JP2022502053A - 固体担体上のクロストリジウムによりアルコールを生産する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の説明の第1の対象は、水力学の希釈率が活性バイオマスの希釈率とは異なっている反応器におけるIBEA(Isopropanol-Butanol-Ethanol-Acetone)タイプの発酵のための方法を提供することにある。この目標を達成するために、吸着によって細菌バイオマスをバイオフィルムの形態で発酵反応器内に少なくとも部分的に定着させることができ、体積ベースの生産性を改善する方法が以下に記載される。
− 等価球の径が0.1〜5mm、好ましくは0.25mm〜1.1mm、好ましくは0.55〜0.99mmである体積空洞(すなわち細孔または小室)、および
− 10〜90g/L、好ましくは10〜80g/L、好ましくは15〜45g/L、例えば20〜45g/Lである、空気中で測定される嵩密度(すなわち、単位体積当たりの見かけ質量)。
図1は、本発明の説明の実施形態によるアルコールを生産する方法の模式図である。
第1の局面による方法および第2の局面による反応器の実施形態が今ここで詳細に記載されることになる。以下の詳細な説明において、多くの具体的な詳細が提示されて、本方法のより綿密な含蓄が提供される。しかしながら、本方法は、これらの具体的な詳細なく行われ得ることが当業者にとって明白であるだろう。他の場合において、周知の特徴は、本説明を不必要にわかりにくくすることを回避するために詳細には記載されない。
1種または複数種の実施形態によると、糖の流体は、リグノセルロースから得られたC5および/またはC6の糖、および/または糖生産植物から得られた糖(例えばグルコース、フルクトースおよびスクロース)、および/またはでんぷん性の植物から得られた糖(例えばデキストリン、マルトースおよび他のオリゴマー、さらにはでんぷん)の水溶液を含む。1種または複数種の実施形態によると、C5および/またはC6の糖の水溶液は再生可能資源の処理を起源とする。1種または複数種の実施形態によると、再生可能資源は、リグノセルロース性のバイオマスタイプのものであり、とりわけ、木質の基材(例えば針葉樹の植物および落葉植物)、農業副産物(例えばわら)またはリグノセルロースの廃棄物を生じさせる産業(農業食品および紙の産業)からの副産物を含んでよい。再生可能資源は、糖生産植物、例えばテンサイ、サトウキビ、またはでんぷん性植物、例えばトウモロコシおよびコムギを起源としてもよい。C5および/またはC6の糖の水溶液は、種々の再生可能資源の混合物を起源としてもよい。
細菌のバイオマスは、主として、バイオフィルムの形態で固体担体上に吸着される。好ましくは、細菌は、種クロストリジウム・ベイジェリンキおよび/またはクロストリジウム・アセトブチリカムに属する種である。本方法において用いられる細菌は、遺伝的に改変されてもされてなくてもよくかつイソプロパノールを自然に生じさせる種および/またはアセトンを自然に生じさせかつイソプロパノールを生じさせるように遺伝的に改変されたクロストリジウム種であってよい。
固体担体は、ポリウレタン発泡材を含む。ポリウレタン発泡材が特に有利であるのは、それがIBEAタイプの混合物の生産へのアクセスを可能にするだけではなく、細菌バイオマスの固定によって連続タイプの生産へのアクセスも可能にするからである。具体的には、本出願人は、ポリウレタン発泡材は、十分に実質的な方法で(すなわち、細胞の洗い落としを引き起こす希釈率を超えて)クロストリジウム属の細菌を定着させることができ、これにより、IBEAタイプの混合物を連続的に生じさせることが可能となることを立証した。さらに、ポリウレタン発泡材は、反応器中の浸漬による固定に適している。
− 体積空洞(すなわち細孔または小室);その等価球の径は0.1〜5mm、好ましくは0.25mm〜1.1mm、好ましくは0.55〜0.99mmである:および/または
− 空気中で測定される嵩密度(すなわち、単位体積当たりの見かけ質量):10〜90g/L、好ましくは10〜80g/L、好ましくは15〜45g/L、例えば20〜45g/Lまたは25〜45g/L。
体積空洞の等価球の径は、とりわけ、サンプル(例えば7mm×7mm×15mm)のX線マイクロスキャナ(例えばHR 70kV 200 microA Point 焦点媒体チューブ(focal medium tube):Varian pixel検出器:6ミクロン;捕捉時間:2時間)による分析および発泡材の典型的な体積の復元(例えば復元される体積5mm×5mm×5mmであり、ボクセルサイズは6ミクロンである)(球状の小室を仮定する)によって得られてよい。
− 画像を二値化する(黒=小室および白=壁);
− Avizo上のxy集水地域法(catchment basin method)によって「小室」を2D区画化する;
− Avizo上の3D集水地域法によって小室を3D区画化する;
− 縁部の小室(不完全な小室)を除去する;
− 復元された小室の体積を測定する;
− 小室の径(同一体積の等価球の径)を推定する;
− 比較のために小室のサイズ分配を行う。
図1は、リグノセルロース性のバイオマスタイプの基質からアルコール混合物を生産するためのスキームを示す。
1種または複数種の実施形態によると、固体担体は、部分的にまたは全体的に浸漬され、とりわけ、バイオフィルムの形成が増加させられかつ性能が改善される。
図6において指し示されるように、本アルコール生産方法は、「フィニッシャー」として知られている仕上げ反応器(12)を実施してよい(任意)。1種または複数種の実施形態によると、発酵反応器(2)からライン(3)を介して抜き出された発酵マストは仕上げ反応器(12)に導入される。仕上げ反応器(12)は発酵反応器(2)から抜き出された発酵マストと相対してIBEAに豊富な第2の発酵マストを生じさせるのに適したものである。次いで、第2の発酵マストは、仕上げ反応器(12)から抜き出され、ライン(6)を介して排出され、発酵マストから興味の化合物を分離・抽出するための分離ユニット(4)(任意)に導入され、前記化合物は、ライン(5)を介して取り出される。仕上げ反応器(12)は、好ましくはPU発泡材を有しないものである。フィニッシャーは、好ましくは均一であり、延長した滞留時間を可能にすることによって、クロストリジウム種のIBEA力価ポテンシャルを最適に利用し、かつ、種の必要性に一致した量の炭素ベースの基質を加えるという目的を有している。仕上げ反応器(12)により、とりわけ、サッカライドの消耗を保証することが可能となる。
(参照例:懸濁液中の細胞の連続的な試験)
懸濁液中の細胞による連続的な試験を実験的に行う。全体積5Lを有するバイオリアクタに発酵培地1.8Lを充填する。当初のグルコースを60g/Lに設定し、接種は、0.2Lである。すなわち、接種率は、試験の開始から(厳密な)嫌気条件を保証するという目的のために1時間にわたって窒素によりパージした後に、最大の増殖率にある細胞を有する発酵培地の全体積に相対して10体積%である。予備的なバッチ工程(4〜5時間)の間窒素によるパージを維持する。採用された微生物は、クロストリジウム・ベイジェリンキDSM 6423である。温度および機械的撹拌を、試験の開始から、それぞれ、36℃および60rpmに設定する;圧力は、実質的に大気圧+バイオリアクタの水頭である。2工程で試験を行う:
− 第1のバッチ工程(継続期間4〜8時間);遅延時間および対数増殖の開始に対応する(発酵ガスの発生と同時に起こる);および
− 第2の連続様式の工程;異なる希釈率を課す。
バッチ様式での方法を実験的に行う:異なる物理的および構造的な特徴を有するポリウレタン発泡材タイプの固体担体(発泡材1、発泡材2)による2回の発酵、およびコントロールの発酵(懸濁液中の細胞)。これらの2種の発泡材の主要な特徴を下記の表1に提示する。
本方法を本発明の説明の実施形態により、異なる物理的および構造的な特徴を有しているポリウレタン発泡材タイプの固体担体(発泡材1、発泡材2)上の固定による連続的な様式で2回の発酵を用いて実験的に行う。これらの2種の発泡材の主要な特徴を表1に提示する。解放された様式で、3mm×5mm×5mmのサイズの立方体により充填を行う。
− 第1のバッチ工程(継続期間:4〜5時間);「遅延時間(lag time)」および対数増殖の開始(発酵ガスの発生と同時に起こる)に対応する;および
− 第2の連続様式工程;異なる希釈率を課す。
本方法を本発明の説明の実施形態により、ポリウレタン発酵材タイプの固体担体上の固定化による連続様式で2回の発酵を用いて実験的に行う。解放様式で、10mm×10mm×7mmのサイズの立方体による充填を行う。発泡材は、約1mmのマクロ細孔サイズを有している。
− 第1のバッチ工程(継続期間7時間);「遅延時間」および対数増殖の開始(発酵ガスの発生と同時に起こる)に対応する;および
− 第2の連続様式の工程;異なる希釈率を課す。
ポリウレタン発泡材タイプの担体上に固定された細胞により連続的な様式の試験を実験的に行う。全体積5Lを有するバイオリアクタに発酵培地2Lを充填する。初期のグルコースを60g/Lに設定し、接種は0.2Lである。すなわち、接種率は、試験の開始から(厳密な)嫌気条件を保証するという目的のために1時間にわたって窒素によりパージされた後で、最大限の増殖率にある細胞を有する発酵培地の全体積に相対して10体積%である。予備的なバッチ工程の間(7時間)、窒素によりパージすることを維持する。採用された微生物は、クロストリジウム・ベイジェリンキDSM 6423である。温度を34℃に設定する。機械撹拌は60〜170rpmの範囲にわたる。圧力は実質的には大気圧+バイオリアクタの水頭である。
− 第1のバッチ工程(継続期間7時間);「遅延時間」および対数増殖の開始に対応する(発酵ガスの発生と同時に起こる);および
− 第2の連続様式工程;異なる希釈率を課す。
Claims (15)
- アルコールを生産するための方法であって、糖の流体を発酵反応器(2)に導入して糖の流体に相対してイソプロパノール、ブタノール、エタノールおよびアセトンに豊富な発酵マストを生じさせ、発酵反応器(2)は、クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスを含んでおり、該バイオマスは、ポリウレタン発泡材を含む固体担体(9)上に担持されている、方法。
- ポリウレタン発泡材は、等価球の径が0.1〜5mmである体積空洞;および/または空気中で測定される嵩密度10〜90g/Lを有する、請求項1に記載の方法。
- 糖の流体を発酵反応器(2)に連続的に導入する、請求項1または2に記載の方法。
- 発酵反応器(2)の体積に相対した糖の流体の希釈率(D);0.04h−1〜1h−1で発酵を行う、請求項3に記載の方法。
- クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスは、種クロストリジウム・アセトブチリカム、クロストリジウム・ベイジェリンキ、クロストリジウム・サッカロブチリカム、クロストリジウム・チロブチリカム、クロストリジウム・サッカロペルブチルアセトニカム、クロストリジウム・ブチリカムから選択される種に属する細菌を含む、請求項1〜4のいずれか1つに記載の方法。
- クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスは、クロストリジウム・ベイジェリンキの種に属しイソプロパノールを天然に生じさせる遺伝的に改変された細菌および/またはイソプロパノールの生産のために遺伝的に改変されたクロストリジウム・アセトブチリカムを含む、請求項1〜5のいずれか1つに記載の方法。
- クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスを、補助タンク(7)中の固体担体(9)上に固定し、クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスを担持している固体担体(9)を発酵反応器(2)に導入する、請求項1〜6のいずれか1つに記載の方法。
- クロストリジウム属に属する種によって生じたバイオマスを固体担体上にバイオフィルムの形態で固定する、請求項1〜7のいずれか1つに記載の方法。
- 固体担体(9)を発酵反応器(2)に1個または複数個のブロックの形態および/または複数個のポリウレタン発泡材の立方体、平行六面体または任意の他の三次元形態を含んでいるネットまたは格子コンテナ(10)の形態で導入する、請求項1〜8のいずれか1つに記載の方法。
- 固体担体(9)は、実質的に、ストレートの円形シリンダの形態にあり、発酵反応器(2)の内径未満または実質的にそれに等しい径を有している、請求項1〜9のいずれか1つに記載の方法。
- 固体担体(9)は、流動床または固定床を発酵反応器(2)内に形成する、請求項1〜10のいずれか1つに記載の方法。
- 固体担体(9)を発酵反応器(2)内に置いて、発酵反応器(2)の反応培地の表面と同一の高さにする、請求項1〜11のいずれか1つに記載の方法。
- 発酵マストの生産を嫌気発酵によって行う、請求項1〜12のいずれか1つに記載の方法。
- 28℃〜40℃の温度、および/または約0.1MPa〜0.15MPaの圧力で、かつ/または最低250時間の期間にわたって発酵を行う、請求項1〜13のいずれか1つに記載の方法。
- イソプロパノール、ブタノール、エタノールおよびアセトンを生産するのに適しているクロストリジウム属に属する種によって生じるバイオマスをポリウレタン発泡材を含んでいる固体担体(9)上に担持されて含んでいる発酵反応器(2)。
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