JP2022031692A - Lipocationic dendrimers and uses thereof - Google Patents

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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide dendrimer compounds that may be used to treat diseases or disorders with a therapeutic nucleic acid.
SOLUTION: The present invention discloses a dendrimer of the following formula: core-(repeating unit)n-terminating group (I), where the core is represented by the following formula (II) or the like; the repeating unit comprises a degradable diacyl or a linker; and the terminating group is represented by the following formula (VIII). In the formula (II), X1 is amino, alkylamino or the like; R1 is amino, hydroxy, mercapto or the like; and a is an integer of 1-6. In the formula (VIII), Y4 is alkanediyl or the like; and R10 is hydrogen, carboxy, hydroxy or the like.
SELECTED DRAWING: Figure 1A
COPYRIGHT: (C)2022,JPO&INPIT

Description

本出願は、2015年9月14日付で出願された米国仮出願第62/218,412号の優先権の恩典を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。 This application claims the benefit of the priority of US Provisional Application No. 62 / 218,412 filed on September 14, 2015, the entire contents of which are incorporated herein by reference in its entirety.

1. 発明の分野
本発明は全体として、デンドリマーの分野に関する。特に、本発明は、核酸を含むデンドリマーナノ粒子組成物に関する。より詳細には、本発明は、核酸の送達のためのデンドリマーナノ粒子組成物に関する。より詳細には、本発明は、薬物および他の賦形剤の送達のためのデンドリマーナノ粒子組成物に関する。 1. Field of Invention The invention as a whole relates to the field of dendrimers. In particular, the present invention relates to dendrimer nanoparticle compositions containing nucleic acids. More specifically, the present invention relates to dendrimer nanoparticle compositions for delivery of nucleic acids. More specifically, the present invention relates to dendrimer nanoparticle compositions for the delivery of drugs and other excipients.

2. 関連技術の説明
RNAiもしくは他の核酸剤の発見およびそれらの治療可能性の認識以来、有効な送達担体のための継続的な探索が行われている(Whitehead et al., 2009; Kanasty et al., 2013; Akinc et al., 2008; Davis et al., 2010; Love et al., 2010; Siegwart et al., 2011; Jayaraman et al., 2012)。健常な肝臓への低分子RNAの送達効力に関して進歩が遂げられたが、腫瘍に対する高い効力と低い正常細胞肝毒性の臨床的に必要とされる組み合わせは、現存する送達媒体によって現在満たされていない。残念ながら、肝細胞がん(HCC)処置のための低分子薬物の全5つの第III相ヒト臨床試験は、消耗性の末期肝機能障害が薬物毒性を増幅させるため、過去4年内に部分的に失敗した(Roberts, L.R., 2008; Scudellari, M., 2014)。マイクロRNA (miRNA)は、細胞分化、増殖、および生存に関与する複数の経路を同時に標的とすることにより腫瘍抑制因子として機能することができるため有望な代替戦略となるが、これらの治療剤は担体が有効であることを要する(Ventura and Jacks, 2009; Kasinski and Slack, 2011; Ling et al., 2013; Cheng et al., 2015)。薬物担体の効力と毒性とのバランスは、特に担体自身の毒性が低分子RNA療法の治療有効性を弱めうる肝臓がんとの関連で、有用な基準である。 2. Explanation of related technologies
Since the discovery of RNAi or other nucleic acid agents and the recognition of their therapeutic potential, ongoing searches for effective delivery carriers have been underway (Whitehead et al., 2009; Kanasty et al., 2013; Akinc). et al., 2008; Davis et al., 2010; Love et al., 2010; Siegwart et al., 2011; Jayaraman et al., 2012). Advances have been made in delivering small RNAs to healthy liver, but the clinically required combination of high potency and low normal cell hepatotoxicity is not currently met by existing delivery vehicles. .. Unfortunately, all five Phase III human clinical trials of small molecule drugs for the treatment of hepatocellular carcinoma (HCC) have been partially conducted within the last four years as debilitating end-stage liver dysfunction amplifies drug toxicity. Failed (Roberts, LR, 2008; Scudellari, M., 2014). MicroRNAs (miRNAs) are promising alternative strategies because they can act as tumor suppressors by simultaneously targeting multiple pathways involved in cell differentiation, proliferation, and survival. The carrier must be effective (Ventura and Jacks, 2009; Kasinski and Slack, 2011; Ling et al., 2013; Cheng et al., 2015). The balance between efficacy and toxicity of a drug carrier is a useful criterion, especially in the context of liver cancer, where the toxicity of the carrier itself can undermine the therapeutic efficacy of small RNA therapy.

この低い毒性と高い効力のバランスを達成するために、送達担体の構造多様性および分子サイズを拡大することによる化学構造の影響は、治療的に有効なバランスを達成するのに有用である。デンドリマーは、中心コアから放射状に発する複数の完全に分枝した単量体から構成される単分散巨大分子である。デンドリマーはそれゆえ、低分子と同じ高度の分子均一性および多分散重合体としての化学的調整のための広い理論的空間を有する(Bosman et al., 1999; Frechet and Tomalia, 2002; Gillies and Frechet, 2002; Grayson and Frechet, 2001)。これらの固有の特徴は、さまざまな生物医学的用途のための特異的性質(Murat and Grest, 1996; Percec et al., 2010; Duncan and Izzo, 2005)をデンドリマーが有することを可能にする(Stiriba et al., 2002; Lee et al., 2005; Wu et al., 2015)。遺伝子送達において、大部分の研究では、さらなる化学修飾のために限られた数の市販のデンドリマーを用いてきた。(Kang et al., 2005; Taratula et al., 2009; Khan et al., 2014)。デンドリマー用途の拡大はそれゆえ、サイズ、化学的性質、形態、および最終的には、デンドリマーの物理的特性を化学合成によって容易に調整する能力に依る。かくして、核酸および他の薬物の担体として作用できる新しいデンドリマーの開発は臨床的に有用である。 To achieve this balance of low toxicity and high potency, the structural diversity of the delivery carrier and the effects of chemical structure by expanding the molecular size are useful in achieving a therapeutically effective balance. Dendrimers are monodisperse macromolecules composed of multiple fully branched monomers radiating from the central core. Dendrimers therefore have the same high degree of molecular uniformity as small molecules and a large theoretical space for chemical preparation as polydisperse polymers (Bosman et al., 1999; Frechet and Tomalia, 2002; Gillies and Frechet). , 2002; Grayson and Frechet, 2001). These unique features allow dendrimers to possess specific properties for a variety of biomedical applications (Murat and Grest, 1996; Percec et al., 2010; Duncan and Izzo, 2005). et al., 2002; Lee et al., 2005; Wu et al., 2015). In gene delivery, most studies have used a limited number of commercially available dendrimers for further chemical modification. (Kang et al., 2005; Taratula et al., 2009; Khan et al., 2014). The expansion of dendrimer applications therefore depends on size, chemistry, morphology, and ultimately, the ability to easily adjust the physical properties of dendrimers by chemical synthesis. Thus, the development of new dendrimers capable of acting as carriers for nucleic acids and other drugs is clinically useful.

発明の概要
いくつかの局面において、本開示は下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは、下記式を有し:

Figure 2022031692000002
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000003
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素、アルキル(C≦18)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000004
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000005
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000006
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000007
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000008
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩を提供する。いくつかの態様において、デンドリマーの構造はさらに定義される:
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000009
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000010
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000011
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000012
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000013
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。いくつかの態様において、デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000014
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000015
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000016
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000017
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000018
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。他の態様において、デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000019
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000020
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000021
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000022
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000023
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。他の態様において、デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000024
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000025
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000026
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000027
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。いくつかの態様において、末端基は下記式:
Figure 2022031692000028
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である。
他の態様において、末端基は下記式:
Figure 2022031692000029
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である。
いくつかの態様において、Y4はアルカンジイル(C4～18)である。他の態様において、末端基は下記式:
Figure 2022031692000030
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)である。
いくつかの態様において、末端基は下記式:
Figure 2022031692000031
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はヒドロキシである。
いくつかの態様において、コアは下記式:
Figure 2022031692000032
によってさらに定義され、
式中、
X1はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; および
aは1、2、3、4、5、もしくは6である。 Outline of the Invention In some aspects, the present disclosure is based on the following formula: Dendrimer:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000002
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the core has the following equation:
Figure 2022031692000003
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen, alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3, or the core has the following equation:
Figure 2022031692000004
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the cores are alkylamines (C ≤ 18) , dialkylamines (C ≤ 36) , heterocycloalkanes (C ≤ 12). , Or a substitution of any of these groups;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000005
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000006
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000007
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000008
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
During the ceremony
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or provide the pharmaceutically acceptable salt thereof. In some embodiments, the structure of the dendrimer is further defined:
The core has the following equation:
Figure 2022031692000009
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000010
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000011
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000012
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000013
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
During the ceremony
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt. In some embodiments, the dendrimer has the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000014
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000015
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000016
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000017
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000018
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt. In another embodiment, the dendrimer has the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000019
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently, respectively; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000020
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000021
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000022
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000023
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
During the ceremony
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt. In another embodiment, the dendrimer has the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
In the formula, by removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units, the core is linked to the repeating unit and the core is alkylamine (C ≤ 18) , dialkylamine ( C ≤ 36) , heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000024
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000025
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000026
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000027
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
During the ceremony
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt. In some embodiments, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000028
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ; and
R 10 is hydrogen.
In another embodiment, the terminal group is of the following formula:
Figure 2022031692000029
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ; and
R 10 is hydrogen.
In some embodiments, Y 4 is alkanediyl (C4-18) . In another embodiment, the terminal group is of the following formula:
Figure 2022031692000030
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is alkylamino (C ≦ 12) , dialkylamino (C ≦ 12) , and N-heterocycloalkyl (C ≦ 12) .
In some embodiments, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000031
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is hydroxy.
In some embodiments, the core is:
Figure 2022031692000032
Further defined by
During the ceremony
X 1 is alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substitution thereof;
R 1 is an amino, hydroxy, or mercapto, or an alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; and
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6.

いくつかの態様において、X1はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、X1はエチルアミノである。他の態様において、X1はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、X1はジメチルアミノである。他の態様において、X1はヘテロシクロアルキル(C≦12)もしくは置換ヘテロシクロアルキル(C≦12)である。他の態様において、X1は4-ピペリジニル、N-ピペリジニル、N-モルホリニル、N-ピロリジニル、2-ピロリジニル、N-ピペラジニルもしくはN-4-メチルピペラジニル(N-4-methylpiperadizinyl)である。他の態様において、X1はヘテロアリール(C≦12)もしくは置換ヘテロアリール(C≦12)である。いくつかの態様において、X1は2-ピリジニルもしくはN-イミダゾリルである。いくつかの態様において、R1はヒドロキシである。他の態様において、R1はアミノである。他の態様において、R1はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R1はアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R1はメチルアミノもしくはエチルアミノである。いくつかの態様において、aは1、2、3、もしくは4である。いくつかの態様において、aは2もしくは3である。いくつかの態様において、aは2である。他の態様において、aは3である。いくつかの態様において、コアは下記式の化合物としてさらに定義される:

Figure 2022031692000033
In some embodiments, X 1 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, X 1 is ethylamino. In another embodiment, X 1 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, X 1 is dimethylamino. In another embodiment, X 1 is heterocycloalkyl (C ≦ 12) or substituted heterocycloalkyl (C ≦ 12) . In other embodiments, X 1 is 4-piperidinyl, N-piperidinyl, N-morpholinyl, N-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, N-piperazinyl or N-4-methylpiperadizinyl. In another embodiment, X 1 is a heteroaryl (C ≤ 12) or a substituted heteroaryl (C ≤ 12) . In some embodiments, X 1 is 2-pyridinyl or N-imidazolyl. In some embodiments, R 1 is hydroxy. In another embodiment, R 1 is amino. In another embodiment, R 1 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 1 is alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 1 is methylamino or ethylamino. In some embodiments, a is 1, 2, 3, or 4. In some embodiments, a is 2 or 3. In some embodiments, a is 2. In another embodiment, a is 3. In some embodiments, the core is further defined as a compound of the formula below:
Figure 2022031692000033

いくつかの態様において、コアは

Figure 2022031692000034
としてさらに定義される。 In some embodiments, the core
Figure 2022031692000034
Further defined as.

他の態様において、コアは下記式によってさらに定義される:

Figure 2022031692000035
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦18)、または置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3である。 In other embodiments, the core is further defined by the following equation:
Figure 2022031692000035
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3.

いくつかの態様において、X2はNである。他の態様において、X2はNR5であり、式中、R5は水素もしくはアルキル(C≦8)である。いくつかの態様において、R5は水素である。他の態様において、R5はメチルである。いくつかの態様において、zは3である。他の態様において、zは2である。いくつかの態様において、R2はヒドロキシである。他の態様において、R2はアミノである。他の態様において、R2はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R2はアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R2はメチルアミノである。他の態様において、R2はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R2はジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R2はジメチルアミノである。いくつかの態様において、bは1、2、3、もしくは4である。いくつかの態様において、bは2もしくは3である。いくつかの態様において、bは2である。他の態様において、bは3である。いくつかの態様において、コアは

Figure 2022031692000036
としてさらに定義される。
いくつかの態様において、コアは
Figure 2022031692000037
としてさらに定義される。 In some embodiments, X 2 is N. In another embodiment, X 2 is NR 5 and in the equation R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) . In some embodiments, R 5 is hydrogen. In another embodiment, R 5 is methyl. In some embodiments, z is 3. In another embodiment, z is 2. In some embodiments, R 2 is hydroxy. In another embodiment, R 2 is amino. In another embodiment, R 2 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 2 is alkylamino (C ≦ 12) . In some embodiments, R 2 is methylamino. In another embodiment, R 2 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 2 is dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 2 is dimethylamino. In some embodiments, b is 1, 2, 3, or 4. In some embodiments, b is 2 or 3. In some embodiments, b is 2. In another embodiment, b is 3. In some embodiments, the core
Figure 2022031692000036
Further defined as.
In some embodiments, the core
Figure 2022031692000037
Further defined as.

他の態様において、コアは

Figure 2022031692000038
としてさらに定義され、
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6である。 In other embodiments, the core
Figure 2022031692000038
Further defined as
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6, respectively.

いくつかの態様において、X3は-O-である。他の態様において、X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)である。いくつかの態様において、X3は-NH-もしくは-NCH3-である。他の態様において、X3はアルキルアミノジイル(C≦8)もしくは置換アルキルアミノジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、X3は-NHCH2CH2NH-もしくは-NHCH2CH2NHCH2CH2NH-である。他の態様において、X3はアルコキシジイル(C≦8)もしくは置換アルコキシジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、X3は-OCH2CH2O-である。他の態様において、X3はアレーンジイル(C≦8)もしくは置換アレーンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、X3はベンゼンジイルである。他の態様において、X3はヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)もしくは置換ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、X3はN,N'-ピペラジンジイルである。 In some embodiments, X 3 is -O-. In another embodiment, X 3 is -NR 6- , in which R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) . In some embodiments, X 3 is -NH- or -NCH 3- . In another embodiment, X 3 is an alkylaminodiyl (C ≦ 8) or a substituted alkylaminodiyl (C ≦ 8) . In some embodiments, X 3 is -NHCH 2 CH 2 NH- or -NHCH 2 CH 2 NHCH 2 CH 2 NH-. In another embodiment, X 3 is an alkoxydiyl (C ≦ 8) or a substituted alkoxydiyl (C ≦ 8) . In some embodiments, X 3 is -OCH 2 CH 2 O-. In another embodiment, X 3 is an arele diyl (C ≤ 8) or a substituted alle diyl (C ≤ 8) . In some embodiments, X 3 is benzenediyl. In another embodiment, X 3 is a heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) or a substituted heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) . In some embodiments, X 3 is N, N'-piperazinezyl.

いくつかの態様において、R3はアミノである。他の態様において、R3はヒドロキシである。他の態様において、R3はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R3はアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R3はメチルアミノである。他の態様において、R3はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R3はジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R3はジメチルアミノである。 In some embodiments, R 3 is amino. In another embodiment, R 3 is hydroxy. In another embodiment, R 3 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 3 is alkylamino (C ≦ 12) . In some embodiments, R 3 is methylamino. In another embodiment, R 3 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 3 is dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 3 is dimethylamino.

いくつかの態様において、R4はアミノである。他の態様において、R4はヒドロキシである。他の態様において、R4はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R4はアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R4はメチルアミノである。他の態様において、R4はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R4はジアルキルアミノ(C≦12)である。いくつかの態様において、R4はジメチルアミノである。他の態様において、R4は-(CH2CH2N)e(Rc)Rdであり: 式中、 eは1、2、もしくは3であり; ならびにRcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)である。いくつかの態様において、eは1もしくは2である。いくつかの態様において、eは1である。いくつかの態様において、Rcは水素である。いくつかの態様において、Rdは水素である。 In some embodiments, R 4 is amino. In another embodiment, R 4 is hydroxy. In another embodiment, R 4 is an alkylamino (C ≦ 12) or a substituted alkylamino (C ≦ 12) . In some embodiments, R 4 is alkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 4 is methyl amino. In another embodiment, R 4 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 4 is dialkylamino (C ≤ 12) . In some embodiments, R 4 is dimethylamino. In other embodiments, R 4 is-(CH 2 CH 2 N) e (R c ) R d : in the equation, e is 1, 2, or 3; and R c and R d are independent of each other. Hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) . In some embodiments, e is 1 or 2. In some embodiments, e is 1. In some embodiments, R c is hydrogen. In some embodiments, R d is hydrogen.

いくつかの態様において、cは1、2、3、もしくは4である。いくつかの態様において、cは2もしくは3である。いくつかの態様において、cは2である。他の態様において、cは3である。いくつかの態様において、dは1、2、3、もしくは4である。いくつかの態様において、dは2もしくは3である。いくつかの態様において、dは2である。他の態様において、dは3である。いくつかの態様において、コアは

Figure 2022031692000039
としてさらに定義される。 In some embodiments, c is 1, 2, 3, or 4. In some embodiments, c is 2 or 3. In some embodiments, c is 2. In another embodiment, c is 3. In some embodiments, d is 1, 2, 3, or 4. In some embodiments, d is 2 or 3. In some embodiments, d is 2. In another embodiment, d is 3. In some embodiments, the core
Figure 2022031692000039
Further defined as.

いくつかの態様において、コアは

Figure 2022031692000040
としてさらに定義される。 In some embodiments, the core
Figure 2022031692000040
Further defined as.

他の態様において、コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である。いくつかの態様において、コアはアルキルアミン(C≦18)もしくは置換アルキルアミン(C≦18)である。いくつかの態様において、コアはオクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、ヘキサデシルアミン、およびオクタデシルアミンである。他の態様において、コアはジアルキルアミン(C≦36)もしくは置換ジアルキルアミン(C≦36)である。いくつかの態様において、コアはN-メチル、N-ドデシルアミン、ジオクチルアミン、もしくはジデシルアミンである。他の態様において、コアはヘテロシクロアルカン(C≦12)もしくは置換ヘテロシクロアルカン(C≦12)である。いくつかの態様において、コアは4-N-メチルピペラジニルである。いくつかの態様において、Y1はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、Y1はアルカンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、Y1は-CH2CH2-である。いくつかの態様において、Y3はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、Y3はアルカンジイル(C≦8)である。いくつかの態様において、Y3は-CH2CH2-である。他の態様において、Y3は以下である:

Figure 2022031692000041
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である。 In other embodiments, the core is an alkylamine (C ≤ 18) , a dialkylamine (C ≤ 36) , a heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups. In some embodiments, the core is an alkylamine (C ≦ 18) or a substituted alkylamine (C ≦ 18) . In some embodiments, the core is octylamine, decylamine, dodecylamine, tetradecylamine, hexadecylamine, and octadecylamine. In another embodiment, the core is a dialkylamine (C ≦ 36) or a substituted dialkylamine (C ≦ 36) . In some embodiments, the core is N-methyl, N-dodecylamine, dioctylamine, or didecylamine. In other embodiments, the core is a heterocycloalkane (C ≦ 12) or a substituted heterocycloalkane (C ≦ 12) . In some embodiments, the core is 4-N-methylpiperazinyl. In some embodiments, Y 1 is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) . In some embodiments, Y 1 is alkanediyl (C ≤ 8) . In some embodiments, Y 1 is -CH 2 CH 2- . In some embodiments, Y 3 is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) . In some embodiments, Y 3 is alkanediyl (C ≤ 8) . In some embodiments, Y 3 is -CH 2 CH 2- . In another embodiment, Y 3 is:
Figure 2022031692000041
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups.

いくつかの態様において、X3はアルカンジイル(C≦12)もしくは置換アルカンジイル(C≦12)である。いくつかの態様において、X3は-CH2CH2-である。いくつかの態様において、X4はアルカンジイル(C≦12)もしくは置換アルカンジイル(C≦12)である。いくつかの態様において、X4は-CH2CH2-である。いくつかの態様において、Y5は共有結合である。いくつかの態様において、Y3は以下である:

Figure 2022031692000042
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である。 In some embodiments, X 3 is an alkanediyl (C ≤ 12) or a substituted alkanediyl (C ≤ 12) . In some embodiments, X 3 is -CH 2 CH 2- . In some embodiments, X 4 is an alkanediyl (C ≤ 12) or a substituted alkanediyl (C ≤ 12) . In some embodiments, X 4 is -CH 2 CH 2- . In some embodiments, Y 5 is a covalent bond. In some embodiments, Y 3 is:
Figure 2022031692000042
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups.

いくつかの態様において、X3はアルカンジイル(C≦12)もしくは置換アルカンジイル(C≦12)である。いくつかの態様において、X3は-CH2CH2-である。いくつかの態様において、X4はアルカンジイル(C≦12)もしくは置換アルカンジイル(C≦12)である。いくつかの態様において、X4は-CH2CH2-である。いくつかの態様において、Y5は共有結合である。いくつかの態様において、Y5は-CH2-もしくは-C(CH3)2-である。いくつかの態様において、A1は-O-である。他の態様において、A1は-NRa-である。いくつかの態様において、Raは水素である。いくつかの態様において、A2は-O-である。他の態様において、A2は-NRa-である。いくつかの態様において、Raは水素である。いくつかの態様において、R9はアルキル(C≦8)である。いくつかの態様において、R9はメチルである。いくつかの態様において、nは0、1、2、3もしくは4である。いくつかの態様において、nは0、1、2、もしくは3である。いくつかの態様において、nは0である。他の態様において、nは1である。他の態様において、nは2である。他の態様において、nは3である。 In some embodiments, X 3 is an alkanediyl (C ≤ 12) or a substituted alkanediyl (C ≤ 12) . In some embodiments, X 3 is -CH 2 CH 2- . In some embodiments, X 4 is an alkanediyl (C ≤ 12) or a substituted alkanediyl (C ≤ 12) . In some embodiments, X 4 is -CH 2 CH 2- . In some embodiments, Y 5 is a covalent bond. In some embodiments, Y 5 is -CH 2 -or -C (CH 3 ) 2- . In some embodiments, A 1 is -O-. In another embodiment, A 1 is -NR a- . In some embodiments, Ra is hydrogen. In some embodiments, A 2 is -O-. In another embodiment, A 2 is -NR a- . In some embodiments, Ra is hydrogen. In some embodiments, R 9 is alkyl (C ≤ 8) . In some embodiments, R 9 is methyl. In some embodiments, n is 0, 1, 2, 3 or 4. In some embodiments, n is 0, 1, 2, or 3. In some embodiments, n is 0. In another embodiment, n is 1. In another embodiment, n is 2. In another embodiment, n is 3.

さらに別の局面において、本開示は、
(a) 本明細書において記述されるデンドリマー; および
(b) 核酸
を含む組成物を提供する。 In yet another aspect, the present disclosure is:
(a) Dendrimers described herein; and
(b) A composition containing a nucleic acid is provided.

いくつかの態様において、核酸は短干渉RNA(例えば低分子干渉RNA) (siRNA)、マイクロRNA (miRNA)、pri-miRNA、メッセンジャーRNA (mRNA)、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(cluster regularly interspaced short palindromic repeat)(CRISPR)関連核酸、単一ガイドRNA (sgRNA)、CRISPR-RNA (crRNA)、トランス活性化crRNA (tracrRNA)、プラスミドDNA (pDNA)、トランスファーRNA (tRNA)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)、ガイドRNA、二本鎖DNA (dsDNA)、一本鎖DNA (ssDNA)、一本鎖RNA (ssRNA)、および二本鎖RNA (dsRNA)である。いくつかの態様において、核酸は、siRNA、tRNA、もしくはCRISPRプロセスにおいて使用されうる核酸である。核酸はsiRNAでありうる。他の態様において、CRISPRプロセスにおいて使用されうる核酸、例えばクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(CRISPR)関連核酸、単一ガイドRNA (sgRNA)、CRISPR-RNA (crRNA)、もしくはトランス活性化crRNA (tracrRNA)。いくつかの態様において、核酸は、配列:

Figure 2022031692000043
を含む第VII因子に対するsiRNAである。 In some embodiments, the nucleic acid is short interfering RNA (eg, small interfering RNA) (siRNA), microRNA (miRNA), pri-miRNA, messenger RNA (mRNA), clustered and regularly arranged short circular sequences. Cluster regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) -related nucleic acids, single-guide RNA (sgRNA), CRISPR-RNA (crRNA), trans-activated crRNA (tracrRNA), plasmid DNA (pDNA), transfer RNA (tRNA), Antisense oligonucleotides (ASO), guide RNA, double-stranded DNA (dsDNA), single-stranded DNA (ssDNA), single-stranded RNA (ssRNA), and double-stranded RNA (dsRNA). In some embodiments, the nucleic acid is a nucleic acid that can be used in siRNA, tRNA, or CRISPR processes. The nucleic acid can be siRNA. In other embodiments, nucleic acids that can be used in the CRISPR process, such as clustered and regularly arranged short palindromic sequence repeat (CRISPR) -related nucleic acids, single guide RNA (sgRNA), CRISPR-RNA (crRNA), or trans. Activated crRNA (tracrRNA). In some embodiments, the nucleic acid is sequence:
Figure 2022031692000043
It is siRNA for factor VII including.

他の態様において、核酸はmiRNAである。他の態様において、核酸はmRNAである。他の態様において、核酸はtRNAである。他の態様において、核酸はガイドRNAである。いくつかの態様において、ガイドRNAはCRISPRプロセスにおいて用いられる。他の態様において、核酸はpDNAである。 In another embodiment, the nucleic acid is a miRNA. In another embodiment, the nucleic acid is mRNA. In another embodiment, the nucleic acid is a tRNA. In another embodiment, the nucleic acid is a guide RNA. In some embodiments, the guide RNA is used in the CRISPR process. In another embodiment, the nucleic acid is pDNA.

いくつかの態様において、デンドリマーおよび核酸は、約100:1～約1:5の重量比で存在する。いくつかの態様において、デンドリマーと核酸との重量比は、約50:1～約2:1である。いくつかの態様において、デンドリマーと核酸との重量比は、25:1である。他の態様において、デンドリマーと核酸との重量比は、7:1である。いくつかの態様において、組成物は、1つもしくは複数のヘルパー脂質をさらに含む。いくつかの態様において、ヘルパー脂質は、ステロイド、ステロイド誘導体、PEG脂質、もしくはリン脂質から選択される。いくつかの態様において、ヘルパー脂質は、ステロイドもしくはステロイド誘導体である。いくつかの態様において、ステロイドはコレステロールである。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーのモル比は、約1:1～約1:10である。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーのモル比は、約38:50である。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーのモル比は、約1:5である。 In some embodiments, the dendrimer and nucleic acid are present in a weight ratio of about 100: 1 to about 1: 5. In some embodiments, the weight ratio of dendrimer to nucleic acid is from about 50: 1 to about 2: 1. In some embodiments, the weight ratio of dendrimer to nucleic acid is 25: 1. In another embodiment the weight ratio of dendrimer to nucleic acid is 7: 1. In some embodiments, the composition further comprises one or more helper lipids. In some embodiments, the helper lipid is selected from steroids, steroid derivatives, PEG lipids, or phospholipids. In some embodiments, the helper lipid is a steroid or steroid derivative. In some embodiments, the steroid is cholesterol. In some embodiments, the steroid or steroid derivative and dendrimer are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20. In some embodiments, the molar ratio of steroid or steroid derivative to dendrimer is from about 1: 1 to about 1:10. In some embodiments, the molar ratio of steroid or steroid derivative to dendrimer is about 38:50. In some embodiments, the molar ratio of steroid or steroid derivative to dendrimer is about 1: 5.

他の態様において、ヘルパー脂質はPEG脂質である。いくつかの態様において、PEG脂質は下記式の化合物のようなPEG化ジアシルグリセロールである:

Figure 2022031692000044
式中、
R12およびR13は各々独立してアルキル(C≦24)、アルケニル(C≦24)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Reは水素、アルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり; および
xは1～250である。 In another embodiment, the helper lipid is a PEG lipid. In some embodiments, the PEG lipid is a PEGylated diacylglycerol, such as a compound of the formula below:
Figure 2022031692000044
During the ceremony
R 12 and R 13 are independently substituteds of alkyl (C ≤ 24) , alkenyl (C ≤ 24) , or any of these groups;
R e is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ; and
x is 1 to 250.

いくつかの態様において、PEG脂質はジミリストイル-sn-グリセロールもしくは下記式の化合物である:

Figure 2022031692000045
式中、
n1は5～250であり; ならびに
n2およびn3は各々独立して2～25である。 In some embodiments, the PEG lipid is dimyristoyl-sn-glycerol or a compound of the formula below:
Figure 2022031692000045
During the ceremony
n 1 is 5-250; as well
n 2 and n 3 are 2 to 25 independently.

いくつかの態様において、PEG脂質およびデンドリマーは、約1:1～約1:250のモル比で存在する。いくつかの態様において、PEG脂質およびデンドリマーのモル比は、約1:10～約1:125である。いくつかの態様において、PEG脂質およびデンドリマーのモル比は、約1:20～約1:50である。 In some embodiments, the PEG lipid and dendrimer are present in a molar ratio of about 1: 1 to about 1: 250. In some embodiments, the molar ratio of PEG lipids and dendrimers is from about 1:10 to about 1: 125. In some embodiments, the molar ratio of PEG lipids and dendrimers is from about 1:20 to about 1:50.

他の態様において、ヘルパー脂質はリン脂質である。いくつかの態様において、リン脂質は1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)である。他の態様において、リン脂質は1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)である。いくつかの態様において、リン脂質およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する。いくつかの態様において、リン脂質およびデンドリマーのモル比は、約1:1～約1:10である。いくつかの態様において、リン脂質およびデンドリマーのモル比は約4：5である。いくつかの態様において、リン脂質およびデンドリマーのモル比は約1：5である。いくつかの態様において、組成物は、デンドリマー、核酸、および1つもしくは複数のヘルパー脂質から本質的になる。 In another embodiment, the helper lipid is a phospholipid. In some embodiments, the phospholipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC). In another embodiment, the phospholipid is 1,2-dioreoil-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE). In some embodiments, phospholipids and dendrimers are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20. In some embodiments, the molar ratio of phospholipids to dendrimers is from about 1: 1 to about 1:10. In some embodiments, the molar ratio of phospholipids to dendrimers is about 4: 5. In some embodiments, the molar ratio of phospholipids to dendrimers is about 1: 5. In some embodiments, the composition consists essentially of a dendrimer, nucleic acid, and one or more helper lipids.

さらに別の局面において、本開示は、
(a) 本明細書において記述される組成物もしくはデンドリマー; および
(b) 薬学的に許容される担体
を含む薬学的組成物を提供する。 In yet another aspect, the present disclosure is:
(a) The compositions or dendrimers described herein; and
(b) To provide a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier.

いくつかの態様において、薬学的に許容される担体は、溶媒もしくは溶液である。いくつかの態様において、薬学的組成物は経口的に、脂肪内に(intraadiposally)、動脈内に、関節内に、頭蓋内に、皮内に、病変内に、筋肉内に、鼻腔内に、眼内に、心膜内に、腹腔内に、胸膜内に、前立腺内に、直腸内に、くも膜下腔内に、気管内に、腫瘍内に、臍帯内に、膣内に、静脈内に、膀胱内に、硝子体内に、リポソーム的に、局所的に、粘膜的に、非経口的に、直腸的に、結膜下に、皮下に、舌下に、局所に、経頬的に、経皮的に、経膣的に、クリーム中で、脂質組成物中で、カテーテルを介して、洗浄を介して、持続注入を介して、注入を介して、吸入を介して、注射を介して、局所送達を介して、もしくは限局性かん流を介して投与するために製剤化される。いくつかの態様において、薬学的組成物は、静脈内もしくは動脈内注射のために製剤化される。いくつかの態様において、薬学的組成物は単位用量として製剤化される。 In some embodiments, the pharmaceutically acceptable carrier is a solvent or solution. In some embodiments, the pharmaceutical composition is orally, intraadiposally, intraarterial, intra-arterial, intracranial, intradermal, intralesional, intramuscular, intranasal. Intravital, intravital, intraperitoneal, thoracic, prostatic, rectal, intravitreal, tracheal, tumor, umbilical cord, vaginal, intravenous. Intravitreal, intravitreal, liposomal, topically, mucosally, parenterally, rectal, subconjunctival, subcutaneous, sublingual, topically, transbuffally. Skinically, transvaginally, in cream, in lipid composition, via catheter, via wash, via continuous infusion, through infusion, through inhalation, via injection, It is formulated for administration via topical delivery or via localized perfusion. In some embodiments, the pharmaceutical composition is formulated for intravenous or intraarterial injection. In some embodiments, the pharmaceutical composition is formulated as a unit dose.

さらに別の局面において、本開示は、核酸を細胞に送達する段階を含む遺伝子の発現を調節する方法であって、細胞への核酸の取り込みを引き起こすのに十分な条件の下で本明細書において記述される組成物もしくは薬学的組成物と細胞を接触させる段階を含む、該方法を提供する。いくつかの態様において、細胞をインビトロで接触させる。他の態様において、細胞をインビボで接触させる。他の態様において、細胞をエクスビボで接触させる。いくつかの態様において、遺伝子発現の調節は、疾患もしくは障害を処置するのに十分である。いくつかの態様において、疾患もしくは障害はがんである。いくつかの態様において、疾患もしくは障害は肝臓がんである。いくつかの態様において、疾患もしくは障害は肝細胞がんである。 In yet another aspect, the present disclosure is a method of regulating gene expression, including the step of delivering nucleic acid to a cell, herein under sufficient conditions to induce nucleic acid uptake into the cell. Provided is the method comprising contacting the cells with the described composition or pharmaceutical composition. In some embodiments, the cells are contacted in vitro. In another embodiment, the cells are contacted in vivo. In another embodiment, the cells are contacted with Exvivo. In some embodiments, regulation of gene expression is sufficient to treat the disease or disorder. In some embodiments, the disease or disorder is cancer. In some embodiments, the disease or disorder is liver cancer. In some embodiments, the disease or disorder is hepatocellular carcinoma.

さらに別の局面において、本開示は、本明細書において記述される組成物もしくは薬学的組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与する段階を含む、患者における疾患もしくは障害を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、疾患もしくは障害はがんである。いくつかの態様において、疾患もしくは障害は肝臓がんである。いくつかの態様において、疾患もしくは障害は肝細胞がんである。いくつかの態様において、本方法は、患者に1つもしくは複数のさらなるがん療法を投与する段階をさらに含む。いくつかの態様において、がん療法は、化学療法化合物、外科手術、放射線療法、もしくは免疫療法である。いくつかの態様において、組成物もしくは薬学的組成物は、1回患者に投与される。他の態様において、組成物もしくは薬学的組成物は2回もしくはそれ以上の回数、患者に投与される。いくつかの態様において、患者はヒトのような哺乳動物である。 In yet another aspect, the disclosure relates to a disease or disorder in a patient, including the step of administering a pharmaceutically effective amount of the composition or pharmaceutical composition described herein to a patient in need thereof. Provide a method of treatment. In some embodiments, the disease or disorder is cancer. In some embodiments, the disease or disorder is liver cancer. In some embodiments, the disease or disorder is hepatocellular carcinoma. In some embodiments, the method further comprises administering to the patient one or more additional cancer therapies. In some embodiments, the cancer therapy is a chemotherapeutic compound, surgery, radiation therapy, or immunotherapy. In some embodiments, the composition or pharmaceutical composition is administered to the patient in a single dose. In other embodiments, the composition or pharmaceutical composition is administered to the patient twice or more times. In some embodiments, the patient is a mammal, such as a human.

さらに別の局面において、
本開示は下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:

Figure 2022031692000046
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルケンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000047
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000048
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000049
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; ならびに
R10は水素であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩を提供する。 In yet another aspect,
This disclosure is based on the following formula: Dendrimer:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000046
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkenediyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or substituted forms of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6 respectively; or repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000047
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substituted form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000048
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000049
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or provide the pharmaceutically acceptable salt thereof.

用語「含む(comprise)」(ならびに「含む(comprises)」および「含む(comprising)」のような、含む(comprise)の任意の形態)、「有する(have)」(ならびに「有する(has)」および「有する(having)」のような、有する(have)の任意の形態)、「含む(contain)」(ならびに「含む(contains)」および「含む(containing)」のような、含む(contain)の任意の形態)、ならびに「含む(include)」(ならびに「含む(includes)」および「含む(including)」のような、含む(include)の任意の形態)は、制限のない連結動詞である。結果として、1つもしくは複数の列挙された段階もしくは要素を「含む(comprises)」、「有する(has)」、「含む(contains)」もしくは「含む(includes)」方法、組成物、キットもしくはシステムは、列挙された段階もしくは要素を保有するが、しかしそれらの段階もしくは要素だけを保有することに限定されない; それは、列挙されていない要素もしくは段階を保有(すなわち、網羅)しうる。同様に、1つもしくは複数の列挙された特徴を「含む(comprises)」、「有する(has)」、「含む(contains)」もしくは「含む(includes)」方法、組成物、キットもしくはシステムの要素は、それらの特徴を保有するが、しかしそれらの特徴だけを保有することに限定されない; それは、列挙されていない特徴を保有しうる。 The terms "comprise" (and any form of complement, such as "comprises" and "comprising"), "have" (and "has"). And any form of have, such as "having"), "contain" (and contain, such as "contains" and "containing"). (Any form of include), as well as "include" (and any form of include, such as "includes" and "including") are unrestricted concatenated verbs. .. As a result, a method, composition, kit or system that "comprises", "has", "contains" or "includes" one or more enumerated steps or elements. Possess an enumerated stage or element, but is not limited to possessing only those stages or elements; it may possess (ie, cover) an unlisted element or stage. Similarly, elements of a method, composition, kit or system that "comprises", "has", "contains" or "includes" one or more enumerated features. Retains those features, but is not limited to possessing only those features; it may possess features not listed.

本方法、組成物、キットおよびシステムのいずれかの任意の態様は、記述された段階および/もしくは特徴を含む(comprise)/含む(include)/含む(contain)/有する(have)のではなく、それらからなり、もしくはそれらから本質的になりうる。したがって、特許請求の範囲のいずれかにおいて、「からなる」もしくは「から本質的になる」という用語は、所与の特許請求の範囲を、普通なら制限のない連結動詞を用いているものから変更するために、上記に列挙した制限のない連結動詞のいずれかに代えて使用されうる。 Any aspect of the method, composition, kit and system, rather than comprise / include / contain / have described steps and / or features. It consists of them, or can be essentially from them. Therefore, in any of the claims, the term "consisting of" or "essentially consisting of" changes the scope of a given claim from one that normally uses an unrestricted concatenated verb. Can be used in place of any of the unrestricted concatenated verbs listed above.

特許請求の範囲における「もしくは」という用語の使用は、代替物だけをいうことが明示されていない限り、または代替物が相互排他的でない限り「および/もしくは」を意味するように用いられるが、本開示は、代替物だけをいう定義ならびに「および/もしくは」を支持する。 The use of the term "or" in the claims is used to mean "and / or" unless it is explicitly stated that it refers only to an alternative, or unless the alternatives are mutually exclusive. This disclosure supports the definition of alternatives only and "and / or".

[本発明1001]
下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:

Figure 2022031692000050
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000051
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素、アルキル(C≦18)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000052
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000053
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000054
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000055
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000056
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。
[本発明1002]
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000057
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000058
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000059
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000060
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000061
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。
[本発明1003]
デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000062
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000063
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000064
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000065
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000066
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。
[本発明1004]
デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000067
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000068
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000069
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000070
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000071
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。
[本発明1005]
デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000072
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000073
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000074
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000075
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。
[本発明1006]
末端基は下記式:
Figure 2022031692000076
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である、
本発明1001～1005のいずれかのデンドリマー。
[本発明1007]
末端基は下記式:
Figure 2022031692000077
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である、
本発明1001～1006のいずれかのデンドリマー。
[本発明1008]
Y4はアルカンジイル(C4～18)である、本発明1001～1007のいずれかのデンドリマー。
[本発明1009]
末端基は下記式:
Figure 2022031692000078
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)である、
本発明1001～1005のいずれかのデンドリマー。
[本発明1010]
末端基は下記式:
Figure 2022031692000079
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はヒドロキシである、
本発明1001～1005のいずれかのデンドリマー。
[本発明1011]
コアは下記式:
Figure 2022031692000080
によってさらに定義され、
式中、
X1はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; および
aは1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001～1002および1006～1010のいずれかのデンドリマー。
[本発明1012]
X1はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である、本発明1011のデンドリマー。
[本発明1013]
X1はヘテロシクロアルキル(C≦12)もしくは置換ヘテロシクロアルキル(C≦12)である、本発明1011のデンドリマー。
[本発明1014]
X1は4-ピペリジニル、N-ピペリジニル、N-モルホリニル、N-ピロリジニル、2-ピロリジニル、N-ピペラジニルもしくはN-4-メチルピペラジニル(N-4-methylpiperadizinyl)である、本発明1013のデンドリマー。
[本発明1015]
R1はアミノである、本発明1011～1014のいずれかのデンドリマー。
[本発明1016]
aは1、2、3、もしくは4である、本発明1011～1015のいずれかのデンドリマー。
[本発明1017]
コアは下記式の化合物:
Figure 2022031692000081
としてさらに定義される、本発明1011～1016のいずれかのデンドリマー。
[本発明1018]
コアは
Figure 2022031692000082
としてさらに定義される、本発明1017のデンドリマー。
[本発明1019]
コアは下記式によってさらに定義される:
Figure 2022031692000083
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦18)、または置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3である、
本発明1001、1003、および1006～1010のいずれかのデンドリマー。
[本発明1020]
X2はNである、本発明1019のデンドリマー。
[本発明1021]
X2はNR5であり、式中、R5は水素もしくはアルキル(C≦8)である、本発明1019のデンドリマー。
[本発明1022]
R5は水素である、本発明1021のデンドリマー。
[本発明1023]
R5はメチルである、本発明1021のデンドリマー。
[本発明1024]
zは3である、本発明1019または1020のデンドリマー。
[本発明1025]
zは2である、本発明1019および1021～1023のいずれかのデンドリマー。
[本発明1026]
R2はアミノである、本発明1019～1025のいずれかのデンドリマー。
[本発明1027]
R2はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、本発明1019～1025のいずれかのデンドリマー。
[本発明1028]
R2はメチルアミノである、本発明1027のデンドリマー。
[本発明1029]
R2はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である、本発明1019～1025のいずれかのデンドリマー。
[本発明1030]
R2はジメチルアミノである、本発明1029のデンドリマー。
[本発明1031]
bは1、2、3、もしくは4である、本発明1019～1030のいずれかのデンドリマー。
[本発明1032]
コアは
Figure 2022031692000084
としてさらに定義される、本発明1019～1031のいずれかのデンドリマー。
[本発明1033]
コアは
Figure 2022031692000085
としてさらに定義される、本発明1032のデンドリマー。
[本発明1034]
コアは
Figure 2022031692000086
としてさらに定義され、
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6である、
本発明1001、1004、および1006～1010のいずれかのデンドリマー。
[本発明1035]
X3はアルキルアミノジイル(C≦8)もしくは置換アルキルアミノジイル(C≦8)である、本発明1034のデンドリマー。
[本発明1036]
X3は-NHCH2CH2NH-もしくは-NHCH2CH2NHCH2CH2NH-である、本発明1035のデンドリマー。
[本発明1037]
X3はヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)もしくは置換ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)である、本発明1034のデンドリマー。
[本発明1038]
X3はN,N'-ピペラジンジイルである、本発明1037のデンドリマー。
[本発明1039]
R3はアミノである、本発明1034～1038のいずれかのデンドリマー。
[本発明1040]
R3はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、本発明1034～1038のいずれかのデンドリマー。
[本発明1041]
R3はメチルアミノである、本発明1040のデンドリマー。
[本発明1042]
R4はアミノである、本発明1034～1041のいずれかのデンドリマー。
[本発明1043]
R4はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、本発明1034～1041のいずれかのデンドリマー。
[本発明1044]
R4はメチルアミノである、本発明1043のデンドリマー。
[本発明1045]
R4は-(CH2CH2N)e(Rc)Rdであり:
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)である、
本発明1034～1041のいずれかのデンドリマー。
[本発明1046]
コアは
Figure 2022031692000087
としてさらに定義される、本発明1034～1045のいずれかのデンドリマー。
[本発明1047]
コアは
Figure 2022031692000088
としてさらに定義される、本発明1046のデンドリマー。
[本発明1048]
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である、本発明1001および1005～1010のいずれかのデンドリマー。
[本発明1049]
コアはオクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、ヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、N-メチル、N-ドデシルアミン、ジオクチルアミン、ジデシルアミン、もしくは4-N-メチルピペラジニルである、本発明1048のデンドリマー。
[本発明1050]
Y1はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である、本発明1001～1049のいずれかのデンドリマー。
[本発明1051]
Y1は-CH2CH2-である、本発明1050のデンドリマー。
[本発明1052]
Y3はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である、本発明1001～1053のいずれかのデンドリマー。
[本発明1053]
Y3は-CH2CH2-である、本発明1052のデンドリマー。
[本発明1054]
Y3は以下である:
Figure 2022031692000089
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; または
Y3は以下である:
Figure 2022031692000090
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である、
本発明1001～1051のいずれかのデンドリマー。
[本発明1055]
A1は-O-もしくは-NH-である、本発明1001～1054のいずれかのデンドリマー。
[本発明1056]
A2は-O-もしくは-NH-である、本発明1001～1055のいずれかのデンドリマー。
[本発明1057]
R9はアルキル(C≦8)である、本発明1001～1056のいずれかのデンドリマー。
[本発明1058]
R9はメチルである、本発明1057のデンドリマー。
[本発明1059]
nは1、2、もしくは3である、本発明1001～1058のいずれかのデンドリマー。
[本発明1060]
(A) 本発明1001～1059のいずれかのデンドリマー; および
(B) 核酸
を含む、組成物。
[本発明1061]
核酸はsiRNA、miRNA、pri-miRNA、メッセンジャーRNA (mRNA)、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(cluster regularly interspaced short palindromic repeat)(CRISPR)関連核酸、単一ガイドRNA (sgRNA)、CRISPR-RNA (crRNA)、トランス活性化crRNA (tracrRNA)、プラスミドDNA (pDNA)、トランスファーRNA (tRNA)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)、ガイドRNA、二本鎖DNA (dsDNA)、一本鎖DNA (ssDNA)、一本鎖RNA (ssRNA)、および二本鎖RNA (dsRNA)である、本発明1060の組成物。
[本発明1062]
核酸は、siRNA、tRNA、もしくはCRISPRプロセスにおいて使用されうる核酸である、本発明1061の組成物。
[本発明1063]
デンドリマーおよび核酸は、約100:1～約1:5の重量比で存在する、本発明1060～1062のいずれかの組成物。
[本発明1064]
1つもしくは複数のヘルパー脂質をさらに含む、本発明1060～1063のいずれかの組成物。
[本発明1065]
ヘルパー脂質は、ステロイド、ステロイド誘導体、PEG脂質、もしくはリン脂質から選択される、本発明1064の組成物。
[本発明1066]
ヘルパー脂質は、ステロイドもしくはステロイド誘導体である、本発明1065の組成物。
[本発明1067]
ステロイドはコレステロールである、本発明1065の組成物。
[本発明1068]
ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する、本発明1066の組成物。
[本発明1069]
ヘルパー脂質はPEG脂質である、本発明1065の組成物。
[本発明1070]
PEG脂質はPEG化ジアシルグリセロールである、本発明1069の組成物。
[本発明1071]
PEG脂質は下記式によってさらに定義され:
Figure 2022031692000091
式中、
R12およびR13は各々独立してアルキル(C≦24)、アルケニル(C≦24)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Reは水素、アルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり; および
xは1～250である、
本発明1070の組成物。
[本発明1072]
PEG脂質はジミリストイル-sn-グリセロールもしくは下記式の化合物である:
Figure 2022031692000092
式中、
n1は5～250であり; ならびに
n2およびn3は各々独立して2～25である、
本発明1069の組成物。
[本発明1073]
PEG脂質およびデンドリマーは、約1:1～約1:250のモル比で存在する、本発明1069の組成物。
[本発明1074]
ヘルパー脂質はリン脂質である、本発明1065の組成物。
[本発明1075]
リン脂質は1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)もしくは1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)である、本発明1065の組成物。
[本発明1076]
リン脂質およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する、本発明1074の組成物。
[本発明1077]
デンドリマー、核酸、および1つもしくは複数のヘルパー脂質から本質的になる、本発明1060～1076のいずれかの組成物。
[本発明1078]
(A) 本発明1060～1077のいずれかの組成物; および
(B) 薬学的に許容される担体
を含む、薬学的組成物。
[本発明1079]
薬学的に許容される担体は、溶媒もしくは溶液である、本発明1078の薬学的組成物。
[本発明1080]
経口的に、脂肪内に(intraadiposally)、動脈内に、関節内に、頭蓋内に、皮内に、病変内に、筋肉内に、鼻腔内に、眼内に、心膜内に、腹腔内に、胸膜内に、前立腺内に、直腸内に、くも膜下腔内に、気管内に、腫瘍内に、臍帯内に、膣内に、静脈内に、膀胱内に、硝子体内に、リポソーム的に、局所的に、粘膜的に、非経口的に、直腸的に、結膜下に、皮下に、舌下に、局所に、経頬的に(transbuccally)、経皮的に、経膣的に、クリーム中で、脂質組成物中で、カテーテルを介して、洗浄を介して、持続注入を介して、注入を介して、吸入を介して、注射を介して、局所送達を介して、もしくは限局性かん流を介して投与するために製剤化される、本発明1078または1079の薬学的組成物。
[本発明1081]
静脈内もしくは動脈内注射のために製剤化される、本発明1080の薬学的組成物。
[本発明1082]
単位用量として製剤化される、本発明1078～1081のいずれかの薬学的組成物。
[本発明1083]
核酸を細胞に送達する段階を含む遺伝子の発現を調節する方法であって、細胞への核酸の取り込みを引き起こすのに十分な条件の下で本発明1060～1082のいずれかの組成物もしくは薬学的組成物と細胞を接触させる段階を含む、方法。
[本発明1084]
細胞をインビトロでもしくはエクスビボで接触させる、本発明1083の方法。
[本発明1085]
細胞をインビボで接触させる、本発明1083の方法。
[本発明1086]
遺伝子発現の調節は、疾患もしくは障害を処置するのに十分である、本発明1083～1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
疾患もしくは障害はがんである、本発明1086の方法。
[本発明1088]
本発明1060～1082のいずれかの組成物もしくは薬学的組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与する段階を含む、患者における疾患もしくは障害を処置する方法。
[本発明1089]
疾患もしくは障害はがんである、本発明1088の方法。
[本発明1090]
患者に1つもしくは複数のさらなるがん療法を投与する段階をさらに含む、本発明1088または1089の方法。
[本発明1091]
がん療法は、化学療法化合物、外科手術、放射線療法、もしくは免疫療法である、本発明1090の方法。
[本発明1092]
組成物もしくは薬学的組成物は、1回患者に投与される、本発明1088～1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
組成物もしくは薬学的組成物は2回もしくはそれ以上の回数、患者に投与される、本発明1088～1091のいずれかの方法。
[本発明1094]
患者は哺乳動物である、本発明1088～1093のいずれかの方法。
[本発明1095]
患者はヒトである、本発明1094の方法。
[本発明1096]
下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000093
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルケンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000094
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000095
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000096
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; ならびに
R10は水素であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。
本開示の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の特定の態様を示すものの、詳細な説明および具体的な実施例は、この詳細な説明から当業者には本発明の趣旨および範囲内のさまざまな変更および修正が明らかになるものと思われるので、実例としてのみ与えられたものであると理解されるべきである。特定の化合物がある特定の一般的な式に帰されているからといって、それが別の一般的な式にも属しうることを意味するものではないことに留意されたい。 [Invention 1001]
Dendrimer of the following formula:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000050
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the core has the following equation:
Figure 2022031692000051
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen, alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3, or the core has the following equation:
Figure 2022031692000052
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the cores are alkylamines (C ≤ 18) , dialkylamines (C ≤ 36) , heterocycloalkanes (C ≤ 12). , Or a substitution of any of these groups;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000053
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000054
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000055
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000056
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt.
[Invention 1002]
The core has the following equation:
Figure 2022031692000057
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000058
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000059
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000060
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000061
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer of the present invention 1001 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Invention 1003]
Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000062
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000063
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000064
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000065
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000066
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer of the present invention 1001 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Invention 1004]
Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000067
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently, respectively; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000068
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000069
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000070
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000071
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer of the present invention 1001 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Invention 1005]
Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
In the formula, by removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units, the core is linked to the repeating unit and the core is alkylamine (C ≤ 18) , dialkylamine ( C ≤ 36) , heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000072
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000073
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000074
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000075
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer of the present invention 1001 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Invention 1006]
The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000076
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ; and
R 10 is hydrogen,
The dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1005.
[Invention 1007]
The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000077
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ; and
R 10 is hydrogen,
The dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1006.
[Invention 1008]
Y 4 is an alkanedyl (C4-18) , any of the dendrimers of the present invention 1001-1007.
[Invention 1009]
The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000078
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
The dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1005.
[Invention 1010]
The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000079
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is hydroxy,
The dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1005.
[Invention 1011]
The core is the following formula:
Figure 2022031692000080
Further defined by
During the ceremony
X 1 is alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substitution thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups; and
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer of any of 1001 to 1002 and 1006 to 1010 of the present invention.
[Invention 1012]
X 1 is a dialkylamino (C ≤ 12) or substituted dialkylamino (C ≤ 12) , the dendrimer of the present invention 1011.
[Invention 1013]
X 1 is a heterocycloalkyl (C ≤ 12) or substituted heterocycloalkyl (C ≤ 12) , the dendrimer of the present invention 1011.
[Invention 1014]
X 1 is 4-piperidinyl, N-piperidinyl, N-morpholinyl, N-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, N-piperazinyl or N-4-methylpiperadizinyl, the dendrimer of the invention 1013. ..
[Invention 1015]
R 1 is an amino, any dendrimer of the present invention 1011-1014.
[Invention 1016]
A dendrimer according to any one of the present inventions 1011 to 1015, wherein a is 1, 2, 3, or 4.
[Invention 1017]
The core is a compound of the following formula:
Figure 2022031692000081
The dendrimer of any of the present inventions 1011-1016, further defined as.
[Invention 1018]
The core is
Figure 2022031692000082
The dendrimer of the present invention 1017, further defined as.
[Invention 1019]
The core is further defined by the following equation:
Figure 2022031692000083
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3.
The dendrimer of any of the present inventions 1001, 1003, and 1006-1010.
[Invention 1020]
X 2 is N, the dendrimer of the present invention 1019.
[Invention 1021]
X 2 is NR 5 , and in the equation, R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) , the dendrimer of the present invention 1019.
[Invention 1022]
R 5 is hydrogen, the dendrimer of 1021 of the present invention.
[Invention 1023]
R 5 is methyl, the dendrimer of 1021 of the present invention.
[Invention 1024]
z is 3, the dendrimer of the present invention 1019 or 1020.
[Invention 1025]
The dendrimer of any of the present inventions 1019 and 1021-1023, where z is 2.
[Invention 1026]
R 2 is an amino, any dendrimer of the present invention 1019-1025.
[Invention 1027]
R 2 is an alkylamino (C ≤ 12) or substituted alkylamino (C ≤ 12) dendrimer according to any of the inventions 1019-1025.
[Invention 1028]
R 2 is methylamino, the dendrimer of the present invention 1027.
[Invention 1029]
R 2 is a dendrimer of any of the present inventions 1019-1025, which is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) .
[Invention 1030]
R 2 is dimethylamino, the dendrimer of the present invention 1029.
[Invention 1031]
b is 1, 2, 3, or 4, any dendrimer of the present invention 1019-1030.
[Invention 1032]
The core is
Figure 2022031692000084
The dendrimer of any of the present inventions 1019-1031, further defined as.
[Invention 1033]
The core is
Figure 2022031692000085
The dendrimer of the present invention 1032, further defined as.
[Invention 1034]
The core is
Figure 2022031692000086
Further defined as
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6, respectively,
The dendrimer of any of the present inventions 1001, 1004, and 1006-1010.
[Invention 1035]
The dendrimer of the present invention 1034, wherein X 3 is an alkylaminodiyl (C ≤ 8) or a substituted alkylaminodiyl (C ≤ 8) .
[Invention 1036]
X 3 is -NHCH 2 CH 2 NH- or -NHCH 2 CH 2 NHCH 2 CH 2 NH-, the dendrimer of the present invention 1035.
[Invention 1037]
X 3 is a heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) or a substituted heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) , the dendrimer of the present invention 1034.
[Invention 1038]
X 3 is an N, N'-piperazine diyl, the dendrimer of the present invention 1037.
[Invention 1039]
R 3 is an amino, any dendrimer of the present invention 1034-1038.
[Invention 1040]
R 3 is an alkylamino (C ≤ 12) or substituted alkylamino (C ≤ 12) dendrimer according to any of the 1034-1038 of the present invention.
[Invention 1041]
R 3 is methylamino, the dendrimer of the present invention 1040.
[Invention 1042]
R 4 is an amino, any dendrimer of the present invention 1034-1041.
[Invention 1043]
The dendrimer of any of 1034-1041 of the present invention, wherein R 4 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) .
[Invention 1044]
R 4 is methylamino, the dendrimer of 1043 of the present invention.
[Invention 1045]
R 4 is-(CH 2 CH 2 N) e (R c ) R d :
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) , respectively.
The dendrimer according to any one of 1034 to 1041 of the present invention.
[Invention 1046]
The core is
Figure 2022031692000087
The dendrimer of any of the present inventions 1034-1045, further defined as.
[Invention 1047]
The core is
Figure 2022031692000088
The dendrimer of the present invention 1046, further defined as.
[Invention 1048]
The core is any of the present inventions 1001 and 1005-1010, which is an alkylamine (C ≤ 18) , a dialkylamine (C ≤ 36) , a heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups. Dendrimer.
[Invention 1049]
The core is octylamine, decylamine, dodecylamine, tetradecylamine, hexadecylamine, octadecylamine, N-methyl, N-dodecylamine, dioctylamine, didecylamine, or 4-N-methylpiperazinyl, the present invention 1048. Dendrimer.
[Invention 1050]
Y 1 is a dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1049, wherein Y 1 is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) .
[Invention 1051]
Y 1 is -CH 2 CH 2- , the dendrimer of the present invention 1050.
[Invention 1052]
Y 3 is a dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1053, which is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) .
[Invention 1053]
Y 3 is -CH 2 CH 2- , the dendrimer of the present invention 1052.
[Invention 1054]
Y 3 is:
Figure 2022031692000089
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substitution of any of these groups; or
Y 3 is:
Figure 2022031692000090
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups.
The dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1051.
[Invention 1055]
A 1 is a dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1054, which is -O- or -NH-.
[Invention 1056]
A 2 is a dendrimer of either 1001 to 1055 of the present invention, which is -O- or -NH-.
[Invention 1057]
R 9 is an alkyl (C ≤ 8) , any dendrimer of the present invention 1001-1056.
[Invention 1058]
R 9 is methyl, the dendrimer of the present invention 1057.
[Invention 1059]
A dendrimer of any of 1001-1058 of the present invention, where n is 1, 2, or 3.
[Invention 1060]
(A) Dendrimer according to any one of the present inventions 1001 to 1059; and
(B) A composition comprising nucleic acid.
[Invention 1061]
Nucleic acid is siRNA, miRNA, pri-miRNA, messenger RNA (mRNA), cluster regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) -related nucleic acid, single guide RNA (sgRNA). , CRISPR-RNA (crRNA), trans-activated crRNA (tracrRNA), plasmid DNA (pDNA), transfer RNA (tRNA), antisense oligonucleotide (ASO), guide RNA, double-stranded DNA (dsDNA), single-stranded The composition of the invention 1060, which is DNA (ssDNA), single-stranded RNA (ssRNA), and double-stranded RNA (dsRNA).
[Invention 1062]
The composition of the present invention 1061, wherein the nucleic acid is a nucleic acid that can be used in siRNA, tRNA, or CRISPR processes.
[Invention 1063]
The composition of any of the present inventions 1060 to 1062, wherein the dendrimer and nucleic acid are present in a weight ratio of about 100: 1 to about 1: 5.
[Invention 1064]
The composition of any of the present inventions 1060-1063, further comprising one or more helper lipids.
[Invention 1065]
The composition of the present invention 1064, wherein the helper lipid is selected from steroids, steroid derivatives, PEG lipids, or phospholipids.
[Invention 1066]
The composition of the present invention 1065, wherein the helper lipid is a steroid or a steroid derivative.
[Invention 1067]
The composition of the present invention 1065, wherein the steroid is cholesterol.
[Invention 1068]
The composition of the present invention 1066, wherein the steroid or steroid derivative and dendrimer are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20.
[Invention 1069]
The composition of the present invention 1065, wherein the helper lipid is a PEG lipid.
[Invention 1070]
The composition of the present invention 1069, wherein the PEG lipid is PEGylated diacylglycerol.
[Invention 1071]
PEG lipids are further defined by the following equation:
Figure 2022031692000091
During the ceremony
R 12 and R 13 are independently substituteds of alkyl (C ≤ 24) , alkenyl (C ≤ 24) , or any of these groups;
R e is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ; and
x is 1-250,
The composition of the present invention 1070.
[Invention 1072]
The PEG lipid is dimyristoyl-sn-glycerol or a compound of the formula below:
Figure 2022031692000092
During the ceremony
n 1 is 5-250; as well
n 2 and n 3 are 2-25 independently, respectively,
The composition of the present invention 1069.
[Invention 1073]
The composition of the present invention 1069, wherein the PEG lipid and the dendrimer are present in a molar ratio of about 1: 1 to about 1: 250.
[Invention 1074]
The composition of the present invention 1065, wherein the helper lipid is a phospholipid.
[Invention 1075]
The composition of the present invention 1065, wherein the phospholipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) or 1,2-dioreoil-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE).
[Invention 1076]
The composition of the present invention 1074, wherein the phospholipids and dendrimers are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20.
[Invention 1077]
The composition of any of the present inventions 1060-1076, essentially consisting of a dendrimer, nucleic acid, and one or more helper lipids.
[Invention 1078]
(A) The composition of any of the present inventions 1060-1077; and
(B) A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier.
[Invention 1079]
The pharmaceutical composition of the present invention 1078, wherein the pharmaceutically acceptable carrier is a solvent or solution.
[Invention 1080]
Orally, intraadiposally, intraarterial, intraarterial, intracranial, intradermal, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal. In the thoracic membrane, in the prostate, in the rectum, in the submucosal cavity, in the trachea, in the tumor, in the umbilical cord, in the vagina, in the vein, in the bladder, in the vitreous, and liposome-like. Topically, mucosally, parenterally, rectal, subconjunctival, subcutaneous, sublingual, topically, transbuccally, transdermally, transvaginally. , In a cream, in a lipid composition, via a catheter, via a wash, via a continuous infusion, through an infusion, through an inhalation, via an injection, via topical delivery, or localized. The pharmaceutical composition of the invention 1078 or 1079, formulated for administration via sexual perfusion.
[Invention 1081]
The pharmaceutical composition of the present invention 1080, which is formulated for intravenous or intraarterial injection.
[Invention 1082]
The pharmaceutical composition according to any one of the present inventions 1078 to 1081, which is formulated as a unit dose.
[Invention 1083]
A method of regulating gene expression, including the step of delivering nucleic acid to a cell, the composition of any of the present invention 1060-1082 or pharmaceutical under conditions sufficient to trigger the uptake of the nucleic acid into the cell. A method comprising contacting a composition with a cell.
[Invention 1084]
The method of the present invention 1083, in which cells are contacted in vitro or exvivo.
[Invention 1085]
The method of the present invention 1083 for contacting cells in vivo.
[Invention 1086]
The method of any of the present inventions 1083-1085, wherein regulation of gene expression is sufficient to treat a disease or disorder.
[Invention 1087]
The method of the present invention 1086, wherein the disease or disorder is cancer.
[Invention 1088]
A method for treating a disease or disorder in a patient, comprising the step of administering a pharmaceutically effective amount of any of the compositions of the present invention 1060 to 1082 or a pharmaceutical composition to a patient in need thereof.
[Invention 1089]
The method of the present invention 1088, wherein the disease or disorder is cancer.
[Invention 1090]
The method of the invention 1088 or 1089 further comprising the step of administering one or more additional cancer therapies to a patient.
[Invention 1091]
The method of the invention 1090, wherein the cancer therapy is a chemotherapeutic compound, surgery, radiation therapy, or immunotherapy.
[Invention 1092]
The method of any of the present inventions 1088-1091, wherein the composition or pharmaceutical composition is administered once to a patient.
[Invention 1093]
The method of any of 1088-1091 of the present invention, wherein the composition or pharmaceutical composition is administered to the patient twice or more times.
[Invention 1094]
The method of any of the present inventions 1088-1093, wherein the patient is a mammal.
[Invention 1095]
The method of the present invention 1094, wherein the patient is a human.
[Invention 1096]
Dendrimer of the following formula:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000093
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkenediyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or substituted forms of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6 respectively; or repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000094
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000095
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000096
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt.
Other objectives, features and advantages of the present disclosure will become apparent from the detailed description below. However, although showing a particular aspect of the invention, detailed description and specific embodiments will reveal to those skilled in the art various changes and modifications within the spirit and scope of the invention. It should be understood that it is given only as an example. It should be noted that just because a particular compound is attributed to a particular general formula does not mean that it can also belong to another general formula.

以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明のある種の局面をさらに実証するために含まれる。本発明は、本明細書において提示される特定の態様の詳細な説明と組み合わせて、これらの図面の1つもしくは複数を参照することによってさらによく理解されうる。 The following drawings form part of this specification and are included to further demonstrate certain aspects of the invention. The present invention may be better understood by reference to one or more of these drawings in combination with the detailed description of the particular embodiments presented herein.

図1A～1Dは、脆弱な肝臓がん内での低分子RNA療法には、腫瘍細胞に対する高い効能と正常細胞に対する低い毒性の組み合わせが必要とされることを示す。生体適合性の、エステルに基づくデンドリマーの化学官能性およびサイズを多様化するためのモジュール戦略により、低毒性と高インビボ低分子RNA送達効力とのバランスを保つデンドリマーの発見が可能とされた。直交反応は1,512個のG1モジュール方式の分解性デンドリマーの合成を促進し、それによって分子構造の数、サイズ、および化学的多様性を増加させた。各段階での分解性エステル結合の包含により、低い毒性が促進された。図1A: 低分子RNAはあまりに大きく、アニオン性でありすぎて、そのままで細胞に侵入することができない。RNAi機構を効率的に利用するために、送達担体は、多数の細胞外および細胞内障壁を通じて低分子RNAに付き添わねばならない。デンドリマー構造内の官能基の同一性および配置の微調整を可能にするモジュール方式のデザインが想定された。図1B: ライブラリは、連続的な直交反応を介して樹立された。第一に、一連の初期分枝中心(IBC)を有するアミンは、2つの分解性エステル基を含むAEMAの、より立体障害の少ないアクリレート基と定量的かつ選択的に反応した。生成物は次に、さまざまなチオールとのDMPP触媒反応を起こした。図1C: 複数の細胞外および細胞内送達障壁を克服するように低分子RNAを媒介する最適化された位相構造を有する分解性デンドリマーを同定するために、ライブラリを4つのゾーン: コア結合 - 周辺分安定化(ゾーンI)、コア結合 - 周辺部結合(ゾーンII)、コア安定化 - 周辺部安定化(ゾーンIII)、およびコア安定化 - 周辺部結合(ゾーンIV)に分ける。図1D: デンドリマーは、コアおよび周辺部のために化学的に多様なアミンおよびチオールで独立して調節される。選択されたアミンは2種類に分けられる: 1～6個の分枝種を生成するRNA結合用のイオン性アミンは1A～6Aと標識され、NP安定化用の疎水性アミンは1H～2Hと標識される。これらのアミンは、より高次デンドリマー世代により効力を増加させることが期待される。NP安定化のための疎水性アルキルアミンは、炭化水素の長さに基づいてSC1～SC19と標識される。化学的多様性を高めるために、アルコールおよびカルボン酸末端チオール(SO1～SO9)ならびにアミン官能化チオール(SN1～SN11)がライブラリデザインに含まれる。世代拡張反応を用いて、複数の分枝を有するG2～G4高次世代デンドリマーも合成された(図10Bおよび図11参照)。Figures 1A-1D show that small RNA therapy in fragile liver cancer requires a combination of high efficacy against tumor cells and low toxicity against normal cells. A modular strategy for diversifying the chemical functionality and size of biocompatible, ester-based dendrimers has enabled the discovery of dendrimers that balance low toxicity with high in vivo small RNA delivery efficacy. Orthogonal reactions facilitated the synthesis of 1,512 G1 modular degradable dendrimers, thereby increasing the number, size, and chemical diversity of molecular structures. The inclusion of degradable ester bonds at each step promoted low toxicity. Figure 1A: Small RNAs are too large and anionic to invade cells as they are. In order to utilize the RNAi mechanism efficiently, the delivery carrier must accompany the small RNA through a number of extracellular and intracellular barriers. A modular design was envisioned that allowed fine-tuning of the identity and placement of functional groups within the dendrimer structure. Figure 1B: The library was established through a continuous orthogonal reaction. First, amines with a series of early branch centers (IBCs) reacted quantitatively and selectively with the less sterically hindered acrylate groups of AEMA, which contained two degradable ester groups. The product then underwent a DMPP-catalyzed reaction with various thiols. Figure 1C: To identify degradable dendrimers with optimized phase structures that mediate small RNAs to overcome multiple extracellular and intracellular delivery barriers, the library is divided into four zones: core binding-periphery. Divided into substabilization (Zone I), core binding-peripheral coupling (Zone II), core stabilization-peripheral stabilization (Zone III), and core stabilization-peripheral coupling (Zone IV). Figure 1D: Dendrimers are independently regulated with chemically diverse amines and thiols for the core and periphery. The selected amines are divided into two types: ionic amines for RNA binding that produce 1-6 branch species are labeled 1A-6A, hydrophobic amines for NP stabilization are 1H-2H. Will be labeled. These amines are expected to increase efficacy with higher dendrimer generations. Hydrophobic alkylamines for NP stabilization are labeled SC1-SC19 based on the length of the hydrocarbon. Alcohol and carboxylic acid terminal thiols (SO1-SO9) and amine-functionalized thiols (SN1-SN11) are included in the library design to enhance chemical diversity. A generational expansion reaction was also used to synthesize G2-G4 high-generation dendrimers with multiple branches (see Figures 10B and 11). 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 図1Aの説明を参照のこと。See the description in Figure 1A. 50℃で5 mol%のブチル化ヒドロキシルトルエン(BHT)の存在下での2-(アクリロイルオキシ)エチルメタクリレート(AEMA)によるトリス(2-アミノエチル)アミン6A3の高いアザ-マイケル付加選択性を示す。トリス(2-アミノエチル)アミンの添加がないと、AEMA単独では24時間後に未反応であり、その変換は0%である。トリス(2-アミノエチル)アミンを添加した後、AEMA変換は、2時間後に82%前後、24時間後に98%であり、6つの分枝を有する第1世代デンドリマー6A3-G1を生成する。EAMAの1H NMR追跡によって反応を容易にモニターする目的で過剰なEAMA (6×0.05当量)を加えることに留意されたい。EAMA変換が完了しても、まだHaおよびHbの5%のシグナルが残存しているはずである。High aza-Michael addition selectivity of tris (2-aminoethyl) amine 6A3 by 2- (acryloyloxy) ethyl methacrylate (AEMA) in the presence of 5 mol% butylated hydroxyltoluene (BHT) at 50 ° C. .. Without the addition of tris (2-aminoethyl) amine, AEMA alone is unreacted after 24 hours and its conversion is 0%. After the addition of tris (2-aminoethyl) amine, the AEMA conversion is around 82% after 2 hours and 98% after 24 hours, producing a first generation dendrimer 6A3-G1 with 6 branches. Note that excess EAMA (6 × 0.05 equivalent) is added for the purpose of easily monitoring the reaction by 1 H NMR tracking of EAMA. After the EAMA conversion is complete, 5% of Ha and H b signals should still remain. 図2-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 2-1. 50℃で5 mol%のブチル化ヒドロキシルトルエン(BHT)の存在下での2-(アクリロイルオキシ)エチルメタクリレート(AEMA)による長鎖アルキル鎖テトラデシルアミン2H4の高いアザ-マイケル付加選択性を示す。AEMA単独は24時間後に未反応であり、その変換は0%である。テトラデシルアミンを添加した後、AEMA変換は、24時間後に97%前後であり、長鎖アルキル鎖コアを有する第1世代デンドリマー2H4-G1を生成する。EAMAの1H NMR追跡によって反応を容易にモニターする目的で過剰なEAMA (2×0.05当量)を加えることに留意されたい。EAMA変換が完了しても、まだHaおよびHbの5%のシグナルが残存しているはずである。It exhibits high aza-Michael addition selectivity of long-chain alkyl chain tetradecylamine 2H4 by 2- (acryloyloxy) ethylmethacrylate (AEMA) in the presence of 5 mol% butylated hydroxyltoluene (BHT) at 50 ° C. AEMA alone is unreacted after 24 hours and its conversion is 0%. After the addition of tetradecylamine, the AEMA conversion is around 97% after 24 hours, producing a first generation dendrimer 2H4-G1 with a long-chain alkyl chain core. Note that excess EAMA (2 × 0.05 equivalent) is added for the purpose of easily monitoring the reaction by 1 H NMR tracking of EAMA. After the EAMA conversion is complete, 5% of Ha and H b signals should still remain. 図3-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 3-1. 48時間DMSO-D6 400 μL中60℃での2-(ブチルアミノ)エタンチオール(6×1.2当量)もしくは1-テトラデカンチオール(6×1.2当量)による6A3-G1 (125 mM)のスルファ-マイケル付加を示す。チオール化合物の添加がないと、6A3-G1はDMSO-D6中60℃で48時間同一のままである。触媒としての(5 mol%)ジメチルフェニルホスフィン(DMPP)の添加により、6A3-G1は48時間以内にDMSO-D6中60℃で100%の変換収率で1-テトラデカンチオールと反応するが、DMPPなしでは6A3-G1の変換収率はわずか57%である。2-(ブチルアミノ)エタンチオールでの6A3-G1の変換収率は、おそらく2-(ブチルアミノ)エタンチオールのアミン基が触媒として作用しうるため、DMPPの添加の有無にかかわらずほぼ定量的である。6A3-G1は2つの二重結合でチオール反応物(6×0.1当量)を消費する(6×0.05当量) EAMAを含むので、過剰なチオール(6×0.2当量)が添加されることに留意されたい。Sulfa-Michael addition of 6A3-G1 (125 mM) with 2- (butylamino) ethanethiol (6 × 1.2 eq) or 1-tetradecanethiol (6 × 1.2 eq) at 60 ° C in DMSO-D6 400 μL for 48 hours. Is shown. Without the addition of the thiol compound, 6A3-G1 remains identical in DMSO-D6 at 60 ° C. for 48 hours. With the addition of (5 mol%) dimethylphenylphosphine (DMPP) as a catalyst, 6A3-G1 reacts with 1-tetradecanethiol in DMSO-D6 at 60 ° C. in 100% conversion yield within 48 hours, but DMPP. Without it, the conversion yield of 6A3-G1 is only 57%. The conversion yield of 6A3-G1 with 2- (butylamino) ethanethiol is almost quantitative with or without the addition of DMPP, probably because the amine group of 2- (butylamino) ethanethiol can act as a catalyst. Is. Note that 6A3-G1 contains an EAMA that consumes a thiol reactant (6 x 0.1 equivalent) with two double bonds (6 x 0.05 equivalent), so excess thiol (6 x 0.2 equivalent) is added. sea bream. 図4-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 4-1. 48時間DMSO-D6中60℃での2-(ブチルアミノ)エタンチオール(2×1.2当量)もしくは1-テトラデカンチオール(2×1.2当量)による2H4-G1 (125 mM)のスルファ-マイケル付加を示す。チオール化合物の添加がないと、2H4-G1はDMSO-D6中60℃で48時間同一のままである。触媒としての(5 mol%)ジメチルフェニルホスフィン(DMPP)の添加により、2H4-G1は48時間以内にDMSO-D6中60℃で100%の変換収率で1-テトラデカンチオールと反応するが、DMPPなしでは2H4-G1の変換収率はわずか51%である。2-(ブチルアミノ)エタンチオールでの2H4-G1の変換収率は、おそらく2-(ブチルアミノ)エタンチオールのアミン基が触媒として作用しうるため、DMPPの添加の有無にかかわらず定量的である。2H4-G1は2つの二重結合でチオール反応物(2×0.1当量)を消費する(2×0.05当量) EAMAを含むので、過剰なチオール(2×0.2当量)が添加されることに留意されたい。Sulfa-Michael addition of 2H4-G1 (125 mM) with 2- (butylamino) ethanethiol (2 × 1.2 eq) or 1-tetradecanethiol (2 × 1.2 eq) at 60 ° C. in DMSO-D6 for 48 hours. .. Without the addition of the thiol compound, 2H4-G1 remains identical in DMSO-D6 at 60 ° C. for 48 hours. With the addition of (5 mol%) dimethylphenylphosphine (DMPP) as a catalyst, 2H4-G1 reacts with 1-tetradecanethiol in DMSO-D6 at 60 ° C. in 100% conversion yield within 48 hours, but DMPP. Without it, the conversion yield of 2H4-G1 is only 51%. The conversion yield of 2H4-G1 with 2- (butylamino) ethanethiol is quantitative with or without the addition of DMPP, probably because the amine group of 2- (butylamino) ethanethiol can act as a catalyst. be. Note that 2H4-G1 contains an EAMA that consumes a thiol reactant (2 x 0.1 equivalent) with two double bonds (2 x 0.05 equivalent), so excess thiol (2 x 0.2 equivalent) is added. sea bream. 図5-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 5-1. 図6Aおよび6Bは、1,512個の第1世代分解性デンドリマーのライブラリが高い効率で樹立されたことを示す。図6A: さまざまな初期分枝中心(IBC)を有する異なるアミンCは、24時間50℃で5 mol%のブチル化ヒドロキシルトルエン(BHT)の存在下において正確な1:1の供給当量で2-(アクリロイルオキシ)エチルメタクリレート(AEMA)と反応した。1H NMRによって全42反応の変換収率はほぼ定量的である。図6B: 42個のC-L-G1の各々は、5% DMPPを有するDMSO 66 μL中の36個のチオール(P)の各々と小規模(平均でおよそ20 mg)で反応した。チオール濃度は750 mMであり、1An&1Hn、2An&2Hn、3An、4An、5An、および6Anの濃度は、それぞれ750 mM、275 mM、250 mM、187.5 mM、150 mMおよび125 mMである。いずれのチオール化合物の添加もないと、全42個のC-L-G1は60℃で48時間安定なままであった。SC4、SN8、およびSO9による全42の各反応は、ほぼ定量的な変換(1H NMRによって測定された)を有する。Figures 6A and 6B show that a library of 1,512 first-generation degradable dendrimers was established with high efficiency. Figure 6A: Different amines C with different initial branch centers (IBCs) at an accurate 1: 1 supply equivalent in the presence of 5 mol% butylated hydroxyltoluene (BHT) at 50 ° C for 24 hours 2- (Acryloyloxy) Reacted with ethyl methacrylate (AEMA). The conversion yields of all 42 reactions by 1 H NMR are almost quantitative. Figure 6B: Each of the 42 CL-G1s reacted with each of the 36 thiols (P) in 66 μL DMSO with 5% DMPP on a small scale (approximately 20 mg on average). The thiol concentration is 750 mM and the concentrations of 1An & 1Hn, 2An & 2Hn, 3An, 4An, 5An, and 6An are 750 mM, 275 mM, 250 mM, 187.5 mM, 150 mM and 125 mM, respectively. Without the addition of any thiol compound, all 42 CL-G1s remained stable at 60 ° C. for 48 hours. Each of the 42 reactions with SC4, SN8, and SO9 has a nearly quantitative conversion (measured by 1 H NMR). 図7A～7Cは、1,512個のG1DDのインビトロsiRNA送達スクリーニングによって、細胞内障壁を克服しうるデンドリマーの発見が可能とされ、構造-活性の関係が樹立されたことを示す(図7A)。図7B: デンドリマーナノ粒子(33 nM siLuc, n=3)による処理後のHeLa-Luc細胞におけるルシフェラーゼサイレンシングのヒートマップは、ゾーン活性の関係を示す。ルシフェラーゼ活性および細胞生存性を測定して、低毒性と高送達効力とのバランスを保つデンドリマーを同定した(図8中のさらなるデータを参照のこと)。図7C: 50%超のサイレンシングを可能にしたナノ粒子群の分析によって、細胞内送達障壁を克服するために最適化された位相構造を有するデンドリマーが同定された。娘ゾーンは、そのヒット率が一連の基準の下でその親ゾーンのヒット率よりも高い場合、さらに分析された。親ゾーンのヒット率はオレンジ色でマークされ、その娘群のヒット率の高い方もしくは低い方がそれぞれ緑色もしくは青色でマークされている。ライブラリ全体のおよそ6%が50%超の遺伝子サイレンシングを可能にした。コア結合 - 周辺部安定化ゾーンIは10%のヒット率を有した。ゾーンI内で、SC分枝を有するサブゾーンは15%をもたらしたが、SO分枝を有するサブゾーンには1%のヒット率しか有しなかった。SC分枝を有するサブゾーンでは、3～6分枝、SC5-8分枝、もしくはSC9-12分枝を有するデンドリマーは、siRNA送達を効率的に媒介するより高い機会を有した。Figures 7A-7C show that in vitro siRNA delivery screening of 1,512 G1DDs enabled the discovery of dendrimers capable of overcoming intracellular barriers and established a structure-activity relationship (Figure 7A). Figure 7B: Heatmaps of luciferase silencing in HeLa-Luc cells treated with dendrimer nanoparticles (33 nM siLuc, n = 3) show a relationship of zone activity. Luciferase activity and cell viability were measured to identify dendrimers that balance low toxicity with high delivery efficacy (see additional data in Figure 8). Figure 7C: Analysis of nanoparticles that allowed greater than 50% silencing identified dendrimers with a topological structure optimized to overcome the intracellular delivery barrier. The daughter zone was further analyzed if its hit rate was higher than that of its parent zone under a set of criteria. The hit rate of the parent zone is marked in orange, and the higher or lower hit rate of the daughter group is marked in green or blue, respectively. Approximately 6% of the entire library allowed over 50% gene silencing. Core Bonding-Peripheral Stabilization Zone I had a 10% hit rate. Within Zone I, subzones with SC branches yielded 15%, while subzones with SO branches had a hit rate of only 1%. In subzones with SC branches, dendrimers with 3-6 branches, SC5-8 branches, or SC9-12 branches had a higher opportunity to efficiently mediate siRNA delivery. 図7Aの説明を参照のこと。See description in Figure 7A. 図7Aの説明を参照のこと。See description in Figure 7A. 図7Aの説明を参照のこと。See description in Figure 7A. siLuc (33 nM siRNA、値はn=3の平均である)を含有する1,512個の第1世代分解性デンドリマー(G1DD) NPの添加後の細胞生存性を示す。G1DDは、12.5:1 (G1DD:siRNA)の重量比でホタルルシフェラーゼ標的化siRNA (siLuc)を含有するナノ粒子ならびに50:38:10:2 (G1DD:コレステロール:DSPC:lipid PEG)のモル比でヘルパー脂質コレステロール、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)および脂質PEG2000を含有するナノ粒子に製剤化された。細胞生存性をONE-Glo + Toxルシフェラーゼレポーターおよび細胞生存性アッセイ法(Promega)で、そのプロトコルにしたがうことによって測定した。未処理細胞に対して規準化することにより細胞生存性を得た。未処理対照(n=6)。実験サンプル(n=3)。Shows cell viability after addition of 1,512 first-generation degradable dendrimers (G1DD) NPs containing siLuc (33 nM siRNA, values are mean of n = 3). G1DD has nanoparticles containing firefly luciferase-targeted siRNA (siLuc) at a weight ratio of 12.5: 1 (G1DD: siRNA) and a molar ratio of 50:38: 10: 2 (G1DD: cholesterol: DSPC: lipid PEG). It was formulated into nanoparticles containing the helper lipid cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) and the lipid PEG2000. Cell viability was measured by the ONE-Glo + Tox luciferase reporter and cell viability assay (Promega) according to the protocol. Cell viability was obtained by standardizing for untreated cells. Untreated control (n = 6). Experimental sample (n = 3). 図8-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 8-1. 図8-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 8-1. 図9Aおよび9Bは、1,512個の第1世代分解性デンドリマー(G1DD)の細胞内siRNA送達活性を示す。G1DDは、12.5:1 (G1DD:siRNA)の重量比でホタルルシフェラーゼ標的化siRNA (siLuc)を含有するナノ粒子ならびに50:38:10:2 (G1DD:コレステロール:DSPC:lipid PEG)のモル比でヘルパー脂質コレステロール、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)および脂質PEG2000を含有するナノ粒子に製剤化された。図9A: 33 nM siRNAによるG1DDナノ粒子の処理後のホタルルシフェラーゼを安定的に発現するHeLa細胞のルシフェラーゼ活性低減のヒートマップを、樹状分析プロセスの内訳を記述するためのゾーンおよび領域に分けている(図9B部分を参照のこと)。細胞生存性およびルシフェラーゼ活性をONE-Glo + Toxルシフェラーゼレポーターおよび細胞生存性アッセイ法(Promega)で、そのプロトコルにしたがうことによって測定した。ルシフェラーゼ活性を未処理細胞のルシフェラーゼ活性および生存性に対して規準化することによりルシフェラーゼ低減を得た。未処理対照(n=6)。実験サンプル(n=3)。図9B: 50%超のルシフェラーゼ活性低減でヒット率を分析することにより、siRNAを媒介して細胞内送達障壁を克服するために最適化された構造を有する分解性デンドリマーを同定するためのデンドリマー由来樹木分析プロセスの利用。娘ゾーンは、そのヒット率が一連の基準の下でその親ゾーンのヒット率よりも高い場合、さらに分析される。親ゾーンのヒット率は黒の棒グラフであり、その娘群のヒット率の高い方もしくは低い方が青色もしくは赤色のフォントである。ライブラリ全体のおよそ6%が50%超の遺伝子サイレンシングを誘導した。コア結合 - 周辺部安定化ゾーン(ゾーンI)は10%のヒット率を有する。ゾーンI中で、SC分枝を有するサブゾーンは15%を有するが、SO分枝を有するサブゾーンは1%を有する。SC分枝を有するサブゾーンでは、3つ、4つ、5つ、もしくは6つの分枝SC5-8分枝またはSC9-12分枝を有するデンドリマーは、細胞内送達障壁を克服するためにsiRNAを効率的に媒介するより高い機会を有する。Figures 9A and 9B show the intracellular siRNA delivery activity of 1,512 first-generation degrading dendrimers (G1DD). G1DD has nanoparticles containing firefly luciferase-targeted siRNA (siLuc) at a weight ratio of 12.5: 1 (G1DD: siRNA) and a molar ratio of 50:38: 10: 2 (G1DD: cholesterol: DSPC: lipid PEG). It was formulated into nanoparticles containing the helper lipid cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) and the lipid PEG2000. Figure 9A: 33 The heatmap for reducing luciferase activity in HeLa cells that stably express firefly luciferase after treatment with nM siRNA is divided into zones and regions to describe the breakdown of the dendritic analysis process. (See Figure 9B). Cell viability and luciferase activity were measured by the ONE-Glo + Tox luciferase reporter and cell viability assay (Promega) according to the protocol. A reduction in luciferase was obtained by normalizing the luciferase activity to the luciferase activity and viability of untreated cells. Untreated control (n = 6). Experimental sample (n = 3). Figure 9B: Derived from dendrimers to identify degradable dendrimers with structures optimized to overcome intracellular delivery barriers mediated by siRNA by analyzing hit rates with luciferase activity reduction of> 50%. Utilization of the tree analysis process. The daughter zone is further analyzed if its hit rate is higher than that of its parent zone under a set of criteria. The hit rate of the parent zone is a black bar graph, and the higher or lower hit rate of the daughter group is the blue or red font. Approximately 6% of the entire library induced gene silencing over 50%. Core Bonding-The Peripheral Stabilization Zone (Zone I) has a 10% hit rate. In Zone I, the subzone with SC branch has 15%, while the subzone with SO branch has 1%. In subzones with SC branches, dendrimers with 3, 4, 5, or 6 branches SC5-8 or SC9-12 branches efficiently siRNA to overcome intracellular delivery barriers. Have a higher opportunity to mediate. 図9A-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 9A-1. 図9A-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 9A-1. 図10A～10Cは、系統的インビボsiRNA送達スクリーニングによって、細胞外障壁を克服することもできるデンドリマーがさらに同定されたことを示す。分析によって、予想される活性を有するさらなるデンドリマーをデザインするためのSARが提供された。図10A: 多様な構造を有する26個の第1世代分解性デンドリマーを、1 mg/kg (n=3)のsiRNA投与量でマウスにおける第VII因子ノックダウンについて評価した。PBS対照(n=3)。データは平均± s.dとして示される。図10B: 複数の分枝を有する分解性デンドリマーの合理的なデザインは、(I) 複数のIBCを有するポリアミンを選択すること、および(II) 世代拡張を介して分枝を増加させることによって達成された。天然ポリアミンであるスペルミジン5A5およびスペルミン6A4を利用した。世代拡張を介して複数の分枝を有する分解性デンドリマーを合成するために、1A2 (1個のIBC)、2A2および2A11 (2個のIBC)、3A3および3A5 (3個のIBC)、ならびに4A1および4A3 (4個のIBC)を選択した(図11も参照のこと)。図10C: 戦略IおよびIIを介して合理的にデザインされた分解性デンドリマー24個を、1 mg/kg (n=3)のsiRNA投与量でマウスにおける第VII因子ノックダウンについて評価した。PBS対照(n=3)。データは平均± s.dとして示される。合理的にデザインされたデンドリマーは、高いヒット率で活性であった。Figures 10A-10C show that systematic in vivo siRNA delivery screening has further identified dendrimers that can also overcome extracellular barriers. Analysis provided a SAR for designing additional dendrimers with expected activity. Figure 10A: Twenty-six first-generation degradable dendrimers with diverse structures were evaluated for factor VII knockdown in mice at a siRNA dose of 1 mg / kg (n = 3). PBS control (n = 3). The data are shown as mean ± s.d. Figure 10B: Reasonable design of degradable dendrimers with multiple branches is achieved by (I) selecting polyamines with multiple IBCs and (II) increasing branching through generational expansion. Was done. The natural polyamines spermidine 5A5 and spermine 6A4 were used. 1A2 (1 IBC), 2A2 and 2A11 (2 IBCs), 3A3 and 3A5 (3 IBCs), and 4A1 to synthesize degradable dendrimers with multiple branches via generational expansion. And 4A3 (4 IBCs) were selected (see also Figure 11). Figure 10C: Twenty-four reasonably designed degradable dendrimers via Strategies I and II were evaluated for factor VII knockdown in mice at a siRNA dose of 1 mg / kg (n = 3). PBS control (n = 3). The data are shown as mean ± s.d. The reasonably designed dendrimer was active with a high hit rate. 図10Aの説明を参照のこと。See description in Figure 10A. 図10Aの説明を参照のこと。See description in Figure 10A. 図10Aの説明を参照のこと。See description in Figure 10A. 世代拡張戦略によって複数の分枝を有する分解性デンドリマーを調製するための2A2および2A11 (2つのIBC)、3A3および3A5 (3つのIBC)、ならびに4A1および4A3 (4つのIBC)の合成経路を示す。Demonstrate the synthetic pathways of 2A2 and 2A11 (2 IBCs), 3A3 and 3A5 (3 IBCs), and 4A1 and 4A3 (4 IBCs) to prepare degradable dendrimers with multiple branches by a generational expansion strategy. .. 図11-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 11-1. 図11-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 11-1. 図11-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 11-1. 図11-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 11-1. 図12A～12Eは、高送達効力と低毒性とのバランスを保ちうるデンドリマーをさらに同定する、分解性デンドリマーのいくつかのインビボ毒性評価(95%超のインビボFVIIノックダウン)を示す。分解性デンドリマーNPのいくつかは、対照siRNA (siCTR)の結合後に(図12A)類似のサイズおよび(図12B)正味表面電荷を保有していた(図12Bの凡例に基づいて左から右へグラフ中にナノ粒子が描かれている)。C12-200リピドイドLNPは、同等なインビボ効力を有する非加水分解系の最良の例であるため、挑戦的な比較となった。図12C: 野生型マウス(p26)にいくつかのNPを4 mg siCTR/kg (100 mgデンドリマー/kgもしくは28 mg対照C12-200/kg)でi.v.注射した(n=3)。体重変化は、デンドリマーの同一性にしたがって製剤の間で変化したが、全てのNPが、正常なWTマウスにおいてほとんど無毒であった。図12D: 3 mg siCTR/kg (75 mg/kg 5A2-SC8および6A3-SC12もしくは21 mg/kg C12-200)の注射後の侵襲性MYC駆動腫瘍を担持するトランスジェニックマウス(p32)の体重変化(n=5)。図12E: 3 mg siCTR/kgの投与量(75 mgデンドリマー/kg)で5A2-SC8および6A3-SC12ナノ粒子を32、36、40、および44日目に注射したトランスジェニックマウスのカプラン-マイヤー生存曲線(n=5)。腫瘍担持マウス(脆弱な宿主)では、担体の毒性が悪化され、5A2-SC8のみが良好な耐容性を示すことができ、生存に影響を与えなかった。データは平均± s.dとして示される。統計分析は、(e) Mantel-Cox検定; n.s. P > 0.05; ＊P < 0.05で行った。Figures 12A-12E show some in vivo toxicity assessments (> 95% in vivo FVII knockdown) of degradable dendrimers that further identify dendrimers that can balance high delivery efficacy with low toxicity. Some of the degradable dendrimer NPs had similar sizes (Fig. 12A) and net surface charge (Fig. 12B) after binding of the control siRNA (siCTR) (figure from left to right based on the legend in Fig. 12B). Nanoparticles are drawn inside). C12-200 lipidoid LNP was a challenging comparison as it is the best example of a non-hydrolyzed system with comparable in vivo potency. Figure 12C: Wild-type mice (p26) were iv injected with 4 mg siCTR / kg (100 mg dendrimer / kg or 28 mg control C12-200 / kg) (n = 3). Body weight changes varied between formulations according to dendrimer identity, but all NPs were largely nontoxic in normal WT mice. Figure 12 D: Weight changes in transgenic mice (p32) carrying invasive MYC-driven tumors after injection of 3 mg siCTR / kg (75 mg / kg 5A2-SC8 and 6A3-SC12 or 21 mg / kg C12-200) (n = 5). Figure 12E: Kaplan-Meier survival of transgenic mice injected with 5A2-SC8 and 6A3-SC12 nanoparticles at days 32, 36, 40, and 44 at a dose of 3 mg siCTR / kg (75 mg dendrimer / kg). Curve (n = 5). In tumor-carrying mice (vulnerable hosts), carrier toxicity was exacerbated and only 5A2-SC8 was able to show good tolerance and did not affect survival. The data are shown as mean ± sd. Statistical analysis was performed by (e) Mantel-Cox test; ns P>0.05; * P <0.05. 図12Aの説明を参照のこと。See description in Figure 12A. 図12Aの説明を参照のこと。See description in Figure 12A. 図12Aの説明を参照のこと。See description in Figure 12A. 図12Aの説明を参照のこと。See description in Figure 12A. 図13Aおよび13Bは、侵襲性トランスジェニックMYC駆動肝臓腫瘍モデルを選択して、腫瘍成長の抑制のためにmiRNAを送達するモジュール方式の分解性デンドリマーの毒性および効力を評価した(Nguyen et al., 2014)ことを示す。図13A: LAP-tTa; TRE-MYCトランスジェニックマウスモデルを示す概略図。ドキシサイクリン(Dox)の非存在下もしくは存在下においてLAP-tTA導入遺伝子を呈する場合、肝臓特異的LAPプロモーターによってTRE-MYCがオンもしくはオフされる。図13B: いずれの処置もないと、肝臓腫瘍はp20～26頃に目に見え、その後、肝臓はp32までに小さな腫瘍で満たされ、最終的に腫瘍は大きくなり、肝臓サイズはp42～p60の時点で劇的に増加する。Figures 13A and 13B selected an invasive transgenic MYC-driven liver tumor model to assess the toxicity and efficacy of modular degradable dendrimers that deliver miRNAs for suppression of tumor growth (Nguyen et al., 2014) Indicates that. Figure 13A: Schematic diagram showing a LAP-tTa; TRE-MYC transgenic mouse model. When presenting the LAP-tTA transgene in the absence or presence of doxycycline (Dox), the liver-specific LAP promoter turns TRE-MYC on or off. Figure 13B: Without any treatment, liver tumors are visible around p20-26, after which the liver is filled with small tumors by p32, eventually the tumors grow and the liver size is p42-p60. It increases dramatically at some point. 図14A～14Cは、蛍光画像化によって肝臓内の腫瘍細胞へのsiRNAの送達が確認されることを示す。図14A: 41日齢時の侵襲性肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスの肉眼的解剖学および蛍光画像化。蛍光画像化は、Cy5.5標識siRNAと共に製剤化された5A2-SC8ナノ粒子が、1 mg Cy5.5-siRNA/kgのi.v.注射から24時間後に、がん性肝臓全体では大量のsiRNA蓄積を媒介し、脾臓および腎臓では微量の蓄積であったことを示す。5A2-SC8 NPがインビボでsiRNAを腫瘍細胞に送達できるかどうかをさらに確認するために、i.v.注射から24時間後に肝臓の腫瘍組織を収集し、OTCに包埋し、H＆E染色および共焦点画像化のため切片にした。図14B: H＆E染色によって、肝臓が腫瘍を含むことが確認される。腫瘍組織の同じスライドを共焦点画像化によってスキャンし、3つのチャネル: 核の場合にはDAPI (青色)、ファロイジン染色アクチンの場合にはFITC (緑色)、およびsiRNAの場合にはCy5.5 (赤色)の下で捕捉した。図14C: 同じ領域の共焦点画像化によって、5A2-SC8がsiRNAを肝臓内の腫瘍細胞に効率的に送達できることが示される。Figures 14A-14C show that fluorescence imaging confirms the delivery of siRNA to tumor cells in the liver. Figure 14A: Gross anatomy and fluorescence imaging of transgenic mice carrying invasive liver tumors at 41 days of age. Fluorescence imaging showed that 5A2-SC8 nanoparticles formulated with Cy5.5-labeled siRNA produced large amounts of siRNA accumulation throughout the cancerous liver 24 hours after iv injection of 1 mg Cy5.5-siRNA / kg. It mediates and indicates that there was a small amount of accumulation in the spleen and kidneys. To further confirm whether 5A2-SC8 NP can deliver siRNA to tumor cells in vivo, liver tumor tissue is collected 24 hours after iv injection, embedded in OTC, H & E staining and confocal imaging. Was cut into sections. Figure 14B: H & E staining confirms that the liver contains a tumor. The same slide of tumor tissue was scanned by confocal imaging and three channels: DAPI (blue) for nuclei, FITC (green) for phalloidin-stained actin, and Cy5.5 for siRNA (Cy5.5). Captured under (red). Figure 14C: Confocal imaging of the same region shows that 5A2-SC8 can efficiently deliver siRNA to tumor cells in the liver. 図14-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 14-1. 図15Aおよび15Bは、図15Aにおいて、正常な野生型マウスおよび肝臓腫瘍担持マウスにおけるCy5.5標識siRNAと共に製剤化された5A2-SC8 NPの生体内分布を、ならびに図15Bにおいて、腫瘍担持マウスからの肝臓のH＆E染色像を示す。5A2-SC8 NPは、1 mg siRNA/kgのi.v.注射から24時間後に正常マウスおよび肝臓腫瘍担持マウスの両方の肝臓全体におけるCy5.5標識siRNAの蓄積を媒介する。H＆E染色像は、腫瘍担持マウスの肝臓が腫瘍で満たされていること、および共焦点画像化に用いられたスライドが腫瘍細胞を含むことを示す。肝臓のサイズは、腫瘍が成長するにつれて増加することに留意されたい(図15A中の比例均等ボックスを参照のこと)。15A and 15B show the in vivo distribution of 5A2-SC8 NP formulated with Cy5.5-labeled siRNA in normal wild-type and liver tumor-bearing mice in FIG. 15A, and from tumor-bearing mice in FIG. 15B. The H & E stained image of the liver of the mouse is shown. 5A2-SC8 NP mediates the accumulation of Cy5.5-labeled siRNA throughout the liver in both normal and liver tumor-carrying mice 24 hours after i.v. injection of 1 mg siRNA / kg. H & E stained images show that the livers of tumor-bearing mice are filled with tumors and that the slides used for confocal imaging contain tumor cells. Note that the size of the liver increases as the tumor grows (see the proportional equality box in Figure 15A). 図15Aの説明を参照のこと。See description in Figure 15A. 図16A～16Hは、モジュール方式の分解性デンドリマーが、臨床的に関連性かつ侵襲性のMYC駆動遺伝子腫瘍モデルに治療用Let-7g miRNA模倣体を送達し、有意な生存利益をもたらしうることを示す。図16A: 5A2-SC8 NPは血液中および(図16B)採取された肝臓組織中で測定された場合に、MYC駆動肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスにおけるFVIIタンパク質のサイレンシングを可能にする(単回注射, 1 mg/kg, p26マウス、注射後48時間) (左にsiCTRおよび右にsiFVII)。図16C: 5A2-SC8 NPは、MYC駆動肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスの肝臓組織へのLet-7gの送達を可能にする(単回注射, 1 mg/kg, p26マウス, 注射後48時間)。Let-7g発現は有意に増加したが、他のLet-7ファミリーメンバーは影響を受けなかった(左にsiCTRおよび右にsiFVII)。図16D: 26日目(これは腫瘍発生の開始後である)に始めて61日目まで、MYC駆動肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスに毎週、1 mg/kg Let-7gのi.v.注射を行った。Let-7gを投与されたマウスは、明らかに小さい腹部を有していた。図16E: 腹囲は対照と比較して処置マウスでいっそう小さかった。図16F: Let-7g模倣体および対照模倣体注射マウスからの肝臓の代表的な画像は、腫瘍負荷の低減を示す。図16G: 5A2-SC8 NPの内部でのmiRNA模倣体の毎週の送達は、正常な体重増加に影響を与えず、その一方でC12-200 LNPの内部でのmiRNA模倣体の送達は体重減少および死を引き起こした。n=5。図16H: 26から61日までの毎週Let-7g送達により、生存が延長された。処置を受けない全ての対照マウス(n=9)および対照の非標的模倣体を含む5A2-SC8 NPを受けたマウス(n=5)は、出生後60日前後で死亡した。C12-200 LNP注射マウスは早期に死亡した(n=7)。C12-200 + Let-7g模倣体注射を受けた全てのマウスが死亡したので、#C12-200 + CTR模倣体実験は中止された(n=7)。5A2-SC8 NPの内部でのLet-7gを送達によって、顕著な生存利益が得られた。データは平均± s.dとして示される。統計分析を(a,b,c,e)両側スチューデントt検定、もしくは(h) Mantel-Cox検定で行った; n.s. P > 0.05; ＊P < 0.05; ＊＊P < 0.01; ＊＊＊P < 0.001; ＊＊＊＊P < 0.0001。Figures 16A-16H show that modular degradable dendrimers can deliver therapeutic Let-7g miRNA mimetics to clinically relevant and invasive MYC-driven gene tumor models with significant survival benefits. show. Figure 16A: 5A2-SC8 NP enables the silencing of FVII proteins in transgenic mice carrying MYC-driven liver tumors when measured in blood and (Figure 16B) in harvested liver tissue (single). Round injection, 1 mg / kg, p26 mouse, 48 hours post-injection) (siCTR on the left and siFVII on the right). Figure 16C: 5A2-SC8 NP enables delivery of Let-7 g to liver tissue in transgenic mice carrying MYC-driven liver tumors (single injection, 1 mg / kg, p26 mice, 48 hours post-injection). ). Let-7g expression was significantly increased, but other Let-7 family members were unaffected (siCTR on the left and siFVII on the right). Figure 16D: Weekly 1 mg / kg Let-7 g iv injections of transgenic mice carrying MYC-driven liver tumors from day 26 (after the onset of tumor development) to day 61. .. Mice treated with Let-7g had an apparently small abdomen. Figure 16E: Abdominal circumference was smaller in treated mice compared to controls. Figure 16F: Representative images of the liver from Let-7g mimetic and control mimetic injection mice show reduced tumor loading. Figure 16G: Weekly delivery of miRNA mimetics inside 5A2-SC8 NP does not affect normal weight gain, while delivery of miRNA mimetics inside C12-200 LNP results in weight loss and Caused death. n = 5. Figure 16 H: Weekly Let-7g delivery from 26 to 61 days prolongs survival. All untreated control mice (n = 9) and mice that received 5A2-SC8 NP containing control non-target mimetics (n = 5) died around 60 days after birth. C12-200 LNP-injected mice died prematurely (n = 7). The # C12-200 + CTR mimetic experiment was discontinued because all mice that received the C12-200 + Let-7g mimetic injection died (n = 7). Delivery of Let-7g inside 5A2-SC8 NP resulted in significant survival benefits. The data are shown as mean ± sd. Statistical analysis was performed by (a, b, c, e) two-sided Student's t-test or (h) Mantel-Cox test; ns P>0.05; * P <0.05; ** P <0.01; *** P <0.001; *** P <0.0001. 図16-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 16-1. 図16-1の説明を参照のこと。See the description in Figure 16-1. 図17A～17Cは、HeLa-Luc (図17A)、A549-Luc (図17B)、およびMDA-MB231-Luc (図17C)におけるコレステロール、リン脂質、およびPEG脂質の異なる組み合わせと共に製剤化されたデンドリマーナノ粒子を用いたsiLuc送達を示す。Figures 17A-17C are dendrimers formulated with different combinations of cholesterol, phospholipids, and PEG lipids in HeLa-Luc (Figure 17A), A549-Luc (Figure 17B), and MDA-MB231-Luc (Figure 17C). The siLuc delivery using nanoparticles is shown. 図17Aの説明を参照のこと。See description in Figure 17A. 図17Aの説明を参照のこと。See description in Figure 17A. 図18Aおよび18Bは、図18Aにおいて、siLucをHeLa-Lucに送達する際のDSPC脂質 vs. PEG-DMGを有するDOPE脂質による異なる組成の製剤の比較を示す。図18Bにおいて、siLucをHeLa-Lucに送達する際のDSPC脂質 vs. PEG-DHDを有するDOPE脂質による異なる組成の製剤の比較を示す。18A and 18B show a comparison of different composition formulations of DOPE lipids with DSPC lipids vs. PEG-DMG in delivering siLuc to HeLa-Luc in FIG. 18A. FIG. 18B shows a comparison of different composition formulations with DSPC lipids vs. DOPE lipids with PEG-DHD in delivering siLuc to HeLa-Luc. 図18Aの説明を参照のこと。See description in Figure 18A. デンドリマーもしくはZ120を含有するナノ粒子組成物を用い、ナノ粒子製剤中にリン脂質DSPC有りおよび無しでのsgRNA送達を示す。Nanoparticle compositions containing dendrimers or Z120 are used to show sgRNA delivery with and without phospholipid DSPC in nanoparticle formulations. 図20Aおよび20Bは、sgRNAのカプセル封入率(図20A)およびHeLa-Luc-Cas9細胞における送達(図20B)を示す。20A and 20B show encapsulation rates of sgRNA (FIG. 20A) and delivery in HeLa-Luc-Cas9 cells (FIG. 20B). 図20Aの説明を参照のこと。See description in Figure 20A. 図21Aおよび21Bは、Luc mRNAが24時間のインキュベーション(図21A)および48時間のインキュベーション(図21B)後に送達されているIGROV細胞の生存性を示す。21A and 21B show the viability of IGROV cells to which Luc mRNA is delivered after a 24-hour incubation (FIG. 21A) and a 48-hour incubation (FIG. 21B). 図21Aの説明を参照のこと。See description in Figure 21A. mCherry mRNAによる処理後の細胞の蛍光顕微鏡検査を示し、それらの細胞へのmRNAの送達を示す。Fluorescence microscopy of cells after treatment with mCherry mRNA is shown and delivery of mRNA to those cells is shown.

例示的な態様の説明
いくつかの局面において、本開示は、核酸の担体として使用されうるリポカチオン性デンドリマーを提供する。いくつかの態様において、デンドリマーは、生理学的条件下で分解を起こす1つもしくは複数の基を含む。いくつかの態様において、デンドリマーは、デンドリマーおよび1つもしくは複数の核酸を含む組成物に製剤化される。これらの組成物はまた、コレステロールおよび/またはリン脂質のような1つもしくは複数のヘルパー脂質をさらに含みうる。最後に、いくつかの局面において、本開示はまた、デンドリマー組成物を用いて核酸治療用物質で処置されうる1つもしくは複数の疾患を処置する方法を提供する。 Description of Exemplary Aspects In some aspects, the present disclosure provides lipocationic dendrimers that can be used as carriers of nucleic acids. In some embodiments, the dendrimer comprises one or more groups that undergo degradation under physiological conditions. In some embodiments, the dendrimer is formulated into a composition comprising the dendrimer and one or more nucleic acids. These compositions may also further comprise one or more helper lipids such as cholesterol and / or phospholipids. Finally, in some aspects, the disclosure also provides a method of treating one or more diseases that can be treated with a nucleic acid therapeutic agent using a dendrimer composition.

A. 化学的定義
化学基の文脈において用いられる場合:「水素」は-Hを意味し; 「ヒドロキシ」は-OHを意味し; 「オキソ」は=Oを意味し; 「カルボニル」は-C(=O)-を意味し; 「カルボキシ」は-C(=O)OH (-COOHもしくは-CO2Hとも書かれる)を意味し; 「ハロ」は独立して-F、-Cl、-Brもしくは-Iを意味し; 「アミノ」は-NH2を意味し; 「ヒドロキシアミノ」は-NHOHを意味し; 「ニトロ」は-NO2を意味し; イミノは=NHを意味し; 「シアノ」は-CNを意味し; 「イソシアネート」は-N=C=Oを意味し; 「アジド」は-N3を意味し; 一価の文脈において「リン酸塩」は-OP(O)(OH)2もしくはその脱プロトン化形態を意味し; 二価の文脈において「リン酸塩」は-OP(O)(OH)O-もしくはその脱プロトン化形態を意味し; 「メルカプト」は-SHを意味し; および「チオ」は=Sを意味し; 「スルホニル」は-S(O)2-を意味し; 「ヒドロキシスルホニル」は-S(O)2OHを意味し; 「スルホンアミド」は-S(O)2NH2を意味し; ならびに「スルフィニル」は-S(O)-を意味する。 A. Chemical definition When used in the context of chemical groups: "hydrogen" means -H; "hydroxy" means -OH; "oxo" means = O; "carbonyl" means -C (= O)-means; "carboxy" means -C (= O) OH (also written as -COOH or -CO 2 H); "halo" independently means -F, -Cl,- Br or -I; "amino" means -NH 2 ; "hydroxyamino" means -NHOH; "nitro" means -NO 2 ; imino means = NH; ""Cyano" means -CN; "isocyanate" means -N = C = O; "azid" means -N 3 ; "phosphate" in monovalent context is -OP (O) (OH) 2 or its deprotonized form; in a divalent context, "phosphate" means -OP (O) (OH) O- or its deprotonated form; "mercapto"- SH means SH; and "thio" means = S; "sulfonyl" means -S (O) 2- ; "hydroxysulfonyl" means -S (O) 2 OH; "sulfonamide""" Means -S (O) 2 NH 2 ; and "sulfinyl" means -S (O)-.

化学式の文脈において、記号「-」は単結合を意味し、「=」は二重結合を意味し、および「≡」は三重結合を意味する。記号

Figure 2022031692000097
は任意の結合を表し、これは存在する場合、単結合もしくは二重結合のどちらかである。記号
Figure 2022031692000098
は単結合もしくは二重結合を表す。したがって、例えば、式
Figure 2022031692000099
は
Figure 2022031692000100
を含む。そのような環原子は2つ以上の二重結合の一部を形成しないことが理解される。さらに、共有結合記号「-」は、1個もしくは2個のステレオジェン原子を連結する場合、いかなる好ましい立体化学も示さないことに留意されたい。そうではなく、それは全ての立体異性体およびその混合物を網羅する。記号
Figure 2022031692000101
は結合を横切って垂直に描かれた場合
Figure 2022031692000102
基の結合点を示す。読者が結合点を明確に特定するのを補助するために、結合点は、典型的には、より大きな基についてこのようなやり方でのみ特定されることに留意されたい。記号
Figure 2022031692000103
は、くさびの太端に結合した基が「頁の外」にある単結合を意味する。記号
Figure 2022031692000104
は、くさびの太端に結合した基が「頁の中に」ある単結合を意味する。記号
Figure 2022031692000105
は、二重結合の周りの幾何(例えば、EもしくはZのどちらか)が定義されていない単結合を意味する。それゆえ、両方の選択肢、およびそれらの組み合わせが意図される。本出願において示される構造の原子上のいずれの未定義の原子価も、その原子に結合した水素原子を暗示する。炭素原子上の太点は、その炭素に結合している水素が紙面の外へ配向していることを示す。 In the context of chemical formulas, the symbol "-" means a single bond, "=" means a double bond, and "≡" means a triple bond. symbol
Figure 2022031692000097
Represents any bond, which, if present, is either a single bond or a double bond. symbol
Figure 2022031692000098
Represents a single bond or a double bond. So, for example, an expression
Figure 2022031692000099
teeth
Figure 2022031692000100
including. It is understood that such ring atoms do not form part of more than one double bond. Furthermore, it should be noted that the covalent bond symbol "-" does not indicate any preferred stereochemistry when concatenating one or two stereogen atoms. Instead, it covers all stereoisomers and mixtures thereof. symbol
Figure 2022031692000101
Is drawn vertically across the bond
Figure 2022031692000102
Indicates the bonding point of the group. Note that, to help the reader clearly identify the junction, the junction is typically identified only in this way for larger groups. symbol
Figure 2022031692000103
Means a single bond whose group attached to the thick end of the wedge is "outside the page". symbol
Figure 2022031692000104
Means a single bond "in the page" with a group attached to the thick end of the wedge. symbol
Figure 2022031692000105
Means a single bond with no defined geometry around the double bond (eg, either E or Z). Therefore, both options, and combinations thereof, are intended. Any undefined valence on an atom of the structure shown in this application implies a hydrogen atom attached to that atom. Thick dots on a carbon atom indicate that the hydrogen bonded to that carbon is oriented out of the paper.

基「R」が、例えば、式:

Figure 2022031692000106
において、環系上に「浮遊基」として描かれているなら、Rは、安定な構造が形成される限り、描写された、暗示された、または明確に定義された水素を含む、いずれかの環原子に結合した任意の水素原子に取って代わりうる。基「R」が、例えば式:
Figure 2022031692000107
にあるように、縮合環系上に「浮遊基」として描かれているなら、Rは、特別の定めのない限り、縮合環のいずれかの環原子のいずれかに結合した任意の水素に取って代わりうる。置換可能な水素には、安定な構造が形成される限り、描かれた水素(例えば、上記の式中の窒素に結合した水素)、含意された水素(例えば、示されていないが、存在するものと理解される上記の式の水素)、明確に定義された水素、および存在が環原子の同一性に依る任意の水素(例えば、Xが-CH-に等しい場合、基Xに結合した水素)が含まれる。描かれた例において、Rは、縮合環系の5員環もしくは6員環のどちらかに存在しうる。上記の式において、括弧で囲まれた基「R」の直後の下付き文字「y」は数値変数を表す。特別の定めのない限り、この変数は、環もしくは環系の置換可能な水素原子の最大数によってのみ制限される、0、1、2、もしくは2より大きい任意の整数とすることができる。 The group "R" is, for example, the expression:
Figure 2022031692000106
In, if depicted as a "floating group" on the ring system, R may contain either depicted, implied, or well-defined hydrogen, as long as a stable structure is formed. It can replace any hydrogen atom bonded to a ring atom. The group "R" is, for example, the formula:
Figure 2022031692000107
If depicted as a "floating group" on a fused ring system, as in, R is taken for any hydrogen attached to any of the ring atoms of the fused ring, unless otherwise specified. Can be replaced. Substitutable hydrogens include drawn hydrogens (eg, hydrogen bound to nitrogen in the above equation), implied hydrogens (eg, not shown, but present) as long as a stable structure is formed. Hydrogen of the above equation understood to be), well-defined hydrogen, and any hydrogen whose existence depends on the identity of the ring atom (eg, hydrogen attached to the group X if X is equal to -CH-). ) Is included. In the example depicted, R can be on either the 5- or 6-membered ring of the fused ring system. In the above equation, the subscript "y" immediately after the base "R" enclosed in parentheses represents a numeric variable. Unless otherwise specified, this variable can be any integer greater than 0, 1, 2, or 2 limited only by the maximum number of substitutable hydrogen atoms in the ring or ring system.

化学基および化合物クラスの場合、基もしくはクラスにおける炭素原子の数は以下のように示される: 「Cn」は基/クラスにおける炭素原子の正確な数(n)を定義する。「C≦n」は、基/クラスに入ることができる炭素原子の最大数(n)を定義し、最小数は対象となっている基/クラスに対して可能な限り小さいものとなり、例えば、基「アルケニル(C≦8)」もしくはクラス「アルケン(C≦8)」における炭素原子の最小数は2であるものと理解される。1～10個の炭素原子を有するアルコキシ基を示す「アルコキシ(C≦10)」と比較されたい。「Cn-n'」は、基中の炭素原子の最小数(n)と最大数(n')の両方を定義する。したがって、「アルキル(C2～10)」は、2～10個の炭素原子を有するアルキル基を示す。これらの炭素数インジケータは、それが修飾する化学基もしくはクラスの前もしくは後にあってもよく、意味のいずれの変化も示すことなく、括弧で囲まれていてもいなくてもよい。したがって、「C5オレフィン」、「C5-オレフィン」、「オレフィン(C5)」および「オレフィンC5」という用語は、全て同意語である。 For chemical groups and compound classes, the number of carbon atoms in a group or class is shown below: "Cn" defines the exact number (n) of carbon atoms in a group / class. “C ≦ n” defines the maximum number (n) of carbon atoms that can enter a group / class, the minimum number being as small as possible with respect to the group / class of interest, for example. It is understood that the minimum number of carbon atoms in the group "alkenyl (C ≤ 8) " or class "alkene (C ≤ 8) " is 2. Compare with "alkoxy (C ≤ 10) ", which indicates an alkoxy group having 1 to 10 carbon atoms. "Cn-n'" defines both the minimum number (n) and the maximum number (n') of carbon atoms in the group. Therefore, "alkyl (C2-10) " refers to an alkyl group having 2-10 carbon atoms. These carbon number indicators may be before or after the chemical group or class to which they are modified and may or may not be enclosed in parentheses without showing any change in meaning. Therefore, the terms "C5 olefin", "C5-olefin", "olefin (C5) " and "olefin C5 " are all synonymous.

「飽和した」という用語は、化合物もしくは化学基を修飾するために用いられる場合、化合物または化学基が、以下に記載の場合を除いて、炭素-炭素二重結合なしおよび炭素-炭素三重結合なしを意味する。この用語が原子を修飾するために用いられる場合、その原子が任意の二重結合もしくは三重結合の一部ではないことを意味する。飽和基の置換型の場合、1つもしくは複数の炭素酸素二重結合もしくは炭素窒素二重結合が存在しうる。そのような結合が存在するなら、ケト-エノール互変異性もしくはイミン/エナミン互変異性の一部として生じうる炭素-炭素二重結合は排除されない。「飽和した」という用語が物質の溶液を修飾するために用いられる場合、その物質がそれ以上その溶液に溶解しえないことを意味する。 When the term "saturated" is used to modify a compound or chemical group, the compound or chemical group has no carbon-carbon double bonds and no carbon-carbon triple bonds, except as described below. Means. When the term is used to modify an atom, it means that the atom is not part of any double or triple bond. In the case of the substituted type of saturated group, there may be one or more carbon oxygen double bonds or carbon nitrogen double bonds. The presence of such bonds does not rule out carbon-carbon double bonds that can occur as part of keto-enol tautomer or imine / enamine tautomer. When the term "saturated" is used to modify a solution of a substance, it means that the substance can no longer be dissolved in that solution.

「脂肪族」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、そのように修飾された化合物もしくは化学基は、非環式もしくは環式であるが、非芳香族の炭化水素化合物もしくは基であることを示す。脂肪族化合物/基において、炭素原子は、直鎖、分枝鎖、もしくは非芳香族環(脂環式)において一緒に連結されることができる。脂肪族化合物/基は、一重炭素-炭素結合によって連結された飽和(アルカン/アルキル)、あるいは1つもしくは複数の炭素-炭素二重結合(アルケン/アルケニル)または1つもしくは複数の炭素-炭素三重結合(アルキン/アルキニル)による不飽和であることができる。 When the term "aliphatic" is used without the "substituted" modifier, such modified compounds or chemical groups are acyclic or cyclic, but non-aromatic hydrocarbons. Indicates that it is a compound or group. In aliphatic compounds / groups, carbon atoms can be linked together in a straight chain, branched chain, or non-aromatic ring (alicyclic). The aliphatic compound / group is saturated (alkane / alkyl) linked by a single carbon-carbon bond, or one or more carbon-carbon double bonds (alkene / alkenyl) or one or more carbon-carbon triple bonds. It can be unsaturated due to binding (alkyne / alkynyl).

「芳香族」という用語は、化合物もしくは化学基原子を修飾するために用いられる場合、環を形成する結合の相互作用によって安定化された原子の平面不飽和環を含む化合物もしくは化学基を意味する。 The term "aromatic", when used to modify a compound or chemical group atom, means a compound or chemical group containing a planar unsaturated ring of atoms stabilized by the interaction of the bonds forming the ring. ..

「アルキル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての炭素原子、直鎖もしくは分枝鎖非環式構造を有し、炭素および水素以外の原子を有していない、一価の飽和脂肪族基をいう。基-CH3 (Me)、-CH2CH3 (Et)、-CH2CH2CH3 (n-Prもしくはプロピル)、-CH(CH3)2 (i-Pr、iPrもしくはイソプロピル)、-CH2CH2CH2CH3 (n-Bu)、-CH(CH3)CH2CH3 (sec-ブチル)、-CH2CH(CH3)2 (イソブチル)、-C(CH3)3 (tert-ブチル、t-ブチル、t-BuもしくはtBu)、および-CH2C(CH3)3 (neo-ペンチル)は、アルキル基の非限定的な例である。「アルカンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての1つもしくは2つの飽和炭素原子、直鎖もしくは分枝鎖非環式構造を有し、炭素-炭素二重もしくは三重結合を有しておらず、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、二価の飽和脂肪族基をいう。基-CH2- (メチレン)、-CH2CH2-、-CH2C(CH3)2CH2-、および-CH2CH2CH2-はアルカンジイル基の非限定的な例である。「アルカン」は、Rが、この用語が上記で定義される通りのアルキルである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。以下の基は置換アルキル基の非限定的な例である: -CH2OH、-CH2Cl、-CF3、-CH2CN、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OCH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)CH3、-CH2OCH3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2、および-CH2CH2Cl。「ハロアルキル」という用語は、置換アルキルの一部であり、炭素、水素およびハロゲン以外の他の原子が存在しないように、水素原子の置き換えがハロ(すなわち、-F、-Cl、-Br、もしくは-I)に限定されている。基-CH2Clは、ハロアルキルの非限定的な例である。「フルオロアルキル」という用語は、置換アルキルの一部であり、炭素、水素およびフッ素以外の他の原子が存在しないように、水素原子の置き換えがフルオロに限定されている。基-CH2F、-CF3、および-CH2CF3はフルオロアルキル基の非限定的な例である。 The term "alkyl", when used without the modifier "substituted", has a carbon atom as a bond point, a straight or branched chain acyclic structure, and has atoms other than carbon and hydrogen. A monovalent saturated aliphatic group that has not been used. Group -CH 3 (Me), -CH 2 CH 3 (Et), -CH 2 CH 2 CH 3 (n-Pr or propyl), -CH (CH 3 ) 2 (i-Pr, i Pr or isopropyl), -CH 2 CH 2 CH 2 CH 3 (n-Bu), -CH (CH 3 ) CH 2 CH 3 (sec-butyl), -CH 2 CH (CH 3 ) 2 (isobutyl), -C (CH 3 ) 3 (tert-butyl, t-butyl, t-Bu or t Bu), and -CH 2 C (CH 3 ) 3 (neo-pentyl) are non-limiting examples of alkyl groups. The term "alkanediyl", when used without the modifier "substituted", has one or two saturated carbon atoms as bond points, a straight or branched acyclic structure, and carbon. -A divalent saturated aliphatic group that does not have a carbon double or triple bond and has no atoms other than carbon and hydrogen. The groups -CH 2- (methylene), -CH 2 CH 2- , -CH 2 C (CH 3 ) 2 CH 2- , and -CH 2 CH 2 CH 2- are non-limiting examples of alkanediyl groups. .. "Alkane" refers to a class of compounds having the formula HR, where R is alkyl as the term is defined above. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 . The following groups are non-limiting examples of substituted alkyl groups: -CH 2 OH, -CH 2 Cl, -CF 3 , -CH 2 CN, -CH 2 C (O) OH, -CH 2 C (O) ) OCH 3 , -CH 2 C (O) NH 2 , -CH 2 C (O) CH 3 , -CH 2 OCH 3 , -CH 2 OC (O) CH 3 , -CH 2 NH 2 , -CH 2 N (CH 3 ) 2 , and -CH 2 CH 2 Cl. The term "haloalkyl" is part of a substituted alkyl and the substitution of a hydrogen atom is halo (ie, -F, -Cl, -Br, or so that there are no other atoms other than carbon, hydrogen and halogen. -I) is limited. Group-CH 2 Cl is a non-limiting example of haloalkyl. The term "fluoroalkyl" is part of the substituted alkyl and the substitution of the hydrogen atom is limited to fluoro so that there are no other atoms other than carbon, hydrogen and fluorine. The groups -CH 2 F, -CF 3 , and -CH 2 CF 3 are non-limiting examples of fluoroalkyl groups.

「シクロアルキル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての炭素原子を有し、該炭素原子は1つもしくは複数の非芳香環構造の一部を形成し、炭素-炭素二重もしくは三重結合を有しておらず、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、一価の飽和脂肪族基をいう。非限定的な例としては、-CH(CH2)2 (シクロプロピル)、シクロブチル、シクロペンチル、もしくはシクロヘキシル(Cy)が挙げられる。「シクロアルカンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての2つの炭素原子を有し、炭素-炭素二重もしくは三重結合を有しておらず、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、二価の飽和脂肪族基をいう。基

Figure 2022031692000108
は、シクロアルカンジイル基の非限定的な例である。「シクロアルカン」は、Rが、この用語が上記で定義される通りのシクロアルキルである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 The term "cycloalkyl", when used without the modifier "substituted", has a carbon atom as a bond, the carbon atom forming part of one or more non-aromatic ring structures. A monovalent saturated aliphatic group that does not have a carbon-carbon double or triple bond and has no atoms other than carbon and hydrogen. Non-limiting examples include -CH (CH 2 ) 2 (cyclopropyl), cyclobutyl, cyclopentyl, or cyclohexyl (Cy). The term "cycloalkanediyl", when used without the modifier "substituted", has two carbon atoms as bond points and does not have a carbon-carbon double or triple bond. A divalent saturated aliphatic group having no atoms other than carbon and hydrogen. Basic
Figure 2022031692000108
Is a non-limiting example of a cycloalkanediyl group. "Cycloalkane" refers to a class of compounds having the formula HR, where R is cycloalkyl as the term is defined above. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 .

「アルケニル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての炭素原子、直鎖もしくは分枝鎖非環式構造、少なくとも1つの非芳香族炭素-炭素二重結合を有し、炭素-炭素三重結合を有しておらず、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、一価の不飽和脂肪族基をいう。非限定的な例としては、-CH=CH2 (ビニル)、-CH=CHCH3、-CH=CHCH2CH3、-CH2CH=CH2 (アリル)、-CH2CH=CHCH3、および-CH=CHCH=CH2が挙げられる。「アルケンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての2つの炭素原子、直鎖もしくは分枝鎖、直鎖もしくは分枝鎖非環式構造、少なくとも1つの非芳香族炭素-炭素二重結合を有し、炭素-炭素三重結合を有しておらず、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、二価の不飽和脂肪族基をいう。基-CH=CH-、-CH=C(CH3)CH2-、-CH=CHCH2-、および-CH2CH=CHCH2-はアルケンジイル基の非限定的な例である。アルケンジイル基は脂肪族であるが、両端で連結されると、この基は芳香族構造の一部を形成することから除外されないということが知られている。「アルケン」および「オレフィン」という用語は同意語であり、Rはこの用語が、上記で定義される通りのアルケニルである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。同様に、「末端アルケン」および「α-オレフィン」という用語は同意語であり、1つだけの炭素-炭素二重結合を有し、その結合は分子の末端のビニル基の一部であるアルケンをいう。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。基-CH=CHF、-CH=CHClおよび-CH=CHBrは置換アルケニル基の非限定的な例である。 The term "alkenyl", when used without the modifier "substituted", is a carbon atom as a bond, a straight or branched acyclic structure, at least one non-aromatic carbon-carbon double. A monovalent unsaturated aliphatic group having a bond, no carbon-carbon triple bond, and no atoms other than carbon and hydrogen. Non-limiting examples are -CH = CH 2 (vinyl), -CH = CHCH 3 , -CH = CHCH 2 CH 3 , -CH 2 CH = CH 2 (allyl), -CH 2 CH = CHCH 3 , And -CH = CHCH = CH 2 . The term "alkendyl", when used without the modifier "substituted", has two carbon atoms as bond points, a straight or branched, straight or branched acyclic structure, at least one. A divalent unsaturated aliphatic group having two non-aromatic carbon-carbon double bonds, no carbon-carbon triple bond, and no atoms other than carbon and hydrogen. The groups -CH = CH-, -CH = C (CH 3 ) CH 2- , -CH = CHCH 2- , and -CH 2 CH = CHCH 2- are non-limiting examples of arcendyl groups. Although the arcendyl group is aliphatic, it is known that when linked at both ends, this group is not excluded from forming part of the aromatic structure. The terms "alkene" and "olefin" are synonymous, and R refers to a class of compounds having the formula HR, the term being an alkenyl as defined above. Similarly, the terms "terminal alkene" and "α-olefin" are synonymous and have only one carbon-carbon double bond, the bond being part of the vinyl group at the end of the molecule. To say. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 . The groups -CH = CHF, -CH = CHCl and -CH = CHBr are non-limiting examples of substituted alkenyl groups.

「アルキニル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての炭素原子、直鎖もしくは分枝鎖非環式構造、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有し、かつ炭素および水素以外の原子を有していない、一価の不飽和脂肪族基をいう。本明細書において用いられる場合、アルキニルという用語は、1つもしくは複数の非芳香族炭素-炭素二重結合の存在を除外しない。基-C≡CH、-C≡CCH3、および-CH2C≡CCH3はアルキニル基の非限定的な例である。「アルキン」は、Rがアルキニルである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 The term "alkynyl", when used without the modifier "substituted", has a carbon atom as a bond, a straight or branched acyclic structure, and at least one carbon-carbon triple bond. A monovalent unsaturated aliphatic group having no atoms other than carbon and hydrogen. As used herein, the term alkynyl does not preclude the presence of one or more non-aromatic carbon-carbon double bonds. The groups -C≡CH, -C≡CCH 3 , and -CH 2 C≡CCH 3 are non-limiting examples of alkynyl groups. "Alkyne" refers to a class of compounds having the formula HR, where R is an alkynyl. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 .

「アリール」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての芳香族炭素原子を有し、該炭素原子は1つもしくは複数の6員芳香環構造の一部を形成し、環原子は全て炭素であり、かつ基は炭素および水素以外の原子からならない、一価の不飽和芳香族基をいう。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。本明細書において用いられる場合、この用語は、第1の芳香環もしくは存在する任意のさらなる芳香環に結合された、1つもしくは複数のアルキルもしくはアラルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。アリール基の非限定的な例としては、フェニル(Ph)、メチルフェニル、(ジメチル)フェニル、-C6H4CH2CH3 (エチルフェニル)、ナフチル、およびビフェニルから誘導される一価の基が挙げられる。「アレーンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての2つの芳香族炭素原子を有し、該炭素原子は1つもしくは複数の6員芳香環構造の一部を形成し、環原子は全て炭素であり、かつ一価の基は炭素および水素以外の原子からならない、二価の芳香族基をいう。本明細書において用いられる場合、この用語は、第1の芳香環もしくは存在する任意のさらなる芳香環に結合された、1つもしくは複数のアルキル、アリールもしくはアラルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。非縮合環は下記の1つもしくは複数を介して連結されうる: 共有結合、アルカンジイル、もしくはアルケンジイル基(炭素数の制限が許容する)。アレーンジイル基の非限定的な例としては、

Figure 2022031692000109
が挙げられる。 The term "aryl", when used without the modifier "substituted", has an aromatic carbon atom as a bond, the carbon atom being part of one or more 6-membered aromatic ring structures. A monovalent unsaturated aromatic group in which all ring atoms are carbon and the group consists of atoms other than carbon and hydrogen. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. As used herein, the term is the presence of one or more alkyl or aralkyl groups (as limited by the number of carbon atoms allows) attached to a first aromatic ring or any additional aromatic ring present. Do not exclude. Non-limiting examples of aryl groups are monovalent groups derived from phenyl (Ph), methylphenyl, (dimethyl) phenyl, -C 6 H 4 CH 2 CH 3 (ethylphenyl), naphthyl, and biphenyl. Can be mentioned. The term "arene diyl", when used without the modifier "substituted", has two aromatic carbon atoms as bonding points, the carbon atom of which is one or more 6-membered aromatic ring structures. It is a divalent aromatic group that forms a part, all ring atoms are carbon, and the monovalent group consists of atoms other than carbon and hydrogen. As used herein, the term is one or more alkyl, aryl or aralkyl groups attached to a first aromatic ring or any additional aromatic ring present (a limitation on the number of carbons allows). Do not exclude the existence of. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. Non-condensed rings can be linked via one or more of the following: covalent bonds, alkanediyl, or alkendiyl groups (carbon number restrictions allow). As a non-limiting example of an arrangeyl group,
Figure 2022031692000109
Can be mentioned.

「アレーン」は、Rが、その用語が上記で定義される通りのアリールである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。ベンゼンおよびトルエンはアレーンの非限定的な例である。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 "Alane" refers to a class of compounds having the formula HR, where R is an aryl as the term is defined above. Benzene and toluene are non-limiting examples of arene. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 .

「アラルキル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、アルカンジイルおよびアリールという用語がそれぞれ前述の定義に一致した様式で用いられる、一価の基-アルカンジイル-アリールをいう。非限定的な例は、フェニルメチル(ベンジル, Bn)および2-フェニル-エチルである。アラルキルという用語が「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、アルカンジイルおよび/もしくはアリール基からの1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。置換アラルキルの非限定的な例は、(3-クロロフェニル)-メチル、および2-クロロ-2-フェニル-エタ-1-イルである。 The term "aralkyl", when used without the modifier "replaced", is a monovalent group-alkandyl-aryl, each of which is used in a manner consistent with the definitions above. say. Non-limiting examples are phenylmethyl (benzyl, Bn) and 2-phenyl-ethyl. When the term aralkyl is used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms from the alkanediyl and / or aryl group are independently -OH, -F, -Cl, -Br,-. I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 ,- NHCH 2 CH 3 , -N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 ,- It has been replaced by NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 . Non-limiting examples of substituted aralkyl are (3-chlorophenyl) -methyl, and 2-chloro-2-phenyl-eta-1-yl.

「ヘテロアリール」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての芳香族炭素原子もしくは窒素原子を有し、該炭素原子もしくは窒素原子は1つもしくは複数の芳香環構造の一部を形成し、環原子の少なくとも1つは窒素、酸素もしくは硫黄であり、かつヘテロアリール基は炭素、水素、芳香族窒素、芳香族酸素および芳香族硫黄以外の原子からならない、一価の芳香族基をいう。ヘテロアリール環は、窒素、酸素、および硫黄から選択される1つ、2つ、3つ、もしくは4つの環原子を含みうる。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。本明細書において用いられる場合、この用語は、芳香環もしくは芳香環系に結合された1つもしくは複数のアルキル、アリール、および/もしくはアラルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、フラニル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル(Im)、イソキサゾリル、メチルピリジニル、オキサゾリル、フェニルピリジニル、ピリジニル(ピリジル)、ピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリル、キナゾリル、キノキサリニル、トリアジニル、テトラゾリル、チアゾリル、チエニル、およびトリアゾリルが挙げられる。「N-ヘテロアリール」という用語は、結合点としての窒素原子を有するヘテロアリール基をいう。「ヘテロアレーンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、2つの結合点としての2つの芳香族炭素原子、2つの芳香族窒素原子、もしくは1つの芳香族炭素原子および1つの芳香族窒素原子を有し、該原子は1つもしくは複数の芳香環構造の一部を形成し、環原子の少なくとも1つは窒素、酸素もしくは硫黄であり、かつ二価基は炭素、水素、芳香族窒素、芳香族酸素および芳香族硫黄以外の原子からならない、二価の芳香族基をいう。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。非縮合環は下記の1つもしくは複数を介して連結されうる: 共有結合、アルカンジイル、もしくはアルケンジイル基(炭素数の制限が許容する)。本明細書において用いられる場合、この用語は、芳香環もしくは芳香環系に結合された1つもしくは複数のアルキル、アリール、および/もしくはアラルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。ヘテロアレーンジイル基の非限定的な例としては、

Figure 2022031692000110
が挙げられる。「ヘテロアレーン」は、Rがヘテロアリールである、式H-Rを有する化合物のクラスをいう。ピリジンおよびキノリンはヘテロアレーンの非限定的な例である。これらの用語が「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 The term "heteroaryl", when used without the modifier "substituted", has an aromatic carbon or nitrogen atom as a bond, the carbon or nitrogen atom having one or more aromatics. Part of the ring structure, at least one of the ring atoms is nitrogen, oxygen or sulfur, and the heteroaryl group consists of atoms other than carbon, hydrogen, aromatic nitrogen, aromatic oxygen and aromatic sulfur. A monovalent aromatic group. Heteroaryl rings can contain one, two, three, or four ring atoms selected from nitrogen, oxygen, and sulfur. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. As used herein, the term does not preclude the presence of one or more alkyl, aryl, and / or aralkyl groups (allowing carbon number restrictions) attached to an aromatic ring or aromatic ring system. .. Non-limiting examples of heteroaryl groups include furanyl, imidazolyl, indolyl, indazolyl (Im), isoxazolyl, methylpyridinyl, oxazolyl, phenylpyridinyl, pyridinyl (pyridyl), pyrrolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, quinolyl, quinazolyl, quinoxalinyl. , Triazinyl, tetrazolyl, thiazolyl, thienyl, and triazolyl. The term "N-heteroaryl" refers to a heteroaryl group having a nitrogen atom as a bonding point. The term "heteroarrangedyl", when used without the modifier "substituted", has two aromatic carbon atoms as two bonding points, two aromatic nitrogen atoms, or one aromatic carbon atom. And has one aromatic nitrogen atom, the atom forming part of one or more aromatic ring structures, at least one of the ring atoms is nitrogen, oxygen or sulfur, and the divalent group is carbon. , A divalent aromatic group consisting of atoms other than hydrogen, aromatic nitrogen, aromatic oxygen and aromatic sulfur. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. Non-condensed rings can be linked via one or more of the following: covalent bonds, alkanediyl, or alkendiyl groups (carbon number restrictions allow). As used herein, the term does not preclude the presence of one or more alkyl, aryl, and / or aralkyl groups (allowing carbon number restrictions) attached to an aromatic ring or aromatic ring system. .. As a non-limiting example of a heteroarenediyl group,
Figure 2022031692000110
Can be mentioned. "Heteroarene" refers to a class of compounds having the formula HR, where R is heteroaryl. Pyridine and quinoline are non-limiting examples of heteroarene. When these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 , -N (CH) 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S It has been replaced by (O) 2 OH or -S (O) 2 NH 2 .

「ヘテロシクロアルキル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、結合点としての炭素原子もしくは窒素原子を有し、該炭素原子もしくは窒素原子は1つもしくは複数の非芳香環構造の一部を形成し、環原子の少なくとも1つは窒素、酸素もしくは硫黄であり、かつヘテロシクロアルキル基は炭素、水素、窒素、酸素および硫黄以外の原子からならない、一価の非芳香族基をいう。ヘテロシクロアルキル環は、窒素、酸素、もしくは硫黄から選択される1つ、2つ、3つ、もしくは4つの環原子を含みうる。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。本明細書において用いられる場合、この用語は、環もしくは環系に結合された1つもしくは複数のアルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。同様に、この用語は、得られる基が非芳香族のままであることを条件として、環もしくは環系における1つもしくは複数の二重結合の存在を除外しない。ヘテロシクロアルキル基の非限定的な例としては、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、テトラヒドロピラニル、ピラニル、オキシラニル、およびオキセタニルが挙げられる。「N-ヘテロシクロアルキル」という用語は、結合点としての窒素原子を有するヘテロシクロアルキル基をいう。N-ピロリジニルはそのような基の一例である。「ヘテロシクロアルカンジイル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、2つの結合点としての2つの炭素原子、2つの窒素原子、もしくは1つの炭素原子および1つの窒素原子を有し、該原子は1つもしくは複数の環構造の一部を形成し、環原子の少なくとも1つは窒素、酸素もしくは硫黄であり、かつ二価基は炭素、水素、窒素、酸素および硫黄以外の原子からならない、二価の環基をいう。2つ以上の環が存在する場合、環は縮合されても、縮合されなくてもよい。非縮合環は下記の1つもしくは複数を介して連結されうる: 共有結合、アルカンジイル、もしくはアルケンジイル基(炭素数の制限が許容する)。本明細書において用いられる場合、この用語は、環もしくは環系に結合された1つもしくは複数のアルキル基(炭素数の制限が許容する)の存在を除外しない。同様に、この用語は、得られる基が非芳香族のままであることを条件として、環もしくは環系における1つもしくは複数の二重結合の存在を除外しない。ヘテロシクロアルカンジイル基の非限定的な例としては、

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が挙げられる。これらの用語が「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 The term "heterocycloalkyl", when used without the modifier "substituted", has a carbon or nitrogen atom as a bond, the carbon or nitrogen atom being one or more non-aromatic. It forms part of the ring structure, with at least one of the ring atoms being nitrogen, oxygen or sulfur, and the heterocycloalkyl group consisting of carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen and atoms other than sulfur, a monovalent non-fragrance. Refers to a tribal group. The heterocycloalkyl ring may contain one, two, three, or four ring atoms selected from nitrogen, oxygen, or sulfur. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. As used herein, the term does not preclude the presence of one or more alkyl groups attached to a ring or ring system (a limit on the number of carbon atoms allows). Similarly, the term does not rule out the presence of one or more double bonds in the ring or ring system, provided that the resulting group remains unaromatic. Non-limiting examples of heterocycloalkyl groups include aziridinyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, tetrahydropyran, tetrahydrothiofuranyl, tetrahydropyranyl, pyranyl, oxylanyl, and oxetanyl. The term "N-heterocycloalkyl" refers to a heterocycloalkyl group having a nitrogen atom as a bonding point. N-pyrrolidinyl is an example of such a group. The term "heterocycloalkandyl", when used without the modifier "substituted", has two carbon atoms as two bond points, two nitrogen atoms, or one carbon atom and one nitrogen atom. The atom forms part of one or more ring structures, at least one of the ring atoms is nitrogen, oxygen or sulfur, and the divalent group is carbon, hydrogen, nitrogen, oxygen and sulfur. A divalent ring group consisting of atoms other than the above. When two or more rings are present, the rings may or may not be condensed. Non-condensed rings can be linked via one or more of the following: covalent bonds, alkanediyl, or alkendiyl groups (carbon number restrictions allow). As used herein, the term does not preclude the presence of one or more alkyl groups attached to a ring or ring system (a limit on the number of carbon atoms allows). Similarly, the term does not rule out the presence of one or more double bonds in the ring or ring system, provided that the resulting group remains unaromatic. As a non-limiting example of a heterocycloalkanediyl group,
Figure 2022031692000111
Can be mentioned. When these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 , -N (CH) 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S It has been replaced by (O) 2 OH or -S (O) 2 NH 2 .

「アシル」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rが、それらの用語が上記で定義される通りの、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アラルキルもしくはヘテロアリールである、基-C(O)Rをいう。基-CHO、-C(O)CH3 (アセチル, Ac)、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH2CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-C(O)CH(CH2)2、-C(O)C6H5、-C(O)C6H4CH3、-C(O)CH2C6H5、-C(O)(イミダゾリル)はアシル基の非限定的な例である。「チオアシル」は、基-C(O)Rの酸素原子が硫黄原子で置き換えられていること以外は、同様の様式で定義され、-C(S)Rである。「アルデヒド」という用語は、水素原子の少なくとも1つが-CHO基で置き換えられている、上記で定義の、アルカンに対応する。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子(もしあれば、カルボニルもしくはチオカルボニル基の炭素原子に直接結合された水素原子を含む)は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。基-C(O)CH2CF3、-CO2H (カルボキシル)、-CO2CH3 (メチルカルボキシル)、-CO2CH2CH3、-C(O)NH2 (カルバモイル)、および-CON(CH3)2は置換アシル基の非限定的な例である。 When the term "acyl" is used without the modifier "substituted", R is hydrogen, alkyl, cycloalkyl, alkenyl, aryl, aralkyl or hetero as those terms are defined above. Refers to the group-C (O) R, which is an aryl. Group -CHO, -C (O) CH 3 (acetyl, Ac), -C (O) CH 2 CH 3 , -C (O) CH 2 CH 2 CH 3 , -C (O) CH (CH 3 ) 2 , -C (O) CH (CH 2 ) 2 , -C (O) C 6 H 5 , -C (O) C 6 H 4 CH 3 , -C (O) CH 2 C 6 H 5 , -C ( O) (imidazolyl) is a non-limiting example of an acyl group. A "thioacyl" is defined in a similar fashion and is -C (S) R, except that the oxygen atom of the group -C (O) R is replaced by a sulfur atom. The term "aldehyde" corresponds to the alkane as defined above, in which at least one of the hydrogen atoms has been replaced with a -CHO group. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms (including hydrogen atoms directly attached to the carbon atom of a carbonyl or thiocarbonyl group, if any). Independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 , -N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) ) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 . Groups -C (O) CH 2 CF 3 , -CO 2 H (carboxyl), -CO 2 CH 3 (methyl carboxyl), -CO 2 CH 2 CH 3 , -C (O) NH 2 (carbamoyl), and- CON (CH 3 ) 2 is a non-limiting example of a substituted acyl group.

「アルコキシ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rが、その用語が上記で定義される通りのアルキルである、基-ORをいう。非限定的な例としては、-OCH3 (メトキシ)、-OCH2CH3 (エトキシ)、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2 (イソプロポキシ)、-OC(CH3)3 (tert-ブトキシ)、-OCH(CH2)2、-O-シクロペンチル、および-O-シクロヘキシルが挙げられる。「シクロアルコキシ」、「アルケニルオキシ」、「アルキニルオキシ」、「アリールオキシ」、「アラルコキシ」、「ヘテロアリールオキシ」、「ヘテロシクロアルコキシ」、および「アシルオキシ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rがそれぞれシクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、およびアシルである、-ORと定義される基をいう。「アルコキシジイル」という用語は、二価基-O-アルカンジイル-、-O-アルカンジイル-O-、もしくは-アルカンジイル-O-アルカンジイル-をいう。「アルキルチオ」および「アシルチオ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rがそれぞれアルキルおよびアシルである、基-SRをいう。「アルコール」という用語は、水素原子の少なくとも1つがヒドロキシ基で置き換えられている、上記で定義の、アルカンに対応する。「エーテル」という用語は、水素原子の少なくとも1つがアルコキシ基で置き換えられている、上記で定義の、アルカンに対応する。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。 The term "alkoxy", when used without the "substituted" modifier, refers to a group-OR in which R is an alkyl as defined above. Non-limiting examples include -OCH 3 (methoxy), -OCH 2 CH 3 (ethoxy), -OCH 2 CH 2 CH 3 , -OCH (CH 3 ) 2 (isopropoxy), -OC (CH 3 ). Included are 3 (tert-butoxy), -OCH (CH 2 ) 2 , -O-cyclopentyl, and -O-cyclohexyl. The terms "cycloalkoxy,""alkenyloxy,""alkynyloxy,""aryloxy,""aralkoxy,""heteroaryloxy,""heterocycloalkoxy," and "acyloxy" are referred to as "replaced." When used without modifiers, R refers to a group defined as -OR, which is cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, aralkyl, heteroaryl, heterocycloalkyl, and acyl, respectively. The term "alkoxydiyl" refers to the divalent group -O-alcandiyl-, -O-alcandiyl-O-, or-alcandiyl-O-alcandiyl-. The terms "alkylthio" and "acylthio", when used without the "substituted" modifier, refer to a group-SR in which R is alkyl and acyl, respectively. The term "alcohol" corresponds to the alkane as defined above, in which at least one of the hydrogen atoms has been replaced with a hydroxy group. The term "ether" corresponds to an alkane as defined above, in which at least one of the hydrogen atoms has been replaced with an alkoxy group. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms are independently -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 , -NHCH 2 CH 3 ,- N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 , -NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 .

「アルキルアミノ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rが、その用語が上記で定義される通りのアルキルである、基-NHRをいう。非限定的な例としては、-NHCH3および-NHCH2CH3が挙げられる。「ジアルキルアミノ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、RおよびR'が同じもしくは異なるアルキル基でありうるか、またはRおよびR'が一緒になって、アルカンジイルを表しうる、基-NRR'をいう。ジアルキルアミノ基の非限定的な例としては、-N(CH3)2および-N(CH3)(CH2CH3)が挙げられる。「シクロアルキルアミノ」、「アルケニルアミノ」、「アルキニルアミノ」、「アリールアミノ」、「アラルキルアミノ」、「ヘテロアリールアミノ」、「ヘテロシクロアルキルアミノ」、「アルコキシアミノ」、および「アルキルスルホニルアミノ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rがそれぞれシクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、およびアルキルスルホニルである、-NHRと定義される基をいう。アリールアミノ基の非限定的な例は-NHC6H5である。「アルキルアミノジイル」という用語は、二価基-NH-アルカンジイル-、-NH-アルカンジイル-NH-、もしくは-アルカンジイル-NH-アルカンジイル-をいう。「アミド」(アシルアミノ)という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rが、その用語が上記で定義される通りのアシルである、基-NHRをいう。アミド基の非限定的な例は-NHC(O)CH3である。「アルキルイミノ」という用語は、「置換された」という修飾語なしで用いられる場合、Rが、その用語が上記で定義される通りのアルキルである、二価基=NRをいう。これらの用語のいずれかが「置換された」という修飾語とともに用いられる場合、炭素原子に結合された1つもしくは複数の水素原子は独立して-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、もしくは-S(O)2NH2により置き換えられている。基NHC(O)OCH3および-NHC(O)NHCH3は置換アミド基の非限定的な例である。 The term "alkylamino", when used without the "substituted" modifier, refers to the group-NHR, where R is alkyl as the term is defined above. Non-limiting examples include -NHCH 3 and -NHCH 2 CH 3 . The term "dialkylamino", when used without the "substituted" modifier, can be an alkyl group with the same or different R and R', or R and R'combined to form an alkanediyl. Representable group-NRR'. Non-limiting examples of dialkylamino groups include -N (CH 3 ) 2 and -N (CH 3 ) (CH 2 CH 3 ). "Cycloalkylamino", "alkenylamino", "alkynylamino", "arylamino", "aralkylamino", "heteroarylamino", "heterocycloalkylamino", "alkoxyamino", and "alkylsulfonylamino" When used without the "substituted" modifier, the term R is cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, aralkyl, heteroaryl, heterocycloalkyl, alkoxy, and alkylsulfonyl, respectively, with -NHR. Refers to the defined group. A non-limiting example of an arylamino group is -NHC 6 H 5 . The term "alkylaminodiyl" refers to the divalent group -NH-alkanediyl-, -NH-alkanediyl-NH-, or-alkandyl-NH-alkanediyl-. The term "amide" (acylamino), when used without the "substituted" modifier, refers to the group-NHR, where R is the acyl as defined above. A non-limiting example of an amide group is -NHC (O) CH 3 . The term "alkylimino", when used without the "substituted" modifier, refers to divalent group = NR, where R is alkyl as the term is defined above. When any of these terms are used with the modifier "substituted", one or more hydrogen atoms attached to a carbon atom are independently -OH, -F, -Cl, -Br,-. I, -NH 2 , -NO 2 , -CO 2 H, -CO 2 CH 3 , -CN, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -C (O) CH 3 , -NHCH 3 ,- NHCH 2 CH 3 , -N (CH 3 ) 2 , -C (O) NH 2 , -C (O) NHCH 3 , -C (O) N (CH 3 ) 2 , -OC (O) CH 3 ,- It has been replaced by NHC (O) CH 3 , -S (O) 2 OH, or -S (O) 2 NH 2 . The groups NHC (O) OCH 3 and -NHC (O) NHCH 3 are non-limiting examples of substituted amide groups.

「1つの(a)」もしくは「1つの(an)」という単語の使用は、特許請求の範囲および/もしくは本明細書において「含む(comprising)」という用語とともに用いられる場合、「1つ(one)」を意味しうるが、「1つもしくは複数」、「少なくとも1つ」、および「1つもしくは2つ以上」の意味とも一致する。 The use of the word "one (a)" or "one (an)" is "one" when used in the claims and / or with the term "comprising" herein. ) ”, But also consistent with the meanings of“ one or more ”,“ at least one ”, and“ one or more ”.

本出願の全体を通して、「約」という用語は、値がその値をもとめるために用いている装置、方法の誤差の固有の変動、もしくは試験対象の間に存在する変動を含むことを示すために用いられる。 Throughout this application, the term "about" is used to indicate that a value includes an inherent variation in the device, method error, or variation that exists between test subjects. Used.

本出願において用いられる場合、「平均分子量」という用語は、各重合体種のモル数とその種のモル質量との間の関係をいう。特に、各重合体分子は、異なるレベルの重合を有し、したがって、異なるモル質量を有しうる。平均分子量は、複数の重合体分子の分子量を表すために用いることができる。平均分子量は、典型的には、平均モル質量と同義である。特に、3つの主要なタイプの平均分子量がある: 数平均モル質量、重量(質量)平均モル質量、およびZ平均モル質量。本出願の文脈において、特別の定めのない限り、平均分子量は、式の数平均モル質量もしくは重量平均モル質量のどちらかを表す。いくつかの態様において、平均分子量は数平均モル質量である。いくつかの態様において、平均分子量は、脂質中に存在するPEG成分を記述するために使用されうる。 As used in this application, the term "average molecular weight" refers to the relationship between the number of moles of each polymer species and the molar mass of that species. In particular, each polymer molecule may have different levels of polymerization and therefore different molar masses. The average molecular weight can be used to represent the molecular weight of a plurality of polymer molecules. Average molecular weight is typically synonymous with average molar mass. In particular, there are three main types of average molecular weight: number average molar mass, weight (mass) average molar mass, and Z average molar mass. In the context of this application, unless otherwise specified, the average molecular weight represents either the number average molar mass or the weight average molar mass of the formula. In some embodiments, the average molecular weight is a number average molar mass. In some embodiments, the average molecular weight can be used to describe the PEG component present in the lipid.

「含む(comprise)」、「有する(have)」および「含む(include)」という用語は、制限のない連結動詞である。「含む(comprises)」、「含む(comprising)」、「有する(has)」、「有する(having)」、「含む(includes)」および「含む(including)」のような、これらの動詞の1つもしくは複数の任意の形式もしくは時制も制限がない。例えば、1つもしくは複数の段階を「含む(comprises)」、「有する(has)」もしくは「含む(includes)」任意の方法は、それらの1つもしくは複数の段階だけを有することに限定されることはなく、同様に他の列挙していない段階も網羅する。 The terms "comprise," "have," and "include" are unrestricted concatenated verbs. One of these verbs, such as "comprises," "comprising," "has," "having," "includes," and "including." There are no restrictions on any form or tense of one or more. For example, any method of "comprises", "has" or "includes" one or more stages is limited to having only one or more of them. It does not, and also covers other unlisted stages.

「有効」という用語は、その用語が本明細書および/もしくは特許請求の範囲において用いられる場合、所望の、予想の、もしくは所期の結果を達成するのに十分であることを意味する。「有効量」、「治療的有効量」もしくは「薬学的有効量」は、患者もしくは対象を化合物で処置するという文脈において用いられる場合、疾患を処置するために対象もしくは患者に投与されたときに、疾患に対するそのような処置を行うのに十分な化合物の量を意味する。 The term "valid", as used herein and / or in the claims, means sufficient to achieve the desired, expected, or intended outcome. An "effective amount," "therapeutically effective amount," or "pharmaceutically effective amount" is used when used in the context of treating a patient or subject with a compound, when administered to the subject or patient to treat the disease. Means the amount of compound sufficient to perform such treatment for the disease.

本明細書において用いられる場合、「IC50」という用語は、得られる最大の応答の50%である阻害用量をいう。この定量的尺度は、所与の生物学的、生化学的もしくは化学的プロセス(またはプロセスの成分、すなわち酵素、細胞、細胞受容体もしくは微生物)を半分だけ阻害するために、どれだけの特定の薬物もしくは他の物質(阻害剤)が必要とされるかを示す。 As used herein, the term "IC 50 " refers to an inhibitory dose that is 50% of the maximum response obtained. How specific this quantitative measure is to inhibit a given biological, biochemical or chemical process (or a component of the process, ie an enzyme, cell, cell receptor or microorganism) by half. Indicates whether a drug or other substance (inhibitor) is needed.

第一の化合物の「異性体」は、各分子が第一の化合物と同じ構成原子を含むが、それらの原子の三次元の配置が異なる、別の化合物である。 An "isomer" of a first compound is another compound in which each molecule contains the same constituent atoms as the first compound, but the three-dimensional arrangement of those atoms is different.

本明細書において用いられる場合、「患者」もしくは「対象」という用語は、ヒト、サル、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、もしくはそのトランスジェニック種のような、生きている哺乳類生物をいう。ある種の態様において、患者もしくは対象は霊長類である。ヒト対象の非限定的な例は、成人、少年、乳児および胎児である。 As used herein, the term "patient" or "subject" is used live, such as human, monkey, bovine, sheep, goat, dog, cat, mouse, rat, guinea pig, or transgenic species thereof. Refers to mammals that are present. In certain embodiments, the patient or subject is a primate. Non-limiting examples of human subjects are adults, boys, babies and fetuses.

本明細書において一般に用いられる場合、「薬学的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、妥当な損益比に相応の、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織、器官、および/または体液と接触して用いるのに適した、化合物、材料、組成物、および/または投与量形態をいう。 As commonly used herein, "pharmaceutically acceptable" is, within sound medical judgment, excessive toxicity, irritation, allergic response, or other, commensurate with a reasonable profit / loss ratio. A compound, material, composition, and / or dosage form suitable for use in contact with human and animal tissues, organs, and / or body fluids without problems or complications.

「薬学的に許容される塩」は、上記で定義される通り、薬学的に許容され、かつ所望の薬理活性を保有する、本発明の化合物の塩を意味する。そのような塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などのような無機酸と; または1,2-エタンジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、3-フェニルプロピオン酸、4,4'-メチレンビス(3-ヒドロキシ-2-エン-1-カルボン酸)、4-メチルビシクロ[2.2.2]オクタ-2-エン-1-カルボン酸、酢酸、脂肪族モノ-およびジカルボン酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクロペンタンプロピオン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヒドロキシナフトエ酸、乳酸、ラウリル硫酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、o-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、シュウ酸、p-クロロベンゼンスルホン酸、フェニル-置換アルカン酸、プロピオン酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、第三級ブチル酢酸、トリメチル酢酸などのような有機酸と形成される酸付加塩が含まれる。薬学的に許容される塩には、存在する酸性プロトンが無機または有機塩基と反応可能な場合に形成されうる、塩基付加塩も含まれる。許容される無機塩基には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アルミニウムおよび水酸化カルシウムが含まれる。許容される有機塩基には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、N-メチルグルカミンなどが含まれる。本発明の任意の塩の一部を形成している特定のアニオンもしくはカチオンは、塩が全体として薬理学的に許容される限り、重要ではないことが理解されるべきである。薬学的に許容される塩ならびにそれらの調製法および使用法のさらなる例は、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (P. H. Stahl & C. G. Wermuth eds., Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002)に提示されている。 "Pharmaceutically acceptable salt" means, as defined above, a salt of a compound of the invention that is pharmaceutically acceptable and possesses the desired pharmacological activity. Such salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitrate, phosphoric acid, etc .; or 1,2-ethanedisulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, 3-Phenylpropionic acid, 4,4'-methylenebis (3-hydroxy-2-en-1-carboxylic acid), 4-methylbicyclo [2.2.2] octa-2-en-1-carboxylic acid, acetic acid, fat Group mono- and dicarboxylic acids, aliphatic sulfuric acids, aromatic sulfuric acids, benzenesulfonic acids, benzoic acids, camphorsulfonic acids, carbonic acid, silicate acid, citric acid, cyclopentanepropionic acid, ethanesulfonic acid, fumaric acid, glucoheptonic acid, Gluconic acid, glutamic acid, glycolic acid, heptanic acid, hexanoic acid, hydroxynaphthoic acid, lactic acid, lauryl sulfate, maleic acid, malic acid, malonic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, muconic acid, o- (4-hydroxybenzoyl) Of benzoic acid, oxalic acid, p-chlorobenzenesulfonic acid, phenyl-substituted alkanoic acid, propionic acid, p-toluenesulfonic acid, pyruvate, salicylic acid, stearic acid, succinic acid, tartaric acid, tertiary butylacetic acid, trimethylacetic acid, etc. Such organic acids and acid addition salts formed are included. Pharmaceutically acceptable salts also include base addition salts that can be formed if the acidic protons present are capable of reacting with inorganic or organic bases. Acceptable inorganic bases include sodium hydroxide, sodium carbonate, potassium hydroxide, aluminum hydroxide and calcium hydroxide. Acceptable organic bases include ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, tromethamine, N-methylglucamine and the like. It should be understood that the particular anions or cations that form part of any salt of the invention are not important as long as the salt as a whole is pharmacologically acceptable. Further examples of pharmaceutically acceptable salts and their preparation and use are presented in the Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (PH Stahl & CG Wermuth eds., Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002). ..

本明細書において用いられる「薬学的に許容される担体」という用語は、化学物質を担持もしくは輸送することに関与する、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル封入材料のような、薬学的に許容される材料、組成物もしくは媒体を意味する。 As used herein, the term "pharmaceutically acceptable carrier" refers to liquid or solid fillers, diluents, excipients, solvents or encapsulating materials involved in carrying or transporting chemicals. Means a pharmaceutically acceptable material, composition or medium, such as.

「予防」または「予防すること」には、(1) 疾患のリスクが高い、および/もしくは素因を有しうるが、疾患の任意の、もしくは全ての病態もしくは総体症状をまだ経験もしくは提示していない、対象もしくは患者における疾患の発症を阻害すること、ならびに/または(2) 疾患のリスクが高い、および/もしくは素因を有しうるが、疾患の任意の、もしくは全ての病態もしくは総体症状をまだ経験もしくは提示していない、対象もしくは患者における疾患の病態もしくは総体症状の発症を遅延させることが含まれる。 "Prevention" or "prevention" may (1) have a high risk and / or predisposition to the disease, but still experience or present any or all pathological or general symptoms of the disease. Not present, inhibiting the onset of the disease in the subject or patient, and / or (2) at high risk of the disease, and / or having a predisposition, but still any or all pathophysiology or general symptoms of the disease Includes delaying the onset of pathological or general symptoms of the disease in a subject or patient that has not been experienced or presented.

「繰り返し単位」は、ある種の材料、例えば、有機材料、無機材料もしくは有機金属のいずれかの、骨格および/もしくは重合体の最も単純な構造実体である。重合体鎖の場合、繰り返し単位は、ネックレスのビーズのように、鎖に沿って連続的に連結される。例えば、ポリエチレン-[-CH2CH2-]n-において、繰り返し単位は-CH2CH2-である。下付き文字「n」は、重合度、すなわち、ともに連結した繰り返し単位の数を示す。「n」の値が未定義のままである場合、または「n」がない場合、それは単に材料の重合体性だけでなく、括弧内の式の繰り返しを指定する。繰り返し単位の概念は、金属有機骨格、変性重合体、熱硬化性重合体などにおけるような、繰り返し単位間の連結が三次元的に伸びるところに等しく適用される。デンドリマーの文脈内で、繰り返し単位はまた、分枝単位、内部層、もしくは世代として記述されうる。同様に、末端基はまた、表面基として記述されうる。 A "repeating unit" is the simplest structural entity of a skeleton and / or polymer of any material, eg, an organic material, an inorganic material or an organometallic. In the case of polymer chains, the repeating units are continuously linked along the chain, like beads in a necklace. For example, in polyethylene- [-CH 2 CH 2- ] n- , the repeating unit is -CH 2 CH 2- . The subscript "n" indicates the degree of polymerization, that is, the number of repeating units concatenated together. If the value of "n" remains undefined, or if there is no "n", it specifies not only the polymerizable nature of the material, but the repetition of the expression in parentheses. The concept of repeating units applies equally where the connections between repeating units extend three-dimensionally, such as in metal organic skeletons, modified polymers, thermosetting polymers and the like. Within the context of dendrimers, repeating units can also be described as branching units, inner layers, or generations. Similarly, end groups can also be described as surface groups.

「立体異性体」もしくは「光学異性体」は、同じ原子が同じ他の原子に結合しているが、それらの原子の三次元の配置が異なる、所与の化合物の異性体である。「鏡像異性体」は、左右の手のような、互いに鏡像である、所与の化合物の立体異性体である。「ジアステレオマー」は、鏡像異性体ではない、所与の化合物の立体異性体である。キラル分子は、立体中心もしくはステレオジェン中心ともいわれる、キラル中心を含み、これは任意の2つの基の交換が立体異性体につながるような基を担持する分子における任意の点であるが、必ずしも原子ではない。有機化合物において、キラル中心は典型的には炭素、リンもしくは硫黄原子であるが、有機および無機化合物において他の原子が立体中心であることも可能である。分子は複数の立体中心を有し、多くの立体異性体を生じることもできる。その立体異性が四面体ステレオジェン中心(例えば、四面体炭素)による化合物において、仮説上可能な立体異性体の総数は2nを越えず、nは四面体立体中心の数である。対称性を有する分子は多くの場合、可能な最大数よりも少ない立体異性体を有する。鏡像異性体の50:50混合物はラセミ混合物といわれる。あるいは、鏡像異性体の混合物は、1つの鏡像異性体が50％よりも多い量で存在するように、鏡像異性的に濃縮されうる。典型的には、鏡像異性体および/もしくはジアステレオマーは、当技術分野において公知の技術を用いて分割もしくは分離することができる。立体化学が定義されていないキラリティーの任意の立体中心もしくは軸について、キラリティーのその立体中心もしくは軸はそのR型、S型、もしくはラセミおよび非ラセミ混合物を含む、RおよびS型の混合物として存在しうることが企図される。本明細書において用いられる場合、「他の立体異性体を実質的に含まない」という語句は、組成物が≦15%、より好ましくは≦10%、さらにより好ましくは≦5%、もしくは最も好ましくは≦1%の別の立体異性体を含むことを意味する。 A "stereoisomer" or "optical isomer" is an isomer of a given compound in which the same atom is attached to the same other atom, but the three-dimensional arrangement of those atoms is different. An "enantiomer" is a stereoisomer of a given compound that is mirror images of each other, such as the left and right hands. A "diastereomer" is a stereoisomer of a given compound that is not an enantiomer. A chiral molecule contains a chiral center, also known as a stereocenter or stereogen center, which is any point in a molecule carrying a group such that the exchange of any two groups leads to a stereoisomer, but not necessarily an atom. is not it. In organic compounds, the chiral center is typically a carbon, phosphorus or sulfur atom, but in organic and inorganic compounds other atoms can be stereocenters. Molecules have multiple stereocenters and can also give rise to many stereoisomers. In a compound whose steric isomer is a tetrahedral stereocenter (eg, tetrahedral carbon), the total number of hypothetically possible steric isomers does not exceed 2 n , where n is the number of tetrahedral steric centers. Molecules with symmetry often have fewer stereoisomers than the maximum possible. A 50:50 mixture of enantiomers is called a racemic mixture. Alternatively, the mixture of enantiomers can be enriched enantiomerically such that one enantiomer is present in an amount greater than 50%. Typically, enantiomers and / or diastereomers can be split or separated using techniques known in the art. For any stereocenter or axis of chirality for which stereochemistry is not defined, the stereocenter or axis of chirality is as a mixture of R and S types, including its R-type, S-type, or racemic and non-racemic mixtures. It is intended that it may exist. As used herein, the phrase "substantially free of other stereoisomers" means that the composition is ≤15%, more preferably ≤10%, even more preferably ≤5%, or most preferably. Means contain another stereoisomer of ≤1%.

「処置」もしくは「処置すること」には、(1) 疾患の病態もしくは総体症状を経験もしくは提示している対象もしくは患者における疾患を阻害する(例えば、病態および/もしくは総体症状のさらなる発生を停止する)こと、(2) 疾患の病態もしくは総体症状を経験もしくは提示している対象もしくは患者における疾患を改善する(例えば、病態および/もしくは総体症状を逆転する)こと、および/または(3) 疾患の病態もしくは総体症状を経験もしくは提示している対象もしくは患者における疾患の任意の測定可能な低減を行うことが含まれる。 "Treatment" or "treatment" includes (1) inhibiting the disease in a subject or patient who is experiencing or presenting the condition or general symptoms of the disease (eg, stopping further development of the condition and / or general symptoms). (To), (2) to improve the disease in a subject or patient who is experiencing or presenting the pathology or general symptoms of the disease (eg, reversing the pathology and / or general symptoms), and / or (3) the disease. Includes making any measurable reduction of the disease in a subject or patient who is experiencing or presenting the condition or general symptoms of the disease.

前述の定義は、参照により本明細書に組み入れられる任意の参照文献における任意の相反する定義に取って代わる。しかし、ある種の用語が定義されているという事実は、定義されていない任意の用語が明確ではないことを示すと考えられるべきではない。むしろ、用いられる全ての用語は、当業者であれば本発明の範囲を理解し、本発明を実践しうるような用語で本発明を記述すると考えられる。 The above definition supersedes any conflicting definition in any reference incorporated herein by reference. However, the fact that certain terms are defined should not be considered to indicate that any undefined term is unclear. Rather, all terms used are considered to describe the invention in terms that would allow one of ordinary skill in the art to understand the scope of the invention and practice the invention.

B. デンリマーおよび樹状構造
本開示のいくつかの局面において、親油性およびカチオン性成分を含有するデンドリマーが提供される。デンドリマーは、規則的な樹状分枝を示す重合体であり、枝分かれした層をコアにもしくはコアから順次もしくは世代的に添加することにより形成され、コア、少なくとも1つの内部分枝層および表面分枝層によって特徴付けられる。(Petar R. Dvornic and Donald A. Tomalia in Chem. in Britain, 641-645, August 1994を参照のこと)。他の態様において、本明細書において用いられる「デンドリマー」という用語は、限定するものではないが、内部コアを有する分子構造、この開始剤コアに規則的に結合した繰り返し単位の内部層(もしくは「世代」)、および最外の世代に結合した末端基の外部表面を含むことが意図される。「デンドロン」は、コアに直接もしくは連結部分を通じ連結されて、より大きなデンドリマーを形成する、もしくは形成しうる焦点から発する分枝を有するデンドリマーの一種である。いくつかの態様において、デンドリマー構造は、各分枝について各繰り返し単位を兼ねる中心コアからの放射性の繰り返し基を有する。いくつかの態様において、本明細書において記述されるデンドリマーは、小分子、中型の分子、脂質、もしくは脂質様材料として記述されうる。これらの用語は、デンドロン様の外観(例えば、単一の焦点から放射する分子)を有する、本明細書において記述される化合物を記述するために使用されうる。 B. Dendrimers and dendritic structures In some aspects of this disclosure, dendrimers containing lipophilic and cationic components are provided. Dendrimers are polymers that exhibit regular dendritic branches and are formed by adding branched layers to or sequentially from the core or by generations to the core, at least one inner sub-branch layer and surface components. Characterized by a branch layer. (See Petar R. Dvornic and Donald A. Tomalia in Chem. In Britain, 641-645, August 1994). In other embodiments, the term "dendrimer" as used herein is a molecular structure having an internal core, an internal layer (or "or") of repeating units regularly bound to this initiator core. "Generation"), and is intended to include the outer surface of the terminal group attached to the outermost generation. A "dendrimer" is a type of dendrimer that is linked directly to the core or through a connecting portion to form or have a branch emanating from a focal point that can form a larger dendrimer. In some embodiments, the dendrimer structure has a radioactive repeating group from the central core that also serves as each repeating unit for each branch. In some embodiments, the dendrimers described herein can be described as small molecules, medium-sized molecules, lipids, or lipid-like materials. These terms can be used to describe the compounds described herein with a dendron-like appearance (eg, molecules radiating from a single focal point).

デンドリマーは重合体であるが、デンドリマーは制御可能な構造、単一の分子量、多数の制御可能な表面官能基を有し、伝統的に特定の世代に到達した後に球状構造をとるため、伝統的な重合体より好ましい。デンドリマーは、単分散、樹状および/もしくは世代構造の重合体構造を生成するために、各繰り返し単位の逐次反応によって調製することができる。個々のデンドリマーは、その中心コア上の1つもしくは複数の機能的部位に結合した樹状のくさびを有する、中心のコア分子からなる。デンドリマー表面層は、調製中に用いられるアセンブリ単量体によって、アニオン性、カチオン性、親水性もしくは親油性基を含む種々の官能基をその上に配置することができる。 Although dendrimers are polymers, dendrimers are traditional because they have a controllable structure, a single molecular weight, a large number of controllable surface functional groups, and traditionally have a spherical structure after reaching a particular generation. It is preferable to the polymer. Dendrimers can be prepared by sequential reaction of each repeating unit to produce polymer structures of monodisperse, dendritic and / or generational structures. Each dendrimer consists of a central core molecule with a dendritic wedge attached to one or more functional sites on its central core. The dendrimer surface layer can be populated with various functional groups, including anionic, cationic, hydrophilic or lipophilic groups, depending on the assembly monomers used during preparation.

コア、繰り返し単位の官能基および/もしくは化学的性質、ならびに表面基もしくは末端基を修飾することにより、それらの物理的性質を調節することができる。変化させることができるいくつかの特性には、溶解性、毒性、免疫原性および生物学的付着能力が含まれるが、これらに限定されることはない。デンドリマーは、それらの世代もしくは枝中の繰り返し単位の数によって記述されることが多い。コア分子のみからなるデンドリマーは世代0といわれ、その一方で全ての分枝に沿った各連続繰り返し単位は末端基もしくは表面基まで、第1世代、第2世代などである。いくつかの態様において、チオールとの第2の縮合反応ではなく、アミンとの第1の縮合反応のみから生じる半世代が可能である。 By modifying the functional and / or chemical properties of the core, repeating unit, as well as the surface or end groups, their physical properties can be adjusted. Some properties that can be altered include, but are not limited to, solubility, toxicity, immunogenicity and bioadhesive ability. Dendrimers are often described by their generation or the number of repeating units in the branch. Dendrimers consisting only of core molecules are said to be generation 0, while each continuous repeating unit along all branches is the 1st generation, 2nd generation, etc. up to the terminal group or surface group. In some embodiments, half a generation is possible that results only from the first condensation reaction with the amine, not the second condensation reaction with the thiol.

デンドリマーの調製は、各連続した群によりデンドリマーを構築することを含む一連の段階的反応によって達成される合成制御のレベルを必要とする。デンドリマー合成は、収束型もしくは発散型のものであることができる。多様なデンドリマー合成の間に、分子は、前世代に1世代を付着させ、次に反応の次の段階のために官能基を変化させる段階的プロセスで、コアから周辺に組み立てられる。官能基の変換は、制御されない重合を防止するために必要である。そのような重合は、単分散ではなく、さもなければ超分枝重合体として知られている高度に分枝した分子をもたらす。立体効果のために、デンドリマー繰り返し単位を反応し続けると、立体的な過密状態が特定の世代で完全な反応を妨げ、分子の単分散性を破壊するまで、球状もしくは球形分子が生じる。したがって、いくつかの態様において、G1～G10世代のデンドリマーが特に企図される。いくつかの態様において、デンドリマーは、1、2、3、4、5、6、7、8、9もしくは10個の繰り返し単位、またはその中で導き出せる任意の範囲を含む。いくつかの態様において、本明細書において用いられるデンドリマーは、G0、G1、G2もしくはG3である。しかし、分枝重合体中の間隔単位を低減させることによって、可能な世代数(11、12、13、14、15、20、もしくは25のような)を増加させることができる。 Preparation of dendrimers requires a level of synthetic control achieved by a series of stepwise reactions involving the construction of dendrimers by each contiguous group. Dendrimer synthesis can be convergent or divergent. During diverse dendrimer synthesis, the molecule is assembled from the core to the periphery in a stepwise process that attaches one generation to the previous generation and then changes the functional groups for the next stage of the reaction. Functional group conversion is necessary to prevent uncontrolled polymerization. Such polymerization results in highly branched molecules, otherwise known as superbranched polymers, rather than monodisperse. Continued reaction of dendrimer repeat units due to steric effects results in spherical or spherical molecules until a steric overcrowding impedes a complete reaction at a particular generation and disrupts the monodispersity of the molecule. Therefore, in some embodiments, G1-G10 generation dendrimers are specifically contemplated. In some embodiments, the dendrimer comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 repeating units, or any range within which it can be derived. In some embodiments, the dendrimer used herein is G0, G1, G2 or G3. However, by reducing the interval units in the branched polymer, the number of possible generations (such as 11, 12, 13, 14, 15, 20, or 25) can be increased.

さらに、デンドリマーは、2つの主要な化学的環境: 末端生成時に特定の表面基によって作出される環境と高次構造のためバルク媒体および表面基から遮蔽されうる樹状構造の内部とを有する。これらの異なる化学的環境のために、デンドリマーは、治療用途を含む多数の異なる潜在的用途を見出した。 In addition, dendrimers have two major chemical environments: one created by specific surface groups during terminal formation and one inside a dendritic structure that can be shielded from bulk media and surface groups due to higher order structure. Due to these different chemical environments, dendrimers have found a number of different potential uses, including therapeutic uses.

いくつかの局面において、本開示のデンドリマーは、アクリレートおよびメタクリレート基とアミンおよびチオールとの示差反応性を用いて組み立てられる。本明細書において使用されうるデンドリマーには、アクリレート基と第1級もしくは第2級アミンとのおよびメタクリレートとメルカプト基との反応によって形成される第2級もしくは第3級アミンおよびチオエーテルが含まれる。さらに、本明細書において記述されるデンドリマーの繰り返し単位は、生理学的条件下で分解可能な基を含みうる。いくつかの態様において、これらの繰り返し単位は、1つもしくは複数の初期(germinal)ジエーテル、エステル、アミドもしくはジスルフィド基を含みうる。いくつかの態様において、コア分子は、一方向のみの樹状重合を可能にするモノアミンである。他の態様において、コア分子は、それぞれが1つもしくは複数の繰り返し単位を含みうる複数の異なる樹状分枝を有するポリアミンである。デンドリマーは、このコアから1つもしくは複数の水素原子を除去することによって形成されうる。いくつかの態様において、これらの水素原子は、窒素原子のようなヘテロ原子上にある。いくつかの態様において、末端基は、長鎖アルキル基もしくはアルケニル基のような親油性基である。他の態様において、末端基は、長鎖ハロアルキル基もしくはハロアルケニル基である。他の態様において、末端基は、アミン(-NH2)もしくはカルボン酸(-CO2H)のようなイオン化可能基を含む脂肪族基もしくは芳香族基である。さらに他の態様において、末端基は、水酸基、アミド基、もしくはエステルのような1つもしくは複数の水素結合供与体を含む脂肪族基もしくは芳香族基である。 In some aspects, the dendrimers of the present disclosure are assembled using the differential reactivity of acrylates and methacrylate groups with amines and thiols. Dendrimers that can be used herein include secondary or tertiary amines and thioethers formed by the reaction of an acrylate group with a primary or secondary amine and a methacrylate with a mercapto group. In addition, the repeating units of dendrimers described herein may contain groups that are degradable under physiological conditions. In some embodiments, these repeating units may comprise one or more germinal diethers, esters, amides or disulfide groups. In some embodiments, the core molecule is a monoamine that allows dendritic polymerization in only one direction. In another embodiment, the core molecule is a polyamine having a plurality of different dendritic branches, each of which may contain one or more repeating units. Dendrimers can be formed by removing one or more hydrogen atoms from this core. In some embodiments, these hydrogen atoms are on a heteroatom, such as a nitrogen atom. In some embodiments, the terminal group is a lipophilic group such as a long chain alkyl group or an alkenyl group. In another embodiment, the terminal group is a long chain haloalkyl group or a haloalkenyl group. In another embodiment, the terminal group is an aliphatic or aromatic group containing an ionizable group such as an amine (-NH 2 ) or a carboxylic acid (-CO 2 H). In yet another embodiment, the terminal group is an aliphatic or aromatic group containing one or more hydrogen bond donors such as hydroxyl groups, amide groups, or esters.

本開示によって提供されるデンドリマーは、例えば、上記で本発明の節の概要および以下の特許請求の範囲に示される。それらは、実施例の節において概説された方法を用いて作出されうる。これらの方法は、当業者によって適用される有機化学の原理および技法を用いてさらに修飾および最適化することができる。そのような原理および技法は、例えば、参照により本明細書に組み入れられるMarch’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure (2007)に教示されている。 The dendrimers provided by the present disclosure are set forth, for example, in the context of the sections of the invention above and the claims below. They can be produced using the methods outlined in the Examples section. These methods can be further modified and optimized using organic chemistry principles and techniques applied by those of skill in the art. Such principles and techniques are taught, for example, in March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure (2007), which is incorporated herein by reference.

本開示のデンドリマーは、1つもしくは複数の非対称に置換された炭素原子もしくは窒素原子を含み、光学的に活性な形態もしくはラセミ形態で単離されうる。したがって、特定の立体化学もしくは異性体形態が具体的に示されない限り、化学式の全てのキラル、ジアステレオマー、ラセミ形態、エピマー形態および全ての幾何異性形態が意図される。デンドリマーは、ラセミ化合物およびラセミ混合物、単一鏡像異性体、ジアステレオマー混合物ならびに個々のジアステレオマーとして生じうる。いくつかの態様において、単一のジアステレオマーが得られる。本開示のデンドリマーのキラル中心は、S配置またはR配置を有することができる。さらに、デンドリマーの1つもしくは複数が構造異性体として存在しうることが企図される。いくつかの態様において、化合物は同じ式を有するが、しかしコアの窒素原子との異なる結合性を有する。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、出発単量体が最初に第1級アミンと反応し、次いで統計的に、存在するいずれかの第2級アミンと反応するので、そのようなデンドリマーが存在するものと考えられる。したがって、構造異性体は、完全に反応した第1級アミン、次いで、反応した第2級アミンの混合物を提示しうる。 The dendrimers of the present disclosure contain one or more asymmetrically substituted carbon or nitrogen atoms and can be isolated in optically active or racemic form. Thus, all chiral, diastereomeric, racemic, epimeric and all geometric isomer forms of the chemical formula are intended unless a particular stereochemical or isomer form is specifically indicated. Dendrimers can occur as racemic compounds and racemic mixtures, single enantiomers, diastereomeric mixtures and individual diastereomers. In some embodiments, a single diastereomer is obtained. The chiral center of the dendrimer of the present disclosure can have an S or R configuration. Furthermore, it is contemplated that one or more of the dendrimers may exist as structural isomers. In some embodiments, the compounds have the same formula, but have different binding properties with the nitrogen atom of the core. We do not want to be bound by any theory, but such as because the starting monomer first reacts with the primary amine and then statistically with any secondary amine present. It is believed that there is a dendrimer. Thus, structural isomers can present a mixture of fully reacted primary amines followed by reacted secondary amines.

本開示のデンドリマーを表すために用いられる化学式は、典型的には、おそらくいくつかの異なる互変異性体のうちの1つのみを示すであろう。例えば、多くのタイプのケトン基が、対応するエノール基と平衡状態で存在することが知られている。同様に、多くのタイプのイミン基が、エナミン基と平衡して存在する。与えられた式についてどの互変異性体が描かれていても、どの1つが最も一般的であっても、所与の化学式の全ての互変異性体が意図される。 The chemical formula used to represent the dendrimers of the present disclosure will typically represent only one of several different tautomers. For example, many types of ketone groups are known to be present in equilibrium with the corresponding enol groups. Similarly, many types of imine groups are present in equilibrium with the enamine groups. All tautomers of a given chemical formula are intended, no matter which tautomer is drawn for a given formula or which one is the most common.

本開示のデンドリマーはまた、本明細書において記載される適応症でもしくはそれ以外で用いるかどうかにかかわらず、それらが先行技術において公知の化合物よりも効果的であり、低い毒性であり、長く作用し、強力であり、少ない副作用をもたらし、容易に吸収され、および/もしくは良好な薬物動態プロファイル(例えば、高い経口バイオアベイラビリティおよび/もしくは低いクリアランス)を有し、ならびに/または先行技術において公知の化合物に比べて他の有用な薬理学的、物理的、もしくは化学的性質を有しうるという利点がありうる。 The dendrimers of the present disclosure are also more effective, less toxic and longer lasting than the compounds known in the prior art, whether or not they are used in the indications described herein or otherwise. And / or a compound known in the prior art that is potent, has few side effects, is easily absorbed, and / or has a good pharmacokinetic profile (eg, high oral bioavailability and / or low clearance). It may have the advantage that it may have other useful pharmacological, physical, or chemical properties as compared to.

さらに、本開示のデンドリマーを構成する原子は、そのような原子の全ての同位体形態を含むことが意図される。同位体は、本明細書において用いられる場合、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有する原子を含む。一般的な例として、限定するものではないが、水素の同位体には三重水素および重水素が含まれ、炭素の同位体には13Cおよび14Cが含まれる。 Furthermore, the atoms constituting the dendrimers of the present disclosure are intended to include all isotopic forms of such atoms. Isotopes, as used herein, include atoms having the same atomic number but different mass numbers. As a general example, but not limited to, hydrogen isotopes include tritium and deuterium, and carbon isotopes include 13 C and 14 C.

本明細書において提供されるデンドリマーの任意の塩形態の一部を形成している特定のアニオンもしくはカチオンは、塩が全体として薬理学的に許容される限り、重要ではないことが認識されるべきである。薬学的に許容される塩ならびにそれらの調製法および使用法のさらなる例は、Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (2002)に提示されており、これは参照により本明細書に組み入れられる。 It should be recognized that the particular anions or cations that form part of any of the salt forms of the dendrimers provided herein are not important as long as the salt as a whole is pharmacologically acceptable. Is. Further examples of pharmaceutically acceptable salts and their preparation and use are presented in the Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (2002), which are incorporated herein by reference.

C. ヘルパー脂質
本開示のいくつかの局面において、1つもしくは複数のヘルパー脂質を本開示の重合体と混合して組成物を作出する。いくつかの態様において、重合体は、1、2、3、4、もしくは5種類の異なるヘルパー脂質と混合される。重合体は、単一のタイプの複数の異なる脂質と混合できることが企図される。いくつかの態様において、脂質は、ステロイドもしくはステロイド誘導体でありうる。他の態様において、脂質はPEG脂質である。他の態様において、脂質はリン脂質である。他の態様において、デンドリマー組成物は、ステロイドもしくはステロイド誘導体、PEG脂質、およびリン脂質を含む。 C. Helper Lipids In some aspects of the present disclosure, one or more helper lipids are mixed with the polymers of the present disclosure to create compositions. In some embodiments, the polymer is mixed with 1, 2, 3, 4, or 5 different helper lipids. It is contemplated that the polymer can be mixed with a number of different lipids of a single type. In some embodiments, the lipid can be a steroid or a steroid derivative. In another embodiment, the lipid is a PEG lipid. In another embodiment, the lipid is a phospholipid. In other embodiments, the dendrimer composition comprises a steroid or steroid derivative, PEG lipid, and phospholipid.

1. ステロイドおよびステロイド誘導体
本開示のいくつかの局面において、重合体を1つもしくは複数のステロイドもしくはステロイド誘導体と混合してデンドリマー組成物を作出する。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体は、任意のステロイドもしくはステロイド誘導体を含む。本明細書において用いられる場合、いくつかの態様において、「ステロイド」という用語は、アルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、オキソ基、アシル基、または2つもしくはそれ以上の炭素原子間の二重結合を含む1つもしくは複数の置換をさらに含みうる四環17炭素環構造を有する化合物のクラスである。1つの局面において、ステロイドの環構造は、下記の式に示されるように、3つの縮合シクロヘキシル環および縮合シクロペンチル環を含む:

Figure 2022031692000112
いくつかの態様において、ステロイド誘導体は、1つもしくは複数の非アルキル置換を有する上記の環構造を含む。いくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体は、式が、
Figure 2022031692000113
のようにさらに定義される、ステロールである。本開示のいくつかの態様において、ステロイドもしくはステロイド誘導体は、コレスタンもしくはコレスタン誘導体である。コレスタンにおいて、環構造は、式:
Figure 2022031692000114
によってさらに定義される。上記のように、コレスタン誘導体は、上記環系の1つもしくは複数の非アルキル置換を含む。いくつかの態様において、コレスタンもしくはコレスタン誘導体は、コレステンもしくはコレステン誘導体またはステロールもしくはステロール誘導体である。他の態様において、コレスタンもしくはコレスタン誘導体は、コレステン(cholestere)およびステロールもしくはその誘導体の両方である。 1. Steroids and Steroid Derivatives In some aspects of this disclosure, polymers are mixed with one or more steroids or steroid derivatives to create dendrimer compositions. In some embodiments, the steroid or steroid derivative comprises any steroid or steroid derivative. As used herein, in some embodiments, the term "steroid" refers to an alkyl group, an alkoxy group, a hydroxy group, an oxo group, an acyl group, or a double bond between two or more carbon atoms. A class of compounds having a tetracyclic 17 carbonyl structure that may further comprise one or more substitutions comprising. In one aspect, the ring structure of the steroid comprises three fused cyclohexyl rings and a condensed cyclopentyl ring, as shown in the formula below:
Figure 2022031692000112
In some embodiments, the steroid derivative comprises the ring structure described above having one or more non-alkyl substitutions. In some embodiments, the steroid or steroid derivative has the formula,
Figure 2022031692000113
It is a sterol, which is further defined as. In some embodiments of the present disclosure, the steroid or steroid derivative is cholestane or a cholestane derivative. In Cholestane, the ring structure is the formula:
Figure 2022031692000114
Further defined by. As mentioned above, the cholestane derivative comprises one or more non-alkyl substitutions in the ring system. In some embodiments, the cholestane or cholestane derivative is cholestene or cholestene derivative or sterol or sterol derivative. In other embodiments, the cholestane or cholestane derivative is both cholestere and sterol or a derivative thereof.

いくつかの態様において、組成物は、約1:10～約1:20のステロイドのデンドリマーに対するモル比をさらに含みうる。いくつかの態様において、モル比は、約1:20、1:18、1:16、1:14、1:12、1:10、1:8、1:6、1:4、1:2、1:1、2:1、4:1、6:1、8:1～約10:1もしくはその中で導き出せる任意の範囲である。いくつかの態様において、モル比は約38:50もしくは約1:5である。 In some embodiments, the composition may further comprise a molar ratio of the steroid from about 1:10 to about 1:20 to the dendrimer. In some embodiments, the molar ratios are approximately 1:20, 1:18, 1:16, 1:14, 1:12, 1:10, 1: 8, 1: 6, 1: 4, 1: 2. , 1: 1, 2: 1, 4: 1, 6: 1, 8: 1 to about 10: 1 or any range that can be derived within it. In some embodiments, the molar ratio is about 38:50 or about 1: 5.

2. PEGもしくはPEG化脂質
本開示のいくつかの局面において、重合体は、デンドリマー組成物を作出するために1つもしくは複数のPEG化脂質(もしくはPEG脂質)と混合される。いくつかの態様において、本開示は、PEG基が結合した任意の脂質を用いることを含む。いくつかの態様において、PEG脂質は、グリセロール基に結合したPEG鎖をも含むジグリセリドである。他の態様において、PEG脂質は、PEG鎖でリンカー基に結合した1つもしくは複数のC6～C24長鎖アルキルもしくはアルケニル基またはC6～C24脂肪酸基を含む化合物である。PEG脂質のいくつかの非限定的な例としては、PEG修飾ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジン酸、PEGセラミドコンジュゲート化PEG修飾ジアルキルアミンおよびPEG修飾1,2-ジアシルオキシプロパン-3-アミン、PEG修飾ジアシルグリセロールおよびジアルキルグリセロールが挙げられる。いくつかの態様においては、PEG修飾ジアステアロイルホスファチジルエタノールアミンもしくはPEG修飾ジミリストイル-sn-グリセロール。いくつかの態様において、PEG修飾は、脂質のPEG成分の分子量によって測定される。いくつかの態様において、PEG修飾は、約100～約15,000の分子量を有する。いくつかの態様において、分子量は、約200～約500、約400～約5,000、約500～約3,000、もしくは約1,200～約3,000である。PEG修飾の分子量は、約100、200、400、500、600、800、1,000、1,250、1,500、1,750、2,000、2,250、2,500、2,750、3,000、3,500、4,000、4,500、5,000、6,000、7,000、8,000、9,000、10,000、12,500～約15,000である。本発明において使用されうる脂質のいくつかの非限定的な例は、米国特許第5,820,873号、WO 2010/141069、もしくは米国特許第8,450,298号によって教示されており、これらは参照により本明細書に組み入れられる。 2. PEG or PEGylated Lipids In some aspects of the disclosure, the polymer is mixed with one or more PEGylated lipids (or PEG lipids) to create a dendrimer composition. In some embodiments, the present disclosure comprises using any lipid to which a PEG group is attached. In some embodiments, the PEG lipid is a diglyceride that also contains a PEG chain attached to a glycerol group. In another embodiment, the PEG lipid is a compound comprising one or more C6-C24 long chain alkyl or alkenyl groups or C6-C24 fatty acid groups attached to a linker group with a PEG chain. Some non-limiting examples of PEG lipids include PEG-modified phosphatidylethanolamine and phosphatidic acid, PEG ceramide conjugated PEG-modified dialkylamine and PEG-modified 1,2-diacyloxypropane-3-amine, PEG-modified diacyl. Examples include glycerol and dialkylglycerol. In some embodiments, PEG-modified diasteroylphosphatidylethanolamine or PEG-modified dimyristyl-sn-glycerol. In some embodiments, PEG modification is measured by the molecular weight of the PEG component of the lipid. In some embodiments, the PEG modification has a molecular weight of about 100 to about 15,000. In some embodiments, the molecular weight is from about 200 to about 500, from about 400 to about 5,000, from about 500 to about 3,000, or from about 1,200 to about 3,000. The molecular weight of PEG modification is about 100, 200, 400, 500, 600, 800, 1,000, 1,250, 1,500, 1,750, 2,000, 2,250, 2,500, 2,750, 3,000, 3,500, 4,000, 4,500, 5,000, 6,000, 7,000, 8,000. , 9,000, 10,000, 12,500 to about 15,000. Some non-limiting examples of lipids that can be used in the present invention are taught by US Pat. No. 5,820,873, WO 2010/141069, or US Pat. No. 8,450,298, which are incorporated herein by reference. Will be.

別の局面において、PEG脂質は下記式を有する:

Figure 2022031692000115
式中、 R12およびR13は各々独立してアルキル(C≦24)、アルケニル(C≦24)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; Reは水素、アルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり; およびxは1～250である。いくつかの態様において、Reはメチルのようなアルキル(C≦8)である。R12およびR13は各々独立してアルキル(C≦4～20)である。いくつかの態様において、xは5～250である。1つの態様において、xは5～125であり、またはxは100～250である。いくつかの態様において、PEG脂質は1,2-ジミリストイル-sn-グリセロール、メトキシポリエチレングリコールである。 In another aspect, the PEG lipid has the following formula:
Figure 2022031692000115
In the equation, R 12 and R 13 are independently substituteds of alkyl (C ≤ 24) , alkenyl (C ≤ 24) , or any of these groups; R e is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) . ) Or substituted alkyl (C ≤ 8) ; and x is 1-250. In some embodiments, R e is a methyl-like alkyl (C ≤ 8) . R 12 and R 13 are each independently alkyl (C ≤ 4-20) . In some embodiments, x is between 5 and 250. In one embodiment, x is 5-125, or x is 100-250. In some embodiments, the PEG lipid is 1,2-dimiristoyl-sn-glycerol, methoxypolyethylene glycol.

別の局面において、PEG脂質は下記式を有する:

Figure 2022031692000116
式中、 n1は1～100の整数であり、n2およびn3は各々独立して1～29の整数から選択される。いくつかの態様において、n1は5、10、15、20、25、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、もしくは100、またはその中で導き出せる任意の範囲である。いくつかの態様において、n1は約30～約50である。いくつかの態様において、n2は5～23である。いくつかの態様において、n2は11～約17である。いくつかの態様において、n3は5～23である。いくつかの態様において、n3は11～約17である。 In another aspect, the PEG lipid has the following formula:
Figure 2022031692000116
In the equation, n 1 is an integer from 1 to 100, and n 2 and n 3 are independently selected from integers from 1 to 29, respectively. In some embodiments, n 1 is 5, 10, 15, 20, 25, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45. , 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100, or any range within which can be derived. In some embodiments, n 1 is about 30 to about 50. In some embodiments, n 2 is 5-23. In some embodiments, n 2 is 11 to about 17. In some embodiments, n 3 is 5-23. In some embodiments, n 3 is 11 to about 17.

いくつかの態様において、組成物は、約1:1～約1:250のPEG脂質のデンドリマーに対するモル比をさらに含みうる。いくつかの態様において、モル比は、約1:1、1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90、1:100、1:110、1:120、1:125、1:150、1:175、1:200、1:225～約1:250もしくはその中で導き出せる任意の範囲である。いくつかの態様において、モル比は約1:25もしくは約3:100である。 In some embodiments, the composition may further comprise a molar ratio of PEG lipids from about 1: 1 to about 1: 250 to the dendrimer. In some embodiments, the molar ratios are approximately 1: 1, 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1:90. , 1: 100, 1: 110, 1: 120, 1: 125, 1: 150, 1: 175, 1: 200, 1: 225 to about 1: 250 or any range that can be derived within it. In some embodiments, the molar ratio is about 1:25 or about 3: 100.

3. リン脂質
本開示のいくつかの局面において、重合体は、デンドリマー組成物を作出するために1つもしくは複数のリン脂質と混合される。いくつかの態様においては、リン酸基をも含む任意の脂質。いくつかの態様において、リン脂質は、1つもしくは2つの長鎖C6～C24アルキルもしくはアルケニル基、グリセロールもしくはスフィンゴシン、1つもしくは2つのリン酸基、および任意で、有機小分子を含む構造である。いくつかの態様において、有機小分子は、アミノ酸、糖、またはコリンもしくはエタノールアミンのような、アミノ置換アルコキシ基である。いくつかの態様において、リン脂質はホスファチジルコリンである。いくつかの態様において、リン脂質はジステアロイルホスファチジルコリンもしくはジオレオイルホスファチジルエタノールアミンである。 3. Phospholipids In some aspects of the disclosure, the polymer is mixed with one or more phospholipids to create a dendrimer composition. In some embodiments, any lipid that also contains a phosphate group. In some embodiments, the phospholipid is a structure comprising one or two long chain C6-C24 alkyl or alkenyl groups, glycerol or sphingosine, one or two phosphate groups, and optionally small organic molecules. .. In some embodiments, the small organic molecule is an amino-substituted alkoxy group, such as an amino acid, sugar, or choline or ethanolamine. In some embodiments, the phospholipid is phosphatidylcholine. In some embodiments, the phospholipid is distearoylphosphatidylcholine or dioleoil phosphatidylethanolamine.

いくつかの態様において、組成物は、約1:10～約1:20のリン脂質のデンドリマーに対するモル比をさらに含みうる。いくつかの態様において、モル比は、約1:20、1:18、1:16、1:14、1:12、1:10、1:8、1:6、1:4、1:2、1:1、2:1、4:1、6:1、8:1～約10:1もしくはその中で導き出せる任意の範囲である。いくつかの態様において、モル比は約38:50もしくは約1:5である。 In some embodiments, the composition may further comprise a molar ratio of phospholipids from about 1:10 to about 1:20 to the dendrimer. In some embodiments, the molar ratios are approximately 1:20, 1:18, 1:16, 1:14, 1:12, 1:10, 1: 8, 1: 6, 1: 4, 1: 2. , 1: 1, 2: 1, 4: 1, 6: 1, 8: 1 to about 10: 1 or any range that can be derived within it. In some embodiments, the molar ratio is about 38:50 or about 1: 5.

D. 核酸および核酸に基づく治療剤
1. 核酸
本開示のいくつかの局面において、デンドリマー組成物は、1つもしくは複数の核酸を含む。いくつかの態様において、デンドリマー組成物は、約5:1～約1:100のデンドリマーに対する重量比で存在する1つもしくは複数の核酸を含む。いくつかの態様において、核酸のデンドリマーに対する重量比は、約5:1、2.5:1、1:1、1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90、もしくは1:100、またはその中で導き出せる任意の範囲である。いくつかの態様において、重量比は約1:25もしくは約1:7である。さらに、本開示は、本明細書において開示される特定の核酸に限定されないことが明らかなはずである。しかしながら、当業者は、ヒト以外の種(例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、サル、テナガザル、チンパンジー、類人猿、ヒヒ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよび他の種)由来の核酸を含む核酸のさまざまな他の供給源における関連した同族体を容易に同定することができるので、本発明は、核酸の任意の特定の供給源、配列、もしくはタイプに範囲が限定されない。本開示において用いられる核酸は、天然に存在する配列に基づく配列を含みうることが企図される。遺伝暗号の縮重を考慮すれば、天然配列のヌクレオチド配列と同一であるヌクレオチドの少なくとも約50%、一般的には少なくとも約60%、より一般的には約70%、最も一般的には約80%、好ましくは少なくとも約90%および最も好ましくは約95%を有する配列。別の態様において、核酸は、天然配列に対する相補配列であり、または75%、80%、85%、90%、95%および100%に相補的である。 D. Nucleic acid and nucleic acid-based therapeutic agents
1. Nucleic Acids In some aspects of the disclosure, the dendrimer composition comprises one or more nucleic acids. In some embodiments, the dendrimer composition comprises one or more nucleic acids present in a weight ratio of about 5: 1 to about 1: 100 to the dendrimer. In some embodiments, the weight ratio of nucleic acid to dendrimer is about 5: 1, 2.5: 1, 1: 1, 1: 5, 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30. , 1:35, 1:40, 1:45, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1:90, or 1: 100, or any range within which can be derived. In some embodiments, the weight ratio is about 1:25 or about 1: 7. Furthermore, it should be clear that the present disclosure is not limited to the particular nucleic acids disclosed herein. However, those skilled in the art include nucleic acids from non-human species (eg, mice, rats, rabbits, dogs, monkeys, gibbons, chimpanzees, apes, sheep, cows, pigs, horses, sheep, cats and other species). The present invention is not limited to any particular source, sequence, or type of nucleic acid, as related apes in various other sources of nucleic acid can be easily identified. It is contemplated that the nucleic acids used in the present disclosure may include sequences based on naturally occurring sequences. Considering the degeneracy of the genetic code, at least about 50%, generally at least about 60%, more generally about 70%, most commonly about about 50% of nucleotides that are identical to the nucleotide sequence of the natural sequence. Sequences with 80%, preferably at least about 90% and most preferably about 95%. In another embodiment, the nucleic acid is a complementary sequence to the native sequence, or is complementary to 75%, 80%, 85%, 90%, 95% and 100%.

いくつかの局面において、核酸は、インビボにおいて存在する別の配列をサイレンシングするか、該別の配列に相補的であるか、または取って代わる配列である。長さが17塩基の配列は、ヒトゲノムにおいて一度だけ出現するはずであり、それゆえ、独自の標的配列を特定するのに十分である。より短いオリゴマーは作出することがそれだけ容易であり、インビボでの接近性を増加させるが、ハイブリダイゼーションの特異性の決定には多数の他の要因が関与する。オリゴヌクレオチドのその相補標的に対する結合親和性および配列特異性の両方が、長さの増加とともに増加する。8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100もしくはそれ以上の塩基対の例示的なオリゴヌクレオチドが用いられるが、他のものも企図されると考えられる。250、500、1000、1212、1500、2000、2500、3000もしくはそれ以上をコードするより長いポリヌクレオチドが同様に企図される。 In some aspects, the nucleic acid is a sequence that silences, complements, or replaces another sequence that is present in vivo. Sequences with a length of 17 bases should appear only once in the human genome and are therefore sufficient to identify unique target sequences. Shorter oligomers are so easy to produce and increase in vivo accessibility, but many other factors are involved in determining the specificity of hybridization. Both the binding affinity and sequence specificity of an oligonucleotide to its complementary target increase with increasing length. 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, Illustrative oligonucleotides of 85, 90, 95, 100 or more base pairs are used, but others are also conceivable. Longer polynucleotides encoding 250, 500, 1000, 1212, 1500, 2000, 2500, 3000 or more are similarly contemplated.

本明細書において用いられる核酸は、ゲノムDNAに由来してもよく、すなわち、特定の生物のゲノムから直接クローン化されてもよい。しかし、好ましい態様において、核酸は相補的DNA (cDNA)を含むであろう。天然のイントロンもしくは別の遺伝子に由来するイントロンを加えたcDNAも企図される; そのように操作された分子は「ミニ遺伝子」といわれることもある。最低でも、本発明のこれらのおよび他の核酸は、例えば、ゲル電気泳動における分子量標準として使用されうる。 The nucleic acids used herein may be derived from genomic DNA, i.e., cloned directly from the genome of a particular organism. However, in a preferred embodiment, the nucleic acid will contain complementary DNA (cDNA). A cDNA with an intron added from a natural intron or another gene is also conceived; such engineered molecules are sometimes referred to as "minigenes". At a minimum, these and other nucleic acids of the invention can be used, for example, as a molecular weight standard in gel electrophoresis.

「cDNA」という用語は、鋳型としてメッセンジャーRNA (mRNA)を用いて調製されたDNAをいうように意図される。ゲノムDNAまたはゲノム、非プロセッシングもしくは部分的にプロセッシングされたRNA鋳型から重合されたDNAとは対照的に、cDNAを用いることの利点は、cDNAが主として、対応するタンパク質のコード配列を含むということである。最適な発現のために非コード領域が必要とされる場合、またはイントロンのような非コード領域がアンチセンス戦略において標的とされる場合のような、完全もしくは部分ゲノム配列が好ましい場合がありうる。 The term "cDNA" is intended to refer to DNA prepared using messenger RNA (mRNA) as a template. The advantage of using cDNA, as opposed to genomic or genomic, non-processed or partially processed RNA templates, is that the cDNA primarily contains the coding sequence of the corresponding protein. be. Complete or partial genomic sequences may be preferred, such as when non-coding regions are required for optimal expression, or where non-coding regions such as introns are targeted in antisense strategies.

いくつかの態様において、核酸は、遺伝子もしくは遺伝子産物の発現を阻害する1つもしくは複数のアンチセンスセグメントを含む。アンチセンス方法論は、核酸が「相補的」配列と対になる傾向があるという事実を利用する。相補的とは、ポリヌクレオチドが、標準的なワトソン-クリック相補性規則にしたがって塩基対形成できるものであることを意味する。すなわち、より大きなプリンがより小さなピリミジンと塩基対を形成して、シトシンと対になったグアニン(G:C)、DNAの場合にはチミンと対になったアデニン(A:T)、もしくはRNAの場合にはウラシルと対になったアデニン(A:U)の組み合わせを形成するであろう。イノシン、5-メチルシトシン、6-メチルアデニン、ヒポキサンチンおよび他のものなどの、あまり一般的でない塩基をハイブリダイズする配列に含めることで、対形成は妨害されない。 In some embodiments, the nucleic acid comprises one or more antisense segments that inhibit the expression of a gene or gene product. Antisense methodologies take advantage of the fact that nucleic acids tend to be paired with "complementary" sequences. Complementarity means that the polynucleotide is capable of base pairing according to standard Watson-Click complementarity rules. That is, guanine (G: C) paired with cytosine when a larger purine base pairs with a smaller pyrimidine, or adenine (A: T) paired with thymine in the case of DNA, or RNA. In the case of, it will form a paired adenine (A: U) combination with uracil. Pairing is not disrupted by including less common bases in the hybridizing sequence, such as inosine, 5-methylcytosine, 6-methyladenine, hypoxanthine and others.

ポリヌクレオチドで二本鎖(ds) DNAを標的化すると三重らせん形成が起こる; RNAを標的化すると二重らせん形成が起こるであろう。アンチセンスポリヌクレオチドは、標的細胞に導入されると、その標的ポリヌクレオチドに特異的に結合し、転写、RNAプロセッシング、輸送、翻訳および/もしくは安定性を妨げる。アンチセンスRNA構築体、もしくはそのようなアンチセンスRNAをコードするDNAは、宿主細胞内で、インビトロもしくはインビボのどちらかで、例えばヒト対象を含む宿主動物内で遺伝子転写もしくは翻訳またはその両方を阻害するために利用されうる。 Targeting double-stranded (ds) DNA with polynucleotides will result in triple helix formation; targeting RNA will result in double helix formation. When introduced into a target cell, the antisense polynucleotide specifically binds to the target polynucleotide and interferes with transcription, RNA processing, transport, translation and / or stability. Antisense RNA constructs, or DNA encoding such antisense RNA, inhibit gene transcription and / or translation in host cells, either in vitro or in vivo, eg, in host animals, including human subjects. Can be used to.

アンチセンス構築体は、プロモーターおよび他の制御領域、エクソン、イントロンもしくは遺伝子のエクソン-イントロン境界にさえも結合するようにデザインされうる。最も有効なアンチセンス構築体は、イントロン/エクソンスプライスジャンクションに相補的な領域を含むと考えられる。したがって、好ましい態様は、イントロン-エクソンスプライスジャンクションの50～200塩基内の領域に対して相補性を有するアンチセンス構築体を含むことが提案される。いくつかのエクソン配列を、その標的選択性に重大な影響を及ぼすことなく構築体に含めることができることが観察されている。含まれるエクソン材料の量は、用いられる特定のエクソンおよびイントロン配列に依って変化するであろう。単に、インビトロで構築体を試験して、正常細胞機能が影響を受けるかどうか、または相補配列を有する関連遺伝子の発現が影響を受けるかどうかを決定することによって、あまりにも多くのエクソンDNAが含まれているかどうかを容易に試験することができる。 The antisense construct can be designed to bind to promoters and other regulatory regions, exons, introns or even exon-intron boundaries of genes. The most effective antisense constructs are believed to contain regions complementary to the intron / exon splice junction. Therefore, it is proposed that a preferred embodiment comprises an antisense construct having complementarity to a region within 50-200 bases of the intron-exon splice junction. It has been observed that several exon sequences can be included in the construct without significant impact on its target selectivity. The amount of exon material contained will vary depending on the particular exon and intron sequence used. Too much exon DNA is contained by simply testing the construct in vitro to determine if normal cell function is affected or if the expression of related genes with complementary sequences is affected. You can easily test if it is.

上記のように、「相補的」もしくは「アンチセンス」は、それらの全長にわたって実質的に相補的であり、かつ塩基ミスマッチがほとんどないポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、長さが15塩基の配列は、位置番号13もしくは14で相補的なヌクレオチドを有する場合、相補的と称されうる。当然のことながら、完全に相補的な配列は、その全長にわたって完全に相補的であり、かつ塩基のミスマッチを有しない配列であろう。相同性の程度がより低い他の配列も企図される。例えば、相同性の高い領域は限られているが、非相同領域も含むアンチセンス構築体(例えば、リボザイム; 以下参照)をデザインすることができる。これらの分子は、50%未満の相同性を有するが、適切な条件下で標的配列に結合するであろう。 As mentioned above, "complementary" or "antisense" means polynucleotide sequences that are substantially complementary over their full length and have few base mismatches. For example, a sequence 15 bases in length can be referred to as complementary if it has complementary nucleotides at position number 13 or 14. Naturally, a perfectly complementary sequence would be a sequence that is perfectly complementary over its entire length and has no base mismatch. Other sequences with a lower degree of homology are also contemplated. For example, antisense constructs (eg, ribozymes; see below) can be designed that include non-homologous regions, although the regions of high homology are limited. These molecules have less than 50% homology but will bind to the target sequence under appropriate conditions.

ゲノムDNAの一部をcDNAもしくは合成配列と組み合わせてsiRNAを形成するか、もしくは特異的構築体を作出することが有利でありうる。例えば、イントロンが最終的な構築体において所望される場合、ゲノムクローンを用いる必要がある。cDNA、siRNA、もしくは合成されたポリヌクレオチドは、より好都合な制限部位を構築体の残りの部分に提供することができ、それゆえ、配列の残部に用いられる。他の態様は、ゲノム配列もしくはコーディング/非コーディング転写産物を標的化するために使用されうるdsRNAもしくはssRNAを含む。 It may be advantageous to combine a portion of genomic DNA with cDNA or synthetic sequences to form siRNAs or to create specific constructs. For example, if an intron is desired in the final construct, genomic clones should be used. The cDNA, siRNA, or synthesized polynucleotide can provide a more favorable restriction site for the rest of the construct and is therefore used for the rest of the sequence. Other embodiments include dsRNAs or ssRNAs that can be used to target genomic sequences or coding / non-coding transcripts.

他の態様において、デンドリマー組成物は、遺伝子治療において用いられる1つもしくは複数の発現ベクターを含む核酸を含みうる。発現には、ベクターにおいて適切なシグナルが提供されることが必要とされ、これには宿主細胞における関心対象の遺伝子の発現を推進するウイルス源および哺乳動物源の両方由来のエンハンサー/プロモーターのような、さまざまな調節要素が含まれる。宿主細胞におけるメッセンジャーRNA安定性および翻訳可能性を最適化するようにデザインされた要素も定義される。薬物選択マーカーの発現をポリペプチドの発現に結びつける要素のように、産物を発現する永続的で安定な細胞クローンを樹立するためのいくつかの主要な薬物選択マーカーの使用条件も提供される。 In other embodiments, the dendrimer composition may comprise a nucleic acid comprising one or more expression vectors used in gene therapy. Expression requires the vector to provide the appropriate signal, such as enhancers / promoters from both viral and mammalian sources that drive expression of the gene of interest in the host cell. , Contains various regulatory elements. Elements designed to optimize messenger RNA stability and translatability in host cells are also defined. Conditions for the use of several major drug selection markers for establishing persistent and stable cell clones that express the product, such as the factors that link the expression of drug selection markers to the expression of polypeptides, are also provided.

本出願を通して、「発現構築体」という用語は、核酸コード配列の一部もしくは全部が転写されうる遺伝子産物をコードする核酸を含む任意のタイプの遺伝子構築体を含むことが意図される。転写産物はタンパク質に翻訳されてもよいが、そうである必要はない。ある種の態様において、発現は、遺伝子の転写および遺伝子産物へのmRNAの翻訳の両方を含む。他の態様において、発現は、関心対象の遺伝子をコードする核酸の転写を含むだけである。 Throughout this application, the term "expression construct" is intended to include any type of gene construct, including nucleic acids encoding gene products in which some or all of the nucleic acid coding sequences can be transcribed. The transcript may be translated into a protein, but it does not have to be. In certain embodiments, expression involves both transcription of the gene and translation of the mRNA into the gene product. In other embodiments, expression only involves transcription of the nucleic acid encoding the gene of interest.

「ベクター」という用語は、核酸配列が複製されうる細胞への導入のため核酸配列が挿入されうる担体核酸分子をいうように用いられる。核酸配列は「外因性」であることができ、これにより、それがベクターを導入する細胞に対して外来であること、またはその配列が細胞における配列と相同であるが、配列が通常見出されない宿主細胞核酸内の位置にあることが意味される。ベクターには、プラスミド、コスミド、ウイルス(バクテリオファージ、動物ウイルス、および植物ウイルス)、ならびに人工染色体(例えば、YAC)が含まれる。当業者は、参照によりともに本明細書に組み入れられる、Sambrook et al. (1989)およびAusubel et al. (1994)に記述されている標準的な組み換え技法によりベクターを構築するために知識を身に付けているであろう。 The term "vector" is used to refer to a carrier nucleic acid molecule into which a nucleic acid sequence can be inserted for introduction into a cell in which the nucleic acid sequence can be replicated. The nucleic acid sequence can be "extrinsic" so that it is foreign to the cell into which the vector is introduced, or the sequence is homologous to the sequence in the cell, but the sequence is usually not found. It is meant to be in a position within the host cell nucleic acid. Vectors include plasmids, cosmids, viruses (bacteriophages, animal viruses, and plant viruses), and artificial chromosomes (eg, YAC). Those of skill in the art will be knowledgeable to construct vectors by the standard recombination techniques described in Sambrook et al. (1989) and Ausubel et al. (1994), both incorporated herein by reference. Will be attached.

「発現ベクター」という用語は、転写されうる遺伝子産物の少なくとも一部をコードする核酸配列を含むベクターをいう。ある場合には、RNA分子はその後、タンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドに翻訳される。他の場合には、これらの配列は、例えば、アンチセンス分子もしくはリボザイムの産生において翻訳されない。発現ベクターは、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配列の転写および場合によっては翻訳に必要な核酸配列をいう種々の「制御配列」を含むことができる。転写および翻訳を統べる制御配列に加えて、ベクターおよび発現ベクターは、同様に他の機能を果たす核酸配列を含むことができ、以下に記述される。 The term "expression vector" refers to a vector containing a nucleic acid sequence that encodes at least a portion of a gene product that can be transcribed. In some cases, the RNA molecule is then translated into a protein, polypeptide or peptide. In other cases, these sequences are not translated, for example, in the production of antisense molecules or ribozymes. Expression vectors can include various "regulatory sequences" that refer to nucleic acid sequences required for transcription and, in some cases, translation of functionally linked coding sequences in a particular host organism. In addition to the regulatory sequences governing transcription and translation, vectors and expression vectors can contain nucleic acid sequences that also perform other functions and are described below.

2. siRNA
上記のように、本発明は、遺伝子もしくは遺伝子産物の発現および/もしくは活性化を低減するための1つもしくは複数の阻害性核酸の使用を企図する。阻害性核酸の例としては、siRNA (低分子干渉RNA)、短鎖ヘアピンRNA (shRNA)、二本鎖RNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムのような、核酸配列を標的にした分子およびアプタマーのような遺伝子もしくは遺伝子産物を標的にした分子が挙げられるが、これらに限定されることはない。 2. siRNA
As mentioned above, the present invention contemplates the use of one or more inhibitory nucleic acids to reduce expression and / or activation of a gene or gene product. Examples of inhibitory nucleic acids include nucleic acid sequence-targeted molecules and aptamers such as siRNA (small interfering RNA), short hairpin RNA (shRNA), double-stranded RNA, antisense oligonucleotides, and ribozymes. Examples include, but are not limited to, molecules targeting various genes or gene products.

阻害性核酸は、遺伝子の転写を阻害するか、または細胞内の遺伝子転写産物の翻訳を妨げうる。阻害性核酸は、16～1000ヌクレオチド長、およびある種の態様において18～100ヌクレオチド長でありうる。 Inhibiting nucleic acids can inhibit the transcription of genes or interfere with the translation of intracellular gene transcription products. Inhibitor nucleic acids can be 16-1000 nucleotides in length, and in certain embodiments 18-100 nucleotides in length.

阻害性核酸は当技術分野において周知である。例えば、siRNA、shRNAおよび二本鎖RNAは、米国特許第6,506,559号および同第6,573,099号に、ならびに米国特許出願公開第2003/0051263号、同第2003/0055020号、同第2004/0265839号、同第2002/0168707号、同第2003/0159161号、および同第2004/0064842号に記述されており、これらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。 Inhibitor nucleic acids are well known in the art. For example, siRNA, shRNA and double-stranded RNA are found in US Pat. Nos. 6,506,559 and 6,573,099, as well as US Patent Applications Publications 2003/0051263, 2003/0055020, 2004/0265839, and the same. It is described in 2002/0168707, 2003/0159161, and 2004/0064842, all of which are incorporated herein by reference in their entirety.

1998年にFireおよび同僚らによるRNAiの発見以来、生化学的機構は急速に特徴付けられている。二本鎖RNA (dsRNA)は、RNAase IIIファミリーのリボヌクレアーゼであるDicerによって切断される。このプロセスにより、約21ヌクレオチド長のsiRNAが得られる。これらのsiRNAは、標的mRNAに導かれる多タンパク質RNA誘導サイレンシング複合体(RISC)に組み入れられる。RISCは、相補領域の中央で標的mRNAを切断する。哺乳動物細胞では、短いRNA断片(およそ22ヌクレオチド)である関連マイクロRNA (miRNA)が見出される。miRNAは、不完全なヘアピンRNA構造を有するより長い(およそ70ヌクレオチド)前駆体のDicer媒介切断後に生成される。miRNAは、標的mRNAの翻訳抑制をもたらすmiRNA-タンパク質複合体(miRNP)に組み入れられる。 Since the discovery of RNAi by Fire and colleagues in 1998, the biochemical mechanism has been rapidly characterized. Double-stranded RNA (dsRNA) is cleaved by Dicer, a ribonuclease in the RNAase III family. This process yields siRNAs that are approximately 21 nucleotides in length. These siRNAs are incorporated into a multiprotein RNA-induced silencing complex (RISC) that is directed to the target mRNA. RISC cleaves the target mRNA in the center of the complementary region. In mammalian cells, related microRNAs (miRNAs), which are short RNA fragments (approximately 22 nucleotides), are found. miRNAs are produced after Dicer-mediated cleavage of longer (approximately 70 nucleotides) precursors with incomplete hairpin RNA structures. miRNAs are incorporated into miRNA-protein complexes (miRNPs) that result in translational repression of target mRNAs.

RNAi効果を生じさせることができる核酸をデザインする際には、siRNAの性質、サイレンシング効果の持続性、および送達系の選択のような、考慮する必要のあるいくつかの要因がある。RNAi効果をもたらすために、生物に導入されるsiRNAは、典型的には、エクソン配列を含むであろう。さらに、RNAiプロセスは相同性に依存するので、相同であるが遺伝子特異的ではない配列間の交差干渉の可能性を最小にしながら、遺伝子特異性を最大とするように配列を注意深く選択しなければならない。特に、siRNAは、siRNAの配列とEphAヌクレオチド配列の一部との間で、80、85、90、95、98%あるいは100%超の同一性を示す。標的遺伝子と約80%未満の同一性の配列は実質的に有効性が低い。したがって、siRNAと阻害される遺伝子との間の同一性が高いほど、無関係の遺伝子の発現が影響を受ける可能性は低くなるであろう。 There are several factors that need to be considered when designing nucleic acids that can produce RNAi effects, such as the nature of siRNAs, the persistence of silencing effects, and the choice of delivery system. SiRNAs introduced into an organism to provide RNAi effects will typically contain exon sequences. In addition, the RNAi process is homologous, so sequences must be carefully selected to maximize gene specificity while minimizing the possibility of cross-interference between homologous but non-gene specific sequences. It doesn't become. In particular, siRNAs exhibit 80, 85, 90, 95, 98% or greater than 100% identity between the siRNA sequence and part of the EphA nucleotide sequence. Sequences with less than about 80% identity with the target gene are substantially less effective. Therefore, the higher the identity between the siRNA and the inhibited gene, the less likely it is that the expression of an unrelated gene will be affected.

さらに、siRNAのサイズは重要な考慮事項である。いくつかの態様において、本開示は、少なくとも約19～25ヌクレオチドを含み、遺伝子発現を調節することができるsiRNA分子に関する。本開示の文脈において、siRNAは特に、500、200、100、50、25、もしくは20ヌクレオチド長未満である。いくつかの態様において、siRNAは、約25ヌクレオチド～約35ヌクレオチド長もしくは約19ヌクレオチド～約25ヌクレオチド長である。 In addition, the size of siRNA is an important consideration. In some embodiments, the present disclosure relates to siRNA molecules that contain at least about 19-25 nucleotides and are capable of regulating gene expression. In the context of the present disclosure, siRNAs are particularly less than 500, 200, 100, 50, 25, or 20 nucleotides in length. In some embodiments, the siRNA is about 25 nucleotides to about 35 nucleotides in length or about 19 nucleotides to about 25 nucleotides in length.

siRNA媒介遺伝子サイレンシングの有効性を改善するために、mRNA上の標的部位の選択のためのガイドラインが、siRNAの最適デザインのために開発されている(Soutschek et al., 2004; Wadhwa et al., 2004)。これらの戦略は、最大の遺伝子ノックダウンを達成するためにsiRNA配列を選択するための合理的なアプローチを可能にしうる。細胞および組織へのsiRNAの侵入を容易にするため、アデノウイルス、レンチウイルスおよびレトロウイルスのようなプラスミドおよびウイルスベクターを含む種々のベクターが用いられている(Wadhwa et al., 2004)。 To improve the effectiveness of siRNA-mediated gene silencing, guidelines for selecting target sites on mRNA have been developed for optimal siRNA design (Soutschek et al., 2004; Wadhwa et al. , 2004). These strategies may enable a rational approach for selecting siRNA sequences to achieve maximum gene knockdown. Various vectors, including plasmids and viral vectors such as adenovirus, lentivirus and retrovirus, have been used to facilitate the entry of siRNA into cells and tissues (Wadhwa et al., 2004).

阻害性核酸内で、核酸の成分は、全体にわたって同じタイプもしくは同種のものである必要はない(例えば、阻害性核酸は、ヌクレオチドおよび核酸もしくはヌクレオチド類似体を含みうる)。典型的には、阻害性核酸は二本鎖構造を形成する; 二本鎖構造は、部分的にもしくは完全に相補的な2つの別個の核酸から生じうる。本発明のある種の態様において、阻害性核酸は、単一の核酸(ポリヌクレオチド)もしくは核酸類似体のみを含み、それ自体で相補的になる(例えば、ヘアピンループを形成する)ことにより二本鎖構造を形成しうる。阻害性核酸の二本鎖構造は、その導出可能な全ての範囲を含めて、16～500もしくはそれ以上の連続した核酸塩基を含みうる。阻害性核酸は、相補的核酸(これは同じ核酸の別の部分もしくは別個の相補的核酸でありうる)とハイブリダイズして二本鎖構造を形成する17～35個の連続核酸塩基、より詳細には18～30個の連続核酸塩基、より詳細には19～25核酸塩基、より詳細には20～23個の連続核酸塩基、もしくは20～22個の連続核酸塩基、もしくは21個の連続核酸塩を含みうる。 Within the inhibitory nucleic acid, the components of the nucleic acid need not be of the same type or homologous throughout (eg, the inhibitory nucleic acid can include nucleotides and nucleic acids or nucleotide analogs). Typically, the inhibitory nucleic acid forms a double-stranded structure; the double-stranded structure can result from two distinct nucleic acids that are partially or completely complementary. In certain embodiments of the invention, the inhibitory nucleic acid comprises only a single nucleic acid (polynucleotide) or nucleic acid analog and is complementary in itself (eg, forming a hairpin loop). Can form a chain structure. The double-stranded structure of an inhibitory nucleic acid can include 16-500 or more contiguous nucleobases, including the entire derivable range. Inhibitor nucleic acids are 17-35 contiguous nucleic acid bases, more detailed, that hybridize with complementary nucleic acids, which can be different parts of the same nucleic acid or separate complementary nucleic acids, to form a double-stranded structure. 18 to 30 consecutive nucleic acid bases, more specifically 19 to 25 nucleic acid bases, more specifically 20 to 23 consecutive nucleic acid bases, or 20 to 22 consecutive nucleic acid bases, or 21 consecutive nucleic acid bases. May contain salt.

siRNAは、商業的供給源、天然供給源から得ることができ、または当業者に周知のいくつかの技法のいずれかを用いて合成することができる。例えば、予めデザインされたsiRNAの商業的供給源にはInvitrogenのStealth(商標) Select技術(Carlsbad, CA)、Ambion(登録商標) (Austin, TX)、およびQiagen(登録商標) (Valencia, CA)が含まれる。本発明の組成物および方法に適用できる阻害性核酸は、遺伝子もしくは遺伝子産物の検証された下方調節因子であることが任意の供給源によって見出された任意の核酸配列でありうる。 The siRNA can be obtained from a commercial source, a natural source, or synthesized using any of several techniques well known to those of skill in the art. For example, Invitrogen's Stealth® Select Technology (Carlsbad, CA), Ambion® (Austin, TX), and Qiagen® (Valencia, CA) are commercial sources of pre-designed siRNA. Is included. The inhibitory nucleic acid applicable to the compositions and methods of the invention can be any nucleic acid sequence found by any source to be a validated down-regulator of a gene or gene product.

いくつかの態様において、本発明は、遺伝子をコードする核酸の少なくとも10個、しかし30個以下の連続するヌクレオチドに実質的に相補的であり、かつ遺伝子もしくは遺伝子産物の発現を低減させる少なくとも1つの鎖を有する、少なくとも19個のヌクレオチドの単離されたsiRNA分子を特徴とする。本開示の1つの態様において、siRNA分子は、遺伝子もしくは遺伝子産物をコードするmRNAの少なくとも10個、しかし30個以下の連続するヌクレオチドに実質的に相補的な少なくとも1つの鎖を有する。 In some embodiments, the invention is substantially complementary to at least 10 but no more than 30 contiguous nucleotides of the nucleic acid encoding the gene, and at least one that reduces expression of the gene or gene product. It is characterized by an isolated siRNA molecule of at least 19 nucleotides having a strand. In one embodiment of the disclosure, the siRNA molecule has at least 10 strands of mRNA encoding a gene or gene product, but at least one strand that is substantially complementary to up to 30 contiguous nucleotides.

1つの態様において、siRNA分子は、標的治療用タンパク質をコードする核酸配列のいずれかの少なくとも10個の連続するヌクレオチドと、少なくとも75、80、85、もしくは90%相同であり、特に少なくとも95%、99%、もしくは100%類似もしくは同一であり、または前記の間の任意の割合そうである(例えば、本発明は75%およびそれ以上、80%およびそれ以上、85%およびそれ以上などを企図し、前記範囲はそれらの間の全ての整数を含むように意図される)。 In one embodiment, the siRNA molecule is at least 75, 80, 85, or 90% homologous to at least 10 contiguous nucleotides of any of the nucleic acid sequences encoding the targeted therapeutic protein, particularly at least 95%. 99%, or 100% similar or identical, or any percentage between the above (eg, the invention contemplates 75% and above, 80% and above, 85% and above, etc.). , The range is intended to include all integers between them).

siRNAはまた、1つもしくは複数のヌクレオチドの改変を含みうる。そのような改変は、19～25ヌクレオチドRNAの末端もしくは内部(RNAの1つもしくは複数のヌクレオチドの位置)へのような、非ヌクレオチド材料の付加を含むことができる。ある種の局面において、RNA分子は3'-ヒドロキシル基を含む。本発明のRNA分子中のヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドを含む、非標準ヌクレオチドを含むこともできる。二本鎖オリゴヌクレオチドは、修飾された骨格、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、もしくは当技術分野において公知の他の修飾骨格を含み、または非天然ヌクレオシド間結合を含みうる。siRNAのさらなる修飾(例えば、2'-O-メチルリボヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロリボヌクレオチド、「ユニバーサル塩基」ヌクレオチド、5-C-メチルヌクレオチド、1つもしくは複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合、および逆位デオキシ塩基性残基の組み入れ)は、米国特許出願公開第2004/0019001号および米国特許第6,673,611号(この各々は、参照によりその全体が組み入れられる)において見出すことができる。集合的に、そのような改変された全ての上記核酸もしくはRNAは、修飾siRNAといわれる。 The siRNA can also contain modifications of one or more nucleotides. Such modifications can include the addition of non-nucleotide material, such as to the end or interior of a 19-25 nucleotide RNA (position of one or more nucleotides in the RNA). In certain aspects, RNA molecules contain 3'-hydroxyl groups. Nucleotides in the RNA molecule of the invention can also include non-standard nucleotides, including non-naturally occurring nucleotides or deoxyribonucleotides. Double-stranded oligonucleotides may include modified backbones such as phosphorothioates, phosphorodithioates, or other modified backbones known in the art, or may contain unnatural nucleoside linkages. Further modifications of siRNA (eg, 2'-O-methylribonucleotide, 2'-deoxy-2'-fluororibonucleotide, "universal base" nucleotide, 5-C-methylnucleotide, one or more phosphorothioate nucleotide linkages , And the incorporation of inverted deoxybasic residues) can be found in US Patent Application Publication No. 2004/0019001 and US Pat. No. 6,673,611, each of which is incorporated by reference in its entirety. Collectively, all such modified nucleic acids or RNAs are referred to as modified siRNAs.

1つの態様において、siRNAは、特定の遺伝子産物の発現を、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、もしくは少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、もしくは少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%もしくはそれ以上、または前記の間の任意の範囲だけ減少させることができる。 In one embodiment, siRNAs express at least 10%, at least 20%, at least 30%, or at least 40%, at least 50%, at least 60%, or at least 70%, at least 75% of the expression of a particular gene product. It can be reduced by at least 80%, at least 90%, at least 95% or more, or by any range between the above.

3. CRISPR/CAS
CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeat)(クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート)は、塩基配列の短い繰り返しを含むDNA座である。各繰り返しの後に、ウイルスへの以前の曝露からの「スペーサーDNA」の短いセグメントが続く。CRISPRは、配列決定された真正細菌ゲノムの約40%および配列決定された古細菌の90%に見出される。CRISPRは、CRISPRに関連するタンパク質をコードするcas遺伝子と関係していることが多い。CRISPR/Casシステムは、原核生物の免疫系であり、プラスミドおよびファージのような外来遺伝子要素に対する耐性を付与し、後天性免疫の一形態を提供する。CRISPRスペーサーは、真核生物におけるRNAiのようなこれらの外因性遺伝要素を認識してサイレンスさせる。 3. CRISPR / CAS
A CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeat) is a DNA locus containing a short repeat of a base sequence. Each iteration is followed by a short segment of "spacer DNA" from previous exposure to the virus. CRISPR is found in approximately 40% of sequenced eubacterial genomes and 90% of sequenced archaea. CRISPR is often associated with the cas gene, which encodes a protein associated with CRISPR. The CRISPR / Cas system is the prokaryotic immune system, conferring resistance to foreign genetic elements such as plasmids and phage, providing a form of acquired immunity. CRISPR spacers recognize and silence these extrinsic genetic elements such as RNAi in eukaryotes.

繰り返しは、1987年に細菌の大腸菌(Escherichia coli)について最初に記述された。2000年には、同様のクラスター化した繰り返しが、さらなる細菌および古細菌において同定され、規則的な配置の短いリピート(Short Regularly Spaced Repeat: SRSR)と称された。SRSRは2002年にCRISPRと改名された。いくつかは推定上のヌクレアーゼもしくはヘリカーゼタンパク質をコードする遺伝子のセットが、CRISPR繰り返し(cas、もしくはCRISPR関連遺伝子)と関連していることが分かった。 The repeat was first described in 1987 for the bacterium Escherichia coli. In 2000, similar clustered repeats were identified in additional bacteria and archaea and were referred to as Short Regularly Spaced Repeats (SRSRs). SRSR was renamed CRISPR in 2002. Some have found that a set of genes encoding a putative nuclease or helicase protein is associated with CRISPR repeats (cas, or CRISPR-related genes).

2005年には、独立した3人の研究者によって、CRISPRスペーサーがいくつかのファージDNAおよびプラスミドのような染色体外DNAと相同性を示すことが示された。これは、CRISPR/casシステムが細菌における適応免疫において役割を有しうることの表れであった。Kooninおよび同僚らによって、スペーサーが、RNA干渉と呼ばれるシステムを用いる真核細胞と同様に、RNA分子の鋳型として働くことが提唱された。 In 2005, three independent researchers showed that CRISPR spacers are homologous to some phage DNA and extrachromosomal DNA such as plasmids. This was an indication that the CRISPR / cas system could play a role in adaptive immunity in bacteria. Koonin and colleagues have proposed that spacers act as templates for RNA molecules, as well as eukaryotic cells that use a system called RNA interference.

2007年にBarrangou、Horvath (Daniscoの食品業界の科学者)および他者らにより、それらがサーモフィルス菌(Streptococcus thermophilus)の耐性をスペーサーDNAでのファージ攻撃に変えうることが示された。DoudnaおよびCharpentierにより、細菌が免疫防御においてスペーサーをどのように配備するかを知るため、CRISPR関連タンパク質が独立的に探索されていた。彼らにより、Cas9と呼ばれるタンパク質に依るさらに単純なCRISPRシステムが共同研究された。彼らは、スペーサーおよび回文DNAを長いRNA分子に転写することによって細菌が侵入ファージに応答し、細胞がtracrRNAおよびCas9を用いてcrRNAと呼ばれる断片に切断することを見出した。 In 2007, Barrangou, Horvath, a scientist in the food industry at Danisco, and others showed that they could turn resistance to Streptococcus thermophilus into phage attack with spacer DNA. Doudna and Charpentier independently searched for CRISPR-related proteins to find out how bacteria deploy spacers in immune defense. They collaborated on a simpler CRISPR system that relies on a protein called Cas9. They found that by transcribing spacers and palindromic DNA into long RNA molecules, bacteria responded to invading phage and cells were cleaved into fragments called crRNA using tracrRNA and Cas9.

CRISPRは、2012年までにヒト細胞培養におけるゲノムエンジニアリング/編集ツールとして働くことが初めて示された。それ以来、パン酵母(出芽酵母(S. cerevisiae))、ゼブラフィッシュ、線虫(C.エレガンス(C. elegans))、植物、マウス、およびいくつかの他の生物を含む広範囲の生物において用いられている。さらに、CRISPRは、科学者が特定の遺伝子を標的とし、活性化もしくはサイレンスさせることを可能にするプログラム可能な転写因子を作出するように修飾されている。何万ものガイドRNAのライブラリが現在、利用可能である。 By 2012, CRISPR was first shown to serve as a genomic engineering / editing tool in human cell culture. Since then, it has been used in a wide range of organisms including baker's yeast (S. cerevisiae), zebrafish, nematodes (C. elegans), plants, mice, and some other organisms. ing. In addition, CRISPR has been modified to create programmable transcription factors that allow scientists to target, activate or silence specific genes. A library of tens of thousands of guide RNAs is currently available.

CRISPRが生きた動物での疾患症状を食い止めることができるという最初の証拠は、2014年3月に、MITの研究者が稀有な肝臓障害のマウスを治癒させたときに実証された。2012年以来、CRISPR/Casシステムは、マウスおよび霊長類のような真核生物でも働く遺伝子編集(特定の遺伝子のサイレンシング、増強もしくは変更)に用いられている。cas遺伝子および特異的にデザインされたCRISPRを含むプラスミドを挿入することにより、生物のゲノムは任意の所望の場所で切断することができる。 First evidence that CRISPR can stop disease symptoms in living animals was demonstrated in March 2014 when MIT researchers cured a rare liver-damaged mouse. Since 2012, the CRISPR / Cas system has been used for gene editing (silencing, enhancing or altering specific genes) that also works in eukaryotes such as mice and primates. By inserting a plasmid containing the cas gene and a specifically designed CRISPR, the genome of the organism can be cleaved at any desired location.

CRISPRの繰り返しは、サイズが24～48塩基対の範囲に及ぶ。それらは通常、ヘアピンのような二次構造の形成を意味するいくらかの二分子対称性を示すが、しかし本当の意味で回文ではない。繰り返しは、類似の長さのスペーサーで区切られている。いくつかのスペーサーは原核生物のゲノム(自己標的化スペーサー)に一致するが、いくつかのCRISPRスペーサー配列は、プラスミドおよびファージからの配列に正確に一致する。ファージ感染に応答して新しいスペーサーが迅速に付加されることができる。 CRISPR repeats range in size from 24-48 base pairs. They usually show some bimolecular symmetry, which means the formation of hairpin-like secondary structures, but they are not really palindromes. The repeats are separated by spacers of similar length. Some spacers match the prokaryotic genome (self-targeting spacers), while some CRISPR spacer sequences exactly match sequences from plasmids and phages. New spacers can be rapidly added in response to phage infection.

CRISPR関連(cas)遺伝子は、CRISPR繰り返し-スペーサーアレイと関連することが多い。2013年現在、40種を超える異なるCasタンパク質ファミリーが記述されている。これらのタンパク質ファミリーのうち、Cas1は異なるCRISPR/Casシステムの間で遍在しているようである。8つのCRISPRサブタイプ(Ecoli、Ypest、Nmeni、Dvulg、Tneap、Hmari、Apern、およびMtube)を定義するためにcas遺伝子および繰り返し構造の特定の組み合わせが用いられており、それらのうちのいくつかは、繰り返し関連ミステリアスタンパク質(repeat-associated mysterious protein; RAMP)をコードするさらなる遺伝子モジュールと関連している。単一のゲノム中に2つ以上のCRISPRサブタイプが存在しうる。CRISPR/Casサブタイプの散発的分布は、微生物の進化中にシステムが水平遺伝子移動を被ることを示唆している。 CRISPR-related (cas) genes are often associated with CRISPR repeat-spacer arrays. As of 2013, more than 40 different Cas protein families have been described. Of these protein families, Cas1 appears to be ubiquitous among different CRISPR / Cas systems. Specific combinations of cas genes and repeating structures have been used to define eight CRISPR subtypes (Ecoli, Ypest, Nmeni, Dvulg, Tneap, Hmari, Apern, and Mtube), some of which , Is associated with additional gene modules encoding repeat-associated mysterious proteins (RAMPs). There can be more than one CRISPR subtype in a single genome. The sporadic distribution of CRISPR / Cas subtypes suggests that the system undergoes horizontal gene transfer during microbial evolution.

外因性DNAは、明らかに、Cas遺伝子によってコードされるタンパク質により小さな要素(長さがおよそ30塩基対)にプロセッシングされ、これが次に、リーダー配列の近くのCRISPR座に何らかの形で挿入される。CRISPR座からのRNAは、構成的に発現され、Casタンパク質により、隣接する繰り返し配列を有する個々の外因的に誘導された配列要素から構成される小さなRNAにプロセッシングされる。RNAは、他のCasタンパク質をガイドしてRNAもしくはDNAレベルで外因性遺伝要素をサイレンスさせる。CRISPRサブタイプ間の機能的多様性が証拠から示唆されている。Cse (CasサブタイプEcoli)タンパク質(大腸菌(E. coli)中のCasA～Eと呼ばれる)は、CRISPR RNA転写産物を、Cascadeが保持するスペーサー-繰り返し単位にプロセッシングする機能的複合体Cascadeを形成する。他の原核生物において、Cas6はCRISPR転写産物をプロセッシングする。興味深いことに、大腸菌でのCRISPRに基づくファージ不活性化には、CascadeおよびCas3が必要とされるが、しかしCas1およびCas2は必要とされない。パイロコッカス・フリオサス(Pyrococcus furiosus)および他の原核生物において見出されるCmr (Cas RAMPモジュール)タンパク質は、相補的な標的RNAを認識し切断する小さなCRISPR RNAとの機能的複合体を形成する。RNAガイドCRISPR酵素は、V型制限酵素として分類される。 The exogenous DNA is apparently processed into smaller elements (approximately 30 base pairs in length) by the protein encoded by the Cas gene, which is then somehow inserted into the CRISPR locus near the leader sequence. RNA from the CRISPR locus is constitutively expressed and processed by the Cas protein into small RNAs composed of individual extrinsically derived sequence elements with adjacent repeat sequences. RNA guides other Cas proteins to silence exogenous genetic elements at the RNA or DNA level. Evidence suggests functional diversity between CRISPR subtypes. The Cse (Cas subtype Ecoli) protein (called CasA-E in E. coli) forms a functional complex Cascade that processes CRISPR RNA transcripts into Cascade-held spacer-repeating units. .. In other prokaryotes, Cas6 processes CRISPR transcripts. Interestingly, CRISPR-based phage inactivation in E. coli requires Cascade and Cas3, but not Cascade and Cas2. The Cmr (Cas RAMP module) protein found in Pyrococcus furiosus and other prokaryotes forms a functional complex with a small CRISPR RNA that recognizes and cleaves complementary target RNAs. RNA-guided CRISPR enzymes are classified as type V restriction enzymes.

米国特許出願公開第2014/0068797号も参照されたく、これは参照によりその全体が組み入れられる。 See also U.S. Patent Application Publication No. 2014/0068797, which is incorporated by reference in its entirety.

i. Cas9
Cas9はヌクレアーゼ、つまり二重らせんの各鎖に対して1つずつの、2つの活性切断部位を有する、DNAを切断するために特化した酵素である。Cas9のその標的DNAを位置付ける能力を保持しながら、一方もしくは両方の部位を無効にできることが実証されている。Jinekは、tracrRNAおよびスペーサーRNAを、Cas9と混合された、「単一ガイドRNA」分子に組み合わせて、正しいDNA標的を見つけて切断することができた。Jinekらは、そのような合成ガイドRNAを遺伝子編集に用いることができうることを提唱した。 i. Cas9
Cas9 is a nuclease, an enzyme specialized for cleaving DNA, with two active cleavage sites, one for each strand of the double helix. It has been demonstrated that Cas9 can nullify one or both sites while retaining its ability to position its target DNA. Jinek was able to combine tracrRNA and spacer RNA into a "single guide RNA" molecule mixed with Cas9 to find and cleave the correct DNA target. Jinek et al. Proposed that such synthetic guide RNAs could be used for gene editing.

Cas9タンパク質は、病原性細菌および共生細菌において高度に濃縮されている。CRISPR/Cas媒介遺伝子調節は、特に真核生物宿主との細菌の相互作用の間に、内因性細菌遺伝子の調節に寄与しうる。例えば、フランシセラノビサイダ(Francisella novicida)のCasタンパク質Cas9は、独自の小さなCRISPR/Cas関連RNA (scaRNA)を用いて、F.ノビサイダが宿主応答を弱め、病原性を促進するのに重要である細菌リポタンパク質をコードする内因性転写産物を抑制する。 Cas9 protein is highly enriched in pathogenic and symbiotic bacteria. CRISPR / Cas-mediated gene regulation can contribute to the regulation of endogenous bacterial genes, especially during bacterial interactions with eukaryotic hosts. For example, the Francisella novicida Cas protein Cas9 is important for F. novicida to weaken the host response and promote pathogenicity using a unique small CRISPR / Cas-related RNA (scaRNA). Suppresses endogenous transcripts encoding bacterial lipoproteins.

ii. gRNAもしくはsgRNA
RNAガイドタンパク質として、Cas9はDNA標的の認識を指令する短いRNAを必要とする(Mali et al., 2013a)。Cas9は、PAM配列NGGを含むDNA配列を選択的に調べるが、それはプロトスペーサー標的なしでここに結合することができる。しかしながら、Cas9-gRNA複合体は、二本鎖切断を作出するためにgRNAに近い一致を必要とする(Cho et al., 2013; Hsu et al., 2013)。細菌におけるCRISPR配列は複数のRNAにおいて発現され、その後にプロセッシングされてRNAのためのガイド鎖を作出する(Bikard et al., 2013)。真核生物系は、CRISPR RNAをプロセッシングするために必要なタンパク質のいくつかを欠いているため、RNAポリメラーゼIII型プロモーターU6で発現される単一のRNAにCas9標的化に必須のRNA断片を組み合わせるために合成構築体gRNAが作出された(Mali et al., 2013a, b)。合成gRNAは、最小長で100 bpをわずかに上回り、PAM配列NGGの直前の20個のプロトスペーサーヌクレオチドを標的とする部分を含む; gRNAはPAM配列を含まない。 ii. gRNA or sgRNA
As an RNA-guided protein, Cas9 requires a short RNA that directs the recognition of DNA targets (Mali et al., 2013a). Cas9 selectively examines the DNA sequence containing the PAM sequence NGG, which can bind here without a protospacer target. However, the Cas9-gRNA complex requires a close match for gRNA to produce double-strand breaks (Cho et al., 2013; Hsu et al., 2013). CRISPR sequences in bacteria are expressed in multiple RNAs and then processed to produce guide strands for RNA (Bikard et al., 2013). Because the eukaryotic system lacks some of the proteins needed to process CRISPR RNA, it combines a single RNA expressed by the RNA polymerase type III promoter U6 with an RNA fragment essential for Cas9 targeting. A synthetic construct gRNA was produced for this (Mali et al., 2013a, b). Synthetic gRNAs are slightly above 100 bp in minimum length and contain a portion that targets the 20 protospacer nucleotides immediately preceding the PAM sequence NGG; the gRNA does not contain the PAM sequence.

4. 修飾された核酸塩基
いくつかの態様において、本開示の核酸は、修飾された糖部分を含む1つもしくは複数の修飾されたヌクレオシドを含む。1つもしくは複数の糖修飾されたヌクレオシドを含むそのような化合物は、天然の糖部分を含むヌクレオシドのみを含むオリゴヌクレオチドと比べて、標的核酸との増大したヌクレアーゼ安定性もしくは増加した結合親和性のような、望ましい特性を有しうる。いくつかの態様において、修飾された糖部分は置換された糖部分である。いくつかの態様において、修飾された糖部分は糖代用物である。そのような糖代用物は、置換された糖部分の置換に対応する1つもしくは複数の置換を含みうる。 4. Modified Nucleic Acid Base In some embodiments, the nucleic acid of the present disclosure comprises one or more modified nucleosides containing a modified sugar moiety. Such compounds containing one or more sugar-modified nucleosides have increased nuclease stability or increased binding affinity with the target nucleic acid compared to oligonucleotides containing only the nucleoside containing the natural sugar moiety. Can have desirable properties, such as. In some embodiments, the modified sugar moiety is a substituted sugar moiety. In some embodiments, the modified sugar moiety is a sugar substitute. Such sugar substitutes may include one or more substitutions corresponding to the substitution of the substituted sugar moiety.

いくつかの態様において、修飾された糖部分は、2'位および/もしくは5'位の置換基を含むがこれらに限定されない、1つもしくは複数の非架橋糖置換基を含む置換された糖部分である。2'-位に適した糖置換基の例としては、2'-F、2'-OCH3 (「OMe」もしくは「O-メチル」)、および2'-O(CH2)2OCH3 (「MOE」)が挙げられるが、これらに限定されることはない。ある種の態様において、2'位の糖置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、O-アリル、O--C1～C10アルキル、O--C1～C10置換アルキル; OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2--O--N(Rm)(Rn)、およびO--CH2--C(=O)--N(Rm)(Rn)から選択され、各RmおよびRnは、独立して、Hまたは置換もしくは非置換C1～C10アルキルである。5'位の糖置換基の例としては、5'-メチル(RもしくはS); 5'-ビニル、および5'-メトキシが挙げられるが、これらに限定されることはない。いくつかの態様において、置換された糖は、2つ以上の非架橋糖置換基、例えば、T-F-5'-メチル糖部分を含む(例えば、さらなる5',2'-ビス置換糖部分およびヌクレオシドの場合、PCT国際出願WO 2008/101157を参照のこと)。 In some embodiments, the modified sugar moiety contains, but is not limited to, substituents at the 2'and / or 5'positions, the substituted sugar moiety containing one or more non-crosslinked sugar substituents. Is. Examples of suitable sugar substituents for the 2'-position are 2'-F, 2'-OCH 3 ("OMe" or "O-methyl"), and 2'-O (CH 2 ) 2 OCH 3 ( "MOE"), but is not limited to these. In certain embodiments, the sugar substituent at the 2'position is allyl, amino, azide, thio, O-allyl, O--C 1 to C 10 alkyl, O--C 1 to C 10 substituted alkyl; OCF 3 , O (CH 2 ) 2 SCH 3 , O (CH 2 ) 2 --O--N (Rm) (Rn), and O--CH 2 --C (= O) --N (Rm) (Rn) ), Each Rm and Rn is independently H or substituted or unsubstituted C 1 to C 10 alkyl. Examples of the sugar substituent at the 5'position include, but are not limited to, 5'-methyl (R or S); 5'-vinyl, and 5'-methoxy. In some embodiments, the substituted sugar comprises two or more non-crosslinked sugar substituents, eg, a TF-5'-methyl sugar moiety (eg, an additional 5', 2'-bis substituted sugar moiety and a nucleoside). If so, see PCT International Application WO 2008/101157).

2'-置換糖部分を含むヌクレオシドは2'-置換ヌクレオシドといわれる。いくつかの態様において、2'-置換ヌクレオシドは、ハロ、アリル、アミノ、アジド、SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S、もしくはN(Rm)-アルキル; O、S、もしくはN(Rm)-アルケニル; O、SもしくはN(Rm)-アルキニル; O-アルキレニル-O-アルキル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、O-アルカリール、O-アラルキル、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2--O--N(Rm)(Rn)もしくはO--CH2--C(=O)--N(Rm)(Rn)から選択される2'-置換基を含み、各RmおよびRnは、独立して、H、アミノ保護基または置換もしくは非置換C1～C10アルキルである。これらの2'-置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ(NO2)、チオール、チオアルコキシ(S-アルキル)、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニルおよびアルキニルから独立して選択される1つもしくは複数の置換基でさらに置換することができる。 A nucleoside containing a 2'-substituted sugar moiety is called a 2'-substituted nucleoside. In some embodiments, the 2'-substituted nucleosides are halo, allyl, amino, azide, SH, CN, OCN, CF 3 , OCF 3 , O, S, or N (R m ) -alkyl; O, S, Or N (R m ) -alkenyl; O, S or N (R m ) -alkynyl; O-alkylenyl-O-alkyl, alkynyl, alkyl, aralkyl, O-alkyryl, O-aralkyl, O (CH 2 ) 2 Select from SCH 3 , O (CH 2 ) 2 --O--N (R m ) (R n ) or O--CH 2 --C (= O) --N (R m ) (R n ) Each R m and R n is an H, amino protecting group or substituted or unsubstituted C 1 to C 10 alkyl, each containing a 2'-substituted group. These 2'-substituents are independent of hydroxyl, amino, alkoxy, carboxy, benzyl, phenyl, nitro (NO 2 ), thiol, thioalkoxy (S-alkyl), halogen, alkyl, aryl, alkenyl and alkynyl. It can be further substituted with one or more substituents of choice.

いくつかの態様において、2'-置換ヌクレオシドは、F、NH2、N3、OCF3、O--CH3、O(CH2)3NH2、CH2-CH=CH2、O--CH2-CH=CH2、OCH2CH2OCH3、O(CH2)2SCH3、O--(CH2)2--O--N(Rm)(Rn)、O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、およびN-置換アセトアミド(O--CH2--C(=O)--N(Rm)(Rn)から選択される2'-置換基を含み、各RmおよびRnは、独立して、H、アミノ保護基または置換もしくは非置換C1～C10アルキルである。 In some embodiments, the 2'-substituted nucleosides are F, NH 2 , N 3 , OCF 3 , O--CH 3 , O (CH 2 ) 3 NH 2 , CH 2 -CH = CH 2 , O-- CH 2 -CH = CH 2 , OCH 2 CH 2 OCH 3 , O (CH 2 ) 2 SCH 3 , O-- (CH 2 ) 2 --O--N (R m ) (R n ), O (CH) 2 ) 2 O (CH 2 ) 2 N (CH 3 ) 2 , and N-substituted acetamide (O--CH 2 --C (= O) --N (R m ) (R n ) selected from 2 '-Containing substituents, each R m and R n is independently H, amino protecting group or substituted or unsubstituted C 1 to C 10 alkyl.

いくつかの態様において、2'-置換ヌクレオシドは、F、OCF3, O--CH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2--O--N(CH3)2, --O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、およびO--CH2--C(=O)--N(H)CH3から選択される2'-置換基を含む糖部分を含む。 In some embodiments, the 2'-substituted nucleosides are F, OCF 3 , O--CH 3 , OCH 2 CH 2 OCH 3 , O (CH 2 ) 2 SCH 3 , O (CH 2 ) 2 --O- -N (CH 3 ) 2 , --O (CH 2 ) 2 O (CH 2 ) 2 N (CH 3 ) 2 , and O--CH 2 --C (= O) --N (H) CH 3 Contains sugar moieties containing 2'-substituents selected from.

いくつかの態様において、2'-置換ヌクレオシドは、F、O--CH3、およびOCH2CH2OCH3から選択される2'-置換基を含む糖部分を含む。 In some embodiments, the 2'-substituted nucleoside comprises a sugar moiety containing a 2'-substituted group selected from F, O--CH 3 , and OCH 2 CH 2 OCH 3 .

ある種の修飾糖部分は、二環式糖部分を生じる第二の環を形成する架橋糖置換基を含む。いくつかのそのような態様において、二環式糖部分は、4'および2'フラノース環原子の間の架橋を含む。そのような4'-2'糖置換基の例としては、--[C(Ra)(Rb)]n--、--[C(Ra)(Rb)]n--O--、--C(RaRb)--N(R)--O--もしくは、--C(RaRb)--O--N(R)--; 4'-CH2-2'、4'-(CH2)2-2'、4'-(CH2)--O-2' (LNA); 4'-(CH2)--S-2'; 4'-(CH2)2--O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)--O-2' (cEt)および4'-CH(CH2OCH3)--O-2'、ならびにそれらの類似体(例えば、米国特許第7,399,845号参照); 4'-C(CH3)(CH3)--O-2'およびその類似体(例えば、WO 2009/006478参照); 4'-CH2--N(OCH3)-2'およびその類似体(例えば、WO2008/150729参照); 4'-CH2--O--N(CH3)-2' (例えば、2004年9月2日付で公開されたUS2004/0171570を参照のこと); 4'-CH2--O--N(R)-2'、および4'-CH2--N(R)--O-2'-が挙げられるが、これらに限定されることはなく、式中、各Rは、独立して、H、保護基、もしくはC1～C12アルキル; 4'-CH2--N(R)--O-2'であり、式中、RはH、C1～C12アルキル、もしくは保護基(米国特許第7,427,672号参照); 4'-CH2--C(H)(CH3)-2' (例えば、Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134を参照のこと); ならびに4'-CH2--C(=CH2)-2'およびその類似体(PCT国際出願WO 2008/154401を参照のこと)である。 Certain modified sugar moieties include crosslinked sugar substituents that form a second ring that yields the bicyclic sugar moiety. In some such embodiments, the bicyclic sugar moiety comprises a crosslink between the 4'and 2'furanose ring atoms. Examples of such 4'-2'sugar substituents are-[C (R a ) (R b )] n -,-[C (R a ) (R b )] n --O. --, --C (R a R b ) --N (R) --O--or --C (R a R b ) --O--N (R)-; 4'-CH 2 -2', 4'-(CH 2 ) 2 -2', 4'-(CH 2 )-O-2'(LNA);4'-(CH 2 )-S-2';4' -(CH 2 ) 2 --O-2'(ENA);4'-CH (CH 3 ) --O-2' (cEt) and 4'-CH (CH 2 OCH 3 ) --O-2' , And their analogs (see, eg, US Pat. No. 7,399,845); 4'-C (CH 3 ) (CH 3 )-O-2' and its analogs (see, eg, WO 2009/006478); 4 '-CH 2 --N (OCH 3 ) -2' and its analogs (see, eg WO2008 / 150729); 4'-CH 2 --O--N (CH 3 ) -2' (eg, 2004) See US2004 / 0171570 published on September 2); 4'-CH 2 --O--N (R) -2', and 4'-CH 2 --N (R) --O -2'-, but not limited to these, in the equation, each R is independently H, protecting group, or C 1 to C 12 alkyl; 4'-CH 2 --N. (R) --O-2', where R is H, C 1 to C 12 alkyl, or protecting group (see US Pat. No. 7,427,672); 4'-CH 2 --C (H) ( CH 3 ) -2'(see, for example, Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); and 4'-CH 2 --C (= CH 2 ) -2 'And its analogs (see PCT International Application WO 2008/154401).

いくつかの態様において、そのような4'-2'架橋は独立して、--[C(Ra)(Rb)]n--、--C(Ra)=C(Rb)--、--C(Ra)=N--、--C(=NRa)--、--C(=O)--、--C(=S)--、--O--、--Si(Ra)2--、--S(=O)x--、および--N(Ra)--から独立して選択される1～4個の連結基を含み; 式中、
xは0、1、もしくは2であり;
nは1、2、3、もしくは4であり;
各RaおよびRbは、独立して、H、保護基、ヒドロキシル、C1～C12アルキル、置換されたC1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、置換されたC2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、置換されたC2～C12アルキニル、C5～C20アリール、置換されたC5～C20アリール、複素環基、置換された複素環基、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、C5～C7脂環式基、置換されたC5～C7脂環式基、ハロゲン、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、アシル(C(=O)--H)、置換されたアシル、CN、スルホニル(S(=O)2-J1)、もしくはスルホキシル(S(=O)-J1)であり; ならびに
各J1およびJ2は、独立して、H、C1～C12アルキル、置換されたC1～C12アルキル、C2～C12アルケニル、置換されたC2～C12アルケニル、C2～C12アルキニル、置換されたC2～C12アルキニル、C5～C20アリール、置換されたC5～C20アリール、アシル(C(=O)--H)、置換されたアシル、複素環基、置換された複素環基、C1～C12アミノアルキル、置換されたC1～C12アミノアルキル、または保護基である。 In some embodiments, such 4'-2'crosslinks are independent-[C (R a ) (R b )] n -,-C (R a ) = C (R b ). --, --C (R a ) = N--, --C (= NR a )-, --C (= O)-, --C (= S)-, --O- -Contains 1 to 4 linking groups selected independently of-, --Si (R a ) 2- , --S (= O) x- , and --N (R a )- During the ceremony,
x is 0, 1, or 2;
n is 1, 2, 3, or 4;
Each R a and R b are independently H, protective group, hydroxyl, C 1 to C 12 alkyl, substituted C 1 to C 12 alkyl, C 2 to C 12 alkenyl, substituted C 2 to C. 12 Alkenyl, C 2 to C 12 alkynyl, substituted C 2 to C 12 alkynyl, C 5 to C 20 aryl, substituted C 5 to C 20 aryl, heterocyclic group, substituted heterocyclic group, heteroaryl , Substituted heteroaryl, C 5 to C 7 alicyclic group, substituted C 5 to C 7 alicyclic group, halogen, OJ 1 , NJ 1 J 2 , SJ 1 , N 3 , COOJ 1 , acyl (C (= O)-H), substituted acyl, CN, sulfonyl (S (= O) 2 -J 1 ), or sulfoxyl (S (= O) -J 1 ); and each J 1 And J 2 are independently H, C 1 to C 12 alkyl, substituted C 1 to C 12 alkyl, C 2 to C 12 alkenyl, substituted C 2 to C 12 alkenyl, C 2 to C 12 Alkinyl, substituted C 2 to C 12 alkynyl, C 5 to C 20 aryl, substituted C 5 to C 20 aryl, acyl (C (= O) --H), substituted acyl, heterocyclic group, Substituted heterocyclic group, C 1 to C 12 aminoalkyl, substituted C 1 to C 12 aminoalkyl, or protective group.

二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドもしくはBNAといわれる。二環式ヌクレオシドには、(A) α-L-メチレンオキシ(4'-CH2--O-2') BNA、(B) β-D-メチレンオキシ(4'-CH2--O-2') BNA (ロックされた核酸もしくはLNAともいわれる)、(C) エチレンオキシ(4'-(CH2)2--O-2') BNA、(D) アミノオキシ(4'-CH2--O--N(R)-2') BNA、(E) オキシアミノ(4'-CH2--N(R)--O-2') BNA、(F) メチル(メチレンオキシ) (4'-CH(CH3)--O-2') BNA (拘束エチルもしくはcEtともいわれる)、(G) メチレン-チオ(4'-CH2--S-2') BNA、(H) メチレン-アミノ(4'-CH2-N(R)-2') BNA、(I) メチル炭素環式(4'-CH2--CH(CH3)-2') BNA、(J) プロピレン炭素環式(4'-(CH2)3-2') BNA、および(K) メトキシ(エチレンオキシ) (4'-CH(CH2OMe)-O-2') BNA (拘束MOEもしくはcMOEともいわれる)が含まれるが、これらに限定されることはない。 A nucleoside containing a bicyclic sugar moiety is referred to as a bicyclic nucleoside or BNA. Bicyclic nucleosides include (A) α-L-methyleneoxy (4'-CH 2 --O-2') BNA and (B) β-D-methyleneoxy (4'-CH 2 --O-). 2') BNA (also known as locked nucleic acid or LNA), (C) ethyleneoxy (4'-(CH 2 ) 2 --O-2') BNA, (D) aminooxy (4'-CH 2- -O--N (R) -2') BNA, (E) Oxyamino (4'-CH 2 --N (R) --O-2') BNA, (F) Methyl (methyleneoxy) (4 '-CH (CH 3 ) --O-2') BNA (also known as constrained ethyl or cEt), (G) Methylene-thio (4'-CH 2 --S-2') BNA, (H) Methylene- Amino (4'-CH2-N (R) -2') BNA, (I) Methyl carbocyclic (4'-CH 2 --CH (CH 3 ) -2') BNA, (J) Propylene carbocyclic (4'-(CH 2 ) 3 -2') BNA, and (K) methoxy (ethyleneoxy) (4'-CH (CH 2 OMe) -O-2') BNA (also known as constrained MOE or cMOE) Included, but not limited to.

さらなる二環式糖部分は、当技術分野において公知である、例えば: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 129(26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 5561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; 米国特許第7,053,207号、同第6,268,490号、同第6,770,748号、同第6,794,499号、同第7,034,133号、同第6,525,191号、同第6,670,461号、および同第7,399,845号; WO 2004/106356、WO 1994/14226、WO 2005/021570、およびWO 2007/134181; 米国特許出願公開第2004/0171570号、同第2007/0287831号、および同第2008/0039618号; 米国特許出願第12/129,154号、同第60/989,574号、同第61/026,995号、同第61/026,998号、同第61/056,564号、同第61/086,231号、同第61/097,787号、および同第61/099,844号; ならびにPCT国際出願番号PCT/US2008/064591、PCT/US2008/066154、およびPCT/US2008/068922。 Additional bicyclic sugar moieties are known in the art, eg: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630. Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al. , J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 129 (26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 5561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239- 243; US Pat. Nos. 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 6,670,461, and 7,399,845; WO 2004/106356, WO 1994/14226, WO 2005/021570, and WO 2007/134181; US Patent Application Publication Nos. 2004/0171570, 2007/0287831, and 2008/0039618; US Patent Applications 12 / 129,154, same. No. 60 / 989,574, No. 61 / 026,995, No. 61 / 026,998, No. 61 / 056,564, No. 61 / 086,231, No. 61 / 097,787, and No. 61 / 099,844; PCT International Application Numbers PCT / US2008 / 064591, PCT / US2008 / 066154, and PCT / US2008 / 068922.

いくつかの態様において、二環式糖部分およびそのような二環式糖部分を組み入れたヌクレオシドは、異性立体配置によってさらに定義される。例えば、4'-2'メチレン-オキシ架橋を含むヌクレオシドは、α-L配置もしくはβ-D配置にありうる。これまでに、α-L-メチレンオキシ(4'-CH2--O-2')二環式ヌクレオシドは、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み入れられている(Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372)。 In some embodiments, the bicyclic sugar moiety and the nucleoside incorporating such a bicyclic sugar moiety are further defined by a heterocyclic configuration. For example, a nucleoside containing a 4'-2'methylene-oxybridge can be in the α-L or β-D configuration. So far, α-L-methyleneoxy (4'-CH 2 --O-2') bicyclic nucleosides have been incorporated into antisense oligonucleotides exhibiting antisense activity (Frieden et al., Nucleic). Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).

いくつかの態様において、置換された糖部分は、1つもしくは複数の非架橋糖置換基および1つもしくは複数の架橋糖置換基(例えば、5'-置換および4'-2'架橋糖; PCT国際出願WO 2007/134181、ここではLNAが、例えば、5'-メチルもしくは5'-ビニル基で置換されている)を含む。 In some embodiments, the substituted sugar moiety is one or more non-crosslinked sugar substituents and one or more crosslinked sugar substituents (eg, 5'-substituted and 4'-2'crosslinked sugars; PCT. International application WO 2007/134181, where LNA is substituted with, for example, a 5'-methyl or 5'-vinyl group).

いくつかの態様において、修飾された糖部分は糖代用物である。いくつかのそのような態様において、天然糖の酸素原子は、例えば、硫黄、炭素もしくは窒素原子で置換される。いくつかのそのような態様において、そのような修飾された糖部分はまた、上記のように架橋および/もしくは非架橋置換基を含む。例えば、ある種の糖代用物は、4'-硫黄原子および置換を2'-位(例えば、公開された米国特許出願第2005/0130923号を参照のこと)および/もしくは5'位に含む。さらなる例として、4'-2'架橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシドが記述されている(例えば、Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443およびAlbaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740を参照のこと)。 In some embodiments, the modified sugar moiety is a sugar substitute. In some such embodiments, the oxygen atom of the natural sugar is replaced with, for example, a sulfur, carbon or nitrogen atom. In some such embodiments, such modified sugar moieties also include crosslinked and / or non-crosslinked substituents as described above. For example, certain sugar substitutes contain 4'-sulfur atoms and substitutions at the 2'-position (see, eg, published US Patent Application No. 2005/0130923) and / or at the 5'position. As a further example, carbocyclic bicyclic nucleosides with 4'-2'crosslinks have been described (eg Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25 (22), 4429-4443 and Albaek et al. ., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740).

いくつかの態様において、糖代用物は、5-原子以外の環を含む。例えば、いくつかの態様において、糖代用物は、6員テトラヒドロピランを含む。そのようなテトラヒドロピランは、さらに修飾されもしくは置換されうる。そのような修飾されたテトラヒドロピランを含むヌクレオシドには、ヘキシトール核酸(HNA)、アニトール核酸(ANA)、マンニトール(manitol)核酸(MNA) (Leumann, C J. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854を参照のこと)、およびフルオロHNA (F-HNA)が含まれるが、これらに限定されることはない。 In some embodiments, the sugar substitute comprises a ring other than the 5-atom. For example, in some embodiments, the sugar substitute comprises 6-membered tetrahydropyran. Such tetrahydropyran can be further modified or replaced. Nucleosides containing such modified tetrahydropyran include hexitol nucleic acid (HNA), anitol nucleic acid (ANA), mannitol nucleic acid (MNA) (Leumann, C J. Bioorg. & Med. Chem. (2002)). 10: 841-854), and, but is not limited to, fluoro HNA (F-HNA).

いくつかの態様において、q1、q2、q3、q4、q5、q6およびq7がそれぞれHである式VIIの修飾されたTHPヌクレオシドが提供される。ある種の態様において、q1、q2、q3、q4、q5、q6およびq7の少なくとも1つはH以外である。いくつかの態様において、q1、q2、q3、q4、q5、q6およびq7の少なくとも1つはメチルである。いくつかの態様において、R1およびR2の1つがFである式VIIのTHPヌクレオシドが提供される。ある種の態様において、R1はフルオロであり、かつR2はHであり、R1はメトキシであり、かつR2はHであり、およびR1はメトキシエトキシであり、かつR2はHである。 In some embodiments, a modified THP nucleoside of formula VII is provided in which q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 are H, respectively. In certain embodiments, at least one of q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 is other than H. In some embodiments, at least one of q 1 , q 2 , q 3 , q 4 , q 5 , q 6 and q 7 is methyl. In some embodiments, a THP nucleoside of formula VII is provided in which one of R 1 and R 2 is F. In certain embodiments, R 1 is fluoro and R 2 is H, R 1 is methoxy, and R 2 is H, and R 1 is methoxyethoxy, and R 2 is H. Is.

アンチセンス化合物への組み入れのためのヌクレオシドを修飾するために用いることができる多くの他のビシクロおよびトリシクロ糖代用物環系も当技術分野において公知である(例えば、総説: Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854を参照のこと)。 Many other bicyclo and tricyclosaccharide substitute ring systems that can be used to modify nucleosides for incorporation into antisense compounds are also known in the art (eg, review: Leumann, J.C., See Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).

非限定的に、2'-F-5'-メチル置換ヌクレオシド(他の開示された5',2'-ビス置換ヌクレオシドの場合にはPCT国際出願WO 2008/101157を参照のこと)ならびにSでのリボシル環酸素原子の置換および2'位でのさらなる置換(米国特許出願第2005/0130923号参照)あるいは二環式核酸の5'置換(PCT国際出願WO 2007/134181を参照されたく、4'-CH2--O-2'二環式ヌクレオシドは、5'の位置で5'-メチルもしくは5'-ビニル基によりさらに置換されている)のような、修飾の組み合わせも提供される。また、炭素環式二環式ヌクレオシドの合成および調製はそのオリゴマー化および生化学的研究とともに記述されている(例えば、Srivastava et al., 2007を参照のこと)。 Not limited to 2'-F-5'-methyl substituted nucleosides (see PCT international application WO 2008/101157 for other disclosed 5', 2'-bis substituted nucleosides) as well as S. Substitution of the ribosyl ring oxygen atom and further substitution at the 2'position (see US Patent Application No. 2005/0130923) or 5'substitution of bicyclic nucleic acids (see PCT International Application WO 2007/134181, 4' -CH 2 --O-2'bicyclic nucleosides are also provided with a combination of modifications, such as (which is further substituted with a 5'-methyl or 5'-vinyl group at the 5'position). Also, the synthesis and preparation of carbocyclic bicyclic nucleosides has been described along with their oligomerization and biochemical studies (see, eg, Srivastava et al., 2007).

いくつかの態様において、本発明は、修飾されたヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。それらの修飾されたヌクレオチドは、修飾された糖、修飾された核酸塩基、および/もしくは修飾された結合を含みうる。特定の修飾は、得られたオリゴヌクレオチドが所望の特徴を保有するように選択される。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、1つもしくは複数のRNA様ヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、1つもしくは複数のDNA様ヌクレオチドを含む。 In some embodiments, the invention provides an oligonucleotide containing a modified nucleoside. The modified nucleotides may contain modified sugars, modified nucleobases, and / or modified bonds. Certain modifications are selected so that the resulting oligonucleotide possesses the desired characteristics. In some embodiments, the oligonucleotide comprises one or more RNA-like nucleosides. In some embodiments, the oligonucleotide comprises one or more DNA-like nucleotides.

いくつかの態様において、本発明のヌクレオシドは、1つもしくは複数の未修飾核酸塩基を含む。ある種の態様において、本発明のヌクレオシドは、1つもしくは複数の修飾核酸塩基を含む。 In some embodiments, the nucleosides of the invention comprise one or more unmodified nucleobases. In certain embodiments, the nucleosides of the invention comprise one or more modified nucleobases.

いくつかの態様において、修飾された核酸塩基は、本明細書において定義される普遍的塩基、疎水性塩基、無差別(promiscuous)塩基、サイズ拡張塩基、およびフッ素化塩基、2-アミノプロピルアデニン、5-プロピニルウラシルを含む、5-置換ピリミジン、6-アザピリミジンならびにN-2、N-6およびO-6置換プリン; 5-プロピニルシトシン; 5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの6-メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの2-プロピルおよび他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-チオチミンおよび2-チオシトシン、5-ハロウラシルおよびシトシン、5-プロピニルCH3)ウラシルおよびシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、6-アザ(azo)ウラシル、シトシンおよびチミン、5-ウラシル(シュードウラシル)、4-チオウラシル、8-ハロ、8-アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシルならびに他の8-置換アデニンおよびグアニン、5-ハロ、特に5-ブロモ、5-トリフルオロメチルおよび他の5-置換ウラシルおよびシトシン、7-メチルグアニンおよび7-メチルアデニン、2-F-アデニン、2-アミノ-アデニン、8-アザグアニンおよび8-アザアデニン、7-デアザグアニンおよび7-デアザアデニン、3-デアザグアニンおよび3-デアザアデニン、本明細書において定義される普遍的塩基、疎水性塩基、無差別(promiscuous)塩基、サイズ拡張塩基、およびフッ素化塩基から選択される。さらに修飾された核酸塩基には、フェノキサジンシチジン([5,4-b][1,4]ベンゾオキサジン-2(3H)-オン)、フェノチアジンシチジン(1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾチアジン-2(3H)-オン)のような三環式ピリミジン、置換フェノキサジンシチジン(例えば、9-(2-アミノエトキシ)-H-ピリミド[5,4-13][1,4]ベンゾオキサジン-2(3H)-オン)、カルバゾールシチジン(2H-ピリミド[4,5-b]インドール-2-オン)、ピリドインドールシチジン(H-ピリド[3',2':4,5]ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-オン)のようなG-クランプが含まれる。修飾された核酸塩基はまた、プリンもしくはピリミジン塩基が他の複素環で置換されたもの、例えば7-デアザ-アデニン、7-デアザグアノシン、2-アミノピリジンおよび2-ピリドンを含みうる。さらなる核酸塩基には、米国特許第3,687,808号に開示されているもの、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J. I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859に開示されているもの; Englisch et al., 1991により開示されているもの; およびSanghvi, Y. S., 1993により開示されているものが含まれる。 In some embodiments, the modified nucleobase is a universal base, a hydrophobic base, a promiscuous base, a size-enhancing base, and a fluorinated base, 2-aminopropyladenine, as defined herein. 5-substituted pyrimidine, 6-azapyrimidine and N-2, N-6 and O-6 substituted purines, including 5-propynyluracil; 5-propynylcitosine; 5-hydroxymethylcytosine, xanthin, hypoxanthin, 2-amino Adenine, 6-methyl and other alkyl derivatives of adenine and guanine, 2-propyl and other alkyl derivatives of adenine and guanine, 2-thiouracil, 2-thiothymine and 2-thiocitosine, 5-halolasyl and cytosine, 5-propynyl CH 3 ) Uracil and citocin and other alkynyl derivatives of pyrimidine base, 6-aza (azo) uracil, citocin and timine, 5-uracil (pseudouracil), 4-thiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-thiol, 8-thioalkyl, 8-hydroxyl and other 8-substituted adenine and guanine, 5-halo, especially 5-bromo, 5-trifluoromethyl and other 5-substituted uracil and cytosine, 7-methylguanine and 7-methyladenine. , 2-F-adenine, 2-amino-adenine, 8-azaguanine and 8-azaadenine, 7-deazaguanine and 7-deazaadenine, 3-deazaguanine and 3-deazaadenine, universal bases defined herein, hydrophobic. It is selected from bases, promiscuous bases, size-enhancing bases, and fluorinated bases. Further modified nucleobases include phenoxazinecytidine ([5,4-b] [1,4] benzoxazine-2 (3H) -on) and phenothiazinecytidine (1H-pyrimid] [ Tricyclic pyrimidines such as benzothiazine-2 (3H) -on), substituted phenoxazine cytidines (eg 9- (2-aminoethoxy) -H-pyrimids [5,4-13] [1,4] 4] Benzoxazine-2 (3H) -on), carbazole cytidine ( 2 H-pyrimid [4,5-b] indol-2-one), pyridoindole cytidine (H-pyrido [3', 2': 4) , 5] G-clamps such as Pyrrolo [2,3-d] pyrimidine-2-one) are included. Modified nucleobases can also include purines or pyrimidine bases substituted with other heterocycles, such as 7-deaza-adenine, 7-deazaguanosine, 2-aminopyridine and 2-pyridone. Additional nucleobases include those disclosed in US Pat. No. 3,687,808 and those disclosed in The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, JI, Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859. Includes those disclosed by Englisch et al., 1991; and those disclosed by Sanghvi, YS, 1993.

ある種の上記の修飾された核酸塩基および他の修飾された核酸塩基の調製を教示する代表的な米国特許には、非限定的に、米国特許第3,687,808号; 同第4,845,205号; 同第5,130,302号; 同第5,134,066号; 同第5,175,273号; 同第5,367,066号; 同第5,432,272号; 同第5,457,187号; 同第5,459,255号; 同第5,484,908号; 同第5,502,177号; 同第5,525,711号; 同第5,552,540号; 同第5,587,469号; 同第5,594,121号; 同第5,596,091号; 同第5,614,617号; 同第5,645,985号; 同第5,681,941号; 同第5,750,692号; 同第5,763,588号; 同第5,830,653号および同第6,005,096号が含まれ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。 Representative US patents teaching the preparation of certain of the above modified nucleobases and other modified nucleobases include, but are not limited to, US Pat. Nos. 3,687,808; 4,845,205; 5,130,302. No. 5,134,066; No. 5,175,273; No. 5,367,066; No. 5,432,272; No. 5,457,187; No. 5,459,255; No. 5,484,908; No. 5,502,177; No. 5,525,711; No. 5,552,540 No. 5,587,469; No. 5,594,121; No. 5,596,091; No. 5,614,617; No. 5,645,985; No. 5,681,941; No. 5,750,692; No. 5,763,588; No. 5,830,653 and No. 6,005,096. No. is included, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

いくつかの態様において、本発明は、結合したヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。そのような態様において、ヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を用いてともに連結されうる。ヌクレオシド間連結基の2つの主なクラスは、リン原子の存在もしくは非存在によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合には、ホスホジエステル(P=O)、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデートおよびホスホロチオエート(P=S)が含まれるが、これらに限定されることはない。代表的な非リン含有ヌクレオシド間連結基には、メチレンメチルイミノ(--CH2--N(CH3)--O--CH2--)、チオジエステル(--O--C(O)--S--)、チオノカルバメート(--O--C(O)(NH)--S--); シロキサン(--O--Si(H)2--O--); およびN,N'-ジメチルヒドラジン(--CH2--N(CH3)--N(CH3)--)が含まれるが、これらに限定されることはない。天然のホスホジエステル結合と比較して、修飾された結合は、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を変化させる、典型的には増加させるために用いることができる。いくつかの態様において、キラル原子を有するヌクレオシド間結合は、ラセミ混合物として、または別個の鏡像異性体として調製することができる。代表的なキラル結合には、アルキルホスホネートおよびホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されることはない。リン含有および非リン含有ヌクレオシド間結合の調製の方法は、当業者に周知である。 In some embodiments, the invention provides an oligonucleotide containing a bound nucleoside. In such an embodiment, the nucleosides can be linked together using any internucleoside bond. The two main classes of internucleoside linking groups are defined by the presence or absence of a phosphorus atom. Representative phosphorus-containing nucleoside bonds include, but are not limited to, phosphodiesters (P = O), phosphotriesters, methylphosphonates, phosphoramidates and phosphorothioates (P = S). Typical non-phosphorus-containing nucleoside linking groups include methylenemethylimino (--CH 2 --N (CH 3 ) --O--CH 2 --) and thiodiester (--O--C (O). ) --S--), Thionocarbamate (--O--C (O) (NH) --S--); Siloxane (--O--Si (H) 2 --O--); And N, N'-dimethylhydrazine (--CH 2 --N (CH 3 ) --N (CH 3 )-), but is not limited to these. Modified conjugations, as compared to native phosphodiester bonds, can be used to alter, typically increase, the nuclease resistance of oligonucleotides. In some embodiments, the internucleoside bond with a chiral atom can be prepared as a racemic mixture or as a separate enantiomer. Typical chiral bonds include, but are not limited to, alkylphosphonates and phosphorothioates. Methods of preparing phosphorus-containing and non-phosphorus-containing nucleoside bonds are well known to those of skill in the art.

本明細書において記述されるオリゴヌクレオチドは、1つもしくは複数の不斉中心を含み、したがって絶対立体化学に関して、(R)もしくは(S)、糖アノマーの場合のようなαもしくはβ、またはアミノ酸などの場合のような(D)もしくは(L)として定義されうる鏡像異性体、ジアステレオマー、および他の立体異性体配置を生じる。本明細書において提供されるアンチセンス化合物に含まれるのは、全てのそのような可能な異性体、ならびにそれらのラセミ体および光学的に純粋な形態である。 The oligonucleotides described herein contain one or more asymmetric centers and thus, with respect to absolute stereochemistry, (R) or (S), α or β, as in the case of sugar anomers, or amino acids, etc. It yields enantiomers, diastereomers, and other stereoisomeric arrangements that can be defined as (D) or (L) as in the case of. Included in the antisense compounds provided herein are all such possible isomers, as well as their racemates and optically pure forms.

中性のヌクレオシド間結合には、非限定的に、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、MMI (3'-CH2--N(CH3)--O-5')、アミド-3 (3'-CH2--C(=O)--N(H)-5')、アミド-4 (3'-CH2--N(H)--C(=O)-5')、ホルムアセタール(3'-O--CH2--O-5')、およびチオホルムアセタール(3'-S--CH2--O-5')が含まれる。さらなる中性のヌクレオシド間結合には、シロキサン(ジアルキルシロキサン)、カルボキシレートエステル、カルボキサミド、スルフィド、スルホネートエステルおよびアミドを含む非イオン結合が含まれる(例えば: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y. S. Sanghvi and P. D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Chapters 3 and 4, 40-65を参照のこと)。さらなる中性のヌクレオシド間結合には、混合されたN、O、SおよびCH2構成部分を含む非イオン結合が含まれる。 Neutral nucleoside bonds include, but are not limited to, phosphotriesters, methylphosphonates, MMIs (3'-CH 2 --N (CH 3 ) --O-5'), amides-3 (3'- CH 2 --C (= O) --N (H) -5'), Amide-4 (3'-CH 2 --N (H) --C (= O) -5'), Holm Acetal ( Includes 3'-O--CH 2 --O-5'), and thioform acetal (3'-S--CH 2 --O-5'). Further neutral internucleoside bonds include nonionic bonds containing siloxanes (dialkylsiloxanes), carboxylate esters, carboxamides, sulfides, sulfonate esters and amides (eg: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; YS Sanghvi and PD Cook). , Eds., ACS Symposium Series 580; see Chapters 3 and 4, 40-65). Further neutral internucleoside bonds include non-ionic bonds containing mixed N, O, S and CH 2 components.

オリゴヌクレオチド上の他の位置、特に3'末端ヌクレオチド上の糖の3'位および5'末端ヌクレオチドの5'位でさらなる修飾を行うこともできる。例えば、本発明のリガンド結合オリゴヌクレオチドの1つのさらなる修飾は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布もしくは細胞取り込みを増強する1つもしくは複数のさらなる非リガンド部分もしくはコンジュゲートをオリゴヌクレオチドに化学的に連結することを伴う。そのような部分には、コレステロール部分(Letsinger et al., 1989)のような脂質部分、コール酸(Manoharan et al., 1994)、チオエーテル、例えば、ヘキシル-5-トリチルチオール(Manoharan et al., 1992; Manoharan et al., 1993)、チオコレステロール(Oberhauser et al., 1992)、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基(Saison-Behmoaras et al., 1991; Kabanov et al., 1990; Svinarchuk et al., 1993)、リン脂質、例えば、ジ-ヘキサデシル-rac-グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム1,2-ジ-O-ヘキサデシル-rac-グリセロ-3-H-ホスホネート(Manoharan et al., 1995; Shea et al., 1990)、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖(Manoharan et al., 1995)、またはアダマンタン酢酸(Manoharan et al., 1995)、パルミチル部分(Mishra et al., 1995)、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ-カルボニル-オキシコレステロール部分(Crooke et al., 1996)が含まれるが、これらに限定されることはない。 Further modifications can be made at other positions on the oligonucleotide, especially at the 3'position of the sugar on the 3'end nucleotide and the 5'position of the 5'end nucleotide. For example, one further modification of a ligand-bound oligonucleotide of the invention chemically links one or more additional non-ligand moieties or conjugates to the oligonucleotide that enhance the activity, cell distribution or uptake of the oligonucleotide. Accompanied by that. Such moieties include lipid moieties such as the cholesterol moiety (Letsinger et al., 1989), colitic acid (Manoharan et al., 1994), thioethers such as hexyl-5-tritylthiol (Manoharan et al.,,). 1992; Manoharan et al., 1993), thiocholidole (Oberhauser et al., 1992), aliphatic chains such as dodecanediol or undecyl residues (Saison-Behmoaras et al., 1991; Kabanov et al., 1990; Svinarchuk et al., 1993), phospholipids such as di-hexadecyl-rac-glycerol or triethylammonium 1,2-di-O-hexadecyl-rac-glycero-3-H-phosphonate (Manoharan et al., 1995; Shea et al., 1990), polyamine or polyethylene glycol chains (Manoharan et al., 1995), or adamantan acetate (Manoharan et al., 1995), palmityl moieties (Mishra et al., 1995), or octadecylamine or hexyl. Amino-carbonyl-oxylipid moieties (Crooke et al., 1996) are included, but are not limited to these.

そのようなオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第4,828,979号; 同第4,948,882号; 同第5,218,105号; 同第5,525,465号; 同第5,541,313号; 同第5,545,730号; 同第5,552,538号; 同第5,578,717号、同第5,580,731号; 同第5,580,731号; 同第5,591,584号; 同第5,109,124号; 同第5,118,802号; 同第5,138,045号; 同第5,414,077号; 同第5,486,603号; 同第5,512,439号; 同第5,578,718号; 同第5,608,046号; 同第4,587,044号; 同第4,605,735号; 同第4,667,025号; 同第4,762,779号; 同第4,789,737号; 同第4,824,941号; 同第4,835,263号; 同第4,876,335号; 同第4,904,582号; 同第4,958,013号; 同第5,082,830号; 同第5,112,963号; 同第5,214,136号; 同第5,082,830号; 同第5,112,963号; 同第5,214,136号; 同第5,245,022号; 同第5,254,469号; 同第5,258,506号; 同第5,262,536号; 同第5,272,250号; 同第5,292,873号; 同第5,317,098号; 同第5,371,241号、同第5,391,723号; 同第5,416,203号、同第5,451,463号; 同第5,510,475号; 同第5,512,667号; 同第5,514,785号; 同第5,565,552号; 同第5,567,810号; 同第5,574,142号; 同第5,585,481号; 同第5,587,371号; 同第5,595,726号; 同第5,597,696号; 同第5,599,923号; 同第5,599,928号および同第5,688,941号が含まれるが、これらに限定されることはなく、これらの各々は、参照により本明細書に組み入れられる。 Representative U.S. patents that teach the preparation of such oligonucleotide conjugates include U.S. Pat. Nos. 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730. No. 5,552,538; No. 5,578,717, No. 5,580,731; No. 5,580,731; No. 5,591,584; No. 5,109,124; No. 5,118,802; No. 5,138,045; No. 5,414,077; No. 5,486,603 No. 5,512,439; No. 5,578,718; No. 5,608,046; No. 4,587,044; No. 4,605,735; No. 4,667,025; No. 4,762,779; No. 4,789,737; No. 4,824,941; No. 4,835,263; No. 4,876,335; No. 4,904,582; No. 4,958,013; No. 5,082,830; No. 5,112,963; No. 5,214,136; No. 5,082,830; No. 5,112,963; No. 5,214,136; No. 5,254,469; No. 5,258,506; No. 5,262,536; No. 5,272,250; No. 5,292,873; No. 5,317,098; No. 5,371,241, No. 5,391,723; No. 5,416,203, No. 5,451,463. No. 5,510,475; No. 5,512,667; No. 5,514,785; No. 5,565,552; No. 5,567,810; No. 5,574,142; No. 5,585,481; No. 5,587,371; No. 5,595,726; No. 5,597,696 No. 5,599,923; No. 5,599,928 and No. 5,688,941; but not limited to these, each of which is incorporated herein by reference.

E. キット
本開示はまた、キットを提供する。本明細書において開示される成分のいずれも、キットの形態で組み合わせることができる。いくつかの態様において、キットは、上記のもしくは特許請求の範囲におけるデンドリマーもしくは組成物を含む。 E. Kits This disclosure also provides kits. Any of the ingredients disclosed herein can be combined in the form of a kit. In some embodiments, the kit comprises a dendrimer or composition as described above or in the claims.

キットは一般に、成分が配され、好ましくは、適当に分注されうる、少なくとも1つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジもしくは他の容器を含む。キット中に2つ以上の成分がある場合、キットはまた、一般に、さらなる成分が別個に配されうる、第2、第3もしくは他のさらなる容器を含む。しかしながら、成分のさまざまな組み合わせを容器に含めることができる。いくつかの態様において、核酸送達成分の全てが単一の容器中で組み合わされる。他の態様において、本重合体を有するデンドリマー送達成分の一部もしくは全部が別個の容器中で提供される。 Kits generally include at least one vial, test tube, flask, bottle, syringe or other container to which the ingredients are arranged and preferably dispensed appropriately. If there are more than one ingredient in the kit, the kit also generally includes a second, third or other additional container in which the additional ingredients can be placed separately. However, various combinations of ingredients can be included in the container. In some embodiments, all of the nucleic acid delivery components are combined in a single container. In another embodiment, some or all of the dendrimer delivery components having the present polymer are provided in separate containers.

本発明のキットはまた、典型的には、商業的販売のために密閉してさまざまな容器を含むための包装を含む。そのような包装は、所望の容器が保持される厚紙または射出もしくはブロー成形プラスチック包装を含みうる。キットはまた、キット成分を利用するための説明書を含みうる。説明書は、実行可能なバリエーションを含みうる。 The kits of the invention also typically include packaging for containing various containers sealed for commercial sale. Such packaging may include cardboard or injection or blow molded plastic packaging that holds the desired container. The kit may also include instructions for utilizing the kit components. The instructions may include viable variations.

F. 実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を実証するために含まれる。以下の実施例において開示される技法は、本発明の実践において良好に機能するように発明者によって発見された技法を表し、したがって、その実践のための好ましい様式を構成すると考えることができることが、当業者には理解されるべきである。しかしながら、当業者であれば、本開示に照らして、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示された特定の態様において多くの変更をなすことができ、それでもなお、同様のもしくは類似の結果を得ることができることを認識すべきである。 F. Examples The following examples are included to demonstrate preferred embodiments of the invention. The techniques disclosed in the following examples represent techniques discovered by the inventor to function well in the practice of the present invention and can therefore be considered to constitute a preferred mode for that practice. It should be understood by those skilled in the art. However, one of ordinary skill in the art can make many changes in the particular embodiments disclosed without departing from the spirit and scope of the invention in the light of the present disclosure, and nonetheless, similar or similar. It should be recognized that results can be obtained.

実施例1: 材料および器具
1. 化学合成のための材料
全てのアミン、チオール、および他に特定されていない化学物質は、Sigma-Aldrichから購入された。1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)は、Avanti Lipidsから購入された。脂質PEG2000は、以下に記述されるように、化学的に合成された。報告された手順(Love et al., 2010)にしたがってC12-200は合成された。全ての有機溶媒はFisher Scientificから購入され、溶媒精製システム(Innovative Technology)で精製された。 Example 1: Materials and equipment
1. Materials for Chemical Synthesis All amines, thiols, and other unspecified chemicals were purchased from Sigma-Aldrich. 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) was purchased from Avanti Lipids. The lipid PEG2000 was chemically synthesized as described below. C12-200 was synthesized according to the reported procedure (Love et al., 2010). All organic solvents were purchased from Fisher Scientific and purified by a solvent purification system (Innovative Technology).

2. インビトロおよびインビボ実験のための核酸および他の材料
全てのsiRNAは、Sigma-Aldrichから購入された。Let-7g miRNA模倣体およびその対照模倣体は、Ambion by Life Technologiesから購入された。ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)およびウシ胎児血清(FBS)は、Sigma-Aldrichから購入された。OptiMEM、DAPI、およびAlexa Fluor 488ファロイジンは、Life Technologiesから購入された。ONE-Glo + ToxはPromegaから購入された。Biophen FVIIはAniara Corporationから購入された。 2. Nucleic acids and other materials for in vitro and in vivo experiments All siRNAs were purchased from Sigma-Aldrich. The Let-7g miRNA mimetic and its control mimetics were purchased from Ambion by Life Technologies. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) and Fetal Bovine Serum (FBS) were purchased from Sigma-Aldrich. OptiMEM, DAPI, and Alexa Fluor 488 Phalloidin were purchased from Life Technologies. ONE-Glo + Tox was purchased from Promega. Biophen FVII was purchased from Aniara Corporation.

siRNAのセンス鎖およびアンチセンス鎖の配列は以下の通りであった:
siLuc (ルシフェラーゼに対するsiRNA)。dTはDNA塩基である。他は全てRNA塩基である。

Figure 2022031692000117
siFVII (FVIIに対するsiRNA)。2'-フルオロ修飾ヌクレオチドは小文字である。
Figure 2022031692000118
siCTR (対照としてのsiRNA)
Figure 2022031692000119
The sequences of the sense and antisense strands of the siRNA were as follows:
siLuc (siRNA for luciferase). dT is a DNA base. All others are RNA bases.
Figure 2022031692000117
siFVII (siRNA for FVII). 2'-Fluoro-modified nucleotides are lowercase.
Figure 2022031692000118
siCTR (siRNA as a control)
Figure 2022031692000119

Sigma-Aldrich MISSION siRNAユニバーサル陰性対照(Universal Negative Control) #1 (カタログ番号: SIC001)を対照実験において非標的siRNAとして用いた。2' OMe修飾された対照siRNA(Sigma-Aldrich, 独自の修飾)をインビボ研究で用いて、免疫刺激を低減させた。
Cy5.5標識siRNA (画像化のためのsiRNA)

Figure 2022031692000120
Let-7g miRNA模倣体
Ambion (Life Technologies) mirVana miRNA模倣体(カタログ番号: 4464070, 製品ID: MC11758, 名称: has-let-7g)。Ambionによって開示されていない正確な配列および修飾。成熟ヒトLet-7gを模倣する。
陰性対照(CTR) miRNA模倣体
Ambion (Life Technologies) mirVana miRNA模倣体, 陰性対照(Negative Control) #1 (カタログ番号: 4464061)。Ambionによって開示されていない正確な配列および修飾。 Sigma-Aldrich MISSION siRNA Universal Negative Control # 1 (catalog number: SIC001) was used as the non-target siRNA in the control experiment. 2'OMe-modified control siRNA (Sigma-Aldrich, proprietary modification) was used in in vivo studies to reduce immune stimulation.
Cy5.5 labeled siRNA (siRNA for imaging)
Figure 2022031692000120
Let-7g miRNA mimetic
Ambion (Life Technologies) mirVana miRNA mimetic (catalog number: 4464070, product ID: MC11758, name: has-let-7g). Exact sequences and modifications not disclosed by Ambion. It mimics the mature human Let-7g.
Negative control (CTR) miRNA mimetic
Ambion (Life Technologies) mirVana miRNA mimetic, Negative Control # 1 (catalog number: 4464061). Exact sequences and modifications not disclosed by Ambion.

3. ロボット自動化
ナノ粒子(NP)製剤化およびインビトロスクリーニングは、8チャネル液体ハンドリングアーム(LiHa)、96チャネルヘッドを有するマルチチャネルアーム(MCA)、ロボットマニピュレータアーム(RoMa)、および統合InfiniTe F/M200 Proマイクロプレートリーダー(Tecan)を備えたTecan Freedom EVO 200流体ハンドリングロボットにて行われた。2つの統合されたカスタム加熱および撹拌化学反応ステーション(V&P Scientific 710E-3HM Series Tumble Stirrers)によって、反応および混合の支援が提供された。全ての操作はEVOware Standardソフトウェア(Tecan)でプログラムされていた。 3. Robotic automated nanoparticle (NP) formulation and in vitro screening includes 8-channel liquid handling arm (LiHa), multi-channel arm with 96-channel head (MCA), robot manipulator arm (RoMa), and integrated InfiniTe F / M200. Performed on a Tecan Freedom EVO 200 fluid handling robot equipped with a Pro microplate reader (Tecan). Two integrated custom heating and stirring chemical reaction stations (V & P Scientific 710E-3HM Series Tumble Stirrers) provided reaction and mixing assistance. All operations were programmed with EVOware Standard software (Tecan).

4. 合成特性
1Hおよび13C NMRは、Varian 500 MHz分光計にて行われた。MSはVoyager DE-Pro MALDI TOFにて行われた。フラッシュクロマトグラフィーは、UV-visおよび蒸発光散乱検出器(ELSD)を備えたTeledyne Isco CombiFlash Rf-200iクロマトグラフィーシステムにて行われた。粒子サイズおよびゼータ電位は、Malvern Zetasizer Nano ZS (He-Neレーザー, λ = 632 nm)を用いた動的光散乱(DLS)によって測定された。 4. Synthetic properties
1 H and 13 C NMR were performed on a Varian 500 MHz spectrometer. MS was performed at Voyager DE-Pro MALDI TOF. Flash chromatography was performed on a Teledyne Isco CombiFlash Rf-200i chromatography system equipped with UV-vis and an evaporative light scattering detector (ELSD). Particle size and zeta potential were measured by dynamic light scattering (DLS) with a Malvern Zetasizer Nano ZS (He-Ne laser, λ = 632 nm).

5. インビボ研究のためのナノ粒子製剤
インビボ研究のために製剤化されたデンドリマーナノ粒子は、ヘリンボーン迅速混合特性を有するマイクロ流体混合装置(Precision Nanosystems NanoAssemblr)を用いて調製された。デンドリマー、DSPC、コレステロール、および脂質PEG2000のエタノール溶液を、以下に記述するようにsiRNAの酸性溶液と迅速に混ぜ合わせた。水性:EtOHの典型的な比率は3:1 (容量)であり、典型的な流速は12 mL/分であった。 5. Nanoparticle formulation for in vivo studies Dendrimer nanoparticles formulated for in vivo studies were prepared using a Microfluidic Mixer (Precision Nanosystems NanoAssemblr) with herringbone rapid mixing properties. Ethanol solutions of dendrimer, DSPC, cholesterol, and lipid PEG2000 were rapidly mixed with an acidic solution of siRNA as described below. A typical ratio of aqueous: EtOH was 3: 1 (volume) and a typical flow rate was 12 mL / min.

6. モジュール方式の分解性デンドリマーの自動インビトロ送達スクリーニング
ナノ粒子(NP)製剤およびインビトロスクリーニングは、8チャネル液体ハンドリングアーム(LiHa)、96チャネルヘッドを有するマルチチャネルアーム(MCA)、ロボットマニピュレータアーム(RoMa)、および統合InfiniTe F/M200 Proマイクロプレートリーダー(Tecan)を備えたTecan Freedom EVO 200流体ハンドリングロボットにて行われた。 6. Automated in vitro delivery screening of modular degradable dendrimers Nanoparticle (NP) formulations and in vitro screening include 8-channel liquid handling arm (LiHa), multi-channel arm (MCA) with 96-channel head, robot manipulator arm (RoMa). ), And the Tecan Freedom EVO 200 fluid handling robot with the integrated InfiniTe F / M200 Pro microplate reader (Tecan).

ホタルルシフェラーゼを安定に発現するHeLa細胞(HeLa-Luc)は、レンチウイルス感染を用いたルシフェラーゼ遺伝子の安定したトランスフェクション、続いてクローン選択によってHeLa細胞(ATCC)から導出された。HeLa-Luc細胞を、不透明な白色96ウェルプレート(Corning)の各ウェルに播種し(10,000細胞/ウェル)、5% FBSを補充したフェノールレッド不含DMEMに終夜付着させた。トランスフェクションを開始する前の2日目に、培地を新鮮なFBS含有培地と交換した。 HeLa cells (HeLa-Luc) that stably express firefly luciferase were derived from HeLa cells (ATCC) by stable transfection of the luciferase gene using lentivirus infection, followed by clone selection. HeLa-Luc cells were seeded in each well of an opaque white 96-well plate (Corning) (10,000 cells / well) and adhered overnight to phenol red-free DMEM supplemented with 5% FBS. On the second day prior to the start of transfection, the medium was replaced with fresh FBS-containing medium.

G1DD-siLucナノ粒子は、発見プロセスを加速するために自動化された流体ハンドリングロボットの助けを借りて製剤化された。全ての操作はEVOware Standardソフトウェアでプログラムされていた。最初に、デンドリマー反応溶液を元の反応濃度からエタノール中12.5 mMに希釈した。次に、デンドリマー溶液を二度目に、LiHaアームを用いてエタノール中12.5 mMから1 mMに希釈した。次いで、エタノール中の脂質混合物89.2 μLを96ウェル透明プレートに添加した。脂質混合物は、エタノール中のDSPC (0.0690 mM)、コレステロール(0.2622 mM)、および脂質PEG2000 (0.0138 mM)から構成された。引き続いて、96ウェルプレートの脂質混合物にLiHaを介して各デンドリマー(1 mM) 30.8 μLを添加し、その後迅速な混合を行った(15回; 75 μLの混合容量; 250 μL/秒の速度)。LiHaを添加し、一度に8チップ混合した。第2の透明96ウェルプレートに、クエン酸緩衝液(pH = 4.3)中のsiLuc (20 ng/μL) 50 μLをLiHaによって添加した。次いで、エタノール混合物(デンドリマー、DSPC、コレステロール、脂質PEG2000) 30 μLをsiLuc溶液50 μLに添加し、その後に迅速な混合(15回; 75 μLの混合容量; 250 μL/秒の速度)を行って、デンドリマーナノ粒子を形成させた。次に、LiHaを用い滅菌PBS(1×) 120 μLを添加および混合してNPを希釈し、pHを上昇させた。引き続き、プレートを再フォーマットして、増殖細胞への容易な移入を可能にした。最後に、NP溶液20 μLを、MCA96ヘッドを介し滅菌使い捨てチップを用いて培養細胞に添加して、混入を回避した。細胞は最終的にsiLuc (33 nM) 100 ngを受けた。このスクリーニング段階の間、デンドリマーのsiLucに対するモル比は100:1であった。製剤の最終組成は、G1DD:コレステロール:DSPC:脂質PEG2000: = 50:38:10:2 (モルで)であった。細胞を37℃、5% CO2で24時間インキュベートし、次いでホタルルシフェラーゼ活性と、生存性を、One Glo + Toxアッセイキット(Promega)を用いて分析した。 G1DD-siLuc nanoparticles were formulated with the help of an automated fluid handling robot to accelerate the discovery process. All operations were programmed with EVOware Standard software. First, the dendrimer reaction solution was diluted from the original reaction concentration to 12.5 mM in ethanol. The dendrimer solution was then diluted a second time in ethanol from 12.5 mM to 1 mM using a LiHa arm. Then 89.2 μL of the lipid mixture in ethanol was added to the 96-well clear plate. The lipid mixture consisted of DSPC (0.0690 mM), cholesterol (0.2622 mM), and lipid PEG2000 (0.0138 mM) in ethanol. Subsequently, 30.8 μL of each dendrimer (1 mM) was added to the lipid mixture in a 96-well plate via LiHa, followed by rapid mixing (15 times; 75 μL mixing volume; 250 μL / sec rate). .. LiHa was added and 8 chips were mixed at a time. To a second clear 96-well plate, 50 μL of siLuc (20 ng / μL) in citrate buffer (pH = 4.3) was added by LiHa. Then 30 μL of the ethanol mixture (dendrimer, DSPC, cholesterol, lipid PEG2000) was added to 50 μL of the siLuc solution, followed by rapid mixing (15 times; 75 μL mixing volume; 250 μL / sec rate). , Dendrimer nanoparticles were formed. Next, using LiHa, 120 μL of sterile PBS (1 ×) was added and mixed to dilute the NP and raise the pH. Subsequently, the plates were reformatted to allow easy transfer into proliferating cells. Finally, 20 μL of NP solution was added to the cultured cells via a MCA96 head using a sterile disposable tip to avoid contamination. The cells finally received 100 ng of siLuc (33 nM). During this screening phase, the molar ratio of dendrimers to siLuc was 100: 1. The final composition of the drug product was G1DD: cholesterol: DSPC: lipid PEG2000: = 50: 38: 10: 2 (in moles). Cells were incubated at 37 ° C. at 5% CO 2 for 24 hours, then firefly luciferase activity and viability were analyzed using the One Glo + Tox assay kit (Promega).

7. インビボ研究のためのデンドリマー-低分子RNA製剤
インビボ研究のために製剤化されたデンドリマーナノ粒子は、ヘリンボーン迅速混合特性を有するマイクロ流体混合装置(Precision Nanosystems NanoAssemblr)を用いて調製された。デンドリマー、DSPC、コレステロール、および脂質PEG2000 (50:38:10:2のモル比)のエタノール溶液を低分子RNAの酸性溶液と迅速に混ぜ合わせて、25:1 (デンドリマー:低分子RNA)の最終重量比を得た。水性:EtOHの典型的な比率は3:1 (容量)であり、典型的な流速は12 mL/分であった。報告された手順(Love et al., 2010)にしたがってC12-200 LNPは調製された。C12-200、DSPC、コレステロール、および脂質PEG2000 (50:38.5:10:1.5のモル比)のエタノール溶液を低分子RNAの酸性溶液と迅速に混ぜ合わせて、7:1 (C12-200:低分子RNA)の最終重量比を得た。全ての製剤化されたNPを、3.5kDのカットオフを用いた滅菌PBS中での透析によって精製し、サイズを、インビボ研究の前に動的光散乱(DLS)によって測定した。適用可能な場合、Ribogreen結合アッセイ(Invitrogen)を用いて、少量の溶液を取り、そのプロトコルにしたがうことにより、低分子RNAのカプセル封入を測定した。 7. Dendrimer-small RNA formulation for in vivo studies Dendrimer nanoparticles formulated for in vivo studies were prepared using a Microfluidic Mixer (Precision Nanosystems Nano Assemblr) with herringbone rapid mixing properties. A solution of dendrimer, DSPC, cholesterol, and lipid PEG2000 (50:38: 10: 2 molar ratio) in ethanol was rapidly mixed with an acidic solution of small RNA to produce a final 25: 1 (dendrimer: small RNA). A weight ratio was obtained. A typical ratio of aqueous: EtOH was 3: 1 (volume) and a typical flow rate was 12 mL / min. C12-200 LNP was prepared according to the reported procedure (Love et al., 2010). A solution of C12-200, DSPC, cholesterol, and lipid PEG2000 (molar ratio of 50: 38.5: 10: 1.5) was rapidly mixed with an acidic solution of small RNA to 7: 1 (C12-200: small molecule). The final weight ratio of RNA) was obtained. All formulated NPs were purified by dialysis in sterile PBS with a 3.5 kD cutoff and their size was measured by dynamic light scattering (DLS) prior to in vivo studies. Where applicable, Ribogreen binding assay (Invitrogen) was used to take small amounts of solution and measure small RNA encapsulation according to the protocol.

8. 動物実験
全ての実験は、テキサス大学サウスウェスタンメディカルセンターの施設動物用ケアおよび使用委員会によって承認され、適用可能な地方、州および連邦規則と一致していた。雌性C57BL/6マウスはHarlan Laboratories (Indianapolis, IN)から購入された。MYC駆動肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスは、TRE-MYC系統をLAP-tTA系統と交配させることによって作出された。LAP-tTAおよびTRE-MYC遺伝子型を担持するマウスを1 mg/mLのdoxで維持し、doxを取り除くことによってMYCを誘導した。統計的有意性を達成するのに必要とされる動物数を予測するために、検出力分析を行った。 8. Animal testing All testing was approved by the Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Texas Southwestern Medical Center and was consistent with applicable local, state and federal regulations. Female C57BL / 6 mice were purchased from Harlan Laboratories (Indianapolis, IN). Transgenic mice carrying MYC-driven liver tumors were generated by mating the TRE-MYC strain with the LAP-tTA strain. Mice carrying the LAP-tTA and TRE-MYC genotypes were maintained at 1 mg / mL dox and MYC was induced by removing the dox. Power analysis was performed to predict the number of animals required to achieve statistical significance.

9. マウスにおけるインビボ第VII因子サイレンシング
インビボ送達スクリーニングのため、雌性C57BL/6マウスは尾静脈にPBS (陰性対照, n=3)またはPBS中で希釈された非標的化siRNA (siCTR, 陰性対照, n=3)を含有するデンドリマーNPもしくは抗第VII因子siRNA (siFVII, n=3)を含有するデンドリマーNP (総量200 μLもしくはそれ以下)のi.v.注射を受けた。48時間後、体重増加/減少を測定し、マウスを、逆眼窩眼球出血による血液サンプル採取のためイソフルオレン吸入により麻酔した。血清分離管(Becton Dickinson)で血清を単離し、第VII因子タンパク質レベルを発色アッセイ法(Biophen FVII, Aniara Corporation)によって分析した。PBSを注射したマウス由来のサンプルを用いて標準曲線を構築し、処置群を未処置PBS対照と比較することにより相対的な第VII因子発現を決定した。 9. In vivo Factor VII Silencing in Mice For in vivo delivery screening, female C57BL / 6 mice had PBS (negative control, n = 3) in the tail vein or untargeted siRNA (siCTR, negative control) diluted in PBS. Received an iv injection of dendrimer NP containing n = 3) or dendrimer NP containing anti-Factor VII siRNA (siFVII, n = 3) (total volume 200 μL or less). After 48 hours, weight gain / loss was measured and mice were anesthetized by inhalation of isofluorene for blood sampling due to reverse orbital ocular hemorrhage. Serum was isolated in a serum separation tube (Becton Dickinson) and factor VII protein levels were analyzed by color development assay (Biophen FVII, Aniara Corporation). A standard curve was constructed using mice derived from mice injected with PBS and relative factor VII expression was determined by comparing the treated group with untreated PBS controls.

治療研究のため、トランスジェニックマウスにおけるFVIIノックダウンを、上記の血液アッセイ法でおよびqPCRによって採取された肝臓組織を用いて検証した。統計的有意性を評価するために、95%信頼水準の両側スチューデントt検定を実施した。 For therapeutic studies, FVII knockdown in transgenic mice was validated using liver tissue collected by the blood assay described above and by qPCR. A two-sided student's t-test with a 95% confidence level was performed to assess statistical significance.

10. 生体内分布
肝臓腫瘍を担持する雌性C57BL/6マウスもしくはトランスジェニックマウスは尾静脈に、200 μL中1 mg/kgのsiRNAでCy5.5-siRNAを含有するデンドリマーNPのi.v.注射を受けた。注射後24時間の時点で、マウスを安楽死させ、臓器を取り出した。生体内分布は、Cy5.5フィルタの設定でIVIS Lumina System (Caliper Life Sciences)を用いて全臓器を画像化することによって評価された。 10. Biodistribution Female C57BL / 6 mice or transgenic mice carrying liver tumors received an iv injection of dendrimer NP containing Cy5.5-siRNA at 1 mg / kg siRNA in 200 μL into the tail vein. .. Twenty-four hours after injection, mice were euthanized and organs removed. Biodistribution was assessed by imaging all organs using the IVIS Lumina System (Caliper Life Sciences) with the Cy5.5 filter set.

共焦点画像化のため、組織を凍結切片化(7 μm)し、4%パラホルムアルデヒドを用いて室温で10分間固定した。スライドをPBSで3回洗浄し、1%アルブミンを有するPBS中で30分間ブロッキングした。次いで、切片を、1%アルブミンを有するPBS中のAlexa Fluor 488 Phalloidin (200分の1希釈, Life Technologies)とともに30分間インキュベートした。スライドを0.1% Tween 20で3回洗浄し、ProLong Gold Antifade (Life Technologies)を用いてマウントした。25×対物レンズを備えたLSM 700点走査共焦点顕微鏡(Zeiss)を用いて、切片を画像化した。 For confocal imaging, the tissue was frozen sectioned (7 μm) and fixed with 4% paraformaldehyde at room temperature for 10 minutes. Slides were washed 3 times with PBS and blocked in PBS with 1% albumin for 30 minutes. Sections were then incubated with Alexa Fluor 488 Phalloidin (1/200 dilution, Life Technologies) in PBS with 1% albumin for 30 minutes. Slides were washed 3 times with 0.1% Tween 20 and mounted using ProLong Gold Antifade (Life Technologies). Sections were imaged using an LSM 700-point scanning confocal microscope (Zeiss) equipped with a 25 × objective lens.

11. インビボ毒性評価およびLet-7g治療研究
肝臓腫瘍を担持する野生型マウスもしくはトランスジェニックマウスを、異なる群に無作為に分けた。マウスは尾静脈に、siCTRを含有するデンドリマーNPのi.v.注射を受けた。それらの体重を毎日モニターした。肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスの場合、複数回の尾静脈注射を行って、繰り返し投与をシミュレーションした。 11. In vivo Toxicity Assessment and Let-7g Therapeutic Studies Wild-type or transgenic mice carrying liver tumors were randomly divided into different groups. Mice received an iv injection of dendrimer NP containing siCTR into the tail vein. Their weight was monitored daily. In the case of transgenic mice carrying liver tumors, multiple tail vein injections were performed to simulate repeated administration.

Let-7gの治療研究の場合、肝臓腫瘍を担持するトランスジェニックマウスは尾静脈に、26日齢から61日齢までPBS 200 μL中1 mg/kgの投与量でLet-7g模倣体もしくはCTR模倣体を有するデンドリマーNPのi.v.注射を毎週受けた。処理順序無作為化を用いた。盲検は行われなかった。それらの体重、腹部サイズ、および生存を注意深くモニターした。統計的有意性を評価するために、95%信頼水準の両側T検定もしくはMantel-Cox検定を実施した。 For Let-7g therapeutic studies, transgenic mice carrying liver tumors were placed in the tail vein at doses of 1 mg / kg in 200 μL PBS from 26 days to 61 days to mimic Let-7g or CTR. Received weekly iv injections of dendrimer NP with body. Processing order randomization was used. No blinding was done. Their weight, abdominal size, and survival were carefully monitored. A two-sided T-test or Mantel-Cox test with a 95% confidence level was performed to assess statistical significance.

実施例2: PEG脂質およびデンドリマーの合成および特徴付け
1. 1,512個の第1世代分解性デンドリマー(G1DD)を含むライブラリの合成
G1DDは、2つの連続した直交反応によって合成された。最初に、異なる初期分枝中心(IBC)を有するアミンを2-(アクリロイルオキシ)エチルメタクリレート(AEMA)のアクリレート基と、IBC数に等しいAEMAとのアミンのモル比で別々に反応された(例えば2Aアミン: 2当量のAEMAを添加した; 6Aアミン: 6当量のAEMAを添加した)。50℃で24時間、5 mol%のブチル化ヒドロキシルトルエン(BHT)の添加によって反応を実施した。次に、各第1段階添加物を各チオールと、アミンIBC数に等しいチオール添加物とのチオールのモル比で別々に反応させた(例えば2Aアミン第1段階添加物: 2当量の各チオールを添加した; 6Aアミン第1段階添加物: 6当量の各チオールを添加した)。60℃で48時間、5 mol%のジメチルフェニルホスフィン(DMPP)触媒の添加によって反応を実施した。ガラスバイアルおよびアルミニウム反応ブロック中で反応を実施することにより、1,512員ライブラリ合成が加速された。カスタム加熱および撹拌化学反応ステーション(V&P Scientific 710E-3HM Series Tumble Stirrers)を利用した。 Example 2: Synthesis and characterization of PEG lipids and dendrimers
1. Synthesis of a library containing 1,512 first-generation degradable dendrimers (G1DD)
G1DD was synthesized by two consecutive orthogonal reactions. First, amines with different initial branch centers (IBC) were reacted separately with the acrylate group of 2- (acryloyloxy) ethyl methacrylate (AEMA) and the amine molar ratio of AEMA equal to the IBC number (eg). 2A amines: 2 equivalents of AEMA added; 6A amines: 6 equivalents of AEMA added). The reaction was carried out at 50 ° C. for 24 hours with the addition of 5 mol% butylated hydroxyltoluene (BHT). Each first-stage additive was then reacted separately with a thiol molar ratio of each thiol to a thiol additive equal to the number of amine IBCs (eg 2A amine first-stage additive: 2 equivalents of each thiol. Added; 6A amine first stage additive: 6 equivalents of each thiol added). The reaction was carried out at 60 ° C. for 48 hours with the addition of 5 mol% dimethylphenylphosphine (DMPP) catalyst. Performing the reaction in glass vials and aluminum reaction blocks accelerated 1,512-member library synthesis. A custom heating and stirring chemical reaction station (V & P Scientific 710E-3HM Series Tumble Stirrers) was used.

初期のインビトロ送達スクリーニング実験を粗G1DDで実施した。精製されたデンドリマーを用いて活性を検証するための追跡研究を行った。 Early in vitro delivery screening experiments were performed with crude G1DD. Follow-up studies were performed to verify activity using purified dendrimers.

全てのインビボ動物実験は、精製されたG1DDで行われた。精製されたG1DDは、Teledyne Iscoクロマトグラフィーシステムを使いヘキサンおよび酢酸エチルの勾配溶出液を用いて中性アルミナカラムでのカラムフラッシュクロマトグラフィーによって得られた。 All in vivo animal experiments were performed on purified G1DD. Purified G1DD was obtained by column flash chromatography on a neutral alumina column using a gradient eluate of hexane and ethyl acetate using a Teledyne Isco chromatography system.

2. より高次世代の分解性デンドリマー(HGDD) (例として1A2-G2-SC8)の合成

Figure 2022031692000121
以前の方法(Ma et al., 2009)にしたがって、より高次世代の分解性デンドリマーを調製した。1A2-G1は、5 mol% BHTの存在下、50℃で24時間、1A2アミンを1当量のAEMAと反応させた直後に調製された。1A2-G1 (4.00 g, 11.7 mmol)をDMSO 10 mLに溶解した。上記溶液への2-アミノエタンチオール(1.37 g, 17.5 mmol)の添加後、反応物を室温で30分間撹拌した。次にジクロロメタン300 mLを直ちに反応溶液に加え、余分な2-アミノエタンチオールを除去するために冷塩水(50 mL×3)で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、回転蒸発により濃縮して次の段階に直接用いた。AEMA (4.75 g, 25.8 mmol)およびBHT (227 mg, 1.08 mmol)を上記溶液に加えた。反応物を50℃で撹拌し、1H NMRによってモニターした。反応が完了した後、TLCプレート分析によりEAMAが見られなくなるまで、ヘキサン部分20 mLで溶液を繰り返し洗浄した。洗浄した溶液を真空中で乾燥させて、次の段階のために粘性液体1A3-G2を直接得た。1A3-G2を、上記の二段階合成手順にしたがうことにより反応させて、次の段階のために粘性液体1A3-G3を直接得た。1A2-G3 (0.5 g, 0.3 mmol)をDMSO 0.5 mLに溶解した後、1-オクタンチオール(216 μL, 1.22 mmol)およびジメチルフェニルホスフィン(DMPP) (8.6 μL, 0.061mmol)を添加した。反応物を60℃で48時間撹拌し、次いでヘキサンおよび酢酸エチルの勾配溶出液を用いて中性アルミナカラムに流すことにより精製した。淡黄色の粘性液体1A2-G3-SC8を得た。 2. Synthesis of higher generation degradable dendrimers (HGDD) (eg 1A2-G2-SC8)
Figure 2022031692000121
Higher generation degradable dendrimers were prepared according to previous methods (Ma et al., 2009). 1A2-G1 was prepared immediately after reacting 1A2 amine with 1 equivalent of AEMA in the presence of 5 mol% BHT at 50 ° C. for 24 hours. 1A2-G1 (4.00 g, 11.7 mmol) was dissolved in 10 mL of DMSO. After the addition of 2-aminoethanethiol (1.37 g, 17.5 mmol) to the above solution, the reaction was stirred at room temperature for 30 minutes. 300 mL of dichloromethane was then immediately added to the reaction solution and washed with cold brine (50 mL x 3) to remove excess 2-aminoethanethiol. The organic phase was dried over magnesium sulfate, concentrated by rotary evaporation and used directly in the next step. AEMA (4.75 g, 25.8 mmol) and BHT (227 mg, 1.08 mmol) were added to the above solution. The reaction was stirred at 50 ° C. and monitored by 1 H NMR. After the reaction was complete, the solution was repeatedly washed with 20 mL of hexane moiety until no EAMA was seen by TLC plate analysis. The washed solution was dried in vacuo to give the viscous liquid 1A3-G2 directly for the next step. 1A3-G2 was reacted by following the above two-step synthesis procedure to give the viscous liquid 1A3-G3 directly for the next step. After dissolving 1A2-G3 (0.5 g, 0.3 mmol) in 0.5 mL of DMSO, 1-octanethiol (216 μL, 1.22 mmol) and dimethylphenylphosphine (DMPP) (8.6 μL, 0.061 mmol) were added. The reaction was purified by stirring at 60 ° C. for 48 hours and then flowing through a neutral alumina column using a gradient eluate of hexane and ethyl acetate. A pale yellow viscous liquid 1A2-G3-SC8 was obtained.

3. 脂質PEG2000の合成

Figure 2022031692000122
PEG44-OH (80 g, 40 mmol)およびピリジン(6.5 mL, 80 mmol)を無水DCM 250 mLに溶解し、0℃で冷却した。DCM 50 mL中の塩化メタンスルホニル(15.5 mL, 200 mmol)を30分かけて添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。DCMさらに100 mLを添加し、有機相を飽和NaHCO3溶液(50 mL×3)、次いで塩水(50 mL×3)で洗浄した。得られた溶液を濃縮し、残渣をイソプロパノール中で再結晶し、乾燥して、白色粉末PEG2000-Ms (74 g, 93%)を得た。 3. Synthesis of lipid PEG2000
Figure 2022031692000122
PEG 44 -OH (80 g, 40 mmol) and pyridine (6.5 mL, 80 mmol) were dissolved in 250 mL of anhydrous DCM and cooled at 0 ° C. Methanesulfonyl chloride (15.5 mL, 200 mmol) in 50 mL of DCM was added over 30 minutes and the mixture was stirred overnight at room temperature. A further 100 mL of DCM was added and the organic phase was washed with saturated י 3 solution (50 mL x 3) and then with brine (50 mL x 3). The resulting solution was concentrated and the residue was recrystallized in isopropanol and dried to give a white powder PEG2000-Ms (74 g, 93%).

PEG2000-Ms (35.41 g, 17.7 mmol)をDMF 250 mLに溶解した。次に、NaN3 (12.4 g, 19.0 mmol)を溶液に添加した。反応物を窒素下、50℃で2日間撹拌した。DMFの除去後、残渣をDCM 300 mLに溶解し、塩水(50 mL×3)で洗浄した。溶媒の除去後、残油をメタノール50 mLに溶解し、生成物をジエチルエーテル300 mLで3回沈殿させて、所望の化合物(25.55 g, 72%)を白色粉末PEG2000-N3として得た。 PEG2000-Ms (35.41 g, 17.7 mmol) was dissolved in 250 mL of DMF. Next, NaN 3 (12.4 g, 19.0 mmol) was added to the solution. The reaction was stirred under nitrogen at 50 ° C. for 2 days. After removal of DMF, the residue was dissolved in 300 mL of DCM and washed with saline (50 mL x 3). After removal of the solvent, the residual oil was dissolved in 50 mL of methanol and the product was precipitated 3 times with 300 mL of diethyl ether to give the desired compound (25.55 g, 72%) as white powder PEG2000-N 3 .

プロパルギルアミン(0.50 g, 9.1 mmol)、BHT (191 mg, 0.91 mmol)、およびEAMA (2.73 g, 18.2 mmol)を25 mLの反応バイアルに加えた。混合物を50℃で48時間撹拌した。反応物を冷却して、次の反応に用いるために精製することなく、無色の油状生成物T3-G1を得た。 Propargylamine (0.50 g, 9.1 mmol), BHT (191 mg, 0.91 mmol), and EAMA (2.73 g, 18.2 mmol) were added to a 25 mL reaction vial. The mixture was stirred at 50 ° C. for 48 hours. The reaction was cooled to give the colorless oily product T3-G1 without purification for use in the next reaction.

4. 選択デンドリマーの特徴付け

Figure 2022031692000123
Figure 2022031692000124
Figure 2022031692000125
5A2-SC8はまた、6本のアーム(以下に示される構造)で調製された。
Figure 2022031692000126
Figure 2022031692000127
Figure 2022031692000128
4. characterization of selected dendrimers
Figure 2022031692000123
Figure 2022031692000124
Figure 2022031692000125
5A2-SC8 was also prepared with 6 arms (structure shown below).
Figure 2022031692000126
Figure 2022031692000127
Figure 2022031692000128

実施例3: 第1世代分解性デンドリマー(G1DD)のライブラリデザインおよび合成
肝臓がんは、薬物誘発肝毒性が基礎肝臓疾患を悪化させうるため、治療的介入について困難な宿主である(Boyerinas et al., 2010)。それゆえ、効果的なRNAi媒介療法を達成するために、担体の高い効力と低い毒性のバランスが維持されなければならない。これには、サイズ、化学構造、および最終の物理的特性という点で送達担体を容易に調整するための多様な戦略が必要である(図1A)。いくつかの態様において、以下の特徴の1つもしくは複数を示すデンドリマーがデザインされた: 化学的およびサイズ操作に最適な単分散材料(Wu et al., 2004; Carlmark et al., 2009; Killops et al., 2008; Ma et al., 2009; Franc and Kakkar, 2010)。直交反応を利用して2-(アクリロイルオキシ)エチルメタクリレート(AEMA)と逐次的に反応させ、さまざまなパラメータ: コア(C)、連結もしくは繰り返し単位(L)および周辺部もしくは末端基(P)によって第1世代分解性デンドリマー(G1DD)を多様化させた(図1B)。いくつかの態様において、ポリエステルはFDAに認可された毒性最小限の製品において用いられるので、出発の分解性連結としてエステルを選択した。各成長段階で、エステル数が増加し、これによってバランスのとれた効力および毒性を有する分解性デンドリマーを同定する機会が提供される。 Example 3: Library Design and Synthesis of First Generation Degradable Dendrimer (G1DD) Liver cancer is a difficult host for therapeutic intervention because drug-induced hepatotoxicity can exacerbate underlying liver disease (Boyerinas et al). ., 2010). Therefore, a balance between high efficacy and low toxicity of the carrier must be maintained in order to achieve effective RNAi-mediated therapy. This requires a variety of strategies for easily adjusting the delivery carrier in terms of size, chemical structure, and final physical properties (Fig. 1A). In some embodiments, dendrimers have been designed that exhibit one or more of the following characteristics: monodisperse materials optimal for chemical and size manipulation (Wu et al., 2004; Carlmark et al., 2009; Killops et. al., 2008; Ma et al., 2009; Franc and Kakkar, 2010). It is sequentially reacted with 2- (acryloyloxy) ethyl methacrylate (AEMA) using an orthogonal reaction with various parameters: core (C), ligated or repeating unit (L) and peripheral or end group (P). Diversified first-generation degradable dendrimers (G1DD) (Fig. 1B). In some embodiments, polyesters are used in FDA-approved minimal viable products, so esters were selected as the starting degradable linkage. At each stage of growth, the number of esters increases, which provides an opportunity to identify degradable dendrimers with balanced efficacy and toxicity.

以前の結果から、これらの直交反応が一連の世代のポリエステルデンドリマーを構築できることが明らかである(Ma et al., 2009)。しかしながら、この戦略が利用される前に、この方法は、精製することなく種々の化学的に異なるアミンおよびチオール化合物を用いて多様なデンドリマーを生成できることが立証された。この化学反応のロバスト性を調べるために、最も困難な出発物質、つまり初期分枝中心(IBC)として6個のN-H結合を有するトリス(2-アミノエチル)アミンおよび14炭素長のアルキル鎖を有するテトラデシルアミンを用いて、直交マイケル付加反応の構造的限界を試験した。50℃で5 mol%のブチル化ヒドロキシルトルエン(BHT) (ラジカル形成を阻害する)の存在下において24時間後に、トリス(2-アミノエチル)アミンおよびテトラデシルアミンの両方は、AEMA中のアクリレート官能基と定量的かつ選択的に反応したが、これらの条件下でAEMAそれ自体は未反応のままである(図2および3)。第2の直交反応(スルファ-マイケル付加)において、ジメチルフェニルホスフィンは、低濃度(最低125 mMである)もしくは小規模(平均でおよそ20 mg)条件で最終生成物を達成するため、および高い変換(1H NMRによって100%)を達成するため触媒として必要とされ、その結果、その材料をその後の試験もしくは世代拡張のために精製することなく用いることができる(図4および5)。デンドリマーのいくつかは、より大規模で再合成され、インビボ研究を行う前にフラッシュクロマトグラフィーによって精製された。 Previous results indicate that these orthogonal reactions can construct a series of generations of polyester dendrimers (Ma et al., 2009). However, before this strategy was utilized, it was demonstrated that this method can produce a variety of dendrimers with a variety of chemically different amine and thiol compounds without purification. To investigate the robustness of this chemical reaction, it has the most difficult starting material: tris (2-aminoethyl) amine with 6 NH bonds as the initial branch center (IBC) and an alkyl chain with a length of 14 carbons. Tetradecylamine was used to test the structural limits of the orthogonal Michael addition reaction. After 24 hours in the presence of 5 mol% butylated hydroxyltoluene (BHT) (which inhibits radical formation) at 50 ° C., both tris (2-aminoethyl) amine and tetradecylamine are acrylate functional in AEMA. Although it reacted quantitatively and selectively with the group, AEMA itself remains unreacted under these conditions (Figs. 2 and 3). In the second orthogonal reaction (sulfa-Michael addition), dimethylphenylphosphine is used to achieve the final product under low concentration (minimum 125 mM) or small scale (average approximately 20 mg) conditions, and high conversion. Required as a catalyst to achieve (100% by 1 H NMR), so that the material can be used without purification for subsequent testing or generation expansion (Figures 4 and 5). Some of the dendrimers were resynthesized on a larger scale and purified by flash chromatography prior to in vivo studies.

複数の送達障壁のため、ナノカプセル封入による低分子RNA担体の効力はpKa、トポロジー/構造、および疎水性を含めて、さまざまな要因によって影響される(Siegwart et al., 2011; Jayaraman et al., 2012; Schaffert et al., 2011; Whitehead et al., 2014)。高い送達効力を有する分解性デンドリマーを容易に同定するために、コア形成アミンCおよび周辺部形成チオールPを化学的に多様化することによって、4つのゾーン: コア結合 - 周辺分安定化(ゾーンI)、コア結合 - 周辺部結合(ゾーンII)、コア安定化 - 周辺部安定化(ゾーンIII)、およびコア安定化 - 周辺部結合(ゾーンIV)でG1DDのライブラリをデザインした(図1Cおよび1D)。ゾーンIおよびIIにおいて、RNA結合は、1つ(1An)から6つ(6An)の初期分枝中心(IBC)を有するアミンによって調節された。それゆえ、対応するデンドリマーには、1～6個の分枝が含まれていた。ゾーンIIIおよびIVにおいて、RNA-デンドリマーNPの安定化は、アルキル鎖の異なる長さ(1Hnおよび2Hn)で主に変えられた。ゾーンIIおよびIVにおいて、アミノチオール(SNn)の結合能力は異なるアミンで主に調節されたが、ゾーンIおよびIIIにおいては、安定化がアルキルチオール(SCn)長ならびにカルボキシル-およびヒドロキシル-アルキルチオール(SOn)で変えられた。化合物のライブラリ全体をデンドリマーの有効性について試験した(図6)。 Due to multiple delivery barriers, the efficacy of small RNA carriers with nanoencapsulation is influenced by a variety of factors, including pK a , topology / structure, and hydrophobicity (Siegwart et al., 2011; Jayaraman et al). ., 2012; Schaffert et al., 2011; Whitehead et al., 2014). By chemically diversifying the core-forming amine C and the peripheral-forming thiol P to easily identify degradable dendrimers with high delivery potency, four zones: core binding-peripheral stabilization (Zone I). ), Core binding-peripheral binding (Zone II), core stabilization-peripheral stabilization (Zone III), and core stabilization-peripheral binding (Zone IV) designed the G1DD library (Figures 1C and 1D). ). In Zones I and II, RNA binding was regulated by amines with 1 (1An) to 6 (6An) early branch centers (IBCs). Therefore, the corresponding dendrimer contained 1-6 branches. In Zones III and IV, the stabilization of RNA-dendrimer NPs was largely altered by the different lengths of the alkyl chains (1Hn and 2Hn). In Zones II and IV, the binding capacity of aminothiols (SNn) was predominantly regulated with different amines, whereas in Zones I and III, stabilization was alkylthiol (SCn) length and carboxyl- and hydroxyl-alkylthiols ( It was changed by SOn). The entire library of compounds was tested for dendrimer efficacy (Fig. 6).

実施例4: siRNA細胞内送達のためのインビトロG1DDスクリーニング
送達担体は、一連の細胞外および細胞内障壁を克服して、低分子RNAが腫瘍細胞の内側で活性であることを可能にしなければならない。ルシフェラーゼを安定に発現したHeLa細胞にインビトロでsiRNAを送達する能力についての1,512員のG1DDライブラリのスクリーニングによりsiRNAを媒介して細胞内障壁を克服できるG1DDが同定された。G1DDは、ルシフェラーゼ標的化siRNA (siLuc)ならびにヘルパー脂質コレステロール、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)および脂質PEG2000を含有するナノ粒子(NP)に製剤化された(Akinc et al., 2008; Semple et al., 2010)。ルシフェラーゼ低減および細胞生存性を定量化することによって、細胞内送達能を評価した(図7～9)。 Example 4: In vitro G1DD screening for siRNA intracellular delivery The delivery carrier must overcome a series of extracellular and intracellular barriers to allow the small RNA to be active inside the tumor cells. .. Screening of a 1,512-member G1DD library for the ability to deliver siRNA in vitro to HeLa cells that stably express luciferase identified G1DD that can mediate siRNA and overcome intracellular barriers. G1DD was formulated into nanoparticles (NP) containing luciferase-targeted siRNA (siLuc) and helper lipid cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) and lipid PEG2000 (Akinc). et al., 2008; Semple et al., 2010). The intracellular delivery ability was evaluated by reducing luciferase and quantifying cell viability (Figs. 7-9).

インビトロデータからSARを抽出するために、本発明者らはデンドリマー由来樹木分析プロセスを利用した(図7Bおよび9B)。1,512個のデンドリマーの中で、88個が50%超のルシフェラーゼサイレンシングを媒介し、ライブラリ全体のヒット率は6%であった。全4つのゾーン(I～IV)のヒット率が分析された場合、ゾーンIのヒット率は10%であったが、ゾーンII、III、およびIVのヒット率はそれぞれ0%、2%、および3%であった。この結果から、siRNA結合コアおよび安定化周辺部(ゾーンI)を有するこれらのデンドリマーがはるかに高い細胞内siRNA送達能を有することが示された。ゾーン1の分枝タイプ内では、SO周辺部を有するデンドリマーのヒット率は1%ほどに低いが、SC周辺部を有するデンドリマーのヒット率は15%ほどに高かった。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、デンドリマー周辺部からの疎水性安定化は、ナノカプセル封入を通じて細胞にsiRNAを効率的に送達するために重要であると考えられている。これは、さらなるNP安定性を提供する疎水性パッキングの増加をもたらす可能性が高い(Leung et al., 2012)。結合コアおよびSC周辺部を有するこれらのデンドリマーの分枝数および分枝長さをさらに調べた後で、結合コアおよび3、4、5もしくは6個のSC5-8分枝もしくはSC9-12分枝を有するデンドリマーは、siLucをHeLa細胞へ送達する25%超の機会を有し、50%超のルシフェラーゼノックダウンを伴う。完全なG1DDライブラリのインビトロスクリーニングおよび樹状分析プロセスを通じて、細胞内siRNA送達の増加を示したデンドリマーの群: 結合コア/SC周辺部および3～6個のSC5-8もしくはSC9-12分枝を有する結合コアを有する群が同定された。 To extract SAR from in vitro data, we utilized a dendrimer-derived tree analysis process (Figs. 7B and 9B). Of the 1,512 dendrimers, 88 mediated more than 50% luciferase silencing and the overall library hit rate was 6%. When the hit rates for all four zones (I-IV) were analyzed, the hit rates for Zone I were 10%, while the hit rates for Zones II, III, and IV were 0%, 2%, and IV, respectively. It was 3%. The results showed that these dendrimers with a siRNA binding core and a stabilized periphery (Zone I) have a much higher intracellular siRNA delivery capacity. Within the zone 1 branch type, the hit rate of dendrimers with SO perimeters was as low as 1%, but the hit rate of dendrimers with SC perimeters was as high as 15%. Although not bound by any theory, hydrophobic stabilization from the periphery of the dendrimer is believed to be important for the efficient delivery of siRNA to cells through nanocapsulation. This is likely to result in an increase in hydrophobic packing that provides additional NP stability (Leung et al., 2012). After further investigation of the number of branches and branch length of these dendrimers with bound cores and SC perimeters, the bound cores and 3, 4, 5 or 6 SC5-8 or SC9-12 branches Dendrimers with have more than 25% chance of delivering siLuc to HeLa cells and are accompanied by more than 50% luciferase knockdown. A group of dendrimers showing increased intracellular siRNA delivery through in vitro screening and dendritic analysis processes of the complete G1DD library: with bound core / SC periphery and 3-6 SC5-8 or SC9-12 branches. A group with a binding core was identified.

実施例5: 効果的なインビボsiRNA送達およびG2-G4デンドリマーのデザインのための分解性デンドリマーの同定
細胞内障壁を克服できるデンドリマーを同定したら、次に、インビボでsiRNAを効率的に送達するための細胞外障壁を克服できるデンドリマーが同定された。これらの2つのプロセスを分離することにより、血液安定性、肝臓(腫瘍)局在、細胞取り込み、および活性なsiRNA放出を含む障壁を克服する化学官能性を同定することができた。デンドリマーを、肝細胞における第VII因子をサイレンスさせるその能力について評価した。というのは、わずかな血清サンプルからこの血液凝固因子を容易に定量化できるからである(Akinc et al., 2008; Semple et al., 2010)。ヒットした分解性デンドリマーのうち26種を選択して、化学的多様性を最大にさせた: 22種は樹状分析プロセスに基づいて最適化された化学構造を保有し、さらに4種(2A2-SC14、2A6-SC14、2A9-SC14、および6A1-SO9)は、その高い細胞内siRNA送達能力に基づいて選択された。デンドリマーを抗第VII因子siRNA (siFVII)とともに製剤化し、1 mg siFVII/kgの投与量でマウスへi.v.注射した。FVII活性を注射の3日後に定量化した。高いインビトロ効力にもかかわらず、2A2-SC14、2A6-SC14、2A9-SC14、6A1-SO9および大部分の3分枝デンドリマーは、最小のインビボFVIIノックダウンしか示さなかった(図3A)。結合コアおよび4、5もしくは6個のSC8もしくはSC12分枝を含んだデンドリマーは、より高いノックダウンを示した。これらの研究に基づいて、SC8分枝デンドリマーは一般的にSC12分枝化合物より有効であった。 Example 5: Identification of Degradable Dendrimers for Effective In vivo SiRNA Delivery and Design of G2-G4 Dendrimers Once dendrimers have been identified that can overcome intracellular barriers, the next step is to efficiently deliver siRNA in vivo. Dendrimers have been identified that can overcome the extracellular barrier. Separation of these two processes allowed the identification of chemical functionalities that overcome barriers including blood stability, liver (tumor) localization, cell uptake, and active siRNA release. Dendrimers were evaluated for their ability to silence Factor VII in hepatocytes. This is because this blood coagulation factor can be easily quantified from a small serum sample (Akinc et al., 2008; Semple et al., 2010). Twenty-six of the hit degradable dendrimers were selected to maximize chemical diversity: 22 possessed an optimized chemical structure based on the dendritic analysis process, and four more (2A2-). SC14, 2A6-SC14, 2A9-SC14, and 6A1-SO9) were selected based on their high intracellular siRNA delivery capacity. Dendrimers were formulated with anti-Factor VII siRNA (siFVII) and injected iv into mice at a dose of 1 mg siFVII / kg. FVII activity was quantified 3 days after injection. Despite high in vitro potency, 2A2-SC14, 2A6-SC14, 2A9-SC14, 6A1-SO9 and most 3-branched dendrimers showed minimal in vivo FVII knockdown (Fig. 3A). Dendrimers containing bound cores and 4, 5 or 6 SC8 or SC12 branches showed higher knockdown. Based on these studies, SC8 branched dendrimers were generally more effective than SC12 branched compounds.

インビトロおよびインビボのハイスループットスクリーニング結果を手にして、本発明者らは、今度は、そのSAR情報を用いて、本発明者らのアプローチを検証するための予測された活性を有するデンドリマーを合理的にデザインできるかどうかを問うた。一連の分解性デンドリマーは、2つの戦略を用いて: (I) 5もしくは6個のIBCを有するポリアミンを選択することによって; および(II) デンドリマー世代拡張を介して分枝を増加させることによって調製された(図10)。戦略Iを実施するために、2種の天然アミン、つまりスペルミジン(5個のIBC)およびスペルミン(6個のIBC)が選択された。戦略IIに関しては、世代拡張を介して複数の分枝を有する分解性デンドリマーを得るために、1A2 (1個のIBC)、2A2および2A11 (2個のIBC)、3A3および3A5 (3個のIBC)、ならびに4A1および4A3 (4個のIBC)が選択された(図10Cおよび11)。インビボSARをさらに調べるために、さらに24の分解性デンドリマーが評価された(図10C)。世代拡張の後、4もしくは6個のSC分枝を有する1A2 (1個のIBC)、2A2 (2個のIBC)ならびに3A3および3A5 (3個のIBC)のより高次世代のデンドリマーは、肝細胞への良好なインビボsiRNA送達を有していたが、8個の分枝を有するデンドリマーは活性が低かった。このプロセスにより、インビトロスクリーニングにおいて不活性であったアミンコアが転換され、次にインビボ活性を示したより高次世代のデンドリマーが合理的にデザインされる。 With in vitro and in vivo high-throughput screening results in hand, we now use the SAR information to rationalize dendrimers with predicted activity to validate our approach. I asked if I could design it. A series of degradable dendrimers are prepared using two strategies: (I) by selecting polyamines with 5 or 6 IBCs; and (II) increasing branching through dendrimer generation expansion. Was done (Fig. 10). Two natural amines, spermidine (5 IBCs) and spermine (6 IBCs), were selected to carry out Strategy I. For Strategy II, 1A2 (1 IBC), 2A2 and 2A11 (2 IBCs), 3A3 and 3A5 (3 IBCs) to obtain a degradable dendrimer with multiple branches via generational expansion. ), And 4A1 and 4A3 (4 IBCs) were selected (Figs. 10C and 11). Twenty-four more degradable dendrimers were evaluated to further investigate in vivo SAR (Fig. 10C). After generational expansion, higher next-generation dendrimers of 1A2 (1 IBC), 2A2 (2 IBC) and 3A3 and 3A5 (3 IBC) with 4 or 6 SC branches are liver. It had good in vivo siRNA delivery to cells, but dendrimers with 8 branches were less active. This process transforms the amine core, which was inactive in in vitro screening, and then rationally designs higher-generation dendrimers that exhibit in vivo activity.

実施例6: MYC駆動肝臓腫瘍を担持するマウスにおける分解性デンドリマーのインビボ毒性評価
肝臓がん処置に必要とされる低い毒性および高い効力の必要なバランスを有する分解性デンドリマーを同定するために、分解性デンドリマーを選択してそのインビボ毒性を評価した。並行して、本発明者らは、マウスおよび非ヒト霊長類において以前に強力であることが示された非加水分解性システムの最良の例として選択したC12-200リピドイドLNPを分析した(Love et al., 2010)。リピドイドは、クラスとして、臨床研究の最前線でベンチマーク材料である(Kanasty et al., 2013; Love et al., 2010; Sahay et al., 2013)。非免疫原性対照siRNAを用いて、個々のデンドリマー自体の毒性を最もよく評価した。デンドリマーNPは、毒性をよりよく調べるのに必要とされるよりも高い、25:1 (デンドリマー:siCTR)の重量比で製剤化された。C12-200 LNPは、以前に報告されたものと同一の製剤パラメータを用いて調製された(Love et al., 2010)。PBS緩衝液中の各NPのサイズおよびゼータ電位を特徴付けた。それらは全て同様のサイズ、直径64～80 nmを保有し、それらの表面は電荷が中性に近かった(図12Aおよび12B)。各製剤化されたNPを4 mgのsiCTR/kg用量(100 mgのデンドリマー/kgもしくは28 mgのC12-200/kg)で野生型マウスへi.v.注射した。インビボ毒性を評価するための多くの異なる方法の中で、体重減少は簡単で有益なパラメータとして利用することができる。正常マウスでは、C12-200対照LNPを含む、選択されたNPについて最小限の体重変化があった。しかしながら、候補者の中で、5A2-SC8および6A3-SC12を注射されたマウスは、より迅速な回復を経験し、初日後に正常に体重を増加させた。 Example 6: In vivo Toxicity Assessment of Degradable Dendrimers in Mice Carrying MYC-Driven Liver Tumors Degradation to identify degradable dendrimers with the required balance of low toxicity and high efficacy required for liver cancer treatment. Sex dendrimers were selected and their in vivo toxicity was evaluated. In parallel, we analyzed the C12-200 lipidoid LNP selected as the best example of a non-hydrolyzable system previously shown to be potent in mice and non-human primates (Love et. al., 2010). Lipidoid, as a class, is a benchmark material at the forefront of clinical research (Kanasty et al., 2013; Love et al., 2010; Sahay et al., 2013). Non-immunogenic control siRNAs were used to best assess the toxicity of individual dendrimers themselves. Dendrimer NP was formulated with a weight ratio of 25: 1 (dendrimer: siCTR), which is higher than required to better investigate toxicity. C12-200 LNP was prepared using the same pharmaceutical parameters as previously reported (Love et al., 2010). The size and zeta potential of each NP in PBS buffer was characterized. They all possessed similar sizes, 64-80 nm in diameter, and their surfaces were near neutral in charge (Figs. 12A and 12B). Each formulated NP was iv injected into wild-type mice at a dose of 4 mg siCTR / kg (100 mg dendrimer / kg or 28 mg C12-200 / kg). Among the many different methods for assessing in vivo toxicity, weight loss can be utilized as a simple and informative parameter. In normal mice, there was minimal change in body weight for selected NPs, including C12-200 control LNP. However, among the candidates, mice injected with 5A2-SC8 and 6A3-SC12 experienced a faster recovery and gained normal weight after the first day.

これらの結果に基づいて、5A2-SC8および6A3-SC12は、単回および複数回注射による侵襲性肝臓腫瘍を担持する慢性疾患のトランスジェニックマウスにおけるそれらのインビボ毒性のさらなる評価のために選択された。十分に確立されたTet-On MYC誘導性トランスジェニック肝臓がんモデルを選択した(図13A) (Nguyen et al., 2014)。早発性の時点でMYCが過剰発現すると腫瘍がより侵襲性であるため、MYCは出生直後(p0)に誘発され、急速に増殖する肝臓腫瘍が生じた。32日齢(p32)の時点で、侵襲性肝臓腫瘍を担持するこれらの病気のトランスジェニックマウスに、3 mgのsiCTR/kg投与量(75 mgのデンドリマー/kgもしくは21 mgのC12-200/kg)で5A2-SC8もしくは6A3-SC12 NPを注射した。5A2-SC8注射を受けたマウスは、最初の日に約5%の体重を失い、2日目にその開始体重にすぐに戻ったが、6A3-SC12注射を受けたマウスは3日目までに10%の体重を依然として失っており、回復できなかった(図12D)。複数回の注射の後、6A3-SC12担体の毒性のために処置を受けなかったマウスと比べて、これらのマウスは7日早く死亡した(図12E)。WTマウスにおける結果とは対照的に、侵襲性腫瘍を担持するマウスへのC12-200 LNPの注射は、5A2-SC8注射マウスよりも約3倍少ない脂質を受けたにもかかわらず、1日後に20%超の体重を失った(図12D)。これらのデータは、化学構造の小さな変化が毒性の大きな変化を生むことができることを示した。また、腫瘍を担持するマウスは、健常マウスよりも介入に対して敏感であることも示した。これらの結果に基づいて、5A2-SC8は低毒性（75 mg/kgまでの腫瘍担持マウスにおける耐性）および有効なインビボFVIIノックダウン(1 mg siFVII/kgで95%超)のバランスを保有する分解性デンドリマーとして現れた。これらのデンドリマーは用量制限毒性の臨床上の懸念を減らし、より広い治療濃度域を可能にするので、ベンチマーク化合物よりも毒性が低いことに加えて、5A2-SC8 NPはより有効である。 Based on these results, 5A2-SC8 and 6A3-SC12 were selected for further evaluation of their in vivo toxicity in transgenic mice with chronic disease carrying invasive liver tumors by single and multiple injections. .. A well-established Tet-On MYC-induced transgenic liver cancer model was selected (Fig. 13A) (Nguyen et al., 2014). Due to the more invasive tumors when MYC was overexpressed at an early stage, MYC was induced shortly after birth (p0), resulting in rapidly growing liver tumors. At 32 days of age (p32), transgenic mice with these diseases carrying invasive liver tumors were given a dose of 3 mg siCTR / kg (75 mg dendrimer / kg or 21 mg C12-200 / kg). ) Was injected with 5A2-SC8 or 6A3-SC12 NP. Mice receiving 5A2-SC8 injections lost about 5% of body weight on the first day and quickly returned to their starting weight on day 2, whereas mice receiving 6A3-SC12 injections by day 3 He still lost 10% of his weight and could not recover (Fig. 12D). After multiple injections, these mice died 7 days earlier than those that were not treated due to the toxicity of the 6A3-SC12 carrier (Fig. 12E). In contrast to the results in WT mice, injection of C12-200 LNP into mice carrying invasive tumors received about 3 times less lipid than 5A2-SC8 injected mice after 1 day. He lost more than 20% of his weight (Fig. 12D). These data show that small changes in chemical structure can produce large changes in toxicity. We also showed that tumor-carrying mice were more sensitive to intervention than healthy mice. Based on these results, 5A2-SC8 degrades with a balance of low toxicity (resistance in tumor-carrying mice up to 75 mg / kg) and effective in vivo FVII knockdown (> 95% at 1 mg siFVII / kg). Appeared as a sex dendrimer. In addition to being less toxic than benchmark compounds, 5A2-SC8 NP is more effective because these dendrimers reduce clinical concerns about dose limiting toxicity and allow for a wider therapeutic concentration range.

実施例7: Let-7g miRNA模倣体の全身投与による肝臓腫瘍成長の強力な抑制
さらなる毒性を引き起こすことなく治療的miRNA模倣体を送達するための分解性デンドリマーNPの能力を評価するために、p0時に誘導された侵襲性MYCトランスジェニック肝臓がんモデルを再び用いた(Nguyen et al., 2014)。これらのマウスは、HCCの分子的特徴の多くを共有する腫瘍型の小児肝芽腫(HB)に似た急速に成長するがんを発症した。腫瘤効果からの腹部膨満は20日後に肉眼で確認でき、腫瘍は急速に成長した。介入がないと、マウスは生後60日以内に死亡した。このモデルの速さと致死性を考えると、成功した治療の機会は限られている。 Example 7: Strong inhibition of liver tumor growth by systemic administration of Let-7g miRNA mimetics To assess the ability of degradable dendrimer NP to deliver therapeutic miRNA mimetics without causing further toxicity, p0 The sometimes induced invasive MYC transgenic liver cancer model was used again (Nguyen et al., 2014). These mice developed a rapidly growing cancer resembling tumor-type pediatric hepatoblastoma (HB) that shares many of the molecular characteristics of HCC. Abdominal distension from the mass effect was visible to the naked eye 20 days later, and the tumor grew rapidly. Without intervention, mice died within 60 days of age. Given the speed and lethality of this model, successful treatment opportunities are limited.

5A2-SC8は、インビボでの毒性が低く、肝細胞標的FVIIをサイレンシングするための有効性とバランスがとれているので、まず、5A2-SC8 NPが腫瘍細胞にsiRNAを送達できるかどうかを調べた。41日齢(p41)の時点で、これらのトランスジェニックマウスの肝臓は腫瘍に満ちている(図14A)。p40で、1 mg siRNA/kgの投与量でCy5.5標識されたsiRNAを有する5A2-SC8 NPをマウスに静脈注射した。注射から24時間後、蛍光画像化により、5A2-SC8は、脾臓および腎臓における蓄積はほんの少しだけで、がん性肝臓におけるsiRNAの蓄積を媒介したことが示された(図14A～14B)。5A2-SC8 NPは、がん性肝臓が正常肝臓よりたとえ大きくても、正常およびトランスジェニック肝臓にsiRNAを送達した(図15A)。 Since 5A2-SC8 is less toxic in vivo and balanced with its efficacy for silencing the hepatocyte target FVII, we first investigate whether 5A2-SC8 NP can deliver siRNA to tumor cells. rice field. At 41 days of age (p41), the livers of these transgenic mice are full of tumors (Fig. 14A). At p40, mice were intravenously injected with 5A2-SC8 NP with Cy5.5-labeled siRNA at a dose of 1 mg siRNA / kg. Twenty-four hours after injection, fluorescence imaging showed that 5A2-SC8 mediated the accumulation of siRNA in the cancerous liver with very little accumulation in the spleen and kidney (FIGS. 14A-14B). 5A2-SC8 NP delivered siRNA to normal and transgenic livers, even if the cancerous liver was larger than normal liver (Fig. 15A).

5A2-SC8 NPがインビボでsiRNAを腫瘍細胞に送達できるかどうかをさらに確認するために、肝臓の腫瘍組織を採取し、静脈内注射の24時間後に画像化した。H＆E染色によって、腫瘍組織は細胞核で密に満ちており、がん性表現型を示すことが示された(図15B)。共焦点画像化によって、5A2-SC8 NPが標識siRNAを腫瘍細胞に効果的に送達できることが確認された(図14C)。 To further confirm whether 5A2-SC8 NP can deliver siRNA to tumor cells in vivo, liver tumor tissue was harvested and imaged 24 hours after intravenous injection. H & E staining showed that the tumor tissue was densely filled with cell nuclei and exhibited a cancerous phenotype (Fig. 15B). Confocal imaging confirmed that 5A2-SC8 NP was able to effectively deliver the labeled siRNA to tumor cells (Fig. 14C).

これらの慢性的に病気のトランスジェニックマウスにおける5A2-SC8媒介性の低分子RNA送達の治療的有用性を次に評価した。最も重要なmiRNAの1つは、多くの腫瘍型においてダウンレギュレーションされている腫瘍抑制因子ファミリーであるLet-7である(Boyerinas et al., 2010; Roush and Slack, 2008)。内因性のLet-7gは肝臓HBにおいてダウンレギュレーションされることが知られている(Nguyen et al., 2014)ので、この侵襲性の、遺伝子操作されたマウスモデルにおけるLet-7g模倣体の送達が肝臓がんの発症を阻害しうるかどうかを決定するために試験を実施した。 The therapeutic utility of 5A2-SC8-mediated small RNA delivery in these chronically diseased transgenic mice was then evaluated. One of the most important miRNAs is Let-7, a family of tumor suppressors that is downregulated in many tumor types (Boyerinas et al., 2010; Roush and Slack, 2008). Since endogenous Let-7g is known to be downregulated in liver HB (Nguyen et al., 2014), delivery of the Let-7g mimetic in this invasive, genetically engineered mouse model A study was conducted to determine if it could inhibit the development of liver cancer.

5A2-SC8 NPはこのモデルにおいてsiRNA送達を可能にできることが確認された。siFVIIの単回用量のi.v.送達により、血液アッセイ法(図16A)を用いておよび採取された肝臓組織におけるqPCR(図16B)によって、FVIIタンパク質の強力なサイレンシングが示された。このサイレンシングは、腫瘍発生が開始した後のp26で達成された。次に、1 mg/kgのLet-7gを5A2-SC8 NPにおいて腫瘍担持マウスへi.v.送達した(p26)。Let-7gの発現は、注射から48時間後に肝臓組織において7倍増加した(図16C)。 It was confirmed that 5A2-SC8 NP can enable siRNA delivery in this model. Single-dose i.v. delivery of siFVII showed strong silencing of the FVII protein using the blood assay (FIG. 16A) and by qPCR (FIG. 16B) in the collected liver tissue. This silencing was achieved on p26 after the onset of tumor development. Next, 1 mg / kg of Let-7 g was delivered i.v. to tumor-supported mice at 5A2-SC8 NP (p26). Expression of Let-7g increased 7-fold in liver tissue 48 hours after injection (Fig. 16C).

次いで、Let-7g模倣体もしくは対照模倣体を1 mg/kgで含有する5A2-SC8 NPの週1回投与によるp26からの治療レジメンが開始された。p50の時点で、Let-7g模倣体を受けたマウスは、著しく小さい腹部を有し、腫瘍負荷を低減させた(図16D～16F)。Let-7gは、腹囲の低減、定量性の腫瘍成長を引き起こした(図16E)。腫瘍成長に及ぼす効果は、エクスビボ肝臓画像化によって確認された(図16F)。最も重要なことには、26～61日の週1回Let-7gの送達は、体重増加(図16G)および有意に延長された生存(図16H)に影響を与えなかった。処置を受けていない全ての対照マウスおよびCTR模倣体を有する5A2-SC8 NPを受けているマウスは、60日齢前後に死亡した。C12-200 LNP (Let-7gもしくは対照模倣体)は早期死を誘導し、実験の停止を要した。5A2-SC8 NPの内部でのLet-7gの送達は、劇的な生存利益を提供し、1匹のマウスが100日まで生存した。これらの結果は、5A2-SC8が、肝臓腫瘍成長の効果的な阻害によって、慢性的に病気のトランスジェニックマウスに有意な治療的有用性を提供するように、高い送達効力と低毒性とのバランスをとることができることを示した。 A therapeutic regimen was then initiated from p26 with a weekly dose of 5A2-SC8NP containing 1 mg / kg of Let-7g mimetic or control mimetic. At p50, mice that received the Let-7g mimetic had a significantly smaller abdomen and reduced tumor loading (Figs. 16D-16F). Let-7g caused a reduction in abdominal circumference and quantitative tumor growth (Fig. 16E). The effect on tumor growth was confirmed by Exvivo liver imaging (Fig. 16F). Most importantly, weekly delivery of Let-7g 26-61 days did not affect weight gain (Fig. 16G) and significantly prolonged survival (Fig. 16H). All untreated control mice and mice receiving 5A2-SC8 NP with CTR mimetics died around 60 days of age. C12-200 LNP (Let-7g or control mimetic) induced premature death and required discontinuation of the experiment. Delivery of Let-7g within 5A2-SC8 NP provided a dramatic survival benefit, with one mouse surviving up to 100 days. These results show a balance between high delivery efficacy and low toxicity such that 5A2-SC8 provides significant therapeutic utility to chronically diseased transgenic mice by effectively inhibiting liver tumor growth. It was shown that it can be taken.

実施例8: siRNA送達のための異なる脂質組成物の評価
デンドリマーナノ粒子内のどの脂質組成がsiRNA送達の改善をもたらすかを評価するために、異なるリン脂質およびPEG脂質の同一性および濃度を変化させた。3つの異なる細胞株(HeLa-Luc、A549-Luc、およびMDA-MB231-Luc)を用いた。細胞は、1ウェルあたり10K個の細胞で存在し、24時間インキュベーションした。トランスフェクションから24時間後に読み取り値を決定した。ナノ粒子においては、DSPCおよびDOPEをリン脂質として用い、PEG-DSPE、PEG-DMG、およびPEG-DHDをPEG脂質として用いた。組成物は、50:38:10:2の脂質もしくはデンドリマー:コレステロール:リン脂質:PEG脂質モル比を含む。siRNAに対する脂質/デンドリマーのモル比は、100 ngの用量を用いて100:1であった。RiboGreen、Cell-titer Fluor、およびOneGloアッセイ法を用いて、これらの組成物の有効性を決定した。結果は、HeLa-Luc細胞(図17A)、A549-Luc (図17B)、およびMDA-MB231-Luc (図17C)における相対ルシフェラーゼ活性を示す。研究において用いられた6つの製剤は、デンドリマー(脂質) + コレステロール + DSPC + PEG-DSPE (製剤1)、デンドリマー(脂質) + コレステロール + DOPE + PEG-DSPE (製剤2)、デンドリマー(脂質) + コレステロール + DSPC + PEG-DMG (製剤3)、デンドリマー(脂質) + コレステロール + DOPE + PEG-DMG (製剤4)、デンドリマー(脂質) + コレステロール + DSPC + PEG-DSPE (製剤5)、およびデンドリマー(脂質) + コレステロール + DOPE + PEG-DHD (製剤6)を含む。 Example 8: Evaluation of Different Lipid Compositions for SiRNA Delivery To assess which lipid composition within dendrimer nanoparticles results in improved siRNA delivery, varying the identity and concentration of different phospholipids and PEG lipids. I let you. Three different cell lines (HeLa-Luc, A549-Luc, and MDA-MB231-Luc) were used. The cells were present in 10K cells per well and were incubated for 24 hours. Readings were determined 24 hours after transfection. For nanoparticles, DSPC and DOPE were used as phospholipids and PEG-DSPE, PEG-DMG, and PEG-DHD were used as PEG lipids. The composition comprises a 50:38: 10: 2 lipid or dendrimer: cholesterol: phospholipid: PEG lipid molar ratio. The lipid / dendrimer molar ratio to siRNA was 100: 1 using a dose of 100 ng. RiboGreen, Cell-titer Fluor, and OneGlo assays were used to determine the efficacy of these compositions. The results show relative luciferase activity in HeLa-Luc cells (Fig. 17A), A549-Luc (Fig. 17B), and MDA-MB231-Luc (Fig. 17C). The six formulations used in the study were dendrimer (lipid) + cholesterol + DSPC + PEG-DSPE (formulation 1), dendrimer (lipid) + cholesterol + DOPE + PEG-DSPE (formulation 2), and dendrimer (lipid) + cholesterol. + DSPC + PEG-DMG (formulation 3), dendrimer (lipid) + cholesterol + DOPE + PEG-DMG (formulation 4), dendrimer (lipid) + cholesterol + DSPC + PEG-DSPE (formulation 5), and dendrimer (lipid) + Contains lipids + DOPE + PEG-DHD (formulation 6).

さらなる実験を行って、どのリン脂質がsiRNA分子の送達の増加を示したかを決定した。HeLa-Luc細胞株を、1ウェルあたり10K個の細胞で用い、24時間インキュベーションし、トランスフェクションから24時間後に読み取りをした。組成物は、PEG脂質としてのPEG-DHDとともにリン脂質としてDOPEもしくはDOPCのいずれかを含んだ。200:1のデンドリマー(もしくは脂質)のsiRNAに対するモル比で、脂質(もしくはデンドリマー):コレステロール:リン脂質:PEG脂質の比はモル比で50:38:10:2であった。これらの組成物を、Cell-titer FluorおよびOneGloアッセイ法を用いて50 ng用量で試験した。これらの結果を図18Aおよび18Bに示す。 Further experiments were performed to determine which phospholipids showed increased delivery of siRNA molecules. HeLa-Luc cell lines were used on 10K cells per well, incubated for 24 hours and read 24 hours after transfection. The composition contained either DOPE or DOPC as a phospholipid along with PEG-DHD as a PEG lipid. The molar ratio of 200: 1 dendrimer (or lipid) to siRNA was 50: 38: 10: 2 in terms of lipid (or dendrimer): cholesterol: phospholipid: PEG lipid ratio. These compositions were tested at 50 ng doses using the Cell-titer Fluor and OneGlo assays. These results are shown in Figures 18A and 18B.

実施例9: sgRNAおよび他のCRISPR核酸の送達のためのデンドリマーナノ粒子の評価
CRISPR/Cas遺伝子編集のための核酸を送達する組成物を評価するために、sgRNAおよびmRNAの送達を試験した。sgRNA送達のためのZ120およびデンドリマーNPの迅速なスクリーニングを可能にしうる細胞株を作製した。例えば、HeLa (子宮頸がん)およびA549 (肺がん)細胞を樹立して、ルシフェラーゼおよびCas9を同時発現させた。選択および品質管理を検証した。所望の標的遺伝子の第1エクソンを標的とする以前に報告された方法にしたがって、ガイドRNAをデザインした。切断活性および配列特異性を示す最高スコアを保有する標的は、確立されたプロトコルを用いてsgRNA調製のために持ち越された。DNAオリゴヌクレオチドを商業的に合成し、アニールさせ、BsbI消化によってクローニングし、Cas9を含むプラスミド骨格にライゲーションした。インビトロでの転写により、sgRNAの単離が可能となり、これを送達用デンドリマーNPにパッケージングすることができた。ルシフェラーゼのために、一連の5つの異なるガイドがデザインされた。これらのガイドは、sgLuc-Cas9 pDNAトランスフェクションにより、市販の試薬を用いて最良のsgRNA配列を選択することによって検証された。次に、本発明者らは、sgLucをデンドリマーNPにパッケージングし、sgRNAの送達のためのHeLa-Luc-Cas9細胞における送達を評価した。決定した数の曝露時間後、ルシフェラーゼおよび生存性を、One Glo + Tox (Promega)を用いて未処理細胞と比べて測定した。典型的な実験では、1ウェル当たり10K個の細胞をプレーティングし、続いて24時間のインキュベーション、sgLucを含むデンドリマーナノ粒子の添加、およびトランスフェクションから24～48時間後の読み取りを行った。これらの組成物は、デンドリマー、DSPCもしくはDOPE、コレステロール、およびPEG脂質の組み合わせを含有していた。さらに、組成物はさまざまな濃度のMgCl2を含有していた。脂質(もしくはデンドリマー):コレステロール: PEG脂質のモル比は、50:38.5:0.5で、脂質の核酸(sgRNA)に対するモル比200:1および50 ngの用量であった。再び、Cell-titer FluorおよびOneGloアッセイ法を用いて結果を得た。リン脂質なしでの結果を図19に示す。リン脂質ありで同様の研究を行った。これらの組成物では、リン脂質DSPCを製剤に用いた。リン脂質を含まない組成物についての上記と同じ比を用いて、リン脂質含有組成物は、同じ投薬量を用いて50:38.5:10:0.5 (脂質/デンドリマー:コレステロール:リン脂質:PEG脂質)のモル比を有した。これらの組成物を、RiboGreen、Cell-titer Fluor、およびOneGloを用いて、2つの期間、つまり24時間および72時間の時点で試験した。24時間の時点で得られたデータを図20Aに示し、72時間のものを図20Bに示す。 Example 9: Evaluation of dendrimer nanoparticles for delivery of sgRNA and other CRISPR nucleic acids
Delivery of sgRNA and mRNA was tested to evaluate compositions delivering nucleic acids for CRISPR / Cas gene editing. We have generated cell lines that may allow rapid screening of Z120 and dendrimer NPs for sgRNA delivery. For example, HeLa (cervical cancer) and A549 (lung cancer) cells were established to co-express luciferase and Cas9. Validated selection and quality control. Guide RNAs were designed according to previously reported methods of targeting the first exon of the desired target gene. Targets with the highest scores showing cleavage activity and sequence specificity were carried over for sgRNA preparation using established protocols. DNA oligonucleotides were commercially synthesized, annealed, cloned by BsbI digestion and ligated into a Cas9-containing plasmid backbone. Transcription in vitro allowed the isolation of sgRNA, which could be packaged in a dendrimer NP for delivery. A series of five different guides were designed for luciferase. These guides were validated by sgLuc-Cas9 pDNA transfection by selecting the best sgRNA sequence using commercially available reagents. Next, we packaged sgLuc into dendrimer NP and evaluated delivery in HeLa-Luc-Cas9 cells for delivery of sgRNA. After a determined number of exposure times, luciferase and viability were measured using One Glo + Tox (Promega) compared to untreated cells. In a typical experiment, 10K cells per well were plated, followed by 24-hour incubation, addition of dendrimer nanoparticles containing sgLuc, and reading 24-48 hours after transfection. These compositions contained a combination of dendrimer, DSPC or DOPE, cholesterol, and PEG lipids. In addition, the composition contained various concentrations of MgCl 2 . The lipid (or dendrimer): cholesterol: PEG lipid molar ratio was 50: 38.5: 0.5, with doses of 200: 1 and 50 ng molar ratio to the lipid nucleic acid (sgRNA). Results were obtained again using the Cell-titer Fluor and OneGlo assays. The results without phospholipids are shown in Figure 19. A similar study was performed with phospholipids. In these compositions, phospholipid DSPC was used in the formulation. Using the same ratios as above for phospholipid-free compositions, phospholipid-containing compositions were 50: 38.5: 10: 0.5 (lipid / dendrimer: cholesterol: phospholipid: PEG lipid) with the same dosage. Had a molar ratio of. These compositions were tested with RiboGreen, Cell-titer Fluor, and OneGlo at two time periods, 24 hours and 72 hours. The data obtained at 24 hours is shown in FIG. 20A, and the data obtained at 72 hours is shown in FIG. 20B.

実施例10: mRNA送達のためのデンドリマーナノ粒子の評価
siRNAを用いて行われた研究と同様に、mRNA分子の送達を、本明細書において記述されるデンドリマーおよびZ120で試験した。1ウェルあたり4K個の細胞の濃度、24時間のインキュベーション、トランスフェクション後24時間および48時間の読み出しで、IGROV1細胞株を用いた。これらの組成物は、DSPC、DOPE、もしくはリン脂質なしのいずれかおよびPEG-DHDをPEG脂質として含有した。脂質(もしくはデンドリマー):コレステロール:リン脂質:PEG脂質のモル比は50:38.5:0(10):2であり、デンドリマーの核酸(mRNA)に対する重量比5、10、20、30、もしくは40 対 1および2つの異なる用量: 50 ng用量および100 ng用量であった。Cell-titer FluorおよびOneGloアッセイ法を用いて結果を得た。これらの結果を図21A (24時間)および図21B (48時間)に示す。さらに、20:1比のN/Pならびにリン脂質としてのDSPCおよびPEG脂質としてのPEG-DHDを有するナノ粒子組成物を用いたmCherry mRNAの送達を図22において視覚化した。 Example 10: Evaluation of dendrimer nanoparticles for mRNA delivery
Similar to studies performed with siRNA, delivery of mRNA molecules was tested with the dendrimers and Z120 described herein. IGROV1 cell lines were used with concentrations of 4K cells per well, 24-hour incubation, and 24-hour and 48-hour readouts after transfection. These compositions contained either without DSPC, DOPE, or phospholipids and PEG-DHD as PEG lipids. The molar ratio of lipid (or dendrimer): cholesterol: phospholipid: PEG lipid is 50: 38.5: 0 (10): 2, and the weight ratio of dendrimer to nucleic acid (mRNA) is 5, 10, 20, 30, or 40 to 40. One and two different doses: 50 ng dose and 100 ng dose. Results were obtained using the Cell-titer Fluor and OneGlo assays. These results are shown in Figure 21A (24 hours) and Figure 21B (48 hours). In addition, delivery of mCherry mRNA using a nanoparticle composition with a 20: 1 ratio of N / P and DSPC as a phospholipid and PEG-DHD as a PEG lipid was visualized in FIG.

本明細書において開示および主張される組成物および方法の全ては、本開示に照らして過度の実験なしに作製および実行されることができる。本発明の組成物および方法はある種の態様に関して記述されているが、当業者には、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書において記述される、組成物および方法にならびに方法の段階においてもしくは段階の順序において変形が適用されうることが明らかであろう。より具体的には、化学的にも生理学的にも関連するある種の薬剤が、本明細書において記述される薬剤に代用されても、同じもしくは同様の結果が達成されうることが明らかであろう。当業者には明らかなそのような同様の置換および修飾は全て、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念の範囲内であるとみなされる。 All of the compositions and methods disclosed and claimed herein can be made and performed without undue experimentation in the light of the present disclosure. Although the compositions and methods of the invention are described with respect to certain aspects, those skilled in the art will appreciate the compositions and methods described herein without departing from the concept, purpose and scope of the invention. It will be clear that variations can be applied at the stage of the method or in the order of the stages. More specifically, it is clear that the same or similar results can be achieved when certain chemically and physiologically related agents are substituted for the agents described herein. Let's go. All such similar substitutions and modifications apparent to those skilled in the art are considered to be within the spirit, scope and concept of the invention as defined by the appended claims.

参考文献
以下の参考文献は、本明細書において記載されたものに補足的な例示的な手順もしくは他の詳細を提供する限り、参照により本明細書に具体的に組み入れられる。

Figure 2022031692000129
Figure 2022031692000130
Figure 2022031692000131
Figure 2022031692000132
Figure 2022031692000133
Figure 2022031692000134
Figure 2022031692000135
Figure 2022031692000136
Figure 2022031692000137
Figure 2022031692000138
References The following references are specifically incorporated herein by reference to the extent that they provide supplementary exemplary procedures or other details to those described herein.
Figure 2022031692000129
Figure 2022031692000130
Figure 2022031692000131
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Figure 2022031692000137
Figure 2022031692000138

Claims (96)

下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000139
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000140
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素、アルキル(C≦18)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり; あるいは
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000141
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000142
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000143
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000144
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000145
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。 Dendrimer of the following formula:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000139
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the core has the following equation:
Figure 2022031692000140
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen, alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3, or the core has the following equation:
Figure 2022031692000141
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or the cores are alkylamines (C ≤ 18) , dialkylamines (C ≤ 36) , heterocycloalkanes (C ≤ 12). , Or a substitution of any of these groups;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000142
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000143
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000144
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000145
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt. コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000146
式中、
X1はアミノもしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
aは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000147
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000148
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000149
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000150
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1記載のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。 The core has the following equation:
Figure 2022031692000146
During the ceremony
X 1 is amino or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substituted form thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000147
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000148
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000149
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000150
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000151
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3であり;
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000152
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000153
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000154
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000155
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1記載のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。 Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000151
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3;
Repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000152
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000153
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000154
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000155
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000156
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000157
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000158
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000159
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000160
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1記載のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。 Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000156
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are 1, 2, 3, 4, 5, or 6 independently, respectively; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000157
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000158
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000159
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000160
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. デンドリマーは下記式を有する:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000161
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式:
Figure 2022031692000162
の基であり;
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000163
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基、末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000164
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)またはアルカンジイル(C≦18)上の水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10は水素、カルボキシ、ヒドロキシ、もしくはアリール(C≦12)、アルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)N(R11)-アルカンジイル(C≦6)-ヘテロシクロアルキル(C≦12)、-C(O)-アルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-ジアルキルアミノ(C≦12)、-C(O)-N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)であり、式中、
R11は水素、アルキル(C≦6)もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1記載のデンドリマーまたは薬学的に許容されるその塩。 Dendrimers have the following equation:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
In the formula, by removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units, the core is linked to the repeating unit and the core is alkylamine (C ≤ 18) , dialkylamine ( C ≤ 36) , heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; and repeating units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000161
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups; or equation:
Figure 2022031692000162
Is the basis of;
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000163
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group, the terminal group has the following formula:
Figure 2022031692000164
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms on alkanediyl (C ≤ 18) are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH 3 or -OC (O) CH 3 substituted alkanediyl (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen, carboxy, hydroxy, or aryl (C ≤ 12) , alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , -C (O) N (R 11 )-Alkanediyl (C ≤ 6) -Heterocycloalkyl ( C ≤ 12) , -C (O) -Alkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -Dialkylamino (C ≤ 12) , -C (O) -N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) , in the equation,
R 11 is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 末端基は下記式:
Figure 2022031692000165
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である、
請求項1～5のいずれか一項記載のデンドリマー。 The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000165
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ; and
R 10 is hydrogen,
The dendrimer according to any one of claims 1 to 5. 末端基は下記式:
Figure 2022031692000166
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; および
R10は水素である、
請求項1～6のいずれか一項記載のデンドリマー。 The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000166
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ; and
R 10 is hydrogen,
The dendrimer according to any one of claims 1 to 6. Y4はアルカンジイル(C4～18)である、請求項1～7のいずれか一項記載のデンドリマー。 Y 4 is an alkanedyl (C4-18) , the dendrimer according to any one of claims 1-7. 末端基は下記式:
Figure 2022031692000167
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、N-ヘテロシクロアルキル(C≦12)である、
請求項1～5のいずれか一項記載のデンドリマー。 The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000167
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , N-heterocycloalkyl (C ≤ 12) ,
The dendrimer according to any one of claims 1 to 5. 末端基は下記式:
Figure 2022031692000168
によってさらに定義され、
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)または水素原子の1つもしくは複数が、-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3もしくは-OC(O)CH3で置換されているアルカンジイル(C≦18)であり;
R10はヒドロキシである、
請求項1～5のいずれか一項記載のデンドリマー。 The terminal group is as follows:
Figure 2022031692000168
Further defined by
During the ceremony
Y 4 is alkanediyl (C ≤ 18) or one or more hydrogen atoms are -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -SH, -OCH 3 , -OCH 2 CH 3 , -SCH Alkanediyl (C ≤ 18) substituted with 3 or -OC (O) CH 3 ;
R 10 is hydroxy,
The dendrimer according to any one of claims 1 to 5. コアは下記式:
Figure 2022031692000169
によってさらに定義され、
式中、
X1はアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、ヘテロシクロアルキル(C≦12)、ヘテロアリール(C≦12)、もしくはその置換型であり;
R1はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり; および
aは1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1～2および6～10のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is the following formula:
Figure 2022031692000169
Further defined by
During the ceremony
X 1 is alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , heterocycloalkyl (C ≤ 12) , heteroaryl (C ≤ 12) , or a substitution thereof;
R 1 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups; and
a is 1, 2, 3, 4, 5, or 6,
The dendrimer according to any one of claims 1 to 2 and 6 to 10. X1はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である、請求項11記載のデンドリマー。 The dendrimer according to claim 11, wherein X 1 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . X1はヘテロシクロアルキル(C≦12)もしくは置換ヘテロシクロアルキル(C≦12)である、請求項11記載のデンドリマー。 The dendrimer according to claim 11, wherein X 1 is a heterocycloalkyl (C ≦ 12) or a substituted heterocycloalkyl (C ≦ 12) . X1は4-ピペリジニル、N-ピペリジニル、N-モルホリニル、N-ピロリジニル、2-ピロリジニル、N-ピペラジニルもしくはN-4-メチルピペラジニル(N-4-methylpiperadizinyl)である、請求項13記載のデンドリマー。 13 according to claim 13, wherein X 1 is 4-piperidinyl, N-piperidinyl, N-morpholinyl, N-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl, N-piperazinyl or N-4-methylpiperadizinyl. Dendrimer. R1はアミノである、請求項11～14のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 11 to 14, wherein R 1 is amino. aは1、2、3、もしくは4である、請求項11～15のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 11 to 15, wherein a is 1, 2, 3, or 4. コアは下記式の化合物:
Figure 2022031692000170
としてさらに定義される、請求項11～16のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is a compound of the following formula:
Figure 2022031692000170
The dendrimer according to any one of claims 11 to 16, further defined as. コアは
Figure 2022031692000171
としてさらに定義される、請求項17記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000171
The dendrimer of claim 17, further defined as. コアは下記式によってさらに定義される:
Figure 2022031692000172
式中、
X2はN(R5)yであり;
R5は水素もしくはアルキル(C≦18)、または置換アルキル(C≦18)であり; ならびに
yおよびzの和が3であるという条件で、yは0、1、もしくは2であり;
R2はアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
bは1、2、3、4、5、もしくは6であり; ならびに
zおよびyの和が3であるという条件で、zは1、2、3である、
請求項1、3、および6～10のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is further defined by the following equation:
Figure 2022031692000172
During the ceremony
X 2 is N (R 5 ) y ;
R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 18) , or substituted alkyl (C ≤ 18) ;
y is 0, 1, or 2 provided that the sum of y and z is 3;
R 2 is amino, hydroxy, or mercapto, or a substituted form of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
b is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; and
Z is 1, 2, 3 provided that the sum of z and y is 3.
The dendrimer according to any one of claims 1, 3, and 6-10. X2はNである、請求項19記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 19, wherein X 2 is N. X2はNR5であり、式中、R5は水素もしくはアルキル(C≦8)である、請求項19記載のデンドリマー。 25. The dendrimer of claim 19, wherein X 2 is NR 5 and in the equation R 5 is hydrogen or alkyl (C ≤ 8) . R5は水素である、請求項21記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 21, wherein R 5 is hydrogen. R5はメチルである、請求項21記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 21, wherein R 5 is methyl. zは3である、請求項19または20記載のデンドリマー。 The dendrimer according to claim 19 or 20, wherein z is 3. zは2である、請求項19および21～23のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 19 and 21-23, wherein z is 2. R2はアミノである、請求項19～25のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 19 to 25, wherein R 2 is amino. R2はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、請求項19～25のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 19 to 25, wherein R 2 is an alkylamino (C ≦ 12) or a substituted alkylamino (C ≦ 12) . R2はメチルアミノである、請求項27記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 27, wherein R 2 is methylamino. R2はジアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換ジアルキルアミノ(C≦12)である、請求項19～25のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 19 to 25, wherein R 2 is a dialkylamino (C ≤ 12) or a substituted dialkylamino (C ≤ 12) . R2はジメチルアミノである、請求項29記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 29, wherein R 2 is dimethylamino. bは1、2、3、もしくは4である、請求項19～30のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 19 to 30, wherein b is 1, 2, 3, or 4. コアは
Figure 2022031692000173
としてさらに定義される、請求項19～31のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000173
The dendrimer according to any one of claims 19 to 31, further defined as. コアは
Figure 2022031692000174
としてさらに定義される、請求項32記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000174
The dendrimer of claim 32, further defined as. コアは
Figure 2022031692000175
としてさらに定義され、
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型; または式: -(CH2CH2N)e(Rc)Rdの基であり;
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6である、
請求項1、4、および6～10のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000175
Further defined as
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkoxyyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups; or formula:-( CH 2 CH 2 N) e (R c ) is the basis of R d ;
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6, respectively,
The dendrimer according to any one of claims 1, 4, and 6-10. X3はアルキルアミノジイル(C≦8)もしくは置換アルキルアミノジイル(C≦8)である、請求項34記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 34, wherein X 3 is an alkylaminodiyl (C ≤ 8) or a substituted alkylaminodiyl (C ≤ 8) . X3は-NHCH2CH2NH-もしくは-NHCH2CH2NHCH2CH2NH-である、請求項35記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 35, wherein X 3 is -NHCH 2 CH 2 NH- or -NHCH 2 CH 2 NHCH 2 CH 2 NH-. X3はヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)もしくは置換ヘテロシクロアルカンジイル(C≦8)である、請求項34記載のデンドリマー。 The dendrimer according to claim 34, wherein X 3 is a heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) or a substituted heterocycloalkanediyl (C ≤ 8) . X3はN,N'-ピペラジンジイルである、請求項37記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 37, wherein X 3 is N, N'-piperazinezyl. R3はアミノである、請求項34～38のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 34 to 38, wherein R 3 is amino. R3はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、請求項34～38のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 34 to 38, wherein R 3 is an alkylamino (C ≤ 12) or a substituted alkylamino (C ≤ 12) . R3はメチルアミノである、請求項40記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 40, wherein R 3 is methylamino. R4はアミノである、請求項34～41のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 34 to 41, wherein R 4 is amino. R4はアルキルアミノ(C≦12)もしくは置換アルキルアミノ(C≦12)である、請求項34～41のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 34 to 41, wherein R 4 is an alkylamino (C ≦ 12) or a substituted alkylamino (C ≦ 12) . R4はメチルアミノである、請求項43記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 43, wherein R 4 is methyl amino. R4は-(CH2CH2N)e(Rc)Rdであり:
式中、
eは1、2、もしくは3であり;
RcおよびRdは各々独立して水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)である、
請求項34～41のいずれか一項記載のデンドリマー。 R 4 is-(CH 2 CH 2 N) e (R c ) R d :
During the ceremony
e is 1, 2, or 3;
R c and R d are independently hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) , respectively.
The dendrimer according to any one of claims 34 to 41. コアは
Figure 2022031692000176
としてさらに定義される、請求項34～45のいずれか一項記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000176
The dendrimer according to any one of claims 34 to 45, further defined as. コアは
Figure 2022031692000177
としてさらに定義される、請求項46記載のデンドリマー。 The core is
Figure 2022031692000177
The dendrimer of claim 46, further defined as. コアはアルキルアミン(C≦18)、ジアルキルアミン(C≦36)、ヘテロシクロアルカン(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である、請求項1および5～10のいずれか一項記載のデンドリマー。 One of claims 1 and 5-10, wherein the core is an alkylamine (C ≤ 18) , a dialkylamine (C ≤ 36) , a heterocycloalkane (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups. The dendrimer described in item 1. コアはオクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、テトラデシルアミン、ヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、N-メチル、N-ドデシルアミン、ジオクチルアミン、ジデシルアミン、もしくは4-N-メチルピペラジニルである、請求項48記載のデンドリマー。 The core is octylamine, decylamine, dodecylamine, tetradecylamine, hexadecylamine, octadecylamine, N-methyl, N-dodecylamine, dioctylamine, didecylamine, or 4-N-methylpiperazinyl, claim 48. The listed dendrimer. Y1はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である、請求項1～49のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 49, wherein Y 1 is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) . Y1は-CH2CH2-である、請求項50記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 50, wherein Y 1 is -CH 2 CH 2- . Y3はアルカンジイル(C≦8)もしくは置換アルカンジイル(C≦8)である、請求項1～53のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 53, wherein Y 3 is an alkanediyl (C ≤ 8) or a substituted alkanediyl (C ≤ 8) . Y3は-CH2CH2-である、請求項52記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 52, wherein Y 3 is -CH 2 CH 2- . Y3は以下である:
Figure 2022031692000178
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; または
Y3は以下である:
Figure 2022031692000179
式中、
X3およびX4はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Y5は共有結合、アルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型である、
請求項1～51のいずれか一項記載のデンドリマー。 Y 3 is:
Figure 2022031692000178
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substitution of any of these groups; or
Y 3 is:
Figure 2022031692000179
During the ceremony
X 3 and X 4 are alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arenediyl (C ≤ 12) , or substitutions of any of these groups;
Y 5 is a covalent bond, an alkanediyl ( C ≤ 12), an alkendiyl (C ≤ 12) , an arenediyl (C ≤ 12) , or a substituted form of any of these groups.
The dendrimer according to any one of claims 1 to 51. A1は-O-もしくは-NH-である、請求項1～54のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 54, wherein A 1 is -O- or -NH-. A2は-O-もしくは-NH-である、請求項1～55のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 55, wherein A 2 is -O- or -NH-. R9はアルキル(C≦8)である、請求項1～56のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 56, wherein R 9 is alkyl (C ≤ 8) . R9はメチルである、請求項57記載のデンドリマー。 The dendrimer of claim 57, wherein R 9 is methyl. nは1、2、もしくは3である、請求項1～58のいずれか一項記載のデンドリマー。 The dendrimer according to any one of claims 1 to 58, wherein n is 1, 2, or 3. (A) 請求項1～59のいずれか一項記載のデンドリマー; および
(B) 核酸
を含む、組成物。 (A) The dendrimer according to any one of claims 1 to 59; and
(B) A composition comprising nucleic acid. 核酸はsiRNA、miRNA、pri-miRNA、メッセンジャーRNA (mRNA)、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(cluster regularly interspaced short palindromic repeat)(CRISPR)関連核酸、単一ガイドRNA (sgRNA)、CRISPR-RNA (crRNA)、トランス活性化crRNA (tracrRNA)、プラスミドDNA (pDNA)、トランスファーRNA (tRNA)、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)、ガイドRNA、二本鎖DNA (dsDNA)、一本鎖DNA (ssDNA)、一本鎖RNA (ssRNA)、および二本鎖RNA (dsRNA)である、請求項60記載の組成物。 Nucleic acids are siRNA, miRNA, pri-miRNA, messenger RNA (mRNA), cluster regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) -related nucleic acids, single guide RNA (sgRNA). , CRISPR-RNA (crRNA), trans-activated crRNA (tracrRNA), plasmid DNA (pDNA), transfer RNA (tRNA), antisense oligonucleotide (ASO), guide RNA, double-stranded DNA (dsDNA), single-stranded 60. The composition of claim 60, which is DNA (ssDNA), single-stranded RNA (ssRNA), and double-stranded RNA (dsRNA). 核酸は、siRNA、tRNA、もしくはCRISPRプロセスにおいて使用されうる核酸である、請求項61記載の組成物。 13. The composition of claim 61, wherein the nucleic acid is a nucleic acid that can be used in siRNA, tRNA, or CRISPR processes. デンドリマーおよび核酸は、約100:1～約1:5の重量比で存在する、請求項60～62のいずれか一項記載の組成物。 The composition according to any one of claims 60 to 62, wherein the dendrimer and nucleic acid are present in a weight ratio of about 100: 1 to about 1: 5. 1つもしくは複数のヘルパー脂質をさらに含む、請求項60～63のいずれか一項記載の組成物。 The composition according to any one of claims 60 to 63, further comprising one or more helper lipids. ヘルパー脂質は、ステロイド、ステロイド誘導体、PEG脂質、もしくはリン脂質から選択される、請求項64記載の組成物。 The composition according to claim 64, wherein the helper lipid is selected from steroids, steroid derivatives, PEG lipids, or phospholipids. ヘルパー脂質は、ステロイドもしくはステロイド誘導体である、請求項65記載の組成物。 The composition according to claim 65, wherein the helper lipid is a steroid or a steroid derivative. ステロイドはコレステロールである、請求項65記載の組成物。 65. The composition of claim 65, wherein the steroid is cholesterol. ステロイドもしくはステロイド誘導体およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する、請求項66記載の組成物。 The composition according to claim 66, wherein the steroid or steroid derivative and dendrimer are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20. ヘルパー脂質はPEG脂質である、請求項65記載の組成物。 65. The composition of claim 65, wherein the helper lipid is a PEG lipid. PEG脂質はPEG化ジアシルグリセロールである、請求項69記載の組成物。 The composition of claim 69, wherein the PEG lipid is PEGylated diacylglycerol. PEG脂質は下記式によってさらに定義され:
Figure 2022031692000180
式中、
R12およびR13は各々独立してアルキル(C≦24)、アルケニル(C≦24)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
Reは水素、アルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり; および
xは1～250である、
請求項70記載の組成物。 PEG lipids are further defined by the following equation:
Figure 2022031692000180
During the ceremony
R 12 and R 13 are independently substituteds of alkyl (C ≤ 24) , alkenyl (C ≤ 24) , or any of these groups;
R e is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ; and
x is 1-250,
The composition according to claim 70. PEG脂質はジミリストイル-sn-グリセロールもしくは下記式の化合物である:
Figure 2022031692000181
式中、
n1は5～250であり; ならびに
n2およびn3は各々独立して2～25である、
請求項69記載の組成物。 The PEG lipid is dimyristoyl-sn-glycerol or a compound of the formula below:
Figure 2022031692000181
During the ceremony
n 1 is 5-250; as well
n 2 and n 3 are 2-25 independently, respectively,
The composition according to claim 69. PEG脂質およびデンドリマーは、約1:1～約1:250のモル比で存在する、請求項69記載の組成物。 The composition according to claim 69, wherein the PEG lipid and the dendrimer are present in a molar ratio of about 1: 1 to about 1: 250. ヘルパー脂質はリン脂質である、請求項65記載の組成物。 65. The composition of claim 65, wherein the helper lipid is a phospholipid. リン脂質は1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)もしくは1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)である、請求項65記載の組成物。 The composition of claim 65, wherein the phospholipid is 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC) or 1,2-dioreoil-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE). リン脂質およびデンドリマーは、約10:1～約1:20のモル比で存在する、請求項74記載の組成物。 The composition according to claim 74, wherein the phospholipid and the dendrimer are present in a molar ratio of about 10: 1 to about 1:20. デンドリマー、核酸、および1つもしくは複数のヘルパー脂質から本質的になる、請求項60～76のいずれか一項記載の組成物。 The composition according to any one of claims 60 to 76, comprising essentially a dendrimer, nucleic acid, and one or more helper lipids. (A) 請求項60～77のいずれか一項記載の組成物; および
(B) 薬学的に許容される担体
を含む、薬学的組成物。 (A) The composition according to any one of claims 60 to 77; and
(B) A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier. 薬学的に許容される担体は、溶媒もしくは溶液である、請求項78記載の薬学的組成物。 38. The pharmaceutical composition of claim 78, wherein the pharmaceutically acceptable carrier is a solvent or solution. 経口的に、脂肪内に(intraadiposally)、動脈内に、関節内に、頭蓋内に、皮内に、病変内に、筋肉内に、鼻腔内に、眼内に、心膜内に、腹腔内に、胸膜内に、前立腺内に、直腸内に、くも膜下腔内に、気管内に、腫瘍内に、臍帯内に、膣内に、静脈内に、膀胱内に、硝子体内に、リポソーム的に、局所的に、粘膜的に、非経口的に、直腸的に、結膜下に、皮下に、舌下に、局所に、経頬的に(transbuccally)、経皮的に、経膣的に、クリーム中で、脂質組成物中で、カテーテルを介して、洗浄を介して、持続注入を介して、注入を介して、吸入を介して、注射を介して、局所送達を介して、もしくは限局性かん流を介して投与するために製剤化される、請求項78または79記載の薬学的組成物。 Orally, intraadiposally, intraarterial, intraarterial, intracranial, intradermal, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal. In the thoracic membrane, in the prostate, in the rectum, in the submucosal cavity, in the trachea, in the tumor, in the umbilical cord, in the vagina, in the vein, in the bladder, in the vitreous, and liposome-like. Topically, mucosally, parenterally, rectal, subconjunctival, subcutaneous, sublingual, topically, transbuccally, transdermally, transvaginally. , In a cream, in a lipid composition, via a catheter, via a wash, via a continuous infusion, through an infusion, through an inhalation, via an injection, via topical delivery, or localized. The pharmaceutical composition according to claim 78 or 79, which is formulated for administration via sexual perfusion. 静脈内もしくは動脈内注射のために製剤化される、請求項80記載の薬学的組成物。 The pharmaceutical composition according to claim 80, which is formulated for intravenous or intraarterial injection. 単位用量として製剤化される、請求項78～81のいずれか一項記載の薬学的組成物。 The pharmaceutical composition according to any one of claims 78 to 81, which is formulated as a unit dose. 核酸を細胞に送達する段階を含む遺伝子の発現を調節する方法であって、細胞への核酸の取り込みを引き起こすのに十分な条件の下で請求項60～82のいずれか一項記載の組成物もしくは薬学的組成物と細胞を接触させる段階を含む、方法。 The composition according to any one of claims 60 to 82, which is a method for regulating the expression of a gene, which comprises a step of delivering nucleic acid to a cell, under conditions sufficient to induce the uptake of the nucleic acid into the cell. Alternatively, a method comprising contacting a cell with a pharmaceutical composition. 細胞をインビトロでもしくはエクスビボで接触させる、請求項83記載の方法。 38. The method of claim 83, wherein the cells are contacted in vitro or exvivo. 細胞をインビボで接触させる、請求項83記載の方法。 38. The method of claim 83, wherein the cells are contacted in vivo. 遺伝子発現の調節は、疾患もしくは障害を処置するのに十分である、請求項83～85のいずれか一項記載の方法。 The method of any one of claims 83-85, wherein the regulation of gene expression is sufficient to treat the disease or disorder. 疾患もしくは障害はがんである、請求項86記載の方法。 The method of claim 86, wherein the disease or disorder is cancer. 請求項60～82のいずれか一項記載の組成物もしくは薬学的組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与する段階を含む、患者における疾患もしくは障害を処置する方法。 A method for treating a disease or disorder in a patient, comprising the step of administering a pharmaceutically effective amount of the composition or pharmaceutical composition according to any one of claims 60 to 82 to a patient in need thereof. 疾患もしくは障害はがんである、請求項88記載の方法。 88. The method of claim 88, wherein the disease or disorder is cancer. 患者に1つもしくは複数のさらなるがん療法を投与する段階をさらに含む、請求項88または89記載の方法。 38. The method of claim 88 or 89, further comprising administering to the patient one or more additional cancer therapies. がん療法は、化学療法化合物、外科手術、放射線療法、もしくは免疫療法である、請求項90記載の方法。 The method of claim 90, wherein the cancer therapy is a chemotherapeutic compound, surgery, radiation therapy, or immunotherapy. 組成物もしくは薬学的組成物は、1回患者に投与される、請求項88～91のいずれか一項記載の方法。 The method of any one of claims 88-91, wherein the composition or pharmaceutical composition is administered once to a patient. 組成物もしくは薬学的組成物は2回もしくはそれ以上の回数、患者に投与される、請求項88～91のいずれか一項記載の方法。 The method of any one of claims 88-91, wherein the composition or pharmaceutical composition is administered to the patient twice or more times. 患者は哺乳動物である、請求項88～93のいずれか一項記載の方法。 The method of any one of claims 88-93, wherein the patient is a mammal. 患者はヒトである、請求項94記載の方法。 The method of claim 94, wherein the patient is a human. 下記式のデンドリマー:
コア-(繰り返し単位)n-末端基(I)
式中、1つもしくは複数の水素原子をコアから除去して該原子を繰り返し単位で置換することによって、コアは、繰り返し単位に連結され、かつ
コアは下記式を有し:
Figure 2022031692000182
式中、
X3は-NR6-であり、式中、R6は水素、アルキル(C≦8)、もしくは置換アルキル(C≦8)、-O-、もしくはアルキルアミノジイル(C≦8)、アルコキシジイル(C≦8)、アレーンジイル(C≦8)、ヘテロアレーンジイル(C≦8)、ヘテロシクロアルケンジイル(C≦8)、またはこれらの基のいずれかの置換型であり;
R3およびR4は各々独立してアミノ、ヒドロキシ、もしくはメルカプト、もしくはアルキルアミノ(C≦12)、ジアルキルアミノ(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり;
cおよびdは各々独立して1、2、3、4、5、もしくは6であり; または
繰り返し単位は分解性ジアシルおよびリンカーを含み;
分解性ジアシル基は下記式を有し:
Figure 2022031692000183
式中、
A1およびA2は各々独立して-O-もしくは-NRa-であり、式中、
Raは水素、アルキル(C≦6)、もしくは置換アルキル(C≦6)であり;
Y3はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
R9はアルキル(C≦8)もしくは置換アルキル(C≦8)であり;
リンカー基は下記式を有し:
Figure 2022031692000184
式中、
Y1はアルカンジイル(C≦12)、アルケンジイル(C≦12)、アレーンジイル(C≦12)、もしくはこれらの基のいずれかの置換型であり; ならびに
繰り返し単位がリンカー基を含む場合、リンカー基はリンカー基の窒素原子および硫黄原子の両方で分解性ジアシル基に結合しており、繰り返し単位中の第1の基は分解性ジアシル基であり、各リンカー基について、隣の基は、リンカー基の窒素原子に結合した2つの分解性ジアシル基を含み; ならびに
nは、繰り返し単位中に存在するリンカー基の数であり; ならびに
末端基は下記式を有し:
Figure 2022031692000185
式中、
Y4はアルカンジイル(C≦18)であり; ならびに
R10は水素であり;
鎖中の最後の分解性ジアシルは末端基に結合されており;
nは0、1、2、3、4、5、もしくは6である;
または薬学的に許容されるその塩。 Dendrimer of the following formula:
Core-(repeating unit) n -terminal group (I)
By removing one or more hydrogen atoms from the core and substituting the atoms in repeating units in the equation, the core is linked to the repeating unit and the core has the following equation:
Figure 2022031692000182
During the ceremony
X 3 is -NR 6- , where R 6 is hydrogen, alkyl (C ≤ 8) , or substituted alkyl (C ≤ 8) , -O-, or alkylaminodiyl (C ≤ 8) , alkoxydiyl. (C ≤ 8) , arene diyl (C ≤ 8) , hetero arene diyl (C ≤ 8) , heterocycloalkenediyl (C ≤ 8) , or a substituted form of any of these groups;
R 3 and R 4 are independently amino, hydroxy, or mercapto, or substituted forms of alkylamino (C ≤ 12) , dialkylamino (C ≤ 12) , or any of these groups;
c and d are independently 1, 2, 3, 4, 5, or 6 respectively; or repeat units include degradable diacyls and linkers;
The degradable diacyl group has the following formula:
Figure 2022031692000183
During the ceremony
A 1 and A 2 are independently -O- or -NR a- , respectively, in the equation,
R a is hydrogen, alkyl (C ≤ 6) , or substituted alkyl (C ≤ 6) ;
Y 3 is a substitutional form of alkanediyl (C ≤ 12) , alkendiyl (C ≤ 12), allene diyl (C ≤ 12) , or any of these groups;
R 9 is alkyl (C ≤ 8) or substituted alkyl (C ≤ 8) ;
The linker group has the following formula:
Figure 2022031692000184
During the ceremony
Y 1 is a substituted form of alkanediyl ( C ≤ 12), alkendiyl (C ≤ 12) , arrestiyl (C ≤ 12) , or any of these groups; and if the repeating unit contains a linker group, the linker group. Is attached to a degradable diacyl group at both the nitrogen and sulfur atoms of the linker group, the first group in the repeating unit is the degradable diacyl group, and for each linker group, the adjacent group is the linker group. Contains two degradable diacyl groups attached to the nitrogen atom of
n is the number of linker groups present in the repeating unit; as well as the terminal group having the following equation:
Figure 2022031692000185
During the ceremony
Y 4 is alkanezil (C ≤ 18) ;
R 10 is hydrogen;
The last degradable diacyl in the chain is attached to a terminal group;
n is 0, 1, 2, 3, 4, 5, or 6;
Or its pharmaceutically acceptable salt.
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3349802T (en) * 2015-09-14 2021-10-15 Univ Texas Lipocationic dendrimers and uses thereof
MX2018010586A (en) * 2016-03-02 2019-03-28 Univ Texas Sting activating nanovaccine for immunotherapy.
EP3458074B1 (en) 2016-05-16 2024-04-17 Board of Regents of the University of Texas System COMPOSITIONS FOR THE DELIVERY OF tRNA AS NANOPARTICLES AND METHODS OF USE THEREWITH
JP2021528426A (en) * 2018-06-19 2021-10-21 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Lipid nanoparticle composition for delivery of mRNA and long nucleic acids
GB2592505B (en) 2018-09-04 2023-05-03 Univ Texas Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
CA3111483A1 (en) * 2018-09-04 2020-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
AU2021425941A1 (en) 2021-02-08 2023-08-17 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Unsaturated dendrimers compositions,related formulations, and methods of use thereof
EP4304460A1 (en) * 2021-03-11 2024-01-17 SiNON Nano Sciences, Inc. Carbon nanoparticle compositions and methods for delivering therapeutics to specific target sites
WO2022251191A1 (en) * 2021-05-24 2022-12-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania One-component delivery system for nucleic acids
AU2022396084A1 (en) * 2021-11-29 2024-04-04 The Governing Council Of The University Of Toronto Multi-motif dendrons and their supramolecular structures and uses thereof
WO2023233042A1 (en) 2022-06-03 2023-12-07 Bio-Trip B.V. Polyvalent molecule based lipid nanoparticles for nucleic acid delivery

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080242626A1 (en) * 2006-07-21 2008-10-02 Massachusetts Institute Of Technology End-Modified Poly(beta-amino esters) and Uses Thereof
CN101591428A (en) * 2009-06-29 2009-12-02 浙江大学 A kind of method for preparing dendritic macromolecule of polyester
WO2014026283A1 (en) * 2012-08-14 2014-02-20 Angiochem Inc. Peptide-dendrimer conjugates and uses thereof
CN103999853A (en) * 2014-06-11 2014-08-27 中国农业大学 Application of fluorescence arborization nanometer macromolecule in preparing drug carrier
JP2014529328A (en) * 2011-06-08 2014-11-06 日東電工株式会社 Compounds that target drug delivery and enhance siRNA activity
WO2016094342A1 (en) * 2014-12-08 2016-06-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Lipocationic polymers and uses thereof
JP2018537403A (en) * 2015-09-14 2018-12-20 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Lipocationic dendrimers and uses thereof
JP2019515016A (en) * 2016-05-16 2019-06-06 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Compositions for tRNA delivery as nanoparticles and methods of use thereof

Family Cites Families (123)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
JPS5927900A (en) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk Oligonucleotide derivative and its preparation
US4558120A (en) * 1983-01-07 1985-12-10 The Dow Chemical Company Dense star polymer
FR2540122B1 (en) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient NOVEL COMPOUNDS COMPRISING A SEQUENCE OF OLIGONUCLEOTIDE LINKED TO AN INTERCALATION AGENT, THEIR SYNTHESIS PROCESS AND THEIR APPLICATION
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (en) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut NOVEL ADENOSINE DERIVATIVE NUCLEOSIDES, THEIR PREPARATION AND THEIR BIOLOGICAL APPLICATIONS
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (en) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd Poly-labeled oligonucleotide derivative
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
AU598946B2 (en) 1987-06-24 1990-07-05 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (en) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft MODIFIED OLIGONUCLEOTIDS
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
AU7579991A (en) 1990-02-20 1991-09-18 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
DE69032425T2 (en) 1990-05-11 1998-11-26 Microprobe Corp Immersion test strips for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
WO1992002258A1 (en) 1990-07-27 1992-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
WO1992008728A1 (en) 1990-11-08 1992-05-29 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
AU3222793A (en) 1991-11-26 1993-06-28 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
WO1994014226A1 (en) 1992-12-14 1994-06-23 Honeywell Inc. Motor system with individually controlled redundant windings
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US6156564A (en) 1996-06-07 2000-12-05 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Cellular apoptosis susceptibility protein (CSP) and antisense CSP
US6197787B1 (en) 1997-03-03 2001-03-06 Sanofi-Synthelabo Pharmaceutical formulations containing poorly soluble drug substances
JP3756313B2 (en) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 Novel bicyclonucleosides and oligonucleotide analogues
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6126995A (en) 1997-09-30 2000-10-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Process for producing stable divalent scandium
DE19743269A1 (en) 1997-09-30 1999-04-01 Siemens Ag Manufacturing process for a bi-containing ceramic layer
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
CN1796556A (en) 1998-03-20 2006-07-05 联邦科学和工业研究组织 Control of gene expression
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
WO1999054459A2 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
US6199844B1 (en) 1998-07-27 2001-03-13 Chrysler Corporation Striker cap for vehicle suspension system
US6098957A (en) 1998-07-31 2000-08-08 Honeywell Inc. Electro-mechanical torque limiter for valve actuators
US6186231B1 (en) 1998-11-20 2001-02-13 Texaco Inc. Conformance improvement in hydrocarbon bearing underground strata using lignosulfonate-acrylic acid graft copolymer gels
EP1178999B1 (en) 1999-05-04 2007-03-14 Santaris Pharma A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
CA2386270A1 (en) 1999-10-15 2001-04-26 University Of Massachusetts Rna interference pathway genes as tools for targeted genetic interference
US7053150B2 (en) * 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
US20040019001A1 (en) 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US7314956B2 (en) * 2001-08-08 2008-01-01 Vaxim, Inc. Multifunctional carrier for the delivery of a pharmacological agent or genetic material into a cell
JP2003181751A (en) 2001-12-17 2003-07-02 Shirai Tekkosho:Kk Machine for chamfering edge of plate glass
KR20030055020A (en) 2001-12-26 2003-07-02 주식회사 포스코 Apparatus for mold oscillation of continous casting machine
US6987930B2 (en) 2002-08-27 2006-01-17 Pentax Corporation Lens barrel incorporating the advancing/retracting mechanism
WO2004044136A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2’-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004041889A2 (en) 2002-11-05 2004-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
KR100916379B1 (en) 2003-01-10 2009-09-07 사천홍시현시기건유한공사 Method of Manufacturing Cathode Pad for Organic Electroluminescence Device
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ES2382807T3 (en) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi New artificial nucleic acids of the N-O link type with cross-linking
JP5379347B2 (en) 2003-09-18 2013-12-25 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US7985424B2 (en) * 2004-04-20 2011-07-26 Dendritic Nanotechnologies Inc. Dendritic polymers with enhanced amplification and interior functionality
CN102940891B (en) * 2004-05-05 2016-02-24 赛伦斯治疗有限公司 Lipid, lipid complex and application thereof
EP2476756A1 (en) 2005-06-15 2012-07-18 Massachusetts Institute of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
US20090221684A1 (en) * 2005-12-22 2009-09-03 Trustees Of Boston University Molecules for Gene Delivery and Gene Therapy, and Methods of Use Thereof
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
ES2389737T3 (en) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5 'modified bicyclic nucleic acid analogs
US20080068922A1 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Voss Klaus-W Device for blending a binder component and a hardener component for producing a ready-made filler
KR20080039618A (en) 2006-11-01 2008-05-07 엘지전자 주식회사 Method for data service of mobile terminal
EP2125852B1 (en) 2007-02-15 2016-04-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
US20080294089A1 (en) * 2007-06-06 2008-11-27 Biovaluation & Analysis, Inc. Dendritic Polymers for Use in Acoustically Mediated Intracellular Drug Delivery in vivo
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
US8278283B2 (en) 2007-07-05 2012-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted or unsaturated bicyclic nucleic acid analogs
CA3006395C (en) 2008-11-07 2022-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
CN102216462A (en) * 2008-11-17 2011-10-12 安龙制药公司 Branched cationic lipids for nucleic acids delivery system
US8163861B2 (en) 2009-01-15 2012-04-24 Living Proof, Inc. Beta-amino ester compounds and uses thereof
JP2012528857A (en) 2009-06-02 2012-11-15 ウー，ニエン Pure PEG-lipid conjugate
JP5136634B2 (en) 2010-12-17 2013-02-06 オムロン株式会社 Terminal block device
WO2012090223A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Indian Institute Of Science Poly(ether imine) dendrimers and uses thereof
PL2800811T3 (en) 2012-05-25 2017-11-30 Emmanuelle Charpentier Methods and compositions for rna-directed target dna modification and for rna-directed modulation of transcription
JP6241193B2 (en) * 2012-10-23 2017-12-06 コニカミノルタ株式会社 Transparent electrode, electronic device, and organic electroluminescence element
JP2021528426A (en) * 2018-06-19 2021-10-21 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Lipid nanoparticle composition for delivery of mRNA and long nucleic acids
CA3111483A1 (en) * 2018-09-04 2020-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
CA3213299A1 (en) * 2021-03-22 2022-09-29 Recode Therapeutics, Inc. Compositions and methods for targeted delivery to cells

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080242626A1 (en) * 2006-07-21 2008-10-02 Massachusetts Institute Of Technology End-Modified Poly(beta-amino esters) and Uses Thereof
CN101591428A (en) * 2009-06-29 2009-12-02 浙江大学 A kind of method for preparing dendritic macromolecule of polyester
JP2014529328A (en) * 2011-06-08 2014-11-06 日東電工株式会社 Compounds that target drug delivery and enhance siRNA activity
WO2014026283A1 (en) * 2012-08-14 2014-02-20 Angiochem Inc. Peptide-dendrimer conjugates and uses thereof
CN103999853A (en) * 2014-06-11 2014-08-27 中国农业大学 Application of fluorescence arborization nanometer macromolecule in preparing drug carrier
WO2016094342A1 (en) * 2014-12-08 2016-06-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Lipocationic polymers and uses thereof
JP2018537403A (en) * 2015-09-14 2018-12-20 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Lipocationic dendrimers and uses thereof
JP2019515016A (en) * 2016-05-16 2019-06-06 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム Compositions for tRNA delivery as nanoparticles and methods of use thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANGEWANDTE CHEMIE INTERNATIONAL EDITION, vol. 53(52), JPN6020033684, 2014, pages 14397 - 14401, ISSN: 0004975973 *
CHEMICAL COMMUNICATIONS (CAMBRIDGE, UNITED KINGDOM), vol. 49(35), JPN6020033686, 2013, pages 3646 - 3648, ISSN: 0004975974 *
JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 137(29), JPN6020033688, 2015, pages 9206 - 9209, ISSN: 0004975975 *
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 113(3), JPN6020033691, 2016, pages 520 - 525, ISSN: 0004975976 *

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Publication number Publication date
ES2899308T3 (en) 2022-03-10
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