JP2022524906A - 細胞免疫療法の組み合わせ - Google Patents

Abstract

腫瘍を患っている個体に、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ゲムシタビンとを投与することを含む、腫瘍を治療する方法。腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；２）ゲムシタビン；３）上記１）および２）に記載された物質を収容するための容器；および４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための取扱い説明書を含む、キット。

Description

本発明は、細胞免疫療法の分野に属し、具体的には、抗腫瘍療法のための免疫エフェクター細胞とゲムシタビンの併用に関する。

近年、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法などの細胞免疫療法は、血液腫瘍の治療において驚くべき治療効果を示しており、現在、ＣＡＲ－Ｔ細胞が血液腫瘍の治療に使用される臨床試験は２００を超えている（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌｓ－ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ａｎｄ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ， Ｊｅｓｓｉｃａ Ｈａｒｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ， Ａｕｇｕｓｔ １， ２０１７）。しかしながら、固形腫瘍の治療では、血液腫瘍の治療効果を達成することは困難である。

これは、血液腫瘍の場合、ＣＡＲ－Ｔ細胞が静脈内注入によって腫瘍細胞に到達して殺傷を容易に達成できるが、ＣＡＲ－Ｔ細胞が固形腫瘍の腫瘍組織に帰巣することがより困難になるからである。さらに、固形腫瘍は通常、腫瘍細胞、良性細胞、間質細胞、血管細胞などを互いに作用させることができる複雑で動的な腫瘍微小環境を持っている。また、腫瘍微小環境では、サイトカインと成長因子の相互作用のネットワークもあるので、ＣＡＲ－Ｔ療法は通常、固形腫瘍の治療に使用した場合の効果が低くなる。

本願の目的は、固形腫瘍における免疫細胞療法、特にＣＡＲ－Ｔ細胞療法の適用効果を改善するための腫瘍治療法を提供することである。

本発明の第一の態様では、腫瘍を患っている個体に、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ゲムシタビンとを投与することを含む、腫瘍を治療する方法が提供される。

本発明の第二の態様では、腫瘍を患っている個体に、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ゲムシタビンとを投与することを含む、癌細胞の成長、生存または活性またはすべてを低下させる方法が提供される。

好ましい実施形態では、免疫エフェクター細胞及びゲムシタビンを投与するには特定の順序がなく、まずゲムシタビンを投与し、次に免疫エフェクター細胞を投与してもよく、それらを同時に投与してもよく、まず免疫エフェクター細胞を投与し、次にゲムシタビンを投与してもよい。すなわち、腫瘍を患っている個体に免疫エフェクター細胞及びゲムシタビンを投与する方法は、（１）まずゲムシタビンを投与し、次に免疫エフェクター細胞を投与すること、（２）免疫エフェクター細胞とゲムシタビンを同時に投与すること、及び（３）まず免疫エフェクター細胞を投与し、次にゲムシタビンを投与することから選択されるいずれかである。

別の好ましい実施形態では、上記受容体が、キメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔ ｃｅｌｌ ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）またはそれらの組み合わせから選択される。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍抗原が固形腫瘍抗原である。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍抗原が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、血管内皮成長因子受容体のいずれかから選択される。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ－１；ｃ型レクチン様分子－１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原;ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）;インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ－１３Ｒα）;インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ－ＥＳＯ－１；ＨＩＶ－１ Ｇａｇ；ＭＡＲＴ－１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソテリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；段階特異的胚性抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；表皮成長因子受容体ファミリーとその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（１－４）ｂＤＧｌｃｐ（１－１）Ｃｅｒ；ＴＧＳ５；高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ ６、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン;Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；カッパ軽鎖（ｋａｐｐａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）;ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚型ＡｃｈＲ；ＨＬＡ－Ａ１、ＨＬＡ－Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胚性変異体；Ｇタンパク質結合受容体Ｃグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）;Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）;ポリシアル酸; 胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）;乳房分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）;ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質結合受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ交互リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポイエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマ癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマ癌精巣抗原－２（ＭＡＤ －ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；Ｐ５３変異体;ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫移行ブレークポイント;アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ－ｍｙｃトリ骨髄症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）;骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュールを含むムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）から選択される。

別の好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体は、
（ｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または
（ｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または
（ｉｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ
を有する。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、好ましくは、前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列である。

別の好ましい実施形態では、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、好ましくは、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列である。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍は、乳癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、膀胱癌、尿管癌、腎盂癌、脊髄腫瘍、神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、これらの癌の組み合わせ、及びこれらの癌の転移性病変を含む。

別の好ましい実施形態では、前記腫瘍は、乳癌、血液癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌、これらの癌の組み合わせ、及びこれらの癌の転移性病変(病巣)を含む。

別の好ましい実施形態では、前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞または骨髄由来食細胞もしくはそれらの組み合わせを含み、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は、自己Ｔ細胞、同種Ｔ細胞または同種ＮＫ細胞から選択され、より好ましくは、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞である。

別の好ましい実施形態では、前記ゲムシタビンは、経口投与、腹腔内投与および／または注射によって投与される。

別の好ましい実施形態では、前記個体に対して、リンパ球のクリアランスを行わない。

本発明の第三の態様では、薬剤の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞の使用であって、前記薬剤が前記細胞及びゲムシタビンを含み、ヒト患者において腫瘍の治療または癌細胞の成長、生存または活性の低下のために使用され、前記細胞とゲムシタビンが、前記細胞およびゲムシタビンのいずれかを単独で使用した場合の効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合されることを特徴とする、使用が提供される。

本発明の第四の態様では、薬剤の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞及びゲムシタビンの使用であって、前記薬剤が、ヒト患者において腫瘍の治療または癌細胞の成長、生存または活性の低下のために使用され、前記細胞とゲムシタビンが、前記細胞およびゲムシタビンのいずれかを単独で使用した場合の効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合されることを特徴とする、使用が提供される。

好ましい実施形態では、前記免疫エフェクター細胞がＣＡＲ Ｔ細胞であり、好ましくは、前記ＣＡＲ Ｔ細胞が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＢＣＭＡおよび／または血管内皮成長因子受容体を認識する。

本発明の第五の態様では、腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、
１）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
２）ゲムシタビン；
３）上記１）および２）に記載された物質を収容するための容器；および
４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための取扱説明書（プロトコル）
を含み、
前記免疫エフェクター細胞とゲムシタビンが、前記試薬のそれぞれの効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合され、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞がＣＡＲ Ｔ細胞であり、より好ましくは、前記ＣＡＲ Ｔ細胞が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＢＣＭＡおよび／または血管内皮成長因子受容体を認識する、キットが提供される。

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と後文（例えば、実施例）で具体的に記載される各技術的特徴を互いに組み合わせて新規なまたは好ましい技術構成を形成することができることを理解されたい。紙数に制限があるので、ここでは一々述べない。

本発明の有益な効果：
１、本発明によって提供されるゲムシタビンと免疫エフェクター細胞の併用は、腫瘍細胞を殺す能力を有意に向上させることができる。
２、本発明の治療レジメンを採用すると、癌微小環境における免疫抑制に対抗することができ、それによって、固形腫瘍に対する効果を有意に増強し、難治性及び進行性の癌に対してもよい効果を有する。

図１は、組換えベクターＭＳＣＶ－８Ｅ５－２１－ｍＢＢＺのプラスミドマップである。 図２は、インビボ実験で観察した、同所性マウスの膵臓癌に対するゲムシタビンとＣＡＲＴ細胞との併用の阻害効果を示す図である。 図２は、インビボ実験で観察した、同所性マウスの膵臓癌に対するゲムシタビンとＣＡＲＴ細胞との併用の阻害効果を示す図である。 図３は、ゲムシタビンとＣＡＲＴ細胞との併用で治療されたマウスの生体内イメージングデータを示す図である。 図４は、ゲムシタビンとＣＡＲＴ細胞との併用で治療されたマウスの生存期間データを示す図である。

［発明の詳細］
本発明は、免疫エフェクター細胞とゲムシタビンの併用による腫瘍の治療に関する。本発明は、記載された方法および実験条件に限定されないことを理解されたい。特に定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、遺伝子治療、生化学、遺伝学、分子生物学、および医薬品化学の分野で技術者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

本明細書に記載されているものと類似または同等のすべての方法および材料を、本発明の実施または試験に使用することができる。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含む本明細書に準ずる。さらに、特に明記しない限り、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、限定することを意図するものではない。

特に明記されていない限り、本発明の実践では、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学の従来の技術が使用され、これらはすべてこの分野の技術的範囲に含まれる。これらの技術については、参考文献で詳しく説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．ＡＵＳＵＢＥＬ，２０００，Ｗｉｌｅｙａｎｄ ｓｏｎ Ｉｎｃ， Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ， ＵＳＡ）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， （Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （Ｍ．Ｊ． Ｇａｉｔ ｅｄ．， １９８４）；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ． Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｎｏ． ４，６８３，１９５； Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ （Ｂ．Ｄ．Ｈａｒｒｉｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．１９８４）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ （Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ． １９８４）；Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ （Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．， １９８７）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ （ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ （１９８４）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ （Ｊ． Ａｂｅｌｓｏｎ ＆ Ｍ． Ｓｉｍｏｎ， ｅｄｓ．－ｉｎ－ｃｈｉｅｆ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、特にＶｏｌｓ．１５４および１５５（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．）およびＶｏｌ．１８５、“Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ” （Ｄ． Ｇｏｅｄｄｅｌ，ｅｄ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ （Ｊ．Ｈ． Ｍｉｌｌｅｒ ＆ Ｍ． Ｐ． Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．， １９８７， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｍａｙｅｒ ＆ Ｗａｌｋｅｒ， ｅｄｓ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏｎ， １９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ．Ｉ－ＩＶ （Ｄ． Ｍ． Ｗｅｉｒ ＆ Ｃ． Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， １９８６）；およびＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｎｂｒｙｏ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８６）を参照できる。

本発明は少なくとも部分的に次の認識に由来する。ゲムシタビンおよび免疫エフェクター細胞療法の１つ以上のサイクルおよび／または用量を連続的、任意の順序、または実質的に同時投与する併用治療レジメンは、一部の被験者の癌の治療において、免疫細胞の活性および／または数をより効果的に増加、増強または延長することができ、それによって抗腫瘍効果を達成する。

「ゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）」という用語の化学名は２’－デオキシ－２’，２’－ジフルオロシチジン塩酸塩であり、分子式はＣ_９Ｈ_１１Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_４.ＨＣｌであり、分子量は２９９．６６である。ゲムシタビンはピリミジン抗代謝腫瘍薬であり、リボヌクレオシド酸還元酵素と細胞複製を阻害することにより腫瘍細胞ＤＮＡの合成と修復を妨げることができ、さまざまな固形腫瘍に効果的である。具体的な実施形態では、ゲムシタビンと、腫瘍抗原を標的とする免疫細胞療法との組み合わせは、抗腫瘍効果を有意に改善することができ、完全寛解の治療効果さえ達成することができる。

出願人はまた、本発明は難治性癌の抗癌効果を改善できるだけでなく、ＣＡＲ－Ｔ細胞を使用する際にリンパ球クリアランスを必要とせず、それによってリンパ球クリアランスによって引き起こされる低い抗癌治療効果を大幅に低減し、正常組織への損傷による毒性、副作用、特に骨髄の重度の抑制を軽減することができることを発見した。

特定の実施形態において、腫瘍を患っている個体に対するゲムシタビンの静脈内注入の用量は約、１回あたり１２５０ｍｇ／ｍ^２、１２５０、１１５０、１１００、１０５０、１０００、９５０、９００、８５０、８００、７５０、７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２、または１ｍｇ／ｍ^２である。特定の実施形態において、腫瘍を患っている個体に、約６週間、５週間、４週間、３週間、２週間、または１週間ごとに１回、ゲムシタビンを静脈内注入により投与する。

本発明では、免疫エフェクター細胞とゲムシタビンの投与には特定の順序はない。まずゲムシタビンを投与し、次に免疫エフェクター細胞を投与してもよく、それらを同時に投与してもよく、また、まず免疫エフェクター細胞を投与し、次にゲムシタビンを投与してもよい。特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞の治療は、ゲムシタビンの投与前の１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１ヶ月またはそれらの任意の組み合わせで投与する。特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞の治療は、ゲムシタビンの投与後の１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、１ヶ月またはそれらの任意の組み合わせで投与する。

「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫応答中にエフェクター機能を発揮する細胞を指す。例えば、サイトカイン及び／またはケモカインを分泌し、微生物を殺し、抗体を分泌し、腫瘍細胞を認識または排除する免疫細胞を含む。一部の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞（細胞毒性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、好中球、マクロファージ（または骨髄由来食細胞）、および樹状細胞を含む。好ましくは、前記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞、異種Ｔ細胞、および同種異系Ｔ細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞は、同種異系ＮＫ細胞である。

本明細書で使用されるように、「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」という用語は、免疫エフェクター細胞の、例えば、標的細胞による免疫攻撃を増強または促進する機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答とは、標的細胞の死滅を促進する、もしくは成長または増殖を阻害するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性を指す。

「免疫エフェクター機能」という用語は、免疫系の組成によって媒介される任意の機能を含み、これは、腫瘍の拡大および転移の阻害を含む、腫瘍増殖の阻害および／または腫瘍形成の阻害を引き起こす可能性がある。好ましくは、免疫エフェクター機能は腫瘍細胞の傷害である。好ましくは、本発明における免疫エフェクター機能は、抗体媒介性であり、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（ＡＤＣＰ）、腫瘍関連抗原を運ぶ細胞にアポトーシスの誘導（例えば、表面抗原への抗体の結合を介して）、ＣＤ４０Ｌを介したシグナル伝達の阻害（例えば、抗体とＣＤ４０受容体またはＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）との結合を介して）、および／または腫瘍関連抗原を運ぶ細胞の増殖の阻害を含み、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣが好ましい。したがって、１つ以上の免疫エフェクター機能を媒介することができる抗体は、好ましくは、ＣＤＣ媒介溶解、ＡＤＣＣ媒介溶解、アポトーシス、ホモ接着および／または食作用を誘導するこによって（好ましくは、ＣＤＣ媒介溶解および／またはＡＤＣＣ媒介を誘導することによって）腫瘍細胞の傷害を媒介することができるものである。抗体は、癌細胞の表面にある腫瘍関連抗原に結合するだけでも作用し得る。例えば、抗体は、腫瘍細胞の表面にある腫瘍関連抗原に結合することにより、腫瘍関連抗原の機能をブロックしたり、アポトーシスを誘導したりすることができる。

「治療有効量」、「治療に有効」および「有効量」という用語は、本明細書では置き換えて使用でき、例えば、Ｔ細胞応答を促進するのに十分な量または用量であるがこれらに限定されない、特定の生物学的結果を達成するのに有効な化合物、製剤、物質、または組成物の量を指す。 「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍抑制有効量」または「治療有効量」を指す場合、本願の免疫エフェクター細胞、または治療薬の正確な投与数量は、医師が個体の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、および患者（被験者）の状態を考慮した以上決定することができる。免疫エフェクター細胞の有効量は、免疫エフェクター細胞の抗腫瘍活性を増加、増強、または延長し、抗腫瘍免疫エフェクター細胞または活性化免疫エフェクター細胞の数を増やし、ＩＦＮ－γやＴＮＦα分泌、腫瘍退縮、腫瘍縮小、および腫瘍壊死を促進することができる免疫エフェクター細胞の数を指すが、これらに限定されない。

「リンパ球クリアランスなし」または「リンパ球クリアランスを行わない」という用語は、リンパ球枯渇剤の投与なし、全身放射線療法またはそれらの組み合わせ、またはリンパ球クリアランスを引き起こす他の手段を含むがこれらに限定されない、被験者体内のリンパ球をクリアランスしないことを意味する。しかしながら、リンパ球枯渇剤、全身放射線療法またはそれらの組み合わせ、またはリンパ球クリアランスを引き起こす他の手段を投与した後、被験者のリンパ球クリアランス率が６０％未満の場合、本願の「クリアランスなし」の範囲内であると考えられる。

「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、置き換えて使用でき、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドには少なくとも２つのアミノ酸が含まれている必要があり、タンパク質またはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドには、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書で使用される「キメラ受容体」という用語は、すなわち、異なる供給源からのＤＮＡ断片またはタンパク質対応ｃＤＮＡを遺伝子組換え技術によって接続して形成される融合分子であり、細胞外領域、膜貫通領域、および細胞内領域を含む。キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、修飾されたＴ細胞（抗原）受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、免疫エフェクター細胞において、前記細胞に標的細胞（通常は癌細胞）に対する特異性を提供し、細胞内シグナル生成を有するポリペプチドのセットを指す。ＣＡＲは通常、少なくとも１つの細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含み、それは以下に定義される刺激分子及び／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む。一部の態様では、ポリペプチド群は互いに隣接している。ポリペプチド群は、二量体化分子の存在下でポリペプチドを互いにカップリングすることのできる二量体化スイッチを含み、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることのできるスイッチを含む。一態様では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に結合するζ鎖である。一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインをさらに含む。一態様では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、および／またはＣＤ２８などの、本明細書に記載される共刺激分子から選択される。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインと刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、ＣＡＲはキメラ融合タンパク質を含み、この融合タンパク質は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能的シグナル伝達を含む。

一態様では、本発明は、機能的に同等の分子を生成する出発抗体またはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列の修飾を想定している。例えば、ＣＡＲに含まれるｓｃＦｖなど、本明細書に記載の癌関連抗原の抗原結合ドメインのＶＨまたはＶＬは、本明細書に記載の癌関連抗原の抗原結合ドメインの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク（例えば、ｓｃＦｖ）の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％ 、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾されることができる。本発明は、機能的に同等の分子を生成するための、ＣＡＲ構築体の複数のドメインの１つ以上のアミノ酸配列の修飾などの、ＣＡＲ構築体全体の修飾を想定している。ＣＡＲ構築体は、出発ＣＡＲ構築体の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％ 、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持するように修飾されることができる。

一つの具体的な実施形態では、本明細書の腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４、または配列番号１４、または配列番号１５、または配列番号１６、または配列番号１７、または配列番号１８、または配列番号１９、または配列番号２０、または配列番号２１、または配列番号２２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、好ましくは、配列番号４、または配列番号１４、または配列番号１５、または配列番号１６、または配列番号１７、または配列番号１８、または配列番号１９、または配列番号２０、または配列番号２１、または配列番号２２に示されるアミノ酸配列である。

本明細書で使用される「膜貫通ドメイン」とは、蛋白質配列において細胞膜を貫通する領域をいい、膜貫通領域に隣接する１つ以上の追加のアミノ酸、例えば、前記膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域に関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から１５のアミノ酸）および／または前記膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞外領域に関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から１５のアミノ酸）を含むことができる。一態様では、膜貫通ドメインは、キメラ受容体の他のドメインの１つに関連するドメインであり、例えば、一実施形態では、前記膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン、またはヒンジドメインにが由来する同じタンパク質に由来し得る。場合によっては、膜貫通ドメインは、例えば、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするように、選択またはアミノ酸の置換修飾によって、このようなドメインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合することを防ぐことができる。一態様では、膜貫通ドメインは、キメラ受容体を発現する細胞の細胞表面上の別のキメラ受容体とホモ二量体化することができる。膜貫通ドメインは、天然または組換え供給源に由来することができる。前記供給源が天然の場合、前記ドメインは任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来してもよい。一態様では、前記キメラ受容体が前記標的抗原に結合する限り、膜貫通ドメインは細胞内ドメインにシグナルを伝達することができる。本発明で具体的に使用される膜貫通ドメインは、少なくとも以下の膜貫通ドメイン、例えば、Ｔ－細胞受容体のα、β、またはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４を含むことができる。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも以下の膜貫通ドメイン、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ ＣＤ２７８ )、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１Ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ/Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃを含むことができる。

場合によっては、膜貫通ドメインはヒンジ（例えば、ヒトタンパク質からのヒンジ）を介して、ＣＡＲの抗原結合ドメインなどのＣＡＲの細胞外領域に接続することができる。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載のＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ、またはＣＤ８ａヒンジであり得る。一態様では、膜貫通ドメインは組換え体であり得る。その場合、それは主にロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含むことになる。一態様では、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットが、組換え膜貫通ドメインの各末端に見出され得る。必要に応じて、２～１０アミノ酸長の短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーは、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成することができる。グリシン－セリンダブレットは、極めて適切なリンカーを提供する。

本明細書で使用される「細胞内ドメイン」と「細胞質ドメイン」は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは一般に、キメラ受容体が導入された免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ免疫細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性または補助活性であることができる。そのため、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを変換し、特定の機能を実行するように細胞を誘導するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用できるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する場合、免疫エフェクター機能シグナルを変換する限り、完全な鎖の代わりにこのような切断部分を使用することができる。したがって、細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、免疫エフェクター機能シグナルを変換するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を含むことを意味する。

ＴＣＲだけで生成されたシグナルはＴ細胞を完全に活性化するのに十分ではなく、二次シグナルおよび／または共刺激シグナルも必要であることはよく知られている。そのため、Ｔ細胞の活性化は、２つの異なる種類の細胞質シグナル伝達配列によって媒介されると言うことができ、すなわち、ＴＣＲを通じて抗原依存性一次活性化をトリガーするもの（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）と、抗原非依存的に作用して二次シグナルまたは共刺激シグナルを提供するもの（共刺激ドメインのような二次細胞質ドメイン）である。

「刺激分子」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される、細胞質シグナル伝達配列を提供する分子を指し、このシグナル伝達配列は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの面に使用される免疫細胞の活性化を刺激的な方法で調節する。一態様では、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドを担持しているＭＨＣ－抗原ペプチド複合体との結合に拠って開始される一次シグナルであり、増殖、活性化、分化などを含むがこれらに限定されないＴ細胞応答の媒介を引き起こす。刺激的に作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭのシグナル伝達モチーフと呼ばれるものを含んでもよい。本発明で特に使用されるＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例として、ＣＤ３ζ、一般的なＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃＥｐｓｉｌоｎ Ｒ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のいずれかのＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列などの細胞内シグナル伝達配列を含む。本発明のＣＡＲにおいて、ＣＤ３－ζの一次シグナル伝達配列は、ヒト、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基である。

「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それによりＴ細胞の共刺激反応を媒介する、Ｔ細胞上の相同結合パートナーを指し、前記Ｔ細胞の共刺激反応として、増殖が挙げられるが、これに限定されない。共刺激分子は、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子であり、効果的な免疫応答を促進する。共刺激分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、およびＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含むが、これらに限定されない。このような共刺激分子のさらなる例には、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、 ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、 ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ/ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、 ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ/Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。

共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であってもよい。共刺激分子は、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、およびＮＫ細胞受容体というタンパク質ファミリーで表すことができる。このような分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ－１、リンパ球機能関連の抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどが含まれる。

細胞内シグナル伝達ドメインは、分子のすべての細胞内部分またはすべての天然の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはその機能的フラグメントもしくは誘導体を含むことができる。

「４－１ＢＢ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＡＡ６２４７８．２で提供されるアミノ酸配列を持つＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバー、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基を指す。また、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４～２５５、またはウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基として定義される。一態様では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ヒト、またはマウス、げっ歯類、サル、類人猿などの非ヒト種由来の同等の残基である。

本明細書に記載のキメラ抗原受容体は、（ｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または（ｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または（ｉｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζを有する。

本明細書のキメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、好ましくは、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、または４４に示されるアミノ酸配列である。

「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、多鎖または一本鎖、または完全な免疫グロブリンであってもよく、天然源または組換え源に由来してもよい。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であってもよい。

「抗体フラグメント」という用語は、抗原のエピトープと特異的に（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布を介して）相互作用する能力を保持する抗体の少なくとも一部を指す。抗体フラグメントの実例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨ１ドメインで構成されるＦｄフラグメント、線形抗体、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂなど）、ｃａｍｅｌｉｄ ＶＨＨドメイン、抗体フラグメント（たとえば、ヒンジ領域においてジスルフィド結合によって接続された２つのＦａｂフラグメントからなる２価フラグメントを含む）からなる多重特異性抗体および抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合フラグメントが含まれるが、これらに限られていない。「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含む融合タンパク質を指し、前記軽鎖および重鎖可変領域は隣接し（例えば、短い柔軟なポリペプチドリンカーなどの合成リンカーを介して）、一本鎖ポリペプチドとして発現されることができ、しかも前記ｓｃＦｖは、それが由来する完全な抗体の特異性を保持する。特に明記しない限り、本明細書で使用されるように、ｓｃＦｖは任意の順序で（例えば、ポリペプチドのＮ－末端とＣ末端に対して）前記のＶＬとＶＨ可変領域を持つことができ、ｓｃＦｖはＶＬ－リンカー－ＶＨ、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含むことができる。

「抗体重鎖」という用語は、天然に存在する構成として抗体分子に存在し、且つ通常に抗体のタイプを決定する２つのポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。

「抗体軽鎖」という用語は、天然に存在する構成として抗体分子に存在する２つのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。κ（ｋ）とλ（ｌ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖のアイソタイプを指す。

「組換え抗体」という用語は、例えば、ファージまたは酵母発現系によって発現する抗体など、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子（しかもその中で、ＤＮＡ分子は抗体タンパク質を発現する）または指定された抗体のアミノ酸配列を合成することによって生成された抗体を指すとも解釈すべきであり、前記ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、組換えＤＮＡまたは本分野で利用可能且つよく知られているアミノ酸配列技術によって得られた。

「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答は、抗体の生成または特異的免疫能力を有する細胞の活性化に係ることができ、または両方とも含むことができる。当業者は理解すべきであるように、事実上、すべてのタンパク質またはペプチドの任意の高分子は抗原とされることができる。また、抗原は組換えまたはゲノムＤＮＡに由来することができる。本明細書で当該用語が使用される場合、免疫応答を引き起こすタンパク質をコードするヌクレオチド配列または一部のヌクレオチド配列の任意のＤＮＡが含まれると当業者は理解すべきである。さらに、当業者は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列のみによってコードされる必要がないことを理解すべきである。本発明は、複数の遺伝子の一部のヌクレオチド配列の使用を含むが、これに限定されず、これらのヌクレオチド配列は、所望の免疫応答を引き起こすポリペプチドをコードするように異なる組み合わせで排列される。当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要がないことを理解すべきである。抗原は合成によって生成してもよく、生物学的サンプルに由来してもよく、ポリペプチド以外の高分子であってもよい。このような生物学的サンプルは、組織サンプル、腫瘍サンプル、その他の生物学的成分を有する細胞または液体を含むことができるが、これらに限定されない。

「腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）」または「腫瘍抗原」という用語は、正常条件下で限られた数の組織および／または器官において、または特定の発育段階において、特異的に発現されるタンパク質を指す。一部の実施形態において、腫瘍関連抗原は、正常条件下で胃組織において特異的に発現され、好ましくは膵臓、胃粘膜、生殖器官（例えば、精巣）、栄養芽細胞組織（例えば、胎盤）、または生殖系細胞、および１種以上の腫瘍組織または癌組織において発現され、または異常に発現される。一部の実施形態において、腫瘍関連抗原とは、分化抗原、好ましくは細胞型特異的分化抗原、すなわち、正常条件下で特定の分化段階の特定の細胞型において特異的に発現されるタンパク質を指す。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は腫瘍細胞に位置するが、正常組織では発現されないか、またはわずかにしか発現されない。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原の異常な発現は、腫瘍細胞を同定するために使用されることができる。一部の実施形態では、個体（例えば、腫瘍患者）の腫瘍細胞によって発現される腫瘍関連抗原は、前記個体の自己タンパク質である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、個人が正常条件下で免疫系の損傷を受けたときに致命的ではない組織または器官で特異的に発現されるか、もしくは体の免疫系がアクセスできないまたはアクセスが困難な器官または構造で特異的に発現される。一部の実施形態では、正常組織で発現する腫瘍関連抗原のアミノ酸配列は、腫瘍組織で発現する腫瘍関連抗原のアミノ酸配列と同じである。

本発明の腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；ＣＤ１７１；ＣＳ－１；ｃ型レクチン様分子－１；ガングリオシドＧＤ３；Ｔｎ抗原;ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ７０；ＣＤ１２３；ＣＤ１３８；ＣＤ３３；ＣＤ４４；ＣＤ４４ｖ７／８；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）;インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ－１３Ｒα）;インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒα）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；ＮＹ－ＥＳＯ－１；ＨＩＶ－１ Ｇａｇ；ＭＡＲＴ－１；ｇｐ１００；チロシナーゼ；メソテリン；ＥｐＣＡＭ；プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）；段階特異的胚性抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６；表皮成長因子受容体ファミリーとその変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＬＭＰ２；エフリンＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３；ＴＧＳ５；高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチルＧＤ２ガングリオシド；葉酸受容体；腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；Ｃｌａｕｄｉｎ ６、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１；ＡＳＧＰＲ１；ＣＤＨ１６；５Ｔ４；８Ｈ９；αｖβ６インテグリン;Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；ＣＡ９；カッパ軽鎖（ｋａｐｐａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）;ＣＳＰＧ４；ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０；ＦＡＰ；ＦＡＲ；ＦＢＰ；胚型ＡｃｈＲ；ＨＬＡ－Ａ１、ＨＬＡ－Ａ２；ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３；ＫＤＲ；ＭＣＳＰ；ＮＫＧ２Ｄリガンド；ＰＳＣ１；ＲＯＲ１；Ｓｐ１７；ＳＵＲＶＩＶＩＮ；ＴＡＧ７２；ＴＥＭ１；フィブロネクチン；テネイシン；腫瘍壊死ゾーンの癌胚性変異体；Ｇタンパク質結合受容体Ｃグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）;Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）;ポリシアル酸; 胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミドのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）;乳房分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）;ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質結合受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ交互リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポイエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマ癌精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマ癌精巣抗原－２（ＭＡＤ －ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；Ｐ５３変異体;ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫移行ブレークポイント;アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；Ｖ－ｍｙｃトリ骨髄症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チトクロームＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）；Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアリングボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）;骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュールを含むムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含むが、これらに限定されない。

「腫瘍」という用語は、異常な細胞増殖によって引き起こされる腫れまたは病変を指す（腫瘍性細胞（新生細胞）または腫瘍細胞と呼ばれる）。「腫瘍細胞」とは、急速かつ制御不能に増殖し得る細胞、および増殖を引き起こした刺激が停止した後も増殖し続ける異常な細胞を指す。腫瘍は、構造組織の部分的または完全な欠如、および正常組織との機能的協調の欠如として現れ、通常、良性、前悪性、または悪性の可能性がある独特の組織塊を形成する。

「がん」（医学用語：悪性腫瘍）という用語は、一類の疾患を指し、一グループの細胞が制御されない増殖（正常限界を超える分裂）、浸潤（隣接組織への侵入および破壊）を示し、そして時には転移する（リンパまたは血液を介して体の他の部分に広がる）。がんのこれらの３つの悪性の特徴は、がんを、自己制限的で侵入または転移しない良性腫瘍と区別付ける。ほとんどのがんは腫瘍を形成するが、一部（白血病など）は腫瘍を形成しない。

「がん」および「腫瘍」または「がん疾患」および「腫瘍疾患」という用語は置き換えて使用可能であり、細胞が制御されない増殖、および／または浸潤、および／または転移を示す疾患を指す。白血病、セミノーマ、メラノーマ、奇形腫、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、副腎癌、甲状腺癌、血液癌、皮膚癌、脳癌、子宮頸癌、腸癌、肝癌、結腸癌、胃癌、腸癌、頭頸部癌、胃腸癌、リンパ節癌、食道癌、結腸直腸癌、膵臓癌、耳鼻喉（ＥＮＴ）癌、乳癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、肺癌、およびそれらの転移が含まれる。実例としては、肺癌、乳癌、前立腺癌、結腸癌、腎細胞癌、子宮頸癌もしくは上記がんまたは腫瘍の転移が挙げられる。

「トランスフェクション」または「形質導入」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に転移または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクションされた」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクション、形質転換、または形質導入された細胞である。前記細胞は、原発性被験者細胞及びその後代を含む。

「特異的に結合する」、「特異的に認識する」という用語は、本明細書において同じ意味を有し、サンプルに存在する抗原（例えば、腫瘍抗原）を認識して結合する抗体またはリガンドを指し、当該抗体またはリガンドは基本的にはサンプル内の他の分子を認識または結合することはない。

「難治」という用語は、治療に応答しないがんまたは腫瘍などの疾患を指す。実施形態では、難治性腫瘍は、治療前または治療開始時に治療に対して耐性があることであってもよい。他の実施形態では、難治性腫瘍は、治療中に耐性があることであってもよい。難治性腫瘍は耐性腫瘍とも呼ばれる。本発明において、難治性腫瘍は、放射線療法に反応しない、放射線療法後に再発する、化学療法に反応しない、化学療法後に再発する、ＣＡＲ－Ｔ治療に反応しないまたは治療後に再発する腫瘍を含むが、これらに限定されない。難治性または再発性の悪性腫瘍について、本明細書に記載されている治療スキームを使用することができる。

本明細書で使用される「再発した」とは、改善の期間、例えば、癌治療などの療法による以前の治療後、疾患（例えば、癌）、または癌などの疾患の徴候および症状の回復をいう。

「対象」、「個体」、「生物」または「患者」という用語は置き換えて使用可能であり、脊椎動物、好ましくは哺乳動物を含む。本発明において、哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、家畜（例えば、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ、ウマなど）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモットなど）および飼育下の動物（例：動物園の動物）である。本明細書で使用される「動物」という用語は、ヒトも含む。「対象」および「個体」という用語は、患者、すなわち、疾患に罹患している動物、好ましくはヒトを含み、前記疾患は、好ましくは、本明細書に記載の疾患である。

「増強」という用語は、被験者または腫瘍細胞が本明細書に開示された治療に応答する能力を改善することを可能にすることを指す。例えば、増強された応答は、応答性の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％またはそれ以上の増加を含むことができる。本明細書で使用されるように、「増強」はまた、免疫エフェクター細胞療法などの治療に応答する被験者の数を増やすことを指すこともできる。例えば、増強された応答は、治療に応答する被験者の合計パーセンテージを指すことができ、パーセンテージは、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％またはそれ以上である。

一態様では、治療は、次の臨床結果、すなわち、Ｔ細胞の抗腫瘍活性の増加、増強または延長；治療前の数と比較して、抗腫瘍Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞の数の増加、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαの分泌の促進、またはそれらの組み合わせにより決められる。もう一態様では、臨床結果は、腫瘍の退縮；腫瘍の縮小；腫瘍の壊死；免疫系を介した抗腫瘍反応；腫瘍の拡大、再発または拡散、またはそれらの組み合わせである。もう一態様では、治療効果は、Ｔ細胞の存在、Ｔ細胞炎症を示す遺伝子マーカーの存在、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦαの分泌の促進、またはそれらの組み合わせによって予測される。

本明細書に開示されたような免疫エフェクター細胞は、経口、または、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、嚢内、腹腔内、直腸内、大槽内、腫瘍内、鼻腔内（ｉｎｔｒａｖａｓａｌｌｙ）、皮内、または皮膚パッチまたは経皮イオントフォレーシス法を使用して皮膚を通した受動的または促進された吸収などの非経口胃腸外を含む様々な経路によって個体に投与することができる。

本願の方法を実施する際に投与される試薬の総量は、単一用量としてボーラス注入、または比較的短時間にわたる注入によって被験者に投与することができ、または段階的治療スキームを使用して投与することができ、延長した時間にわたって複数の用量を投与する。被験者の病状を治療するための組成物の量が、被験者の年齢および一般的な健康、並びに投与経路および投与される治療回数を含む多くの要因に依存することは、当業者は分かるであろう。これらの要因を考慮に入れて、当業者は必要に応じて具体的な用量を調整する。一般に、最初に、フェースＩとフェースＩＩの臨床試験を使用して組成物の配合および投与経路と頻度を測定する。

範囲：この開示全体を通して、本願の様々な態様は範囲の形で存在することができる。範囲の形による説明は、単に便宜および簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する変更不可能な制限と見なされるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲についての説明は、すべての可能なサブ範囲およびその範囲内の個々の値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、１～６のような範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などのサブ範囲、および、１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６など、その範囲内の個々の値を具体的に開示したと見なされるべきである。別の例として、９５～９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性の範囲を含み、さらに、９６～９９％、９６～９８％、９６～９７％、９７～９９％、９７～９８％、および９８～９９％の同一性などのサブ範囲をも含む。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

本開示に基づいて、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、開示された具体的な実施形態において多くの変更または変化をすることができ、しかも依然として同じまたは類似した結果を得ることができると当業者は理解するのであろう。本発明は範囲上で、本明細書に記載の具体的な実施形態（本発明の各態様としての例示説明のみを目的とする）に制限されていなく、機能的に同等の方法および組成は本発明の範囲内にある。

本願は、養子細胞または免疫エフェクター細胞による固形腫瘍の治療に係り、細胞の複数回投与または反復投与、並びにその使用方法、組成物、及び製品を含む。細胞は一般に、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのキメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの他のトランスジェニック受容体を発現する。

ヒトクローディン１８（Ｃｌａｕｄｉｎ １８、ＣＬＤ１８）分子（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号：スプライスバリアント１（ＣＬＤ１８Ａ１またはＣｌａｕｄｉｎ １８．１）：ＮＰ＿０５７４５３、ＮＭ０１６３６９、およびスプライスバリアント２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣｌａｕｄｉｎ １８．２）：ＮＭ＿００１００２０２６、ＮＰ＿００１００２０２６）は、分子量が約２７，９／２７，７２ｋＤの内在性膜貫通タンパク質である。マウスクローディンＣｌａｕｄｉｎ １８．２（ＮＰ＿００１１８１８５０．１）。

「ＣＬＤ１８」という用語はクローディン１８を指し、細胞によって自然に発現されるか、またはＣＬＤ１８遺伝子でトランスフェクトされた細胞によって発現されるＣＬＤ１８の任意の変異体（ＣＬＤ１８Ａ１およびＣＬＤ１８Ａ２を含む）、コンフォメーション、アイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）および種間ホモログ（ｓｐｅｃｉｅｓｈｏｍｏｌｏｇｓ）を含む。クローディン１８は、上皮と内皮の密着結合（タイトジャンクション）に位置する内在性膜タンパク質である。密着結合は隣接する細胞間で膜内の粒子を組織して相互接続された鎖のネットワークを形成する。密着結合では、オクルディン（оｃｃｌｕｄｉｎ）とクローディンが最も重要な膜貫通タンパク質成分である。それらの強力な細胞間接着特性により、溶質の傍細胞輸送を防止および制御し、膜脂質およびタンパク質の横方向の拡散を制限して細胞極性を維持する一次バリアを生成する。密着結合を形成するタンパク質は、上皮組織の構造の組織に決定的に関与している。好ましくは、「ＣＬＤ１８」は、ヒトＣＬＤ１８、特にＣＬＤ１８Ａ２（アミノ酸配列は配列番号２に示される）および／またはＣＬＤ１８Ａ１（アミノ酸配列は配列番号３に示される）、より好ましくはＣＬＤ１８Ａ２を指す。

「ＣＬＤ１８Ａ１」という用語は、細胞によって自然に発現されるか、またはＣＬＤ１８Ａ１遺伝子でトランスフェクトされた細胞によって発現される任意の、ヒトＣＬＤ１８Ａ１の翻訳後修飾変異体、アイソフォーム、および種間ホモログを含む。

「ＣＬＤ１８Ａ２」という用語は、細胞によって自然に発現されるか、またはＣＬＤ１８Ａ２遺伝子でトランスフェクトされた細胞によって発現される任意の、ヒトＣＬＤ１８Ａ２の翻訳後修飾変異体、アイソフォーム、および種間ホモログを含む。

「ＣＬＤ１８変異体」という用語には、（ｉ）ＣＬＤ１８スプライス変異体、（ｉｉ）ＣＬＤ１８翻訳後修飾変異体、特に異なるＮグリコシル化状態の変異体、（ｉｉｉ）ＣＬＤ１８コンフォメーション変異体、特にＣＬＤ１８－コンフォメーション－１、ＣＬＤ１８－コンフォメーション－２およびＣＬＤ１８－コンフォメーション－３を含むＣＬＤ１８コンフォメーション変異体、（ｉｖ）細胞間の密着結合に位置する遊離ＣＬＤ１８およびホモタイプ／ヘテロタイプ関連変異体、（ｖ）ＣＬＤ１８がん関連変異体およびＣＬＤ１８非がん関連変異体を含むべきである。

一部の実施形態において、前記クローディン１８Ａ２は、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド、または前記アミノ酸配列の変異体のタンパク質／ペプチドである。「変異体」という用語は、変異体、スプライス変異体、コンフォメーション、アイソフォーム、対立遺伝子変異体、種変異体（ｓｐｅｃｉｅｓ ｖａｒｉａｎｔ）および種相同体（ｓｐｅｃｉｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇ）、特に天然に存在する変異体を指す。「ＣＬＤＮ」、「ＣＬＤＮ１８」、「ＣＬＤＮ１８Ａ１」および「ＣＬＤＮ１８Ａ２」という用語は、翻訳後修飾された変異体およびコンフォメーション変異体を包含するものとする。

ＣＬＤ１８Ａ１は正常な肺と胃の上皮で選択的に発現するが、ＣＬＤ１８Ａ２は胃細胞でのみ発現する。さらに、ＣＬＤ１８Ａ２は分化した短命の胃上皮細胞に限定されているが、胃幹細胞領域には存在しない。

一部の実施形態において、原発腫瘍は、胃癌、食道癌、膵臓癌、非小細胞肺癌などの肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、および胆嚢癌、並びに、前記転移、特にＫｒｕｋｅｎｂｅｒｇ腫瘍などの胃癌転移、腹膜転移、及びリンパ節転移を指す。一部の実施形態では、ＣＬＤＮ１８Ａ２を発現する細胞は腫瘍細胞を指し、特に腫瘍形成性胃癌細胞、食道癌細胞、膵臓癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、結腸癌細胞、肝臓癌細胞、頭頸部癌細胞及び胆嚢癌細胞から選択される。

一部の実施形態において、前記腫瘍は、乳癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、膀胱癌、尿管癌、腎盂癌、脊髄腫瘍、神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、これらの癌の組み合わせ、及びこれらの癌の転移性病変を含む。

本発明は、ＣＬＤ１８発現を伴う疾患（腫瘍など）を治療するための治療方法および組成物を提供する。

本発明は、養子細胞または免疫エフェクター細胞による固形腫瘍の治療において、受験者が遺伝子操作された（組み換えられた）免疫エフェクター細胞キメラ受容体を発現する、受験者の腫瘍を治療するための方法を提供する。この方法は、一般に、そのような細胞の単一コースの再注入または複数コースの再注入を含む。一部の実施形態において、それは、治療コース内の用量増加または治療コース内の反復用量注入、または治療コース内の用量減少である。一部の実施形態において、最初の用量は、より低い用量および／または調整または減少された用量であり、および／または後続用量は、強化用量および／または調整または減少された用量である。そのような方法で使用することができる細胞、組成物、および製品も提供される。一部の実施形態において、キメラ受容体は、機能的非ＴＣＲ抗原受容体などの遺伝子操作された抗原受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、およびトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの他の組換え抗原受容体である。受容体はまた、リガンドまたは受容体、または、例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達部分などの他の結合パートナーの細胞外および細胞内部分に特異的に結合する受容体などの他の組換えキメラ受容体を含む。一部の実施形態において、用量は、より低い最初の用量を含む。

一部の実施形態において、この方法は、（ａ）腫瘍を患っている受験者にキメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞の単一コースを投与すること、および（ｂ）キメラ抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現する細胞の複数のコースを受験者に投与することを含む。他の実施形態において、１つ以上の後続用量が投与され得る。

次は、具体的な実施例を組み合わせて本発明についてさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において具体的な条件を示していない実験方法は、通常の条件、例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋらの『Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ』（科学出版社、２００２）に記載の条件、または製造業者によって推奨された条件に従う。

本発明の例示的な抗原受容体、ＣＡＲを含み、およびエンジニアリング改善のための、並びに受容体を細胞に導入する方法について、例えば、中国特許出願公開番号ＣＮ１０７０５８３５４Ａ、ＣＮ１０７４６０２０１Ａ、 ＣＮ１０５１９４６６１Ａ、ＣＮ１０５３１５３７５Ａ、ＣＮ１０５７１３８８１Ａ、ＣＮ１０６１４６６６６Ａ、ＣＮ１０６５１９０３７Ａ、ＣＮ１０６５５４４１４Ａ、ＣＮ１０５３３１５８５Ａ、ＣＮ１０６３９７５９３Ａ、ＣＮ１０６４６７５７３Ａ、ＣＮ１０４１４０９７４Ａ、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１７１８６１２１Ａ１ 、ＷＯ２０１８００６８８２Ａ１、ＷＯ２０１５１７２３３９Ａ８、ＷＯ２０１８／０１８９５８Ａ１に開示されたものを参照する。

実施例１：Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ－ＧＦＰ－Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲＴ細胞の確立
１、Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ－ＧＦＰ－Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２細胞の構築
マウスＣｌａｕｄｉｎ １８．２（配列番号１）を過剰発現するＰａｎｃ０２膵臓癌細胞モデルは、分子生物学の従来の方法によって確立された（Ｐａｎｃ０２膵臓癌細胞モデルは北納生物（ＢＮＣＣ）から購入した）。ｐＷＰＴをベクターとして使用し、マウスＣｌａｕｄｉｎ １８．２（配列番号１）を挿入してプラスミドｐＷＰＴ－ｍＣｌａｕｄｉｎ １８．２を構築した。次に、マウスＣｌａｕｄｉｎ １８．２を過剰発現する膵臓癌細胞Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ－ＧＦＰ－Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２を、レンチウイルスパッケージング感染法によって確立した。

２、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞の構築
（１）プラスミドの構築
本分野における従来の分子生物学的方法を使用して、本実施例で使用されるｓｃＦｖは、標的マウスＣｌａｕｄｉｎ １８．２抗体であり、核酸配列は、配列番号５に示されている。

ＭＳＣＶ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰ（Ａｄｄｇｅｎｅから購入）をベクターとして使用して、次世代キメラ抗原受容体を発現するレトロウイルスプラスミドＭＳＣＶ－８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ（図１に示される）を構築した。その中で、８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ配列はマウスＣＤ８αシグナルペプチド（そのアミノ酸配列は配列番号６に示され、そのヌクレオチド配列は配列番号７に示される）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２を標的とするｓｃＦｖ（アミノ酸配列は配列番号４に示され、そのヌクレオチド配列は配列番号５に示される）、マウスＣＤ８ヒンジおよび膜貫通領域（そのアミノ酸配列は配列番号８に示され、そしてそのヌクレオチドは配列は配列番号９に示される）、マウス４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン（そのアミノ酸配列は配列番号１０に示され、そのヌクレオチド配列は配列番号１１に示される）、およびマウスＣＤ３細胞内セグメントＣＤ３ζ（そのアミノ酸配列は配列番号１２に示され、そのヌクレオチド配列は配列番号１３に示される）からなる。

上記のように構築されたＭＳＣＶ－８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺを２９３Ｔ（ＡＴＣＣに由来）にトランスフェクトして、レトロウイルスをパッケージングし、レトロウイルスを得た。感染法は、本分野でキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞の調製中の従来の感染方法である。

（２）ＣＡＲ Ｔ細胞の構築：Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｓｈａｎｇｈａｉ ＳＩＰＰＲ－ＢＫ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．に由来）の脾臓Ｔリンパ球を採取し、精製したマウスＣＤ３＋Ｔリンパ球を１：１の体積比でＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｍｏｕｓｅ Ｔ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３/ＣＤ２８に加え、ＰＢＳで１回洗浄して活性化し、インキュベーターで培養した。培地は、１０％ＦＢＳ血清が添加された、ＲＰＭＩ １６４０完全培地（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から購入）である。

２４時間活性化したマウス脾臓Ｔリンパ球を、組換えヒトフィブリン断片でコーティングした１２ウェルプレートに播種し、レトロウイルスを加えて１２時間感染させた後、必要な数まで培養および増殖してマウス８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞を得た。

実施例２：インビボ実験で観察されたマウス膵臓癌に対するゲムシタビン（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）とＣＡＲ Ｔ細胞との併用による阻害効果
６週齢のＣ５７ＢＬ/６マウスの膵臓に、２×１０^５ Ｐａｎｃ０２／Ｌｕｃ－ＧＦＰ－Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２細胞をインサイチュで接種し、腫瘍細胞の接種日を０日目（すなわち、Ｄａｙ ０）として記録した。

腫瘍接種後６日目（すなわち、Ｄａｙ ６）に、マウスＴ細胞を採取し、実施例１に従って８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞株を構築した。同時に、マウスのインビボイメージングを行い、マウスの腫瘍量（Tumor burden）に応じてランダムに群分けした。主な群は次のとおりである。

第１群：ＵＴＤ群、すなわち、トランスフェクトされていないマウスＴ細胞治療のみを行った群；
第２群：ＣＡＲＴ群、すなわち、８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞療法のみを行った群；
第３群：Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ群（或いは、ゲムシタビン群と呼ばれる）、すなわち、ゲムシタビンのみを投与された群；及び
第４群：Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群（或いは、ゲムシタビン＋ＣＡＲＴ群と呼ばれる）、すなわち、８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞とゲムシタビンの併用治療群。

６、７、および８日目（すなわち、Ｄａｙ ６、７、８）に、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ群およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲ Ｔ群のマウスに、３０ｍｇ/ｋｇのゲムシタビンで１日１回腹腔内投与した。

腫瘍接種後９日目（すなわち、Ｄａｙ ９）に、ＣＡＲＴ群およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲ Ｔ群のマウスにそれぞれ、尾静脈注射により３×１０^６の８Ｅ５－２Ｉ－ｍＢＢＺ ＣＡＲ－Ｔ細胞を投与し、ＵＴＤ群に３×１０^６のトランスフェクトされていないマウスＴ細胞を注射し、その後、週に１回インビボイメージングを実施して治療効果を観察した。

同所性マウス膵臓癌に対する抑制効果の結果を図２に示す。治療を受けてから１３日目（Ｄａｙ １３）に、ＵＴＤ群、ＣＡＲＴ群、およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ群と比較して、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群のマウス体内の腫瘍量（白く強調表示された領域）は大幅に減少し、当該Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群の２匹のマウスは完全な寛解を示した。２１日目（Ｄａｙ ２１）に、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群では、４匹のマウスが完全に寛解した。他の３つの群では、２１日目に完全寛解したマウスは現れなかった。インビボイメージングデータは、ＵＴＤ群、ＣＡＲＴ群およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ群のマウスの腫瘍が成長し続け、ＵＴＤ群と比較して、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群のマウスの腫瘍成長が効果的に制御された（Ｐ＜０．０５、図３）ことを示している。マウスの生存データは、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ＋ＣＡＲＴ群のマウスの生存期間が最も長く、ＵＴＤ群のマウスの生存期間（Ｐ＜０．０１、図４）およびＧｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ群のマウスの生存期間（Ｐ＜０．０５、図４）を大幅に上回っていることを示している。

本発明で言及されたすべての文献は、あたかも各文献が個別に参照として引用されたように、本願において参照として引用されている。また、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態もまた、本願の添付の特許請求の範囲によって限定される範囲内にあることを理解されたい。

本願に係る配列は下記通りである。

Claims (19)

1. 腫瘍を患っている個体に、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ゲムシタビンとを投与することを含むことを特徴とする、腫瘍を治療する方法。
2. 腫瘍を患っている個体に、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞と、ゲムシタビンとを投与することを含むことを特徴とする、癌細胞の成長、生存または活性またはすべてを低下させる方法。
3. 腫瘍を患っている個体に免疫エフェクター細胞及びゲムシタビンを投与する方法は、
   （１）まずゲムシタビンを投与し、次に免疫エフェクター細胞を投与すること、
   （２）免疫エフェクター細胞とゲムシタビンを同時に投与すること、及び
   （３）まず免疫エフェクター細胞を投与し、次にゲムシタビンを投与すること
   から選択されるいずれかであることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記受容体が、キメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（Ｔ ｃｅｌｌ ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｕｐｌｅｒ、ＴＡＣ）またはそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記腫瘍抗原が固形腫瘍抗原であり、好ましくは、前記腫瘍抗原が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）および／または血管内皮成長因子受容体であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記キメラ抗原受容体は、
   （ｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または
   （ｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ；または
   （ｉｉｉ）腫瘍抗原を認識する抗体またはそのフラグメント、ＣＤ２８またはＣＤ８の膜貫通領域、ＣＤ２８の共刺激シグナルドメイン、ＣＤ１３７の共刺激シグナルドメイン、及びＣＤ３ζ
   を有することを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
7. 前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、
   好ましくは、前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列であることを特徴とする、
   請求項５または６に記載の方法。
8. 前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、
   好ましくは、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列であることを特徴とする、
   請求項６または７に記載の方法。
9. 前記腫瘍は、乳癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、膀胱癌、尿管癌、腎盂癌、脊髄腫瘍、神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、これらの癌の組み合わせ、及びこれらの癌の転移性病変を含むことを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞、好中球、樹状細胞、または骨髄由来食細胞もしくはそれらの組み合わせを含み、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は、自己Ｔ細胞、同種Ｔ細胞または同種ＮＫ細胞から選択され、より好ましくは、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞であることを特徴とする、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記ゲムシタビンは、経口投与、腹腔内投与および／または注射によって投与されることを特徴とする、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記個体に対して、リンパ球のクリアランスを行わないことを特徴とする、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
13. 薬剤の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞の使用であって、前記薬剤が前記細胞及びゲムシタビンを含み、ヒト患者において腫瘍の治療または癌細胞の成長、生存または活性の低下のために使用され、前記細胞とゲムシタビンが、前記細胞およびゲムシタビンのいずれかを単独で使用した場合の効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合されることを特徴とする、使用。
14. 薬剤の調製における、腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞及びゲムシタビンの使用であって、前記薬剤が、ヒト患者において腫瘍の治療または癌細胞の成長、生存または活性の低下のために使用され、前記細胞とゲムシタビンが、前記細胞およびゲムシタビンのいずれかを単独で使用した場合の効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合されることを特徴とする、使用。
15. 前記免疫エフェクター細胞がＣＡＲ Ｔ細胞であり、好ましくは、前記ＣＡＲ Ｔ細胞が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＢＣＭＡおよび／または血管内皮成長因子受容体を認識することを特徴とする、請求項１３または１４に記載の使用。
16. 腫瘍を治療するためのキットであって、前記キットは、
    １）腫瘍抗原を認識する受容体を発現する免疫エフェクター細胞；
    ２）ゲムシタビン；
    ３）上記１）および２）に記載された物質を収容するための容器；および
    ４）前記キットを使用して腫瘍を治療するための取り扱い説明書
    を含み、
    前記免疫エフェクター細胞とゲムシタビンが、前記試薬のそれぞれの効果の合計よりも大きい治療効果を提供するように配合され、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞がＣＡＲ Ｔ細胞であり、より好ましくは、前記ＣＡＲ Ｔ細胞が、上皮成長因子受容体ファミリーおよびその変異体（すなわち、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．１、Ｃｌａｕｄｉｎ ６、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＢＣＭＡおよび／または血管内皮成長因子受容体を認識することを特徴とする、キット。
17. 前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、好ましくは、前記腫瘍抗原を認識する抗体のアミノ酸配列は、配列番号４及び配列番号１４～２２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列であり、
    前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有し、
    好ましくは、前記キメラ抗原受容体のアミノ酸配列は、配列番号２３～４４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列であることを特徴とする、
    請求項１３～１５のいずれか１項に記載の使用、もしくは請求項１６に記載のキット。
18. 前記腫瘍は、乳癌、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、膀胱癌、尿管癌、腎盂癌、脊髄腫瘍、神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、これらの癌の組み合わせ、及びこれらの癌の転移性病変を含むことを特徴とする、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の使用、もしくは請求項１６または１７に記載のキット。
19. 前記免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、マスト細胞、好中球、樹状細胞、または骨髄由来食細胞もしくはそれらの組み合わせを含み、好ましくは、前記免疫エフェクター細胞は、自己Ｔ細胞、同種Ｔ細胞または同種ＮＫ細胞から選択され、より好ましくは、前記Ｔ細胞は自己Ｔ細胞であることを特徴とする、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の使用、もしくは請求項１６～１８のいずれか１項に記載のキット。

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