JP2022522479A - 併用療法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、特に、がん及び自己免疫のための免疫療法等の、疾患を治療するための方法において使用が見出されるキメラタンパク質を含む組成物の組み合わせに関する。【選択図】図３Ｂ

Description

優先権
本出願は、２０１９年２月２８日に出願された米国出願第６２／８１１，８６１号、及び２０１９年８月３０日に出願された米国出願第６２／８９４，４７９号の利益及び優先権を主張し、その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、特に、がん及び自己免疫のための免疫療法等、疾患を治療するための方法において使用が見出されるキメラタンパク質を含む組成物の組み合わせに関する。
電子的に提出されたテキストファイルの記載
本出願は、配列表を含む。それは、「ＳＨＫ－０１４ＰＣ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」と題されたＡＳＣＩＩテキストファイルとしてＥＦＳ－Ｗｅｂを経由して電子的に送信されている。配列表は、サイズが４５，０５６バイトであり、２０２０年２月２７日に作成された。配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
免疫系は、がん細胞及び疾患の原因となる異物に対する体の応答の中核である。しかしながら、多くのがんは、例えば、免疫阻害性シグナルを伝達または伝播することにより、免疫系を回避するメカニズムを発展させてきた。さらに、多くの抗がん療法は、免疫応答を直接的に刺激及び／または活性化しない。二重特異的抗体、連結されたｓｃＦｖ、またはＴ細胞誘導体との現在の併用免疫療法は、チェックポイント（免疫阻害性シグナル）を遮断し、ＴＮＦ受容体をアガナイズ（刺激）することができていない。これは、複数の標的を一価の抗原結合アームで結合するように操作すると、これらの分子が標的アビディティを失うためと考えられる。したがって、少なくとも複数の機能を備えているが、それでも依然として標的アビディティを保持する、例えば、免疫阻害性シグナルを逆転させ、抗がん免疫応答を刺激するような療法を開発する必要性が残っている。
したがって、様々な態様では、本発明は、がん免疫療法に有用な組成物及び方法を提供する。例えば、本発明は、部分的に、免疫チェックポイント分子に指向する少なくとも１つの抗体、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、及び／または各キメラタンパク質が免疫阻害性シグナルを遮断し、及び／または免疫活性化シグナルを刺激することが可能である、１つ以上のキメラタンパク質を投与する（同時にまたは連続的に）ことを含む、がんを治療するための方法に関する。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
本発明の別の態様は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
本発明の別の態様は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
本発明の一態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
本発明の別の態様は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストによる治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
本発明の別の態様は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
本発明のさらに別の態様は、がん治療の有効性の評価を必要とする対象においてがん治療の有効性を評価するための方法であって、対象が、がんに罹患しており、方法が、（ｉ）（Ａ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質、ならびに（Ｂ）抗免疫チェックポイント抗体、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、異種キメラタンパク質を連続投与するステップと、を含む、方法を提供する。
本発明のさらに別の態様は、がん治療の有効性の評価を必要とする対象においてがん治療の有効性を評価するための方法であって、対象が、がんに罹患しており、方法が、（ｉ）（Ａ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質、ならびに（Ｂ）抗免疫チェックポイント抗体、を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、異種キメラタンパク質を連続投与するステップと、を含む、方法を提供する。
本明細書に開示される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
Ｉ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、左のタンパク質）及びＩＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、右のタンパク質）の概略図を示す。Ｉ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質は、それらの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインが取り除かれ、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインがリンカー配列を使用して隣接し、単一のキメラタンパク質を生成するように操作され得る。図１Ｃ及び図１Ｄに示されるように、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３、ならびにＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌは、単一のキメラタンパク質に組み合わせる。図１Ｃは、各タンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを取り除いたＩ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質の連結を示し、各タンパク質から遊離した細胞外ドメインがリンカー配列によって隣接されている。この描写における細胞外ドメインは、典型的には細胞膜の外側に局在するＩ型タンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３）及び／またはＩＩ型タンパク質（例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌ）のアミノ酸配列全体、あるいは意図された受容体またはリガンドとの結合を保持するその任意の一部を含み得る。さらに、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、第１の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の左端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であり、及び／または第２の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の右端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であるように、ドメイン間の十分な全体的柔軟性及び／または物理的距離を含む。図１Ｄは、キメラタンパク質の各細胞外ドメインが「外向き」に面する、線形キメラタンパク質における隣接する細胞外ドメインを示す。 Ｉ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、左のタンパク質）及びＩＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、右のタンパク質）の概略図を示す。Ｉ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質は、それらの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインが取り除かれ、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインがリンカー配列を使用して隣接し、単一のキメラタンパク質を生成するように操作され得る。図１Ｃ及び図１Ｄに示されるように、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３、ならびにＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌは、単一のキメラタンパク質に組み合わせる。図１Ｃは、各タンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを取り除いたＩ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質の連結を示し、各タンパク質から遊離した細胞外ドメインがリンカー配列によって隣接されている。この描写における細胞外ドメインは、典型的には細胞膜の外側に局在するＩ型タンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３）及び／またはＩＩ型タンパク質（例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌ）のアミノ酸配列全体、あるいは意図された受容体またはリガンドとの結合を保持するその任意の一部を含み得る。さらに、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、第１の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の左端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であり、及び／または第２の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の右端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であるように、ドメイン間の十分な全体的柔軟性及び／または物理的距離を含む。図１Ｄは、キメラタンパク質の各細胞外ドメインが「外向き」に面する、線形キメラタンパク質における隣接する細胞外ドメインを示す。 Ｉ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、左のタンパク質）及びＩＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、右のタンパク質）の概略図を示す。Ｉ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質は、それらの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインが取り除かれ、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインがリンカー配列を使用して隣接し、単一のキメラタンパク質を生成するように操作され得る。図１Ｃ及び図１Ｄに示されるように、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３、ならびにＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌは、単一のキメラタンパク質に組み合わせる。図１Ｃは、各タンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを取り除いたＩ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質の連結を示し、各タンパク質から遊離した細胞外ドメインがリンカー配列によって隣接されている。この描写における細胞外ドメインは、典型的には細胞膜の外側に局在するＩ型タンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３）及び／またはＩＩ型タンパク質（例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌ）のアミノ酸配列全体、あるいは意図された受容体またはリガンドとの結合を保持するその任意の一部を含み得る。さらに、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、第１の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の左端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であり、及び／または第２の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の右端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であるように、ドメイン間の十分な全体的柔軟性及び／または物理的距離を含む。図１Ｄは、キメラタンパク質の各細胞外ドメインが「外向き」に面する、線形キメラタンパク質における隣接する細胞外ドメインを示す。 Ｉ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、左のタンパク質）及びＩＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ及び図１Ｂ、右のタンパク質）の概略図を示す。Ｉ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質は、それらの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインが取り除かれ、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインがリンカー配列を使用して隣接し、単一のキメラタンパク質を生成するように操作され得る。図１Ｃ及び図１Ｄに示されるように、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３、ならびにＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌは、単一のキメラタンパク質に組み合わせる。図１Ｃは、各タンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを取り除いたＩ型膜貫通タンパク質及びＩＩ型膜貫通タンパク質の連結を示し、各タンパク質から遊離した細胞外ドメインがリンカー配列によって隣接されている。この描写における細胞外ドメインは、典型的には細胞膜の外側に局在するＩ型タンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３）及び／またはＩＩ型タンパク質（例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌ）のアミノ酸配列全体、あるいは意図された受容体またはリガンドとの結合を保持するその任意の一部を含み得る。さらに、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、第１の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の左端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であり、及び／または第２の細胞外ドメイン（図１Ｃ及び図１Ｄのキメラタンパク質の右端に示される）がその受容体／リガンドと立体的に結合することが可能であるように、ドメイン間の十分な全体的柔軟性及び／または物理的距離を含む。図１Ｄは、キメラタンパク質の各細胞外ドメインが「外向き」に面する、線形キメラタンパク質における隣接する細胞外ドメインを示す。 本発明に関連する免疫阻害性及び免疫刺激性シグナル伝達を示す（Ｍａｈｏｎｅｙ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２０１５：１４；５６１－５８５から）。 本発明によるがん治療の方法に起因する腫瘍体積サイズにおけるインビボでの減少を示す。 図３Ａに示す異なる組み合わせの腫瘍接種後の生存日数パーセントのカプラン・マイヤープロットを示す。この図において、「ＡＲＣ」という用語は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を指す。 図３Ａ及び図３Ｂのグラフに関連するデータを含む。 本発明によるがん治療の方法に起因する腫瘍体積サイズにおけるインビボでの減少を示す。 図４Ａに示す異なる抗体の組み合わせの腫瘍接種後の生存日数パーセントのカプラン・マイヤープロットを示す。この図において、「ＡＲＣ」という用語は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を指す。 図４Ａ及び図４Ｂのグラフに関連するデータを含む。 ＣＴ２６腫瘍を負荷し、説明文に示されるように処理したマウスにおける腫瘍成長動態を示す（１０日目において、曲線の順序は、上から下へ、ビヒクル、抗ＰＤ１、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ＋抗ＰＤ１である）。 図５ＡのＣＴ２６腫瘍実験の生存及び統計のカプラン・マイヤープロットである。 図５Ａ及び図５Ｂのグラフに関連するデータを含む。 図５Ａ及び図５Ｂのグラフに関連するデータを含む。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＣＤ８＋細胞の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総パーフォリン＋ＣＤ８＋細胞の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＩＦＮγ＋ＣＤ８＋細胞の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＡＨ１－四量体＋ＣＤ８＋細胞（抗原特異的ＣＤ８＋細胞）の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＣＤ４＋細胞の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞の画分（パーセンテージとして表される）。 ＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）単独で、または抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）抗体との組み合わせで処理したＣＴ２６（大腸癌）腫瘍同種移植片を保有するＢＡＬＢ／Ｃマウスにおける、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定の結果を示す。フローサイトメトリー分析によって決定されるような、解離腫瘍組織中の示された細胞集団中の総ＩＦＮγ＋（ＮＫＰ４６＋ＮＫ）細胞の画分（パーセンテージとして表される）。
本発明は、部分的に、免疫チェックポイント分子に指向する少なくとも１つの抗体、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、及び／または各キメラタンパク質が免疫阻害性シグナルを遮断し、及び／または免疫活性化シグナルを刺激することが可能である、１つ以上のキメラタンパク質を投与する（同時にまたは連続的に）ことを含む、がんを治療するための方法の発見に基づく。
重要なのは、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質が、例えば、その検出及び／または破壊を回避しようと試みるがん細胞に由来する免疫阻害性シグナルの伝達を妨害、遮断、減少、阻害、及び／または隔離し、及び／または抗がん免疫細胞への免疫刺激性シグナルの伝達を増強、増加、及び／または刺激することであり、本方法は、複数の異なる経路によって抗腫瘍効果を提供することができる。複数の異なる経路を介してがんを治療することによって、本発明の方法は、患者において任意の抗腫瘍効果を提供する、及び／または患者において増強された抗腫瘍効果を提供する可能性が高い。さらに、本方法は複数の異なる経路によって機能するため、少なくとも、経路のうちの１つを標的とする治療に応答しない、応答が不十分である、または抵抗性となる患者において有効であり得る。したがって、２つの経路のうちの１つを介して作用する治療に対して不十分な応答者である患者は、複数の経路を標的とすることによって治療効果を達成することができる。
抗体
本発明の方法は、がんを治療するための方法を含み、これは、実施形態において、免疫チェックポイント分子と結合することが可能である抗体を含む免疫療法を施すことを含む。
抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ダイアボディ、直鎖状抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及び抗体の抗原が結合する一部を含む融合タンパク質のうちの１つ以上から選択され得る。実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、例えば、ヒト化モノクローナル抗体である。したがって、本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、モノクローナル抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、ダイアボディ、直鎖状抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または抗体の抗原が結合する一部を含む融合タンパク質を含む。
実施形態では、抗体は、ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である。ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である例示的な抗体としては、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）、９Ｄ９、トレメリムマブ（旧チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＡＧＥＮ１８８４、及びＲＧ２０７７が挙げられる。
実施形態では、抗体は、ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である。ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である例示的な抗体としては、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）が挙げられる。かかる抗体は、ＰＤ－１とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することが可能である。
ＳＴＩＮＧアゴニスト
本発明の方法は、がんを治療するための方法を含み、これは、実施形態において、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、薬学的組成物を投与することを含む。ＳＴＩＮＧ経路は、免疫細胞を誘引するインターフェロン応答をオンにすることが知られている。理論に拘束されることを望まないが、ＳＴＩＮＧアゴニストを介してＳＴＩＮＧ経路をオンにすると、がんを攻撃するための免疫活性化及び免疫細胞の刺激がもたらされる。
実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、ＩＭＳＡ１０１、及びＵＳ２０１４／０３４１９７６、ＵＳ２０１８／００２８５５３、ＵＳ２０１８／０２３０１７８、ＵＳ９５４９９４４、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１６／１２０３０５、ＷＯ２０１７／０４４６２２、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１７／０２７６４６、ＷＯ２０１７／０９３９３３、ＷＯ２０１７／１０６７４０、ＷＯ２０１７／１２３６５７、ＷＯ２０１７／１２３６６９、ＷＯ２０１７／１６１３４９、ＷＯ２０１７／１７５１４７、ＷＯ２０１７／１７５１５６、ＷＯ２０１７／１７６８１２、ＷＯ２０１８／００９４６６、ＷＯ２０１８／０４５２０４、ＷＯ２０１８／０６０３２３、ＷＯ２０１８／０９８２０３、ＷＯ２０１８／１００５５８、ＷＯ２０１８／１３８６８４、ＷＯ２０１８／１３８６８５、ＷＯ２０１８／１５２４５０、ＷＯ２０１８／１５２４５３、ＷＯ２０１８／１７２２０６、ＷＯ２０１８／１９８０８４、ＷＯ２０１８／２３４８０５、ＷＯ２０１８／２３４８０７、ＷＯ２０１８／２３４８０８、ＷＯ２０１９／０２３４５９、ＷＯ２０１９／０４６４９６、ＷＯ２０１９／０４６４９８、ＷＯ２０１９／０４６５００、ＷＯ２０１９／０７４８８７、ＷＯ２０１９／０７９２６１、ＷＯ２０１９／１１８８３９、ＷＯ２０１９／１２５９７４、またはＷＯ２０１９／１６０８８４に記載される任意のＳＴＩＮＧアゴニストからなる群から選択され、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
キメラタンパク質
本発明の方法は、がんを治療するための方法を含み、これは、実施形態において、免疫阻害性シグナルを遮断する、及び／または免疫活性化シグナルを刺激することが可能であるキメラタンパク質を含む、薬学的組成物を投与することを含む。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般的な構造を含み、式中、（ａ）は、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む第１のドメインであり、（ｂ）は、第１のドメイン及び第２のドメインに隣接するリンカー、例えば、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含む、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含むリンカーであり、（ｃ）は、ＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む第２のドメインであり、リンカーは、第１のドメイン及び第２のドメインを接続する。代替的に、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、Ｎ末端－（ａ）－（ｂ）－（ｃ）－Ｃ末端の一般的な構造を含み、式中、（ａ）は、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む第１のドメインであり、（ｂ）は、第１のドメイン及び第２のドメインに隣接するリンカー、例えば、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含む、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含むリンカーであり、（ｃ）は、別のＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む第２のドメインであり、リンカーは、第１のドメイン及び第２のドメインを接続する。
膜貫通タンパク質は典型的には、細胞外ドメイン、１つまたは一連の膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインからなる。理論に拘束されることを望まないが、膜貫通タンパク質の細胞外ドメインは、細胞外環境において、可溶性受容体もしくはリガンドまたは膜結合受容体もしくはリガンド（すなわち、隣接する細胞の膜）との相互作用に関与する。理論に拘束されることを望まないが、膜貫通ドメイン（複数可）は、膜貫通タンパク質を原形質膜に局在化させる原因となる。理論に拘束されることを望まないが、膜貫通タンパク質の細胞内ドメインは、細胞内シグナル伝達分子との相互作用を調整して、細胞内応答を細胞外環境と調整する（またはその逆）原因となる。
実施形態では、細胞外ドメインは、リガンドまたは受容体と結合するのに十分であり、細胞にシグナルを伝達するのに有効である膜貫通タンパク質の一部を指す。実施形態では、細胞外ドメインは通常、細胞または細胞膜の外部に存在する膜貫通タンパク質のアミノ酸配列全体である。実施形態では、細胞外ドメインは、細胞または細胞膜の外部にあり、当技術分野で即知である方法を使用してアッセイされ得るような（例えば、インビトロでのリガンド結合及び／または細胞活性化アッセイ）、シグナル伝達及び／またはリガンド結合に必要とされる膜貫通タンパク質のアミノ酸配列の一部である。
シングルパス膜貫通タンパク質には、一般的に２つの種類があり、細胞外アミノ末端及び細胞内カルボキシ末端を有するＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ、左のタンパク質を参照されたい）、ならびに細胞外カルボキシ末端及び細胞内アミノ末端を有するＩＩ型膜貫通タンパク質（図１Ａ、右のタンパク質を参照されたい）である。Ｉ型及びＩＩ型膜貫通タンパク質は、受容体またはリガンドのいずれかであり得る。Ｉ型膜貫通タンパク質（例えば、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３）について、タンパク質のアミノ末端は、細胞の外側を向いており、したがって、細胞外環境において他の結合パートナー（リガンドまたは受容体のいずれか）との相互作用に関与する機能ドメインを含む（図１Ｂ、左のタンパク質を参照されたい）。ＩＩ型膜貫通タンパク質（例えば、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌ）について、タンパク質のカルボキシ末端は、細胞の外側を向いており、したがって、細胞外環境において他の結合パートナー（リガンドまたは受容体のいずれか）との相互作用に関与する機能ドメインを含む（図１Ｂ、右のタンパク質を参照されたい）。したがって、これらの２つの種類の膜貫通タンパク質は、細胞膜に対して互いに反対の配向を有する。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴ及びＴＩＭ－３から選択されるＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、ならびに４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬ及びＯＸ４０Ｌから選択されるＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む。したがって、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、少なくとも、ＰＤ－１、ＳＩＲＰα（ＣＤ１７２ａ）、ＴＩＧＩＴまたはＴＩＭ－３の細胞外ドメインを含む第１のドメインを含み、これは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲＬもしくはＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む第２のドメインと直接的にまたはリンカーを介して接続される。図１Ｃ及び図１Ｄに示されるように、ドメインがアミノ末端からカルボキシ末端の配向に連結される場合、第１のドメインは、キメラタンパク質の「左」に位置し、かつ「外向き」となり、第２ドメインは、キメラタンパク質の「右」に位置し、かつ「外向き」となる。
第１及び第２のドメインの他の構成、例えば、第１のドメインが内向きであり、かつ第２のドメインが外向きであること、第１のドメインが外向きであり、かつ第２のドメインが内向きであること、第１及び第２のドメインが両方とも内向きであることが想定される。両方のドメインが「内向き」である場合、キメラタンパク質は、ＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、リンカー、及びＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む、アミノ末端からカルボキシ末端への構成を有するであろう。かかる構成では、それは、キメラタンパク質のドメインがその受容体／リガンドの一方または両方と結合することを可能にするために、本明細書の他の場所に記載されるように、キメラタンパク質が余分な「緩み」を含むことが必要であり得る。
実施形態では、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインは、ＴＩＧＩＴに由来する。
ＴＩＧＩＴは、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）様タンパク質であり、免疫グロブリン及び免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含むＴ細胞上に発現される免疫受容体である。したがって、ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方に対する阻害性免疫チェックポイントとして機能し、免疫系の適応アーム及び先天性アームの両方を標的化する機会を提供する。
ＴＩＧＩＴは、ＮＫ細胞、ならびに活性化、メモリー及び制御性Ｔ細胞のサブセット上、特に二次リンパ器官内の濾胞性ヘルパーＴ細胞上で発現され、ＣＤ１５５／ＰＶＲは、ＩＦＮ－γによって内皮細胞上で上方制御され、未成熟胸腺細胞、リンパ節樹状細胞、ならびに上皮及び神経細胞起源の腫瘍細胞上で高度に発現される。実施形態では、本発明のキメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ細胞外ドメインを含む）は、（例えば、免疫シナプスとの関連で）直前に記載された細胞のうちのいずれかを調節する。
ＴＩＧＩＴは、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、Ｎｅｃｔｉｎ－２、Ｎｅｃｔｉｎ－３及びＮｅｃｔｉｎ－４と結合する。実施形態では、本発明のキメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ細胞外ドメインを含む）は、ＴＩＧＩＴのＣＤ１５５／ＰＶＲへの結合を調節する（例えば、結合またはシグナル伝達を低減または破壊する）。実施形態では、本発明のキメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ細胞外ドメインを含む）は、ＴＩＧＩＴのＮｅｃｔｉｎ－２への結合を調節する（例えば、結合またはシグナル伝達を低減または破壊する）。実施形態では、本発明のキメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ細胞外ドメインを含む）は、ＴＩＧＩＴのＮｅｃｔｉｎ－３への結合を調節する（例えば、結合またはシグナル伝達を低減または破壊する）。実施形態では、本発明のキメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ細胞外ドメインを含む）は、ＴＩＧＩＴのＮｅｃｔｉｎ－４への結合を調節する（例えば、結合またはシグナル伝達を低減または破壊する）。
態様では、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
実施形態では、異種キメラタンパク質が、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含む第１のドメイン、及び／または実質的に全てのＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む第２のドメインを含む。実施形態では、第１のドメインは、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含む。実施形態では、第２のドメインは、実質的に全てのＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、以下のアミノ酸配列を含むヒトＴＩＧＩＴの細胞外ドメインの一部を含む：
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰ（配列番号５７）。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインのバリアントを含む。例として、バリアントは、配列番号５７と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。
当業者は、例えば、Ｓｔａｎｉｅｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＩＧＩＴ ｗｉｔｈ ＰＶＲ ａｎｄ ＰＶＲＬ２ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｈｕｍａｎ ＮＫ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．”ＰＮＡＳ Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（４２），１７８５８－１７８６３（２００９）、Ｂｏｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ａ ｎｏｖｅｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ＤＣ．”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９（３），６９５－７０３（２００９）、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ＴＩＧＩＴ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．”Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０（１），４８－５７（２００９）、及びＬｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｖｓｔｍ３ ｉｓ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ２８ ｆａｍｉｌｙ ａｎｄ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１（４），９０２－９１５（２０１１）等の文献を参照することにより、ＴＩＧＩＴの既知のアミノ酸配列のバリアントを選択することができ、その各々は、その全体が参照により組み込まれる。
実施形態では、ＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインは、ＯＸ４０Ｌに由来する。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、以下のアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む：
ＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦＣＶＬ（配列番号５８）。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインのバリアントを含む。例として、バリアントは、配列番号５８と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。
当業者は、例えば、Ｇｏｄｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ＯＸ－４０ ｌｉｇａｎｄ，ａ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ ＣＤ４＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｔｏ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ．”Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０（２），７５７－７６２（１９９４）、Ｂａｕｍ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ＯＸ４０／ＯＸ４０ ｌｉｇａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｓ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ＯＸ４０ ｌｉｇａｎｄ ａｓ ｔｈｅ ＨＴＬＶ－１－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｐ３４．”ＥＭＢＯ Ｊ．１３（１７），３９９２－４００１（１９９４）、Ｏｈｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＯＸ４０ ｌｉｇａｎｄ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９（８），３８３８－３８４８（１９９７）、及びＣｒｏｆｔ“Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ＴＮＦＲ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ＯＸ４０（ＣＤ１３４）．”Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８，５７－７８（２０１０）等の文献を参照することにより、ＯＸ４０Ｌの既知のアミノ酸配列のバリアントを選択することができ、その各々は、その全体が参照により組み込まれる。
実施形態では、ＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインは、ＬＩＧＨＴに由来する。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、以下のアミノ酸配列を含むヒトＬＩＧＨＴの細胞外ドメインを含む：
ＬＱＬＨＷＲＬＧＥＭＶＴＲＬＰＤＧＰＡＧＳＷＥＱＬＩＱＥＲＲＳＨＥＶＮＰＡＡＨＬＴＧＡＮＳＳＬＴＧＳＧＧＰＬＬＷＥＴＱＬＧＬＡＦＬＲＧＬＳＹＨＤＧＡＬＶＶＴＫＡＧＹＹＹＩＹＳＫＶＱＬＧＧＶＧＣＰＬＧＬＡＳＴＩＴＨＧＬＹＫＲＴＰＲＹＰＥＥＬＥＬＬＶＳＱＱＳＰＣＧＲＡＴＳＳＳＲＶＷＷＤＳＳＦＬＧＧＶＶＨＬＥＡＧＥＫＶＶＶＲＶＬＤＥＲＬＶＲＬＲＤＧＴＲＳＹＦＧＡＦＭＶ（配列番号５９）。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインのバリアントを含む。例として、バリアントは、配列番号５９と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。
当業者は、例えば、Ｍａｕｒｉ，ｅｔ ａｌ．，“ＬＩＧＨＴ，ａ ｎｅｗ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ＴＮＦ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，ａｎｄ ｌｙｍｐｈｏｔｏｘｉｎ ａｌｐｈａ ａｒｅ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒ．”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ８（１），２１－３０（１９９８）、Ｔａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，“ＬＩＧＨＴ，ａ ＴＮＦ－ｌｉｋｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ，ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（８），４１０５－４１１０（２０００）、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ＴＮＦ ａｎｄ ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｅｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ＬＩＧＨＴ：ＤｃＲ３ ａｓｓｅｍｂｌｙ”Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２２ １２５２－６２（２０１４）、Ｆａｕｓｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．”Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ １１（２０１８）、Ｓｕｄｈａｍｓｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＬＴβＲ ｂｙ ＬＴα１β２ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ａｎｄ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｏｒ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１０ １９８９６－１９９０１（２０１３）、Ｓａｖｖｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｍａｍｍａｌｉａｎ ａｎｄ ｖｉｒａｌ ｄｅｃｏｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｆｒｏｍ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｆｅｌｉｘ Ｊ，ＳＮ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７ １１２－１２９（２０１７）”、Ｗａｒｄ－Ｋａｖａｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ＴＮＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｉｎ Ｃｏ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ａｎｄ Ｃｏ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．”Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４４ １００５－１０１９（２０１６）、及びＷａｊａｎｔ“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ＴＮＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．”Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ ２２ １７２７－１７４１（２０１５）等の文献を参照することにより、ＬＩＧＨＴの既知のアミノ酸配列のバリアントを選択することができ、その各々は、その全体が参照により組み込まれる。
実施形態では、本発明のキメラタンパク質及び／または本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ヒトＩｇＧ４抗体配列（配列番号１、配列番号２、または配列番号３）のヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む。
実施形態では、本発明のキメラタンパク質及び／または本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ヒトＩｇＧ４抗体配列からのヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインをリンカーとして使用して、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む。実施形態では、いわゆるＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む：
ＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＩＥＧＲＭＤＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦＣＶＬ（配列番号６０）。
実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書に記載されるバリアントであり得、例えば、本発明のキメラタンパク質は、本発明のキメラタンパク質のアミノ酸配列、例えば、配列番号６０のうちの１つ以上と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を有し得る。
実施形態では、本発明のキメラタンパク質及び／または本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、ヒトＩｇＧ４抗体配列からのヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインをリンカーとして使用して、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメイン及びＬＩＧＨＴの細胞外ドメインを含む。実施形態では、いわゆるＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質は、以下のアミノ酸配列を含む：
ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＱＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＳＧＫＥＹＫＣＫＶＳＳＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＮＡＴＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＩＥＧＲＭＤＬＱＬＨＷＲＬＧＥＭＶＴＲＬＰＤＧＰＡＧＳＷＥＱＬＩＱＥＲＲＳＨＥＶＮＰＡＡＨＬＴＧＡＮＳＳＬＴＧＳＧＧＰＬＬＷＥＴＱＬＧＬＡＦＬＲＧＬＳＹＨＤＧＡＬＶＶＴＫＡＧＹＹＹＩＹＳＫＶＱＬＧＧＶＧＣＰＬＧＬＡＳＴＩＴＨＧＬＹＫＲＴＰＲＹＰＥＥＬＥＬＬＶＳＱＱＳＰＣＧＲＡＴＳＳＳＲＶＷＷＤＳＳＦＬＧＧＶＶＨＬＥＡＧＥＫＶＶＶＲＶＬＤＥＲＬＶＲＬＲＤＧＴＲＳＹＦＧＡＦＭＶ（配列番号６１）。
実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、本明細書に記載されるバリアントであり得、本発明のキメラタンパク質は、本発明のキメラタンパク質のアミノ酸配列、例えば、配列番号６１のうちの１つ以上と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する配列を有し得る。
任意の本明細書に開示される態様及び実施形態では、キメラタンパク質は、本明細書に開示されるタンパク質配列のうちのいずれかと比較して１つ以上のアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含み得る。実施形態では、１つ以上のアミノ酸変異は独立して、置換、挿入、欠失、及び短縮から選択され得る。
実施形態では、アミノ酸変異は、アミノ酸置換であり、保存的及び／または非保存的置換を含み得る。「保存的置換」は、例えば、関与するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、及び／または両親媒性の性質の類似性に基づいて行われ得る。２０個の天然に存在するアミノ酸は、以下の６つの標準的なアミノ酸グループに分類できる：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、上記の６つの標準的なアミノ酸グループの同じグループ内に列挙される別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。例えば、ＧｌｕによるＡｓｐの交換は、そのように修飾されたポリペプチド内に１つの負電荷を保持する。さらに、グリシン及びプロリンは、α－ヘリックスを破壊するそれらの能力に基づいて互いに置換され得る。本明細書中で使用する場合、「非保存的置換」とは、上記の６つの標準的なアミノ酸グループ（１）～（６）の異なるグループ内に列挙される別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。
実施形態では、置換はまた、非古典的なアミノ酸も含み得る（例えば、セレノシステイン、ピロリシン、Ｎ－ホルミルメチオニンβ－アラニン、ＧＡＢＡ及びδ－アミノレブリン酸、４－アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、一般的なアミノ酸のＤ－異性体、２，４－ジアミノ酪酸、α－アミノイソ酪酸、４－アミノ酪酸、Ａｂｕ、２－アミノ酪酸、γ－Ａｂｕ、ε－Ａｈｘ、６－アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２－アミノイソ酪酸、３－アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコスメ、シトルリン、ホモシトルリン、シスチン酸、ｔ－ブチルグリシン、ｔ－ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β－アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えば、βメチルアミノ酸、Ｃ α－メチルアミノ酸、Ｎ α－メチルアミノ酸、及び一般的なアミノ酸類似体）。
変異は、コドン縮重を考慮に入れることを含めて、遺伝コードを参照することによって、キメラタンパク質のヌクレオチド配列に対しても作製することができる。
実施形態では、キメラタンパク質は、ネズミリガンド（複数可）／受容体（複数可）と結合することが可能である。
実施形態では、キメラタンパク質は、ヒトリガンド（複数可）／受容体（複数可）と結合することが可能である。
実施形態では、キメラタンパク質の各細胞外ドメイン（またはそのバリアント）は、約１ｎＭ～約５ｎＭ、例えば、約１ｎＭ、約１．５ｎＭ、約２ｎＭ、約２．５ｎＭ、約３ｎＭ、約３．５ｎＭ、約４ｎＭ、約４．５ｎＭ、または約５ｎＭのＫＤでその同族の受容体またはリガンドと結合する。実施形態では、キメラタンパク質は、約５ｎＭ～約１５ｎＭ、例えば、約５ｎＭ、約５．５ｎＭ、約６ｎＭ、約６．５ｎＭ、約７ｎＭ、約７．５ｎＭ、約８ｎＭ、約８．５ｎＭ、約９ｎＭ、約９．５ｎＭ、約１０ｎＭ、約１０．５ｎＭ、約１１ｎＭ、約１１．５ｎＭ、約１２ｎＭ、約１２．５ｎＭ、約１３ｎＭ、約１３．５ｎＭ、約１４ｎＭ、約１４．５ｎＭ、または約１５ｎＭのＫＤで同族の受容体またはリガンドと結合する。
実施形態では、キメラタンパク質の各細胞外ドメイン（またはそのバリアント）は、約１μＭ、約９００ｎＭ、約８００ｎＭ、約７００ｎＭ、約６００ｎＭ、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１３０ｎＭ、約１００ｎＭ、約９０ｎＭ、約８０ｎＭ、約７０ｎＭ、約６０ｎＭ、約５５ｎＭ、約５０ｎＭ、約４５ｎＭ、約４０ｎＭ、約３５ｎＭ、約３０ｎＭ、約２５ｎＭ、約２０ｎＭ、約１５ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ未満（例えば、表面プラズモン共鳴または生体層干渉法によって測定される）のＫＤでその同族の受容体またはリガンドと結合する。実施形態では、キメラタンパク質は、約１ｎＭ、約９００ｐＭ、約８００ｐＭ、約７００ｐＭ、約６００ｐＭ、約５００ｐＭ、約４００ｐＭ、約３００ｐＭ、約２００ｐＭ、約１００ｐＭ、約９０ｐＭ、約８０ｐＭ、約７０ｐＭ、約６０ｐＭ、約５５ｐＭ、約５０ｐＭ、約４５ｐＭ、約４０ｐＭ、約３５ｐＭ、約３０ｐＭ、約２５ｐＭ、約２０ｐＭ、約１５ｐＭ、または約１０ｐＭ、または約１ｐＭ未満（例えば、表面プラズモン共鳴または生体層干渉法によって測定される）のＫＤでヒトＣＳＦ１と結合する。
本明細書で使用される場合、細胞外ドメインのバリアントは、天然の細胞外ドメインの受容体／リガンドと結合することが可能である。例えば、バリアントは、その受容体／リガンドとのその結合親和性に影響を及ぼさない細胞外ドメインの１つ以上の変異を含み得、代替的に、細胞外ドメインにおける１つ以上の変異は、受容体／リガンドに対する結合親和性を改善し得るか、または細胞外ドメインにおける１つ以上の変異は、受容体／リガンドに対する結合親和性を低下させ得るが、結合を完全に排除しない。実施形態では、１つ以上の変異は、細胞外ドメインがその受容体／リガンドと相互作用する結合ポケットの外側に位置する。実施形態では、１つ以上の変異は、変異が結合を完全に排除しない限り、細胞外ドメインがその受容体／リガンドと相互作用する結合ポケットの内側に位置する。受容体－リガンド結合に関する当業者の知識及び当技術分野の知識に基づいて、どの変異が結合を可能にし、どれが結合を排除するかを理解するであろう。
実施形態では、キメラタンパク質は、単一ドメイン融合タンパク質または抗体対照と比較して、増強された安定性、高アビディティ結合特性、標的結合の延長されたオフ速度、及びタンパク質半減期を示す。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、２つを超える細胞外ドメインを含み得る。例えば、キメラタンパク質は、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０つ、またはそれ以上の細胞外ドメインを含み得る。本明細書に開示されるように、第２の細胞外ドメインは、リンカーを介して第３の細胞外ドメインから分離され得る。代替的に、第２の細胞外ドメインは、第３の細胞外ドメインと直接的に連結され得る（例えば、ペプチド結合を介して）。実施形態では、本明細書に開示されるように、キメラタンパク質は、直接的に連結される細胞外ドメイン及びリンカーを介して間接的に連結される細胞外ドメインを含む。
本発明のキメラタンパク質及び／または本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、そのリガンド／受容体と立体的に結合することが可能である第１のドメイン、及び／またはそのリガンド／受容体と立体的に結合することが可能である第２のドメインを有する。これは、細胞外ドメインのリガンド／受容体結合ドメインがそのリガンド／受容体の結合を立体的に妨げられないように、キメラタンパク質及び／または細胞外ドメイン（またはその一部）と残りのキメラタンパク質との間の物理的距離に十分な全体的な柔軟性があることを意味する。この柔軟性及び／または物理的距離（本明細書では「緩み」と称される）は通常、細胞外ドメイン（複数可）に存在し、通常はリンカーに存在し、及び／または通常はキメラタンパク質に（全体として）存在し得る。代替的にまたは追加的に、キメラタンパク質は、立体障害を回避するために必要な追加の緩みを提供する１つ以上の追加のアミノ酸配列（例えば、以下に記載される結合リンカー）または合成リンカー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー）を含むことによって修飾され得る。
ＷＯ２０１８／１５７１６２、ＷＯ２０１８／１５７１６５、ＷＯ２０１８／１５７１６４、ＷＯ２０１８／１５７１６３及びＷＯ２０１７／０５９１６８のうちの１つ以上に記載されるキメラタンパク質が、本発明において制限なく使用され得る。その各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
リンカー
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、リンカーを含む。
実施形態では、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含む。少なくとも１つのシステイン残基は、キメラタンパク質の１対（またはそれ以上）の間にジスルフィド結合を形成することが可能である。理論に拘束されることを望まないが、かかるジスルフィド結合形成は、キメラタンパク質の有用な多量体状態を維持する原因となる。これは、キメラタンパク質の効率的な産生を可能とし、それは、インビトロ及びインビボで所望される活性を可能とする。
重要なのは、特に、１つ以上のジスルフィド結合を含むリンカー領域における安定化が、安定的に産生可能な多量体状態を維持することができる改善されたキメラタンパク質を提供することである。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質では、リンカーは、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、または抗体配列から選択されるポリペプチドである。
実施形態では、リンカーは、天然に存在するマルチドメインタンパク質に由来するか、または、例えば、Ｃｈｉｃｈｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２２（２）：１５３－１６７、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に記載されるような経験的なリンカーであり、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、リンカーは、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１３），Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９、及びＣｒａｓｔｏ ｅｔ．ａｌ．，（２０００），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３０９－３１２に記載されるようなもの等のリンカー設計データベース及びコンピュータプログラムを使用して設計することができ、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、リンカーは、ポリペプチドを含む。実施形態では、ポリペプチドは、約５００アミノ酸長、約４５０アミノ酸長、約４００アミノ酸長、約３５０アミノ酸長、約３００アミノ酸長、約２５０アミノ酸長、約２００アミノ酸長、約１５０アミノ酸長、または約１００アミノ酸長未満である。例えば、リンカーは、約１００、約９５、約９０、約８５、約８０、約７５、約７０、約６５、約６０、約５５、約５０、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１２、約１１、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、または約２アミノ酸長未満であり得る。
実施形態では、リンカーは、柔軟性である。
実施形態では、リンカーは、剛性である。
実施形態では、リンカーは、実質的にグリシン及びセリン残基からなる（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約１００％のグリシン及びセリン）。
実施形態では、リンカーは、抗体のヒンジ領域（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥクラス抗体に見られるヒンジ領域は、柔軟なスペーサーとして機能し、Ｆａｂ部分が空間内を自由に移動することを可能とする。定常領域とは対照的に、ヒンジドメインは、構造的に多様であり、免疫グロブリンクラス及びサブクラス間で配列及び長さの両方が異なる。例えば、ヒンジ領域の長さ及び柔軟性は、ＩｇＧサブクラス間で異なる。ＩｇＧ１のヒンジ領域はアミノ酸２１６～２３１を包含し、自由に柔軟であるため、Ｆａｂ断片はその対称軸を中心に回転し、２つの重鎖間ジスルフィド架橋の第１の中心にある球内を移動できる。ＩｇＧ２は、ＩｇＧ１よりも短いヒンジを有し、１２個のアミノ酸残基及び４個のジスルフィド架橋を有する。ＩｇＧ２のヒンジ領域は、グリシン残基を欠いており、比較的短く、余分な重鎖間ジスルフィド架橋によって安定化された剛性のポリプロリン二重らせんを含む。これらの特性は、ＩｇＧ２分子の柔軟性を制限する。ＩｇＧ３は、６２個のアミノ酸（２１個のプロリン及び１１個のシステインを含む）を含み、柔軟性がないポリプロリン二重らせんを形成する、その固有の拡張ヒンジ領域（ＩｇＧ１ヒンジの約４倍の長さ）が他のサブクラスと異なる。ＩｇＧ３では、Ｆａｂ断片は、Ｆｃ断片から比較的離れているため、分子の柔軟性が高まる。ＩｇＧ３における細長いヒンジは、他のサブクラスと比較してその高分子量の原因でもある。ＩｇＧ４のヒンジ領域は、ＩｇＧ１よりも短く、その柔軟性は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２の中間である。ヒンジ領域の柔軟性は、ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞ＩｇＧ４＞ＩｇＧ２の順に低減すると報告されている。実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４に由来し、二量体形成（Ｓ２２８Ｐを含む）またはＦｃＲｎ結合を増強するための１つ以上の変異を含み得る。
結晶学的研究によると、免疫グロブリンヒンジ領域は、機能的に、上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域の３つの領域にさらに細分することができる。Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ１３０：８７を参照されたい。上部ヒンジ領域には、ＣＨ１のカルボキシル末端から、動きを制限するヒンジにおける第１の残基、通常は２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合を形成する第１のシステイン残基までのアミノ酸が含まれる。上部ヒンジ領域の長さは、抗体のセグメントの柔軟性と相関する。コアヒンジ領域には、重鎖間ジスルフィド架橋が含まれ、下部ヒンジ領域には、ＣＨ２ドメインのアミノ末端と結合し、ＣＨ２の残基が含まれる。Ｉｄ．野生型ヒトＩｇＧ１のコアヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣ（配列番号２４）を含み、これは、ジスルフィド結合形成によって二量体化されると、回転軸として作用すると考えられる環状オクタペプチドをもたらし、したがって柔軟性が与えられる。実施形態では、本発明のリンカーは、任意の抗体の上部ヒンジ領域、コア領域、及び下部ヒンジ領域（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）のうちの１つ、２つ、または３つを含む。ヒンジ領域はまた、１つ以上のグリコシル化部位を含み得、これは、炭水化物付着のためのいくつかの構造的に異なる種類の部位を含む。例えば、ＩｇＡ１は、ヒンジ領域の１７個のアミノ酸セグメント内に５つのグリコシル化部位を含み、分泌型免疫グロブリンにとって有利な特性と考えられる、腸のプロテアーゼに対するヒンジ領域ポリペプチドの抵抗性を付与する。実施形態では、本発明のリンカーは、１つ以上のグリコシル化部位を含む。
実施形態では、リンカーは、抗体のＦｃドメイン（例えば、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）を含むＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）を含む。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質では、リンカーは、ＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１～配列番号３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、例えば、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。実施形態では、リンカーは、１つ以上の結合リンカーを含み、かかる結合リンカーは独立して、配列番号４～配列番号５０（またはそのバリアント）から選択される。実施形態では、リンカーは、２つ以上の結合リンカーを含み、各結合リンカーは独立して、配列番号４～配列番号５０（またはそのバリアント）から選択され、一方の結合リンカーは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインに対してＮ末端であり、他方の結合リンカーは、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインに対してＣ末端である。
実施形態では、リンカーは、ヒトＩｇＧ１抗体に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、Ｆｃドメインは、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対して増加した親和性及び増強した結合を示す。実施形態では、Ｆｃドメインは、親和性を増加させ、ＦｃＲｎとの結合を増強する１つ以上の変異を含む。理論に拘束されることを望まないが、ＦｃＲｎとの増加した親和性及び増強した結合は、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質のインビボでの半減期を増加させると考えられる。
実施形態では、リンカーにおけるＦｃドメインは、アミノ酸残基２５０、２５２、２５４、２５６、３０８、３０９、３１１、４１６、４２８、４３３、もしくは４３４（参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）の場合と同様に、Ｋａｂａｔの番号付けに従って）、またはそれらの同等物での１つ以上のアミノ酸置換を含む。実施形態では、アミノ酸残基２５０でのアミノ酸置換は、グルタミンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基２５２でのアミノ酸置換は、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはスレオニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基２５４でのアミノ酸置換は、スレオニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基２５６でのアミノ酸置換は、セリン、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはスレオニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３０８でのアミノ酸置換は、スレオニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３０９でのアミノ酸置換は、プロリンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３１１でのアミノ酸置換は、セリンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３８５でのアミノ酸置換は、アルギニン、アスパラギン酸、セリン、スレオニン、ヒスチジン、リジン、アラニン、またはグリシンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３８６でのアミノ酸置換は、スレオニン、プロリン、アスパラギン酸、セリン、リジン、アルギニン、イソロイシン、またはメチオニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３８７でのアミノ酸置換は、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、またはアラニンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基３８９でのアミノ酸置換は、プロリン、セリン、またはアスパラギンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基４１６でのアミノ酸置換は、セリンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基４２８でのアミノ酸置換は、ロイシンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基４３３でのアミノ酸置換は、アルギニン、セリン、イソロイシン、プロリン、またはグルタミンによる置換である。実施形態では、アミノ酸残基４３４でのアミノ酸置換は、ヒスチジン、フェニルアラニン、またはチロシンによる置換である。
実施形態では、Ｆｃドメインリンカー（例えば、ＩｇＧ定常領域を含む）は、アミノ酸残基２５２、２５４、２５６、４３３、４３４、または４３６（参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）の場合と同様に、Ｋａｂａｔの番号付けに従って）での置換等の１つ以上の変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、トリプルＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異またはＹＴＥ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、トリプルＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ／Ｙ４３６Ｈ変異またはＫＦＨ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、ＹＴＥ及びＫＦＨ変異の組み合わせを含む。
実施形態では、リンカーは、アミノ酸残基２５０、２５３、３０７、３１０、３８０、４２８、４３３、４３４、及び４３５（参照により本明細書に明示的に組み込まれる、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）の場合と同様に、Ｋａｂａｔの番号付けに従って）での１つ以上の変異を含むＩｇＧ定常領域を含む。例示的な変異には、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ４２８Ｌ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｆ、Ｎ４３４Ｓ、及びＨ４３５Ａが含まれる。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異またはＬＳ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ変異またはＱＬ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｎ４３４Ａ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ変異またはＡＡＡ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｉ２５３Ａ／Ｈ３１０Ａ／Ｈ４３５Ａ変異またはＩＨＨ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ変異を含む。実施形態では、ＩｇＧ定常領域は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ及びＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ変異の組み合わせを含む。
ＩｇＧ定常領域における追加の例示的な変異は、例えば、Ｒｏｂｂｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１３），５７（１２）：６１４７－６１５３、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ（２００６），２８１（３３）：２３５１４－２４、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２），１６９：５１７１－８０、Ｋｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１４）５１４：６４２－６４５、Ｇｒｅｖｙｓ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．（２０１５），１９４（１１）：５４９７－５０８、及び米国特許第７，０８３，７８４号に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
例示的なＦｃ安定化変異体は、Ｓ２２８Ｐである。例示的なＦｃ半減期延長変異体は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ４２８Ｌ、Ｖ３０８Ｔ、Ｌ３０９Ｐ、及びＱ３１１Ｓであり、本発明のリンカーは、これらの変異体の１つ、２つ、３つ、４つ、または５つを含み得る。
実施形態では、キメラタンパク質は、高い親和性でＦｃＲｎと結合する。実施形態では、キメラタンパク質は、約１ｎＭ～約８０ｎＭのＫＤでＦｃＲｎと結合し得る。例えば、キメラタンパク質は、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭ、約１０ｎＭ、約１５ｎＭ、約２０ｎＭ、約２５ｎＭ、約３０ｎＭ、約３５ｎＭ、約４０ｎＭ、約４５ｎＭ、約５０ｎＭ、約５５ｎＭ、約６０ｎＭ、約６５ｎＭ、約７０ｎＭ、約７１ｎＭ、約７２ｎＭ、約７３ｎＭ、約７４ｎＭ、約７５ｎＭ、約７６ｎＭ、約７７ｎＭ、約７８ｎＭ、約７９ｎＭ、または約８０ｎＭのＫＤでＦｃＲｎと結合し得る。実施形態では、キメラタンパク質は、約９ｎＭのＫＤでＦｃＲｎと結合し得る。実施形態では、キメラタンパク質は、エフェクター機能を有する他のＦｃ受容体（すなわち、ＦｃＲｎ以外）と実質的に結合しない。
実施形態では、リンカーにおけるＦｃドメインは、配列番号１（以下の表１を参照されたい）、またはそれと少なくとも９０％、もしくは９３％、もしくは９５％、もしくは９７％、もしくは９８％、もしくは９９％同一性のアミノ酸配列を有する。実施形態では、変異は、安定性及び／または半減期を増加させるために、配列番号１に対して作製される。例えば、実施形態では、リンカーにおけるＦｃドメインは、配列番号２（以下の表１を参照されたい）、またはそれと少なくとも９０％、もしくは９３％、もしくは９５％、もしくは９７％、もしくは９８％、もしくは９９％同一性のアミノ酸配列を含む。例えば、実施形態では、リンカーにおけるＦｃドメインは、配列番号３（以下の表１を参照されたい）、またはそれと少なくとも９０％、もしくは９３％、もしくは９５％、もしくは９７％、もしくは９８％、もしくは９９％同一性のアミノ酸配列を含む。
さらに、１つ以上の結合リンカーは、リンカーにおけるＦｃドメイン（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、またはそれと少なくとも９０％、もしくは９３％、もしくは９５％、もしくは９７％、もしくは９８％、もしくは９９％同一性であるもののうちの１つ）及び細胞外ドメインを接続するために使用され得る。例えば、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、またはそのバリアントのうちのいずれか１つが、本明細書に開示される細胞外ドメイン、及び本明細書に開示されるリンカーにおけるＦｃドメインを接続し得る。任意選択で、配列番号４～配列番号５０、またはそのバリアントのうちのいずれか１つは、本明細書に開示される細胞外ドメインと本明細書に開示されるＦｃドメインとの間に位置する。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、以下の表１に開示される結合リンカーのバリアントを含み得る。例えば、リンカーは、配列番号４～配列番号５０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。
実施形態では、第１及び第２の結合リンカーは、異なり得るか、またはそれらは、同じであり得る。
理論に拘束されることを望まないが、キメラタンパク質においてＦｃドメインの少なくとも一部を含むリンカーを含めることは、不溶性であり、非機能性の可能性のあるタンパク質連結オリゴマー及び／または凝集体の形成を回避する助けとなる。これは、キメラタンパク質間にジスルフィド結合を形成することが可能であるＦｃドメイン内にシステインが存在するためである。
実施形態では、キメラタンパク質は、本明細書に開示されるように、１つ以上の結合リンカーを含み得、本明細書に開示されるように、Ｆｃドメインリンカーを欠く。
実施形態では、第１及び／または第２の結合リンカーは独立して、配列番号４～配列番号５０のアミノ酸配列から選択され、以下の表１に提供される：
Figure 2022522479000002
Figure 2022522479000003
実施形態では、結合リンカーは、実質的にグリシン及びセリン残基を含む（例えば、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約９７％、または約９８％、または約９９％、または約１００％のグリシン及びセリン）。例えば、実施形態では、結合リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎであり、ここで、ｎは、約１～約８、例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８（配列番号２５～配列番号３２のそれぞれ）である。実施形態では、結合リンカー配列は、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３３）である。追加の例示的な結合リンカーには、これらに限定されないが、配列ＬＥ、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（ｎ＝１～３）（配列番号３６～配列番号３８）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（ｎ＝２～５）（配列番号３９～配列番号４２）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号４３）、ＰＡＰＡＰ（配列番号４４）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号４５）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号４６）、及びＸが、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕ等の任意のアミノ酸を示す、（ＸＰ）ｎを有するリンカーが含まれる。実施形態では、結合リンカーは、ＧＧＳである。実施形態では、結合リンカーは、配列（Ｇｌｙ）ｎを有し、ここで、ｎは、１～１００の任意の数、例えば、（Ｇｌｙ）８（配列番号３４）及び（Ｇｌｙ）６（配列番号３５）である。
実施形態では、結合リンカーは、ＧＧＧＳＥ（配列番号４７）、ＧＳＥＳＧ（配列番号４８）、ＧＳＥＧＳ（配列番号４９）、ＧＥＧＧＳＧＥＧＳＳＧＥＧＳＳＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＳ（配列番号５０）、ならびに４アミノ酸間隔ごとにランダムに配置されるＧ、Ｓ、及びＥの結合リンカーのうちの１つ以上である。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、第１の膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、Ｆｃドメインに先行する１つの結合リンカー、Ｆｃドメインに続く第２の結合リンカー、及び第２の膜貫通タンパク質のＥＣＤを含み、キメラタンパク質は、以下の構造を含み得る：
ＥＣＤ－結合リンカー１－Ｆｃドメイン－結合リンカー２－ＥＣＤ。
第１の結合リンカー、Ｆｃドメインリンカー、及び第２の結合リンカーの組み合わせは、本明細書において「モジュラーリンカー」と称される。実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、表２に示されるようなモジュラーリンカーを含む。
Figure 2022522479000004
Figure 2022522479000005
Figure 2022522479000006
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、上記の表２に開示されるモジュラーリンカーのバリアントを含み得る。例えば、リンカーは、配列番号５１～配列番号５６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも約６０％、または少なくとも約６１％、または少なくとも約６２％、または少なくとも約６３％、または少なくとも約６４％、または少なくとも約６５％、または少なくとも約６６％、または少なくとも約６７％、または少なくとも約６８％、または少なくとも約６９％、または少なくとも約７０％、または少なくとも約７１％、または少なくとも約７２％、または少なくとも約７３％、または少なくとも約７４％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約７６％、または少なくとも約７７％、または少なくとも約７８％、または少なくとも約７９％、または少なくとも約８０％、または少なくとも約８１％、または少なくとも約８２％、または少なくとも約８３％、または少なくとも約８４％、または少なくとも約８５％、または少なくとも約８６％、または少なくとも約８７％、または少なくとも約８８％、または少なくとも約８９％、または少なくとも約９０％、または少なくとも約９１％、または少なくとも約９２％、または少なくとも約９３％、または少なくとも約９４％、または少なくとも約９５％、または少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有し得る。
実施形態では、リンカーは、高い柔軟性であることを含むがこれに限定されない柔軟性であり得る。実施形態では、リンカーは、剛性アルファヘリックスを含むがこれに限定されない剛性であり得る。例示的な結合リンカーの特徴を以下の表３に示す。
Figure 2022522479000007
実施形態では、リンカーは、機能性であり得る。例えば、限定されないが、リンカーは、折り畳み及び／または安定性を改善し、発現を改善し、薬物動態を改善し、及び／または本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の生物活性を改善するように機能し得る。別の例では、リンカーは、キメラタンパク質を特定の細胞型または位置に標的化するように機能し得る。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、１つの結合リンカーのみを含む。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、結合リンカーを欠く。
実施形態では、リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の合成リンカーである。
実施形態では、キメラタンパク質は、そのリガンド／受容体と立体的に結合することが可能である第１のドメイン、及び／またはそのリガンド／受容体と立体的に結合することが可能である第２のドメインを有する。したがって、細胞外ドメインのリガンド／受容体結合ドメインがそのリガンド／受容体の結合を立体的に妨げられないように、キメラタンパク質及び／または細胞外ドメイン（またはその一部）と残りのキメラタンパク質との間の物理的距離に十分な全体的な柔軟性がある。この柔軟性及び／または物理的距離（「緩み」と称される）は通常、細胞外ドメイン（複数可）に存在し、通常はリンカーに存在し、及び／または通常はキメラタンパク質に（全体として）存在し得る。代替的にまたは追加的に、アミノ酸配列（例えば）は、立体障害を回避するために必要な緩みを提供するために、１つ以上の細胞外ドメイン及び／またはリンカーに追加され得る。緩みを提供する任意のアミノ酸配列が追加され得る。実施形態では、追加されるアミノ酸配列は、配列（Ｇｌｙ）ｎを含み、ここで、ｎは、１～１００の任意の数である。追加可能なアミノ酸配列の追加の例には、表１及び表３に記載される結合リンカーが含まれる。実施形態では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーは、立体障害を回避するために必要な緩みを提供するために、細胞外ドメインとリンカーとの間に追加され得る。かかるＰＥＧリンカーは、当技術分野において周知である。
ＷＯ２０１８／１５７１６２、ＷＯ２０１８／１５７１６５、ＷＯ２０１８／１５７１６４、ＷＯ２０１８／１５７１６３及びＷＯ２０１７／０５９１６８のうちの１つ以上に記載されるリンカーは、本発明において制限なく使用され得る。その各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施形態では、異種キメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの一部を含む第１のドメイン、ＯＸ４０Ｌの一部を含む第２のドメイン、及びリンカーを含む。実施形態では、リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。実施形態では、リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、例えば、ＩｇＧ１から、またはヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含むＩｇＧ４からのヒンジＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。したがって、実施形態では、本発明の方法で使用される異種キメラタンパク質が、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメイン（またはそのバリアント）、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含むリンカー、及びＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン（またはそのバリアント）を含む場合、それは本明細書において「ＴＩＧＩＴ－３－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ」と称される。
実施形態では、異種キメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの一部を含む第１のドメイン、ＬＩＧＨＴの一部を含む第２のドメイン、及びリンカーを含む。実施形態では、リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。実施形態では、リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、例えば、ＩｇＧ１から、またはヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含むＩｇＧ４からのヒンジＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。したがって、実施形態では、本発明の方法で使用される異種キメラタンパク質が、ＴＩＧＩＴの細胞外ドメイン（またはそのバリアント）、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含むリンカー、及びＬＩＧＨＴの細胞外ドメイン（またはそのバリアント）を含む場合、それは本明細書において「ＴＩＧＩＴ－３－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ」と称される。
疾患、治療方法、及び作用機構
本方法は、有効量の免疫チェックポイント分子に指向する少なくとも１つの抗体、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、及び／または各キメラタンパク質が免疫阻害性シグナルを遮断し、及び／または免疫活性化シグナルを刺激することが可能である、１つ以上のキメラタンパク質を、それを必要とする対象に投与する（同時にまたは連続的に）ステップを含む。実施形態では、異種キメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの一部を含む第１のドメイン、ＯＸ４０Ｌの一部を含む第２のドメイン、及びリンカーを含む。実施形態では、異種キメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの一部を含む第１のドメイン、ＬＩＧＨＴの一部を含む第２のドメイン、及びリンカーを含む。
免疫応答を増大するため、例えば、患者の抗腫瘍免疫応答を増強するために、免疫阻害性シグナルの伝達を妨害、遮断、減少、阻害、及び／または隔離し、同時にまたは同時期に抗がん免疫細胞への免疫刺激性シグナルの伝達を増強、増加、及び／または刺激することが多くに場合に所望される。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、免疫応答の振幅を調節すること、例えば、エフェクター出力のレベルを調節することが可能であるか、またはそれを含む方法で使用することができる。
実施形態では、例えば、がんの治療に使用される場合、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、免疫阻害と比較して免疫刺激の程度を改変し、サイトカイン産生、増殖、または標的を殺傷する潜在性のレベルの増加を刺激することを含むが、これらに限定されないＴ細胞応答の振幅を増加させる。実施形態では、患者のＴ細胞は、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質によって、活性化及び／または刺激され、活性化Ｔ細胞がサイトカインを分離及び／または分泌することを可能とする。
がんまたは腫瘍は、細胞の非制御な成長及び／または細胞生存の異常な増加及び／または身体の器官及びシステムの正常な機能を妨げるアポトーシスの阻害を指す。良性及び悪性がん、ポリープ、過形成、ならびに休止状態の腫瘍または微小転移巣が含まれる。また、免疫系によって妨げられない異常な増殖を有する細胞（例えば、ウイルス感染細胞）も含まれる。がんは、原発性癌または転移性癌であり得る。原発性癌は、臨床的に検出可能となる発生部位での領域のがん細胞であり得、原発性腫瘍であり得る。対照的に、転移性癌は、ある器官または部分から別の隣接していない器官または部分への疾患の拡散であり得る。転移性癌は、局所領域の周囲の正常組織に浸透して浸潤する能力を獲得し、局所転移であり得る新しい腫瘍を形成するがん細胞によって引き起こされ得る。がんはまた、リンパ管及び／または血管の壁を貫通する能力を獲得するがん細胞によって引き起こされ得、その後、がん細胞は血流を通して循環し（それによって循環腫瘍細胞となる）、体内の他の部位及び組織に循環することが可能である。がんは、リンパ系または血行性拡散等のプロセスが原因となり得る。がんはまた、別の部位で静止し、管または壁を通って再浸透し、増殖し続け、別の臨床的に検出可能な腫瘍を最終的に形成する腫瘍細胞によって引き起こされ得る。がんは、この新しい腫瘍であり得、転移性（または続発性）腫瘍であり得る。
がんは、転移した腫瘍細胞によって引き起こされ得、これは続発性または転移性腫瘍であり得る。腫瘍の細胞は、起源の腫瘍のものの様であり得る。例として、大腸癌細胞が肝臓に転移した場合、二次腫瘍は肝臓に存在するが、異常な肝臓細胞ではなく、結腸または直腸細胞で構成される。したがって、肝臓における腫瘍は、肝臓癌ではなく、転移性大腸癌であり得る。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、治療抵抗性癌を有する対象を治療する。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、１つ以上の免疫調節剤に対して抵抗性である対象を治療する。例えば、実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、約１２週間の治療後、治療に応答しない、または進展しない対象を治療する。例えば、実施形態では、対象は、ＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２剤に抵抗性であり得、例えば、ニボルマブ（ＯＮＯ－４５３８／ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ、ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＭＥＲＣＫ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１、ＣＵＲＥ ＴＥＣＨ）、ＭＫ－３４７５（ＭＥＲＣＫ）、ＢＭＳ ９３６５５９（ＢＲＩＳＴＯＬ ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ）、イブルチニブ（ＰＨＡＲＭＡＣＹＣＬＩＣＳ／ＡＢＢＶＩＥ）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ、ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ）、及び／またはＭＰＤＬ３２８ＯＡ（ＲＯＣＨＥ）－抵抗性患者が含まれる。例えば、実施形態では、対象は、抗ＣＴＬＡ－４剤に抵抗性であり、例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ）－抵抗性患者（例えば、黒色腫患者）である。したがって、実施形態では、本発明は、１つ以上の免疫調節剤の単剤療法を含む、様々な療法に非応答性である患者を救済するがん治療の方法を提供する。
実施形態では、本発明は、腫瘍微小環境内の細胞または組織を標的とする免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を提供する。実施形態では、腫瘍微小環境内の細胞または組織は、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質の１つ以上の標的または結合パートナーを発現する。腫瘍微小環境は、腫瘍が存在する細胞、分泌タンパク質、生理学的小分子、及び血管を含む細胞環境を指す。実施形態では、腫瘍微小環境内の細胞または組織は、腫瘍血管系、腫瘍浸潤リンパ球、線維芽細網細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｒｅｔｉｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ）、内皮前駆細胞（ＥＰＣ）、がん関連線維芽細胞、周皮細胞、他の間質細胞、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の成分、樹状細胞、抗原提示細胞、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、好中球、及び腫瘍の近位に位置する他の免疫細胞のうちの１つ以上である。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、がん細胞を標的とする。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質の１つ以上の標的または結合パートナーを発現する。
制御性Ｔ細胞の活性化は、共刺激及び共阻害性シグナルによって決定的に影響を受ける。共刺激分子の２つの主要なファミリーには、Ｂ７及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーが含まれる。これらの分子は、それぞれＣＤ２８またはＴＮＦ受容体ファミリーに属するＴ細胞上の受容体と結合する。多くの明確に定義された共阻害剤及びその受容体は、Ｂ７及びＣＤ２８ファミリーに属する。
実施形態では、免疫刺激性シグナルは、免疫応答を増強するシグナルを指す。例えば、腫瘍学の脈絡では、かかるシグナルは、抗腫瘍免疫を増強し得る。例えば、これらに限定されないが、免疫刺激性シグナルは、白血球の増殖、サイトカイン産生、殺傷活性、または食作用活性を直接的に刺激することによって特定され得る。詳細な例には、受容体アゴニスト抗体またはかかる受容体（ＯＸ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、４－１ＢＢＬ、及びＴＬ１Ａのそれぞれ）のリガンドを含むキメラタンパク質のいずれかを使用する、ＯＸ４０、ＬＴｂＲ、４－１ＢＢ、またはＴＮＦＲＳＦ２５等のＴＮＦスーパーファミリー受容体の直接的な刺激が含まれる。これらの受容体のうちのいずれか１つからの刺激は、個々のＴ細胞サブセットの増殖及びサイトカイン産生を直接的に刺激し得る。別の例には、かかる免疫抑制細胞の活性を阻害する受容体を介した免疫阻害性細胞の直接的な刺激が含まれる。
実施形態では、免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、免疫調節を増強、回復、促進、及び／または刺激することが可能であるか、またはそれらを含む方法での使用を見出す。実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、抗腫瘍マクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ）、Ｂ細胞、及び樹状細胞を含むがこれらに限定されない腫瘍細胞に指向する１つ以上の免疫細胞の活性または活性化を回復、促進、及び／または刺激する。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、非限定的な例として、生存促進シグナル、オートクリンもしくはパラクリン成長シグナル、ｐ３８ ＭＡＰＫ－、ＥＲＫ－、ＳＴＡＴ－、ＪＡＫ－、ＡＫＴ－、もしくはＰＩ３Ｋを媒介したシグナル、抗アポトーシスシグナル、及び／または炎症誘発性サイトカイン産生もしくはＴ細胞遊走もしくはＴ細胞腫瘍浸潤のうちの１つ以上を促進する及び／または必要とするシグナルを含む、１つ以上のＴ細胞固有シグナルを活性化及び／または刺激することを含む、Ｔ細胞の活性及び／または活性化を増強、回復、促進、及び／または刺激する。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、腫瘍または腫瘍微小環境へのＴ細胞（これらに限定されないが、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔヘルパー細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を含む）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、樹状細胞、単球、及びマクロファージ（例えば、Ｍ１及びＭ２のうちの１つ以上）のうちの１つ以上の増加を引き起こすことが可能であるか、またはそれらを含む方法での使用を見出す。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、特に腫瘍微小環境に浸潤しているそれらのＴ細胞による腫瘍抗原の認識を増強する。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＣＤ１９発現を誘導する、及び／またはＣＤ１９陽性細胞（例えば、ＣＤ１９陽性Ｂ細胞）の数を増加させる。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＩＬ－１５Ｒα発現を誘導する、及び／またはＩＬ－１５Ｒα陽性細胞（例えば、ＩＬ－１５Ｒα陽性樹状細胞）の数を増加させる。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、特に腫瘍及び／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内で、免疫抑制細胞（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、Ｍ２マクロファージ、及び腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ））の低減を阻害及び／または引き起こすことが可能であるか、またはその方法での使用を見出す。実施形態では、本療法は、腫瘍部位及び／またはＴＭＥにおけるＭ１対Ｍ２マクロファージの比率を改変し、Ｍ１マクロファージを支持することができる。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及びＣＸＣＬ１２のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない様々なサイトカインまたはケモカインの血清レベルを増加させることができる。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、治療対象の血清中のＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－２２、ＴＮＦα、またはＩＦＮγを増強することが可能である。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を投与することは、ＴＮＦα分泌を増強することが可能である。特定の実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を投与することは、白血球によるスーパー抗原を媒介したＴＮＦα分泌を増強することが可能である。かかるサイトカイン応答の検出は、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する示される抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質のための最適な投与レジメンを決定するための方法を提供し得る。
本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の亜集団の低減を増加または防止することが可能である。
本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、Ｔ細胞による腫瘍殺傷活性を増強することが可能である。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、抗腫瘍ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞死を阻害、遮断、及び／または減少させる、あるいは前腫瘍Ｔ細胞の細胞死を刺激、誘導、及び／または増加させる。Ｔ細胞枯渇は、増殖及びエフェクター機能の進行性の喪失を特徴とするＴ細胞機能不全の状態であり、クローン欠失に至る。したがって、前腫瘍Ｔ細胞は、多くの慢性感染症、炎症性疾患、及びがんの間に生じるＴ細胞機能不全の状態を指す。この機能不全は、機能的エフェクターまたはメモリーＴ細胞とは異なる不十分な増殖、及び／またはエフェクター機能、阻害性受容体の持続的発現、及び転写状態によって定義される。消耗は、感染及び腫瘍の最適な制御を妨げる。例示的な前腫瘍Ｔ細胞には、これらに限定されないが、Ｔｒｅｇ、１つ以上のチェックポイント阻害性受容体を発現するＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｔｈ２細胞、ならびにＴｈ１７細胞が含まれる。チェックポイント阻害性受容体は、非制御な免疫応答を防止または阻害する免疫細胞に発現する受容体を指す。対照的に、抗腫瘍ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍に対する免疫応答を開始できるＴ細胞を指す。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、エフェクターＴ細胞と制御性Ｔ細胞との比率を増加させることが可能であり、それを含む方法で使用することができる。例示的なエフェクターＴ細胞には、ＩＣＯＳ＋エフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＯ＋）、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ高、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７＋）、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ高、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ６２Ｌ低、ＣＤ４４＋、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ－１５Ｒ＋、ＣＣＲ７低）、セントラルメモリーＴ細胞（例えば、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、またはＣＣＲ７高、ＣＤ４４＋、ＣＤ６２Ｌ高、ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＩＬ－７Ｒ／ＣＤ１２７＋、ＩＬ－１５Ｒ＋）、ＣＤ６２Ｌ＋エフェクターＴ細胞、初期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７＋ＣＤ６２Ｌ－）及び後期エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ２７－ＣＤ６２Ｌ－）（それぞれＴｅｍＥ及びＴｅｍＬ）を含むＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、ＣＤ１２７（＋）ＣＤ２５（低／－）エフェクターＴ細胞、ＣＤ１２７（－）ＣＤ２５（－）エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋幹細胞メモリーエフェクター細胞（ＴＳＣＭ）（例えば、ＣＤ４４（低）ＣＤ６２Ｌ（高）ＣＤ１２２（高）ｓｃａ（＋））、ＴＨ１エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋、ＣＸＣＲ６＋、及びＣＣＲ５＋、またはαβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ－１２Ｒ＋、ＩＦＮγＲ＋、ＣＸＣＲ３＋）、ＴＨ２エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＣＲ３＋、ＣＣＲ４＋、及びＣＣＲ８＋、またはαβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ－４Ｒ＋、ＩＬ－３３Ｒ＋、ＣＣＲ４＋、ＩＬ－１７ＲＢ＋、ＣＲＴＨ２＋）、ＴＨ９エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）、ＴＨ１７エフェクターＴ細胞（例えば、αβ ＴＣＲ、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＩＬ－２３Ｒ＋、ＣＣＲ６＋、ＩＬ－１Ｒ＋）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７（－）エフェクターＴ細胞、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－４、及び／またはＩＦＮ－γを分泌するエフェクターＴ細胞が含まれる。例示的な制御性Ｔ細胞には、ＩＣＯＳ＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５－制御性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５高制御性Ｔ細胞、ＴＩＭ－３＋ＰＤ－１＋制御性Ｔ細胞、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）＋制御性Ｔ細胞、ＣＴＬＡ－４／ＣＤ１５２＋制御性Ｔ細胞、ニューロピリン－１（Ｎｒｐ－１）＋制御性Ｔ細胞、ＣＣＲ４＋ＣＣＲ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ－セレクチン）＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ４５ＲＢ低制御性Ｔ細胞、ＣＤ１２７低制御性Ｔ細胞、ＬＲＲＣ３２／ＧＡＲＰ＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ３９＋制御性Ｔ細胞、ＧＩＴＲ＋制御性Ｔ細胞、ＬＡＰ＋制御性Ｔ細胞、１Ｂ１１＋制御性Ｔ細胞、ＢＴＬＡ＋制御性Ｔ細胞、１型制御性Ｔ細胞（Ｔｒ１細胞）、Ｔヘルパー３型（Ｔｈ３）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞表現型（ＮＫＴｒｅｇ）の制御性細胞、ＣＤ８＋制御性Ｔ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２８－制御性Ｔ細胞、及び／またはＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、ガレクチン－１、ＩＦＮ－γ、及び／またはＭＣＰ１を分泌する制御性Ｔ細胞が含まれる。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５－Ｔ細胞）の増加を引き起こす。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、制御性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞）の低減を引き起こす。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、例えば、再発を防止するか、もしくは動物を再発から保護すること、及び／または転移を防止するか、もしくは転移の可能性を減少させることが可能であるメモリー応答を生成する。したがって、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質により治療した動物は、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質による初期の治療後に再負荷した場合、後に腫瘍細胞を攻撃する、及び／または腫瘍発生を防ぐことが可能である。したがって、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、活性な腫瘍破壊、及びさらに腫瘍抗原の免疫認識の両方を刺激し、これらは、再発を防ぐことが可能であるメモリー応答をプログラミングするのに不可欠である。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、抗原提示細胞の活性化を引き起こすことが可能である。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、抗原提示細胞が抗原を提示する能力を増強することが可能である。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、エフェクターＴ細胞を約１２時間、約２４時間、約４８時間、約７２時間、または約９６時間、または約１週間、または約２週間より長く一過性に刺激することが可能であり、それを含む方法で使用することができる。実施形態では、エフェクターＴ細胞の一過性の刺激は実質的に、患者の血流、または例えば、骨髄、リンパ節、脾臓、胸腺、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）、非リンパ組織、もしくは腫瘍微小環境等のリンパ組織を含む特定の組織／位置で生じる。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は予想外に、細胞外ドメイン成分のそのそれぞれの結合パートナーとの結合を遅いオフ速度（ＫｄまたはＫオフ）で提供する。実施形態では、これは、受容体とリガンド、及びその逆の予想外に長い相互作用を提供する。かかる効果は、より長い正のシグナル効果、例えば、免疫刺激性シグナルの増加または活性化を可能にする。例えば、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、例えば、長いオフ速度結合を介して、免疫細胞増殖を提供するのに十分なシグナル伝達を可能とし、抗腫瘍攻撃を可能とし、刺激シグナル、例えばサイトカインの放出を提供するのに十分なシグナル伝達を可能とする。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、細胞間で安定性シナプスを形成することが可能である。キメラタンパク質によって促進される細胞の安定性シナプス（例えば、負のシグナルを保有する細胞間）は、腫瘍細胞を攻撃するようにＴ細胞を配置する、及び／またはキメラタンパク質によって遮蔽されたものを超える負のシグナルを含む負のシグナルを腫瘍細胞が送達するのを立体的に防ぐ等、腫瘍の縮小に有利な空間的配向を提供する。実施形態では、これは、キメラタンパク質の血清ｔ１／２と比較して、より長い標的上の（例えば、腫瘍内）半減期（ｔ１／２）を提供する。かかる特性は、キメラタンパク質の全身的な分布に関連する標的外毒性を減少させるという複合的な利点を有する可能性がある。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、持続的な免疫調節効果を提供することが可能である。
本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、２つの免疫療法剤の部位特異的相互作用を改善できるため、相乗的な治療効果（例えば、抗腫瘍効果）を提供する。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、オフサイト及び／または全身的な毒性を減少させる可能性を提供する。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、増強された安全性プロファイルを示す。実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、減少した毒性プロファイルを示す。例えば、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の投与は、下痢、炎症（例えば、腸の）、体重低下のうちの１つ以上等の副作用の減少をもたらし得、これらは、本発明の方法で使用される本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の細胞外ドメインによって標的化されるリガンド（複数可）／受容体（複数可）に指向する抗体の投与後に生じる。実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、有効性を犠牲にすることなく、本発明の方法で使用される本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の細胞外ドメインによって標的化されるリガンド（複数可）／受容体（複数可）に指向する抗体と比較して、改善した安全性を提供する。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、現在の免疫療法、例えば、本発明の方法で使用される本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の細胞外ドメインによって標的化されるリガンド（複数可）／受容体（複数可）に指向する抗体と比較して、減少した副作用、例えば、ＧＩ合併症を提供する。例示的なＧＩ合併症には、腹痛、食欲不振、自己免疫効果、便秘、痙攣、脱水症、下痢、食事の問題、倦怠感、鼓腸、腹部または腹水における流体、胃腸（ＧＩ）腸内毒素症、ＧＩ粘膜炎、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ－Ｄ及びＩＢＳ－Ｃ）、悪心、疼痛、便もしくは尿の変化、潰瘍性大腸炎、嘔吐、流体保持による体重増加、及び／または脱力感が含まれる。
治療方法
様々な態様では、本発明は、がん免疫療法に有用な組成物及び方法を提供する。例えば、本発明は、部分的に、がんを治療するための方法であって、有効量の、免疫チェックポイント分子に指向する少なくとも１つの抗体、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニスト、及び／または１つ以上のキメラタンパク質を、がんの治療を必要とする対象に投与する（同時にまたは連続的に）ステップを含む、方法に関する。実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＩＧＩＴの一部を含む第１のドメイン、ＯＸ４０Ｌの一部を含む第２のドメイン、及びリンカーを含む。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物及び第２の薬学的組成物は、同時に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供された後に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供される前に提供される。実施形態において、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明の別の態様は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、またはそれを受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、第１のドメインは、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または第２のドメインは、実質的に全てのＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む。
実施形態では、リンカーは、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。
実施形態では、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、がんは、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である。
実施形態では、抗体は、ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である。ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である例示的な抗体としては、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）、９Ｄ９、トレメリムマブ（旧チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＡＧＥＮ１８８４、及びＲＧ２０７７が挙げられる。
実施形態では、がんは、ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である抗体による治療に好適ながんである。ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である例示的な抗体としては、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）、９Ｄ９、トレメリムマブ（旧チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＡＧＥＮ１８８４、及びＲＧ２０７７が挙げられる。このような抗体は、部分的に、ＣＴＬＡ－４とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することによって、がん治療に貢献する。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物及び第２の薬学的組成物は、同時に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供された後に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供される前に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明の別の態様は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、またはそれを受けていない対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、第１のドメインは、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または第２のドメインは、実質的に全てのＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む。
実施形態では、リンカーは、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。
実施形態では、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、がんは、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である。
実施形態では、抗体は、ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である。ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である例示的な抗体としては、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ ０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、ＲＭＰ１－１４、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）が挙げられる。かかる抗体は、ＰＤ－１とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することが可能である。
実施形態では、がんは、ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に好適ながんである。ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である例示的な抗体としては、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ ０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、ＲＭＰ１－１４、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）が挙げられる。このような抗体は、部分的に、ＰＤ－１とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することによって、がん治療に貢献する。
本発明の一態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物及び第２の薬学的組成物は、同時に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供された後に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供される前に提供される。実施形態において、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明の別の態様は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストによる治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、またはそれを受けていない対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、第１のドメインは、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または第２のドメインが、実質的に全てのＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む。
実施形態では、リンカーは、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。
実施形態では、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、がんは、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である。
実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、ＩＭＳＡ１０１、及びＵＳ２０１４／０３４１９７６、ＵＳ２０１８／００２８５５３、ＵＳ２０１８／０２３０１７８、ＵＳ９５４９９４４、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１６／１２０３０５、ＷＯ２０１７／０４４６２２、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１７／０２７６４６、ＷＯ２０１７／０９３９３３、ＷＯ２０１７／１０６７４０、ＷＯ２０１７／１２３６５７、ＷＯ２０１７／１２３６６９、ＷＯ２０１７／１６１３４９、ＷＯ２０１７／１７５１４７、ＷＯ２０１７／１７５１５６、ＷＯ２０１７／１７６８１２、ＷＯ２０１８／００９４６６、ＷＯ２０１８／０４５２０４、ＷＯ２０１８／０６０３２３、ＷＯ２０１８／０９８２０３、ＷＯ２０１８／１００５５８、ＷＯ２０１８／１３８６８４、ＷＯ２０１８／１３８６８５、ＷＯ２０１８／１５２４５０、ＷＯ２０１８／１５２４５３、ＷＯ２０１８／１７２２０６、ＷＯ２０１８／１９８０８４、ＷＯ２０１８／２３４８０５、ＷＯ２０１８／２３４８０７、ＷＯ２０１８／２３４８０８、ＷＯ２０１９／０２３４５９、ＷＯ２０１９／０４６４９６、ＷＯ２０１９／０４６４９８、ＷＯ２０１９／０４６５００、ＷＯ２０１９／０７４８８７、ＷＯ２０１９／０７９２６１、ＷＯ２０１９／１１８８３９、ＷＯ２０１９／１２５９７４、またはＷＯ２０１９／１６０８８４に記載される任意のＳＴＩＮＧアゴニストからなる群から選択され、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストが、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、ＩＭＳＡ１０１からなる群から選択される。
実施形態では、がんは、ＳＴＩＮＧアゴニストによる治療に好適ながんである。例示的なＳＴＩＮＧアゴニストとしては、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、ＩＭＳＡ１０１、及びＵＳ２０１４／０３４１９７６、ＵＳ２０１８／００２８５５３、ＵＳ２０１８／０２３０１７８、ＵＳ９５４９９４４、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１６／１２０３０５、ＷＯ２０１７／０４４６２２、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１７／０２７６４６、ＷＯ２０１７／０９３９３３、ＷＯ２０１７／１０６７４０、ＷＯ２０１７／１２３６５７、ＷＯ２０１７／１２３６６９、ＷＯ２０１７／１６１３４９、ＷＯ２０１７／１７５１４７、ＷＯ２０１７／１７５１５６、ＷＯ２０１７／１７６８１２、ＷＯ２０１８／００９４６６、ＷＯ２０１８／０４５２０４、ＷＯ２０１８／０６０３２３、ＷＯ２０１８／０９８２０３、ＷＯ２０１８／１００５５８、ＷＯ２０１８／１３８６８４、ＷＯ２０１８／１３８６８５、ＷＯ２０１８／１５２４５０、ＷＯ２０１８／１５２４５３、ＷＯ２０１８／１７２２０６、ＷＯ２０１８／１９８０８４、ＷＯ２０１８／２３４８０５、ＷＯ２０１８／２３４８０７、ＷＯ２０１８／２３４８０８、ＷＯ２０１９／０２３４５９、ＷＯ２０１９／０４６４９６、ＷＯ２０１９／０４６４９８、ＷＯ２０１９／０４６５００、ＷＯ２０１９／０７４８８７、ＷＯ２０１９／０７９２６１、ＷＯ２０１９／１１８８３９、ＷＯ２０１９／１２５９７４、またはＷＯ２０１９／１６０８８４に記載される任意のＳＴＩＮＧアゴニストが挙げられ、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。このようなＳＴＩＮＧアゴニストは、部分的に、免疫活性化を促進し、免疫細胞を刺激してがんを攻撃することによって、がん治療に貢献する。
本発明の態様及び実施形態では、本明細書に開示されるように、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を含むがん治療を必要とする患者は、本明細書に開示されるように、免疫療法、例えば、抗がん免疫療法に対して、不十分な応答性であるか、または非応答性であると予測される。さらに、実施形態では、本明細書に開示されるように、抗がん剤を必要とする患者は、免疫チェックポイント免疫療法に対して、不十分な応答性であるか、もしくは非応答性であるか、またはそのように予測され得る。免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、及びＣＴＬＡ－４から選択され得る。
本発明による治療に好適ながんの例としては、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌が挙げられる。
本発明の態様は、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を対象に提供することと、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を対象に提供することと、を含む、方法に関する。ここで、異種キメラタンパク質は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む。
実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物及び第２の薬学的組成物は、同時に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供された後に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、第１の薬学的組成物は、第２の薬学的組成物が提供される前に提供される。実施形態では、第１の薬学的組成物の用量は、第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第１の薬学的組成物の用量よりも少ない。実施形態では、提供される第２の薬学的組成物の用量は、第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される第２の薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
実施形態では、対象は、第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明の別の態様は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療するための方法に関する。本方法は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供することを含む。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、ＰＤ１と結合するか、もしくはＰＤ１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ１と結合するか、もしくはＰＤ１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、またはそれを受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する。
本発明のさらに別の態様は、対象においてがんを治療するための方法であって、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を対象に提供すること、を含む、方法を提供する。ここで、対象は、（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている。
実施形態では、対象に提供される薬学的組成物の用量は、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される薬学的組成物の用量よりも少ない。
実施形態では、対象は、ＰＤ１と結合するか、またはＰＤ１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、第１のドメインは、実質的に全てのＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または第２のドメインが、実質的に全てのＬＩＧＨＴの細胞外ドメインを含む。
実施形態では、リンカーは、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである。
実施形態では、リンカーは、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む。実施形態では、リンカーは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。
実施形態では、対象は、ＰＤ１と結合するか、またはＰＤ１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。
実施形態では、がんは、ＰＤ１と結合するか、またはＰＤ１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である。
実施形態では、抗体は、ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である。ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である例示的な抗体としては、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）が挙げられる。かかる抗体は、ＰＤ－１とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することが可能である。
実施形態では、がんは、ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に好適ながんである。ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である例示的な抗体としては、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）が挙げられる。このような抗体は、部分的に、ＰＤ－１とそのリガンドのうちの１つ以上との相互作用を阻害することによって、がん治療に貢献する。
薬学的組成物
本発明の方法は、治療有効量の、本明細書に開示される、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体及び／またはＳＴＩＮＧアゴニストならびにキメラタンパク質を含む薬学的組成物を投与することを含む。
本明細書に開示される、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、十分に塩基性の官能基を保有することができ、それは、無機、有機、またはカルボキシル基と反応することができ、無機または有機塩基と反応して、薬学的に許容される塩を形成することができる。薬学的に許容される酸付加塩は、当該技術分野で周知であるように、薬学的に許容される酸から形成される。このような塩としては、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７）及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２に列挙される、薬学的に許容される塩が挙げられ、それらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
実施形態では、本明細書に開示される組成物は、薬学的に許容される塩の形態である。
さらに、本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、組成物、例えば、薬学的に許容される担体またはビヒクルを含む薬学的組成物の成分として対象に投与することができる。かかる薬学的組成物は、適切な投与のための形態を提供するために、任意選択で、好適な量の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。薬学的賦形剤は、水、及び例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油といった石油、動物、植物、もしくは合成起源のものを含む油等の液体であり得る。薬学的賦形剤は、例えば、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンのり、タルク、ケラチン、コロイダルシリカ、尿素、及び類似物であり得る。加えて、助剤、安定剤、増粘剤、滑沢剤、及び着色剤を使用することができる。実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、対象に投与される場合に無菌である。水は、本明細書に開示される任意の薬剤が静脈内投与される場合に有用な賦形剤である。食塩水溶液ならびにデキストロース及びグリセロールの水溶液はまた、特に注入溶液のために液体賦形剤として用いられ得る。好適な薬学的賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等も含まれる。本明細書に開示される任意の薬剤は、必要に応じて、少量の湿潤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含むこともできる。
実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、薬学的組成物は、生理食塩水緩衝液（ＴＢＳ、ＰＢＳ等を含むがこれらに限定されない）に再懸濁される。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、半減期を延長するか、さもなければ薬力学的及び薬物動態学的特性を改善するために、別の薬剤と複合化及び／または融合することができる。実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ（例えば、ｒＰＥＧとして）、ポリシアル酸（ＰＯＬＹＸＥＮ）、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはＨＡＳ）、エラスチン様タンパク質（ＥＬＰ）、ＰＡＳ、ＨＡＰ、ＧＬＫ、ＣＴＰ、トランスフェリン等のうちの１つ以上と融合または複合化され得る。実施形態では、個々のキメラタンパク質の各々は、ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５－２３９に記載される薬剤のうちの１つ以上と融合されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、薬学的組成物の様々な製剤において本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を含む。本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、溶液、懸濁液、乳剤、液滴、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、液体を含むカプセル、粉末、徐放性製剤、坐剤、乳濁液、エアロゾル、スプレー、懸濁液、または使用に好適な他の任意の形態をとることができる。タンパク質配列をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ構築物も使用することができる。実施形態では、組成物は、カプセルの形態である（例えば、米国特許第５，６９８，１５５号を参照されたい）。好適な薬学的賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １４４７－１６７６（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｓ．，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
必要に応じて、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を含む薬学的組成物は、可溶化剤を含むこともできる。また、薬剤は、当技術分野で即知である好適なビヒクルまたは送達デバイスを用いて送達することができる。本明細書に概説される併用療法は、単一の送達ビヒクルまたは送達デバイスで共送達することができる。投与用の組成物は、任意選択で、注入の部位における疼痛を緩和するために、例えば、リグノカイン等の局所麻酔薬を含むことができる。
本発明の本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質を含む薬学的組成物は、単位剤形で好都合に提示することができ、薬学の分野で周知である方法のいずれかによって調製することができる。かかる方法は一般に、治療剤を１つ以上の副成分を構成する担体と会合させるステップを含む。典型的には、薬学的組成物は、治療剤を液体担体、細かく分割した固体担体、またはその両方と会合させることによって均一かつ密接に調製され、次に必要に応じて、生成物を所望の製剤の剤形に成形する（例えば、湿式または乾式造粒、粉末ブレンド等、その後、当技術分野で即知である従来の方法を使用して錠剤化する）。
実施形態では、本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、本明細書に開示される投与様式に適合した薬学的組成物として、慣例の手順に従って製剤化される。
投与、用量、及び治療レジメン
例として、投与は、血流中に本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質の放出をもたらすか、または代替的に本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、活性疾患の部位に直接的に投与される。
本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、任意の簡便な経路、例えば、静脈内注入またはボーラス注射によって投与することもできる。投与は、全身性であり得るか、または局所性であり得る（例えば、腫瘍内注射）。様々な送達系、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセル等への封入化が即知であり、薬剤を投与するために使用することができる。
特定の実施形態では、それは、治療が必要な領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。実施形態では、例えば、がんの治療において、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、腫瘍微小環境（例えば、腫瘍血管系を含む、腫瘍細胞を取り囲み及び／または供給する細胞、分子、細胞外マトリックス及び／または血管、腫瘍浸潤リンパ球；線維芽細網細胞、内皮前駆細胞（ＥＰＣ）、がん関連線維芽細胞、周皮細胞、他の間質細胞、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の成分、樹状細胞、抗原提示細胞、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、好中球、ならびに腫瘍の近位に位置する他の免疫細胞）またはリンパ節に投与される、及び／または腫瘍微小環境またはリンパ節を標的とする。実施形態では、例えば、がんの治療において、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、腫瘍内に投与される。
実施形態では、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、従来の免疫療法（例えば、ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＹＥＲＶＯＹ、及びＴＥＣＥＮＴＲＩＱのうちの１つ以上による治療）で見られるよりも少ない副作用を提供する二重効果を可能とする。例えば、本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、皮膚、胃腸管、腎臓、末梢及び中枢神経系、肝臓、リンパ節、目、膵臓、ならびに内分泌系を含む様々な組織及び器官に影響を与え、例えば、下垂体炎、大腸炎、肝炎、非感染性肺炎、発疹、リウマチ性疾患等一般的に観察される免疫関連の有害事象を減少または予防する。さらに、現在の局所性投与、例えば腫瘍内投与は、従来の免疫療法（例えば、ＯＰＤＩＶＯ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、ＹＥＲＶＯＹ、及びＴＥＣＥＮＴＲＩＱのうちの１つ以上による治療）で使用されるような標準的な全身投与、例えば、ＩＶ注入で見られる有害事象を未然に防ぐ。
剤形としては、例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液等が挙げられる。それらはまた、使用直前に無菌の注入可能な培地に溶解または懸濁することができる、無菌の固体組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造され得る。それらは、例えば、当技術分野で即知である懸濁剤または分散剤を含み得る。
本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質の投薬量、ならびに投薬スケジュールは、治療される疾患、状態の重症度、治療または予防される状態かどうか、治療される対象の年齢、体重、性別、医学的状態、及び健康状態、対象の腎機能または肝機能、使用される本発明の特定の化合物、投与経路、及び投与する医師の裁量を含むが、これらに限定されない、様々なパラメータに依存し得る。さらに、特定の対象に関する薬理ゲノミクス（治療上の薬物動態、薬力学、または有効性プロファイルに対する遺伝子型の影響）情報は、使用される投薬量及び用量スケジュールに影響し得る。さらに、正確な個々の投薬量及び投薬スケジュールは、投与される薬剤の特定の組み合わせ、投与の期間、投与の経路、製剤の性質、排泄率、治療される特定の疾患、障害の重症度、及び障害の解剖学的位置を含む、様々な要因に応じて若干調整することができる。投与量のいくつかの変動が予想され得る。
別の実施形態では、送達は、小胞、特にリポソームであり得る（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３、Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ－Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３－３６５（１９８９）を参照されたい。
本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、制御放出または持続出手段によって、または当業者に周知である送達デバイスによって投与することができる。例には、これらに限定されないが、米国特許第３，８４５，７７０号、同第３，９１６，８９９号、同第３，５３６，８０９号、同第３，５９８，１２３号、同第４，００８，７１９号、同第５，６７４，５３３号、同第５，０５９，５９５号、同第５，５９１，７６７号、同第５，１２０，５４８号、同第５，０７３，５４３号、同第５，６３９，４７６号、同第５，３５４，５５６号、及び同第５，７３３，５５６号に記載されているものが含まれ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。かかる剤形は、様々な割合で所望の放出プロファイルを提供するために、例えば、ヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過性膜、浸透圧システム、多層コーティング、微小粒子、リポソーム、ミクロスフェア、またはこれらの組み合わせを使用して、１つ以上の活性成分を制御放出または持続放出を提供するために有用であり得る。活性成分の制御または持続放出は、ｐＨの変化、温度の変化、適切な波長の光による刺激、酵素の濃度もしくは利用能、水の濃度もしくは利用能、または他の生理学的条件もしくは化合物を含むがこれらに限定されない様々な条件によって刺激することができる。
別の実施形態では、高分子材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたく、さらにＬｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照されたい）。
別の実施形態では、制御放出系は、治療される標的領域の近くに配置され得、したがって全身用量のほんの一画分を必要とし得る（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照されたい）。Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３）による総説で議論されている他の制御放出系を使用することができる。
さらに、本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質は、投与レジメン全体を通して断続的ではなく継続的に投与され得る。
融合タンパク質、核酸、及び細胞
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、組換え融合タンパク質、例えば、本明細書に開示される細胞外ドメインを有する単一のポリペプチドであり得る。例えば、実施形態では、キメラタンパク質は、原核細胞、真核細胞、または無細胞発現系において単一の単位として翻訳される。
実施形態では、キメラタンパク質は、複数のポリペプチド、例えば、本明細書に開示される複数の細胞外ドメインを含む組換えタンパク質であり、それらを組み合わされて（共有または非共有結合を介して）、例えば、インビトロで単一の単位（例えば、本明細書に開示される１つ以上の合成リンカーとともに）を生成する。
実施形態では、キメラタンパク質は、１つのポリペプチドとして化学的に合成されるか、または各ドメインは、別々に化学的に合成され、次いで組み合わされ得る。実施形態では、キメラタンパク質の一部が翻訳され、一部が化学的に合成される。
構築物は、３つの断片をコードする核酸（Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、それに続くリンカー配列、それに続くＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン）をベクター（プラスミド、ウイルス、またはその他）にクローニングすることによって産生でき、完全な配列のアミノ末端は、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む分子の「左側」に対応しており、完全な配列のカルボキシ末端は、ＩＩ型膜貫通タンパク質の細胞外ドメインを含む分子の「右側」に対応する。実施形態では、本明細書の他の場所に記載されるように、他の構成の１つを有するキメラタンパク質の構築物は、産生される翻訳されたキメラタンパク質が所望の構成、例えば、二重の内向きのキメラタンパク質を有するように、３つの核酸を含むであろう。したがって、実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、そのように操作される。
本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、発現ベクターにクローン化された核酸によってコードされ得る。実施形態では、発現ベクターは、ＤＮＡまたはＲＮＡを含む。実施形態では、発現ベクターは、哺乳動物発現ベクターである。
原核生物及び真核生物の両方のベクターは、キメラタンパク質の発現に使用することができる。原核生物ベクターには、Ｅ．ｃｏｌｉ配列に基づく構築物が含まれる（例えば、Ｍａｋｒｉｄｅｓ，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９６，６０：５１２－５３８を参照されたい）。Ｅ．ｃｏｌｉでの発現のために使用することができる制御性領域の非限定的な例には、ｌａｃ、ｔｒｐ、ｌｐｐ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７、及びλＰＬが含まれる。原核生物発現ベクターの非限定的な例としては、λｇｔ１１等のλｇｔベクター系（Ｈｕｙｎｈ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ“ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｖｏｌ．Ｉ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”１９８４，（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．），ｐｐ．４９－７８，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）、及びｐＥＴベクター系（Ｓｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９９０，１８５：６０－８９）が挙げられる。しかしながら、原核生物宿主－ベクター系は、哺乳動物細胞の翻訳後プロセシングの多くを実行できない。したがって、真核生物宿主－ベクター系は、特に有用であり得る。様々な制御性領域は、哺乳動物宿主細胞におけるキメラタンパク質の発現に使用することができる。例えば、ＳＶ４０初期及び後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、及びラウス肉腫ウイルス末端反復配列（ＲＳＶ－ＬＴＲ）プロモーターを使用できる。哺乳動物細胞において有用であり得る誘導性プロモーターには、限定されないが、メタロチオネインＩＩ遺伝子、マウス乳癌ウイルス糖質コルチコイド応答性末端反復配列（ＭＭＴＶ－ＬＴＲ）、β－インターフェロン遺伝子、及びｈｓｐ７０遺伝子に関連するプロモーターが含まれる（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９８９，４９：２７３５－４２、及びＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９０，１０：１６５－７５を参照されたい）。熱ショックプロモーターまたはストレスプロモーターもまた、組換え宿主細胞におけるキメラタンパク質の発現を駆動するために有利であり得る。
実施形態では、発現ベクターは、哺乳動物細胞において機能的である、発現制御領域またはその補体に作動可能に連結された、キメラタンパク質またはその補体をコードする核酸を含む。発現制御領域は、発現ベクターを用いて形質転換されたヒト細胞において遮断及び／または刺激媒介物が産生されるように、作動可能に連結された遮断及び／または刺激媒介物をコードする核酸の発現を駆動することが可能である。
実施形態では、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質は、分泌可能及び完全な機能性単一ポリペプチド鎖として哺乳動物宿主細胞において産生可能である。
発現制御領域は、プロモーター及びエンハンサー等の制御性ポリヌクレオチド（本明細書では要素と称されることもある）であり、作動可能に連結された核酸の発現に影響を与える。本発明の発現ベクターの発現制御領域は、ヒト細胞において作動可能に連結されたコード化核酸を発現することが可能である。実施形態では、細胞は、腫瘍細胞である。別の実施形態では、細胞は、非腫瘍細胞である。実施形態では、発現制御領域は、作動可能に連結された核酸に制御可能な発現を付与する。シグナル（刺激と称されることもある）は、かかる発現制御領域に作動可能に連結された核酸の発現を増加または低減させることができる。シグナルに応答して発現を増加させるかかる発現制御領域は、誘導可能と称されることが多い。シグナルに応答して発現を低減させるかかる発現制御領域は、抑制可能と称されることが多い。通常、かかる要素によって付与される増加または低減の量は、存在するシグナルの量に比例し、シグナルの量が多いほど、発現の増加または低減が大きくなる。
実施形態では、本発明は、合図に応答して一過性で高レベルの発現をもたらすことが可能である誘導性プロモーターの使用を企図する。例えば、腫瘍細胞の近くにある場合、かかる発現制御配列を含むキメラタンパク質の発現ベクターで形質転換された細胞は、形質転換された細胞を適切な合図に曝露することによって、高レベルの薬剤を一過性に産生するように誘導される。例示的な誘導性発現制御領域には、低分子化学化合物等の合図で刺激される誘導性プロモーターを含む領域が含まれる。他の例では、キメラタンパク質は、細胞による抗原認識に感受性のあるプロモーターの制御下で、キメラ抗原受容体含有細胞またはインビトロで増殖した腫瘍浸潤リンパ球で発現され、腫瘍抗原認識に応答して、キメラタンパク質の局所分泌を引き起こす。特定の例は、例えば、米国特許第５，９８９，９１０号、同第５，９３５，９３４号、同第６，０１５，７０９号、及び同第６，００４，９４１号に見出すことができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
発現制御領域及び遺伝子座制御領域には、天然のプロモーター及びエンハンサー要素等の全長プロモーター配列、ならびに全長または非バリアント機能の全部もしくは一部を保持する、部分配列またはポリヌクレオチドバリアントが含まれる。本明細書で使用される場合、「機能的」及びその適格なバリアントという用語は、核酸配列、部分配列、または断片に関して使用される場合、その配列が天然核酸配列（例えば、非バリアントまたは非修飾配列）の１つ以上の機能を有することを意味する。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結する」とは、それらが意図した様式で機能することを可能にするように記載された構成要素の物理的並置を指す。核酸と作動可能に連結する発現制御要素の例では、制御要素が核酸の発現を調節するような関係である。典型的には、転写を調節する発現制御領域は、転写される核酸の５’末端近く（すなわち、「上流」）に並置する。発現制御領域はまた、転写される配列の３’末端（すなわち、「下流」）または転写物内（例えば、イントロン内）に位置し得る。発現制御要素は、転写される配列から離れた距離に位置し得る（例えば、核酸から１００～５００、５００～１０００、２０００～５０００、またはそれ以上のヌクレオチド）。発現制御要素の特定の例はプロモーターであり、これは通常、転写される配列の５’に位置する。発現制御要素の別の例は、転写される配列の５’もしくは３’、または転写される配列内に位置し得るエンハンサーである。
ヒト細胞で機能性の発現系は当該技術分野で周知であり、ウイルス系を含む。一般に、ヒト細胞で機能するプロモーターは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼと結合し、コード配列のｍＲＮＡへの下流（３’）転写を開始することが可能である任意のＤＮＡ配列である。プロモーターは、通常、コード配列の５’末端の近位に配置される転写開始領域、及び典型的に、転写開始部位の２５～３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスを有する。ＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩに正確な部位でＲＮＡ合成を開始するように指示すると考えられている。プロモーターはまた、典型的に、ＴＡＴＡボックスの上流の１００～２００塩基対内に典型的に位置する上流プロモーター要素（エンハンサー要素）も含むであろう。上流のプロモーター要素は、転写が開始される比率を決定し、それらは、どちらの配向にも作用することができる。プロモーターとして特に使用されるのは、ウイルス遺伝子が多くの場合高度に発現され、広い宿主範囲を有するため、哺乳動物ウイルス遺伝子からのプロモーターである。例には、ＳＶ４０初期プロモーター、マウス乳癌ウイルスＬＴＲプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、ＣＭＶプロモーター等が含まれる。
典型的には、哺乳動物細胞によって認識される転写終結及びポリアデニル化配列は、翻訳終止コドンの３’に位置する制御性領域であり、したがって、プロモーター要素と一緒に、コード配列に隣接する。成熟ｍＲＮＡの３’末端は、部位特異的な翻訳後切断及びポリアデニル化によって形成される。転写ターミネーター及びポリアデニル化シグナルの例には、ＳＶ４０に由来するものが含まれる。イントロンはまた、発現構築物に含まれ得る。
核酸を生きた細胞に導入するために使用可能な様々な技法が存在する。インビトロでの哺乳動物細胞への核酸の移入に好適な技術には、リポソームの使用、電気穿孔、微量注入、細胞融合、ポリマー系システム、ＤＥＡＥ－デキストラン、ウイルス形質導入、リン酸カルシウム沈降法等が含まれる。インビボでの遺伝子導入のために、リポソーム、キトサン及びゼラチン等の天然ポリマー系送達ビヒクル、インビボでの形質導入にさらに好適であるウイルスベクターを含む多くの技術及び試薬も使用され得る。いくつかの状況では、腫瘍細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体またはリガンド等の標的化剤を提供することが望ましい。リポソームが用いられる場合、エンドサイトーシスと関連付けられた細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質は、例えば、特定の細胞型に向性のカプシドタンパク質またはその断片、循環中の内部化を受けるタンパク質の抗体、細胞内限局化を標的とし、細胞内半減期を増強するタンパク質を標的とするため、及び／またはそれらの取り込みを促進するために使用され得る。受容体を媒介したエンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２，４４２９－４４３２（１９８７）、及びＷａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７，３４１０－３４１４（１９９０）に記載される。
必要に応じて、例えば、組み込み配列等の遺伝子送達剤を利用することもできる。多数の組み込み配列が当技術分野で即知である（例えば、Ｎｕｎｅｓ－Ｄｕｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２６：３９１－４０６，１９９８、Ｓａｄｗｏｓｋｉ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６５：３４１－３５７，１９８６、Ｂｅｓｔｏｒ，Ｃｅｌｌ，１２２（３）：３２２－３２５，２００５、Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＴＩＧ １５：３２６－３３２，１９９９、Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ＰｈａｒｍＴｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３－４３９，２００３を参照されたい）。これらには、リコンビナーゼ及びトランスポザーゼが含まれる。例としては、Ｃｒｅ（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：４６７－４８６，１９８１）、ラムダ（Ｎａｓｈ，Ｎａｔｕｒｅ，２４７，５４３－５４５，１９７４）、ＦＩｐ（Ｂｒｏａｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２９：２２７－２３４，１９８２）、Ｒ（Ｍａｔｓｕｚａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１７２：６１０－６１８，１９９０）、ｃｐＣ３１（例えば、Ｇｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３５：６６７－６７８，２００４を参照されたい）、スリーピングビューティ、マリナーファミリーのトランスポザーゼ（Ｐｌａｓｔｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，前述）、ならびにレトロウイルスまたはレンチウイルスのＬＴＲ配列及びＡＡＶのＩＴＲ配列等、ウイルス組み込みを提供する成分を有するＡＡＶ、レトロウイルス、及びアンチウイルス等のウイルスを組み込むための成分（Ｋｏｏｔｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ＰｈａｒｍＴｏｘｉｃｏｌ．，４３：４１３－４３９，２００３）が挙げられる。さらに、直接的及び標的遺伝子組み込み戦略を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９、ジンクフィンガー、ＴＡＬＥＮ、及びメガヌクレアーゼ遺伝子編集技術を含むキメラ融合タンパク質をコードする核酸配列を挿入することができる。
実施形態では、キメラタンパク質の発現のための発現ベクターは、ウイルスベクターである。遺伝子治療に有用な多くのウイルスベクターが即知である（例えば、Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１：１ １７，１２２，２００３を参照されたい。例示的なウイルスベクターには、アンチウイルス（ＬＶ）、レトロウイルス（ＲＶ）、アデノウイルス（ＡＶ）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びαウイルスから選択されるものが含まれるが、他のウイルスベクターも使用され得る。インビボでの使用について、αウイルス及びアデノウイルス等、宿主ゲノムに組み込まれないウイルスベクターが使用に好適である。αウイルスの例示的な種類には、シンドビスウイルス、ベネズエラ馬脳炎（ＶＥＥ）ウイルス、及びセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が含まれる。インビトロでの使用について、レトロウイルス、ＡＡＶ、アンチウイルス等、宿主ゲノムに組み込まれるウイルスベクターが好適である。実施形態では、本発明は、インビボで固形腫瘍を本発明のウイルスベクターと接触させることを含む、インビボでのヒト細胞を形質導入する方法を提供する。
発現ベクターは、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質を産生するために宿主細胞に導入され得る。細胞は、例えば、インビトロで培養され得るか、または遺伝子操作され得る。有用な哺乳動物宿主細胞には、ヒト、サル、及びげっ歯類に由来する細胞が含まれるが、これらに限定されない（例えば、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、「Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、１９９０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．を参照されたい）。これらには、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓細胞株（例えば、ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胎児腎臓株（例えば、２９３、２９３－ＥＢＮＡ、または浮遊培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ １９７７，３６：５９）、仔ハムスター腎臓細胞（例えば、ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞－ＤＨＦＲ（例えば、ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０，７７：４２１６）、ＤＧ４４ ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、マウスセルトリ細胞（Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ １９８０，２３：２４３－２５１）、マウス線維芽細胞（例えば、ＮＩＨ－３Ｔ３）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば、ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば、ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（例えば、ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（例えば、ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（例えば、Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、及びマウス乳腺腫瘍細胞（例えば、ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）が含まれる。本明細書に開示されるキメラタンパク質を発現するための例示的ながん細胞型には、マウス線維芽細胞株、ＮＩＨ３Ｔ３、マウスルイス肺癌細胞株、ＬＬＣ、マウス肥満細胞腫細胞株、Ｐ８１５、マウスリンパ腫細胞株、ＥＬ４及びその卵白アルブミン形質移入体、Ｅ．Ｇ７、マウスメラノーマ細胞株、Ｂ１６Ｆ１０、マウス線維肉腫細胞株、ＭＣ５７、ならびにヒト小細胞肺癌細胞株、ＳＣＬＣ＃２及びＳＣＬＣ＃７が含まれる。
宿主細胞は、健康なヒト、がん患者、及び感染性疾患を有する患者を含む正常または罹患した対象から、民間研究所の寄託、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）等の公的な培養物収集、または商業的供給業元から得ることができる。
インビトロ、エクスビボ、及び／またはインビボで、本発明の方法で使用されるキメラタンパク質の産生に使用することができる細胞には、これらに限定されないが、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞、Ｔリンパ球、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球等の血液細胞、様々な幹または前駆細胞、特に造血幹または前駆細胞（例えば、骨髄から得られるもの）、臍帯血、末梢血、及び胎児肝臓が含まれる。細胞型の選択は、治療もしくは予防されている腫瘍または感染症の種類に依存し、当業者によって決定することができる。
Ｆｃを含む巨大分子（モノクローナル抗体等）の産生及び精製は、生成物間でわずかな修飾を伴い、標準化されたプロセスとなった。例えば、多くのＦｃを含む巨大分子は、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞（またはそのバリアント）もしくはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（またはそのバリアント）によって、またはいくつかの事例では細菌または合成法によって産生される。産生後、ＨＥＫまたはＣＨＯ細胞によって分泌されるＦｃを含む巨大分子は、プロテインＡカラムと結合することを介して精製され、それに続く様々な方法を使用して「洗練」される。一般的に言えば、精製されたＦｃを含む巨大分子は、液体の形態で一定期間保存され、長期間凍結されるか、またいくつかの事例では凍結乾燥される。実施形態では、本明細書で企図されるキメラタンパク質の産生は、従来のＦｃを含む巨大分子と比較して、固有の特徴を有し得る。特定の例では、キメラタンパク質は、特定のクロマトグラフィ樹脂を使用するか、またはプロテインＡの捕捉に依存しないクロマトグラフィ法を使用して精製することができる。実施形態では、キメラタンパク質は、オリゴマー状態または複数のオリゴマー状態で精製され得、特定の方法を使用して特定のオリゴマー状態について濃縮され得る。理論に拘束されることなく、これらの方法には、特定の塩濃度、ｐＨ、及び添加剤組成を含む特定の緩衝液による処理が含まれ得る。他の例では、かかる方法は、あるオリゴマー状態を別のものよりも有利に処理すること含み得る。本明細書で得られたキメラタンパク質は、当技術分野で指定されている方法を使用してさらに「洗練」することができる。実施形態では、キメラタンパク質は、非常に安定性であり、広範囲のｐＨ曝露（ｐＨ３～１２の間）に耐えることが可能であり、多数の凍結／解凍ストレス（３回を超える凍結／解凍サイクル）に耐えることが可能であり、高温での長時間の培養（４０℃で２週間を超える）に耐えることが可能である。実施形態では、キメラタンパク質は、かかるストレス条件下で、分解、脱アミド化等の証拠を伴わず、無傷のままであることが示されている。
対象及び／または動物
実施形態では、対象及び／または動物は、哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ウサギ、ヒツジ、またはサル、チンパンジー、もしくはヒヒ等の非ヒト霊長類である。実施形態では、対象及び／または動物は、例えば、ゼブラフィッシュ等の非哺乳動物である。実施形態では、対象及び／または動物は、蛍光標識された細胞（例えば、ＧＦＰを有する）を含み得る。実施形態では、対象及び／または動物は、蛍光細胞を含むトランスジェニック動物である。
実施形態では、対象及び／または動物は、ヒトである。実施形態では、ヒトは、小児のヒトである。実施形態では、ヒトは、成人のヒトである。実施形態では、ヒトは、老齢期のヒトである。実施形態では、ヒトは、患者と称され得る。
ある特定の実施形態では、ヒトは、約０ヶ月～約６ヶ月、約６～約１２ヶ月、生後約６～約１８ヶ月、生後約１８～約３６ヶ月、生後約１～約５歳、生後約５～約１０歳、約１０～約１５歳、約１５～２０歳、約２０～約２５歳、約２５～約３０歳、約３０～約３５歳、約３５～約４０歳、約４０～約４５歳、約４５～約５０歳、約５０～約５５歳、約５５～約６０歳、約６０～約６５歳、約６５～約７０歳、約７０～約７５歳、約７５～約８０歳、約８０～約８５歳、約８５～約９０歳、約９０～約９５歳、または約９５～約１００歳の範囲の年齢を有する。
実施形態では、対象は、非ヒト動物であり、したがって、本発明は獣医学的使用に対する。特定の実施形態では、非ヒト動物は、家庭用ペットである。別の特定の実施形態では、非ヒト動物は、家畜である。
実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する。実施形態では、対象は、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性であるがんを有する。
キット及び医薬品
本発明の態様は、本明細書に開示される薬学的組成物及び／またはキメラタンパク質の投与を単純化することができるキットを提供する。
本発明の例示的なキットは、単位剤形で本明細書に開示される本発明の方法で使用される免疫チェックポイント分子に指向する任意の抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、及び／またはキメラタンパク質、及び／または本明細書に開示される薬学的組成物を含む。実施形態では、単位剤形は、本明細書に開示される任意の薬剤、及び薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを含む、無菌であり得る予め充填されたシリンジ等の容器である。キットは、本明細書に開示される任意の薬剤の使用を指示するラベルまたは印刷された説明書をさらに含むことができる。キットは、開瞼器、局所麻酔剤、及び投与位置に対する洗浄剤をさらに含み得る。実施形態では、キットは、有効量の本発明の組成物及び有効量の別の組成物、例えば、本明細書に開示されるもの等を含む容器を含む。
本発明の態様は、医薬品、例えば、がんの治療及び／または炎症性疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に開示されるようなキメラタンパク質の使用を含む。
治療の対象を選択する方法及びがん治療の有効性を評価する方法
一態様では、本開示は、がん治療の有効性の評価を必要とする対象においてがん治療の有効性を評価するための方法であって、対象が、がんに罹患しており、方法が、（ｉ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、異種キメラタンパク質を連続投与するステップと、を含む、方法に関する。
一態様では、本開示は、がん治療の有効性の評価を必要とする対象においてがん治療の有効性を評価するための方法であって、対象が、がんに罹患しており、方法が、（ｉ）（Ａ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質、ならびに（Ｂ）抗免疫チェックポイント抗体、を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、異種キメラタンパク質を連続投与するステップと、を含む、方法に関する。
一態様では、本開示は、がんの療法による治療のための対象を選択する方法であって、（ｉ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、がんの療法による治療のための対象を選択するステップと、を含む、方法に関する。
一態様では、本開示は、がんの療法による治療のための対象を選択する方法であって、（ｉ）（Ａ）（ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの一部を含む、第１のドメインと、（ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの一部を含む、第２のドメインと、（ｃ）第１のドメイン及び第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質、ならびに（Ｂ）任意選択で、抗免疫チェックポイント抗体、を含む、薬学的組成物を対象に提供するステップと、（ｉｉ）対象から生体試料を得るステップと、（ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、生体試料上でアッセイを実行するステップと、（ｉｖ）対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、がんの療法による治療のための対象を選択するステップと、を含む、方法に関する。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加は、陰性対照と比較して、少なくとも約０．１倍、約０．２倍、約０．３倍、約０．４倍、約０．５倍、約０．６倍、約０．７倍、約０．８倍、約０．９倍、約１倍、約１．１倍、約１．２倍、約１．３倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．６倍、約１．７倍、約１．８倍、約１．９倍、約２倍、約２．１倍、約２．２倍、約２．３倍、約２．４倍、約２．５倍、約２．６倍、約２．７倍、約２．８倍、約２．９倍、約３倍、約３．１倍、約３．２倍、約３．３倍、約３．４倍、約３．５倍、約３．６倍、約３．７倍、約３．８倍、約３．９倍、約４倍、約４．１倍、約４．２倍、約４．３倍、約４．４倍、約４．５倍、約４．６倍、約４．７倍、約４．８倍、約４．９倍、約５倍、約５．１倍、約５．２倍、約５．３倍、約５．４倍、約５．５倍、約５．６倍、約５．７倍、約５．８倍、約５．９倍、約６倍、約６．１倍、約６．２倍、約６．３倍、約６．４倍、約６．５倍、約６．６倍、約６．７倍、約６．８倍、約６．９倍、約７倍、約７．１倍、約７．２倍、約７．３倍、約７．４倍、約７．５倍、約７．６倍、約７．７倍、約７．８倍、約７．９倍、約８倍、約８．１倍、約８．２倍、約８．３倍、約８．４倍、約８．５倍、約８．６倍、約８．７倍、約８．８倍、約８．９倍、約９倍、約９．１倍、約９．２倍、約９．３倍、約９．４倍、約９．５倍、約９．６倍、約９．７倍、約９．８倍、約９．９倍、または約１０倍の倍数で生じる。
いくつかの実施形態では、増加は、陽性対照におけるサイトカインのレベル及び／または活性と比較して計算される。いくつかの実施形態では、陽性対照は、サイトカインを含む。いくつかの実施形態では、陽性対照は、炎症応答を受けている個体において見出されるサイトカインのレベルを含む。
追加的または代替的に、いくつかの実施形態では、対象は、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＬ－２７、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＩＬ－２、ＴＮＦα、及びＩＬ－１８から選択される少なくとも１つのサイトカインのレベル及び／または活性の低減を有する。いくつかの実施形態では、低減は、キメラタンパク質の用量を対象に投与する前に、対象の別の生体試料中のサイトカインのレベル及び／または活性と比較して計算される。いくつかの実施形態では、低減は、キメラタンパク質の用量を投与されていない異なる対象に由来する別の生体試料中のサイトカインのレベル及び／または活性と比較して計算される。いくつかの実施形態では、低減は、陰性対照におけるサイトカインのレベル及び／または活性と比較して計算される。いくつかの実施形態では、陰性対照は、サイトカインを含まない。いくつかの実施形態では、陰性対照は、炎症応答を受けていない個体において見出されるサイトカインのレベルを含む。いくつかの実施形態では、低減は、陰性対照と比較して、少なくとも約０．１倍、約０．２倍、約０．３倍、約０．４倍、約０．５倍、約０．６倍、約０．７倍、約０．８倍、約０．９倍、約１倍、約１．１倍、約１．２倍、約１．３倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．６倍、約１．７倍、約１．８倍、約１．９倍、約２倍、約２．１倍、約２．２倍、約２．３倍、約２．４倍、約２．５倍、約２．６倍、約２．７倍、約２．８倍、約２．９倍、約３倍、約３．１倍、約３．２倍、約３．３倍、約３．４倍、約３．５倍、約３．６倍、約３．７倍、約３．８倍、約３．９倍、約４倍、約４．１倍、約４．２倍、約４．３倍、約４．４倍、約４．５倍、約４．６倍、約４．７倍、約４．８倍、約４．９倍、約５倍、約５．１倍、約５．２倍、約５．３倍、約５．４倍、約５．５倍、約５．６倍、約５．７倍、約５．８倍、約５．９倍、約６倍、約６．１倍、約６．２倍、約６．３倍、約６．４倍、約６．５倍、約６．６倍、約６．７倍、約６．８倍、約６．９倍、約７倍、約７．１倍、約７．２倍、約７．３倍、約７．４倍、約７．５倍、約７．６倍、約７．７倍、約７．８倍、約７．９倍、約８倍、約８．１倍、約８．２倍、約８．３倍、約８．４倍、約８．５倍、約８．６倍、約８．７倍、約８．８倍、約８．９倍、約９倍、約９．１倍、約９．２倍、約９．３倍、約９．４倍、約９．５倍、約９．６倍、約９．７倍、約９．８倍、約９．９倍、または約１０倍の倍数で生じる。
いくつかの実施形態では、低減は、陽性対照におけるサイトカインのレベル及び／または活性と比較して計算される。いくつかの実施形態では、陽性対照は、サイトカインを含む。いくつかの実施形態では、陽性対照は、炎症応答を受けている個体において見出されるサイトカインのレベルを含む。
本明細書に開示された態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、がんは、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、もしくは尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連するがんから選択される。
いくつかの実施形態では、生体試料は、体液、分離された細胞の試料、組織もしくは臓器からの試料、または対象の外側もしくは内側の体表面から得られた洗浄／すすぎ液の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血漿、血清、涙液、涙、骨髄、血液、血液細胞、腹水、組織もしくは細針生検試料、細胞含有体液、遊離浮遊核酸、痰、唾液、尿、脳脊髄液、腹腔液、胸膜液、糞便、リンパ、婦人科液、皮膚スワブ、膣スワブ、経口スワブ、鼻スワブ、洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）もしくは洗浄（ｌａｖａｇｅ）（例えば、導管洗浄もしくは気管支肺胞洗浄）、吸引液、スクレイピング、骨髄検体、組織生検検体、外科検体、糞便、他の体液、分泌物、及び／または排泄物、及び／またはそれらからの細胞から選択される体液である。
いくつかの実施形態では、生体試料は、新鮮な組織試料、凍結腫瘍組織検体、培養細胞、循環腫瘍細胞、またはホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織検体である。いくつかの実施形態では、生体試料は、がんは、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する。
いくつかの実施形態では、生体試料は、スクレイプ、スワブ、または生検を含むがこれらに限定されない周知の技術によって得られる。いくつかの実施形態では、生体試料は、針生検によって得られる。いくつかの実施形態では、生体試料は、スクレイプ、スワブ、及び生検から選択される技術によって得られる。いくつかの実施形態では、生体試料は、ブラシ、（綿）スワブ、スパチュラ、すすぎ／洗浄液、パンチ生検装置、針による空洞の穿刺、または外科用器具の使用によって得られる。いくつかの実施形態では、生体試料は、個体から得られた細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、得られる細胞は、生体試料が得られる個体由来の細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られる「一次試料」である。例えば、いくつかの実施形態では、生体試料は、生検（例えば、細針吸引または組織生検）、手術、体液（例えば、血液、リンパ、糞便等）の収集からなる群から選択される方法によって得られる。いくつかの実施形態では、生体試料は、腫瘍、血液、肝臓、泌尿生殖管、口腔、上気消化管、表皮、または肛門管に由来する。本技術の方法を実施するために、生体試料をさらに加工処理してもよいことを理解されたい。かかる「加工処理された試料」は、例えば、試料から抽出されるか、または一次試料を、ｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写、特定の構成要素の単離及び／または精製等の技術に供することによって得られる核酸またはタンパク質を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性は、ＲＮＡ配列決定、免疫組織化学染色、ウエスタンブロッティング、インセルウエスタン（ｉｎ ｃｅｌｌ ｗｅｓｔｅｒｎ）、免疫蛍光染色、ＥＬＩＳＡ、及びフローサイトメトリー、またはそれらの組み合わせによって測定される。いくつかの実施形態では、試料を、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤と接触させることによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性が測定される。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤は、抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤は、抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、組換え抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、またはその断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ細胞受容体、天然細胞傷害性受容体、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３８、ＣＤ５７、ＣＤ１２７、ＮＫＰ４６、ＨＬＡ－ＤＲ、パーフォリン、グランザイム、及びグラニュライシンから選択される表面マーカーに特異的である。
いくつかの実施形態では、サイトカインのレベル及び／または活性は、ＲＮＡ配列決定、免疫組織化学染色、ウエスタンブロッティング、インセルウエスタン、免疫蛍光染色、ＥＬＩＳＡ、及びフローサイトメトリーのうちの１つ以上によって測定される。
いくつかの実施形態では、サイトカインのレベル及び／または活性は、サイトカインのうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤と試料を接触させることによって測定される。いくつかの実施形態では、サイトカインのうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤は、抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、組換え抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、またはその断片である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ細胞受容体、天然細胞傷害性受容体、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３８、ＣＤ５７、ＣＤ１２７、ＮＫＰ４６、ＨＬＡ－ＤＲ、パーフォリン、グランザイム、及びグラニュライシンから選択されるマーカーに特異的である。いくつかの実施形態では、抗体は、腫瘍抗原に特異的である。
いくつかの実施形態では、サイトカインのレベル及び／または活性は、核酸のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤と試料を接触させることによって測定される。いくつかの実施形態では、核酸のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤は、核酸プライマーまたはプローブである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及びＣＸＣＬ１２から選択される。
いくつかの実施形態では、評価は、予後、または治療に対する応答を含む。いくつかの実施形態では、評価は、予後、及び／または治療に対する応答を含む。いくつかの実施形態では、評価は、対象を高リスク群または低リスク群に分類することを通知する。いくつかの実施形態では、高リスク分類は、高レベルのがん侵襲性を含み、侵襲性が、高い腫瘍グレード、低い全生存、高い転移確率、及び侵襲性を示す腫瘍マーカーの存在のうちの１つ以上によって特徴付け可能である。いくつかの実施形態では、低リスク分類は、低レベルのがん侵襲性を含み、侵襲性が、低い腫瘍グレード、高い全生存、低い転移確率、及び侵襲性を示す腫瘍マーカーの非存在及び／または低減のうちの１つ以上によって特徴付け可能である。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、ネオアジュバント療法の保留を示す。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、アジュバント療法の保留を示す。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、キメラタンパク質の投与の継続を示す。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、キメラタンパク質の投与の保留を示す。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、異種キメラタンパク質の投与の継続を示す。いくつかの実施形態では、低リスクまたは高リスク分類は、異種キメラタンパク質の投与の保留を示す。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与に対する陽性応答及び／またはその利益を予測するものである。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益を予測する。
いくつかの実施形態では、評価は、キメラタンパク質の投与に対する陽性応答及び／またはその利益を予測するものである。いくつかの実施形態では、評価は、キメラタンパク質の投与に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益を予測する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与の継続または投与の保留を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与の継続を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の用量の変更を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の用量の増加を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の用量の低減を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与レジメンの変更を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、異種キメラタンパク質の投与頻度の増加を通知する。
いくつかの実施形態では、評価は、ネオアジュバント療法の投与を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、アジュバント療法の投与を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、ネオアジュバント療法の保留を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、ネオアジュバント療法の変更を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、アジュバント療法の変更を通知する。いくつかの実施形態では、評価は、アジュバント療法の保留を通知する。
いくつかの実施形態では、評価は、ネオアジュバント化学療法に対する陽性応答及び／またはその利益、あるいはネオアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如を予測する。いくつかの実施形態では、評価は、アジュバント化学療法に対する陽性応答及び／またはその利益、あるいはアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如を予測する。いくつかの実施形態では、評価は、ネオアジュバント化学療法に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益、あるいはネオアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如を予測する。いくつかの実施形態では、評価は、アジュバント化学療法に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益、あるいはアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如を予測する。
いくつかの実施形態では、ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法は、化学療法剤である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、以下から選択される：チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンから選択されるアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボクオン、メツレドパ及びウレドパから選択されるアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチイレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（例えば、ブルラタシン及びブルラタシノン）；カンプテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ １－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードから選択されるナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチンから選択されるニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマール（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｇａｍｍａｌｌ）及びカリケアマイシンオメガール（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｏｍｅｇａｌｌ）（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照のこと））から選択される抗生物質；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；クロドロネートから選択されるビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連するクロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣから選択されるマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）から選択される代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートから選択される葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンから選択されるプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンから選択されるピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストトラクトンから選択されるアンドロゲン；ミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンから選択される抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）；フロリン酸から選択される葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシンから選択されるメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬパクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ－フリー、アルブミン工学によるパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、１１１．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンから選択されるプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵ及びロイコボリンと併用するイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸から選択されるレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；細胞増殖を低下させるＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ））及びＶＥＧＦ－Ａの阻害剤、それらの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、ならびにそれらのうちの任意の２つ以上の組み合わせ。
いくつかの実施形態では、ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法は、細胞傷害性薬剤である。いくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤は、メトトレキサート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロトスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン及びカルボプラチン（パラプラチン）から選択されるアルキル化剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン及びビスアントレンを含むアントラサイクリン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；及びビンカアルカロイド、ビンクリスチン及びビンブラスチン、パクリタキセル（タキソール）、リシン、シュードモナス外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、それらの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、ならびにそれらのうちの任意の２つ以上の組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、評価は、キメラタンパク質の投与頻度の低減を通知する。
いくつかの実施形態では、ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法は、チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ４、ＧＩＴＲ、ガレクチン－９、ＨＶＥＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＳＩＲＰα、ＩＣＯＳ、ＣＤ１７２ａ、及びＴＭＩＧＤ２のうちの１つ以上を標的とする薬剤である。
本明細書に開示される任意の態様または実施形態は、本明細書に開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
本発明は、以下の実施例でさらに記載されるが、これらは、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
本明細書の実施例は、本技術の利点及び利益を例示し、当業者が本技術のがんを治療するための方法を実施するのをさらに支援するために提供される。本明細書の実施例は、本技術の特定の態様をより完全に例示するためにも提示される。例えば、免疫チェックポイント分子に指向する抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４及び抗ＰＤ－１）とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質との特定の組み合わせの機能的な抗腫瘍活性は、例示的な実施形態である。実施例は、添付の特許請求の範囲によって定義されるように、本技術の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。実施例は、上述の本技術の変形例、態様または実施形態のうちのいずれかを含むか、または組み込むことができる。上述の変形例、態様または実施形態はまた、本技術の任意のまたは全ての他の変形例、態様または実施形態の変形例をさらに含むか、または組み込むことができる。
実施例１：抗ＣＴＬＡ－４抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質の機能的な抗腫瘍活性
腫瘍を標的として治療するためのＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質と抗ＣＴＬＡ－４抗体との組み合わせ（図３Ａ～図３Ｃ）のインビボでの能力を決定した。
マウスに腫瘍を接種し、ビヒクル、抗体、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質と抗ＣＴＬＡ－４抗体との組み合わせで処理した。組み合わせにおいて、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体の前に投与するか、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体の後に投与するか、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体とともに投与した。用量スケジュールについては、図３Ａを参照されたい。図３Ａに示すように、以下の用量スケジュールを比較した：
（１）ビヒクルのみ、
（２）αＣＴＬＡ抗体（７日目、９日目及び１１日目に投与）、
（３）αＣＴＬＡ抗体（１２、１４及び１６日目に投与）、
（４）ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ、７日目、９日目及び１１日目に投与）、
（５）ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ、１２日目、１４日目及び１６日目に投与）、
（６）αＣＴＬＡ抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、それぞれ７日目、９日目及び１１日目に投与、
（７）αＣＴＬＡ抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、７日目、９日目及び１１日目にαＣＴＬＡ抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与、ならびに
（８）αＣＴＬＡ抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＣＴＬＡ抗体を投与。
図３Ａは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む処理に起因する腫瘍サイズ（すなわち、体積）の変化を示す。図３Ｂは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む処理に起因する、腫瘍接種後の生存日数パーセントのカプラン・マイヤープロットを示す。図３Ｃは、図３Ａ及び図３Ｂのグラフに関連するデータを含む。
ビヒクルのみで処理したマウスにおいて示されるように、２１日目までに、急速に腫瘍が発達し、死に至った（図３Ａ～３Ｂ）。１２日目、１４日目及び１６日目にαＣＴＬＡ抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウスと比較して、腫瘍発達がわずかに遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。７日目、９日目及び１１日目にαＣＴＬＡ抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウス、ならびに１２日目、１４日目及び１６日目にαＣＴＬＡ抗体で処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。
１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。同様に、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウス、ならびに１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質で処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与したマウスは、投薬レジメンに適合したαＣＴＬＡ抗体処理マウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。
７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体をそれぞれ投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。さらに、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＣＴＬＡ抗体を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。また、７日目、９日目及び１１日目にαＣＴＬＡ抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（図３Ｂ）。これらの結果は、αＣＴＬＡ抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質との組み合わせが、αＣＴＬＡ抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質のうちのいずれかを用いる単剤療法と比較して、より良好な抗腫瘍活性を示すことを実証する。したがって、本技術のαＣＴＬＡ抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質を用いる併用療法は、本明細書に開示されるがんの治療方法に有用である。これらの結果はまた、αＣＴＬＡ抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質が同時に投与され得るか、または一方が他方よりも前に投与され得ることを実証する。
驚くべきことに、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＣＴＬＡ抗体を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体を同時に投与する併用療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（３７日目で約４０％生存、図３Ｂを参照されたい）。図３Ｃに示すように、これらのマウスは、１７％の原発性腫瘍拒絶及び１００％の二次腫瘍拒絶を示した。これは、１２日目、１４日目及び１６日目に（それ以外は未処理のマウスにおいて）投与したαＣＴＬＡ抗体が、ビヒクルのみで処理したマウスと比較して、腫瘍成長及び生存に非常にわずかな改善を示したが（図３Ａ～図３Ｂ）、αＣＴＬＡ抗体が、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けているマウスに、１２日目、１４日目及び１６日目に投与されたときに顕著な抗腫瘍活性を示したため、驚くべきことである。したがって、αＣＴＬＡ抗体は、本技術のＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療する方法に有用である。
驚くべきことに、７日目、９日目及び１１日目にαＣＴＬＡ抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＣＴＬＡ抗体を同時に投与する併用療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図３Ａ）、生存が延長した（３７日目で約３０％生存、図３Ｂを参照されたい）。図３Ｃに示すように、これらのマウスは、４３％の原発性腫瘍拒絶及び６７％の二次腫瘍拒絶を示した。したがって、本技術のＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質は、αＣＴＬＡ抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療する方法に有用である。
実施例２：抗ＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質の機能的な抗腫瘍活性
腫瘍を標的として治療するためのＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせ（図４Ａ～図４Ｄ）のインビボでの能力を決定した。
マウスに腫瘍を接種し、ビヒクル、抗体、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせで処理した。組み合わせにおいて、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体の前に投与するか、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体の後に投与するか、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を抗体とともに投与した。図４Ａに示すように、以下の用量スケジュールを比較した：
（１）ビヒクルのみ、
（２）αＰＤ－１抗体（７日目、９日目及び１１日目に投与）、
（３）αＰＤ－１抗体（１２日目、１４日目及び１６日目に投与）、
（４）ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ、７日目、９日目及び１１日目に投与）、
（５）ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ、１２日目、１４日目及び１６日目に投与）、
（６）αＰＤ－１抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、それぞれ７日目、９日目及び１１日目に投与、
（７）αＰＤ－１抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、７日目、９日目及び１１日目にαＰＤ－１抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与、ならびに
（８）αＰＤ－１抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体を投与。
図４Ａは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む処理に起因する腫瘍サイズ（すなわち、体積）の変化を示す。図４Ｂは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む処理に起因する、腫瘍接種後の生存日数パーセントのカプラン・マイヤープロットを示す。図４Ｃ及び図４Ｄは、図４Ａ及び図４Ｂのグラフに関連するデータを含む。
ビヒクルのみで処理したマウスにおいて示されるように、２１日目までに、急速に腫瘍が発達し、死に至った（図４Ａ～４Ｂ）。１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウスの腫瘍発達及び生存に匹敵する、腫瘍発達（図４Ａ）及び生存（図４Ｂ）を示した。７日目、９日目及び１１日目にαＰＤ－１抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウス、ならびに１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体で処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。
１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。同様に、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウス、ならびに１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質で処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与したマウスは、投薬レジメンに適合したαＰＤ－１抗体処理マウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。
興味深いことに、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体をそれぞれ投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。図４Ｃに示すように、これらのマウスは、２９％の原発性腫瘍拒絶及び１００％の二次腫瘍拒絶を示した。さらに、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。また、７日目、９日目及び１１日目にαＰＤ－１抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（図４Ｂ）。これらの結果は、αＰＤ－１抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質との組み合わせが、αＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質のうちのいずれかを用いる単剤療法と比較して、より良好な抗腫瘍活性を示すことを実証する。したがって、本技術のαＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質を用いる併用療法は、本明細書に開示されるがんの治療方法に有用である。これらの結果はまた、αＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質が同時に投与され得るか、または一方が他方よりも前に投与され得ることを実証する。
驚くべきことに、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体を投与する併用療法を受けたマウスは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（３７日目で約４０％生存、図４Ｂを参照されたい）。これは、１２日目、１４日目及び１６日目に（それ以外は未処理のマウスにおいて）投与したαＰＤ－１抗体が、ビヒクルのみで処理したマウスに匹敵する腫瘍成長及び生存を示したが（図４Ａ～図４Ｂ）、αＰＤ－１抗体が、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けているマウスに、１２日目、１４日目及び１６日目に投与されたときに顕著な抗腫瘍活性を示したため、驚くべきことである。さらに、図４Ｃに示すように、これらのマウスは、４３％の原発性腫瘍拒絶及び１００％の二次腫瘍拒絶を示した。したがって、αＰＤ－１抗体は、本技術のＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療する方法に有用である。
驚くべきことに、７日目、９日目及び１１日目にαＰＤ－１抗体を投与し、１２日目、１４日目及び１６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質を投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びαＰＤ－１抗体を同時に投与する併用療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図４Ａ）、生存が延長した（３７日目で約３０％生存、図４Ｂを参照されたい）。図４Ｃに示すように、これらのマウスは、７１％の原発性腫瘍拒絶及び８０％の二次腫瘍拒絶を示した。したがって、本技術のＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ異種キメラタンパク質は、αＰＤ－１抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている対象においてがんを治療する方法に有用である。
図４Ａは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＰＤ－１抗体を含む処理に起因する腫瘍サイズ（すなわち、体積）の変化を示す。図４Ｂは、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び／または抗ＰＤ－１抗体を含む治療に起因する、腫瘍接種後の生存日数パーセントのカプラン・マイヤープロットを示す。驚くべきことに、抗体及びキメラタンパク質の投与順序は、治療転帰に影響を及ぼした。より具体的には、キメラタンパク質と抗体との組み合わせは全て、キメラタンパク質単独または抗体単独の治療のうちのいずれかと比較して改善された治療的利点をもたらすが、併用治療のうち、ＰＤ－１抗体がＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質の前に投与される組み合わせの治療転帰が最大であった。
実験的証拠は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び抗ＣＴＬＡ－４抗体による処理、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質及び抗ＰＤ－１抗体による処理が、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質単独または抗体単独のいずれかによる処理と比較して、腫瘍体積及び生存において最も有意な改善をもたらすことを示す。
実施例３：抗ＰＤ１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質の機能的なインビボ抗腫瘍活性
図５Ａは、ＣＴ２６腫瘍を負荷し、説明文に示されるように処理したマウスにおける腫瘍成長動態を示す（１０日目において、曲線の順序は、上から下へ、ビヒクル、抗ＰＤ１、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ＋抗ＰＤ１である）。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質及び抗ＰＤ１抗体の組み合わせは、腫瘍成長が最も遅かった。
図５Ｂは、図５ＡのＣＴ２６腫瘍実験の生存及び統計のカプラン・マイヤープロットである。示されるように、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質と抗ＰＤ１抗体との組み合わせは、単剤療法の０％と比較して、２４日目の生存が３７．５％であったため、最も効果的であった。図５Ｃ及び図５Ｄは、図５Ａ及び図５Ｂのグラフに関連するデータを含む。
図５Ａに示すように、以下の用量スケジュールを比較した：
（１）ビヒクルのみ、
（２）抗ＰＤ－１（ＲＰＭ１－１４；１日目、３日目及び６日目に１００μｇ）、
（３）ｍＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質（３００μｇ、１日目、３日目、６日目）、及び
（４）抗ＰＤ－１抗体とｍＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質（ＡＲＣ）との組み合わせ、それぞれ１日目、３日目及び６日目に投与。
図５Ａは、ＣＴ２６腫瘍を負荷し、説明文に示されるように処理したマウスにおける腫瘍成長動態を示す（１０日目において、曲線の順序は、上から下へ、ビヒクル、抗ＰＤ１、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ＋抗ＰＤ１である）。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質及び抗ＰＤ１抗体の組み合わせは、腫瘍成長が最も遅かった。
ビヒクルのみで処理したマウスにおいて示されるように、１３日目までに、急速に腫瘍が発達し、死に至った（図５Ａ～５Ｂ）。１日目、３日目及び６日目にαＰＤ－１抗体を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図５Ａ）、生存が延長した（図５Ｂ）。１日目、３日目及び６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラタンパク質を投与したマウスは、ビヒクルのみで処理したマウス、ならびに１２日目、１４日目及び１６日目にαＰＤ－１抗体で処理したマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図５Ａ）、生存が延長した（図５Ｂ）。
興味深いことに、１日目、３日目及び６日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ及び抗ＰＤ－１抗体をそれぞれ投与する併用療法を受けたマウスは、７日目、９日目及び１１日目にＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ及び抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれかを投与する単剤療法を受けたマウスと比較して、腫瘍発達がより遅く（図５Ａ）、生存が延長した（図５Ｂ）。図５Ｄに示すように、併用治療による生存は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ（ｐ＝０．０３）及び抗ＰＤ－１（ｐ＝０．００２２）のうちのいずれかを用いる単剤療法よりも統計的に有意であった。これらの結果は、αＰＤ－１抗体とＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ異種キメラタンパク質との組み合わせが、αＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ異種キメラタンパク質のうちのいずれかを用いる単剤療法と比較して、より良好な抗腫瘍活性を示すことを実証する。したがって、本技術のαＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ異種キメラタンパク質を用いる併用療法は、本明細書に開示されるがんの治療方法に有用である。これらの結果はまた、αＰＤ－１抗体及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ異種キメラタンパク質が同時に投与され得るか、または一方が他方よりも前に投与され得ることを実証する。
実施例４：本技術の併用療法を受けた動物における腫瘍浸潤リンパ球の表現型決定
上記の結果は、キメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）を、それぞれ抗免疫チェックポイント抗体（例えば、抗ＰＤ－１及びαＣＴＬＡ抗体）と組み合わせると、単剤療法の各々と比較して優れた抗腫瘍活性及び生存の増加を示す。ＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の両方に対して阻害性の受容体である。理論に拘束されることなく、標的受容体とのＴＩＧＩＴの相互作用は、Ｔ／ＮＫ細胞傷害性機能を阻害すると考えられる。理論に拘束されることなく、ＴＩＧＩＴの上方制御は、抗ＰＤ－１療法に抵抗性の腫瘍で観察される１つの代償チェックポイント機構であると考えられる。理論に拘束されることなく、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ等のキメラタンパク質は、この阻害性相互作用を遮断することができ、ＡＲＣ共刺激ドメインからの共刺激後の抗腫瘍免疫応答を可能にする。理論に拘束されることなく、上記の結果は、キメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）と抗免疫チェックポイント抗体（例えば、抗ＰＤ－１及びαＣＴＬＡ抗体）との組み合わせが、２つのチェックポイント経路（例えば、ＰＤ－１及びＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ及びＴＩＧＩＴ）を同時に遮断する可能性を有するとともに、免疫共刺激（例えば、ＯＸ４０／Ｌ及びＬＴｂＲ／ＬＩＧＨＴを介する）も提供することを示唆する。
アゴニストリダイレクトチェックポイント（ＡＲＣ）キメラ融合タンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）による単剤療法及び本技術の併用療法（例えば、キメラ融合タンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）と抗免疫チェックポイント抗体（例えば、抗ＰＤ－１及びαＣＴＬＡ抗体）との組み合わせ）の優れた治療効果をさらに調査するために、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の免疫表現型決定を実行した。ＢＡＬＢ／ＣマウスにＣＴ２６（大腸癌）腫瘍を接種し、開始腫瘍体積が３０～６０ｍｍ３に達したとき（０日目を示す）、処理を開始した。０日目、３日目及び６日目に、３００ｍｇのＡＲＣ（ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬもしくはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）、または各ＡＲＣと１００ｍｇの抗ＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４）との組み合わせのいずれかで腹腔内（ＩＰ）注射によってマウスを処理した。７日目に、マウスを安楽死させ、腫瘍組織を採取して解離させ、フローサイトメトリーによって分析し、細胞型パーセントとして計算した。腫瘍において検出されたＣＤ８＋Ｔ細胞の総％は、処理群間で類似している（図６Ａ）。図６Ｂに示すように、全ＣＤ８＋細胞中の総パーフォリン＋ＣＤ８＋細胞は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスにおいて増加した。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、全ＣＤ８＋細胞集団中のパーフォリン＋ＣＤ８＋細胞がさらに増加した（図６Ｂ）。同様に、図６Ｃに示すように、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスの全ＣＤ８＋細胞中で総ＩＦＮγ＋ＣＤ８＋細胞が増加し、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、全ＣＤ８＋細胞集団中のＩＦＮγ＋ＣＤ８＋細胞がさらに増加した（図６Ｃ）。
ＣＴ２６癌細胞に対する免疫優性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、ＡＨ１としても知られる腫瘍／自己抗原ＧＰ７０４２３－４３１に対して向けられている。ＣＴ２６に対するＴ細胞応答を評価するために、総ＡＨ１－四量体＋ＣＤ８＋細胞を定量した。図６Ｄに示すように、総ＡＨ１－四量体＋ＣＤ８＋細胞は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスの全ＣＤ８＋細胞中で増加した。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、全ＣＤ８＋細胞集団中の総ＡＨ１－四量体＋ＣＤ８＋細胞がさらに増加した（図６Ｄ）。まとめると、これらのデータは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の総％がいずれの処理にも影響を受けなかったが、（パーフォリン、ＩＦＮγ、及び腫瘍抗原特異性の発現によって決定されるように）活性化される細胞の割合が、マウスをＴＩＧＩＴ ＡＲＣで処理した際にははるかに高く、ＡＲＣを抗ＰＤ－１と組み合わせた際にはほとんどの場合でさらに増加したことを示す。
これらの結果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化の増加が、キメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）と、本技術の抗免疫チェックポイント抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体及びαＣＴＬＡ抗体）との併用治療の観察された有効性と相関することを実証する。したがって、活性化Ｔ細胞の測定（例えば、総パーフォリン＋ＣＤ８＋細胞、ＩＦＮγ＋ＣＤ８＋細胞、または腫瘍特異的Ｔ細胞を測定することによって）は、本明細書に開示されるがんの療法による治療のための対象を選択する方法に有用である。
ＣＤ４＋Ｔ細胞の総％、ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞（腫瘍中の総ＩＦＮγ＋ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞を含む）を含む他の関連する細胞型も定量した。図６Ｅに示すように、全単核細胞中の総ＣＤ４＋細胞は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスにおいて増加した。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、全単核細胞集団中のＣＤ４＋細胞がさらに増加した（図６Ｅ）。同様に、図６Ｆに示すように、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスの全単核細胞中で総ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞が増加し、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、全単核細胞集団中のＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞がさらに増加した（図６Ｆ）。ＩＦＮγ＋細胞をＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞中で定量した。図６Ｇに示すように、全ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞中の総ＩＦＮγ＋細胞は、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質のいずれかで処理したマウスにおいて増加した。ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０ＬまたはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴキメラ融合タンパク質と抗ＰＤ－１抗体との併用処理により、ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞集団中のＩＦＮγ＋細胞がさらに増加した（図６Ｇ）。
これらの結果は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞、ならびに活性化ＩＦＮγ＋ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞の数の増加が、キメラタンパク質（例えば、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ及びＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＬＩＧＨＴ）と、本技術の抗免疫チェックポイント抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体及びαＣＴＬＡ抗体）との併用治療の観察された有効性と相関することを実証する。したがって、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞、ならびに活性化ＩＦＮγ＋ＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞の測定は、本明細書に開示されるがんの療法による治療のための対象を選択する方法に有用である。
実施例５：ＳＴＩＮＧアゴニストとＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質との特定の組み合わせの機能的なインビボでの抗腫瘍活性
腫瘍体積を標的にして減少させるためのインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストとＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質との特定の組み合わせのインビボでの能力を決定する。
上記実施例１のように、マウスに腫瘍を接種し、ビヒクル、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質とＳＴＩＮＧアゴニストとの組み合わせで処理する。組み合わせにおいて、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質をＳＴＩＮＧアゴニストの前に投与するか、ＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質をＳＴＩＮＧアゴニストの後に投与するか、またはＴＩＧＩＴ－Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌキメラタンパク質をＳＴＩＮＧアゴニストとともに投与する。用量スケジュールは、図３Ａ、図３Ｃ、図４Ａ、及び図４Ｃに示すものと同様である。
例示的なＳＴＩＮＧアゴニストとしては、これらに限定されないが、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、ＩＭＳＡ１０１、及びＵＳ２０１４／０３４１９７６、ＵＳ２０１８／００２８５５３、ＵＳ２０１８／０２３０１７８、ＵＳ９５４９９４４、ＷＯ２０１５／１８５５６５、ＷＯ２０１６／１２０３０５、ＷＯ２０１７／０４４６２２、ＷＯ２０１７／０２７６４５、ＷＯ２０１７／０２７６４６、ＷＯ２０１７／０９３９３３、ＷＯ２０１７／１０６７４０、ＷＯ２０１７／１２３６５７、ＷＯ２０１７／１２３６６９、ＷＯ２０１７／１６１３４９、ＷＯ２０１７／１７５１４７、ＷＯ２０１７／１７５１５６、ＷＯ２０１７／１７６８１２、ＷＯ２０１８／００９４６６、ＷＯ２０１８／０４５２０４、ＷＯ２０１８／０６０３２３、ＷＯ２０１８／０９８２０３、ＷＯ２０１８／１００５５８、ＷＯ２０１８／１３８６８４、ＷＯ２０１８／１３８６８５、ＷＯ２０１８／１５２４５０、ＷＯ２０１８／１５２４５３、ＷＯ２０１８／１７２２０６、ＷＯ２０１８／１９８０８４、ＷＯ２０１８／２３４８０５、ＷＯ２０１８／２３４８０７、ＷＯ２０１８／２３４８０８、ＷＯ２０１９／０２３４５９、ＷＯ２０１９／０４６４９６、ＷＯ２０１９／０４６４９８、ＷＯ２０１９／０４６５００、ＷＯ２０１９／０７４８８７、ＷＯ２０１９／０７９２６１、ＷＯ２０１９／１１８８３９、ＷＯ２０１９／１２５９７４、またはＷＯ２０１９／１６０８８４に記載される任意のＳＴＩＮＧアゴニストが挙げられ、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
腫瘍サイズを、少なくとも接種後３５日目まで１日おきにアッセイする。腫瘍を拒絶するマウスは、反対側の側腹部で二次腫瘍を再負荷し、原発性／二次腫瘍を継続して測定する。
処理の治療活性をアッセイする。例として、腫瘍サイズ（例えば、体積）の変化及び／または処理したマウスの生存の変化を決定する。
上述の実施例のいずれにおいても、処理の治療活性をさらにアッセイしてもよい。特に、腫瘍拒絶を示す薬力学的バイオマーカーの変化は、血清中のサイトカイン上昇（インビトロ）、もしくはスーパー抗原Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ｂと培養した免疫関連細胞のインビトロでの薬力学的バイオマーカーの変化（ＳＥＢアッセイ）によって決定するか、またはＡＩＭ Ｖ培地で培養した場合に決定する。例示的な薬力学的バイオマーカーには、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、及びＩＬ－１７Ａが含まれる。
参照による組み込み
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示に対してのみ提供される。本明細書におけるいずれの内容も、本発明が先行発明によりそのような刊行物に先行する資格がないことを認めるものと解釈されるべきではない。
本書で使用されるように、全ての表題は単純に組織化するのためのものであり、いかなる様式においても開示を制限することを意図したものではない。あらゆる個々の段落の内容は、全ての段落に等しく適用可能であり得る。
均等物
本発明は、その特定の実施形態に関連して開示したが、さらなる修正が可能であり、本出願は、一般に、本発明の原理に従って、本発明の任意の変型、使用、または適応を網羅するものであり、本発明が属する技術分野において知られているか、または慣行に含まれるような、及び前述される本質的な特徴に適用され得るもの、ならびに添付の請求項の範囲に含まれるような本開示からの逸脱を含むことを理解されたい。
当業者は、単なる日常的な実験を用いて、本明細書に具体的に開示される特定の実施形態に対する多数の均等物を認識し、または確認することができるであろう。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲内に包含されることが企図される。

Claims (138)

  1. がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、
    細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を前記対象に提供することと、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を前記対象に提供することと、を含む、前記方法。
  2. 前記第１の薬学的組成物及び前記第２の薬学的組成物が、同時に提供される、請求項１に記載の方法。
  3. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供された後に提供される、請求項１に記載の方法。
  4. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供される前に提供される、請求項１に記載の方法。
  5. 前記第１の薬学的組成物の用量が、前記第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第１の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  6. 提供される前記第２の薬学的組成物の用量が、前記第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第２の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項１、２、または４のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記対象が、前記第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記対象が、前記第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  10. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項９に記載の方法。
  11. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項９または請求項１０に記載の方法。
  12. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）と結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  13. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、前記異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記第１のドメインが、実質的に全ての前記ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または前記第２のドメインが、実質的に全ての前記ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記リンカーが、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記リンカーが、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
  20. 前記がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記がんが、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記ＣＴＬＡ－４と結合することが可能である抗体が、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）、９Ｄ９、トレメリムマブ（旧チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６；ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＡＧＥＮ１８８４、及びＲＧ２０７７からなる群から選択される、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、
    ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を前記対象に提供することと、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を前記対象に提供することと、を含む、前記方法。
  25. 前記第１の薬学的組成物及び前記第２の薬学的組成物が、同時に提供される、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供された後に提供される、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供される前に提供される、請求項２４に記載の方法。
  28. 前記第１の薬学的組成物の用量が、前記第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第１の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項２４～２６のいずれか１項に記載の方法。
  29. 提供される前記第２の薬学的組成物の用量が、前記第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第２の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項２４、２５、または２７のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記対象が、前記第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項２４～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記対象が、前記第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項２４～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  33. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項３２または請求項１０に記載の方法。
  35. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  36. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、前記異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項２４～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記第１のドメインが、実質的に全ての前記ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または前記第２のドメインが、実質的に全ての前記ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む、請求項２４～３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである、請求項２４～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項２４～３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記リンカーが、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記リンカーが、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
  43. 前記がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する、請求項２４～４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項２４～４３のいずれか１項に記載の方法。
  45. 前記がんが、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である、請求項２４～４４のいずれか１項に記載の方法。
  46. ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体が、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ ０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、ＲＭＰ１－１４、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）からなる群から選択される、請求項２４～４５のいずれか１項に記載の方法。
  47. がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、
    インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、第１の薬学的組成物を前記対象に提供することと、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を前記対象に提供することと、を含む、前記方法。
  48. 前記第１の薬学的組成物及び前記第２の薬学的組成物が、同時に提供される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供された後に提供される、請求項４７に記載の方法。
  50. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供される前に提供される、請求項４７に記載の方法。
  51. 前記第１の薬学的組成物の用量が、前記第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第１の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項４７～４９のいずれか１項に記載の方法。
  52. 提供される前記第２の薬学的組成物の用量が、前記第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第２の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項４７、４８、または５０のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記対象が、前記第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項４７～５２のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記対象が、前記第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項４７～５３のいずれか１項に記載の方法。
  55. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストによる治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  56. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項５５または請求項５６に記載の方法。
  58. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストを含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  59. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、前記異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項４７～５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記第１のドメインが、実質的に全ての前記ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または前記第２のドメインが、実質的に全ての前記ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインを含む、請求項４７～６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである、請求項４７～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項４７～６２のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記リンカーが、ＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記リンカーが、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６３または請求項６４に記載の方法。
  66. 前記がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する、請求項４７～６５のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項４７～６６のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記がんが、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である、請求項４７～６７のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記ＳＴＩＮＧアゴニストが、５，６－ジメチルキサンテノン－４－酢酸（ＤＭＸＡＡ）、ＭＩＷ８１５（ＡＤＵ－Ｓ１００）、ＣＲＤ５５００、ＭＫ－１４５４、ＳＢ１１２８５、及びＩＭＳＡ１０１からなる群から選択される、請求項４７～６８のいずれか１項に記載の方法。
  70. がんの治療を必要とする対象においてがんを治療するための方法であって、
    ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、第１の薬学的組成物を前記対象に提供することと、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、第２の薬学的組成物を前記対象に提供することと、を含む、前記方法。
  71. 前記第１の薬学的組成物及び前記第２の薬学的組成物が、同時に提供される、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供された後に提供される、請求項７０に記載の方法。
  73. 前記第１の薬学的組成物が、前記第２の薬学的組成物が提供される前に提供される、請求項７０に記載の方法。
  74. 前記第１の薬学的組成物の用量が、前記第２の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第１の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項７０～７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 提供される前記第２の薬学的組成物の用量が、前記第１の薬学的組成物による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記第２の薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項７０、７１、または７３のいずれか１項に記載の方法。
  76. 前記対象が、前記第１の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項７０～７５のいずれか１項に記載の方法。
  77. 前記対象が、前記第２の薬学的組成物による治療のみを受けたことがあるか、またはそれのみを受けている対象と比較した場合、胃腸の炎症及び体重低下を伴わない増加した生存の見込み、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項７０～７６のいずれか１項に記載の方法。
  78. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  79. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、もしくはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療を受けたことがないか、または受けていない対象と比較した場合、増加した生存の見込み、体重増加、及び／または腫瘍サイズもしくはがん有病率の減少を有する、請求項７８に記載の方法。
  81. 対象においてがんを治療するための方法であって、
    ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む、薬学的組成物を前記対象に提供することを含み、
    前記対象が、
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質による治療を受けたことがあるか、または受けている、前記方法。
  82. 前記対象に提供される前記薬学的組成物の用量が、前記異種キメラタンパク質による治療を受けたことがないか、または受けていない対象に提供される前記薬学的組成物の用量よりも少ない、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項７０～８２のいずれか１項に記載の方法。
  84. 前記第１のドメインが、実質的に全ての前記ＴＩＧＩＴの細胞外ドメインを含み、及び／または前記第２のドメインが、実質的に全ての前記ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインを含む、請求項７０～８３のいずれか１項に記載の方法。
  85. 前記リンカーが、柔軟なアミノ酸配列、ＩｇＧヒンジ領域、及び抗体配列から選択されるポリペプチドである、請求項７０～８４のいずれか１項に記載の方法。
  86. 前記リンカーが、ジスルフィド結合を形成することが可能である少なくとも１つのシステイン残基を含み、及び／またはヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項７０～８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. 前記リンカーが、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４に由来するヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ Ｆｃドメインを含む、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記リンカーが、配列番号１、配列番号２、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８６または請求項８７に記載の方法。
  89. 前記がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、及び尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する、請求項７０～８８のいずれか１項に記載の方法。
  90. 前記対象が、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体を含む治療に対して、不十分な応答性であるか、または抵抗性であるがんを有する、請求項７０～８９のいずれか１項に記載の方法。
  91. 前記がんが、ＰＤ－１と結合するか、またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である抗体による治療に対して、かかる治療の約１２週間後に不十分な応答性であるか、または非応答性である、請求項７０～９０のいずれか１項に記載の方法。
  92. ＰＤ－１またはＰＤ－１リガンドと結合することが可能である前記抗体が、ニボルマブ（ＯＮＯ ４５３８、ＢＭＳ ９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、ＯＰＤＩＶＯ（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ／ＭＫ ３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ ０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、ＲＭＰ１－１４、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ）、及びセミプリマブ（ＲＥＧＮ－２８１０）からなる群から選択される、請求項７０～９１のいずれか１項に記載の方法。
  93. がん治療の有効性の評価を必要とする対象においてがん治療の有効性を評価するための方法であって、前記対象が、がんに罹患しており、前記方法が、
    （ｉ）
    （Ａ）
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部、または一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む、異種キメラタンパク質、ならびに
    （Ｂ）任意選択で、抗免疫チェックポイント抗体、を含む、異種キメラタンパク質を含む、薬学的組成物を前記対象に提供するステップと、
    （ｉｉ）前記対象から生体試料を得るステップと、
    （ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、前記生体試料上でアッセイを実行するステップと、
    （ｉｖ）前記対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、前記異種キメラタンパク質を連続投与するステップと、を含む、前記方法。
  94. がんの療法による治療のための対象を選択する方法であって、
    （ｉ）
    （Ａ）
    （ａ）一部が、ＴＩＧＩＴリガンドと結合することが可能である、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の細胞外ドメインの前記一部を含む、第１のドメインと、
    （ｂ）一部が、ＯＸ４０Ｌ受容体と結合することが可能である、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの前記一部、または一部が、ＬＩＧＨＴ受容体と結合することが可能である、ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインの前記一部を含む、第２のドメインと、
    （ｃ）前記第１のドメイン及び前記第２のドメインを連結するリンカーと、を含む異種キメラタンパク質、ならびに
    （Ｂ）任意選択で、抗免疫チェックポイント抗体、を含む、薬学的組成物を前記対象に提供するステップと、
    （ｉｉ）前記対象から生体試料を得るステップと、
    （ｉｉｉ）単核細胞のレベル及び／または活性を決定するために、前記生体試料上でアッセイを実行するステップと、
    （ｉｖ）前記対象が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性の増加を有する場合、前記がんの療法による治療のための前記対象を選択するステップと、を含む、前記方法。
  95. 前記がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管癌及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、もしくは尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する、請求項９３または請求項９４に記載の方法。
  96. 前記生体試料が、血液、血漿、血清、涙液、涙、骨髄、血液、血液細胞、腹水、組織もしくは細針生検試料、細胞含有体液、遊離浮遊核酸、痰、唾液、尿、脳脊髄液、腹腔液、胸膜液、糞便、リンパ、婦人科液、皮膚スワブ、膣スワブ、経口スワブ、鼻スワブ、洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）もしくは洗浄（ｌａｖａｇｅ）（例えば、導管洗浄もしくは気管支肺胞洗浄）、吸引液、スクレイピング、骨髄検体、組織生検検体、外科検体、糞便、他の体液、分泌物、及び／または排泄物、及び／またはそれらからの細胞から選択される体液である、請求項９３～９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 前記生体試料が、新鮮な組織試料、凍結腫瘍組織検体、培養細胞、循環腫瘍細胞、またはホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織検体である、請求項９３～９６のいずれか１項に記載の方法。
  98. 前記生体試料が、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、副腎癌、肛門癌、乳癌、子宮頸癌、胆管癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、膵臓癌、腎細胞癌、卵巣（卵管及び腹膜癌を含む）癌、小細胞肺癌、皮膚の扁平上皮癌、肉腫、甲状腺癌、もしくは尿路上皮癌から選択されるがんであるか、またはそれに関連する腫瘍に由来する腫瘍試料である、請求項９３～９７のいずれか１項に記載の方法。
  99. 前記生体試料が、スクレイプ、スワブ、及び生検から選択される技術によって得られる、請求項９３～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記生体試料が、ブラシ、（綿）スワブ、スパチュラ、すすぎ／洗浄液、パンチ生検装置、針による空洞の穿刺、または外科用器具の使用によって得られる、請求項９３～９９のいずれか１項に記載の方法。
  101. 前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性が、ＲＮＡ配列決定、免疫組織化学染色、ウエスタンブロッティング、インセルウエスタン（ｉｎ ｃｅｌｌ ｗｅｓｔｅｒｎ）、免疫蛍光染色、ＥＬＩＳＡ、及びフローサイトメトリー、またはそれらの組み合わせによって測定される、請求項９３～１００のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記試料を、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤と接触させることによって、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のレベル及び／または活性を測定する、請求項９３～１０１のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する前記薬剤が、抗体またはその断片である、請求項１０１に記載の方法。
  104. 前記ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／またはＮＫＰ４６＋ＮＫ細胞のうちの１つ以上に特異的に結合する前記薬剤が、抗体またはその断片である、請求項１０１に記載の方法。
  105. 前記抗体が、組換え抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、またはその断片である、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記抗体が、Ｔ細胞受容体、天然細胞傷害性受容体、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３８、ＣＤ５７、ＣＤ１２７、ＮＫＰ４６、ＨＬＡ－ＤＲ、パーフォリン、グランザイム、及びグラニュライシンから選択されるマーカーに特異的である、請求項１０４または請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記抗体が、腫瘍抗原に特異的である、請求項１０４または請求項１０５に記載の方法。
  108. サイトカインのレベル及び／または活性が、前記試料を、前記核酸のうちの１つ以上に特異的に結合する薬剤と接触させることによって測定される、請求項９３～１０７のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記核酸のうちの１つ以上に特異的に結合する前記薬剤が、核酸プライマーまたはプローブである、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記核酸のうちの１つ以上に特異的に結合する前記薬剤が、サイトカインをコードするｍＲＮＡと相同または相補的である、請求項１０８または請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２２、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及びＣＸＣＬ１２から選択される、請求項１１０に記載の方法。
  112. 前記評価が、予後、または治療に対する応答を含む、請求項９３または９５～１１１のいずれか１項に記載の方法。
  113. 前記評価が、前記対象を高リスク群または低リスク群に分類することを通知する、請求項９３または９５～１１２のいずれか１項に記載の方法。
  114. 高リスク分類が、高レベルのがん侵襲性を含み、前記侵襲性が、高い腫瘍グレード、低い全生存、高い転移確率、及び侵襲性を示す腫瘍マーカーの存在のうちの１つ以上によって特徴付け可能である、請求項１１３に記載の方法。
  115. 低リスク分類が、低レベルのがん侵襲性を含み、前記侵襲性が、低い腫瘍グレード、高い全生存、低い転移確率、及び侵襲性を示す腫瘍マーカーの非存在及び／または低減のうちの１つ以上によって特徴付け可能である、請求項１１３または請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記低リスクまたは高リスク分類が、ネオアジュバント療法の保留を示す、請求項１１３～１１５のいずれか１項に記載の方法。
  117. 前記低リスクまたは高リスク分類が、アジュバント療法の保留を示す、請求項１１３～１１６のいずれか１項に記載の方法。
  118. 前記低リスクまたは高リスク分類が、前記異種キメラタンパク質の前記投与の継続を示す、請求項１１３～１１７のいずれか１項に記載の方法。
  119. 前記低リスクまたは高リスク分類が、前記異種キメラタンパク質の前記投与の保留を示す、請求項１１３～１１８のいずれか１項に記載の方法。
  120. 前記評価が、前記異種キメラタンパク質の前記投与に対する陽性応答及び／または前記投与からの利益の予測である、請求項９３または９５～１１９のいずれか１項に記載の方法。
  121. 前記評価が、前記異種キメラタンパク質の前記投与に対する陰性もしくは中性応答、及び／または前記投与からの利益の予測である、請求項９３または９５～１２０のいずれか１項に記載の方法。
  122. 前記評価が、前記異種キメラタンパク質の前記投与を継続するか、または前記投与を保留することを通知する、請求項９３または９５～１２１のいずれか１項に記載の方法。
  123. 前記評価が、前記異種キメラタンパク質の前記投与の継続を通知する、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記評価が、ネオアジュバント療法の投与を通知する、請求項９３または９５～１２３のいずれか１項に記載の方法。
  125. 前記評価が、ネオアジュバント療法の保留を通知する、請求項９３または９５～１２４のいずれか１項に記載の方法。
  126. 前記評価が、アジュバント療法の投与を通知する、請求項９３または９５～１２５のいずれか１項に記載の方法。
  127. 前記評価が、ネオアジュバント療法の変更を通知する、請求項９３または９５～１２６のいずれか１項に記載の方法。
  128. 前記評価が、アジュバント療法の変更を通知する、請求項９３または９５～１２７のいずれか１項に記載の方法。
  129. 前記評価が、アジュバント療法の保留を通知する、請求項９３または９５～１２８のいずれか１項に記載の方法。
  130. 前記評価が、ネオアジュバント化学療法に対する陽性応答及び／またはその利益、あるいはネオアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如の予測である、請求項９３または９５～１２９のいずれか１項に記載の方法。
  131. 前記評価が、ネオアジュバント化学療法に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益、あるいはネオアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如の予測である、請求項９３または９５～１３０のいずれか１項に記載の方法。
  132. 前記評価が、アジュバント化学療法に対する陽性応答及び／またはその利益、あるいはアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如の予測である、請求項９３または９５～１３１のいずれか１項に記載の方法。
  133. 前記評価が、アジュバント化学療法に対する陰性もしくは中性応答及び／またはその利益、あるいはアジュバント化学療法に対する非応答性及び／またはその利益の欠如の予測である、請求項９３または９５～１３２のいずれか１項に記載の方法。
  134. 前記ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法が、化学療法剤である、請求項１１６～１３３のいずれか１項に記載の方法。
  135. 前記化学療法剤が、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンから選択されるアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボクオン、メツレドパ及びウレドパから選択されるアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチイレンチオホスホラミド及びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（例えば、ブルラタシン及びブルラタシノン）；カンプテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ １－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードから選択されるナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチンから選択されるニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマール（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｇａｍｍａｌｌ）及びカリケアマイシンオメガール（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｏｍｅｇａｌｌ）（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照のこと））から選択される抗生物質；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；クロドロネートから選択されるビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連するクロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣから選択されるマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）から選択される代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートから選択される葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンから選択されるプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンから選択されるピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストトラクトンから選択されるアンドロゲン；ミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンから選択される抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）；フロリン酸から選択される葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミド配糖体；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサミトシンから選択されるメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬパクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ－フリー、アルブミン工学によるパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、１１１．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンから選択されるプラチナ類似体；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵ及びロイコボリンと併用するイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸から選択されるレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）；細胞増殖を低下させるＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ））及びＶＥＧＦ－Ａの阻害剤、それらの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、ならびにそれらの任意の２つ以上の組み合わせから選択される、請求項１３４に記載の方法。
  136. 前記ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法が、細胞傷害性薬剤である、請求項１１６～１３５のいずれか１項に記載の方法。
  137. 前記細胞傷害性薬剤が、メトトレキサート、アミノプテリン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン；メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１－メチルニトロソウレア、シクロトスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン及びカルボプラチン（パラプラチン）から選択されるアルキル化剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン及びビスアントレンを含むアントラサイクリン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；及びビンカアルカロイド、ビンクリスチン及びビンブラスチン、パクリタキセル（タキソール）、リシン、シュードモナス外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、それらの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、ならびにそれらのうちの任意の２つ以上の組み合わせから選択される、請求項１３６に記載の方法。
  138. 前記ネオアジュバント療法及び／またはアジュバント療法が、チェックポイント阻害剤である、請求項１１６～１３７のいずれか１項に記載の方法。いくつかの実施形態では、前記チェックポイント阻害剤が、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ４、ＧＩＴＲ、ガレクチン－９、ＨＶＥＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＳＩＲＰα、ＩＣＯＳ、ＣＤ１７２ａ、及びＴＭＩＧＤ２のうちの１つを標的とする薬剤である。
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