JP2022518765A - 心房細動の遺伝子療法による治療 - Google Patents
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Abstract
本明細書では、遺伝子治療技術を使用して心房細動（ＡＦ）を治療及び予防するための組成物、方法、及び装置を提供する。詳細には、酸化ストレス（ＯＳ）及び副交感神経系のシグナル伝達が阻害されることで、ＡＦの基盤となる電気的リモデングが防止及び／または逆転される。
Description
〔技術分野〕
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１月２４日出願の米国仮特許出願第６２／７９６，４２１号に基づく優先権を主張するものであり、参照によりその全容を本明細書に援用するものである。
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１月２４日出願の米国仮特許出願第６２／７９６，４２１号に基づく優先権を主張するものであり、参照によりその全容を本明細書に援用するものである。
本明細書では、遺伝子治療技術を使用して心房細動（ＡＦ）を治療及び予防するための組成物、方法、及び装置を提供する。詳細には、酸化ストレス（ＯＳ）及び副交感神経系のシグナル伝達が阻害されることで、ＡＦの基盤となる電気的リモデングが防止及び／または逆転される。
〔背景技術〕
心房細動（ＡＦ）は、最も一般的な心調律障害である。ＡＦは６百万人超のアメリカ人が罹患し、脳卒中の主な原因となっている。ＡＦは主として加齢性疾患であるため、高齢化社会において急速に広まりつつある。残念ながら、ＡＦの現在の治療法は、薬理学的及びアブレーションによる方法のいずれも、持続性ＡＦの患者には最適とはいえない。アブレーションは、今日のＡＦ治療の「ゴールドスタンダード」とみなされており、発作性ＡＦの患者においてはある程度奏功している（７０～７５％の奏功率）（参照文献１；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）が、持続性ＡＦでは、その奏功率は最適とはいえない（５０％未満）（参照文献２～４；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。
心房細動（ＡＦ）は、最も一般的な心調律障害である。ＡＦは６百万人超のアメリカ人が罹患し、脳卒中の主な原因となっている。ＡＦは主として加齢性疾患であるため、高齢化社会において急速に広まりつつある。残念ながら、ＡＦの現在の治療法は、薬理学的及びアブレーションによる方法のいずれも、持続性ＡＦの患者には最適とはいえない。アブレーションは、今日のＡＦ治療の「ゴールドスタンダード」とみなされており、発作性ＡＦの患者においてはある程度奏功している（７０～７５％の奏功率）（参照文献１；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）が、持続性ＡＦでは、その奏功率は最適とはいえない（５０％未満）（参照文献２～４；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。
ＮＡＤＰＨオキシダーゼ２（Ｎｏｘ２）は、シトクロムｂ（５５８）サブユニットβまたはシトクロムｂ－２４５重鎖としても知られ、ヒトではＮＯＸ２遺伝子（ＣＹＢＢとも呼ばれる）によってコードされるタンパク質である［５］。このタンパク質は、活性酸素種（ＲＯＳ）を生成するスーパーオキシド生成酵素である。
Ｇｉタンパク質αサブユニットは、ヘテロ三量体Ｇタンパク質αサブユニットのファミリーである。このファミリーはまた一般的に、密接に関連するファミリーのメンバーも含めて、Ｇｉ／ｏ（Ｇｉ／Ｇｏ）ファミリーまたはＧｉ／ｏ／ｚ／ｔファミリーとも呼ばれる。Ｇαサブユニットは、Ｇｉアルファ、Ｇαｉ、またはＧｉαとも呼ばれる場合がある。
〔発明の概要〕
本明細書では、遺伝子治療技術を使用して心房細動（ＡＦ）を治療及び予防するための組成物、方法、及び装置を提供する。詳細には、酸化ストレス（ＯＳ）及び副交感神経系のシグナル伝達が阻害されることで、ＡＦの基盤となる電気的リモデングが防止及び／または逆転される。
本明細書では、遺伝子治療技術を使用して心房細動（ＡＦ）を治療及び予防するための組成物、方法、及び装置を提供する。詳細には、酸化ストレス（ＯＳ）及び副交感神経系のシグナル伝達が阻害されることで、ＡＦの基盤となる電気的リモデングが防止及び／または逆転される。
いくつかの実施形態において、本明細書では、心房細動（ＡＦ）を治療する方法であって、遺伝子治療アプローチにより酸化ストレス（ＯＳ）と副交感神経系のシグナル伝達を阻害／低減することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、遺伝子治療アプローチは、ＡＦに罹患している、またはＡＦのリスクを有する対象への導入遺伝子の投与を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子治療アプローチは、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ、及び／またはＧαｉ２及びＧαｏ１阻害ペプチドの一方または両方の投与を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子治療アプローチは、エレクトロポレーションを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書では、対象の心臓の電気的リモデリング及び／または心房細動を防止または逆転させる方法であって、有効量の（ａ）ＮＡＤＰＨオキシダーゼ２（ＮＯＸ２）阻害剤、及び／または（ｂ）（ｉ）Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／または（ｉｉ）Ｇαｏ阻害ペプチドを対象に投与することであって、前記投与することが、心臓の電気的リモデリング及び／または心房細動のレベルが、防止、低減、または消失されるような条件で行われる、投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤は、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤は、ＮＯＸ２のｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、配列番号３４と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、配列番号２と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有するベクター上で与えられる。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、Ｇαｉ２阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、Ｃ末端Ｇαｉ阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドは、Ｇαｏ１阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドは、Ｃ末端Ｇαｏ阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチド及び／またはＧαｏ阻害ペプチドは、ミニジーンとして投与され、ミニジーンから発現される。いくつかの実施形態において、ミニジーンはプラスミド上に存在する。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、配列番号３と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドは、配列番号４と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドとＧαｏ阻害ペプチドは同時投与される。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドとＧαｏ阻害ペプチドは、１：１０～１０：１の比で同時投与される（例えば、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０またはそれらの間の範囲）。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤は、Ｇαｉ阻害ペプチド及び／またはＧαｏ阻害ペプチドと同時投与される。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及びＧαｏ阻害ペプチドは同時投与される。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドは心筋組織に投与される。いくつかの実施形態において、方法は、投与の前、投与の間、または投与後に組織をエレクトロポレーションすることをさらに含む。いくつかの実施形態において、心筋組織は、心房組織または心室組織の少なくとも一方を含む。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドは心内膜または心外膜に投与される。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドは、対象の冠状血管構造のセグメントに投与され、対象の標的冠状組織は、エレクトロポレーションされる。いくつかの実施形態において、有効量のＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドを対象に投与することは、ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコード及び発現する単離された治療用ＤＮＡを投与することを含む。いくつかの実施形態において、有効量のＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドを対象に投与することは、単離された治療用ＤＮＡを注入することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、心房性または心室性不整脈、心室不全、または心不全のうちの１つ以上に罹患している。いくつかの実施形態において、不整脈は、心房細動を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書では、（ａ）ＮＡＤＰＨオキシダーゼ２（ＮＯＸ２）阻害剤、（ｂ）（ｉ）Ｇαｉ阻害ペプチドまたはＧαｉ阻害ペプチドをコードする核酸、及び／または（ｉｉ）Ｇαｏ阻害ペプチドまたはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤は、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤は、ＮＯＸ２のｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡである。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、配列番号３４と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、配列番号２と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有するベクター上で提供される。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、Ｇαｉ２阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、Ｃ末端Ｇαｉ阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドは、Ｇαｏ１阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドは、Ｃ末端Ｇαｏ阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドをコードする核酸は、ミニジーンを含む。いくつかの実施形態において、Ｇαｏ阻害ペプチドをコードする核酸は、プラスミドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドをコードする核酸は、ミニジーンを含む。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドをコードする核酸は、プラスミドである。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチドは、配列番号３と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ＧαＯ阻害ペプチドは、配列番号４と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、Ｇαｉ阻害ペプチド及びＧαｏ阻害ペプチドの両方を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、Ｇαｉ阻害ペプチドをコードする核酸と、Ｇαｏ阻害ペプチドをコードする核酸の両方を含む。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ阻害ペプチド及び／またはＧαｉ阻害ペプチドをコードする核酸と、Ｇαｏ阻害ペプチド及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸は、１：１０～１０：１の比（例えば、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０またはそれらの間の範囲）で存在する。
〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕ＲＡＰは、神経肥厚及び副交感神経線維の発芽の増加をもたらす。
〔図１〕ＲＡＰは、神経肥厚及び副交感神経線維の発芽の増加をもたらす。
〔図２〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡの慢性的な発現は、ＲＡＰにおけるＡＦを防止する。
〔図３〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰにおける神経肥厚及び副交感神経の発芽を防止する。
〔図４〕Ｇαｉ／ｏミニジーンは、ＲＡＰにおけるＡＦの発症までの時間を遅らせる。
〔図５Ａ〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、持続的なＡＦの発生を防止する。短期間の試験では、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与した動物が発症したＡＦは有意に短く、持続性ＡＦの発症の遅れは３０分超であった。コントロールでは、Ｎ＝３～１２、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡでは、ｎ＝３～５とした。
〔図５Ｂ〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、持続的なＡＦの発生を防止する。本発明者らの長期的な試験では、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡの遺伝子注入は８時間よりも長く持続性ＡＦの発症を予防した。Ａ及びＢにおいて、コントロールでは、ｎ＝３～１２、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡでは、ｎ＝３～７とした。データは平均±ＳＥＭである。ログランク検定による有意差をグラフに示す。
〔図６〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡをトランスフェクトした心房におけるＮＯＸ２発現の減少。
〔図７〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡによる心房線維症の減少。
〔図８〕ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ±Ｇαｉ／ｏはＡＦを心房粗動または同調率に変換する。考察については、本文を参照されたい。
〔図９〕修飾されたカルボキシ末端Ｇαペプチドの例示的なアミノ酸配列。
〔図１０〕本発明の例示的なミニジーンのヌクレオチド配列。
〔発明を実施するための形態〕
定義
本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法及び材料を、本発明に記載される各実施形態の実施または試験において用いることができるが、いくつかの好ましい方法、組成物、装置、及び材料を本明細書に記載する。しかしながら、本材料及び方法を記載するのに先立って、本発明は、本明細書に記載される特定の分子、組成物、方法論、またはプロトコルは、通常の実験及び最適化にしたがって変わりうることから、これらに限定されない点は理解されるべきである。本説明文で使用される用語は、特定の形態または実施形態のみを説明することを目的としたものであり、本明細書に記載される実施形態の範囲を限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。
定義
本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法及び材料を、本発明に記載される各実施形態の実施または試験において用いることができるが、いくつかの好ましい方法、組成物、装置、及び材料を本明細書に記載する。しかしながら、本材料及び方法を記載するのに先立って、本発明は、本明細書に記載される特定の分子、組成物、方法論、またはプロトコルは、通常の実験及び最適化にしたがって変わりうることから、これらに限定されない点は理解されるべきである。本説明文で使用される用語は、特定の形態または実施形態のみを説明することを目的としたものであり、本明細書に記載される実施形態の範囲を限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。
別段の定義がなされない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。しかしながら、矛盾が生じる場合、定義を含む本明細書が優先するものとする。したがって、本明細書に記載される実施形態との関連では、以下の定義が適用される。
本明細書において、また付属の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈によってそうでない旨が明確に示されないかぎり、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「ミニジーン（ａ ｍｉｎｉｇｅｎｅ）」と言う場合には、１以上のミニジーン及び当業者には周知のその均等物のことを指す、といった具合である。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値を指す場合、いくつかの実施形態では示された量からの±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％、いくつかの実施形態では±０．１％の変動を包含するものとする（かかる変動は、開示される方法を実施するうえで適切であるため）。
本明細書で使用される場合、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語及びその言語学的な変化形は、更なる特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などの存在を除外することなく、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などの存在を示す。これに対して、「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」なる用語及びその言語学的な変化形は、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などの存在を示し、なおかつあらゆる記載されていない特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などは、通常伴う不純物を例外として除外する。「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」なる語句は、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）など、及び、組成物、系、または方法の基本的性質に実質的に影響しない任意の更なる特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などを示す。本明細書の多くの実施形態は、開放した「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という言葉を用いて説明される。かかる実施形態は、複数の閉鎖した「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「～から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」実施形態を包含し、これらの実施形態は代替的に、かかる言葉を用いて特許請求または説明される場合もある。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、昆虫、ヒト、非ヒト霊長類、脊椎動物、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、げっ歯類などを含むがこれらに限定されない任意の動物を指す。「対象」と「患者」という用語は、互換的に用いられ得る。対象は、一生の任意の段階にあり得る（例えば、胚、胎児、乳児、新生児、子供、成人など）。対象は、男性または女性であり得る。
本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療」、及び「治療すること」という用語は、特定の状態または疾患状態（例えば、心血管障害）を現在有する、または罹患している対象において、その状態、疾患状態、またはそれらの症状の量または重症度を軽減することを指す。これらの用語は、必ずしも完全な治療（例えば、状態、疾患、またはそれらの症状の完全な消失）を示すものではない。「治療」は、疾患（例えば、ヒトを含む哺乳動物における）に対する治療薬または技術の任意の投与または適用を包含し、疾患の阻害、その発症の阻止、疾患の緩和、退行の誘発、または喪失、欠損した、もしくは不全な機能の回復もしくは修復、または非効率的なプロセスの刺激を含む。
本明細書で使用する場合、「治療する」という用語及びその言語学的変化形が治療的手段を包含するのに対して、「予防する」という用語及びその言語的変化形は、特に示されない限り、予防的手段を包含する。
本明細書で使用される「低分子ヘアピンＲＮＡ」という語句及び「ｓｈＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）を行うことができ、センス配列、ループ、及びアンチセンス配列を含む単分子のＲＮＡ含有ポリヌクレオチドを指す。センス配列及びアンチセンス配列は、本明細書では第１の領域及び第２の領域と呼ぶことがある。本明細書に記載されるように、センス配列とアンチセンス配列とは、本発明のｓｈＲＮＡにおいて互いに異なる向きを有し得る（ＬまたはＲ ｓｈＲＮＡ）。したがって、ｓｈＲＮＡの第１の領域がセンス配列である場合、第２の領域はアンチセンス領域であり、その逆も同様である。好ましくは、センス配列とアンチセンス配列とは、互いに実質的に相補的である（約８０％相補的）。アンチセンス配列は、長さ約１６～約２２ヌクレオチド、例えば、長さ約１６～１９ヌクレオチド、より好ましくは１８～１９ヌクレオチドであり得る。センス配列は、長さ約１１～約２２ヌクレオチド、より好ましくは長さ１７～１９ヌクレオチドであり得る。アンチセンス配列（約１６～２２ヌクレオチドの）が標的遺伝子（または標的ＲＮＡ、例えば標的ｍＲＮＡ）と実質的に相補的である場合、ｓｈＲＮＡ（及び他のＲＮＡｉ剤）は標的遺伝子に対して「特異的」である。実質的に相補的とは、アンチセンス配列が標的遺伝子（または遺伝子産物）に対して少なくとも８０％相補的であることを意味する。したがって、いくつかの実施形態において、標的遺伝子に相補的であるアンチセンス配列は、標的に対するミスマッチを含み得る。配列は、ターゲティング配列を遺伝子変異体または表現型の配列と相補的であるように改変することによって、標的、例えば、ウイルス標的の１つ以上の遺伝的変異体または表現型を標的とするように変更することができる。ｓｈＲＮＡは、例えば、長さ０～約２４ヌクレオチド、好ましくは長さ０～約１０ヌクレオチド、長さ０～６ヌクレオチド、例えば、長さ２ヌクレオチドであればループを有し得る。ループの配列は、標的に関係のないヌクレオチド残基を含み得る。特に好ましい一実施形態において、ループは５’－ＵＵ－３’である。いくつかの実施形態において、ループは非ヌクレオチド部分を含み得る。さらに他の実施形態において、ループは非ヌクレオチド部分を含まない。必要に応じて、ｓｈＲＮＡは、分子の３’末端に２塩基のオーバーハング領域を有することができる。ｓｈＲＮＡは、ミスマッチ及び／またはバルジを含むステムループ構造を有するＲＮＡを含むこともできる。標的と相同であるセンス配列は、例えば、天然に存在するマイクロＲＮＡの場合と同様、約１～約５ヌクレオチドのミスマッチ、挿入、または欠失を有することにより、約０～約５つの部位で異なり得る。上記の構造のいずれかを含むＲＮＡは、ループがヌクレオチド、非ヌクレオチド、またはヌクレオチドと非ヌクレオチドの組み合わせを含む構造を含むことができる。
さらに、「低分子ヘアピンＲＮＡ」という語句及び「ｓｈＲＮＡ」という用語は、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド間結合、非ヌクレオチド、デオキシヌクレオチド、及び上記のヌクレオチドの類似体を含むが、それらに限定されない、リボヌクレオチド部分以外の部分も含む核酸を含む。対象とする修飾ｓｈＲＮＡの記載は、いずれも本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用するところの以下の参照文献にみられ得る。すなわち、Ｑ．Ｇｅ，Ｈ．Ｉｌｖｅｓ，Ａ．Ｄａｌｌａｓ，Ｐ．Ｋｕｍａｒ，Ｊ．Ｓｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ａ．Ｋａｚａｋｏｖ，ａｎｄ Ｂ．Ｈ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ（２０１０）Ｍｉｎｉｍａｌ－ｌｅｎｇｔｈ ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡｓ：Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ＲＮＡｉ Ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＲＮＡ１６（１）：１０６－１７（Ｅｐｕｂ Ｄｅｃ．１，２００９）；及びＱ．Ｇｅ，Ａ．Ｄａｌｌａｓ，Ｈ．Ｉｌｖｅｓ，Ｊ．Ｓｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ａ．Ｂｅｈｌｋｅ，ａｎｄ Ｂ．Ｈ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ（２０１０）Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｏｔｅｎｃｙ，Ｓｅｒｕｍ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｈｏｒｔ ｓｈＲＮＡｓ．ＲＮＡ １６（１）：１１８－３０（Ｅｐｕｂ Ｎｏｖ．３０，２００９）。
本明細書で使用する場合、「アンチセンス配列」という語句は、対象とする標的核酸と実質的に相補的（例えば、８０％以上）または１００％相補的であるポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの領域を指す。アンチセンス配列は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはキメラＲＮＡ／ＤＮＡであるポリヌクレオチド領域から構成され得る。アンチセンス配列内の任意のヌクレオチドは、２’修飾などにおけるようにヌクレオチドに結合された置換基を有することによって修飾することができる。アンチセンス配列は、小分子及び／または結合体の多様な基で修飾されてもよい。例えば、アンチセンス配列は、メッセンジャーＲＮＡの分子、ｍＲＮＡではないＲＮＡ配列（例えば、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、－及び＋鎖のウイルスＲＮＡ及びその相補的ＲＮＡ）、またはコーディングまたは非コーディング配列のいずれかであるＤＮＡの配列に全体的または部分的に相補的であり得る。
本明細書で使用する場合、「センス配列」という語句は、メッセンジャーＲＮＡまたはＤＮＡの配列などの標的核酸と全体的または部分的に同じヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたは領域を指す。ある配列が与えられる場合、慣例により、特に示されない限り、その配列はセンス配列（または領域）であり、相補的アンチセンス配列（または領域）の存在は暗黙的である。
本明細書で使用する場合、「相補的」という用語は、ポリヌクレオチド同士が互いに塩基対を形成する能力を指す。塩基対は通常、逆平行のポリヌクレオチド鎖または領域内のヌクレオチド単位間の水素結合によって形成される。相補的なポリヌクレオチド鎖または領域は、ワトソン・クリック型（例えば、ＡとＴ、ＡとＵ、ＣとＧ）、または、安定した二重鎖の形成を可能にする他の任意の型で塩基対を形成することができる。
本明細書で使用する場合、「完全な相補性」または「１００％の相補性」は、一方のポリヌクレオチド鎖または領域の各ヌクレオチド単位が、第２のポリヌクレオチド鎖または領域の各ヌクレオチド単位と水素結合できるような状況を指す。完全ではない相補性とは、２本の鎖または２つの領域のすべてではないが一部のヌクレオチド単位が互いに水素結合できる状況を指す。たとえば、２つの１９マーにおいて、各鎖または各領域の１７塩基対が互いに水素結合できる場合、ポリヌクレオチド鎖は８９．５％の相補性を示す。実質的な相補性とは、約８０％以上の相補性を示すポリヌクレオチド鎖または領域を指す。
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、製剤の他の成分と適合性を有するが、そのレシピエントにとって有害ではない担体、希釈剤、賦形剤、及び／または塩のことである。投与される有効成分は、粉末もしくは顆粒として、溶液、懸濁液もしくは乳濁液として、または本明細書全体を通じて他の場所で説明されるようにして存在し得る。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という語句は、本開示の組成物を動物またはヒトに送達するための薬学的に許容される塩、溶媒、懸濁剤またはビヒクルを意味する。担体は、液体、半固体または固体であってよく、希釈剤、賦形剤または塩としばしば同義的に用いられる。「薬学的に許容される」という語句は、開示される成分、賦形剤、担体、希釈剤または成分が、妥当な利益／リスク比に見合う、過度の有害な副作用（毒性、刺激、アレルギー反応など）を伴わずにヒト及び／または動物での使用に適したものであることを意味する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ（１９８０）（本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）を参照されたい。
本明細書で使用する場合、「ミニジーン」という用語は、天然遺伝子座の１つ以上の要素を含まないが、遺伝子産物もしくは遺伝子産物の一部の部分または合成コンストラクトの発現に必要なエレメントを含む最小の遺伝子フラグメントを指す。
現在の治療法が奏功しない主な理由は、これらの治療法がＡＦの根底にある主要な分子メカニズムを標的としていないために、根底にある疾患プロセスを阻止しないためである。ＡＦは、根底にあるいくつかの主要な分子メカニズムを有する多因子性疾患である。現在の薬剤及びアブレーションは主要な分子メカニズムを標的としていないため、根底にある疾患プロセスを阻止するものではない。
本明細書の実施形態の開発時に行われた実験は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡが、高頻度心房ペーシング（ＲＡＰ）によって誘導される電気的リモデリング及びＡＦを完全に防止することを示した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＨＦモデルにおいて心房線維症を予防することもできる。副交感神経抑制（Ｇαｉ／ｏ－ｃｔによる）もまた、ＲＡＰにより誘導される電気的リモデリング及びＡＦを有意に抑制した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰを行ったイヌにおいて副交感神経の発芽を抑制したが、これは、ＡＦにおける電気的リモデリングの形成における酸化的損傷と副交感神経シグナル伝達との間の有意な相互作用を示している。さらに、実験により、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、特にＧαｉ／ｏ－ｃｔと組み合わせて投与した場合に、確立されたＡＦを有するＲＡＰを行ったイヌにおける電気的リモデリングを逆転させることができることが実証された。
本明細書では、ＡＦの病態の発症の根底にある１つ以上の主要な分子メカニズムを標的とした、ＡＦの治療及び予防に対するアプローチを提供するものである。本明細書の特定の実施形態は、ＡＦにおける電気的リモデリングに寄与する基本的なメカニズム（例えば、酸化ストレス（ＯＳ）、副交感神経系シグナル伝達など）を標的としている。いくつかの実施形態において、本明細書では、一方または両方の心房におけるＯＳ及び副交感神経シグナル伝達を阻害するための遺伝子治療的アプローチを提供する。いくつかの実施形態において、このアプローチは、ＡＦにおける電気的リモデリングの根底にある２つの重要な分子メカニズムを直接的な標的とすることにより、アブレーションに抵抗性を示す患者のＡＦを減少させる。
いくつかの実施形態において、本明細書では、ＡＦの確立された基質を逆転させるためのＯＳ及び／または副交感神経シグナル伝達を標的とした導入遺伝子（複数可）の直接的な心房注射を提供する。いくつかの実施形態において、ＯＳを標的とする遺伝子は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡである。いくつかの実施形態において、副交感神経シグナル伝達を標的とする遺伝子は、Ｇαｉ２及びＧαｏ１阻害ペプチドの一方または両方を含む。本明細書の実施形態の開発時に行われた実験は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ及びＧαｉ２／Ｇαｏ１ペプチドはいずれも、ＡＦの高頻度心房ペーシング（ＲＡＰ）イヌモデルにおいて電気的リモデリングを防止し、結果としてＡＦを減少させることを示している。本明細書の実施形態の開発時に行われた実験はまた、これらのメカニズムが相互に密接に関連しており、ＯＳは心房の副交感神経の肥厚／発芽を引き起こすことにより、ＡＦにおける電気的リモデリングに少なくとも部分的に寄与していることも示している。いくつかの実施形態において、確立されたＡＦ基質を逆転させる本明細書における本明細書のアプローチの能力は、この技術の治療作用を提供するものである。いくつかの実施形態において、本明細書の実施形態は、ＡＦの疾患状態を改変し、洞調律を回復し、ＡＦ関連脳卒中、心不全などの減少をもたらす。
いくつかの実施形態において、治療薬は、冠状動脈バイパスまたは弁置換を行うための開心術中に外科医によって心外膜に投与される。いくつかの実施形態において、より侵襲性の低い経静脈心内膜アプローチが用いられる。
本明細書の実施形態の開発時に行われた実験により、心房細動（ＡＦ）の疾患状態の形成における基本的なメカニズムが特定され（参照文献８～１０；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）、心房におけるこれらのメカニズムを選択的に標的とすることができるいくつかの導入遺伝子が特定された（参照文献１０～１１；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。本明細書のいくつかの実施形態は、ＡＦにおける電気的リモデリング、酸化ストレス、及び副交感神経系シグナル伝達に寄与する２つの基本的なメカニズムの組み合わせを標的としている。いくつかの実施形態において、以下の導入遺伝子を発現するベクター（例えば、プラスミド）が使用される。すなわち、（ａ）ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ（この遺伝子は、酸化ストレスの主要な酵素的要因であるＮＯＸ２を阻害する）、及び（ｂ）Ｃ末端Ｇαｉ＋Ｇαｏ阻害ペプチド（例えば、１：１の比）（これらは、副交感神経性の心房シグナル伝達を阻害する）。いくつかの実施形態において、治療薬は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ±（Ｇαｉ＋Ｇαｏプラスミド）を含む。
本明細書の実施形態の開発時には、臨床的に関連するＡＦの大型動物モデルにおいてエレクトロポレーションを使用することによって導入遺伝子（プラスミド）が心房で首尾よく発現され、その結果、ＡＦが減少することを実証する実験を行った。ＡＦの電気的リモデリングを防止するアプローチの有効性を以下に説明する。確立されたＡＦ基質を導入遺伝子が逆転させることを実証するための実験を、本明細書の実施形態の開発時に行う。研究によって受攻性のＡＦ基質の形成におけるＯＳと副交感神経シグナル伝達との間の有意なクロストーク、さらには相乗効果の証拠が示されているため、本明細書の実施形態の開発時に、ＡＦのＲＡＰモデルにおいてＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ及びＧαｉ／ｏ阻害ペプチドの単独または組み合わせでの投与が、確立されたＡＦ基質を逆転させることを実証するための実験を行う。
ＮＯＸ２により生成されるＲＯＳはＲＡＰを行った心房で上昇する。４匹のイヌに６００ｂｐｍのＲＡＰを３～４週間行った（房室結節のアブレーションは行わなかった）（参照文献１３；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。ＲＡＰを行ったイヌ及び５匹の正常な（コントロール）イヌからのＰＬＡを、異なるＲＯＳ阻害剤の存在下でＯ２－の生成について評価した（ＮＯＸ２、ミトコンドリアＲＯＳ、キサンチンオキシダーゼ及びＮＯＳについて）（参照文献１４；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。総Ｏ２－は、ＲＡＰ ＰＬＡで有意に上昇しており、ＮＯＸ２が総Ｏ２－の大きな要因であった（正常値の３倍の増加；Ｐ＜０．０５）。ＮＯＸ２により生成されたＯ２－の増加は、コントロールと比較してＲＡＰ心房におけるｇｐ９１（主要なＮＯＸ２サブユニット）発現の１０倍超の増加を伴った（ｐ＜０．０１）。ミトコンドリアの誘導Ｏ２－もＲＡＰにおいて上昇していた（正常値の１．５倍の増加；ｐ＜０．０５）。ＮＯＸ２により生成されたＯＳは、ＡＦの電気的リモデリングの状況で有意に上昇しており、ＯＳがＡＦにおける現実的な治療標的となることを示している。
ＡＦは左心房において神経肥厚及び副交感神経／交感神経発芽を引き起こす（参照文献８，１５；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。５匹の動物で３～４週間の６００脈拍／分のＲＡＰによりＲＡＰモデルを確立した（房室結節のアブレーションなし）。５匹の正常なイヌをコントロールとして用いた。ＰＬＡ及びＬＡＡ切片を、副交感神経及び交感神経（アセチルコリンエステラーゼ、ドーパミンβ－ヒドロキシラーゼ）について調べた。神経成長因子（ＮＧＦ）の発現をＰＣＲによって評価した。ＰＬＡは、ＲＡＰ動物とコントロール動物の両方でＬＡＡには見られなかった固有の太い神経束（＞０．０１ｍｍ２）を示した。コントロールと比較してＲＡＰでは、ｉ）ＰＬＡの神経束は顕著に太く、ｉｉ）副交感神経線維が優勢であった（図１）。交感神経線維もＲＡＰで増加した（２．４に対して４．８繊維／ｍｍ２、ｐ＜０．０５）。副交感神経及び交感神経の増殖は、ＲＡＰ ＧＰにおけるＮＧＦ発現の増加と相関していた（＞１０倍増；ｐ＜０．０１）。したがって、ＲＡＰは、ＰＬＡにおける顕著な神経肥厚及び副交感神経及び交感神経線維の増加を誘導する。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰを行った心房におけるＥＲＰ短縮／ＡＦ及び副交感神経発芽を抑制する。ＰＬＡの心筋におけるＮＯＸ２のノックダウン＋ＧＰ（４週間）は、ＲＡＰによって誘導されるＥＲＰ短縮を抑制するだけでなく、ＲＡＰによって誘発される神経増殖／発芽も抑制することを実証するため、本明細書の実施形態の開発時に実験を行った。３匹の動物で、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを発現する１０ｍｇのプラスミドをＰＬＡに心外膜下に注射した後、エレクトロポレーションを行って遺伝子送達を促進した。７匹のコントロール動物にもＲＡＰを行った（１匹はスクランブル遺伝子を注入し、１匹はシャムコントロールであり、他は開胸術を行わずにＲＡＰを行った）。遺伝子注射の１週間後、遺伝子注入した動物に６００ｂｐｍのＲＡＰを２０日間行い（房室結節切除は行わない）、その後、最終試験を行った。４８時間毎に各動物のペーシングを３０～６０分間停止して、自発的ＡＦ（この時間の間に終了しなかったＡＦとして定義される）を評価した。最終試験の後、ＮＯＸ２を測定し（ＰＣＲ、ウエスタンブロッティング）、ＮＧＦの発現を評価し（ＰＣＲ）、自律神経を染色した。図２は、コントロールのイヌ（スクランブルした遺伝子及びシャム）が６日間のＲＡＰ後に持続性ＡＦを発症したことを示している。これに対して、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与した動物では有意なＡＦは認められなかった（コントロールに対するＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ，ｐ＜０．０５；図２）。ＥＲＰは、コントロールと比較してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与したイヌで顕著に長かった（＜５０ミリ秒に対して１２４±２５ミリ秒；ｐ＜０．０５）。ＮＯＸ２レベルは、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡにより、ＰＣＲ（減少率５０％，ｐ＜０．０５）及びウエスタンブロッティングで有意に減少した。ＮＧＦは、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入したＰＬＡで減少していた（約５０％のノックダウン率；ｐ＜０．０５）。免疫染色は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入したＰＬＡは神経束の肥厚を示さず、ＲＡＰコントロールでは副交感神経の過剰支配がみられたことを示した（図３）。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰにおけるＥＲＰ短縮及びＡＦを防止する。ＮＯＸ２阻害は、ＲＡＰによって誘導される副交感神経の増殖も抑制する。ＯＳによって誘導される副交感神経の増殖は、ＲＡＰ時のＥＲＰ短縮に寄与する重要なメカニズムである可能性がある。
遺伝子注入後、７ヶ月間の継続的なＲＡＰの後でも、イヌ被験体はＡＦを発症しなかった（このような長期の継続的なＲＡＰで予想される心房粗動のみ）。これらのデータは、ＡＦにおける臨床的標的としてのＮＯＸ２をさらに証明するものである。
Ｇαｉ／ｏ阻害ペプチド（Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ）を発現するミニジーンは、ＲＡＰにおけるＥＲＰ短縮及びＡＦを抑制する（参照文献１６；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。３匹の動物で、Ｇαｉ２＋Ｇαｏ１ペプチドを（長時間作用型ＵＢＣプロモーターの制御下で）発現するプラスミド１０ｍｇをＰＬＡに注射した。５匹のコントロール動物にもＲＡＰを行った（１匹はスクランブルした遺伝子を注入し、１匹はシャムコントロールとし、他のコントロールは開胸術を行わずにＲＡＰを行った）。その後、すべての動物に６００ｂｐｍのＲＡＰ（房室結節切除を行わない）を２０日間行った。４８時間毎に３０～６０分間ペーシングを停止して持続性ＡＦについて評価を行った。図４は、Ｇαｉ／ｏ－ｃｔがＲＡＰを行ったイヌのＡＦの発症を有意に遅らせることを示す（ｐ＜０．０５）。これは有意なＥＲＰ延長を伴った（コントロールで５０ミリ秒未満に対してＧαｉ／ｏで９３±１３ミリ秒、ｐ＜０．０５）。これらのデータは、副交感神経がＲＡＰにおけるＥＲＰ短縮及びＡＦに寄与していることを示しており、Ｇαｉ／ｏが長期的な電気的リモデリングに対して有益な効果を有することを示すものである。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏペプチドは、ＲＡＰにおけるＡＦを防止するうえで効果的である。イヌ被験体におけるＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ２を発現するミニジーン＋Ｇαｏ１を発現するミニジーンの組み合わせ。ＲＡＰの５ヶ月後、イヌは持続的なＡＦを発症しなかった。重要な点として、持続性心房粗動を発症した、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを長期投与したイヌとは異なり、この動物は、洞調律のエピソードが介在する非持続性の心房粗動のみを示した。これらの結果は、ＲＡＰにおけるＡＦを防止するうえでのＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏペプチドの相乗作用を示している。
ＯＳ及び副交感神経シグナル伝達はいずれも、ＲＡＰにおける電気的リモデリングに寄与する。さらに、ＯＳ阻害は、ＲＡＰにおける副交感神経の増殖／発芽を顕著に抑制し、これらのメカニズム間の密接な相互作用を示している。いくつかの実施形態において、本明細書では、ＲＡＰモデルにおいて確立された電気的リモデリングを逆転させ、結果としてＡＦを減少させるために、ＯＳ及び副交感神経シグナル伝達を遺伝子ベースで（単独または組み合わせで）阻害するための方法及び組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２を阻害するための組成物及び方法が提供される。ＮＯＸ２阻害のためのいくつかの例示的な方法及び組成物が、例えば、参照によってその全容を援用する米国特許第９，９３２，５８８号に記載されている。いくつかの実施形態において、本発明は、細胞または組織におけるＮＯＸ２媒介性シグナル伝達事象を阻害する方法を提供する。これらの方法は、細胞または組織、好ましくはヒト細胞または組織に、修飾ＮＯＸ２ペプチド及び修飾ＮＯＸ２ペプチドをコードするミニジーンを含む単離された核酸のうちの１つを投与することを含み、それにより、投与後にＮＯＸ２ペプチドが、細胞または組織におけるＮＯＸ２媒介性シグナル伝達事象を阻害する。
いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２活性及び／または発現を阻害するための組成物及び方法が提供される。
他の実施形態において、ＮＯＸ２の発現を阻害するための組成物及び方法が提供される。細胞、組織、または対象内の遺伝子発現を改変する複数の方法が、当該分野では周知である（例えば、ＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子治療、ＣＲＩＳＰＲなど）。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２の発現を調節するために核酸が使用される。
いくつかの実施形態において、この技術は、ＮＯＸ２を認識し、結合し、その活性を阻害する抗体またはフラグメントを投与することによって、ＮＯＸ２活性を阻害するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体であり、いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。
いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２阻害剤は、小分子である。いくつかの実施形態において、本発明は、ＮＯＸ２の小分子阻害剤を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＮＯＸ２活性、機能発現などを阻害するように構成された、または阻害することができる小分子薬物または医薬化合物を提供する。
例えば、いくつかの実施形態において、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が、ＮＯＸ２を標的として分解するように設計される。ｓｉＲＮＡは、長さ２０～２５ヌクレオチドの二本鎖ＲＮＡ分子である。それらの特徴に制限はないが、通常、ｓｉＲＮＡは長さ２１ヌクレオチドであり、両端に２ヌクレオチドの３’末端オーバーハング（２－ｎｔ ３’ｏｖｅｒｈａｎｇｓ）を有する。各鎖は５’末端リン酸基（５’ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｇｒｏｕｐ）と３’末端ヒドロキシル基（３’ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｇｒｏｕｐ）を有する。インビボでは、この構造は、長鎖のｄｓＲＮＡまたは低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）のいずれかをｓｉＲＮＡに変換する酵素であるＤｉｃｅｒによるプロセシングの結果である。しかしながら、ｓｉＲＮＡを合成して細胞に外因的に導入することで対象とする遺伝子の特定のノックダウンを引き起こすこともできる。基本的には、配列が既知である任意の遺伝子を、適宜調整されたｓｉＲＮＡとの配列相補性に基づいて標的化することができる。例えば、当業者であればｓｉＲＮＡを合成することができる（例えば、参照によりそれらの全容を援用する、Ｅｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４１１：４９４（２００１）；Ｅｌｂａｓｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １５：１８８（２００１）；Ｔｕｓｃｈｌ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １３：３１９１（１９９９）を参照）。
いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２の発現を阻害するためにＲＮＡｉが用いられる。いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２の発現を調節するためにＲＮＡｉが使用される。ＲＮＡｉは、ヒトを含む大部分の真核生物において外来遺伝子の発現を制御するための進化的に保存された細胞防御を代表する。ＲＮＡｉは通常、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）によってトリガーされ、一本鎖の標的ＲＮＡ（ｍＲＮＡなど）の配列特異的な分解を引き起こす。ｍＲＮＡ分解のメディエーターは、通常、細胞内で酵素的切断によって長鎖のｄｓＲＮＡから生成される低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。ｓｉＲＮＡは、一般に、長さ約２１ヌクレオチド（例えば、長さ２１～２３ヌクレオチド）であり、２ヌクレオチドの３’末端オーバーハング（ｔｗｏ－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ３’ｏｖｅｒｈａｎｇｓ）を特徴とする塩基対構造を有する。低分子ＲＮＡまたはＲＮＡｉが細胞に導入された後、その配列はＲＩＳＣ（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）と呼ばれる酵素複合体に送達されると考えられている。ＲＩＳＣは標的を認識し、エンドヌクレアーゼにより切断する。より大きなＲＮＡ配列が細胞に送達される場合には、ＲＮａｓｅ ＩＩＩ酵素（例えば、ダイサー）はより長鎖のｄｓＲＮＡを２１～２３ヌクレオチドの二本鎖ｓｉＲＮＡフラグメントに変換する点に留意されたい。いくつかの実施形態において、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、融合タンパク質の接合領域を標的とするように設計される。化学的に合成されたｓｉＲＮＡは、培養体細胞における哺乳動物の遺伝子機能のゲノムワイドな分析のための強力な試薬となっている。遺伝子機能を検証するためのそれらの価値以上に、ｓｉＲＮＡはまた、遺伝子特異的な治療薬としての大きな可能性も秘めている（例えば、本明細書に参照により援用するＴｕｓｃｈｌ ａｎｄ Ｂｏｒｋｈａｒｄｔ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔ．２００２；２（３）：１５８－６７を参照）。
他の実施形態では、ｓｈＲＮＡ技術（例えば、本明細書に参照によりその全容を援用する米国公開第２００８／００２５９５８号を参照）が、ＮＯＸ２の発現を調節する（例えば、阻害する）ために利用される。低分子ヘアピンＲＮＡまたは低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉によって遺伝子発現をサイレンシングするために使用できるタイトなヘアピンターンを形成するＲＮＡの配列である。ｓｈＲＮＡは、細胞に導入されるベクターを利用し、ｓｈＲＮＡが常に発現するようにＵ６プロモーターを利用する。このベクターは通常娘細胞に受け継がれ、遺伝子サイレンシングを継承することができる。ｓｈＲＮＡヘアピン構造は細胞マシナリーによってｓｉＲＮＡに切断され、ｓｉＲＮＡはＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と結合する。この複合体は、複合体に結合しているｓｉＲＮＡと一致するｍＲＮＡに結合してこれを切断する。ｓｈＲＮＡは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって転写される。
いくつかの実施形態において、本明細書では、ＮＯＸ２遺伝子を標的とする低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を提供する（「ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ」）。ｓｈＲＮＡは、センス配列、ループ領域、及びアンチセンス配列（第１及び第２の領域と呼ばれる場合もある）を含む単分子ＲＮＡであってよく、これらが一緒になってヘアピンループ構造を形成している。好ましくは、アンチセンス配列とセンス配列とは、互いに実質的に相補的であり（約８０％またはそれ以上相補的）、特定の実施形態では、アンチセンス配列とセンス配列とは、互いに１００％相補的である。特定の実施形態において、アンチセンス配列及びセンス配列は、ダイサーによってプロセシングされるには短すぎ、そのため、より長鎖の二本鎖ＲＮＡの経路とは別の経路を介して作用する（例えば、長さ約１６～約２２ヌクレオチド、例えば、長さ１８～１９ヌクレオチドのアンチセンス配列及びセンス配列を有するｓｈＲＮＡ（例えば、ｓｓｈＲＮＡ））。さらに、本発明の単分子ＲＮＡ内のアンチセンス配列とセンス配列とは同じ長さであってもよく、または約９塩基よりも少ない数で長さが異なってもよい。ループは任意の長さであってよいが、好ましい長さは、長さ０～４ヌクレオチドまたは同等の長さの非ヌクレオチドリンカーであり、より好ましくは、２ヌクレオチドまたは同等の長さの非ヌクレオチドリンカーである（例えば、２ヌクレオチドに相当する長さを有する非ヌクレオチドのループ）。一実施形態では、ループは、５’－ＵＵ－３’（ｒＵｒＵ）または５’－ｔｔ－３’であり、ただし、「ｔ」は、デオキシチミジン（ｄＴｄＴ）を表す。任意のｓｈＲＮＡヘアピン内において、複数のヌクレオチドがリボヌクレオチドである。ヌクレオチドが０個のループの場合、アンチセンス配列はセンス配列に直接連結され、一方または両方の鎖の一部がループを形成する。０ヌクレオチド（ｎｔ）のループを有するｓｈＲＮＡの好ましい実施形態では、アンチセンス配列は約１８または１９ｎｔであり、センス配列がアンチセンス配列よりも短く、アンチセンス配列の一端がループを形成する。
代表的なｓｈＲＮＡのヘアピンは、左巻き（Ｌ）型ヘアピン（つまり、５’－アンチセンス－ループ－センス－３’）または右巻き（Ｒ）型ヘアピン（つまり、５’－センス－ループ－アンチセンス－３’）のいずれかに構成され得る。さらに、ｓｈＲＮＡは、ヘアピンの構成に応じて、センス配列またはアンチセンス配列のいずれかの５’または３’末端のいずれかにオーバーハングを有してもよい。好ましくは、任意のオーバーハングがある場合、それらはヘアピンの３’末端にあり、１～６個の塩基からなる。Ｒ型のヘアピンではオーバーハングが存在することが好ましく、その場合、２ｎｔのオーバーハングが好ましく、ＵＵまたはｔｔのオーバーハングが最も好ましい。
ｓｈＲＮＡの安定性、機能性、及び／または特異性を向上させ、免疫刺激特性を最小限に抑えるために修飾を付加することができる。例えば、オーバーハングは修飾されなくともよく、または２’位のハロゲンまたはＯ－アルキル修飾などの１つ以上の特異性もしくは安定化を与える修飾、またはホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド間修飾を有することができる。オーバーハングは、リボ核酸、デオキシリボ核酸、またはリボ核酸とデオキシリボ核酸との組み合わせであり得る。
左巻き型ヘアピンに適用することができる修飾の別の非限定的な例では、２’－Ｏ－メチル修飾（または他の２’－Ｏ－アルキル修飾を含むがこれに限定されない他の２’修飾）を、ヘアピンの５’アンチセンス末端から１５、１７、または１９位のヌクレオチド、またはこれらの位置の任意の２つ、または３つすべてに、ならびにループのヌクレオチド、及び、「スライシング」活性を阻害する修飾を有してはならない、センス配列の最も５’末端側のヌクレオチドからみてヌクレオチド９、１０、及び１１（９番目（９．ｓｕｐ．ｔｈ）、１０番目（１０．ｓｕｐ．ｔｈ）、及び１１番目（１１．ｓｕｐ．ｔｈ）のヌクレオチドとも呼ばれる）を除くセンス配列の１個おきのヌクレオチドに付加することができる。前文に記載される任意の単一の修飾または修飾群は、単独で、または引用される他の任意の修飾もしくは修飾群と組み合わせて使用することができる。
Ｕｉ－Ｔｅｉ，Ｋ．ら（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００８）３６ （２２）：７１００－７１０９）は、一方または両方の鎖のシード領域を修飾することにより、ｓｉＲＮＡの特異性を高めることができることを観察している。かかる修飾を本開示のｓｈＲＮＡに適用することができる。ヘアピンに適用することができる修飾の別の非限定的な例では、アンチセンス配列のｎｔ１～６及びセンス配列のｎｔ１４～１９を２’－Ｏ－メチル化して、オフターゲット効果を低減することができる。好ましい実施形態では、ｎｔ１～６のみを２’－ＯＨから２’－Ｈまたは２’－Ｏ－アルキルに修飾する。
ｓｈＲＮＡのセンス配列は潜在的にＲＩＳＣに入ってアンチセンス（ターゲティング）鎖と競合する可能性があるため、センス配列のリン酸化を妨げる修飾は、オフターゲットシグネチャを最小限に抑えるうえで有用である。したがって、本発明の右巻き型ｓｈＲＮＡの最も５’末端側のヌクレオチドの５’炭素のリン酸化を妨げる望ましい化学修飾としては、（１）ブロッキング基（例えば、５’－Ｏ－アルキル）を５’炭素に付加するか、または、（２）５’－ヒドロキシル基（例えば、５’－デオキシヌクレオチド）を除去する修飾が含まれるが、これらに限定されない（例えば、ＷＯ２００５／０７８０９４を参照）。
特異性を高める修飾に加えて、安定性を高める修飾を付加することもできる。一実施形態では、２’－Ｏ－アルキル基（または他の２’修飾）を含む修飾を、センス配列の１つ以上の、好ましくはすべてのピリミジン（例えば、Ｃ及び／またはＵヌクレオチド）に付加することができる。センス配列／領域の一部またはすべてのＣ及びＵの、それぞれ２’Ｆまたは２’－Ｏ－アルキルなどの修飾、またはループ構造は、標的特異的なサイレンシングを大幅に変化させることなく、ｓｈＲＮＡ分子の安定性を高めることができる。注意すべき点として、これらの修飾は安定性を高めるが、ＲＮＡｉの破壊（例えば、「スライシング」活性を妨げる）を回避するためにヘアピン内の重要な位置へのこれらの修飾パターンの付加は避けることが望ましい場合がある。
本発明のいくつかの実施形態において、リン酸骨格に対するさらなる安定化修飾がｓｈＲＮＡに含まれてもよい。例えば、少なくとも１つのホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、及び／またはメチルホスホネートが、ｓｈＲＮＡ主鎖のヌクレオチド、またはヌクレオチドの任意の特定のサブセット（例えば、オリゴヌクレオチド主鎖のセンス配列内のいずれかまたはすべてのピリミジン）、ならびに任意のオーバーハング、及び／または存在するループ構造内のヌクレオチドの一部またはすべての３’位のリン酸基を置換することができる。これらの修飾は、独立して、または本明細書に開示される他の修飾と組み合わせて用いることができる。
対象となる修飾ｓｈＲＮＡの説明は、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用する以下の参照文献にみることができる。すなわち、Ｑ．Ｇｅ，Ｈ．Ｉｌｖｅｓ，Ａ．Ｄａｌｌａｓ，Ｐ．Ｋｕｍａｒ，Ｊ．Ｓｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．Ａ．Ｋａｚａｋｏｖ，ａｎｄ Ｂ．Ｈ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ（２０１０）Ｍｉｎｉｍａｌ－ｌｅｎｇｔｈ ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡｓ：Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ＲＮＡｉ Ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＲＮＡ１６（１）：１０６－１７（Ｅｐｕｂ Ｄｅｃ．１，２００９）；及びＱ．Ｇｅ，Ａ．Ｄａｌｌａｓ，Ｈ．Ｉｌｖｅｓ，Ｊ．Ｓｈｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｍ．Ａ．Ｂｅｈｌｋｅ，ａｎｄ Ｂ．Ｈ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ（２０１０）Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｏｔｅｎｃｙ， Ｓｅｒｕｍ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｈｏｒｔ ｓｈＲＮＡｓ．ＲＮＡ１６（１）：１１８－３０（Ｅｐｕｂ Ｎｏｖ．３０，２００９）。
本発明の態様による修飾ｓｈＲＮＡは、３’キャップ構造（例えば、反転デオキシチミジン）、ｓｈＲＮＡの１つまたは複数の位置に結合した検出可能な標識（例えば、蛍光標識、質量標識、放射性標識など）、または送達、検出、機能、特異性、または安定性を高めることができる他の結合体（例えば、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、糖、炭水化物、脂質、ポリマー、ヌクレオチド、ポリヌクレオチドなど）を含む、様々な目的のいずれかのためのさらなる化学修飾を含むことができる。さらなる化学修飾の組み合わせは、ユーザーの所望に応じて使用することができる。
適当なＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡとしては、核酸の一部が長さ約１５ヌクレオチド～約２５ヌクレオチドの範囲の二本鎖構造ドメインを有する、長さ約２０ヌクレオチド～約８０ヌクレオチドの範囲の核酸が挙げられる。いくつかの態様において、ｓｈＲＮＡは、組織及び細胞内のｓｈＲＮＡに安定性を付与するための修飾塩基またはホスホジエステル骨格を含むことができる。例示的なＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡとしては、配列番号３４が挙げられる（５’～３’方向のヌクレオチド配列：ＣＣＧＣＣＴＡＴＧＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＧＧＡＴＡＣＴＣＧＡＧＴＡＴＣＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＡＴＡＧＧＴＴＴＴＴＧ）。いくつかの実施形態において、例示的なＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ（または他の阻害性核酸）は、配列番号１の配列を標的とするものである。
いくつかの実施形態において、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスＤＮＡオリゴ、アンチセンスＲＮＡオリゴ）が、ＮＯＸ２の発現を調節するために使用される。例えば、いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２の発現は、核酸ＮＯＸ２と特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物を使用して阻害される。オリゴマー化合物とその標的核酸との特異的なハイブリダイゼーションは、核酸の正常な機能を妨げる。標的核酸と特異的にハイブリダイズする化合物による標的核酸の機能のこのような調節は、一般に「アンチセンス」と呼ばれる。干渉されるＤＮＡの機能には、複製と転写が含まれる。干渉されるＲＮＡの機能としては、例えば、タンパク質翻訳部位へのＲＮＡの転移、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、１つ以上のｍＲＮＡ種を生成するためのＲＮＡのスプライシング、及びＲＮＡが関与または促進し得る触媒作用などのあらゆる生体機能が含まれる。標的核酸機能とのそのような干渉の全体的な効果は、ＮＯＸ２の発現の調節（例えば、阻害）である。
いくつかの実施形態において、ＮＯＸ２の活性及び／または発現は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して抑制される。本明細書に記載される「ＣＲＩＳＰＲ」（クラスター化された規則的に間隔を空けた短いパリンドローム反復）は、短い反復塩基配列を含む原核生物ＤＮＡのセグメントである。各反復配列の後には、細菌ウイルスまたはプラスミドへの過去の曝露からの「スペーサーＤＮＡ」の短いセグメントが続く。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、プラスミドやファージなどの外来遺伝要素に対する耐性を付与し、ある種の獲得免疫を与える原核生物の免疫システムである。ＣＲＩＳＰＲスペーサーは、真核生物のＲＮＡｉと似た方法でこれらの外因性遺伝子要素を認識して切断する。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、系統樹全体にわたって種における遺伝子編集（特定の遺伝子の配列の付加、破壊、または変更）及び遺伝子調節に使用されてきた。Ｃａｓ９タンパク質と適切なガイドＲＮＡを細胞内に送達することにより、生物のゲノムを任意の場所で切断することができる。ＣＲＩＳＰＲを使用して、対象のゲノムを改変することができるＲＮＡガイド遺伝子編集ツールを構築することができる。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを用いて、対象、組織、または細胞内のＮＯＸ２の発現を（例えば、部分的または完全に）阻害する。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを用いて、活性が低下したＮＯＸ２を生成する（例えば、対象、組織、または細胞内で）。
いくつかの実施形態において、自律神経経路（例えば、ＡＦに関与する経路）を妨害する薬剤が提供される。いくつかの実施形態において、本発明は、自律神経経路を妨害する（例えば、遮断、阻害する）組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、自律神経経路を妨害するＧタンパク質阻害剤を提供する。いくつかの実施形態において、交感神経または副交感神経経路を選択的に遮断するＧタンパク質阻害剤の送達が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書では、Ｇタンパク質共役型受容体媒介シグナル伝達を遮断する心房細動の治療及び予防のための組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、心房細動の治療として心臓の自律神経経路を妨害するＧタンパク質阻害剤を使用した組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、心臓の状態または障害（例えば、心房細動）を治療するためのＧタンパク質阻害剤を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｇタンパク質機能の阻害剤を提供する。
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害剤は、Ｇタンパク質阻害ペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明は、１つ以上のＧタンパク質を阻害することができる任意の適当なアミノ酸配列のペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、本発明の実施形態の組成物によって提供されるかまたはコードされるペプチドは、任意の標準アミノ酸（例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン）、または非標準アミノ酸（例えば、Ｄ－アミノ酸、一般的なアミノ酸の化学的または生物学的に生成された誘導体、セレノシステイン、ピロリシン、ランチオニン、２－アミノイソ酪酸、デヒドロアラニンなど）の任意の配列を含み得る。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、Ｇα（例えば、ＧαＩ、Ｇαｓ、Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１２、Ｇα１３、Ｇα１４、Ｇ１５、Ｇαｏ１、Ｇα１６など）、ＧαＩ、及び／またはＧαｓに対する阻害剤である。いくつかの実施形態において、これらのペプチド配列は、Ｇα（例えば、Ｇαｏ１）、ＧαＩ及び／またはＧαｓのＣ末端を模倣することで受容体／Ｇタンパク質相互作用を遮断する（例えば、５個のＣ末端アミノ酸、６個のＣ末端アミノ酸、７個のＣ末端アミノ酸、８個のＣ末端アミノ酸、９個のＣ末端アミノ酸、１０個のＣ末端アミノ酸、１１個のＣ末端アミノ酸、１２個のＣ末端アミノ酸、１３個のＣ末端アミノ酸、１４個のＣ末端アミノ酸、１５個のＣ末端アミノ酸、１６個のＣ末端アミノ酸、１７個のＣ末端アミノ酸、１８個のＣ末端アミノ酸、１９個のＣ末端アミノ酸、２０個のＣ末端アミノ酸、３０個のＣ末端アミノ酸、４０個のＣ末端アミノ酸、５０個のＣ末端アミノ酸、完全なＣ末端領域など）。
いくつかの実施形態において、例えば、本発明のＧタンパク質阻害ペプチドは、ＧαｉのＣ末端を含む（ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＣＮ５８５８８．１；ＧＩ：２２４５８６９８６）。いくつかの実施形態において、例えば、本発明のＧタンパク質阻害ペプチドは、Ｇαｉの１１個のＣ末端アミノ酸を含む（例えば、アミノ酸配列ＩＫＮＮＬＫＤＣＧＬＦ（配列番号３））。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、配列番号３と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。
特定の実施形態において、本発明のＧタンパク質阻害ペプチドは、Ｇαｏ１のＣ末端を含む（ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＡＨ３００２７の完全な配列；核酸配列ＮＭ＿０２０９８８を参照）。いくつかの実施形態において、例えば、本発明のＧタンパク質阻害ペプチドは、Ｇαｉの１１個のＣ末端アミノ酸を含む（例えば、アミノ酸配列ＩＡＮＮＬＲＧＣＧＬＹ（配列番号４））。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、配列番号４と少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはこれらの間の範囲）の配列同一性を有する。
いくつかの実施形態において、Ｇα（例えば、ＧαＩ、Ｇαｓ、Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１２、Ｇα１３、Ｇα１４、Ｇα１５、Ｇαｏ１、Ｇα１６など）、ＧαＩ、及び／またはＧαｓのＣ末端を模倣することでＧタンパク質相互作用を競合的に阻害するペプチドが提供される。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、Ｇタンパク質のフラグメントである。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、Ｇタンパク質（例えば、ＧαＩ、Ｇαｓ、Ｇα、Ｇαｏ１など）のＣ末端を模倣するが、野生型配列からは異なる（例えば、異なる長さ、変異アミノ酸など）。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｇタンパク質の変異型またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態において、提供されるペプチドは、ＧαＩ、Ｇαｓ、及び／またはＧα（例えば、ＧαＩ、Ｇαｓ、Ｇαｑ、Ｇα１１、Ｇα１２、Ｇα１３、Ｇα１４、Ｇα１５、Ｇαｏ１、Ｇα１６など）のＣ末端の変異配列である。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、単離または精製されたペプチドとして対象に与えられる。いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害ペプチドは、かかるペプチドをコードした核酸分子として対象に与えられる。いくつかの実施形態において、ペプチドは、細胞浸透性を高めるように最適化される（例えば、配列最適化、配列タグ、小分子によるタグ付けなど）。
いくつかの実施形態において、組成物及び方法は、Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチド、またはＧαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードした核酸を含む。Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸の要素は異なり、最低でもＧαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードした核酸配列と、Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドのベクターからの発現に必要な要素と、を含むベクターを含む。任意のＧαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸配列を本明細書で使用することができる。
いくつかの実施形態において、Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードするミニジーンが、医薬組成物中で与えられるか、及び／または対象に投与される。本明細書で使用する場合、「ミニジーン」という用語は、天然遺伝子座の１つ以上の要素を含まないが、遺伝子産物もしくは遺伝子産物の一部の部分または合成コンストラクトの発現に必要なエレメントを含む最小の遺伝子フラグメントを指す。いくつかの例では、Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドのミニジーンは、少なくとも１つのイントロン、またはその一部を含まなくともよい。いくつかの例では、ミニジーンは、少なくとも１つのイントロン、またはその一部を含んでもよい。いくつかの実施形態において、ミニジーンは、ミニジーン転写産物の発現を制御または増強する少なくとも何らかの調節配列を含む。いくつかの例では、ミニジーン調節配列は、プロモーターを含む。ミニジーンにおいて有用なプロモーターは異なり、そのようなミニジーンプロモーターの選択は、ミニジーン転写産物の所望の発現レベル、ミニジーン発現の所望の制御、ミニジーン全体の所望のサイズ、ミニジーンが投与され得る対象を含むミニジーンの使用用途を含む様々な要因によって決められる。かかるミニジーンプロモーターとしては、天然プロモーター、非天然、異種プロモーター、最小プロモーター、ミニプロモーター、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター、誘導性プロモーター、合成プロモーターなどが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本発明のミニジーンのヌクレオチド配列は、配列番号２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、及び３３のうちの１つである（図１０）。いくつかの実施形態において、本発明のミニジーンのヌクレオチド配列は、配列番号２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、及び３３のうちの１つと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれらの間の範囲）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ミニジーン配列は、対象に送達されるベクター（例えば、プラスミド、ウイルスベクターなど）内で与えられる。
いくつかの例において、Ｇαｉ及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸は、例えば、プラスミドのポリヌクレオチド骨格などのベクター骨格を含む。本明細書の実施形態において有用なベクター骨格は異なり、多くの要因に基づいて選択することができる。ベクターは、１つ以上のベクター固有のエレメントを含むことができる。「ベクター固有のエレメント」とは、ベクターの構築の前、その間、またはその後に、及び／またはベクターの使用前に、ベクターの作製、構築、増殖、維持及び／またはアッセイに使用されるエレメントを意味する。そのようなベクター固有のエレメントとしては、例えば、使用時のベクターの増殖、クローニング及び選択に必要なベクターエレメントが挙げられるが、これらに限定されず、例えば、複製起点、マルチクローニングサイト、原核生物プロモーター、ファージプロモーター、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子、コードされた酵素タンパク質、コードされた蛍光または発色タンパク質など）などが挙げられるがこれらに限定されない。任意の便宜のよいベクター固有のエレメントを、本明細書に記載のベクターにおいて適宜使用することができる。
いくつかの実施形態において、Ｇタンパク質阻害剤は、ミニジーンを含む単離された核酸から与えられ、前記ミニジーンは、修飾されたカルボキシ末端Ｇαペプチドをコードし、ペプチドは、ヒト細胞などの細胞のＧタンパク質とＧタンパク質共役受容体との相互作用部位を遮断する。さらに、ミニジーンは、プロモーター、リボソーム結合部位、翻訳開始コドン、及び翻訳終止コドンのうちの１つ以上をさらに含むことができる。いくつかの実施形態において、ミニジーンは、以下の一般式、すなわち、ＭＧＸ、ＭＸ、及びＭＺＸのうちの１つを有する修飾されたカルボキシ末端Ｇαペプチド（例えば、Ｇαｏ１ペプチド）をコードし、式中、Ｍはメチオニンアミノ酸残基であり、Ｇはグリシンアミノ酸残基であり、Ｚはグリシンアミノ酸残基以外のアミノ酸残基であり、Ｘは、Ｇαサブユニットのカルボキシ末端のアミノ酸配列を含み、Ｇタンパク質共役型受容体に結合する特性を有するカルボキシ末端Ｇαペプチドである。この実施形態では、Ｘは、少なくとも約３個の連続するアミノ酸～少なくとも約５４個の連続するアミノ酸、少なくとも約３個の連続するアミノ酸～少なくとも約１１個の連続するアミノ酸、及び少なくとも約１１個の連続するアミノ酸を含むことができる。一実施形態では、Ｘは、Ｇαサブユニットのカルボキシ末端の７個の連続する末端アミノ酸残基を含む。例えば、修飾されたカルボキシ末端Ｇαペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のうちの１つである（図９）。いくつかの実施形態において、修飾されたカルボキシ末端Ｇαペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のうちの１つと少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、またはそれらの間の範囲）の配列同一性を有する。
本発明の例示的な阻害剤としては、いずれも本明細書に参照によりその全容を援用する米国特許公開第２００３０１６２２５８号、同第２００７０２３１８３０号、及び同第２００７００７７５９７号に記載されるものが挙げられる。これらの参照文献は、追加の阻害剤を特定及び選択するための方法をさらに記載している。小分子、ＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス化合物、遺伝子操作、抗体などの他のＧタンパク質阻害剤については、例えば、いずれも参照によりその全容を援用する米国特許第８，５１８，８８４号；米国特許第８，１９３，１５１号；及び米国特許第６，５５９，１２８号に記載されている。
いくつかの実施形態において、本明細書の方法は、開心術を行っているＡＦの患者を治療することを含む。術後ＡＦは、心臓手術を行っている患者の３分の１以上で発生し、手術関連疾病率に大きく寄与している。開心術に加えて、低侵襲性心外膜アプローチによるアブレーション（ＰＶＩ）を行う外科医が益々増えている。既存のＡＦを治療する目的、または術後のＡＦを予防する目的で、本明細書に記載の導入遺伝子（複数可）は、これらの心外膜処置のいずれかにおいて心房に注入される。
いくつかの実施形態において、本明細書の組成物及び／または方法を投与される対象は、心房細動または本明細書に述べられる他の状態などの心臓状態を罹患している。かかる実施形態では、本明細書の組成物及び方法は、そのような状態を治療するために用いられる。いくつかの実施形態において、本明細書の組成物及び／または方法を投与される対象は、心房細動または本明細書に述べられる他の状態などの心臓状態のリスクを有する（例えば、そのリスク要因を有する）。かかる実施形態では、本明細書の組成物及び方法は、そのような状態を予防するために用いられる。
いくつかの実施形態において、本明細書の実施形態で投与される任意の薬剤の取り込み、発現、及び／または送達は、例えば、本明細書に参照によりそれらの全容を援用する米国特許第６，５５９，１２８号、米国特許第８，１９３，１５１号、米国特許第８，５１８，８８４号、米国特許第９，０７８，９１８号、米国特許第９，９３２，５８８号、米国特許第１０，３６９，３６０号、米国仮出願第６２／９６１，５１４号に記載される送達技術、装置、及び／または方法によって促進することができる。例えば、いくつかの実施形態は、送達を促進するための組織のエレクトロポレーションを含む。
本明細書では、心房細動または心不整脈の治療に関する様々な実施形態が記載されている。しかしながら、本明細書に記載される組成物及び方法（例えば、心房細動または心不整脈の治療のための）は、心臓の他の状態及び／または疾患の治療または予防に使用することもできる。いくつかの実施形態において、本発明は、大動脈解離、心不整脈（例えば、心房性心不整脈（例えば、心房期外収縮、移動性心房ペースメーカー、多発性心房頻拍、心房粗動、心房細動など）、房室接合部不整脈（例えば、上室性頻拍、洞房結節リエントリー性頻拍、発作性上室性頻拍、房室接合部調律、房室接合部頻拍、房室接合部期外複合など）、心房性心室性不整脈、心室性不整脈（例えば、心室性期外収縮、促進心室固有調律、単形性心房性頻拍、多形性心室性頻拍、心室細動など）など）、先天性心疾患、心筋梗塞、拡張性心筋症、肥大性心筋症、大動脈弁逆流症、大動脈弁狭窄症、僧帽弁逆流症、僧帽弁狭窄症、エリス・ファンクレフェルト症候群、家族性肥大型心筋症、ホルト・オーラム症候群、マルファン症候群、ワード・ロマノ症候群、及び／または同様の疾患及び症状のリストから選択される心疾患または状態の治療または予防を提供する。
〔実施例〕
実験
実施例１
高頻度心房ペーシング（ＲＡＰ）を行ったイヌにおけるＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡによる電気的リモデリングの逆転
ＯＳがＡＦにおける電気的リモデリングの形成／維持をもたらすとすれば、ＮＯＸ２の阻害は、電気的リモデリングが確立されたイヌにおけるＥＲＰ短縮を逆転させることになる。
実験
実施例１
高頻度心房ペーシング（ＲＡＰ）を行ったイヌにおけるＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡによる電気的リモデリングの逆転
ＯＳがＡＦにおける電気的リモデリングの形成／維持をもたらすとすれば、ＮＯＸ２の阻害は、電気的リモデリングが確立されたイヌにおけるＥＲＰ短縮を逆転させることになる。
イヌに３週間ＲＡＰを行い、その後、洞調律への電気的除細動及びＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡの注射を行う。イヌは、１週間洞調律に維持させ、遺伝子発現のための時間を与える。その後、ＲＡＰを再開し、ＡＦ再発までの時間を測定する。
抗不整脈薬及びアブレーションのいずれもＡＦの急性電気的除細動を得るうえでそれほど効果的ではないため、それらの有効性は通常、ＡＦの再発までの時間によって測定される（患者が洞調律に除細動またはアブレーションされた後）（参照文献２５，３５，３６；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。導入遺伝子の有効性を、イヌモデルにおけるＡＦの発症（または再発）までの時間を評価することによって調べる。
導入遺伝子の調製：ポリメラーゼＩＩＩプロモーター（Ｕ６）の制御下にあるプラスミドを使用して、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡまたはスクランブルしたｓｈＲＮＡを発現させる。このプロモーターを使用して数週間の遺伝子発現が得られている。
ＡＦのＲＡＰモデルの確立：心房ペースメーカーを、頸静脈アプローチを介して埋め込む（参照文献８；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。１週間後、ＲＡＰを６００脈拍／分×３週間で開始する。
開胸電気生理学的マッピング：３週間のＲＡＰの後、イヌを洞調律に除細動する。開胸マッピングを行う。有効不応期（ＥＲＰ）及び心房伝導率を評価する（参照文献８，１０，３７；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。
遺伝子の注入：ベースラインマッピングの後、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡまたはスクランブルしたｓｈＲＮＡのいずれかを両方の心房に注入する。
遺伝子注入のプロトコル：プラスミドを８ｍｌの生理食塩水で希釈し、心外膜下に注射する（各心房に４ｍｌずつ）。以前に記載されているように（参照文献１１～１２；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）、４～６回の注射は確実に心房全体をカバーする（各注射当たり０．５～１ｍｌ）。左心房注射にはＰＶ、ＰＬＡが含まれ、右心房注射にはＳＶＣ／ＲＡジャンクション、ＲＡ自由壁が含まれる。遺伝子注入後、本発明者等が以前に報告しているようにＧｅｎｅｔｒｏｄｅｓ（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を使用してエレクトロポレーションを行う（参照文献１１～１２，３８；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。
ＲＡＰの再開：洞調律での１週間の後、ＲＡＰを再開し、６ヶ月間（２６週間）またはＡＦの発症まで継続する。持続性ＡＦの再誘導までの時間をすべてのイヌで監視する。４８時間毎に３０～６０分間ペーシングを停止して持続性ＡＦについて評価を行う。持続性ＡＦは、この時間の間に終了しないＡＦとして定義される。
開胸マッピング：ＡＦが持続し始めた時点で、イヌを洞調律に除細動し、最終的な開胸試験を行う。ＥＲＰ、伝導率をベースラインで測定する（参照文献８～９；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。
データ分析：
電気生理学的分析：すべての電気生理学的変数（例えば、ＥＲＰ、伝導率不均一性指数、ＡＦ持続時間など）を異なる群間で比較する。各アクティブな遺伝子を、ボンフェローニ補正されたｔ検定を用いて、それぞれのコントロールと比較する。３つのアクティブな遺伝子群をＡＮＯＶＡ（次いでボンフェローニ補正された事後ｔ検定を行う）を用いて互いに比較し、ＡＦにおける電気的リモデリングを逆転させるうえで最も効果的な遺伝子群を決定する。有効サイズを男性と女性で別々に計算して性差の推定値を得る。
電気生理学的分析：すべての電気生理学的変数（例えば、ＥＲＰ、伝導率不均一性指数、ＡＦ持続時間など）を異なる群間で比較する。各アクティブな遺伝子を、ボンフェローニ補正されたｔ検定を用いて、それぞれのコントロールと比較する。３つのアクティブな遺伝子群をＡＮＯＶＡ（次いでボンフェローニ補正された事後ｔ検定を行う）を用いて互いに比較し、ＡＦにおける電気的リモデリングを逆転させるうえで最も効果的な遺伝子群を決定する。有効サイズを男性と女性で別々に計算して性差の推定値を得る。
遺伝子発現の均一性を、ＦＬＡＧ発現プラスミドを投与したイヌで心房の遺伝子注入領域から採取した心房切片の免疫蛍光を評価することによって評価する。
ｓｈＲＮＡによるＮＯＸ２のノックダウン：ＮＯＸ２のノックダウン率（％）を、ＲＴ－ＰＣＲ、ウエスタンブロッティングによって評価する。
酸化的損傷の抑制：タンパク質のカルボニル基を、ＤＮＰＨベースのイムノアッセイによって定量化する（参照文献３９；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。Ｏ２－生成量をルシゲニン化学発光によって評価する（参照文献１４；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。適切な基質を使用して、ＮＯＸ２及びミトコンドリアで生成されるＯ２－を測定する。
炎症：開胸アプローチ及び／または裸のＤＮＡのＣｐＧモチーフは、心房の炎症を引き起こす可能性がある（参照文献４０～４１；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）。心房の炎症を評価する（例えば、好中球／マクロファージ浸潤、アポトーシスなど）。
線維症：マッソントリクローム染色を行って線維症を定量化する。
シグナル伝達経路：ＲＯＳ活性化シグナル伝達経路を測定する（例えば、ＣＡＭＫＩＩ、ＰＫＣなど）。
実施例２
Ｃ末端Ｇαｉ／ｏ阻害ペプチド（Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ）を発現するミニジーンによる副交感神経シグナル伝達の標的化阻害は、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転する
副交感神経シグナル伝達が電気的リモデリングを引き起こす場合、Ｇαｉ／ｏ－ｃｔはＥＲＰ短縮を逆転させ、ＲＡＰにおけるＡＦの再誘導を防止／遅延させることになる。
Ｃ末端Ｇαｉ／ｏ阻害ペプチド（Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ）を発現するミニジーンによる副交感神経シグナル伝達の標的化阻害は、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転する
副交感神経シグナル伝達が電気的リモデリングを引き起こす場合、Ｇαｉ／ｏ－ｃｔはＥＲＰ短縮を逆転させ、ＲＡＰにおけるＡＦの再誘導を防止／遅延させることになる。
イヌに３週間ＲＡＰを行い、その後、洞調律への電気的除細動及び導入遺伝子（Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ）の注射を行う。イヌは、１週間洞調律に維持させ、遺伝子発現のための時間を与える。その後、ＲＡＰを再開し、６ヶ月間（２６週間）またはＡＦの発症まで継続する。最終試験において、ＥＲＰを決定する。イヌにＧαｉ／ｏ－ｃｔを発現するミニジーンを注射する（表１を参照）。長期作用型ヒトポリユビキチンＣ（ＵＢｃ）プロモーターの制御下にあるプラスミドを使用して、Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを発現させる。このプラスミドは、遺伝子発現の均一性を評価するためのマーカー遺伝子として使用されるＦＬＡＧタグも有している。交感神経及び副交感神経を染色し（参照文献３７，４２；本明細書に参照によりその開示内容の全体を援用する）、自律神経シグナル伝達タンパク質（例えば、ＰＫＡ、ｃＡＭＰなど）の発現／活性を評価する。
実施例３
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡとＧαｉ／ｏ－ｃｔを組み合わせて投与すると、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転させる。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡとＧαｉ／ｏ－ｃｔを組み合わせて投与すると、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転させる。
ＯＳと副交感神経シグナル伝達は、ＡＦの形成に相乗的に作用し、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔは、いずれかの遺伝子単独よりも効果的にＥＲＰ短縮を逆転させる。いくつかの実施形態において、Ｇαｉ／ｏ－ｃｔとＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡとの併用は、いずれかの遺伝子単独よりもＥＲＰ短縮の抑制により効果的であり、したがってＡＦを減少させる。
実施例４
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰを行ったイヌにおける電気的リモデリング及び副交感神経発芽を抑制する。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰを行ったイヌにおける電気的リモデリング及び副交感神経発芽を抑制する。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、心房にＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを心外膜下注射した後、心筋への遺伝子導入を促進するためにエレクトロポレーションを行った、ＲＡＰを行った７匹のイヌでＥＲＰ短縮／ＡＦを防止した。遺伝子注射及びエレクトロポレーション手順は、最初の４匹の動物ではＰＬＡに限定し、その後の３匹の動物では、左心房の自由壁、ＬＡＡ、及び右心房にも遺伝子注入を行った。スクランブルしたｓｈＲＮＡの注入を行った、または遺伝子注入を行わなかった１８匹の動物をコントロールとして使用した。図５Ａ及び５Ｂは、短期（すなわち、４週間のＲＡＰ）と長期（すなわち、１２週間のＲＡＰ）の両方でＡＦを評価するための実験計画の詳細を示す。遺伝子注入後、動物にＲＡＰを行い、その後、ＲＡＰが中断された期間中に誘導されたＡＦの持続時間を記録した。図５Ａは、ＲＡＰ開始後のＡＦの持続時間を示す。コントロール動物では中央値で４日間以内のＲＡＰで３０分間を超える持続的なＡＦを発症した（四分位範囲（ＩＱＲ）４～９日）のに対して、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与した動物ではこのＡＦ負荷を発症するまでに中央値で２１日を要した（ｐ＜０．０１））。各群３匹の動物を１２週間追跡して、持続性ＡＦ（８時間を超えるＡＦの持続時間として定義される）の発症を評価した。図５Ｂは、コントロール動物が８時間を超えるＡＦを発症するまでに中央値で１４日かかったことを示している。これに対して、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ動物が８時間を超えるＡＦを発症するまでには中央値で２８日を要した（ｐ＜０．０５）。記録された全期間にわたって、コントロール動物ではＡＦが中央値で６０分間（ＩＱＲ３０～６０分）持続したのに対して、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与した動物ではＡＦの持続時間は中央値で０分であった（ＩＱＲ０～２分）（ｐ＝０．００３）。ＥＲＰは、コントロールに対してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを投与したイヌで顕著に長かった（４６±２０ミリ秒に対して９７±５２ミリ秒；ｐ＜０．０５）。最終試験の後、ＮＯＸ２を測定し（ＰＣＲ、ウエスタンブロッティング）、ＮＧＦの発現を評価し（ＰＣＲ）、自律神経を染色した。ＮＯＸ２レベルは、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡにより、ＰＣＲ（減少率５０％，ｐ＜０．０５）及びウエスタンブロッティングで有意に減少した。ＮＧＦは、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入したＰＬＡで減少していた（約５０％のノックダウン率；ｐ＜０．０５）。免疫染色は、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入したＰＬＡは神経束の肥厚を示さず、ＲＡＰコントロールでは副交感神経の過剰支配がみられたことを示した（図３）。ＡＦにおけるＥＲＰ短縮に寄与する主要なイオンチャンネル（ＩＣａＬ、ＩＫ１、及び構成的に活性であるＩＫＡｃｈ（ＩＫＨと呼ばれる））のうち、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入した心房ではＩＫＨの振幅が有意に減少したことが発見された（データは、スペースの制約のために示さず）。結論：ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＲＡＰにより誘導されるＥＲＰ短縮、ＡＦ、及び副交感神経増殖を防止する。実験は、酸化的損傷によって誘導された副交感神経増殖がＡＦにおけるＥＲＰ短縮に寄与することを示している。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを注入したイヌのうち２匹を、遺伝子注入後８ヶ月間フォローした。これらのイヌは、フォローアップ期間全体を通じてＡＦを発症しなかった。培養した心房は、有意なＮＯＸ２の発現低下を継続的に示した。
実施例５
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＨＦモデルにおいて心房線維症を予防する
ＮＯＸ２によって生じる酸化的損傷は、ＨＦにおけるＡＦ基質の形成に重要な役割を果たす。このモデルは、心房線維症を誘発することでよく知られている。ＨＦの心房におけるＮＯＸ２の標的化阻害が心房線維症を予防することを実証するための実験を、本明細書における実施形態の開発時に行った。３匹の動物で、５～１０ｍｇのＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを心外膜下に左心房後部に注射し、続いてエレクトロポレーションを行った。５匹の動物にｐＵＢｃ－ＬａｃＺ（ＨＦコントロール）の注射を行った。次に、高頻度心室ペーシングを２４０ｂｐｍで３週間行った後、開胸マッピングを行った。左心房をＮＯＸ２ノックダウン（ＰＣＲ、ウエスタンブロット）及び線維症発生率（％）について調べた。ＡＦは有意に減少した（ＬａｃＺに対するＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＝６±０．６秒に対する６３６±１５１秒；ｐ＜０．０１）。ＬａｃＺを投与したイヌと比較してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡのＰＬＡではネイティブＮＯＸ２のノックダウン率は５０％超であった（図６；ｐ＜０．０１）。図７は、線維症（青色に染色、矢印）が、ＬａｃＺを注入したＰＬＡと比較してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡで有意に減少したことを示している（１８．８±１．５％に対して８．４±０．５％，ｐ＜０．０５）。結論：ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＨＦにおける心房線維症を低減させる。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＨＦモデルにおいて心房線維症を予防する
ＮＯＸ２によって生じる酸化的損傷は、ＨＦにおけるＡＦ基質の形成に重要な役割を果たす。このモデルは、心房線維症を誘発することでよく知られている。ＨＦの心房におけるＮＯＸ２の標的化阻害が心房線維症を予防することを実証するための実験を、本明細書における実施形態の開発時に行った。３匹の動物で、５～１０ｍｇのＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡを心外膜下に左心房後部に注射し、続いてエレクトロポレーションを行った。５匹の動物にｐＵＢｃ－ＬａｃＺ（ＨＦコントロール）の注射を行った。次に、高頻度心室ペーシングを２４０ｂｐｍで３週間行った後、開胸マッピングを行った。左心房をＮＯＸ２ノックダウン（ＰＣＲ、ウエスタンブロット）及び線維症発生率（％）について調べた。ＡＦは有意に減少した（ＬａｃＺに対するＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＝６±０．６秒に対する６３６±１５１秒；ｐ＜０．０１）。ＬａｃＺを投与したイヌと比較してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡのＰＬＡではネイティブＮＯＸ２のノックダウン率は５０％超であった（図６；ｐ＜０．０１）。図７は、線維症（青色に染色、矢印）が、ＬａｃＺを注入したＰＬＡと比較してＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡで有意に減少したことを示している（１８．８±１．５％に対して８．４±０．５％，ｐ＜０．０５）。結論：ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡは、ＨＦにおける心房線維症を低減させる。
実施例６
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ±Ｇαｉ／ｏ－ｃｔは、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転させる
持続性／継続性ＡＦ発症後の遺伝子注入を４匹の動物で行った。すべてのイヌに最初に２～４ヶ月間ＲＡＰを行って高度の電気的リモデリング及び持続性ＡＦを生じさせた。次に、イヌに以下の遺伝子を注入した。すなわち、ａ）ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ（Ｎ＝１）、ｂ）ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ（Ｎ＝２）、ｃ）スクランブルしたｓｈＲＮＡ（Ｎ＝１）（図８）。スクランブルしたｓｈＲＮＡを投与した動物は、遺伝子注入後の３ヶ月間のフォローアップ期間中、ＡＦを継続的に示した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡのみを投与したイヌは、遺伝子注入の数週間後に心房粗動に組織化されたが、ＡＦの発作を継続的に示した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与した２匹のイヌのうち、１匹のイヌが遺伝子注入の数週間後に心房粗動へと移行したが、このイヌは心房粗動を維持し、ＡＦの発作は示さなかった。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与したもう１匹のイヌは、遺伝子注射の２週間後に自発的に洞調律に移行した（図８）。このイヌはまだフォロー中である。ＮＯＸ２のターゲティング（Ｇαｉ／ｏの併用、または同時ターゲティングを伴う）は、ＡＦにおける電気的リモデリングを逆転させる。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与したイヌにおける安定した心房粗動及び／または洞調律への移行は、これらの遺伝子間の相乗作用の存在を示すものである。
ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ±Ｇαｉ／ｏ－ｃｔは、ＲＡＰにおける電気的リモデリングを逆転させる
持続性／継続性ＡＦ発症後の遺伝子注入を４匹の動物で行った。すべてのイヌに最初に２～４ヶ月間ＲＡＰを行って高度の電気的リモデリング及び持続性ＡＦを生じさせた。次に、イヌに以下の遺伝子を注入した。すなわち、ａ）ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ（Ｎ＝１）、ｂ）ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔ（Ｎ＝２）、ｃ）スクランブルしたｓｈＲＮＡ（Ｎ＝１）（図８）。スクランブルしたｓｈＲＮＡを投与した動物は、遺伝子注入後の３ヶ月間のフォローアップ期間中、ＡＦを継続的に示した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡのみを投与したイヌは、遺伝子注入の数週間後に心房粗動に組織化されたが、ＡＦの発作を継続的に示した。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与した２匹のイヌのうち、１匹のイヌが遺伝子注入の数週間後に心房粗動へと移行したが、このイヌは心房粗動を維持し、ＡＦの発作は示さなかった。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与したもう１匹のイヌは、遺伝子注射の２週間後に自発的に洞調律に移行した（図８）。このイヌはまだフォロー中である。ＮＯＸ２のターゲティング（Ｇαｉ／ｏの併用、または同時ターゲティングを伴う）は、ＡＦにおける電気的リモデリングを逆転させる。ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ＋Ｇαｉ／ｏ－ｃｔを投与したイヌにおける安定した心房粗動及び／または洞調律への移行は、これらの遺伝子間の相乗作用の存在を示すものである。
参照文献
その一部が上記で番号で引用されている以下の参照文献は、参照によってそれらの開示内容の全体を本明細書に援用するものである。
その一部が上記で番号で引用されている以下の参照文献は、参照によってそれらの開示内容の全体を本明細書に援用するものである。
１．Ｃａｌｋｉｎｓ Ｈ，Ｋｕｃｋ ＫＨ，Ｃａｐｐａｔｏ Ｒ，ｅｔ ａｌ．２０１２ ＨＲＳ／ＥＨＲＡ／ＥＣＡＳ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｏｎ Ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｎｄ Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐａｔｉｅｎｔ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ，ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ，ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ，ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｒｉａｌ ｄｅｓｉｇｎ．Ｅｕｒｏｐａｃｅ ２０１２；１４：５２８－６０６．
２．Ｎａｄｅｍａｎｅｅ Ｋ，ＭｃＫｅｎｚｉｅ Ｊ，Ｋｏｓａｒ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００４；４３：２０４４－５３．
３．Ｎａｄｅｍａｎｅｅ Ｋ，Ｓｃｈｗａｂ ＭＣ，Ｋｏｓａｒ ＥＭ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ｃａｔｈｅｔｅｒ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｉｇｈ－ｒｉｓｋ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００８；５１：８４３－９．
４．Ｅｓｔｎｅｒ ＨＬ，Ｈｅｓｓｌｉｎｇ Ｇ，Ｎｄｒｅｐｅｐａ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｍ－ｇｕｉｄｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｂｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｅｕｒｏｐａｃｅ ２００８；１０：１２８１－７．
５．Ｒａｈｍａｎ Ｆ，Ｋｗａｎ ＧＦ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ ＥＪ．Ｇｌｏｂａｌ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１６；１３：５０１．
６．Ｃｈｕｇｈ ＳＳ，Ｈａｖｍｏｅｌｌｅｒ Ｒ，Ｎａｒａｙａｎａｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ２０１０ Ｓｔｕｄｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１４；１２９：８３７－４７．
７．Ｋｉｒｃｈｈｏｆ Ｐ，Ｃａｌｋｉｎｓ Ｈ．Ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１７；３８：２０－６．
８．Ｎｇ Ｊ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ ａｎｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎｓ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ： ｃｒｅａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｄｙｎａｍｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１１；４：３８８－９６．
９．Ｋｏｄｕｒｉ Ｈ，Ｎｇ Ｊ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｍｓ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；５：６４０－９．
１０．Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｎｇ Ｊ，Ｕｌｐｈａｎｉ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００７；４９：１３４０－８．
１１．Ｋｕｎａｍａｌｌａ Ａ，Ｎｇ Ｊ，Ｐａｒｉｎｉ Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｏｍｉｎａｎｔ－Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＴＧＦ－ｂｅｔａ Ｔｙｐｅ ＩＩ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ Ｌｅｆｔ Ａｔｒｉｕｍ Ｌｅａｄｓ ｔｏ Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１６；１１９：６９－８２．
１２．Ａｉｓｔｒｕｐ ＧＬ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，Ｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｇａｌｐｈａ（ｉ／ｏ）－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖａｇａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｖａｇａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１１；８：１７２２－９．
１３．Ａｖｉｔａｌｌ Ｂ，Ｂｉ Ｊ，Ｍｙｋｙｔｓｅｙ Ａ，Ｃｈｉｃｏｓ Ａ．Ａｔｒｉａｌ ａｎｄ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｏ ｓｕｐｐｏｒｔ ｅａｒｌｙ ｒｈｙｔｈｍ ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２００８；５：８３９－４５．
１４．Ｋｉｍ ＹＭ，Ｇｕｚｉｋ ＴＪ，Ｚｈａｎｇ ＹＨ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｎｏｘ２ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ ｏｘｉｄａｓｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２００５；９７：６２９－３６．
１５．Ａｒｏｒａ Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｅａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｔｒｉａｌ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；５：８５０－９．
１６．Ｙｏｏ Ｓ ＧＧ，Ｗｒｅｎ Ｌ，Ａｉｓｔｒｕｐ Ｇ，Ｎｇ Ｊ，Ｇｏｒｄｏｎ Ｄ，Ｐａｓｓｍａｎ Ｒ，Ｋｎｉｇｈｔ Ｂ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇｅｒ Ｊ，Ａｒｏｒａ Ｒ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｎｏｖｅｌ Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｇαｉ／ｏ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１６；１３：Ｓ２００．
１７．Ｃａｍｍ ＡＪ．Ｈｏｐｅｓ ａｎｄ ｄｉｓａｐｐｏｉｎｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ ｄｒｕｇｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１７；２３７：７１－４．
１８．Ｂｅｎ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ Ｔ，Ｊａｒｅｄ Ｂｕｎｃｈ Ｔ，Ｇｅｒｓｈ ＢＪ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ ２００９；６：４６－５６．
１９．Ｇｉｌｌｉｎｏｖ ＡＭ，Ｓａｌｔｍａｎ ＡＥ．Ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｃａｒｄｉａｃ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｏｒａｃ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｓｕｒｇ ２００７；１９：２５－３２．
２０．Ｒａｈｍａｎ Ｆ，Ｋｗａｎ ＧＦ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ ＥＪ．Ｇｌｏｂａｌ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１４；１１：６３９－５４．
２１．Ｇｕｅｒｒａ Ｆ，Ｍａｔａｓｓｉｎｉ ＭＶ，Ｓｃａｐｐｉｎｉ Ｌ，Ｕｒｂｉｎａｔｉ Ａ，Ｃａｐｕｃｃｉ Ａ．Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｖｅｒｎａｋａｌａｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ｏｎｓｅｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｔｈｅｒ ２０１４；１２：１０６７－７５．
２２．Ｎａｃｃａｒｅｌｌｉ ＧＶ，Ｋｏｗｅｙ ＰＲ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｄｒｏｎｅｄａｒｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ／ｆｌｕｔｔｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ａｆｔｅｒｍａｔｈ ｏｆ ＰＡＬＬＡＳ．Ｃｕｒｒ Ｃａｒｄｉｏｌ Ｒｅｖ ２０１４；１０：３０３－８．
２３．Ａｎｄｒａｄｅ ＪＧ，Ｋｈａｉｒｙ Ｐ，Ｇｕｅｒｒａ ＰＧ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｃｒｙｏｂａｌｌｏｏｎ ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１１；８：１４４４－５１．
２４．Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ Ｒ，Ｍａｒｉｊｏｎ Ｅ，Ｃｏｍｂｅｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎｔａｃｔ－ｆｏｒｃｅ ｖａｌｕｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｅｔｔｅｒ ｍｉｄ－ｔｅｒｍ ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ａｂｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＳｍａｒｔＴｏｕｃｈ ｃａｔｈｅｔｅｒ．Ｅｕｒｏｐａｃｅ ２０１４．
２５．Ｎａｒａｙａｎ ＳＭ，Ｂａｙｋａｎｅｒ Ｔ，Ｃｌｏｐｔｏｎ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｏｔｏｒ ａｎｄ ｆｏｃａｌ ｓｏｕｒｃｅｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｌａｔｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒｉｇｇｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ａｌｏｎｅ：ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ ｏｆ ｔｈｅ ＣＯＮＦＩＲＭ ｔｒｉａｌ （Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ ｏｒ Ｗｉｔｈｏｕｔ Ｆｏｃａｌ Ｉｍｐｕｌｓｅ ａｎｄ Ｒｏｔｏｒ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１４；６３：１７６１－８．
２６．Ｈａｉｓｓａｇｕｅｒｒｅ Ｍ，Ｈｏｃｉｎｉ Ｍ，Ｄｅｎｉｓ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｉｖｅｒ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１４；１３０：５３０－８．
２７．Ｓｃｈｏｔｔｅｎ Ｕ，Ｖｅｒｈｅｕｌｅ Ｓ，Ｋｉｒｃｈｈｏｆ Ｐ，Ｇｏｅｔｔｅ Ａ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ： ａ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒａｉｓａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；９１：２６５－３２５．
２８．Ｚｓｅｂｏ Ｋ，Ｙａｒｏｓｈｉｎｓｋｙ Ａ，Ｒｕｄｙ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＡＡＶ１／ＳＥＲＣＡ２ａ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｖｅｎｔｓ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１４；１１４：１０１－８．
２９．Ｊｅｓｓｕｐ Ｍ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｂ，Ｍａｎｃｉｎｉ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｌｃｉｕｍ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｃａｒｄｉａｃ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＵＰＩＤ）：ａ ｐｈａｓｅ ２ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１１；１２４：３０４－１３．
３０．Ｊａｓｋｉ ＢＥ，Ｊｅｓｓｕｐ ＭＬ，Ｍａｎｃｉｎｉ ＤＭ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｌｃｉｕｍ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＵＰＩＤ Ｔｒｉａｌ），ａ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ ｐｈａｓｅ １／２ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ ２００９；１５：１７１－８１．
３１．Ｃｈｕｎｇ ＥＳ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｌ，Ｐａｔｅｌ ＡＮ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｔｕｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｙｅａｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｔｈｅ ＳＴＯＰ－ＨＦ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｐｈａｓｅ ＩＩ ｔｒｉａｌ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１５；３６：２２２８－３８．
３２．Ｐｅｎｎ ＭＳ，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ＦＯ，Ｓｃｈａｅｒ ＧＬ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ ｐｌａｓｍｉｄ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１３；１１２：８１６－２５．
３３．Ｓｕ ＣＨ，Ｗｕ ＹＪ，Ｗａｎｇ ＨＨ，Ｙｅｈ ＨＩ．Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；３０３：Ｈ６２９－３８．
３４．Ｂｉｋｏｕ Ｏ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｔｒａｐｐｅ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ４３ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１１；９２：２１８－２５．
３５．Ｐａｇｅ ＲＬ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ＳＪ，Ｃｒｉｊｎｓ ＨＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒｈｙｔｈｍ－ ａｎｄ ｒａｔｅ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｒｏｎｅｄａｒｏｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ（ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＡＴＨＥＮＡ ｔｒｉａｌ）．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１１；１０７：１０１９－２２．
３６．Ｂｏｅｒｓｍａ ＬＶ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｏｒｔ Ｐ，Ｄｅｂｒｕｙｎｅ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｌｔｉｅｌｅｃｔｒｏｄｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｖｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｖｅｒｓｕｓ Ｓｉｎｇｌｅ Ｔｉｐ Ｗｉｄｅ Ａｒｅａ Ｃａｔｈｅｔｅｒ Ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：Ａ Ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１６；９：ｅ００３１５１．
３７．Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｕｌｐｈａｎｉ ＪＳ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒａｌ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００８；２９４：Ｈ１３４－４４．
３８．Ａｉｓｔｒｕｐ ＧＬ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，Ｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｖａｇａｌ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２００９；８３：４８１－９２．
３９．Ｗｅｈｒ ＮＢ，Ｌｅｖｉｎｅ ＲＬ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１３；９６５：２６５－８１．
４０．Ｚａｋｋａｒ Ｍ，Ａｓｃｉｏｎｅ Ｒ，Ｊａｍｅｓ ＡＦ，Ａｎｇｅｌｉｎｉ ＧＤ，Ｓｕｌｅｉｍａｎ ＭＳ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２０１５；１５４：１３－２０．
４１．Ｈｙｄｅ ＳＣ，Ｐｒｉｎｇｌｅ ＩＡ，Ａｂｄｕｌｌａｈ Ｓ，ｅｔ ａｌ．ＣｐＧ－ｆｒｅｅ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｃｏｎｆｅｒ ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８；２６：５４９－５１．
４２．Ｕｌｐｈａｎｉ ＪＳ，Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｃａｉｎ ＪＨ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｏｆ Ｍａｒｓｈａｌｌ ａｓ ａ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｃｏｎｄｕｉｔ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００７；２９３：Ｈ１６２９－３５．
４３．Ｓｏｕｃｅｋ Ｒ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｋｅｌｅｍｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａ ｄｏｍｉｎａｎｔ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｎｔ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１２；９：２６５－７２．
４４．Ｔｒａｐｐｅ Ｋ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｂｉｋｏｕ Ｏ，ｅｔ ａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ ３：ａ ｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１３；３４：１４７－５７．
４５．Ｓｈｉｎ Ｙｏｏ，Ａｎｎａ Ｐｆｅｎｎｉｇｅｒ，Ｊａｃｏｂ Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｗｅｎｗｅｉ Ｚｈａｎｇ，Ｊａｓｏｎ Ｎｇ，Ａｍｙ Ｂｕｒｒｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｏｒｇ Ｇｕｓｓａｋ，Ｔｒｅｎｔ Ｗａｕｇｈ，Ｓｕｚａｎｎｅ Ｂｕｌｌ，Ｂｒａｎｄｏｎ Ｂｅｎｅｆｉｅｌｄ，Ｂｒａｄｌｅｙ Ｐ．Ｋｎｉｇｈｔ，Ｒｏｄ Ｐａｓｓｍａｎ，Ｊ．Ａｎｄｒｅｗ Ｗａｓｓｅｒｓｔｒｏｍ，Ｇａｒｙ Ｌ．Ａｉｓｔｒｕｐ，Ｒｉｓｈｉ Ａｒｏｒａ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＮＯＸ２－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ｉｎｊｕｒｙ ｗｉｔｈ ａ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｇｅｎｅ－Ｔｈｅｒａｐｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｃａｎｉｎｅ Ｍｏｄｅｌ．ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／７６５００８ ｈｔｔｐｓ：／／ｔ．ｃｏ／ＮＧ１ｌａ４３Ｕ５ｉ＃ｂｉｏｒｘｉｖ＿ｐｈｙｓｉｏ
配列
配列番号１（例示的なＮＯＸ２標的配列）- TATCCATTTCCAAGTCATAGG
配列番号２（ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡをコードする例示的なベクター）－aatgtagtcttatgcaatactcttgtagtcttgcaacatggtaacgatgagttagcaacatgccttacaaggagagaaaaagcaccgtgcatgccgattggtggaagtaaggtggtacgatcgtgccttattaggaaggcaacagacgggtctgacatggattggacgaaccactgaattgccgcattgcagagatattgtatttaagtgcctagctcgatacataaacgggtctctctggttagaccagatctgagcctgggagctctctggctaactagggaacccactgcttaagcctcaataaagcttgccttgagtgcttcaagtagtgtgtgcccgtctgttgtgtgactctggtaactagagatccctcagacccttttagtcagtgtggaaaatctctagcagtggcgcccgaacagggacttgaaagcgaaagggaaaccagaggagctctctcgacgcaggactcggcttgctgaagcgcgcacggcaagaggcgaggggcggcgactggtgagtacgccaaaaattttgactagcggaggctagaaggagagagatgggtgcgagagcgtcagtattaagcgggggagaattagatcgcgatgggaaaaaattcggttaaggccagggggaaagaaaaaatataaattaaaacatatagtatgggcaagcagggagctagaacgattcgcagttaatcctggcctgttagaaacatcagaaggctgtagacaaatactgggacagctacaaccatcccttcagacaggatcagaagaacttagatcattatataatacagtagcaaccctctattgtgtgcatcaaaggatagagataaaagacaccaaggaagctttagacaagatagaggaagagcaaaacaaaagtaagaccaccgcacagcaagcggccgctgatcttcagacctggaggaggagatatgagggacaattggagaagtgaattatataaatataaagtagtaaaaattgaaccattaggagtagcacccaccaaggcaaagagaagagtggtgcagagagaaaaaagagcagtgggaataggagctttgttccttgggttcttgggagcagcaggaagcactatgggcgcagcgtcaatgacgctgacggtacaggccagacaattattgtctggtatagtgcagcagcagaacaatttgctgagggctattgaggcgcaacagcatctgttgcaactcacagtctggggcatcaagcagctccaggcaagaatcctggctgtggaaagatacctaaaggatcaacagctcctggggatttggggttgctctggaaaactcatttgcaccactgctgtgccttggaatgctagttggagtaataaatctctggaacagatttggaatcacacgacctggatggagtgggacagagaaattaacaattacacaagcttaatacactccttaattgaagaatcgcaaaaccagcaagaaaagaatgaacaagaattattggaattagataaatgggcaagtttgtggaattggtttaacataacaaattggctgtggtatataaaattattcataatgatagtaggaggcttggtaggtttaagaatagtttttgctgtactttctatagtgaatagagttaggcagggatattcaccattatcgtttgagacccacctcccaaccccgaggggacccgacaggcccgaaggaatagaagaagaaggtggagagagagacagagacagatccattcgattagtgaacggatctcgacggtatcgatcacgagactagcctcgagcggccgcccccttcaccgagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattggaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccggtacaacagccacaacgtctatctcgagatagacgttgtggctgttgtatttttgaattctcgacctcgagacaaatggcagtattcatccacaattttaaaagaaaaggggggattggggggtacagtgcaggggaaagaatagtagacataatagcaacagacatacaaactaaagaattacaaaaacaaattacaaaaattcaaaattttcgggtttattacagggacagcagagatccactttggccgcggctcgagggggttggggttgcgccttttccaaggcagccctgggtttgcgcagggacgcggctgctctgggcgtggttccgggaaacgcagcggcgccgaccctgggtctcgcacattcttcacgtccgttcgcagcgtcacccggatcttcgccgctacccttgtgggccccccggcgacgcttcctgctccgcccctaagtcgggaaggttccttgcggttcgcggcgtgccggacgtgacaaacggaagccgcacgtctcactagtaccctcgcagacggacagcgccagggagcaatggcagcgcgccgaccgcgatgggctgtggccaatagcggctgctcagcagggcgcgccgagagcagcggccgggaaggggcggtgcgggaggcggggtgtggggcggtagtgtgggccctgttcctgcccgcgcggtgttccgcattctgcaagcctccggagcgcacgtcggcagtcggctccctcgttgaccgaatcaccgacctctctccccagggggatccaccggagcttaccatgaccgagtacaagcccacggtgcgcctcgccacccgcgacgacgtccccagggccgtacgcaccctcgccgccgcgttcgccgactaccccgccacgcgccacaccgtcgatccggaccgccacatcgagcgggtcaccgagctgcaagaactcttcctcacgcgcgtcgggctcgacatcggcaaggtgtgggtcgcggacgacggcgccgcggtggcggtctggaccacgccggagagcgtcgaagcgggggcggtgttcgccgagatcggcccgcgcatggccgagttgagcggttcccggctggccgagcagcaacagatggaaggcctcctggcgccgcaccggcccaaggagcccgcgtggttcctggccaccgtcggcgtctcgcccgaccaccagggcaagggtctgggcagcgccgtcgtgctccccggagtggaggcggccgagcgcgccggggtgcccgccttcctggagacctccgcgccccgcaacctccccttctacgagcggctcggcttcaccgtcaccgccgacgtcgaggtgcccgaaggaccgcgcacctggtgcatgacccgcaagcccggtgcctgacgcccgccccacgacccgcagcgcccgaccgaaaggagcgcacgaccccatgcatcggtacctttaagaccaatgacttacaaggcagctgtagatcttagccactttttaaaagaaaaggggggactggaagggctaattcactcccaacgaagacaagatctgctttttgcttgtactgggtctctctggttagaccagatctgagcctgggagctctctggctaactagggaacccactgcttaagcctcaataaagcttgccttgagtgcttcaagtagtgtgtgcccgtctgttgtgtgactctggtaactagagatccctcagacccttttagtcagtgtggaaaatctctagcagtagtagttcatgtcatcttattattcagtatttataacttgcaaagaaatgaatatcagagagtgagaggaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttatcatgtctggctctagctatcccgcccctaactccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgaggccgcctcggcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctagggacgtacccaattcgccctatagtgagtcgtattacgcgcgctcactggccgtcgttttacaacgtcgtgactgggaaaaccctggcgttacccaacttaatcgccttgcagcacatccccctttcgccagctggcgtaatagcgaagaggcccgcaccgatcgcccttcccaacagttgcgcagcctgaatggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgcttacaatttaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacggtgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgttcttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgcagttggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatcaggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgataccgctcgccgcagccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcccaatacgcaaaccgcctctccccgcgcgttggccgattcattaatgcagctggcacgacaggtttcccgactggaaagcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtgagttagctcactcattaggcaccccaggctttacactttatgcttccggctcgtatgttgtgtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcgcgcaattaaccctcactaaagggaacaaaagctggagctgcaagctt
配列番号３（例示的なＧαｉ阻害ペプチド；Ｇαｉ２サブユニットのＣ末端の１１個のアミノ酸） - IKNNLKDCGLF
配列番号４（Ｇαｏ阻害ペプチド；Ｇαｏ１サブユニットのＣ末端の１１個のアミノ酸） - IANNLRGCGLY
配列番号５～１９（例示的なＧタンパク質阻害ペプチド）－図９
配列番号２０～３３（Ｇタンパク質阻害ペプチドをコードする例示的なミニジーン）－図１０
配列番号３４（例示的なＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ）－ CCGCCTATGACTTGGAAATGGATACTCGAGTATCCATTTCCAAGTCATAGGTTTTTG
２．Ｎａｄｅｍａｎｅｅ Ｋ，ＭｃＫｅｎｚｉｅ Ｊ，Ｋｏｓａｒ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００４；４３：２０４４－５３．
３．Ｎａｄｅｍａｎｅｅ Ｋ，Ｓｃｈｗａｂ ＭＣ，Ｋｏｓａｒ ＥＭ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ｃａｔｈｅｔｅｒ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｉｇｈ－ｒｉｓｋ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００８；５１：８４３－９．
４．Ｅｓｔｎｅｒ ＨＬ，Ｈｅｓｓｌｉｎｇ Ｇ，Ｎｄｒｅｐｅｐａ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｍ－ｇｕｉｄｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ａｂｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｅｕｒｏｐａｃｅ ２００８；１０：１２８１－７．
５．Ｒａｈｍａｎ Ｆ，Ｋｗａｎ ＧＦ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ ＥＪ．Ｇｌｏｂａｌ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１６；１３：５０１．
６．Ｃｈｕｇｈ ＳＳ，Ｈａｖｍｏｅｌｌｅｒ Ｒ，Ｎａｒａｙａｎａｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ２０１０ Ｓｔｕｄｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１４；１２９：８３７－４７．
７．Ｋｉｒｃｈｈｏｆ Ｐ，Ｃａｌｋｉｎｓ Ｈ．Ｃａｔｈｅｔｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１７；３８：２０－６．
８．Ｎｇ Ｊ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ ａｎｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎｓ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ： ｃｒｅａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｄｙｎａｍｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１１；４：３８８－９６．
９．Ｋｏｄｕｒｉ Ｈ，Ｎｇ Ｊ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｍｓ ｉｎ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；５：６４０－９．
１０．Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｎｇ Ｊ，Ｕｌｐｈａｎｉ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００７；４９：１３４０－８．
１１．Ｋｕｎａｍａｌｌａ Ａ，Ｎｇ Ｊ，Ｐａｒｉｎｉ Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ Ｄｏｍｉｎａｎｔ－Ｎｅｇａｔｉｖｅ ＴＧＦ－ｂｅｔａ Ｔｙｐｅ ＩＩ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ Ｌｅｆｔ Ａｔｒｉｕｍ Ｌｅａｄｓ ｔｏ Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１６；１１９：６９－８２．
１２．Ａｉｓｔｒｕｐ ＧＬ，Ｃｏｋｉｃ Ｉ，Ｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｇａｌｐｈａ（ｉ／ｏ）－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖａｇａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｖａｇａｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１１；８：１７２２－９．
１３．Ａｖｉｔａｌｌ Ｂ，Ｂｉ Ｊ，Ｍｙｋｙｔｓｅｙ Ａ，Ｃｈｉｃｏｓ Ａ．Ａｔｒｉａｌ ａｎｄ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｏ ｓｕｐｐｏｒｔ ｅａｒｌｙ ｒｈｙｔｈｍ ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２００８；５：８３９－４５．
１４．Ｋｉｍ ＹＭ，Ｇｕｚｉｋ ＴＪ，Ｚｈａｎｇ ＹＨ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｎｏｘ２ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ ｏｘｉｄａｓｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ． Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２００５；９７：６２９－３６．
１５．Ａｒｏｒａ Ｒ．Ｒｅｃｅｎｔ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｅａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｔｒｉａｌ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；５：８５０－９．
１６．Ｙｏｏ Ｓ ＧＧ，Ｗｒｅｎ Ｌ，Ａｉｓｔｒｕｐ Ｇ，Ｎｇ Ｊ，Ｇｏｒｄｏｎ Ｄ，Ｐａｓｓｍａｎ Ｒ，Ｋｎｉｇｈｔ Ｂ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇｅｒ Ｊ，Ａｒｏｒａ Ｒ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｎｅｒｖｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｎｏｖｅｌ Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｇαｉ／ｏ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１６；１３：Ｓ２００．
１７．Ｃａｍｍ ＡＪ．Ｈｏｐｅｓ ａｎｄ ｄｉｓａｐｐｏｉｎｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ ｄｒｕｇｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１７；２３７：７１－４．
１８．Ｂｅｎ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ Ｔ，Ｊａｒｅｄ Ｂｕｎｃｈ Ｔ，Ｇｅｒｓｈ ＢＪ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ ２００９；６：４６－５６．
１９．Ｇｉｌｌｉｎｏｖ ＡＭ，Ｓａｌｔｍａｎ ＡＥ．Ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｃａｒｄｉａｃ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｏｒａｃ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｓｕｒｇ ２００７；１９：２５－３２．
２０．Ｒａｈｍａｎ Ｆ，Ｋｗａｎ ＧＦ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ ＥＪ．Ｇｌｏｂａｌ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１４；１１：６３９－５４．
２１．Ｇｕｅｒｒａ Ｆ，Ｍａｔａｓｓｉｎｉ ＭＶ，Ｓｃａｐｐｉｎｉ Ｌ，Ｕｒｂｉｎａｔｉ Ａ，Ｃａｐｕｃｃｉ Ａ．Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｖｅｒｎａｋａｌａｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ｏｎｓｅｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｔｈｅｒ ２０１４；１２：１０６７－７５．
２２．Ｎａｃｃａｒｅｌｌｉ ＧＶ，Ｋｏｗｅｙ ＰＲ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｄｒｏｎｅｄａｒｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ／ｆｌｕｔｔｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ａｆｔｅｒｍａｔｈ ｏｆ ＰＡＬＬＡＳ．Ｃｕｒｒ Ｃａｒｄｉｏｌ Ｒｅｖ ２０１４；１０：３０３－８．
２３．Ａｎｄｒａｄｅ ＪＧ，Ｋｈａｉｒｙ Ｐ，Ｇｕｅｒｒａ ＰＧ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｃｒｙｏｂａｌｌｏｏｎ ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１１；８：１４４４－５１．
２４．Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ Ｒ，Ｍａｒｉｊｏｎ Ｅ，Ｃｏｍｂｅｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎｔａｃｔ－ｆｏｒｃｅ ｖａｌｕｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｂｅｔｔｅｒ ｍｉｄ－ｔｅｒｍ ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ａｂｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＳｍａｒｔＴｏｕｃｈ ｃａｔｈｅｔｅｒ．Ｅｕｒｏｐａｃｅ ２０１４．
２５．Ｎａｒａｙａｎ ＳＭ，Ｂａｙｋａｎｅｒ Ｔ，Ｃｌｏｐｔｏｎ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｏｔｏｒ ａｎｄ ｆｏｃａｌ ｓｏｕｒｃｅｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｌａｔｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒｉｇｇｅｒ ａｂｌａｔｉｏｎ ａｌｏｎｅ：ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ ｏｆ ｔｈｅ ＣＯＮＦＩＲＭ ｔｒｉａｌ （Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ ｏｒ Ｗｉｔｈｏｕｔ Ｆｏｃａｌ Ｉｍｐｕｌｓｅ ａｎｄ Ｒｏｔｏｒ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１４；６３：１７６１－８．
２６．Ｈａｉｓｓａｇｕｅｒｒｅ Ｍ，Ｈｏｃｉｎｉ Ｍ，Ｄｅｎｉｓ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｉｖｅｒ ｄｏｍａｉｎｓ ｉｎ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１４；１３０：５３０－８．
２７．Ｓｃｈｏｔｔｅｎ Ｕ，Ｖｅｒｈｅｕｌｅ Ｓ，Ｋｉｒｃｈｈｏｆ Ｐ，Ｇｏｅｔｔｅ Ａ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ： ａ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒａｉｓａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ ２０１１；９１：２６５－３２５．
２８．Ｚｓｅｂｏ Ｋ，Ｙａｒｏｓｈｉｎｓｋｙ Ａ，Ｒｕｄｙ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＡＡＶ１／ＳＥＲＣＡ２ａ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｖｅｎｔｓ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１４；１１４：１０１－８．
２９．Ｊｅｓｓｕｐ Ｍ，Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｂ，Ｍａｎｃｉｎｉ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｌｃｉｕｍ Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｃａｒｄｉａｃ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＵＰＩＤ）：ａ ｐｈａｓｅ ２ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｓａｒｃｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１１；１２４：３０４－１３．
３０．Ｊａｓｋｉ ＢＥ，Ｊｅｓｓｕｐ ＭＬ，Ｍａｎｃｉｎｉ ＤＭ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｌｃｉｕｍ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＵＰＩＤ Ｔｒｉａｌ），ａ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ ｐｈａｓｅ １／２ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ ２００９；１５：１７１－８１．
３１．Ｃｈｕｎｇ ＥＳ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｌ，Ｐａｔｅｌ ＡＮ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｔｕｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｙｅａｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ ｎｏｎ－ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｔｈｅ ＳＴＯＰ－ＨＦ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｐｈａｓｅ ＩＩ ｔｒｉａｌ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１５；３６：２２２８－３８．
３２．Ｐｅｎｎ ＭＳ，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ＦＯ，Ｓｃｈａｅｒ ＧＬ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ ｐｌａｓｍｉｄ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ ２０１３；１１２：８１６－２５．
３３．Ｓｕ ＣＨ，Ｗｕ ＹＪ，Ｗａｎｇ ＨＨ，Ｙｅｈ ＨＩ．Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；３０３：Ｈ６２９－３８．
３４．Ｂｉｋｏｕ Ｏ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｔｒａｐｐｅ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ４３ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１１；９２：２１８－２５．
３５．Ｐａｇｅ ＲＬ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ＳＪ，Ｃｒｉｊｎｓ ＨＪ，ｅｔ ａｌ．Ｒｈｙｔｈｍ－ ａｎｄ ｒａｔｅ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｒｏｎｅｄａｒｏｎｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ（ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＡＴＨＥＮＡ ｔｒｉａｌ）．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ ２０１１；１０７：１０１９－２２．
３６．Ｂｏｅｒｓｍａ ＬＶ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｏｒｔ Ｐ，Ｄｅｂｒｕｙｎｅ Ｐ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｌｔｉｅｌｅｃｔｒｏｄｅ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｖｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｖｅｒｓｕｓ Ｓｉｎｇｌｅ Ｔｉｐ Ｗｉｄｅ Ａｒｅａ Ｃａｔｈｅｔｅｒ Ａｂｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：Ａ Ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ．Ｃｉｒｃ Ａｒｒｈｙｔｈｍ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌ ２０１６；９：ｅ００３１５１．
３７．Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｕｌｐｈａｎｉ ＪＳ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒａｌ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｌｅｆｔ ａｔｒｉｕｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００８；２９４：Ｈ１３４－４４．
３８．Ａｉｓｔｒｕｐ ＧＬ，Ｖｉｌｌｕｅｎｄａｓ Ｒ，Ｎｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｖａｇａｌ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２００９；８３：４８１－９２．
３９．Ｗｅｈｒ ＮＢ，Ｌｅｖｉｎｅ ＲＬ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１３；９６５：２６５－８１．
４０．Ｚａｋｋａｒ Ｍ，Ａｓｃｉｏｎｅ Ｒ，Ｊａｍｅｓ ＡＦ，Ａｎｇｅｌｉｎｉ ＧＤ，Ｓｕｌｅｉｍａｎ ＭＳ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２０１５；１５４：１３－２０．
４１．Ｈｙｄｅ ＳＣ，Ｐｒｉｎｇｌｅ ＩＡ，Ａｂｄｕｌｌａｈ Ｓ，ｅｔ ａｌ．ＣｐＧ－ｆｒｅｅ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｃｏｎｆｅｒ ｒｅｄｕｃｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００８；２６：５４９－５１．
４２．Ｕｌｐｈａｎｉ ＪＳ，Ａｒｏｒａ Ｒ，Ｃａｉｎ ＪＨ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｏｆ Ｍａｒｓｈａｌｌ ａｓ ａ ｐａｒａｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｃｏｎｄｕｉｔ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００７；２９３：Ｈ１６２９－３５．
４３．Ｓｏｕｃｅｋ Ｒ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｋｅｌｅｍｅｎ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａ ｄｏｍｉｎａｎｔ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｎｔ．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ ２０１２；９：２６５－７２．
４４．Ｔｒａｐｐｅ Ｋ，Ｔｈｏｍａｓ Ｄ，Ｂｉｋｏｕ Ｏ，ｅｔ ａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ｃａｓｐａｓｅ ３：ａ ｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２０１３；３４：１４７－５７．
４５．Ｓｈｉｎ Ｙｏｏ，Ａｎｎａ Ｐｆｅｎｎｉｇｅｒ，Ｊａｃｏｂ Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｗｅｎｗｅｉ Ｚｈａｎｇ，Ｊａｓｏｎ Ｎｇ，Ａｍｙ Ｂｕｒｒｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇｅｏｒｇ Ｇｕｓｓａｋ，Ｔｒｅｎｔ Ｗａｕｇｈ，Ｓｕｚａｎｎｅ Ｂｕｌｌ，Ｂｒａｎｄｏｎ Ｂｅｎｅｆｉｅｌｄ，Ｂｒａｄｌｅｙ Ｐ．Ｋｎｉｇｈｔ，Ｒｏｄ Ｐａｓｓｍａｎ，Ｊ．Ａｎｄｒｅｗ Ｗａｓｓｅｒｓｔｒｏｍ，Ｇａｒｙ Ｌ．Ａｉｓｔｒｕｐ，Ｒｉｓｈｉ Ａｒｏｒａ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＮＯＸ２－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ Ｉｎｊｕｒｙ ｗｉｔｈ ａ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｇｅｎｅ－Ｔｈｅｒａｐｙ Ａｐｐｒｏａｃｈ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｃａｎｉｎｅ Ｍｏｄｅｌ．ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／７６５００８ ｈｔｔｐｓ：／／ｔ．ｃｏ／ＮＧ１ｌａ４３Ｕ５ｉ＃ｂｉｏｒｘｉｖ＿ｐｈｙｓｉｏ
配列
配列番号１（例示的なＮＯＸ２標的配列）- TATCCATTTCCAAGTCATAGG
配列番号２（ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡをコードする例示的なベクター）－aatgtagtcttatgcaatactcttgtagtcttgcaacatggtaacgatgagttagcaacatgccttacaaggagagaaaaagcaccgtgcatgccgattggtggaagtaaggtggtacgatcgtgccttattaggaaggcaacagacgggtctgacatggattggacgaaccactgaattgccgcattgcagagatattgtatttaagtgcctagctcgatacataaacgggtctctctggttagaccagatctgagcctgggagctctctggctaactagggaacccactgcttaagcctcaataaagcttgccttgagtgcttcaagtagtgtgtgcccgtctgttgtgtgactctggtaactagagatccctcagacccttttagtcagtgtggaaaatctctagcagtggcgcccgaacagggacttgaaagcgaaagggaaaccagaggagctctctcgacgcaggactcggcttgctgaagcgcgcacggcaagaggcgaggggcggcgactggtgagtacgccaaaaattttgactagcggaggctagaaggagagagatgggtgcgagagcgtcagtattaagcgggggagaattagatcgcgatgggaaaaaattcggttaaggccagggggaaagaaaaaatataaattaaaacatatagtatgggcaagcagggagctagaacgattcgcagttaatcctggcctgttagaaacatcagaaggctgtagacaaatactgggacagctacaaccatcccttcagacaggatcagaagaacttagatcattatataatacagtagcaaccctctattgtgtgcatcaaaggatagagataaaagacaccaaggaagctttagacaagatagaggaagagcaaaacaaaagtaagaccaccgcacagcaagcggccgctgatcttcagacctggaggaggagatatgagggacaattggagaagtgaattatataaatataaagtagtaaaaattgaaccattaggagtagcacccaccaaggcaaagagaagagtggtgcagagagaaaaaagagcagtgggaataggagctttgttccttgggttcttgggagcagcaggaagcactatgggcgcagcgtcaatgacgctgacggtacaggccagacaattattgtctggtatagtgcagcagcagaacaatttgctgagggctattgaggcgcaacagcatctgttgcaactcacagtctggggcatcaagcagctccaggcaagaatcctggctgtggaaagatacctaaaggatcaacagctcctggggatttggggttgctctggaaaactcatttgcaccactgctgtgccttggaatgctagttggagtaataaatctctggaacagatttggaatcacacgacctggatggagtgggacagagaaattaacaattacacaagcttaatacactccttaattgaagaatcgcaaaaccagcaagaaaagaatgaacaagaattattggaattagataaatgggcaagtttgtggaattggtttaacataacaaattggctgtggtatataaaattattcataatgatagtaggaggcttggtaggtttaagaatagtttttgctgtactttctatagtgaatagagttaggcagggatattcaccattatcgtttgagacccacctcccaaccccgaggggacccgacaggcccgaaggaatagaagaagaaggtggagagagagacagagacagatccattcgattagtgaacggatctcgacggtatcgatcacgagactagcctcgagcggccgcccccttcaccgagggcctatttcccatgattccttcatatttgcatatacgatacaaggctgttagagagataattggaattaatttgactgtaaacacaaagatattagtacaaaatacgtgacgtagaaagtaataatttcttgggtagtttgcagttttaaaattatgttttaaaatggactatcatatgcttaccgtaacttgaaagtatttcgatttcttggctttatatatcttgtggaaaggacgaaacaccggtacaacagccacaacgtctatctcgagatagacgttgtggctgttgtatttttgaattctcgacctcgagacaaatggcagtattcatccacaattttaaaagaaaaggggggattggggggtacagtgcaggggaaagaatagtagacataatagcaacagacatacaaactaaagaattacaaaaacaaattacaaaaattcaaaattttcgggtttattacagggacagcagagatccactttggccgcggctcgagggggttggggttgcgccttttccaaggcagccctgggtttgcgcagggacgcggctgctctgggcgtggttccgggaaacgcagcggcgccgaccctgggtctcgcacattcttcacgtccgttcgcagcgtcacccggatcttcgccgctacccttgtgggccccccggcgacgcttcctgctccgcccctaagtcgggaaggttccttgcggttcgcggcgtgccggacgtgacaaacggaagccgcacgtctcactagtaccctcgcagacggacagcgccagggagcaatggcagcgcgccgaccgcgatgggctgtggccaatagcggctgctcagcagggcgcgccgagagcagcggccgggaaggggcggtgcgggaggcggggtgtggggcggtagtgtgggccctgttcctgcccgcgcggtgttccgcattctgcaagcctccggagcgcacgtcggcagtcggctccctcgttgaccgaatcaccgacctctctccccagggggatccaccggagcttaccatgaccgagtacaagcccacggtgcgcctcgccacccgcgacgacgtccccagggccgtacgcaccctcgccgccgcgttcgccgactaccccgccacgcgccacaccgtcgatccggaccgccacatcgagcgggtcaccgagctgcaagaactcttcctcacgcgcgtcgggctcgacatcggcaaggtgtgggtcgcggacgacggcgccgcggtggcggtctggaccacgccggagagcgtcgaagcgggggcggtgttcgccgagatcggcccgcgcatggccgagttgagcggttcccggctggccgagcagcaacagatggaaggcctcctggcgccgcaccggcccaaggagcccgcgtggttcctggccaccgtcggcgtctcgcccgaccaccagggcaagggtctgggcagcgccgtcgtgctccccggagtggaggcggccgagcgcgccggggtgcccgccttcctggagacctccgcgccccgcaacctccccttctacgagcggctcggcttcaccgtcaccgccgacgtcgaggtgcccgaaggaccgcgcacctggtgcatgacccgcaagcccggtgcctgacgcccgccccacgacccgcagcgcccgaccgaaaggagcgcacgaccccatgcatcggtacctttaagaccaatgacttacaaggcagctgtagatcttagccactttttaaaagaaaaggggggactggaagggctaattcactcccaacgaagacaagatctgctttttgcttgtactgggtctctctggttagaccagatctgagcctgggagctctctggctaactagggaacccactgcttaagcctcaataaagcttgccttgagtgcttcaagtagtgtgtgcccgtctgttgtgtgactctggtaactagagatccctcagacccttttagtcagtgtggaaaatctctagcagtagtagttcatgtcatcttattattcagtatttataacttgcaaagaaatgaatatcagagagtgagaggaacttgtttattgcagcttataatggttacaaataaagcaatagcatcacaaatttcacaaataaagcatttttttcactgcattctagttgtggtttgtccaaactcatcaatgtatcttatcatgtctggctctagctatcccgcccctaactccgcccatcccgcccctaactccgcccagttccgcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgaggccgcctcggcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctagggacgtacccaattcgccctatagtgagtcgtattacgcgcgctcactggccgtcgttttacaacgtcgtgactgggaaaaccctggcgttacccaacttaatcgccttgcagcacatccccctttcgccagctggcgtaatagcgaagaggcccgcaccgatcgcccttcccaacagttgcgcagcctgaatggcgaatgggacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgcttacaatttaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacggtgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgttcttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgcagttggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatcaggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgttctttcctgcgttatcccctgattctgtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgataccgctcgccgcagccgaacgaccgagcgcagcgagtcagtgagcgaggaagcggaagagcgcccaatacgcaaaccgcctctccccgcgcgttggccgattcattaatgcagctggcacgacaggtttcccgactggaaagcgggcagtgagcgcaacgcaattaatgtgagttagctcactcattaggcaccccaggctttacactttatgcttccggctcgtatgttgtgtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcgcgcaattaaccctcactaaagggaacaaaagctggagctgcaagctt
配列番号３（例示的なＧαｉ阻害ペプチド；Ｇαｉ２サブユニットのＣ末端の１１個のアミノ酸） - IKNNLKDCGLF
配列番号４（Ｇαｏ阻害ペプチド；Ｇαｏ１サブユニットのＣ末端の１１個のアミノ酸） - IANNLRGCGLY
配列番号５～１９（例示的なＧタンパク質阻害ペプチド）－図９
配列番号２０～３３（Ｇタンパク質阻害ペプチドをコードする例示的なミニジーン）－図１０
配列番号３４（例示的なＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡ）－ CCGCCTATGACTTGGAAATGGATACTCGAGTATCCATTTCCAAGTCATAGGTTTTTG
Claims (40)
- 対象の心臓の電気的リモデリング及び／または心房細動を予防または逆転させる方法であって、有効量の以下のもの：
（ａ）ＮＡＤＰＨオキシダーゼ２（ＮＯＸ２）阻害剤、及び／または
（ｂ）（ｉ）Ｇαｉ阻害ペプチド、またはＧαｉ阻害ペプチドをコードする核酸、及び／または
（ｉｉ）Ｇαｏ阻害ペプチド、またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸、
を前記対象に投与することを含み、前記投与することが、あるレベルの心臓の電気的リモデリング及び／または心房細動が予防、低減、または消失するような条件下で行われる、前記方法。 - 前記ＮＯＸ２阻害剤が、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤である、請求項１に記載の方法。
- ＮＯＸ２遺伝子発現の前記核酸阻害剤が、ＮＯＸ２ ｓｉＲＮＡである、請求項２に記載の方法。
- ＮＯＸ２遺伝子発現の前記核酸阻害剤が、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡである、請求項２に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡが、配列番号３４を含む、請求項４に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドが、Ｇαｉ２阻害ペプチドである、請求項１に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドが、Ｃ末端Ｇαｉ阻害ペプチドである、請求項６に記載の方法。
- 前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、Ｇαｏ１阻害ペプチドである、請求項１に記載の方法。
- 前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、Ｃ末端Ｇαｏ阻害ペプチドである、請求項１に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチド及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、ミニジーンとして投与され、ミニジーンから発現される、請求項１に記載の方法。
- 前記ミニジーンがプラスミド上に存在する、請求項１０に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドと前記Ｇαｏ阻害ペプチドが同時投与される、請求項１に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドと前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、１：１０～１０：１の比で同時投与される、請求項１２に記載の方法。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドと前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、１：１の比で同時投与される、請求項１３に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２阻害剤が、前記Ｇαｉ阻害ペプチド及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドと同時投与される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２阻害剤、前記Ｇαｉ阻害ペプチド、及び前記Ｇαｏ阻害ペプチドが同時投与される、請求項１５に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２阻害剤、前記Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドが心筋組織に投与される、請求項１に記載の方法。
- 前記投与の前、その間、またはその後に前記心筋組織をエレクトロポレーションすることをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
- 前記心筋組織が、心房組織または心室組織の少なくとも一方を含む、請求項１７に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２阻害剤、前記Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、心内膜または心外膜に投与される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＮＯＸ２阻害剤、前記Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、前記対象の冠状血管構造のセグメントに投与され、前記対象の標的冠状組織がエレクトロポレーションされる、請求項１に記載の方法。
- 前記不整脈が、心房細動を含む、請求項１に記載の方法。
- 有効量の前記ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドを前記対象に投与することが、前記ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドをコード及び発現する単離された治療用ＤＮＡを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
- 有効量の前記ＮＯＸ２阻害剤、Ｇαｉ阻害ペプチド、及び／またはＧαｏ阻害ペプチドを前記対象投与することが、前記単離された治療用ＤＮＡを注入することを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記対象が、心房性または心室性不整脈、心室不全、または心不全のうちの１つ以上に罹患している、請求項１に記載の方法。
- 前記不整脈が、心房細動を含む、請求項２５に記載の方法。
- （ａ）ＮＡＤＰＨオキシダーゼ２（ＮＯＸ２）阻害剤、及び
（ｂ）（ｉ）Ｇαｉ阻害ペプチド、またはＧαｉ阻害ペプチドをコードする核酸、及び／または
（ｉｉ）Ｇαｏ阻害ペプチド、またはＧαｏ阻害ペプチドをコードする核酸を含む、医薬組成物。 - 前記ＮＯＸ２阻害剤が、ＮＯＸ２遺伝子発現の核酸阻害剤である、請求項２７に記載の医薬組成物。
- ＮＯＸ２遺伝子発現の前記核酸阻害剤が、ＮＯＸ２ ｓｉＲＮＡである、請求項２８に記載の医薬組成物。
- ＮＯＸ２遺伝子発現の前記核酸阻害剤が、ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡである、請求項２８に記載の医薬組成物。
- 前記ＮＯＸ２ ｓｈＲＮＡが、配列番号３４を含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドが、Ｇαｉ２阻害ペプチドである、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドが、Ｃ末端Ｇαｉ阻害ペプチドである、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、Ｇαｏ１阻害ペプチドである、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、Ｃ末端Ｇαｏ阻害ペプチドである、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチド及び／または前記Ｇαｏ阻害ペプチドが、ミニジーンとして投与され、ミニジーンから発現される、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記ミニジーンがプラスミド上に存在する、請求項３６に記載の医薬組成物。
- Ｇαｉ阻害ペプチド及びＧαｏ阻害ペプチドの両方を含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドと前記Ｇαｏ阻害ペプチドとを１：１０～１０：１の比で含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
- 前記Ｇαｉ阻害ペプチドと前記Ｇαｏ阻害ペプチドとを１：１の比で含む、請求項３９に記載の医薬組成物。
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