JP2022505585A - Ａｌｋ２抗体及びその使用方法 - Google Patents

Ａｌｋ２抗体及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

Figure 2022505585000001
本発明は、ＡＬＫ２抗体及びその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を特徴とする。本発明はまた、骨の疾患又は損傷、低赤血球レベル（例えば、貧血又は失血）、異所性骨化（例えば、進行性骨化性線維異形成症に起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、多発性骨軟骨腫、びまん性内因性橋グリオーマ、後嚢混濁、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療するための、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントを使用する医薬組成物及び方法を特徴とする。

Description

健康な骨は、骨の破壊及び骨の成長の両方を伴う絶え間ないリモデリングを受ける。骨の成長は骨芽細胞種によって仲介されるのに対し、破骨細胞は骨を吸収する。病状は、これらのシステムが同化プログラムのダウンレギュレーション、異化システムのアップレギュレーションのいずれか、又は両方の組み合わせによってバランスを崩し、正味の骨量減少をもたらすときに生じる。したがって、骨リモデリングのバランスを制御することは、骨への損傷の治癒を促進するだけでなく、骨量の減少や骨の脱灰に関連する骨粗鬆症などの障害の治療に役立つ可能性がある。
骨の損傷は、加齢やがんに関連する骨量減少、遺伝的条件、薬物治療の有害な副作用など、様々な根本原因から生じ得る。世界保健機関は、骨粗鬆症だけでも米国、ヨーロッパ及び日本で７５００万人が罹患しており、骨損傷の重大な危険因子であると推定している。一般に、骨量減少の全体は、効果的な治療法がほとんどない病的状態を表している。代わりに、治療は、骨の成長を直接促進し、骨密度を増加させる薬剤ではなく、固定、運動、及び食事の変更に重点を置いている。骨粗鬆症に関しては、エストロゲン、カルシトニン、ビタミンＫと併用したオステオカルシン、又は食品としての高用量のカルシウムがいずれも治療的介入として使用される。骨粗鬆症に対する他の治療的アプローチには、ビスホスホナート、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、カルシウム模倣薬、スタチン、アナボリックステロイド、ランタン及びストロンチウム塩、及びフッ化ナトリウムが含まれる。しかしながら、そのような治療剤はしばしば望ましくない副作用を伴う。
貧血は、罹患率と死亡率の両方に影響を与える健康への影響を伴う世界的な健康問題である。米国だけでも、貧血の有病率は２００３年から２０１２年にかけて２倍近くになった。貧血の症状には、倦怠感、脱力感、息切れ、動悸、認知能力の低下などがあり、子供、妊婦、生殖年齢の女性、高齢者が貧血を発症するリスクが最も高いことがわかっている。貧血の最も一般的な形態は鉄欠乏性貧血であるが、貧血は慢性疾患、失血、及び赤血球の破壊によっても引き起こされ得る。鉄欠乏性貧血は鉄サプリメントで治療できるが、再生不良性貧血、慢性疾患の貧血、溶血性貧血など、他の多くの形態の貧血には輸血が必要な場合がある。
異所性骨化（ＨＯ）は、軟部組織における骨格外骨の病理学的形成である。このプロセスは、大面積の火傷、筋骨格系損傷、整形外科手術、脊髄損傷などの重度の外傷を伴う患者集団、及び進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）として知られる遺伝性疾患を有する患者集団で生じる。ＦＯＰは、Ｉ型骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体アクチビンＡ受容体Ｉ型（ＡＣＶＲ１）の過剰活性化変異によって引き起こされ、ＦＯＰの患者は、筋肉、腱、靭帯、及びその他の結合組織に、実質的な外傷を伴わない異所性骨病変を発症する可能性がある。これらの病理学的異所性骨形成の臨床的後遺症には、外傷の状況か遺伝子変異かにかかわらず、非治癒性の創傷、慢性的な痛み、及び関節の不動が含まれる。ＦＯＰの場合、異所性骨の形成は、関節を横断して発達する骨の橋をもたらす可能性があり、動きを徐々に制限し、進行性の骨化が胸郭のコンプライアンスの喪失により死をもたらす可能性がある。
外科的切除後に骨が再発することが多いため、ＨＯの治療オプションは限られており、余分な骨を外科的に除去しようとすると、さらに骨が成長する可能性がある。さらに、一部の患者は、傷つきやすい位置にＨＯを有するため切除不能な場合がある。特に再発に直面した場合、手術のリスクは切除の利益を上回る可能性がある。リスクのある患者でＨＯが最初に発生する前にＨＯを予防し、及び／又はＨＯの量を減らし、ＨＯの再発を低減し、又はＦＯＰの患者でさらなる異所性骨形成を予防することができる治療オプションが必要である。現在、ＦＯＰの承認された治療法はない。
シェーグレン症候群は、ドライアイと口渇という２つの最も一般的な症状によって識別される全身性自己免疫疾患である。また、関節の痛み、腫れ、こわばり、唾液腺の腫れ、皮膚の発疹や乾燥肌、膣の乾燥、持続性の乾いた咳、長時間の倦怠感を特徴とする場合がある。シェーグレン症候群はまた、腎臓、胃腸系、血管、肺、肝臓、膵臓、中枢神経系などの臓器の機能障害を引き起こす可能性がある。これは最も一般的な自己免疫疾患の１つであり、４００万人を超えるアメリカ人がこの疾患に苦しんでおり、その９割が女性である。シェーグレン症候群に関連するドライアイは、免疫抑制剤とステロイド点眼薬で治療され得る。ただし、眼圧の上昇や易感染性などの副作用があるため、ステロイド点眼薬は長期間使用するべきではない。
びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）は、橋に由来する小児脳腫瘍であり、すべての小児脳腫瘍の約２０％を占める。ＤＩＰＧは、生存期間の中央値が１０～１１ヵ月であり、不治のままである。ＤＩＰＧの成功する治療法を特定できないのは、腫瘍が傷つきやすい場所にあるため、生検が最近まで一般的に行われていなかったために、この疾患の生物学的理解の欠如に起因している可能性がある。その結果、これまでの多くの試験は成人神経膠芽腫に見られる遺伝的変化に基づいたものであり、最近になって、これはＤＩＰＧとは分子的に異なることが判明した。
先天性多発性外骨腫とも呼ばれる多発性骨軟骨腫（ＭＯ）は、骨軟骨腫と呼ばれる複数の良性（非がん性）骨腫瘍を、多くの場合、脚、腕、指の長骨の成長端（骨幹端）及び腰や肩甲骨などの扁平骨に発症することを特徴とする稀な遺伝性疾患である。骨軟骨腫の数及びそれらが位置する骨は、罹患した個人間で大きく異なる。骨軟骨腫は出生時には存在しないが、罹患した個人の約９６％が１２歳になるまでに複数の骨軟骨腫を発症する。これらの骨軟骨腫は通常、思春期の直後まで成長し続け、骨変形、骨格異常、手足の長さの違い、低身長、痛み、可動域の減少、ならびに、神経、血管、脊髄、及び骨軟骨腫の周囲の組織への圧力を引き起こす可能性がある。先天性多発性骨軟骨腫は常染色体優性遺伝病として遺伝し、エキソストシン－１（ＥＸＴ１）又はエキソストシン－２（ＥＸＴ２）遺伝子の変異に関連している。現在の治療オプションには、「経過観察」アプローチ（症状がない場合）、骨軟骨腫の外科的除去、矯正骨切り術、及び骨端線閉鎖術又は下肢延長術が含まれる。
後嚢混濁（ＰＣＯ）は、白内障手術及び眼内レンズ移植後の視力低下に関連する最も頻繁な合併症である。白内障手術では、眼の天然の水晶体が人工の眼内レンズに置換され、これは水晶体嚢の内側に配置される。ＰＣＯは、水晶体上皮細胞が後嚢に向かって移動し、増殖して分化し、嚢の裏側まで成長して嚢を厚くさせ、わずかに不透明になったときに発生する。これにより、網膜に到達できる光の量が減少し、ぼやけた又は曇った視界、又は明るい光やまぶしさの問題をもたらし得る。ＰＣＯはＮｄ：ＹＡＧレーザー嚢切開術を使用して治療できるが、潜在的な合併症と治療のかなりのコストは、新しいＰＣＯ療法を特定することの重要性を明確に示している。
心肥大は、心筋細胞のサイズの増加及び細胞外マトリックスなどの他の心筋成分の変化に起因する心筋の異常な肥大又は肥厚である。心肥大は、運動又は妊娠に応答して発生する生理学的なものであるか、又は高血圧又は心臓弁膜症などのストレス（例えば、血行動態ストレス）に応答して発生する病理学的なものであり得る。また、心臓線維症は、心臓線維芽細胞の不適切な増殖又は心筋における細胞外マトリックスの過剰な沈着による心臓弁の異常な肥厚を特徴とする場合がある。これは、より硬く、コンプライアンスの低い筋肉をもたらし、心不全への進行中に発生する可能性がある。心臓線維症を軽減又は逆転させるための有効な治療法が不足しており、アドレナリン拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬などのレニン－アンジオテンシン系モジュレーター、及びアンジオテンシン受容体遮断薬などの心肥大に対する既存の治療法は、一部の患者では有効性の欠如、さらには退行を特徴とする天井効果をもたらす可能性がある。
骨疾患、貧血、ＨＯ（例えば、ＦＯＰに起因するＨＯ）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、及び心肥大及び／又は心臓線維症に対する新規かつ効果的な治療の必要性が存在する。
本明細書に記載されているのは、アクチビン受容体様キナーゼ－２（ＡＬＫ２、アクチビンＡ受容体タイプＩ（ＡＣＶＲ１）としても知られている）抗体、例えばＡＬＫ２中和抗体及びそのＡＬＫ２結合フラグメントである。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体及びその抗原結合フラグメントは、ヒト対象などの対象に投与するための医薬組成物に製剤化することができる。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント及び組成物は、骨疾患（例えば、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少などの骨損傷を伴う疾患又は状態）、低赤血球レベル（例えば、低ヘモグロビンレベル又は低赤血球数、例えば、貧血）、異所性骨化（ＨＯ）、例えば、進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）に起因する異所性骨化、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）、多発性骨軟骨腫（ＭＯ）、後嚢混濁（ＰＣＯ）、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療又は予防するために、ヒト対象などの対象に投与することができる。
本発明の例示的な実施形態は、以下に列挙される段落に記載されている。
Ｅ１．以下を含む単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント：（１）軽鎖可変ドメインであって、ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）及びＳＧＤＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号２、ここで、Ｘ１はＳ又はＮであり、Ｘ２はＩ又はＬであり、Ｘ３はＰ、Ｇ、又はＲであり、Ｘ４はＳ、Ｔ、又はＫであり、Ｘ５はＦ、Ｋ、又はＹであり、Ｘ６はＦ、Ｙ、又はＳであり、Ｘ７はＡ又はＶであり、Ｘ８はＳ、Ｙ、又はＨである）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１；アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２ＩＹＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＲＰＳ（配列番号３、ここで、Ｘ１はＶ又はＬであり、Ｘ２はＶ又はＬであり、Ｘ３はＫ、Ｒ、Ｇ又はＹであり、Ｘ４はＮ又はＤであり、Ｘ５はＮ又はＳであり、Ｘ６はＨ、Ｎ、Ｄ、又はＫである）を含むか又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；及びＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）、ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）、ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）、ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）、及びＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（２）アミノ酸配列ＧＸ１ＴＦＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号９、ここで、Ｘ１はＧ又はＦであり、Ｘ２はＳ又はＮであり、Ｘ３はＹ、Ｈ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ４はＧ又はＡであり、Ｘ５はＶ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ６はＳ又はＨである）を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１；ＷＭＧＸ１ＩＩＰＸ２ＦＧＸ３ＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１０、ここで、Ｘ１はＧ又はＲであり、Ｘ２はＨ又はＤであり、Ｘ３はＩ又はＴである）、ＷＶＧＲＩＫＳＫＸ１ＤＸ２Ｘ３ＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号１１、ここで、Ｘ１はＡ又はＲであり、Ｘ２はＳ又はＧであり、Ｘ３はＧ又はＹである）、及びＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２；及びＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）、ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）、ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）、ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）、及びＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン。
Ｅ２．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＳである、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＮである、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＩである、Ｅ１～Ｅ３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＬである、Ｅ１～Ｅ３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＰである、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＧである、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＲである、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＳである、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＴである、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＫである、Ｅ１～Ｅ８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＦである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＫである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＹである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＦである、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＹである、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＳである、Ｅ１～Ｅ１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＡである、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＶである、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ８がＳである、Ｅ１～Ｅ１９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ８がＹである、Ｅ１～Ｅ１９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＡ又はＶであり、Ｘ８がＨである、Ｅ１～Ｅ１９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＶである、Ｅ１～Ｅ２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＬである、Ｅ１～Ｅ２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＶである、Ｅ１～Ｅ２４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＬである、Ｅ１～Ｅ２４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２７．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＫである、Ｅ１～Ｅ２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２８．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＲである、Ｅ１～Ｅ２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２９．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＧである、Ｅ１～Ｅ２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３０．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＹである、Ｅ１～Ｅ２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３１．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＮである、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３２．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＤである、Ｅ１～Ｅ３０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３３．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＮである、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３４．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＳである、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３５．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＨである、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３６．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＮである、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３７．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＤである、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３８．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＫである、Ｅ１～Ｅ３４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ３９．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＧである、Ｅ１～Ｅ３８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４０．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＦである、Ｅ１～Ｅ３８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４１．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ１～Ｅ４０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４２．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＮである、Ｅ１～Ｅ４０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４３．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＹである、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４４．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＨである、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４５．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＳである、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４６．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＡである、Ｅ１～Ｅ４２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４７．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＧである、Ｅ１～Ｅ４６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４８．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＡである、Ｅ１～Ｅ４６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ４９．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＶである、Ｅ１～Ｅ４８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５０．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＭである、Ｅ１～Ｅ４８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５１．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＩである、Ｅ１～Ｅ４８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５２．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＳである、Ｅ１～Ｅ５１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５３．重鎖ＣＤＲ１が配列番号９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＨである、Ｅ１～Ｅ５１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５４．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＧである、Ｅ１～Ｅ５３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５５．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＲである、Ｅ１～Ｅ５３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５６．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＨである、Ｅ１～Ｅ５５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５７．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＤである、Ｅ１～Ｅ５５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５８．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＩである、Ｅ１～Ｅ５７のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ５９．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＴである、Ｅ１～Ｅ５７のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６０．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＡである、Ｅ１～Ｅ５３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６１．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＲである、Ｅ１～Ｅ５３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６２．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ１～Ｅ５３、Ｅ６０、及びＥ６１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６３．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＧである、Ｅ１～Ｅ５３、Ｅ６０、及びＥ６１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６４．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＧである、Ｅ１～Ｅ５３及びＥ６０～Ｅ６３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６５．重鎖ＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＹである、Ｅ１～Ｅ５３及びＥ６０～Ｅ６３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６６．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６７．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６８．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ６９．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７０．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７１．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７２．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７３．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７４．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７５．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７６．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７７．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７８．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ７９．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８０．軽鎖ＣＤＲ３がＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ７５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８１．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８２．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８３．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８４．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８５．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８６．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８７．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８８．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ８９．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９０．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ８５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９１．重鎖ＣＤＲ３が配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９２．重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９３．重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９４．重鎖ＣＤＲ３が配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９５．重鎖ＣＤＲ３が配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１及びＥ６６～Ｅ９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９６．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＸ１ＤＸ２Ｘ３ＲＰＳ（配列番号２２、ここで、Ｘ１はＲ、Ｇ、又はＹであり、Ｘ２はＳ又はＮであり、Ｘ３はＮ、Ｄ、又はＫである）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９７．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＲである、Ｅ９６の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９８．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＧである、Ｅ９６の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ９９．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＹである、Ｅ９６の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１００．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ９６～Ｅ９９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０１．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＮである、Ｅ９６～Ｅ９９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０２．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＮである、Ｅ９６～Ｅ１０１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０３．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＤである、Ｅ９６～Ｅ１０１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０４．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２２の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＫである、Ｅ９６～Ｅ１０１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０５．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＸ１ＲＰＳ（配列番号２３、ここで、Ｘ１はＮ又はＫである）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０６．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＮである、Ｅ１０５の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０７．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号２３の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＫである、Ｅ１０５の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０８．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＸ１ＡＭＸ２（配列番号２９、ここで、Ｘ１はＨ又はＡであり、Ｘ２はＳ又はＨである）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１０９．重鎖ＣＤＲ１が配列番号２９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＨである、Ｅ１０８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１０．重鎖ＣＤＲ１が配列番号２９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＡである、Ｅ１０８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１１．重鎖ＣＤＲ１が配列番号２９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ１０８～Ｅ１１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１２．重鎖ＣＤＲ１が配列番号２９の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＨである、Ｅ１０８～Ｅ１１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１３．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＸ１ＳＸ２ＡＭＳ（配列番号３０、ここで、Ｘ１はＳ又はＮであり、Ｘ２はＨ又はＳである）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１４．重鎖ＣＤＲ１が配列番号３０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＳである、Ｅ１１３の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１５．重鎖ＣＤＲ１が配列番号３０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＮである、Ｅ１１３の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１６．重鎖ＣＤＲ１が配列番号３０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＨである、Ｅ１１３～Ｅ１１５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１７．重鎖ＣＤＲ１が配列番号３０の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ１１３～Ｅ１１５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１８．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１１９．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２０．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２１．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）からなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２２．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２３．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２４．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２５．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）からなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２６．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２７．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２８．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１２９．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）からなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３０．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３１．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３２．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３３．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）からなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３４．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３５．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３６．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３７．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）からなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３８．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号６７の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性、又は配列番号６７の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９５％の配列同一性、又は配列番号６７の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１３９．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号６８の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性、又は配列番号６８の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９５％の配列同一性、又は配列番号６８の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４０．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号６９の配列のアミノ酸１～３３３位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性、又は配列番号６９の配列のアミノ酸１～３３３位と少なくとも９５％の配列同一性、又は配列番号６９の配列のアミノ酸１～３３３位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４１．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７０の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性、又は配列番号７０の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９５％の配列同一性、又は配列番号７０の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４２．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７１の配列のアミノ酸１～３３７位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性、又は配列番号７１の配列のアミノ酸１～３３７位と少なくとも９５％の配列同一性、又は配列番号７１の配列のアミノ酸１～３３７位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４３．前記抗体が、配列番号６７の配列のアミノ酸１～４３３位を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４４．前記抗体が、配列番号６８の配列のアミノ酸１～４３４位を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４５．前記抗体が、配列番号６９の配列のアミノ酸１～４３５位を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４６．前記抗体が、配列番号７０の配列のアミノ酸１～４３４位を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４７．前記抗体が、配列番号７１の配列のアミノ酸１～４３９位を含むか又はそれからなる、Ｅ１の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１４８．以下を含む単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント：（１）軽鎖可変ドメインであって、ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）、ＳＧＤＸ１Ｘ２ＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号６４、ここで、Ｘ１はＮ又はＡであり、Ｘ２はＩ又はＬであり、Ｘ３はＫ又はＹであり、Ｘ４はＫ又はＹであり、Ｘ５はＹ又はＩであり、Ｘ６はＶ又はＡである）、及びＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１；アミノ酸配列ＬＸ１ＩＹＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｓ（配列番号６５、ここで、Ｘ１はＶ又はＬであり、Ｘ２はＤ、Ｒ、又はＹであり、Ｘ３はＡ、Ｄ、又はＮであり、Ｘ４はＳ又はＮであり、Ｘ５はＫ又はＮであり、Ｘ６はＬ又はＲであり、Ｘ７はＱ又はＰである）を含むか又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；及びＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）、ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）、ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）、及びＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（２）アミノ酸配列ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７（配列番号６６、ここで、Ｘ１はＦ又はＧであり、Ｘ２はＧ又はＳであり、Ｘ３はＲ、Ｓ、Ｄ、又はＴであり、Ｘ４はＦ、Ｓ、Ｙ、又はＨであり、Ｘ５はＶ又はＡであり、Ｘ６はＭ又はＩであり、Ｘ７はＨ又はＳである）を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１；ＷＶＳＸ１ＩＸ２ＹＸ３Ｘ４ＳＸ５ＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６、ここで、Ｘ１はＶ又はＳであり、Ｘ２はＧ、Ｈ、又はＦであり、Ｘ３はＳ又はＤであり、Ｘ４はＧ又はＳであり、Ｘ５はＳ、Ｅ、又はＮである）、及びＷＶＳＸ１ＩＸ２ＹＸ３Ｘ４ＳＸ５ＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６、ここで、Ｘ１はＶ又はＳであり、Ｘ２はＧ、Ｈ、又はＦであり、Ｘ３はＳ又はＤであり、Ｘ４はＧ又はＳであり、Ｘ５はＳ、Ｅ、又はＮである）、及びＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２；及びＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）、ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）、ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）、及びＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）から選択されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン。
Ｅ１４９．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＮである、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５０．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＡである、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５１．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＩである、Ｅ１４８～Ｅ１５０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５２．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＬである、Ｅ１４８～Ｅ１５０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５３．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＫである、Ｅ１４８～Ｅ１５２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５４．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＹである、Ｅ１４８～Ｅ１５２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５５．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＫである、Ｅ１４８～Ｅ１５４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５６．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＹである、Ｅ１４８～Ｅ１５４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５７．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＹである、Ｅ１４８～Ｅ１５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５８．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＩである、Ｅ１４８～Ｅ１５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１５９．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＶである、Ｅ１４８～Ｅ１５８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６０．軽鎖ＣＤＲ１が配列番号６４の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＡである、Ｅ１４８～Ｅ１５８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６１．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＶである、Ｅ１４８～Ｅ１６０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６２．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＬである、Ｅ１４８～Ｅ１６０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６３．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＤである、Ｅ１４８～Ｅ１６２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６４．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＲである、Ｅ１４８～Ｅ１６２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６５．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＹである、Ｅ１４８～Ｅ１６２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６６．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＡである、Ｅ１４８～Ｅ１６５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６７．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＤである、Ｅ１４８～Ｅ１６５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６８．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＮである、Ｅ１４８～Ｅ１６５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１６９．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１６８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７０．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＮである、Ｅ１４８～Ｅ１６８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７１．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＫである、Ｅ１４８～Ｅ１７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７２．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＮである、Ｅ１４８～Ｅ１７０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７３．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＬである、Ｅ１４８～Ｅ１７２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７４．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＲである、Ｅ１４８～Ｅ１７２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７５．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＱである、Ｅ１４８～Ｅ１７４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７６．軽鎖ＣＤＲ２が配列番号６５の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＰである、Ｅ１４８～Ｅ１７４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７７．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＦである、Ｅ１４８～Ｅ１７６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７８．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＧである、Ｅ１４８～Ｅ１７６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１７９．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＧである、Ｅ１４８～Ｅ１７８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８０．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１７８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８１．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＲである、Ｅ１４８～Ｅ１８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８２．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８３．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＤである、Ｅ１４８～Ｅ１８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８４．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＴである、Ｅ１４８～Ｅ１８０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８５．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＦである、Ｅ１４８～Ｅ１８４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８６．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１８４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８７．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＹである、Ｅ１４８～Ｅ１８４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８８．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＨである、Ｅ１４８～Ｅ１８４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１８９．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＶである、Ｅ１４８～Ｅ１８８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９０．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＶ又はＡである、Ｅ１４８～Ｅ１８８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９１．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＭである、Ｅ１４８～Ｅ１９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９２．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ６がＩである、Ｅ１４８～Ｅ１９０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９３．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＨである、Ｅ１４８～Ｅ１９２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９４．重鎖ＣＤＲ１が配列番号６６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ７がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１９２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９５．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＶである、Ｅ１４８～Ｅ１９４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９６．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ１がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１９４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９７．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＧである、Ｅ１４８～Ｅ１９６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９８．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＨである、Ｅ１４８～Ｅ１９６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ１９９．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ２がＦである、Ｅ１４８～Ｅ１９６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２００．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＳである、Ｅ１４８～Ｅ１９９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０１．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ３がＤである、Ｅ１４８～Ｅ１９９のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０２．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＧである、Ｅ１４８～Ｅ２０１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０３．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ４がＳである、Ｅ１４８～Ｅ２０１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０４．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＳである、Ｅ１４８～Ｅ２０３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０５．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＥである、Ｅ１４８～Ｅ２０３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０６．重鎖ＣＤＲ２が配列番号７６の配列を含むか又はそれからなり、Ｘ５がＮである、Ｅ１４８～Ｅ２０３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０７．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０８．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２０９．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１０．軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１１．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１２．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１３．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１４．軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１５．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１６．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１７．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１８．軽鎖ＣＤＲ３が配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２１９．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２０．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２１．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２２．重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２１８のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２３．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２４．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２５．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２６．重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２７．重鎖ＣＤＲ３が配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２８．重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２２９．重鎖ＣＤＲ３が配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３０．重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８及びＥ２０７～Ｅ２２６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３１．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３２．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３３．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３４．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）からなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３５．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３６．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３７．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３８．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）からなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２３９．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４０．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４１．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４２．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）からなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４３．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４４．重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４５．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）を含むか又はそれからなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）を含むか又はそれからなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４６．軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）からなり、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）からなり、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）からなり、重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）からなり、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）からなり、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）からなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４７．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７２の配列のアミノ酸１～３４４位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性を有するか、又は配列番号７２の配列のアミノ酸１～３４４位と少なくとも９５％の配列同一性を有するか、又は配列番号７２の配列のアミノ酸１～３４４位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４８．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７３の配列のアミノ酸１～３２７位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性を有するか、又は配列番号７３の配列のアミノ酸１～３２７位と少なくとも９５％の配列同一性を有するか、又は配列番号７３の配列のアミノ酸１～３２７位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２４９．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７４の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性を有するか、又は配列番号７４の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９５％の配列同一性を有するか、又は配列番号７４の配列のアミノ酸１～３３１位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５０．前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７５の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）の配列同一性を有するか、又は配列番号７５の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９５％の配列同一性を有するか、又は配列番号７５の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９８％の配列同一性を有する、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５１．前記抗体が配列番号７２の配列のアミノ酸１～４４６位を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５２．前記抗体が配列番号７３の配列のアミノ酸１～４２９位を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５３．前記抗体が配列番号７４の配列のアミノ酸１～４３３位を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５４．前記抗体が配列番号７５の配列のアミノ酸１～４３４位を含むか又はそれからなる、Ｅ１４８の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５５．前記抗体がモノクローナル抗体である、Ｅ１～Ｅ２５４のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５６．前記抗体がヒト化抗体である、Ｅ１～Ｅ２５５のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５７．ＡＬＫ２結合フラグメントがＦａｂである、Ｅ１～Ｅ２５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５８．ＡＬＫ２結合フラグメントがＦａｂ’である、Ｅ１～Ｅ２５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２５９．ＡＬＫ２結合フラグメントがＦ（ａｂ’）２である、Ｅ１～Ｅ２５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６０．ＡＬＫ２結合フラグメントがＦｖである、Ｅ１～Ｅ２５６のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６１．前記抗体が１４ｎＭ以下のＫＤ値でヒトＡＬＫ２に結合する、Ｅ１～Ｅ２６０のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６２．前記抗体が５ｎＭ以下のＫＤ値でヒトＡＬＫ２に結合する、Ｅ１～Ｅ２６１のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６３．前記抗体が１ｎＭ以下のＫＤ値でヒトＡＬＫ２に結合する、Ｅ１～Ｅ２６２のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６４．前記抗体が０．５ｎＭ以下のＫＤ値でヒトＡＬＫ２に結合する、Ｅ１～Ｅ２６３のいずれか１つの単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
Ｅ２６５．Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
Ｅ２６６．Ｅ２６５の核酸分子を含む発現ベクター。
Ｅ２６７．Ｅ２６６の発現ベクターを含む細胞。
Ｅ２６８．Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、又はＥ２６６の発現ベクターと、１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物。
Ｅ２６９．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントが治療有効量にある、Ｅ２６８の医薬組成物。
Ｅ２７０．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象の骨塩密度を増加させる方法。
Ｅ２７１．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象の骨吸収（例えば、骨量減少）を低減する方法。
Ｅ２７２．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象の骨形成を増加させる方法。
Ｅ２７３．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象の骨強度を高める方法。
Ｅ２７４．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象の骨折のリスクを低減する方法。
Ｅ２７５．対象が原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少を有するか、又はそれらを発症するリスクがある、Ｅ２７０～Ｅ２７４のいずれか１つの方法。
Ｅ２７６．対象が原発性骨粗鬆症を有するか又は発症するリスクがある、Ｅ２７５の方法。
Ｅ２７７．対象が続発性骨粗鬆症を有するか又は発症するリスクがある、Ｅ２７５の方法。
Ｅ２７８．対象が骨減少症を有するか又は発症するリスクがある、Ｅ２７５の方法。
Ｅ２７９．骨疾患を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８０．骨疾患が、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少である、Ｅ２７９の方法。
Ｅ２８１．骨疾患が原発性骨粗鬆症であるＥ２８０の方法。
Ｅ２８２．骨疾患が続発性骨粗鬆症であるＥ２８０の方法。
Ｅ２８３．骨疾患が骨減少症であるＥ２８０の方法。
Ｅ２８４．原発性骨粗鬆症を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８５．続発性骨粗鬆症を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８６．骨減少症を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８７．骨折を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８８．骨がん又はがん転移関連の骨量減少を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２８９．パジェット病を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９０．腎性骨異栄養症を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９１．治療関連の骨量減少を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９２．食事関連の骨量減少を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９３．低重力関連の骨量減少を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９４．不動に関連する骨量減少を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ２９５．原発性骨粗鬆症が、加齢性骨粗鬆症又はホルモンに関連する骨粗鬆症である、Ｅ２７５、Ｅ２７６、Ｅ２８０、Ｅ２８１、及びＥ２８４のいずれか１つの方法。
Ｅ２９６．続発性骨粗鬆症が、不動化誘発性骨粗鬆症又はグルココルチコイド誘発性骨粗鬆症である、Ｅ２７５、Ｅ２７８、Ｅ２８０、Ｅ２８２、及びＥ２８５のいずれか１つの方法。
Ｅ２９７．前記がんが多発性骨髄腫である、Ｅ２７５、Ｅ２８０、及びＥ２８８のいずれか１つの方法。
Ｅ２９８．前記治療がＦＧＦ－２１治療、ＧＬＰ－１治療、がん治療、あるいは肥満又は２型糖尿病の治療である、Ｅ２７５、Ｅ２８０、及びＥ２９１のいずれか１つの方法。
Ｅ２９９．食事関連の骨量減少がくる病である、Ｅ２７５、Ｅ２８０、及びＥ２９２のいずれか１つの方法。
Ｅ３００．前記対象に骨折のリスクがある、Ｅ２７０～Ｅ２９９のいずれか１つの方法。
Ｅ３０１．前記方法は前記対象において骨形成を増加させる、Ｅ２７０～Ｅ３００のいずれか１つの方法。
Ｅ３０２．前記方法は前記対象において骨吸収（例えば、骨量減少）を低下させる、Ｅ２７０～Ｅ３０１のいずれか１つの方法。
Ｅ３０３．前記方法は骨芽細胞活性又は骨芽細胞形成を高める、Ｅ２７０～Ｅ３０２のいずれか１つの方法。
Ｅ３０４．前記方法は破骨細胞活性を低下させるか、又は破骨細胞形成を低下させる、Ｅ２７０～Ｅ３０３のいずれか１つの方法。
Ｅ３０５．前記方法は骨折のリスクを低下させる、Ｅ２７０～Ｅ３０４のいずれか１つの方法。
Ｅ３０６．前記方法は骨塩密度を増加させる、Ｅ２７０～Ｅ３０５のいずれか１つの方法。
Ｅ３０７．骨が皮質骨である、Ｅ２７０～Ｅ３０６のいずれか１つの方法。
Ｅ３０８．骨が小柱骨である、Ｅ２７０～Ｅ３０６のいずれか１つの方法。
Ｅ３０９．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与する前に、前記対象の骨塩密度を評価する（例えば、二重エネルギーＸ線吸収測定法などの標準的なテストを使用して骨塩密度を評価する）ことをさらに含む、Ｅ２７０～Ｅ３０８のいずれか１つの方法。
Ｅ３１０．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与した後に、前記対象の骨塩密度を評価する（例えば、二重エネルギーＸ線吸収測定法などの標準的なテストを使用して骨塩密度を評価する）ことをさらに含む、Ｅ２７０～Ｅ３０９のいずれか１つの方法。
Ｅ３１１．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象における赤血球レベルを増加させる方法。
Ｅ３１２．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象におけるヘモグロビンレベル（例えば、血清ヘモグロビンレベル）を増加させる方法。
Ｅ３１３．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象における赤血球数を増加させる方法。
Ｅ３１４．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象における赤血球形成を促進し又は増加させる方法。
Ｅ３１５．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象におけるヘプシジンレベル（例えば、血清ヘプシジン濃度）を低下させる方法。
Ｅ３１６．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象における鉄レベル（例えば、血清鉄レベル）を増加させる方法。
Ｅ３１７．前記対象が貧血又は失血を有するか又はそれらを発症するリスクがある、Ｅ３１１～Ｅ３１６のいずれか１つの方法。
Ｅ３１８．前記貧血又は失血が、がん、がん治療、腎疾患又は腎不全（例えば、慢性腎疾患又は急性腎疾患又は不全）、骨髄異形成症候群、サラセミア、栄養不足、投薬に対する有害反応、炎症性又は自己免疫性疾患、脾臓肥大、ポルフィリア、血管炎、溶血、骨髄欠損、骨髄移植、糖尿病、肝疾患（例えば、急性肝疾患又は慢性肝疾患）、出血（例えば、急性又は慢性出血）、感染症、ヘモグロビン症、薬物使用、アルコール乱用、高齢、チャーグ・ストラウス症候群、フェルティ症候群、移植片対宿主病、造血幹細胞移植、骨髄線維症、汎血球減少症、純赤血球形成不全、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、シュバッハマン症候群（例えば、シュバッハマン・ダイアモンド症候群）、輸血の禁忌、手術、外傷、創傷、潰瘍、尿路出血、消化管出血、頻繁な献血、又は重い月経出血に関連する、Ｅ３１７の方法。
Ｅ３１９．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、貧血を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法。
Ｅ３２０．いくつかの実施形態において、前記貧血が、がん、がん治療、腎疾患又は腎不全（例えば、慢性腎疾患又は急性腎疾患又は不全）、骨髄異形成症候群、サラセミア、栄養不足、投薬に対する有害反応、炎症性又は自己免疫性疾患、脾臓肥大、ポルフィリア、血管炎、溶血、骨髄欠損、骨髄移植、糖尿病、肝疾患（例えば、急性肝疾患又は慢性肝疾患）、出血（例えば、急性又は慢性出血）、感染症、ヘモグロビン症、薬物使用、アルコール乱用、高齢、チャーグ・ストラウス症候群、フェルティ症候群、移植片対宿主病、造血幹細胞移植、骨髄線維症、汎血球減少症、純赤血球形成不全、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、シュバッハマン症候群（例えば、シュバッハマン・ダイアモンド症候群）、輸血の禁忌、手術、外傷、創傷、潰瘍、尿路出血、消化管出血、頻繁な献血、又は重い月経出血に関連する、Ｅ３１９の方法。
Ｅ３２１．前記貧血が再生不良性貧血、鉄欠乏性貧血、ビタミン欠乏性貧血、炎症性貧血（慢性疾患の貧血とも呼ばれ、例えば、感染症などの炎症性疾患又は症状（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ又は結核などの慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ又はループス）、がん（例えば、がん又はがん治療）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、及び慢性腎疾患）によって引き起こされる貧血）、骨髄性疾患に関連する貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球性貧血、小球性貧血、低色素性貧血、鉄芽球性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニ貧血、又は芽球過剰を伴う難治性貧血である、Ｅ３１７～３２０の方法。
Ｅ３２２．前記貧血がＩＲＩＤＡであるＥ３２１の方法。
Ｅ３２３．前記貧血が炎症性貧血である、Ｅ３２２の方法。
Ｅ３２４．前記貧血が上昇したヘプシジンレベルに関連している、Ｅ３１１～Ｅ３２３のいずれか１つの方法。
Ｅ３２５．前記対象がエリスロポエチン（ＥＰＯ）による治療に十分に反応しないか、又はＥＰＯの悪影響を受けやすい、Ｅ３１１～Ｅ３２４のいずれか１つの方法。
Ｅ３２６．前記方法は、赤血球形成、赤血球数、ヘマトクリット、又はヘモグロビンレベルを高める、Ｅ３１１～Ｅ３２５のいずれか１つの方法。
Ｅ３２７．前記方法は、ヘプシジンレベルの上昇を予防又は低減する、Ｅ３１１～Ｅ３２６のいずれか１つの方法。
Ｅ３２８．前記方法は鉄レベルを増加させる、Ｅ３１１～Ｅ３２７のいずれか１つの方法。
Ｅ３２９．前記方法は、前記対象の輸血の必要性を低減する、Ｅ３１１～Ｅ３２８のいずれか１つの方法。
Ｅ３３０．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与する前に、前記対象の赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、赤血球数、ヘプシジンレベル、又は鉄レベルを評価する（例えば、血液検査などの標準的な検査を使用して、血球レベル、ヘモグロビンレベル、赤血球数、ヘプシジンレベル、又は鉄レベルを評価する）ことをさらに含む、Ｅ３１１～Ｅ３２９のいずれか１つの方法。
Ｅ３３１．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与した後に、前記対象の赤血球レベル、ヘモグロビンレベル、赤血球数、ヘプシジンレベル、又は鉄レベルを評価する（例えば、血液検査などの標準的な検査を使用して、血球レベル、ヘモグロビンレベル、赤血球数、ヘプシジンレベル、又は鉄レベルを評価する）ことをさらに含む、Ｅ３１１～Ｅ３３０のいずれか１つの方法。
Ｅ３３２．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、それを必要とする対象における異所性骨化を予防又は軽減する方法。
Ｅ３３３．前記対象が進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を有する、Ｅ３３２の方法。
Ｅ３３４．ＦＯＰが遺伝性ＦＯＰ又は散発性ＦＯＰである、Ｅ３３３の方法。
Ｅ３３５．治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することにより、ＦＯＰを有する対象を治療する方法。
Ｅ３３６．ＦＯＰが遺伝性ＦＯＰ又は散発性ＦＯＰである、Ｅ３３５の方法。
Ｅ３３７．前記方法は、ＦＯＰの進行を遅らせるか又は阻害する、Ｅ３３２～Ｅ３３６のいずれか１つの方法。
Ｅ３３８．前記方法は、ＦＯＰの発症を遅らせる（例えば、異所性骨化の発症を遅らせる）、Ｅ３３２～Ｅ３３７のいずれか１つの方法。
Ｅ３３９．前記方法は、異所性骨化を予防する（例えば、異所性骨化を発症するリスクのある対象における異所性骨化を予防する、又は異所性骨の外科的切除後の異所性骨化の再発を予防する）、Ｅ３３２～Ｅ３３８のいずれか１つの方法。
Ｅ３４０．前記方法は、異所性骨化を低減する（例えば、対象における異所性骨化の量を低減する、対象における異所性骨化の発生を低減する、又は異所性骨の外科的切除後の異所性骨化の再発を低減する）、Ｅ３３２～Ｅ３３９のいずれか１つの方法。
Ｅ３４１．前記方法は異所性骨の形成を減少させる、Ｅ３３２～Ｅ３４０のいずれか１つ方法。
Ｅ３４２．前記方法は、（例えば、外科的切除後の）異所性骨の再発を低減する、Ｅ３３２～Ｅ３４１のいずれか１つの方法。
Ｅ３４３．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与する前に、前記対象の異所性骨化（例えば、異所性骨の量又は位置）を評価する（例えば、放射線撮影（例えば、Ｘ線）、ＣＴ（コンピュータ断層撮影）、及び／又はＭＲＩ（磁気共鳴画像法）などの標準的なテストを使用して異所性骨化を評価する）ことをさらに含む、Ｅ３３２～Ｅ３４２のいずれか１つの方法。
Ｅ３４４．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与した後に、前記対象の異所性骨化（例えば、異所性骨の量又は位置）を評価する（例えば、放射線撮影（例えば、Ｘ線）、ＣＴ（コンピュータ断層撮影）、及び／又はＭＲＩ（磁気共鳴画像法）などの標準的なテストを使用して異所性骨化を評価する）ことをさらに含む、Ｅ３３２～Ｅ３４３のいずれか１つの方法。
Ｅ３４５．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与する前に、前記対象がＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１）に活性化突然変異を保有しているか否かを決定することをさらに含む、Ｅ３３２～Ｅ３４４のいずれか１つの方法。
Ｅ３４６．シェーグレン症候群を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ３４７．前記方法はシェーグレン症候群の症状を軽減又は改善する、Ｅ３４６の方法。
Ｅ３４８．前記症状が、ドライアイ、口渇、眼の刺激、涙腺の線維症、涙腺の炎症、かすみ目、全身性炎症、関節痛、又は倦怠感である、Ｅ３４７の方法。
Ｅ３４９．前記症状がドライアイである、Ｅ３４８の方法。
Ｅ３５０．シェーグレン症候群を有する対象のドライアイを治療又は軽減する（シェーグレン症候群に関連するドライアイを治療する）方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療又は軽減する方法。
Ｅ３５１．前記方法は涙液の産生を増加させる（例えば、産生される涙液量を増加させる）、Ｅ３４６～Ｅ３５０のいずれか１つの方法。
Ｅ３５２．前記方法は眼の刺激を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５１のいずれか１つの方法。
Ｅ３５３．前記方法は視覚を改善する（例えば、視力を向上させる）、Ｅ３４６～Ｅ３５２のいずれか１つの方法。
Ｅ３５４．前記方法は涙腺の線維症を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５３のいずれか１つの方法。
Ｅ３５５．前記方法は涙腺の炎症を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５４のいずれか１つの方法。
Ｅ３５６．前記方法は唾液の産生量又は唾液流量を増加させる、Ｅ３４６～Ｅ３５５のいずれか１つの方法。
Ｅ３５７．前記方法は全身性炎症を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５６のいずれか１つの方法。
Ｅ３５８．前記方法は関節痛を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５７のいずれか１つの方法。
Ｅ３５９．前記方法は倦怠感を軽減する、Ｅ３４６～Ｅ３５８のいずれか１つの方法。
Ｅ３６０．多発性骨軟骨腫（ＭＯ）を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することにより治療する方法。
Ｅ３６１．ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成を予防又は軽減する（例えば、まだ骨軟骨腫を発症していないＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成を予防するか、１つ又は複数の骨軟骨腫をすでに発症しているＭＯを有する対象における骨軟骨種の形成を低下させ又は防止する）方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３６２．ＭＯを有する対象の骨軟骨腫のサイズを縮小する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３６３．ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の成長を遅らせるか又は阻害する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３６４．ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の数を減少させる方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３６５．骨軟骨腫が長骨上に形成される、Ｅ３６０～Ｅ３６４のいずれか１つの方法。
Ｅ３６６．骨軟骨腫が扁平骨上に形成される、Ｅ３６０～Ｅ３６４のいずれか１つの方法。
Ｅ３６７．骨軟骨腫が骨の成長端（骨幹端）に形成される、Ｅ３６０～Ｅ３６６のいずれか１つの方法。
Ｅ３６８．びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３６９．前記方法は対象の生存時間を延長させる（例えば、寿命を延ばす）、方法Ｅ３６８。
Ｅ３７０．前記方法は腫瘍増殖を減少させる、Ｅ３６８又はＥ３６９の方法。
Ｅ３７１．前記方法は腫瘍体積を減少させる、Ｅ３６８～Ｅ３７０のいずれか１つの方法。
Ｅ３７２．前記方法は腫瘍転移を減少させる、Ｅ３６８～Ｅ３７１のいずれか１つの方法。
Ｅ３７３．前記方法は、前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物を投与する前に、前記対象がＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１）に突然変異を保有しているか否かを決定することをさらに含む、Ｅ３６８～Ｅ３７２のいずれか１つの方法。
Ｅ３７４．対象における後嚢混濁（ＰＣＯ）の発症を低減又は予防する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
Ｅ３７５．ＰＣＯを有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３７６．前記対象が白内障手術を受けたか、又は間もなく受けることになっている（例えば、対象は、６ヵ月、５ヵ月、４ヵ月、３ヵ月、２ヵ月、１ヵ月、２週、１週間、又はそれよりも近いうちに白内障手術を受ける予定である）、Ｅ３７４又はＥ３７５の方法。
Ｅ３７７．前記方法は視力を改善する、Ｅ３７４～Ｅ３７６のいずれか１つの方法。
Ｅ３７８．前記方法は光感受性又はまぶしさを低減する、Ｅ３７４～Ｅ３７７のいずれか１つの方法。
Ｅ３７９．前記方法は線維症（例えば、後嚢上又はその付近の線維症、例えば、移植された水晶体付近の線維症）を軽減又は阻害する、Ｅ３７４～Ｅ３７８のいずれか１つの方法。
Ｅ３８０．前記方法は眼の炎症を軽減又は阻害する、Ｅ３７４～Ｅ３７９のいずれか１つの方法。
Ｅ３８１．心肥大を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３８２．心肥大の発症を遅らせるか又は予防する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
Ｅ３８３．前記対象は、高血圧症又は弁膜症を有することが特定されている、Ｅ３８１又はＥ３８２の方法。
Ｅ３８４．心臓線維症を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
Ｅ３８５．心臓線維症の発症を遅らせるか又は予防する方法であって、治療有効量のＥ１～Ｅ２６４のいずれか１つの抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、Ｅ２６５の核酸分子、Ｅ２６６の発現ベクター、又はＥ２６８又はＥ２６９の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
Ｅ３８６．前記対象は、高血圧、糖尿病性肥大型心筋症、又は特発性拡張型心筋症を有することが特定されているか、又は前記対象は心筋梗塞を有する、Ｅ３８４又はＥ３８５の方法。
Ｅ３８７．前記方法は心臓線維症を軽減又は逆転させる、Ｅ３８１～Ｅ３８６のいずれか１つの方法。
Ｅ３８８．前記方法は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状を改善する、Ｅ３８１～Ｅ３８７のいずれか１つの方法。
Ｅ３８９．心肥大又は心臓線維症の症状が、運動能力の低下、血液駆出量の低下、左心室拡張末期圧の上昇、肺毛細血管楔入圧の上昇、心拍出量の低下、心係数の低下、肺動脈圧の上昇、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の増加、左心室及び右心室の壁応力の増加、壁張力及び／又は壁の厚さの増加、心筋収縮性の減少、心筋細胞面積の増加、又は心筋における細胞外マトリックス沈着の増加である、Ｅ３８８の方法。
Ｅ３９０．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、骨塩密度を増加させ、骨吸収を減少させ（例えば、骨量減少を低下させ）、骨折のリスクを減らし、骨強度を高め、骨吸収速度を低下させ（例えば、骨量減少速度を低下させ）、骨形成を増加させ、骨形成速度を上げ、破骨細胞活性を低下させ、骨芽細胞活性を高め、又は骨疾患を治療するのに十分な量で投与される、Ｅ２７０～Ｅ３１０のいずれか１つの方法。
Ｅ３９１．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、赤血球レベルを上昇させ、ヘモグロビンレベルを上昇させ、赤血球形成を増加させ、赤血球数を増加させ、ヘマトクリット値を増加させ、輸血の必要性の減少させ、鉄レベルを上昇させ、鉄欠乏を減少させ、ヘプシジンレベルの上昇を減少させ、又は貧血を治療するのに十分な量で投与される、Ｅ３１１～Ｅ３３１のいずれか１つの方法。
Ｅ３９２．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、ＦＯＰを治療し、ＦＯＰの進行を遅らせるか又は停止し、ＦＯＰの発症を遅らせ、異所性骨化を予防し、異所性骨化を軽減し、異所性骨形成を予防又は軽減し、又は異所性骨の再発を予防又は軽減するのに十分な量で投与される、Ｅ３３２～Ｅ３４５のいずれか１つの方法。
Ｅ３９３．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、シェーグレン症候群を治療し、シェーグレン症候群に関連するドライアイを治療又は軽減し、シェーグレン症候群の症状を軽減又は改善し、涙液の産生を増加させ、眼の刺激を軽減し、視覚を改善し、涙腺の線維症を軽減し、涙腺の炎症を軽減し、あるいは唾液の産生量又は唾液流量を増加させるのに十分な量で投与される、Ｅ３４６～Ｅ３５９のいずれか１つの方法。
Ｅ３９４．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、ＭＯを治療し、骨軟骨腫の形成を予防し、骨軟骨腫の形成を減少させ、骨軟骨腫のサイズを縮小し、骨軟骨腫の成長を低下させ、又は骨軟骨腫の数を減少させるのに十分な量で投与される、Ｅ３６０～Ｅ３６７のいずれか１つの方法。
Ｅ３９５．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、ＤＩＰＧを治療し、生存期間を延長し（例えば、寿命を延ばし）、腫瘍の増殖を減少させ、腫瘍の体積を減少させ、又は腫瘍の転移を減少させるのに十分な量で投与される、Ｅ３６８～Ｅ３７３のいずれか１つの方法。
Ｅ３９６．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、ＰＣＯを治療し、ＰＣＯの発症を予防し、視力を改善し、光感受性又はまぶしさを減少させ、線維症を軽減又は阻害し、あるいは眼の炎症を軽減又は阻害するのに十分な量で投与される、Ｅ３７４～Ｅ３８０のいずれか１つの方法。
Ｅ３９７．前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、前記核酸分子、前記発現ベクター、又は前記医薬組成物が、心肥大を治療し、心臓線維症を治療し、心肥大の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症の発症を遅らせ又は予防し、又は心臓線維症の症状を改善するのに十分な量で投与される、Ｅ３８１～Ｅ３８８９のいずれか１つの方法。
定義
本願で使用される場合、「約」という用語は、記載されている値から１０％上又は下の範囲内にある値を指す。
本願で使用される場合、「投与」は、任意の有効な経路によって、対象に治療薬（例えば、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント））を提供し又は与えることを指す。例示的な投与経路は本明細書で後述する。
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、完全形のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全形の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及びそれらが所望の生物学的活性を示す限り、抗体フラグメントを包含する。
「抗体フラグメント」は、完全形の抗体の一部、好ましくは完全形の抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５））；一本鎖抗体分子；及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が含まれる。
本願で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体は、自然に発生する可能性のある少量で存在し得る突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異性が高く、単一の抗原部位を対象とする。
本願で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、具体的には、特定の種に由来する、あるいは特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配列と重鎖及び／又は軽鎖の一部が同一又は相同であり、一方で、鎖の残りの部分は、別の種に由来する、あるいは別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体の対応する配と列同一又は相同である「キメラ」抗体、ならびに、所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントを含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、キメラ抗体、抗体鎖又はそれらのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）であり、これらは非ヒト抗体に由来する最小配列を含む。ほとんどの場合、ヒト化抗体はヒト抗体（レシピエント抗体）であり、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基は、所望の特異性、親和性、容量を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置換されている。場合によっては、ヒト抗体のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲやフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。
本願で使用される場合、「骨塩密度（ＢＭＤ）」、「骨密度」、及び「骨量」という用語は、骨組織中の骨塩（例えば、カルシウム）の量の尺度を指す。ＢＭＤは、当業者に知られている十分に確立された臨床技術によって（例えば、単一エネルギー又は二重エネルギー光子又はＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）によって）測定することができる。ＢＭＤの概念は、骨の単位体積あたりのミネラルの質量に関連しているが、臨床的には、イメージング時に骨表面の１平方センチメートルあたりの光学密度に従ってプロキシによって測定される。ＢＭＤ測定は、骨粗鬆症及び骨折リスクの間接的な指標として臨床医学で使用される。いくつかの実施形態では、ＢＭＤ試験結果は、Ｔスコアとして提供され、ここで、Ｔスコアは、健康な３０歳の成人の理想的な又はピークの骨塩密度と比較した対象のＢＭＤを表す。スコア０は、ＢＭＤが健康な若年成人の通常の参照値に等しいことを示す。対象の測定されたＢＭＤと健康な若年成人の参照値のＢＭＤとの差は、標準偏差単位（ＳＤ）として測定される。したがって、＋１ＳＤから－１ＳＤまでのＴスコアは正常なＢＭＤを示す可能性があり、－１ＳＤから－２．５ＳＤまでのＴスコアは低骨量（例えば、骨減少症）を示す可能性があり、－２．５ＳＤ未満のＴスコアは、骨粗鬆症又は重度の骨粗鬆症を示す可能性がある。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、それを必要とする対象に投与され、ここで、患者は、低骨量（例えば、－１ＳＤから－２．５ＳＤのＴスコア）を有する。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、それを必要とする対象に投与され、ここで、患者は、骨粗鬆症（例えば、－２．５ＳＤ未満のＴスコア）を有する。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の投与は、対象のＢＭＤを増加させる（例えば、対象のＴスコアを増加させる）ことによって対象を治療する。
本願で使用される場合、「骨強度」という用語は、骨塩密度に加えて骨の質によって決定される骨の測定値を指す。骨の質は、骨の形状、微細構造、及び構成組織の特性に影響される。骨強度は、骨折のリスクを評価するために使用できる。
本願で使用される場合、「骨疾患」という用語は、骨損傷（例えば、骨塩密度の低下、骨強度の低下、及び／又は骨量減少）を特徴とする状態を指す。そのような疾患又は状態は、骨芽細胞及び／又は破骨細胞活性の不均衡（例えば、骨吸収の増加又は骨形成の減少）によって引き起こされ得る。骨疾患には、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少（例えば、多発性骨髄腫に関連する骨量減少）、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、及び不動に関連する骨量減少が含まれる。
本願で使用される場合、「骨リモデリング」又は「骨代謝」という用語は、古い骨の個別の部分を新しく合成されたタンパク質性マトリックスのパケットで置き換えることによって骨強度及びイオン恒常性を維持するためのプロセスを指す。骨は破骨細胞によって吸収され、骨化と呼ばれるプロセスで骨芽細胞によって沈着する。骨細胞の活動は、このプロセスで重要な役割を果たす。骨量の減少をもたらす状態は、吸収の増加又は骨化の減少のいずれかによって引き起こされ得る。健康な人では、小児期の間は骨形成が吸収を上回る。老化プロセスが始まると、吸収が形成を上回る。骨吸収速度はまた、閉経に関連するエストロゲン欠乏のために、閉経後の年配の女性では通常はるかに高い。
本願で使用される場合、「骨吸収」又は「骨異化活性」という用語は、破骨細胞が骨の組織を分解し、ミネラルを放出し、その結果、ミネラル（例えば、カルシウム）が骨組織から血液に移動するプロセスを指す。骨吸収速度の増加は、閉経後の女性を含め、加齢に関連している。骨吸収速度が高いこと、又は骨化速度を超える骨吸収速度は、骨減少症及び骨粗鬆症を含む骨塩密度の低下などの骨障害に関連しており、骨量減少をもたらす。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、対象における骨吸収（例えば、対象における骨吸収速度）を減少させるために、それを必要とする対象に投与される。
本願で使用される場合、「骨形成」、「骨化」、「骨生成」、又は「骨同化活性」という用語は、骨芽細胞によって新しい骨組織を形成するプロセスを指す。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、骨形成を増加させる（例えば、対象における骨形成又は骨生成の速度を増加させる）ために、それを必要とする対象に投与される。
本願で使用される場合、「細胞型」という用語は、遺伝子発現データに基づいて統計的に分離可能な表現型を共有する細胞のグループを指す。例えば、共通の細胞型の細胞は、類似の遺伝子活性化パターン及び抗原提示プロファイルなどの、類似の構造的及び／又は機能的特徴を共有し得る。共通の細胞型の細胞には、共通の組織（例えば、上皮組織、神経組織、結合組織、骨組織、又は筋肉組織）から単離された細胞、及び／又は、共通の器官、組織系、血管、又は他の構造及び／又は一生物の共通の領域から単離された細胞が含まれ得る。
本願で使用される場合、「保存的突然変異」、「保存的置換」、及び「保存的アミノ酸置換」という用語は、１つ以上のアミノ酸の、同様の物理化学的特性、例えば極性、静電荷、及び立体体積を示す１つ以上の異なるアミノ酸への置換を指す。天然に存在する２０個のアミノ酸それぞれについてのこれらの特性を、以下の表１に要約する。
Figure 2022505585000002
この表から、保存的アミノ酸ファミリーには、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ及びＩ；（ｉｉ）Ｄ及びＥ；（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ及びＴ；（ｉｖ）Ｈ、Ｋ及びＲ；（ｖ）Ｎ及びＱ；（ｖｉ）Ｆ、Ｙ、及びＷが含まれることが分かる。したがって、保存的突然変異又は置換は、１つのアミノ酸を同じアミノ酸ファミリーのメンバーで置換するものである（例えば、ＳｅｒをＴｈｒに、ＬｙｓをＡｒｇに置換）。
本願で使用される場合、「単離された抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＡＬＫ２に結合する単離された抗体は、夾雑物、例えば、ＡＬＫ２に結合しない抗体を実質的に含まない）。さらに、「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され、分離され、及び／又は回収されたものである。その自然環境の夾雑成分は、抗体の診断的又は治療的用途を妨げる可能性のある物質であり、酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を含み得る。
本願で使用される場合、「増加する」及び「減少する」という用語は、参照と比較して、それぞれ、より多い又はより少ない量の、測定対象の機能、発現、又は活性をもたらす調節を指す。例えば、本明細書に記載の方法で本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を投与した後、本明細書に記載の測定対象のマーカーの量（例えば、赤血球レベル、骨塩密度、涙液産生、生存時間）は、投与前のマーカーの量に対して、又は未治療の対象に対して、対象において増加し得る。あるいは、本明細書に記載の測定対象のマーカーの量（例えば、異所性骨化、又は、骨軟骨腫のサイズ、数、又は形成）は、投与前のマーカーの量に対して、又は未治療の対象に対して、対象において減少し得る。
主として、測定対象は、投与後に投与が記載された効果を有した時点、例えば、治療レジメンが開始された後、少なくとも１週間、１ヵ月、３ヵ月、又は６ヵ月で測定される。
本願で使用される場合、「赤血球レベルの増加」及び「赤血球形成の促進」という用語は、ヘマトクリット値、赤血球数、及びヘモグロビン測定値の増加などの臨床的に観察可能な測定対象を指し、そのような変化が起こるメカニズムについては中立的な立場にあることを意図している。本願で使用される「低赤血球レベル」という用語は、対象の年齢及び性別から正常と見なされる値の範囲を下回る赤血球数、ヘマトクリット値、及び／又はヘモグロビン測定値を指す。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、赤血球レベルを増加させる（例えば、ヘモグロビンレベル又は赤血球数を増加させる）ために、対象（例えば、貧血を有する対象）に投与される。
本願で使用される場合、「赤血球形成」及び「赤血球生成」という用語は、赤血球が骨髄で生産される赤血球生成のプロセスなどの赤血球の生成を指す。
本願で使用される場合、「貧血」という用語は、血中の酸素レベルの低下をもたらすヘモグロビン又は赤血球の異常を指す。貧血は、赤血球及び／又はヘモグロビンの異常な産生、プロセシング、又は働きに関連している可能性がある。貧血という用語は、正常な血中レベルと比較して、赤血球の数及び／又は血中のヘモグロビンのレベルが低下することを指す。
本願で使用される場合、「炎症性貧血」という用語は、炎症性サイトカインによって引き起こされ、十分な鉄分貯蔵があるにもかかわらず、主にヘプシジンの上昇に起因する低鉄血症を特徴とする貧血のタイプを指す。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、ＡＬＫ２を介してＳＭＡＤシグナル伝達経路を活性化することにより、ヘプシジンをアップレギュレートする。炎症性貧血は慢性疾患の貧血とも呼ばれる。炎症性貧血を引き起こす慢性状態には、感染症（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ又は結核などの慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ又はループス）、がん（例えば、がん又はがん治療）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、及び慢性腎疾患が含まれる。
本願で使用される場合、「鉄剤不応性鉄欠乏性貧血」及び「ＩＲＩＤＡ」という用語は、遺伝性の形態の鉄欠乏性貧血を指す。ＩＲＩＤＡの主な特徴には、生涯にわたる貧血（ヘモグロビン６～９ｇ／ｄＬ）；赤血球サイズが非常に小さく（小球性）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）が４５～６５ｆＬであること；血中の鉄レベルが非常に低いこと（トランスフェリン飽和度＜５％）；異常な経口鉄吸収－経口鉄サプリメントへの反応がない、又は「経口鉄チャレンジ（ｏｒａｌ ｉｒｏｎ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）」の失敗；異常な鉄の利用－非経口鉄（静脈内注射された鉄）に対するゆっくりとした、不完全な、一時的な反応；及び常染色体劣性遺伝パターンを持つ罹患した家族が他にいること含まれる。ＩＲＩＤＡの診断は、血中のヘプシジンのレベルを測定することで確認できる。ＴＭＰＲＳＳ６の突然変異は、ＩＲＩＤＡに関連していることが判明した。
本願で使用される場合、「異所性骨化」及び「異所性骨形成」という用語は、筋肉、腱、及び他の軟部組織などの非骨格組織における骨の異常な成長を指す。「異所性骨」は、非骨格組織で形成された骨を指す。異所性骨化は、ＦＯＰを有する対象で発症し得る。
本願で使用される場合、「進行性骨化性線維異形成症」及び「ＦＯＰ」という用語は、骨格筋及び腱や靭帯などの結合組織が徐々に骨に置き換わる（骨化する）障害を指す。この状態は、骨格の外側の骨形成（骨格外又は異所性骨）につながり、動きを制限する。このプロセスは、一般的に幼児期に顕著になり、首と肩から始まり、胴体へ下って四肢に伝わっていく。ＦＯＰの人は、異常な足の親指（外反母趾）を持って生まれるので、診断はしやすい。転倒や侵襲的な医療処置などの外傷、又はウイルス性疾患は、筋肉の腫れや炎症（筋炎）の症状を引き起こす可能性がある。これらの再燃は数日から数ヵ月続き、多くの場合、損傷した領域で永続的な骨の成長をもたらす。ＦＯＰはＡＣＶＲ１遺伝子の突然変異によって引き起こされ、常染色体優性遺伝する。
本願で使用される場合、「線維症」という用語は、線維性結合組織の過剰な形成の病理学的プロセスを指す。線維症は、特定の組織における通常の沈着を超える線維芽細胞の蓄積及びコラーゲン沈着を特徴とする。炎症又は組織の損傷に応答して、近くの線維芽細胞は創傷に移動し、増殖し、大量のコラーゲン性細胞外マトリックスを生成することができる。損傷に応答して線維症が発生する場合、「瘢痕」という用語を同義語として使用することができる。線維症は、例えば、肺、皮膚、肝臓、腎臓、心臓、眼、涙腺、腱、軟骨、膵臓組織、子宮組織、神経組織、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、小腸及び大腸、胆道、及び腸を含む、体の多くの組織で発症する可能性がある。
本願で使用される場合、「心肥大」という用語は、成人の心筋細胞が肥大型成長を介して応力に応答するプロセスから生じる心筋の異常な拡大又は肥厚を指す。このような成長は、細胞分裂を伴わない細胞サイズの増大、力の生成を最大化するための細胞内の追加のサルコメアの集合、及び胎児心臓遺伝子プログラムの活性化を特徴とする。心肥大は、罹患率及び死亡率のリスクの増加と関連していることが多く、細胞外マトリックス足場の変化（例えば、心臓線維症）を伴う心間質における線維性組織沈着と関連していることが見出されている。
本願で使用される場合、心筋線維症としても知られる「心臓線維症」という用語は、心筋の線維症を指し、壁の硬化、収縮性の低下、及び全体的な心臓機能の悪化を特徴とする。心臓筋線維芽細胞は、間質腔における結合組織（例えば、細胞外マトリックス）の過剰な沈着によって線維症を媒介する。心臓線維症は、心肥大に合併してしばしば見られる。
本願で使用される場合、「ドライアイ」という用語は、眼が十分な涙液を産生しない場合（例えば、涙液の産生又は涙液量の減少）、又は涙液が急速に蒸発する場合に発生する慢性状態を指す。ドライアイは、眼の不快感や異常な視覚機能を伴う場合がある。
本願で使用される「シェーグレン症候群」という用語は、口渇、流涙の減少、及び他の乾燥粘膜を特徴とする全身性炎症性障害を指す。眼と口の乾燥は、この症候群の最も一般的な症状である。
本願で使用される場合、「シェーグレン症候群に関連するドライアイ」は、原発性シェーグレン症候群に関連するドライアイ及び続発性シェーグレン症候群に関連するドライアイを指す。シェーグレン症候群に関連するドライアイは、一般に、涙液分泌が低下したドライアイとして分類される。
本願で使用される場合、「多発性骨軟骨腫」又は「ＭＯ」という用語は、骨、例えば長骨の端部又は扁平骨での骨軟骨腫の形成に関連する状態又は疾患を指す。ＭＯを有する対象は、しばしばＥＸＴ１又はＥＸＴ２などのエキソストシン遺伝子に機能喪失型変異を保有する。ＭＯは、先天性多発性外骨腫、ベッセル・ハーゲン病、多発性骨軟骨性外骨症、多発性軟骨性外骨腫、多発性先天性外骨腫、及び先天性多発性骨軟骨腫としても知られている。
本願で使用される場合、「骨軟骨腫」という用語は、小児期又は青年期に発症する良性（非がん性）腫瘍を指す。これは、軟骨と骨の異常な過増殖であり、通常、成長板付近の骨の表面に形成される。骨軟骨腫は、ほとんどの場合、脚と腕の長骨、及び骨盤や肩甲骨などの扁平骨上に形成される。
本願で使用される場合、「びまん性内在性橋グリオーマ」という用語は、橋で発生し、すべての小児脳腫瘍の約２０％を占める、非常に進行が速く治療が困難な脳腫瘍を指す。びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）の小児の全生存期間の中央値は９～１１ヵ月で、１年生存率及び２年生存率はそれぞれ約３０％及び１０％未満である。ＤＩＰＧは、成人のグリオーマとは分子的に異なることが分かっており、ヒストンバリアントをコードする遺伝子に突然変異を有することが多い。ＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１）の突然変異もＤＩＰＧで観察されている。
本願で使用される場合、「後嚢混濁」という用語は、患者の２０％～４０％で発生する白内障手術の最も一般的な術後合併症を指す。後嚢混濁（ＰＣＯ）では、後嚢は水晶体上皮細胞の移動、増殖、及び分化によって二次混濁を起こす。ＰＣＯは、特に中心視軸が関わる場合に重大な視覚症状を引き起こす可能性があり、後嚢（例えば、レンズインプラントの後方）での線維症（瘢痕組織など）の形成によって識別できる。ＰＣＯの症状には、視力の漸進的な低下、かすみ目、日光への過敏症、グレアや光の周りの光輪が見えることなどがある。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、比較長さ全体で配列同一性の最大パーセントを達成するために必要に応じてギャップ導入をした後の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。ここで、保存的置換は配列同一性の一部として考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的でのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮやＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内の様々な方法で達成することができる。特定の実施形態において、本アミノ酸配列同一性は、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、又は９９％である。
本願で使用される場合、「親和性」又は「結合親和性」という用語は、２つの分子間の結合相互作用の強さを指す。主として、結合親和性は、分子とその結合パートナーとの間の、例えば、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）とＡＬＫ２タンパク質との間の非共有相互作用の合計の強さを指す。別様に規定されない限り、結合親和性とは、結合ペアのメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。２つの分子間の結合親和性は、一般に解離定数（ＫＤ）又は親和定数（ＫＡ）で表される。互いに低い結合親和性を有する２つの分子は、概してゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、大きいＫＤを示す。互いに高い親和性を有する２つの分子は、一般に容易に結合し、結合状態が長くなる傾向があり、小さいＫＤを示す。２つの相互作用する分子のＫＤは、当技術分野で周知の方法及び技術、例えば、表面プラズモン共鳴を使用して決定することができる。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。
本願で使用される場合、抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦｖフラグメント）の「特異的結合」という用語は、標的分子ではない分子への結合とは測定可能に異なる標的分子への結合である。本願で使用される場合、特異的結合は、バックグラウンド（「非特異的」）結合に対する特定の抗原の結合への９５％を超える優先度を指す。「実質的に特異的な」結合とは、バックグラウンドに対する特定の抗原の結合への約８０％を超える優先度を指す。結合は、ウエスタンブロット、イムノブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（「ＥＬＩＳＡ」）、ラジオイムノアッセイ（「ＲＩＡ」）、免疫沈降、表面プラズモン共鳴、バイオレイヤー干渉法、化学発光、蛍光偏光、リン光、免疫組織化学的分析、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型（「ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ」）質量分析、マイクロサイトメトリー、マイクロアレイ、顕微鏡、蛍光活性化セルソーティング（「ＦＡＣＳ」）及びフローサイトメトリーを含むがこれらに限定されない様々な方法を使用して測定することができる。特定の実施形態において、標的（例えば、ＡＬＫ２）に特異的に結合する抗体は、０．１ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．３ｎＭ、０．５ｎＭ、０．７ｎＭ、１．０ｎＭ、２．０ｎＭ、４．０ｎＭ、５．０ｎＭ、７．０ｎＭ、１０．０ｎＭ、１４．０ｎＭ、又は１５．０ｎＭを上限とする解離定数（ＫＤ）を有する。
本願で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、モノマーがアミド結合を介して互いに共有結合しているアミノ酸残基である単一のポリマーを表す。ポリペプチドは、天然に存在する、組換えの、又は合成的に生成された任意のアミノ酸配列を包含することを意図している。
本願で使用される場合、本明細書に記載の組成物又はＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の「有効量」、「治療有効量」、及び「十分な量」という用語は、対象に投与したとき、臨床結果を含む、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量を指す。したがって、その「有効量」又はその同義語は、それが適用されている状況に依存する。例えば、骨疾患（例えば、骨粗鬆症、又は骨損傷を伴う状態、例えば、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少）、低赤血球レベルを伴う疾患又は状態（例えば、貧血又は失血）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症などの疾患を有する又は発症するリスクのある患者を治療する場合、それは、組成物又はＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を投与せずに得られた応答と比較して治療応答を達成するのに十分な組成物又はＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の量である。そのような量に相当する本明細書に記載の所与の組成物の量は、所与の薬剤、製剤、投与経路、疾患又は障害のタイプ、対象の固有性（例えば、年齢、性別、体重）又は治療される宿主などの様々な因子に応じて変動するが、それにかかわらず、当業者は、当技術分野で知られている日常的な方法によって当然に決定することができる。投与計画は、最適な治療反応を提供するように調整され得る。
本願で使用される場合、「局所的に」又は「局所投与」は、全身的効果ではなく局所的効果を目的とした体の特定の部位への投与を意味する。局所投与の例は、経皮、吸入、関節内、髄腔内、膣内、硝子体内、子宮内、病変内投与、リンパ節投与、腫瘍内投与、及び対象の粘膜への投与であり、投与は全身的効果ではなく局所的効果を目的としたものである。
本願で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、対象に影響を与える、又は影響を与える可能性のある特定の疾患又は状態を予防し、治療し、又はコントロールするために対象に投与される、任意選択で１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及び／又は担体と組み合わせた治療薬を含む混合物を指す。医薬組成物は、経口投与用の錠剤又はカプセル形態、あるいは静脈内又は皮下投与用の水性形態であり得る。
本願で使用される場合、「薬学的に許容される担体又は賦形剤」という用語は、医薬組成物中の賦形剤又は希釈剤を指す。薬学的に許容される担体は、製剤の他の成分と適合性があり、合理的な利益／リスク比に見合った過度の毒性、刺激、アレルギー反応、及び他の問題となる合併症がなく、対象の組織との接触に適したものである必要がある。本発明において、薬学的に許容される担体又は賦形剤は、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）に十分な薬学的安定性を提供する必要がある。担体又は賦形剤の性質は、投与方法によって異なる。例えば、静脈内投与には主として水溶液担体が使用されるが、経口投与の場合は固体担体が好ましい。
本願で使用される場合、「サンプル」という用語は、対象から単離された標本（例えば、血液、血液成分（例えば、血清又は血漿）、尿、唾液、羊膜液、脳脊髄液、組織（例えば、神経組織、胎盤組織、又は皮膚組織）、膵液、絨毛膜標本、及び細胞（例えば、血液細胞又は骨細胞）を指す。
本願で使用される場合、疾患又は状態に関しての「治療」は、有益な又は所望の結果、例えば、臨床結果を得るためのアプローチを指す。有益な又は所望の結果には、限定するものではないが、１つ以上の症状又は状態の軽減又は改善；疾患又は状態の程度の減少；疾患、障害、又は状態の安定した（すなわち、悪化していない）状態；疾患又は状態の拡大の抑制；疾患又は状態の進行の遅延又は緩慢化；疾患又は状態の改善又は緩和；及び寛解（部分的又は完全）が含まれ、検出可能か検出不可能かは問わない。疾患又は状態を「改善する」又は「緩和する」とは、疾患、障害、又は状態の程度及び／又は望ましくない臨床症状が、治療していない場合の上記程度と比較して弱くなること、及び／又は、進行の時間経過が治療していない場合の時間経過と比較して遅くなり又は長期化することを意味する。「治療」はまた、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味する場合がある。治療が必要な人には、すでに病状又は障害がある人、ならびに病状又は障害を患いやすい人、あるいは病状又は障害を予防する必要がある人が含まれる。
本願で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、哺乳動物、例えば、ヒトを指す。哺乳動物には、限定するものではないが、ヒトならびに飼育動物及び家畜、例えばサル（例えば、カニクイザル）、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、及びウシなどが含まれる。本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、骨疾患（例えば、骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少などの骨損傷を伴う疾患又は状態）、低血球レベルを伴う疾患（例えば、貧血又は失血）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症と診断された対象、又はこれらの症状を発症するリスクがあると診断された対象であり得る。診断は、当技術分野で知られている任意の方法又は技術によって実施することができる。当業者は、本開示に従って治療される対象が、標準的な試験を受けた対象であってもよいし、上記疾患や状態に関連する１つ以上のリスクファクターが存在するため、検査を行わずにリスクがあると特定された対象でもよいことを理解するであろう。
図１Ａ～１Ｂは、ＳＭＡＤ１ルシフェラーゼレポーターを用いてＣ２Ｃ１２細胞でした抗ＡＬＫ２ ｆＡＢのＢＭＰ６阻害用量反応曲線を示す一連のグラフである。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍの３及び４パラメータカーブフィットの５０％阻害値（ＩＣ５０）を、各グラフの横に示す。図１Ａは、生成した最初の４つのｆＡＢの用量反応曲線のグラフである。 図１Ａ～１Ｂは、ＳＭＡＤ１ルシフェラーゼレポーターを用いてＣ２Ｃ１２細胞でした抗ＡＬＫ２ ｆＡＢのＢＭＰ６阻害用量反応曲線を示す一連のグラフである。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍの３及び４パラメータカーブフィットの５０％阻害値（ＩＣ５０）を、各グラフの横に示す。図１Ｂは、Ｒａｐｉｄ Ｐｏｏｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎから生成された５つの第２ラウンドｆＡＢの用量反応曲線のグラフである。 ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおけるヘモグロビンレベルに対するＡＬＫ２抗体による処理の効果を示すグラフである。ＡＬＫ２抗体による処理は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連するヘモグロビンの減少を防ぐ（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１）。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおけるヘモグロビンレベル、ヘプシジン濃度、及び鉄レベルに対するＡＬＫ２抗体による処理の効果を示す一連のグラフである。ＡＬＫ２抗体での処理は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連するヘモグロビンの減少を逆転させる（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１）。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおけるヘモグロビンレベル、ヘプシジン濃度、及び鉄レベルに対するＡＬＫ２抗体による処理の効果を示す一連のグラフである。ＡＬＫ２抗体での処理は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連する血清ヘプシジンの増加を逆転させる（＊＊＝ｐ≦０．０１）。 図３Ａ～３Ｃは、ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおけるヘモグロビンレベル、ヘプシジン濃度、及び鉄レベルに対するＡＬＫ２抗体による処理の効果を示す一連のグラフである。ＡＬＫ２抗体での処理は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連する血清鉄の減少を逆転させる（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１）。 骨粗鬆症のマウスモデルにおける骨塩密度に対するＡＬＫ２抗体による処理の効果を示すグラフである。ＡＬＫ２抗体による処理は、精巣摘除術に関連する骨塩密度を増加させる（骨量減少を減少させる）（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＊＊＝ｐ≦０．０００１）。 抗体１のアミノ酸配列（配列番号６７）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体２のアミノ酸配列（配列番号６８）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体３のアミノ酸配列（配列番号６９）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体４のアミノ酸配列（配列番号７０）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体５のアミノ酸配列（配列番号７１）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体６のアミノ酸配列（配列番号７２）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体７のアミノ酸配列（配列番号７３）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体８のアミノ酸配列（配列番号７４）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。 抗体９のアミノ酸配列（配列番号７５）を示し、軽鎖及び重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインが強調表示され、アミノ酸位置が提供されている。可変軽鎖、定常軽鎖、可変重鎖、ＣＨ１ドメイン、ＥｃｏＲＩリンカー、Ｆｌａｇタグ、タグリンカー、及び６アミノ酸のヒスチジンタグの開始アミノ酸と終了アミノ酸も提供される。
発明の詳細な説明
本明細書に記載されているのは、骨疾患、貧血、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療するための組成物及び方法である。本発明は、ＡＬＫ２抗体（例えば、中和抗体）及びその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）、ならびに抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、及び抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクターを特徴とする。本発明はまた、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント、核酸分子、発現ベクター、及び組成物を使用して、骨疾患（例えば、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少などの骨損傷を伴う疾患又は状態）、低赤血球レベル（例えば、低ヘモグロビンレベル又は低赤血球数、例えば、貧血）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症を、ヒト対象などの対象において治療又は予防する方法を特徴とする。
ＡＬＫ２抗体
ＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１としても知られている）は、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体である。ＡＬＫ２は、胚発生時に多くの組織で広く発現し、出生後の発達時に骨で高度に発現し、骨形成及び軟骨形成の両方に不可欠な役割を果たしていると考えられている。ＡＬＫ２における機能獲得型変異には、ｃ．６１７Ｇ＞Ａ（ｐ．Ｒ２０６Ｈ）、ｃ．６１９Ｃ＞Ｇ（ｐ．Ｑ２０７Ｅ）、ｃ．１０６７Ｇ＞Ａ（ｐ．Ｇ３５６Ｄ）、ｃ．９８２Ｇ＞Ｔ（ｐ．Ｇ３２８Ｗ）、ｃ．９８３Ｇ＞Ａ（ｐ．Ｇ３２８Ｅ）、ｃ．９８２Ｇ＞Ａ（ｐ．Ｇ３２８Ｒ）、ｃ．７７４Ｇ＞Ｃ／ｃ．７７４Ｇ＞Ｔ（Ｐ．Ｒ２５８Ｓ）、ｃ．１１２４Ｇ＞Ｃ（ｐ．Ｒ３７５Ｐ）、ｃ．５８７Ｔ＞Ｃ（ｐ．Ｌ１９６Ｐ）、ｃ．５９０－５９２ｄｅｌＣＴＴ（ｐ．Ｐ１９７＿Ｆ１９８ｄｅｌｉｎｓＬ）、及びｃ．６０５Ｇ＞Ｔ（ｐ．Ｒ２０２ｌ）が含まれ、これらはＦＯＰを有する対象で発見されており、Ａｌｋ２Ｒ２０６Ｈ変異マウスを使用した研究では、ＡＬＫ２が間葉系幹細胞の骨形成分化を調節することが示唆されている。ＡＬＫ２の活性化変異は、ＤＩＰＧ患者の約２５％でも観察されており、小分子ＡＬＫ２阻害剤は、同所性ＤＩＰＧ異種移植モデルで生存期間を延長し細胞充実度を低下させることが判明した。ＡＬＫ２を介したＳＭＡＤシグナル伝達経路のＢＭＰ活性化は、炎症性貧血（慢性疾患の貧血としても知られる）及び鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）に関与する鉄ホメオスタシスのマスターレギュレーターであるヘプシジンのアップレギュレーションを誘導するため、ＡＬＫ２は貧血にも関与している可能性がある。ＡＬＫ２はまた、発生中の水晶体上皮細胞の増殖を促進する。したがって、ＡＬＫ２の阻害は、ＰＣＯにつながる水晶体上皮細胞の異常な増殖を予防又は軽減する可能性がある。さらに、小分子ＡＬＫ２阻害剤は、確立されたマウスモデルで炎症を軽減し、シェーグレン症候群の症状を治療し、ＭＯのマウスモデルを使用した複数の研究で骨軟骨腫の形成、成長、及びサイズを低下させることが判明した。さらに、小分子ＡＬＫ２阻害剤による処理及びＡＬＫ２の心筋細胞特異的欠失の両方が、マウスの心肥大及び左心室線維症を軽減した。さらに、ＡＬＫ２リガンドの線維症を促進する効果は、線維症が病状に寄与する疾患又は状態（例えば、ＰＣＯにおける後嚢の線維症、シェーグレン症候群における涙腺の線維症、及び心臓線維症及び／又は心肥大における線維症）の治療にＡＬＫ２の阻害が使えることを示唆している。
本発明は、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体が、ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおいてヘモグロビンレベル、ヘプシジン濃度、及び鉄レベルを回復させ、骨粗鬆症のマウスモデルで骨密度を増加させた（例えば、骨量減少を低下させた）という発見に部分的に基づいている。理論に縛られることを望まないが、ＴＭＰＲＳＳ６はヘプシジン分泌及び貧血を抑制するように作用し、炎症性貧血はヘプシジンレベルの上昇を特徴とすることが多いため、ＡＬＫ２抗体がＩＲＩＤＡのＴＭＰＲＳＳ６ノックダウンモデルでヘモグロビンレベルを回復させたという発見は、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体が炎症性貧血の治療に使用できることを示唆している。ＦＯＰ及びＤＩＰＧの患者で特定されたＡＬＫ２の機能獲得型変異を考えると、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＦＯＰ治療のために、及び／又は異所性骨化を予防又は治療するために、及びＤＩＰＧを治療し又はＤＩＰＧを有する対象の生存期間を延長するためにも使用され得る。以前の研究では、小分子ＡＬＫ２阻害剤を使用して、シェーグレン症候群、ＭＯ（例えば、骨軟骨腫の形成、成長、又はサイズの低下）、ならびに心肥大及び心臓線維症の症状を治療できることも示されている。したがって、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントはまた、これらの状態を治療するためにも使用され得る。最後に、水晶体上皮細胞の増殖を促進するためのＡＬＫ２の必要性は、ＡＬＫ２阻害がＰＣＯの治療に有効である可能性があることを示唆している。したがって、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント）、核酸分子、発現ベクター、及び組成物は、骨疾患（例えば、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少などの骨損傷を伴う疾患又は状態）、貧血（例えば、ＩＲＩＤＡ、炎症性貧血）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療又は予防するために、ヒト対象などの対象に投与することができる。
ベクター、宿主細胞、及びタンパク質産生
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体及びその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、宿主細胞から産生することができる。宿主細胞とは、本明細書に記載の抗体及びその抗原結合フラグメントを対応する核酸から発現するために必要な、必須細胞成分、例えば、細胞小器官を含む媒体（ｖｅｈｉｃｌｅ）を指す。核酸は、核酸ベクターに含ませてもよく、この核酸ベクターを当技術分野で知られている従来の技術（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染など）によって宿主細胞に導入することができる。核酸ベクターの選択は、使用する宿主細胞に部分的に依存する。概して、好ましい宿主細胞は、真核生物（例えば、哺乳動物）又は原核生物（例えば、細菌）のいずれかに由来するものである。
核酸ベクターの構築及び宿主細胞
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、当技術分野で知られている様々な方法によって調製することができる。これらの方法には、限定するものではないが、オリゴヌクレオチド媒介（又は部位特異的）突然変異誘発及びＰＣＲ突然変異誘発が含まれる。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子は、標準的な技術、例えば、遺伝子合成を使用して得ることができる。あるいは、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子は、当技術分野における標準的な技術、例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）突然変異誘発を使用して、特定のアミノ酸置換を含むように突然変異され得る。核酸分子は、ヌクレオチドシンセサイザー又はＰＣＲ技術を使用して合成することができる。
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）をコードする核酸配列は、原核生物又は真核生物の宿主細胞においてその核酸分子を複製及び発現することができるベクターに挿入され得る。多くのベクターが当技術分野で利用可能であり、本発明の目的のために使用することができる。各ベクターは、特定の宿主細胞との適合性のために調整及び最適化され得る様々な構成要素を含み得る。例えば、ベクターの構成要素は、限定するものではないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、目的のタンパク質をコードする核酸配列、及び転写終結配列を含み得る。
いくつかの実施形態において、哺乳動物細胞は、本発明の宿主細胞として使用され得る。哺乳動物細胞種の例には、限定するものではないが、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）（例えば、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｆ）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＰＣ３、Ｖｅｒｏ、ＭＣ３Ｔ３、ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、ＮＳ０（免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれる。いくつかの実施形態において、大腸菌細胞も、本発明の宿主細胞として使用され得る。大腸菌株の例には、限定するものではないが、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，４４６）、大腸菌λ１７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７）、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ－１０２５）、及び大腸菌ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が含まれる。異なる宿主細胞は、翻訳後プロセシング及びタンパク質産物の修飾（例えば、グリコシル化）のための特徴的かつ特異的なメカニズムを持っている。発現されたポリペプチドの正しい修飾及びプロセシングを確実にするために、適切な細胞株又は宿主系を選択することができる。上記の発現ベクターは、当技術分野における従来の技術、例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、及び直接マイクロインジェクションを使用して、適切な宿主細胞に導入することができる。ベクターがタンパク質産生のために宿主細胞に導入されると、宿主細胞は、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、又は所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地で培養される。治療用タンパク質の発現方法は当技術分野で知られており、例えば、Ｐａｕｌｉｎａ Ｂａｉｂａｓ、Ａｒｇｅｌｉａ Ｌｏｒｅｎｃｅ（編）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；第２版 ２００４年及びＶｌａｄｉｍｉｒ Ｖｏｙｎｏｖ ａｎｄ Ｊｕｓｔｉｎ Ａ．Ｃａｒａｖｅｌｌａ（編）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；第２版 ２０１２年を参照されたい。
タンパク質の産生、回収、及び精製
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を産生するために使用される宿主細胞は、当技術分野で知られている、選択された宿主細胞の培養に適した培地で増殖させることができる。哺乳動物宿主細胞に適した培地の例には、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したＤＭＥＭ、及びＲＰＭＩ－１６４０が含まれる。細菌宿主細胞に適した培地の例には、選択剤、例えばアンピシリンなどの必要な添加物を加えたルリアブロス（ＬＢ）が含まれる。宿主細胞は、約２０℃～約３９℃、例えば、２５℃～約３７℃、好ましくは３７℃などの適切な温度及び５～１０％などのＣＯ２レベルで培養される。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、大抵は約６．８～７．４、例えば７．０である。本発明の発現ベクターにおいて誘導性プロモーターが使用される場合、タンパク質発現は、プロモーターの活性化に適した条件下で誘導される。
いくつかの実施形態において、使用される発現ベクター及び宿主細胞に応じて、発現されたタンパク質は、宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）から細胞培養培地に分泌され得る。タンパク質の回収には、細胞培養培地をろ過して細胞破片を除去することが含まれる場合がある。タンパク質をさらに精製してもよい。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、当技術分野で知られているタンパク質精製の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差によって、又はタンパク質精製のための他の標準的な技術によって精製することができる。例えば、プロテインＡカラム（例えば、ＰＯＲＯＳプロテインＡクロマトグラフィー）などのアフィニティーカラムを適切に選択しクロマトグラフィーカラム（例えば、ＰＯＲＯＳ ＨＳ－５０陽イオン交換クロマトグラフィー）、濾過、限外濾過、塩析及び透析手順と組み合わせて、タンパク質を単離及び精製することができる。
他の実施形態において、宿主細胞を、例えば、浸透圧ショック、超音波処理、又は溶解によって破壊し、発現されたタンパク質を回収してもよい。細胞を破壊したら、細胞破片を遠心分離又はろ過により除去してもよい。場合によっては、ポリペプチドをペプチドなどのマーカー配列に結合させて、精製を容易にすることができる。マーカーアミノ酸配列の一例は、ヘキサヒスチジンペプチド（Ｈｉｓ－ｔａｇ）であり、これはマイクロモーラーの親和性でニッケル官能化アガロースアフィニティーカラムに結合する。精製に有用な他のペプチドタグには、限定するものではないが、インフルエンザのヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当するヘマグルチニン「ＨＡ」タグが含まれる（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３７：７６７，１９８４）。
あるいは、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、例えば、遺伝子治療の状況においては、ベクター（例えば、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクター））を投与することにより、対象（例えば、ヒト）の細胞によって産生することができる。ベクターは、対象の細胞内に入ると（例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染などによって）、抗体又はその抗原結合フラグメントの発現を促進し、その後、細胞から分泌される。疾患又は障害の治療が望ましい結果である場合、それ以上の手段は必要ないかもしれない。タンパク質の収集が望まれる場合、血液を対象から収集し、当技術分野で知られている方法によってタンパク質を血液から精製することができる。
医薬組成物及び調製物
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、骨疾患、低赤血球レベル（例えば、低ヘモグロビンレベル又は低赤血球数、例えば、貧血）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＭＯ、ＤＩＰＧ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症に苦しむヒト患者などの患者に投与するための媒体に組み込むことができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む医薬組成物は、治療法において他の薬剤（例えば、生物学的治療薬及び／又は小分子）又は組成物と組み合わせて使用され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物は、当技術分野で知られている方法を使用して調製することができる。例えば、そのような組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ 第２２版、Ａｌｌｅｎ，Ｌ．編、２０１３年、参照により本明細書に組み込まれる）を用い、所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製することができる。いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードする核酸分子（ＤＮＡ又はＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）、又はそのような核酸分子を含むベクターを含む。
医薬組成物中の許容可能な担体及び賦形剤は、使用される投与量及び濃度ではレシピエントに対して無毒である。許容される担体及び賦形剤には、リン酸塩、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、及びＴＡＥなどの緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンなどの抗酸化剤、塩化ヘキサメトニウム、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、レゾルシノール、及び塩化ベンザルコニウムなどの防腐剤、ヒト血清アルブミン、ゼラチンなどのタンパク質、デキストラン、及び免疫グロブリン、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、ヒスチジン、リジンなどのアミノ酸、及びグルコース、マンノース、スクロース、ソルビトールなどの炭水化物が含まれ得る。本発明の医薬組成物は、注射可能な製剤の形態で非経口的に投与することができる。注射用の医薬組成物は、媒体として滅菌溶液又は任意の薬学的に許容される液体を使用して製剤化することができる。薬学的に許容される媒体には、限定するものではないが、滅菌水、生理食塩水、及び細胞培養培地（例えば、ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、α－改変イーグル培地（ａ－ＭＥＭＩ）が含まれる。
ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の混合物は、１つ以上の賦形剤、担体、又は希釈剤と適切に混合された水中で調製され得る。分散液もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物、ならびに油中で調製することができる。通常の保管及び使用条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防ぐために防腐剤を含んでもよい。注射可能な用途に適した剤形には、無菌の水溶液又は分散液、及び無菌の注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための無菌の粉末が含まれる（米国特許第５，４６６，４６８号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる）。いずれにせよ、製剤は無菌とすることができ、容易な注射可能性が存在する程度に流動性であり得る。製剤は、製造及び保管の条件下で安定であり得、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合に必要な粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の予防は、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含めることが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを使用することによってもたらすことができる。
例えば、本明細書に記載の医薬組成物を含む溶液は、必要に応じて適切に緩衝され得、液体希釈剤は、最初に十分な生理食塩水又はグルコースで等張にされる。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に特に適している。これに関連して、使用することができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に知られるであろう。例えば、１回の投与量は１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解させて１０００ｍｌの皮下注射液に加えてもよいし、注入の提案された部位に注射してもよい。投与量のいくらかの変動は、治療される対象の状態に応じて必然的に発生する。
本発明の医薬組成物は、ヒドロキシルメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどのマイクロカプセル内に調製することができる。本発明の医薬組成物はまた、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセルなどの他の薬物送達システムにおいて調製され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ 第２２版、Ａｌｌｅｎ，Ｌ．編（２０１３年）に記載されている。インビボ投与に使用される医薬組成物は、無菌でなければならない。これは、滅菌ろ過膜によるろ過によって容易に達成される。
本発明の医薬組成物はまた、徐放性製剤として調製され得る。徐放性調製物の適切な例には、本発明のポリペプチドを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれる。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリアクチド、Ｌ－グルタミン酸とγエチル－Ｌ－グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。いくつかの徐放性製剤は、数ヵ月、例えば、１～６ヵ月にわたる分子の放出を可能にし、他の製剤は、より短い期間、例えば、数日から数週間にわたり本発明の医薬組成物を放出する。
医薬組成物は、必要に応じて単位剤形で形成することができる。医薬調製物に含まれる本明細書に記載の活性成分、例えば、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の量は、指定された範囲内の適切な用量が提供されるようにするものである（例えば、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の用量）。
遺伝子治療のための医薬組成物は、許容可能な希釈剤中にあるか、又は遺伝子送達媒体が埋め込まれている徐放性マトリックスを含み得る。流体力学的注射が送達方法として使用される場合、本明細書に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードする核酸分子、又はその核酸分子を含むベクター（例えば、ウイルスベクター）を含む医薬組成物は、静脈内に大量の流体で急速に送達される。インビボ遺伝子送達媒体として使用できるベクターには、限定するものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラなどのワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクターが含まれる。
経路、用量、及び投与
治療薬として本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む医薬組成物は、静脈内、非経口、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、局所、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、髄腔内、脳室内、吸入、灌流、洗浄（ｌａｖａｇｅ）、及び経口投与などの様々な経路によることができる。医薬組成物はまた、経口、眼、鼻、スプレー、エアロゾル、直腸、又は膣への投与用に製剤化されるか、又はそれらを介して投与され得る。注射可能な製剤については、様々な効果的な医薬担体が当技術分野で知られている。例えば、ＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，第１８版（２０１４年）を参照されたい。眼への投与の場合、製剤は、注射（例えば、眼内注射）によって全身的に、又は局所的に（例えば、溶液、懸濁液、又は軟膏として点眼（例えば、点眼薬）などによって）送達され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードする核酸分子又はそのような核酸分子を含むベクターを含む医薬組成物は、遺伝子送達によって投与され得る。遺伝子送達の方法は、当業者によく知られている。インビボ遺伝子送達及び発現に使用できるベクターには、限定するものではないが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクターが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子は、対象に直接投与され得る。
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸分子又はそのような核酸分子を含むベクターは、流体力学的注入プラットフォームを使用して投与され得る。流体力学的注入法では、本明細書に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードする核酸分子は、操作されたプラスミド（例えば、ウイルスプラスミド）中の強力なプロモーターの制御下に置かれる。プラスミドは、多くの場合、大量の液体で静脈内に急速に送達される。流体力学的注入は、静脈内の制御された流体力学的圧力を使用して細胞透過性を高め、大量の流体の急速な注入による高圧が静脈からの流体及びプラスミドの血管外漏出をもたらすようにする。核酸分子の発現は主に肝臓によって促進される。マウスでは、流体力学的注入は、プラスミドを尾静脈に注射することによって行われることが多い。特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードするｍＲＮＡ分子は、流体力学的注入を使用して投与され得る。
所与の場合における投与に最も適切な経路及び用量は、投与される特定の組成物、患者、製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療中の疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄率に依存する。本発明の医薬組成物は、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ））の範囲の本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）の用量を含み得る。また、より具体的な実施形態では、約０．１～約３０ｍｇ／ｋｇであり、より具体的な実施形態では、約０．３～約３０ｍｇ／ｋｇである。用量は、疾患の程度及び対象の異なるパラメータなどの従来の要因に従って、医師によって適合させることができる。
医薬組成物は、剤形と適合性のある方法で、そして症状の改善又は緩和をもたらすのに治療上有効であるような量で投与される。医薬組成物は、様々な剤形、例えば、静脈内剤形、皮下剤形、及び経口剤形（例えば、摂取可能な溶液、薬物放出カプセル）で投与される。概して、治療用抗体は、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１～５０ｍｇ／ｋｇで投与される。本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む医薬組成物は、それを必要とする対象に、例えば、毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、四半期、隔年、毎年に１回以上（例えば、１～１０回またはそれ以上）、又は医学的に必要な場合に投与することができる。いくつかの実施形態において、本発明のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む医薬組成物は、それを必要とする対象に、毎週、隔週、毎月、隔月、又は四半期ごとに投与され得る。用量は、単一又は複数の投薬計画のいずれかで提供され得る。投与のタイミングは、病状が改善するにつれて減少するか、患者の健康が低下するにつれて増加する可能性がある。
治療法
本明細書に記載の組成物及び方法は、病状、例えば、骨疾患、貧血、又は低赤血球レベル（例えば、低ヘモグロビンレベル又は低赤血球数）、異所性骨化（例えば、ＦＯＰに起因する異所性骨化）、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療及び／又は予防する（例えば、そのように診断された対象の発症を予防し又はその対象を治療する）ために使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体（例えば、中和抗体）又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、それを必要とする対象の骨塩密度を増加させ、骨形成を増加させ、骨強度を高め、骨吸収（例えば、骨量減少）を減少させ、又は骨折のリスクを低下させるために投与される。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象において通常観察される骨塩密度、骨強度、骨形成、骨吸収、又は骨折のリスクと比較して、骨塩密度を増加させ、骨形成を増加させ、骨強度を高め、骨吸収（例えば、骨量減少）を減少させ、又は骨折のリスクを減少させ得る。いくつかの実施形態において、対象は、骨損傷（例えば、骨粗鬆症又は骨減少症）をもたらす疾患を有するか、又はそれを発症するリスクを有し得る。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、対象は、骨損傷（例えば、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少）を伴う疾患又は状態を有するか又はそれを発症するリスクがある。本発明はまた、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少を有するか又はそれを発症するリスクのある対象を、本明細書に記載の有効量のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメントをその対象に投与することによって治療する方法を含む。
本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、骨疾患（例えば、骨損傷）を有する又は発症するリスクのある対象は、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少を含む疾患又は状態を有するか又は発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、原発性骨粗鬆症は、加齢性骨粗鬆症又はホルモンに関連する骨粗鬆症である（例えば、エストロゲンの低下に関連する）。いくつかの実施形態では、続発性骨粗鬆症は、不動化誘発性骨粗鬆症又はグルココルチコイド誘発性骨粗鬆症である。いくつかの実施形態では、骨がんは多発性骨髄腫であるか、又はがん転移関連の骨量減少は多発性骨髄腫によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、治療関連の骨量減少は、ＦＧＦ－２１又はＧＬＰ－１による治療、治療薬を含むＦＧＦ－２１又はＧＬＰ－１による治療、２型糖尿病及び／又は肥満の治療、又はがん治療（例えば、化学療法又は放射線療法）により生じる。いくつかの実施形態では、食事関連の骨量減少は、くる病（例えば、ビタミンＤ欠乏症）である。いくつかの実施形態では、低重力関連の骨量減少は、負荷に関連する骨量減少の欠如である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、骨塩密度を増加させる（例えば、骨量を増加させる）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、骨吸収を減少させる（例えば、骨異化活性を低減するか、又は骨量減少を低減する）、例えば、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される骨吸収と比較して、骨吸収を減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、骨形成を増加させる（例えば、骨同化活性を増加させるか、又は骨生成を増加させる）、例えば、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される骨形成と比較して、骨形成を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、骨芽細胞活性又は骨芽細胞形成を高める、例えば、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される骨芽細胞活性又は骨芽細胞形成と比較して、骨芽細胞活性又は骨芽細胞形成を高める。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、破骨細胞活性又は破骨細胞形成を減少させる、例えば、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される破骨細胞活性又は破骨細胞形成と比較して、破骨細胞活性又は破骨細胞形成を減少させる。いくつかの実施形態では、骨は皮質骨又は小柱骨である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、それを必要とする対象において、赤血球レベルを増加させる（例えば、ヘモグロビンレベルを増加させる、赤血球数を増加させる、又は赤血球の形成又は産生を増加させる）ために投与される。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される赤血球レベルと比較して、赤血球レベルを増加させ得る（例えば、ヘモグロビンレベル、赤血球数、又は赤血球形成を増加させる）。いくつかの実施形態において、対象は、低赤血球レベルに関連する疾患又は状態（例えば、貧血又は失血）を有し得る。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態において、対象は、低赤血球レベルを伴う疾患又は状態（例えば、貧血又は失血、例えば再生不良性貧血、鉄欠乏性貧血、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、又は炎症性貧血（慢性疾患の貧血とも呼ばれ、例えば、感染症（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ又は結核などの慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ又はループス）、がん（例えば、がん又はがん治療）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、及び慢性腎疾患）によって引き起こされる貧血）を有するか又は発症するリスクがある。本発明はまた、低赤血球レベル（例えば、低ヘモグロビンレベル又は低赤血球数、例えば、貧血）を有する又は発症するリスクのある対象を、本明細書に記載の有効量のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）をその対象に投与することにより治療する方法を含む。本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の組成物での治療又はその投与の前に、貧血に関連することが知られている遺伝子の１つ以上の突然変異（例えば、ＩＲＩＤＡに関連するＴＭＰＲＳＳ６の突然変異）について対象をスクリーニングする工程を含み得る。当業者に知られている標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して、対象を遺伝子突然変異についてスクリーニングすることができる。
本発明はまた、本明細書に記載の有効量のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を対象に投与することにより、貧血又は失血を有する又は発症するリスクのある対象を治療する方法を含む。本明細書に記載の方法のいずれかにおいて、低い赤血球レベル（例えば、低いヘモグロビンレベル又は低い赤血球数）を有するか又は発症するリスクのある対象は、貧血又は失血を有するか又は発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、貧血は、栄養不足（例えば、ビタミン欠乏）、骨髄欠損（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、投薬（例えば、抗レトロウイルスＨＩＶ薬）に対する有害反応、骨髄異形成症候群、骨髄移植、がん（例えば、乳がん、肺がん、結腸がんなどの固形腫瘍；慢性リンパ球白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫などのリンパ系の腫瘍；又は白血病又は多発性骨髄腫などの造血系の腫瘍）、がん治療（例えば、放射線療法又は化学療法、例えば、白金含有剤による化学療法）、炎症性又は自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ、その他の炎症性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、急性又は慢性皮膚疾患（例えば乾癬）、又は炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、嚢胞炎、胃炎）、特発性又は先天性状態を含む急性又は慢性腎疾患又は障害（例えば、慢性腎臓病）、急性又は慢性肝疾患、急性又は慢性出血、感染症（例えば、マラリア骨髄炎）、脾臓肥大、ポルフィリア、血管炎、溶血、尿路感染症、ヘモグロビン症（鎌状赤血球症など）、サラセミア、チャーグ・ストラウス症候群、フェルティ症候群、移植片対宿主病、造血幹細胞移植、骨髄線維症、汎血球減少症、純赤血球形成不全、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、シュバッハマン症候群（例えば、シュバッハマン・ダイアモンド症候群）、薬物使用又は乱用（例えば、アルコール乱用）、又は輸血の禁忌（例えば、高齢患者、アロ抗体又は自己抗体を持つ患者、小児患者、心肺疾患の患者、宗教上の理由で輸血に反対する患者（例えば、一部のエホバの証人））に関連している。いくつかの実施形態では、貧血は、再生不良性貧血、鉄欠乏性貧血、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、ビタミン欠乏性貧血、炎症性貧血（慢性疾患の貧血とも呼ばれ、例えば、感染症（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ又は結核などの慢性感染症）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ又はループス）、がん、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）、及び慢性腎疾患）などの炎症性疾患又は状態によって引き起こされる貧血）、骨髄性疾患関連の貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球性貧血、小球性貧血、低色素性貧血、鉄芽球性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニ貧血、又は芽球過剰を伴う難治性貧血である。いくつかの実施形態において、貧血は、ヘプシジンレベルの上昇に関連している（例えば、貧血を有さない対象におけるヘプシジンレベルと比較して上昇している）。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、エリスロポエチン（ＥＰＯ）に十分に反応しない、又はＥＰＯの有害作用（例えば、高血圧、頭痛、血管血栓症、インフルエンザ様症候群、シャントの閉塞、及び心筋梗塞）の影響を受けやすい対象を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、失血は、手術、外傷、創傷、潰瘍、尿路出血、消化管出血、頻繁な献血、又は重い月経出血（例えば、月経過多）によるものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される赤血球レベルと比較して、赤血球レベル（例えば、ヘモグロビンレベル又は赤血球数）を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、治療前に得られた測定値と比較して、又は未治療の対象で通常観察される赤血球形成と比較して、赤血球形成を増加又は誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、対象の輸血に対する必要性を低減する（例えば、対象は、輸血をもはや必要としないか、又は対象は、本明細書に記載の組成物及び方法による治療前よりも必要な輸血の頻度が少ない）。血液を採取し、後で輸血に使用するために保存することができるように、正常な赤血球レベルを有する対象もまた、赤血球レベルを増加させるために本明細書に記載の方法及び組成物を使用して治療されてもよい。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＦＯＰを治療するために、ＦＯＰの進行を遅らせる又は停止するために、ＦＯＰの発症を遅らせるために（例えば、異所性骨化の発症を遅らせるために）、又は、ＦＯＰの対象における異所性骨化などの異所性骨化を予防又は軽減する（例えば、筋肉、腱、靭帯、又は他の結合組織における骨の形成、例えば、すでに異所性骨化を経験したＦＯＰの対象における異所性骨化を予防又は軽減する、又は異所性骨化をまだ発現していない対象においての異所性骨化の発症を予防する）ために、対象に投与され得る。ＦＯＰは、遺伝性ＦＯＰ（例えば、常染色体優性突然変異などの突然変異の生殖細胞系伝達に関連するＦＯＰ）又は散発性ＦＯＰ（例えば、自発的で非遺伝性の突然変異に関連するＦＯＰ）であり得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、未治療又は対照治療を受けた対象で観察された異所性骨の量、異所性骨の形成、又は異所性骨の再発と比較して、異所性骨の量を減少させ、異所性骨の形成を減少させ、又は異所性骨の再発（例えば、外科的切除後の再発）を減少させ得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、異所性骨の形成を予防し得る（例えば、ＦＯＰを有する対象などの異所性骨化を発症するリスクのある対象において、又は外科的切除後の再発などの、異所性骨の再発を予防し得る。いくつかの実施形態では、対象は異所性骨化を発症するリスクがある（例えば、対象はＦＯＰに関連する遺伝子変異を有するが、ＦＯＰの症状をまだ示していない、例えば、異所性骨化をまだ示していない）。本明細書に記載の方法は、ＦＯＰに関連することが知られている遺伝子の１つ以上の突然変異（例えば、ＡＬＫ２の突然変異、アクチビンＡタイプＩ受容体（ＡＣＶＲ１）としても知られている）について、本明細書に記載の組成物での治療又はその投与の前に対象をスクリーニングする工程を含み得る。当業者に知られている標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して、対象を遺伝子突然変異についてスクリーニングすることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、シェーグレン症候群を治療するために（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイを治療するために）、又はシェーグレン症候群の１つ以上の症状を軽減するため（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ又は口渇を軽減するため）に、対象に投与され得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療前の対象又は未治療のシェーグレン症候群の対象における眼の刺激、視覚、涙腺の炎症又は線維症、唾液の産生、涙液の産生、全身性炎症、関節痛、倦怠感、又はシェーグレン症候群の症状の重症度又は発生と比較して、眼の刺激を軽減し、涙腺の線維症を軽減し、涙腺の炎症を軽減し、視覚を改善し、唾液の産生を増加させ、涙液の産生を増加させ（例えば、涙液量を増加させ）、全身性炎症を軽減し、関節痛を軽減し、シェーグレン症候群の対象の倦怠感を軽減し、又はシェーグレン症候群の１つ以上の症状の重症度又は発生を軽減し（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ、口渇、又は関節痛を軽減し）得る。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＤＩＰＧを治療し、ＤＩＰＧを有する対象の生存期間（例えば、生存時間、例えば、寿命）を延長し、ＤＩＰＧを有する対象の無増悪生存期間を延長し、ＤＩＰＧ腫瘍の増殖を減少させ、ＤＩＰＧ腫瘍のサイズ又は体積を減少させ、又はＤＩＰＧ腫瘍の転移を予防又は減少させるために対象に投与され得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、未治療又は対照治療の対象の生存期間、無増悪生存期間、腫瘍増殖、腫瘍サイズ又は体積、あるいは腫瘍転移と比較して、又は治療前の対象の腫瘍増殖、腫瘍サイズ又は体積、あるいは腫瘍転移と比較して、ＤＩＰＧを有する対象の生存期間（例えば、生存時間、例えば、寿命）を延長させ、ＤＩＰＧを有する対象の無進行生存期間を延長し、ＤＩＰＧ腫瘍の増殖を減少させ、ＤＩＰＧ腫瘍のサイズ又は体積を減少させ、又はＤＩＰＧ腫瘍の転移を予防又は減少させる。いくつかの実施形態では、対象は、ＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１）に活性化突然変異を有する。本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の組成物による治療又はその投与の前に、ＡＬＫ２（ＡＣＶＲ１）の突然変異について対象をスクリーニングする工程を含み得る。当業者に知られている標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して、対象を遺伝子突然変異についてスクリーニングすることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＭＯを治療し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成を低減又は予防し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の数を低減し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫のサイズを減少させるか、又はＭＯを有する対象における骨軟骨腫の成長を遅延させるために対象に投与され得る。骨軟骨腫は、骨の成長端（骨幹端）、長骨（例えば、脚、腕、又は指の長骨）、及び／又は扁平骨（例えば、寛骨（骨盤骨）、肋骨、又は肩甲骨）に形成され得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療前の対象又はＭＯを有する未治療の対象の骨軟骨腫の形成、骨軟骨腫の数、骨軟骨腫のサイズ、又は骨軟骨腫の成長と比較して、骨軟骨腫の形成を低減又は予防し（例えば、骨軟骨腫をまだ発症していないＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成を予防し、又はすでに１つ以上の骨軟骨腫を発症しているＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成低減又は予防し、骨軟骨腫の数を減らし、骨軟骨腫のサイズを縮小し、又は骨軟骨腫の成長を遅らせ得る。本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の組成物による治療又はその投与の前に、ＥＸＴ１又はＥＸＴ２における突然変異について対象をスクリーニングする工程を含み得る。当業者に知られている標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して、対象を遺伝子突然変異についてスクリーニングすることができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＰＣＯを有する対象又はＰＣＯを発症するリスクがある対象（例えば、白内障手術を受けたか、又は間もなく受けることになっている対象、例えば、６ヵ月、５ヵ月、４ヵ月、３ヵ月、２ヵ月、１ヵ月、２週、１週間、又はそれよりも近いうちに白内障手術を受ける予定である対象）において、ＰＣＯを治療し、ＰＣＯの発症を低減又は予防するために（例えば、白内障手術を受けたがまだＰＣＴＯを発症していない対象又は白内障手術を間もなく受けることになっている対象、例えば、６ヵ月、５ヵ月、４ヵ月、３ヵ月、２ヵ月、１ヵ月、２週、１週間、又はそれよりも近いうちに白内障手術を受ける予定である対象、例えば、ＰＣＯを発症するリスクのある対象）において、未治療の対象のＰＣＯの発症、線維症（例えば、移植された水晶体付近の線維症、例えば、又は後嚢上又はその付近の線維症）、水晶体線維の分化、水晶体上皮細胞の増殖、又は眼の炎症と比較して、ＰＣＯの発症を予防し、ＰＣＯを有する対象の視力を改善し（例えば、ぼやけた視力又は曇った視力を軽減し）、ＰＣＯを有する対象の光感受性又はまぶしさを軽減し、線維症（例えば、移植された水晶体付近の線維症、例えば、後嚢上又はその付近の線維症）を軽減又は予防し、水晶体上皮細胞の増殖を減少させ又は阻害し、水晶体線維の分化を軽減又は予防し、又は眼の炎症を軽減又は予防するために、対象に投与され得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＰＣＯを発症するリスクのある対象においてＰＣＯの発症を軽減又は予防し、線維症（例えば、移植された水晶体付近の線維症、例えば、後嚢上又はその付近の線維症）を軽減又は予防し、水晶体線維の分化を低減又は予防し、水晶体上皮細胞の増殖を低減又は阻害し、又は眼の炎症を軽減又は予防し得る。又は、治療前の対象における視力、光感受性又はまぶしさ、線維症、眼の炎症、水晶体上皮細胞の増殖、又は水晶体線維の分化と比較して、視力を改善し（例えば、ぼやけた又は曇った視力を軽減し）、又は光感受性又はまぶしさを軽減し、線維症を軽減し、眼の炎症を軽減し、水晶体上皮細胞の増殖を軽減し、又は水晶体線維の分化を軽減し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、心肥大を治療し、心臓線維症を治療し、心肥大の発症を遅らせ又は予防し（例えば、心肥大を発症するリスクがある対象、例えば、高血圧又は弁膜症のある対象において）、心臓線維症の発症を遅らせるか又は予防し（例えば、心臓線維症を発症するリスクがある対象、例えば、高血圧の対象、心筋梗塞を患ったことのある対象、糖尿病性肥大型心筋症の対象、又は特発性拡張型心筋症の対象において）、心臓線維症を逆転させ、心臓瘢痕形成を減少又は阻害し、心臓再生を増加又は誘発し、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状を改善する（例えば、運動能力の向上、血液駆出量の増加、左心室拡張末期圧の低下、肺毛細血管楔入圧の低下、心拍出量の増加、心係数の増加、肺動脈圧の低下、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の減少、左心室及び右心室の壁応力の減少、壁張力及び／又は壁の厚さの減少、心筋収縮性の増加、心筋細胞面積の減少、心筋細胞の細胞外マトリックス沈着の減少、生活の質の改善、及び／又は疾患関連の罹患率及び死亡率の低下）ために対象に投与され得る。本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療前の対象又は未治療又は対照治療を受けた対象の心肥大の発症、心臓線維症の発症、心臓線維症の程度、心臓瘢痕形成、心臓再生、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状と比較して、心肥大又は心臓線維症を有するか又は発症するリスクのある対象における心肥大の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症を逆転させ、心臓瘢痕形成を低減又は阻害し、心臓再生を増加又は誘発し、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状を改善する。
本明細書に記載の組成物は、骨塩密度を増加させ、骨強度、密度を増加させ、骨吸収（例えば、骨量減少）を減少させ、骨吸収（例えば、骨量減少）速度を減少させ、骨形成を増加させ、骨形成の速度を増加させ、破骨細胞活性を低下させ、骨芽細胞活性を増加させ、骨折のリスクを減少させ、赤血球レベルを増加させ、ヘモグロビンレベルを増加させ、輸血の必要性を低下させ、赤血球形成を増加させ、又は赤血球数を増加させ、貧血を治療し、鉄レベルを増加させ、鉄欠乏を減少させ、上昇したヘプシジンレベルを低下させ、ＦＯＰを治療し、異所性骨化を予防し（例えば、対象において異所性骨の初期形成を予防し、又は外科的切除後の異所性骨の再発を予防し）、ＦＯＰの進行を遅らせ又は停止し、ＦＯＰの発症を遅らせ（例えば、異所性骨化の発症を遅らせ）、異所性骨化を減少させ（例えば、対象における異所性骨の量を減らし、又は、異所性骨の初期形成などの異所性骨の形成又は外科的切除後の異所性骨の再発を減少させ）、シェーグレン症候群を治療し、シェーグレン症候群に関連するドライアイを軽減し、シェーグレン症候群に関連する口渇を軽減し、眼の炎症を軽減し、唾液の産生を増加させ、涙液の産生を増加させ、全身の炎症を軽減し、関節痛を軽減し、倦怠感を軽減し、シェーグレン症候群の症状の重症度又は発生を軽減し（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ、口渇、又は関節痛を軽減し）、ＤＩＰＧを治療し、ＤＩＰＧを有する対象の生存期間（例えば、生存時間、例えば、寿命）を延長し、ＤＩＰＧを有する対象の無増悪生存期間を延長し、ＤＩＰＧ腫瘍の増殖を減少させ、ＤＩＰＧ腫瘍のサイズ又は体積を減少させ、ＤＩＰＧ腫瘍の転移を予防又は減少させ、ＭＯを治療し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の形成を低減又は予防し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の数を低減し、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫のサイズを減少させ、ＭＯを有する対象における骨軟骨腫の増殖を遅延させ、ＰＣＯの発症を低減又は予防し、ＰＣＯを有する対象の視力を改善し（例えば、ぼやけた視力又は曇った視力を軽減し）、ＰＣＯを有する対象の光感受性又はまぶしさを軽減し、線維症（例えば、移植された水晶体付近の線維症、例えば、後嚢上又はその付近の線維症）を軽減又は予防し、水晶体上皮細胞の増殖を軽減又は阻害し、水晶体線維の分化を軽減又は予防し、又はＰＣＯを有する対象の眼の炎症を軽減又は予防し、心肥大を治療し、心臓線維症を治療し、心肥大の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症を逆転させ、心臓瘢痕形成を減少又は阻害し、心臓再生を増加又は誘発し、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状を改善する（例えば、運動能力の向上、血液駆出量の増加、左心室拡張末期圧の低下、肺毛細血管楔入圧の低下、心拍出量の増加、心係数の増加、肺動脈圧の低下、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の減少、左心室及び右心室の壁応力の減少、壁張力及び／又は壁の厚さの減少、心筋収縮性の増加、心筋細胞の細胞外マトリックス沈着の減少、生活の質の改善、及び／又は疾患関連の罹患率及び死亡率の低下）のに十分な量で投与される。骨塩密度は、当業者に知られている十分に確立された臨床技術を使用して評価することができる（例えば、二重エネルギーＸ線吸収測定法によって）。赤血球レベルは、赤血球数とヘモグロビンレベルを測定する標準的な血液検査を使用して評価できる。ＦＯＰ症状（例えば、異所性骨化）及びＭＯ（例えば、骨軟骨腫）は、放射線撮影（例えば、Ｘ線）、ＣＴ（コンピュータ断層撮影）、及び／又はＭＲＩ（磁気共鳴画像法）などの標準的な画像法を使用して評価できる。ＤＩＰＧ腫瘍のサイズ、増殖、体積、又は転移は、ＭＲＩなどの画像診断法を使用して評価できる。心肥大及び／又は心臓線維症の症状は、心臓機能及び形態を評価するための臨床的アプローチを使用して評価できる（例えば、ストレステスト、心エコー検査、ＣＴ、ＭＲＩ、心臓磁気共鳴画像法、単一光子放射型コンピュータ断層撮影法、ポジトロン放射型断層撮影法、バルーンカテーテルベースのアプローチ、又は生検の組織学的分析）。シェーグレン症候群及びＰＣＯ症状は、視覚機能を評価し、眼を画像化して炎症及び／又は線維症を評価することによって評価できる（例えば、細隙灯画像を使用して後嚢に形成された線維症を評価する）。本明細書に記載の方法はまた、本明細書に記載の組成物による治療又はその投与の前に、あるいは本明細書に記載の組成物の投与又はそれによる治療の後に、対象における骨塩密度、赤血球レベル、あるいはＦＯＰ、ＤＩＰＧ、ＭＯ、ＰＣＯ、シェーグレン症候群、又は心肥大及び／又は心臓線維症の症状を評価する工程を含み得る。対象は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）又は医薬組成物の投与から、治療に使用される用量及び投与経路に応じて、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月又はそれ以上後に評価され得る。評価の結果に応じて、対象は追加の治療を受ける場合がある。
本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）をコードする核酸、又は前記核酸を含む発現ベクターもまた、本明細書に記載の任意の方法に従って投与することができる。本明細書に記載の方法のいずれにおいても、ポリペプチド、核酸、又はベクターを、医薬組成物の一部として投与することができる。
キット
本明細書に記載の組成物は、骨疾患、貧血、ＦＯＰ、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＭＯ、ＤＩＰＧ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症の治療に使用するためのキットとして提供することができる。組成物は、本明細書に記載のＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含み得、任意選択で薬学的に許容される賦形剤（例えば、生理食塩水）中、骨疾患、貧血、ＦＯＰ、シェーグレン症候群（例えば、シェーグレン症候群に関連するドライアイ）、ＭＯ、ＤＩＰＧ、ＰＣＯ、又は心肥大及び／又は心臓線維症を治療するのに十分な量の単位剤形で提供され得る。キットは、医師などのキットのユーザに、本明細書に記載の方法を実施するように指示する添付文書をさらに含み得る。キットは、任意選択で、組成物を投与するための注射器又は他のデバイスを含み得る。
実施例
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態をさらに説明するために提供されているが、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。それらの例示的な性質により、当業者に知られている他の手順、方法論、又は技術を代替的に使用することができることが理解されるであろう。
実施例１－ＡＬＫ２抗体の生成
ヒトコンビナトリアルファージライブラリーからＡＬＫ２を認識する抗体を選び出し、続いて２回の濃縮を行い、非特異的抗体を枯渇させるために密接に関連する抗原に対してカウンターセレクションを行うことにより、抗体を生成した。２回目の濃縮後、Ｒａｐｉｄ Ｐｏｏｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ「ＲＡＰＭＡＴ（商標）」（Ｐｒａｓｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１（４），５７１－５８３，２００９）を実施した（ＲＡＰＭＡＴはＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧの登録商標である）。ＣＤＲの変動性が非常に多様なセットを、選択した抗体プールにクローン化したため、予備選択した抗体プールの多様性はさらに拡大した。得られた拡張抗体ライブラリーを、ＡＬＫ２で選出した。このとき、高ストリンジェンシー洗浄条件を使用してさらに２回濃縮し、選出段階では抗原量の減少させ、非特異的抗体を枯渇させるために密接に関連する抗原に対してカウンターセレクションを行った。選出後、濃縮した抗体遺伝子プールをファージディスプレイベクターから細菌発現ベクターにサブクローニングし、以下の表２に示すように最終的なＦａｂ抗体フォーマットを決定した。
Figure 2022505585000003
実施例２－表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＡＬＫ２抗体結合親和性の評価
ＧＥ Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００を使用して、抗ＡＬＫ２抗体（リガンド）とＡＬＫ２－Ｈｉｓ／ＡＬＫ２－ｍＦＣ（分析物）との間の相互作用の動態を測定した。フローセル１～４を、アミンカップリングキットを使用して、ＧＥの抗ヒト捕捉抗体で固定した。次に、フローセル２～４では抗ＡＬＫ２タンパク質をチップに捕捉し、フローセル１は、非特異的結合を測定及び減算するための参照セルとして空のままにした。Ｂｉａｃｏｒｅで動態アッセイを実施する場合、１００共鳴単位（ＲＵ）の最大分析物結合応答（ＲＭａｘ）を許容することが最善である。これは、式ＲＭａｘ１００＝（ｋＤａ分析物／ｋＤａリガンド）×固定化リガンドＲＵによって達成される。フローセル内のリガンドの密度が高すぎると、チップ表面近くの非結合分析物の濃度が人為的に低くなり、結果として得られるセンサーグラムは、リガンドと分析物との間の真の結合を表さなくなってしまう。これは物質移動効果と呼ばれ、チップ表面に結合するリガンドの適切なレベルを計算し、また、４０μＬ／分の高流量を使用することによって防止される。ランニングバッファー及びタンパク質の希釈にはＨＢＳ－ＥＰ＋を使用した。各リガンドは、デュプリケートの濃度系列で実験した。各サイクルの終わりに、チップを再生するため、結合したすべての抗ＡＬＫ２及び分析物を３Ｍ ＭｇＣｌ２で除去した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４を使用して、ｆＡＢ－ＦＨフォーマットの一価ｆＡＢ抗体とＡＬＫ２－ＦＣとの間の相互作用の動態も測定した。
以下の表３に、ＦｏｒｔｅＢｉｏ ＯｃｔｅｔによってＡＬＫ２－ＦＣに対して測定した抗体１、抗体２、及び抗体３のｆＡＢのＫＤ値、及びＧＥ ＢｉａｃｏｒｅによってＡＬＫ２－Ｈｉｓに対して測定した完全抗体のＫＤ値を示す。表４は、ＧＥ ＢｉａｃｏｒｅによってＡＬＫ２－ｍＦＣに対して測定した抗体２のＫＤ値を示す。表５は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４を使用して測定した、ｆＡＢ－ＦＨフォーマットの一価ｆＡＢ抗体とＡＬＫ２－ＦＣとの間の相互作用のｋａ、ｋｄ、及びＫＤ値を示す。
Figure 2022505585000004
Figure 2022505585000005
Figure 2022505585000006
実施例３－遺伝子ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用したＡＬＫ２抗体の評価
Ｃ２Ｃ１２－ＢＲＥ－ルシフェラーゼ（ＳＭＡＤ１レポーター）細胞を、９６ウェルプレートの２％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭにプレーティングし、３時間以上インキュベーターに入れてプレート表面に順応させた。各ｆＡｂ変異体について、２％ＤＭＥＭで希釈系列を作成し、細胞に投与した。残りのウェルは、陽性対照及びバックグラウンドの複製に使用した。次に、細胞を３７℃のインキュベーターに４５分間入れた。ウェルを、媒体（バックグラウンド値を決定するため）、ＢＭＰ６（ＡＬＫ２刺激値を決定するため）、又はｆＡＢとそれに続く４０ｎｇ／ｍＬ ＢＭＰ６（ｆＡｂのＩＣ５０を決定するため）のいずれかで処理した。ＢＲＥで刺激したルシフェラーゼの程度を、ＳＭＡＤ１リン酸化の代わりに測定した。プレートを一晩インキュベートした後、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｓｔｅａｄｙ Ｇｌｏ及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５ｅを使用して読み取った。阻害は、陽性対照ウェルと比較したシグナル損失のパーセントとして計算した。図１Ａ～１Ｂは、ＳＭＡＤ１ルシフェラーゼレポーターを用いてＣ２Ｃ１２細胞で実施した抗ＡＬＫ２ ｆＡＢのＢＭＰ６阻害用量反応曲線を示す。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍの３及び４パラメータカーブフィットの両方の５０％抑制値（ＩＣ５０）が曲線の横に表示されている。図１Ａは、生成した最初の４つのｆＡＢからの結果を示し、図１Ｂは、Ｒａｐｉｄ Ｐｏｏｌ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎを使用して生成した５つの第２ラウンドｆＡＢからの結果を示している。
実施例４－ＩＲＩＤＡのマウスモデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
８週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６マウスを、媒体又はＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ抗体２、週２回、腹腔内注射）で処理した。投与開始から６日後、媒体処理マウスに、ルシフェラーゼ（対照）又はＴＭＰＲＳＳ６（０．３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを標的とする脂質カプセル化ｓｉＲＮＡを静脈内投与した。ＴＭＰＲＳＳ６は、ヘモジュベリンを切断することによってヘプシジン分泌を抑制する膜貫通型ＩＩ型セリンプロテアーゼをコードしており、ＴＭＰＲＳＳ６の変異がＩＲＩＤＡのヒト対象で観察されている。ＡＬＫ２抗体で処理したマウスにＴＭＰＲＳＳ６ｓｉＲＮＡ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ｓｉＲＮＡ投与の４８時間後にマウスを安楽死させた。全血を収集し、血液学的パラメータについてアッセイした。図２に示すように、ＡＬＫ２抗体による治療は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連するヘモグロビンの減少を防ぐ（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１）。
第２の実験では、８週齢のメスのアルビノＣ５７ＢＬ／６マウスに、ルシフェラーゼ（対照）又はＴＭＰＲＳＳ６（０．７５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを標的とする脂質カプセル化ｓｉＲＮＡを３日ごとに静脈内投与した。ＴＭＰＲＳＳ６ｓｉＲＮＡを投与されたコホートでヘプシジンが増加し、血清ヘモグロビン及び血清鉄が減少する時点まで、マウスはｓｉＲＮＡ処理を受けた。この時点で、マウスをさらにランダム化して、媒体又は抗ＡＬＫ２抗体（抗体２、５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）のいずれかを投与した。最初のｓｉＲＮＡ投与から１２日後にマウスを安楽死させた。全血を収集し、血液学的パラメータについてアッセイした。さらに、血清を収集し、ＥＬＩＳＡによりヘプシジン濃度を、そして比色分析により総鉄含有量を分析した。図３Ａに示すように、ＡＬＫ２抗体での処理は、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連するヘモグロビン減少を逆転させた（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１）。ＡＬＫ２抗体処理はまた、ＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連する血清ヘプシジンの増加（＊＊＝ｐ≦０．０１、図３Ｂ）及びＴＭＰＲＳＳ６欠損に関連する血清鉄の減少（＊＝ｐ≦０．０５；＊＊＝ｐ≦０．０１、図３Ｃ）を逆転させた。
実施例５－骨粗鬆症のマウスモデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、９週齢で精巣摘除術（ＯＲＸ）又は偽手術を行った。その後の６週間の回復期間の間に、ＯＲＸマウスは骨粗鬆症の表現型を発症し、ＯＲＸマウスに媒体又はＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ抗体２）のいずれかを週２回腹腔内注射した。全身二重Ｘ線吸収測定法（Ｌｕｎａｒ ＰＩＸＩｍｕｓ、ＧＥ Ｌｕｎａｒ Ｃｏｒｐ．）を、投与開始から１６週間後に実施した。高解像度のデジタル画像をキャプチャし、ヒドロキシアパタイトファントムを参照として、ＢＭＤ（ソフトウェアバージョン２．１０）を決定した。図４に示すように、ＡＬＫ２抗体で処理されたＯＲＸマウスは媒体で処理されたマウスよりもＢＭＤが大きく、ＡＬＫ２抗体で処理するとＢＭＤが改善するか骨量減少が低下することを示している。
実施例６－ＭＯのマウスモデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
骨軟骨腫の形成に対するＡＬＫ２抗体の効果は、ＭＯのマウスモデルを使用して決定される。このマウスは、誘導可能かつ軟骨細胞特異的な、ホモ接合性のＥｘｔ１遺伝子の破壊を有し、Ｐ８で授乳中の母動物にドキシサイクリンを単回投与すると、骨軟骨腫の形成は、変異体の１００％で観察される。マウスを、Ｐ８から始まるＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ）又は媒体のいずれかの週２回の腹腔内注射を受ける２つの群に分ける。膝関節及び胸郭の骨軟骨腫をモニタリングするために、マイクロＣＴ撮影を毎週実施する。４週間の処理の終わりにマウスを犠死させる。各群の一部から、全身骨格を準備し、画像化の目的でアリザリンレッド及びアルシアンブルーで染色する。残りのマウスでは、後肢と胸郭の軟骨・骨接合部のサンプルを採取する。組織を４％パラホルムアルデヒドで固定し、ＥＤＴＡで脱灰し、パラフィンに包埋し、５μｍの厚さに切断する。次に、サフラニンＯ／ファストグリーン染色を使用して、軟骨形態の変化と骨軟骨腫の発生を測定する。
実施例７－後嚢混濁に対するＡＬＫ２抗体の効果
白内障手術後の後嚢混濁（ＰＣＯ）の形成に対するＡＬＫ２抗体の効果は、損傷誘発性ＰＣＯのマウスモデルを使用して決定される。簡単に説明すると、１０～１６週齢のマウスを、ＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ）又は媒体のいずれかを、手術前の２週間に週２回投与する２つの群に分ける。白内障手術を麻酔下で行い、瞳孔の１つを２．５％塩酸フェニレフリン及び１％トロピカミドで拡張させる。眼科用メスを使用して、水晶体嚢内に伸びる角膜中央部を切開する。平衡塩類溶液によるハイドロダイセクションを使用して、水晶体嚢から水晶体線維塊を分離し、水晶体線維塊を取り除き、切開を閉じ、前房に平衡塩類溶液を再充填する。各群では、一部のマウスを、手術直後と手術後１、５、及び１４日で安楽死させる。マウスには、安楽死させるまで、週に２回ＡＬＫ２抗体又は媒体のいずれかを投与し続ける。解剖の直前に、動物に麻酔をかけ、角膜の混濁、血管新生の有無、及び瞳孔散大の程度を評価する。解剖時に、手術した眼及び手術していない眼（対照）の両方を採取して包埋し、急速凍結させ、－８０°で保存する。次に、炎症細胞、線維性マーカー（αＳＭＡ、フィブロネクチン）、及び水晶体線維分化マーカー（Ｐｒｏｘ１、ｃＭａｆ）の存在の程度を、免疫組織化学を使用して評価する。
実施例８－ＤＩＰＧのマウス同所性異種移植モデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）におけるグリオーマの増殖の阻害に対するＡＬＫ２抗体の効果は、ＤＩＰＧのマウス同所性異種移植モデルを使用して評価される。このモデルは、ＨＫ２７Ｍ遺伝子及びＡＣＲＶ１遺伝子に変異を含む患者由来の細胞株（ＨＳＪＤ－ＤＩＰＧ－００７）を、免疫不全ＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスの第４心室に移植することを組み込んでいる。この研究の主な結果は、移植を受けた子犬の生存の持続である。簡単に説明すると、３週齢のメスのＮＯＤ－ＳＣＩＤマウスに、定位手術によりＨＳＪＤ－ＤＩＰＧ－００７細胞を移植する。接種後１４～２１日で、マウスを２つの群にランダムに分け、媒体又はＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ）を週２回投与する。マウスには接種後２１日以内に症状が現れると予想され、介入なしでは平均寿命は約６０日と予想される。試験期間中、マウスの体重、健康、及び状態を注意深くモニタリングする。マウスの体重が２０％以上減少した場合、又は健康状態の悪化や苦痛の兆候が見られた場合、マウスを安楽死させて試験から除外する。終了後、マウスの脳を注意深く解剖し、後日の組織学的評価のためにホルマリンで固定し、また、ＨＳＪＤ－ＤＩＰＧ－００７細胞のインビボ増殖を測定する。
実施例９－シェーグレン症候群のマウスモデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
シェーグレン症候群の症状の改善に対するＡＬＫ２抗体の効果は、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）自己免疫マウスモデルで決定される。膵島炎に加えて、ＮＯＤマウスは外分泌腺及び唾液腺に免疫浸潤を発症し、最終的に分泌機能障害を引き起こす。これらのマウスで測定される主要な表現型の結果は、産生される涙液量である。これは、病気の進行と薬理学的介入の有効性の縦断的分析を与えるために毎週テストされる。抗体を腹腔内注射により週２回５ｍｇ／ｋｇで投与する。簡単に説明すると、ＮＯＤマウス（１２週齢）のベースラインでの涙液産生を評価し、２つの群にランダム化して、媒体又はＡＬＫ２抗体のいずれかを８週間投与する。この期間中、マウスの涙液産生を毎週テストする。試験の終了時に、涙腺を採取して、線維症マーカー（ＭＭＰ９、ＭＭＰ２、ＣＯＬ１Ａ１、ＴＩＭＰ）及び炎症マーカー（ＭＣＰ１、ＩＬ６、ＴＮＦ－α）のｍＲＮＡ発現を評価する。反対側の涙腺を解剖し、炎症及び線維症の組織学的分析のためにホルマリンで固定する。
実施例１０－心肥大のマウスモデルにおけるＡＬＫ２抗体の効果
心肥大及び線維症の発症に対するＡＬＫ２抗体の効果は、アンジオテンシンＩＩ（Ａ２）誘発性心肥大マウスモデルを使用して決定される。マウスを、ＡＬＫ２抗体（５ｍｇ／ｋｇ）又は媒体のいずれかを週２回、手術前の２週間投与される群、又は手術直後に投与を開始する群に分ける。簡単に説明すると、麻酔をかけたマウスにＡ２を充填した浸透圧ミニポンプを植え込み、このミニポンプは２週間又は４週間一定量のＡ２を放出して心肥大を誘発する。２週間又は４週間の終わりに、マウスは鎮静下で心エコー検査を受ける。心臓全体及び左心室（ＬＶ）の重量を測定し、ＬＶを半分に分割して、液体窒素又はホルマリン中で保存する。脛骨の長さ（ＴＬ）も測定する。心臓重量の変化、心臓重量対ＴＬ比、ＬＶ重量、及びＬＶ対ＴＬ比を評価する。さらに、脳室内中隔及び後壁の厚さ、ならびに心筋細胞の面積及び線維化を測定する。
実施例１１－ＡＬＫ２抗体の投与による貧血の治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、ヘモグロビンレベルを増加させ、赤血球数を増加させ、又は鉄欠乏を減少させるように、貧血（例えば、ＩＲＩＤＡ又は炎症性貧血）を有するヒト患者などの対象を治療することができる。治療方法は、血液学的パラメータを測定する血液検査に基づいて、治療の候補として対象を診断又は特定することを含み得る。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、貧血を治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ヘモグロビンレベルを増加させ、赤血球数を増加させ、又は鉄欠乏を減少させるのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は血液検査を行うことで、患者のヘモグロビンレベル、赤血球数、又は鉄欠乏をモニタリングできる。組成物の投与前の試験結果と比較して、組成物の投与後に患者が改善されたヘモグロビンレベル、赤血球数、又は鉄欠乏を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１２－ＡＬＫ２抗体の投与による骨疾患の治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、骨塩密度を増加させ、骨形成を増加させ、骨吸収（例えば、骨量減少）を減少させ、又は骨折のリスクを低減するように、骨疾患（例えば、骨粗鬆症又は骨減少症）を有するヒト患者などの対象を治療することができる。治療方法は、骨塩密度の標準的な臨床試験（例えば、二重Ｘ線吸収測定法）に基づいて、治療の候補として対象を診断又は特定することを含み得る。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、骨疾患を治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、骨塩密度を増加させ、骨形成を増加させ、骨吸収を減少させ（例えば、骨量減少）、又は骨折のリスクを減少させるのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は二重Ｘ線吸収測定法を行うことで、患者の骨塩密度をモニタリングできる。組成物の投与前の試験結果と比較して、組成物の投与後に患者が骨塩密度の増加、骨形成の増加、骨吸収の減少（例えば、骨量減少）、又は骨折のリスクの減少を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１３－ＡＬＫ２抗体の投与によるＦＯＰの治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、異所性骨化を予防又は軽減し、ＦＯＰの進行を遅らせ、又はＦＯＰの発症を遅らせるように、ＦＯＰを有するヒト患者（例えば、ＡＬＫ２における機能獲得型変異を有する患者）などの対象を治療することができる。治療の方法は、ＡＬＫ２の突然変異の遺伝子検査に基づいて、又は放射線イメージング、ＣＴ、又はＭＲＩを行うことに基づいて、治療の候補として対象を診断又は特定することを含み得る。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、ＦＯＰを治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、異所性骨化を減少させ、ＦＯＰの進行を遅らせ、又はＦＯＰの発症を遅らせるのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は、放射線撮影、ＣＴ、及び／又はＭＲＩを使用して、患者の異所性骨化又は疾患の進行をモニタリングできる。組成物の投与前の試験結果と比較して、組成物の投与後に患者が異所性骨化の減少（例えば、異所性骨化の量又は追加の異所性骨の形成の減少）、異所性骨化が発症しないこと、又はＦＯＰの発症の遅延又は進行の緩慢化を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１４－ＡＬＫ２抗体の投与によるシェーグレン症候群の治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、シェーグレン症候群の１つ又は複数の症状（例えば、ドライアイ、口渇、眼の刺激、かすみ目、涙腺の線維症、涙腺の炎症、全身性炎症、関節痛、又は倦怠感）を改善し又は軽減するように、シェーグレン症候群を有するヒト患者などの対象を治療することができる。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、シェーグレン症候群を治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、シェーグレン症候群の１つ以上の症状を（例えば、涙液又は唾液の産生を増加させることにより、例えば、ドライアイ、口渇、眼の刺激、かすみ目、涙腺の線維症、涙腺の炎症、全身性炎症、関節痛、又は倦怠感を）改善し又は軽減するのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は、涙液の産生（例えば、涙液産生量）、唾液の産生、視覚、眼の刺激、涙腺の炎症又は線維症、又は関節痛や倦怠感についての患者の報告を評価することによって、シェーグレン症候群の患者の症状をモニタリングすることができる。組成物の投与前の症状と比較して、組成物の投与後に患者がシェーグレン症候群の１つ以上の症状（例えば、ドライアイ、口渇、眼の刺激、かすみ目、涙腺の線維症、涙腺の炎症、全身性炎症、関節痛、又は倦怠感）の軽減を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１５－ＡＬＫ２抗体の投与によるＭＯの治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、骨軟骨腫の形成を予防又は低減し、骨軟骨腫のサイズを低減し、骨軟骨腫の数を低減し、又は骨軟骨腫の成長を遅らせるように、ＭＯを有するヒト患者などの対象を治療することができる。治療方法は、ＥＸＴ１又はＥＸＴ２における突然変異の遺伝子検査に基づいて、又は放射線イメージング、ＣＴ、又はＭＲＩを実行することに基づいて、治療の候補として対象を診断又は特定することを含み得る。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、ＭＯを治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、骨軟骨腫の形成を低減し、骨軟骨腫のサイズを低減し、骨軟骨腫の数を低減し、又は骨軟骨腫の成長を遅らせるのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は、放射線撮影、ＣＴ、及び／又はＭＲＩを使用して、患者の骨軟骨腫の成長、数、又はサイズをモニタリングすることができる。組成物の投与前の試験結果と比較して、又は未治療の対象と比較して、組成物の投与後に患者が骨軟骨腫形成の減少（例えば、新しい骨軟骨腫を形成しないか、又は未治療の対象又は治療前の骨軟骨腫形成と比較して骨軟骨腫の形成が少ない）、骨軟骨腫サイズの減少、骨軟骨腫数の減少、又は骨軟骨腫成長の遅延を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１６－ＡＬＫ２抗体の投与によるＤＩＰＧの治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、生存時間を改善し、腫瘍増殖を低減し、腫瘍のサイズ又は体積を低減し、又は腫瘍転移を予防又は低減するように、ＤＩＰＧを有するヒト患者などの対象を治療することができる。治療方法は、ＡＬＫ２の活性化変異の遺伝子検査に基づいて、治療の候補として対象を診断又は特定することを含み得る。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって、又は中枢神経系への局所投与（例えば、脳室内注射、髄腔内注射、又は大槽内注射）によって、対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、生存時間を改善し、腫瘍増殖を減少させ、腫瘍のサイズ又は体積を減少させ、又は腫瘍転移を予防又は減少させるのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は、イメージング（例えば、ＭＲＩ）を使用して、患者の生存時間や腫瘍のサイズ、増殖、又は転移をモニタリングすることができる。患者が、未治療の対象と比較して、又は投与前の対象における腫瘍増殖、サイズ、又は転移と比較して、腫瘍増殖の減少、腫瘍のサイズ又は体積の減少、腫瘍転移の減少、又は生存期間の増加を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１７－ＡＬＫ２抗体の投与によるＰＣＯの治療又は予防
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、ＰＣＯの発症を予防し、ＰＣＯを軽減し、視力を改善し（例えば、ぼやけた又は曇った視力を軽減し）、光感受性又はまぶしさを軽減し、線維症（例えば、後嚢上又はその付近、例えば、移植された水晶体付近の線維症）を軽減又は予防し、水晶体線維の分化を軽減又は予防し、水晶体上皮細胞の増殖の減少させ又は阻害し、又は眼の炎症を軽減又は予防するように、ＰＣＯを有するか又は発症するリスクのあるヒト患者などの対象（例えば、ＰＣＯを有する患者又は白内障手術を受けたか、又は間もなく白内障手術を受けることになっている患者、例えば、６ヵ月、５ヵ月、４ヵ月、３ヵ月、２ヵ月、１ヵ月、２週、１週間、又はそれよりも近いうちに白内障手術を受ける予定である患者）を治療することができる。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、ＰＣＯを治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）又は眼への投与（例えば、眼内注射又は局所投与）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、ＰＣＯの発症を予防し、ＰＣＯを軽減し、視力を改善し（例えば、ぼやけた又は曇った視力を軽減し）、光感受性又はまぶしさを軽減し、線維症（例えば、後嚢上又はその付近の、例えば、移植された水晶体付近の線維症）を軽減又は予防し、水晶体線維の分化を低減又は予防し、水晶体上皮細胞増殖を低減又は阻害し、又は眼の炎症を軽減又は予防するのに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は患者の視力、光感受性やまぶしさ、後嚢の不透明度、又は眼の炎症をモニタリングすることができる。未治療の対象と比較して、又は治療前の患者の測定値と比較して、組成物の投与後に患者がＰＣＯを発症しないか、視力の改善、光感受性又はまぶしさの低下、線維症の軽減、又は眼の炎症の軽減を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
実施例１８－ＡＬＫ２抗体の投与による心肥大及び／又は心臓線維症の治療
本明細書に開示される方法によれば、当技術分野の医師は、心肥大又は心臓線維症の発症を遅らせるか又は予防し、心臓線維症を逆転させ、心臓瘢痕形成を減少させ又は阻害し、心臓再生を増加又は誘発し、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状の改善する（例えば、運動能力の向上、血液駆出量の増加、左心室拡張末期圧の低下、肺毛細血管楔入圧の低下、心拍出量の増加、心係数の増加、肺動脈圧の低下、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の減少、左心室及び右心室の壁応力の減少、壁張力及び／又は壁の厚さの減少、心筋収縮性の増加、心筋細胞の細胞外マトリックス沈着の減少、又は線維化の減少）ように、心肥大及び／又は心臓線維症を有するヒト患者などの対象を治療することができる。対象を治療するために、当技術分野の医師は、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物を対象に投与することができる。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）を含む組成物は、心肥大及び／又は心臓線維症を治療するために、例えば、非経口注射（例えば、静脈内注射）によって対象に投与され得る。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、治療有効量、例えば、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｍｇ／ｋｇ）で投与される。いくつかの実施形態において、ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、隔月、月に１回、２週間に１回、又は少なくとも週に１回以上（例えば、週に１、２、３、４、５、６、又は週７回又はそれ以上）投与される。ＡＬＫ２抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＬＫ２結合フラグメント）は、心肥大又は心臓線維症の発症を遅らせ又は予防し、心臓線維症を逆転させ、心臓瘢痕形成を低減又は阻害し、心臓の再生を増加又は誘導し、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状を改善する（例えば、運動能力の向上、血液駆出量の増加、左心室拡張末期圧の低下、肺毛細血管楔入圧の低下、心拍出量の増加、心係数の増加、肺動脈圧の低下、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の減少、左心室及び右心室の壁応力の減少、壁張力及び／又は壁の厚さの減少、心筋収縮性の増加、心筋細胞の細胞外マトリックス沈着の減少、又は線維化の減少）のに十分な量で投与される。
組成物を患者に投与した後、当技術分野の実践者は、治療に応答した患者の改善を様々な方法でモニタリングすることができる。例えば、医師は、心肥大又は心臓線維症の患者の症状（例えば、運動能力、血液駆出量、左心室拡張末期圧、肺毛細血管楔入圧、心拍出量、心係数、肺動脈圧、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法、左心室及び右心室の壁応力、壁張力及び／又は壁の厚さ、又は心筋収縮性）を、ストレステスト、心エコー検査、ＭＲＩ、又は他のアプローチを使用してモニタリングすることができる。組成物の投与前の試験結果と比較して、又は未治療の対象と比較して、組成物の投与後に患者が心臓線維症の減少、心臓再生の増加、又は心肥大又は心臓線維症の１つ以上の症状の改善（例えば、運動能力の向上、血液駆出量の増加、左心室拡張末期圧の低下、肺毛細血管楔入圧の低下、心拍出量の増加、心係数の増加、肺動脈圧の低下、左心室の収縮末期及び拡張期の寸法の減少、左心室及び右心室の壁応力の減少、壁張力及び／又は壁の厚さの減少、心筋収縮性の増加、心筋細胞の細胞外マトリックス沈着の減少、又は線維化の減少）を示すという所見は、患者が治療に好ましく反応していることを示す。必要に応じて、その後の投与量を決定し投与することができる。
他の実施形態
本発明をその特定の実施形態に関して説明してきたが、それはさらなる修正が可能であり、本願は、概して、本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、又は適合を包含することを意図していることが理解されよう。本開示からのそのような逸脱を含むことは、本発明が関係する当技術分野内の既知の又は慣習的な慣行の範囲内であり、前述の本質的な特徴に適用することができる。
すべての刊行物、特許、及び特許出願は、個々の刊行物、特許、又は特許出願の全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合と同程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (103)

  1. 単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメントであって：（１）軽鎖可変ドメインであって、ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）及びＳＧＤＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号２、ここで、Ｘ１はＳ又はＮであり、Ｘ２はＩ又はＬであり、Ｘ３はＰ、Ｇ、又はＲであり、Ｘ４はＳ、Ｔ、又はＫであり、Ｘ５はＦ、Ｋ、又はＹであり、Ｘ６はＦ、Ｙ、又はＳであり、Ｘ７はＡ又はＶであり、Ｘ８はＳ、Ｙ、又はＨである）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１；アミノ酸配列Ｘ１Ｘ２ＩＹＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＲＰＳ（配列番号３、ここで、Ｘ１はＶ又はＬであり、Ｘ２はＶ又はＬであり、Ｘ３はＫ、Ｒ、Ｇ又はＹであり、Ｘ４はＮ又はＤであり、Ｘ５はＮ又はＳであり、Ｘ６はＨ、Ｎ、Ｄ、又はＫである）を含む軽鎖ＣＤＲ２；及びＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）、ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）、ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）、ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）、及びＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（２）アミノ酸配列ＧＸ１ＴＦＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（配列番号９、ここで、Ｘ１はＧ又はＦであり、Ｘ２はＳ又はＮであり、Ｘ３はＹ、Ｈ、Ｓ、又はＡであり、Ｘ４はＧ又はＡであり、Ｘ５はＶ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ６はＳ又はＨである）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＷＭＧＸ１ＩＩＰＸ２ＦＧＸ３ＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１０、ここで、Ｘ１はＧ又はＲであり、Ｘ２はＨ又はＤであり、Ｘ３はＩ又はＴである）、ＷＶＧＲＩＫＳＫＸ１ＤＸ２Ｘ３ＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号１１、ここで、Ｘ１はＡ又はＲであり、Ｘ２はＳ又はＧであり、Ｘ３はＧ又はＹである）、及びＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）、ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）、ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）、ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）、及びＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む、単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  2. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  3. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  4. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  5. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  6. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  7. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  8. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  9. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  10. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  11. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  12. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  13. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  14. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  15. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  16. 軽鎖ＣＤＲ３がＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  17. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  18. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  19. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  20. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  21. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  22. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  23. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  24. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  25. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  26. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  27. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  28. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  29. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  30. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  31. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  32. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＸ１ＤＸ２Ｘ３ＲＰＳ（配列番号２２、ここで、Ｘ１はＲ、Ｇ、又はＹであり、Ｘ２はＳ又はＮであり、Ｘ３はＮ、Ｄ、又はＫである）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  33. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＸ１ＲＰＳ（配列番号２３、ここで、Ｘ１はＮ又はＫである）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  34. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＸ１ＡＭＸ２（配列番号２９、ここで、Ｘ１はＨ又はＡであり、Ｘ２はＳ又はＨである）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  35. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＸ１ＳＸ２ＡＭＳ（配列番号３０、ここで、Ｘ１はＳ又はＮであり、Ｘ２はＨ又はＳである）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  36. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＳ（配列番号１）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＬＩＹＫＮＮＨＲＰＳ（配列番号２４）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＳＷＤＨＳＤＲＦＹＶ（配列番号４）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  37. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＧＶＳ（配列番号３１）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＧＩＩＰＨＦＧＩＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３６）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＩＧＳＬＤＩ（配列番号１３）を含む、請求項１又は３６に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  38. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＩＰＳＦＦＡＳ（配列番号１８）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号２５）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＶＴＡＰＷＫＳＩＷ（配列番号５）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  39. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＨＡＭＳ（配列番号３２）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＡＤＳＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３７）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＶＡＦＡＹ（配列番号１４）を含む、請求項１又は３８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  40. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＴＫＹＡＹ（配列番号１９）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＧＤＳＤＲＰＳ（配列番号２６）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＹＳＡＤＡＱＱＭＫＡ（配列番号６）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  41. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＮＳＳＡＭＳ（配列番号３３）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＧＲＩＫＳＫＲＤＧＹＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧ（配列番号３８）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＧＧＬＫＦＤＹ（配列番号１５）を含む、請求項１又は４０に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  42. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＬＲＫＹＳＡＨ（配列番号２０）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＤＮＫＲＰＳ（配列番号２７）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＶＹＡＳＶＨＲＭ（配列番号７）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  43. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＳＹＡＩＨ（配列番号３４）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＲＩＩＰＤＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３９）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＧＰＴＱＡＩＨＹＦＡＹ（配列番号１６）を含む、請求項１又は４２に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  44. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＳＬＧＳＫＳＶＨ（配列番号２１）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＫＲＰＳ（配列番号２８）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＴＹＤＷＳＨＦＧＷ（配列番号８）を含む、請求項１に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  45. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＡＡＭＨ（配列番号３５）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＡＧＦＩＬＧＳＬＧＶＡＷＭＤＶ（配列番号１７）を含む、請求項１又は４４に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  46. 前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号６７の配列のアミノ酸１～３３１位、配列番号６８の配列のアミノ酸１～３３２位、配列番号６９の配列のアミノ酸１～３３３位、配列番号７０の配列のアミノ酸１～３３２位、又は配列番号７１の配列のアミノ酸１～３３７位と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１に記載の単離された抗体。
  47. 前記抗体が、配列番号６７の配列のアミノ酸１～４３３位、配列番号６８の配列のアミノ酸１～４３４位、配列番号６９の配列のアミノ酸１～４３５位、配列番号７０の配列のアミノ酸１～４３４位、又は配列番号７１の配列のアミノ酸１～４３９位を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
  48. 単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメントであって：（１）軽鎖可変ドメインであって、ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）、ＳＧＤＸ１Ｘ２ＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｈ（配列番号６４、ここで、Ｘ１はＮ又はＡであり、Ｘ２はＩ又はＬであり、Ｘ３はＫ又はＹであり、Ｘ４はＫ又はＹであり、Ｘ５はＹ又はＩであり、Ｘ６はＶ又はＡである）、及びＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１；アミノ酸配列ＬＸ１ＩＹＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｓ（配列番号６５、ここで、Ｘ１はＶ又はＬであり、Ｘ２はＤ、Ｒ、又はＹであり、Ｘ３はＡ、Ｄ、又はＮであり、Ｘ４はＳ又はＮであり、Ｘ５はＫ又はＮであり、Ｘ６はＬ又はＲであり、Ｘ７はＱ又はＰである）を含むか又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；及びＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）、ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）、ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）、及びＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン；及び（２）アミノ酸配列ＧＸ１ＴＦＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７（配列番号６６、ここで、Ｘ１はＦ又はＧであり、Ｘ２はＧ又はＳであり、Ｘ３はＲ、Ｓ、Ｄ、又はＴであり、Ｘ４はＦ、Ｓ、Ｙ、又はＨであり、Ｘ５はＶ又はＡであり、Ｘ６はＭ又はＩであり、Ｘ７はＨ又はＳである）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＷＶＳＸ１ＩＸ２ＹＸ３Ｘ４ＳＸ５ＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６、ここで、Ｘ１はＶ又はＳであり、Ｘ２はＧ、Ｈ、又はＦであり、Ｘ３はＳ又はＤであり、Ｘ４はＧ又はＳであり、Ｘ５はＳ、Ｅ、又はＮである）、及びＷＶＳＸ１ＩＸ２ＹＸ３Ｘ４ＳＸ５ＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６、ここで、Ｘ１はＶ又はＳであり、Ｘ２はＧ、Ｈ、又はＦであり、Ｘ３はＳ又はＤであり、Ｘ４はＧ又はＳであり、Ｘ５はＳ、Ｅ、又はＮである）、及びＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；及びＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）、ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）、ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）、及びＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  49. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  50. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  51. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  52. 軽鎖ＣＤＲ１が配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  53. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）を含む、請求項４８～５２のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  54. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）を含む、請求項４８～５２のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  55. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）を含む、請求項４８～５２のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  56. 軽鎖ＣＤＲ２が配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）を含む、請求項４８～５２のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  57. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）を含む、請求項４８～５６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  58. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）を含む、請求項４８～５６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  59. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）を含む、請求項４８～５６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  60. 軽鎖ＣＤＲ３が配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）を含む、請求項４８～５６のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  61. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  62. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  63. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  64. 重鎖ＣＤＲ１が配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）を含む、請求項４８～６０のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  65. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）を含む、請求項４８～６４のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  66. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）を含む、請求項４８～６４のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  67. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）を含む、請求項４８～６４のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  68. 重鎖ＣＤＲ２が配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）を含む、請求項４８～６４のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  69. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）を含む、請求項４８～６８のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  70. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）を含む、請求項４８～６８のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  71. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）を含む、請求項４８～６８のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  72. 重鎖ＣＤＲ３が配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）を含む、請求項４８～６８のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  73. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＱＧＩＳＧＮＷＬＴ（配列番号４０）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＡＳＮＬＱＳ（配列番号４１）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＨＱＳＹＲＧＰＭ（配列番号４２）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  74. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＧＲＦＶＭＨ（配列番号４３）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＧＹＳＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＰＧＹＹＹＰＳＧＹＹＲＧＰＧＹＷＭＤＶ（配列番号４５）を含む、請求項４８又は７３に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  75. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＮＩＲＫＫＹＶＨ（配列番号４６）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号４７）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＡＧＲＤＮＹ（配列番号４８）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  76. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＳＡＭＨ（配列番号４９）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＶＩＨＹＤＳＳＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＲＹＦＦＤＶ（配列番号５１）を含む、請求項４８又は７５に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  77. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＤＡＬＲＹＹＩＡＨ（配列番号５２）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＶＩＹＹＮＮＮＲＰＳ（配列番号５３）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＳＹＧＰＧＳＶ（配列番号５４）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  78. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＡＭＨ（配列番号５５）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＶＳＳＩＦＹＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＰＫＳＹＡＳＧＰＦＡＹ（配列番号５７）を含む、請求項４８又は７７に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  79. 軽鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＱＮＹＶＳ（配列番号５８）を含み、軽鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＬＬＩＹＤＮＳＫＲＰＳ（配列番号５９）を含み、軽鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＳＷＤＬＬＳＫＳＲ（配列番号６０）を含む、請求項４８に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  80. 重鎖ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＧＧＴＦＳＴＨＡＩＳ（配列番号６１）を含み、重鎖ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＷＭＧＬＩＱＰＲＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＲ（配列番号６２）を含み、重鎖ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＤＹＹＧＧＭＡＹ（配列番号６３）を含む、請求項４８又は７９に記載の単離された抗体、又はそのＡＬＫ２結合フラグメント。
  81. 前記抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を除いて、配列番号７２の配列のアミノ酸１～３４４位、配列番号７３の配列のアミノ酸１～３２７位、配列番号７４の配列のアミノ酸１～３３１位、又は配列番号７５の配列のアミノ酸１～３３２位と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項４８に記載の単離された抗体。
  82. 前記抗体が配列番号７２の配列のアミノ酸１～４４６位、配列番号７３の配列のアミノ酸１～４２９位、配列番号７４の配列のアミノ酸１～４３３位、又は配列番号７５の配列のアミノ酸１～４３４位を含む、請求項４８に記載の単離された抗体。
  83. 請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
  84. 請求項８３に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
  85. 請求項８４に記載の発現ベクターを含む細胞。
  86. 請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、又は請求項８４に記載の発現ベクターと、１つ以上の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物。
  87. 前記抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメントが治療有効量にある、請求項８６に記載の医薬組成物。
  88. 治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象の骨塩密度を増加させる方法。
  89. 治療有効量の請求項１～請求項８２に記載のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象の骨吸収を低減し、骨形成を増加させ、骨強度を高め、又は骨折のリスクを低減する方法。
  90. 治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、骨疾患を発症するリスクのある対象を治療する方法。
  91. 骨疾患が、原発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症、骨減少症、大理石骨病、骨折、骨がん又はがん転移関連の骨量減少、パジェット病、腎性骨異栄養症、治療関連の骨量減少、食事関連の骨量減少、肥満の治療に関連する骨量減少、低重力関連の骨量減少、又は不動に関連する骨量減少である、請求項９０に記載の方法。
  92. 治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象の赤血球レベルを上昇させ、ヘモグロビンレベルを上昇させ、赤血球数を増加させ、赤血球形成を促進し又は増加させ、ヘプシジンレベルを減少させる方法。
  93. 貧血を有するか又は発症するリスクのある対象を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
  94. 前記貧血が、がん、がん治療、慢性腎疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ）、急性腎疾患又は不全、慢性腎疾患（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）又は不全、骨髄異形成症候群、サラセミア、栄養不足、投薬に対する有害反応、炎症性又は自己免疫性疾患、脾臓肥大、ポルフィリア、血管炎、溶血、骨髄欠損、骨髄移植、急性肝疾患、慢性肝疾患、急性出血、慢性出血、感染症、ヘモグロビン症、薬物使用、アルコール乱用、チャーグ・ストラウス症候群、フェルティ症候群、移植片対宿主病、造血幹細胞移植、骨髄線維症、汎血球減少症、純赤血球形成不全、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、シュバッハマン症候群、高齢、輸血の禁忌、手術、外傷、創傷、潰瘍、尿路出血、消化管出血、頻繁な献血、又は重い月経出血に関連する、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記貧血が再生不良性貧血、鉄欠乏性貧血、ビタミン欠乏性貧血、炎症性貧血、ＩＲＩＤＡ、骨髄性疾患に関連する貧血、溶血性貧血、鎌状赤血球性貧血、小球性貧血、低色素性貧血、鉄芽球性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、ファンコニ貧血、又は芽球過剰を伴う難治性貧血である、請求項９３又は９４に記載の方法。
  96. 前記貧血がＩＲＩＤＡである請求項９５に記載の方法。
  97. 前記貧血が炎症性貧血である、請求項９５に記載の方法。
  98. 前記貧血が上昇したヘプシジンレベルに関連している、請求項９３～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における異所性骨化を予防又は軽減する方法。
  100. 前記対象が進行性骨化性線維異形成症（ＦＯＰ）を有する、請求項９９に記載の方法。
  101. ＦＯＰを有する対象を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
  102. ＦＯＰが遺伝性ＦＯＰ又は散発性ＦＯＰである、請求項１００又は１０１に記載の方法。
  103. シェーグレン症候群、多発性骨軟骨腫、びまん性内在性橋グリオーマ、ＰＣＯ、心肥大、又は心臓線維症を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～８２のいずれか一項に記載の抗体又はそのＡＬＫ２結合フラグメント、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載の発現ベクター、又は請求項８６又は請求項８７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法。
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