JP2022506974A - 藻類由来のヘムを食用の製品に組み込むための組成物及び方法 - Google Patents

藻類由来のヘムを食用の製品に組み込むための組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

材料及び完成食料製品を含む食用組成物に、ヘム及び赤色または赤に類似する色をもたらすための藻類由来の組成物、及び当該組成物を生成するためのプロセスを提示する。また、ヘム生成藻類を生育する方法、当該藻類から藻類調製物を生成する方法、及び藻類調製物を用いて、材料及び食料製品を作る方法も提示する。また、藻類から生成されたヘム及び別の栄養成分を含む食用組成物を含む組成物も提示する。【選択図】図６

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１９年６月２４日に出願された米国仮出願第６２／８６５，８００号、２０１９年５月２０日に出願された米国仮出願第６２／８５０，２２７号、及び２０１８年１１月８日に出願された米国仮出願第６２／７５７，５３４号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張するものであり、その各々の内容の全てが、参照により本明細書に組み込まれる。
［配列表］
本出願は、ＡＳＣＩＩ様式で電子的に提出された配列表を含み、その全てが参照により本明細書に組み込まれる。２０１９年１１月６日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、20498-202379_SL.txtと名付けられ、サイズは２０８キロバイトである。
工業化された畜産農業の出現により、食用動物肉の消費は増加し続けている。畜産農業には、かなり大きな土地利用と、かなりの量の淡水を必要とし、これらは、入手がますます困難になっている限られた資源である。
動物肉消費に関する持続可能性と倫理的な懸念に対処するため、食品業界は、肉製品のような味や触感があり、臭いがする植物性の代替物を積極的に開発しようとしてきた。しかし、現在の植物性の代替物の多くは、より大規模な食品市場や消費者市場に浸透することができていない。食物生態系の持続可能性を向上させるためには、現在食肉を好む消費者の興味を引く製品を開発することが必須である。
近年の進歩により、宿主生物から精製されたヘム含有タンパク質を用い、食肉のものに近い製品の風味及び香りのプロファイルを作る可能性が示されている。ヘム含有タンパク質由来のヘムは、肉製品に「肉のような」風味及び香りを与える役割を担っていると考えられている。しかし、利用可能なヘム含有タンパク質の供給源は高価であり、技術的に集中的であるため、その有用性は限られている。この製品は、経済性の低さに加え、遺伝子改変が行われているため、遺伝子改変によるものではない食品の消費を選択してきた多くの消費者の興味を引くことは少ない。また、栄養面での利点が増大し、カロリー摂取のバランスがとれた製品に向かう傾向がある。現在の肉代替物の多くは、消費者が望む味、食感、及び視覚的魅力を維持しつつ、これらの要求を完全に満足させるということができない。従って、本明細書に示すように、ヘム含有タンパク質を組み込んだ食料製品が求められている。
製品にヘムを組み込むという現在のアプローチに関する経済的懸念及び消費者の懸念の両方に対処するために、風味が豊かで栄養価の高い肉の代替物をもたらす組成物、及びそのような組成物を生成するためのプロセスを、本明細書に開示する。特に、ここに開示するのは、藻類から得たヘムを、別の栄養成分と共に組み込んだ組成物、及びそのような組成物を生成する方法である。藻類は、費用のかかる精製プロセスなしで、完成製品に組み込むことができる。
本開示は、ヘムを過剰発現または蓄積する改変藻類の組成物、及びそのような改変藻類を食料製品に使用する方法を含む。従って、本開示の一態様は、遺伝子改変を有する改変藻類を含み、このとき、遺伝子改変は、遺伝子改変のない藻類と比較して、藻類におけるヘムの蓄積をもたらす。いくつかの態様において、改変藻類は、クロロフィル生成が減少または欠如している。いくつかの態様において、藻類は、赤色または赤に類似する色を有する。いくつかの態様において、藻類は、グルコースを唯一の炭素源として成長する能力を有する。
遺伝子改変は、クロロフィル合成経路、プロトポルフィリノーゲンIX合成経路、またはヘム合成経路に対する遺伝子改変を含むのが好ましい。いくつかの態様において、遺伝子改変は、マグネシウムキラターゼの発現の欠乏に関わるものである。これに代えてまたは加えて、遺伝子改変は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上における改変を含む。これに代えてまたは加えて、遺伝子改変は、上流調節領域、下流調節領域、エクソン、イントロン、またはそれらの任意の組み合せにおける改変を含む。いくつかの態様において、遺伝子改変は、挿入、欠失、点突然変異、逆位、重複、フレームシフト、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの態様において、改変藻類は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する。これに代えてまたは加えて、改変藻類は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する。これに代えてまたは加えて、改変藻類は、１つ以上の脂肪酸の生成が減少している。
いくつかの態様において、改変藻類は、光非依存性プロトクロロフィリドオキシドレダクターゼの発現を低減または排除する遺伝子改変を更に含む。そのような態様において、遺伝子改変は、ＣｈｌＢ、ＣｈｌＬ、及びＣｈｌＮのうちの１つ以上における突然変異または欠失を含むことが企図される。いくつかの態様において、改変藻類は、フェロケレターゼの発現がアップレギュレートされ、これに加えてまたは代えて、プロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼの発現がアップレギュレートされている。必要に応じ、藻類は、組換え核酸または異種核酸を含む。いくつかの態様において、改変藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）を含む。これに代えてまたは加えて、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。
本開示のもう１つの態様は、藻類調製物を含有する食用組成物を含み、この藻類調製物は、上述のような改変藻類またはその一部を含む。いくつかの態様において、食用組成物は、改変藻類に由来するヘムを含有する。いくつかの態様において、藻類調製物は、藻類細胞を含む。いくつかの態様において、藻類調製物は、分画された藻類調製物である。いくつかの態様において、藻類調製物は、赤色または赤に類似する色である。
いくつかの態様において、食用組成物は、藻類調製物に由来する赤色または赤に類似する色を有する。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、肉の風味または肉に似た風味を食用組成物に与える。これに代えてまたは加えて、食用組成物は、藻類調製物に由来する肉の食感または肉に似た食感を有する。このような態様において、肉の食感または肉に似た食感は、牛肉の食感もしくは牛肉に似た食感、魚肉の食感もしくは魚肉に似た食感、鶏肉の食感もしくは鶏肉に似た食感、豚肉の食感もしくは豚肉に似た食感、または模造肉の食感を含むことが企図される。
いくつかの態様において、食用組成物は、牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、及び模造肉からなる群より選択される完成製品である。これに代えてまたは加えて、食用成分は、完全菜食主義者用、菜食主義者用、またはグルテン非含有である。これに代えてまたは加えて、食用組成物は、藻類調製物に由来する血液の見かけを有する。
これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する。いくつかの態様において、藻類調製物は、総タンパク質含有量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％を食用組成物にもたらす。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせを食用組成物にもたらす。必要に応じ、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせは、１日の推奨必要量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％である。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、食用組成物中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、食用組成物を含む完成製品中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、少なくとも約５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇのオメガ３脂肪酸を食用組成物にもたらす。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、脂肪酸含有量が減少している。
いくつかの態様において、食料製品は、タンパク質源、脂肪源、炭水化物、デンプン、増粘剤、ビタミン、ミネラル、またはそれらを任意に組み合わせたものと組み合わされる。そのような態様において、タンパク質源は、小麦由来組織状タンパク質、大豆由来組織状タンパク質、及びエンドウ豆由来組織状タンパク質、真菌タンパク質、及び藻類タンパク質からなる群より選択されることが好ましい。これに代えてまたは加えて、脂肪源は、精製したココナッツ油及びヒマワリ油の少なくとも一方を含む。いくつかの態様において、食用成分は、ジャガイモデンプン、メチルセルロース、水、及び調味料のうちの少なくとも１つを更に含有し、この調味料は、酵母エキス、ニンニク粉末、タマネギ粉末、及び塩のうちの少なくとも１つが選択される。
いくつかの態様において、食料製品は、ハンバーガ、ソーセージ、ケバブ、フィレ、魚肉代替物、ひき肉風製品、またはミートボールの材料である。いくつかの態様において、ハンバーガは、約５％の藻類調製物、約２０％の大豆由来組織状タンパク質、及び約２０％の精製ココナッツ油を含有する。必要に応じ、ハンバーガは、約３％のヒマワリ油、約２％のジャガイモデンプン、約１％のメチルセルロース、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する。これに代えてまたは加えて、ハンバーガは、約０．５％のコンニャクガム、約０．５％のキサンタンガム、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する。いくつかの態様において、魚肉代替物は、２０％の大豆由来組織状タンパク質、約５％の藻類調製物、約６５％の水、及び約１０％の調味料を含有する。いくつかの態様において、食用組成物は、動物性タンパク質を含有しない。
いくつかの態様において、藻類調製物は、プロトポルフィリノーゲンIXの合成または蓄積が増加した藻類を含む。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、暗条件で生育すると、赤色または赤に類似する色を呈する藻類を含む。いくつかの態様において、藻類調製物に含まれる藻類は、組換え藻類、または遺伝子改変藻類である。いくつかの態様において、藻類調製物は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）を含む。必要に応じ、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。
本開示のもう１つの態様は、食用組成物を生成する方法を含む。この方法は、（ａ）上述したような改変藻類を、当該改変藻類が赤色または赤に類似する色を呈する条件のもとで培養し、当該改変藻類がヘムを生成するステップと、（ｂ）培養した改変藻類を採取して藻類調製物を生成するステップと、（ｃ）藻類調製物を、少なくとも１つの食用成分と組み合わせて、食用組成物を生成するステップとを備える。いくつかの態様において、この条件は、発酵条件を含む。これに代えてまたは加えて、この条件は、改変藻類の成長のための還元炭素源として酢酸塩を含む。これに代えてまたは加えて、この条件は、改変藻類の成長のための還元炭素源として糖を含む。これに代えてまたは加えて、この条件は、暗い状態または光が制限された状態を含む。これに代えてまたは加えて、この条件は、鉄の補給を更に含む。
いくつかの態様において、この方法は、培養した改変藻類を分画して、藻類調製物を生成するステップを更に備える。いくつかの態様において、藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する。これに代えてまたは加えて、藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する。いくつかの態様において、改変藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）である。必要に応じ、改変藻類は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。
いくつかの態様において、食用組成物は、肉の風味または肉に似た風味、肉の食感または肉に似た食感、血液のような見かけ、及び肉の色または肉に似た色からなる群より選択される少なくとも１つの特徴を有し、この少なくとも１つの特徴は、藻類調製物に由来する。いくつかの態様において、この方法は、食用組成物を含む完成製品を製造するステップを更に備え、当該完成製品は、牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、または模造肉である。いくつかの態様において、食用組成物は、動物性タンパク質を含有しない。いくつかの態様において、藻類調製物は、デンプン、タンパク質、ＰＰIX、脂肪酸、及びクロロフィルのうちの１つ以上を除去するために分画される。
本開示のもう１つの態様は、含有するヘムが富化された改変藻類を生成する方法を含む。この方法は、（ａ）遺伝子改変を生成するプロセスを藻類株に適用して、第１の藻類集団を作り出すステップと、（ｂ）ヘムが富化され、任意でＰＰIXが富化された第２の藻類集団を、第１の藻類集団から選択するステップとを備える。いくつかの態様において、このプロセスは、ランダムなＵＶ突然変異誘発、ランダムな化学的突然変異誘発、組換え遺伝子操作、遺伝子編集、及び遺伝子サイレンシングのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの態様において、この方法は、発酵条件で第１の藻類集団を培養するステップを更に備える。いくつかの態様において、発酵条件は、唯一の炭素源として糖を有する培地を含む。このような態様において、糖は、グルコース、デキストロース、フルクトース、マルトース、ガラクトース、スクロース、及びリボースから選択されることが好ましい。これに代えてまたは加えて、発酵条件は、５００ルクス未満の照度を含む。
いくつかの態様において、第２の藻類集団を選択するステップは、赤色または赤に類似する色を有する藻類細胞を選別または識別するステップを含む。これに代えてまたは加えて、第２の藻類集団を選別するステップは、ＦＡＣＳによって行う。いくつかの態様において、第２の藻類集団は、発酵条件で成長する能力で選択される。
藻類におけるヘムの生成のための例示的な経路を示す図である。この例示的な経路は、野生型藻類によるクロロフィルの生成に用いることができるが、ヘムの生成にも用いることができる。 例示的な藻類成長培地の組成を示す図である。 例示的な藻類成長培地の選択プロセスを示す図である。 唯一の炭素源としてブドウ糖を用いた、完全な暗条件での藻類の成長を示す画像である。 ヘムを過剰発現する藻類の例示的な分画を示す画像であり、デンプン及びカロチノイド画分から分離される、タンパク質及びヘム富化バイオマスの分離を示す画像である。 赤い藻類からの、ＰＰIX及びヘムの両方または一方の抽出プロセスを示す画像である。 好気性発酵条件で生育した場合の、ヘム過剰生成株の例示的な増殖曲線（乾燥細胞重量）を示すグラフである。 グルコース含有培地におけるクラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）の乾燥細胞重量の増加を示すグラフである。 ヘキサン抽出の前後における赤い藻類調製物の分画成分を示すグラフである。 ＣＨＬＨ遺伝子に変異を有する野生型の緑藻類及び赤い藻類の配列アラインメントの一部を示す図である（上の配列（Seq_1）は、緑藻類のＣＨＬＨ遺伝子の部分的核酸配列（配列番号２７の残基１６２１～１６７９）、及び部分的アミノ酸配列（配列番号２８の残基４５１～４６０）であり、下の配列（Seq_2）は、赤い藻類のＣＨＬＨ遺伝子の部分的核酸配列（配列番号１２９の残基１６２１～１６８０）、及び部分的アミノ酸配列（配列番号１５２の残基４５１～４６０）であり、変異（星印）がある）。図示するように、野生型ＣＨＬＨ核酸配列（配列番号２７）は、位置１６７８にチアミンが挿入されることにより、プロリンの配列番号２８の野生型ＣＨＬＨアミノ酸配列が、アミノ酸位置５６０のセリンに変化する。 ０．０１ｇ、０．１ｇ、１．０ｇ、及び５．０ｇのヘム富化藻類で作り出したハンバーガを示す画像である。 ヘム富化藻類を含まない植物性ハンバーガ材料の材料混合物、ヘム富化藻類を添加した植物性ハンバーガ材料の材料混合物、またはヘム富化藻類を添加した植物性ハンバーガ材料をハンバーガの形にした調理前後の材料混合物を示す画像である。 ヘムが豊富な、肉不使用の「マグロ」の例を示す画像である。
本発明の組成物及び方法を説明する前に、本発明は、記載した特定の組成物、方法、及び実験条件に限定されるものではなく、組成物、方法、及び条件が変化し得るものであると理解すべきである。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用する用語は、特定の態様を説明することのみを目的とするものであって、限定を意図するものではないと理解すべきである。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしていない限り、複数のものへの言及を含む。従って、例えば、「方法」への言及は、本開示などを読むことによって当業者に明らかになる本明細書に記載の形態の１つ以上の方法及び１つ以上のステップの両方または一方を含む。更に、「含んでいる（including）」、「含む（includes）」、「有している（having）」、「有する（has）」、「伴う（with）」、またはそれらの変形が、詳細な説明及び請求項のいずれか一方または両方において使用される限り、そのような用語は、「含んでいる、備えている（comprising）」という用語と同様に包含的な意味を意図するものである。
「約」または「ほぼ」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容可能な誤差範囲内であることを意味し、その値を測定または決定する方法、例えば測定システムの限界に部分的に依存するものである。例えば、「約」は、与えられた値の慣例に従い、１標準偏差以内を意味する場合や、１標準偏差を上回る範囲内を意味する場合がある。特定の値が本明細書及び請求項に記載されている場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、当該特定の値に対する許容可能な誤差範囲を意味するものと見なすべきである。
本明細書中で使用する場合、１つ以上の遺伝子及び１つ以上の酵素の両方または一方の「欠乏」、「欠如」、または「減少」には、例えば、遺伝子配列の突然変異または欠失、遺伝子（ＲＮＡ及びタンパク質の両方または一方）からの発現の減少または欠如、及び遺伝子産物（ＲＮＡ及びタンパク質の両方または一方）の蓄積または安定性の欠如のうちの少なくとも１つが含まれる。
本明細書中で使用する場合、酵素または遺伝子が「過剰発現すること」、及び酵素または遺伝子の「過剰発現」には、例えば、遺伝子（ＲＮＡ及びタンパク質の両方または一方）からの発現の増加と、遺伝子産物（ＲＮＡ及びタンパク質の両方または一方）の蓄積または安定性の増加との少なくとも一方が含まれる。このような過剰発現には、調節領域及び遺伝子配列の両方または一方に対する改変、並びにコピー数、ゲノム位置、及び翻訳後修飾を含めることができる。
本明細書中で使用する場合、「改変藻類」という用語は、１つ以上の遺伝子改変を含む藻類を意味するために使用される。いくつかの場合、改変藻類は、組換え技術を介し、そのゲノム中に異種核酸を組み込むときには、組換え改変生物でもある。別の場合には、改変された藻類は、組換え改変生物ではない（例えば、紫外線や、化学的または放射線突然変異誘発によって改変された場合）。いくつかの場合、組換え改変生物ではない藻類を非ＧＭＯと呼称し、そのような藻類由来の成分を非ＧＭＯ成分と呼称することができる。
本明細書中で使用する場合、「遺伝子改変」という用語は、自然条件下では起こらない方法による、生物の遺伝物質の何らかの操作を意味するために使用される。遺伝子改変には、突然変異誘発（紫外線、Ｘ線、ガンマ線照射、化学曝露などによる）によって行われる改変を含めることができる。遺伝子改変には、遺伝子編集を含めることができる。いくつかの場合、組換え技術によって遺伝子改変を行うことができる。本明細書中で使用する場合、「組換え改変生物」は、組換え技術を介し、そのゲノムに異種核酸（例えば、組換え核酸）を組み込む生物を意味するために使用される。このような操作を行う方法は、当業者に公知であり、対象となる核酸配列を有した細胞を形質転換するためのベクタを使用する技術を含むが、これに限定されるものではない。その定義には、改変されたヌクレアーゼ、または「分子ハサミ」を用いて、生物のゲノム中のＤＮＡの挿入、欠失、または置換を行う種々の形態の遺伝子編集が含まれる。これらのヌクレアーゼは、ゲノム中の所望の位置に、部位特異的な二本鎖切断（ＤＳＢ）を作り出す。誘導された二本鎖切断は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同組換え（ＨＲ）を介して修復され、標的突然変異（即ち、編集）を生じる。
別段の定義がなされていない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野における当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。本発明を実施または試験する際には、本明細書に記載する方法及び材料と同様または均等の任意の方法及び材料を用いることができるが、好ましい方法及び材料を以下に記載する。
本明細書に提示するのは、藻類由来のヘム及びそれ以外の栄養成分を提供するための組成物及び方法である。藻類は、これらの水生生物を様々な色にする多くの化合物を生成することが知られている。これらの化合物には、藻類を緑色にするクロロフィル、藻類が黄色またはオレンジ色に見えるベータカロチン、藻類が赤色に見えるアスタキサンチン、または藻類を青色にするフィコシアニンのような種々の色素が含まれるが、これらに限定されない。前述のこれらの化合物の各々は、食料製品に添加されているが、ヘムを過剰生成する藻類を組み込んで、赤色と肉のような風味及び臭いとの両方または一方を与えた製品は、今日まで存在しない。
本明細書で提示するのは、ヘムを過剰生成する藻類を用いる株、方法、及び組成物である。いくつかの実施形態において、藻類株は、成長すると、赤色または赤に類似する色となる。本明細書で使用する場合、いくつかの実施形態において、赤に類似する色は、５９０ｎｍ～７５０ｎｍの波長を有する任意の色、または当該色の任意の合成色とすることができる。これに代えてまたは加えて、いくつかの実施形態において、赤に類似する色は、ＲＧＢ（ｒ．ｇ．ｂ）におけるｇ値またはｂ値が０と８０との間で、ｒ値が２５５と８０との間である任意の色として定義することができる。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成する藻類培養物から作られた調製物は、食物及びそれ以外の食料製品に組み込まれたときに、ピンク色または赤色を与える。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成する藻類培養物から作られた調製物は、食物及びそれ以外の食料製品に組み込まれたときに、「肉のような」風味、臭い、及び食感のうちの少なくとも１つを与える。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成する藻類培養物から作られた調製物は、所望の色、味、及び臭いのうちの少なくとも１つに加え、オメガ３脂肪酸、飽和脂肪、タンパク質、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの任意の組み合わせなど、１つ以上の付加栄養成分を与える。
［藻類の生成及び過剰生成］
本明細書に提示するのは、ヘムを過剰生成する藻類株、並びにヘムの生成または蓄積と、クロロフィル含有量よりも多い含有量のプロトポルフィリンIX（ＰＰIX）の生成との両方または一方を行い、食用組成物及び成分を生成するために使用可能な藻類株である。また、本明細書には、そのような株や、当該株から得られる成分及び組成物を生成する方法、並びに本明細書の方法と共に使用して当該組成物を生成する方法も提示する。このような株は、ヘム、ＰＰIX、及びクロロフィルを生成する生化学経路の１つ以上の段階を改変することによって作り出される。
理論に束縛されることなく、図１に示すように、ヘム経路は、クロロフィル生化学経路から分岐する生化学経路である。即ち、この経路は、ＧｌｕｔＲＮＡレダクターゼとＧＳＡアミノトランスフェラーゼとによって５-アミノレブリン酸（ＡＬＡ）に変換されるグルタミン酸ｔＲＮＡから始まる。次に、ＡＬＡが、ＡＬＡデヒドラーゼによってポルフォビリノーゲンに変換される。次に、ポルフォビリノーゲンが、ポフォビリノーゲンデアミナーゼによって、ヒドロキシメチルビランに変換される。次に、ヒドロキシメチルビランが、ＵＰＧIIIシンターゼによってウロポルフィリノーゲンIIIに変換される。次に、ウロポルフィリノーゲンIIIが、ＵＰＧIIIデカルボキシラーゼによってコプロフィリノーゲンに変換される。次に、コプロフィリノーゲンが、ＣＰＧオキシダーゼによってプロトポルフィリノーゲンIXに変換される。次に、プロトポルフィリノーゲンIXが、ＰＰＧオキシダーゼによってプロトポルフィリンIXに変換される。プロトポルフィリンIXは、クロロフィル生成経路またはヘムＢに送ることができる。最後に、プロトポルフィリンIXが、鉄をプロトポルフィリンIXに結合させる酵素フェロキラターゼによって、ヘムＢに変換される。
クロロフィルへの代謝フラックスを減少させることにより、ヘムＢへの代謝フラックスを増加させることが可能である。本明細書のいくつかの実施形態において、生成方法及び当該生成方法により生成された組成物に用いる藻類株は、クロロフィルへの代謝フラックスが減少し、ヘムＢ（本明細書では「ヘム」ともいう）への代謝フラックスが増加する。いくつかの実施形態において、藻類株は、クロロフィル及びカロチノイドの合成が減少し、ヘムの合成または蓄積が増加しているものである。いくつかの実施形態において、藻類株は、クロロフィルの量が欠乏または減少している。いくつかの実施形態において、藻類株は、赤色または赤に類似する色である。
いくつかの実施形態において、藻類株は、クロロフィル生合成経路における１つ以上の酵素が欠乏している。このような欠乏には、遺伝子欠失、突然変異、及びそれ以外で酵素の発現不足または酵素の機能性の欠乏をもたらす変化が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、藻類株は、プロトポルフィリンIXをクロロフィルに変換する最初の段階であるマグネシウムキラターゼが欠乏している。いくつかの実施形態において、藻類株は、プロトクロロフィリドをクロロフィリドに変換する光依存性プロトクロロフィリドが欠乏している。いくつかの実施形態において、藻類株は、暗所においてプロトクロロフィリドをクロロフィリドに変換する光非依存性プロトクロロフィリドが欠乏している。いくつかの実施形態において、藻類株は、葉緑体ゲノムにコードされ、プロトクロロフィリドをクロロフィリドに変換する光非依存性プロトクロロフィリドオキシドレダクターゼ（ＬＩＰＯＲ）のサブユニットであるＣｈｌＢ、ＣｈｌＬ、及びＣｈｌＮ遺伝子産物のうちの１つ以上が欠乏している。この酵素は、発現すると、クラミドモナス属などの藻類にクロロフィルを生成させることが可能であり、例え藻類に照明をしなくても緑色を維持することができる。これらの遺伝子のうちの１つ以上を奪うと、藻類株は、暗い生育条件下で黄色を呈する。
いくつかの実施形態において、藻類株は、マグネシウムキラターゼ、マグネシウムプロトポルフィリノーゲンIX、プロトクロロフィリド、クロロフィリド、及びクロロフィルのうちの１つ以上が欠如または減少している。
いくつかの実施形態において、藻類株は、マグネシウムキラターゼサブユニットＣＨＬＤ、ＣＨＬＨ、及びＣＨＬＩのうちの１つ以上が欠乏している。これらのサブユニットは、ＣＨＬＤサブユニットに対応するＣＨＬＤ１（またはＣＨｌＤ１と表記）、ＣＨＬＨサブユニットに対応するＣＨＬＨ１（またはＣＨｌＨ１と表記）、２つの遺伝子ＣＨＬＩ１及びＣＨＬＩ２によってコードされ、ＣＨＬＩサブユニットに対応するＣＨＬＩ１及びＣＨＬＩ２（またはＣＨｌＩ１及びＣＨｌＩ２と表記）というように遺伝子名でも呼称される。
いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、マグネシウムキラターゼの核にコードされるサブユニットの１つ以上、例えばサブユニットＣＨＬＤ、ＣＨＬＨ、及びＣＨＬＩの遺伝子によってコードされるサブユニットの１つ以上が欠乏している。これらのサブユニットの１つ以上の欠乏により、クロロフィルの発現が低減または排除される。いくつかの実施形態において、サブユニットをコードする遺伝子は、コドンを終止コドンに変化させる１つ以上の点突然変異などにより改変することが可能であり、その結果、切り詰めたコード領域が得られる。いくつかの実施形態において、サブユニットをコードする遺伝子は、サブユニットをコードする遺伝子の一部または全てを除去する欠失によって改変することができる。いくつかの実施形態において、サブユニットをコードする遺伝子は、コード領域における１つ以上の塩基の欠失または挿入によって引き起こされるようなフレームシフト突然変異によって改変することが可能であり、その結果、非機能性の切り詰められたタンパク質、非機能性のタンパク質、または切り詰められたタンパク質が得られる。いくつかの実施形態において、サブユニットをコードする遺伝子は、タンパク質の内部またはＮもしくはＣ末端に、１つ以上のアミノ酸を付加することで、非機能性サブユニットを作り出したり、サブユニットまたは酵素の活性または安定性を低下させたりするなど、非機能性タンパク質を作り出すコード領域への挿入によって改変することが可能である。
いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類は、イントロン、エクソン、調節領域、または全遺伝子配列を含むＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、またはＣＨＬＨ１をコードするヌクレオチド配列に、少なくとも１つの改変（例えば、配列番号２３，２５，２７，１５３における改変）を有する。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、またはＣＨＬＨ１のアミノ酸配列に、少なくとも１つの改変（例えば、配列番号２４，２６，２８，１５１における改変）を有する。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、またはＣＨＬＨ１の一部をコードするエクソンに、少なくとも１つの改変（点突然変異、欠失、または挿入）を含む。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、配列番号４７～５８，７２～８０，９１～１０２，１３２～１４１のうちのいずれかにおける改変など、そのようなエクソンの野生型配列に対する少なくとも１つの改変を含む。
いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、５’非翻訳領域または３’非翻訳領域など、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、またはＣＨＬＨ１の非翻訳領域に、少なくとも１つの改変（点突然変異、欠失、または挿入）を含む。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、配列番号４５，４６，７０，７１，８９，９０，１３０，１３１のいずれかにおける改変など、そのような非翻訳領域の野生型配列に対する少なくとも１つの改変を含む。
いくつかの実施形態において、Ｍｇキラターゼの１つ以上のサブユニットの発現の調節は、クロロフィルの量が減少した株を作り出すように変更される。ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上の調節領域は、挿入、欠失、または１つ以上の点突然変異などによって、発現が減少するように改変することができる。このような変更により、例えば、転写因子結合部位、エンハンサ部位、ＲＮＡポリメラーゼ相互作用及び転写開始部位を、サブユニット遺伝子の転写を低減または排除する様式で改変してもよい。
いくつかの実施形態において、１つ以上のサブユニットの発現は、スプライシングの供与部位または受容部位を除去または変更するか、またはそれ以外で遺伝子スプライシングの効率または正確性を変更するような、突然変異、挿入、または欠失など、サブユニットの遺伝子によりイントロンのスプライシングを改変することによって変更される。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、またはＣＨＬＨ１のイントロンに、少なくとも１つの改変（点突然変異、欠失、または挿入）を含む。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類株は、配列番号５９～６９，８１～８８，１０３～１１３，１４２～１５０のいずれかにおける改変など、そのようなイントロンの野生型配列に対する少なくとも１つの改変を含む。
いくつかの実施形態において、藻類株は、経路のバランスがヘム生成に有利になるように、１つ以上の酵素を過剰発現する。いくつかの実施形態において、藻類株は、グルタミル-ｔＲＮＡレダクターゼ、グルタミル-１-セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼ、ＡＬＡデヒドロゲナーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ、ＵＰＧIIIシンターゼ、ＵＰＧIIIデカルボキシラーゼ、ＣＰＧオキシダーゼ、ＰＰＧオキシダーゼ、及びフェロキラターゼのうちの１つ以上を過剰発現する。いくつかの実施形態において、藻類株は、ヘムＢ合成の律速前駆物質であるＡＬＡを生成する能力が改善される。いくつかの実施形態において、藻類株は、プロトポルフィリンIXのヘムＢへの変換を担う酵素である機能的なフェロキラターゼ遺伝子を生成する能力が改善されている。いくつかの実施形態において、藻類株は、ＵＰＧIIIシンターゼ、ＵＰＧIIIデカルボキシラーゼ、ＣＰＧオキシダーゼ、またはＰＰＧオキシダーゼを生成する能力が改善されている。いくつかの実施形態において、藻類株は、野生型株と比較して、ヘム、ヘム含有タンパク質、プロトポルフィリノーゲンIX、ビリベルジンIX、フォトクロモビリン、及びフェロキラターゼのうちの１つ以上の量を増加させる。
いくつかの実施形態において、藻類株は、カロチノイドまたはカロチノイドの前駆物質を生成する。理論に束縛されることなく、カロチノイドは、色を付与し、植物性代替物の視覚的外観に影響を与えることができる。例示的なカロチノイドには、ガンマカロチン、ベータカロチン、ベータクリプトキサンチン、ゼアキサンチン、アンテラキサンチン、ルテイン、プロリコピン、及びリコピンが含まれが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、藻類株は、カロチノイドまたはカロチノイドの前駆物質が欠乏している。カロチノイド生合成の欠乏は、カロチノイド生合成に影響する突然変異、例えば、フィトエンシンターゼ遺伝子における突然変異などにより、発生する可能性がある。
本明細書のいくつかの実施形態において、本明細書の組成物及び方法に使用する藻類は、非ＧＭＯであること、異種核酸を含有しないこと、及び組換え技術を使用して作成されないことのうちの少なくとも１つに該当する。いくつかの実施形態において、本明細書の藻類は、その色、ヘム含有量、ヘム合成の速度、もしくはヘムの蓄積、またはプロトポルフィリンIX含有量、プロトポルフィリンIX合成の速度、もしくはプロトポルフィリンIXの蓄積に基づいて選択される。いくつかの実施形態において、藻類は、クロロフィルのレベルが低下され、これに加えてまたは代えて、クロロフィルのレベルが、ヘム及びプロトポルフィリンIXの両方または一方のレベルよりも低い。いくつかの実施形態において、本明細書の組成物及び方法に使用する藻類は、ヘム生合成または蓄積に関与する１つ以上の遺伝子についての異種遺伝子を含んでおらず、例えば、藻類は、ヘム生合成、ヘム蓄積、プロトポルフィリンIX生合成、またはプロトポルフィリンIX蓄積に関与する細菌、真菌、植物、または動物由来の遺伝子または核酸を含まない。
いくつかの実施形態において、藻類は、ヘムの合成もしくは蓄積の増加、クロロフィルの合成もしくは蓄積の減少、またはそれらの組み合わせに寄与する１つ以上の遺伝子の発現において改変される。このような改変は、紫外線、放射線、または化学物質への曝露などによる突然変異誘発によって作り出すことができる。
いくつかの実施形態において、改変は、例えばＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳヌクレアーゼによるなどして、１つ以上の成分の発現を変化させるために正確に操作されたヌクレアーゼターゲティングのような遺伝子編集を介して生じさせることができる。このようなヌクレアーゼを用い、１つ以上のヌクレオチドまたはヌクレオチド領域の挿入、欠失、突然変異、置換を生じさせ、経路中の１つ以上の経路酵素の発現を改変して、クロロフィルの減少と、ヘムの生成の増加との両方または一方を行うことができる。改変の生成に続いて、ヌクレアーゼ及び関連するガイド核酸が除去されるように、藻類株の生育及び交配の両方または一方を行うことが可能であり、残っている藻類株は、ヌクレアーゼ及び関連する編集システムを保持しない。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳヌクレアーゼなどのヌクレアーゼを用い、クロロフィルの発現及び蓄積の両方または一方が低減または抑止されるように、クロロフィル経路の要素に対する改変を行うことができる。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳヌクレアーゼなどのヌクレアーゼを用い、ヘムの発現及び蓄積の両方または一方が増加するように、クロロフィル経路の要素に対する改変を行うことができる。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳヌクレアーゼなどのヌクレアーゼを用い、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上において改変を行うことにより、ヘム富化藻類株を得る。このような改変は、１つ以上の点突然変異、挿入、欠失、またはそれらの組み合わせを含むように、配列番号４５～１１３，１３０～１５０，１５３のうちのいずれか１つ以上に改変を加えたガイドＲＮＡを設計することによって行うことができる。
本明細書に記載する遺伝子編集に使用可能な改変ヌクレアーゼには、例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクチベータ様エフェクタ系ヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム、及びＡＲＣＵＳなど、いくつかのファミリがあるが、これらに限定されない。なお、改変ヌクレアーゼを利用する公知のいずれかの遺伝子編集システムを、本明細書に記載する方法において使用してもよいと理解すべきである。従って、いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成する藻類株は、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム（例えば、ＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳ９）などの技術を用いることにより、またはジンクフィンガヌクレアーゼを用いることにより、生成することができる。
ＣＲＩＳＰＲ（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）は、塩基配列の、複数の、短い、直接反復を含むＤＮＡ遺伝子座の略称である。原核生物のＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムは、真核生物において使用するための遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、強化、または変更）としての使用に適合されている（例えば、Cong, Science, 15:339(6121):819-823 (2013)、及びJinek, et al., Science, 337(6096):816-21 (2012)参照）。Ｃａｓ遺伝子及び特別に設計されたＣＲＩＳＰＲを含む要素を細胞にトランスフェクトすることにより、核酸配列を任意の所望の位置で切断し改変することができる。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムを用いるゲノム編集に使用するための組成物を調製する方法は、米国公開第２０１６／０３４０６６１号、米国公開第２０１６／０３４０６６２号、米国公開第２０１６／０３５４４８７号、米国公開第２０１６／０３５５７９６号、米国公開第２０１６／０３５５７９７号、及び国際公開第２０１４／０１８４２３号に詳細に記載されており、それらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる。
ジンクフィンガヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ジンクフィンガＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合することにより生成される人工制限酵素である。ジンクフィンガドメインは、所望の特定のＤＮＡ配列をターゲットとするように操作することが可能であり、これにより、ジンクフィンガヌクレアーゼは、複雑なゲノム内の特定の配列をターゲットとすることができる。内因性のＤＮＡ修復機構を利用することにより、これらの試薬を使用して、高等生物のゲノムを正確に改変することができる。最も一般的な切断ドメインは、ＩＩＳ型酵素Ｆｏｋ１である。Ｆｏｋ１は、一方の鎖の認識部位から９ヌクレオチド、他方の鎖の認識部位から１３ヌクレオチドで、ＤＮＡの二本鎖切断を引き起こす。例えば、米国特許第５３５６８０２号、第５４３６１５０号、第５４８７９９４号、並びにLi et al. Proc., Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992):4275-4279、Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2764-2768 (1993)、Kim et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:883-887 (1994a)、Kim et al. J. Biol. Chem. 269:31,978-31,982 (1994b)を参照することとし、それらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる。これらの酵素（または酵素的に機能するその断片）の１つ以上を、切断ドメインの供給源として使用することができる。
いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類は、株を遺伝子改変して、クロロフィル経路及びヘム経路の両方または一方を改変することによって作り出される。内因性遺伝子（例えば、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上）の発現の妨害、阻害、またはダウンレギュレートを行うものなど、組換え核酸の導入は、経路を通るフラックスを変化させることができる。このような遺伝子改変には、調節領域における組換えＤＮＡの組込み、及び内因性遺伝子に関するエクソンまたはイントロンに加え、遺伝子サイレンシング（例えば、１つ以上の内因性遺伝子の発現をダウンレギュレートまたはサイレンシングするためのアンチセンスまたはｓｉＲＮＡの導入）を含めることができる。いくつかの実施形態において、経路内の遺伝子の発現は、ヘムに変換可能なＰＰIXを、経路がより多く生成するようにアップレギュレートすることが可能であり、または、経路内の遺伝子の発現により、藻類においてより多くのヘムを生成するように、フェロキラターゼの発現または活性をアップレギュレートする。フェロキラターゼの改変のための核酸は、配列番号１１４，１１５のものなどの調節領域、配列番号１１６～１２２のものなどのエクソン、及び配列番号１２３～１２８のものなどのイントロンを含むことができる。いくつかの実施形態において、ヘム富化藻類は、フェロキラターゼのコピー数の増加、またはフェロキラターゼを過剰発現する構成体（例えば、核酸配列番号７、及びタンパク質配列番号８によってもたらされるもの）の具備を含むことができる。いくつかの実施形態において、遺伝子改変は、葉緑体における１つ以上の遺伝子に対する改変または当該遺伝子の発現を含む。いくつかの実施形態において、核にコードされた遺伝子、またはそのような遺伝子の発現に改変がなされる。
［組成物及び方法に使用する藻類の属及び種］
ヘム及びヘム含有組成物を生成するために本明細書に提示する組成物及び方法では、ヘム生合成経路を有した藻類株が用いられる。いくつかの実施形態において、ヘムを得るための藻類株は、緑藻類（緑藻）である。いくつかの実施形態において、緑藻は、クラミドモナス属（Chlamydomonas）、ドナリエラ（Dunaliella）、アカヒゲムシ（Haematococcus）、クロレラ（Chlorella）、及びイカダモ（Scenedesmaceae）からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、クラミドモナス属（Chlamydomonas）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。種々の実施形態において、緑藻は、クロロフィシアン（Chlorophycean）、クラミドモナス属（Chlamydomonas）、コナミドリムシ（C. reinhardtii）、クラミドモナス１３７ｃ株（C. reinhardtii 137c）、またはｐｓｂＡ欠乏クラミドモナス（C. reinhardtii）株とすることができる。いくつかの実施形態において、選択された宿主は、Rasala and Mayfield, Bioeng Bugs. (2011) 2(1):50-4、Rasala, et al., Plant Biotechnol J. (2011) May 2, PMID 21535358、Coragliotti, et al., Mol Biotechnol. (2011) 48(1):60-75、Specht, et al., Biotechnol Lett. (2010) 32(10):1373-83、Rasala, et al., Plant Biotechnol J. (2010) 8(6):719-33、Mulo, et al., Biochim Biophys Acta. (2011) May 2, PMID:21565160、及びBonente, et al., Photosynth Res.(2011) May 6, PMID:21547493、米国公開第２０１２／０３０９９３９号、米国公開第２０１０／０１２９３９４号、及び国際公開第２０１２／１７０１２５号に開示されるようなコナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。上記参考文献の全ては、全ての目的のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、ヘムを得るための藻類株は、単細胞藻類である。対象となる例示的な更なる微細藻類種には、アクナンテス・オリエンタリス（Achnanthes orientalis）、アグメヌルム（Agmenellum）、アンフィプロラ・ヒアリン（Amphiprora hyaline）、アンフォラ・コフェイフォルミス（Amphora coffeiformis）、アンフォラ・コフェイフォルミス・リネア（Amphora coffeiformis linea）、アンフォラ・コフェイフォルミス・プンクタータ（Amphora coffeiformis punctata）、アンフォラ・コフェイフォルミス・タイロリ（Amphora coffeiformis taylori）、アンフォラ・コフェイフォルミス・テヌイス（Amphora coffeiformis tenuis）、アンフォラ・デリカティッシマ（Amphora delicatissima）、アンフォラ・デリカティッシマ・キャピタータ（Amphora delicatissima capitata）、アンフォラ属の種（Amphora sp.）、アナバエナ（Anabaena）、アンキストロデスムス（Ankistrodesmus）、アンキストロデスムス・ファルカタス（Ankistrodesmus falcatus）、ボエケロヴィア・ホオグランディ（Boekelovia hooglandii）、ボロディネラ属の種（Borodinella sp.）、ボトリョコッカス・ブラウニイ（Botryococcus braunii）、ボトリョコッカス・スデティクス（Botryococcus sudeticus）、カルテリア（Carteria）、カエトセロス・グラシリス（Chaetoceros gracilis）、カエトセロス・ムエレリ（Chaetoceros muelleri）、カエトセロス・ムエレリ・スブサルスム（Chaetoceros muelleri subsalsum）、カエトセロス属の種（Chaetoceros sp.）、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinharadtii）、クロレラ・アニトラータ（Chlorella anitrata）、クロレラ・アンタルクティカ（Chlorella Antarctica）、クロレラ・アウレオビリディス（Chlorella aureoviridis）、クロレラ・キャンディダ（Chlorella candida）、クロレラ・カプスレイト（Chlorella capsulate）、クロレラ・デシカート（Chlorella desiccate）、クロレラ・エリプソイデア（Chlorella ellipsoidea）、クロレラ・エメルソニイ（Chlorella emersonii）、クロレラ・フスカ（Chlorella fusca）、クロレラ・フスカ・バリエタース・バクオラータ（Chlorella fusca var. vacuolata）、クロレラ・グルコトロファ（Chlorella glucotropha）、クロレラ・インフシオナム（Chlorella infusionum）、クロレラ・インフシオナム・バリエタース・アクトフィラ（Chlorella infusionum var. actophila）、クロレラ・インフシオナム・バリエタース・アウゼノフィラ（Chlorella infusionum var. auxenophila）、クロレラ・ケッセレリ（Chlorella kessleri）、クロレラ・ロボフォラ（Chlorella lobophora）（ＳＡＧ ３７．８８株）、クロレラ・ルテオビリディス（Chlorella luteoviridis）、クロレラ・ルテオビリディス・バリエタース・アウレオビリディス（Chlorella luteoviridis var. aureoviridis）、クロレラ・ルテオビリディス・バリエタース・ルテスセンス（Chlorella luteoviridis var. lutescens）、クロレラ・ミニアータ（Chlorella miniata）、クロレラ・ミヌティッシマ（Chlorella minutissima）、クロレラ・ムタビリス（Chlorella mutabilis）、クロレラ・ノクツルナ（Chlorella nocturna）、クロレラ・パルバ（Chlorella parva）、クロレラ・フォトフィラ（Chlorella photophila）、クロレラ・プリングシェイミイ（Chlorella pringsheimii）、クロレラ・プロトセコイデス（Chlorella protothecoides）、クロレラ・プロトセコイデス・バリエタース・アシジコラ（Chlorella protothecoides var. acidicola）、クロレラ・レグラリス（Chlorella regularis）、クロレラ・レグラリス・バリエタース・ミニマ（Chlorella regularis var. minima）、クロレラ・レグラリス・バリエタース・ウンブリカタ（Chlorella regularis var. umbricata）、クロレラ・レイシグリイ（Chlorella reisiglii）、クロレラ・サッカロフィラ（Chlorella saccharophila）、クロレラ・サッカロフィラ・バリエタース・エリプソイディア（Chlorella saccharophila var. ellipsoidea）、クロレラ・サリナ（Chlorella salina）、クロレラ・シンプレックス（Chlorella simplex）、クロレラ・ソロキニアナ（Chlorella sorokiniana）、クロレラ属の種（Chlorella sp.）、クロレラ・スファエリカ（Chlorella sphaerica）、クロレラ・スティグマトフォラ（Chlorella stigmatophora）、クロレラ・バニエリイ（Chlorella vanniellii）、クロレラ・ブルガリス（Chlorella vulgaris）、クロレラ・ブルガリス・フォルマ・テルティア（Chlorella vulgaris f. tertia）、クロレラ・ブルガリス・バリエタース・アウトロフィカ（Chlorella vulgaris var. autorophica）、クロレラ・ブルガリス・バリエタース・ビリディス（Chlorella vulgaris var. viridis）、クロレラ・ブルガリス・バリエタース・ブルガリス（Chlorella vulgaris var. vulgaris）、クロレラ・ブルガリス・バリエタース・ブルガリス・フォルマ・テルティア（Chlorella vulgaris var. vulgaris f. tertia）、クロレラ・ブルガリス・バリエタース・ブルガリス・フォルマ・ビリディス（Chlorella vulgaris var. vulgaris f. viridis）、クロレラ・シャンセラ（Chlorella xanthella）、クロレラ・ゾフィンジエンシス（Chlorella zofingiensis）、クロレラ・トレボウシオイデス（Chlorella trebouxioides）、クロレラ・ブルガリス（Chlorella vulgaris）、クロロコッカム・インフシオヌム（Chlorococcum infusionum）、クロロコッカム属の種（Chlorococcum sp.）、クロゴニウム（Chlorogonium）、クロオモナス属の種（Chroomonas sp.）、クリソスファエラ属の種（Chrysosphaera sp.）、クリコスファエラ属の種（Cricosphaera sp.）、クリプテコディニウム・コーニイ（Crypthecodinium cohnii）、クリプトモナス属の種（Cryptomonas sp.）、サイクロテラ・クリプティカ（Cyclotella cryptica）、サイクロテラ・メネグヒニアナ（Cyclotella meneghiniana）、サイクロテラ属の種（Cyclotella sp.）、ドナリエラ属の種（Dunaliella sp.）、ドナリエラ・バルダウィル（Dunaliella bardawil）、ドナリエラ・バイオクラータ（Dunaliella bioculata）、ドナリエラ・グラヌラテ（Dunaliella granulate）、ドナリエラ・マリタイム（Dunaliella maritime）、ドナリエラ・ミヌタ（Dunaliella minuta）、ドナリエラ・パルバ（Dunaliella parva）、ドナリエラ・ペイルセイ（Dunaliella peircei）、ドナリエラ・プリモレクタ（Dunaliella primolecta）、ドナリエラ・サリナ（Dunaliella salina）、ドナリエラ・テリコラ（Dunaliella terricola）、ドナリエラ・テルティオレクタ（Dunaliella tertiolecta）、ドナリエラ・ビリディス（Dunaliella viridis）、ドナリエラ・テルティオレクタ（Dunaliella tertiolecta）、エレモスファエラ・ビリディス（Eremosphaera viridis）、エレモスファエラ属の種（Eremosphaera sp.）、エリプソイドン属の種（Ellipsoidon sp.）、エウグレナ（Euglena）、フランセイア属の種（Franceia sp.）、フラギラリア・クロトネンシス（Fragilaria crotonensis）、フラギラリア属の種（Fragilaria sp.）、グレオカプサ属の種（Gleocapsa sp.）、グロエオサムニオン属の種（Gloeothamnion sp.）、ヒメノモナス属の種（Hymenomonas sp.）、イソクリシス・アッフィーニス・ガルバーナ（Isochrysis aff. galbana）、イソクリシス・ガルバーナ（Isochrysis galbana）、レポシンクリス（Lepocinclis）、ミクラクチニウム（Micractinium）、ミクラクチニウム（Micractinium）（ＵＴＥＸ ＬＢ ２６１４）、モノラフィディウム・ミヌツム（Monoraphidium minutum）、モノラフィディウム属の種（Monoraphidium sp.）、ナンノクロリス属の種（Nannochloris sp.）、ナンノクロロプシス・サリナ（Nannochloropsis salina）、ナンノクロロプシス属の種（Nannochloropsis sp.）、ナビクラ・アクセプタータ（Navicula acceptata）、ナビクラ・ビスカンテラエ（Navicula biskanterae）、ナビクラ・シュードテネロイデス（Navicula pseudotenelloides）、ナビクラ・ペリクロサ（Navicula pelliculosa）、ナビクラ・サプロフィラ（Navicula saprophila）、ナビクラ属の種（Navicula sp.）、ネフロクロリス属の種（Nephrochloris sp.）、ネフロセルミス属の種（Nephroselmis sp.）、ニッチア・コムニス（Nitschia communis）、ニッチア・アレクサンドリア（Nitzschia alexandrina）、ニッチア・コムニス（Nitzschia communis）、ニッチア・ディッシパータ（Nitzschia dissipata）、ニッチア・フルストゥルム（Nitzschia frustulum）、ニッチア・ハンチアーナ（Nitzschia hantzschiana）、ニッチア・インコンスピクア（Nitzschia inconspicua）、ニッチア・インテルメディア（Nitzschia intermedia）、ニッチア・マイクロセファーラ（Nitzschia microcephala）、ニッチア・プシラ（Nitzschia pusilla）、ニッチア・プシラ・エリプティカ（Nitzschia pusilla elliptica）、ニッチア・プシラ・モノエンシス（Nitzschia pusilla monoensis）、ニッチア・クアドラングラール（Nitzschia quadrangular）、ニッチア属の種（Nitzschia sp.）、オクロモナス属の種（Ochromonas sp.）、オオサイスティス・パルバ（Oocystis parva）、オオサイスティス・プシラ（Oocystis pusilla）、オオサイスティス属の種（Oocystis sp.）、オスキラトリア・リムネティカ（Oscillatoria limnetica）、オスキラトリア属の種（Oscillatoria sp.）、オスキラトリア・スブレビス（Oscillatoria subbrevis）、パスケリア・アシドフィラ（Pascheria acidophila）、パブロバ属の種（Pavlova sp.）、ファグス（Phagus）、フォルミディウム（Phormidium）、プラティモナス属の種（Platymonas sp.）、プレウロクリシス・カルテラエ（Pleurochrysis carterae）、プレウロクリシス・デンターテ（Pleurochrysis dentate）、プレウロクリシス属の種（Pleurochrysis sp.）、プロトテカ・ウィッケルハミイ（Prototheca wickerhamii）、プロトテカ・スタグノラ（Prototheca stagnora）、プロトテカ・ポルトリセンシス（Prototheca portoricensis）、プロトテカ・モリフォルミス（Prototheca moriformis）、プロトテカ・ゾフィイ（Prototheca zopfii）、ピラミモナス属の種（Pyramimonas sp.）、ピロボトリス（Pyrobotrys）、サルシノイド・クリソフィテ（Sarcinoid chrysophyte）、セネデスムス・アルマタス（Scenedesmus armatus）、シゾシトゥリウム（Schizochytrium）、スピロギラ（Spirogyra）、スピルリナ・プラテンシス（Spirulina platensis）、スティココッカス属の種（Stichococcus sp.）、シネココッカス属の種（Synechococcus sp.）、テトラエドロン（Tetraedron）、テトラセルミス属の種（Tetraselmis sp.）、テトラセルミス・スエシカ（Tetraselmis suecica）、サラッシオシラ・ウェイッスフロギイ（Thalassiosira weissflogii）、及びビリディエラ・フリデリシアナ（Viridiella fridericiana）が含まれるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態において、藻類は、クラミドモナス属（Chlamydomonas）の種である。いくつかの実施形態において、藻類は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である。いくつかの実施形態において、藻類は、突然変異誘発によって、スクリーニングによって、選択によって、または別の藻類株との交配によって生成された緑色クラミドモナス属（Chlamydomonas）の株の派生物である。
いくつかの実施形態において、本明細書における方法で使用するため、及びヘム含有組成物を生成するための藻類株は、１つ以上の表現型及び１つ以上の遺伝子型の両方または一方に基づいて選択または識別される。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成するための藻類株は、交配プロセスを介して作り出すことができる。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成するための藻類株は、紫外線突然変異誘発などの突然変異誘発を介して作り出すことができる。いくつかの実施形態において、ヘムを過剰生成するための藻類株は、ＤＮＡ改変をもたらす化合物による化学的突然変異誘発を介して生成することができる。
藻類の選択方法には、欠損、クロロフィル生合成経路及びクロロフィル蓄積の両方または一方の欠乏、突然変異、並びに変化についての遺伝子スクリーニングまたは表現型スクリーニングと、ヘム、ヘム生合成中間体、及びヘム生合成酵素の発現増加及び蓄積の両方または一方についての遺伝子スクリーニングまたは表現型スクリーニングとが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書における方法で使用するため、及びヘム含有組成物を生成するための藻類株は、そのスペクトルプロファイル及びその赤色または赤に類似する色の両方または一方に基づいて選択または識別される。いくつかの実施形態において、本明細書における方法で使用するため、及びヘム含有組成物を生成するための藻類は、暗条件における成長速度に基づいて選択または識別される。いくつかの実施形態において、この選択は、暗条件における成長速度、及び暗条件で生育した場合の、赤色または赤に類似する色の出現または増大に基づく。いくつかの実施形態において、藻類株は、生成または蓄積されるカロチノイドの量が欠乏または減少しているものが選択される。
いくつかの実施形態において、藻類株は、ヘムの生成、ヘムの蓄積、クロロフィルの減少、及びカロチノイドの減少のうちの少なくとも１つに寄与する特性を、組み合わせるかまたは増強するために交配される。いくつかの実施形態において、暗条件下でより速く成長する藻類株（例えば、野生株よりも速い）が、赤色または赤に類似する色を呈する藻類株と交配される。いくつかの実施形態において、カロチノイドの生成または蓄積が欠乏する藻類株が、赤色または赤に類似する色を呈する藻類株と交配される。
いくつかの実施形態において、藻類株が突然変異誘発され、次いで、ヘムの生成増加、ヘムの蓄積、クロロフィルの減少、及びカロチノイドの減少のうちの１つ以上の特徴を示す新しい株を選択または識別する。いくつかの実施形態において、藻類株は、第１の開始株の突然変異誘発、及び第１の開始株よりも暗所で速く成長する第２の株の選択によって生成される。いくつかの実施形態において、藻類株は、第１の開始株の突然変異誘発、及び１つ以上のカロチノイドが欠如する第２の株の選択によって生成される。いくつかの実施形態において、藻類株は、オメガ油（例えば、オメガ３脂肪酸）を減少させる改変、及びグルコース、デキストロース、スクロースなどの特定の炭素源で藻類株を成長させる改変の両方または一方といった更なる改変を含む。
いくつかの実施形態において、藻類は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）などのクラミドモナス属（Chlamydomonas）の種であり、この株は、視覚可能な赤色または赤褐色の外観を有する。いくつかの実施形態において、この株は、グルコースでの成長も示す。いくつかの実施形態において、この株は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、もしくはＣＨＬＨ１をコードする遺伝子、またはそのイントロンもしくは調節領域といった、核にコードされるＭｇキラターゼのサブユニットなど、クロロフィル合成経路における遺伝子改変を有し、これにより、この株は、ヘムを過剰発現するか、またはヘム含有量が増大される。いくつかの実施形態において、この株は、ＰＰIX含有量も豊富である。いくつかの実施形態において、この株は、発酵条件下において、高い培養密度となるまで増殖可能である。
［ヘム株を過剰生成するための培養方法］
液体培地で藻類を生育する方法には、池、水路、小規模実験システム、並びに閉鎖型及び部分閉鎖型のバイオリアクタシステムを含む多種多様な選択肢が含まれる。また、例えば、海洋、海、湖、河川、貯水池などの水中で、そのまま藻類を生育することもできる。
いくつかの実施形態において、本明細書に提示する方法及び組成物に有用なヘム過剰生成藻類は、小規模実験システム、大規模システム、並びに閉鎖型及び部分閉鎖型のバイオリアクタシステムのうちの少なくとも１つといった、制御された培養システムにおいて生育される。小規模実験システムは、約６リットル未満の容量の培養物を意味し、約１ミリリットル以下から約６リットルまでの範囲とすることができる。大規模培養とは、約６リットルを超える容量の培養物の生育を意味し、約６リットルから約２００リットルまでの範囲とすることが可能であり、更に大規模なシステムでは、面積が５～２５００平方メートル以上に及ぶ。大規模培養システムには、約１００００～約２００００リットル、最大で約１００００００リットルの液体培養システムを含めることができる。
本明細書における組成物を生成するための方法と共に使用する培養システムには、環境が開放系または半閉鎖系よりも厳密な管理下にある、バイオリアクタのような閉鎖構造が含まれる。光バイオリアクタは、ある種の光源を組み込んで、リアクタに光子エネルギを供給するバイオリアクタである。バイオリアクタという用語は、環境に対して閉じられ、ガス及び汚染物質が環境と直接交換されないシステムを指すことができる。バイオリアクタは、密閉されたものとして説明することができ、フォトバイオリアクタの場合は、液体細胞懸濁培養物の制御されたバイオマス生産のために設計された照明付きの培養容器である。
いくつかの実施形態において、本明細書に提示する方法及び組成物に使用する藻類は、発酵容器内で生育される。いくつかの実施形態において、容器は、ステンレス鋼の発酵容器である。いくつかの実施形態において、藻類は、従属栄養条件で生育されることにより、１つ以上の炭素源が培養物にもたらされる。いくつかの実施形態において、藻類は、好気性条件及び従属栄養条件で生育される。いくつかの実施形態において、藻類は、約１０ｇ／Ｌ、約２０ｇ／Ｌ、約３０ｇ／Ｌ、約４０ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ、約７５ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ、約１２５ｇ／Ｌ、または約１５０ｇ／Ｌ以上の密度に成長する。
いくつかの実施形態において、藻類は、約０．１ｇ／Ｌ、約１．０ｇ／Ｌ、約５．０ｇ／Ｌ、約１０．０ｇ／Ｌ、約２０．０ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ、約８０ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌを超える開始密度まで、種子槽から接種される。接種されると、藻類は、好気性発酵プロセスを用い、従属栄養的に生育される。このプロセスにおいて、藻類は、成長を維持するために栄養素が与えられる。いくつかの実施形態において、これらの栄養素は、還元炭素源を含む。例示的な好気性発酵プロセス及び還元炭素源の両方または一方には、酢酸塩、グルコース、スクロース、フルクトース、グリセロール、及びそれ以外のタイプの糖（例えば、デキストロース、マルトース、ガラクトース、スクロース、リボースなど）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、藻類培養物は、鉄が補給される。
いくつかの実施形態において、藻類は、暗条件下で培養される。この暗条件は、１０００ルクス未満、７５０ルクス未満、５００ルクス未満、４００ルクス未満、３００ルクス未満、２００ルックス未満、１００ルックス未満の照度を有するのが好ましい。いくつかの実施形態において、暗条件下で培養された藻類は、暗条件下で培養された藻類と比較して、クロロフィル生成が、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％欠如または減少している。いくつかの実施形態において、暗条件下で生育される藻類は、１つ以上の栄養素が補給される。いくつかの実施形態において、暗条件下で生育される藻類は、酢酸塩、グルコース、スクロース、フルクトース、グリセロール、またはそれ以外のタイプの糖（例えば、デキストロース、マルトース、ガラクトース、スクロース、リボースなど）などの還元炭素源の存在下で生育される。いくつかの実施形態において、暗条件下で生育される藻類は、鉄の存在下で生育されるか、そうでない場合は鉄が補給される。
いくつかの実施形態において、本光細書のヘム富化株は、ビリベルジンIX及びフォトクロモビリンへの経路フラックスが減少し、当該株中のヘムの量が増加するように、暗い状態または光が制限された状態のもとで生育される。いくつかの実施形態において、本光細書のヘム富化株は、暗い状態または光が制限された状態のもとで生育され、グルコースなどの炭素源を利用する。
［食用の食料製品及び材料］
ここに提示するのは、藻類由来のヘムを含む、人間及び動物による消費のための食用の製品である。いくつかの実施形態において、食用の製品は、牛肉風製品、魚肉風製品、または模造肉である。いくつかの実施形態において、食用の製品は、全細胞藻類を含み、藻類は、組成物にヘムをもたらす。いくつかの実施形態において、ヘムは、藻類がヘムを過剰生成する全細胞藻類成分によって食用の製品に与えられる。いくつかの実施形態において、ヘムは、藻類のクロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する藻類によって、食用の製品に与えられる。いくつかの実施形態では、ヘムは、クロロフィル含有量よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％多いプロトポルフィリン含有量を有する藻類によって食用の製品に与えられる。
いくつかの実施形態において、食用の製品は、牛肉風製品、魚肉風製品、または模造肉であり、ヘムは、分画藻類によってもたらされる。例えば、ヘムを生成または過剰生成する全細胞藻類は、一部または相当量のバイオマスをヘム含有画分から分離する分画法を適用することができる。分画は、オメガ３脂肪酸、脂肪、タンパク質、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの任意の組み合わせなど、ヘム含有画分と関連する成分を残しながら、藻類バイオマスの１つ以上の成分を除去するようにしてもよい。いくつかの実施形態において、ヘムは、藻類のオメガ３脂肪酸、飽和脂肪、タンパク質、ビタミンＡ、及びベータカロチンのうちの１つ以上から分離することができる。溶剤及び緩衝剤、またはそれらの組み合わせによる抽出を用い、ヘム富化画分を得ることができる。例えば、藻類のバイオマスまたはその画分は、ヘキサン抽出によりヘムを富化することができる。
いくつかの実施形態において、バイオマスは、含有するヘムを分離し、必要に応じてＰＰIXを分離するために、分画されるか、または別の方法で処理される。このような分画には、ヘムからのＰＰIXの分離を含めることができる。例えば、ヘム結合タンパク質及びタンパク質と結びついたヘムは、タンパク質結合体またはタンパク質関連化合物ではないＰＰIXから分離することができる。遊離ヘム及びタンパク質関連ヘムはいずれも、ヘムと鉄との結合に基づいて、ＰＰIXから分離することができる。ＰＰIXは、鉄成分を含まないため、この特徴を用いて、ヘム含有画分からＰＰIXを分離することができる。いくつかの実施形態において、本明細書の藻類バイオマスは、ヘムが、ＰＰIXを含む他の成分から分離されるように、分画されるか、またはそれ以外の方法で処理される。
いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、画分のクロロフィル含有量よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％多いヘム含有量を有する。いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、画分のクロロフィル含有量よりも少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％多いプロトポルフィリンIX含有量を有する。いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、クロロフィルを含有しないか、または実質的にクロロフィルを含有しない。いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約４．５％のプロトポルフィリンIX含有量を有する（総重量に対する重量割合であり、例えば、１グラムの試料中の４５ｍｇのプロトポルフィリンIX）。いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約０．５％のヘム含有量を有する（総重量に対する重量割合であり、例えば、１グラムの試料中の５ｍｇのヘム）。いくつかの実施形態において、ヘム含有画分は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約４．５％のプロトポルフィリンIX含有量を有し、約０．５％のヘム含有量を有する（総重量に対する重量割合）。
いくつかの実施形態において、食用組成物の調製に使用される全体藻類調製物は、画分のクロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物は、画分のクロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物は、クロロフィルを含有しないか、または実質的にクロロフィルを含有しない。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約４．５％のプロトポルフィリンIX含有量を有する（総重量に対する重量割合であり、例えば、１グラムの試料中の４５ｍｇのプロトポルフィリンIX）。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約０．５％のヘム含有量を有する（総重量に対する重量割合であり、例えば、１グラムの試料中の５ｍｇのヘム）。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さず、約４．５％のプロトポルフィリンIX含有量を有し、約０．５％のヘム含有量を有する（総重量に対する重量割合）。
いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さない調製物であって、クロロフィルを生成または蓄積しない藻類株から作られる。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物は、クロロフィルを有さないか、または実質的にクロロフィルを有さない調製物であって、クロロフィル合成経路に１つ以上の突然変異を有するか、クロロフィルの蓄積または代謝回転に影響する経路に１つ以上の突然変異を有するかの少なくとも一方である藻類株であって、例えば、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上における改変など、マグネシウムキラターゼの１つ以上のサブユニットに改変を有する藻類株から作られる。
いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物は、総重量に対する重量割合で、約０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、もしくは２．５％の、または２．５％を上回るヘムを含有する。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物は、総重量に対する重量割合で、約０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．５％、５．０％、５．５％、６．０％、６．５％、７．０％、７．５％、８．０％、８．５％、９．０％、９．５％、もしくは１０．０％の、または１０％を上回るプロトポルフィリンIXを含有する。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物中のヘムは、遊離ヘムである。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物中のヘムは、１つ以上のタンパク質と複合体を形成し、例えば１つ以上の切断型ヘモグロビンと複合体を形成する。いくつかの実施形態において、全体藻類調製物または分画藻類調製物中のヘムは、遊離ヘムと、タンパク質と複合体を形成したヘムとの混合物である。
いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、食用組成物にヘムをもたらすだけでなく、タンパク質ももたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％のタンパク質を、食用組成物にもたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、食用の製品中のタンパク質の約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％をもたらす。いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、食用組成物にタンパク質をもたらし、食用組成物は、植物性供給源など、１つ以上の更なる供給源からのタンパク質を含有する。いくつかの実施形態において、藻類画分は、開始バイオマスと比較して、タンパク質が富化される。ヘキサン抽出または同等の溶媒を用いて、画分に含有するタンパク質を富化することができる。いくつかの実施形態において、炭水化物及び脂肪酸の両方または一方は、タンパク質の富化及びヘムの富化の両方または一方を行いながら、そのような抽出を介して除去または削減される。
いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、食用組成物にヘムをもたらすだけでなく、オメガ３脂肪酸ももたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、オメガ３脂肪酸の１日の推奨適用量またはその一部を、食用の製品にもたらす。例えば、全細胞藻類または分画藻類は、少なくとも約５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇのオメガ３脂肪酸を、食用組成物にもたらす。
いくつかの実施形態において、オメガ３脂肪酸などのオメガ油は、藻類バイオマスまたは分画藻類の試料から除去される。このような油の除去により、藻類由来製品に存在し得る「魚のような」香りまたは味を減少または除去することなどによって、藻類バイオマスまたは分画藻類の香り及び味を変更することができる。いくつかの実施形態において、ヘキサン、またはイソヘキサン、ヘプタン、ブタン、もしくはそれ以外のアルコールなどの類似の溶媒が、香り及び味の改変のための藻類バイオマスまたは分画藻類の調製において使用される。いくつかの場合、ヘキサン抽出または類似の溶媒による抽出は、油を除去または油の量を減少させるだけでなく、得られる製品におけるヘムの富化及びタンパク質の富化の両方または一方がなされる。
いくつかの実施形態において、藻類バイオマスまたは分画藻類は、１つ以上のオメガ油が欠乏する株を用いて作られる。このような株を、交配を介するなど、ヘム富化株と組み合わせて、オメガ油の生成が減少したヘム富化株を生成することができる。
いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、食用組成物にヘムをもたらすだけでなく、ビタミンＡももたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、ビタミンＡの１日の推奨適用量またはその一部を食用の製品にもたらす。例えば、全細胞藻類または分画藻類は、ビタミンＡの１日の推奨適用量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、もしくは１００％、またはビタミンＡについて、少なくとも約２０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、または１０００μｇのレチノール活性当量（ＲＡＥ）をもたらす。いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、ビタミンＡについて、約２０００μｇ、２５００μｇ、または３０００μｇ以下のレチノール活性当量（ＲＡＥ）をもたらす。
いくつかの実施形態において、全細胞藻類または分画藻類は、食用組成物にヘムをもたらすだけでなく、ベータカロチンももたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、ベータカロチンの１日の推奨適用量またはその一部を食用の製品に提供する。例えば、全細胞藻類または分画藻類は、ベータカロチンの１日の推奨適用量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％をもたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、約０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１２ｍｇ、または１５ｍｇのベータカロチンをもたらす。
いくつかの実施形態において、ヘムをもたらす全細胞藻類または分画藻類は、飽和脂肪を含有する。いくつかの実施形態において、藻類は、飽和脂肪についての１日の推奨制限量より少ない量またはその一部を、食用の製品にもたらす。例えば、全細胞藻類または分画藻類は、飽和脂肪の１日の推奨適用量の約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％以下をもたらす。いくつかの実施形態において、藻類は、食用組成物中または食用組成物から作られた完成製品中に存在する総飽和脂肪の０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％以下をもたらす。
本明細書のいくつかの実施形態において、ヘムを含有する藻類全体または藻類画分は、食用組成物を作り出すために使用され、この食用組成物は、その後、完成製品中の材料として使用される。この食用組成物は、ヘムだけでなく、オメガ３脂肪酸、脂肪、タンパク質、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの任意の組み合わせを、材料にもたらすようにしてもよい。このような材料は、着色剤、結着剤、結合剤、栄養源、味もしくは風味の増強剤、または充填剤であってよい。
いくつかの実施形態において、ヘムを含有する藻類全体または藻類画分は、完成製品である食用組成物を作り出すために使用される。例えば、完成製品は、ハンバーガ、パティ、ケーキ、ひき「肉」、ソーセージ、ケバブ、ステーキ、角切り「肉」、「ミートボール」、フィレ、ドラムスティック、「チキンフィンガ」、または「チキンナゲット」などの、肉に似た製品であってもよい。完成製品は、牛肉、鶏肉、豚肉、ジビエ、七面鳥肉、またはそれ以外の消費可能な肉製品に似せて作られた、肉に似た製品であってもよい。完成製品は、マグロ製品、香料入りマグロ製品、またはサケ製品といった、魚のフィレ、魚のパティまたはケーキ、魚肉ボール、魚肉サラダ、魚のすり身、フィッシュナゲット、フィッシュバーガなどに似せて作られた魚肉に似た製品であってもよい。
藻類全体または藻類画分は、オメガ３脂肪酸、飽和脂肪、タンパク質、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの任意の組み合わせを完成製品にもたらすようにしてもよい。いくつかの実施形態において、藻類全体または藻類画分は、オメガ油を低減することが可能であり、完成製品に使用することができる。肉風製品は、藻類全体または藻類画分を用い、本明細書に記載するようにして処理することにより、または本明細書に記載するような株のタイプにより、オメガ油の量を減少させたヘム富化藻類から作ることができる。
いくつかの実施形態において、藻類全体または藻類画分を含有する完成製品は、調理された製品である。いくつかの実施形態において、藻類全体または藻類画分を含有する完成製品は、未調理の製品または生の製品である。いくつかの実施形態において、藻類全体または藻類画分を含有する完成製品は、部分的に調理された製品である。
［ヘム含有調製物及び製品］
本明細書に記載するような、ヘムを過剰生成する藻類株及び培養物は、様々な形態及び調製物で使用することができる。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、ヘムを過剰生成する藻類培養物から調製され、このヘム含有組成物は、赤色または赤に類似する色である。
いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、培養藻類から単離されたバイオマスから調製される。いくつかの実施形態において、バイオマスは、１つ以上の成分を除去するために、更に分画される。いくつかの実施形態において、バイオマスは、デンプンを除去するために、分画される。いくつかの実施形態において、バイオマスは、タンパク質を除去するために、分画される。いくつかの実施形態において、バイオマスは、カロチノイドを除去するために、分画されるか、または別の方法で処理される。いくつかの実施形態において、バイオマスは、特定の成分を富化するために、分画されるか、または別の方法で処理される。いくつかの実施形態において、分画または処理されたバイオマスは、ヘムが富化される。いくつかの実施形態において、分画または処理されたバイオマスは、タンパク質、またはタンパク質及びヘムが富化される。いくつかの実施形態において、分画または処理により、調製物の赤色または赤に類似する色が増強される。分画または処理されたバイオマスは、組成物が、約１０％のタンパク質、約１０％を超えるタンパク質、または約２０％、約３０％、約４０％、もしくは約５０％を超えるタンパク質となるように、含有するタンパク質を富化することができる。
いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、培養藻類の培養培地から調製されたヘム含有液体である。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、藻類培養物中で細胞外に見出されるヘムから調製される。いくつかの実施形態において、藻類培養物は、細胞からヘムを解放するために、溶解されるか、または別の方法で処理される。いくつかの実施形態において、ヘム含有液体は、１つ以上の成分を除去するために、更に分画される。いくつかの実施形態において、ヘム含有液体は、デンプンを除去するために、分画される。いくつかの実施形態において、ヘム含有液体は、タンパク質を除去するために、分画される。いくつかの実施形態において、ヘム含有液体は、カロチノイドを除去するために、分画されるか、または別の方法で処理される。いくつかの実施形態において、ヘム含有液体は、特定の成分を富化するために、分画されるか、または別の方法で処理される。いくつかの実施形態において、分画または処理されたヘム含有液体は、ヘムが富化される。いくつかの実施形態において、分画または処理により、調製物の赤色または赤に類似する色が増強される。
バイオマス、液体、及び分画調製物を含むヘム含有組成物は、更に処理することができる。このような処理には、濃縮、乾燥、凍結乾燥、及び凍結を含めることができる。種々の実施形態において、ヘム含有組成物は、更なる成分及び材料と組み合わせることができる。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、食用の製品を作り出すために更なる材料と組み合わせられる。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、食用の製品に赤色または赤に類似する色を与える。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、食用の製品に、肉に似た味、肉に似た風味や香り、及び食感のうちの少なくとも１つといった肉に似た特徴を与える。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、模造肉、牛肉風製品、鶏肉風製品など、食用の製品に血液の見かけをもたらす。或いは、肉の風味もしくは香りまたは肉に似た風味もしくは香り、肉の食感または肉に似た食感、血液のような見かけ、肉の色または肉に似た色という特徴のうちの少なくとも１つは、藻類の調整物から与えられる。
いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物は、肉風製品を作り出すために、更なる成分と組み合わせられる。このような肉風製品には、人工肉または培養肉（実験室で、またはそれとは別に動物以外で、増殖させた動物細胞から作ったもの）、植物性及び非動物性の肉（植物成分及び動物を原料としない成分の両方または一方から作ったもの）が含まれる。いくつかの実施形態において、ヘム過剰生成藻類から生成されたヘム含有組成物は、肉風製品を作り出すために、更なる成分と組み合わされ、その結果、ヘム含有組成物の添加によって、赤色または赤に類似する色、肉に似た香り、肉に似た味、及び肉に似た食感のうちの少なくとも１つを肉風製品に与える。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物によって与えられた肉のような特徴は、生または未調理の製品に与えられる。いくつかの実施形態において、ヘム含有組成物によって付与された肉のような特徴は、調理された製品に与えられる。
いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、食用組成物中で更なるタンパク質源と結合される。例えば、タンパク質源は、小麦タンパク質、小麦由来組織状タンパク質、エンドウ豆タンパク質、エンドウ豆由来組織状タンパク質、大豆タンパク質、大豆由来組織状タンパク質、ジャガイモタンパク質、ホエイタンパク質、酵母エキス、もしくはそれ以外の植物性タンパク質源、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、食用組成物中で油または脂肪源と結合される。例えば、油または脂肪源は、ココナッツ油、キャノーラ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、トウモロコシ油、オリーブ油、アボカド油、ナッツ油、もしくはそれ以外の植物性の油もしくは脂肪源、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、ジャガイモ、ヒヨコマメ、小麦、大豆、豆、トウモロコシ、もしくはそれ以外の植物由来のデンプンもしくは炭水化物、またはそれらの任意の組み合わせなどの、デンプンまたはそれ以外の炭水化物源と結合される。いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、食用組成物中で増粘剤と結合される。例えば、アロールート、コーンスターチ、カタクリデンプン、ジャガイモデンプン、サゴデンプン、タピオカなどのデンプン、及びそれらのデンプン誘導体を、増粘剤として使用してもよく、食品増粘剤として使用される微生物ガム及び植物ガムには、アルギニン、グアールガム、イナゴマメガム、コンニャク、及びキサンタンガムが含まれ、コラーゲン及び卵白などのタンパク質を増粘剤として使用してもよく、増粘剤として使用する糖ポリマには、寒天、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ペクチン、及びカラギーナンが含まれる。いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、食用組成物中で、ビタミンＥ、ビタミンＣ、チアミン（ビタミンＢ１）、亜鉛、ナイアシン、ビタミンＢ６、リボフラビン（ビタミンＢ２）、及びビタミンＢ１２などのビタミン及びミネラルと結合させてもよい。
いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、更なる成分と組み合わせて、食用組成物及び完成製品の両方または一方を菜食主義者用、完全菜食主義者用、またはグルテン非含有として、ユダヤ教の掟の実践者、及びイスラムの戒律の実践者の食事規則に適合するようにしてもよい。従って、いくつかの実施形態において、食用組成物及び完成製品の両方または一方は、菜食主義者、完全菜食主義者、グルテンを採らない集団、ユダヤ教の掟の実践者、及びイスラムの戒律の実践者による消費に適合するものとしてもよい。いくつかの実施形態において、藻類全体または分画藻類は、更なる成分と組み合わせて、食用組成物及び完成製品の両方または一方が、ＧＭＯを含まないようにしてもよいし、これに加えてまたは代えて、遺伝子改変された生物または細胞に由来する成分を何ら含まないようにしてもよい。
［例示的な番号付き実施形態］
以下の実施形態は、本明細書に開示する特徴の組み合わせの非限定的な順列を列挙したものである。特徴の組み合わせの別の順列も考えられる。特に、これらの番号付き実施形態の各々は、列挙した順番とは無関係に、それ以前またはそれ以降のあらゆる番号付き実施形態に従属または関連するものと考えられる。
実施形態１．遺伝子改変を有する改変藻類であって、前記遺伝子改変により、遺伝子改変のない藻類と比較して、前記改変藻類にヘムが蓄積する、改変藻類。２．クロロフィル生成が減少または欠如している、実施形態１の改変藻類。３．赤色または赤に類似する色を有する、実施形態１または２の改変藻類。４．グルコースを唯一の炭素源として成長する能力を有する、実施形態１～３のいずれかの改変藻類。５．前記遺伝子改変は、クロロフィル合成経路、プロトポルフィリノーゲンIX合成経路、またはヘム合成経路に対する遺伝子改変を含む、実施形態１～４のいずれかの改変藻類。６．前記遺伝子改変は、マグネシウムキラターゼの発現の欠乏に関わるものである、実施形態１～５のいずれかの改変藻類。７．前記遺伝子改変は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上における改変を含む、実施形態１～６のいずれかの改変藻類。８．前記遺伝子改変は、上流調節領域、下流調節領域、エクソン、イントロン、またはそれらの任意の組み合わせにおける改変を含む、実施形態７の改変藻類。９．前記遺伝子改変は、挿入、欠失、点突然変異、逆位、重複、フレームシフト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態５～８のいずれかの改変藻類。１０．クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、実施形態１～９のいずれかの改変藻類。１１．クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、実施形態１～１０のいずれかの改変藻類。１２．１つ以上の脂肪酸の生成が減少している、実施形態１～１１のいずれかの改変藻類。１３．光非依存性プロトクロロフィリドオキシドレダクターゼの発現を低減または排除する遺伝子改変を更に含む、実施形態１～１２のいずれかの改変藻類。１４．前記遺伝子改変は、ＣｈｌＢ、ＣｈｌＬ、及びＣｈｌＮのうちの１つ以上における突然変異または欠失を含む、実施形態１３の改変藻類。１５．フェロキラターゼの発現がアップレギュレートされている、実施形態１～１４のいずれかの改変藻類。１６．プロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼの発現がアップレギュレートされている、実施形態１～１５のいずれかの改変藻類。１７．組換え核酸または異種核酸を含む、実施形態１～１６のいずれかの改変藻類。１８．前記藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）を含む、実施形態１～１７のいずれかの改変藻類。１９．前記クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、実施形態１８の改変藻類。
実施形態２０．藻類調製物を含有する食用組成物であって、前記藻類調製物は、実施形態１～１９のいずれかの改変藻類またはその一部を含む、食用組成物。２１．前記改変藻類に由来するヘムを含有する、実施形態２０の食用組成物。２２．前記藻類調製物は、藻類細胞を含む、実施形態２０の食用組成物。２３．前記藻類調製物は、分画された藻類調製物である、実施形態２０の食用組成物。２４．前記藻類調製物は、赤色または赤に類似する色である、実施形態２０～２３のいずれかの食用組成物。２５．前記藻類調製物に由来する赤色または赤に類似する色を有する、実施形態２０～２４のいずれかの食用組成物。２６．前記藻類調製物は、前記食用組成物に肉の風味または肉に似た風味を与える、実施形態２０～２５のいずれかの食用組成物。２７．前記藻類調製物に由来する肉の食感または肉に似た食感を有する、実施形態２０～２６のいずれかの食用組成物。２８．前記肉の食感または肉に似た食感は、牛肉の食感もしくは牛肉に似た食感、魚肉の食感もしくは魚肉に似た食感、鶏肉の食感もしくは鶏肉に似た食感、豚肉の食感もしくは豚肉に似た食感、または模造肉の食感を含む、実施形態２７の食用組成物。２９．牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、及び模造肉からなる群より選択される完成製品である、実施形態２０～２８のいずれかの食用組成物。３０．完全菜食主義者用、菜食主義者用、またはグルテン非含有である、実施形態２０～２９のいずれかの食用組成物。３１．前記藻類調製物に由来する血液の見かけを有する、実施形態２０～３０のいずれかの食用組成物。３２．前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、実施形態２０～３１のいずれかの食用組成物。３３．前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、実施形態２０～３２のいずれかの食用組成物。３４．前記藻類調製物は、総タンパク質含有量の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％を前記食用組成物にもたらす、実施形態２０～３３のいずれかの食用組成物。３５．前記藻類調製物は、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせを前記食用組成物にもたらす、実施形態２０～３４のいずれかの食用組成物。３６．前記ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせは、１日の推奨必要量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％である、実施形態３５の食用組成物。３７．前記藻類調製物は、前記食用組成物中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす、実施形態２０～３６のいずれかの食用組成物。３８．前記藻類調製物は、前記食用組成物を含む完成製品中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす、実施形態２０～３７の食用組成物。３９．前記藻類調製物は、少なくとも約５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇのオメガ３脂肪酸を、前記食用組成物にもたらす、実施形態２０～３８のいずれかの食用組成物。４０．前記藻類調製物は、脂肪酸含有量が減少している、実施形態２０～３９のいずれかの食用組成物。４１．タンパク質源、脂肪源、炭水化物、デンプン、増粘剤、ビタミン、ミネラル、またはそれらを任意に組み合わせたものと組み合わされる、実施形態２０～４０のいずれかの食用組成物。４２．前記タンパク質源は、小麦由来組織状タンパク質、大豆由来組織状タンパク質、エンドウ豆由来組織状タンパク質、真菌タンパク質、及び藻類タンパク質からなる群より選択される、実施形態４１の食用組成物。４３．前記脂肪源は、精製したココナッツ油及びヒマワリ油の少なくとも一方を含む、実施形態４１の食用組成物。４４．ジャガイモデンプン、メチルセルロース、水、及び調味料のうちの少なくとも１つを更に含有し、前記調味料は、酵母エキス、ニンニク粉末、タマネギ粉末、及び塩のうちの少なくとも１つが選択される、実施形態４１～４３のいずれかの食用組成物。４５．ハンバーガ、ソーセージ、ケバブ、フィレ、魚肉代替物、ひき肉風製品、またはミートボールの材料である、実施形態４１～４４のいずれかの食用組成物。４６．前記ハンバーガは、約５％の藻類調製物、約２０％の大豆由来組織状タンパク質、及び約２０％の精製ココナッツ油を含有する、実施形態４５の食用組成物。４７．約３％のヒマワリ油、約２％のジャガイモデンプン、約１％のメチルセルロース、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する、実施形態４６の食用組成物。４８．約０．５％のコンニャクガム、約０．５％のキサンタンガム、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する、実施形態４６の食用組成物。４９．前記魚肉代替物は、２０％の大豆由来組織状タンパク質、約５％の藻類調製物、約６５％の水、及び約１０％の調味料を含有する、実施形態４５の食用組成物。５０．動物性タンパク質を含有しない、実施形態２０～４９のいずれかの食用組成物。５１．前記藻類調製物は、プロトポルフィリノーゲンIXの合成または蓄積が増加した藻類を含む、実施形態２０～５０のいずれかの食用組成物。５２．前記藻類調製物は、暗条件で生育すると、赤色または赤に類似する色を呈する藻類を含む、実施形態２０～５１のいずれかの食用組成物。５３．前記藻類調製物に含まれる藻類は、組換え藻類または遺伝子改変藻類である、実施形態２０～５２のいずれかの食用組成物。５４．前記藻類調製物は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）を含む、実施形態２０～５３のいずれかの食用組成物。５５．前記クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、実施形態５４の食用組成物。
実施形態５６．食用組成物を生成する方法であって、（ａ）実施形態１～１９のいずれかの改変藻類を、前記改変藻類が赤色または赤に類似する色を呈する条件で培養し、前記改変藻類がヘムを生成するステップと、（ｂ）培養した前記改変藻類を採取して藻類調製物を生成するステップと、（ｃ）前記藻類調製物を、少なくとも１つの食用成分と組み合わせて、食用組成物を生成するステップとを備える、方法。５７．前記条件は、発酵条件を含む、実施形態５６の方法。５８．前記条件は、前記改変藻類の成長のための還元炭素源として酢酸塩を含む、実施形態５６または５７の方法。５９．前記条件は、前記改変藻類の成長のための還元炭素源として糖を含む、実施形態５６～５８のいずれかの方法。６０．前記条件は、暗い状態または光が制限された状態を含む、実施形態５６～５９のいずれかの方法。６１．培養した前記改変藻類を分画して前記藻類調製物を生成するステップを更に含む、実施形態５６～６０のいずれかの方法。６２．前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、実施形態５６～６１のいずれかの方法。６３．前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、実施形態５６～６２のいずれかの方法。６４．前記条件は、鉄の補給を更に含む、実施形態５６～６３のいずれかの方法。６５．前記改変藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）である、実施形態５６～６４のいずれかの方法。６６．前記改変藻類は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、実施形態６５の方法。６７．前記食用組成物は、肉の風味または肉に似た風味、肉の食感または肉に似た食感、血液のような見かけ、及び肉の色または肉に似た色からなる群より選択される少なくとも１つの特徴を有し、前記少なくとも１つの特徴は、前記藻類調製物に由来する、実施形態５６～６６のいずれかの方法。６８．前記食用組成物を含む完成製品を製造するステップを更に備え、前記完成製品は、牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、または模造肉である、実施形態５６～６７のいずれかの方法。６９．前記食用組成物は、動物性タンパク質を含有しない、実施形態５６～６８のいずれかの方法。７０．前記藻類調製物は、デンプン、タンパク質、ＰＰIX、脂肪酸、及びクロロフィルのうちの１つ以上を除去するために分画される、実施形態５６～６９のいずれかの方法。
実施形態７１．含有するヘムが富化された改変藻類を作る方法であって、（ａ）遺伝子改変を生成するプロセスを藻類株に適用して、第１の藻類集団を作り出すステップと、（ｂ）ヘムが富化され、任意でＰＰIXが富化された第２の藻類集団を、前記第１の藻類集団から選択するステップとを備える、方法。７２．前記プロセスは、ランダムなＵＶ突然変異誘発、ランダムな化学的突然変異誘発、組換え遺伝子改変、遺伝子編集、及び遺伝子サイレンシングのうちの少なくとも１つを含む、実施形態７１の方法。７３．前記第１の藻類集団を発酵条件で培養するステップを更に備える、実施形態７１または７２の方法。７４．前記発酵条件は、唯一の炭素源として糖を有する培地を含む、実施形態７３の方法。７５．前記糖は、グルコース、デキストロース、フルクトース、マルトース、ガラクトース、スクロース、及びリボースから選択される、実施形態７４の方法。７６．前記発酵条件は、５００ルクス未満の照度を含む、実施形態７３～７５のいずれかの方法。７７．前記第２の藻類集団を選択するステップは、赤色または赤に類似する色を有する藻類細胞を選別または識別するステップを含む、実施形態７３～７６のいずれかの方法。７８．前記第２の藻類集団を選択するステップは、ＦＡＣＳによって行われる、実施形態７３～７７のいずれかの方法。７９．前記第２の藻類集団は、前記発酵条件で成長する能力で選択される、実施形態７３～７８のいずれかの方法。
［実施例］
実施例１：藻類の突然変異誘発と株の選択
藻類（クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.)）の野生型の株に、４２０ｎｍの励起波長及び６３５ｎｍの放射でＵＶ照射を行った。まず、株は、グルコースなどの代替炭素源で成長する能力で選択された。これら選択された株の１つは、蛍光スクリーニング（例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ））、または磁気的細胞選別もしくはビーズベース細胞選別により、赤色の株の選択及び識別の両方または一方を行うために、選択の際と同様の条件を用いて更に突然変異誘発された。これらの選択について、図２に例示すると共に、以下に更に詳述する。
ヘムを過剰発現する藻類（コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii））の株は、クロロフィルを生成する能力がないことで識別した。更に、これらの株は、赤色、茶色、オレンジ色、またはこれら列挙した色から多少異なる色を呈した。識別された株は、光感受性を示し、１０μＥ・ｍ-２・ｓ-１を超える直接光下で長時間成長することはできない。
ヘムを過剰発現する藻類の株を生成するために、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）の緑色の親株をＵＶ光クロスリンカに入れ、２５～３００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶ光に曝露して、ランダムな突然変異を誘発した。ＵＶ光への曝露後、株を寒天プレート上に回収し、暗所に置いた。回収の後、増殖培地を入れたフラスコ内に株を取り込み、ヘムに富む株の多くが失われるおそれのある光への曝露の可能性を制限する暗所で、振盪機に入れて成長させた。暗所で１週間培養した後、フローサイトメータにかけた。細胞は、４２０ｎｍの光で励起され、５９５±１５ｎｍ及び６３５±１５ｎｍで励起状態を測定した。５９５±１５ｎｍに高い励起信号を示した細胞は、この信号がクロロフィル形成の前駆物質であるＭｇプロトポルフィリンに関わる蛍光信号であることから、避けられた。６３５±１５ｎｍに高い蛍光励起信号を示した細胞は、この信号が高いプロトポルフィリンIXを示すものであることから、取り出す集団に選別した。取り出した後、細胞をプレート上に広げ、個々のコロニーを成長させ、それらの個々の蛍光特性を、９６ウェルプレートリーダによって測定した。このようなプロセスにより、プロトポルフィリンIX及びヘムのレベルが上昇した５０株が識別された。
これらの赤色株のうちの１株について、クロロフィル及びヘムの生合成に関与する遺伝子座でゲノム配列決定を行った。配列決定の結果、遺伝子改変がＣＨＬＨ遺伝子座で起こったことが示された。赤色株のＣＨＬＨの配列は、配列番号１２９（ヌクレオチド配列）及び配列番号１５２（アミノ酸配列）にある。この改変は、緑色株と比較してＣＨＬＨにおける単一塩基対を欠失させ、その結果、ＣＨＬＨオープンリーディングフレームにおけるフレームシフトを引き起こし、これに加えてまたは代えて、タンパク質が切断型に翻訳されるように終止コドンを生成する。図９に配列比較を示す（上の配列（Seq_1）は、緑藻類のＣＨＬＨ遺伝子の部分的な核酸配列（配列番号２７の残基１６２１～１６７９）、及び部分的なアミノ酸配列（配列番号２８の残基４５１～４６０）であり、下の配列（Seq_2）は、赤い藻類のＣＨＬＨ遺伝子の部分的な核酸配列（配列番号１２９の残基１６２１～１６８０）、及び部分的なアミノ酸配列（配列番号１５２の残基４５１～４６０）であり、変異（星印）がある）。このような藻類株において改変され得る更なる遺伝子の核酸配列を本明細書に提示する。
実施例１Ａ：糖を唯一の還元炭素源として成長する、ヘムを富化したクラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）の同定
炭素源としての糖の使用は、酢酸塩の使用と比較して、クラミドモナス属（Chlamydomonas）の藻類の生産コストに経済的利益をもたらす。現在までのところ、糖を炭素源として成長するコナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）の株は確認されていない。一般的に、図３に示すように、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）は、成長するために、酢酸塩、または日光及び二酸化炭素を必要とする。野生の藻類または様々な培養収集センターから得られる藻類の株を、２５ｇ／Ｌでデキストロースを添加した寒天増殖培地上で平板培養した。次に、この培養プレートを、光合成が起こらないように暗所に置いた。培養物は、２週間成長させた。２週間の終わりに、光のない条件で成長する能力について、培養物を調査した。次に、デキストロースを一次炭素源として暗所で成長できた株を、増殖培地と、一次炭素源としての２５ｇ／Ｌのデキストロースとを入れた振盪フラスコに入れ、暗所で１週間成長させた。培地中の培養密度及び糖濃度を毎日観察し、デキストロースが株によって代謝されているかどうかを調査した。
それらの識別に続き、デキストロースを炭素源として成長したクラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）の株は、ＵＶクロスリンカを用いて突然変異誘発がなされた。培養物を、２５～３００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶ光に曝露し、突然変異を誘発した。ＵＶ光への曝露の後、株を寒天プレート上に回収し、暗所に置いた。回収の後、増殖培地を入れたフラスコ内に株を取り込み、ヘムに富む株の多くが失われるおそれのある光への曝露の可能性を制限する暗所で、振盪機に入れて増殖させた。暗所で１週間培養した後、フローサイトメータにかけた。細胞は、４２０ｎｍの光で励起され、５９５±１５ｎｍ及び６３５±１５ｎｍで励起状態を測定した。５９５±１５ｎｍに高い励起信号を示した細胞は、この信号がクロロフィル形成の前駆物質であるＭｇプロトポルフィリンに関わる蛍光信号であることから、避けられた。６３５±１５ｎｍに高い蛍光励起信号を示した細胞は、この信号が高いプロトポルフィリンIXを示すものであることから、取り出す集団に選別した。取り出した後、細胞をプレート上に広げ、個々のコロニーを成長させ、それらの個々の蛍光特性を、９６ウェルプレートリーダによって測定した。このようなプロセスにより、プロトポルフィリンIX及びヘムのレベルが上昇し、更にデキストロースで成長できた２０株が識別された。
表１～５には、一例として同定された赤色ヘム藻類（株番号：ＴＡＩ１１４、種名：コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii））の特性分析を示す。
表１：微生物学的分析
Figure 2022506974000002
表２：重金属分析
Figure 2022506974000003
表３：バイオマス分析
Figure 2022506974000004
表４：ポルフィリン（ヘム）分析
Figure 2022506974000005
表５：アミノ酸組成
Figure 2022506974000006
実施例１Ｂ：ヘム過剰生成藻類の同定
識別した株の１つを、酢酸塩が培養のための還元炭素栄養源として使用される流加好気性発酵条件下で成長させた。この株は、最小限の光が培養物に到達可能な発酵槽で成長させた。この株を、１２０ｇ／Ｌを上回る密度まで増殖させ、遠心分離により採取した。採取した株は、赤色であり、食料製品などの組成物に加えて、赤色、オレンジ、または茶色を与えることができる。図６は、好気性発酵条件で成長させたヘム過剰生成株の細胞重量を示すグラフである。
実施例１Ｃ：ヘム過剰生成藻類の高密度増殖
ヘムを過剰発現する能力に関して予め選択したクラミドモナス（Chlamydomonas）の株を、高密度まで増殖させた。これを行うために、培養物が１リットルあたり１２０グラムになるのを可能とするような培地成分を含む基礎培地が開発された。そのような培地成分が、水で溶解させたときに１０ｍＳ／ｃｍを超えないようにされたので、株は淡水藻類である。次に、好気性流加発酵プロセスを用いて培養物を成長させた。培養物は、炭素源としての酢酸塩、窒素源としての水酸化アンモニウム、及びりん酸塩源としてりん酸を含む培地を用いて生育された。培養物は、ｐＨを６．８に維持するため、酸性側のｐＨスタットを用いて生育した。図６に示すように、培養物は、７日間成長させ、１２０ｇ／Ｌの力価のバイオマスを達成した。ヘム及びプロトポルフィリンIXは、ヘム定量アッセイ（アブノバ（Abnova）製ＫＡ１６１７）を用いて定量化した。ヘム及びプロトポルフィリンIXは、重量でバイオマスの５％を超えることが判った。１ｇ／Ｌを超えるヘム及びプロトポルフィリンIXの力価が達成された。即ち、ヘム／プロトポルフィリンIXは、藻類培養液を、１．７ＭのＨＣＬ及び８０％アセトンの溶液と混合することにより、規定量の藻類培養液から抽出された。混合物は、３０分間放置された。３０分後に試料を遠心分離し、藻類バイオマスからヘム／プロトポルフィリンIXの抽出物を分離した。可溶性のヘム／プロトポルフィリンIX試料を、アブノバ（Abnova）製のアッセイにおいて用い、標準曲線と比較して、藻類バイオマス中のヘム／プロトポルフィリンIX量を測定した。
実施例２：分画
ヘムを過剰生成するコナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）の株からの細胞を、発酵培養物から採取した。採取した細胞を超音波処理により破砕した後、試料を１００００×ｇで遠心分離した。これにより、試料が、カロチノイド、デンプン、及びタンパク質／ヘムバイオマスの画分に分離された。次に、タンパク質／ヘムバイオマスを、ｐＨ７．４のリン酸バッファ生理食塩水中に再懸濁した。図４に示すのは、遠心分離後の分画（左）、及びヘム含有画分の再懸濁（右）である。また、図５には、ＰＰIX及びヘムの分画プロセス、並びにバイオマス、抽出物、及び凍結乾燥製品の生成プロセスを示す。
実施例３：ヘム生成の特性解析
ヘムの濃度を測定するために、多くのヘムアッセイを用いることができる。一例として、ヘムの量は、アルカリ水溶液に藻類バイオマスを混合して、ヘムを均一な色に変化させることによって、定量的に測定することができる。色の濃さは、試料中のヘム濃度に正比例する４００ｎｍでの吸光度によって測定することができる。次に、これらの測定値を、既知濃度のヘムによって生成された標準値と比較して、藻類試料中のヘムの量を測定することができる。
実施例４：ヘムを豊富に含む「肉不使用」ハンバーガの調製
ヘムを富化した試料を用い、植物性材料及びヘム富化藻類から製造される肉に似た製品の組成物を調製することができる。ヘムを豊富に含むハンバーガを作成するために、以下の割合で材料を混合し、藻類による円盤状の植物性ハンバーガに成形した。割合は、２０％または約２０％の小麦由来組織状タンパク質、２０％または約２０％の精製ココナッツ油、３％または約３％のヒマワリ油、２％または約２％のジャガイモデンプン、０．５％または約０．５％のコンニャクガム、０．５％または約０．５％のキサンタンガム、４５％または約２０％の水、及び４～９％または約４～９％の調味料（酵母エキス、ニンニク粉末、タマネギ粉末、塩を含む）、及びヘムを富化した（「赤い」）藻類である。図１０に示すのは、ヘム富化藻類を０．０１ｇ、０．１ｇ、１．０ｇ、及び５．０ｇ用いて作ったハンバーガである。
この実施例では、ヘム富化藻類の組成は、４．５％のプロトポルフィリンIX、０．５％のヘム、０％のクロロフィル、２４．４％のタンパク質、９％の食物繊維、４０％のデンプン、０．８％のオメガ３脂肪酸、３．９％の別の脂肪、７．５％の水分、及び８．４％の灰分であった。
実施例５：ヘムを豊富に含む植物性ハンバーガの調製
ヘムを富化した試料を用い、植物性材料及びヘム富化藻類からハンバーガ組成を調製することができる。ヘムを豊富に含む植物性ハンバーガを作るために、以下の割合で材料を混合し、円盤状に成形した。割合は、２０％または約２０％の大豆由来組織状タンパク質、２０％または約２０％の精製ココナッツ油、３％または約３％のヒマワリ油、２％または約２％のジャガイモデンプン、１％または約１％のメチルセルロース、４５％または約４５％の水、及び４～９％または約４～９％の調味料（酵母エキス、ニンニク粉末、タマネギ粉末、塩、及びヘムを富化した（「赤い」）藻類を含む）である。図１１に示すのは、ヘム富化藻類を含まない植物性ハンバーガ材料の混合物であり（最も左）、ヘム富化藻類を添加した植物性ハンバーガ材料（左から２番目）、ヘム富化藻類を添加してハンバーガに成形した植物性ハンバーガ材料の調理前（左から３番目）及び調理後（最も右）である。図示するように、ヘム富化藻類を添加することにより、赤または赤に類似する色（動物の血液を伴うハンバーガに類似）が、材料混合物及びハンバーガに与えられ、この色は、調理すると変化する。
この実施例において、ヘム富化藻類の組成は、４．５％のプロトポルフィリンIX、０．５％のヘム、０％のクロロフィル、２４．４％のタンパク質、９％の食物繊維、４０％のデンプン、０．８％のオメガ３脂肪酸、３．９％の別の脂肪、７．５％の水分、８．４％の灰分であった。
実施例６：ヘムを豊富に含む肉不使用「マグロ」の調製
図１２に示すように、ヘムを富化した試料を用いて、魚肉に似た組成物を調製することができる。ヘムを豊富に含む肉不使用の「魚肉」を作り出すために、以下の割合で材料を混合した。割合は、２０％または約２０％の大豆由来組織状タンパク質、６５％または約６５％の水、及び１０％または約１０％の調味料、並びにヘムを富化した５％または約５％の（「赤い」）藻類である。図１２に示すのは、肉不使用の「マグロ」の四角い部分である。
この実施例において、ヘム富化藻類の組成は、４．５％のプロトポルフィリンIX、０．５％のヘム、０％のクロロフィル、２４．４％のタンパク質、９％の食物繊維、４０％のデンプン、０．８％のオメガ３脂肪酸、３．９％の別の脂肪、７．５％の水分、８．４％の灰分であった。
実施例７：グルコースのもとでのヘム富化藻類株の成長
唯一の炭素源としてグルコースを含む培地で、ヘム富化藻類株を成長させた。簡単に説明すると、図２に示すように、リットルあたりの総量で、２５ｇの無水グルコース、５ｇのＫＮＯ３、０．５２７５ｇのＫＨ２ＰＯ４、０．３９２５ｇのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０３１２７５ｇのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．００７１２５ｇのＨ３ＢＯ３、０．００２ｇのＣｕＳＯ４、０．００２７７５ｇのＺｎＳＯ４、０．００２４２５ｇのＣｏＳＯ４、０．００３２５ｇのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、０．００１１５ｇの（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ、及び０．０１７３５ｇのＣａＣｌを供給し、水中に培地を調製した。培地をｐＨ７．０に調整し、オートクレーブに入れ、培地の最終ｐＨが５．５～６．５となった。藻類株を、約０．１ｇ／Ｌの密度で接種した。
培養液を、暗い（光がない）インキュベータに入れ、回転振盪プラットホーム上において３０℃で成長させた。培養密度（乾燥細胞重量で測定）及び培地中の残留グルコース濃度を毎日測定した。図７は、経時的な乾燥細胞重量の増加、及びそれに伴う培地中の残留グルコースの減少を示す。この実験における乾燥細胞重量は、２５ｇ／Ｌを超えるものとなった。
実施例８：バイオマス全体からのヘム画分の抽出
ヘム富化藻類（実施例１と同様に生育）を用いて、ヘム富化画分を調製した。約１００ｇの藻類バイオマスと、アセトンを８０％、１．７ＭのＨＣＬを２０％含む１．０Ｌの溶液とを、３０分間にわたって混合した。バイオマスを沈降させた後、水液層を固体部分から分離して新しい容器内に抽出した（ヘム及びプロトポルフィリンIXを含有）。摘出した水液層に遠心分離を行い、或いは、いくつかの実験では、０．４μｍの分子カットオフ値を有したフィルターで試料をろ過した。得られた水性画分を、１０ＭのＮａＯＨで中和した。次に、試料１００ｍｌあたり１００ｍｌの水を加えた。このような混合の結果、ヘム及びプロトポルフィリンIXは不溶性となり、溶液から離脱した。次に、この溶液を遠心分離して固形物（ヘム及びプロトポルフィリンIXを含む）を収集し、乾燥させて赤色の粉末を形成した。図５は、手順の各ステップを経て収集された、赤に類似する色の画分（ヘム及びプロトポルフィリンIXを含む）を示す。１６０ｇの赤い藻類バイオマスから、７．７ｇのＰＰIX／ヘムが抽出された。
実施例９：ヘムを富化するための藻類バイオマスからの脂肪酸の除去
乾燥したクラミドモナス（Chlamydomonas）細胞を、水、エタノール、及びヘキサンと共に６：７７：１７の比率で混合した。試料を、４時間分離させた。次に、脂肪酸を含む水液層を除去した。次に、試料を遠心分離して、固形バイオマス層を、残りの何らかの脂肪酸から完全に分離した。その後、このバイオマスを、更なる分析の前に乾燥させた。図８は、脂肪酸抽出前後の藻類バイオマスの生化学的分析を示しており、抽出プロセスの後の脂肪酸含量が１０分の１未満となる減少を示している。
実施例１０：ヘム富化株を作り出すためのクロロフィル経路の標的改変
ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）は、タンパク質複合体を非機能的にする欠失または挿入を引き起こすように、マグネシウムキラターゼ遺伝子のサブユニットのいずれかに対して設計することができる。一旦設計されたｓｇＲＮＡは、３７℃でインキュベートしてＣａｓ９タンパク質と結合することによって、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）を形成することができる。次に、ｓｇＲＮＡを担持してマグネシウムキラターゼを標的とするこれらのＲＮＰを、電気穿孔により緑藻培養物中に導入する。３×１０８の細胞を、藻類用のマックスエフィシャイエンシー（登録商標、MAX Efficiency）形質転換バッファ試薬（サーモフィッシャーサイエンティフィック（Thermo Fisher Scientific））に入れ、０．２ｃｍのギャップを有したキュベットに入れる。電気穿孔の電圧は２５０Ｖ、パルス間隔は１５ｍｓに設定されている。電気穿孔を行った細胞を、４０ｍＭのスクロースを加えて回収効率を向上させた増殖培地で回収する。次に、寒天を含む増殖培地で細胞を平板培養し、マグネシウムキラターゼ変異体の光感受性のため、暗所で成長させる。一旦回収すると、個体群を取り出し、個々のコロニーを作り出すことができる。プレートを、再び暗所に２～３週間入れる。Ｍｇキラターゼの突然変異体は緑色ではないので、目視によって識別することができる。次に、標的突然変異が確実に導入されるように、突然変異体を配列決定する。
実施例１１：様々な肉の模倣品用に改良されたヘム富化株を作り出するためのクロロフィル経路の改変
アミノレブリン酸など、ヘムの前駆物質を増加させる藻類の株は、ヘムを過剰発現する株と交配することにより、生成されるヘムまたはプロトポルフィリンIXの量を更に増加させることができる。交配は、相手側の交配型であるクラミドモナスの株を特定した後、それらを窒素が欠乏した状態にすることによって行うことができる。窒素欠乏状態とした後に、株を水中に再懸濁させ、鞭毛の形成を促進する。相手側交配型の鞭毛は、接合子の形成をもたらす藻類株の融合を助ける。交配した培養物をクロロホルムに曝露し、交配しなかった株を死滅させる。クロロホルムは、接合子を殺さない。次に、接合子を増殖培地に入れ、増殖させる。次に、前駆体プロトポルフィリンIXの蛍光の増加の測定、または生化学的アッセイ（アブノバ（Abnova）製ＫＡ１６１７）により、ヘムの増加について個々のコロニーを識別及び選別する。
ヘムを過剰発現する藻類の菌株は、オメガ３、オメガ６、またはオメガ９を過少生成または過剰生成する株と交配することもできる。模造魚肉については、ヘムを過剰発現する藻類の株に、より多くのオメガ油が含まれるのが理想的である。牛肉風の模倣製品には、ヘムを過剰発現する藻類の株に、より少ないオメガ油が含まれるのが理想的である。そのため、オメガ油を過剰発現するかまたは過少発現するかのいずれかについての突然変異体である藻類の株は、ヘムを過剰発現する藻類の株と交配して、様々な肉風の製品に対してより理想的となる藻類を形成することが可能である。
［配列表］
ＡＬＡデヒドラターゼ（ＡＬＡＤ）核酸配列（配列番号１）：
atgcagatgatgcagcgcaacgttgtgggccagcgccccgtcgctggctcccgccgctcgctggtggttgccaacgttgcggaggtgacccgccccgcggtcagcaccaacggcaagcaccggactggtgtgccggagggaactcccatcgtcacccctcaggacctgccctcgcgccctcgccgcaaccgccgcagcgagagcttccgtgcttccgttcgtgaggtgaacgtgtcgcccgccaacttcatcctgccgatcttcatccacgaggagagcaaccagaacgtgcccatcgcctccatgcctggcatcaaccgcctggcgtatggcaagaacgtgattgactacgttgctgaggctcgctcttacggtgtcaaccaggtcgtggttttccccaagacgcccgaccacctgaagacgcaaaccgcggaggaggcgttcaacaagaacggcctcagccagcgcacgatccgcctgctgaaggactctttccctgacctggaggtgtacacggacgtggctctggacccctacaactcggacggccacgacggtatcgtgtcggacgccggtgtgatcctgaacgacgagaccatcgagtacctgtgccgccaggccgtgagccaggccgaggccggtgccgacgtggtgtcgccctctgacatgatggacggccgcgtgggcgccatccgccgcgccctggaccgcgagggcttcaccaacgtgtccatcatgtcctacaccgccaagtacgcctccgcctactacggccccttccgtgacgccctggcgtccgcgcccaagcccggccaggcgcaccgccgcatcccccccaacaagaagacctaccagatggaccccgccaactaccgcgaggccatccgcgaggccaaggccgacgaggccgagggcgctgacatcatgatggtcaagcccggcatgccgtacctggacgtggtacgcctgctgcgtgagaccagcccgctgcccgtggccgtgtaccacgtgtcgggcgagtacgccatgctcaaggcggcggcggagcgcggctggctgaacgagaaggatgccgtgcttgaggccatgacctgcttccgccgcgccggcgctgacctcatcctcacctactacggcattgaggcctccaagtggctggcgggcgagaagtaa
ＡＬＡデヒドラターゼ（ＡＬＡＤ）アミノ酸配列（配列番号２）：
MQMMQRNVVGQRPVAGSRRSLVVANVAEVTRPAVSTNGKHRTGVPEGTPIVTPQDLPSRPRRNRRSESFRASVREVNVSPANFILPIFIHEESNQNVPIASMPGINRLAYGKNVIDYVAEARSYGVNQVVVFPKTPDHLKTQTAEEAFNKNGLSQRTIRLLKDSFPDLEVYTDVALDPYNSDGHDGIVSDAGVILNDETIEYLCRQAVSQAEAGADVVSPSDMMDGRVGAIRRALDREGFTNVSIMSYTAKYASAYYGPFRDALASAPKPGQAHRRIPPNKKTYQMDPANYREAIREAKADEAEGADIMMVKPGMPYLDVVRLLRETSPLPVAVYHVSGEYAMLKAAAERGWLNEKDAVLEAMTCFRRAGADLILTYYGIEASKWLAGEK
コプロポルフィリノーゲンIIIオキシダーゼ（ＣＰＸ１）核酸配列（配列番号３）：
atggcactgcaagcctcaacccgctcgctccagcagcgccgcgccttctcttcggcccagacctccaagcgtgtgtctgtgaccaaggtccgcgcgacggctatcgaggcggagaactatgtgaagcaggctccccagtcgctggtccgcccgggcatcgacactgaggactctatgcgcgctcgcttcgagaaggtgatccgcaacgcccaggactccatctgcaatgctatctccgagatcgatggcaagccgttccaccaggacgcctggacccgccccggcggcggtggcggcatcagccgcgtgctgcaggacggcaacgtgtgggagaaggccggcgtcaacgtgtccgtggtctacggcaccatgccccctgaggcctaccgcgctgccactggcaacgccgagaagctgaagaacaagggtgacggtggccgcgtgcccttcttcgccgccggcatctcgtcggtgatgcacccccgcaacccccactgccccaccatgcacttcaactaccgctacttcgagactgaggagtggaacggcatccccggccagtggtggttcggcggcggcaccgacatcacccccagctatgtggtgcccgaggacatgaagcacttccacggcacctacaaggcggtgtgcgaccgccacgatcccgcttactacgagaagttccgcacctggtgcgatgagtacttcctcatcaagcaccgcggcgagcgccgcggcctgggcggcatcttcttcgatgacctgaacgaccgcaaccccgaggacatcctgaagttctcgaccgacgccgtgaacaacgtggtggaggcatactgccccatcatcaagaagcacatgaacgacccctacacccccgaggagaaggagtggcagcagatccgccgcggccgctacgtggagttcaacctggtctatgaccgcggcaccaccttcggcctgaagaccggcggccgcattgagtcgatcctcatgtccatgccccagaccgcctcatggctgtacgaccaccagcccaaggccggctcgcccgaggccgagctgctcgacgcctgccgcaacccccgcgtctgggtgtaa
コプロポルフィリノーゲンIIIオキシダーゼ（ＣＰＸ１）アミノ酸配列（配列番号４）：
MALQASTRSLQQRRAFSSAQTSKRVSVTKVRATAIEAENYVKQAPQSLVRPGIDTEDSMRARFEKVIRNAQDSICNAISEIDGKPFHQDAWTRPGGGGGISRVLQDGNVWEKAGVNVSVVYGTMPPEAYRAATGNAEKLKNKGDGGRVPFFAAGISSVMHPRNPHCPTMHFNYRYFETEEWNGIPGQWWFGGGTDITPSYVVPEDMKHFHGTYKAVCDRHDPAYYEKFRTWCDEYFLIKHRGERRGLGGIFFDDLNDRNPEDILKFSTDAVNNVVEAYCPIIKKHMNDPYTPEEKEWQQIRRGRYVEFNLVYDRGTTFGLKTGGRIESILMSMPQTASWLYDHQPKAGSPEAELLDACRNPRVWV
コプロポルフィリノーゲンIIIオキシダーゼ（ＣＰＸ２）核酸配列（配列番号５）：
atgctgaggaagcagattggtggatctggccagcagcgggcgggcctccgacgggtgaaccaaggacctgcgcgtcggcggttggcaccctgccgcgtggcggcccccgtgcaaacctcgtcctccgtcgccacattcaatggcttcgtggactacattcacggactccagaagaacattctgagcactgctgaggatctggagaacggcgagcggaagtttgttgttgaccgctgggagcgcgacgccagcaaccccaacgccgggtatggcattacgtgcgtgcttgaggacgggaaggtgctggagaaggccgcagccaatatctcagtggtgcgcgggacgctgtcggcgcagcgcgcagtggccatgagctcccgcggccgcagcagcatcgaccccaagggcgggcagccctacgccgcggccgccatgagcctagtgttccacagcgcgcacccgctcatccccacgctgcgcgcgacgtgcggttgttccaggtgggcgatgaggcgtggtacggcggtggctgtgacctgacgcccaactacctagacgtggaggactcgcagtccttccaccgctactggaaggacgtgtgcggcaagtacaagccgggcctgtacaccgagctcaaggagtggtgcgacaggtacttctacatcccggcccgcaaagagcaccgtggcattggcggcctgttctttgatgacatggccactgcggaggcgggctgcgatgtggaggcgtttgtgcgggaagtgggagatggcatcctgccctgctggctgcccatcgtggcgcggcaccgtggccagcccttcacggagcagcagcggcaatggcagctgctgcgccgcggtcgctacatcgagttcaacctgctgtacgaccgcggcatcaagttcggtctggacggcggccgcatcgagagcatcatggtgtcggcgccgccgctgatcgcgtggaagtacaacgtggtgccacagccgggcagccccgaggaggagatgctgaaggtgcttcagcagccccgcgagtgggcctga
コプロポルフィリノーゲンIIIオキシダーゼ（ＣＰＸ２）アミノ酸配列（配列番号６）：
MLRKQIGGSGQQRAGLRRVNQGPARRRLAPCRVAAPVQTSSSVATFNGFVDYIHGLQKNILSTAEDLENGERKFVVDRWERDASNPNAGYGITCVLEDGKVLEKAAANISVVRGTLSAQRAVAMSSRGRSSIDPKGGQPYAAAAMSLVFHSAHPLIPTLRADVRLFQVGDEAWYGGGCDLTPNYLDVEDSQSFHRYWKDVCGKYKPGLYTELKEWCDRYFYIPARKEHRGIGGLFFDDMATAEAGCDVEAFVREVGDGILPCWLPIVARHRGQPFTEQQRQWQLLRRGRYIEFNLLYDRGIKFGLDGGRIESIMVSAPPLIAWKYNVVPQPGSPEEEMLKVLQQPREWA
コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）由来のフェロキラターゼ核酸配列（配列番号７）：
atggcgtcgtttggattgatgcaaaggacggtgcactgtccccagcttgtggaggagcggtgttcgccggtcgctggctgctctggtcgtggcctgccagttatccagcggcaacggcgtggcgtgtgcagtgccaccaacggtgtccagcgagggcgtgtgctgcgccggacggccgcttcgaccgacgtggtctccttcgtggaccccaatgacattagaaaacccgcagcagcagcagctggccctgcggtggataaggtcggcgttctgctgttaaaccttggcgggcccgaaaagctcgacgacgtcaagcctttcctgtataacctattcgccgacccagaaattattcgcctgccagcggcagctcagttcctgcagccgctgctcgcgacgatcatctccacgcttcgcgccccgaagagcgcggagggctatgaggccattggcggtggtagcccgttgcgtaggattacagacgagcaggcggaggcgctggcggagtctctgcgcgccaagggccaacctgcgaacgtgtacgtgggcatgcgctattggcacccctacacggaggaggcgctggagcacattaaggccgacggcgtcacgcgcctggtcatcctcccgctgtaccctcagttctccatctctaccagcggctccagccttcgactgcttgagtcgctcttcaagagcgacatcgcgctcaagtcgctgcggcacacggtcatcccgtcctggtaccagcggcggggctacgtgagcgcgatggcggacctgattgtagaggagctgaagaagttccgggacgtgcccagcgtggagctgtttttctccgcgcacggcgtgcccaagtcctacgtggaggaggcgggcgacccatacaaggaggagatggaggagtgcgtgcggctcattacggacgaggtcaagcggcgcggcttcgccaacacgcacacgctggcctaccagagccgcgtgggccccgcggaatggctcaagccgtacacggatgagtccatcaaggagctgggcaagcgcggcgtcaagtcgctgctggcggtgcccatcagctttgtcagcgagcacattgagacgttggaggagatcgacatggagtaccgcgagctggcggaggagagcggcatccgcaactggggccgcgtgccggcgctgaacaccaacgccgccttcatcgacgacctggcggacgcggtgatggaggcgctgccctacgtgggctgcctggccgggccgacagactcgctggtgccgctgggcgacctggagatgctgctgcaggcctacgaccgcgagcgccgcacgctgccgtcaccggtggtgatgtgggagtggggctggaccaagagcgcggagacgtggaacggccgcattgccatgattgccatcatcatcatcctggcgctggaggcagccagcggccagtccatcctcaaaaacctgttcctggcggagtag
コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）由来のフェロキラターゼアミノ酸配列（配列番号８）：
MASFGLMQRTVHCPQLVEERCSPVAGCSGRGLPVIQRQRRGVCSATNGVQRGRVLRRTAASTDVVSFVDPNDIRKPAAAAAGPAVDKVGVLLLNLGGPEKLDDVKPFLYNLFADPEIIRLPAAAQFLQPLLATIISTLRAPKSAEGYEAIGGGSPLRRITDEQAEALAESLRAKGQPANVYVGMRYWHPYTEEALEHIKADGVTRLVILPLYPQFSISTSGSSLRLLESLFKSDIALKSLRHTVIPSWYQRRGYVSAMADLIVEELKKFRDVPSVELFFSAHGVPKSYVEEAGDPYKEEMEECVRLITDEVKRRGFANTHTLAYQSRVGPAEWLKPYTDESIKELGKRGVKSLLAVPISFVSEHIETLEEIDMEYRELAEESGIRNWGRVPALNTNAAFIDDLADAVMEALPYVGCLAGPTDSLVPLGDLEMLLQAYDRERRTLPSPVVWEWGWTKSAETWNGRIAMIAIIIILALEAASGQSILKNLFLAE
グルタミン酸-１-セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼ（ＧＳＡ）核酸配列（配列番号９）：
atgcagatgcagctgaacgccaagaccgtgcagggcgccttcaaggcgcagcgccctcgctctgtccgcggcaacgtggcggtgcgcgcagtggccgctccccctaagctggtcaccaagcgctccgaggagatcttcaaggaggctcaggagctgctgcccggtggcgtgaactcgcccgtgcgcgctttccgctcggttggtggcggccccatcgtcttcgacagggtcaagggtgcctactgctgggacgtcgatggcaacaagtacatcgactacgttggctcttggggccctgccatttgcggccacggcaacgacgaggtcaacaacgccctgaaggcgcagatcgacaagggcacctcgttcggtgctccctgcgagctggagaacgtgctggccaagatggtgattgaccgcgtgccctcggtggagatggtgcgcttcgtgtcctcgggcactgaggcgtgcctgtcggtgctgcgcctgatgcgcgcatacaccggccgcgagaaggtgctgaagttcaccggctgctaccacggccacgccgactccttcctggtgaaggccggctccggtgtgatcaccctgggcctgcccgactcgcccggtgtgcccaagagcaccgccgccgccaccctgaccgccacctacaacaacctggactccgtgcgcgagctgttcgccgccaacaagggcgagattgccggtgtgatcctggagcccgtggtcggcaacagcggcttcattgtgcccaccaaggagttcctgcagggcctgcgcgagatctgcacggctgagggcgccgtgctgtgcttcgatgaggtcatgaccggcttccgcattgccaagggctgcgcccaggagcacttcggtatcacccccgacctgaccaccatgggcaaggtcattggtggcggcatgcctgtgggcgcctacggcggcaagaaggagatcatgaagatggtcgcccccgccggccccatgtaccaggccggcaccctttcgggcaaccccatggccatgactgccggcatcaagacgctggagatcctgggccgccccggcgcctacgagcacctggagaaggtgaccaagcgcctgatcgacggcatcatggccgccgccaaggagcacagccacgagatcaccggcggcaacatcagcggcatgtttggcttcttcttctgcaagggccctgtgacctgcttcgaggacgccctggcggccgacactgccaagttcgcgcgcttccaccgcggcatgctggaggagggcgtctacctggctccctcgcagttcgaggccggcttcacctctctggcccactccgaggcggacgtggatgccacgatcgccgccgctcgccgcgtgttcgcccgcatctaa
グルタミン酸-１-セミアルデヒドアミノトランスフェラーゼ（ＧＳＡ）アミノ酸配列（配列番号１０）：
MQMQLNAKTVQGAFKAQRPRSVRGNVAVRAVAAPPKLVTKRSEEIFKEAQELLPGGVNSPVRAFRSVGGGPIVFDRVKGAYCWDVDGNKYIDYVGSWGPAICGHGNDEVNNALKAQIDKGTSFGAPCELENVLAKMVIDRVPSVEMVRFVSSGTEACLSVLRLMRAYTGREKVLKFTGCYHGHADSFLVKAGSGVITLGLPDSPGVPKSTAAATLTATYNNLDSVRELFAANKGEIAGVILEPVVGNSGFIVPTKEFLQGLREICTAEGAVLCFDEVMTGFRIAKGCAQEHFGITPDLTTMGKVIGGGMPVGAYGGKKEIMKMVAPAGPMYQAGTLSGNPMAMTAGIKTLEILGRPGAYEHLEKVTKRLIDGIMAAAKEHSHEITGGNISGMFGFFFCKGPVTCFEDALAADTAKFARFHRGMLEEGVYLAPSQFEAGFTSLAHSEADVDATIAAARRVFARI
グルタミル-ｔＲＮＡレダクターゼ（ＨＥＭＡ）核酸配列（配列番号１１）：
atgcagaccactatgcagcagcgtctccagggccgtaacgtggccgggcggagcgtcgctccctcggtccctgcccatcgctccttccactcacaccgggctgccactcaaaccgctacgatcagcgctgctgctagctcaaccaccaagctgccagcttcgcatctggagagcagcaagaaggcgctggattcgctgaagcagcaggccgtcaatcgctacgcgggtgacaagaagagctccattattgccattggtctcaccattcacaacgcacccgtggagctgcgcgagaagctggctgtgcctgaggctgaatggccgcgtgctattgaggagctctgccagttcccgcacatcgaggaggccgcggtgctgtcgacgtgcaatcgcatggagctctacgttgtcggtctgtcgtggcaccgcggcgttcgcgaggtggaggagtggctgtctcgcaccagcggcgtgcctctggatgagctgcgcccctacctgttcctgctgcgcgaccgcgacgccacgcaccacctgatgcgcgtgtcgggtggccttgactcgctggttatgggcgagggccagattctcgcccaagtgcgccaggtctacaaggtcggccagaactgccccggcttcggtcgccacctgaacggcctgttcaagcaggctatcaccgctggcaagcgcgtgcgtgccgagacctccatctccaccggctccgtctccgtctcatccgccgccgtcgagctggcgcagctcaagctccccacccacaactggtccgacgctaaggtctgcatcatcggcgctggcaagatgtctacgctgctggtgaagcacctgcagagcaagggctgcaaggaggtgacggtgctcaaccgctctctgccgcgcgcccaggcgctggcggaggagttccctgaggtcaagttcaacatccacctgatgcccgacctgctgcagtgcgtggaggccagcgacgtcatcttcgccgcctccggctctgaggagatcctcatccacaaggagcatgtcgaggccatgtccaagccatcggacgttgttggctccaagcgccgcttcgtcgacatctccgtgccccgcaacatcgcccccgccatcaacgagctggagcacggcatcgtctacaacgtcgacgacctgaaggaggttgtggccgccaacaaggagggccgcgcgcaggcggccgccgaggccgaggtgctgatccgcgaggagcagcgcgcgttcgaggcctggcgtgactctctggagaccgtgcccaccatcaaggcgctgcgctccaaggccgagaccatccgcgccgccgagtttgagaaggccgtgtctcgcctgggcgaggggctatccaagaagcagctcaaggcggtggaggagctcagcaagggcatcgtcaacaagctgctgcacgggcccatgacggcactgcgctgcgacggcaccgatccggatgccgtgggccagaccctcgcgaacatggaggccctggagcgcatgttccagctctcggaggtggacgtggccgcgctggcgggcaagcagtaa
グルタミル-ｔＲＮＡレダクターゼ（ＨＥＭＡ）アミノ酸配列（配列番号１２）：
MQTTMQQRLQGRNVAGRSVAPSVPAHRSFHSHRAATQTATISAAASSTTKLPASHLESSKKALDSLKQQAVNRYAGDKKSSIIAIGLTIHNAPVELREKLAVPEAEWPRAIEELCQFPHIEEAAVLSTCNRMELYVVGLSWHRGVREVEEWLSRTSGVPLDELRPYLFLLRDRDATHHLMRVSGGLDSLVMGEGQILAQVRQVYKVGQNCPGFGRHLNGLFKQAITAGKRVRAETSISTGSVSVSSAAVELAQLKLPTHNWSDAKVCIIGAGKMSTLLVKHLQSKGCKEVTVLNRSLPRAQALAEEFPEVKFNIHLMPDLLQCVEASDVIFAASGSEEILIHKEHVEAMSKPSDVVGSKRRFVDISVPRNIAPAINELEHGIVYNVDDLKEVVAANKEGRAQAAAEAEVLIREEQRAFEAWRDSLETVPTIKALRSKAETIRAAEFEKAVSRLGEGLSKKQLKAVEELSKGIVNKLLHGPMTALRCDGTDPDAVGQTLANMEALERMFQLSEVDVAALAGKQ
光非依存性プロトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＮ（ｃｈ１Ｎ）核酸配列（配列番号１３）：
atgttatactcacaatttaaacattcggtgcctttaggccgtaagtctccccttctttcagggggccccccttctgggggtcgcccaacaacggctgcctcaggcctaggtcgcaacgtggccgtaagaattgggaccccgttgggctttgcccttcgggcccaggtaattatggcagctgcgggcaatactagcggtgcgccgcaccccgtaggggagtcccagcctgcgttgtcccaggtggattctcaacttgtaattgagtgtgaaacaggaaattaccatactttttgcccaattagttgtgtttcttggttataccaaaaaattgaagatagttttttcttagttattggtacaaaaacgtgtgggtattttttacaaaatgctttaggggttatgatttttgccgaacctcgttacgctatggcggaattagaagaaagcgatatttcggcgcaattaaatgattacaaagaattaaaacgtctatgtttacaaattaaacaagaccgtaacccaagtgttattgtgtggattggcacatgcacaaccgaaattattaaaatggatttagaaggtatggcaccgaaactagaagctgaaatcggtattccaattgtggtagcacgcgcaaatggacttgattatgcttttacacaaggtgaagatactgttttagctgcgatggtccaaaaatgcccggaattaggcgctattccagctattgtacctcagattccttctgactctcgtacacttagccaactatctgtagcggcttcggtacccgaaaacagtgcgtctgggccagaaggggagccttcactagcccagaagggaatggattctaagttaacaaacaactctccatgccgagtagattctgtctcagaatctaccccggcgtttcctggacgtgctccgcacgtcgggaaaagtactcctcaaaatttagttttatttggttcattacctagcacgatggcaaatcaactggagtttgaattaaaacgccaaggtattaatgttactgggtggttacctgcggctcgctattcatctttacctgcattaggtgaaaacgtgtatgtttgtgggattaatccatttttaagtcgaactgctacttctttaatgcgtcgtcgtaaatgcaaattaatttcagctcctttcccaattggtccagatggtacaaaagcttgggtcgaaaaaatttgtaatgttttcggtgttacaccaactggtttagaagatcgtgaacgtcttgtttgggaaggtttaaaagattatttaaatttcgtaaaagggaaatctgttttctttatgggtgataatctgttagaaatttcattagcccgttttttaattcgctgtggtatgaccgtttatgaaatcggtattccgtacatggaccaacgatttcaagctggggaattagaattattaaaaaaaacatgcatggaaatgaacgtgcccctaccgcgtattgttgaaaaacctgataattactatcaaattcaacgtattaaagaattacaaccagatttagttattaccggcatggcccatgcaaacccactggaagcgcgcggcattactacgaaatggtccgttgaatttacgtttgcgcaaattcatgggtttggcaacgcacgtgatatcttagaattagttacaaaaccgttacgtcgtaataaaaatctatctaaatatcaatttccgttagatagctgggacaagcctgcttccgtaggcgctcacgaactgtcggcctaa
光非依存性プロトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＮ（ｃｈ１Ｎ）アミノ酸配列（配列番号１４）：
MLYSQFKHSVPLGRKSPLLSGGPPSGGRPTTAASGLGRNVAVRIGTPLGFALRAQVIMAAAGNTSGAPHPVGESQPALSQVDSQLVIECETGNYHTFCPISCVSWLYQKIEDSFFLVIGTKTCGYFLQNALGVMIFAEPRYAMAELEESDISAQLNDYKELKRLCLQIKQDRNPSVIVWIGTCTTEIIKMDLEGMAPKLEAEIGIPIVVARANGLDYAFTQGEDTVLAAMVQKCPELGAIPAIVPQIPSDSRTLSQLSVAASVPENSASGPEGEPSLAQKGMDSKLTNNSPCRVDSVSESTPAFPGRAPHVGKSTPQNLVLFGSLPSTMANQLEFELKRQGINVTGWLPAARYSSLPALGENVYVCGINPFLSRTATSLMRRRKCKLISAPFPIGPDGTKAWVEKICNVFGVTPTGLEDRERLVWEGLKDYLNFVKGKSVFFMGDNLLEISLARFLIRCGMTVYEIGIPYMDQRFQAGELELLKKTCMEMNVPLPRIVEKPDNYYQIQRIKELQPDLVITGMAHANPLEARGITTKWSVEFTFAQIHGFGNARDILELVTKPLRRNKNLSKYQFPLDSWDKPASVGAHELSA
光非依存性プロトクロロフィリドサブユニットＢ（ｃｈ１Ｂ）核酸配列（配列番号１５）：
atgaaattagcgtattggatgtatgcgggaccggctcatattggaacattacgagttgcaagctcgtttcgaaatgtgcatgctattatgcatgctcccttaggcgatgattattttaacgtaatgcgttcaatgttagaacgtgaacgtgattttacgccagtgacggcaagtattgttgatcgtcatgttttagctcgtggttcacaagaaaaagttgttgaaaacattcaacgaaaagataaagaagaatgtccggatttaattttattaacaccaacatgtacctcaagtattttgcaagaagatttacaaaattttgtaaatcgcgcggccgaagtagcaaagcgttcggatgttttattagctgacgttaaccattaccgagtgaatgaattacaagcggctgaccgtacgttagagcaaattgtacgcttttatttagaaaaagaagtaaataaacttcacgcggagttaggcggccttaaaaaaccgcttcgctttgcccagcgtacccaaaagccgtctgccaatattttaggcatgtttacactaggtttccataatcaacatgactgtcgtgaattaaaacgtttattaaatgatttaggtatcgaagtcaatgaagtgattcctgaaggtagttttgtacatggattaaaaaatttaccaaaagcgtggtttaacatcgtcccgtatcgtgaagttggtttaatgacggcaatttatttagaaaaagaatttggcatgccttatacctcaatcacgccaatgggcattattgacaccgcggcgtttattcgtgaaattgcggccatttgtagtcaaattagcacttcacaggcatctacaaactcaactgaaggactccagaggggagaaaatgtcagtttaactgaaactaattcgattatttttaataaagcaaaatatgaacaatacattaatcaacaaacgcattttgtttctcaagcagcttggttttcacgttctattgactgtcaaaatttaaccggtaaaaaaaccgttgtgtttggtgatgcaactcacgcggcaagtatgacgaaaattcttgtgcgcgaaatgggtattcatgttgtttgcgcgggcacgtattgtaaacatgatgcagattggtttagagagcaagtttcaggtttttgtgatcaagttttaattacagatgatcacagccaaattgcggaaatcattgctcaaattgaacctgcagccatttttggtacacaaatggaacgtcatgttgggaaaaggttagatattccttgtggggttatttctgcaccggtacatattcaaaacttcccactaggctttagaccgtttttagggtatgaaggtactaatcaaatttccgatttagtttataattcgtttagtttaggtatggaagatcacttactagaaattttcaacggtcatgacaataaagaagttattacacgttcgtattcttcagaaactgatttagaatggacaaaagaagcattagatgaactagctcgtgttcctggttttgttcgttcaaaagttaaacgtaatactgaaaaatttgcgcgtacaaataaaaatcaagttattactattgaagttatgtacgcagctaaagaagcggtatcagcgtaa
光非依存性プロトクロロフィリドサブユニットＢ（ｃｈ１Ｂ）アミノ酸配列（配列番号１６）：
MKLAYWMYAGPAHIGTLRVASSFRNVHAIMHAPLGDDYFNVMRSMLERERDFTPVTASIVDRHVLARGSQEKVVENIQRKDKEECPDLILLTPTCTSSILQEDLQNFVNRAAEVAKRSDVLLADVNHYRVNELQAADRTLEQIVRFYLEKEVNKLHAELGGLKKPLRFAQRTQKPSANILGMFTLGFHNQHDCRELKRLLNDLGIEVNEVIPEGSFVHGLKNLPKAWFNIVPYREVGLMTAIYLEKEFGMPYTSITPMGIIDTAAFIREIAAICSQISTSQASTNSTEGLQRGENVSLTETNSIIFNKAKYEQYINQQTHFVSQAAWFSRSIDCQNLTGKKTVVFGDATHAASMTKILVREMGIHVVCAGTYCKHDADWFREQVSGFCDQVLITDDHSQIAEIIAQIEPAAIFGTQMERHVGKRLDIPCGVISAPVHIQNFPLGFRPFLGYEGTNQISDLVYNSFSLGMEDHLLEIFNGHDNKEVITRSYSSETDLEWTKEALDELARVPGFVRSKVKRNTEKFARTNKNQVITIEVMYAAKEAVSA
光非依存性プロトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＬ（ｃｈ１Ｌ）核酸配列（配列番号１７）：
atgaaattagcagtttatggcaaaggtggtattggtaaatccacaacaagttgtaacatttcaattgcattagcaaaacgtggcaaaaaagtattacaaattggttgtgatccaaaacacgatagtacttttacattaaccggttttttaattccaacaattattgatactttacaaagtaaagattatcattacgaagatgtttggccggaagatgttatttaccaaggctacgggagtgtggattgtgttgaagcaggtggcccgccagccggcgccggctgtggtgggtatgttgttggtgaaacagttaaattattaaaagaattaaatgcattttatgaatatgatgttattctgtttgatgttttaggggatgttgtatgtggtgggtttgctgcacctttaaattacgccgactattgcattattgtcacagataatggctttgatgcgttatttgccgcaaaccgtattgctgcttcagtgcgcgaaaaagcgcgcattcacccattacgtttagctgggttaattgggaatcgtacagccaaacgcgatttaatcgataaatacgttgaagcgtgcccgatgccagtcttagaggtattaccgttaattgaagacattcgtgtgtcacgcgtaaaaggtaaaacattatttgaaatggcagaacatgattcatcattacactacatttgtgacttttatttaaatattgcggatcaattattaactgaaccagaaggtgttgttccgcgcgaattagcagaccgtgaattatttactctattatcagatttctatttaaacgctgggactcctagccctagtggatctgagttcggctcaggcgcccttagcggaacgagcggcgaaacagctcccggtaatatgggtcagcacatgagtaacgcagtaaaaacaaacgaacaggaaatgaatttctttcttgtgtaa
光非依存性プロトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＬ（ｃｈ１Ｌ）アミノ酸配列（配列番号１８）：
MKLAVYGKGGIGKSTTSCNISIALAKRGKKVLQIGCDPKHDSTFTLTGFLIPTIIDTLQSKDYHYEDVWPEDVIYQGYGSVDCVEAGGPPAGAGCGGYVVGETVKLLKELNAFYEYDVILFDVLGDVVCGGFAAPLNYADYCIIVTDNGFDALFAANRIAASVREKARIHPLRLAGLIGNRTAKRDLIDKYVEACPMPVLEVLPLIEDIRVSRVKGKTLFEMAEHDSSLHYICDFYLNIADQLLTEPEGVVPRELADRELFTLLSDFYLNAGTPSPSGSEFGSGALSGTSGETAPGNMGQHMSNAVKTNEQEMNFFLV
マグネシウムキラターゼサブユニットＨ（ＣＨＬＨ２）核酸配列（配列番号１９）：
atgcggattgtgctggtcagcggcttcgagagctttaacgtgggcctgtacaaggatgcggcggagctgctgaagcgctccatgcccaacgtcacactccaggtgttctccgaccgcgacctggcctccgacgccacccgctcccggctggaggcggctctggggcgcgccgacatcttcttcggatcactgctgttcgactacgaccaggtggagtggctacgggcccggctggagcgggtgcctgtgcggctagtgtttgagtcggcgttggagctcatgagctgcaacaaggtggggtcgttcatgatgggcggcggcggtcccggcggcggcccgcccggcaaggcgcccggcccgccgcccgcggtgaagaaggttctctccatgtttggaagcggtcgcgaggaggacaagatgggcggctcctccaatgtggtggccatgttcagttacctggtggagaccctgatggagccaacgggtgggttatttggtagttggtggttgtgttatggttggccgtttcggttgggtgatctgggctggtatctacaacccccctcaaccctcacgcctccaggctacgtgccgccgcctgtggtggagactcccgcactgggctgcctccacccctccgcgcccggccgctacttcgagtcccccgccgagtacatgaagtggtacgccagggagggcccgctgcgcggcacgggcgccccggtggttggcgtgctgctgtaccgcaagcatgtgatcaccgaccagccgtacatcccgcagctggtcagccagctggaggcggaggggctgctgcccgtgcccatcttcatcaacggcgtggaggcgcacaccgtggttcgcgacctgctgacctccgtgcacgagcaggatctgcttgcacgcggcgagacgggcgccatcagccccaccctgaagcgggacgcggtcaaggtggacgcggtggtgagcaccattggcttcccgctggtgggcggccccgccggcaccatggagggcgggcggcaggcggaggtggccaaggccatcctgggcgccaaggacgtgccgtacacggtggcggcgccgctgcttattcaggacatggagagctggagcagggacggcgtggcgggtctccagagtgtggtgctgtactcgctgccggagctggacggcgcagtggacacggtgccactgggggggctggtgggggacgacatctacctggtgccggagcgggtgaagaagctggcggggcggctcaagtcgtggcgtacgacacgcactaagcatgcctctgtttgtgacgtccagcccctcccccccccgtctcccctctccaccctccctctcccttcctctcccttcctctcactctccaccctcttccccctccgcccaaacataacgaggcgggggctgctgggcgcaagcgggccctggagtacccgctgcgacctagctagtccaactccacccatcccccaatgccgcaatagctttccggagatgagcacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacacgccacccacgcacacacacacacacacacgctccccccgctcgccacacccccatcccaccccacccgcaggagctgctgacgtaccccgcggactggggcccggccgagtggggcccgctgccctacctgcccgaccccgacgtgctggttcgccgcatggaggcgcagtggggcgagctgcgagcctaccgcggcctcaacacctcggcgcgcggcatgttccaggagtacggggctgacgtggtcctgcacttcggcatgcacggcaccgtggagtggttgcctggggcgccgctggggaacaacggcctcagctggagcgacgtgctgctcggcgagctgccaaacgtgtacgtgtacgctgccaacaacccctccgagtccatcgtggcaaagcggcgcggctacggcaccatcgtcagccacaacgtgccgccgtacgggcgggcgggtctgtacaagcagctttccagcctcaaggagacgcttcaggagtaccgcgaggccgcgcaggccgcacgtgcccgagcaggagccagcagcagcagcggcagtagcagcagtagcagtagcagcggcagtggcagtagcagcagcagtgtggagctgcgggcggcgttggcaccggtgttcgacgcctacactgaccgcctgtatgcctacctgcagctgctggaggggcggctgttcagcgaggggctacacgtactgggagcgccgccggcgccgccgcaggtgggtggttttcccgcgagcttccaacggtaccgtaaactgcccaactgcccaacttctccccaaacacaggaggctgtcaagatccggaacctgctcatgcagaacacgcaggagctggacgggctgctcaagggcctgggtgggcgttacgtgcttcccgaggcgggcggcgacctgctgcgggacgggtcgggcgtgctgcccaccggccgcaacatccacgcactggacccctaccgcatgccctcccccgccgccatggcccgtggggcggcggtggcggcggccattcttgagcagcaccgggcggctaacagcggggcgtggcccgagacctgcgccgtcaacctgtgggggctggactccatcaagagcaagggcgagagtgtgggggtggtgctggcgctggtgggggcggtgccggtgcgcgagggtacgggccgcgtcgcgcgcttccaactggtgccgctgtcagagttgggccggccgcgtgtggacgtgctttgtaacatgagcggcatcttccgcgactccttccagaacgtggtggagctgctcgacgacctgtttgcaagggccgccgccgccgctgacgagccagatgacatgaacttcatcgccaaacacgcccgagccatggagaagcagggcctgtccgccacctcggcccgcctgttctccaacccggctggcgactacgggtcgatggtcaacgagcgagtggggcagggcagctgggccaacggcgacgagctgggtgacacgtgggcggcccgcaacgccttcagctacggccgaggcaaggagcgaggcacggcgcggcccgaggtgctgcaggcgctgctcaagaccacggaccggatcgtgcagcagatcgacagtgtggagtacggcctgacagacatccaggagtactacgccaacacgggcgccctcaagagagccgccgaggtggccaaaggcgacccgggccccggtggccggcggccgcgcgtggggtgttccattgtggaggcctttggcggcgcgggcgcgggcgcgggcggcgccggtggagcgggcgtgccgccgcctcgcgagctggaggaggtgctgcgcctggagtaccgctcgaagctgctcaaccccaagtgggcccgggccatggcggcgcagggcagcggcggcgcctacgagatcagtcagcgcatgacggcgttggtgggctggggcgccaccaccgatttcagggagggctgggtgtgggacccaggcgccatggacacgtatgtgggcgatgaggagatggccagcaagctcaagaagaacaacccgcaggcctttgccaacgtgctgcggcgcatgctggaggcggcgggccgcggcatgtggagccccaacaaggaccagctggcacagctcaagtcgctgtacagcgagatggacgaccagctggagggggtgacg
マグネシウムキラターゼサブユニットＨ（ＣＨＬＨ２）アミノ酸配列（配列番号２０）：
MRIVLVSGFESFNVGLYKDAAELLKRSMPNVTLQVFSDRDLASDATRSRLEAALGRADIFFGSLLFDYDQVEWLRARLERVPVRLVFESALELMSCNKVGSFMMGGGGPGGGPPGKAPGPPPAVKKVLSMFGSGREEDKMGGSSNVVAMFSYLVETLMEPTGGLFGSWWLCYGWPFRLGDLGWYLQPPSTLTPPGYVPPPVVETPALGCLHPSAPGRYFESPAEYMKWYAREGPLRGTGAPVVGVLLYRKHVITDQPYIPQLVSQLEAEGLLPVPIFINGVEAHTVVRDLLTSVHEQDLLARGETGAISPTLKRDAVKVDAVVSTIGFPLVGGPAGTMEGGRQAEVAKAILGAKDVPYTVAAPLLIQDMESWSRDGVAGLQSVVLYSLPELDGAVDTVPLGGLVGDDIYLVPERVKKLAGRLKSWRTTRTKHASVCDVQPLPPPSPLSTLPLPSSPFLSLSTLFPLRPNITRRGLLGASGPWSTRCDLASPTPPIPQCRNSFPEMSTHTHTHTHTHTHTHTHTHTRHPRTHTHTHAPPARHTPIPPHPQELLTYPADWGPAEWGPLPYLPDPDVLVRRMEAQWGELRAYRGLNTSARGMFQEYGADVVLHFGMHGTVEWLPGAPLGNNGLSWSDVLLGELPNVYVYAANNPSESIVAKRRGYGTIVSHNVPPYGRAGLYKQLSSLKETLQEYREAAQAARARAGASSSSGSSSSSSSSGSGSSSSSVELRAALAPVFDAYTDRLYAYLQLLEGRLFSEGLHVLGAPPAPPQVGGFPASFQRYRKLPNCPTSPQTQEAVKIRNLLMQNTQELDGLLKGLGGRYVLPEAGGDLLRDGSGVLPTGRNIHALDPYRMPSPAAMARGAAVAAAILEQHRAANSGAWPETCAVNLWGLDSIKSKGESVGVVLALVGAVPVREGTGRVARFQLVPLSELGRPRVDVLCNMSGIFRDSFQNVVELLDDLFARAAAAADEPDDMNFIAKHARAMEKQGLSATSARLFSNPAGDYGSMVNERVGQGSWANGDELGDTWAARNAFSYGRGKERGTARPEVLQALLKTTDRIVQQIDSVEYGLTDIQEYYANTGALKRAAEVAKGDPGPGGRRPRVGCSIVEAFGGAGAGAGGAGGAGVPPPRELEEVLRLEYRSKLLNPKWARAMAAQGSGGAYEISQRMTALVGWGATTDFREGWVWDPGAMDTYVGDEEMASKLKKNNPQAFANVLRRMLEAAGRGMWSPNKDQLAQLKSLYSEMDDQLEGVT
マグネシウムキラターゼサブユニット１（ＣＨＬＩ１）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）核酸配列（配列番号２１）：
atggccctgaacatgcgtgtttcctcttccaaggtcgctgccaagcagcagggccgcatctccgcggtgccggttgtgtcgagcaaggtggcctcctccgcccgcgtggcccccttccagggcgctcccgtggccgcgcagcgcgctgctctgctggtgcgcgccgctgccgctactgaggtcaaggctgctgagggccgcactgagaaggagctgggccaggcccgccccatcttccccttcaccgccatcgtgggccaggatgagatgaagctggcgctgattctgaacgtgatcgaccccaagatcggtggtgtcatgatcatgggcgaccgtggcactggcaagtccaccaccattcgtgccctggcggatctgctgcccgagatgcaggtggttgccaacgacccctttaactcggaccccaccgaccccgagctgatgagcgaggaggtgcgcaaccgcgtcaaggccggcgagcagctgcccgtgtcttccaagaagattcccatggtggacctgcccctgggcgccactgaggaccgcgtgtgcggcaccatcgacatcgagaaggcgctgaccgagggtgtcaaggcgttcgagcccggcctgctggccaaggccaaccgcggcatcctgtacgtggatgaggtcaacctgctggacgaccacctggtcgatgtgctgctggactcggccgcctccggctggaacaccgtggagcgcgagggtatctccatcagccaccccgcccgcttcatcctggtcggctcgggcaaccccgaggagggtgagctgcgcccccagctgctggatcgcttcggcatgcacgcccagatcggcaccgtcaaggacccccgcctgcgtgtgcagatcgtgtcgcagcgctcgaccttcgacgagaaccccgccgccttccgcaaggactacgaggccggccagatggcgctgacccagcgcatcgtggacgcgcgcaagctgctgaagcagggcgaggtcaactacgacttccgcgtcaagatcagccagatctgctcggacctgaacgtggacggcatccgcggcgacatcgtgaccaaccgcgccgccaaggccctggccgccttcgagggccgcaccgaggtgacccccgaggacatctaccgtgtcattcccctgtgcctgcgccaccgcctccggaaagaccccctggctgagatcgacgacggtgaccgcgtgcgtgagatcttcaagcaggtgttcggcatggagtaa
マグネシウムキラターゼサブユニット１（ＣＨＬＩ１）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）アミノ酸配列（配列番号２２）：
MALNMRVSSSKVAAKQQGRISAVPVVSSKVASSARVAPFQGAPVAAQRAALLVRAAAATEVKAAEGRTEKELGQARPIFPFTAIVGQDEMKLALILNVIDPKIGGVMIMGDRGTGKSTTIRALADLLPEMQVVANDPFNSDPTDPELMSEEVRNRVKAGEQLPVSSKKIPMVDLPLGATEDRVCGTIDIEKALTEGVKAFEPGLLAKANRGILYVDEVNLLDDHLVDVLLDSAASGWNTVEREGISISHPARFILVGSGNPEEGELRPQLLDRFGMHAQIGTVKDPRLRVQIVSQRSTFDENPAAFRKDYEAGQMALTQRIVDARKLLKQGEVNYDFRVKISQICSDLNVDGIRGDIVTNRAAKALAAFEGRTEVTPEDIYRVIPLCLRHRLRKDPLAEIDDGDRVREIFKQVFGME
マグネシウムキラターゼサブユニット１（ＣＨＬＩ２）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）核酸配列（配列番号２３）：
atgcagagtctccagggtcagcgcgcgttcactgcggtgcgccagggtcgggcgggtcccctgcggactcgcctggtcgtgcgctcgtctgttgccttgccatccacgaaagccgcgaagaagccgaacttcccgttcgtcaagattcagggccaggaggagatgaagcttgcactgctgctgaacgtggtcgaccccaacatcggcggagtgcttattatgggtgaccgcggcactgccaagtcggtcgcggtccgcgccctggtggatatgcttcccgacattgacgtggttgagggcgacgccttcaacagctcccccaccgaccccaagttcatgggccccgacaccctgcagcgcttccgcaacggcgagaagctgcccaccgtccgcatgcggacccccctggtggagctgcctctgggcgccaccgaggaccgcatctgcggcaccatcgacatcgagaaggcgctgacgcagggcatcaaggcctacgagcccggcctgctggccaaggccaaccgcggcatcctgtatgtggacgaggtgaacctgctggatgatggcctggttgatgtcgtgctggactcgtcggctagcggcctgaacactgtggagcgtgagggtgtgtccattgtgcaccctgcccgcttcatcatgattggctcaggcaacccccaggagggtgagctgcgcccgcagctgctggatcgcttcggcatgagcgtcaacgtggccacgctgcaggacaccaagcagcgcacgcagctggtgctggaccggcttgcgtacgaggcggaccctgacgcatttgtggactcgtgcaaggccgagcagacggcgctcacggacaagctggaggcggcccgccagcgcctgcggtccgtcaagatcagcgaggagctgcagatcctgatctcggacatttgctcgcgcctggatgtggatggcctgcgcggtgacattgtgatcaaccgcgccgccaaggcgcttgtggccttcgagggccgcaccgaggtgaccacgaatgacgtggagcgcgtcatctcgggctgcctcaaccaccgcctgcgcaaggacccgctggaccccattgacaacggcaccaaggtggccatcctgttcaagcgcatgaccgaccccgagatcatgaagcgcgaggaggaggccaagaagaagcgcgaggaggcggccgccaaggccaaggcggagggcaaggcggaccgccccacgggcgccaaggctggcgcctgggctggcttgccccctcgtcggtaa
マグネシウムキラターゼサブユニット１（ＣＨＬＩ２）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）アミノ酸配列（配列番号２４）：
MQSLQGQRAFTAVRQGRAGPLRTRLVVRSSVALPSTKAAKKPNFPFVKIQGQEEMKLALLLNVVDPNIGGVLIMGDRGTAKSVAVRALVDMLPDIDVVEGDAFNSSPTDPKFMGPDTLQRFRNGEKLPTVRMRTPLVELPLGATEDRICGTIDIEKALTQGIKAYEPGLLAKANRGILYVDEVNLLDDGLVDVVLDSSASGLNTVEREGVSIVHPARFIMIGSGNPQEGELRPQLLDRFGMSVNVATLQDTKQRTQLVLDRLAYEADPDAFVDSCKAEQTALTDKLEAARQRLRSVKISEELQILISDICSRLDVDGLRGDIVINRAAKALVAFEGRTEVTTNDVERVISGCLNHRLRKDPLDPIDNGTKVAILFKRMTDPEIMKREEEAKKKREEAAAKAKAEGKADRPTGAKAGAWAGLPPRR
マグネシウムキラターゼサブユニットＤ（ＣＨＬＤ）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）核酸配列（配列番号２５）：
atgaagtctctctgccatgagctcgctggccccagcgttactgggtgcggccggcgaagcctccggaaggctttcagcggtgccaagattgcgcaggtctctcgccccgctgtgcttaacagcgtgcagcgccaacagcgtctcgcctgttctgccgtggccgagctctccgctgctgagctgcgcgccatgaaggtgtctgaggaggactccaagggcttcgatgcggatgtgtcgacccgcctggcccgctcgtaccctctggcggccgtggtgggccaggacaacatcaagcaggcgctgctgctgggcgccgtggacaccgggctgggcggcatcgccatcgccggtcgccgcggtaccgccaagtccatcatggctcgcggcctgcacgctctgctgccgcccattgaggtggtggagggcagcatctgcaacgccgaccccgaggacccccgctcctgggaggctggcctggctgagaagtatgcgggcggccctgtgaagaccaagatgcgctcggcgccgtttgtgcagatccctctgggtgtgactgaggaccgcttggtgggcactgtggacattgaggcgtccatgaaggagggcaagactgtgttccagcccggcctgctggctgaggcgcaccgcggcatcctgtacgtggacgagatcaacctgctggatgacggcattgccaacctgctgctgtccatcctgtcggacggagtcaacgtggtggagcgcgagggcatctccatcagccacccctgccggccgctgctgattgccacctacaaccccgaggagggccctctgcgtgagcacctgctggaccgcatcgccattggcctcagcgccgacgtccccagcaccagcgacgagcgcgtcaaggccattgacgcagccatccgcttccaggacaagccgcaggacactattgacgacaccgcggagctcaccgacgccctgcgcacctcggtcatcctggctcgcgagtacctgaaggacgtgaccatcgcgccggagcaggtgacctacattgtggaggaggcgcgccgcggcggagtccaggggcaccgcgcggagctgtacgcggtcaagtgtgccaaggcgtgtgcggctctggagggccgtgagcgtgtgaacaaggatgacctgcgccaggccgtgcagctggtcatcctgccgcgcgccaccatcctggaccagcccccgcccgagcaggagcagcccccgccgccgcccccgccccctcccccgccgccgccgcaggaccaaatggaggacgaggaccaggaggagaaggaggacgagaaggaggaggaggagaaggagaacgaggaccaggacgagcccgagatccctcaggagttcatgtttgagtccgagggcgtcatcatggacccctccatcctcatgttcgcgcagcagcagcagcgcgcgcagggccgctccggccgcgccaagacgctcatcttcagcgacgaccgcggccgctacatcaagcccatgctgcccaagggtgacaaggtcaagcgcctggcagtggacgccacgcttcgcgccgccgcgccctaccagaagattcgccggcagcaggccatcagcgagggcaaggtgcagcgcaaggtgtacgtggacaagccagacatgcgctccaagaagctggcccgcaaggccggtgcgctggtgatttttgttgtggacgcgtccggctccatggctctgaaccgcatgagcgccgccaagggcgcctgcatgcgcctgctggctgagtcgtacaccagccgcgaccaggtgtgcctcatccccttctacggcgacaaggccgaggtgctgctgccgccctccaagtccatcgccatggcccgccgccgcctggactcgctgccctgcggcggcggctcgccccttgcgcacggcctgtccacggcggtacgtgtgggcatgcaggccagccaggcgggcgaggtgggccgcgtcatgatggtgctcatcacggacggccgcgccaacgtcagcctggccaagtccaacgaggaccccgaggcgctcaagcccgacgcgcccaagcccaccgccgactcgctgaaggacgaggtgcgcgacatggccaagaaggccgcgtccgccggcatcaacgtgcttgtcattgacacggagaacaagttcgtgagcaccggctttgcggaggagatctccaaggcagcgcagggcaagtactactacctgcccaacgccagcgacgccgccatcgcggcggccgcgtccggcgccatggccgcggccaagggcggctactag
マグネシウムキラターゼサブユニットＤ（ＣＨＬＤ）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）アミノ酸配列（配列番号２６）：
MKSLCHELAGPSVTGCGRRSLRKAFSGAKIAQVSRPAVLNSVQRQQRLACSAVAELSAAELRAMKVSEEDSKGFDADVSTRLARSYPLAAVVGQDNIKQALLLGAVDTGLGGIAIAGRRGTAKSIMARGLHALLPPIEVVEGSICNADPEDPRSWEAGLAEKYAGGPVKTKMRSAPFVQIPLGVTEDRLVGTVDIEASMKEGKTVFQPGLLAEAHRGILYVDEINLLDDGIANLLLSILSDGVNVVEREGISISHPCRPLLIATYNPEEGPLREHLLDRIAIGLSADVPSTSDERVKAIDAAIRFQDKPQDTIDDTAELTDALRTSVILAREYLKDVTIAPEQVTYIVEEARRGGVQGHRAELYAVKCAKACAALEGRERVNKDDLRQAVQLVILPRATILDQPPPEQEQPPPPPPPPPPPPPQDQMEDEDQEEKEDEKEEEEKENEDQDEPEIPQEFMFESEGVIMDPSILMFAQQQQRAQGRSGRAKTLIFSDDRGRYIKPMLPKGDKVKRLAVDATLRAAAPYQKIRRQQAISEGKVQRKVYVDKPDMRSKKLARKAGALVIFVVDASGSMALNRMSAAKGACMRLLAESYTSRDQVCLIPFYGDKAEVLLPPSKSIAMARRRLDSLPCGGGSPLAHGLSTAVRVGMQASQAGEVGRVMMVLITDGRANVSLAKSNEDPEALKPDAPKPTADSLKDEVRDMAKKAASAGINVLVIDTENKFVSTGFAEEISKAAQGKYYYLPNASDAAIAAAASGAMAAAKGGY
マグネシウムキラターゼサブユニットＨ（ＣＨＬＨ１）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）核酸配列（配列番号２７）：
atgcagacttcctcgcttcttggccggcgcacggcccacccggctgcgggcgcgacgcccaagccggttgcgccctcgccccgcgtggctagcacccgccaggtcgcgtgcaatgtggcgactggaccccggccgcccatgaccaccttcaccggtggcaacaagggccctgctaagcagcaggtgtcgctggatctgcgcgacgagggcgctggcatgttcaccagcaccagcccggagatgcgccgtgtcgtccctgacgatgtgaagggtcgcgttaaggtgaaggttgtgtacgtggtgctggaggcccagtaccagtcggccatcagcgctgcggtgaagaacatcaacgccaagaactccaaggtgtgcttcgaggtggtgggctacctgctggaggagctgcgtgaccagaagaacctcgatatgctcaaggaggatgtggcctctgccaacatcttcatcggctcgctcatcttcattgaggagcttgccgagaagattgtggaggcggtgagccccctgcgcgagaagctggacgcgtgcctgatcttcccgtccatgccggcggtcatgaagctgaacaagctgggcacgttttcgatggctcagctgggccagtcgaagtcggtgttctcggagttcatcaagtctgctcgcaagaacaacgacaacttcgaggagggcttgctgaagctggtgcgcaccctgcctaaggtgctgaagtatctgccctcggacaaggcgcaggacgccaagaacttcgtgaacagcctgcagtactggctgggcggtaactcggacaacctggagaacctgctgctgaacaccgtcagcaactacgtgcccgctctgaagggcgtggacttcagcgtggctgagcccaccgcctaccccgatgtgggtatctggcaccctctggcctcgggcatgtacgaggacctgaaggagtacctgaactggtacgacacccgcaaggacatggtcttcgccaaggacgcccccgtcattggcctggtgctgcagcgctcgcacctggtgactggcgatgagggccactacagcggcgtggtcgctgagctggagagccgcggtgctaaggtcatccccgtctttgccggtggcctggacttctccgcccccgtcaagaagttcttctacgaccccctgggctctggccgcacgttcgtggacaccgttgtgtcgctgaccggcttcgcgctggtgggcggccccgcgcgccaggacgcgccgaaggccattgaggcgctgaagaacctgaacgtgccctacctggtgtcgctgccgctggtgttccagaccactgaggagtggctggacagcgagctgggcgtgcaccccgtccaggtggctctgcaggttgccctgcccgagctggatggtgccatggagcccatcgtgttcgctggccgtgactcgaacaccggcaagtcgcactcgctgcccgaccgcatcgcttcgctgtgcgctcgcgccgtgaactgggccaacctgcgcaagaagcgcaacgccgagaagaagctggccgtcaccgtgttcagcttcccccctgacaagggcaacgtcggcactgccgcctacctgaacgtgttcggctccatctaccgcgtgctgaagaacctgcagcgcgagggctacgacgtgggcgccctgccgccctcggaggaggatctgatccagtcggtgctgacccagaaggaggccaagttcaactcgaccgacctgcacatcgcctacaagatgaaggtggacgagtaccagaagctgtgcccttacgccgaggcgctggaggagaactggggcaagccccccggcaccctgaacaccaacggccaggagctgctggtgtacggccgccagtacggcaacgtcttcatcggcgtgcagcccaccttcggctacgagggcgacccgatgcgcctgctgttctcgaagtcggccagcccccaccacggcttcgccgcctactacaccttcctggagaagatcttcaaggccgacgccgtgctgcacttcggcacccacggctcgctggagttcatgcccggcaagcaggtcggcatgtcgggtgtgtgctaccccgactcgctgatcggcaccatccccaacctctactactacgccgccaacaacccgtctgaggccaccatcgccaagcgccgctcgtacgccaacaccatttcgtacctgacgccgcctgccgagaacgccggcctgtacaagggcctgaaggagctgaaggagctgatcagctcgtaccagggcatgcgtgagtctggccgcgccgagcagatctgcgccaccatcattgagaccgccaagctgtgcaacctggaccgcgacgtgaccctgcccgacgctgacgccaaggacctgaccatggacatgcgcgacagcgttgtgggccaggtgtaccgcaagctgatggagattgagtcccgcctgctgccctgcggcctgcacgtggtgggctgcccgcccaccgccgaggaggccgtggccaccctggtcaacatcgctgagctggaccgcccggacaacaacccccccatcaagggcatgcccggcatcctggcccgcgccattggtcgcgacatcgagtcgatttacagcggcaacaacaagggcgtcctggctgacgttgaccagctgcagcgcatcaccgaggcctcccgcacctgcgtgcgcgagttcgtgaaggaccgcaccggcctgaacggccgcatcggcaccaactggatcaccaacctgctcaagttcaccggcttctacgtggacccctgggtgcgcggcctgcagaacggcgagttcgccagcgccaaccgcgaggagctgatcaccctgttcaactacctggagttctgcctgacccaggtggtcaaggacaacgagctgggcgccctggtagaggcgctgaacggccagtacgtcgagcccggccccggcggtgaccccatccgcaaccccaacgtgctgcccaccggcaagaacatccacgccctggaccctcagtcgattcccactcaggccgcgctgaagagcgcccgcctggtggtggaccgcctgctggaccgcgagcgcgacaacaacggcggcaagtaccccgagaccatcgcgctggtgctgtggggcactgacaacatcaagacctacggcgagtcgctggcccaggtcatgatgatggtcggtgtcaagcccgtggccgacgccctgggccgcgtgaacaagctggaggtgatccctctggaggagctgggccgcccccgcgtggacgtggttgtcaactgctcgggtgtgttccgcgacctgttcgtgaaccagatgctgctgctggaccgcgccatcaagctggcggccgagcaggacgagcccgatgagatgaacttcgtgcgcaagcacgccaagcagcaggcggcggagctgggcctgcagagcctgcgcgacgcggccacccgtgtgttctccaacagctcgggctcctactcgtccaacgtcaacctggcggtggagaacagcagctggagcgacgagtcgcagctgcaggagatgtacctgaagcgcaagtcgtacgccttcaactcggaccgccccggcgccggtggcgagatgcagcgcgacgtgttcgagacggccatgaagaccgtggacgtgaccttccagaacctggactcgtccgagatctcgctgaccgatgtgtcgcactacttcgactccgaccccaccaagctggtggcgtcgctgcgcaacgacggccgcacccccaacgcctacatcgccgacaccaccaccgccaacgcgcaggtccgcactctgggtgagaccgtgcgcctggacgcccgcaccaagctgctcaaccccaagtggtacgagggcatgcttgcctcgggctacgagggcgtgcgcgagatccagaagcgcatgaccaacaccatgggctggtcggccacctcgggcatggtggacaactgggtgtacgacgaggccaactcgaccttcatcgaggatgcggccatggccgagcgcctgatgaacaccaaccccaacagcttccgcaagctggtggccaccttcctggaggccaacggccgcggctactgggacgccaagcccgagcagctggagcgcctgcgccagctgtacatggacgtggaggacaagattgagggcgtcgaataa
マグネシウムキラターゼサブユニットＨ（ＣＨＬＨ１）コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）アミノ酸配列（配列番号２８）：
MQTSSLLGRRTAHPAAGATPKPVAPSPRVASTRQVACNVATGPRPPMTTFTGGNKGPAKQQVSLDLRDEGAGMFTSTSPEMRRVVPDDVKGRVKVKVVYVVLEAQYQSAISAAVKNINAKNSKVCFEVVGYLLEELRDQKNLDMLKEDVASANIFIGSLIFIEELAEKIVEAVSPLREKLDACLIFPSMPAVMKLNKLGTFSMAQLGQSKSVFSEFIKSARKNNDNFEEGLLKLVRTLPKVLKYLPSDKAQDAKNFVNSLQYWLGGNSDNLENLLLNTVSNYVPALKGVDFSVAEPTAYPDVGIWHPLASGMYEDLKEYLNWYDTRKDMVFAKDAPVIGLVLQRSHLVTGDEGHYSGVVAELESRGAKVIPVFAGGLDFSAPVKKFFYDPLGSGRTFVDTVVSLTGFALVGGPARQDAPKAIEALKNLNVPYLVSLPLVFQTTEEWLDSELGVHPVQVALQVALPELDGAMEPIVFAGRDSNTGKSHSLPDRIASLCARAVNWANLRKKRNAEKKLAVTVFSFPPDKGNVGTAAYLNVFGSIYRVLKNLQREGYDVGALPPSEEDLIQSVLTQKEAKFNSTDLHIAYKMKVDEYQKLCPYAEALEENWGKPPGTLNTNGQELLVYGRQYGNVFIGVQPTFGYEGDPMRLLFSKSASPHHGFAAYYTFLEKIFKADAVLHFGTHGSLEFMPGKQVGMSGVCYPDSLIGTIPNLYYYAANNPSEATIAKRRSYANTISYLTPPAENAGLYKGLKELKELISSYQGMRESGRAEQICATIIETAKLCNLDRDVTLPDADAKDLTMDMRDSVVGQVYRKLMEIESRLLPCGLHVVGCPPTAEEAVATLVNIAELDRPDNNPPIKGMPGILARAIGRDIESIYSGNNKGVLADVDQLQRITEASRTCVREFVKDRTGLNGRIGTNWITNLLKFTGFYVDPWVRGLQNGEFASANREELITLFNYLEFCLTQVVKDNELGALVEALNGQYVEPGPGGDPIRNPNVLPTGKNIHALDPQSIPTQAALKSARLVVDRLLDRERDNNGGKYPETIALVLWGTDNIKTYGESLAQVMMMVGVKPVADALGRVNKLEVIPLEELGRPRVDVVVNCSGVFRDLFVNQMLLLDRAIKLAAEQDEPDEMNFVRKHAKQQAAELGLQSLRDAATRVFSNSSGSYSSNVNLAVENSSWSDESQLQEMYLKRKSYAFNSDRPGAGGEMQRDVFETAMKTVDVTFQNLDSSEISLTDVSHYFDSDPTKLVASLRNDGRTPNAYIADTTTANAQVRTLGETVRLDARTKLLNPKWYEGMLASGYEGVREIQKRMTNTMGWSATSGMVDNWVYDEANSTFIEDAAMAERLMNTNPNSFRKLVATFLEANGRGYWDAKPEQLERLRQLYMDVEDKIEGVE
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＢ（ｃｈ１Ｂ）核酸配列（配列番号２９）：
atgaaattagcttattggatgtacgcaggtcccgctcatatcggtgtgttgcgtgttagcagctcttttaaaaatgtacatgccattatgcatgctcctttaggagatgattattttaatgtaatgcgttccatgttagaacgtgaacgtgattttacaccagtaacagccagtattgtagatcgtcatgttttagcaagaggatcgcaagaaaaagtggttgaaaatattacgcgaaaaaataaagaagaaactcctgatttaattttattaactcctacttgtacgtcaagcattttacaagaagatttacacaattttgttgaatcggcattagctaaaccagtacaaatagatgaacatgcagaccataaagtaactcaacaaagtgcactttcaagtgtatcccctttactaccgcttgaagaaaatacattaatagtaagtgaactagataagaagcttagcccgtctagcaagttgcatattaatatgcccaatatttgtattcccgaaggagaaggggaaggggagcagactaaaaattcaatttttgttaaatctgcaactttaacaaatttgtcagaagaggaactattaaatcaagaacatcataccaaaacaagaaatcactctgacgttattttagctgatgtaaaccattatcgtgtaaatgaattacaagctgcagatcgtactcttgaacaaattgtacgttattatatttctcaagcacaaaaacaaaattgtttaaacattactaaaacagccaaaccatctgtaaatattattggtatttttactttgggttttcataatcaacatgattgtcgtgaattaaaacgtttatttaatgatttaggtattcaaatcaatgaaatcatacctgaaggcggaaatgtacacaacttaaaaaaattaccccaagcttggtttaattttgtgccctaccgtgaaattggcttaatgactgctatgtatttaaaatccgagtttaatatgccttacgtcgcaattactcctatgggattaattgatacggctgcttgtattcgttcaatttgtaaaatcattacaactcaattattaaatcagacggctacagtgcaggagccatcaaaatttatttacccgaaggcgacgtcattagaacaaaccaatattctcgaaacctctcaaaaagaaactattcttaaagacaatccagatagcggaaataccctttctacaactgtagaagaaattgaaactttatttaataaatatatcgatcaacaaactcgttttgtttcccaagcagcctggttttcacgttctattgactgtcaaaatttaacaggtaaaaaagccgtagttttcggagatgctacacattcagctgccatgacaaaattattagcacgtgaaatgggtattaaggtttcatgcgctggaacttattgcaaacacgatgcggattggtttagagagcaagttagtgggttttgtgatcaagttttaattaccgatgatcacacacaagtaggggatatgattgcacaattagaacctgcagccatttttgggacacaaatggaacgtcacgttggtaaacgtttagatattccatgtggtgttatatctgctcctgtgcatattcaaaactttccgttaggttatcgaccttttttaggttatgaaggtacaaatcaaatagctgatttagtgtataattcatttaatcttggaatggaagaccatttattacaaatttttggaggtcatgattcagaaaacaattcgtcaattgcaacgcatttgaatacaaataacgcaataaatttagcgccaggatatttacctgagggagaaggcagtagtagaacttcaaatgtagtgtctacaatttctagtgaaaaaaaagccattgtatggtctccagaaggtttagcagaattaaataaagtcccaggatttgttcgaggaaaagttaaacgtaatacggaaaaatatgctttacaaaaaaattgttcgatgattactgtagaagttatgtatgcagcaaaagaagctttgtcggcttaa
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＢ（ｃｈ１Ｂ）アミノ酸配列（配列番号３０）：
MKLAYWMYAGPAHIGVLRVSSSFKNVHAIMHAPLGDDYFNVMRSMLERERDFTPVTASIVDRHVLARGSQEKVVENITRKNKEETPDLILLTPTCTSSILQEDLHNFVESALAKPVQIDEHADHKVTQQSALSSVSPLLPLEENTLIVSELDKKLSPSSKLHINMPNICIPEGEGEGEQTKNSIFVKSATLTNLSEEELLNQEHHTKTRNHSDVILADVNHYRVNELQAADRTLEQIVRYYISQAQKQNCLNITKTAKPSVNIIGIFTLGFHNQHDCRELKRLFNDLGIQINEIIPEGGNVHNLKKLPQAWFNFVPYREIGLMTAMYLKSEFNMPYVAITPMGLIDTAACIRSICKIITTQLLNQTATVQEPSKFIYPKATSLEQTNILETSQKETILKDNPDSGNTLSTTVEEIETLFNKYIDQQTRFVSQAAWFSRSIDCQNLTGKKAVVFGDATHSAAMTKLLAREMGIKVSCAGTYCKHDADWFREQVSGFCDQVLITDDHTQVGDMIAQLEPAAIFGTQMERHVGKRLDIPCGVISAPVHIQNFPLGYRPFLGYEGTNQIADLVYNSFNLGMEDHLLQIFGGHDSENNSSIATHLNTNNAINLAPGYLPEGEGSSRTSNVVSTISSEKKAIVWSPEGLAELNKVPGFVRGKVKRNTEKYALQKNCSMITVEVMYAAKEALSA
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＬ（ｃｈＩＬ）核酸配列（配列番号３１）：
atgaaattagctgtttacggaaaaggtggtattggaaaatcaacgacaagttgtaatatttcgattgctttacgaaaacgtggtaaaaaagtgttacaaattggttgtgatcctaaacatgatagtacttttacattgacagggtttttaattccaaccattattgatacattaagttctaaagattatcattatgaagatatttggcccgaagatgttatttacggaggttatgggggtgtagattgtgttgaagctggaggaccacctgccggtgcggggtgtggtggttatgttgtaggtgaaacggtaaaacttttaaaagagttaaatgcttttttcgaatacgatgttattttatttgatgttttaggtgatgttgtttgtggtggctttgctgctccattaaactacgctgattattgtattattgtaactgataatggttttgatgctttatttgctgcaaatcgtattgcagcttcagttcgtgaaaaagcacgtacacatccattgcgtttagcgggtttaatcggaaatcgtacatcaaaacgtgatttaattgataaatatgtagaagcttgtcctatgccagtattagaagttttaccattaattgaagaaattcgtatttcacgtgttaaaggcaaaactttatttgaaatgtcaaataaaaataatatgacttcggctcatatggatggctctaaaggtgacaattctacagtaggagtgtcagaaactccatcggaagattatatttgtaatttttatttaaatattgctgatcaattattaacagaaccagaaggagttattccacgtgaattagcagataaagaactttttactcttttatcagatttctatcttaaaatttaa
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＬ（ｃｈＩＬ）アミノ酸配列（配列番号３２）：
MKLAVYGKGGIGKSTTSCNISIALRKRGKKVLQIGCDPKHDSTFTLTGFLIPTIIDTLSSKDYHYEDIWPEDVIYGGYGGVDCVEAGGPPAGAGCGGYVVGETVKLLKELNAFFEYDVILFDVLGDVVCGGFAAPLNYADYCIIVTDNGFDALFAANRIAASVREKARTHPLRLAGLIGNRTSKRDLIDKYVEACPMPVLEVLPLIEEIRISRVKGKTLFEMSNKNNMTSAHMDGSKGDNSTVGVSETPSEDYICNFYLNIADQLLTEPEGVIPRELADKELFTLLSDFYLKI
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＮ（ｃｈ１Ｎ）核酸配列（配列番号３３）：
atgttagatggtgccacaacgattttaaatttaaatagtttttttgaatgtgaaactggcaattatcatactttttgcccgattagctgtgtagcttggttatatcaaaaaatcgaagatagcttttttttagtaattgggacaaaaacatgtggttattttttacaaaatgcccttggagttatgatttttgccgaacctaggtatgctatggcagaattagaagaaagtgatatttcagcacaattaaacgattataaagaattaaaacgtttatgtttacaaattaaacaagatagaaatcccagcgttattgtttggattggaacttgtacaactgaaattatcaaaatggatttagaagggatggctccacgtttagaaactgaaatcggcatacccattgttgtagcacgtgctaatggtttagattatgcttttacacaaggtgaagacacagttttatcagcaatggccttagcatccttaaaaaaagatgttccttttttagtaggtaatactgggttaacaaacaaccagcttctccttgaaaaatcaacttcttcagttaatgggacagacggaaaggaattacttaaaaaatctcttgtattatttggttccgtaccaagtacagttactacacaattaactttagaattaaaaaaagaaggtattaatgtatctggatggcttccatctgctaattataaagatttacctacttttaataaagatacacttgtatgtggtataaatccttttttaagtcgaacagctaccacgttaatgcgtcgtagtaagtgcacattaatttgtgcaccctttccaataggccccgatggcacaagagtttggattgaaaaaatttgtggtgcttttggcattaatcctagtcttaatccaattactggtaatactaatttatatgatcgtgaacaaaaaattttcaacgggctagaagattatttaaaattattacgtggaaaatctgtattttttatgggtgataatttattagaaatttctttagcacgttttttaacacgttgtggtatgattgtttatgaaatcggaattccatatttagataaacgatttcaagcagcagaattagctttattagaacaaacttgtaaagaaatgaatgtaccaatgccgcgcattgtagaaaaaccagataattattatcaaattcgacgtatacgtgaattaaaacctgatttaacgattactggaatggcacatgcaaatccattagaagctcgaggtattacaacaaaatggtcagttgaatttacttttgctcaaattcatggatttactaatacacgtgaaattttagaattagtaacacagcctcttagacgcaatctaatgtcaaatcaatctgtaaatgctatttcttaa
フォトクロロフィリドレダクターゼサブユニットＮ（ｃｈ１Ｎ）アミノ酸配列（配列番号３４）：
MLDGATTILNLNSFFECETGNYHTFCPISCVAWLYQKIEDSFFLVIGTKTCGYFLQNALGVMIFAEPRYAMAELEESDISAQLNDYKELKRLCLQIKQDRNPSVIVWIGTCTTEIIKMDLEGMAPRLETEIGIPIVVARANGLDYAFTQGEDTVLSAMALASLKKDVPFLVGNTGLTNNQLLLEKSTSSVNGTDGKELLKKSLVLFGSVPSTVTTQLTLELKKEGINVSGWLPSANYKDLPTFNKDTLVCGINPFLSRTATTLMRRSKCTLICAPFPIGPDGTRVWIEKICGAFGINPSLNPITGNTNLYDREQKIFNGLEDYLKLLRGKSVFFMGDNLLEISLARFLTRCGMIVYEIGIPYLDKRFQAAELALLEQTCKEMNVPMPRIVEKPDNYYQIRRIRELKPDLTITGMAHANPLEARGITTKWSVEFTFAQIHGFTNTREILELVTQPLRRNLMSNQSVNAIS
ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ１）核酸配列（配列番号３５）：
atgcagcagtgcgttggccgctccgtccgcgctccgtccagcagggcggtcgcgcccaaggtcgctggcgctcgtgtcagccgccgcgtgtgccgcgtctatgcctccgctgttgctaccaagacggtgaagattggcacgcgcggctcgcccctggctctggcccaggcttacatgactcgcgacctgctgaagaagagcttccctgagctgagcgaggagggtgctctggagatcgtgatcatcaagaccaccggtgacaaaatcctgaaccagcccctggctgacatcggtggcaagggtctgtttaccaaggagatcgatgatgctctgctgagcggcaagattgacatcgccgtgcactccatgaaggacgtgcccacctacctgcccgagggcaccatcctgccctgcaacctgccccgcgaggatgtgcgcgatgtgttcatctcgcctgtcgccaaggacctgagcgagctgcccgccggcgccattgtgggctcggcctcgctgcgccgtcaggcccagatcctggccaagtacccccacctcaaggtggagaacttccgcggcaacgtgcagacccgcctgcgcaagctgaacgagggcgcctgctccgccaccctgctggctctggccggtctgaagcgcctggacatgactgagcacatcaccaagaccctcagcattgacgagatgctgcccgccgtgagccagggcgccattggcattgcctgccgcaccgacgacggcgccagccgcaacctgctggccgccctgaaccacgaggagacccgcatcgccgtggtgtgcgagcgcgccttcctgaccgccctggacggctcttgccgcacccccattgccggctacgcgcacaagggcgccgacggcatgctgcacttcagcggcctggtggccaccccggacggcaagcagatcatgcgcgctagccgcgtggtgcccttcacggaggcggatgccgtcaagtgcggcgaggaggccggcaaggagctcaaggccaacggccccaaggagctgttcatgtactaa
ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ１）アミノ酸配列（配列番号３６）：
MQQCVGRSVRAPSSRAVAPKVAGARVSRRVCRVYASAVATKTVKIGTRGSPLALAQAYMTRDLLKKSFPELSEEGALEIVIIKTTGDKILNQPLADIGGKGLFTKEIDDALLSGKIDIAVHSMKDVPTYLPEGTILPCNLPREDVRDVFISPVAKDLSELPAGAIVGSASLRRQAQILAKYPHLKVENFRGNVQTRLRKLNEGACSATLLALAGLKRLDMTEHITKTLSIDEMLPAVSQGAIGIACRTDDGASRNLLAALNHEETRIAVVCERAFLTALDGSCRTPIAGYAHKGADGMLHFSGLVATPDGKQIMRASRVVPFTEADAVKCGEEAGKELKANGPKELFMY
ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ２）核酸配列（配列番号３７）：
atgcgatcgtatctgctcaaggctcaagtggcctcatgtcagttttcgcgcacgtcgaaggtctggagactggcgccgggttctgacagacgacggtgtcggggcctcactcggacaccgcactgcgcggcccccaccagcgagcccgccccgccatccagcagcggcaagagcgggcaacgaccactcgtgatagccacgcggccatctaagcttgcaaaggagcagacgcggcaggtgcagcagctgctgctggcggcggcgcagctcaaggacgagcagctgcagctgagcaccctggaactggcgtctaggggcgacacgactcagggtgtgtcgctgcgcagtctgggctcgggcgcattcaccgaggagctggaccaggctgtgctgtcgggcgctgccgacatgtcggtgcacagcctgaaggactgccccgccgccctggcgcccgggctgctgctggccgcctgcctgccgcgggccgacccccgggacgtcctcatcgcgcccgaggccacctcgctgggcgagctggtgccgggcagccgtgtgggcaccagcagcagccgccgcgcggcgcagatcaagcactccttcccccacctgcaggttgtgcagctgcgcggcaatgtggactcgcggctggggcgcatccgcagccgcgacatcggcgccacagtgctggcggcggcgggcctcaagcggctgggtgtgatgaactcggacgagggtgacactaccgctacgggcgccgtgggggtggtgtgcagggcagacgatgagtgggtggtcggcctgctggacgccatctcgcaccgcggcacggccctggaggtggcggcggagcgggcgtgcctggcagcgctgctgggcggcggcggcgcgtgccagcgttcagcgttcccggacattgcgtgggcctgccacacgcggcacgaccccgacagcaacacaatggacctggattgcctggtggcggacctggagggcaaggagctcttcaggtacacggagttctaccggccggtcattgacgaggtggacgcggtgtcgctggggtcgctgtacggcagcctgctgcgcatgatggcgccaccaggcgcggccccctgttggcagctaccttcctcgcggcattag
ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ（ＰＢＧＤ２）アミノ酸配列（配列番号３８）：
MRSYLLKAQVASCQFSRTSKVWRLAPGSDRRRCRGLTRTPHCAAPTSEPAPPSSSGKSGQRPLVIATRPSKLAKEQTRQVQQLLLAAAQLKDEQLQLSTLELASRGDTTQGVSLRSLGSGAFTEELDQAVLSGAADMSVHSLKDCPAALAPGLLLAACLPRADPRDVLIAPEATSLGELVPGSRVGTSSSRRAAQIKHSFPHLQVVQLRGNVDSRLGRIRSRDIGATVLAAAGLKRLGVMNSDEGDTTATGAVGVVCRADDEWVVGLLDAISHRGTALEVAAERACLAALLGGGGACQRSAFPDIAWACHTRHDPDSNTMDLDCLVADLEGKELFRYTEFYRPVIDEVDAVSLGSLYGSLLRMMAPPGAAPCWQLPSSRH
プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＸ１）核酸配列（配列番号３９）：
atgatgttgacccagactcctgggaccgccacggcttctagccggcggtcgcagatccgctcggctgcgcacgtctccgccaaggtcgcgcctcggcccacgccattctcggtcgcgagccccgcgaccgctgcgagccccgcgaccgcggcggcccgccgcacactccaccgcactgctgcggcggccactggtgctcccacggcgtccggagccggcgtcgccaagacgctcgacaatgtgtatgacgtgatcgtggtcggtggaggtctctcgggcctggtgaccggccaggccctggcggctcagcacaaaattcagaacttccttgttacggaggctcgcgagcgcgtcggcggcaacattacgtccatgtcgggcgatggctacgtgtgggaggagggcccgaacagcttccagcccaacgatagcatgctgcagattgcggtggactctggctgcgagaaggaccttgtgttcggtgaccccacggctccccgcttcgtgtggtgggagggcaagctgcgccccgtgccctcgggcctggacgccttcaccttcgacctcatgtccatccccggcaagatccgcgccgggctgggcgccatcggcctcatcaacggagccatgccctccttcgaggagagtgtggagcagttcatccgccgcaacctgggcgatgaggtgttcttccgcctgatcgagcccttctgctccggcgtgtacgcgggcgacccctccaagctgtccatgaaggcggccttcaacaggatctggattctggagaagaacggcggcagcctggtgggaggtgccatcaagctgttccaggaacgccagtccaacccggccccgccgcgggacccgcgcctgccgcccaagcccaagggccagacggtgggctcgttccgcaagggcctgaagatgctgccggacgccattgagcgcaacatccccgacaagatccgcgtgaactggaagctggtgtctctgggccgcgaggcggacgggcggtacgggctggtgtacgacacgcccgagggccgtgtcaaggtgtttgcccgcgccgtggctctgaccgcgcccagctacgtggtggcggacctggtcaaggagcaggcgcccgccgccgccgaggccctgggctccttcgactacccgccggtgggcgccgtgacgctgtcgtacccgctgagcgccgtgcgggaggagcgcaaggcctcggacgggtccgtgccgggcttcggtcagctgcacccgcgcacgcagggcatcaccactctgggcaccatctacagctccagcctgttccccggccgcgcgcccgagggccacatgctgctgctcaactacatcggcggcaccaccaaccgcggcatcgtcaaccagaccaccgagcagctggtggagcaggtggacaaggacctgcgcaacatggtcatcaagcccgacgcgcccaagccccgtgtggtgggcgtgcgcgtgtggccgcgcgccatcccgcagttcaacctgggccacctggagcagctggacaaggcgcgcaaggcgctggacgcggcggggctgcagggcgtgcacctggggggcaactacgtcagcggtgtggccctgggcaaggtggtggagcacggctacgagtccgcagccaacctggccaagagcgtgtccaaggccgcagtcaaggcctaa
プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（ＰＰＸ１）アミノ酸配列（配列番号４０）：
MMLTQTPGTATASSRRSQIRSAAHVSAKVAPRPTPFSVASPATAASPATAAARRTLHRTAAAATGAPTASGAGVAKTLDNVYDVIVVGGGLSGLVTGQALAAQHKIQNFLVTEARERVGGNITSMSGDGYVWEEGPNSFQPNDSMLQIAVDSGCEKDLVFGDPTAPRFVWWEGKLRPVPSGLDAFTFDLMSIPGKIRAGLGAIGLINGAMPSFEESVEQFIRRNLGDEVFFRLIEPFCSGVYAGDPSKLSMKAAFNRIWILEKNGGSLVGGAIKLFQERQSNPAPPRDPRLPPKPKGQTVGSFRKGLKMLPDAIERNIPDKIRVNWKLVSLGREADGRYGLVYDTPEGRVKVFARAVALTAPSYVVADLVKEQAPAAAEALGSFDYPPVGAVTLSYPLSAVREERKASDGSVPGFGQLHPRTQGITTLGTIYSSSLFPGRAPEGHMLLLNYIGGTTNRGIVNQTTEQLVEQVDKDLRNMVIKPDAPKPRVVGVRVWPRAIPQFNLGHLEQLDKARKALDAAGLQGVHLGGNYVSGVALGKVVEHGYESAANLAKSVSKAAVKA
ウロポルフィリノーゲンIIIデカルボキシラーゼ（ＵＲＯＤ１）核酸配列（配列番号４１）：
atgcagaccaaggctttcacctctgcgcgcccccagcgggccgctgcgctcaaggcgcagcgcacctcgtcggtgaccgtgcgcgcgaccgcggcccccgccgtggcctctgcccccgccgcctcgggctctgcctctgaccccctgatgctgcgcgccatccgcggcgacaaggtggagcgcccgcccgtgtggatgatgcgccaggccggccgctaccagaaggtgtaccaggacctgtgcaagaagcaccccacgttccgtgagcgctcggagcgcgtggacctggcggtggagatctctctgcagccgtggcacgcgttcaagcccgacggcgtcatcctgttcagcgacattctgacccccctgcccggcatgaacatccccttcgacatggcgcccggccccatcatcatggaccccatccgcaccatggcgcaagtggagaaggtgacgaagctggacgctgaggccgcctgccccttcgtgggcgagtcgctgcgccagctgcgcacctacatcggcaaccaggccgcggtcctgggcttcgtgggcgcccccttcaccctggccacctacattgtggagggcggcagctccaagaacttcgcgcacatcaagaagatggctttctccacccccgagatcctgcacgccctgctggacaagctggctgacaacgtggccgactacgtccgctaccaggccgacgccggcgcccaggtggtgcagatcttcgactcgtgggccagcgagctgcagccccaggacttcgacgtgttctccggcccctacatcaagaaggtgatcgacagcgtgcgcaagacccaccccgacctgcccatcatcctctacatcagcggctctggcggcctgctggagcgcatggcctcttgctcgcccgacatcatctcgctggaccagtcggtggacttcaccgacggcgtcaagcgctgcggcaccaacttcgccttccagggcaacatggaccccggcgtcctgttcggctccaaggacttcatcgagaagcgcgtcatggacaccatcaaggctgcccgcgacgccgacgtgcgccacgtgatgaacctgggccacggcgtgctgcccggcacccccgaggaccacgtgggccactacttccacgtcgcccgcaccgcccacgagcgcatgtaa
ウロポルフィリノーゲンIIIデカルボキシラーゼ（ＵＲＯＤ１）アミノ酸配列（配列番号４２）：
MQTKAFTSARPQRAAALKAQRTSSVTVRATAAPAVASAPAASGSASDPLMLRAIRGDKVERPPVWMMRQAGRYQKVYQDLCKKHPTFRERSERVDLAVEISLQPWHAFKPDGVILFSDILTPLPGMNIPFDMAPGPIIMDPIRTMAQVEKVTKLDAEAACPFVGESLRQLRTYIGNQAAVLGFVGAPFTLATYIVEGGSSKNFAHIKKMAFSTPEILHALLDKLADNVADYVRYQADAGAQVVQIFDSWASELQPQDFDVFSGPYIKKVIDSVRKTHPDLPIILYISGSGGLLERMASCSPDIISLDQSVDFTDGVKRCGTNFAFQGNMDPGVLFGSKDFIEKRVMDTIKAARDADVRHVMNLGHGVLPGTPEDHVGHYFHVARTAHERM
ウロポルフィリノーゲンIIIシンターゼ（ＨＥＭ４）核酸配列（配列番号４３）：
atgtcggccctggacgccgccgccatcccctacgagctagtgccgggtgtgtcctccgctctggccgccccgctgttcgccggcgtcccgctcacacacgtcagcctgagcccctcgttcaccgtggtcagcgggcacgacgtggccggcaccgactgggcggcgttccgggggctgcccacgctggtggttctgatggcgggtcgtaacctggggcagatagcccggcggcttgtgcaggacgcggggtgggcgcccgatacacctgtaagtcaacctagtggctag
ウロポルフィリノーゲンIIIシンターゼ（ＨＥＭ４）アミノ酸配列（配列番号４４）：
MSALDAAAIPYELVPGVSSALAAPLFAGVPLTHVSLSPSFTVVSGHDVAGTDWAAFRGLPTLVVLMAGRNLGQIARRLVQDAGWAPDTPVSQPSG
ＣＨＬＤ５’非翻訳領域（調節領域）（配列番号４５）：
ggcgtccccacaaccaggacagcctacttcttgaccttattaataagtcgctgcgtgtcgcgactgaccattttggcccggacttgcgtgcttgtgatttgtgcttcgactagatccgcgggcaccaagggacgcggacagctgatagtcaagaactagatcctctgggagcgtctggggctgtccccgctgctcgccaaggaa
ＣＨＬＤ３’非翻訳領域（調節領域）（配列番号４６）：
gtgccgagtgactgaggtggcaaggtgcagtggcggcggaggcagttgtgctggggtggcaaggcggacaggcgaagctggtgggttgcgacgaggaggaggtgcacgtgcacgcgtaacataagaagaacagtgggaggacaggtagcgtgacttgactgggacgaggagcgtactgatgtgtggcgtgtgttggtatgtgagcgttacccctcccctagatagcggcggtctccactttcaggaggatgagagccatcatgaggctttgagggggcactggttcgtgtgtaggctgaggctgctgttgaagtcacaaggcagcactgcatgcgcgagtgagtgtggccggatatgcatcgagttgcaggtacactgaaatgaggtgactgcggcgtatatcgctgccagtacaggttgaagcggcgggcacggtgaatggagtactcggcctggaacgcttgcgatcagatggtcgagctcaagaagatttggttgagccgttgggtcgtgcgtcatattatggcttgcatcttcggggagcggcaagaaacggactccaatgcaggccctcgggcgagaaagattgggcgtgtccgggggtgcattctcgccgcgtggggctgcatcgaatttcgcttgagtgccccttcccggggagggggggcggtagttcaaccccatcatcgtaggggggttgtaaatgccagcccaaactaaa
ＣＨＬＤエクソン１（配列番号４７）：
atgaagtctctctgccatgagctcgctggccccagcgttactgggtgcggccggcgaagcctccggaaggctttcagcggtgccaagattgcgcaggtctctcgccccgctgtgcttaacagcgtgcagcgccaacagcgtctcgcctgttctgccgtggccgagctctccgctgctgagctgcgcg
ＣＨＬＤエクソン２（配列番号４８）：
ccatgaaggtgtctgaggaggactccaagggcttcgatgcggatgtgtcgacccgcctggcccgctcgtaccctctggcggccgtggtgggccaggacaacatcaagcaggcgctgctgctgggcgccgtggacaccgggctgggcggcatcgccatcgccggtcgccgcggtaccgccaagtccatcatggctcgcggcctgcacgctctgctgccgcccattgaggtggtggagggcagcatctgcaacgccgaccccgaggacccccgctcctgggag
ＣＨＬＤエクソン３（配列番号４９）：
gctggcctggctgagaagtatgcgggcggccctgtgaagaccaagatgcgctcggcgccgtttgtgcagatccctctgggtgtgactgaggaccgcttggtgggcactgtggacattgaggcgtccatgaag
ＣＨＬＤエクソン４（配列番号５０）：
gagggcaagactgtgttccagcccggcctgctggctgaggcgcaccgcggcatcctgtacgtggacgagatcaacctgctggatgacggcattgccaacctgctgctgtccatcctgtcggacggagtcaacgtggtggagcgcgagggcatctccatcagccaccc
ＣＨＬＤエクソン５（配列番号５１）：
ctgccggccgctgctgattgccacctacaaccccgaggagggccctctgcgtgagcacctgctggaccgcatcgccattggcctcagcgccgacgtccccagcaccagcgacgagcgcgtcaaggc cattgacgcagccatccgcttccaggacaagccgcag
ＣＨＬＤエクソン６（配列番号５２）：
gacactattgacgacacc gcggagctcaccgacgccctgcgcacctcg
ＣＨＬＤエクソン７（配列番号５３）：
gtcatcctggctcgcgagtacctgaaggacgtgaccatcgcgccggagcaggtgacctacattgtggaggaggcgcgccgcggcggagtccaggggcacc gcgcggagctgtacgcggtcaag
ＣＨＬＤエクソン８（配列番号５４）：
tgtgccaaggcgtgtgcggctctggagggccgtgagcgtgtgaacaaggatgacctg cgccaggccgtgcagctggtcatcctgccgcgcgccaccatcctggaccagcccccgcccgagcaggagcagcccccgccgccgcccccgccccctcccccgccgccgccgcag
ＣＨＬＤエクソン９（配列番号５５）：
gaccaaatggaggacgaggaccaggaggagaaggaggacgagaaggaggaggaggagaaggagaacgaggaccaggacgagcccgag
ＣＨＬＤエクソン１０（配列番号５６）：
atccctcaggagttcatgtttgagtccgagggcgtcatcatggacccctccatcctcatgttcgcgcagcagcagcagcgcgcgcagggccgctccggccgcgccaagacgctcatcttcagcgacgaccgcggccgctacatcaagcccatgctgcccaagggtgacaaggtcaagcgcctggcagtggacgccacgcttcgcgccgccgcgcccta ccagaag
ＣＨＬＤエクソン１１（配列番号５７）：
attcgccggcagcaggccatcagcgagggcaaggtgcagcgcaaggtgtacgtggacaagccagaca
ＣＨＬＤエクソン１２（配列番号５８）：
tgcgctccaagaagctggcccgcaaggccggtgcgctggtgatttttgttgtggacgcgtccggctccatggctctgaaccgcatgagcgccgccaagggcgcctgcatgcgcctgctggctgagtcgtacaccagccgcgaccaggtgtgcctcatccccttctacggcgacaaggccgaggtgctgctgccgccctccaagtccatcgccatggcccgccgccgcctggactcgctgccctgcggcggcggctcgccccttgcgcacggcctgtccacggcggtacgtgtgggcatgcaggccagccaggcgggcgaggtgggccgcgtcatgatggtgctcatcacggacggccgcgccaacgtcagcctggccaagtccaacgaggaccccgaggcgctcaagcccgacgcgcccaagcccaccgccgactcgctgaaggacgaggtgcgcgacatggccaagaaggccgcgtccgccggcatcaacgtgcttgtcattgacacggagaacaagttcgtgagcaccggctttgcggaggagatctccaaggcagcgcagggcaagtactactacctgcccaacgccagcgacgccgccatcgcggcggccgcgtccggcgccatggccgcggccaagggcggctactag
ＣＨＬＤイントロン１（配列番号５９）：
gtgagcgcctactttgatatgtaccaaagataccactgataggtttaggcacggaagatctggacttggaccccgtttgcgcaagccgggcgatgcacccatttcgcggtcacgccgagcgctggggtgcaatttagcgtgcccgacaagctagaaaacagggaattaccatttgtttaattttgttgcgagagatctttgcttgtgtccaccggccgcgcgggggaacttccggtgttgcgcaaggttgcgtgcgtgcccaccatcaacacctgtgccaggtctgtgtcacccccaggttccaccaccctgcaatcttccaattgtgtctcgtttgctcgttgtctaatagtcgtcctttgctcatccctacctgcag
ＣＨＬＤイントロン２（配列番号６０）：
gtgaggcagggaaggtgacacaggaggttttgaaagagagacagggaggcaaagatggatggcggggcgggcagtgactttggggcggcatggagtgggattggtggagtgggattgggcaccatgtatcacagatgttggcaacacagcgcagggccttgctctgtgcttgtgttgaccgtctagtcccccgtgccctgaaccaagtctttcctcctgacacggtcctccatgtcctccttccggcattcccttcctcgtccacag
ＣＨＬＤイントロン３（配列番号６１）：
gtgagccagcaagggaggagaggggaacggccgggtagggcagccggagtttaaccacgccaattcaacggggagcaacggggaagaggaagggccggaagaggacggcaaaagcatttggtgggggcagcggctgtagtcagaagcgcaaaggctgccacagtgtggcccgcaccctcctcaccaccagtttggcatgatcgtttagcatgggctggaatactcaccgccagttctctcctctcccctctcctcccctgtccccgcctgcag
ＣＨＬＤイントロン４（配列番号６２）：
gtgagtgcgcgcgctgggtgtgtttgtgggacggcgcggcattggagcgcaggtgcgggtgctgggccgtgcacttgtccgttggttcccttggaagcttcgatacacactcttactgcacgctctttaaccgccccccccctccacctctgcccgccccgtgcag
ＣＨＬＤイントロン５（配列番号６３）：
gtgggtgggggaaagtgactggatgtcggtgggttttaggtatgtgcgtgtgtacgatgcggggagcagtacggaagcgggcacgagcggtgagggggcaggattgtggcgcacgctcgggccaagcccgggctcgcgacagagggtgggcttgtattcgtagtcaagcgcatcaggaagtgcagttgactggattcacctgaaacggcgctgagcgggcggctaatagaatcccgcttcctgtccgcccctccccttgcccttcaatccgtcag
ＣＨＬＤイントロン６（配列番号６４）：
gtgagtggcgggggccgtgcgtttgtttgttgcgtgggctggctggctggctttgttggatgagggcgctgctcaccactcatctctttgaatccccacttatccagttgcctgcatgaaaccccgcctgactcactccccaccatcctgtaccgcttttccaaacatccttgcaaccatcccgccatccccacccgcag
ＣＨＬＤイントロン７（配列番号６５）：
gtgaggagttggagggggaaggggcgaggggatgcgacagaagcgagggcgaggggagccggggtgggttgttgcaagtgtcgtgaattatagaatgaccccaaaagcgccggcccaacagggcctattacttgcgagtcaatccaacccctgatatagggagaatggggtagaggtcgtatcacgacagcaaggatgtacagtgggccttggggttgggaggtacagggaaaaaggagaggacatggggttgggtaagcggggaataacaaatatacacccagcgtttatggaagtgggagatggaaacgggggcggacgaacaggaacaggggccggatggaggggctatgggggcatggtgggtgggggtacggcgcggggcagagcagggtcttgggtgaatgggcaagatgctgatgcttgggatgaagacactatgagcaaagaaatggttgttgacgattgccatgatcatcgcagtgggggaggcggggtggcaataccggcagtcaacagttggggtgcgatcaagattgattggagtaccagcagtggccgggatctggctgacgtgtctcgagcgagttgctggggtggcaaggagatgcaggggcagacgacgttgtgcgaccacacttacacacatttccttccccttgcgtgtgtccgtgcgccctgtgcctccag
ＣＨＬＤイントロン８（配列番号６６）：
gtacgtaaacgtatttgattgctcaggtggttagccttggtgtggctgctgtttgacttgtgcagctgtctttgtgtacatgttccacaaccctgtactccccatattccgcccccattccag
ＣＨＬＤイントロン９（配列番号６７）：
gtgagaggcggcgcggcggcttgcgggcgaaggcggggggcggggcggaggcaatgcggccgcgcatggccagcaacggaagggctggctatcaacacggcgagcgcacgatattcatataagagtgccatcgtgcaatgctgaatacttgcgccaaccggatctcgctgctccgcttccaccggactgctttctcatctctccccttcaccctgtgtgtatccacag
ＣＨＬＤイントロン１０（配列番号６８）：
gtgagtgcccgaggtggtgggtggtgaattggggcacgagggtatgtgggcctaagggagctgaatggggcatgttttcttctgagcatcacggtcagagcttgacctgtcctccccgctgtacccccgtgcacggtccgacacag
ＣＨＬＤイントロン１１（配列番号６９）：
gtgagtacagcgcatcccggcgcaatcattgggcctagttactgctgcaggactcgtgtgctcttaagggctggcagctgtcagaagctctactcctcgcactgaccactgtgcctttctctccttcctctctccctccccgcacccctcctcccacttcctcaacag
ＣＨＬＩ２ ５’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号７０）：
gcagacttccataaagctcttgtaacgctgtaccaactagtaagcggtacaattcgcctgagcccgagcaacgcgacctttcttgctctgtggatctctgataatctaaccagaccaaaaccttttcactaatctaggcaaca
ＣＨＬＩ２ ３’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号７１）：
aaaaggctggtgtaggcctgtcgggtcgtgttaaaggttgctgcgtgaacgtgtaagtgtgacagtgtgccggtatgtgtgtgtatacatgtgttgcggtgtgcttttgtggcggtacatggtgatgactgagcgggtgggacagagcacggttaactgacgagggcagtccgtgcgagacggacgtttttgtagccgaggtgcaaggactgatgacgggctaagctgctggagacttggagttgagagtgcaggtggatcgacggtttctctaaggagtatgaataggcaggagggctggagacatttggggtgcaaggaggcggtagtatgggagatgtccatgggcggattttggcctctgtaacttcttaacgccca
ＣＨＬＩ２エクソン１（配列番号７２）：
atgcagagtctccagggtcagcgcgcgttcactgcggtgcgccagggtcgggcgggtcccctgcggactcgcctggtcgtgcgctcgtctgttgccttgccatccacgaaagccgcgaagaagccgaacttcccgttcgtcaagattcagggccaggaggagatgaagcttgcactgctgctgaacgtggtcgaccccaacatcggcggagtgcttattatgggtgaccgcggcactgccaagtcggtcgcg
ＣＨＬＩ２エクソン２（配列番号７３）：
gtccgcgccctggtggatatgcttcccgacattgacgtggttgagggcgacgccttcaacagctcccccaccgaccccaagttcatgggccccgacaccctgcagcgcttccgcaacggcgagaagctgcccaccgtccgcatgcggacccccctg
ＣＨＬＩ２エクソン３（配列番号７４）：
gtggagctgcctctgggcgccaccgaggaccgcatctgcggcaccatcgacatcgagaaggcgctgacgcagggcatcaaggcctacgagcccggcctgctg
ＣＨＬＩ２エクソン４（配列番号７５）：
gccaaggccaaccgcggcatcctgtatgtggacgaggtgaacctgctggatgatggcctg
ＣＨＬＩ２エクソン５（配列番号７６）：
gttgatgtcgtgctggactcgtcggctagcggcctgaacactgtggagcgtgagggtgtgtccattgtgcaccctgcccgcttcatcatgattggctcaggcaacccccag
ＣＨＬＩ２エクソン６（配列番号７７）：
gagggtgagctgcgcccgcagctgctggatcgcttcggcatgagcgtcaacgtggccacgctgcaggacaccaagcagcgcacgcagctggtgctggaccg
ＣＨＬＩ２エクソン７（配列番号７８）：
gcttgcgtacgaggcggaccctgacgcatttgtggactcgtgcaaggccgagcagacggcgctcacggacaagctggaggcggcccgccagcgcctgcggtccgtcaagatcagcgaggagctgcag
ＣＨＬＩ２エクソン８（配列番号７９）：
atcctgatctcggacatttgctcgcgcctggatgtggatggcctgcgcggtgacattgtgatcaaccgcgccgccaaggcgcttgtggccttcgagggccgcaccgaggtgaccacgaatgacgtggagcgcgtcatctcgggctgcctcaaccaccg
ＣＨＬＩ２エクソン９（配列番号８０）：
cctgcgcaaggacccgctggaccccattgacaacggcaccaaggtggccatcctgttcaagcgcatgaccgaccccgagatcatgaagcgcgaggaggaggccaagaagaagcgcgaggaggcggccgccaaggccaaggcggagggcaaggcggaccgccccacgggcgccaaggctggcgcctgggctggcttgccccctcgtcggtaa
ＣＨＬＩ２イントロン１（配列番号８１）：
gtaggtaacacaagcaattatggggcgaagatctaggctccgctgatccgggcgggcaatcggcatcgtcggtgcaaccgtggggcgtctgtgcaccctttgctggtgccaggttgcctgactcgcctgcattcctgtaccgagccacattggctgctttgcagcgtgcatgggacgggtgtaggataagcgctatgtatgcgatagcgcgggtgcaccggcttggcatggcaaggttgcggggtgcacatgcgtgccagcgtcccctcagcatcagagtctggatctaagggctcagcggcttcctgcgcatgtgggtctttgcgtagtgctacgaagccttataattaaagctcatgtattgagtggtccgggtttggggcactagtagtgccaggaggcgcgtgccaggttgatatgagcatatcagcacccgttccttgcgaaacgcttccgttgtgctcccttccccaccacctccccgctcatacccatacatatggctatccgtcctctcattgcttgcccctacag
ＣＨＬＩ２イントロン２（配列番号８２）：
gtgagcgggcctaccttctgaagacagtcttacgtgttgcactgcagcggtgttgcgcacctctgcttttgcgtgcgccgggaagcgcggattgcggcctcacagatcaagcccggaaacgcttgttgtttccagcgggtggcacacacgcgcgcgcgcgcacagtgacaccctcacggccgcgctgccctgcag
ＣＨＬＩ２イントロン３（配列番号８３）：
gtgcgtagtgcatggggagaggggacgaggggaggagggcagggccaataaaccgaaccccaagtcatcgagacacagaacccgataatagctcccagatcgccaaggggtgaggcgggaagccaaggatgatgcgttggccgcattgcgtgttgacgtcaggcttacacagggtctgactggctgtgcttggggtttggcacgcttcttgactggccccgtacgcatgctgcag
ＣＨＬＩ２イントロン４（配列番号８４）：
gtgagtggtggtggtttctgggtcagcagaggacttctgtagtaggtaatgtgggccagggaagtgtggctaacatgccaaacacgggggcgcaccagtgcaagctgcattcgctgacgtgcacgggtgcaatgggtgcaaggcgaactgcaatcgcggtgcacagttgccagggctgcgctcacgcttgagtgtctgcacacgcactgcag
ＣＨＬＩ２イントロン５（配列番号８５）：
gtgcgtagcgtgcgcgcatgtacttgtctcccttgtcatgttgggaaaggtcggtccccagcctgcttgcaagatgcggccggtcagcagctgcggacggtcagcacctacgtgccgaggttgtgtaacatgaatggcgttggggcggccgacctgccacaagctgaactgcgaccagcaaggcagctgccagcaacgcacacccgacgtgctacacgcttgtgttttgacctcctaaacacacccgcccgctgtctgtcacgtccacag
ＣＨＬＩ２イントロン６（配列番号８６）：
gtaagcggcggcggcgcggggacacggagggacatttcgcgagcatgggttgaggagtcgggaggattcggtggctggccggagtcgggagtcggagtcgcgagtcggaagtcaagcttctggcggcttcgtgctgtcgggtgcgctcgccatgatggcgctgaccggagggcgtcacgctgtgtatgtgggcgcgcag
ＣＨＬＩ２イントロン７（配列番号８７）：
gtacggggcgtacagcgggggcggctgcacggggccagtgaccgacagggcagcacgcggctggcgaagagcgacaaagtgacagggtgaccaagaccgggtgatgccacgagaggggcgcgggagccgtgcattgggtcgaggagggaggaatgcaactttacactgatgcctctgtatacggccgccttccgagccctgcaaaccttcgctttcccccgacgcacgcag
ＣＨＬＩ２イントロン８（配列番号８８）：
gtgagcgcagcgtgcggtggatgcggtgcgcgtgcgggttgccaacttattattttgtacgtggacgcgtggctggcgatggcatgtcatggcgcgaatggatattgggcgaatggataccggtaatggtagcacggggcggcagggcctggcggtagtggggttgagggggcgaggactccagcgcgcgatacatgccatgttcagcatggccccaactgacagcgcccgctgccctgtgcgccccgctccctccgcgcacccgctcctcctacacag
ＣＨＬＨ１ ５’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号８９）：
ctagtctagagggaactagggaggggcaacagagaa
ＣＨＬＨ１ ３’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号９０）：
gcggcctccccttcatggtagcactagttggcgggttgtggttggactaggcggctagggtatatacctagtagcggcggctgcggagtggagggctggcgcccagcgcgagggcgtggcctttcctcctggacccgagagcgctccgcgaggagacggcgagtgagataggcagcagcgagcggagatcgatttgtgaacagttttgtggcgggatcccatagcggatgcagagaagaccttagagcagcttcctcggtggagtgaacgagccagagcggagggaaggcgcatgagggaactgcagggactggaactgcgggagtgcaggtccggtgctaggtccgctaaacagtgcggtctacgcctgtgtgtgaggtgtgcgtgtgtgtgtgagctgtgcggttttgttgtgcaaagtaggagtgagccgagccgcgcgtactttgtggcgtgtttggctgctggcgctgagagccaagagagggtaaacgggtttggtattttatggtgcggggtgaaagcagccctcgcaggaatggagcgattctgcagcatgatgcacgtgtgcctgcgcgtggatggtggctgttgatatggctctgccactccggcagcaccgctacgatacctagcggtgcctggagtggtctctctgtttggtgcgtgatgtttgggtttgccgttttgattctttgtttcgtgctgaatggctgaggcggcaagacccctcgtgccagtgtacagagcctcacggctccctcggaccccgcgtggggacgtccattcccggtggcggtgtcgcctcggcggtgtaaagcaaaaaatatttt
ＣＨＬＨ１エクソン１（配列番号９１）：
atgcagacttcctcgcttcttggccggcgcacggcccacccggctgcgggcgcgacgcccaagccg
ＣＨＬＨ１エクソン２（配列番号９２）：
gttgcgccctcgccccgcgtggctagcacccgccag
ＣＨＬＨ１エクソン３（配列番号９３）：
gtcgcgtgcaatgtggcgactggaccccggccgcccatgaccaccttcaccggtggcaacaagggccctgctaagcagcaggtgtcgctggatctgcgcgacgagg
ＣＨＬＨ１エクソン４（配列番号９４）：
gcgctggcatgttcaccagcaccagcccggagatgcgccgtgtcgtccctgacgatgtgaagggtcgcgttaaggtgaaggttgtgtacgtggtgctggaggcccagtaccagtcggccatcagcgctgcggtgaagaacatcaacgccaagaactccaag
ＣＨＬＨ１エクソン５（配列番号９５）：
gtgtgcttcgaggtggtgggctacctgctggaggagctgcgtgaccagaagaacctcgatatgctcaaggaggatgtggcctctgccaacatcttcatcggctcgctcatcttcattgaggagcttgccgagaag
ＣＨＬＨ１エクソン６（配列番号９６）：
attgtggaggcggtgagccccctgcgcgagaagctggacgcgtgcctgatcttcccgtccatgccggcggtcatgaagctgaacaagctgggcacgttttcgatggctcagctgggccagtcgaagtcggtgttctcggagttcatcaagtctgctcgcaag
ＣＨＬＨ１エクソン７（配列番号９７）：
aacaacgacaacttcgaggagggcttgctgaagctggtgcgcaccctgcctaaggtgctgaagtatctgccctcggacaaggcgcaggacgccaagaacttcgtgaacagcctgcagtactggctgggcggtaactcggacaacctggagaacctgctgctgaacaccgtcagcaactacgtgcccgctctgaagggcgtggacttcagcgtggctgagcccaccgcctaccccgatgtgggtatctggcaccctctggcctcgggcatgtacgaggacctgaaggagtacctgaactg
ＣＨＬＨ１エクソン８（配列番号９８）：
gtacgacacccgcaaggacatggtcttcgccaaggacgcccccgtcattggcctggtgctgcagcgctcgcacctggtgactggcgatgagggccactacagcggcgtggtcgctgagctggagagccgcggtgctaaggtcatccccgtctttgccg
ＣＨＬＨ１エクソン９（配列番号９９）：
gtggcctggacttctccgcccccgtcaagaagttcttctacgaccccctgggctctggccgcacgttcgtggacaccgttgtgtcgctgaccggcttcgcgctggtgggcggccccgcgcgccaggacgcgccgaaggccattgaggcgctgaagaacctgaacgtgccctacctggtgtcgctgccgctggtgttccagaccactgaggagtggctggacagcgagctgggcgtgcaccccgtccaggtggctctgcag
ＣＨＬＨ１エクソン１０（配列番号１００）：
gttgccctgcccgagctggatggtgccatggagcccatcgtgttcgctggccgtgactcgaacaccggcaagtcgcactcgctgcccgaccgcatcgcttcgctgtgcgctcgcgccgtgaactgggccaacctgcgcaagaagcgcaacgccgagaagaagctggccgtcaccgtgttcagcttcccccctgacaagggcaacgtcggcactgccgcctacctgaacgtgttcggctccatctaccgcgtgctgaagaacctgcagcgcgagggctacgacgtgggcgccctgccgccctcggaggaggatctgatccagtcggtgctgacccagaaggaggccaagttcaactcgaccgacctgcacatcgcctacaagatgaaggtggacgagtaccagaagctgtgcccttacgccgaggcgctggaggagaactggggcaagccccccggcaccctgaacaccaacggccaggagctgctggtgtacggccgccagtacggcaacgtcttcatcggcgtgcagcccaccttcggctacgagggcgacccgatgcgcctgctgttctcgaagtcggccagcccccaccacggcttcgccgcctactacaccttcctggagaagatcttcaaggccgacgccgtgctgcacttcggcacccacggctcgctggagttcatgcccggcaagcaggtcggcatgtcgggtgtgtgctaccccgactcgctgatcggcaccatccccaacctctactactacgccgccaacaacccgtctgaggccaccatcgccaagcgccgctcgtacgccaacaccatttcgtacctgacgccgcctgccgagaacgccggcctgtacaagggcctgaaggagctgaaggagctgatcagctcgtaccagggcatgcgtgagtctggccgcgccgagcagatctgcgccaccatcattgagaccgccaagctgtgcaacctggaccgcgacgtgaccctgcccgacgctgacgccaaggacctgaccatggacatgcgcgacagcgttgtgggccaggtgtaccgcaagctgatggagattgagtcccgcctgctgccctgcggcctgcacgtggtgggctgcccgcccaccgccgaggaggccgtggccaccctggtcaacatcgctgagctggaccgcccggacaacaacccccccatcaagggcatgcccggcatcctggcccgcgccattggtcgcgacatcgagtcgatttacagcggcaacaacaagggcgtcctggctgacgttgaccagctgcagcgcatcaccgaggcctcccgcacctgcgtgcgcgagttcgtgaaggaccgcaccggcctgaacggccgcatcggcaccaactggatcaccaacctgctcaagttcaccggcttctacgtggacccctgggtgcgcggcctgcagaacggcgagttcgccagcgccaaccgcgaggagctgatcaccctgttcaactacctggagttctgcctgacccag
ＣＨＬＨ１エクソン１１（配列番号１０１）：
gtggtcaaggacaacgagctgggcgccctggtagaggcgctgaacggccagtacgtcgagcccggccccggcggtgaccccatccgcaaccccaacgtgctgcccaccggcaagaacatccacgccctggaccctcagtcgattcccactcaggccgcgctgaagagcgcccgcctggtggtggaccgcctgctggaccgcgagcgcgacaacaacggcggcaagtaccccgagaccatcgcgctggtgctgtggggcactgacaacatcaagacctacggcgagtcgctggcccaggtcatgatgatggtcggtgtcaagcccgtggccgacgccctgggccgcgtgaacaagctggaggtgatccctctggaggagctgggccgcccccgcgtggacgtggttgtcaactgctcgggtgtgttccgcgacctgttcgtgaaccagatgctgctgctggaccgcgccatcaagctggcggccgagcaggacgagcccgatgagatgaacttcgtgcgcaagcacgccaagcagcaggcggcggagctgggcctgcagagcctgcgcgacgcggccacccgtgtgttctccaacagctcgggctcctactcgtccaacgtcaacctggcggtggagaacagcagctggagcgacgagtcgcagctgcaggagatgtacctgaagcgcaagtcgtacgccttcaactcggaccg
ＣＨＬＨ１エクソン１２（配列番号１０２）：
ccccggcgccggtggcgagatgcagcgcgacgtgttcgagacggccatgaagaccgtggacgtgaccttccagaacctggactcgtccgagatctcgctgaccgatgtgtcgcactacttcgactccgaccccaccaagctggtggcgtcgctgcgcaacgacggccgcacccccaacgcctacatcgccgacaccaccaccgccaacgcgcaggtccgcactctgggtgagaccgtgcgcctggacgcccgcaccaagctgctcaaccccaagtggtacgagggcatgcttgcctcgggctacgagggcgtgcgcgagatccagaagcgcatgaccaacaccatgggctggtcggccacctcgggcatggtggacaactgggtgtacgacgaggccaactcgaccttcatcgaggatgcggccatggccgagcgcctgatgaacaccaaccccaacagcttccgcaagctggtggccaccttcctggaggccaacggccgcggctactgggacgccaagcccgagcagctggagcgcctgcgccagctgtacatggacgtggaggacaagattgagggcgtcgaataa
ＣＨＬＨ１イントロン１（配列番号１０３）：
gtaggtgtaattagaaggatcaaaacctagcggcctgatctgggactgacggcctcgcgcttcaatcactctgatgcag
ＣＨＬＨ１イントロン２（配列番号１０４）：
gtaggcacggcagaatgctcaatgaacatgcagctacatatgtttgggatcatggctgatctctgtgcgacgggtccgcgcag
ＣＨＬＨ１イントロン３（配列番号１０５）：
gtgagcagcgcggaccgagcaagcgctggcgatgcagttggatttgttgttcttgggtcaggcgctcgctcgatggccagcgcgtgtatttaatgggataagggttgagacaaagcatctcttcgggtaaaaatcttagttttcgacagcacgttgagaggcatgcaacttgctctttcgcag
ＣＨＬＨ１イントロン４（配列番号１０６）：
gtgggtaaggagttgcattatcagtgtggcatggtgttgcgggcgtctggggcgctgcaacagcggcatcgtgccgaactgaccgtgccgggctacccgcgtgcag
ＣＨＬＨ１イントロン５（配列番号１０７）：
gtgcgctagggttggggtctggagggtgtggattgcgcccaagtgccctgttgcgcttggcggtcgctgtcatgatgtgagggtgacgtagtgcactcaattgcctgctacgtcaccacctttgatgggctggatctgaggcaggtcagctcggttccctgctgcatccagtgtccctgtcgccctgcacgtttgacgctgttcccccttccgcactgtctcgctttgcag
ＣＨＬＨ１イントロン６（配列番号１０８）：
gtgtgggcacgcgctttgggaagggaggcatacatttttggttgcggttaggctgggcgcggacttggcactcacacggtcattgcacactcatgtctcaccttcatttacggtcccttgtgccgaactacctacag
ＣＨＬＨ１イントロン７（配列番号１０９）：
gtgagcagcatcagggcagagtgcatgaacggattggtggcagtggggaatggaattagacggacacgtctgggcggcaatatgttgcgctgcagtttttggggtgtagtgaactagaaaatagggaagagataggccacataacatccgaaagctcatatttttgcaaccggcgcacctatcacagcccacctgaagggttttgtagtcaacgcgtgcaactgactagatgtccccttacctgtctgatttcag
ＣＨＬＨ１イントロン８（配列番号１１０）：
gtgaggcggggcggcgctgccctcggtaggggttgcagatggtgatgggtaaccgaatgcatggccaatggggagtgaaatcaggaaaggaggggtaacacaatgcagggcagcacctgaatcgtgaaggcggagttaggcagggatctgtcagttcgcctgtcacgtggatgggcgcagctgacctttgtggtgttgtggtgtggcgcag
ＣＨＬＨ１イントロン９（配列番号１１１）：
gtgagctcagctgggacatgtaggggctcgggtcgccggagcatcgatgtagaattacgggaggaggggagaggggagaggattgcacgaaccgagatgagggcggtggttcgggatttcgggcaaaagctcgtgcggcaagcgttcagtgactgaagagcagtgtgcttcaactgcccctctgtccctcag
ＣＨＬＨ１イントロン１０（配列番号１１２）：
gtgcgaccggtgccgctgcgtggccaacagcttggtgccaccttcctgcggtgttgatttacactgtgtgcgtggatgtgttggtttttcgcaactttagtctgggctccagctctttgccttcattgatcactcgtcttacctcctgcgccatcatttgaatacag
ＣＨＬＨ１イントロン１１（配列番号１１３）：
gtgagccttaatgcaacacgtgtagccgttcgcatgggtggctgggtcatgctatggttggatcggcgtccgcctgcttgctactgcctgttcggtaccagcgtttactgaccccgcgtgtgccattcccaccacctaccccctcgccttgcag
フェロキラターゼ５’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号１１４）：
gacagtgatatagcaataccgatataataggtttggcgggcttcaccttgtccttacccagaatgtggccctgacagtcgatttccagcccccttgccactcgctccctgatttcttcaatcaactagttgggtcgttttctcgtaagg
フェロキラターゼ３’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号１１５）：
gggggcgggtggcgagtaaggcgtatggcggagcgaggagatgggctgtggcgtggccggtgttcttttgtgtgattggaaacatagacggggtgcggcacgcggcctgactgctgcgcggttggtgtggttgcggggggagcggggtcgatggggcagcgcgcacgagttggttgaaggaggagggccaggcgctgggctacacccatggtttgaggatgctagtgagtgatgtgtgcggggggcatggtgtgtaccattcagagtccagatgcacgcacggttgcgtgggagcgttccctgctgtgcatgatgatggcgccttcgatgaatcatctcttgaaggtccaaatgaaacgtctgaagtctgcagagggtggtgctggacatgccatccaggcggaagtgggcagctgtgtctgactacaaagtaggtcttgttttgcttggatagcgtttggctatgtagcgtgtattctgctcatcaatcacgccaggcgtcagggactacccatgcaagtcgggagcgtggctggctctggaaaagttgtagctgctaggtggcgttggctggggtgtcatgcatctcggcaggtaggcggtagcggtggacgacctctgcagcggagcatgtgcacaagatgtgactgcgcatgcacccgtatatgacggcgttggcgtcagttgttgagagtgaacagaggagagacgagcgaagctgccatgcccttagtggctggtgcgagaggggaagaaagagagaggaaggactttgcggcagtgccccacgccggagttggggacacggtcatcaacagggcggcggagctgggcggagtgggtgtgtgatgggacagggttcaaggcaggttggcgaggtcggagtgggtagaccagtccttcagtgcaagggcattagggcatgatgtaagggctgaagcttg
フェロキラターゼエクソン１（配列番号１１６）：
atggcgtcgtttggattgatgcaaaggacggtgcactgtccccagcttgtggaggagcggtgttcgccggtcgctggctgctctggtcgtggcctgccagttatccagcggcaacg
フェロキラターゼエクソン２（配列番号１１７）：
gcgtggcgtgtgcagtgccaccaacggtgtccagcgagggcgtgtgctgcgccggacggccgcttcgaccgacgtggtctccttcgtggaccccaatgacattagaaaacccgcagcagcagcagctggccctgcggtggataaggtcggcgttctgctgttaaaccttggcgggcccgaaaagctcgacgacgtcaagcctttcctgtataacctattcgccgacccagaaattattcgcctgccagcggcagctcagttcctgcagccgctgctcgcgacgatcatctccacgcttcgcgccccgaagagcgcggagggctatgaggccattggcggtggtagcccgttgcgtaggattacagacgagcaggcggaggcgctggcggagtctctgcgcgccaagggccaacctgcgaacgtgtacgtgggcatgcgctattggcacccctacacggaggaggcgctggagcacattaaggccgacggcgtcacgcgcctggtcatcctcccgctgtaccctcagttctccatctctaccagcggctccagccttcgactgcttgagtcgctcttcaagagcgacatcgcgctcaagtcgctgcggcacacggtcatcccgtcctggtaccagcggcggggctacgtgagcgcgatggcggacctgattgtagag
フェロキラターゼエクソン３（配列番号１１８）：
gagctgaagaagttccgggacgtgcccagcgtggagctgtttttctccgcgcacggcgtgcccaagtcctacgtggaggaggcgggcgacccatacaaggaggagatggaggagtgcgtgcggctcattacggacgag
フェロキラターゼエクソン４（配列番号１１９）：
gtcaagcggcgcggcttcgccaacacgcacacgctggcctaccagagccgcgtgggccccgcggaatggctcaagccgtacacggatgagtccatcaa
フェロキラターゼエクソン５（配列番号１２０）：
ggagctgggcaagcgcggcgtcaagtcgctgctggcggtgcccatcagctttgtcagcgagcacattgagacgttggaggagatcgacatggagtaccgcgagctggcggaggagagcg
フェロキラターゼエクソン６（配列番号１２１）：
gcatccgcaactggggccgcgtgccggcgctgaacaccaacgccgccttcatcgacgacctggcggacgcggtgatggaggcgctgccctacgtgggctgcctggccgggccgacagactcgctggtgccgctgg
フェロキラターゼエクソン７（配列番号１２２）：
gcgacctggagatgctgctgcaggcctacgaccgcgagcgccgcacgctgccgtcaccggtggtgatgtgggagtggggctggaccaagagcgcggagacgtggaacggccgcattgccatgattgccatcatcatcatcctggcgctggaggcagccagcggccagtccatcctcaaaaacctgttcctggcggagtag
フェロキラターゼイントロン１（配列番号１２３）：
gtgcgataataaatttgcatccttatgaattgctcaatgactaacgagcagcgtccgcgaccacag
フェロキラターゼイントロン２（配列番号１２４）：
gtgagggtggcattctgtaaagggagttgtggagttgggcagagcgagtgggtttggtcgccagggcgaggatgttgcgcgggcgttggcaggaacagggctgctagggcttgcgtggccagcgactagggtttcgactggccagcgccgccggggcgcgcttgccgaagctgcacagccccaagcgcttctgtggatcaaatggaaacttgtggcagtgtgtatgctagcgccttggcgcaagaccaattttagtggtattactgttattactgtggtagcggtgggtattcggcggcgtggttgttgttgcagccccgtgcgactaagaccgctggcaacgacagcaagccgccgcacccaggcatatacggcccaccagcaccaccgtacacaaccacgtgcctttgcactctacgcaccacagcgcgctgctgccgctcccacctcccatcccaacggcccctcttacccccacttcacaacccctcctctcacacgccctcctcttccccctcctcttccag
フェロキラターゼイントロン３（配列番号１２５）：
gtgggccgggcgcagcgggcgggcgggaggggcaggaggggcaggaggggaggaagggaggggaggaagggatggaaagctggcgcagcggcagcggcgggacaggtagagggcgctgccccagcggcggcaggtgggcatggtgggcgggtaggggcgacgcgtgagggactcgtcaggcatccgcatggcggcgacttgctgctcctcaccgctgacggctgcatctgctgtgtgcgtaacctggcctggctggcaccgcag
フェロキラターゼイントロン４（配列番号１２６）：
gtgaggcccgtgggtgggacgcggggagggacgcggggagggggagacgcgggagcgggacaagggtgaggatacggggagggaataggagaggccatggggagggatggggacacgggaggatgcacgggcctgggtggagccagggggaagtggacgacgagcccggcgggaggagggctgggtagaaggacgcgggaggtggttgggacaggtggacggggcgtgtggagcatacggcgcaagaagcgggactgagcgggttgcagggatggatgtaatcacggcaagtaagaaccccgagtggggctcagcgtgtcagcctgccttatctttcgcgcaagcgctggggttttatttcgctgtacacacgtcgcgcctttctgccgcag
フェロキラターゼイントロン５（配列番号１２７）：
gtgaggaggcgccggagttttgggggaaggggtgcggcgtgaagcgagatggcaggggcgaaggaaggagcggatggtggctgggtgcaagcggagaggcgacagagagtggaggttttggtggagcggttggggagaggggcgcagcagggatgcggccctggggatggcgggacagaagggagcaagtttgccaagtgaagggggggggtgctcaagaggagagggcggtggaggttaagacggccgtgctggttatgctggggttgcaaggcgcatgggcgcatggagccgggggagtttggctgtggatgggcactgcggatgggcacggcttgctactcatgtgcggtcgcggtccgcggtgtgtcagccagccaggacccatcccactgggtcttcctgcgtgcctgggactgcttgccgccacccacccattcatcaccaccactgcgcagacccaccaacaccgctgccctgaactgctctgactcttggcgctcctcag
フェロキラターゼイントロン６（配列番号１２８）：
gtgagtcgcgccgtcgcggttggttcgcggatgccggttggcggatgacgttcggcggttggcattgggtttgggtttgaggggttgttgggtgaggtcgggattggggtcgggattgggggtcgagcgtggggctggcgtggatgatggcgtggtctttggaaggggcttggggaggttgcgcgtgtggatgcggacagcatgggcgcgacagtgcgcatgtgcatgtgctgtgtcaaacgtctggtgcgttcagtgtgtccttgcgtgcctcccaccgtacgcagccatcccgcgcgcctggaccgtagagaccgcctacgtgtccgctagcggcctcggcctcagcctaagcgccagtagcgccagcgacacaagcaacactgtcgctaatggcagcagcggcagcagcagcagtcacgagaatgcccgcggccgggagaaagtgctcctagccgggggccgccgctagctggtttcctcagcgcgtggacggtggtgccttcatcccgaccaccccaggcgcgtccccagtcccgtcgagctcgcctgccttgtggcccgccttgaccgccctggcgccacccggtggctcgcataacgactcgctttccgttctccgcctgacgctgtccgcctgacgctctgcgcttgactctttgcgccttcctcccctcttcccccag
変異配列決定された紅藻ＣＨＬＨ ＤＮＡ（配列番号１２９）：
atgcagacttcctcgcttcttggccggcgcacggcccacccggctgcgggcgcgacgcccaagccggttgcgccctcgccccgcgtggctagcacccgccaggtcgcgtgcaatgtggcgactggaccccggccgcccatgaccaccttcaccggtggcaacaagggccctgctaagcagcaggtgtcgctggatctgcgcgacgagggcgctggcatgttcaccagcaccagcccggagatgcgccgtgtcgtccctgacgatgtgaagggtcgcgttaaggtgaaggttgtgtacgtggtgctggaggcccagtaccagtcggccatcagcgctgcggtgaagaacatcaacgccaagaactccaaggtgtgcttcgaggtggtgggctacctgctggaggagctgcgtgaccagaagaacctcgatatgctcaaggaggatgtggcctctgccaacatcttcatcggctcgctcatcttcattgaggagcttgccgagaagattgtggaggcggtgagccccctgcgcgagaagctggacgcgtgcctgatcttcccgtccatgccggcggtcatgaagctgaacaagctgggcacgttttcgatggctcagctgggccagtcgaagtcggtgttctcggagttcatcaagtctgctcgcaagaacaacgacaacttcgaggagggcttgctgaagctggtgcgcaccctgcctaaggtgctgaagtatctgccctcggacaaggcgcaggacgccaagaacttcgtgaacagcctgcagtactggctgggcggtaactcggacaacctggagaacctgctgctgaacaccgtcagcaactacgtgcccgctctgaagggcgtggacttcagcgtggctgagcccaccgcctaccccgatgtgggtatctggcaccctctggcctcgggcatgtacgaggacctgaaggagtacctgaactggtacgacacccgcaaggacatggtcttcgccaaggacgcccccgtcattggcctggtgctgcagcgctcgcacctggtgactggcgatgagggccactacagcggcgtggtcgctgagctggagagccgcggtgctaaggtcatccccgtctttgccggtggcctggacttctccgcccccgtcaagaagttcttctacgaccccctgggctctggccgcacgttcgtggacaccgttgtgtcgctgaccggcttcgcgctggtgggcggccccgcgcgccaggacgcgccgaaggccattgaggcgctgaagaacctgaacgtgccctacctggtgtcgctgccgctggtgttccagaccactgaggagtggctggacagcgagctgggcgtgcaccccgtccaggtggctctgcaggttgccctgcccgagctggatggtgccatggagcccatcgtgttcgctggccgtgactcgaacaccggcaagtcgcactcgctgcccgaccgcatcgcttcgctgtgcgctcgcgccgtgaactgggccaacctgcgcaagaagcgcaacgccgagaagaagctggccgtcaccgtgttcagcttcccccctgacaagggcaacgtcggcactgccgcctacctgaacgtgttcggctccatctaccgcgtgctgaagaacctgcagcgcgagggctacgacgtgggcgccctgtccgccctcggaggaggatctgatccagtcggtgctgacccagaaggaggccaagttcaactcgaccgacctgcacatcgcctacaagatgaaggtggacgagtaccagaagctgtgcccttacgccgaggcgctggaggagaactggggcaagccccccggcaccctgaacaccaacggccaggagctgctggtgtacggccgccagtacggcaacgtcttcatcggcgtgcagcccaccttcggctacgagggcgacccgatgcgcctgctgttctcgaagtcggccagcccccaccacggcttcgccgcctactacaccttcctggagaagatcttcaaggccgacgccgtgctgcacttcggcacccacggctcgctggagttcatgcccggcaagcaggtcggcatgtcgggtgtgtgctaccccgactcgctgatcggcaccatccccaacctctactactacgccgccaacaacccgtctgaggccaccatcgccaagcgccgctcgtacgccaacaccatttcgtacctgacgccgcctgccgagaacgccggcctgtacaagggcctgaaggagctgaaggagctgatcagctcgtaccagggcatgcgtgagtctggccgcgccgagcagatctgcgccaccatcattgagaccgccaagctgtgcaacctggaccgcgacgtgaccctgcccgacgctgacgccaaggacctgaccatggacatgcgcgacagcgttgtgggccaggtgtaccgcaagctgatggagattgagtcccgcctgctgccctgcggcctgcacgtggtgggctgcccgcccaccgccgaggaggccgtggccaccctggtcaacatcgctgagctggaccgcccggacaacaacccccccatcaagggcatgcccggcatcctggcccgcgccattggtcgcgacatcgagtcgatttacagcggcaacaacaagggcgtcctggctgacgttgaccagctgcagcgcatcaccgaggcctcccgcacctgcgtgcgcgagttcgtgaaggaccgcaccggcctgaacggccgcatcggcaccaactggatcaccaacctgctcaagttcaccggcttctacgtggacccctgggtgcgcggcctgcagaacggcgagttcgccagcgccaaccgcgaggagctgatcaccctgttcaactacctggagttctgcctgacccaggtggtcaaggacaacgagctgggcgccctggtagaggcgctgaacggccagtacgtcgagcccggccccggcggtgaccccatccgcaaccccaacgtgctgcccaccggcaagaacatccacgccctggaccctcagtcgattcccactcaggccgcgctgaagagcgcccgcctggtggtggaccgcctgctggaccgcgagcgcgacaacaacggcggcaagtaccccgagaccatcgcgctggtgctgtggggcactgacaacatcaagacctacggcgagtcgctggcccaggtcatgatgatggtcggtgtcaagcccgtggccgacgccctgggccgcgtgaacaagctggaggtgatccctctggaggagctgggccgcccccgcgtggacgtggttgtcaactgctcgggtgtgttccgcgacctgttcgtgaaccagatgctgctgctggaccgcgccatcaagctggcggccgagcaggacgagcccgatgagatgaacttcgtgcgcaagcacgccaagcagcaggcggcggagctgggcctgcagagcctgcgcgacgcggccacccgtgtgttctccaacagctcgggctcctactcgtccaacgtcaacctggcggtggagaacagcagctggagcgacgagtcgcagctgcaggagatgtacctgaagcgcaagtcgtacgccttcaactcggaccgccccggcgccggtggcgagatgcagcgcgacgtgttcgagacggccatgaagaccgtggacgtgaccttccagaacctggactcgtccgagatctcgctgaccgatgtgtcgcactacttcgactccgaccccaccaagctggtggcgtcgctgcgcaacgacggccgcacccccaacgcctacatcgccgacaccaccaccgccaacgcgcaggtccgcactctgggtgagaccgtgcgcctggacgcccgcaccaagctgctcaaccccaagtggtacgagggcatgcttgcctcgggctacgagggcgtgcgcgagatccagaagcgcatgaccaacaccatgggctggtcggccacctcgggcatggtggacaactgggtgtacgacgaggccaactcgaccttcatcgaggatgcggccatggccgagcgcctgatgaacaccaaccccaacagcttccgcaagctggtggccaccttcctggaggccaacggccgcggctactgggacgccaagcccgagcagctggagcgcctgcgccagctgtacatggacgtggaggacaagattgagggcgtcgaataa
ＣＨＬＩ１ ５’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号１３０）：
tcctacagagtaaaggtctaggcgatgcgcgactgaaagactgtgaatcccggcgtcgccgtggtgggatgtgggccggtgcgctgtcgcagaggataaattacaggtatcaaacaaggttagggcgttggaaggagcggcgctagggaactgaaatcggatctgcatcggaccctcattccgcgacttgtccttcttttgcctcgccccgcagctcttgagttttgttcttgaccctttgacacgaaccaaccgatataaaa
ＣＨＬＩ１ ３’- 非翻訳領域（調節領域）（配列番号１３１）：
gcggcaggccttcatggtcgtcgttggagcatttgcggaaaggctgatggcagcagatgcagccatgtcagttgtggctgaagttgttggctggggcgggagcgggcagcagctgctgcgagcggccgaagcagcggtgctgctttgcgtatgagaggaagaccagtgccctcgaggaggcgagtgcctgtgtgagtgtcaggacgtgtgacttcggaaactgagggcggtgagtagatgtgactggggcttgcaggaagcctactgaccctatcagaaaaggtgagcaggggtatatggtctaggagcgttgccggagcgtggctggccagtgctagccgcgcgggctctgttgctcgctggcgcgccgccgccttcacaacagatgccgtagaaatgcagcgatgtgacgaggcgtggcctattctgcaatgtgtgaggcgccaatggcgccactgacaaatggaggagtggtcaaagcttgggtacgttttgagagctgcatcgggcagcgaggatcagtgtgcggtaagaccgacggcagacggattggcaagggaataggagggacgtgggcgtgggcgcccgcgctttgtcgaggccgcatgagccggccgcttctagacccgtagcccattttgaacaagcgcccacgcgtgctcccgatgggggacatcgatcacgggaattgattaaggggcatgtgtggtgtgcaagtgagtgactggtggttccgtccctgtgaggttgtttcgttggacgtggctgccgggttgcgcgcgggctaagcgggcctgaggcagagcgctggcgtgtagccgcgagtatcgatctgtaacgtgc
ＣＨＬＩ１エクソン１（配列番号１３２）：
atggccctgaacatgcgtgtttcctcttccaaggtcgctgccaagcagcagggccgcatctccgcggtgccggttgtgtcgagcaaggtggcctcctccgcccgcgtggcccccttccag
ＣＨＬＩ１エクソン２（配列番号１３３）：
ggcgctcccgtggccgcgcagcgcgctgctctgctgg
ＣＨＬＩ１エクソン３（配列番号１３４）：
tgcgcgccgctgccgctactgaggtcaaggctgctgagggccgcactgagaaggagctgg
ＣＨＬＩ１エクソン４（配列番号１３５）：
gccaggcccgccccatcttccccttcaccgccatcgtgggccaggatgagatgaagctggcgctgattctgaacgtgatcgaccccaagatcggtggtgtcatgatcatgggcgaccgtggcactggcaagtccaccaccattcgtgccctggcggatctgctgcccgagatgcag
ＣＨＬＩ１エクソン５（配列番号１３６）：
gtggttgccaacgacccctttaactcggaccccaccgaccccgagctgatgagcgaggaggtgcgcaaccgcgtcaaggccggcgagcagctgcccgtgtcttccaagaagattcccatggtggacctgcccctgggcgccactgaggaccgcgtgtgcggcaccatcgacatcgagaaggcgctgaccgagg
ＣＨＬＩ１エクソン６（配列番号１３７）：
gtgtcaaggcgttcgagcccggcctgctggccaaggccaaccgcggcatcctgtacgtggatgaggtcaacctgctggacgaccacctg
ＣＨＬＩ１エクソン７（配列番号１３８）：
gtcgatgtgctgctggactcggccgcctccggctggaacaccgtggagcgcgagggtatctccatcagccaccccgcccgcttcatcctggtcggctcgg
ＣＨＬＩ１エクソン８（配列番号１３９）：
gcaaccccgaggagggtgagctgcgcccccagctgctggatcgcttcggcatgcacgcccagatcggcaccgtcaaggacccccgcctgcgtgtgcagatcgtgtcgcagcgctcgaccttcgacgagaaccccgccgccttccg
ＣＨＬＩ１エクソン９（配列番号１４０）：
caaggactacgaggccggccagatggcgctgacccagcgcatcgtggacgcgcgcaagctgctgaagcagggcgaggtcaactacgacttccgcgtcaagatcagccagatctgctcggacctgaacgtggacggcatccgcggcgacatcgtgaccaaccgcgccgccaaggccctggccgccttcgagggccgcaccgag
ＣＨＬＩ１エクソン１０（配列番号１４１）：
gtgacccccgaggacatctaccgtgtcattcccctgtgcctgcgccaccgcctccggaaagaccccctggctgagatcgacgacggtgaccgcgtgcgtgagatcttcaagcaggtgttcggcatggagtaa
ＣＨＬＩ１イントロン１（配列番号１４２）：
gtgtgcagttgcatctaaagaacgtccaattcatggttactgctcgtggatctaagcggttggctcaccagcgttccatggtccccgattcgtgcacgcag
ＣＨＬＩ１イントロン２（配列番号１４３）：
gtgagaagccatgatacaaatataaggatttgaagcggtagatctaggacccatcgaacttgagcaccgacttgcagtccttgccttgtccggcgactgaacttctgcgcttgctttgcag
ＣＨＬＩ１イントロン３（配列番号１４４）：
gtaagtgtcgcgcaaagattttctgccgggacgggtctccctcgcaacatctgaacccatggctcgtttttttgccccgcag
ＣＨＬＩ１イントロン４（配列番号１４５）：
gtgcgcgcctcccccaaccccagtttggcaaatgtgtggttaagcgtcgaaagcgtgaacagaaacaggtgttgcgggggccgcggaatggctgcaatgggtgctgggggcttcggagggtctgggggcgagtttgggtatacacgggcgcgcacacttgaaggaacgctcaaggacgacagcggaggcgtggagacagcgccggcccaagcagcctgtacttgtagctgctggtcagctgaggcatcacgacttgggaccagcacccggcctcacggttgcacaaggccatcaccgcgcgccaccacccacgcctcttcaaacccatgccggcacctaccgctacccctgtgacacgctccgcacacgccgccccgcacaccccaccatgtgacag
ＣＨＬＩ１イントロン５（配列番号１４６）：
gtgagagcgaggcgcggggcgtgctctgcaggctagggtgaagatcaggagagccgaagcgggcccgaacagcgcagagagaggcaagacgacacccctgccgcgttttgatcacaagattcacacccttgctctccccaacgctcccgcacatag
ＣＨＬＩ１イントロン６（配列番号１４７）：
gtgagcaggggcagataggcggtcgggcggctgggcggcaggggctgtgttggctgtgttgggtgtgggctgaggctggtgggtgggctggcgggtggcagggatagcggtgaggggatggtgatggggcagaatgggcgggtgggcggacacgtggggtcgttgaagggtgtgtggggacggcaactggtatgcgatatgtcggcttggccctggcggggaaagcattcgcagaatggcgcacgaacgaggccggggagcgagcggggatgggagacgcaacctgcgctgcgaagtgcggcgcgcgctccagttgacacgttgcacgaatgtggccagtgttcgcctgagagttatgggttagaccgccagatgagccggttaagctggtggtcgcggttgatcggctgcttcccttccggttgcacgcctggcaccctaacattaccctgtccgctgctgccctttgcccacag
ＣＨＬＩ１イントロン７（配列番号１４８）：
gtgagtgcagctgccgctgcggctgctgatggtgacctgtgcgaccacggggctccgcatttctggacgaagcgttgtaccatagccgtcttggtccctgatttgggccggctctggtccgaagccttgacatctacagttcaacatggccgtataacgatcctgtgcccacccacacgccaccccgccag
ＣＨＬＩ１イントロン８（配列番号１４９）：
gtgagcgcgcgctctacgatacggcagacatgtacacactgcggcgcactgtagagcttgcattgcatttcaaggcctcgaaagagtagggtggtcgttctctggtggtgtccggccacaattatgcaccccggtgttggtgcagcagctgtgatgtcacaccttgcatcacccccctactgctgccgcctctcctctcttctcgcccgcag
ＣＨＬＩ１イントロン９（配列番号１５０）：
gtgagcagagcaatattgcagagggaagggtggcggaagggtgataacggttggggatctagaggggcgagatggatgcacacagcgcggggttggttatgcatgcctgcatggacgcgtgcacgcacccctgatctgccggttttccaactggcgatgccgtattatgacctgcagctcaccatcctcatgcttgatttgcctcgctcag
ＣＨＬＩ１タンパク質配列（配列番号１５１）：
MALNMRVSSSKVAAKQQGRISAVPVVSSKVASSARVAPFQGAPVAAQRAALLVRAAAATEVKAAEGRTEKELGQARPIFPFTAIVGQDEMKLALILNVIDPKIGGVMIMGDRGTGKSTTIRALADLLPEMQVVANDPFNSDPTDPELMSEEVRNRVKAGEQLPVSSKKIPMVDLPLGATEDRVCGTIDIEKALTEGVKAFEPGLLAKANRGILYVDEVNLLDDHLVDVLLDSAASGWNTVEREGISISHPARFILVGSGNPEEGELRPQLLDRFGMHAQIGTVKDPRLRVQIVSQRSTFDENPAAFRKDYEAGQMALTQRIVDARKLLKQGEVNYDFRVKISQICSDLNVDGIRGDIVTNRAAKALAAFEGRTEVTPEDIYRVIPLCLRHRLRKDPLAEIDDGDRVREIFKQVFGME
変異タンパク質配列紅藻ＣＨＬＨ（配列番号１５２）：
MQTSSLLGRRTAHPAAGATPKPVAPSPRVASTRQVACNVATGPRPPMTTFTGGNKGPAKQQVSLDLRDEGAGMFTSTSPEMRRVVPDDVKGRVKVKVVYVVLEAQYQSAISAAVKNINAKNSKVCFEVVGYLLEELRDQKNLDMLKEDVASANIFIGSLIFIEELAEKIVEAVSPLREKLDACLIFPSMPAVMKLNKLGTFSMAQLGQSKSVFSEFIKSARKNNDNFEEGLLKLVRTLPKVLKYLPSDKAQDAKNFVNSLQYWLGGNSDNLENLLLNTVSNYVPALKGVDFSVAEPTAYPDVGIWHPLASGMYEDLKEYLNWYDTRKDMVFAKDAPVIGLVLQRSHLVTGDEGHYSGVVAELESRGAKVIPVFAGGLDFSAPVKKFFYDPLGSGRTFVDTVVSLTGFALVGGPARQDAPKAIEALKNLNVPYLVSLPLVFQTTEEWLDSELGVHPVQVALQVALPELDGAMEPIVFAGRDSNTGKSHSLPDRIASLCARAVNWANLRKKRNAEKKLAVTVFSFPPDKGNVGTAAYLNVFGSIYRVLKNLQREGYDVGALSALGGGSDPVGADPEGGQVQLDRPAHRLQDEGGRVPEAVPLRRGAGGELGQAPRHPEHQRPGAAGVRPPVRQRLHRRAAHLRLRGRPDAPAVLEVGQPPPRLRRLLHLPGEDLQGRRRAALRHPRLAGVHARQAGRHVGCVLPRLADRHHPQPLLLRRQQPV
ＣＨＬＩ１ ＤＮＡ配列（配列番号１５３）：
atggccctgaacatgcgtgtttcctcttccaaggtcgctgccaagcagcagggccgcatctccgcggtgccggttgtgtcgagcaaggtggcctcctccgcccgcgtggcccccttccagggcgctcccgtggccgcgcagcgcgctgctctgctggtgcgcgccgctgccgctactgaggtcaaggctgctgagggccgcactgagaaggagctgggccaggcccgccccatcttccccttcaccgccatcgtgggccaggatgagatgaagctggcgctgattctgaacgtgatcgaccccaagatcggtggtgtcatgatcatgggcgaccgtggcactggcaagtccaccaccattcgtgccctggcggatctgctgcccgagatgcaggtggttgccaacgacccctttaactcggaccccaccgaccccgagctgatgagcgaggaggtgcgcaaccgcgtcaaggccggcgagcagctgcccgtgtcttccaagaagattcccatggtggacctgcccctgggcgccactgaggaccgcgtgtgcggcaccatcgacatcgagaaggcgctgaccgagggtgtcaaggcgttcgagcccggcctgctggccaaggccaaccgcggcatcctgtacgtggatgaggtcaacctgctggacgaccacctggtcgatgtgctgctggactcggccgcctccggctggaacaccgtggagcgcgagggtatctccatcagccaccccgcccgcttcatcctggtcggctcgggcaaccccgaggagggtgagctgcgcccccagctgctggatcgcttcggcatgcacgcccagatcggcaccgtcaaggacccccgcctgcgtgtgcagatcgtgtcgcagcgctcgaccttcgacgagaaccccgccgccttccgcaaggactacgaggccggccagatggcgctgacccagcgcatcgtggacgcgcgcaagctgctgaagcagggcgaggtcaactacgacttccgcgtcaagatcagccagatctgctcggacctgaacgtggacggcatccgcggcgacatcgtgaccaaccgcgccgccaaggccctggccgccttcgagggccgcaccgaggtgacccccgaggacatctaccgtgtcattcccctgtgcctgcgccaccgcctccggaaagaccccctggctgagatcgacgacggtgaccgcgtgcgtgagatcttcaagcaggtgttcggcatggagtaa
上述した実施例に基づき本発明を説明したが、その変更及び変形が、本発明の真意及び範囲に含まれることが理解されるであろう。従って、本発明は、特許請求の範囲によってのみ限定される。

Claims (81)

  1. 遺伝子改変を有する改変藻類であって、前記遺伝子改変により、遺伝子改変のない藻類と比較して、前記改変藻類にヘムが蓄積する、改変藻類。
  2. クロロフィル生成が減少または欠如している、請求項１に記載の改変藻類。
  3. 赤色または赤に類似する色を有する、請求項１または２に記載の改変藻類。
  4. グルコースを唯一の炭素源として成長する能力を有する、請求項１～３のいずれかに記載の改変藻類。
  5. 前記遺伝子改変は、クロロフィル合成経路、プロトポルフィリノーゲンIX合成経路、またはヘム合成経路に対する遺伝子改変を含む、請求項１～４のいずれかに記載の改変藻類。
  6. 前記遺伝子改変は、マグネシウムキラターゼの発現の欠乏に関わるものである、請求項１～５のいずれかに記載の改変藻類。
  7. 前記遺伝子改変は、ＣＨＬＤ、ＣＨＬＩ１、ＣＨＬＩ２、及びＣＨＬＨ１のうちの１つ以上における改変を含む、請求項１～６のいずれかに記載の改変藻類。
  8. 前記遺伝子改変は、上流調節領域、下流調節領域、エクソン、イントロン、またはそれらの任意の組み合わせにおける改変を含む、請求項７に記載の改変藻類。
  9. 前記遺伝子改変は、挿入、欠失、点突然変異、逆位、重複、フレームシフト、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５～８のいずれかに記載の改変藻類。
  10. クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、請求項１～９のいずれかに記載の改変藻類。
  11. クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、請求項１～９のいずれかに記載の改変藻類。
  12. １つ以上の脂肪酸の生成が減少している、請求項１～１１のいずれかに記載の改変藻類。
  13. 光非依存性プロトクロロフィリドオキシドレダクターゼの発現を低減または排除する遺伝子改変を更に含む、請求項１～１２のいずれかに記載の改変藻類。
  14. 前記遺伝子改変は、ＣｈｌＢ、ＣｈｌＬ、及びＣｈｌＮのうちの１つ以上における突然変異または欠失を含む、請求項１３に記載の改変藻類。
  15. フェロケレターゼの発現がアップレギュレートされている、請求項１～１４のいずれかに記載の改変藻類。
  16. プロトポルフィリノーゲンIXオキシダーゼの発現がアップレギュレートされている、請求項１～１５のいずれかに記載の改変藻類。
  17. 組換え核酸または異種核酸を含む、請求項１～１６のいずれかに記載の改変藻類。
  18. 前記改変藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）である、請求項１～１７のいずれかに記載の改変藻類。
  19. 前記クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、請求項１８に記載の改変藻類。
  20. 藻類調製物を含有する食用組成物であって、前記藻類調製物は、請求項１～１９のいずれかに記載の改変藻類またはその一部を含む、食用組成物。
  21. 前記改変藻類に由来するヘムを含有する、請求項２０に記載の食用組成物。
  22. 前記藻類調製物は、藻類細胞を含む、請求項２０に記載の食用組成物。
  23. 前記藻類調製物は、分画された藻類調製物である、請求項２０に記載の食用組成物。
  24. 前記藻類調製物は、赤色または赤に類似する色である、請求項２０～２３のいずれかに記載の食用組成物。
  25. 前記藻類調製物に由来する赤色または赤に類似する色を有する、請求項２０～２４のいずれかに記載の食用組成物。
  26. 前記藻類調製物は、前記食用組成物に肉の風味または肉に似た風味を与える、請求項２０～２５のいずれかに記載の食用組成物。
  27. 前記藻類調製物に由来する肉の食感または肉に似た食感を有する、請求項２０～２６のいずれかに記載の食用組成物。
  28. 前記肉の食感または肉に似た食感は、牛肉の食感もしくは牛肉に似た食感、魚肉の食感もしくは魚肉に似た食感、鶏肉の食感もしくは鶏肉に似た食感、豚肉の食感もしくは豚肉に似た食感、または模造肉の食感である、請求項２７に記載の食用組成物。
  29. 牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、及び模造肉からなる群より選択される完成製品である、請求項２０～２８のいずれかに記載の食用組成物。
  30. 完全菜食主義者用、菜食主義者用、またはグルテン非含有である、請求項２０～２９のいずれかに記載の食用組成物。
  31. 前記藻類調製物に由来する血液の見かけを有する、請求項２０～３０のいずれかに記載の食用組成物。
  32. 前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、請求項２０～３１のいずれかに記載の食用組成物。
  33. 前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、請求項２０～３２のいずれかに記載の食用組成物。
  34. 前記藻類調製物は、総タンパク質含有量の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％を前記食用組成物にもたらす、請求項２０～３３のいずれかに記載の食用組成物。
  35. 前記藻類調製物は、ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせを前記食用組成物にもたらす、請求項２０～３４のいずれかに記載の食用組成物。
  36. 前記ビタミンＡ、ベータカロチン、またはそれらの組み合わせは、１日の推奨必要量の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％である、請求項３５に記載の食用組成物。
  37. 前記藻類調製物は、前記食用組成物中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす、請求項２０～３６のいずれかに記載の食用組成物。
  38. 前記藻類調製物は、前記食用組成物を含む完成製品中に存在する総飽和脂肪の約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．５％、２％、５％、または１０％より少ない飽和脂肪をもたらす、請求項２０～３７のいずれかに記載の食用組成物。
  39. 前記藻類調製物は、少なくとも約５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇのオメガ３脂肪酸を前記食用組成物にもたらす、請求項２０～３８のいずれかに記載の食用組成物。
  40. 前記藻類調製物は、脂肪酸含有量が減少している、請求項２０～３９のいずれかに記載の食用組成物。
  41. タンパク質源、脂肪源、炭水化物、デンプン、増粘剤、ビタミン、ミネラル、またはそれらを任意に組み合わせたものと組み合わされる、請求項２０～４０のいずれかに記載の食用組成物。
  42. 前記タンパク質源は、小麦由来組織状タンパク質、大豆由来組織状タンパク質、エンドウ豆由来組織状タンパク質、真菌タンパク質、及び藻類タンパク質からなる群より選択される、請求項４１に記載の食用組成物。
  43. 前記脂肪源は、精製したココナッツ油及びヒマワリ油の少なくとも一方を含む、請求項４１に記載の食用組成物。
  44. ジャガイモデンプン、メチルセルロース、水、及び調味料のうちの少なくとも１つを更に含有し、前記調味料は、酵母エキス、ニンニク粉末、タマネギ粉末、塩、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項４１～４３のいずれかに記載の食用組成物。
  45. ハンバーガ、ソーセージ、ケバブ、フィレ、魚肉代替物、ひき肉風製品、またはミートボールの材料である、請求項４１～４４のいずれかに記載の食用組成物。
  46. 前記ハンバーガは、約５％の前記藻類調製物、約２０％の大豆由来組織状タンパク質、及び約２０％の精製ココナッツ油を含有する、請求項４５に記載の食用組成物。
  47. 約３％のヒマワリ油、約２％のジャガイモデンプン、約１％のメチルセルロース、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する、請求項４６に記載の食用組成物。
  48. 約０．５％のコンニャクガム、約０．５％のキサンタンガム、約４５％の水、及び約４～９％の調味料を更に含有する、請求項４６に記載の食用組成物。
  49. 前記魚肉代替物は、２０％の大豆由来組織状タンパク質、約５％の藻類調製物、約６５％の水、及び約１０％の調味料を含有する、請求項４５に記載の食用組成物。
  50. 動物性タンパク質を含有しない、請求項２０～４９のいずれかに記載の食用組成物。
  51. 前記藻類調製物は、プロトポルフィリノーゲンIXの合成または蓄積が増加した藻類を含む、請求項２０～５０のいずれかに記載の食用組成物。
  52. 前記藻類調製物は、暗条件で生育すると、赤色または赤に類似する色を呈する藻類を含む、請求項２０～５１のいずれかに記載の食用組成物。
  53. 前記藻類調製物中の藻類は、組換え藻類または遺伝子改変藻類である、請求項２０～５２のいずれかに記載の食用組成物。
  54. 前記藻類調製物は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）を含む、請求項２０～５３のいずれかに記載の食用組成物。
  55. 前記クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、請求項５４に記載の食用組成物。
  56. 食用組成物を生成する方法であって、
    （ａ）請求項１～１９のいずれかに記載の改変藻類を、前記改変藻類が赤色または赤に類似する色を呈する条件のもとで培養し、前記改変藻類がヘムを生成するステップと、
    （ｂ）培養した前記改変藻類を採取して藻類調製物を生成するステップと、
    （ｃ）前記藻類調製物を、少なくとも１つの食用成分と組み合わせて、食用組成物を生成するステップと
    を備える、方法。
  57. 前記条件は、発酵条件を含む、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記条件は、前記改変藻類の成長のための還元炭素源として酢酸塩を含む、請求項５６または５７に記載の方法。
  59. 前記条件は、前記改変藻類の成長のための還元炭素源として糖を含む、請求項５６～５８のいずれかに記載の方法。
  60. 前記条件は、暗い状態または光が制限された状態を含む、請求項５６～５９のいずれかに記載の方法。
  61. 培養した前記改変藻類を分画して前記藻類調製物を生成するステップを更に備える、請求項５６～６０のいずれかに記載の方法。
  62. 前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いヘム含有量を有する、請求項５６～６１のいずれかに記載の方法。
  63. 前記藻類調製物は、クロロフィル含有量よりも多いプロトポルフィリンIX含有量を有する、請求項５６～６２のいずれかに記載の方法。
  64. 前記条件は、鉄の補給を更に含む、クレーム５６～６３のいずれかに記載の方法。
  65. 前記遺伝子改変藻類は、クラミドモナス属の種（Chlamydomonas sp.）である、請求項５６～６４のいずれかに記載の方法。
  66. 前記遺伝子改変藻類は、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）である、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記食用組成物は、肉の風味または肉に似た風味、肉の食感または肉に似た食感、血液のような見かけ、及び肉の色または肉に似た色からなる群より選択される少なくとも１つの特徴を有し、前記少なくとも１つの特徴は、前記藻類調製物に由来する、請求項５６～６６のいずれかに記載の方法。
  68. 前記食用組成物を含む完成製品を製造するステップを更に備え、前記完成製品は、牛肉風食料製品、魚肉風製品、鶏肉風製品、豚肉風製品、または模造肉である、請求項５６～６７のいずれかに記載の方法。
  69. 前記食用組成物は、動物性タンパク質を含有しない、請求項５６～６８のいずれかに記載の方法。
  70. 前記藻類調製物は、デンプン、タンパク質、ＰＰIX、脂肪酸、及びクロロフィルのうちの１つ以上を除去するために分画される、請求項５６～６９のいずれかに記載の方法。
  71. 含有するヘムが富化された改変藻類を作る方法であって、
    （ａ）遺伝子改変を生成するプロセスを藻類株に適用して、第１の藻類集団を作り出すステップと、
    （ｂ）ヘムが富化され、任意でＰＰIXが富化された第２の藻類集団を、前記第１の藻類集団から選択するステップと
    を備える、方法。
  72. 前記プロセスは、ランダムなＵＶ突然変異誘発、ランダムな化学的突然変異誘発、組換え遺伝子操作、遺伝子編集、及び遺伝子サイレンシングのうちの少なくとも１つを含む、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記第１の藻類集団を発酵条件で培養するステップを更に備える、請求項７１または７２に記載の方法。
  74. 前記発酵条件は、唯一の炭素源として糖を有する培地を含む、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記糖は、グルコース、デキストロース、フルクトース、マルトース、ガラクトース、スクロース、及びリボースからなる群より選択される、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記発酵条件は、５００ルクス未満の照度を含む、請求項７３～７５のいずれかに記載の方法。
  77. 前記第２の藻類集団を選択するステップは、赤色または赤に類似する色を有する藻類細胞を選別または識別するステップを含む、請求項７３～７６のいずれかに記載の方法。
  78. 前記第２の藻類集団を選択するステップは、ＦＡＣＳによって行われる、請求項７３～７７のいずれかに記載の方法。
  79. 前記第２の藻類集団は、前記発酵条件で成長する能力で選択される、請求項７３～７８のいずれかに記載の方法。
  80. 前記藻類調製物は、プロトポルフィリノーゲンIXの合成または蓄積が増加した藻類を含む、請求項２０～５９のいずれかに記載の食用組成物。
  81. 前記藻類調製物が、暗条件で生育するときに、赤色または赤に類似する色を呈する藻類を含む、請求項２０～５９のいずれかに記載の食用組成物。
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