C(C)C Chemical compound [c-]1nn[nH]n1.CC(C)[NH2+]C(C)C YQVISGXICTVSDQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 3
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 3
- XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-4,5-dicarbonitrile Chemical compound N#CC=1N=CNC=1C#N XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 3-bis[di(propan-2-yl)amino]phosphanyloxypropanenitrile Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(N(C(C)C)C(C)C)OCCC#N RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GXGKKIPUFAHZIZ-UHFFFAOYSA-N 5-benzylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound C=1C=CC=CC=1CSC=1N=NNN=1 GXGKKIPUFAHZIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004517 catalytic hydrocracking Methods 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000000061 phosphanyl group Chemical group [H]P([H])* 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N sulfonic acid Chemical compound OS(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 1,1-dioxo-1$l^{6},2-benzodithiol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)SS(=O)(=O)C2=C1 JUDOLRSMWHVKGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropan-1-one Chemical group CC(C)(C)[C]=O YQTCQNIPQMJNTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FRIBMENBGGCKPD-UHFFFAOYSA-N 3-(2,3-dimethoxyphenyl)prop-2-enal Chemical compound COC1=CC=CC(C=CC=O)=C1OC FRIBMENBGGCKPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDHHCRXETZPXIM-UHFFFAOYSA-N 3-aminodithiazolidine-5-thione Chemical compound NN1SSC(C1)=S QDHHCRXETZPXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- UZOFELREXGAFOI-UHFFFAOYSA-N 4-methylpiperidine Chemical compound CC1CCNCC1 UZOFELREXGAFOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWZHEXZIISFIDA-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1,2,4-dithiazole-3-thione Chemical compound NC1=NC(=S)SS1 YWZHEXZIISFIDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZIJZXUDFRSADE-UHFFFAOYSA-N 5-ethoxy-1,2,4-dithiazol-3-one Chemical compound CCOC1=NC(=O)SS1 RZIJZXUDFRSADE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 5-ethylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound CCSC=1N=NNN=1 GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- CNKIOLVIBAZABE-UHFFFAOYSA-N carbamic acid;n-ethylethanamine Chemical compound NC([O-])=O.CC[NH2+]CC CNKIOLVIBAZABE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N ethanol etoh Chemical compound CCO.CCO OCLXJTCGWSSVOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N meoh methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=NC=C1 PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- HGPWSFNGQIFXOV-UHFFFAOYSA-N propan-2-yloxyphosphonamidous acid Chemical compound CC(C)OP(N)O HGPWSFNGQIFXOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000037 tert-butyldiphenylsilyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[Si]([H])([*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000005500 uronium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/08—Polyoxyalkylene derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本発明は、式（Ｉ）のＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマー（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ保護基であり、ｎは、０～１０の整数であり、ｍは、０～２０の整数である）、その対応するエナンチオマーおよび／または光学異性体を調製するための方法、ならびにＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製のための該方法の使用を含む。TIFF2022533220000061.tif89146
Description
本発明は、式Ｉのエピマー的に純粋なＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマー
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ保護基であり、ｎは、０～１０の整数であり、ｍは、０～２０の整数である）、その対応するエナンチオマーおよび／または光学異性体を調製するための新規な方法に関する。
式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトは、ＧａｌＮＡｃ部分を含むコンジュゲートの標的化部分である、ＧａｌＮＡｃ部分を有する。ＧａｌＮＡｃ部分は、肝臓細胞上に位置するアシアロ糖タンパク質受容体に対するその親和性に起因して、肝臓細胞へのオリゴヌクレオチドコンジュゲートの機能的送達を可能にする。そのようなＧａｌＮＡｃクラスターコンジュゲートは、薬物動態モジュレーターとして作用する可能性を有し、したがって、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ第２０１７／０８４９８７号（特許文献１）に記載されるような治療的に価値のある化合物である。
ＧａｌＮＡｃ部分とホスホラミダイトの固有な組み合わせに起因して、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトは、固相オリゴヌクレオチド合成において、ヌクレオシドビルディングブロックと一緒にビルディングブロックとして直接的に導入することができる。したがって、ＧａｌＮＡｃ部分を導入するための別個のコンジュゲーション工程を、回避することができる。
ＰＣＴ公開ＷＯ第２０１７／０８４９８７号（特許文献１）に記載される現在の方法によると、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトは、
ａ）式ＡのＧａｌＮＡｃ酸誘導体
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ保護基であり、ｎは、０～１０の整数である）と、
式ＩＶのアミン
（式中、Ｒ３は、ヒドロキシ保護基であり、ｍは、０～２０の整数である）との反応によって、式Ｃのアミド
（式中、Ｒ１、Ｒ３、ｎ、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｂ）ヒドロキシ保護基Ｒ３の除去により、式ＤのＧａｌＮＡｃアミド
（式中、Ｒ１、ｎ、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｃ）式ＤのＧａｌＮＡｃアミドと、ホスホロアミデート化剤との反応により、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイト誘導体を形成することと
によって調製することができる。
ａ）式ＡのＧａｌＮＡｃ酸誘導体
式ＩＶのアミン
ｂ）ヒドロキシ保護基Ｒ３の除去により、式ＤのＧａｌＮＡｃアミド
ｃ）式ＤのＧａｌＮＡｃアミドと、ホスホロアミデート化剤との反応により、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイト誘導体を形成することと
によって調製することができる。
この方法は、カップリング工程ａ）において、指定のキラル中心（以下の式Ｉにおける矢印）でラセミ化をもたらすことが見出された。
したがって、本発明の目的は、エピマー的に純粋な形態で、ビルディングブロックを生成するための新規な方法を提供することであった。
この目的は、式Ｉのエピマー的に純粋なＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製する新規な方法であって、
ａ）式ＩＩの化合物
（式中、Ｒ３は、ヒドロキシ保護基であり、ｍは、上述の通りである）、またはその塩を、
式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分
（式中、Ｒ１およびｎは、上述の通りである）とカップリングして、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミド
（式中、Ｒ１、Ｒ３、ｎ、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｂ）ヒドロキシル保護基Ｒ３を除去して、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを形成することと、
ｃ）式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを、ホスホロアミデート化剤と反応させて、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを形成することと
を含む、方法によって達成することができる。
ａ）式ＩＩの化合物
式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分
ｂ）ヒドロキシル保護基Ｒ３を除去して、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを形成することと、
ｃ）式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを、ホスホロアミデート化剤と反応させて、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを形成することと
を含む、方法によって達成することができる。
以下の定義は、本明細書において本発明を説明するための使用される様々な用語の意味および範囲を例示し、定義するために記載されている。
キラル炭素が化学構造内に存在する場合は常に、そのキラル炭素と関連するすべての立体異性体が、純粋な立体異性体ならびにその混合物として、その構造によって包含されることが意図される。
エピマーという用語は、立体異性体の対のうちの一方を指し、ここで、異性体は、１つの不斉中心のみにおいて構造が異なり、分子内のすべての他の立体中心は同じである。
「Ｃ１－１２－アルキル」という用語は、１～１２個の炭素原子の一価の直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を指し、「Ｃ１－６－アルキル」という用語は、１～６個の炭素原子の一価の直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を指す。
「Ｃ１－１２－アルキル」または「Ｃ１－６－アルキル」の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ならびにペンチルおよびヘキシルがその異性体とともに挙げられる。
「アシル」という用語は、アルキル基に連結されたカルボニル基を指す。この用語は、具体的には、Ｃ１－１２－アルキルカルボニル基、より具体的には、Ｃ１－６－アルキルカルボニル基を表し、これは、Ｃ１－６－アルキルによって置換されていてもよく、またはフェニルによって置換されていてもよい。アシル基の例としては、アセチル、ピバロイル、またはベンゾイルがある。フェニルと置換されていてもよいものとしては、ハロゲン、例えば、塩素、臭素、またはヨウ素、または上記に定義されているＣ１－６－アルキル基がある。アシルは、好ましくは、アセチルを表す。
「ヒドロキシ保護基」という用語は、ヒドロキシ基を保護することが意図される基を指し、これには、エステルおよびエーテル形成基、具体的には、テトラヒドロピラニル、アシル（例えば、ベンゾイル、アセチル、カルバモイル）、ベンジル、およびシリルエーテル（例えば、ＴＢＳ、ＴＢＤＰＳ）基が挙げられる。これらの基のさらなる例は、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991, chapters 2-3、E. Haslam, “Protective Groups in Organic Chemistry”, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, NY, 1973, Chapter 5、およびT.W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981に見出される。
「アミノ保護基」という用語は、アミノ基を保護することが意図される基を指し、これには、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、カルボベンジルオキシ（ＣＢＺもしくはＺ）、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ｐ－メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、およびトリフルオロアセチルが挙げられる。これらの基のさらなる例は、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2nd ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, 1991, chapters 7、E. Haslam, “Protective Groups in Organic Chemistry”, J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, NY, 1973, Chapter 5、およびT.W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley and Sons, New York, NY, 1981に見出される。
式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーは、好ましくは、Ｒ１が、Ｃ１－６－アルキルまたはフェニルで置換されていてもよいＣ１－６－アルキルカルボニル基であり、ｎが、０～５の整数であり、ｍが、０～１０の整数であるものであり、より好ましくは、Ｒ１がアセチルであり、ｎが２であり、ｍが５であるものである。
より好ましい実施形態において、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーは、式Ｉｂ～Ｉｅの化合物を含む。
式ＩｂおよびＩｃのエピマーが、さらにより好ましい。
工程ａ）
工程ａ）は、式ＩＩの化合物またはその塩の、式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分とのカップリングにより、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドを形成することによって特徴づけられる。
工程ａ）は、式ＩＩの化合物またはその塩の、式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分とのカップリングにより、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドを形成することによって特徴づけられる。
式ＩＩの化合物またはその塩は、
ａ１）式Ｖのリジン化合物
（式中、Ｒ２およびＲ４は、アミノ保護基である）を、式ＶＩのアミン
（式中、Ｒ３は、ヒドロキシル保護基であり、ｍは、上述の通りである）とカップリングして、
式ＶＩＩのカルボキサミド
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｂ１）アミノ保護基Ｒ４を除去して、式ＶＩＩＩのアミン
（式中、Ｒ２およびＲ３およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｃ１）式ＶＩＩＩのアミンを、アミノ基が保護されたリジンとカップリングして、式ＩＸのジペプチド
（式中、Ｒ２およびＲ３およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｄ１）アミノ保護基Ｒ２を除去して、式ＩＩの化合物を形成することと
によって調製することができる。
ａ１）式Ｖのリジン化合物
式ＶＩＩのカルボキサミド
ｂ１）アミノ保護基Ｒ４を除去して、式ＶＩＩＩのアミン
ｃ１）式ＶＩＩＩのアミンを、アミノ基が保護されたリジンとカップリングして、式ＩＸのジペプチド
ｄ１）アミノ保護基Ｒ２を除去して、式ＩＩの化合物を形成することと
によって調製することができる。
好ましい実施形態において、カップリング工程ａ１）およびｃ１）は、ペプチドカップリング剤、アミン塩基、および有機溶媒の存在下において行われる。
カップリングは、カルボジイミドカップリング剤、例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド）もしくはＥＤＣ（Ｎ－（Ｎ’’，Ｎ’’－ジメチルアミノプロピル－Ｎ’－エチルカルボジイミド）を、ＨＯＢｔ（１－ヒドロキシベンズトリアゾール）もしくはＨＯＳｕ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）、ＴＢＴＵ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、もしくはＨＯＡｔ（１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール、およびこれらの一般的な組み合わせ、例えば、ＴＢＴＵ／ＨＯＢｔまたはＨＢＴＵ／ＨＯＡｔなどの添加剤ありまたはなしで使用し、当業者に既知の古典的な方法に従い得る。
好ましい実施形態において、ｎ－プロピルホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）が、カップリング剤として、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、またはＮ－ジイソプロピルエチルアミンなどであるが、好ましくはＮ－ジイソプロピルエチルアミンである、アミン塩基としての第三級アミンとともに選択される。
カップリング反応は、通常、極性非プロトン性溶媒、例えば、アセトニトリル、酢酸エチル、もしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの混合物において、２０℃～７０℃の範囲、好ましくは２０℃～４０℃の範囲の反応温度で行われる。
カップリング工程ａ１）およびｃ１）による生成物は、当業者に既知の方法を適用して、例えば、有機相の洗浄およびそれに続くエバポレーションによる溶媒の除去によって、反応混合物の有機層から得ることができる。
アミノ保護基Ｒ４は、典型的に、塩基性条件下において切断可能なアミノ保護基である。ＦＭＯＣが、もっとも好ましいアミノ保護基である。塩基性条件は原則として、有機溶媒の存在下における、第二級脂肪族アミン、例えば、ピペリジン、４－メチルピペリジン、ピロリジン、またはジエチルアミンでの、しかし好ましくはジエチルアミンでの、処理を含む。好適な溶媒は、極性非プロトン性溶媒、例えば、アセトニトリルもしくはテトラヒドロフラン、またはこれらの混合物である。
アミノ保護基Ｒ２は、典型的に、酸性条件下において切断可能なアミノ保護基、好ましくはｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）である。
アミノ保護基Ｒ２の除去は、したがって、極性非プロトン性溶媒、例えば、アセトニトリル中で、例えば、塩酸、トリフルオロ酢酸、スルホン酸、例えば、ｐ－トルエンスルホン酸またはメタンスルホン酸から選択される好適な酸を用いて行われ得る。
好ましい実施形態において、メタンスルホン酸が適用される。
酸性処理により、それぞれの酸との式ＩＸのジペプチドの三アンモニウム塩が形成され、好ましい実施形態については、メタンスルホン酸との式ＩＸのジペプチドの三アンモニウム塩が形成される。
式ＩＸのジペプチドの三アンモニウム塩は、当業者に既知の方法、例えば、結晶化を適用することによって単離することができるか、または工程ｂ）において式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分とのカップリングに直接的に適用される。
式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分は、ＰＣＴ国際公開ＷＯ第２０１７／０８４９８７号における開示に従って、特に、その実施例７に従って、調製することができる。
式ＩＩの化合物またはその塩、例えば、式ＩＸのジペプチドの三アンモニウム塩の、式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分との最終的なカップリングは、上述のカップリング条件下において行うことができる。また、上記で報告された好ましい反応条件を、このカップリング反応に適用することができる。
式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドは、逆相クロマトグラフィーによってさらに精製することができ、生成物を含有する画分を、例えば、凍結乾燥させて、精製された式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドを得ることができる。
工程ｂ）
工程ｂ）は、ヒドロキシル保護基Ｒ３の除去により、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを形成することを必要とする。
工程ｂ）は、ヒドロキシル保護基Ｒ３の除去により、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを形成することを必要とする。
除去条件を、ヒドロキシ保護基Ｒ３は切断されるがヒドロキシ保護基Ｒ１は影響を受けないように選択することができるように、ヒドロキシ保護基Ｒ３がヒドロキシ保護基Ｒ１とは化学的に異なることが重要である。
好適なヒドロキシ保護基Ｒ３は、ハロゲンもしくはＣ１－６－アルキルで置換されていてもよいベンジルであるか、またはベンズヒドリルもしくはトリチル、すなわち、水素化分解によって切断することができる基である。
好ましい実施形態において、Ｒ３は、ベンジルであり、水素化分解は、好適な水素化触媒の存在下における水素による接触水素化である。
ベンジル基の除去に好適な水素化触媒は、パラジウム炭素（Ｐｄ／Ｃ）である。
反応は、通常、脂肪族アルコール、例えば、２－プロパノールなどの極性プロトン性溶媒、またはＴＨＦもしくは酢酸エチルなどの極性非プロトン性溶媒の存在下において、０℃～４０℃、好ましくは１０℃～３０℃の反応温度で、１０バール～１００バール、好ましくは３０バール～８０バールの水素圧において、行われる。
式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールは、触媒を濾別し、真空中でのエバポレーションによって濾液を濃縮することによって、得ることができる。
工程ｃ）
工程ｃ）は、式ＩＶのＧａｌＮＡｃ酸アミドの遊離アルコールを、ホスホロアミデート化剤と反応させて、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを形成することを必要とする。
工程ｃ）は、式ＩＶのＧａｌＮＡｃ酸アミドの遊離アルコールを、ホスホロアミデート化剤と反応させて、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを形成することを必要とする。
ホスホロアミデート化剤は、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジ－（２－プロピル）クロロホスホロアミダイトまたは２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラ（２－プロピル）ホスホロジアミダイトから選択することができる。
好ましい実施形態において、ホスホロアミデート化剤は、活性化剤と組み合わせた２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラ（２－プロピル）ホスホロジアミダイトである。
活性化剤は、第二級アミン、好ましくは第二級脂肪族アミン、例えば、ジイソプロピルアミンの酸性アンモニウム塩、好ましくはジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドから選択され得る。あるいは、他のテトラゾール種の活性化剤、例えば、テトラゾール、５－（エチルチオ）－１Ｈ－テトラゾール、５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾール、または４，５－ジシアノイミダゾールを使用してもよい。
反応は、極性非プロトン性溶媒、例えば、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、またはアセトニトリルにおいて、－２０℃～５０℃、好ましくは１０℃～３０℃の反応温度で行うことができる。
反応混合物からの生成物の単離は、エバポレーションによって行うことができる。しかしながら、原則として、生成物は、溶液中に残り、分取クロマトグラフィーによってさらに精製される。
あるいは、上述のホスホロアミデート化反応の反応混合物を、固相オリゴヌクレオチド合成のために、クロマトグラフィー精製なしで直接的に使用することができる。
好ましい実施形態において、クロマトグラフィーにより精製した生成物である式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーは、極性非プロトン性溶媒、例えば、ジクロロメタンもしくはアセトニトリルまたはそれらの混合物中に溶解され、ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製に直接的に適用される。あるいは、生成物溶液を、分子篩（３Åもしくは４Å）、無水Ｋ２ＣＯ３、塩基性活性アルミナ、ＣａＣｌ２もしくはＣａＨ２、好ましくはＣａＨ２、または３Åの分子篩などの乾燥剤で乾燥させてもよい。
ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製は、
ａ）式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製すること、
ｂ）固相オリゴヌクレオチド合成において、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを、所望の配列の所望のヌクレオシドビルディングブロックと一緒に利用して、固体支持体に結合した所望のＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートを形成すること、および最後に
ｃ）固相支持体からＧａｌＮＡｃ－クラスター＿オリゴヌクレオチドコンジュゲートを切断し、完全に脱保護し精製すること
を含む。
ａ）式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製すること、
ｂ）固相オリゴヌクレオチド合成において、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを、所望の配列の所望のヌクレオシドビルディングブロックと一緒に利用して、固体支持体に結合した所望のＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートを形成すること、および最後に
ｃ）固相支持体からＧａｌＮＡｃ－クラスター＿オリゴヌクレオチドコンジュゲートを切断し、完全に脱保護し精製すること
を含む。
オリゴヌクレオチドという用語は、本明細書で使用される場合、当業者によって一般的に理解されるように、２つ以上の共有結合的に連結されたヌクレオシドを含む分子として定義される。治療的に価値のあるオリゴヌクレオチドとして使用するために、オリゴヌクレオチドは、典型的に、７～３０個のヌクレオチドの長さとして合成される。オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、それに続く精製によって実験室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合的に連結されたヌクレオチドまたはヌクレオシドの核酸塩基部分、またはその修飾物の配列または順序に対して言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のものであり、化学的に合成され、かつ典型的には、精製または単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾されたヌクレオシドまたはヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾されたＲＮＡ、もしくはＬＮＡヌクレオシドモノマー、またはこれらの組み合わせからなり得る。ＬＮＡヌクレオシドモノマーは、ヌクレオチドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’との間のリンカー基（ビラジクル（bi-radicle）または架橋と称される）を含む、修飾されたヌクレオシドである。これらのヌクレオシドは、文献において、架橋核酸または二環式核酸（ＢＮＡ）とも称される。
非限定的な実施形態において、ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、
からなる群から選択することができ、式中、大文字は、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ単位を表し、小文字は、ＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｓ」は、ホスホロチオエート連結を表し、上付き文字Ｍｅは、５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡまたはベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ単位を表し、Ｃ６は、６－アミノヘキシル－１－ホスフェート連結を表す。
固相合成後に、ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、依然として、固体支持体に結合しており、依然として、ヒドロキシ保護基Ｒ１などの保護基を有する。
支持体からの切断および脱保護は、当業者に既知でありWincott et al.; Nucl. Acids Res. (1995) 23 (14): 2677-2684などの文献に記載されている方法を使用して行うことができる。通常、ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、好適な塩、例えば、アンモニウム塩、またはアルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩もしくはカリウム塩の形態で得られる。
本明細書において開示される化合物は、配列番号１、２、３、および４からなる群から選択される核酸塩基配列を有する。
略語
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４－（ジメチルアミノ）－ピリジン
ＥＳＩ エレクトロンスプレーイオン化（Electron Spry Ionization）
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＨＳＱＣ－ＮＭＲ 異核種単一量子コヒーレンス－核磁気共鳴
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＳ 分子篩
ＭｓＯＨ メタンスルホン酸
Ｒｔ 室温（２０～２５℃）
ＳＰＯＳ 固相オリゴヌクレオチド合成
Ｔ３Ｐ ｎ－プロピルホスホン酸無水物
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＢＭＥ メチルｔｅｒｔ．－ブチルエーテル
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４－（ジメチルアミノ）－ピリジン
ＥＳＩ エレクトロンスプレーイオン化（Electron Spry Ionization）
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＨＳＱＣ－ＮＭＲ 異核種単一量子コヒーレンス－核磁気共鳴
ＭｅＯＨ メタノール
ＭＳ 分子篩
ＭｓＯＨ メタンスルホン酸
Ｒｔ 室温（２０～２５℃）
ＳＰＯＳ 固相オリゴヌクレオチド合成
Ｔ３Ｐ ｎ－プロピルホスホン酸無水物
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＢＭＥ メチルｔｅｒｔ．－ブチルエーテル
方法スキーム：
実施例１ａ
（２Ｓ）－６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸
ＴＨＦ（５４０ｍｌ）中のＦｍｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（５４ｇ、１１５ｍｍｏｌ）、６－ベンジルオキシヘキシル－１－アミン塩酸塩（ＷＯ第２０１７０８４９８７Ａ１号に従って調製）（２９．５ｇ、１２１ｍｍｏｌ）、およびＮ－エチルジイソプロピルアミン（７８．４ｍｌ、４６１ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ－プロピルホスホン酸無水物（ＥｔＯＡｃ中、環状三量体５０％、１２２ｍｌ、２０７ｍｍｏｌ）を、２０～２５℃で３０秒間添加した。得られた明黄色のｐＨ７～８の溶液を、２０～２５℃で１時間撹拌した。水（５４０ｍｌ）、ＴＢＭＥ（１３５ｍｌ）、およびｎ－ヘプタン（５４０ｍｌ）を、反応混合物に順に添加し、二相混合物を抽出した。有機層を、濃縮し、真空中で濃縮して、目的の（Ｓ）－アミド（７９ｇ）を得、これを、さらなる精製なしに使用した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ３９Ｈ５１Ｎ３Ｏ６（ＭＨ＋）の計算値：６５７．３７７８、実測値：６５７．３７８１。
（２Ｓ）－６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸
実施例１ｂ
（２Ｒ）－６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸
実施例１ａと同じように、粗（Ｒ）－アミドを白色の固体として得、さらなる精製なしに使用した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ３９Ｈ５１Ｎ３Ｏ６（ＭＨ＋）の計算値：６５７．３７７８、実測値：６５７．３７８９。
（２Ｒ）－６－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸
実施例２ａ
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｓ）－５－アミノ－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－ヘキシル］カルバメート
ＴＨＦ（２３７ｍｌ）中の上記の粗アミド（７９ｇ、１２０ｍｍｏｌ）の溶液に、ジエチルアミン（２５１ｍｌ、２．４ｍｏｌ）を添加し、無色の溶液を、２０～２５℃で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、真空中で乾燥させて、明黄色の油を得、これを、ＴＢＭＥ（５２１ｍｌ）および水（５２１ｍｌ）中に再溶解させた。メタンスルホン酸（７．０２ｍｌ、１０８ｍｍｏｌ）を、ｐＨ４まで添加し、層を分離した。水層を、ＴＢＭＥ（５２１ｍｌ）で再抽出し、次いで、水酸化ナトリウム（水中３２％、１２．９ｍｌ、１３９ｍｍｏｌ）で、ｐＨ１４まで塩基性にした。水性相を、ＴＢＭＥ（５２１ｍｌ）で抽出し、有機層を分離させ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、真空中で乾燥させて、（Ｓ）－Ｂを無色の油として得た（４８．５ｇ、２工程で収率９７％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２４Ｈ４１Ｎ３Ｏ６（ＭＨ＋）の計算値：４３５．３０９７、実測値：４３５．３１２１。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｓ）－５－アミノ－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－ヘキシル］カルバメート
実施例２ｂ
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｒ）－５－アミノ－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－ヘキシル］カルバメート
実施例２ａと同じように、（Ｒ）－Ｂを、明黄色の油として得た（９２３ｍｇ、２工程で８５％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２４Ｈ４１Ｎ３Ｏ６（ＭＨ＋）の計算値：４３５．３０９７、実測値：４３５．３１１３。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｒ）－５－アミノ－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－ヘキシル］カルバメート
実施例３ａ
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｓ）－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－５－［［（２Ｓ）－２，６－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサノイル］アミノ］ヘキシル］カルバメート
ＴＨＦ（４８０ｍｌ）中の（Ｓ）－Ｂ（４８ｇ、１１０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（７５ｍｌ、４４１ｍｍｏｌ）、およびＢｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ（４５．８ｇ、１３２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％、９７．４ｍｌ、１６５ｍｍｏｌ）を、２０～２５℃で３０秒間にわたって添加し、無色の溶液を４５分間撹拌した。次いで、水（４８０ｍｌ）を添加し、二相混合物を５分間撹拌した。ｎ－ヘプタン（４８０ｍｌ）を添加し、層を分離した。有機層を、水中０．５Ｍ ＨＣｌ（２３０ｍｌ）、０．５Ｍ ＮａＯＨ（２３０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、ＥｔＯＨ（４５ｍｌ）中に溶解させ、ｎ－ヘプタン（４２８ｍｌ）を添加した。得られた白色の懸濁液を、２０～２５℃で１６時間撹拌した。懸濁液を濾過し、ケーキをＥｔＯＨ／ｎ－ヘプタン（０．５／９．５、５０ｍｌ）で洗浄し、白色の固体を真空中で乾燥させて、（Ｓ，Ｓ）－Ｃ（６３．３ｇ、収率７５％）を白色の結晶性固形物として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ４０Ｈ６９Ｎ５Ｏ９（ＭＨ＋）の計算値：７６３．５０９５、実測値：７６３．５０９８。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｓ）－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－５－［［（２Ｓ）－２，６－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサノイル］アミノ］ヘキシル］カルバメート
実施例３ｂ
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｒ）－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－５－［［（２Ｓ）－２，６－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサノイル］アミノ］ヘキシル］カルバメート
実施例３ａと同じように、（Ｒ，Ｓ）－Ｃを、白色の固体として得た（１６．４ｇ、７１％）。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ４０Ｈ６９Ｎ５Ｏ９（ＭＨ＋）の計算値：７６３．５０９５、実測値：７６３．５０７６。
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５Ｒ）－６－（６－ベンジルオキシヘキシルアミノ）－６－オキソ－５－［［（２Ｓ）－２，６－ビス（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサノイル］アミノ］ヘキシル］カルバメート
実施例４ａ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－（６－ベンジルオキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
（Ｓ，Ｓ）－Ｃ（３６．１ｇ、４７．３ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３６６ｍｌ）中に懸濁させ、メタンスルホン酸（１５．４ｍｌ、２３７ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた黄色がかった濁った溶液を、５５～６０℃に加熱した。２０分後に、追加のアセトニトリル（３６６ｍｌ）を添加して、撹拌させた。２時間後に油浴を除去し、白色のスラリーをカップリングに使用した。ＤＩＰＥＡ（１３７ｍｌ、８０４ｍｍｏｌ）およびＦの溶液（ＷＯ第２０１７０８４９８７Ａ号に従って調製したもの（７．６％重量／重量、１．３５ｋｇ、１９１ｍｍｏｌ）を、上記の反応混合物に添加し、明黄色の溶液を、４０～４５℃に温めた。次いで、Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％、１３９ｍｌ、２３７ｍｍｏｌ）を、５分間にわたって添加し、無色の溶液を、４０～４５℃で撹拌した。３０分後に、反応混合物を２０～２５℃に冷却し、真空中でおよそ５００ｇまで濃縮した。この粗溶液を、１Ｍ重炭酸ナトリウム（２３６ｍｌ、２３６ｍｍｏｌ）中に溶解し、少量ずつ４回に分けて、逆相クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｃ１８、３６０ｇ、Ｈ２Ｏ／アセトニトリル１００：０から７０：３０から６０：４０から１０：９０）によって精製した。生成物を含有する画分を、真空中で濃縮して、アセトニトリルを除去し、次いで、凍結乾燥させて、白色の泡沫体を得、これをアセトニトリル（２×）と共沸混合して、部分的に脱アセチル化された（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（７７．１ｇ）を白色の泡沫体として得た。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－（６－ベンジルオキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
再アセチル化：
上記で得られた（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（７７．１ｇ）を、アセトニトリル（２３１ｍｌ）中に取り、２０～２５℃で１時間、ＤＭＡＰ（４６５ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．８６ｍｌ、２８．６ｍｍｏｌ）、および無水酢酸（２．５１ｍｌ、２６．７ｍｍｏｌ）で処理した。水（１．０ｌ）で希釈した後、この溶液を、少量ずつ５回に分けて、逆相クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｃ１８、３６０ｇ、Ｈ２Ｏ／アセトニトリル１００：０から７０：３０から６５：３５から０：１００）によって再度精製した。生成物を含有する画分を、真空中で濃縮して、白色の泡沫体を得、これをアセトニトリルと共沸混合して、（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（６７．０ｇ、８７％）を白色の泡沫体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ９１Ｈ１４４Ｎ８Ｏ４２（（Ｍ＋２Ｈ）／２２＋）の計算値：１０１１．４７６２、実測値：１０１１．４７６１。
上記で得られた（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（７７．１ｇ）を、アセトニトリル（２３１ｍｌ）中に取り、２０～２５℃で１時間、ＤＭＡＰ（４６５ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．８６ｍｌ、２８．６ｍｍｏｌ）、および無水酢酸（２．５１ｍｌ、２６．７ｍｍｏｌ）で処理した。水（１．０ｌ）で希釈した後、この溶液を、少量ずつ５回に分けて、逆相クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｃ１８、３６０ｇ、Ｈ２Ｏ／アセトニトリル１００：０から７０：３０から６５：３５から０：１００）によって再度精製した。生成物を含有する画分を、真空中で濃縮して、白色の泡沫体を得、これをアセトニトリルと共沸混合して、（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（６７．０ｇ、８７％）を白色の泡沫体として得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ９１Ｈ１４４Ｎ８Ｏ４２（（Ｍ＋２Ｈ）／２２＋）の計算値：１０１１．４７６２、実測値：１０１１．４７６１。
実施例４ｂ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－（６－ベンジルオキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例４ａと同じようにあるが再アセチル化手順は行わずに、（Ｒ，Ｓ）－Ｇを、白色の泡沫体として得た（２９．１ｇ、６６％）。ＨＲＭＳ（ＥＩ）：Ｃ９１Ｈ１４４Ｎ８Ｏ４２ （Ｍ＋）計算値：２０２０．９３７８、実測値：２０２０．９３６５。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－（６－ベンジルオキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例５ａ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－（６－ヒドロキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］－エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
（Ｓ，Ｓ）－Ｇ（６７．０ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）を、２－プロパノール（６７０ｍｌ）中に溶解し、パラジウム炭素１０％（３．８ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、６０バールのＨ２下において、２時間、２０℃で加圧反応装置において水素化した。懸濁液を、濾過し、フィルタを、２－プロパノール（１５０ｍｌ）で洗浄した。結果として得られた無色の溶液を、真空中で濃縮し、残留物を、アセトニトリル（３×５００ｍｌ）と共沸混合して、粗（Ｓ，Ｓ）－Ｈ（６１．１ｇ、９５％）を白色の泡沫体として得、これを、さらなる精製なしに使用し、２０℃で保管した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ８４Ｈ１３９Ｎ８Ｏ４２（ＭＨ＋）の計算値：１９３０．８９０８、実測値：１９３１．９００４。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－（６－ヒドロキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］－エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例５ｂ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－（６－ヒドロキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］－エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例５ａと同じように、粗（Ｒ，Ｓ）－Ｈを、白色の泡沫体として得た（２９．１ｇ、定量的収率）。ＬＣ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ８４Ｈ１３９Ｎ８Ｏ４２（ＭＨ＋）の計算値：１９３１．９、実測値：１９３１．５。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－（６－ヒドロキシヘキシルカルバモイル）－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］－エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例６ａ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［ｒａｃ－（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［６－［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシヘキシルカルバモイル］－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］－アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
無水ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の（Ｓ，Ｓ）－Ｈ（３．４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、３－（（ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（９０２ｍｇ、２．９９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピル－アンモニウムテトラゾリド（１５１ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を添加した。明黄色の溶液を、２０～２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を、ＴＢＭＥで希釈し、分取クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ Ｃｙａｎｏ、２７５ｇ、ＴＢＭＥ（１％体積／体積のＮＥｔ３を含有）／アセトニトリル９０：１０から７０：３０）によって直接精製した。生成物を含有する画分を、真空中で濃縮して、（Ｓ，Ｓ）－Ｉ（３．０ｇ、８０％）を白色の泡沫体として得た。３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：ｐｐｍ １４６．３２；ＨＲＭＳ（無水ＣＨＣｌ３からのナノスプレー）：Ｃ９１Ｈ１４４Ｎ８Ｏ４２の計算値（（Ｍ＋２Ｈ）／２２＋）：１０６６．５０６６；実測値：１０６６．５０７８。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［ｒａｃ－（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｓ）－１－［６－［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシヘキシルカルバモイル］－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］－アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
実施例６ｂ
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［６－［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシヘキシルカルバモイル］－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］－アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
アセトニトリル（２０ｍｌ、ＣａＨ２で乾燥）中の（Ｒ，Ｓ）－Ｈ（２．５ｇ、１．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、３－（（ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（６２４ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピル－アンモニウムテトラゾリド（４４．３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。無色の溶液を、２０～２５℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を、真空中で１２ｍｌの体積まで濃縮し、分取クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ Ｃｙａｎｏ、２７５ｇ、ＴＢＭＥ／アセトニトリル９５：５から７５：２５）を適用した。生成物を含有する画分を、真空中で濃縮して、（Ｒ，Ｓ）－Ｉ（２．１ｇ、７６％）を無色のワックスとして得た。３１Ｐ ＮＭＲ（１６２ ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）：ｐｐｍ １４６．８３。
（２Ｓ）－２，６－ビス［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［６－［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシヘキシルカルバモイル］－５－［［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－エチル－４，５－ジメチル－テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］アセチル］－アミノ］ペンチル］ヘキサンアミド
固相オリゴヌクレオチド合成（ＳＰＯＳ）のために、（Ｓ，Ｓ）－Ｉおよび（Ｒ，Ｓ）－Ｉのいずれかを、無水ＭｅＣＮまたはＣＨ２Ｃｌ２中に溶解して、０．１～０．２Ｍの溶液を得た。この溶液を、４Å ＭＳ、３Å ＭＳ、無水Ｋ２ＣＯ３、塩基性活性アルミナ、ＣａＣｌ２、またはＣａＨ２上で１時間乾燥させ、次いで、オリゴヌクレオチド合成装置で直接使用した。
固相オリゴヌクレオチド合成
ＧａｌＮＡｃ－クラスター修飾ＬＮＡ／ＤＮＡを、ＢｉｏＡｕｔｏｍａｔｉｏｎ Ｍｅｒｍａｄｅ １２において１もしくは２０μｍｏｌのスケールで、または０．２、０．９５、もしくは１．９ｍｍｏｌのスケールでＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、固相における標準的なホスホラミダイト化学（ＷＯ第２０１７０８４９８７Ａ１号および同第２０１８２１５３９１Ａ１号を参照されたい）によって生成した。使用される固体支持体としては、Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５Ｇ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５Ｇ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ３５０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、またはＫｉｎｏｖａｔｅ ＮｉｔｔｏＰｈａｓｅ ＨＬ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ４００が挙げられる。２－ＯＣＨ２－４架橋ヌクレオチド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＡＦＣ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＡＦＣ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有するオリゴヌクレオチドを、対応するホスホラミダイトを用いて生成した。上記のように調製したＭｅＣＮまたはＣＨ２Ｃｌ２中のＧａｌＮＡｃ－クラスターホスホラミダイト（Ｓ，Ｓ）－Ｉおよび（Ｒ，Ｓ）－Ｉの溶液を、標準的なＳＰＯＳ活性化因子、例えば、４，５－ジシアノイミダゾール（Ｎ－メチルイミダゾールありおよびなし）またはテトラゾール活性化因子、例えば、５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾールもしくはＡｃｔｉｖａｔｏｒ ４２とともに、１．５～４．０当量のホスホラミダイトを、３０／７０～４０／６０のアミダイト対活性化因子の比で、１０～３０分間のカップリング時間で用いて、使用した。酸化は、ピリジン／Ｈ２Ｏ（９：１）中の有機酸化剤、例えば、カンファースルホニルオキサジリジン、クメンヒドロペルオキシド、ｔｅｒｔ－ブチル過酸化水素、またはヨウ素によって行う。チオール化は、ＳＰＯＳに使用される標準的なチオール化試薬、例えば、３－アミノ－１，２，３－ジチアゾール－５－チオン（キサンタン水素化物）、３－ジメチルアミノ－１，２，３－ジチアゾール－５－チオン、３－エトキシ－１，２，４－ジチアゾリン－５－オン、Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬、またはフェニル酢酸ジスルフィドを、それぞれの溶媒に入れたものによって実行することができる。キャッピング工程は、ＧａｌＮＡｃ－クラスターホスホラミダイトのカップリングには用いなかった。切断および脱保護は、当業者に既知の方法（Wincott F. et al. Nucleic Acid Research, 1995, 23,14, 2677-84）、例えば、２５～５５℃の温度における濃縮ＮＨ４ＯＨ（２８～３３％）によって達成した。脱保護し乾燥させた、アンモニウム塩としての粗ＧａｌＮＡｃ－クラスター修飾ＬＮＡを、特徴づけ、同一性を、イオン対合ＨＰＬＣ－ＭＳにより確認した。それらは、オリゴヌクレオチドの標準的な精製方法によって精製することができる（例えば、ＷＯ第２０１８２１５３９１Ａ１号を参照されたい）。
ＧａｌＮＡｃ－クラスター修飾ＬＮＡ／ＤＮＡを、ＢｉｏＡｕｔｏｍａｔｉｏｎ Ｍｅｒｍａｄｅ １２において１もしくは２０μｍｏｌのスケールで、または０．２、０．９５、もしくは１．９ｍｍｏｌのスケールでＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、固相における標準的なホスホラミダイト化学（ＷＯ第２０１７０８４９８７Ａ１号および同第２０１８２１５３９１Ａ１号を参照されたい）によって生成した。使用される固体支持体としては、Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５Ｇ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｕｐｐｏｒｔ ５Ｇ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ３５０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、またはＫｉｎｏｖａｔｅ ＮｉｔｔｏＰｈａｓｅ ＨＬ Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ ４００が挙げられる。２－ＯＣＨ２－４架橋ヌクレオチド（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＡＦＣ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＳＡＦＣ、Ｈａｍｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有するオリゴヌクレオチドを、対応するホスホラミダイトを用いて生成した。上記のように調製したＭｅＣＮまたはＣＨ２Ｃｌ２中のＧａｌＮＡｃ－クラスターホスホラミダイト（Ｓ，Ｓ）－Ｉおよび（Ｒ，Ｓ）－Ｉの溶液を、標準的なＳＰＯＳ活性化因子、例えば、４，５－ジシアノイミダゾール（Ｎ－メチルイミダゾールありおよびなし）またはテトラゾール活性化因子、例えば、５－（ベンジルチオ）－１Ｈ－テトラゾールもしくはＡｃｔｉｖａｔｏｒ ４２とともに、１．５～４．０当量のホスホラミダイトを、３０／７０～４０／６０のアミダイト対活性化因子の比で、１０～３０分間のカップリング時間で用いて、使用した。酸化は、ピリジン／Ｈ２Ｏ（９：１）中の有機酸化剤、例えば、カンファースルホニルオキサジリジン、クメンヒドロペルオキシド、ｔｅｒｔ－ブチル過酸化水素、またはヨウ素によって行う。チオール化は、ＳＰＯＳに使用される標準的なチオール化試薬、例えば、３－アミノ－１，２，３－ジチアゾール－５－チオン（キサンタン水素化物）、３－ジメチルアミノ－１，２，３－ジチアゾール－５－チオン、３－エトキシ－１，２，４－ジチアゾリン－５－オン、Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬、またはフェニル酢酸ジスルフィドを、それぞれの溶媒に入れたものによって実行することができる。キャッピング工程は、ＧａｌＮＡｃ－クラスターホスホラミダイトのカップリングには用いなかった。切断および脱保護は、当業者に既知の方法（Wincott F. et al. Nucleic Acid Research, 1995, 23,14, 2677-84）、例えば、２５～５５℃の温度における濃縮ＮＨ４ＯＨ（２８～３３％）によって達成した。脱保護し乾燥させた、アンモニウム塩としての粗ＧａｌＮＡｃ－クラスター修飾ＬＮＡを、特徴づけ、同一性を、イオン対合ＨＰＬＣ－ＭＳにより確認した。それらは、オリゴヌクレオチドの標準的な精製方法によって精製することができる（例えば、ＷＯ第２０１８２１５３９１Ａ１号を参照されたい）。
（大文字は、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ単位を表し、小文字は、ＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｓ」は、ホスホロチオエート連結を表し、上付き文字Ｍｅは、５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡまたはベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ単位を表し、ＡＭ－Ｃ６は、６－アミノヘキシル－ｌ－ホスフェート連結を表す）。
実施例７ａ：
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（１．７ｇ、８７．０ａ％のＨＰＬＣ純度）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２２０Ｈ３０３Ｎ７６Ｏ１１１Ｐ１５Ｓ１２（Ｍ－）の計算値：６６３３．３１１５、実測値：６６３３．３０８９。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９５％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９９．８％のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例７ｂ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（１．６ｇ、９１．６ａ％のＨＰＬＣ純度）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２２０Ｈ３０３Ｎ７６Ｏ１１１Ｐ１５Ｓ１２（Ｍ－）の計算値：６６３３．３１１５、実測値：６６３３．３１３４。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９５％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９５．６％未満のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例８ａ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．２ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（３５０ｍｇ、７９．１ａ％のＨＰＬＣ純度）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２５９Ｈ３５９Ｎ７６Ｏ１３５Ｐ１９Ｓ１６（Ｍ－）の計算値：７７９３．４１０９、実測値：７７９３．４１２７。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９６％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９９．８％のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．２ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例８ｂ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．２ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（６３０ｍｇ、８２．９ａ％のＨＰＬＣ）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２５９Ｈ３５９Ｎ７６Ｏ１３５Ｐ１９Ｓ１６（Ｍ－）の計算値：７７９３．４１０９、実測値：７７９３．４１２７。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９６％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９５．４％を上回るエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．２ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例９ａ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において２＊１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって、それに続いて逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（１２．５ｇ、９２．７ａ％のＨＰＬＣ純度）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２４８Ｈ３４６Ｎ６８Ｏ１３３Ｐ１８Ｓ１５（Ｍ－）の計算値：７４４１．３４９０、実測値：７４４１．３７３０。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９８％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９９．６％のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において２＊１．９ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、ＩＥＸ－ＭＰＬＣによって、それに続いて逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例９ｂ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（６．０ｇ、８２．０ａ％のＨＰＬＣ）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２４８Ｈ３４６Ｎ６８Ｏ１３３Ｐ１８Ｓ１５（Ｍ－）の計算値：７４４１．３４９０、実測値：７４４１．３５０８。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９８％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９７．０％を上回るエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において１．９ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩としての粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例１０ａ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．９５ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩として粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（１．６ｇ、８７．７ａ％のＨＰＬＣ純度）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２２９Ｈ３１８Ｎ７２Ｏ１１３Ｐ１６Ｓ１６（Ｍ－）の計算値：６８９１．２６８４、実測値：６８９１．２７１４。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９４％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９９．６％のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｓ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．９５ｍｍｏｌのスケールで合成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩として粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
実施例１０ｂ
の合成
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．９５ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩として粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
のナトリウム塩（２．０ｇ、８８．０ａ％のＨＰＬＣ）を、白色の凍結乾燥物として得た。ＩＰ－ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２２９Ｈ３１８Ｎ７２Ｏ１１３Ｐ１６Ｓ１６（Ｍ－）の計算値：６８９１．２６８４、実測値：６８９１．２７１５。エピマー純度は、１Ｈ－１３Ｃ－ＨＳＱＣ－ＮＭＲによって、９５％を上回ると決定した（ＬＯＤ）。加えて、６Ｍ ＨＣｌにおける加水分解、遊離アミノ酸の誘導体化、およびＣＨＩＲＡＳＩＬ ＶＡＬにおけるリジンエナンチオマーのガスクロマトグラフィー分離により、９９．４％のエピマー純度が示された。
上述の標準的なＳＰＯＳ条件に従って、（Ｒ，Ｓ）－Ｉを使用して、標題生成物を、ＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）において０．９５ｍｍｏｌのスケールで合成し生成した。脱保護し濃縮したアンモニウム塩として粗オリゴヌクレオチドを、逆相ＨＰＬＣによって精製し、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび凍結乾燥した後に、
Claims (22)
- 式Ｉのエピマー的に純粋なＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマー
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ保護基であり、ｎは、０～１０の整数であり、ｍは、０～２０の整数である）、その対応するエナンチオマーおよび／または光学異性体を調製するための方法であって、
ａ）式ＩＩの化合物
（式中、Ｒ３は、ヒドロキシ保護基であり、ｍは、上述の通りである）、またはその塩を、
式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分
（式中、Ｒ１およびｎは、上述の通りである）とカップリングして、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミド
（式中、Ｒ１、Ｒ３、ｎ、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｂ）ヒドロキシル保護基Ｒ３を除去して、式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを形成することと、
ｃ）式ＩＶのＧａｌＮＡｃアミドの遊離アルコールを、ホスホロアミデート化剤と反応させて、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを形成することと
を含む、方法。 - Ｒ１が、アシル基である、請求項１に記載の方法。
- Ｒ１が、Ｃ１－６－アルキルまたはフェニルによって置換されていてもよいＣ１－６－アルキルカルボニル基である、請求項１または２に記載の方法。
- ｎが、０～５の整数であり、ｍが、０～１０の整数である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
- Ｒ１がアセチルであり、ｎが２であり、ｍが５である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
- Ｒ３がベンジルである、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
- 式Ｉが、以下の式Ｉｂ～Ｉｅ：
のＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
- 式ＩＩの化合物が、
ａ１）式Ｖのリジン化合物
（式中、Ｒ２およびＲ４は、アミノ保護基である）を、
式ＶＩのアミン
（式中、Ｒ３およびｍは、上述の通りである）
とカップリングして、
式ＶＩＩのカルボキサミド
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｂ１）アミノ保護基Ｒ４を除去して、式ＶＩＩＩのアミン
（式中、Ｒ２、Ｒ３、およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｃ１）式ＶＩＩＩのアミンを、アミノ基が保護されたリジンとカップリングして、式ＩＸのジペプチド
（式中、Ｒ２およびＲ３およびｍは、上述の通りである）を形成することと、
ｄ１）アミノ保護基Ｒ２を除去して、式ＩＩの化合物を形成することと
によって調製される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。 - カップリング工程ａ１）およびｃ１）が、ペプチドカップリング剤、アミン塩基、および有機溶媒の存在下において行われる、請求項８に記載の方法。
- ペプチドカップリング剤がｎ－プロピルホスホン酸無水物であり、アミン塩基が第三級アミンであり、有機溶媒が極性非プロトン性溶媒であり、反応温度が２０℃～７０℃から選択される、請求項８または９に記載の方法。
- Ｒ４が、塩基性条件下において切断可能なアミノ保護基、好ましくはＦＭＯＣである、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
- 塩基性条件が、有機溶媒の存在下における、第二級脂肪族アミン、好ましくはジエチルアミンでの処理を含む、請求項１１に記載の方法。
- アミノ保護基Ｒ２が、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニルである、請求項８から１２のいずれか一項に記載の方法。
- 工程ｄ１）において、アミノ保護基Ｒ２が酸性条件下において除去され、それぞれの酸との式ＩＸのジペプチドの三アンモニウム塩が形成される、請求項８に記載の方法。
- 酸が、スルホン酸、好ましくはメタンスルホン酸である、請求項１４に記載の方法。
- 工程ａ）において式ＩＩの化合物を式ＩＩＩのＧａｌＮＡｃ部分とカップリングすることが、ペプチドカップリング剤、アミン塩基、および有機溶媒の存在下において行われる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
- ペプチドカップリング剤がｎ－プロピルホスホン酸無水物であり、アミン塩基が第三級アミンであり、有機溶媒が極性非プロトン性溶媒であり、反応温度が２０℃～７０℃から選択される、請求項１６に記載の方法。
- 工程ｂ）においてヒドロキシル保護基Ｒ３を除去して遊離アルコールを形成することが、水素化触媒の存在下において水素による接触水素化によって行われる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
- 工程ｃ）におけるホスホロアミデート化剤が、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジ－（２－プロピル）クロロホスホロアミダイトまたは２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラ（２－プロピル）ホスホロジアミダイトから選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
- 工程ｃ）における反応が、－２０℃～５０℃の反応温度で、第二級アミンの酸性アンモニウム塩および極性非プロトン性溶媒の存在下において、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラ（２－プロピル）ホスホロジアミダイトを用いて行われる、請求項１９に記載の方法。
- 前記ＧａｌＮＡｃ部分を単一のエピマーとして含むＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製のための方法における、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法の使用。
- ＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製が、
ａ）請求項１から２０のいずれか一項に記載の式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製することと、
ｂ）固相オリゴヌクレオチド合成において、式ＩのＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを、所望の配列の所望のヌクレオシドビルディングブロックと一緒に利用して、固体支持体に結合した所望のＧａｌＮＡｃ－クラスターオリゴヌクレオチドコンジュゲートを形成することと、最後に
ｃ）固相支持体からＧａｌＮＡｃ－クラスター＿オリゴヌクレオチドコンジュゲートを切断し、完全に脱保護し精製することと
を含む、請求項２１に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP19175309 | 2019-05-20 | ||
| EP19175309.4 | 2019-05-20 | ||
| PCT/EP2020/063749 WO2020234208A1 (en) | 2019-05-20 | 2020-05-18 | Process for the preparation of galnac phosphoramidite epimers |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022533220A true JP2022533220A (ja) | 2022-07-21 |
Family
ID=66625050
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021569002A Pending JP2022533220A (ja) | 2019-05-20 | 2020-05-18 | ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトエピマーを調製するための方法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220259248A1 (ja) |
| EP (1) | EP3972984A1 (ja) |
| JP (1) | JP2022533220A (ja) |
| KR (1) | KR20220010496A (ja) |
| CN (1) | CN113840828B (ja) |
| AR (1) | AR118949A1 (ja) |
| AU (1) | AU2020278797A1 (ja) |
| CA (1) | CA3134494A1 (ja) |
| IL (1) | IL288116A (ja) |
| MX (1) | MX2021014111A (ja) |
| SG (1) | SG11202110680PA (ja) |
| TW (1) | TW202110483A (ja) |
| WO (1) | WO2020234208A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024075760A1 (ja) * | 2022-10-05 | 2024-04-11 | 第一三共株式会社 | ２分岐型ｎ－アセチル－ｄ－ガラクトサミン構造を有する化合物の製造方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116917477B (zh) * | 2022-01-30 | 2024-04-09 | 大睿生物医药科技(上海)有限公司 | 含有n-乙酰半乳糖胺的靶向配体 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SI3331892T1 (sl) * | 2015-08-06 | 2019-10-30 | Hoffmann La Roche | Postopki za pripravo derivatov gaINAc kisline |
| KR102117172B1 (ko) * | 2015-11-16 | 2020-06-01 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | GalNAc 클러스터 포스포라미다이트 |
| WO2018215049A1 (en) * | 2017-05-23 | 2018-11-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for galnac oligonucleotide conjugates |
-
2020
- 2020-05-18 AU AU2020278797A patent/AU2020278797A1/en active Pending
- 2020-05-18 WO PCT/EP2020/063749 patent/WO2020234208A1/en unknown
- 2020-05-18 EP EP20725557.1A patent/EP3972984A1/en active Pending
- 2020-05-18 CN CN202080037148.6A patent/CN113840828B/zh active Active
- 2020-05-18 AR ARP200101400A patent/AR118949A1/es unknown
- 2020-05-18 SG SG11202110680PA patent/SG11202110680PA/en unknown
- 2020-05-18 US US17/612,900 patent/US20220259248A1/en active Pending
- 2020-05-18 CA CA3134494A patent/CA3134494A1/en active Pending
- 2020-05-18 JP JP2021569002A patent/JP2022533220A/ja active Pending
- 2020-05-18 KR KR1020217037546A patent/KR20220010496A/ko active Search and Examination
- 2020-05-18 MX MX2021014111A patent/MX2021014111A/es unknown
- 2020-05-19 TW TW109116480A patent/TW202110483A/zh unknown
-
2021
- 2021-11-15 IL IL288116A patent/IL288116A/en unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024075760A1 (ja) * | 2022-10-05 | 2024-04-11 | 第一三共株式会社 | ２分岐型ｎ－アセチル－ｄ－ガラクトサミン構造を有する化合物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2021014111A (es) | 2021-12-10 |
| AU2020278797A1 (en) | 2021-10-07 |
| IL288116A (en) | 2022-01-01 |
| KR20220010496A (ko) | 2022-01-25 |
| EP3972984A1 (en) | 2022-03-30 |
| CA3134494A1 (en) | 2020-11-26 |
| US20220259248A1 (en) | 2022-08-18 |
| AR118949A1 (es) | 2021-11-10 |
| CN113840828A (zh) | 2021-12-24 |
| TW202110483A (zh) | 2021-03-16 |
| WO2020234208A1 (en) | 2020-11-26 |
| CN113840828B (zh) | 2024-01-16 |
| SG11202110680PA (en) | 2021-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2016357980B2 (en) | GalNAc cluster phosphoramidite | |
| ES2744437T3 (es) | Procedimientos para la preparación de derivados ácidos de GalNAc | |
| CA3059009C (en) | Process for galnac oligonucleotide conjugates | |
| CN113840828B (zh) | 用于制备GalNAc亚磷酰胺差向异构体的方法 | |
| WO2018199340A1 (ja) | オリゴヌクレオチド誘導体またはその塩 | |
| BR112017021926B1 (pt) | Processo para a preparação de derivados de ácido galnac, sal de amina e processo para a preparação de conjugados de oligonucleotídeos galnac |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230516 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20240305 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240422 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240607 |