JP2022511786A - 新規芳香族化合物によるナチュラルキラー細胞およびｉｌｃ３細胞の増殖 - Google Patents

新規芳香族化合物によるナチュラルキラー細胞およびｉｌｃ３細胞の増殖 Download PDF

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Abstract

幹細胞動員因子を含む培地を用いた３段階の増殖および分化の方法を使用して、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書に提供される。また、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を使用して、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法、ならびに癌またはウイルス感染を有する個体に、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を投与することを含む、癌またはウイルス感染を有する個体を治療する方法も、本明細書に提供される。【選択図】なし

Description

幹細胞動員因子を含む培地中の造血幹細胞または前駆細胞の集団から、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞の集団を産生する方法が、本明細書で提供され、例えば、胎盤の細胞、例えば、胎盤灌流液（例えば、ヒト胎盤灌流液）または他の組織（例えば、臍帯血または末梢血由来の造血幹細胞もしくは前駆細胞）から始めて、幹細胞動員因子を含む培地でＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を産生する３段階法が提供される。胎盤灌流液を使用して、本明細書に記載のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞および／またはＮＫ前駆細胞を、例えば、腫瘍細胞の増殖を抑制するか、または病原体感染（例えば、ウイルス感染）を阻害する方法が、本明細書にさらに提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびに／あるいはＮＫ前駆細胞は、１つ以上の免疫調節化合物と組み合わせて使用される、かつ／またはそれで処理される。
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の主要成分を構成する細胞傷害性リンパ球である。
ＮＫ細胞は、インターフェロンまたはマクロファージ由来サイトカインに応答して活性化される。ＮＫ細胞の細胞傷害活性は、「活性化受容体」または「抑制性受容体」と見なされ得る２つのタイプの表面受容体によって主に調節されているが、一部の受容体、例えば、ＣＤ９４および２Ｂ４（ＣＤ２４４）は、リガンド相互作用に応じていずれかの方法で作用することができる。
ＮＫ細胞は、他の活性の中でも、腫瘍の宿主拒絶において役割を果たし、ウイルス感染細胞を死滅させ得ることが示されている。ナチュラルキラー細胞は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質を欠いているか、または減少したレベルを示す細胞によって活性化され得る。自己ＭＨＣクラスＩの発現レベルの変化または低減を有する癌細胞では、ＮＫ細胞感受性が誘導される。末梢血由来の活性化ＮＫ細胞および増殖ＮＫ細胞、ならびに場合によってＬＡＫ細胞は、進行癌を有する患者のエクスビボ療法およびインビボ治療の両方で使用されており、白血病、乳癌、およびある種のリンパ腫などの骨髄関連疾患に対してある程度の成功を収めている。
腫瘍細胞およびウイルス感染細胞を死滅させる際のＮＫ細胞の有利な特性にもかかわらず、当該技術分野では、殺腫瘍機能を保持するナチュラルキラー細胞を産生および増殖するための効率的な方法を開発する必要性が依然として存在する。
ＮＫ細胞は、自然リンパ球（ＩＬＣ）である。自然リンパ球は、発生のために、転写因子であるＩＤ２への依存性を通して関連する。ＩＬＣの一種（ＩＬＣ３細胞として知られている）は、ＲＯＲγｔを発現し、ＩＬ－２２を産生するとともに、パーフォリン、グランザイム、および細胞死受容体などの細胞傷害性エフェクターを発現することなく、成人の免疫応答において役割を果たすものとして文献に記載されている（Ｍｏｎｔａｌｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４１：９８８－１０００、Ｋｉｌｌｉｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：１４２、Ｗｉｔｈｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８９（５）：２０９４－２０９８）。
本明細書では、細胞、例えば造血幹細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）などの造血細胞を増殖および分化させて、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および／またはＩＬＣ３細胞を産生する方法が提供される。特に、本発明は、当該造血前駆細胞から、分化ＮＫおよび／またはＩＬＣ３細胞の増加した集団を産生するために、造血幹細胞および前駆細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）／増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を促進する新規の芳香族化合物（幹細胞動員剤／因子）に焦点を当てている。これらの化合物、ならびにそれらの合成および検証は、参照により本明細書に援用される共同出願第＿＿＿号で、より詳細に記載されている。
一態様では、本明細書に記載される３つの段階を含むＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生する方法（本明細書では、「３段階法（ｔｈｒｅｅ－ｓｔａｇｅ ｍｅｔｈｏｄ）」と称される）が本明細書で提供される。本明細書で提供される３段階法によって産生されるナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、本明細書では、「３段階法によって産生されるＮＫ細胞」、「３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞」、または「３段階法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞」と称される。特定の実施形態では、当該方法は、１つ以上のさらなるステップまたは中間ステップを含む。特定の実施形態では、当該方法は、細胞が接触する（例えば、培養された）いかなる第４ステップまたは中間ステップを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤および（任意選択的に）低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％（例えば、８０％）のナチュラルキラー細胞が生存可能である。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地はいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地、第２の培地、および第３の培地のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つ全てが、ＧＢＧＭ（登録商標）培地ではない。特定の実施形態では、第３の培地は、追加の脱硫酸化酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＳＣＦ、幹細胞動員剤、およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、第４の細胞集団を産生することと、を含み、第４の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびエオメソダーミン（ＥＯＭＥＳ）を発現する。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＲＡＲ関連オーファン受容体γ（ＲＯＲγｔ）またはインターロイキン－１受容体１（ＩＬ１Ｒ１）のいずれかを発現しない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）ＣＤ１１ａ－細胞を、第３の細胞集団から単離して、第４の細胞集団を産生することと、を含み、第４の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現する。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンまたはＥＯＭＥＳのいずれも発現しない。特定の実施形態では、当該第３の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。
特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、哺乳動物細胞である。
特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、霊長類細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、げっ歯類細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト、霊長類、イヌ、またはげっ歯類以外の哺乳動物由来の細胞である。
特定の態様では、第１の培地で培養された造血幹細胞または前駆細胞は、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞である。特定の態様では、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤造血幹細胞または前駆細胞である。特定の態様では、胎盤造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤灌流液から得られた、または得られる細胞である（例えば、胎盤灌流液から単離された有核細胞から得られた、または得られる細胞。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られた、または得られる細胞である。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、胎児肝細胞である。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、動員末梢血細胞である。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、骨髄細胞である。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、または顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの１つ以上を含む。特定の態様では、当該第１の培地は、追加のＬＭＷＨを含まない。特定の態様では、当該第１の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。特定の態様では、当該第１の培地は、ＬＭＷＨを含まない。特定の態様では、当該第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、当該Ｔｐｏは、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、または約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で第１の培地に存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の実施形態では、当該第１の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第２の培地は、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の態様では、第２の培地は、追加のＬＭＷＨを含まない。特定の態様では、第２の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。特定の態様では、第２の培地は、ＬＭＷＨを含まない。特定の態様では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第２の培地に存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが当該第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の実施形態では、当該第２の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。
特定の態様では、幹細胞動員因子は、以下に記載される式（Ｉ）、（Ｉ－Ａ）、（Ｉ－Ｂ）、（Ｉ－Ｃ）、または（Ｉ－Ｄ）を有する化合物である。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、またはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、３００Ｕ／ｍＬ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。
特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、および１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、幹細胞動員剤を欠く。
特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一般に、特に列挙された培地成分は、当該培地の未定義成分（例えば、血清）中の可能な構成成分を指すものではない。例えば、当該Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５は、第１の培地、第２の培地、または第３の培地の未定義成分内に含まれず、例えば、当該Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５は、血清内に含まれない。さらに、当該ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、および／またはＧＭ－ＣＳＦは、第１の培地、第２の培地、または第３の培地の未定義成分内に含まれず、例えば、当該ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、および／またはＧＭ－ＣＳＦは、血清内に含まれない。
特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地または第３の培地は、ヒト血清－ＡＢを含む。特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれかは、１％～２０％のヒト血清－ＡＢ、５％～１５％のヒト血清－ＡＢ、または約２、５、もしくは１０％のヒト血清－ＡＢを含む。
特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれかは、２－メルカプトエタノールを含む。特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれかは、ゲンタマイシンを含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞は、当該第２の培地で当該培養する前に、当該第１の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される。特定の実施形態では、細胞は、当該第３の培地で当該培養する前に、当該第２の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される。特定の実施形態では、細胞は、当該第３の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０日間、または３０日間超培養される。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で７～１３日間培養して、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で２～６日間培養して、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で１０～３０日間培養する（すなわち、細胞を、合計１９～４９日間培養する）。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で８～１２日間培養して、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で３～５日間培養して、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で１５～２５日間培養する（すなわち、細胞を、合計２６～４２日間培養する）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で約１０日間培養して、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で約４日間培養して、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で約２１日間培養する（すなわち、細胞を、合計約３５日間培養する）。
特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、および第３の培地における当該培養は、全て、静置培養条件下、例えば、培養皿または培養フラスコで行われる。特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、または第３の培地のうちの少なくとも１つにおける当該培養は、スピナーフラスコで行われる。特定の態様では、当該第１の培地および当該第２の培地での当該培養は、静置培養条件下で行われ、当該第３の培地における当該培養は、スピナーフラスコで行われる。
特定の態様では、当該培養は、スピナーフラスコで行われる。他の態様では、当該培養は、Ｇ－Ｒｅｘ装置で行われる。さらに他の態様では、当該培養は、ＷＡＶＥバイオリアクターで行われる。
特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、最初に、１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで、当該第１の培地に接種される。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、最初に、約３×１０４細胞／ｍＬで、当該第１の培地に接種される。
特定の態様では、当該第１の細胞集団は、最初に、５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで、当該第２の培地に接種される。特定の態様では、当該第１の細胞集団は、最初に、約１×１０５細胞／ｍＬで、当該第２の培地に接種される。
特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、１×１０５～１×１０６細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、約５×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。より具体的な態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、スピナーフラスコで、約５×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、約３×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。より具体的な態様では、当該第２の細胞集団は、静置培養物で、約３×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に最初に接種される。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも１０，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも７５，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ）染色によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、アネキシン－Ｖ染色によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、７－ＡＡＤ染色およびアネキシン－Ｖ染色の両方によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、トリパンブルー染色によって決定される。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも１０，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも７５，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも７５％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示すナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の細胞傷害性を示す。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞が１０：１の割合でインビトロで共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の細胞傷害性を示す。
特定の態様では、当該第３の培養ステップの後、当該第３の細胞集団、例えば、当該ナチュラルキラー細胞集団は、凍結保存される。特定の態様では、当該第４の培養ステップの後、当該第４の細胞集団、例えば、当該ナチュラルキラー細胞集団は、凍結保存される。
特定の態様では、ナチュラルキラー細胞、すなわち、本明細書に記載の３段階法によって産生されるナチュラルキラー細胞を含む細胞集団が、本明細書で提供される。したがって、本明細書に記載の３段階法によって産生された単離されたナチュラルキラー細胞集団が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒトの使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
特定の態様では、ＩＬＣ３細胞、すなわち、本明細書に記載の３段階法によって産生されるナチュラルキラー細胞を含む細胞集団が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞を含む細胞集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒトでの使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
一実施形態では、単離されたＮＫ前駆細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＮＫ前駆細胞は、本明細書に記載の３段階法に従って産生される。特定の実施形態では、ＮＫ前駆細胞集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒト使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
別の実施形態では、単離された成熟ＮＫ細胞集団が、本明細書で提供され、当該成熟ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法に従って産生される。特定の実施形態では、成熟ＮＫ細胞集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒト使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
別の実施形態では、単離されたＩＬＣ３集団が、本明細書で提供され、当該ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法に従って産生される。特定の実施形態では、単離されたＩＬＣ３集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒト使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
別の実施形態では、細胞集団が、本明細書で提供され、当該細胞集団は、本明細書に記載の方法によって産生される第３の細胞集団である。別の実施形態では、細胞集団が、本明細書で提供され、当該細胞集団は、本明細書に記載の方法によって産生される第４の細胞集団である。
別の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＮＫ細胞は、活性化され、当該活性化されたＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法に従って産生される。特定の実施形態では、単離されたＮＫ集団は、インビボでの使用に好適な、例えば、インビボでのヒト使用に好適な医薬組成物に製剤化される。
したがって、別の態様では、腫瘍細胞増殖を抑制する、ウイルス感染を治療する、または癌（例えば、血液癌および固形腫瘍）を治療するために、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団の使用が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団は、免疫調節化合物（例えば、本明細書に記載の免疫調節化合物）もしくはサリドマイドと接触させるか、またはそれらと組み合わせて使用される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団は、免疫調節化合物（例えば、本明細書に記載の免疫調節化合物）もしくはサリドマイドで処理されるか、またはそれらと組み合わせて使用される。
特定の実施形態では、当該癌は、固形腫瘍である。別の実施形態では、当該癌は、血液癌である。特定の実施形態では、癌は、膠芽腫、原発性腺管癌、白血病、急性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、肺癌、結腸腺癌、組織球性リンパ腫、大腸癌、大腸腺癌、前立腺癌、多発性骨髄腫、または網膜芽腫である。より具体的な実施形態では、癌は、ＡＭＬである。より具体的な実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。
別の特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団が産生される造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤灌流液、臍帯血または末梢血から得られる。一実施形態では、ＮＫ細胞集団が産生される造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤から、例えば、胎盤灌流液から得られる。一実施形態では、ＮＫ細胞集団が産生される造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、ＮＫ細胞集団が産生される造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、末梢血から得られない。別の特定の実施形態では、ＮＫ細胞集団が産生される造血細胞、例えば、造血幹細胞または前駆細胞は、胎盤灌流液由来の組み合わせ細胞であり、臍帯血、例えば、灌流液と同じ胎盤由来の臍帯血である。別の特定の実施形態では、当該臍帯血は、当該胎盤灌流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離される。特定の実施形態では、組み合わせ細胞は、臍帯血および胎盤灌流液をプールするか、または組み合わせることによって得ることができる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、体積で、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で組み合わされて、組み合わせ細胞が得られる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１～１：１０、５：１～１：５、または３：１～１：３の割合で組み合わされる。別の特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５、または１：１０の割合で組み合わされる。より具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、８．５：１．５（８５％：１５％）の割合で組み合わされる。
特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、総有核細胞（ＴＮＣ）の含有量によって決定される、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で組み合わされて、組み合わせ細胞が得られる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１～１０：１、５：１～１：５、または３：１～１：３の割合で組み合わされる。別の特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５、または１：１０の割合で組み合わされる。
したがって、一実施形態では、癌またはウイルス感染を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＮＫ細胞集団からの有効量の細胞を、当該個体に投与することを含む。特定の実施形態では、癌は、固形腫瘍である。特定の実施形態では、癌は、血液癌である。特定の実施形態では、血液癌は、白血病である。別の特定の実施形態では、血液癌は、リンパ腫である。別の特定の実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病である。別の特定の実施形態では、血液癌は、慢性リンパ球性白血病である。別の特定の実施形態では、血液癌は、慢性骨髄性白血病である。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、当該接触または当該投与の前に凍結保存されている。他の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、当該接触または当該投与の前に、凍結保存されていない。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、免疫調節化合物（例えば、本明細書に記載の免疫調節化合物）、またはサリドマイドで処理されている。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８で処理されている。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された単離されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で前処理されている。別の特定の実施形態では、本方法は、個体に、（１）本明細書に記載の３段階法を使用して産生される有効量の単離されたＮＫ細胞集団と、（２）有効量の免疫調節化合物またはサリドマイドとを投与することを含む。この文脈における「有効量」とは、ＮＫ細胞集団、および任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドにおける、細胞の量を意味し、当該ＮＫ細胞集団、および任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドを投与されていない当該癌または当該感染症を有する個体と比較して、当該癌または当該感染症のうちの１つ以上の症状における検出可能な改善をもたらす。特定の実施形態では、当該免疫調節化合物は、レナリドミドまたはポマリドミドである。別の実施形態では、本方法は、個体に、抗癌剤化合物、例えば、以下に記載のうちの１つ以上の抗癌剤化合物を投与することをさらに含む。
別の実施形態では、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、治療有効量のＮＫ細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団の細胞と接触させること）を含む方法が、本明細書で提供される。以下、別段の記載がない限り、「近接（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）」という用語は、所望の結果を引き出すのに十分な近接を指し、例えば、特定の実施形態では、「近接」という用語は、接触を指す。特定の実施形態では、当該接触は、インビトロで行われる。特定の実施形態では、当該接触は、エクスビボで行われる。他の実施形態では、当該接触は、インビボで行われる。腫瘍細胞の増殖を抑制する方法では、複数のＮＫ細胞を使用することができ、治療有効量のＮＫ細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞をＮＫ細胞集団の細胞と接触させること）を含む。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、乳癌細胞、頭頸部癌細胞、または肉腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、大腸癌細胞、大腸腺癌細胞、または網膜芽腫細胞である。
一実施形態では、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法で使用するための複数のナチュラルキラー細胞が、本明細書で提供され、腫瘍細胞を、複数のナチュラルキラー細胞と接触させることを含み、ナチュラルキラー細胞は、本明細書に記載の方法によって産生される。特定の実施形態では、当該接触は、ヒト個体で行われる。特定の実施形態では、当該方法は、当該個体に当該ナチュラルキラー細胞を投与することを含む。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。特定の実施形態では、当該個体は、再発性／難治性ＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対して少なくとも１つの非自然リンパ球（ＩＬＣ）治療薬を失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は、６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ＮＫ細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、乳癌細胞、頭頸部癌細胞、または肉腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、大腸癌細胞、大腸腺癌細胞、または網膜芽腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞または多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３８抗体、または抗ＣＤ３２抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、当該接触または当該投与の前に、凍結保存されているか、または凍結保存されていない。
単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。特定の実施形態では、投与は非経口である。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与（ｉｎｔｒａｆｅｍｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、または腫瘍内投与による。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックス、またはスカフォールドを用いて行われる。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、注射による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物を対象に投与は、カテーテルを介する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、固形腫瘍（例えば、肉腫）に直接注射される。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、シリンジでの注射による。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の投与は、ガイド送達を介する。特定の実施形態では、対象への単離されたＮＫ細胞集団またはその医薬組成物の注射による投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線によって補助される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＮＫ細胞集団は、当該接触または接近の前に、免疫調節化合物（例えば、本明細書の下記に記載の免疫調節化合物）もしくはサリドマイド、および／またはＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８で処理されている。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＮＫ細胞集団は、当該接触または接近の前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で処理されている。別の特定の実施形態では、有効量の免疫調節化合物（例えば、以下の本明細書に記載の免疫調節化合物）またはサリドマイドを、腫瘍細胞とさらに接近させる（例えば、腫瘍細胞は、免疫調節化合物またはサリドマイドと接触させる）。この文脈における「有効量」とは、ＮＫ細胞集団の細胞の量、および、任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドの量を意味し、ＮＫ細胞集団の細胞と接触または接近させていない同等の腫瘍細胞数、および、任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドと比較して、当該腫瘍細胞の検出可能な抑制をもたらす。別の特定の実施形態では、本方法は、有効量の抗癌剤、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物を、腫瘍細胞と接近させること（例えば、腫瘍細胞を抗癌剤化合物と接触させること）をさらに含む。
本方法の特定の実施形態では、腫瘍細胞は、血液癌細胞である。別の特定の実施形態では、腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、神経膠芽腫細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、大腸癌細胞、前立腺癌細胞、または大腸腺癌細胞である。より具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、ＡＭＬ細胞である。より具体的な実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞である。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、インビトロで行われる。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、エクスビボで行われる。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、インビボで行われる。より具体的な実施形態では、当該インビボで接触または接近させることは、ヒトで行われる。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、膵臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、腎臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗ＣＤ３３抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗ＣＤ２０抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗ＣＤ１３８抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、抗ＣＤ３２抗体と共に投与される。
別の態様では、多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、（１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）ＮＫ細胞を投与することを含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体の多発性骨髄腫を治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、３段階法を使用してＮＫ細胞集団を産生するための方法）。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、当該投与前に増殖されている。別の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、および／またはＮＫ細胞は、互いに別個に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、ＮＫ細胞（任意選択的に、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８による前処理によって活性化される）を、投与することを含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体におけるＡＭＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された単離されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で前処理されている。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、本明細書に記載される３段階法を使用してＮＫ細胞集団を産生するための方法）。ＡＭＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、本明細書に記載される３段階法によって産生される。特定の実施形態では、前述の方法によって治療されるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ナチュラルキラー細胞または非自然リンパ球細胞の治療薬が失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ナチュラルキラー細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。別の態様では、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、治療有効量の（１）レナリドミド、（２）メルファラン、（３）フルダラビン、および（４）ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を投与することを含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体における当該ＣＬＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用してＮＫ細胞集団を産生するための方法）。上記の方法のいずれかの特定の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、フルダラビン、および増殖ＮＫ細胞は、当該個体に別個に投与される。ＣＬＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、本明細書に記載される３段階法によって産生される。
別の実施形態では、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法が、本明細書で提供され、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団の細胞と接触させること）を含む。以下、別段の記載がない限り、「接近」という用語は、所望の結果を引き出すのに十分な接近を指し、例えば、特定の実施形態では、「接近」という用語は、接触を指す。特定の実施形態では、当該接触は、インビトロで行われる。特定の実施形態では、当該接触は、エクスビボで行われる。他の実施形態では、当該接触は、インビボで行われる。腫瘍細胞の増殖を抑制する方法では、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができ、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団の細胞と接触させること）を含む。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、乳癌細胞、頭頸部癌細胞、または肉腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、大腸癌細胞、大腸腺癌細胞、または網膜芽腫細胞である。
一実施形態では、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法で使用するための複数のＩＬＣ３細胞が、本明細書で提供され、腫瘍細胞を、複数のＩＬＣ３細胞と接触させることを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の方法によって産生される。
特定の実施形態では、当該接触は、ヒト個体で行われる。特定の実施形態では、当該方法は、当該個体に、当該ＩＬＣ３細胞を投与することを含む。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である。特定の実施形態では、当該個体は、再発性／難治性ＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対して少なくとも１つの非自然リンパ球（ＩＬＣ）治療薬を失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は、６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ＩＬＣ３細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、乳癌細胞、頭頸部癌細胞、または肉腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、大腸癌細胞、大腸腺癌細胞、または網膜芽腫細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞または多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３８抗体、または抗ＣＤ３２抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、当該接触または当該投与の前に、凍結保存されているか、または凍結保存されていない。
単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。特定の実施形態では、投与は非経口である。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、デバイス、マトリックス、またはスカフォールドを用いて行われる。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、注射による。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、カテーテルを介する。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、固形腫瘍（例えば、肉腫）に直接注射される。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、シリンジでの注射による。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の投与は、ガイド送達を介する。特定の実施形態では、対象への単離されたＩＬＣ３細胞集団またはその医薬組成物の注射による投与は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線によって補助される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＩＬＣ３細胞集団は、当該接触または接近の前に、免疫調節化合物（例えば、本明細書の下記に記載の免疫調節化合物）もしくはサリドマイド、および／またはＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８で処理されている。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＮＫ細胞集団は、当該接触または接近の前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で処理されている。別の特定の実施形態では、有効量の免疫調節化合物（例えば、以下の本明細書の下記に記載の免疫調節化合物）またはサリドマイドを、腫瘍細胞とさらに接近させ、例えば、腫瘍細胞は、免疫調節化合物またはサリドマイドと接触させる。この文脈における「有効量」とは、ＩＬＣ３細胞集団の細胞の量、および、任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドの量を意味し、ＩＬＣ３細胞集団の細胞と接触または接近させていない同等の腫瘍細胞数、および、任意選択的に、免疫調節化合物またはサリドマイドと比較して、当該腫瘍細胞の検出可能な抑制をもたらす。別の特定の実施形態では、本方法は、有効量の抗癌剤、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物を、腫瘍細胞と接近させること（例えば、腫瘍細胞を抗癌剤化合物と接触させること）をさらに含む。
本方法の特定の実施形態では、腫瘍細胞は、血液癌細胞である。別の特定の実施形態では、腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、神経膠芽腫細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、網膜芽腫細胞、大腸癌細胞、前立腺癌細胞、または大腸腺癌細胞である。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、インビトロで行われる。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、エクスビボで行われる。別の特定の実施形態では、当該接触または接近させることは、インビボで行われる。より具体的な実施形態では、当該インビボで接触または接近させることは、ヒトで行われる。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、固形腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、肝臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、肺腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、膵臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、腎臓腫瘍細胞である。特定の実施形態では、当該腫瘍細胞は、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗ＣＤ３３抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗ＣＤ２０抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗ＣＤ１３８抗体と共に投与される。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、抗ＣＤ３２抗体と共に投与される。
別の態様では、多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、（１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）ＩＬＣ３細胞を投与することを含み、当該ＩＬＣ３細胞は、当該個体の多発性骨髄腫を治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を産生するための方法）。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、当該投与前に増殖されている。別の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、および／またはＩＬＣ３細胞は、互いに別個に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、ＩＬＣ３細胞（任意選択的に、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８による前処理によって活性化される）を、投与することを含み、当該ＩＬＣ３細胞は、当該個体におけるＡＭＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された単離されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で前処理されている。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、本明細書に記載される３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を産生するための方法）。ＡＭＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書に記載される３段階法によって産生される。特定の実施形態では、前述の方法によって治療されるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ＩＬＣ３細胞または非自然リンパ球細胞の治療薬が失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ＩＬＣ３細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。別の態様では、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、治療有効量の（１）レナリドミド、（２）メルファラン、（３）フルダラビン、および（４）ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団）を投与することを含み、当該ＩＬＣ３細胞は、当該個体における当該ＣＬＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を産生するための本明細書に記載の方法のいずれかによって産生されている（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用してＩＬＣ３細胞集団を産生するための方法）。上記の方法のいずれかの特定の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、フルダラビン、および増殖ＩＬＣ３細胞は、当該個体に別個に投与される。ＣＬＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書に記載される３段階法によって産生される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団は、凍結保存される（例えば、本明細書に記載の方法を使用して凍結保存される）。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団は、凍結保存培地（例えば、本明細書に記載の凍結保存培地）で凍結保存される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ前駆細胞集団および／またはＮＫ細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ前駆細胞集団および／またはＮＫ細胞集団を含む細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、を含む。
上記の治療または腫瘍抑制の方法の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、他のナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤灌流液、臍帯血もしくは末梢血から単離されたナチュラルキラー細胞、または異なる方法によって造血細胞から産生されたナチュラルキラー細胞）と組み合わされる。特定の実施形態では、ナチュラルキラー細胞集団は、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で、別の供給源由来のナチュラルキラー細胞、または異なる方法によって作製されたナチュラルキラー細胞と組み合わされる。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団は、凍結保存される（例えば、本明細書に記載の方法を使用して凍結保存される）。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団は、凍結保存培地（例えば、本明細書に記載の凍結保存培地）で凍結保存される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３前駆細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団の凍結保存は、（１）本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３前駆細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、を含む。
上記の治療または腫瘍抑制の方法の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、他のＩＬＣ３細胞（例えば、胎盤灌流液、臍帯血もしくは末梢血から単離されたＩＬＣ３細胞、または異なる方法によって造血細胞から産生されたＩＬＣ３細胞）と組み合わされる。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞集団は、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で、別の供給源由来のＩＬＣ３、または異なる方法によって作製されたＩＬＣ３と組み合わされる。
別の態様では、化学療法後に胃腸管を修復する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。化学療法後に胃腸管を修復する方法では、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができ、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、放射線から個体を保護する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。放射線から個体を保護する方法では、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができ、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。本方法の特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、骨髄移植の補助として使用される。
別の態様では、個体の胸腺を再構成する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。個体の胸腺を再構成する方法では、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができ、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、本明細書に記載の３段階法によって産生される単離されたＮＫ細胞を含む組成物が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、造血細胞（例えば、胎盤灌流液、臍帯血、および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞）から産生される。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも７０％を含む。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％を含む。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、または９０％が、ＣＤ１６－である。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％が、ＣＤ９４＋である。
特定の態様では、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞集団が、本明細書で提供され、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよび／またはＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つ以上を発現しない。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、またはＩＬ１Ｒ１のいずれも発現しない。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＺＭＢ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
特定の態様では、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞の集団が、本明細書で提供され、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つ以上を発現し、ＣＤ９４、パーフォリン、およびＥＯＭＥＳのうちの１つ以上を発現しない。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリン、またはＥＯＭＥＳのいずれも発現しない。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６および／または２Ｂ４をさらに発現する。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬ－２２、ＴＮＦα、およびＤＮＡＭ－１のうちの１つ以上をさらに発現する。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦα、およびＤＮＡＭ－１を発現する。
特定の態様では、ナチュラルキラー細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの各々を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を分離することと、（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で組み合わせて、第４の細胞集団を産生することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、５０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、２０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、５：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：５の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：１０の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：２０の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：５０の割合で組み合わされる。
特定の態様では、当該集団の複数のＮＫ細胞は、マイクロＲＮＡであるｄｍｅ－ｍｉＲ－７、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｃ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｇ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１１８３、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４７、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２４８、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５５Ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５５、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１６、ｈｓａ－ｍｉＲ－１７、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８１ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８２、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９２、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２００ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２１４、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２１、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３１、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３５、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７４ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５４、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８４、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１３Ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１６－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ｈ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｋ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４８Ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６００、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４１、ｈｓａ－ｍｉＲ－６４３、ｈｓａ－ｍｉＲ－８７４、ｈｓａ－ｍｉＲ－８７５－５ｐ、およびｈｓａ－ｍｉＲ－９２ａ－２のうちの１つ以上を、末梢血ナチュラルキラー細胞よりも検出可能な高いレベルで、発現する。特定の態様では、当該集団の複数のＮＫ細胞は、マイクロＲＮＡであるｍｉＲ１８８－５ｐ、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ、ｍｉＲ－３４ｃ、ｍｉＲ－１８ａ、ｍｉＲ－５００、ｍｉＲ－２２、ｍｉＲ－２２２、ｍｉＲ－７ａ、ｍｉＲ－５３２－３ｐ、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２６ｂ、ｍｉＲ－２６ａ、ｍｉＲ－１９１、ｍｉＲ－１８１ｄ、ｍｉＲ－３２２、およびｍｉＲ３４２－３ｐのうちの１つ以上を、末梢血ナチュラルキラー細胞よりも検出可能な低いレベルで、発現する。特定の態様では、当該集団の複数のＮＫ細胞は、末梢血ナチュラルキラー細胞と同等のレベルで、マイクロＲＮＡであるｍｉＲ－１８１ａ、ｍｉＲ－３０ｂ、およびｍｉＲ３０ｃのうちの１つ以上を発現する。
特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、単一の個体由来であり、すなわち、造血幹細胞および前駆細胞は単一の個体由来である。より具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞は、少なくとも２つの異なる個体由来のナチュラルキラー細胞を含み、すなわち、当該造血幹細胞および前駆細胞は、少なくとも２つの異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体とは異なる個体由来であり、すなわち、当該造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、当該免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触もしくは接近していない同等の数のナチュラルキラー細胞（すなわち、ＮＫ細胞）よりも、検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリンを発現するのに十分な量および時間で、免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触または接近している。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞を含む組成物は、免疫調節化合物またはサリドマイドをさらに含む。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、以下に記載の化合物、例えば、アミノ置換イソインドリン化合物である。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、レナリドミドである。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、ポマリドミドである。
別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞を含む組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物（例えば、以下に記載の抗癌剤化合物の１つ以上）をさらに含む。
より具体的な実施形態では、組成物は、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞と、別の供給源由来のナチュラルキラー細胞、または別の方法によって作製されるＮＫ細胞とを含む。特定の実施形態では、当該他の供給源は、胎盤血および／または臍帯血である。別の特定の実施形態では、当該他の供給源は、末梢血である。より具体的な実施形態では、ＮＫ細胞は、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で、別の供給源由来のナチュラルキラー細胞、または異なる方法によって作製されたナチュラルキラー細胞と組み合わされる。
別の特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞と、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞のいずれかとを含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞とは異なる個体由来の胎盤灌流液を含む。別の特定の実施形態では、当該胎盤灌流液の細胞の全て、または実質的に全て（例えば、９０％、９５％、９８％、または９９％超）は、胎児細胞である。別の特定の実施形態では、胎盤灌流液または胎盤灌流細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液の胎児細胞は、当該灌流液の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％、または５０％未満を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、胎盤血管系を通した０．９％ＮａＣｌ溶液の灌流によって得られる。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、培養培地を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、赤血球を除去するように処理されている。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下に記載の免疫調節化合物（例えば、アミノ置換イソインドリン化合物）を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
別の特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞および胎盤灌流細胞を含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、組成物は、単離された胎盤灌流液および単離された胎盤灌流細胞を含み、当該単離された灌流液および当該単離された胎盤灌流細胞は、異なる個体由来である。胎盤灌流液を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、少なくとも２つの個体由来の胎盤灌流液を含む。胎盤灌流細胞を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該単離された胎盤灌流細胞は、少なくとも２つの個体由来である。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
別の態様では、例えば、本明細書に記載の３段階法の任意の実施形態によって産生される、単離されたＮＫ細胞集団を含む組成物（例えば、医薬組成物）が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団は、造血細胞、例えば、胎盤から単離された造血幹細胞または前駆細胞（例えば、胎盤灌流液、臍帯血、および／または末梢血）から産生される。別の特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団は、組成物中の細胞の少なくとも７０％を含む。別の特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団は、組成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％を含む。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、組成物中の細胞の少なくとも７０％を含む。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも８０％、８２％、８４％、８６％、８８％または９０％は、ＣＤ３－およびＣＤ５６＋である。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、または９０％が、ＣＤ１６－である。特定の実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％が、ＣＤ９４＋である。
別の特定の実施形態では、当該組成物中の当該単離されたＮＫ細胞は、単一の個体由来であり、すなわち、当該造血幹細胞および前駆細胞は、単一の個体由来である。より具体的な実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞は、少なくとも２つの異なる個体由来のＮＫ細胞を含み、すなわち、当該造血幹細胞および前駆細胞は、少なくとも２つの異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、当該組成物中の当該単離されたＮＫ細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体とは異なる個体由来であり、すなわち、当該造血幹細胞および前駆細胞は、ＮＫ細胞による治療が意図される個体とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、当該免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触もしくは接近していない同等の数のナチュラルキラー細胞（すなわち、ＮＫ細胞）よりも、検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリンを発現するのに十分な量および時間で、免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触または接近している。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物またはサリドマイドをさらに含む。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、以下に記載の化合物である。
別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
より具体的な実施形態では、組成物は、別の供給源由来のＮＫ細胞、または別の方法によって作製されたＮＫ細胞を含む。特定の実施形態では、当該他の供給源は、胎盤血および／または臍帯血である。別の特定の実施形態では、当該他の供給源は、末梢血である。より具体的な実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞集団は、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で、別の供給源由来のＮＫ細胞、または異なる方法によって作製されたＮＫ細胞と組み合わされる。
別の特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞集団と、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞のいずれかとを含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞集団と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞集団とは異なる個体由来の胎盤灌流液を含む。別の特定の実施形態では、当該胎盤灌流液の細胞の全て、または実質的に全て（例えば、９０％、９５％、９８％、または９９％超）は、胎児細胞である。別の特定の実施形態では、胎盤灌流液または胎盤灌流細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、胎児細胞は、当該胎盤灌流液の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％または５０％未満を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、胎盤血管系を通した０．９％ＮａＣｌ溶液の灌流によって得られる。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、培養培地を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、赤血球を除去するように処理されている。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下に記載の免疫調節化合物（例えば、アミノ置換イソインドリン化合物）を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
別の特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞集団および胎盤灌流細胞を含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞集団と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞集団とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、組成物は、単離された胎盤灌流液および単離された胎盤灌流細胞を含み、当該単離された灌流液および当該単離された胎盤灌流細胞は、異なる個体由来である。胎盤灌流液を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、少なくとも２つの個体由来の胎盤灌流液を含む。胎盤灌流細胞を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該単離された胎盤灌流細胞は、少なくとも２つの個体由来である。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
３．１．用語
本明細書で使用される場合、「免疫調節化合物」および「ＩＭｉＤ（商標）」という用語は、サリドマイドを包含しない。
本明細書で使用される場合、「レナリドミド」は、３－（４’アミノイソインドリン－１’－オン）－１－ピペリジン－２，６－ジオン（ケミカル・アブストラクト・サービス名）または２，６－ピペリジンジオン，３－（４－アミノ－１，３－ジヒドロ－１－オキソ－２Ｈ－イソインドール－２－イル）－（国際純正および応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）名）を意味する。本明細書で使用される場合、「ポマリドミド」は、４－アミノ－２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドール－１，３－ジオンを意味する。
本明細書で使用される場合、細胞を参照して、「多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）」とは、細胞が、別の細胞型の細胞に分化する能力を有することを意味する。特定の実施形態では、「多能性細胞」は、哺乳動物体の約２６０種類の細胞型のサブセットに増殖する能力を有する細胞である。多能性細胞（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）とは異なり、多能性細胞（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｃｅｌｌ）は、全ての細胞型を形成する能力を有しない。
本明細書で使用される場合、「フィーダー細胞」は、１つのタイプの細胞を指し、第２のタイプの細胞と共培養して、第２のタイプの細胞を維持し得、おそらく増殖させ得る環境を提供する。いかなる理論にも拘束されることなく、フィーダー細胞は、例えば、ペプチド、ポリペプチド、電気シグナル、有機分子（例えば、ステロイド）、核酸分子、増殖因子（例えば、ｂＦＧＦ）、他の因子（例えば、サイトカイン）、および代謝栄養素を標的細胞に提供し得る。特定の実施形態では、フィーダー細胞は単層で増殖する。
本明細書で使用される場合、さらなる修飾なしに本明細書に記載の方法を使用して産生される「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ細胞」は、任意の組織源由来のナチュラルキラー細胞を含む。
本明細書で使用される場合、さらなる修飾なしに本明細書に記載の方法を使用して産生される「ＩＬＣ３細胞」は、任意の組織源由来のＩＬＣ３細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「胎盤灌流液（ｐｌａｃｅｎｔａｌ ｐｅｒｆｕｓａｔｅ）」とは、胎盤（例えば、ヒト胎盤）の少なくとも一部を通って（例えば、胎盤血管系を通して）灌流した灌流溶液を意味し、胎盤を灌流する間に灌流溶液によって回収された複数の細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「胎盤灌流細胞」は、胎盤灌流液から単離されるか、または単離され得る有核細胞（例えば、全有核細胞）を意味する。
本明細書で使用される場合、「腫瘍細胞抑制」、「腫瘍細胞増殖の抑制」などは、例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団を腫瘍細胞集団と接触または接近させることによって（例えば、腫瘍細胞集団を本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞またはＮＫ細胞集団と接触させることによって）、腫瘍細胞集団の増殖を遅らせることを含む（例えば、当該腫瘍細胞集団の腫瘍細胞のうちの１つ以上を死滅させることで）。特定の実施形態では、当該接触は、インビトロまたはエクスビボで行われる。他の実施形態では、当該接触は、インビボで行われる。
本明細書で使用される場合、「造血細胞」という用語は、造血幹細胞および造血前駆細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「未定義成分（ｕｎｄｅｆｉｎｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」は、その構成成分が一般的に提供または定量されていない成分を指す、培養培地分野の用語である。「未定義成分」の例としては、血清、例えば、ヒト血清（例えば、ヒト血清ＡＢ）および胎児血清（例えば、ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍまたはｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｒｕｍ））が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「＋」は、特定の細胞マーカーの存在を示すために使用されるとき、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照と比べて検出可能に存在するか、または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいてバックグラウンドを上回って検出可能であることを意味する。
本明細書で使用される場合、「－」は、特定の細胞マーカーの存在を示すために使用されるとき、細胞マーカーが、蛍光活性化細胞選別においてアイソタイプ対照と比べて検出可能に存在しないか、または定量的もしくは半定量的ＲＴ－ＰＣＲにおいてバックグラウンドを上回って検出可能でないことを意味する。
化合物ＣＲＬ１～ＣＲＬ１１についてのＮＫ細胞の増殖を示す。
化合物ＣＲＬ１２～ＣＲＬ２２についてのＮＫ細胞の増殖を示す。
ＳＲ１陽性対照と比較したＮＫ細胞の増殖を示す。
ＮＫ細胞が由来するＣＤ３４＋細胞の増殖を示す。
増殖ＮＫ培養物の細胞傷害性を示す。
ＰＮＫ細胞が細胞傷害性機構をコードする遺伝子を高度に発現することを示す。図６Ａは、ＣＹＮＫ細胞を末梢血由来ＮＫ細胞（ＰＢ－ＮＫ）と１：１の割合で組み合わせ、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ ＣｈｒｏｍｉｕｍプラットフォームおよびＩｌｌｕｍｉｎａ配列決定を使用して、単一細胞レベルで遺伝子発現を分析した。バイオインフォマティクス分析は、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｒａｎｇｅｒ分析パイプラインを利用した。転写物分析は、グランザイムＢ（ＧＺＭＢ）発現細胞に限定した。図６Ｂは、ＰＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞を別個の集団として示す代表的なｔＳＮＥプロット。図６Ｃは、選択されたＮＫ細胞関連遺伝子のｔＳＮＥプロット。データは、２つのドナーを表す。
ＰＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞が、ＮＫ細胞受容体をコードする遺伝子を示差的に発現することを示す。末梢血ＮＫ細胞（ＰＢ－ＮＫ）およびＣＤ１１ａ＋ビーズ精製ＰＮＫ細胞における、リアルタイム定量ＰＣＲによって分析された、選択されたＮＫ細胞受容体遺伝子の発現。選択されたマーカーのヒストグラム上に示された代替名。データは、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢＮＫ細胞（ｎ＝３）についての３つのドナーの平均±ＳＤを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．００１。
ＰＢ－ＮＫ細胞およびＣＹＮＫ細胞のゲーティング戦略を示す。ＣＹＮＫ細胞およびＰＢＭＣ細胞を解凍し、ＮＫ細胞受容体を標的とするフルオロフォア結合抗体で染色した。図は、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞の同定のための代表的なドットプロットおよびゲーティング戦略を示す。集団のさらなる特徴付けについては、図９を参照されたい。
ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞上の表面タンパク質の示差的発現を示す。ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞を、図８に示されるようにプレゲートした。
ＣＹＮＫ細胞が、表面タンパク質発現に基づいてＰＢ－ＮＫ細胞とは異なる細胞集団を形成することを示す。ｔＳＮＥプロットは、それらの表面マーカーに基づいてＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞の示差的クラスタリングを実証する。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してフローサイトメトリーデータのｔＳＮＥプロットを生成した。
造血細胞（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）からＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を産生および増殖させる新規な方法が、本明細書で提供される。造血細胞（例えば造血幹細胞または前駆細胞）からＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生する方法（例えば、３段階法）も、本明細書で提供される。ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生するために使用される造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）は、任意の供給源（例えば、限定されないが、胎盤、臍帯血、胎盤血、末梢血、脾臓または肝臓）から得ることができる。特定の実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、あるいはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団は、増殖造血細胞（例えば、造血幹細胞および／または造血前駆細胞）から産生される。一実施形態では、造血細胞は、かかる細胞の供給源、例えば、胎盤（例えば、胎盤灌流液、臍帯血、胎盤血）、末梢血、脾臓、肝臓（例えば、胎児肝臓）、および／または骨髄から採取される。
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生するために使用される造血細胞は、任意の動物種から得ることができる。特定の実施形態では、造血幹細胞または前駆細胞は、哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、ヒト細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、霊長類細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、イヌ細胞である。特定の実施形態では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、げっ歯類細胞である。
５．１．造血細胞
本明細書に開示される方法に有用な造血細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、前駆細胞、造血前駆細胞、造血幹細胞など）に分化することができる任意の造血細胞であり得る。造血細胞は、例えば、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢血、肝臓など、またはそれらの組み合わせなどの組織源から得ることができる。造血細胞は、胎盤から得ることができる。特定の実施形態では、造血細胞は、胎盤灌流液から得られる。一実施形態では、造血細胞は、臍帯血から得られない。一実施形態では、造血細胞は、末梢血から得られない。胎盤灌流液由来の造血細胞は、胎児造血細胞および母体造血細胞の混合物（例えば、母体細胞が造血細胞の総数の５％超を含む混合物）を含み得る。特定の実施形態では、胎盤灌流液由来の造血細胞は、少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％、または９９．５％の胎児細胞を含む。
別の特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団が産生される造血細胞（例えば造血幹細胞または前駆細胞）は、胎盤灌流液、臍帯血、胎児肝臓、動員末梢血、または骨髄から得られる。別の特定の実施形態では、造血細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団が産生される造血幹細胞または前駆細胞）は、胎盤灌流液由来および臍帯血由来（例えば、灌流液と同じ胎盤由来の臍帯血）の組み合わせ細胞である。別の特定の実施形態では、当該臍帯血は、当該胎盤灌流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離される。特定の実施形態では、組み合わせ細胞は、臍帯血および胎盤灌流液をプールするか、または組み合わせることによって得ることができる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、体積で、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で組み合わされて、組み合わせ細胞が得られる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１～１：１０、５：１～１：５、または３：１～１：３の割合で組み合わされる。別の特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５、または１：１０の割合で組み合わされる。より具体的な実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、８．５：１．５（８５％：１５％）の割合で組み合わされる。
特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、総有核細胞（ＴＮＣ）の含有量によって決定される、１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で組み合わされて、組み合わせ細胞が得られる。特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１～１０：１、５：１～１：５、または３：１～１：３の割合で組み合わされる。別の特定の実施形態では、臍帯血および胎盤灌流液は、１０：１、５：１、３：１、１：１、１：３、１：５、または１：１０の割合で組み合わされる。
別の特定の実施形態では、造血細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される当該ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団が産生される造血幹細胞または前駆細胞）は、臍帯血および胎盤灌流液の両方由来であるが、当該臍帯血は、当該胎盤灌流液が得られる胎盤以外の胎盤から単離される。
特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。特定の実施形態では、本明細書に開示される方法において有用な造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋またはＣＤ３４＋ＣＤ３８－である。より具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－Ｌｉｎ－である。別の特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６－、ＣＤ６６ｂ－、および／またはグリコホリンＡ－のうちの１つ以上である。別の特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ２－、ＣＤ３－、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１１ｃ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１６－、ＣＤ１９－、ＣＤ２４－、ＣＤ５６－、ＣＤ６６ｂ－、およびグリコホリンＡ－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－である。別のより具体的な実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－ＣＤ３３－ＣＤ１１７－ＣＤ２３５－ＣＤ３６－である。
別の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ４５＋である。別の特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。別の実施形態では、造血細胞は、Ｔｈｙ－１＋である。特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋である。別の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ１３３＋である。特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋またはＣＤ１３３＋Ｔｈｙ－１＋である。別の特定の実施形態では、ＣＤ３４＋造血細胞は、ＣＸＣＲ４＋である。別の特定の実施形態では、ＣＤ３４＋造血細胞は、ＣＸＣＲ４－である。別の実施形態では、造血細胞は、ＫＤＲ（血管増殖因子受容体２）に対して陽性である。特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＫＤＲ＋、ＣＤ１３３＋ＫＤＲ＋またはＴｈｙ－１＋ＫＤＲ＋である。特定の他の実施形態では、造血細胞は、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ＋）に対して陽性であり、例えば、細胞は、ＣＤ３４＋ＡＬＤＨ＋である。
特定の他の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ４５－である。特定の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞、例えば、ＣＤ３４＋、ＣＤ４５－細胞は、ｍｉＲＮＡ ｈｓａ－ｍｉＲ－３８０、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１２、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１７、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１８ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５１９ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５２０ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３７、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２２ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５４９、および／またはｈｓａ－ｍｉＲ－６１８のうちの１つ以上または全てを発現する。
特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４－である。
また、造血細胞は、系譜決定（ｌｉｎｅａｇｅ ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ）を示す特定のマーカーを欠いているか、または発生的未感作性（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｎａｉｖｅｔｅ）の欠いている場合がある。例えば、別の実施形態では、造血細胞は、ＨＬＡ－ＤＲ－である。特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＨＬＡ－ＤＲ－、ＣＤ１３３＋ＨＬＡ－ＤＲ－、Ｔｈｙ－１＋ＨＬＡ－ＤＲ－またはＡＬＤＨ＋ＨＬＡ－ＤＲ－である。別の実施形態では、造血細胞は、系譜マーカーであるＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂおよびグリコホリンＡのうちの１つ以上または全てに対して陰性である。
したがって、造血細胞は、未分化状態を示すマーカーの存在に基づいて、または少なくともいくつかの系譜分化が起きたことを示す系譜マーカーの不在に基づいて、本明細書に開示される方法で使用するために選択され得る。特定のマーカーの存在または不在に基づいて、造血細胞を含む細胞を単離する方法を以下に詳述する。
本明細書に提供される方法で使用される造血細胞は、実質的に均質な集団（例えば、単一の組織源由来の造血細胞）を、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％もしくは少なくとも約９９％含む集団、または同じ造血細胞関連細胞マーカーを示す造血細胞を含む集団であり得る。例えば、様々な実施形態では、造血細胞は、骨髄、臍帯血、胎盤血、末梢血、または胎盤（例えば、胎盤灌流液）由来の造血細胞を、少なくとも約９５％、９８％、または９９％含み得る。
本明細書に提供される方法で使用される造血細胞は、単一の個体から（例えば、単一の胎盤から）、または複数の個体から得ることができる（例えば、プールされ得る）。造血細胞が複数の個体から得られ、プールされる場合、造血細胞は、同じ組織源から得ることができる。したがって、様々な実施形態では、プールされた造血細胞は、全て胎盤由来（例えば、胎盤灌流液）、全て胎盤血由来、全て臍帯血由来、全て末梢血由来などである。
本明細書に開示される方法で使用される造血細胞は、特定の実施形態では、２つ以上の組織源由来の造血細胞を含むことができる。例えば、特定の実施形態では、２つ以上の供給源由来の造血細胞が本明細書の方法で使用するために組み合わされる場合、本明細書に記載の３段階法を使用してナチュラルキラー細胞を産生するために使用される複数の造血細胞は、胎盤由来の造血細胞（例えば、胎盤灌流液）を含む。様々な実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生するために使用される造血細胞は、胎盤および臍帯血由来、胎盤および末梢血由来、胎盤および胎盤血由来、または胎盤および骨髄由来の造血細胞を含む。一実施形態では、造血細胞は、胎盤灌流液由来の造血細胞を、臍帯血由来の造血細胞と組み合わせて含み、臍帯血および胎盤は、同じ個体由来である（すなわち、灌流液および臍帯血が一致する）。造血細胞が２つの組織源由来の造血細胞を含む実施形態では、供給源由来の造血細胞は、例えば、１：１０、２：９、３：８、４：７：、５：６、６：５、７：４、８：３、９：２、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、または９：１の割合で組み合わされ得る。
５．１．１．胎盤造血幹細胞
特定の実施形態では、本明細書に提供される方法において使用される造血細胞は、胎盤造血細胞である。一実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ３４＋である。特定の実施形態では、胎盤造血細胞は、主に（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％）、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞である。別の特定の実施形態では、胎盤造血細胞は、主に（例えば、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％）ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋細胞である。胎盤造血細胞は、当業者に既知の任意の手段（例えば、灌流）によって、産後の哺乳類（例えば、ヒト）胎盤から得ることができる。
別の実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ４５－である。特定の実施形態では、造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、胎盤造血細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋である。
５．２．ナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにナチュラルキラー細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団の産生
本方法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびにＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団の産生は、造血細胞集団を増殖することを含む。細胞増殖中、造血細胞集団内の複数の造血細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に分化する。一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％（例えば、少なくとも８０％）のナチュラルキラー細胞が生存可能である。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、かかるナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＳＣＦ、幹細胞動員剤、およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＮＫ細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、第４の細胞集団を産生することと、を含み、第４の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
特定の実施形態では、上記の実施形態のいずれかにおいて、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＲＯＲγｔまたはＩＬ１Ｒ１のいずれも発現しない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本発明で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
一態様では、ＩＬＣ３細胞を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ－細胞を単離するか、またはＣＤ１１ａ＋細胞を除去して、第４の細胞集団を産生することと、を含み、第４の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現する。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、パーフォリンまたはＥＯＭＥＳのいずれも発現しない。
５．２．１．３段階法を使用したＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団の産生
一実施形態では、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生する３段階法が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法によるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生するために、本明細書に記載される造血細胞を増殖および分化させる方法は、当該造血細胞を含む細胞集団を、１ミリリットル当たり約２×１０４～約６×１０６細胞で維持することを含む。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、最初に、１×１０４～１×１０５細胞／ｍＬで、当該第１の培地に接種される。特定の態様では、当該造血幹細胞または前駆細胞は、最初に、約３×１０４細胞／ｍＬで、当該第１の培地に接種される。
特定の態様では、当該第１の細胞集団は、最初に、５×１０４～５×１０５細胞／ｍＬで、当該第２の培地に接種される。特定の態様では、当該第１の細胞集団は、最初に、約１×１０５細胞／ｍＬで、当該第２の培地に接種される。
特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、１×１０５～５×１０６細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、１×１０５～１×１０６細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、約５×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。より具体的な態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、スピナーフラスコで、約５×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。特定の態様では、当該第２の細胞集団は、最初に、約３×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に接種される。より具体的な態様では、当該第２の細胞集団は、静置培養物で、約３×１０５細胞／ｍＬで、当該第３の培地に最初に接種される。
特定の実施形態では、３段階法は、第１の段階（「段階１」）を含み、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、例えば、本明細書に記載のように、特定の期間、第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することを含む。特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の実施形態では、第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の実施形態では、第１の培地は、追加のＬＭＷＨを欠く。特定の実施形態では、第１の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第１の培地は、ＬＭＷＨを欠く。特定の実施形態では、第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々。特定の実施形態では、第１の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ抑制タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）、またはその両方を欠く。
特定の実施形態では、その後、「段階２」において、当該細胞を、例えば、本明細書に記載のように、特定の期間、第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生する。特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠く。特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の実施形態では、第２の培地は、追加のＬＭＷＨを欠く。特定の実施形態では、第２の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第２の培地は、ヘパリン（例えば、ＬＭＷＨ）を欠く。特定の実施形態では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の実施形態では、第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、マクロファージ抑制タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）、またはその両方を欠く。
特定の実施形態では、その後、「ステージ３」において、当該細胞を、例えば、本明細書に記載のように、特定の期間、第３の培地で培養して、第３の細胞集団（例えば、ナチュラルキラー細胞）を産生する。特定の実施形態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く。特定の実施形態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の実施形態では、第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌのうちの１つ、２つ、または３つ全てを欠く。特定の実施形態では、第３の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第３の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の実施形態では、第３の培地は、ヘパリン（例えば、ＬＭＷＨ）を欠く。
特定の実施形態では、３段階法を使用して、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を産生する。特定の実施形態では、３段階法は、間質フィーダー細胞支持の不在下で行われる。特定の実施形態では、３段階法は、外因的に追加のステロイド（例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、またはその誘導体）の不在下で行われる。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第１の培地は、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、Ｆｌｔ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－６、ＩＬ－７、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、または顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）のうちの１つ以上を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第１の培地は、幹細胞動員剤およびＴｐｏに加えて、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、第１の培地は、追加のＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、第１の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の態様では、第１の培地は、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、第１の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の態様では、当該Ｔｐｏは、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、または約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で第１の培地に存在する。他の態様では、当該Ｔｐｏは、１００ｎｇ／ｍＬ～５００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ～３００ｎｇ／ｍＬ、または約２５０ｎｇ／ｍＬの濃度で第１の培地に存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第１の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第１の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の実施形態では、当該第１の培地は、さらに、以下のうちの１つ以上を含む：抗生物質（ゲンタマイシンなど）、抗酸化剤（トランスフェリン、インスリン、および／またはβ－メルカプトエタノールなど）、亜セレン酸ナトリウム、アスコルビン酸、エタノールアミン、ならびにグルタチオン。特定の実施形態では、第１の培地の基礎を提供する培地は、当業者に既知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭ、および／またはＲＰＭＩ－１６４０などの市販の細胞／組織培養培地であるか、あるいは、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／またはＲＰＭＩ－１６４０に含まれる成分などの既知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれる成分を含む培地である。特定の実施形態では、当該第１の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。上記実施形態のいずれかの特定の実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、またはその両方を欠く。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第２の培地は、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含み、Ｔｐｏを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第２の培地は、幹細胞動員剤およびＩＬ－１５に加えて、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、第２の培地は、追加のＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、第２の培地は、追加の脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の態様では、第２の培地は、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、第２の培地は、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く。特定の態様では、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第２の培地に存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが当該第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、１Ｕ／ｍＬ～１０Ｕ／ｍＬの濃度で存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、当該第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、４Ｕ／ｍＬ～５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、ＬＭＷＨが第２の培地に存在する場合、ＬＭＷＨは、約４．５Ｕ／ｍＬの濃度で第２の培地に存在し、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第２の培地に、Ｆｌｔ－３Ｌは、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＳＣＦは、約２７ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の実施形態では、当該第２の培地は、さらに、以下のうちの１つ以上を含む：抗生物質（ゲンタマイシンなど）、抗酸化剤（トランスフェリン、インスリン、および／またはβ－メルカプトエタノールなど）、亜セレン酸ナトリウム、アスコルビン酸、エタノールアミン、ならびにグルタチオン。特定の実施形態では、第２の培地の基礎を提供する培地は、当業者に既知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭ、および／またはＲＰＭＩ－１６４０などの市販の細胞／組織培養培地であるか、あるいは、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／またはＲＰＭＩ－１６４０に含まれる成分などの既知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれる成分を含む培地である。特定の実施形態では、当該第２の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。上記実施形態のいずれかの特定の実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、またはその両方を欠く。
特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦおよびＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＳＣＦ、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、ＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される当該第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く。特定の態様では、３段階法で使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、またはＧＭ－ＣＳＦのうちの１つ以上を含む。特定の態様では、３段階法で使用される第３の培地は、ＩＬ－２およびＩＬ－１５に加えて、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、１００Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、３００Ｕ／ｍＬ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該ＩＬ－２は、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在し、当該ＩＬ－１５は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で当該第３の培地に存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．０１ｎｇ／ｍＬ～０．５０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．０６ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、０．２０ｎｇ／ｍＬ～０．３０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、０．００５ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、当該第３の培地に、ＳＣＦは、約２２ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－６は、約０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＩＬ－７は、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、Ｇ－ＣＳＦは、約０．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で存在し、ＧＭ－ＣＳＦは、約０．０１ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および１０の幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、および幹細胞動員剤を含み、ＳＣＦを欠く。特定の態様では、第３の培地は、１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２、および２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤を欠く。特定の態様では、第３の培地は、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７、２２ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ、および１０００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含み、幹細胞動員剤を欠く。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、第１の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、Ｆｌｔ－３Ｌのうちの１つ、２つ、または３つ全てを欠く。
特定の実施形態では、当該第３の培地は、さらに、以下のうちの１つ以上を含む：抗生物質（ゲンタマイシンなど）、抗酸化剤（トランスフェリン、インスリン、および／またはβ－メルカプトエタノールなど）、亜セレン酸ナトリウム、アスコルビン酸、エタノールアミン、ならびにグルタチオン。特定の実施形態では、第３の培地の基礎を提供する培地は、当業者に既知の細胞／組織培養培地、例えば、ＳＣＧＭ（商標）、ＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭ、および／またはＲＰＭＩ－１６４０などの市販の細胞／組織培養培地であるか、あるいは、ＧＢＧＭ（登録商標）、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１０、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５、ＯＰＴＭＩＺＥＲ、ＳＴＥＭＳＰＡＮ（登録商標）Ｈ３０００、ＣＥＬＬＧＲＯ ＣＯＭＰＬＥＴＥ（商標）、ＤＭＥＭ：ハムのＦ１２（「Ｆ１２」）（例えば、２：１の割合、または高グルコースもしくは低グルコースＤＭＥＭ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）、ＥＬ０８－１Ｄ２、Ｍｙｅｌｏｃｕｌｔ（商標）Ｈ５１００、ＩＭＤＭおよび／またはＲＰＭＩ－１６４０に含まれる成分などの既知の細胞／組織培養培地に一般的に含まれる成分を含む培地である。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＧＢＧＭ（登録商標）ではない。
一般に、特に列挙された培地成分は、当該培地の未定義成分中の可能な構成成分を指すものではない。例えば、当該Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５は、第１の培地、第２の培地、または第３の培地の未定義成分内に含まれず、例えば、当該Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５は、血清内に含まれない。さらに、当該ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、および／またはＧＭ－ＣＳＦは、第１の培地、第２の培地、または第３の培地の未定義成分内に含まれず、例えば、当該ＬＭＷＨ、Ｆｌｔ－３、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、および／またはＧＭ－ＣＳＦは、血清内に含まれない。
特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地または第３の培地は、ヒト血清－ＡＢを含む。特定の態様では、当該第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれかは、１％～２０％のヒト血清－ＡＢ、５％～１５％のヒト血清－ＡＢ、または約２、５、もしくは１０％のヒト血清－ＡＢを含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞は、当該第１の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、細胞は、当該第２の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０日間培養される。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、細胞は、当該第３の培地で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０日間、または３０日間超培養される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で７～１３日間培養して、当該第２の培地で当該培養する前に、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で２～６日間培養して、当該第３の培地で当該培養する前に、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で１０～３０日間培養する（すなわち、細胞を、合計１９～４９日間培養する）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で８～１２日間培養して、当該第２の培地で当該培養する前に、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で３～５日間培養して、当該第３の培地で当該培養する前に、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で１５～２５日間培養する（すなわち、細胞を、合計２６～４２日間培養する）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法において、当該造血幹細胞または前駆細胞を、当該第１の培地で約１０日間培養して、当該第２の培地で当該培養する前に、第１の細胞集団を産生し、当該第１の細胞集団を、当該第２の培地で約４日間培養して、当該第３の培地で当該培養する前に、第２の細胞集団を産生し、当該第２の細胞集団を、当該第３の培地で約２１日間培養する（すなわち、細胞を、合計約３５日間培養する）。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも１０，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも７５，０００倍多くのナチュラルキラー細胞を産生する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、７－アミノアクチノマイシンＤ（７ＡＡＤ）染色によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、アネキシン－Ｖ染色によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、７－ＡＡＤ染色およびアネキシン－Ｖ染色の両方によって決定される。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞の生存率は、トリパンブルー染色によって決定される。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも１０，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも５０，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。特定の態様では、当該３段階法は、当該第１の培地に最初に接種された造血幹細胞の数と比較して、少なくとも７５，０００倍多くのＩＬＣ３細胞を産生する。
特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも７０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ＋ナチュラルキラー細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。特定の態様では、本明細書に開示される３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＩＬＣ３細胞を含む。
特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養された場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞をインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養した場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞をインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養した場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞をインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養した場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ナチュラルキラー細胞を産生し、当該ナチュラルキラー細胞および当該Ｋ５６２細胞をインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養した場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の細胞傷害性を示す。
特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも２０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも３５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも４５％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも６０％の細胞傷害性を示す。特定の態様では、３段階法は、ＩＬＣ３細胞を産生し、当該ＩＬＣ３細胞および当該Ｋ５６２細胞がインビトロまたはエクスビボで１０：１の割合で共培養される場合、Ｋ５６２細胞に対して少なくとも７５％の細胞傷害性を示す。
特定の態様では、当該第３の培養ステップの後、当該第３の細胞集団（例えば、当該ナチュラルキラー細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、凍結保存される。特定の態様では、当該第４のステップの後、当該第４の細胞集団（例えば、当該ナチュラルキラー細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、凍結保存される。
特定の態様では、ナチュラルキラー細胞、すなわち、本明細書に記載の３段階法によって産生されるナチュラルキラー細胞を含む細胞集団が、本明細書で提供される。したがって、本明細書に記載の３段階法によって産生された単離されたナチュラルキラー細胞集団が、本明細書で提供される。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも２０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ５６＋ＣＤ３－ナチュラルキラー細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも６０％のＣＤ１６－細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも８０％のＣＤ１６－細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも２０％のＣＤ９４＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ナチュラルキラー細胞集団は、少なくとも４０％のＣＤ９４＋細胞を含む。
特定の態様では、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞集団が、本明細書で提供され、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよび／またはＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、ならびにＩＬ１Ｒ１のうちの１つ以上を発現しない。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現し、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、またはＩＬ１Ｒ１のいずれも発現しない。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＺＭＢ、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ３０、およびＮＫＧ２Ｄをさらに発現する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現する。特定の態様では、当該ナチュラルキラー細胞は、ＣＤ９４を発現しない。
特定の態様では、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１７＋ＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞の集団が、本明細書で提供され、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、およびＩＬ１Ｒ１のうちの１つ以上を発現し、ＣＤ９４、パーフォリン、およびＥＯＭＥＳのうちの１つ以上を発現しない。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＲＯＲγｔ、アリール炭化水素受容体、およびＩＬ１Ｒ１を発現し、ＣＤ９４、パーフォリン、またはＥＯＭＥＳのいずれも発現しない。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６および／または２Ｂ４をさらに発現する。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬ－２２、ＴＮＦα、およびＤＮＡＭ－１のうちの１つ以上をさらに発現する。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ２２６、２Ｂ４、ＩＬ－２２、ＴＮＦα、およびＤＮＡＭ－１を発現する。
特定の態様では、ナチュラルキラー細胞およびＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を産生する方法が、本明細書で提供され、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの各々を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞を分離することと、（ｅ）ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で組み合わせて、第４の細胞集団を産生することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、５０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、２０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１０：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、５：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：１の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：５の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：１０の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：２０の割合で組み合わされる。特定の態様では、第４の細胞集団において、ＣＤ１１ａ＋細胞およびＣＤ１１ａ－細胞は、１：５０の割合で組み合わされる。
５．３．幹細胞動員因子
５．３．１．化学的定義
本明細書に記載の幹細胞動員因子の開示の理解を容易にするために、いくつかの用語が以下に定義される。
一般に、本明細書で使用される命名法、ならびに本明細書に記載される生物学、細胞生物学、生化学、有機化学、創薬化学、および薬理学における実験手順は、当該技術分野で周知であり、通常用いられるものである。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、一般に、本開示が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。
「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容誤差を意味し、部分的には、その値がどのように測定されるか、または決定されるかに依存する。特定の実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、１、２、３、または４標準偏差以内を意味する。特定の実施形態では、「約」または「およそ」という用語は、所与の値または範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．０５％以内を意味する。
本明細書で使用される場合、限定されないが、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ、Ｒｈ、Ｒｍ、ＲＧ、ＲＪ、ＲＫ、ＲＵ、ＲＶ、ＲＹ、およびＲＺなどの任意の「Ｒ」基（複数可）は、示された原子に結合し得る置換基を表す。Ｒ基は、置換または非置換であり得る。２つの「Ｒ」基が「一緒になる」と記載されている場合、Ｒ基およびそれらが結合している原子は、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、または複素環を形成することができる。例えば、限定されないが、ＮＲａＲｂ基のＲａおよびＲｂが「一緒になる」ことが示されている場合、それは、それらが互いに共有結合して環を形成することを意味する：
Figure 2022511786000001
加えて、２つの「Ｒ」基が、それらが結合して代替として環を形成する原子（複数可）と「一緒になる」ように記載されている場合、Ｒ基は、以前に定義された可変基または置換基に限定されない。
基が「任意選択的に置換された」と記載される場合、その基は、非置換であってもよく、または示された置換基のうちの１つ以上で置換されていてもよい。同様に、基が「非置換または置換された」と記載される場合、置換されているならば、置換基（複数可）は、１つ以上の示された置換基から選択され得る。置換基が示されていない場合、示された「任意選択的に置換された」または「置換された」基は、個別にかつ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシルアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アミノアルキル、アミノ酸、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、ヘテロシクリル（アルキル）、ヒドロキシアルキル、アシル、シアノ、ハロゲン、チオカルボニル、Ｏ－カルバミル、Ｎ－カルバミル、Ｏ－チオカルバミル、Ｎ－アミド、Ｓ－スルホンアミド、Ｎ－スルホンアミド、Ｃ－カルボキシ、Ｏ－カルボキシ、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、アジド、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、アミノ、一置換アミノ基、および二置換アミノ基から選択される１つ以上の基（複数可）で置換され得ることを意味する。
本明細書で使用される場合、「ａ」および「ｂ」が整数である「Ｃａ～Ｃｂ」は、アルキル、アルケニルもしくはアルキニル基の炭素原子の数、またはシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリールもしくはヘテロアリシクリル（ｈｅｔｅｒｏａｌｉｃｙｃｌｙｌ）基の環の炭素原子の数を指す。すなわち、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルの環（複数可）、シクロアルケニルの環（複数可）、アリールの環（複数可）、ヘテロアリールの環（複数可）、またはヘテロアリシクリルの環（複数可）は、包含的に「ａ」から「ｂ」までの炭素原子を含有することができる。したがって、例えば、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」基は、１～４個の炭素を有する全てのアルキル基、すなわち、ＣＨ３－、ＣＨ３ＣＨ２－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２－、（ＣＨ３）２ＣＨ－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－、および（ＣＨ３）３Ｃ－を指す。アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロアリシクリル基に関して「ａ」および「ｂ」が指定されていない場合、これらの定義に記載される最も広い範囲が想定される。
本明細書で使用される場合、「アルキル」は、完全に飽和した（二重または三重結合なし）炭化水素基を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖を指す。アルキル基は、１～２０個の炭素原子を有し得る（本明細書に出現するたびに、「１～２０」などの数値範囲は、所与の範囲内の各整数を指し、例えば、「１～２０個の炭素原子」は、アルキル基が、最大で２０個の炭素原子を含み、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子などからなり得ることを意味するが、本定義は、数値範囲が指定されていない「アルキル」という用語の出現も包含する）。アルキル基はまた、１～１０個の炭素原子を有する中サイズのアルキルであってもよい。アルキル基はまた、１～６個の炭素原子を有する低級アルキルであってもよい。化合物のアルキル基は、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」または同様の名称として表され得る。単なる例として、「Ｃ１～Ｃ４アルキル」は、アルキル鎖に１～４個の炭素原子が存在することを示し、すなわち、アルキル鎖は、メチル、エチル、プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、およびｔ－ブチルから選択される。典型的なアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、三級ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」は、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖に１つ以上の二重結合を含有するアルキル基を指す。アルケニル基の例としては、アレニル、ビニルメチル、およびエテニルが挙げられる。アルケニル基は、非置換または置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アルキニル」は、直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖に１つ以上の三重結合を含有するアルキル基を指す。アルキニルの例としては、エチニルおよびプロピニルが挙げられる。アルキニル基は、非置換または置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」は、完全に飽和した（二重または三重結合なし）単環式または多環式の炭化水素環系を指す。２つ以上の環から構成されている場合、環は、融合された様式で一緒に連結され得る。シクロアルキル基は、環（複数可）に３～１０個の原子、または環（複数可）に３～８個の原子を含有することができる。シクロアルキル基は、非置換または置換であり得る。典型的なシクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「シクロアルケニル」は、少なくとも１つの環に１つ以上の二重結合を含有する単環式または多環式炭化水素環系を指すが、二重結合が２つ以上存在する場合、全ての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を形成することはできない（そうでなければ、基は本明細書で定義される「アリール」である）。シクロアルケニル基は、環（複数可）に３～１０個の原子、または環（複数可）に３～８個の原子を含有することができる。２つ以上の環から構成される場合、環は、融合された様式で一緒に連結され得る。シクロアルケニル基は、非置換または置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アリール」は、全ての環にわたって完全に非局在化したπ電子系を有する炭素環式（全ての炭素）の単環式または多環式芳香族環系（２つの炭素環が化学結合を共有する縮合環系を含む）を指す。アリール基の炭素原子の数は異なり得る。例えば、アリール基は、Ｃ６～Ｃ１４アリール基、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、またはＣ６アリール基であり得る。アリール基の例としては、ベンゼン、ナフタレン、アズレンが挙げられるが、これらに限定されない。アリール基は、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」は、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のヘテロ原子、すなわち、限定されないが、窒素、酸素、および硫黄を含む炭素以外の元素を含有する、単環式または多環式の芳香族環系（完全に非局在化したπ電子系を有する環系）を指す。ヘテロアリール基の環（複数可）の原子の数は、異なり得る。例えば、ヘテロアリール基は、環（複数可）に４～１４個の原子、環（複数可）に５～１０個の原子、または環（複数可）に５～６個の原子を含有することができる。さらに、「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つのアリール環および少なくとも１つのヘテロアリール環、または少なくとも２つのヘテロアリール環などの２つの環が少なくとも１つの化学結合を共有する縮合環系を含む。ヘテロアリール環の例としては、本明細書に記載のものおよび以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：フラン、フラザン、チオフェン、ベンゾチオフェン、フタラジン、ピロール、オキサゾール、ベンゾオキサゾール、１，２，３－オキサジアゾール、１，２，４－オキサジアゾール、チアゾール、１，２，３－チアジアゾール、１，２，４－チアジアゾール、ベンゾチアゾール、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、インドール、インダゾール、ピラゾール、ベンゾピラゾール、イソオキサゾール、ベンゾイソオキサゾール、イソチアゾール、トリアゾール、ベンゾトリアゾール、チアジアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、プリン、プテリジン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、トリアジン。ヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリル」または「ヘテロアリシクリル」は、炭素原子が１～５個のヘテロ原子と共に当該環系を構成する、３員、４員、５員、６員、７員、８員、９員、１０員、最大１８員の単環式、二環式、および三環式の環系を指す。しかしながら、複素環は、完全に非局在化したπ電子系が全ての環にわたって生じないような方法で位置する１つ以上の不飽和結合を任意選択的に含んでもよい。ヘテロ原子（複数可）は、炭素以外の元素であり、限定されないが、酸素、硫黄、および窒素を含む。複素環は、１つ以上のカルボニルまたはチオカルボニル官能基をさらに含有し得、定義のように、ラクタム、ラクトン、環状イミド、環状チオイミド、および環状カルバメートなどのオキソ系およびチオ系を含む。２つ以上の環から構成されている場合、環は、融合された様式で一緒に連結され得る。加えて、ヘテロシクリルの任意の窒素は、四級化され得る。ヘテロシクリルまたはヘテロアリシクリル基は、非置換または置換であり得る。そのような「ヘテロシクリル」または「ヘテロアリシクリル」基の例としては、本明細書に記載されるものおよび以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：１，３－ジオキシン、１，３－ジオキサン、１，４－ジオキサン、１，２－ジオキソラン、１，３－ジオキソラン、１，４－ジオキソラン、１，３－オキサチアン、１，４－オキサチイン、１，３－オキサチオラン、１，３－ジチオール、１，３－ジチオラン、１，４－オキサチアン、テトラヒドロ－１，４－チアジン、１，３－チアジナン、２Ｈ－１，２－オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、バルビツール酸、チオバルビツール酸、ジオキソピペラジン、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、トリオキサン、ヘキサヒドロ－１，３，５－トリアジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、オキサゾリジノン、チアゾリン、チアゾリジン、モルホリン、オキシラン、ピペリジンＮ－オキシド、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリジオン、４－ピペリドン、ピラゾリン、ピラゾリジン、２－オキソピロリジン、テトラヒドロピラン、４Ｈ－ピラン、テトラヒドロチオピラン、チアモルホリン、チアモルホリンスルホキシド、チアモルホリンスルホン、およびそれらのベンゾ縮合類似体（例えば、ベンゾイミダゾリジノン、テトラヒドロキノリン、および３，４－メチレンジオキシフェニル）。
本明細書で使用される場合、「アラルキル」および「アリール（アルキル）」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結されたアリール基を指す。アラルキルの低級アルキレンおよびアリール基は、置換または非置換であってもよい。例として、限定されないが、ベンジル、２－フェニルアルキル、３－フェニルアルキル、およびナフチルアルキルが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアラルキル」および「ヘテロアリール（アルキル）」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結されたヘテロアリール基を指す。ヘテロアラルキルの低級アルキレンおよびヘテロアリール基は、置換または非置換であり得る。例として、限定されないが、２－チエニルアルキル、３－チエニルアルキル、フリルアルキル、チエニルアルキル、ピロリルアルキル、ピリジルアルキル、イソオキサゾリルアルキル、イミダゾリルアルキル、およびそれらのベンゾ縮合類似体が挙げられる。
「ヘテロアリシクリル（アルキル）」および「ヘテロシクリル（アルキル）」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結されたヘテロシクリル基またはヘテロアリシクリル基を指す。ヘテロアリシクリル（アルキル）の低級アルキレンおよびヘテロシクリルは、置換または非置換であり得る。例としては、限定されないが、テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル（メチル）、ピペリジン－４－イル（エチル）、ピペリジン－４－イル（プロピル）、テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン－４－イル（メチル）、および１，３－チアジナン－４－イル（メチル）が挙げられる。
「低級アルキレン基」は、直鎖－ＣＨ２－テザリング基（ｔｅｔｈｅｒｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）であり、それらの末端炭素原子を介して分子断片を連結する結合を形成する。例としては、限定されないが、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）、およびブチレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）が挙げられる。低級アルキレン基は、低級アルキレン基の１つ以上の水素を、「置換された」の定義の下に列挙される置換基（複数可）で置き換えることによって置換することができる。
本明細書で使用される場合、「アルコキシ」は、式－ＯＲを指し、式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり、本明細書で定義される。アルコキシの非限定的なリストは、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、１－メチルエトキシ（イソプロポキシ）、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、フェノキシ、およびベンゾオキシである。アルコキシは、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アシル」は、置換基として、カルボニル基を介して連結された水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）を指す。例としては、ホルミル、アセチル、プロパノイル、ベンゾイル、およびアクリルが挙げられる。アシルは、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アシルアルキル」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結されたアシルを指す。例としては、アリール－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－およびヘテロアリール－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－が挙げられ、ｎは１～６の範囲の整数である。
本明細書で使用される場合、「アルコキシアルキル」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結されたアルコキシ基を指す。例としては、Ｃ１～４アルキル－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ－が挙げられ、ｎは１～６の範囲の整数である。
本明細書で使用される場合、「アミノアルキル」は、置換基として、低級アルキレン基を介して連結された任意選択的に置換されたアミノ基を指す。例としては、Ｈ２Ｎ（ＣＨ２）ｎ－が挙げられ、ｎは１～６の範囲の整数である。
本明細書で使用されるとき、「ヒドロキシアルキル」は、１つ以上の水素原子がヒドロキシ基によって置き換えられたアルキル基を指す。例示的なヒドロキシアルキル基としては、２－ヒドロキシエチル、３－ヒドロキシプロピル、２－ヒドロキシプロピル、および２，２－ジヒドロキシエチルが挙げられるが、これらに限定されない。ヒドロキシアルキルは、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用されるとき、「ハロアルキル」は、１つ以上の水素原子がハロゲンによって置き換えられたアルキル基（例えば、モノハロアルキル、ジハロアルキル、およびトリハロアルキル）を指す。かかる基としては、クロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、クロロフルオロアルキル、クロロジフルオロアルキル、および２－フルオロイソブチルが挙げられるが、これらに限定されない。ハロアルキルは、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用されるとき、「ハロアルコキシ」は、１つ以上の水素原子がハロゲンによって置き換えられたアルコキシ基（例えば、モノハロアルコキシ、ジハロアルコキシ、およびトリハロアルコキシ）を指す。かかる基としては、クロロメトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロフルオロアルキル、クロロジフルオロアルコキシ、および２－フルオロイソブトキシが挙げられるが、これらに限定されない。ハロアルコキシは、置換または非置換であり得る。
「スルフェニル」基は、「－ＳＲ」基を指し、Ｒは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。スルフェニルは、置換または非置換であり得る。
「スルフィニル」基は、「－Ｓ（＝Ｏ）－Ｒ」基を指し、Ｒは、スルフェニルに関して定義されたものと同じであり得る。スルフィニルは、置換または非置換であり得る。
「スルホニル」基は、「ＳＯ２Ｒ」基を指し、Ｒは、スルフェニルに関して定義されたものと同じであり得る。スルホニルは、置換または非置換であり得る。
「Ｏ－カルボキシ」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ－」基を指し、Ｒは、本明細書で定義されるように、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｏ－カルボキシは、置換または非置換であり得る。
「エステル」および「Ｃ－カルボキシ」という用語は、「－Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ」基を指し、Ｒは、Ｏ－カルボキシに関して定義されたものと同じであり得る。エステルおよびＣ－カルボキシは、置換または非置換であり得る。
「チオカルボニル」基は、「－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ」基を指し、Ｒが、Ｏ－カルボキシに関して定義されたものと同じであり得る。チオカルボニルは、置換または非置換であり得る。
「トリハロメタンスルホニル」基は、「Ｘ３ＣＳＯ２－」基を指し、各Ｘはハロゲンである。
「トリハロメタンスルホンアミド」基は、「Ｘ３ＣＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、各Ｘは、ハロゲンであり、ＲＡは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）である。
本明細書で使用される「アミノ」という用語は、－ＮＨ２基を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒドロキシ」という用語は、－ＯＨ基を指す。
「シアノ」基は、「－ＣＮ」基を指す。
本明細書で使用される「アジド」という用語は、－Ｎ３基を指す。
「イソシアナト」基は、「－ＮＣＯ」基を指す。
「チオシアナト」基は、「－ＣＮＳ」基を指す。
「イソチオシアナト」基は、「－ＮＣＳ」基を指す。
「カルボニル」基は、Ｃ＝Ｏ基を指す。
「Ｓ－スルホンアミド」基は、「－ＳＯ２Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ＲＡおよびＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｓ－スルホンアミドは、置換または非置換であり得る。
「Ｎ－スルホンアミド」基は、「ＲＳＯ２Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ＲおよびＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｎ－スルホンアミドは、置換または非置換であり得る。
「Ｏ－カルバミル」基は、「－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、式中、ＲＡおよびＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｏ－カルバミルは、置換または非置換であり得る。
「Ｎ－カルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ＲおよびＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｎ－カルバミルは、置換または非置換であり得る。
「Ｏ－チオカルバミル」基は、「－ＯＣ（＝Ｓ）－Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、ＲＡおよびＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｏ－チオカルバミルは、置換または非置換であり得る。
「Ｎ－チオカルバミル」基は、「ＲＯＣ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ＲおよびＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｎ－チオカルバミルは、置換または非置換であり得る。
「Ｃ－アミド」基は、「－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡＲＢ）」基を指し、式中、ＲＡおよびＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｃ－アミドは、置換または非置換であり得る。
「Ｎ－アミド」基は、「ＲＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＡ）－」基を指し、ＲおよびＲＡは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。Ｎ－アミドは、置換または非置換であり得る。
「尿素」基は、「Ｎ（Ｒ）－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲＡＲＢ基を指し、Ｒは、水素またはアルキルであり得、ＲＡおよびＲＢは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル（アルキル）、アリール（アルキル）、ヘテロアリール（アルキル）、またはヘテロシクリル（アルキル）であり得る。尿素は、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される「ハロゲン原子」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素などの、元素周期表の第７列の放射性安定性原子のいずれか１つを意味する。
本明細書で使用される場合、
Figure 2022511786000002
 は、特に明記されない限り、単結合または二重結合を示す。
置換基の数が指定されていない場合（例えば、ハロアルキル）、１つ以上の置換基が存在し得る。例えば、「ハロアルキル」は、１つ以上の同じまたは異なるハロゲンを含み得る。別の例として、「Ｃ１～Ｃ３アルコキシフェニル」は、１つ以上の同じまたは異なるアルコキシ基を含み得、１個、２個、または３個の原子を含有する。
本明細書で使用される場合、任意の保護基、アミノ酸、および他の化合物の略語は、別段の指示がない限り、それらの一般的な用法、認識された略語、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅと一致する（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１：９４２－９４４（１９７２）を参照されたい）。
特定の実施形態では、「光学活性」および「鏡像異性体活性」は、約５０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、約９９．５％以上、または約９９．８％以上の鏡像異性体過剰率を有する分子の集合を指す。特定の実施形態では、化合物は、当の２つの鏡像異性体の総重量に基づいて、約９５％以上の所望の鏡像異性体、約５％以下のより好ましくない鏡像異性体を含む。
光学活性化合物を説明する際、接頭辞ＲおよびＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの光学活性化合物の絶対立体配置を示すために使用される。（＋）および（－）は、光学活性化合物の旋光性、すなわち、偏光面が光学活性化合物によって回転する方向を示すために使用される。接頭辞（－）は、光学活性化合物が左旋性であることを示し、すなわち、化合物が偏光面を左または反時計回りに回転させる。接頭辞（＋）は、光学活性化合物が右旋性であることを示し、すなわち、化合物が偏光面を右または時計回りに回転させる。しかしながら、旋光性の符号、（＋）および（－）は、化合物ＲおよびＳの絶対立体配置とは関係しない。
「同位体バリアント」という用語は、同位体が、かかる化合物を構成する原子のうちの１つ以上で、非天然の割合を含有する化合物を指す。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、限定されないが、水素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、炭素－１１（１１Ｃ）、炭素－１２（１２Ｃ）、炭素－１３（１３Ｃ）、炭素－１４（１４Ｃ）、窒素－１３（１３Ｎ）、窒素－１４（１４Ｎ）、窒素－１５（１５Ｎ）、酸素－１４（１４Ｏ）、酸素－１５（１５Ｏ）、酸素－１６（１６Ｏ）、酸素－１７（１７Ｏ）、酸素－１８（１８Ｏ）、フッ素－１７（１７Ｆ）、フッ素－１８（１８Ｆ）、リン－３１（３１Ｐ）、リン－３２（３２Ｐ）、リン－３３（３３Ｐ）、硫黄－３２（３２Ｓ）、硫黄－３３（３３Ｓ）、硫黄－３４（３４Ｓ）、硫黄－３５（３５Ｓ）、硫黄－３６（３６Ｓ）、塩素－３５（３５Ｃｌ）、塩素－３６（３６Ｃｌ）、塩素－３７（３７Ｃｌ）、臭素－７９（７９Ｂｒ）、臭素－８１（８１Ｂｒ）、ヨウ素－１２３（１２３Ｉ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素－１２７（１２７Ｉ）、ヨウ素－１２９（１２９Ｉ）、およびヨウ素－１３１（１３１Ｉ）を含む１つ以上の同位体を、非天然の割合で含有する。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、安定な形態、すなわち、非放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、限定されないが、水素（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）、炭素－１２（１２Ｃ）、炭素－１３（１３Ｃ）、窒素－１４（１４Ｎ）、窒素－１５（１５Ｎ）、酸素－１６（１６Ｏ）、酸素－１７（１７Ｏ）、酸素－１８（１８Ｏ）、フッ素－１７（１７Ｆ）、リン－３１（３１Ｐ）、硫黄－３２（３２Ｓ）、硫黄－３３（３３Ｓ）、硫黄－３４（３４Ｓ）、硫黄－３６（３６Ｓ）、塩素－３５（３５Ｃｌ）、塩素－３７（３７Ｃｌ）、臭素－７９（７９Ｂｒ）、臭素－８１（８１Ｂｒ）、およびヨウ素－１２７（１２７Ｉ）を含む１つ以上の同位体を、非天然の割合で含有する。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、不安定な形態、すなわち、放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、限定されないが、トリチウム（３Ｈ）、炭素－１１（１１Ｃ）、炭素－１４（１４Ｃ）、窒素－１３（１３Ｎ）、酸素－１４（１４Ｏ）、酸素－１５（１５Ｏ）、フッ素－１８（１８Ｆ）、リン－３２（３２Ｐ）、リン－３３（３３Ｐ）、硫黄－３５（３５Ｓ）、塩素－３６（３６Ｃｌ）、ヨウ素－１２３（１２３Ｉ）、ヨウ素－１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素－１２９（１２９Ｉ）、およびヨウ素－１３１（１３１Ｉ）を含む１つ以上の同位体を、非天然の割合で含有する。本明細書に提供される化合物では、当業者の判断に従って実行可能である場合、任意の水素は、例えば、２Ｈであり得るか、または任意の炭素は、例えば、１３Ｃであり得るか、または任意の窒素は、例えば、１５Ｎであり得るか、または任意の酸素は、例えば、１８Ｏであり得ることが理解されるであろう。特定の実施形態では、化合物の「同位体バリアント」は、非天然の割合の重水素（Ｄ）を含有する。
「溶媒和物」という用語は、化学量論的または非化学量論的な量で存在する、溶質の１つ以上の分子（例えば、本明細書に提供される化合物）、および溶媒の１つ以上の分子によって形成される複合体または凝集体を指す。好適な溶媒としては、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、および酢酸が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、溶媒は、薬学的に許容される。一実施形態では、複合体または凝集体は、結晶形態である。別の実施形態では、複合体または凝集体は、非結晶形態である。溶媒が水である場合、溶媒和物は、水和物である。水和物の例としては、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、および五水和物が挙げられるが、これらに限定されない。
「鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、もしくはその同位体バリアント、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ」という語句は、「（ｉ）それにおいて参照される化合物の鏡像異性体、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、もしくは同位体バリアント、（ｉｉ）それにおいて参照される化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ、または（ｉｉｉ）それにおいて参照される化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくは鏡像異性体のプロドラッグ、鏡像異性体の混合物、２つ以上のジアステレオマーの混合物、もしくは同位体バリアント」という語句と同じ意味を有する。
５．３．２．幹細胞動員化合物
特定の態様では、幹細胞動員因子は、以下に記載される式（Ｉ）、（Ｉ－Ａ）、（Ｉ－Ｂ）、（Ｉ－Ｃ）、または（Ｉ－Ｄ）を有する化合物である。
式（Ｉ）
本明細書に開示される一部の実施形態は、以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関し、
Figure 2022511786000003
 式中、各
Figure 2022511786000004
 は、独立して、単結合または二重結合を表し得、ＲＪは、－ＮＲａＲｂ、－ＯＲｂ、および＝Ｏからなる群から選択され得、ＲＪが＝Ｏである場合、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000005
 は、単結合を表し、Ｇは、Ｎであり、Ｎは、ＲＧで置換され、それ以外は、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000006
 は、二重結合を表し、Ｇは、Ｎであり、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され得、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され得、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得、ＲＹおよびＲＺは、各々独立して、不在であり得るか、または水素、ハロ、Ｃ１～６アルキル、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２からなる群から選択され得、あるいはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000007
 から選択される環を形成し得、当該環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）から選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され得、ＲＹおよびＲＺが共に
Figure 2022511786000008
 を形成する場合、ＲＪは、－ＯＲｂまたは＝Ｏであり得、Ｒｄは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｍは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘ、Ｙ、およびＺは、各々独立して、ＮまたはＣであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。
［００７７］一部の実施形態では、
Figure 2022511786000009
 は、単結合を表し得る。他の実施形態では、
Figure 2022511786000010
 は、二重結合を表し得る。一部の実施形態では、ＹおよびＺを結合する
Figure 2022511786000011
 は、単結合を表し得る。他の実施形態では、ＹおよびＺを結合する
Figure 2022511786000012
 は、二重結合を表し得る。一部の実施形態では、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000013
 が単結合を表す場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｎは、ＲＧで置換される。他の実施形態では、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000014
 が二重結合を表す場合、Ｇは、Ｎであり得る。一部の実施形態では、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000015
 が二重結合を表す場合、ＪおよびＲＪを結合する
Figure 2022511786000016
 は、次いで単結合であり得る。一部の実施形態では、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000017
 が二重結合を表す場合、次いでＪおよびＲＪを結合する
Figure 2022511786000018
 は、二重結合ではあり得ない。一部の実施形態では、ＪおよびＲＪを結合する
Figure 2022511786000019
 が二重結合を表す場合、次いでＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000020
 は、単結合であり得る。一部の実施形態では、ＪおよびＲＪを結合する
Figure 2022511786000021
 が二重結合を表す場合、次いでＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000022
 は、二重結合ではあり得ない。
一部の実施形態では、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得る。他の実施形態では、ＲＪは、－ＯＲｂであり得る。さらに他の実施形態では、ＲＪは、＝Ｏであり得る。一部の実施形態では、ＲＪが＝Ｏである場合、次いでＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000023
 は、単結合を表し、Ｇは、Ｎであり、Ｎは、ＲＧで置換される。一部の実施形態では、ＲＧは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２である。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒａは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。例えば、Ｒａは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｂは、Ｒｃであり得る。一部の実施形態では、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得る。例えば、Ｒｂは、－ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得る。一部の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。
一部の実施形態では、Ｒｃは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃ部分が置換として示される場合、その部分は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基Ｅで置換され得る。一部の実施形態では、Ｅは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。
一部の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリールであり得る。他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。Ｒｃ部分が置換として示される場合、その部分は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基Ｅで置換され得る。一部の実施形態では、Ｅは、－ＯＨであり得る。他の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。さらに他の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。
一部の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、フェニルであり得る。他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、ナフチルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、ヒドロキシフェニルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｂが－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃである場合、Ｒｃは、インドリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、水素であり得る。他の実施形態では、ＲＫは、非置換Ｃ１～６アルキルであり得る。例えば、一部の実施形態では、ＲＫは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル（分枝鎖および直鎖）、またはヘキシル（分枝鎖および直鎖）であり得る。他の実施形態では、ＲＫは、置換Ｃ１～６アルキルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得る。例えば、一部の実施形態では、ＲＫは、－ＮＨ（ＣＨ３）、－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、－ＮＨ（イソプロピル）、または－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）であり得る。他の実施形態では、ＲＫは、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリールであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、置換Ｃ６～１０アリールであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。ＲＫ部分が置換として示される場合、その部分は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基Ｑで置換され得る。一部の実施形態では、Ｑは、－ＯＨであり得る。他の実施形態では、Ｑは、Ｃ１－４アルキルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｑは、Ｃ１～４ハロアルキルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｑは、ハロであり得る。さらに他の実施形態では、Ｑは、シアノであり得る。さらに他の実施形態では、Ｑは、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）であり得る。さらに他の実施形態では、Ｑは、－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）であり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、フェニルまたはナフチルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、ベンゾチオフェニルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、ベンゾチオフェニルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、ベンゾチオフェニルであり得る。さらに他の実施形態では、ＲＫは、ピリジニルであり得る。さらに他の実施形態では、ＲＫは、１つ以上の置換基Ｑで置換されたピリジニルであり得る。例えば、ＲＫは、メチルピリジニル、エチルピリジニル、シアノピリジニル、クロロピリジニル、フルオロピリジニル、またはブロモピリジニルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＧは、水素であり得る。一部の実施形態では、ＲＧは、Ｃ１～４アルキルであり得る。一部の実施形態では、ＲＧは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。
一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、不在であり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、水素であり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、ハロであり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、Ｃ１～６アルキルであり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、－ＯＨであり得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）であり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得る。例えば、ＲＹおよびＲＺは、独立して、－ＮＨ（ＣＨ３）、－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、－ＮＨ（イソプロピル）、または－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）であり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、独立して、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得る。
一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、環を形成し得る。一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000024
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000025
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000026
 を形成し得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000027
 を形成し得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000028
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000029
 を形成し得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に結合されて、
Figure 2022511786000030
 を形成し得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000031
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000032
 を形成し得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000033
 を形成し得る。一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺが、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて環を形成し得る場合、その環は、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル、－Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）２、シアノ、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルから選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され得る。
一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺが一緒に
Figure 2022511786000034
 を形成する場合、次いで、ＲＪは、－ＯＲｂまたは＝Ｏであり得る。
一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000035
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000036
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000037
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000038
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000039
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000040
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000041
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000042
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000043
 を形成し得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000044
 を形成し得る。一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺが、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて環を形成し得る場合、その環は、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル、－Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）２、シアノ、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルから選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され得る。一部の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒に
Figure 2022511786000045
 となり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒に
Figure 2022511786000046
 となり得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒に
Figure 2022511786000047
 となり得る。さらに他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒に
Figure 2022511786000048
 となり得る。他の実施形態では、ＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒に
Figure 2022511786000049
 となり得る。
一部の実施形態では、Ｒｄは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。例えば、Ｒｄは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｄは、ハロであり得る。他の実施形態では、Ｒｄは、シアノであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｍは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒｍは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。例えば、Ｒｍは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｍは、ハロであり得る。例えば、Ｒｍは、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードであり得る。他の実施形態では、Ｒｍは、シアノであり得る。
一部の実施形態では、Ｘ、Ｙ、およびＺは、各々独立して、ＮまたはＣであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。一部の実施形態では、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｎであり得る。他の実施形態では、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、ＣＨであり得る。一部の実施形態では、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、ＣＨであり得、Ｚは、Ｎであり得る。さらに他の実施形態では、Ｘは、ＣＨであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｎであり得る。さらに他の実施形態では、Ｘは、ＣＨであり得、Ｙは、ＣＨであり得、Ｚは、Ｎであり得る。他の実施形態では、Ｘは、ＣＨであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、ＣＨであり得る。さらに他の実施形態では、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、ＣＨであり得、Ｚは、ＣＨであり得る。他の実施形態では、Ｘは、ＣＨであり得、Ｙは、ＣＨであり得、Ｚは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＹおよびＲＺは、各々独立して、不在であり得るか、または、水素、Ｃ１～６アルキル、および－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）からなる群から選択され得、あるいはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000050
 から選択される環を形成し得、当該環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）から選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され得、Ｒｄは、Ｃ１～４アルキルであり得、Ｒｍは、シアノであり得、Ｘ、Ｙ、およびＺは、各々独立して、ＮまたはＣであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換フェニル、置換フェニル、インドリル、および－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、メチル、置換ピリジニル、非置換ベンゾチオフェニル、および－ＮＨ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＹは、－ＮＨ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得、ＲＺは、不在であり得るか、または、水素であり得、あるいはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
Figure 2022511786000051
 から選択される環を形成し得、当該環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～４アルキル、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、シアノ、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルから選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され得、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｍは、シアノであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000052
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得るか、またはＲｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得るか、またはＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、１つ以上のＱで置換され得、Ｑは、シアノ、ハロ、もしくはＣ１～Ｃ４アルキルから選択され得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に、
Figure 2022511786000053
 となり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000054
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、またはＲｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、水素、Ｃ１－４アルキル、もしくはＯ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000055
 となり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000056
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得るか、またはＲｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、水素、Ｃ１－４アルキル、もしくはＯ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000057
 となり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000058
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され得、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得、ＲＺは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得、ＹおよびＺを結合する
Figure 2022511786000059
 は、二重結合であり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－６－（イソプロピルアミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000060
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６－１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000061
 となり、その環は、Ｃ１～Ｃ４アルキルで置換され得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000062
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000063
 となり、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール）であり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000064
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000065
 となり、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－オンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＯＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000066
 は、二重結合であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000067
 となり得、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃである。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミドであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000068
 は、二重結合であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000069
 となり得、当該環は、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２で置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃである。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000070
 .は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり、ＲＹは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得、ＲＺは、不在であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｎであり得、ＹおよびＺを結合する
Figure 2022511786000071
 は、二重結合であり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は５－（２－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－６－（ｓｅｃ－ブチルアミノ）ピリミジン－４－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000072
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、非置換Ｃ１～６アルキルであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000073
 となり得、その環は、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリールで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂであり得る場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000074
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、水素であり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000075
 となり得、その環は、置換Ｃ６～Ｃ１０アリールで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが＝Ｏである場合、Ｇは、Ｎで置換され得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000076
 は、単結合であり得、ＲＧは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000077
 となり得、Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃで有り得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミドで有り得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000078
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000079
 となり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000080
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000081
 となり、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000082
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000083
 となり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000084
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６－１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000085
 となり得、その環は、シアノで置換され得、Ｒｄは、Ｃ１～４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000086
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000087
 となり得、その環は、Ｃ１～４アルキルで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000088
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６－１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000089
 となり得、その環は、Ｃ１～４アルキルで置換され得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000090
 は、二重結合を表し、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000091
 となり、その環は、Ｃ１～Ｃ４アルキルで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧとＪを結合する
Figure 2022511786000092
 は、二重結合を表し、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000093
 となり得、その環は、Ｃ１～Ｃ４アルキルで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000094
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり得、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000095
 となり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000096
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000097
 となり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000098
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000099
 となり得、その環は、Ｃ１～Ｃ４アルキルで置換され、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000100
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり、ＲＹおよびＲＺは、一緒に
Figure 2022511786000101
 となり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物が、本明細書に提供され、その化合物は、以下から選択され得る：
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－６－（イソプロピルアミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－オン、
３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミド、
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
５－（２－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－６－（ｓｅｃ－ブチルアミノ）ピリミジン－４－イル）ニコチノニトリル、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミド、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミン、
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリル、
Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミン、
２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミン、
４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノール、
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル、およびそれらの薬学的に許容される塩。
式（Ｉ－Ａ）
本明細書に提供される一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－Ａ）の構造を有することができ：
Figure 2022511786000102
 その薬学的に許容される塩を含み、式中、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得、Ｗは、ＯまたはＳであり得、Ｒｅは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルで有り得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒａは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得る。例えば、Ｒｂは、－ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｃは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃ部分が置換として示される場合、その部分は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基Ｅで置換され得る。一部の実施形態では、Ｅは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、フェニルであり得る。他の実施形態では、Ｒｃは、ヒドロキシフェニルであり得る。さらに他の実施形態では、Ｒｃは、インドリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され得、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得る。一部の実施形態では、ＲＫは、ピリジニルであり得る。他の実施形態では、ＲKは、１つ以上の置換基Ｑで置換されたピリジニルであり得る。例えば、ＲKは、メチルピリジニル、エチルピリジニル、シアノピリジニル、クロロピリジニル、フルオロピリジニル、またはブロモピリジニルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｅは、水素であり得る。一部の実施形態では、Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。例えば、Ｒｅは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ｒeは、Ｃ１～４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され得、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルおよび置換ピリジニルからなる群から選択され得、置換ピリジニルは、１つの置換基Ｑで置換され、Ｑは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、Ｒｅは、イソプロピルであり得る。
一部の実施形態では、ＷがＯである場合、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－Ｃ１～４アルキル、ハロ、シアノ、および－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）からなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得、Ｒｅは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、ＷがＳである場合、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ6-10アリール、置換Ｃ6-10アリール、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリール、ならびにＯ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールからなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－Ｃ１～４アルキル、ハロ、シアノ、および－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）からなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得、Ｒｅは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｗは、Ｓであり得、Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり、Ｗは、Ｓであり得、Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり得、Ｗは、Ｓであり得、Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｗは、Ｓであり得、Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり、Ｗは、Ｏであり得、Ｒｅは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000103
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、Ｗは、Ｏであり得、Ｒｅは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり得、Ｗは、Ｏであり得、Ｒｅは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
［０１４０］一部の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、以下からなる群から選択され得る：
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、および
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル。
式（Ｉ－Ｂ）
本明細書で提供される他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－Ｂ）の構造を有することができ：
Figure 2022511786000104
 その薬学的に許容される塩を含み、式中、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され得、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得、Ｒｆは、水素、Ｃ１～４アルキル、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、および１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリールからなる群から選択され得、Ｕは、ＮまたはＣＲＵであり得、Ｖは、ＳまたはＮＲＶであり得、ＲＵは、水素、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、ＲＶは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、ＵがＣＲＵであり、かつＶがＮＲＶである場合、ＲＵは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒａは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得る。例えば、Ｒｂは、－ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃ、または－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得る。特定の実施形態では、Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｒｃであり得る。特定の実施形態では、Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。特定の実施形態では、Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－（インドリル）であり得る。特定の実施形態では、Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－（ヒドロキシフェニル）であり得る。
一部の実施形態では、Ｒｃは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得る。一部の実施形態では、Ｒｃ部分が置換として示される場合、その部分は、１つ以上、例えば、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基Ｅで置換され得る。一部の実施形態では、Ｅは、－ＯＨであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキルであり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり得る。一部の実施形態では、Ｅは、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）であり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、水素であり得る。他の実施形態では、ＲＫは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得る。例えば、ＲＫは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。一部の実施形態では、ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され得、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得る。特定の実施形態では、ＲＫは、ベンゾチオフェニルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、１つ以上の置換基Ｑで置換されたピリジニルであり得る。例えば、ＲKは、メチルピリジニル、エチルピリジニル、シアノピリジニル、クロロピリジニル、フルオロピリジニル、またはブロモピリジニルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得る。特定の実施形態では、ＲＧは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得る。
一部の実施形態では、Ｒｆは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒｆは、Ｃ１～４アルキルであり得る。例えば、Ｒｆは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。一部の実施形態では、Ｒｆは、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリールであり得る。他の実施形態では、Ｒｆは、１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリールであり得る。特定の実施形態では、Ｒｆは、１～５個のハロ原子で置換されたフェニルであり得る。特定の実施形態では、Ｒｆは、フルオロフェニルであり得る。
一部の実施形態では、Ｕは、Ｎであり得る。他の実施形態では、Ｕは、ＣＲＵであり得る。
一部の実施形態では、Ｖは、Ｓであり得る。他の実施形態では、Ｖは、ＮＲＶであり得る。
一部の実施形態では、ＲＵは、水素であり得る。一部の実施形態では、ＲＵは、Ｃ１～４アルキルであり得る。他の実施形態では、ＲＵは、ハロであり得る。例えば、ＲＵは、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードであり得る。さらに他の実施形態では、ＲＵは、シアノであり得る。
一部の実施形態では、ＲＶは、水素であり得る。他の実施形態では、ＲＶは、Ｃ１～４アルキルであり得る。例えば、ＲＶは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。一部の実施形態では、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得る。他の実施形態では、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され得、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、Ｃ１～４アルキルまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、Ｒｆは、水素、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルからなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、置換フェニル、および非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルおよび置換ピリジニルからなる群から選択され得、置換ピリジニルは、１つの置換基Ｑで置換され、Ｑは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、ＲＧは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、Ｒｆは、水素、フェニル、およびフルオロフェニルからなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、ＶがＳである場合、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（ＣＨ２－ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、ハロ、シアノ、および－Ｏ－（Ｃ１～４アルキルからなる群から選択され得、ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得、Ｒｆは、水素、Ｃ１～４アルキル、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、および１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリールからなる群から選択され得、Ｕは、ＣＲＵであり得、ＲＵは、水素、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得る。
一部の実施形態では、ＶがＮＲＶである場合、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（ＣＨ２－ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、ハロ、シアノ、および－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）からなる群から選択され得、ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され得、Ｒｆは、水素であり得、Ｕは、ＮまたはＣＲＵであり得、ＲＵは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、ＲＶは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＯＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000105
 は、二重結合であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｕは、Ｎであり得、Ｖは、ＮＲｖであり得、Ｒｖは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｆは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミドであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが＝Ｏである場合、Ｇは、Ｎで置換され得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000106
 は、単結合であり得、ＲＧは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｕは、Ｎであり得、Ｖは、ＮＲｖであり得、Ｒｖは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｆは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃで有り得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミドで有り得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000107
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｕは、ＣＲｕであり得、Ｒｕは、シアノであり得、Ｖは、ＮＲｖであり得、Ｒｖは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｆは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000108
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、非置換Ｃ１～６アルキルであり得、Ｕは、ＣＲｕであり得、Ｒｕは、水素であり得、Ｖは、Ｓであり得、Ｒｆは、フェニルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂであり得る場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000109
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、水素であり得、Ｕは、ＣＲｕであり得、Ｒｕは、水素であり得、Ｖは、Ｓであり得、Ｒｆは、フルオロフェニルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、以下からなる群から選択され得る：
３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミド、
３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミド、
２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン、および
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン。
式（Ｉ－Ｃ）
本明細書で提供されるさらに他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－Ｃ）の構造を有することができ：
Figure 2022511786000110
 その薬学的に許容される塩を含み、式中、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ａは、ＮまたはＣＨであり得、Ｂは、ＮまたはＣＨであり得、Ｒｇは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２からなる群から選択され得、ＹおよびＺは、各々、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得る。
一部の実施形態では、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得る。例えば、一部の実施形態では、ＲＫは、－ＮＨ（ＣＨ３）、－ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ３）、－ＮＨ（イソプロピル）、または－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）であり得る。一部の実施形態では、ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルであり得る。他の実施形態では、ＲＫは、置換ピリジニルであり得る。例えば、ＲＫは、メチルピリジニル、エチルピリジニル、シアノピリジニル、クロロピリジニル、フルオロピリジニル、またはブロモピリジニルであり得る。
一部の実施形態では、Ａは、Ｎであり得、Ｂは、Ｎで有り得る。他の実施形態では、Ａは、Ｎであり得、Ｂは、ＣＨで有り得る。さらに他の実施形態では、Ａは、ＣＨであり得、Ｂは、Ｎで有り得る。さらに他の実施形態では、Ａは、ＣＨであり得、Ｂは、ＣＨで有り得る。
一部の実施形態では、Ｒｇは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒｇは、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得る。特定の実施形態では、Ｒｇは、－Ｎ（ＣＨ３）２であり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ｒｇは、水素または－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、非置換ベンゾチオフェニル、および置換ピリジニルからなる群から選択され得、置換ピリジニルは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ｒｇは、水素または－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）、非置換ベンゾチオフェニル、および置換ピリジニルからなる群から選択され得、置換ピリジニルは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され得、Ｒｇは、水素または－Ｎ（ＣＨ３）２であり得る。
一部の実施形態では、ＡがＣであり、ＢがＣである場合、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであるか、または、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｒｇは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃである。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり、Ａは、Ｎであり得、Ｂは、Ｎであり得、Ｒｇは、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃである。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｃ）の化合物は、４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、ハロであり得、Ａは、ＣＨであり得、Ｂは、ＣＨであり得、Ｒｇは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｃ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000111
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する置換５～１０員ヘテロアリールであり得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上のＱで置換され、Ｑは、シアノであり得、Ａは、ＣＨであり得、Ｂは、ＣＨであり得、Ｒｇは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｃ）の化合物は、５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリルであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000112
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）であり得、Ａは、ＣＨであり得、Ｂは、ＣＨであり得、Ｒｇは、水素であり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得、Ｙは、Ｃであり得、Ｚは、Ｃであり得る。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｃ）の化合物は、Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミンであり得る。
一部の実施形態では、式（Ｉ～Ｃ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、以下からなる群から選択され得る：
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミン、
５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリル、および
Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミン。
式（Ｉ－Ｄ）
本明細書で提供されるさらに他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－Ｄ）の構造を有することができ：
Figure 2022511786000113
 その薬学的に許容される塩を含み、式中、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり得、Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり得、Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルであり得、Ｄは、ＮまたはＣＨであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、Ｘは、ＮまたはＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒｈは、水素であり得る。他の実施形態では、Ｒｈは、Ｃ１～４アルキルであり得る。例えば、Ｒｈは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、イソ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルであり得る。
一部の実施形態では、Ｄは、Ｎであり得る。他の実施形態では、Ｄは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、ＤがＮである場合、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得る。他の実施形態では、ＤがＮである場合、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、Ｘは、ＣＨであり得る。一部の実施形態では、ＤがＣＨである場合、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、Ｘは、Ｎであり得る。他の実施形態では、ＤがＣＨである場合、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、Ｘは、ＣＨであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され得、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され得、Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され得、ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルであり得、Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２）－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され得、置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され得、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルであり得、Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルであり得る。
一部の実施形態では、ＤがＮである場合、ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、または置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｒｈは、Ｃ１～４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、または置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり得、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｄは、Ｎであり得、Ｒｈは、Ｃ１～４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｄ）の化合物は、Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミンであり得る。
一部の実施形態では、ＲＪが－ＮＲａＲｂである場合、Ｇは、Ｎであり得、ＧおよびＪを結合する
Figure 2022511786000114
 は、二重結合であり得、Ｒａは、水素であり得、Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり得、Ｒｃは、置換Ｃ６～１０アリールであり得、１つ以上のＥで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、ＲＫは、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する非置換５～１０員ヘテロアリールであり得、Ｄは、Ｎであり得、Ｒｈは、Ｃ１～４アルキルであり得、Ｊは、Ｃであり得、Ｘは、Ｃであり得、Ｙは、Ｎであり得、Ｚは、Ｃであり得、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる。一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｄ）の化合物は、４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノールであり得る。
一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｄ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、以下からなる群から選択され得る：
Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミン、および４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノール。
本明細書で提供される化合物は、単一の鏡像異性体、もしくは単一のジアステレオマーなどの鏡像異性体的に純粋であってもよく、または立体異性体の混合物（例えば、２つの鏡像異性体のラセミ混合物）、もしくは２つ以上のジアステレオマーの混合物であってもよい。したがって、当業者は、その（Ｒ）形態の化合物の投与は、インビボでエピマー化を受ける化合物について、その（Ｓ）形態の化合物の投与と同等であることを認識するであろう。個々の鏡像異性体の調製／単離のための従来の技法としては、好適な光学的に純粋な前駆体からの合成、アキラルな出発物質からの不斉合成、または鏡像異性体の混合物の分割（例えば、キラルクロマトグラフィー、再結晶化、分割、ジアステレオマー塩形成、または分離に続くジアステレオマー付加物への誘導体化）、が挙げられる。
５．４．ＮＫ細胞の単離
ナチュラルキラー細胞を単離する方法は、当該技術分野において既知であり、ナチュラルキラー細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞）を単離するために使用され得る。例えば、ＮＫ細胞を、単離または濃縮することができる（例えば、一実施形態では、ＣＤ５６およびＣＤ３に対する抗体で細胞を染色し、ＣＤ５６＋ＣＤ３－細胞を選択することによって）。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－細胞について濃縮される。ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、市販のキット、例えば、ＮＫ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して単離され得る。ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）を含む細胞集団のＮＫ細胞以外の細胞を除去することによって、単離または濃縮することもできる。例えば、ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、ＨＬＡ ＤＲ、および／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）のうちの１つ以上に対する抗体を使用して、非ＮＫ細胞マーカーを示す細胞を枯渇させることによって、単離または濃縮され得る。負の単離（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）は、市販のキット、例えば、ＮＫ細胞負の単離キット（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して行うことができる。これらの方法によって単離された細胞は、例えば、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞、および／またはＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞、および／またはＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞、および／またはＣＤ９４＋細胞とＣＤ９４－を分離するために、追加的に選別され得る。特定の実施形態では、細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法によって産生される細胞）は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を分離するように選別される。特定の実施形態では、ＣＤ１１ａ＋細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１１ａ＋細胞について濃縮される。特定の実施形態では、ＣＤ１１ａ－細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１１ａ細胞について濃縮される。特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するように選別される。特定の実施形態では、ＣＤ１１７＋細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１１７＋細胞について濃縮される。特定の実施形態では、ＣＤ１１７－細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１１７－細胞について濃縮される。特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ１６＋細胞とＣＤ１６－細胞を分離するように選別される。特定の実施形態では、ＣＤ１６＋細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１６＋細胞について濃縮される。特定の実施形態では、ＣＤ１６－細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ１６－細胞について濃縮される。特定の実施形態では、細胞は、ＣＤ９４＋細胞とＣＤ９４－細胞を分離するように選別される。特定の実施形態では、ＣＤ９４＋細胞が単離される。特定の実施形態では、この細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ９４＋細胞について濃縮される。特定の実施形態では、ＣＤ９４－細胞が単離される。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される全細胞と比較して、ＣＤ９４－細胞について濃縮される。特定の実施形態では、単離は、磁気分離を使用して行われる。特定の実施形態では、単離は、フローサイトメトリーを使用して行われる。
ＩＬＣ３細胞を単離する方法は、当該技術分野において既知であり、ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞）を単離するために使用され得る。例えば、ＩＬＣ３細胞を、単離または濃縮することができる（例えば、一実施形態では、ＣＤ５６、ＣＤ３およびＣＤ１１ａに対する抗体で細胞を染色し、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－細胞について選択することによって）。ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）を含む細胞集団のＩＬＣ３細胞以外の細胞を除去することによって、単離または濃縮することもできる。例えば、ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ９４、ＣＤ１２３、ＨＬＡ ＤＲ、および／またはＣＤ２３５ａ（グリコホリンＡ）のうちの１つ以上に対する抗体を使用して、非ＩＬＣ３細胞マーカーを示す細胞を枯渇させることによって、単離または濃縮され得る。これらの方法によって単離された細胞は、例えば、ＣＤ１１７＋細胞とＣＤ１１７－細胞を分離するために、追加的に選別され得る。ＮＫ細胞を、単離または濃縮することができる（例えば、一実施形態では、ＣＤ５６、ＣＤ３、ＣＤ９４、およびＣＤ１１ａに対する抗体で細胞を染色し、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について選択することによって）。ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）は、ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される細胞）を含む細胞集団のＮＫ細胞以外の細胞を除去することによって、単離または濃縮することもできる。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について濃縮される。
一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－細胞について選択することによって、単離または濃縮される。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－細胞について濃縮される。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について選択することによって、単離または濃縮される。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋細胞について濃縮される。一実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について選択することによって、単離または濃縮される。特定の実施形態では、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ１１ａ－ＣＤ１１７＋ＣＤＩＬ１Ｒ１＋細胞について濃縮される。
一実施形態では、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について選択することによって、単離または濃縮される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋細胞について濃縮される。一実施形態では、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１１７－細胞について選択することによって、単離または濃縮される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された全細胞と比較して、ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ９４＋ＣＤ１１ａ＋ＣＤ１１７－細胞について濃縮される。
細胞分離は、例えば、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、または一実施形態では、特定の抗体とコンジュゲートされたマイクロビーズを使用した磁気細胞選別によって達成することができる。細胞は、例えば、１つ以上の特異的抗体（例えば、抗ＣＤ５６抗体）を含む磁気ビーズ（例えば、直径約０．５～１００μｍ）に結合する能力に基づいて、粒子を分離するための方法である磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）技術を使用して単離され得る。磁気細胞分離は、例えば、ＡＵＴＯＭＡＣＳ（商標）セパレータ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、実施および自動化することができる。磁気微粒子上で、特定の細胞表面分子またはハプテンを特異的に認識する抗体の共有結合付加を含めて、様々な有用な修飾を行うことができる。次いで、結合を可能にするために、ビーズを細胞と混合する。次いで、細胞は磁場を通して、特定の細胞表面マーカーを有する細胞を分離する。一実施形態では、次いで、これらの細胞を単離し、追加の細胞表面マーカーに対する抗体が結合した磁気ビーズと再混合することができる。細胞を再び磁場に通して、両方の抗体を結合する細胞を単離する。次いで、かかる細胞を、クローン単離のためのマイクロタイター皿などの別個の皿に希釈することができる。
５．５．胎盤灌流液
ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生される、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、任意の供給源（例えば、胎盤組織、胎盤灌流液、臍帯血、胎盤血、末梢血、脾臓、肝臓など）由来の造血細胞（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）から産生され得る。特定の実施形態では、造血幹細胞は、胎盤灌流液からの造血幹細胞と、胎盤灌流液を生成するために使用される同じ胎盤由来の臍帯血からの造血幹細胞との、組み合わせ造血幹細胞である。胎盤灌流液は、例えば、米国特許第７，０４５，１４８号および同第７，４６８，２７６号、ならびに米国特許出願公開第２００９／０１０４１６４号に開示される方法によって得ることができる胎盤灌流細胞を含む（これらの開示は、それらの全体が本明細書に援用される）。
５．５．１．細胞回収組成物
造血幹細胞もしくは前駆細胞がそこから単離され得るか、または腫瘍細胞、癌もしくはウイルス感染を有する個体の腫瘍抑制もしくは治療に有用であり得る胎盤灌流液および灌流細胞は、例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、例えば、本明細書で提供される３段階法に従って産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞集団と組み合わせて、胎盤細胞回収組成物を使用して、哺乳動物の胎盤（例えば、ヒト産後胎盤）を灌流することによって回収することができる。灌流液は、任意の生理学的に許容される溶液（例えば、食塩水溶液、培養培地、またはより複雑な細胞回収組成物）で、胎盤を灌流することによって、胎盤から回収することができる。胎盤の灌流、ならびに灌流細胞の回収および保存に好適な細胞回収組成物は、関連する米国出願公開第２００７／０１９００４２号に詳細に記載されている（参照によりその全体が本明細書に援用される）。
細胞回収組成物は、幹細胞の回収および／または培養に好適な任意の生理学的に許容される溶液、例えば、生理食塩水溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、クレブス液、修飾クレブス液、イーグル液、０．９％ＮａＣｌなど）、培養培地（例えば、ＤＭＥＭ、Ｈ．ＤＭＥＭなど）などを含み得る。
細胞回収組成物は、胎盤細胞を保存する傾向がある１つ以上の成分を含み得る（すなわち、回収時から培養時まで、胎盤細胞の死を防ぐか、胎盤細胞の死を遅らせるか、死ぬ細胞集団の胎盤細胞の数を減少させるか、または同様のもの）。かかる成分は、例えば、アポトーシス阻害剤（例えば、カスパーゼ阻害剤もしくはＪＮＫ阻害剤）、血管拡張剤（例えば、硫酸マグネシウム、降圧薬、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、副腎皮質刺激ホルモン、コルチコトロピン放出ホルモン、ニトロプルシドナトリウム、ヒドララジン、アデノシン三リン酸、アデノシン、インドメタシンもしくは硫酸マグネシウム、ホスホジエステラーゼ阻害剤など）、壊死阻害剤（例えば、２－（１Ｈ－インドール－３－イル）－３－ペンチルアミノ－マレイミド、ピロリジンジチオカルバメート、もしくはクロナゼパム）、ＴＮＦ－α阻害剤、および／または酸素担持パーフルオロカーボン（例えば、パーフルオロオクチルブロミド、パーフルオロデシルブロミドなど）であり得る。
細胞回収組成物は、１つ以上の組織分解酵素、例えば、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、中性プロテアーゼ、ヒアルロニダーゼ、ＲＮａｓｅ、またはＤＮａｓｅなどを含み得る。かかる酵素としては、コラーゲナーゼ（例えば、コラーゲナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ由来のコラーゲナーゼなど）、ディスパーゼ、サーモリシン、エラスターゼ、トリプシン、リベラーゼ、ヒアルロニダーゼなどが挙げられるが、これらに限定されない。
細胞回収組成物は、殺菌的にまたは静菌的に有効量の抗生物質を含み得る。特定の非限定的な実施形態では、抗生物質は、マクロライド（例えば、トブラマイシン）、セファロスポリン（例えば、セファレキシン、セフラジン、セフロキシム、セフプロジル、セファクロル、セフィキシム、またはセファドロキシル）、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＶ）、またはキノロン（例えば、オフロキサシン、シプロフロキサシン、またはノルフロキサシン）、テトラサイクリン、ストレプトマイシンなどである。特定の実施形態では、抗生物質は、グラム（＋）および／またはグラム（－）細菌、例えば、緑膿菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、黄色ブドウ球菌Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓなどに対して活性である。
また、細胞回収組成物は、以下の化合物のうちの１つ以上を含み得る：アデノシン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、Ｄ－グルコース（約２０ｍＭ～約１００ｍＭ）、マグネシウムイオン（約１ｍＭ～約５０ｍＭ）、一実施形態では、内皮の完全性および細胞生存率を維持するのに十分な量で存在する分子量が２０，０００ダルトン超の高分子（例えば、合成もしくは天然に存在するコロイド、デキストランなどの多糖、またはポリエチレングリコール、約２５ｇ／ｌ～約１００ｇ／ｌ、または約４０ｇ／ｌ～約６０ｇ／ｌで存在する）、抗酸化剤（例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、グルタチオン、ビタミンＣまたはビタミンＥ、約２５μＭ～約１００μＭで存在する）、還元剤（例えば、Ｎ－アセチルシステイン、約０．１ｍＭ～約５ｍＭで存在する）、細胞内へのカルシウム流入を防止する薬剤（例えば、ベラパミル、約２μＭ～約２５μＭで存在する）、ニトログリセリン（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ～約０．２ｇ／Ｌ）、一実施形態では、残留血液の凝固を防止するのに十分な量で存在する抗凝固剤（例えば、ヘパリンまたはヒルジン、約１０００単位／Ｌ～約１００，０００単位／Ｌの濃度で存在する）、あるいはアミロライド含有化合物（例えば、アミロライド、エチルイソプロピルアミロライド、ヘキサメチレンアミロライド、ジメチルアミロライドもしくはイソブチルアミロライド、約１．０μＭ～約５μＭで存在する）。
５．５．２．胎盤の回収と取り扱い
一般に、ヒトの胎盤は、産後に排出されてまもなく回収する。一実施形態では、インフォームドコンセントの後、かつ患者の完全な病歴を聴取し、胎盤と関連付けた後に、胎盤を患者から回収する。一実施形態では、出産後も病歴聴取を続ける。
灌流液を回収する前に、臍帯血および胎盤血を除去する。特定の実施形態では、出産後、胎盤の臍帯血が回収される。胎盤は、従来の臍帯血回収のプロセスに供され得る。典型的には、針またはカニューレを使用して、重力を利用して胎盤を失血する（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎの米国特許第５，３７２，５８１号、Ｈｅｓｓｅｌらの米国特許第５，４１５，６６５号を参照されたい）。針またはカニューレは、通常、臍帯静脈に配置し、胎盤から臍帯血を排出するのを助けるために、胎盤を軽くマッサージしてもよい。かかる臍帯血の回収は、商業的に行われ得る（例えば、ＬｉｆｅＢａｎｋ Ｉｎｃ．，Ｃｅｄａｒ Ｋｎｏｌｌｓ，Ｎ．Ｊ．，ＶｉａＣｏｒｄ，Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ ａｎｄ ＣｒｙｏＣｅｌｌ）。一実施形態では、胎盤は、臍帯血回収の際の組織の破壊を最小限に抑えるために、さらなる操作なしに重力で排出される。
典型的には、胎盤は、臍帯血の回収および灌流液の回収のために、分娩室または分娩室から別の場所、例えば、実験室に輸送される。胎盤は、滅菌された熱絶縁輸送デバイス（胎盤の温度を２０～２８℃の間に維持する）で輸送することができる。例えば、胎盤を、クランプ留めされた近位臍帯と共に、滅菌されたジップロック式ビニール袋に入れ、次いで絶縁容器に入れることによって輸送することができる。別の実施形態では、胎盤は、実質的に米国特許第７，１４７，６２６号に記載されているような臍帯血回収キットで輸送される。一実施形態では、胎盤は、出産の４～２４時間後に、実験室に送達される。特定の実施形態では、近位臍帯は、例えば、臍帯血の採取の前に、胎盤ディスクへの挿入部から４～５ｃｍ（センチメートル）以内でクランプ留めされる。他の実施形態では、近位臍帯は、臍帯血の採取後であるが、胎盤のさらなる処理前にクランプ留めされる。
胎盤は、灌流液を採取する前に、滅菌条件下で、室温または５～２５℃（摂氏）のいずれかの温度で保管することができる。胎盤は、胎盤を灌流して、残留する臍帯血をすべて除去した後で、４８時間超の期間、または４～２４時間の期間にわたって保管され得る。胎盤は、５℃～２５℃（摂氏）の温度で抗凝固溶液中で保管することができる。好適な抗凝固溶液は、当該技術分野で周知である。例えば、ヘパリンまたはワルファリンナトリウムの溶液を使用することができる。一実施形態では、抗凝固溶液は、ヘパリンの溶液（例えば、１：１０００溶液中１％ｗ／ｗ）を含む。一部の実施形態では、失血した胎盤は胎盤灌流液が回収される前に３６時間以下で保管される。
５．５．３．胎盤灌流
哺乳類胎盤を灌流し、胎盤灌流液を得る方法は、例えば、Ｈａｒｉｒｉによる米国特許第７，０４５，１４８号および同第７，２５５，８７９号、ならびに米国出願公開第２００９／０１０４１６４号、同第２００７／０１９００４２号、および同第２００７／０２７５３６２号（米国特許第８，０５７，７８８号として発行）に開示されており、これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
灌流溶液（例えば、上に記載の食塩溶液、培養培地、または細胞回収組成物）を胎盤血管系を通して灌流することによって、灌流液を得ることができる。一実施形態では、哺乳動物の胎盤を、臍帯動脈および臍帯静脈のいずれかまたは両方を通して灌流溶液を通過させることによって灌流する。胎盤を通る灌流溶液の流れは、例えば、胎盤内への重力流を使用して達成され得る。例えば、灌流溶液を、ポンプ（例えば、蠕動ポンプ）を使用して、強制的に胎盤を通す。臍帯静脈は、例えば、滅菌チューブなどの滅菌接続装置に接続されたカニューレ（例えば、テフロン（登録商標）またはプラスチックカニューレ）で、カニューレ処置することができる。滅菌接続装置は、灌流マニホールドに接続されている。
灌流の準備では、胎盤は、臍帯動脈および臍帯静脈が胎盤の最も高い点に位置するような様式で配向され得る。胎盤は、灌流溶液が胎盤血管系を通過するか、または胎盤血管系および周囲組織を通過することによって、灌流され得る。一実施形態では、臍帯動脈および臍帯静脈は、可撓性コネクタを介して灌流溶液のリザーバに接続されたピペットに同時に接続される。灌流溶液は、臍帯静脈および動脈に通過する。灌流溶液は、血管壁から胎盤の周囲組織に滲出および／または通過し、妊娠中に母体の子宮に付着した胎盤の表面から好適な開いた容器内へと回収される。灌流溶液は、臍帯開口部を介して導入され、母体子宮壁に面した胎盤壁の開口部から流出または滲出させることもできる。別の実施形態では、灌流溶液は、臍帯静脈を通過し、臍帯動脈から回収されるか、または臍帯動脈を通過し、臍帯静脈から回収され、すなわち、胎盤血管系（胎児組織）のみを通過する。
一実施形態では、例えば、臍帯動脈および臍帯静脈は、同時に、例えば、可撓性コネクタを介して灌流溶液のリザーバに接続されたピペットに接続される。灌流溶液は、臍帯静脈および臍帯動脈に通過する。灌流溶液は、血管壁から胎盤の周辺組織に滲出および／または通過し、妊娠中に母体の子宮に付着した胎盤の表面から好適な開いた容器内へと回収される。灌流溶液は、臍帯開口部を介して導入され、母体子宮壁に面した胎盤壁の開口部から流出または滲出させることもできる。「パン（ｐａｎ）」法と称され得るこの方法によって回収される胎盤細胞は、典型的には、胎児細胞と母体細胞の混合物である。
別の実施形態では、灌流溶液は、臍帯静脈を通過し、臍帯動脈から回収されるか、または臍帯動脈を通過し、臍帯静脈から回収される。「閉回路（ｃｌｏｓｅｄ ｃｉｒｃｕｉｔ）」法と称され得るこの方法によって回収される胎盤細胞は、典型的には、ほぼ排他的に胎児細胞である。
一実施形態では、閉回路灌流法は、以下のように行うことができる。産後の胎盤を、生後約４８時間以内に得る。臍帯をクランプで留め、クランプの上で切断する。臍帯を廃棄するか、または処理することができ（例えば、臍帯幹細胞を回収する）、かつ／または臍帯膜を処理して、生体材料を生成することができる。羊膜は、灌流中に保持することができ、または、例えば、指での鈍的切開を使用して、絨毛膜から分離することができる。羊膜が灌流の前に絨毛膜から分離される場合、それを、例えば、廃棄するか、または処理することがきる（例えば、酵素消化によって幹細胞を得るために、または、例えば、羊膜生体材料（例えば、米国出願公開第２００４／００４８７９６号に記載されている生体材料）を産生するために）。例えば、滅菌ガーゼを使用して、すべての目視可能な血栓および残留血液から胎盤を洗浄した後、例えば、臍帯膜を部分的に切断して、臍帯の断面を露出させることによって、臍帯血管を露出させる。血管は、例えば、閉じた鰐口クランプを各血管の切り口を通して前進させることによって特定され、開かれる。次いで、装置（例えば、灌流装置または蠕動ポンプに接続されたプラスチックチューブ）を、胎盤動脈の各々に挿入する。ポンプは、目的のために好適な任意のポンプ（例えば蠕動ポンプ）であってもよい。次いで、無菌回収リザーバ（例えば、２５０ｍＬ回収バッグなどの血液バッグに接続されたプラスチックチューブを、胎盤静脈に挿入する。あるいは、ポンプに接続されたチューブを胎盤静脈に挿入し、回収リザーバ（複数可）へのチューブを胎盤動脈の一方または両方に挿入する。次いで、胎盤をある体積の灌流溶液（例えば、約７５０ｍＬの灌流溶液）で灌流する。次いで、灌流液中の細胞を、例えば、遠心分離によって、回収する。
一実施形態では、灌流中、近位臍帯をクランプで留め、より具体的には、臍帯の胎盤への挿入部から４～５ｃｍ（センチメートル）以内を、クランプで留めてもよい。
失血プロセス中、哺乳動物の胎盤由来の灌流液の第１の回収物は、概して、臍帯血および／または胎盤血の残留する赤血球で着色している。灌流が進み、残留する臍帯血細胞が胎盤から洗い出されるにつれて、灌流液は、より無色になる。概して、３０～１００ｍＬの灌流液は、最初に胎盤から血液を流すのに十分であるが、観察結果に応じて、多少、灌流液を使用することができる。
特定の実施形態では、臍帯血は、灌流の前に胎盤から除去されるが（例えば、重力排出によって）、胎盤は、残留血液を除去するために溶液でフラッシュ（例えば、灌流）されない。特定の実施形態では、臍帯血は、灌流の前に胎盤から除去され（例えば、重力排出によって）、胎盤は、残留血液を除去するために胎盤を溶液でフラッシュ（例えば、灌流）される。
胎盤を灌流するために使用される灌流液の体積は、回収される胎盤細胞の数、胎盤の大きさ、単一の胎盤から作製される回収物の数などに応じて変化し得る。様々な実施形態では、灌流液の体積は、５０ｍＬ～５０００ｍＬ、５０ｍＬ～４０００ｍＬ、５０ｍＬ～３０００ｍＬ、１００ｍＬ～２０００ｍＬ、２５０ｍＬ～２０００ｍＬ、５００ｍＬ～２０００ｍＬ、または７５０ｍＬ～２０００ｍＬであり得る。典型的には、胎盤は、失血後、７００～８００ｍＬの灌流液で灌流される。
胎盤は、数時間または数日間にわたって複数回灌流することができる。胎盤が複数回灌流される場合、胎盤は、容器または他の好適な容器内で無菌条件下で維持または培養され得、細胞回収組成物もしくは標準的な灌流溶液（例えば、標準的なリン酸緩衝生理食塩水溶液（「ＰＢＳ」）などで、抗凝固剤（例えば、ヘパリン、ワルファリンナトリウム、クマリン、ビスヒドロキシクマリン）を含有もしくは不含、および／または抗菌剤（例えば、β－メルカプトエタノール（０．１ｍＭ）、抗生物質：ストレプトマイシン（例えば、４０～１００μｇ／ｍｌ）、ペニシリン（例えば、４０Ｕ／ｍｌ）、アンホテリシンＢ（例えば、０．５μｇ／ｍｌ）など）を含有もしくは不含）で灌流され得る。一実施形態では、単離された胎盤は、灌流液を回収せずに、一定期間、維持または培養され、例えば、胎盤は、灌流液を灌流および回収する前に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくは２４時間、または２もしくは３日間またはそれ以上の間、維持または培養される。灌流した胎盤は、１回以上のさらなる回数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間、またはそれ以上の間維持され得、例えば、７００～８００ｍＬの灌流液で、再度灌流され得る。胎盤は、１、２、３、４、５回またはそれ以上の回数、例えば、１、２、３、４、５、または６時間毎に１回灌流され得る。一実施形態では、胎盤の灌流および灌流溶液（例えば、胎盤細胞回収組成物）の回収は、回収された有核細胞の数が１００細胞／ｍＬ未満になるまで繰り返される。異なる時点での灌流液をさらに個別に処理して、細胞（例えば、総有核細胞）の時間依存的な集団を回収することができる。異なる時点の灌流液も、プールすることができる。
５．５．４．胎盤灌流液および胎盤灌流細胞
典型的には、単一の胎盤灌流からの胎盤灌流液は、約１億～約５億個の有核細胞を含み、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞）が、本明細書に開示される方法によって産生され得る造血細胞を含む。特定の実施形態では、胎盤灌流または灌流細胞は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）を含む。かかる細胞は、より具体的な実施形態では、ＣＤ３４＋ＣＤ４５－幹細胞または前駆細胞、ＣＤ３４＋ＣＤ４５＋幹細胞または前駆細胞などを含み得る。特定の実施形態では、灌流液または灌流細胞は、造血細胞をそれから単離する前に、凍結保存される。特定の他の実施形態では、胎盤灌流液または灌流細胞は、胎児細胞のみ、または胎児細胞と母体細胞との組み合わせを含む。
５．６．ＮＫ細胞
５．６．１．３段階法によって産生されるＮＫ細胞
別の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＮＫ細胞は、上に記載の３段階法に従って産生される。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生される単離されたＮＫ細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＮＫ細胞集団は、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ前駆細胞集団（例えば、ＮＫ前駆細胞集団を産生するために使用される第３の培養ステップが、ＮＫ細胞集団を産生するために使用される第３の培養ステップよりも短い期間であったことを除いて、同じ３段階法によって産生されるＮＫ前駆細胞集団）よりも高い割合のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％以上のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団は、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、または９５％～９９％のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＮＫｐ４６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１６－である、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１６＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ９４－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ９４＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１１ａ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＮＫｐ３０＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１６１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＤＮＡＭ－１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、Ｔ－ｂｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＣＤ１１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＮＫｐ４４＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＣＤ２４４＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、パーフォリンを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、グランザイムＢを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団は、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、および／またはＴＮＦαを分泌する細胞を含む。
５．７．ＩＬＣ３細胞
５．７．１．３段階法により産生されるＩＬＣ３細胞
別の実施形態では、単離されたＩＬＣ３細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＩＬＣ３細胞は、上に記載の３段階法に従って産生される。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生される単離されたＩＬＣ３細胞集団が、本明細書で提供され、当該ＩＬＣ３細胞集団は、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３前駆細胞集団（例えば、ＩＬＣ３前駆細胞集団を産生するために使用される第３の培養ステップが、ＩＬＣ３細胞集団を産生するために使用される第３の培養ステップよりも短い期間であったことを除いて、同じ３段階法によって産生されるＩＬＣ３前駆細胞集団）よりも高い割合のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、約７０％以上、一部の実施形態では、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％以上のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。別の特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団は、７０％～７５％、７５％～８０％、８０％～８５％、８５％～９０％、９０％～９５％、または９５％～９９％のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＮＫｐ４６－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１６－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＩＬ１Ｒ１＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ９４－であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＲＯＲγｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、ＣＤ１１ａ－である、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞集団の当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、さらに、Ｔ－ｂｅｔ＋であるＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を含む。
一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＣＤ１１７＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫＧ２Ｄ－である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＮＫｐ３０－である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＣＤ２４４＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＤＮＡＭ－１＋である細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＡＨＲを発現する細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、パーフォリンを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＥＯＭＥＳを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、グランザイムＢを発現しない細胞を含む。一実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＩＬＣ３細胞集団は、ＩＬ－２２および／またはＩＬ－８を分泌する細胞を含む。
特定の態様では、本明細書に記載の３段階法によって産生される細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、２０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：５の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：１０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：２０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：５０の割合で含む。
特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で組み合わせて、組み合わせ細胞集団を産生することによって、産生される。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、２０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、５：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：５の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：１０の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：２０の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＣＤ１１ａ＋細胞とＣＤ１１ａ－細胞を、１：５０の割合で組み合わせたものを含む。
特定の態様では、本明細書に記載の３段階法によって産生される細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、２０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１０：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：１の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：５の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：１０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：２０の割合で含む。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：５０の割合で含む。
特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５０：１、４０：１、３０：１、２０：１、１０：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、または１：５０の割合で組み合わせて、組み合わせ細胞集団を産生することによって、産生される。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、２０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１０：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、５：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：１の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：５の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：１０の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：２０の割合で組み合わせたものを含む。特定の態様では、本明細書に記載の組み合わせ細胞集団は、ＮＫ細胞とＩＬＣ３細胞を、１：５０の割合で組み合わせたものを含む。
５．８．胎盤灌流液と組み合わせたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
例えば、腫瘍細胞または複数の腫瘍細胞の増殖を抑制する上で使用するための、胎盤灌流液、胎盤灌流細胞および／または付着性胎盤細胞と組み合わせた、本明細書に記載の３段階法によるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む組成物が、本明細書でさらに提供される。
５．８．１．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と灌流液もしくは灌流細胞との組み合わせ
本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と、胎盤灌流液および／または胎盤灌流細胞との組み合わせを含む組成物が、さらに本明細書で提供される。一実施形態では、例えば、本明細書に記載の方法を使用して産生される一定量のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を補充した胎盤灌流液が、本明細書で提供される。ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞を補充した一定量の胎盤灌流液の特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の割合で存在する。特定の実施形態では、例えば、各ミリリットルの胎盤灌流液に、本明細書に記載の方法を使用して産生される約１ｘ１０４、５ｘ１０４、１ｘ１０５、５ｘ１０５、１ｘ１０６、５ｘ１０６、１ｘ１０７、５ｘ１０７、１ｘ１０８、５ｘ１０８またはそれ以上のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が補充される。別の実施形態では、胎盤灌流細胞は、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞で補充される。特定の他の実施形態では、胎盤灌流細胞が、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わされる場合、胎盤灌流細胞は、概して、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％、もしくは１％、それ超、またはそれ未満を含む。特定の他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、複数の胎盤灌流細胞および／または組み合わせナチュラルキラー細胞と組み合わされる場合、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞もしくはＮＫ細胞集団は、概して、細胞の総数の約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％、もしくは１％、それ超、またはそれ未満を含む。特定の他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、胎盤灌流液を補充するために使用される場合、一定量の細胞を懸濁する溶液（例えば、生理食塩水溶液、培養培地など）は、細胞を含む灌流液の総体積の約５０％、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、６％、４％、２％、もしくは１％、それ超、またはそれ未満を含み、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、補充の前に、１ミリリットル当たり約１ｘ１０４、５ｘ１０４、１ｘ１０５、５ｘ１０５、１ｘ１０６、５ｘ１０６、１ｘ１０７、５ｘ１０７、１ｘ１０８、５ｘ１０８細胞、またはそれ以上に懸濁される。
他の実施形態では、細胞の上記の組み合わせのいずれかは、次に、臍帯血または臍帯血由来の有核細胞と組み合わされる。
プールされた胎盤灌流液が、本明細書でさらに提供され、２つ以上の供給源（例えば、２つ以上の胎盤）、および組み合わせた（例えば、プールされた）供給源から得られる。かかるプールされた灌流液は、各供給源からほぼ等しい量の灌流液を含み得るか、または各供給源から異なる量の灌流液を含み得る。各供給源からの相対量は、ランダムに選択することができ、あるいは、例えば、１つ以上の細胞因子（例えば、サイトカイン、増殖因子、ホルモンなど）の濃度もしくは量、各供給源からの灌流液中の胎盤細胞の数、または各供給源からの灌流液の他の特徴に基づいてもよい。同じ胎盤の複数の灌流からの灌流液も、同様にプールすることができる。
同様に、２つ以上の供給源（例えば、２つ以上の胎盤）から得られ、プールされた胎盤灌流細胞、および胎盤由来中間ナチュラルキラー細胞が、本明細書で提供される。かかるプールされた細胞は、２つ以上の供給源からのほぼ等しい数の細胞、またはプールされた供給源のうちの１つ以上からの異なる数の細胞を含み得る。各供給源からの細胞の相対数は、例えば、プールされる細胞中の１つ以上の特定の細胞型の数（例えば、ＣＤ３４＋細胞の数など）に基づいて選択することができる。
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびに、かかる細胞と胎盤灌流液および／または胎盤灌流細胞との組み合わせが、本明細書でさらに提供され、それらは、例えば、所与の数のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞もしくはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団から期待される腫瘍抑制の程度もしくは量（すなわち、効力）、あるいは所与の量の灌流液を決定するためにアッセイされている。例えば、細胞のアリコートまたは試料数を、腫瘍細胞がさもなければ増殖する条件下で、既知の数の腫瘍細胞と接触または接近させ、経時的に（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０週間、またはそれ以上）胎盤灌流液、灌流細胞、胎盤ナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせの存在下での腫瘍細胞の増殖速度を、灌流液、灌流細胞、胎盤ナチュラルキラー細胞、またはそれらの組み合わせの不在下での等しい数の腫瘍細胞の増殖と比較する。細胞の効力は、腫瘍細胞の増殖を、例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％など、抑制するのに必要な細胞の数または溶液の量として表現され得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、医薬品等級の投与可能な単位として提供される。かかる単位は、例えば、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどの別個の量で提供され得る。かかる単位は、他のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞もしくは灌流細胞と組み合わせて、特定の数の細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、もしくはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個もしくはそれ以上の細胞、または１単位当たり１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個、１×１０９個、５×１０９個、１×１０１０個、５×１０１０個、１×１０１１個、もしくはそれ以上の細胞を含有するように提供され得る。特定の実施形態では、単位は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個もしくはそれ以上のＮＫ細胞、あるいは１単位当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の細胞を含み得る。かかる単位は、特定の数のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、もしくはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団、ならびに／あるいは他の細胞のいずれかを含有するように提供され得る。
上記の実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞もしくは細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団、あるいはＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞もしくはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と他のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、灌流細胞もしくは灌流液との組み合わせは、レシピエントに対して自己的であり得るか（すなわち、レシピエントから得られる）、またはレシピエントに対して同種であり得る（すなわち、当該レシピエントとは異なる少なくとも１つの他の個体から得られる）。
特定の実施形態では、細胞の各単位は、体積、細胞の数、細胞の種類、その単位が特定の種類の細胞に対して濃縮されているかどうか、および／または単位での所与の細胞数の効力もしくは単位の所与のミリリットル数の効力（すなわち、単位での細胞が、特定の種類（複数可）の腫瘍細胞の増殖の測定可能な抑制を引き起こすかどうか）のうちの１つ以上を指定するようにラベルされる。
５．８．２．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と付着性胎盤幹細胞との組み合わせ
他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、単独で、または胎盤灌流液もしくは胎盤灌流細胞との組み合わせてのいずれかで、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、例えば、Ｈａｒｉｒｉの米国特許第７，０４５，１４８号および同第７，２５５，８７９号、ならびに米国特許出願公開第２００７／０２７５３６２号に記載されているように（これらの開示は、その全体が参照により本明細書に援用される）、単離された付着性胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞および胎盤多能性細胞）が補充される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の割合で存在する。「付着性胎盤細胞」とは、細胞が、組織培養表面（例えば、組織培養プラスチック）に付着性であることを意味する。本明細書に開示される組成物および方法において有用な付着性胎盤細胞は、概して、トロホブラスト、胚性生殖細胞、または胚性幹細胞ではない。
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、単独で、または胎盤灌流液もしくは胎盤灌流細胞と組み合わせてのいずれかで、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個もしくはそれ以上の付着性胎盤細胞、または１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個、１×１０９個、５×１０９個、１×１０１０個、５×１０１０個、１×１０１１個、もしくはそれ以上の付着性胎盤細胞で補充され得る。組み合わせにおける付着性胎盤細胞は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、もしくは４０回、またはそれ以上の集団の倍加のために培養された付着性胎盤細胞であり得る。
単離された付着性胎盤細胞は、初代培養で培養するか、または細胞培養で増殖させる場合、組織培養基質、例えば、組織培養容器表面（例えば、組織培養プラスチック）に接着する。培養中の付着性胎盤細胞は、いくつかの細胞質突起が中心の細胞体から伸び、概して、線維芽細胞様の星状の外観が想定される。しかしながら、付着性胎盤細胞は、同じ条件下で培養された線維芽細胞と形態学的に区別可能であり、付着性胎盤細胞は、線維芽細胞よりも多くのかかる突起を呈する。付着性胎盤細胞はまた、造血幹細胞と形態学的に区別することができ、造血幹細胞は、概して、培養では、より丸い形態、または石畳状の形態が想定される。
本明細書で提供される組成物および方法において有用な単離された付着性胎盤細胞および付着性胎盤細胞集団は、付着性胎盤細胞を含む細胞または細胞集団を特定および／または単離するために使用され得る複数のマーカーを発現する。本明細書に提供される組成物および方法において有用な付着性胎盤細胞、および付着性胎盤細胞集団は、胎盤、またはその任意の部分（例えば、羊膜、絨毛膜、羊膜絨毛膜板、胎盤葉、臍帯など）から直接得られる付着性胎盤細胞および付着性胎盤細胞を含有する細胞集団を含む。一実施形態では、付着性胎盤幹細胞集団は、培養中の付着性胎盤幹細胞の集団（すなわち、２細胞以上）、例えば、容器（例えば、バッグ）中の集団である。
付着性胎盤細胞は、一般に、マーカーであるＣＤ７３、ＣＤ１０５、およびＣＤ２００、および／またはＯＣＴ－４を発現し、ＣＤ３４、ＣＤ３８、またはＣＤ４５を発現しない。付着性胎盤幹細胞はまた、ＨＬＡ－ＡＢＣ（ＭＨＣ－１）およびＨＬＡ－ＤＲも発現し得る。これらのマーカーを使用して、付着性胎盤細胞を特定し、付着性胎盤細胞を、他の細胞型と区別することができる。付着性胎盤細胞は、ＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し得るため、それらは、間葉系幹細胞様の特徴を有し得る。ＣＤ３４、ＣＤ３８、および／またはＣＤ４５の発現の欠如から、付着性胎盤幹細胞は、非造血幹細胞として特定される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の単離された付着性胎盤細胞は、癌細胞の増殖または腫瘍の増殖を検出可能に抑制する。
特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、単離された胎盤幹細胞である。特定の他の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、単離された胎盤多能性細胞である。特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、およびＣＤ１０５＋である。より具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、胎盤幹細胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、多能性の付着性胎盤細胞である。別の特定の実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性がある。より具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、さらに、ＣＤ２００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋およびＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
一実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＣＤ２００＋、ＨＬＡ－Ｇ＋である。特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。別の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞は、胚様体（ｅｍｂｒｙｏｉｄ－ｌｉｋｅ ｂｏｄｉｅｓ）の形成を可能にする条件下で培養した場合、１つ以上の胚様体を産生する。
別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋である。当該集団の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＨＬＡ－Ｇ＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－またはＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、およびＨＬＡ－Ｇ＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、胚様体の形成を可能にする条件下で培養した場合、１つ以上の胚様体を産生する。
別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＣＤ２００＋、ＯＣＴ－４＋である。特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＨＬＡ－Ｇ＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４＋、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ＋である。別の特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、胚様体の形成を可能にする条件下で培養した場合、１つ以上の胚様体を産生する。
別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋およびＨＬＡ－Ｇ＋である。特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－およびＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、当該付着性幹細胞はまた、ＯＣＴ－４＋である。別の特定の実施形態では、当該付着性幹細胞はまた、ＣＤ２００＋である。より具体的な実施形態では、当該付着性幹細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、ＣＤ４５－、ＯＣＴ－４＋およびＣＤ２００＋である。
別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞はＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋幹細胞であり、当該細胞は、胚様体の形成を可能にする条件下で、１つ以上の胚様体を産生する。特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞はまた、ＯＣＴ－４＋である。より具体的な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＯＣＴ－４＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－である。
別の実施形態では、付着性胎盤幹細胞は、ＯＣＴ－４＋幹細胞であり、当該付着性胎盤幹細胞は、胚様体の形成を可能にする条件下で培養した場合、１つ以上の胚様体を産生し、当該幹細胞は、癌細胞増殖または腫瘍増殖を検出可能に抑制する細胞として特定されている。
様々な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、ＯＣＴ－４＋である。上記集団の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ７３＋およびＣＤ１０５＋である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、またはＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、当該幹細胞は、ＣＤ２００＋である。より具体的な実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞はまた、ＣＤ７３＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－、ＣＤ３８－、およびＣＤ４５－である。別の特定の実施形態では、当該単離された付着性胎盤細胞は、例えば、少なくとも１回、少なくとも３回、少なくとも５回、少なくとも１０回、少なくとも１５回、または少なくとも２０回継代されている。
上記実施形態のいずれかのより具体的な実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＡＢＣ－ｐを発現する（胎盤特異的ＡＢＣトランスポータータンパク質、例えば、Ａｌｌｉｋｍｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（２３）：５３３７－９（１９９８）を参照されたい）。
別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＣＤ２９＋、ＣＤ４４＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ３４－およびＣＤ１３３－である。別の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、ＩＬ－６、ＩＬ－８、および単球走化性タンパク質（ＭＣＰ－１）を構成的に分泌する。
上で参照された単離された付着性胎盤細胞の各々は、哺乳動物の胎盤から直接得られ、単離された細胞、または培養され、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０回、もしくはそれ以上継代された細胞、あるいはそれらの組み合わせを含み得る。上に記載の腫瘍細胞抑制性の複数の単離された付着性胎盤細胞は、約、少なくとも、または最大１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１またはそれ以上の、単離された付着性胎盤細胞を含み得る。
５．８．３．付着性胎盤細胞条件培地を含む組成物
本明細書ではまた、組成物の使用が提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）、ならびに、追加的に、条件培地を含み、当該組成物は、腫瘍抑制性であるか、または癌もしくはウイルス感染の治療に有効である。特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載される割合で存在する。本明細書に記載される付着性胎盤細胞を使用して、腫瘍細胞抑制性、抗癌性、または抗ウイルス性である条件培地（すなわち、検出可能な腫瘍細胞抑制作用、抗癌作用、または抗ウイルス作用を有する細胞によって分泌または排出される１つ以上の生体分子を含む培地）を産生することができる。様々な実施形態では、条件培地は、細胞が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日間またはそれ以上増殖した（すなわち、培養された）培地を含む。他の実施形態では、条件培地は、そのような細胞が、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％の合流、または最大１００％コンフルエンス（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ）に増殖した培地を含む。かかる条件培地を使用して、別個の細胞集団（例えば、胎盤細胞、または別の種類の細胞）の培養を支持することができる。別の実施形態では、本明細書で提供される条件培地は、単離された付着性胎盤細胞、例えば、単離された付着性胎盤幹細胞もしくは単離された付着性胎盤多能性細胞、または単離された付着性胎盤細胞以外の細胞（例えば、非胎盤幹細胞または非胎盤多能性細胞）が培養された培地を含む。
かかる条件培地は、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、胎盤灌流液、または胎盤灌流細胞、のうちのいずれかと、またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて、腫瘍細胞抑制性、抗癌性、または抗ウイルス性である組成物を形成することができる。特定の実施形態では、組成物は、体積で半分以下、例えば、体積で、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、もしくは１％、またはそれ未満の条件培地を含む。
したがって、一実施形態では、組成物が本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびに単離された付着性胎盤細胞の培養からの培養培地を含み、当該単離された付着性胎盤細胞は、（ａ）基質に付着し、かつ（ｂ）ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋およびＣＤ１０５＋であり、当該組成物は、腫瘍細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）もしくは増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を検出可能に抑制するか、または抗癌性もしくは抗ウイルス性である。特定の実施形態では、単離された付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、およびＣＤ１０５＋である。より具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、胎盤幹細胞である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、多能性の付着性胎盤細胞である。別の特定の実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋胎盤細胞は、神経表現型の細胞、骨形成表現型の細胞、または軟骨形成表現型の細胞に分化する可能性がある。より具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、さらに、ＣＤ２００＋である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、単離されたＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。より具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋またはＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ９０＋およびＣＤ４５－である。別のより具体的な実施形態では、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－付着性胎盤細胞は、フローサイトメトリーによって検出した場合、さらに、ＣＤ８０－およびＣＤ８６－である。
別の実施形態では、組成物が本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、ならびに単離された付着性胎盤細胞の培養からの培養培地を含み、当該単離された付着性胎盤細胞は、（ａ）基質に付着し、かつ（ｂ）ＣＤ２００およびＨＬＡ－Ｇを発現するか、もしくはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＣＤ２００を発現するか、もしくはＣＤ２００およびＯＣＴ－４を発現するか、もしくはＣＤ７３、ＣＤ１０５およびＨＬＡ－Ｇを発現するか、もしくはＣＤ７３およびＣＤ１０５を発現し、当該集団を胚様体の形成を可能にする条件下で培養した場合に胎盤幹細胞を含む胎盤細胞集団において１つ以上の胚様体の形成を促進するか、またはＯＣＴ－４を発現しかつ当該集団を胚様体の形成を可能にする条件下で培養した場合に胎盤幹細胞を含む胎盤細胞集団において１つ以上の胚様体の形成を促進し、当該組成物は、腫瘍細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）もしくは増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を検出可能に抑制するか、または抗癌性もしくは抗ウイルス性である。特定の実施形態では、組成物は、複数の当該単離された胎盤付着細胞をさらに含む。別の特定の実施形態では、組成物は、複数の非胎盤細胞を含む。より具体的な実施形態では、当該非胎盤細胞は、ＣＤ３４＋細胞（例えば、末梢血造血前駆細胞、臍帯血造血前駆細胞、または胎盤血造血前駆細胞などの造血前駆細胞）を含む。非胎盤細胞はまた、間葉系幹細胞（例えば、骨髄由来間葉系幹細胞）などの幹細胞を含み得る。非胎盤細胞はまた、１つ以上の種類の成体細胞または細胞株であり得る。別の特定の実施形態では、組成物は、抗増殖剤（例えば、抗ＭＩＰ－１αまたは抗ＭＩＰ－１β抗体）を含む。
特定の実施形態では、上に記載の細胞または細胞の組み合わせのうちの１つによって条件付けられた培養培地は、単離された付着性胎盤細胞と腫瘍細胞の比が約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、または約５：１の割合で、複数の腫瘍細胞と共培養された複数の単離された付着性胎盤細胞から得られる。例えば、条件培養培地または上清は、約１×１０５個の単離された付着性胎盤細胞、約１×１０６個の単離された付着性胎盤細胞、約１×１０７個の単離された付着性胎盤細胞、または約１×１０８個の単離された付着性胎盤細胞、またはそれ以上を含む培養から得ることができる。別の特定の実施形態では、条件培養培地または上清は、約１×１０５～約５×１０５個の単離された付着性胎盤細胞と約１×１０５個の腫瘍細胞、約１×１０６～約５×１０６個の単離された付着性胎盤細胞と約１×１０６個の腫瘍細胞、約１×１０７～約５×１０７個の単離された付着性胎盤細胞と約１×１０７個の腫瘍細胞、または約１×１０８～約５×１０８個の単離された付着性胎盤細胞と約１×１０８個の腫瘍細胞を含む共培養から得られる。
５．９．細胞の保存
細胞、例えば、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）、または造血幹細胞もしくは前駆細胞を含む胎盤灌流細胞を、保存することができ、すなわち、長期保存を可能にする条件下、または細胞死（例えば、アポトーシスもしくは壊死による）を阻害する条件下に置かれる。
胎盤灌流液は、細胞回収組成物が、胎盤の少なくとも一部を通過することによって（例えば、胎盤血管系を通過することによって）産生され得る。細胞回収組成物は、灌流液内に含まれる細胞を保存するように作用する１つ以上の化合物を含む。そのような胎盤細胞回収組成物は、関連する米国出願公開第２００７／０１９００４２号に記載されているように（その開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される）、アポトーシス阻害剤、壊死阻害剤、および／または酸素担持パーフルオロカーボンを含むことができる。
一実施形態では、灌流液または胎盤細胞集団は、灌流液または細胞集団をアポトーシス阻害剤および酸素担持パーフルオロカーボンを含む細胞回収組成物と接近させることによって、哺乳動物（例えばヒト、産後胎盤）から回収され、当該アポトーシス阻害剤は、アポトーシス阻害剤と接触または接近させていない細胞集団と比較して、胎盤細胞集団、例えば、付着性胎盤細胞（例えば、胎盤幹細胞または胎盤多能性細胞）においてアポトーシスを低減または阻止するのに十分な量および時間、存在する。例えば、胎盤を、細胞回収組成物で灌流することができ、胎盤細胞（例えば、全有核胎盤細胞）がそれから単離される。特定の実施形態では、アポトーシス阻害剤は、カスパーゼ阻害剤である。別の特定の実施形態では、当該アポトーシス阻害剤は、ＪＮＫ阻害剤である。より具体的な実施形態では、当該ＪＮＫ阻害剤は、付着性胎盤細胞（例えば付着性胎盤幹細胞または付着性胎盤多能性細胞）の分化または増殖を調節しない。別の実施形態では、細胞回収組成物は、当該アポトーシス阻害剤と当該酸素担持パーフルオロカーボンとを別個の相で含む。別の実施形態では、細胞回収組成物は、エマルション中に当該アポトーシス阻害剤および当該酸素担持パーフルオロカーボンを含む。別の実施形態では、細胞回収組成物はさらに、乳化剤、例えばレシチンを含む。別の実施形態では、当該アポトーシス阻害剤および当該パーフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞回収組成物に接近させる時点で、約０℃～約２５℃である。別のより具体的な実施形態では、当該アポトーシス阻害剤および当該パーフルオロカーボンは、胎盤細胞を細胞回収組成物に接近させる時点で、約２℃～１０℃、または約２℃～約５℃である。別のより具体的な実施形態では、当該接近させることは、当該細胞集団の輸送中に行われる。別のより具体的な実施形態では、当該接近にもたらすことは、当該細胞集団の凍結および解凍中に行われる。
別の実施形態では、胎盤灌流液および／または胎盤細胞は、灌流液および／または細胞をアポトーシス阻害剤および臓器保存化合物と接近させることによって、回収および保存することができ、当該アポトーシス阻害剤は、アポトーシス阻害剤と接触または接近させていない灌流液または胎盤細胞と比較して、細胞のアポトーシスを低減または阻止するのに十分な量および時間、存在する。特定の実施形態では、臓器保存化合物は、ＵＷ溶液（米国特許第４，７９８，８２４号に記載されている、ＶＩＡＳＰＡＮ（商標）としても知られている、Ｓｏｕｔｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ４９（２）：２５１－２５７（１９９０）も参照されたい）、またはＳｔｅｒｎらの米国特許第５，５５２，２６７号に記載されている溶液である（それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される）。別の実施形態では、当該臓器保存組成物は、ヒドロキシエチルデンプン、ラクトビオン酸、ラフィノース、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態では、胎盤細胞回収組成物は、２相またはエマルションのいずれかで、酸素担持パーフルオロカーボンをさらに含む。
本方法の別の実施形態では、灌流中に、胎盤細胞を、アポトーシス阻害剤および酸素担持パーフルオロカーボン、臓器保存化合物、またはそれらの組み合わせを含む細胞回収組成物と接近させる。別の実施形態では、灌流による回収後、胎盤細胞を、当該細胞回収化合物と接近させる。
典型的には、胎盤細胞を回収、濃縮、および単離する間、低酸素および機械的ストレスによる細胞ストレスを最小限に抑えるか、または排除することが好ましい。したがって、本方法の別の実施形態では、胎盤灌流液または胎盤細胞集団は、当該保存中６時間未満の回収、濃縮、または単離の間、低酸素状態に曝露される（低酸素状態とは、正常な血中酸素濃度よりも低い酸素濃度である）。より具体的な実施形態では、当該灌流液または胎盤細胞集団は、当該保存中、当該低酸素状態に２時間未満曝露される。別のより具体的な実施形態では、胎盤細胞集団は、回収、濃縮または単離の間、当該低酸素状態に１時間未満、もしくは３０分未満曝露されるか、または回収、濃縮または単離の間、低酸素状態に曝露されない。別の特定の実施形態では、上記の胎盤細胞集団は、回収、濃縮または単離の間、剪断応力に曝露されない。
細胞、例えば、胎盤灌流細胞、造血細胞（例えば、ＣＤ３４＋造血幹細胞）、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、本明細書で提供される単離された付着性胎盤細胞は、小さな容器（例えば、アンプルまたはセプタムバイアル）中の凍結保存培地に凍結保存され得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される細胞は、１ｍＬ当たり約１×１０４～５×１０８細胞の濃度で凍結保存される。特定の実施形態では、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり約１×１０６～１．５×１０７細胞の濃度で凍結保存される。より具体的な実施形態では、本明細書で提供される細胞は、１ｍＬ当たり約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、１．５×１０７細胞の濃度で凍結保存される。
好適な凍結保存培地としては、通常の生理食塩水、培養培地（例えば、増殖培地または細胞凍結培地を含む）、例えば、市販の細胞凍結培地（例えば、Ｃ２６９５、Ｃ２６３９またはＣ６０３９（Ｓｉｇｍａ）、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ２、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５、またはＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０（ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、凍結保存培地は、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０％（ｖ／ｖ）の濃度で、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を含む。凍結保存培地は、追加の薬剤、例えば、メチルセルロース、デキストラン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、トレハロース、および／またはグリセロールを含み得る。特定の実施形態では、凍結保存培地は、約１％～１０％のＤＭＳＯ、約２５％～７５％のデキストラン、および／または約２０～６０％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む。特定の実施形態では、凍結保存培地は、約１％～１０％のＤＭＳＯ、約２５％～７５％のトレハロース、および／または約２０～６０％のヒトＨＳＡを含む。特定の実施形態では、凍結保存培地は、５％のＤＭＳＯ、５５％のデキストラン、および４０の％ＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存培地は、５％のＤＭＳＯ、５５％のデキストラン（生理食塩水中１０重量／体積％）、および４０％のＨＳＡを含む。別の特定の実施形態では、凍結保存培地は、５％のＤＭＳＯ、５５％のトレハロース、および４０％のＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、凍結保存培地は５％のＤＭＳＯ、５５％のトレハロース（生理食塩水中１０重量／体積％）、および４０％のＨＳＡを含む。別の特定の実施形態では、凍結保存培地は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ５を含む。別の特定の実施形態では、凍結保存培地は、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０を含む。
本明細書で提供される細胞は、様々な方法のいずれかによって、細胞培養、増殖、または分化の任意の段階で、凍結保存することができる。例えば、本明細書で提供される細胞は、起源の組織もしくは臓器（例えば、胎盤灌流液もしくは臍帯血）から単離された直後に、または上に概説される方法の第１、第２、もしくは第３のステップ間もしくはその後に、凍結保存され得る。特定の実施形態では、造血細胞（例えば造血幹細胞または前駆細胞）は、起源の組織または臓器からの単離後、約１、５、１０、１５、２０、３０、４５分以内、または約１、２、４、６、１０、１２、１８、２０、もしくは２４時間以内に、凍結保存される。特定の実施形態では、当該細胞は、起源の組織または臓器からの単離後、１、２、または３日以内に、凍結保存される。特定の実施形態では、当該細胞は、上に記載の第１の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日間培養された後に、凍結保存される。一部の実施形態では、当該細胞は、上に記載の第１の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日間培養され、上に記載の第２の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日間培養された後に、凍結保存される。一部の実施形態では、ＮＫ細胞が本明細書に記載の３段階法を使用して作製される場合、当該細胞は、第１の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５日間培養された後、かつ／または第２の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５日間培養された後、かつ／または第３の培地で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５日間培養された後に、凍結保存される。特定の実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法を使用して作製され、当該細胞は、第１の培地で１０日間培養された後、第２の培地で４日間培養された後、および第３の培地で２１日間培養された後に、凍結保存される。
一態様では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）を凍結保存する方法が、本明細書で提供される。一実施形態では、当該方法は、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－もしくはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋もしくはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％もしくは少なくとも８０％のナチュラルキラー細胞が生存可能である、第３の細胞集団を産生することと、次に、凍結保存培地中でＮＫ細胞を凍結保存すること、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＮＫ細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞因子（ＳＣＦ）およびＬＭＷＨの各々を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＮＫ細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＳＣＦ、幹細胞動員剤、およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＮＫ細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、第４の細胞集団を産生することであって、第４の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、第４の細胞集団を産生することと、次に、ＮＫ細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＩＬＣ３細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＩＬＣ３細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＩＬＣ３細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、幹細胞動員剤、ＳＣＦ、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することであって、第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、第３の細胞集団を産生することと、次に、ＩＬＣ３細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
一実施形態では、当該方法は、（ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、（ｂ）第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、（ｃ）第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを各々欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、（ｄ）第３の細胞集団からＣＤ１１ａ－細胞を単離して、第４の細胞集団を産生することであって、第４の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、第４の細胞集団を産生することと、次に、ＩＬＣ３細胞を、凍結保存培地で凍結保存することと、を含む。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。特定の実施形態では、当該凍結保存ステップは、（１）細胞懸濁液を調製することと、（２）ステップ（１）からの細胞懸濁液に凍結保存培地を添加して、凍結保存細胞懸濁液を得ることと、（３）ステップ（３）からの凍結保存細胞懸濁液を冷却して、凍結保存試料を得ることと、（４）凍結保存試料を－８０℃未満で凍結保存することと、をさらに含む。特定の実施形態では、本方法は、中間ステップを含まない。
本明細書で提供される細胞は、凍結保存中に、プログラムフリーザー（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ－ｒａｔｅ ｆｒｅｅｚｅｒ）で、例えば、約０．１、０．３、０．５、１、または２℃／分で冷却することができる。一実施形態では、凍結保存温度は、約－８０℃～約－１８０℃、または約－１２５℃～約－１４０℃である。凍結保存細胞は、使用のために解凍する前に、液体窒素に移すことができる。一部の実施形態では、例えば、アンプルが約－９０℃に達したら、それらを液体窒素貯蔵エリアに移す。凍結保存細胞は、約２５℃～約４０℃の温度で解凍することができ、より具体的には、約３７℃の温度に解凍することができる。特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、４、６、１０、１２、１８、２０、もしくは２４時間、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、もしくは２８日間凍結保存された後に、解凍される。特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８ヶ月間凍結保存された後に、解凍される。特定の実施形態では、凍結保存細胞は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年間凍結保存された後に、解凍される。
好適な解凍培地としては、生理食塩水、プラズマライト培養培地（例えば、増殖培地（例えば、ＲＰＭＩ培地）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、解凍培地は、培地サプリメント（例えば、栄養素、サイトカイン、および／または因子）のうちの１つ以上を含む。本明細書で提供される細胞を解凍するのに好適な培地サプリメントとしては、例えば、ヒト血清ＡＢ、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）またはウシ胎児血清（ＦＣＳ）、ビタミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、アミノ酸（例えば、Ｌ－グルタミン）、脂肪酸（例えば、オレイン酸、リノール酸またはパルミチン酸）、インスリン（例えば、組換えヒトインスリン）、トランスフェリン（鉄飽和ヒトトランスフェリン）、β－メルカプトエタノール、幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３－Ｌ）、サイトカイン（例えば、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５））、トロンボポエチン（Ｔｐｏ）、またはヘパリンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書で提供される方法において有用な解凍培地は、ＲＰＭＩを含む。別の特定の実施形態では、当該解凍培地は、プラズマライトを含む。別の特定の実施形態では、当該解凍培地は、約０．５～２０％のＦＢＳを含む。別の特定の実施形態では、当該解凍培地は、約１、２、５、１０、１５、または２０％のＦＢＳを含む。別の特定の実施形態では、当該解凍培地は、約０．５％～２０％のＨＳＡを含む。別の特定の実施形態では、当該解凍培地は、約１、２．５、５、１０、１５、または２０％のＨＳＡを含む。より具体的な実施形態では、当該解凍培地は、ＲＰＭＩおよび約１０％のＦＢＳを含む。別のより具体的な実施形態では、当該解凍培地は、プラズマライトおよび約５％のＨＳＡを含む。
本明細書に提供される凍結保存方法は、長期保存を可能にするように、または細胞死（例えば、アポトーシスもしくは壊死による）を阻害する条件下で最適化することができる。一実施形態では、解凍後の細胞は、例えば、自動細胞計数器またはトリパンブルー法によって決定される、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９８％超の生存細胞を含む。別の実施形態では、解凍後の細胞は、約０．５、１、５、１０、１５、２０、または２５％の死細胞を含む。別の実施形態では、解凍後の細胞は、初期アポトーシス細胞の約０．５、１、５、１０、１５、２０、または２５％を含む。別の実施形態では、アポトーシスアッセイ（例えば、ＴＯ－ＰＲＯ３またはＡｎｎＶ／ＰＩアポトーシスアッセイキット）によって決定した場合、解凍して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日後に、解凍後の細胞の約０．５、１、５、１０、１５、または２０％が、アポトーシスを受ける。特定の実施形態では、解凍後の細胞は、本明細書で提供される方法を使用して、培養、増殖、または分化した後、再凍結保存される。
５．１０．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む組成物
５．１０．１．３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞
一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）が、本明細書で提供され、本明細書に記載の３段階法を使用して産生される単離されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団を含む。特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団は、造血細胞（例えば、胎盤灌流液、臍帯血、および／または末梢血から単離された造血幹細胞または前駆細胞）から産生される。別の特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団は、組成物中の細胞の少なくとも５０％を含む。別の特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞）は、組成物中の細胞の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％を含む。特定の実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団における細胞の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％以下は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞である。特定の実施形態では、当該ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、ＣＤ１６－である。
本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団は、インビボで使用するために医薬組成物に製剤化することができる。かかる医薬組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、生理食塩水溶液またはインビボ投与のための他の許容される生理学的に許容される溶液）中に、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の集団を含む。本発明の医薬組成物は、本明細書の他箇所に記載のＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団のうちのいずれかをも含み得る。
本発明の医薬組成物は、５０％以上の生存細胞（すなわち、集団中の細胞の少なくとも５０％が機能的であるか、または生存している）を含む細胞集団を含む。好ましくは、集団中の少なくとも６０％の細胞が生存可能である。より好ましくは、医薬組成物中の集団における細胞の少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％が生存可能である。
本発明の医薬組成物は、１つ以上の化合物（例えば、生着を促進する）、安定剤（アルブミン、デキストラン４０、ゼラチン、ヒドロキシエチルデンプンなど）を含み得る。
注射液として製剤化される場合、一実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１．２５％のＨＳＡおよび約２．５％のデキストランを含む。細胞産物の投与に好適な他の注射用製剤を使用してもよい。
一実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、全身投与または局所投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、非経口投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、デバイス、マトリックス、またはスカフォールドを介した投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、注射に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、カテーテルを介した投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、局所注射に好適である。より具体的な実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、固形腫瘍（例えば、肉腫）への直接局所注射に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、シリンジによる注射に好適である。特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、ガイド送達を介した投与に好適である。特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物（例えば、医薬組成物）は、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線によって補助される注射に好適である。
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む組成物（例えば、本明細書で提供される医薬組成物）は、薬学的等級の投与可能な単位として提供される。かかる単位は、例えば、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｎＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、５０ｍＬ、５５ｍＬ、６０ｍＬ、６５ｍＬ、７０ｍＬ、７５ｍＬ、８０ｍＬ、８５ｍＬ、９０ｍＬ、９５ｍＬ、１００ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、２５０ｍＬ、３００ｍＬ、３５０ｍＬ、４００ｍＬ、４５０ｍＬ、５００ｍＬなどの別個の量で提供され得る。かかる単位は、特定の数の細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞）、例えば、１ミリリットル当たり１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個もしくはそれ以上の細胞、または１単位当たり１×１０４個、５×１０４個、１×１０５個、５×１０５個、１×１０６個、５×１０６個、１×１０７個、５×１０７個、１×１０８個、５×１０８個、１×１０９個、５×１０９個、１×１０１０個、５×１０１０個、１×１０１１個、もしくはそれ以上の細胞を含有するように提供され得る。特定の実施形態では、単位は、１ミリリットル当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６個もしくはそれ以上のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、あるいは１単位当たり約、少なくとも約、または最大で約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の細胞を含み得る。かかる単位は、特定の数のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、もしくはＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団、ならびに／あるいは他の細胞のいずれかを含有するように提供され得る。特定の実施形態では、ＮＫ細胞およびＩＬＣ３細胞は、本明細書で提供される割合で存在する。
別の特定の実施形態では、当該組成物中の当該単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、単一の個体由来である。より具体的な実施形態では、当該単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、少なくとも２つの異なる個体由来のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含む。別の特定の実施形態では、当該組成物中の当該単離されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を用いた治療が意図される個体とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、当該免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触もしくは接近していない同等の数のナチュラルキラー細胞（すなわち、ＮＫ細胞）よりも、当該ＮＫ細胞が検出可能に多くのグランザイムＢまたはパーフォリンを発現するのに十分な量および時間で、免疫調節化合物もしくはサリドマイドと接触または接近している。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物またはサリドマイドをさらに含む。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、以下に記載の化合物である。例えば、米国特許第７，４９８，１７１号を参照されたい（その開示の全体が参照により本明細書に援用される）。特定の実施形態では、免疫調節化合物は、アミノ置換イソインドリンである。一実施形態では、免疫調節化合物は、３－（４－アミノ－１－オキソ－１，３－ジヒドロイソインドール－２－イル）－ピペリジン－２，６－ジオン、３－（４’アミノイソリンドリン－１’－オン）－１－ピペリジン－２，６－ジオン、４－（アミノ）－２－（２，６－ジオキソ（３－ピペリジル））－イソインドリン－１，３－ジオン、または４－アミノ－２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）イソインドール－１，３－ジオンである。別の実施形態では、免疫調節化合物は、ポマリドミドまたはレナリドミドである。別の実施形態では、当該免疫調節化合物は、以下の構造を有する化合物であり
Figure 2022511786000115
式中、ＸおよびＹのうちの一方は、Ｃ＝Ｏであり、ＸおよびＹのうちの他方は、Ｃ＝ＯまたはＣＨ２であり、Ｒ２は、水素もしくは低級アルキル、またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、もしくは立体異性体の混合物である。別の実施形態では、当該免疫調節化合物は、以下の構造を有する化合物であり
Figure 2022511786000116
 式中、ＸおよびＹのうちの一方は、Ｃ＝Ｏであり、他方は、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｒ１は、Ｈ、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ３～Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２～Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ１～Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリール、Ｃ（Ｏ）Ｒ３、Ｃ（Ｓ）Ｒ３、Ｃ（Ｏ）ＯＲ４、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－Ｎ（Ｒ６）２、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－ＯＲ５、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３、Ｃ（Ｓ）ＮＨＲ３、Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ３’、Ｃ（Ｓ）ＮＲ３Ｒ３’、または（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－Ｏ（ＣＯ）Ｒ５であり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、ベンジル、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、または（Ｃ２～Ｃ８）アルキニルであり、
Ｒ３およびＲ３’は、独立して、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ３～Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２～Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ１～Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリール、（Ｃ０～Ｃ８）アルキル－Ｎ（Ｒ６）２、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－ＯＲ５、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル－Ｏ（ＣＯ）Ｒ５、またはＣ（Ｏ）ＯＲ５であり、
Ｒ４は、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２～Ｃ８）アルキニル、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル－ＯＲ５、ベンジル、アリール、（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ１～Ｃ６）ヘテロシクロアルキル、または（Ｃ０～Ｃ４）アルキル－（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリールであり、
Ｒ５は、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２～Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、または（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリールであり、
Ｒ６は、各出現時に独立して、Ｈ、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、（Ｃ２～Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２～Ｃ８）アルキニル、ベンジル、アリール、（Ｃ２～Ｃ５）ヘテロアリール、または（Ｃ０～Ｃ８）アルキル－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｒ５であるか、あるいはＲ６基は、連結してヘテロシクロアルキル基を形成することができ、
ｎは、０または１であり、
＊は、不斉炭素中心を表し、
あるいはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、または立体異性体の混合物である。別の実施形態では、当該免疫調節化合物は、以下の構造を有する化合物であり
Figure 2022511786000117
 式中、
ＸおよびＹのうちの一方は、Ｃ＝Ｏであり、他方は、ＣＨ２またはＣ＝Ｏであり、
Ｒは、ＨまたはＣＨ２ＯＣＯＲ’であり、
（ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、各々、他とは独立して、ハロ、炭素原子１～４個のアルキル、または炭素原子１～４個のアルコキシであるか、あるいは（ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４のうちの１つは、ニトロまたは－ＮＨＲ５であり、かつ残りのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素または炭素原子１～８個のアルキルであり、
Ｒ６は、水素、（Ｃ１～Ｃ８）アルキル、ベンゾ、クロロ、またはフルオロであり、
Ｒ’は、Ｒ７－ＣＨＲ１０－Ｎ（Ｒ８Ｒ９）であり、
Ｒ７は、ｍ－フェニレンもしくはｐ－フェニレン、または－（ＣｎＨ２ｎ）－であり、ｎは、０～４の値を有し、
Ｒ８およびＲ９は、各々、他とは独立して取られて、水素または炭素原子１～８個のアルキルであるか、あるいはＲ８およびＲ９は、一緒に取られて、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、または－ＣＨ２ＣＨ２Ｘ１ＣＨ２ＣＨ２－であり、Ｘ１は、－Ｏ－、－Ｓ－、または－ＮＨ－であり、
Ｒ１０は、水素、炭素原子が最大８個のアルキル、またはフェニルであり、
＊は、不斉炭素中心を表し、
あるいはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、クラスレート、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、または立体異性体の混合物である。
別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
より具体的な実施形態では、組成物は、別の供給源由来のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を含むか、または別の方法によって作製される。特定の実施形態では、当該他の供給源は、胎盤血および／または臍帯血である。別の特定の実施形態では、当該他の供給源は、末梢血である。より具体的な実施形態では、当該組成物中のＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団は、約１００：１、９５：５、９０：１０、８５：１５、８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、６０：４０、５５：４５、５０：５０、４５：５５、４０：６０、３５：６５、３０：７０、２５：７５、２０：８０、１５：８５、１０：９０、５：９５、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、１：１００などの割合で、別の供給源由来のＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わされるか、または別の方法によって作製される。
別の特定の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞のいずれかとを含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、当該ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団とは異なる個体由来の胎盤灌流液を含む。別の特定の実施形態では、当該胎盤灌流液の細胞の全て、または実質的に全て（例えば、９０％、９５％、９８％、または９９％超）は、胎児細胞である。別の特定の実施形態では、胎盤灌流液または胎盤灌流細胞は、胎児細胞および母体細胞を含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液の胎児細胞は、当該灌流液の細胞の約９０％、８０％、７０％、６０％、または５０％未満を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、胎盤血管系を通した０．９％ＮａＣｌ溶液の灌流によって得られる。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、培養培地を含む。別の特定の実施形態では、当該灌流液は、赤血球を除去するように処理されている。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物、例えば、以下に記載の免疫調節化合物（例えば、アミノ置換イソインドリン化合物）を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
別の特定の実施形態では、組成物は、ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と、胎盤灌流細胞とを含む。より具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団と同じ個体由来である。別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流細胞は、当該ＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団とは異なる個体由来である。別の特定の実施形態では、組成物は、単離された胎盤灌流液および単離された胎盤灌流細胞を含み、当該単離された灌流液および当該単離された胎盤灌流細胞は、異なる個体由来である。胎盤灌流液を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該胎盤灌流液は、少なくとも２つの個体由来の胎盤灌流液を含む。胎盤灌流細胞を含む上記実施形態のいずれかの別のより具体的な実施形態では、当該単離された胎盤灌流細胞は、少なくとも２つの個体由来である。別の特定の実施形態では、当該組成物は、免疫調節化合物を含む。別の特定の実施形態では、組成物は、１つ以上の抗癌剤化合物、例えば、以下に記載の抗癌剤化合物のうちの１つ以上をさらに含む。
５．１１．３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の使用
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載され提供される３段階法に従って産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞）は、癌を有する個体（例えば、固形腫瘍細胞および／または血液癌細胞を有する個体）、またはウイルス感染を有する個体を治療する方法において使用することができる。一部のかかる実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の有効投与量は、１×１０４～５×１０４、５×１０４～１×１０５、１×１０５～５×１０５、５×１０５～１×１０６、１×１０６～５×１０６、５×１０６～１×１０７細胞／キログラム体重、またはそれ以上の範囲である。本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞はまた、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法において使用することができる。
５．１１．１．癌を有する個体の治療
一実施形態では、癌（例えば、血液癌または固形腫瘍）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生される治療有効量のＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を、当該個体に投与することを含む。一実施形態では、癌（例えば、血液癌または固形腫瘍）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生される治療有効量のＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団）を、当該個体に投与することを含む。特定の実施形態では、個体は、ナチュラルキラー細胞の欠乏症（例えば、個体の癌に対して活性なＮＫ細胞の欠乏症）を有する。特定の実施形態では、本方法は、当該個体に、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞（例えば、治療有効量の胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞）を投与することをさらに含む。別の特定の実施形態では、本方法は、上記の個体に、有効量の免疫調節化合物（例えば、上に記載の免疫調節化合物）またはサリドマイドをさらに投与することを含む。本明細書で使用される場合、「有効量」は、例えば、個体が罹患する癌の１つ以上の症状の検出可能な改善、進行の軽減、または排除をもたらす量である。
単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。特定の実施形態では、投与は非経口である。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、デバイス、マトリックス、またはスカフォールドを用いて行われる。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、注射による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、カテーテルを介する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、固形腫瘍（例えば、肉腫）に直接注射される。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、シリンジによる注射による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、ガイド送達を介する。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を注射によって対象に投与することは、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線によって補助される。
特定の実施形態では、癌は血液癌、例えば、白血病またはリンパ腫である。より具体的な実施形態では、癌は、急性白血病（例えば、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、前駆Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）、もしくは急性混合型白血病）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性単球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ球性リンパ腫、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病）、有毛細胞性リンパ腫、Ｔ細胞性前リンパ球性白血病、またはリンパ腫（例えば、組織球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン血症）、脾辺縁帯リンパ腫形質細胞性腫瘍、（例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着症、または重鎖病）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（モルトリンパ腫）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、アグレッシブＮＫ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症（セザリー症候群）、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症（例えば、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫またはリンパ腫様丘疹症）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、不特定未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫または結節性リンパ球優性ホジキンリンパ腫）である。別の特定の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫または骨髄異形成症候群である。
特定の他の特定の実施形態では、癌は、固形腫瘍、例えば、癌（例えば、腺癌、副腎皮質癌、結腸腺癌、大腸腺癌、大腸癌、管細胞癌、肺癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫（例えば、悪性黒色腫）、非黒色腫皮膚癌、もしくは不特定の癌）、デスモイド腫瘍、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、生殖細胞腫瘍（例えば、精巣癌、卵巣癌、絨毛癌、卵黄嚢腫瘍、胚細胞腫など）、肝芽腫、肝細胞癌、神経芽腫、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、またはウィルムス腫瘍である。別の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓癌または乳癌である。他の実施形態では、固形腫瘍は、聴神経腫瘍、星状細胞腫（例えば、グレードＩの毛様細胞性星状細胞腫、グレードＩＩ、低グレードの星状細胞腫、グレードＩＩＩの未分化星状細胞腫、もしくはグレードＩＶの多形神経膠芽腫）、脊索腫、頭蓋咽頭腫、神経膠腫（例えば、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合神経膠腫、視神経膠腫、もしくは上衣下腫）、神経膠芽腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起膠腫、松果体芽腫、下垂体腫瘍、未分化神経外胚葉性腫瘍、または神経鞘腫である。別の実施形態では、癌は、前立腺癌である。別の実施形態では、癌は、肝臓癌である。別の実施形態では、癌は、肺癌である。別の実施形態では、癌は、腎臓癌である。
特定の実施形態では、癌（例えば、血液癌または固形腫瘍）を有する個体（例えば、ナチュラルキラー細胞の欠乏症を有する個体）は、当該投与前に骨髄移植を受けた個体である。特定の実施形態では、骨髄移植は、当該癌の治療中であった。特定の他の実施形態では、骨髄移植は、当該癌以外の状態の治療中であった。特定の実施形態では、個体は、当該骨髄移植に加えて、免疫抑制剤を受けた。特定の実施形態では、骨髄移植を受けた個体は、当該投与時に、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の１つ以上の症状を呈する。特定の他の実施形態では、骨髄移植を受けた個体は、ＧＶＨＤの症状が現れる前に、当該細胞を投与される。
特定の実施形態では、癌（例えば、血液癌）を有する個体は、当該投与の前に、少なくとも１用量のＴＮＦα阻害剤（例えば、ＥＴＡＮＥＲＣＥＰＴ（登録商標）（Ｅｎｂｒｅｌ））を受けている。特定の実施形態では、当該個体は、当該癌の診断から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月以内に、当該用量のＴＮＦα阻害剤を受けた。特定の実施形態では、ＴＮＦα阻害剤の用量を受けた個体は、急性骨髄性白血病を呈する。より具体的な実施形態では、ＴＮＦα阻害剤の用量を受け、急性骨髄性白血病を示す個体は、血球の第５染色体の長腕の欠失をさらに呈する。別の実施形態では、癌、例えば、血液癌を有する個体は、フィラデルフィア染色体を示す。
特定の他の実施形態では、当該個体における癌（例えば、血液癌または固形腫瘍）は、１つ以上の抗癌剤に対して不応性である。特定の実施形態では、癌は、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）に不応性である。
特定の実施形態では、当該個体における癌（例えば血液癌）は、少なくとも１つの抗癌剤に応答し、この実施形態では、胎盤灌流液、単離された胎盤灌流細胞、単離されたナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤由来中間ナチュラルキラー細胞）、単離し組み合わせた本明細書に記載のナチュラルキラー細胞もしくはＮＫ細胞、および／またはそれらの組み合わせ、ならびに、任意選択的に、免疫調節化合物が、補助治療としてまたは当該抗癌薬との併用療法として添加される。特定の他の実施形態では、癌（例えば、血液癌）を有する個体は、当該投与の前に、少なくとも１つの抗癌薬で治療されており、再発している。特定の実施形態では、治療される個体は、難治性癌を有する。一実施形態では、本明細書に記載の細胞を用いた癌治療法は、癌の再発を防ぐ（例えば、予防または遅延する）。一実施形態では、本明細書に記載の癌治療法は、１ヶ月以上、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月以上、１年以上、２年以上、３年以上、または４年以上、癌の寛解をもたらす。
一実施形態では、多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、（１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）ＮＫ細胞を投与することを含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体における多発性骨髄腫を治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するために、本明細書に記載の３段階法によって産生されている。別の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、および／またはＮＫ細胞は、互いに別個に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞は、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－もしくはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋もしくはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％、または少なくとも８０％のナチュラルキラー細胞が生存可能である、方法によって産生される。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
別の実施形態では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、ＮＫ細胞を投与すること（任意選択的に、ＩＬ２単独、またはＩＬ－１５単独、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８による前処理によって活性化される）を含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体におけるＡＭＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された単離されたＮＫ細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で前処理されている。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するために、本明細書に記載の３段階法によって産生されている。ＡＭＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。特定の実施形態では、前述の方法によって治療されるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬの治療のためにＮＫ細胞を投与するための当該技術分野で既知の方法は、この目的のために適合され得る。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｂｌｏｏｄ １０５：３０５１－３０５７、Ｒｕｂｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２８：９５５－９５９を参照されたい（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に援用される）。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ナチュラルキラー細胞治療薬が失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ナチュラルキラー細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。
一実施形態では、多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、（１）レナリドミド、（２）メルファラン、および（３）ＩＬＣ３細胞を投与することを含み、当該ＩＬＣ３細胞は、当該個体の多発性骨髄腫を治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を産生するために、本明細書に記載の３段階法によって産生されている。別の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、および／またはＩＬＣ３細胞は、互いに別個に投与される。多発性骨髄腫を有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－もしくはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋もしくはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％、または少なくとも８０％のナチュラルキラー細胞が生存可能である、方法によって産生される。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
別の実施形態では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、ＩＬＣ３細胞（任意選択的に、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ１２とＩＬ１５、ＩＬ１２とＩＬ１８、ＩＬ２とＩＬ１２とＩＬ１５とＩＬ１８、またはＩＬ２とＩＬ１５とＩＬ１８による前処理によって活性化される）を、投与することを含み、当該ＩＬＣ３細胞は、当該個体におけるＡＭＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法を使用して産生された単離されたＩＬＣ３細胞集団は、当該投与前に、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１８、またはＩＬ１５のうちの１つ以上で前処理されている。特定の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、臍帯血ＩＬＣ３細胞、または臍帯血造血細胞（例えば、造血幹細胞）から産生されるＩＬＣ３細胞である。別の実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、ＩＬＣ３細胞を産生するために、本明細書に記載の３段階法によって産生されている。ＡＭＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載される３段階法によって産生される。特定の実施形態では、前述の方法によって治療されるＡＭＬは、難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬを含む。難治性ＡＭＬ、予後不良ＡＭＬ、または小児ＡＭＬの治療のためにＩＬＣ３細胞を投与するための当該技術分野で既知の方法は、この目的のために適合され得る。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｂｌｏｏｄ １０５：３０５１－３０５７、Ｒｕｂｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２８：９５５－９５９を参照されたい（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に援用される）。特定の実施形態では、当該個体は、ＡＭＬに対する少なくとも１つの非ナチュラルキラー細胞治療薬が失敗したＡＭＬを有する。特定の実施形態では、当該個体は６５歳以上であり、初回寛解期にある。特定の実施形態では、当該個体は、当該ナチュラルキラー細胞を投与する前に、フルダラビン、シタラビン、またはその両方で条件付けされている。
ＡＭＬを有する個体を治療する方法の他の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞は、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－もしくはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋もしくはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％、または少なくとも８０％のナチュラルキラー細胞が生存可能である、方法によって産生される。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
別の実施形態では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、個体に、治療有効量の（１）レナリドミド、（２）メルファラン、（３）フルダラビン、および（４）ＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞）を投与することを含み、当該ＮＫ細胞は、当該個体における当該ＣＬＬを治療するのに有効である。特定の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、臍帯血ＮＫ細胞、または臍帯血造血幹細胞から産生されるＮＫ細胞である。別の実施形態では、当該ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞を産生するために、本明細書に記載の３段階法によって産生されている。上記の方法のいずれかの特定の実施形態では、当該レナリドミド、メルファラン、フルダラビン、および増殖ＮＫ細胞は、当該個体に別個に投与される。ＣＬＬを有する個体を治療する方法の特定の具体的な実施形態では、当該ＮＫ細胞は、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋幹細胞または前駆細胞）を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生することと、その後、当該第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生することと、その後、当該第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み幹細胞動員剤およびＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生することと、を含み、第３の細胞集団は、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、ＣＤ１６－もしくはＣＤ１６＋、およびＣＤ９４＋もしくはＣＤ９４－であるナチュラルキラー細胞を含み、少なくとも７０％、または少なくとも８０％のナチュラルキラー細胞が生存可能である、方法によって産生される。特定の実施形態では、当該第１の培地および／または当該第２の培地は、白血病抑制因子（ＬＩＦ）および／またはマクロファージ炎症性タンパク質－１α（ＭＩＰ－１α）を欠く。特定の実施形態では、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦＭＳ様チロシンキナーゼ－３リガンド（Ｆｌｔ－３Ｌ）を欠く。特定の実施形態では、当該第１の培地および当該第２の培地は、ＬＩＦおよびＭＩＰ－１αを欠き、当該第３の培地は、ＬＩＦ、ＭＩＰ－１α、およびＦｌｔ３Ｌを欠く。特定の実施形態では、第１の培地、第２の培地、または第３の培地のいずれも、ヘパリン、例えば、低分子量ヘパリンを含まない。
５．１１．２．腫瘍細胞増殖の抑制
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法が、本明細書でさらに提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を、腫瘍細胞と接近させること（例えば、腫瘍細胞を、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞と接触させること）を含む。したがって、複数のＮＫ細胞を、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法において使用することができ、治療有効量のＮＫ細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞を、ＮＫ細胞集団の細胞と接触させること）を含む。任意選択的に、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞を、本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＮＫ細胞と接近させる。別の特定の実施形態では、免疫調節化合物（例えば、上に記載の免疫調節化合物）またはサリドマイドを、本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＮＫ細胞とさらに接近させ、その結果、腫瘍細胞の増殖が、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞と接近させない同じ種類の腫瘍細胞と比較して、検出可能に低減される。任意選択的に、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞を、免疫調節化合物と接触または接近させた本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＮＫ細胞と接近させる。
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法が、本明細書でさらに提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団）を、腫瘍細胞と接近させること（例えば、腫瘍細胞を、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞と接触させること）を含む。したがって、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法では、複数のＩＬＣ３細胞を使用することができ、治療有効量のＩＬＣ３細胞集団を、腫瘍細胞に接近させること（例えば、腫瘍細胞をＩＬＣ３細胞集団の細胞と接触させること）を含む。任意選択的に、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞を、本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＩＬＣ３細胞と接近させる。別の特定の実施形態では、免疫調節化合物（例えば、上に記載の免疫調節化合物）またはサリドマイドを、本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＩＬＣ３細胞とさらに接近させ、その結果、腫瘍細胞の増殖が、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＩＬＣ３細胞と接近させない同じ種類の腫瘍細胞と比較して、検出可能に低減される。任意選択的に、単離された胎盤灌流液または単離された胎盤灌流細胞を、免疫調節化合物と接触または接近させた本明細書に記載の方法を使用して産生された腫瘍細胞および／またはＩＬＣ３細胞と接近させる。
本明細書で使用される場合、特定の実施形態では、細胞に関して「接触させる（ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ）」または「接近させる（ｂｒｉｎｇｉｎｇ ｉｎｔｏ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ）」ことは、一実施形態では、直接的で物理的な（例えば、細胞と細胞）、胎盤灌流液、胎盤灌流細胞、ナチュラルキラー細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＮＫ細胞集団）、ＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＩＬＣ３細胞集団）、および／または単離され組み合されたナチュラルキラー細胞と腫瘍細胞、の間での接触を包含する。別の実施形態では、「接触させること」は、同じ物理的空間における存在を包含し、例えば、胎盤灌流液、胎盤灌流細胞、ナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤中間ナチュラルキラー細胞）、本明細書に記載のナチュラルキラー細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＮＫ細胞集団）、本明細書に記載のＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＩＬＣ３細胞集団）、および／または単離され組み合されたナチュラルキラー細胞が、腫瘍細胞と同じ容器（例えば、培養皿、マルチウェルプレート）に配置される。別の実施形態では、胎盤灌流液、胎盤灌流細胞、組み合わせたナチュラルキラー細胞、胎盤中間ナチュラルキラー細胞、もしくは本明細書に記載のナチュラルキラー細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＮＫ細胞集団）、または本明細書に記載のＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法に従って産生されるＩＬＣ３細胞集団）と、腫瘍細胞とを「接触させる」ことは、例えば、胎盤灌流液もしくは胎盤灌流細胞（例えば、胎盤灌流細胞）、組み合わせたナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤中間ナチュラルキラー細胞）、またはＩＬＣ３細胞を、個体（例えば、腫瘍細胞を含むヒト（例えば、癌患者））に、注射または注入することによって達成される。「接触させること」とは、免疫調節化合物および／またはサリドマイドの文脈では、例えば、細胞と免疫調節化合物および／またはサリドマイドが、互いに直接物理的に接触するか、または同じ物理体積（例えば、細胞培養容器もしくは個体）内に配置されることを意味する。
特定の実施形態では、腫瘍細胞は、血液癌細胞（例えば、白血病細胞またはリンパ腫細胞）である。より具体的な実施形態では、癌は、急性白血病（例えば、急性Ｔ細胞白血病細胞、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性骨髄芽球性白血病細胞、急性巨核芽球性白血病細胞、前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病細胞、前駆Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病細胞、バーキット白血病（バーキットリンパ腫）細胞、もしくは急性混合型白血病細胞）、慢性白血病細胞（例えば、慢性骨髄性リンパ腫細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、慢性単球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ球性リンパ腫細胞、もしくはＢ細胞性前リンパ球性白血病）、有毛細胞性リンパ腫細胞、Ｔ細胞性前リンパ球性白血病細胞、またはリンパ腫細胞（例えば、組織球性リンパ腫細胞、リンパ形質細胞性リンパ腫細胞（例えば、ワルデンストレームマクログロブリン血症細胞）、脾辺縁帯リンパ腫形質細胞性腫瘍細胞、（例えば、形質細胞性骨髄腫細胞、形質細胞腫細胞、単クローン性免疫グロブリン沈着症、または重鎖病）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（モルトリンパ腫）細胞、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）細胞、濾胞性リンパ腫細胞、マントル細胞リンパ腫細胞、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫細胞、原発性滲出性リンパ腫細胞、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病細胞、アグレッシブＮＫ細胞白血病細胞、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫細胞、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫－鼻型細胞、腸症型Ｔ細胞リンパ腫細胞、肝脾Ｔ細胞リンパ腫細胞、芽球性ＮＫ細胞リンパ腫細胞、菌状息肉症（セザリー症候群）、原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖異常症（例えば、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫またはリンパ腫様丘疹症）細胞、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫細胞、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、不特定未分化大細胞リンパ腫細胞、ホジキンリンパ腫細胞または結節性リンパ球優性ホジキンリンパ腫細胞）である。別の特定の実施形態では、腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞または骨髄異形成症候群細胞である。
特定の実施形態では、癌細胞は、固形腫瘍細胞、例えば、癌細胞（例えば、腺癌細胞、副腎皮質癌細胞、結腸腺癌細胞、大腸腺癌細胞、大腸癌細胞、管細胞癌細胞、肺癌細胞、甲状腺癌細胞、鼻咽頭癌細胞、黒色腫細胞（例えば、悪性黒色腫細胞）、非黒色腫皮膚癌細胞、もしくは不特定の癌細胞）、デスモイド腫瘍細胞、線維形成性小円形細胞腫瘍細胞、内分泌腫瘍細胞、ユーイング肉腫細胞、生殖細胞腫瘍（例えば、精巣癌細胞、卵巣癌細胞、絨毛癌細胞、卵黄嚢腫瘍細胞、胚細胞腫細胞）、肝芽腫細胞、肝細胞癌細胞、神経芽腫細胞、非横紋筋肉腫軟部組織肉腫細胞、骨肉腫細胞、網膜芽腫細胞、横紋筋肉腫細胞、またはウィルムス腫瘍細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、膵臓癌細胞または乳癌細胞である。他の実施形態では、固形腫瘍細胞は、聴神経腫瘍細胞、星状細胞腫細胞（例えば、グレードＩの毛様細胞性星状細胞腫細胞、グレードＩＩ、低グレードの星状細胞腫細胞、グレードＩＩＩの未分化星状細胞腫細胞、もしくはグレードＩＶの多形神経膠芽腫細胞）、脊索腫細胞、頭蓋咽頭腫細胞、神経膠腫細胞（例えば、脳幹神経膠腫細胞、上衣腫細胞、混合神経膠腫細胞、視神経膠腫細胞、もしくは上衣下腫細胞）、神経膠芽腫細胞、髄芽腫細胞、髄膜腫細胞、転移性脳腫瘍細胞、乏突起膠腫細胞、松果体芽腫細胞、下垂体腫瘍細胞、未分化神経外胚葉性腫瘍細胞、または神経鞘腫細胞である。別の実施形態では、腫瘍細胞は、前立腺癌細胞である。
本明細書で使用される場合、「治療的に有益な」および「治療的利益」としては、例えば、腫瘍のサイズの減少、腫瘍の増殖の減少または停止、転移性疾患の低減または予防、単位体積当たりの組織試料（例えば、血液試料）中の癌細胞の数の減少数、当該個体が有する特定の癌または腫瘍の任意の症状における臨床的改善、当該個体が有する特定の癌の任意の症状の悪化の減少または停止などが挙げられるが、これらに限定されない。
５．１１．３．ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびに他の抗癌剤を使用した癌の治療
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、１つ以上の他の抗癌剤を含む抗癌療法レジメンの一部であり得る。同様に、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、１つ以上の他の抗癌剤を含む抗癌療法レジメンの一部であり得る。追加的に、または代替的に、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を使用した癌を有する個体の治療を使用して、１つ以上の他の抗癌剤を含む抗癌療法を補充することができる。かかる抗癌剤は、当該技術分野で周知であり、抗炎症剤、免疫調節剤、細胞傷害性剤、癌ワクチン、化学療法剤、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＨＤＡＣ６ｉ（ＡＣＹ－２４１））、およびｓｉＲＮＡを含む。本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞、および、任意選択的に、灌流液、灌流細胞、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞以外のナチュラルキラー細胞に加えて、癌を有する個体（例えば、腫瘍細胞を有する個体）に投与され得る特定の抗癌剤としては、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アドゼレシン、アドリアマイシン、アドルシル、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、アメタントロン酢酸塩、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ（例えば、Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎ由来、エルウィナーゼ）、アスペルリン、アバスチン（ベバシズマブ）、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレン塩酸塩、ビスナフィドジメシル酸塩、ビゼレシン、ブレオマイシン硫酸塩、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、セデフィンゴール、セレコキシブ（ＣＯＸ－２阻害剤）、セルビジン、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトールメシル酸塩、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、デザグアニンメシル酸塩、ジアジコン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、ドロロキシフェンクエン酸塩、ドロモスタノロンプロピオン酸塩、デュアゾマイシン、エダトレキサート、エフロミチン塩酸塩、エルサミトルシン、エルスパー、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン塩酸塩、エルブロゾール、エソルビシン塩酸塩、エストラムスチン、リン酸ナトリウム塩、エタニダゾール、エトポシド、エトポシドリン酸塩、エトポフォス、エトプリン、ファドロゾール塩酸塩、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、フルダラビンリン酸塩、フルオロウラシル、フルロシタビン、フォスキドン、ホストリエシンナトリウム塩、ゲムシタビン、ゲムシタビン塩酸塩、ヒドロキシ尿素、イダマイシン、イダルビシン塩酸塩、イホスファミド、イルモフォシン、イプロプラチン、イリノテカン、イリノテカン塩酸塩、ランレオチド酢酸塩、レトロゾール、リュープロリド酢酸塩、リアロゾール塩酸塩、ロメトレキソールナトリウム塩、ロムスチン、ロソキサントロン塩酸塩、マソプロコール、マイタンシン、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロール酢酸塩、メレンゲストロール酢酸塩、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム塩、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロン塩酸塩、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペグアスパラガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシン硫酸塩、ペルフォスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピロキサントロン塩酸塩、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム塩、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン、プリントール、ピューロマイシン、ピューロマイシン塩酸塩、ピラゾフリン、リウマトレックス、リボプリン、サフィンゴール、サフィンゴール塩酸塩、セムスチン、シムトラゼン、スパルフォセートナトリウム塩、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム塩酸塩、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、タブロイド、タリソマイシン、テコガランナトリウム塩、タキソテール、テガフール、テロキサントロン塩酸塩、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポサール、トレミフェンクエン酸塩、トレストロン酢酸塩、トレキサール、トリシリビンリン酸塩、トリメトレキサート、トリメトレキセートグルクロン酸塩、トリプトレリン、ツブロゾール塩酸塩、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、ビンデシン、ビンデシン硫酸塩、ビネピジン硫酸塩、ビングリシネート硫酸塩、ビンロイロシン硫酸塩、ビノレルビン酒石酸塩、ビンロシジン硫酸塩、ビンゾリジン硫酸塩、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、およびゾルビシン塩酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
他の抗癌剤には、以下が含まれるが、これらに限定されない：２０－エピ－１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、５－アザシチジン、５－エチニルウラシル、アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ＡＬＬ－ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス、抗背側化形態形成タンパク質－１、抗アンドロゲン剤、前立腺癌、抗エストロゲン剤、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス調節因子、アプリン酸、ａｒａ－ＣＤＰ－ＤＬ－ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、βラクタム誘導体、βアレチン、βクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトサール（カンプトとも呼ばれる、イリノテカン）カンプトテシン誘導体、カペシタビン、カルボキサミド－アミノ－トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＣａＲｅｓｔ Ｍ３、ＣＡＲＮ７００、軟骨由来阻害剤、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）、カスタノスペルミン、ＣＣ－１２２、ＣＣ－２２０、ＣＣ－４８６、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロルルン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス－ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタアントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクホスファート、細胞溶解因子、シトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデンミンＢ、デスロレリン、デキサメタゾン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ－５－アザシチジン、ジヒドロタキソール、９－、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフル、エピルビシン、エプリステリド、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシドリン酸塩、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン（例、フルダラ）、フルオロダウノルニシン塩酸塩、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリクス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ホモハリントニン（ＨＨＴ、オマセタキシンメペスクシネート）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イマチニブ（例：ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））、イミキモド、免疫賦活ペプチド、インスリン様増殖因子１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、４－、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン－Ｎ三酢酸塩、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナン硫酸塩、レプトールスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球αインターフェロン、リュープロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、リュープロレリン、レバミゾール、リアロゾール、直鎖状ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリンアミド７、ロバプラチン、ロンブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリライシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、マイトトキシン線維芽細胞増殖因子－サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、抗ＥＧＦＲ抗体（例：アービタックス（セツキシマブ））、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体（例、リツキシマブ）、抗ＣＳ－１抗体（例：エロツズマブ（ＢＭＳ／ＡｂｂＶｉｅ））、抗ＣＤ３８抗体（例、ダラツムマブ（ジェンマブ／Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ））、抗ＣＤ１３８抗体（例、インダツキシマブ（Ｂｉｏｔｅｓｔ ＡＧ Ｄｒｅｉｅｉｃｈ））、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例、デュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）））、抗ＮＫＧ２Ａ抗体（例、モナリズマブ（ＩＰＨ２２０１、Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ））、抗ＤＬＬ４抗体（例、デムシズマブ（Ｏｎｃｏｍｅｄ／Ｃｅｌｇｅｎｅ））、抗ＤＬＬ４－抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体、抗ＲＳＰＯ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＩＣＯＳアゴニスト抗体、抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例、モノクローナル抗体３Ｆ８またはｃｈ１４．１８）、抗ＥｒｂＢ２抗体（例、ハーセプチン）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ、モピダモール、マスタード抗癌剤、ミカペルオキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミリアポロン、Ｎ－アセチルジナリン、Ｎ－置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素モジュレーター、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン、オブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））、Ｏ６－ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカインインデューサー、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン（例、フロキサチン）、オキサウノマイシン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペグアスパラガーゼ、ペルデシン、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルフォスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニル酢酸、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤、白金錯体、白金化合物、白金－トリアミン錯体、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニゾン、プロピルビス－アクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアソーム阻害剤、プロテインＡベースの免疫調節剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインキナーゼＣ阻害剤、ミクロアルガル、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ－ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムＲｅ１８６エチドロン酸、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、ＳａｒＣＮＵ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Ｓｄｉ１ミメティック、セムスチン、老化由来インヒビター１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シゾフィラン、ソブゾキサン、ボロカプテートナトリウム、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、スチピアミド、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、チオコラリン、トロンボポエチン、トロンボポエチン模倣体、チマルファシン、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、エチルエチオプルプリンスズ、チラパザミン、二塩化チタノセン、トプセンチン、トレミフェン、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメクス、尿生殖器洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベクティビックス（パニツムマブ）ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ウェルコボリン（ロイコボリン）、ゼローダ（カペシタビン）、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、およびジノスタチンスチマラマー。
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、１つ以上の免疫チェックポイントモジュレーターを含む抗癌療法レジメンの一部であり得る。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント分子、例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、ならびにＢおよびＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、ならびに／またはＰＤ－Ｌ１を調節する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、抗体またはその抗原結合断片である。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント分子のアゴニストである。特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２８、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子）および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗原結合断片である。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。特定の実施形態では、免疫チェックポイント分子は、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン含有－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、Ｔ細胞活性化Ｖドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＰＤ－１、および／またはＰＤ－Ｌ１である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗原結合断片である。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗体またはその抗原結合断片である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＰＤ－１に結合する。特定の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ、Ｏｎｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ランブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１、Ｃｕｒｅｔｅｃｈ、Ｍｅｄｉｖａｔｉｏｎ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＰＤＲ－００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＳＨＲ１２１０、またはＩＮＣＳＨＲ１２１０、Ｉｎｃｙｔｅ、Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体またはその抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）、またはアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ－３２８０Ａ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｒｏｃｈｅ）。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＬＡＧ－３に結合する。特定の実施形態では、ＬＡＧ－３に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＧＳＫ２８３１７８１（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、またはＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＴＬＡ－４に結合する。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４に結合する抗体またはその抗体結合断片は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（商標）、ＢＭＳ－７３４０１６、ＭＤＸ０１０、ＭＤＸ－１０１、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、またはトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＯＸ４０に結合する。特定の実施形態では、ＯＸ４０に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＭＥＤＩ６４６９（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＭＥＤＩ０５６２（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、またはＫＨＫ４０８３（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＧＩＴＲに結合する。特定の実施形態では、ＧＩＴＲに結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）またはＭＥＤＩ１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に結合する。特定の実施形態では、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に結合する抗体またはその抗体結合断片は、ＰＦ－２５６６（ＰＦ－０５０８２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）、またはウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。特定の実施形態では、抗体またはその抗体結合断片は、ＣＤ２７に結合する。特定の実施形態では、ＣＤ２７に結合する抗体またはその抗体結合断片は、バリルマブ（ＣＤＸ－１１２７、Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）である。
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、レナリドミドまたはポマリドミドを含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、ＨＤＡＣ阻害剤を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＣＳ－１抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＣＤ３８抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＣＤ１３８抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＰＤ－１抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗抗体を含む抗癌療法ＰＤ－Ｌ１レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、ＣＣ－１２２を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、ＣＣ－２２０を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＤＬＬ４抗体（例えば、デムシズマブ）を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＤＬＬ４および抗ＶＥＧＦ二重特異性抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＲＳＰＯ３抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、抗ＴＩＧＩＴ抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、ＩＣＯＳアゴニスト抗体を含む抗癌療法レジメンの一部である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を使用した癌を有する個体の治療は、ホモハリントニン（例えば、オマセタキシンメペサクシネート）を含む抗癌療法レジメンの一部である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞を使用した癌を有する個体の治療は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対する抗癌療法レジメンの一部である。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞を使用した癌を有する個体の治療は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に対する抗癌療法レジメンの一部である。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせて、１つ以上の抗体（例えば、前述の段落に記載の抗体）を投与することを含む。かかるＡＤＣＣ法を使用して、いくつかのタイプの癌を治療することができ、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または他のＢ細胞悪性腫瘍（リンパ腫および白血病）、神経芽腫、黒色腫、乳癌、ならびに頭頸部癌を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＡＤＣＣ療法は、以下の抗体：抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、Ｅｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ））、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、抗ジシアロガングリオシド（ＧＤ２）抗体（例えば、モノクローナル抗体３Ｆ８もしくはｃｈ１４．１８）、または抗ＥｒｂＢ２抗体（例えば、ハーセプチン）のうちの１つ以上を、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせて、投与することを含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせた、抗ＣＤ３３抗体の投与を含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせた、抗ＣＤ２０抗体の投与を含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせた、抗ＣＤ１３８抗体の投与を含む。一実施形態では、ＡＤＣＣレジメンは、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせた、抗ＣＤ３２抗体の投与を含む。
５．１１．４．ウイルス感染の治療
別の実施形態では、ウイルス感染を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生される治療有効量のＮＫ細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団）を、当該個体に投与することを含む。別の実施形態では、ウイルス感染を有する個体を治療する方法が、本明細書で提供され、本明細書に記載の方法を使用して産生される治療有効量のＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＩＬＣ３細胞集団）を、当該個体に投与することを含む。特定の実施形態では、個体は、ナチュラルキラー細胞の欠乏症（例えば、個体のウイルス感染に対して活性なＮＫ細胞または他の自然リンパ球の欠乏症）を有する。特定の実施形態では、当該投与は、単離された胎盤灌流液、単離された胎盤灌流細胞、単離されたナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤ナチュラルキラー細胞（例えば、胎盤由来中間ナチュラルキラー細胞））、単離された組み合わせたナチュラルキラー細胞、および／またはそれらの組み合わせのうちの１つ以上を、個体に投与することをさらに含む。特定の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、当該投与の前に、免疫調節化合物（例えば、上述の免疫調節化合物）またはサリドマイドと接触させるか、もしくは接近させる。特定の他の特定の実施形態では、当該投与は、本明細書に記載の方法を使用して産生される当該ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞に加えて、免疫調節化合物（例えば、上述の免疫調節化合物）またはサリドマイドを、当該個体に投与することを含み、当該量は、例えば、当該ウイルス感染症の１つ以上の症状の検出可能な改善、進行の軽減、または排除をもたらす量である。特定の実施形態では、ウイルス感染症は、アデノウイルス科、ピコルナウイルス科、ヘルペスウイルス科、ヘパドナウイルス科、フラビウイルス科、レトロウイルス科、オルトミキソウイルス科、パラミキソウイルス科、パピローマウイルス科、ラブドウイルス科、またはトガウイルス科のウイルスによる感染症である。より具体的な実施形態では、当該ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、コキサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、ポリオウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、単純ヘルペス１型（ＨＳＶ１）、単純ヘルペス２型（ＨＳＶ２）、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ８）、帯状疱疹ウイルス（水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）または帯状疱疹ウイルス）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、インフルエンザウイルス（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、またはソゴトウイルス）、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、パピローマウイルス、狂犬病ウイルス、または風疹ウイルスである。
他のより具体的な実施形態では、当該ウイルスは、アデノウイルスＡ種（血清型１２、１８、もしくは３１）、アデノウイルスＢ種（血清型３、７、１１、１４、１６、３４、３５、もしくは５０）、アデノウイルスＣ種（血清型１、２、５、もしくは６）、アデノウイルスＤ種（血清型８、９、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３３、３６、３７、３８、３９、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、もしくは５１）、アデノウイルスＥ種（血清型４）、またはアデノウイルスＦ種（血清型４０もしくは４１）である。
特定の他のより具体的な実施形態では、ウイルスは、アポイウイルス（ＡＰＯＩＶ）、アロアウイルス（ＡＲＯＡＶ）、バガザウイルス（ＢＡＧＶ）、バンジウイルス（ＢＡＮＶ）、ボウボイウイルス（ＢＯＵＶ）、カシパコアウイルス（ＣＰＣＶ）、カレイ島ウイルス（ＣＩＶ）、カウボーンリッジウイルス（ＣＲＶ）、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、エッジヒルウイルス（ＥＨＶ）、ガジェッツガリーウイルス（ＧＧＹＶ）、イルヘウスウイルス（ＩＬＨＶ）、イスラエル七面鳥髄膜脳脊髄炎ウイルス（ＩＴＶ）、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）、ジュグラウイルス（ＪＵＧＶ）、ジュティアパウイルス（ＪＵＴＶ）、カダムウイルス（ＫＡＤＶ）、ケドウゴウウイルス（ＫＥＤＶ）、ココベラウイルス（ＫＯＫＶ）、コウタンゴウイルス（ＫＯＵＶ）、キャサヌール森林病ウイルス（ＫＦＤＶ）、ランガットウイルス（ＬＧＴＶ）、メアバンウイルス（ＭＥＡＶ）、モドックウイルス（ＭＯＤＶ）、モンタナ筋炎白質脳炎ウイルス（ＭＭＬＶ）、マレーバレー脳炎ウイルス（ＭＶＥＶ）、ウンタヤウイルス（ＮＴＡＶ）、オムスク出血熱ウイルス（ＯＨＦＶ）、ポワッサンウイルス（ＰＯＷＶ）、リオブラボーウイルス（ＲＢＶ）、ロイヤルファームウイルス（ＲＦＶ）、サボヤウイルス（ＳＡＢＶ）、セントルイス脳炎ウイルス（ＳＬＥＶ）、サルビエハウイルス（ＳＶＶ）、サンペルリータウイルス（ＳＰＶ）、サウマレツリーフウイルス（ＳＲＥＶ）、セピクウイルス（ＳＥＰＶ）、テンブスウイルス（ＴＭＵＶ）、ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、チュレニイウイルス（ＴＹＵＶ）、ウガンダＳウイルス（ＵＧＳＶ）、ウスツウイルス（ＵＳＵＶ）、ウェッセルスブロンウイルス（ＷＥＳＳＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、ヤウンデウイルス（ＹＡＯＶ）、黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）、ヨコセウイルス（ＹＯＫＶ）、またはジカウイルス（ＺＩＫＶ）である。
他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞、ならびに、任意選択的に、胎盤灌流液および／または灌流細胞は、１つ以上の他の抗ウイルス剤を含む抗ウイルス療法レジメンの一部として、ウイルス感染症を有する個体に投与される。ウイルス感染症を有する個体に投与され得る特定の抗ウイルス剤としては、イミキモド、ポドフィロックス、ポドフィリン、インターフェロンα（ＩＦＮα）、レチコロス、ノノキシノール－９、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、アマンタジン、リマンタジン、リバビリン、ザナマビル、およびオセルタウマビル、プロテアーゼ阻害剤（インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、またはサキナビルなど）、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビン、またはジドブジンなど）、ならびに非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ネビラピン、またはエファビレンツなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
５．１１．５．ＩＬＣ３細胞の他の治療用途
ＩＬＣ３細胞が、本明細書で提供され、本明細書で提供されるすべての方法において使用することができる。ＩＬＣ３細胞を使用することができる例示的な方法は、以下の態様で開示される。
別の態様では、化学療法後に胃腸管を修復する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法による。
別の態様では、個体を放射線から保護する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。特定の態様では、当該ＩＬＣ３細胞は、骨髄移植の補助として使用される。
別の態様では、個体の胸腺を再構成する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、個体における病原体に対する防御免疫を促進する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。特定の態様では、病原体に対する防御免疫を促進することは、腸管感染症を治療するために行われる。特定の態様では、病原体に対する防御免疫を促進することは、腸管感染症を予防するために行われる。特定の態様では、腸管感染症は、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｒｏｄｅｎｔｉｕｍである。
別の態様では、腫瘍拒絶の方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、器官形成中に組織の完全性を維持する方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、組織修復方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
別の態様では、炎症の制御方法が、本明細書で提供され、複数のＩＬＣ３細胞を、個体に投与することを含み、ＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の３段階法によって産生される。
５．１１．６．投与
細胞、例えば、胎盤灌流細胞（例えば、胎盤灌流液由来の有核細胞）、組み合わせたナチュラルキラー細胞、ＩＬＣ３細胞、および／または単離されたナチュラルキラー細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されたＮＫ細胞集団）の細胞数の決定、ならびに免疫調節化合物（例えば、免疫調節化合物）もしくはサリドマイドの量の決定は、互いに独立して行うことができる。
単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物の投与は、全身または局所であり得る。特定の実施形態では、投与は非経口である。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、注射、注入、静脈内（ＩＶ）投与、大腿内投与、または腫瘍内投与による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、デバイス、マトリックス、またはスカフォールドを用いて行われる。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、注射による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、カテーテルを介する。特定の実施形態では、ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の注射は、局所注射である。より具体的な実施形態では、局所注射は、固形腫瘍（例えば、肉腫）に直接注射される。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、シリンジによる注射による。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を対象に投与することは、ガイド送達を介する。特定の実施形態では、単離されたＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその医薬組成物を注射によって対象に投与することは、腹腔鏡検査、内視鏡検査、超音波、コンピュータ断層撮影、磁気共鳴、または放射線によって補助される。
５．１１．６．１．細胞の投与
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）は、個体に検出可能な治療上の利益をもたらす任意の量または数（例えば、有効量）で、個体に使用され（例えば、個体に投与される）、その個体は、ウイルス感染、癌細胞、もしくは腫瘍細胞（例えば、固形腫瘍もしくは血液癌）を有する（例えば、癌患者）。かかる細胞は、細胞の絶対数で、かかる個体に投与することができ、例えば、当該個体に、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、約、少なくとも約、または最大約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、もしくは１×１０１１個投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、細胞の相対数で、かかる個体に投与することができ、例えば、当該個体に、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、個体１ｋｇ当たり、約、少なくとも約、または最大約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、または１×１０１１個投与することができる。他の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、細胞の相対数で、かかる個体に投与することができ、例えば、当該個体に、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、個体１ｋｇ当たり、約、少なくとも約、または最大約１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、または５×１０８個投与することができる。本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、本明細書に記載の方法を使用して産生されたいくつかのＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞の数、任意選択的に、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外の胎盤灌流細胞および／またはナチュラルキラー細胞の数と、当該個体における腫瘍細胞の数（例えば、推定数）と、の間のおよその比率に従って、かかる個体に投与することができる。例えば、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、個体の腫瘍細胞の数に対して、約、少なくとも約または最大約１：１、１：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、もしくは１００：１の割合で、当該個体に投与することができる。かかる個体における腫瘍細胞の数は、例えば、個体由来の組織の試料（例えば、血液試料、生検など）における腫瘍細胞の数を数えることによって、推定することができる。特定の実施形態では、例えば、固形腫瘍に関して、当該計数は、腫瘍または複数の腫瘍のイメージングと組み合わせて行われ、およその腫瘍量を得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、任意選択的に、胎盤灌流細胞および／または本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞以外のナチュラルキラー細胞に加えて、免疫調節化合物またはサリドマイド（例えば、有効量の免疫調節化合物またはサリドマイド）が、個体に投与される。
特定の実施形態では、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法（例えば、個体における）、個体のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体を治療する方法、またはウイルス感染を有する個体を治療する方法、または癌を有する個体（例えば、腫瘍細胞、血液癌もしくは固形腫瘍を有する個体）を治療する方法は、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と、１つ以上の胎盤灌流液および／または胎盤灌流細胞との組み合わせに、腫瘍細胞を接近させるか、またはその組み合わせを、当該個体に投与することを含む。特定の実施形態では、本方法は、腫瘍細胞を免疫調節化合物もしくはサリドマイドに接近させるか、または免疫調節化合物もしくはサリドマイドを個体に投与することをさらに含む。
特定の実施形態では、例えば、個体のナチュラルキラー細胞の欠乏（例えば、ＮＫ細胞の数の欠乏、またはＮＫ細胞の癌、腫瘍もしくはウイルス感染細胞に対する反応性の欠乏）を有する個体の治療、または癌もしくはウイルス感染を有する個体の治療、または腫瘍細胞増殖の抑制は、単離された胎盤灌流細胞もしくは胎盤灌流液で補充された本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞と当該個体を接近させるか、または当該個体に投与することを含む。特定の実施形態では、１ミリリットル当たり、約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個もしくはそれ以上の本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞は、１ミリリットル当たり、約、もしくは少なくとも約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個もしくはそれ以上の単離された胎盤灌流細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の単離された胎盤灌流細胞で補充される。他のより具体的な実施形態では、約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個もしくはそれ以上の本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞は、約、または少なくとも約、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、もしくは１０００ｍＬの灌流液、または約１単位の灌流液で補充される。
別の特定の実施形態では、個体のナチュラルキラー細胞の欠乏症を有する個体の治療、癌を有する個体の治療、ウイルス感染症を有する個体の治療、または腫瘍細胞の増殖の抑制は、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞を、腫瘍細胞に接近させるか、あるいは個体に投与することを含み、当該細胞は、付着性胎盤細胞、例えば、付着性胎盤幹細胞または多能性細胞（例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋の組織培養プラスチックに付着性の胎盤細胞）で補充される。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞は、１ミリリットル当たり、約１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８個もしくはそれ以上の付着性胎盤幹細胞、または１×１０４、５×１０４、１×１０５、５×１０５、１×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、１×１０８、５×１０８、１×１０９、５×１０９、１×１０１０、５×１０１０、１×１０１１個もしくはそれ以上の付着性胎盤細胞（例えば、付着性胎盤幹細胞もしくは多能性細胞）で補充される。
別の特定の実施形態では、個体のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の治療、癌を有する個体の治療、ウイルス感染を有する個体の治療、または腫瘍細胞の増殖の抑制は、本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞と組み合わせて、免疫調節化合物もしくはサリドマイドを使用して行われ、当該細胞は、条件培地（例えば、ＣＤ３４－、ＣＤ１０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ２００＋の組織培養プラスチック付着性胎盤細胞によって条件付けられた培地）（例えば、灌流液の１単位当たり、または１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、もしくは１０１１個の本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞当たり、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．１、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍＬの幹細胞条件培養培地）で補充される。特定の実施形態では、組織培養プラスチック付着性胎盤細胞は、米国特許第７，４６８，２７６号および同第８，０５７，７８８号に記載されている多能性付着性胎盤細胞である（これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される）。別の特定の実施形態では、本方法は、免疫調節化合物またはサリドマイドを、腫瘍細胞に接近させるか、または個体に投与することをさらに含む。
別の特定の実施形態では、個体のナチュラルキラー細胞の欠乏を有する個体の治療、癌を有する個体の治療、ウイルス感染を有する個体の治療、または腫瘍細胞増殖の抑制であって、本明細書に記載の方法を使用して産生される当該ＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞が、胎盤灌流細胞で補充され、灌流細胞を、当該接近させる前の一定期間、インターロイキン－２（ＩＬ－２）に接近させる。特定の実施形態では、当該期間は、当該接近させる前の、約、少なくとも、または最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、もしくは４８時間である。
本明細書に記載の方法を使用して産生されるＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、または、任意選択的に、灌流液もしくは灌流細胞は、抗癌療法の過程で、ウイルス感染を有する個体、癌を有する個体、または腫瘍細胞を有する個体に、１回投与することができ、あるいは、治療中に、複数回（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、もしくは２３時間毎に、または１、２、３、４、５、６、もしくは７日毎に、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２４、３６週間、もしくはそれ以上毎に１回）投与することができる。細胞および免疫調節化合物もしくはサリドマイドが使用される実施形態では、免疫調節化合物もしくはサリドマイド、または細胞もしくは灌流液は、個体に、一緒に投与され得るか（例えば、同じ製剤で）、別個に、ほぼ同時に投与され得るか（例えば、別個の製剤で）、または別個に、投与され得る（例えば、異なる投薬スケジュールで、または１日の異なる時間に）。同様に、細胞および抗ウイルス化合物もしくは抗癌剤化合物が使用される実施形態では、抗ウイルス化合物もしくは抗癌剤化合物、または細胞もしくは灌流液は、個体に、一緒に投与され得るか（例えば、同じ製剤で）、別個に、ほぼ同時に投与され得るか（例えば、別個の製剤で）、または別個に、投与され得る（例えば、異なる投薬スケジュールで、または１日の異なる時間に）。本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞ならびに灌流または灌流細胞は、本明細書に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞、灌流または灌流細胞が過去に個体に投与されたかどうかに関係なく投与され得る。
６．キット
薬学的パックまたはキットが、本明細書で提供され、本明細書に記載の組成物（例えば、本明細書に記載の方法によって産生されるＮＫ細胞および／またはＩＬＣ３細胞（例えば、本明細書に記載の３段階法を使用して産生されるＮＫ細胞集団および／またはＩＬＣ３細胞集団）を含む組成物）のうちの１つ以上が充填された１つ以上の容器を含む。任意選択的に、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定される形式の通知が、かかる容器（複数可）に付随してもよく、通知は、ヒト投与のための製造、使用、または販売の機関の承認を反映する。
本明細書に包含されるキットは、本明細書に記載の方法（例えば、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法、および／または癌（例えば、血液癌）を治療する方法、および／またはウイルス感染を治療する方法に従って、使用することができる。一実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法によって産生されるＮＫ細胞および／もしくはＩＬＣ３細胞、またはその組成物を、１つ以上の容器中に含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の３段階法によって産生されるＮＫ細胞集団および／もしくはＩＬＣ３細胞集団、またはその組成物を含むキットが、本明細書で提供される。
７．１．実施例１：造血幹細胞または前駆細胞からナチュラルキラー細胞を産生する３段階法
ＣＤ３４＋細胞を、以下の培地（ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）で、示された日数培養し、細胞数、細胞生存率、ナチュラルキラー細胞の分化の特徴付け、および機能の評価のために、細胞のアリコートを採取する。
段階１の培地：９０％の幹細胞増殖培地（ＳＣＧＭ）（ＣｅｌｌＧｒｏ（登録商標））、１０％ヒト血清－ＡＢ、補充：２５ｎｇ／ｍＬまたは２５０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトトロンボポエチン（ＴＰＯ）、２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／ｍＬの組換えヒト幹細胞因子（ＳＣＦ）、２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－７、０．０５ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－６、０．２５ｎｇ／ｍＬまたは０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、０．０１ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、０．１０％のゲンタマイシン、および１～１０μｍのＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ－１（ＳＲ－１）または他の幹細胞動員剤。
段階２の培地：９０％ＳＣＧＭ、１０％のヒト血清－ＡＢ、補充：２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＦｌｔ３Ｌ、２７ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＳＣＦ、２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－１５、０．０５ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－６、０．２５ｎｇ／ｍＬまたは０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、０．０１ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、０．１０％のゲンタマイシン、および１～１０μｍのＳＲ１または他の幹細胞動員剤。
段階３の培地：９０％のＳＴＥＭＭＡＣＳ（商標）、１０％のヒト血清－ＡＢ、０．０２５ｍＭの２－メルカプトエタノール（５５ｍＭ）、補充：２２ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＳＣＦ、１０００Ｕ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－７、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－１５、０．０５ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－６、０．２５ｎｇ／ｍＬまたは０．１２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、０．０１ｎｇ／ｍＬまたは０．０２５ｎｇ／ｍＬの組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、および０．１０％のゲンタマイシン。
細胞を、０日目に、段階１の培地に、３×１０４細胞／ｍＬで播種し、細胞を、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５＋をカウントすることによって純度を試験し、７ＡＡＤ染色によって生存率を試験する。５日目に、細胞をカウントし、段階１の培地に、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。７日目に、細胞をカウントし、段階１の培地に、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
１０日目に、細胞をカウントし、段階２の培地に、１×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１２日目に、細胞をカウントし、段階２の培地に、３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１４日目に、細胞をカウントし、段階３の培地に播種する。細胞を、段階３の培地で、３５日目まで維持する。
代替的に、以下のプロトコルを、１４日目まで使用する：細胞を、０日目に、段階１の培地に、７．５×１０３細胞／ｍＬで播種し、細胞を、ＣＤ３４＋およびＣＤ４５＋をカウントすることによって純度を試験し、７ＡＡＤ染色によって生存率を試験する。７日目に、細胞をカウントし、段階１の培地に、３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。９日目に、細胞をカウントし、段階２の培地に、３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１２日目に、細胞をカウントし、段階２の培地に、３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。１４日目に、細胞をカウントし、段階２の培地に、３×１０５細胞／ｍＬの濃度に播種する。
継代時の細胞の播種は、培養液を新鮮な培地で希釈するか、または細胞の遠心分離および新鮮な培地の再懸濁／添加のいずれかによる。
回収する場合、細胞を、４００×ｇで７分間遠沈し、その後、ペレットを、等量のＰｌａｓｍａｌｙｔｅ Ａに懸濁する。懸濁液を、４００×ｇで７分間遠沈し、得られたペレットを、標的細胞濃度で、１０％のＨＳＡ（ｗ／ｖ）、６０％のＰｌａｓｍａｌｙｔｅ Ａ（ｖ／ｖ）に懸濁する。次いで、細胞を、７０μｍのメッシュを通して漉し、最終容器を充填し、細胞のアリコートを、生存率、細胞傷害性、純度、および細胞数について試験し、残りはパッケージする。
７．２．実施例２：ＮＫ細胞の増殖のための幹細胞動員剤の選択
インビトロでＮＫ細胞集団の増殖を促進する能力について、以下の化合物を調査した：
４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－６－（イソプロピルアミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール）（「ＣＲＬ１」）
Figure 2022511786000118
 ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール）（「ＣＲＬ２」）
Figure 2022511786000119
 ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール（「ＣＲＬ３」）
Figure 2022511786000120
 ２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－オン（「ＣＲＬ４」）
Figure 2022511786000121
 ３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミド（「ＣＲＬ５」）
Figure 2022511786000122
 ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール（「ＣＲＬ６」）
Figure 2022511786000123
 ５－（２－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－６－（ｓｅｃ－ブチルアミノ）ピリミジン－４－イル）ニコチノニトリル（「ＣＲＬ７」）
Figure 2022511786000124
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ８」）
Figure 2022511786000125
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ９」）
Figure 2022511786000126
 ３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミド（「ＣＲＬ１０」）
Figure 2022511786000127
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミン（「ＣＲＬ１１」）
Figure 2022511786000128
 ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリル（「ＣＲＬ１２」）
Figure 2022511786000129
 Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミン（「ＣＲＬ１３」）
Figure 2022511786000130
 ２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル（「ＣＲＬ１４」）
Figure 2022511786000131
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミン（「ＣＲＬ１５」）
Figure 2022511786000132
 ４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノール（「ＣＲＬ１６」）
Figure 2022511786000133
 ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル（「ＣＲＬ１７」）
Figure 2022511786000134
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ１８」）
Figure 2022511786000135
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ１９」）
Figure 2022511786000136
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ２０」）
Figure 2022511786000137
 Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン（「ＣＲＬ２１」）
Figure 2022511786000138
 ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル（「ＣＲＬ２２」）
Figure 2022511786000139
 。
７．３．実施例３：３段階ＮＫ細胞の特徴付け
方法
ＵＣＢ ＣＤ３４＋細胞を、実施例１に記載されるように、３段階ＮＫ細胞を産生するために、トロンボポエチン、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２を含むサイトカインの存在下で、３５日間培養した。多色フローサイトメトリーを使用して、三段階ＮＫ細胞の表現型特性を決定した。
生物学的試験のために、化合物が、培養に提供され、ＮＫ細胞の増殖および分化に対するそれらの効果を評価した。具体的には、ＮＫ培養プロトコルに従って、ＣＤ３４＋細胞（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のドナーを解凍し、インビトロで増殖した。培養の最初の１４日間、各ＣＲＬ化合物を、ＤＭＳＯに溶解し、１０μＭの濃度で培養物に添加した。ＳＲ１（１０μＭで）は、陽性対照の化合物として機能し、一方、いずれの化合物も含まないＤＭＳＯ単独は、陰性対照として機能した。３５日目の培養の終了時に、Ｋ５６２腫瘍細胞株に対する細胞の細胞増殖、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の分化および細胞傷害性を特徴付けた。化合物の数が多いため、ＣＲＬ１～１１およびＣＲＬ１２～２２の２つの実験で試験を行った。各実験には、同じドナーを使用した。陽性対照および陰性対照も、両方の実験に含まれた。
結果
細胞増殖データは、２２個の化合物のうち２０個が、１０μＭの濃度で、ＮＫの増殖を支持したことを示した。ＣＲＬ７およびＣＲＬ１３を除いて、残りの化合物は全て、３５日間にわたって２，０００～１５，０００倍のＮＫ増殖をもたらした（図１および図２）。全ての化合物の中で、ＣＲＬ１９、２０、および２２は、細胞増殖を最も良好に支持し、それらは、３５日目のＳＲ１と比較して、同様の増殖レベルを示した（図３）。培養１４日目のＣＤ３４細胞の増殖は、同様の傾向を示し、ほとんどの化合物がＣＤ３４細胞の増殖を支持し、ＣＲＬ１９、２０、および２２は、１４日目に最も高いＣＤ３４細胞の増殖を達成した（図４）。
化合物培養細胞を、Ｋ５６２腫瘍細胞に対して、１０：１のエフェクター対標的の割合で使用して、細胞傷害性アッセイを実行して（図５）、細胞機能を評価した。結果は、化合物と共に培養した細胞が、１０：１のＥ：Ｔ比で、３０～６０％のＫ５６２細胞を死滅させ、細胞がＮＫ機能を呈することが示された。両方のドナーについて、ＣＲＬ１７、１８、１９、および２１と共に培養された細胞は、ＳＲ１と共に培養した細胞と比較して、類似またはそれ以上の死滅活性を示した。
結論：
要約すると、本発明者らは、ＣＲＬ７およびＣＲＬ１３を除く全ての化合物がＰＮＫ－００７の増殖および分化を支持することを見出した。化合物による増殖は、３５日間にわたって２，０００～１５，０００倍の範囲であり、培養物は、ＮＫ細胞の７０％超を達成した。これらの化合物のうち、ＣＲＬ１９、２０、および２２は、ＰＮＫ－００７培養のＳＲ１と非常に類似した増殖、分化、および細胞傷害性の特性を示した。ＣＲＬ１７、１８、および２１は、ＳＲ１と比較して、わずかに少ない増殖をもたらしたが、ＣＤ５６＋／ＣＤ１１ａ＋亜集団を増加させ、細胞の死滅活性も増加させた。
７．４． 実施例４：３段階ＮＫ細胞のさらなる特徴付け
方法
細胞：凍結ＰＢＭＣは、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。末梢血由来ＮＫ（ＰＢ－ＮＫ）細胞は、ヒトＮＫ細胞濃縮キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造元の指示に従って使用して、健常ドナーの新鮮な血液から単離した。ＣＹＮＫ細胞を、臍帯血由来ＣＤ３４＋幹細胞から生成した（参照：Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ．２０１５）。簡潔には、ＣＤ３４＋細胞を、トロモボポエチン、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３リガンド、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、およびＩＬ－２を含むサイトカインの存在下で、３５日間培養した。ＰＢＮＫ細胞およびＣＹＮＫ細胞は、解析するまで凍結保存した。
磁気活性化細胞選別：ＰＮＫ細胞を、ＰＥマウス抗ヒトＣＤ１１ａ（ＢＤ）で染色し、ＣＤ１１ａ＋ＰＮＫ細胞を、製造元（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）の指示に従って、抗ＰＥのＭｉｃｒｏＢｅａｄｓを使用して濃縮した。
単一細胞ＲＮＡ配列決定：ＣＹＮＫ細胞を、ＰＢ－ＮＫと１：１の割合で組み合わせ、遺伝子発現を、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ ＣｈｒｏｍｉｕｍプラットフォームおよびＩｌｌｕｍｉｎａ配列決定を使用して、単一細胞レベルで分析した。バイオインフォマティクス分析は、１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｒａｎｇｅｒ分析パイプラインを利用した。
フローサイトメトリー：凍結保存した細胞を、３７℃の水浴中で迅速に解凍し、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％のｈｉＦＢＳ（熱非動化ウシ胎児血清、Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、続いて、ＰＢＳ中のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ Ｓｔａｉｎで洗浄した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％のＦＢＳ）で洗浄し、続いて、ブロッキング溶液（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ緩衝液、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプｋ対照、およびヒトＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（全てＢＤ由来））でインキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、氷上で２５分間、ＦＡＣＳ緩衝液中のフルオロフォア結合抗体とインキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、ＦｏｒｔｅｓｓａＸ２０フローサイトメーター（ＢＤ）で分析した。
ｑＲＴ－ＰＣＲ：ＲＮＡを、クイックＲＮＡミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造元の指示に従って使用して、細胞から単離した。標準的な反応では、ｃＤＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ逆転写酵素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、合成した。ＲＴ－ＰＣＲを、Ｔａｑｍａｎ遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して行った。ΔΔＣｔ法を使用して、ＧＡＰＤＨ（Ｈｓ０２７５８９９１）に対して、発現レベルを計算した。
結果
ＣＹＮＫ細胞は、インビトロで様々な腫瘍細胞株を効率的に死滅させるが、ＣＹＮＫ細胞が細胞死を誘導するのに使用する機構は、あまり理解されていないままである（参照）。ＮＫ細胞受容体の活性化において、ＣＹＮＫ細胞がそれらの機能的役割を行うために用いる細胞内シグナル伝達経路と分子機構とを解明するために、本発明者らは、ＣＹＮＫ細胞を末梢血ＮＫ細胞（ＰＢ－ＮＫ）と比較するための偏りのないアプローチとして、単一細胞ＲＮＡ配列決定（ｓｃＲＮＡ配列）を使用した（図６Ａ）。偏りのない転写クラスタリングは、ＣＹＮＫ細胞とＰＢ－ＮＫ細胞との間を区別する２つの異なる特徴を明らかにした（図６Ｂ）。表１および表２は、ＰＢ－ＮＫ細胞およびＣＹＮＫ細胞におけるクラスター当たりの上位５０個の上方制御遺伝子を、それぞれ列挙する。ＰＢ－ＮＫ細胞において発現がより高い遺伝子セットには、ＮＫ細胞の機能的役割に関連する遺伝子が含まれ、ＦＧＦＢＰ２、グランザイム（ＧＺＭＨ、ＧＺＭＭ）、ＣＸＣＲ４、ＫＬＲＦ１、ＫＬＦ２、ＩＦＮＧが挙げられる（表１）。
□ＦＧＦＢＰ２は、線維芽細胞増殖因子結合タンパク質をコードし、細胞傷害性リンパ球によって分泌されることが知られている。
□グランザイムは、ＮＫ細胞および細胞傷害性Ｔリンパ球（参照）の細胞傷害性顆粒に貯蔵されているセリンプロテアーゼの一群である。ＧｚｍＡおよびＧｚｍＢは、それらの細胞質への放出時に標的細胞死を誘導し、広範に研究されているが、ＧｚｍＨ、ＧｚｍＫおよびＧｚｍＭの機能的な役割についてはあまり知られていない。
□ＣＸＣＲ４は、骨髄へのＮＫ細胞ホーミングを調節する。
□ＫＬＲＦ１は、活性化誘導Ｃ型レクチン様免疫受容体であるＮＫｐ８０をコードし、活性化誘導Ｃ型レクチン（ＡＩＣＬ）への結合時に活性化され、ＮＫ細胞傷害性およびサイトカイン分泌を誘導する。
□転写因子ＫＬＦ２は、ＮＫ細胞の増殖と生存の両方を調節する。
□ＮＫ細胞由来ＩＦＮ－γ（ＩＦＮＧ遺伝子）は、活性化ＮＫ細胞から分泌される重要な免疫調節因子であり、樹状細胞およびＴ細胞応答を調節することによって、適応免疫応答を促進する。
表１．ＰＢ－ＮＫクラスター当たりの上位５０個の上方制御される遺伝子。
Figure 2022511786000140
Figure 2022511786000141
ＮＫ細胞の機能的役割に関連する因子をコードするＣＹＮＫクラスターの上位の示差的に発現する遺伝子としては、表面受容体および共受容体（ＣＤ９６、ＮＣＲ３、ＣＤ５９、ＫＬＲＣ１）、ＴＮＦＳＦ１０、免疫チェックポイント遺伝子（ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ４、ＨＡＶＣＲ２）、ＮＫ細胞受容体アダプター分子遺伝子（ＦＣＥＲ１ＧおよびＬＡＴ２）が挙げられる（表２）。
表２．ＣＹＮＫクラスター当たりの上位５０個の上方制御される遺伝子。
Figure 2022511786000142
Figure 2022511786000143
Figure 2022511786000144
細胞傷害性応答がＣＹＮＫ細胞内でどのように開始されるかをよりよく理解するために、ＮＫ細胞受容体およびアダプター分子に主に焦点を当てて、標的検出から細胞溶解応答に至る、十分に特徴付けられたタンパク質をコードする手動で選択された遺伝子の発現を、具体的に分析した（表３）。示差的遺伝子発現分析は、ＣＹＮＫ細胞において、２つの主要な細胞傷害性分子であるパーフォリン（ＰＲＦ１）およびグランザイムＢ（ＧＺＭＢ）の高い発現を示した。同様に、ＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０をコードする）を除いて、ＣＹＮＫ細胞とＰＢ－ＮＫ細胞との間で示差的に発現されたほとんどの受容体は、ＣＹＮＫ細胞でより高く発現された。選択されたＮＫ細胞のエフェクターおよび受容体の遺伝子の発現を、図６ＣのｔＳＮＥプロットで可視化する。ＮＫ細胞の細胞傷害性機構の成分をコードする遺伝子の発現の上昇は、広範囲の標的細胞に対するＣＹＮＫ細胞の高い細胞傷害活性と良好に相関する。
表３．ＮＫ細胞の細胞溶解機能を調節する因子をコードする上位の示差的に発現される遺伝子。クラスター全体にわたって、１細胞当たり１未満のカウントを有する遺伝子は除外された。
Figure 2022511786000145
Figure 2022511786000146
次に、ｓｃＲＮＡｓｅｑデータセットにおいて高度および／または示差的に発現される選択されたＮＫ細胞関連遺伝子に焦点を当てた定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）によって、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞の転写プロファイルを分析した（図７）。単離または培養後に解凍されたばかりのナイーブ細胞からＲＮＡを抽出した。ｑＲＴ－ＰＣＲは、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞の両方において、ＣＤ６９、ＫＬＲＫ１およびＫＬＲＢ１は、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨと比較して、高い発現を示したが、ＮＫＧ２ＤおよびＣＤ１６１／ＫＬＲＢ１をそれぞれコードするＫＬＲＫ１およびＫＬＲＢ１は、ＰＢ－ＮＫ細胞において、有意に高い発現を示した。先のｓｃＲＮＡ配列決定で見られたＫＬＲＦ１遺伝子によってコードされるＮＫｐ８０の有意な示差的発現（表３）は、ｑＲＴ－ＰＣＲによって確認された。同様に、ＫＬＲＤ１は、ＣＹＮＫ細胞と比較して、ＰＢ－ＮＫでより高い発現であった。合わせて、データは、ＣＹＮＫ細胞と比較して、ＰＢ－ＮＫ細胞上の抑制性キラー細胞レクチン様受容体（ＫＬＲＢ１、ＫＬＲＤ１、ＫＬＲＦ１）の発現は、より高い発現を示す。抑制性ＮＫＧ２Ａおよび活性化ＮＫＧ２Ｃをコードする２つのＣ型レクチン受容体遺伝子であるＫＬＲＣ１およびＫＬＲＣ２は、ＣＹＮＫ細胞において、より高度に発現された。天然の細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）のうち、ＮＣＲ２（ＮＫｐ４４をコードする）のみが、ＣＹＮＫ細胞において、高発現で示差的に発現されたが、ＰＢ－ＮＫ細胞では、ほとんど発現されなかった。２つの共活性化ＮＫ細胞受容体遺伝子ＣＤ２４４（２Ｂ４）およびＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）は、ＣＹＮＫ細胞と比較して、ＰＢ－ＮＫ細胞で、発現がわずかに高かった。典型的なリガンド活性化ＮＫ細胞受容体遺伝子とともに、抗体依存性細胞介在性細胞傷害に必要なＦｃ受容体であるＣＤ１６をコードするＦＣＧＲ３Ａの発現も分析した。ｓｃＲＮＡｓｅｑデータでは、ＦＣＧＲ３Ａは有意な示差的発現を示さなかったが、ｑＲＴ－ＰＣＲにでは、ＰＢ－ＮＫ細胞において、高度に発現され、ＣＹＮＫ細胞では、非常に低いレベルで発現された。２つの遺伝子ＴＮＦＲＳＦ１８およびＴＮＦＳＦ１０の発現は、ｓｃＲＮＡ配列決定で、高度に示差的に発現され、ＣＹＮＫクラスターで上昇しており、ｑＲＴ－ＰＣＲでも分析した。ＰＣＲデータから、ＧＩＴＲおよびＴＲＡＩＬをそれぞれコードしているこれらの遺伝子は、ＰＢ－ＮＫ細胞での低いレベル発現と比較して、ＣＹＮＫ細胞上で高い発現が確認された。
最後に、本発明者らは、フローサイトメトリーを使用した表面タンパク質の発現によって、ＰＢ－ＮＫ細胞と比較して、ＣＹＮＫ細胞を特徴付けた。ｓｃＲＮＡｓｅｑおよびｑＲＴ－ＰＣＲによる転写の特徴付けに基づいて、様々なＮＫ細胞受容体を標的とする抗体を選択した（表１～３、図６および図７）。ＮＫ細胞は、高レベルでＮＫ細胞マーカーであるＣＤ５６を発現し、それぞれ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および骨髄の細胞マーカーであるＣＤ３、ＣＤ１９、およびＣＤ１４の発現を欠く（図８）。ＰＢ－ＮＫ細胞の大部分は、低レベルでＣＤ５６を発現するが、ＰＢ－ＮＫ細胞の小サブセットは、ＣＹＮＫ細胞で見られるレベルでＣＤ５６を発現する（図９）。ＮＣＲ分析では、ＣＹＮＫ細胞においてＮＫｐ４４の高い発現が示された一方、ＰＢ－ＮＫ細胞ではＮＫｐ４４の発現が低レベルであり、転写分析と十分に対応していた（図７）。他方、ＮＫｐ８０は、ＰＢ－ＮＫ細胞で発現し、ＣＹＮＫ上ではほとんど発現しなかったことから、ＫＬＲＦ１発現の転写データも確認された（表１および図７）。ＣＤ１６は、ＣＹＮＫ細胞では事実上発現されなかったが、ＰＢ－ＮＫ細胞の大部分は、ＣＤ１６を高レベルで発現した。したがって、ＣＤ１６タンパク質の発現は、転写分析にも十分に対応する（表１および図７）。キラー細胞レクチン様受容体の発現は、ＣＹＮＫ細胞とＰＢ－ＮＫ細胞との間で同等であったが、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９４（ＮＫＧ２Ｃ）およびＮＫＧ２Ａについては、ＰＢ－ＮＫ細胞と比較して、ＣＹＮＫ細胞がより高い平均蛍光強度を示した。ＴＮＦＲＳＦ１８によってコードされるチェックポイント阻害剤分子であるＧＩＴＲは、ＰＢ－ＮＫ細胞では発現してなかったが、すべてのＣＹＮＫ細胞で高度に発現され、ｑＲＴ－ＰＣＲデータとよく相関している。
フローサイトメトリーのデータセット（図８および図９）を使用して、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞集団の表面マーカー発現の偏りのない分析を行った（図１０）。抗体で染色されたＣＹＮＫ細胞とＰＢＭＣ細胞を、フローサイトメトリーによる取得および分析のために混合した。ｔＳＮＥプロットから明らかなように、プロット上のＣＤ５６およびＣＤ３／ＣＤ１４／ＣＤ１９陽性細胞の局在を見ると、ＣＹＮＫ細胞およびＰＢ－ＮＫ細胞は、互いに、および他の末梢血細胞とは別個にクラスター化する。ＮＫｐ４４（ＣＤ３３６）およびＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）の高い発現は、ＧＩＴＲがＰＢＭＣサブセットの任意の細胞型で事実上発現しないため、ＣＹＮＫ細胞の同定を可能にする。他方で、ＰＢ－ＮＫ細胞は、ＣＹＮＫ細胞では発現しないＣＤ１６およびＮＫｐ８０を高度に発現する。まとめると、本発明者らは、高い信頼性でＣＹＮＫ細胞をＰＢ－ＮＫ細胞から区別することを可能にする、細胞表面マーカーを同定した。
均等物：
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって、範囲が限定されるものではない。実際、記載されたものに加えて、前述の説明および添付の図面から、当業者には、本発明の様々な修正が明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
本明細書で引用されるすべての参考文献は、あたかも各々の個々の刊行物、特許または特許出願が、具体的かつ個別に示されて、すべての目的のために、それらの全体が参照により本明細書に援用されるのと同程度に、すべての目的のために、それらの全体が、参照により本明細書に援用される。刊行物の引用は、出願日前のその開示についてであり、本発明が、先行発明のためにそのような刊行物に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。

Claims (95)

  1. ナチュラルキラー細胞を含む細胞集団を産生する方法であって、
    （ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生するステップと、
    （ｂ）前記第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生するステップと、
    （ｃ）前記第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）の各々を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生するステップと、を含み、
    前記第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－であるナチュラルキラー細胞を含み、前記ナチュラルキラー細胞の少なくとも８０％が生存可能である、方法。
  2. 前記第３の細胞集団が、ＣＤ９４＋またはＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記第３の細胞集団が、ＣＤ９４－またはＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記第３の細胞集団が、ＣＤ９４＋およびＣＤ１６＋であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１に記載の方法。
  5. 前記第３の細胞集団が、ＣＤ９４－およびＣＤ１６－であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項１に記載の方法。
  6. ナチュラルキラー細胞を含む細胞集団を産生する方法であって、
    （ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生するステップと、
    （ｂ）前記第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生するステップと、
    （ｃ）前記第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生するステップと、を含み、
    前記第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、方法。
  7. 前記第３の培地が、幹細胞因子（ＳＣＦ）を欠く、請求項６に記載の方法。
  8. 前記第３の培地が、ＬＭＷＨを欠く、請求項７に記載の方法。
  9. （ｄ）前記第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ＋細胞を単離して、第４の細胞集団を産生するさらなるステップを含み、
    前記第４の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ＋であるナチュラルキラー細胞を含む、請求項７に記載の方法。
  10. 前記ナチュラルキラー細胞が、パーフォリンおよびＥＯＭＥＳを発現する、請求項６～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記ナチュラルキラー細胞が、ＲＯＲγｔまたはＩＬ１Ｒ１のいずれも発現しない、請求項６～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. ＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を産生する方法であって、
    （ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生するステップと、
    （ｂ）前記第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生するステップと、
    （ｃ）前記第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含みＬＭＷＨを欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生するステップと、を含み、
    前記第３の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、方法。
  13. 前記第３の培地が、幹細胞動員剤を含む、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記第３の培地が、ＳＣＦを含む、請求項１２に記載の方法。
  15. 前記第３の培地が、幹細胞動員剤およびＳＣＦを含む、請求項１２に記載の方法。
  16. ＩＬＣ３細胞を含む細胞集団を産生する方法であって、
    （ａ）造血幹細胞または前駆細胞を、幹細胞動員剤およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含む第１の培地で培養して、第１の細胞集団を産生するステップと、
    （ｂ）前記第１の細胞集団を、幹細胞動員剤およびインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）を含みＴｐｏを欠く第２の培地で培養して、第２の細胞集団を産生するステップと、
    （ｃ）前記第２の細胞集団を、ＩＬ－２およびＩＬ－１５を含み、幹細胞動員剤およびＬＭＷＨの各々を欠く第３の培地で培養して、第３の細胞集団を産生するステップと、
    （ｄ）前記第３の細胞集団から、ＣＤ１１ａ－細胞を単離して、第４の細胞集団を産生するステップと、を含み、
    前記第４の細胞集団が、ＣＤ５６＋、ＣＤ３－、およびＣＤ１１ａ－であるＩＬＣ３細胞を含む、方法。
  17. 前記ＩＬＣ３細胞が、ＲＯＲγｔおよびＩＬ１Ｒ１を発現する、請求項１２～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記ＩＬＣ３細胞が、パーフォリンまたはＥＯＭＥＳのいずれも発現しない、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記第３の培地が、脱硫酸化グリコサミノグリカンを欠く、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、ヒト細胞である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、霊長類細胞である、請求項２０に記載の方法。
  23. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、イヌ細胞である、請求項２０に記載の方法。
  24. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、げっ歯類細胞である、請求項２０に記載の方法。
  25. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、ヒト、霊長類、イヌ、またはげっ歯類以外の哺乳類由来の細胞である、請求項２０に記載の方法。
  26. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、ＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、胎盤細胞である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記胎盤細胞が、ヒト胎盤灌流液から得られるか、またはそれから得ることができる、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記胎盤細胞が、ヒト胎盤灌流液から単離される有核細胞から得られるか、またはそれから得ることができる、請求項２７に記載の方法。
  30. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、臍帯血から得られるか、またはそれから得ることができる、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、胎児肝細胞である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、動員末梢血細胞である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記造血幹細胞または前駆細胞が、骨髄細胞である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記Ｔｐｏが、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第１の培地に存在する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記Ｔｐｏが、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第１の培地に存在する、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記Ｔｐｏが、約２５ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第１の培地に存在する、請求項３４に記載の方法。
  37. 前記ＩＬ－１５が、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の培地に存在する、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記ＩＬ－１５が、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の培地に存在する、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記ＩＬ－１５が、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第２の培地に存在する、請求項３７に記載の方法。
  40. 前記ＩＬ－２が、１０Ｕ／ｍＬ～１０，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地に存在し、前記ＩＬ－１５が、１ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地地に存在する、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記ＩＬ－２が、３００Ｕ／ｍＬ～３，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地に存在し、前記ＩＬ－１５が、１０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地に存在する、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記ＩＬ－２が、約１，０００Ｕ／ｍＬの濃度で前記第３の培地に存在し、前記ＩＬ－１５が、約２０ｎｇ／ｍＬの濃度で前記第３の培地に存在する、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５が、前記第１の培地、第２の培地、または第３の培地の未定義成分には含まれない、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記Ｔｐｏ、ＩＬ－２、およびＩＬ－１５が、血清には含まれない、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記幹細胞動員剤が、以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物であり、
    Figure 2022511786000147
     その薬学的に許容される塩を含み、式中、
    各
    Figure 2022511786000148
     は、独立して、単結合または二重結合を表し、
    ＲＪは、‐ＮＲａＲｂ、‐ＯＲｂ、および＝Ｏからなる群から選択され、ＲＪが＝Ｏである場合、ＧおよびＪを結合する
    Figure 2022511786000149
     は、単結合を表し、Ｇは、Ｎであり、Ｎは、ＲＧで置換され、それ以外はＧおよびＪを結合する
    Figure 2022511786000150
     は、二重結合を表し、Ｇは、Ｎであり、
    Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
    ＲＹおよびＲＺは、各々独立して、不在であるか、もしくは水素、ハロ、Ｃ１～６アルキル、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２からなる群から選択されるか、
    またはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
    Figure 2022511786000151
     から選択される環を形成し、前記環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）から選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され、ＲＹおよびＲＺが一緒に
    Figure 2022511786000152
     を形成する場合、ＲＪは、－ＯＲｂまたは＝Ｏであり、
    Ｒｄは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｍは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    Ｊは、Ｃであり、
    Ｘ、Ｙ、およびＺは、各々独立して、ＮまたはＣであり、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＧは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
    ＲＹおよびＲＺは、各々独立して、不在であるか、もしくは水素、Ｃ１～６アルキル、および－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）からなる群から選択されるか、
    またはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
    Figure 2022511786000153
     から選択される環を形成し、前記環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－ＯＨ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）から選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され、
    Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｍは、シアノであり、
    Ｘ、Ｙ、およびＺは、各々独立して、ＮまたはＣであり、任意の炭素原子の原子価は、必要に応じて、水素原子で満たされる、請求項４５に記載の方法。
  47. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換フェニル、置換フェニル、インドリル、および－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、メチル、置換ピリジニル、非置換ベンゾチオフェニル、および－ＮＨ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）からなる群から選択され、
    ＲＧは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
    ＲＹは、－ＮＨ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）であり、
    ＲＺは、不在であるか、もしくは水素であるか、
    またはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
    Figure 2022511786000154
     から選択される環を形成し、前記環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル、－Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）２、シアノ、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルから選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され、
    Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｍは、シアノであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨである、請求項４５に記載の方法。
  48. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換フェニル、置換フェニル、インドリル、および－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、
    ＲＫは、水素、メチル、置換ピリジニル、非置換ベンゾチオフェニル、および－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）からなる群から選択され、前記置換ピリジニル部分は、１つの置換基Ｑで置換され、Ｑは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    ＲＧは、－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
    ＲＹは、－ＮＨ（イソプロピル）または－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）であり、
    ＲＺは、不在であるか、もしくは水素であるか、
    またはＲＹおよびＲＺは、それらが結合している原子と一緒になって、一緒に連結されて、
    Figure 2022511786000155
     から選択される環を形成し、前記環は、任意選択的に、独立して、Ｃ１～Ｃ４アルキル、シアノ、非置換フェニル、および４－フルオロフェニルから選択される１つ、２つ、または３つの基で置換され、
    Ｒｄは、イソプロピルであり、
    Ｒｍは、シアノであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨである、請求項４５に記載の方法。
  49. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（Ｉ－Ａ）の構造を有し、
    Figure 2022511786000156
     その薬学的に許容される塩を含み、式中、
    ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり、
    Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＹおよびＺは、各々、Ｃであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨであり、
    Ｗは、ＯまたはＳであり、
    Ｒｅは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルである、請求項４５に記載の方法。
  50. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、前記置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ｒｅは、Ｃ１～Ｃ４アルキルである、請求項４９に記載の方法。
  51. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、‐ＯＨであり、
    ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルおよび置換ピリジニルからなる群から選択され、前記置換ピリジニルは、１つの置換基Ｑで置換され、Ｑは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    Ｒｅは、イソプロピルである、請求項４９に記載の方法。
  52. 前記化合物が、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－７－イソプロピル－２－（５－メチルピリジン－３－イル）チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
    ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリル、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
    ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピルチエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－メチルピリジン－３－イル）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－アミン、および
    ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）フロ［３，２－ｄ］ピリミジン－２－イル）ニコチノニトリルからなる群から選択されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項４９に記載の方法。
  53. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（Ｉ－Ｂ）の構造を有し、
    Figure 2022511786000157
     その薬学的に許容される塩を含み、式中、
    Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、－ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＧは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２からなる群から選択され、
    Ｒｆは、水素、Ｃ１～４アルキル、非置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、および１～５個のハロ原子で置換されたＣ６～Ｃ１０アリールからなる群から選択され、
    Ｕは、ＮまたはＣＲＵであり、
    Ｖは、ＳまたはＮＲＶであり、
    ＲＵは、水素、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    ＲＶは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    ＵがＣＲＵであり、かつＶがＮＲＶである場合、ＲＵは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    ＹおよびＺは、各々、Ｃであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨである、請求項４５に記載の方法。
  54. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、前記置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＧは、Ｃ１～４アルキルまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
    Ｒｆは、水素、非置換フェニル、および１～５個のハロ原子で置換されたフェニルからなる群から選択され、
    ＹおよびＺは、各々、Ｃであり、
    Ｘは、ＣＨである、請求項５３に記載の方法。
  55. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、－ＯＨであり、
    ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルおよび置換ピリジニルからなる群から選択され、前記置換ピリジニルは、１つの置換基Ｑで置換され、Ｑは、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    ＲＧは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
    Ｒｆは、水素、フェニル、およびフルオロフェニルからなる群から選択され、
    ＹおよびＺは、各々、Ｃであり、
    Ｘは、ＣＨである、請求項５３に記載の方法。
  56. 前記化合物が、
    ３－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－９Ｈ－プリン－６－イル）オキシ）プロパンアミド、
    ３－（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－９－イソプロピル－６－オキソ－６，９－ジヒドロ－１Ｈ－プリン－１－イル）プロパンアミド、
    ２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－５－カルボニトリル、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－メチル－６－フェニルチエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン、および
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミンからなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項５３に記載の方法。
  57. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（Ｉ－Ｃ）の構造を有し、
    Figure 2022511786000158
     その薬学的に許容される塩を含み、式中、
    ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり、
    Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、水素、非置換Ｃ１～６アルキル、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ａは、ＮまたはＣＨであり、
    Ｂは、ＮまたはＣＨであり、
    Ｒｇは、水素、Ｃ１～４アルキル、および－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２からなる群から選択され、
    ＹおよびＺは、各々、Ｃであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨである、請求項４５に記載の方法。
  58. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、前記置換ヘテロアリールは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ｒｇは、水素または－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２である、請求項５７に記載の方法。
  59. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、－ＮＨ（Ｃ１～４アルキル）、非置換ベンゾチオフェニル、および置換ピリジニルからなる群から選択され、前記置換ピリジニルは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ｒｇは、水素または－Ｎ（Ｃ１～４アルキル）２である、請求項５７に記載の方法。
  60. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（ＣＨ２ＣＨ２）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、‐ＯＨであり、
    ＲＫは、－ＮＨ（ｓｅｃ－ブチル）、非置換ベンゾチオヘニル、および置換ピリジニルからなる群から選択され、前記置換ピリジニルは、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、Ｃ１～４アルキル、ハロ、およびシアノからなる群から選択され、
    Ｒｇは、水素または－Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項５７に記載の方法。
  61. 前記化合物が、
    ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－８－（ジメチルアミノ）ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－２－（５－フルオロピリジン－３－イル）キナゾリン－４－アミン、
    ５－（４－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）キナゾリン－２－イル）ニコチノニトリル、および
    Ｎ４－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－Ｎ２－（ｓｅｃ－ブチル）キナゾリン－２，４－ジアミンからなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項５７に記載の方法。
  62. 前記式（Ｉ）の化合物が、式（Ｉ－Ｄ）の構造を有し、
    Figure 2022511786000159
     その薬学的に許容される塩を含み、式中、
    ＲＪは、－ＮＲａＲｂであり、
    Ｒａは、水素またはＣ１～Ｃ４アルキルであり、
    Ｒｂは、Ｒｃまたは－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルであり、
    Ｄは、ＮまたはＣＨであり、
    Ｙは、Ｎであり、
    Ｚは、Ｃであり、
    Ｘは、ＮまたはＣＨである、請求項４５に記載の方法。
  63. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲｃ部分は、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、非置換Ｃ６～１０アリール、置換Ｃ６～１０アリール、非置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）、ならびに置換５～１０員ヘテロアリール（Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択される１～４個の原子を有する）からなる群から選択され、置換として示されたＲＫ部分は、１つ以上の置換基Ｑで置換され、各Ｑは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～４アルキル、Ｃ１～４ハロアルキル、ハロ、シアノ、－Ｏ－（Ｃ１～４アルキル）、および－Ｏ－（Ｃ１～４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルである、請求項６２に記載の方法。
  64. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（Ｃ１～Ｃ４アルキル）－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つ以上の置換基Ｅで置換され、各Ｅは、独立して、－ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）、および－Ｏ（Ｃ１～Ｃ４ハロアルキル）からなる群から選択され、
    ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルであり、
    Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルである、請求項６２に記載の方法。
  65. Ｒａは、水素であり、
    Ｒｂは、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｒｃであり、
    Ｒｃは、置換フェニルおよび非置換インドリルからなる群から選択され、前記置換フェニルは、１つの置換基Ｅで置換され、Ｅは、‐ＯＨであり、
    ＲＫは、非置換ベンゾチオフェニルであり、
    Ｒｈは、水素またはＣ１～４アルキルである、請求項６２に記載の方法。
  66. 前記化合物が、
    Ｎ－（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）－６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－アミン、および
    ４－（２－（（６－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－３－イソプロピルイミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－８－イル）アミノ）エチル）フェノールからなる群から選択されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項６２に記載の方法。
  67. 前記化合物が、
    ５－（２－（（２－（１Ｈ－インドール－３－イル）エチル）アミノ）－６－（ｓｅｃ－ブチルアミノ）ピリミジン－４－イル）ニコチノニトリル、
    ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－６－（イソプロピルアミノ）ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、
    ４－（２－（（２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－７－イソプロピル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）アミノ）エチル）フェノール、および
    ２－（ベンゾ［ｂ］チオフェン－３－イル）－４－（（４－ヒドロキシフェネチル）アミノ）－７－イソプロピル－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－オンからなる群から選択されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項６５に記載の方法。
  68. 前記第１の培地が、ＬＭＷＨを含まない、請求項１～６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記第１の培地が、脱硫酸化グリコサミノグリカンを含まない、請求項１～６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記第１の培地が、Ｆｌｔ－３Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－７、Ｇ－ＣＳＦ、およびＧＭ－ＣＳＦの各々を含む、請求項１～６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法によって産生されるナチュラルキラー細胞の集団。
  72. 請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法によって産生されるＩＬＣ３細胞の集団。
  73. 腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、前記腫瘍細胞を、複数のナチュラルキラー細胞および／またはＩＬＣ３細胞と接触させることを含み、前記ナチュラルキラー細胞が、請求項７０のいずれか一項に記載の方法によって産生される、方法。
  74. 前記接触が、インビトロで行われる、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記接触が、インビボで行われる、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記腫瘍細胞が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記腫瘍細胞が、乳癌細胞、頭頸部癌細胞、または肉腫細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記腫瘍細胞が、原発性腺管癌細胞、白血病細胞、急性Ｔ細胞白血病細胞、慢性骨髄性リンパ腫（ＣＭＬ）細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、大腸癌細胞、大腸腺癌細胞、または網膜芽腫細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記腫瘍細胞が、固形腫瘍細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記腫瘍細胞が、肝臓腫瘍細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記腫瘍細胞が、肺腫瘍細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記腫瘍細胞が、膵腫瘍細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  83. 前記腫瘍細胞が、腎臓腫瘍細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  84. 前記腫瘍細胞が、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）細胞である、請求項７３～７５のいずれか一項に記載の方法。
  85. 前記ナチュラルキラー細胞が、前記接触または前記投与の前に凍結保存されている、請求項７３～８４のいずれか一項に記載の方法。
  86. 前記ナチュラルキラー細胞が、前記接触または前記投与の前に凍結保存されていない、請求項７３～８４のいずれか一項に記載の方法。
  87. ＦＧＦＢＰ２、ＧＺＭＨ、ＣＣＬ３Ｌ３、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＲ４、ＺＥＢ２、ＫＬＦ２、ＬＩＴＡＦ、ＲＯＲＡ、ＬＹＡＲ、ＣＮＯＴ１、ＩＦＮＧ、ＤＵＳＰ２、ＡＴＧ２Ａ、ＣＤ７、ＰＭＡＩＰ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＮＲ４Ａ２、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＰＩＫ３Ｒ１、ＫＬＲＦ１、ＳＮＨＧ９、ＭＴ２Ａ、ＲＧＳ２、ＣＨＤ１、ＤＵＳＰ１、ＥＭＬ４、ＺＦＰ３６、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＤＮＡＪＢ６、ＳＢＤＳ、ＩＲＦ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＰＹＬ２、ＰＮＲＣ１、ＩＳＣＡ１、ＪＵＮＢ、ＷＨＡＭＭ、ＲＩＣＴＯＲ、ＴＮＦＡＩＰ３、ＥＰＣ１、ＭＶＤ、ＣＬＫ１、ＡＲＬ４Ｃ、ＲＥＬ、ＫＭＴ２Ｅ、ＹＰＥＬ５、ＡＭＤ１、ＢＴＧ２、およびＩＤＳからなる群から選択される１つ以上のマーカーの発現であって、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも低い発現、ならびに／またはＮＤＦＩＰ２、ＬＩＮＣ００９９６、ＭＡＬ、ＣＣＬ１、ＭＢ、ＳＰＩＮＫ２、Ｃ１５ｏｒｆ４８、ＣＡＭＫ１、ＫＬＲＣ１、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＩＬ３２、ＣＡＰＧ、ＡＣ０９２５８０．４、Ｓ１００Ａ１１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＥＮＯ１、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＣＣＮＤ２、ＫＲＴ８１、ＭＲＰＳ６、ＡＮＸＡ２、ＰＴＧＥＲ２、ＧＬＯ１、ＨＡＶＣＲ２、ＰＹＣＡＲＤ、ＬＡＴ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＣＯＴＬ１、ＰＫＭ、ＴＡＬＤＯ１、ＣＤ９６、ＮＣＲ３、ＫＲＴ８６、ＳＴＭＮ１、ＬＴＢ、ＡＲＰＣ１Ｂ、ＡＲＰＣ５、ＦＫＢＰ１Ａ、ＴＩＭＰ１、ＧＺＭＫ、ＣＤ５９、ＰＧＫ１、ＲＧＳ１０、ＥＶＬ、ＲＡＣ２、ＬＧＡＬＳ１、ＩＴＧＢ７、ＴＵＢＢ、ＰＧＡＭ１、ＰＲＦ１、ＧＺＭＢ、ＩＬ２ＲＢ、ＫＬＲＣ２、およびＫＬＲＢ１からなる群から選択される１つ以上のマーカーの発現であって、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも高い発現、を特徴とするナチュラルキラー細胞。
  88. ＦＧＦＢＰ２、ＧＺＭＨ、ＣＣＬ３Ｌ３、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＲ４、ＺＥＢ２、ＫＬＦ２、ＬＩＴＡＦ、ＲＯＲＡ、ＬＹＡＲ、ＣＮＯＴ１、ＩＦＮＧ、ＤＵＳＰ２、ＡＴＧ２Ａ、ＣＤ７、ＰＭＡＩＰ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＮＲ４Ａ２、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＰＩＫ３Ｒ１、ＫＬＲＦ１、ＳＮＨＧ９、ＭＴ２Ａ、ＲＧＳ２、ＣＨＤ１、ＤＵＳＰ１、ＥＭＬ４、ＺＦＰ３６、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＤＮＡＪＢ６、ＳＢＤＳ、ＩＲＦ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＰＹＬ２、ＰＮＲＣ１、ＩＳＣＡ１、ＪＵＮＢ、ＷＨＡＭＭ、ＲＩＣＴＯＲ、ＴＮＦＡＩＰ３、ＥＰＣ１、ＭＶＤ、ＣＬＫ１、ＡＲＬ４Ｃ、ＲＥＬ、ＫＭＴ２Ｅ、ＹＰＥＬ５、ＡＭＤ１、ＢＴＧ２、およびＩＤＳからなる群から選択される１つ以上のマーカーの発現であって、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも低い発現、を特徴とする、請求項８７に記載のナチュラルキラー細胞。
  89. ＦＧＦＢＰ２、ＧＺＭＨ、ＣＣＬ３Ｌ３、ＧＺＭＭ、ＣＸＣＲ４、ＺＥＢ２、ＫＬＦ２、ＬＩＴＡＦ、ＲＯＲＡ、ＬＹＡＲ、ＣＮＯＴ１、ＩＦＮＧ、ＤＵＳＰ２、ＡＴＧ２Ａ、ＣＤ７、ＰＭＡＩＰ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＮＲ４Ａ２、ＺＦＰ３６Ｌ２、ＰＩＫ３Ｒ１、ＫＬＲＦ１、ＳＮＨＧ９、ＭＴ２Ａ、ＲＧＳ２、ＣＨＤ１、ＤＵＳＰ１、ＥＭＬ４、ＺＦＰ３６、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＤＮＡＪＢ６、ＳＢＤＳ、ＩＲＦ１、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＴＳＰＹＬ２、ＰＮＲＣ１、ＩＳＣＡ１、ＪＵＮＢ、ＷＨＡＭＭ、ＲＩＣＴＯＲ、ＴＮＦＡＩＰ３、ＥＰＣ１、ＭＶＤ、ＣＬＫ１、ＡＲＬ４Ｃ、ＲＥＬ、ＫＭＴ２Ｅ、ＹＰＥＬ５、ＡＭＤ１、ＢＴＧ２、およびＩＤＳからなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のマーカーの発現が、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも低い、請求項８７または請求項８８に記載のナチュラルキラー細胞。
  90. ＮＤＦＩＰ２、ＬＩＮＣ００９９６、ＭＡＬ、ＣＣＬ１、ＭＢ、ＳＰＩＮＫ２、Ｃ１５ｏｒｆ４８、ＣＡＭＫ１、ＫＬＲＣ１、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＩＬ３２、ＣＡＰＧ、ＡＣ０９２５８０．４、Ｓ１００Ａ１１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＥＮＯ１、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＣＣＮＤ２、ＫＲＴ８１、ＭＲＰＳ６、ＡＮＸＡ２、ＰＴＧＥＲ２、ＧＬＯ１、ＨＡＶＣＲ２、ＰＹＣＡＲＤ、ＬＡＴ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＣＯＴＬ１、ＰＫＭ、ＴＡＬＤＯ１、ＣＤ９６、ＮＣＲ３、ＫＲＴ８６、ＳＴＭＮ１、ＬＴＢ、ＡＲＰＣ１Ｂ、ＡＲＰＣ５、ＦＫＢＰ１Ａ、ＴＩＭＰ１、ＧＺＭＫ、ＣＤ５９、ＰＧＫ１、ＲＧＳ１０、ＥＶＬ、ＲＡＣ２、ＬＧＡＬＳ１、ＩＴＧＢ７、ＴＵＢＢ、ＰＧＡＭ１、ＰＲＦ１、ＧＺＭＢ、ＩＬ２ＲＢ、ＫＬＲＣ２、およびＫＬＲＢ１からなる群から選択される１つ以上のマーカーの発現であって、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも高い発現、を特徴とする、請求項８７に記載のナチュラルキラー細胞。
  91. ＮＤＦＩＰ２、ＬＩＮＣ００９９６、ＭＡＬ、ＣＣＬ１、ＭＢ、ＳＰＩＮＫ２、Ｃ１５ｏｒｆ４８、ＣＡＭＫ１、ＫＬＲＣ１、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＩＬ３２、ＣＡＰＧ、ＡＣ０９２５８０．４、Ｓ１００Ａ１１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＥＮＯ１、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＣＣＮＤ２、ＫＲＴ８１、ＭＲＰＳ６、ＡＮＸＡ２、ＰＴＧＥＲ２、ＧＬＯ１、ＨＡＶＣＲ２、ＰＹＣＡＲＤ、ＬＡＴ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＣＯＴＬ１、ＰＫＭ、ＴＡＬＤＯ１、ＣＤ９６、ＮＣＲ３、ＫＲＴ８６、ＳＴＭＮ１、ＬＴＢ、ＡＲＰＣ１Ｂ、ＡＲＰＣ５、ＦＫＢＰ１Ａ、ＴＩＭＰ１、ＧＺＭＫ、ＣＤ５９、ＰＧＫ１、ＲＧＳ１０、ＥＶＬ、ＲＡＣ２、ＬＧＡＬＳ１、ＩＴＧＢ７、ＴＵＢＢ、ＰＧＡＭ１、ＰＲＦ１、ＧＺＭＢ、ＩＬ２ＲＢ、ＫＬＲＣ２、およびＫＬＲＢ１からなる群から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のマーカーの発現が、末梢血ナチュラルキラー細胞における前記マーカーの発現よりも高い、請求項８７～９０のいずれか一項に記載のナチュラルキラー細胞。
  92. 前記ナチュラルキラー細胞が、造血幹細胞由来のナチュラルキラー細胞である、請求項８７～９１のいずれか一項に記載のナチュラルキラー細胞。
  93. 前記ナチュラルキラー細胞が、ＣＤ３４＋造血幹細胞由来のナチュラルキラー細胞である、請求項８７～９２のいずれか一項に記載のナチュラルキラー細胞。
  94. 前記造血幹細胞が、胎盤由来の造血幹細胞である、請求項９２または請求項９３に記載のナチュラルキラー細胞。
  95. 前記ナチュラルキラー細胞が、請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法によって調製される、請求項８７～９４のいずれか一項に記載のナチュラルキラー細胞。
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WO (1) WO2020113182A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023038037A1 (ja) * 2021-09-08 2023-03-16 株式会社ガイアバイオメディシン 細胞の処理方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220265712A1 (en) * 2019-06-14 2022-08-25 Celularity Inc. Populations of natural killer cells for treating cancers
US20220273716A1 (en) * 2019-07-25 2022-09-01 Celularity Inc. Populations of natural killer cells comprising a cd38 chimeric antigen receptor
WO2021155312A1 (en) * 2020-01-29 2021-08-05 Celularity Inc. Placental derived natural killer cells for treatment of coronavirus infections
WO2022144632A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for differentiating stem cells into nk cells
US20240082398A1 (en) * 2021-01-15 2024-03-14 City Of Hope Methods of preparing and expanding type i innate lymphoid cells and therapeutic uses thereof
WO2023278628A1 (en) * 2021-06-29 2023-01-05 Celularity Inc. Human placental hematopoietic stem cell derived natural killer cells in acute myeloid leukemia (aml) remission with minimal residual disease (mrd) or relapsed/refractory aml

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017066530A1 (en) * 2015-10-15 2017-04-20 Anthrogensis Corporation Natural killer cells and ilc3 cells and uses thereof

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4798824A (en) 1985-10-03 1989-01-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Perfusate for the preservation of organs
US5190556A (en) 1991-03-19 1993-03-02 O.B. Tech, Inc. Cord cutter sampler
US5552267A (en) 1992-04-03 1996-09-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Solution for prolonged organ preservation
US5372581A (en) 1993-07-21 1994-12-13 Minneapolis Children's Services Corporation Method and apparatus for placental blood collection
KR100915482B1 (ko) 2000-12-06 2009-09-03 하리리 로버트 제이 태반 줄기 세포의 회수 방법
EP2316919B1 (en) 2001-02-14 2015-10-07 Anthrogenesis Corporation Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
US20030187515A1 (en) 2002-03-26 2003-10-02 Hariri Robert J. Collagen biofabric and methods of preparing and using the collagen biofabric
US7498171B2 (en) 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
JP2005089352A (ja) * 2003-09-16 2005-04-07 Kissei Pharmaceut Co Ltd 新規なイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン誘導体、それを含有する医薬組成物およびそれらの用途
US7147626B2 (en) 2004-09-23 2006-12-12 Celgene Corporation Cord blood and placenta collection kit
EP1976977B1 (en) 2005-12-29 2015-07-08 Anthrogenesis Corporation Placental stem cell populations
CN101374941A (zh) 2005-12-29 2009-02-25 人类起源公司 采集和保存胎盘干细胞的改良组合物及其使用方法
WO2007128723A1 (en) * 2006-05-03 2007-11-15 Symrise Gmbh & Co. Kg Ah receptor antagonists
AU2008305516A1 (en) 2007-09-26 2009-04-02 Anthrogenesis Corporation Angiogenic cells from human placental perfusate
AU2013203936A1 (en) * 2008-10-30 2013-05-02 Novartis Ag Compounds that expand hematopoietic stem cells
CN103442568A (zh) * 2010-10-08 2013-12-11 Abbvie公司 呋喃并[3,2-d]嘧啶化合物
EA201791443A1 (ru) * 2014-12-31 2018-01-31 Антродженезис Корпорейшн Естественные киллерные клетки и их применения
TWI752155B (zh) * 2017-02-01 2022-01-11 德商菲尼克斯製藥股份有限公司 芳香烴受體(AhR)調節劑化合物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017066530A1 (en) * 2015-10-15 2017-04-20 Anthrogensis Corporation Natural killer cells and ilc3 cells and uses thereof

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023038037A1 (ja) * 2021-09-08 2023-03-16 株式会社ガイアバイオメディシン 細胞の処理方法

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