JP2021519069A - 遺伝子改変リンパ球の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
この出願は、「METHODS OF MANUFACTURING GENETICALLY−MODIFIED LYMPHOCYTES」との表題の2018年3月27日に出願された米国仮特許出願第62/648,804号(この開示は、参考として本明細書に援用される)に基づく優先権を主張する。
本発明は、概して、HIVの処置および防止のための免疫化および免疫療法の分野に関する。特に、開示されている方法は、そのようなHIV+の個体に注入するのに好適な細胞産物を調製するために、非標的細胞を枯渇させるステップを含む、治癒を求めるHIV+の個体から白血球を得るステップと、処理するステップと、増殖させるステップとに関する。
抗レトロウイルス薬併用療法(Combination antiretroviral therapy)(cART)(高活性抗レトロウイルス薬療法(Highly Active Antiretroviral Therapy)またはHAARTとしても公知)は、HIV−1の複製を制限し、疾患進行を遅延させるが、薬物の毒性および薬物耐性ウイルスの出現が、HIV感染者の長期制御における課題である。さらに、伝統的な抗レトロウイルス薬療法は、AIDS発症または死の遅延には成功しているものの、治癒をもたらすには至っていない。代替的な処置戦略が必要である。
一態様では、方法が提供される。本方法は、末梢血単核細胞(PBMC)を供給源から精製するステップと、少なくとも1つのHIV特異的ペプチドでPBMCを刺激するステップと、少なくとも1サブセットの細胞をPBMCから枯渇させるステップであって、少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む、ステップと、枯渇させたPBMCに、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと、少なくとも1日間にわたって、形質導入されたPBMCを培養するステップと、培養されたPBMCを採取するステップとを含む。複数の実施形態では、少なくとも1サブセットの細胞は、CD8+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、好中球、好塩基球、好酸球、肥満細胞、樹状細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む。
概説
本明細書では、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)疾患を処置および/または防止して機能的治癒を達成するための方法および組成物が開示される。本方法および組成物は、後述するように、組み込みレンチウイルス、非組み込みレンチウイルス、および関連するウイルスベクター技術を含む。
本明細書で別途定義されない限り、本開示との関連で使用される科学および技術用語は、当業者により一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈により別途必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、本明細書に記載される、細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸の化学、およびハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法、ならびにこれらの技術は、当技術分野で周知であり一般的に使用されているものである。特記なき限り、本開示の方法および技術は概して、当技術分野で周知であり、かつ本明細書随所で引用され、論じられる様々な一般的参考文献およびより具体的な参考文献に記載されている、従来の方法に従って行われる。例えば、Sambrook J.およびRussell D. Molecular Cloning:A Laboratory Manual、第3版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.(2000年)、Ausubelら、Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology、Wiley, John & Sons, Inc.(2002年)、HarlowおよびLane Using Antibodies: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.(1998年)、およびColiganら、Short Protocols in Protein Science、Wiley,John & Sons, Inc.(2003年)を参照されたい。任意の酵素反応または精製技術は、製造元の仕様に従って、当技術分野で一般的に実行されるように、または本明細書に記載されるように行われる。本明細書に記載される、分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品および製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにこれらの検査手技および技術は、当技術分野で周知であり一般的に使用されているものである。
本明細書で詳述されるように、一態様では、HIVに感染した細胞を処置する方法が提供される。本方法は、概して、ex vivoで行われる、HIVに感染した被験体から単離された末梢血単核細胞(PBMC)を治療有効量の刺激剤と接触させるステップと、非標的細胞集団を枯渇させるステップと、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムをPBMCにex vivoで形質導入するステップと、そのような形質導入を達成するために十分な期間にわたって、形質導入されたPBMCを培養するステップとを含む。複数の実施形態では、形質導入されたPBMCは約1〜約35日間培養される。複数の実施形態では、本方法は、形質導入されたPBMCを被験体に注入するステップをさらに含む。複数の実施形態では、被験体はヒトである。複数の実施形態では、刺激剤は、ペプチドまたはペプチドの混合物であり、また複数の実施形態では、gagペプチドを含む。さらなる実施形態では、刺激剤はワクチンを含む。複数の実施形態では、ワクチンはHIVワクチンであり、さらなる実施形態では、HIVワクチンは、MVA/HIV62Bワクチンまたはそのバリアントまたは類似体である。複数の実施形態では、ウイルス送達システムはレンチウイルス粒子を含む。複数の実施形態では、少なくとも1つの遺伝子エレメントは、ケモカイン受容体CCR5の産生を阻害することができる低分子RNAを含む。複数の実施形態では、少なくとも1つの遺伝子エレメントは、HIV RNA配列をターゲティングすることができる少なくとも1つの低分子RNAを含む。他の実施形態では、少なくとも1つの遺伝子エレメントは、ケモカイン受容体CCR5の産生を阻害することができる低分子RNAと、HIV RNA配列をターゲティングすることができる少なくとも1つの低分子RNAとを含む。複数の実施形態では、HIV RNA配列は、HIV感染を予防するかまたは既に感染している細胞でのウイルス発現を低減するHIV Vif配列、HIV Tat配列、それらのバリアント、または他のHIV遺伝子に由来するRNA配列を含む。複数の実施形態では、少なくとも1つの遺伝子エレメントは、マイクロRNAまたはshRNAのうちの少なくとも1つを含む。さらなる実施形態では、少なくとも1つの遺伝子エレメントは、マイクロRNAクラスターを含む。
一般的に「HIV」とも呼ばれるヒト免疫不全ウイルスは、ヒトにおいて後天性免疫不全症候群(AIDS)を引き起こすレトロウイルスである。AIDSとは、免疫系の進行性不全が、生命を脅かす日和見感染およびがんを蔓延させる状態である。処置しなければ、HIV感染後の平均生存期間は、HIVサブタイプおよび宿主集団の遺伝的特質に応じて9〜11年と推定される。HIVによる感染は、血液、精液、膣液、尿道球腺液(pre−ejaculate)、唾液、涙、リンパ液もしくは脳脊髄液、または母乳を含むがこれらに限定されない体液の移入、あるいは汚染された血液または組織産物の使用によって起こる。HIVは、感染した個体において遊離ウイルス粒子として存在する場合もあれば、感染した免疫細胞内に存在する場合もある。
ウイルスベクターは、疾患を治療または防止する目的で遺伝子構築物を宿主細胞に送達するために使用される。
歴史的に、ワクチンは、天然痘、ポリオ、麻疹、および黄熱病をはじめとする致命的な感染性疾患に対する対抗手段の主力であった。残念ながら、現在認可されているHIV用ワクチンはない。HIVウイルスは、免疫系から逃れる独特の方法を有し、ヒトの身体は、これに対して有効な免疫応答を確立することができないと思われる。結果として、科学者らは、HIVからの保護を提供するために何が必要かを明確に把握していない。
一態様では、本開示は、ウイルスベクターを使用してHIV疾患の治癒を達成するための方法を提供する。本方法は、概して、HIV特異的CD4 T細胞の割合を増やすための免疫療法と、その後に必要に応じてHIVならびにCCR5およびCXCR4の阻害剤を送達するためのレンチウイルス形質導入とを含む。
置が付随する場合がある。
様々な態様では、本開示は、感受性細胞へのHIVの侵入を阻害する遺伝子構築物を送達することができるレンチウイルスベクターを提供する。例として、本明細書による1つの作用機構は、感受性細胞へのウイルス進入速度を低減させるため、CCR5および/またはCXCR4ケモカイン受容体に対するmRNAレベルを低下させることである。
・ RSV(ラウス肉腫ウイルス末端反復配列(long terminal repeat))、
・ 5’LTR(染色体組み込み後にベクターの複製を防止するために切り詰めることができるHIV末端反復配列の一部分)、
・ Psi(パッケージング中のウイルス粒子へのベクターRNAゲノムの組み込みを可能にするパッケージングシグナル)、
・ RRE(Rev応答エレメントを付加すると、RNAを細胞の核から細胞質に動員することによって導入遺伝子からの発現を改善することができる)、
・ cPPT(宿主細胞染色体への導入遺伝子の組み込みの前に第二鎖DNA合成を促進するポリプリントラクト(poly purine tract))、
・ プロモーター(プロモーターは、組み込まれた導入遺伝子からのRNA転写を開始してマイクロRNAクラスター(または構築物の他の遺伝子エレメント)を発現し、一部の実施形態では、ベクターはEF−1プロモーターを使用し得る)、
・ 抗CCR5(宿主細胞因子CCR5のメッセンジャーRNAをターゲティングして細胞表面上のその発現を低減させるマイクロRNA)、
・ 抗Rev/Tat(HIVのRevコード領域とTatコード領域との間の接合部におけるHIVのゲノムRNAまたはメッセンジャーRNAをターゲティングするマイクロRNA。本出願では、miRNA Tatと呼称されるか、または同様の説明が与えられる場合がある)、
・ 抗Vif(Vifコード領域内のHIVのゲノムRNAまたはメッセンジャーRNA
をターゲティングするマイクロRNA)、
・ WPRE(ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメントは、核のRNA輸送を促進するために使用され得るさらなるベクター成分である)、および
・ デルタU3 3’LTR(ベクターの安全性を改善するためにU3領域の一部分を欠失させた、HIVの3’末端反復配列の改変バージョン)。
本明細書の様々な態様および実施形態に従うレンチウイルスビリオン(粒子)は、ビリオン(ウイルス粒子)を産生するために必要なウイルスタンパク質をコードするベクターシステムによって発現される。様々な実施形態では、逆転写および組み込みのための、プロモーターに作動可能に連結した、レンチウイルスpolタンパク質をコードする核酸配列を含有する1つのベクターが提供される。別の実施形態では、polタンパク質は、複数のベクターによって発現される。他の実施形態では、ウイルスカプシドを形成するための、プロモーターに作動可能に連結した、レンチウイルスGagタンパク質をコードする核酸配列を含有するベクターが提供される。複数の実施形態では、このgag核酸配列は、pol核酸配列の少なくとも一部とは別個のベクター上にある。他の実施形態では、gag核酸は、polタンパク質をコードする全てのpol核酸配列とは別個のベクター上にある。
様々な態様では、本開示は、機能的治癒の達成するためのHIV処置の成功を決定するためのバイオアッセイを含む。これらのアッセイは、患者における形質導入されたHIV特異的なCD4 T細胞の頻度を測定することにより、開示されている免疫化および処置の方法の有効度を測定するための方法を提供する。HIV特異的CD4 T細胞が認識可能である。なぜなら、とりわけ、これらが増殖し、細胞表面マーカーの組成を変更し、リン酸化を含むシグナル伝達経路を誘導し、かつ/あるいは、サイトカイン、ケモカイン、カスパーゼ、リン酸化シグナル伝達分子、または他の細胞質および/もしくは核成分であり得る特定のマーカータンパク質を発現するからである。特定の応答するCD4 T細胞は、例えば、フローサイトメトリーソーティング、磁性ビーズ分離、または抗原特異的CD4 T細胞の単離の他の認識されている方法を使用したHIV特異的細胞のソーティングを可能にする、標識されたモノクローナル抗体またはmRNA配列の特異的なin situ増幅を使用して認識される。単離されたCD4 T細胞を試験すると、組み込まれた治療用レンチウイルスを有する細胞の頻度が決定される。質量分析、PCR、ELISAまたは抗体染色と併せた個々の細胞のマイクロ流体分離を含む単一細胞試験法を使用して、HIVに対する応答性および組み込まれた治療用レンチウイルスの存在を確認することもできる。
開示されている方法および組成物は、HIV+患者をその疾患の様々な段階で処置するために使用され得る。したがって、投薬レジメンは、患者の状態および投与方法に基づいて異なり得る。
は約35日目に行われ得る。
様々な実施形態では、T細胞などの細胞がHIV感染患者から得られ、培養される。培養は、マルチウェルプレートにて馴化培地(「CM」)を含む培養培地中で行われ得る。上清p24gagのレベル(「p24」)およびウイルスRNAレベルが標準的手段によって評価され得る。CM培養細胞が1ng/ml未満の上清p24レベルのピークを有する患者は、さらなる抗ウイルス剤の使用ありまたはなしのCMにおける大規模なT細胞の拡大増殖に好適な患者であり得る。さらに、異なる薬物または目的の薬物の組み合わせを異なるウェルに加えてよく、試料中のウイルスレベルに対する影響を標準的手段によって評価することができる。適度なウイルス抑制をもたらす薬物の組み合わせは、治療上有用な組み合わせである。特定の被験体に関する適度なウイルス抑制を構成するものが何かを決定することは、適格な技師の能力の範囲内である。ウイルスの拡大増殖を制限することにおける目的の薬物の有効性を試験するために、抗CD3抗体などのさらなる因子を培養物に添加してウイルス産生を刺激してもよい。当技術分野で公知のHIV感染細胞試料の培養方法とは異なり、CMでは2か月超の期間にわたるT細胞の培養が可能であり、これにより、長期の薬物有効性をアッセイする有効な系がもたらされる。
図3(直鎖形態)および図4(環状化形態)にまとめたようにレンチウイルスベクターシステムを開発した。まず図3の上部を参照すると、左から右に、次のエレメント:ハイブリッド5’末端反復配列(RSV/5’LTR)(配列番号33〜34)、Psi配列(RNAパッケージング部位)(配列番号35)、RRE(Rev応答エレメント)(配列番号36)、cPPT(ポリプリントラクト)(配列番号37)、EF−1αプロモーター(配列番号4)、miR30CCR5(配列番号1)、miR21Vif(配列番号2)、miR185Tat(配列番号3)、ウッドチャック転写後調節エレメント(WPRE)(配列番号31または67)、およびΔU3 3’LTR(配列番号38)を有する代表的な治療用ベクターをデザインし産生した。図3で詳述されている治療用ベクターは、本明細書ではAGT103とも呼ばれる。
この実施例の目的は、抗HIVレンチウイルスベクターを開発することであった。
AGT103−Tは、AGT103レンチウイルスベクターも形質導入されている、>1×107個のHIV特異的CD4 T細胞を含有する、遺伝子改変された自己PBMCである。
・ 年齢18〜60歳。
・ 研究登録前に記録されたHIV感染。
・ 研究期間中に抗レトロウイルス薬物レジメンを変更しないこと(医療上の指示がある場合を除く)を含め、研究により強制される評価に従う意志がなければならない。
・ 1立方ミリメートルあたりCD4+T細胞数>500個の細胞(細胞/mm3)
・ >400個の細胞/mm3のCD4+T細胞最下点
・ HIVウイルス量<1,000コピー/ミリリットル(mL)
除外基準:
・ 何らかのウイルス肝炎
・ 急性HIV感染
・ HIVウイルス量>1,000コピー/mL
・ 活発または最近(過去6か月)のAIDSを定義する合併症
・ 研究登録から12週間以内におけるHIV薬物適用の何らかの変化
・ 処置に成功した皮膚の基底細胞癌を除く、少なくとも5年間にわたって寛解していないがんまたは悪性疾患
・ NYHAグレード3もしくは4のうっ血性心不全または制御不良の狭心症もしくは不整脈の現在の診断
・ 出血障害歴
・ 過去30日間の慢性的なステロイドの使用
・ 妊娠中または授乳中
・ 能動的な薬物またはアルコールの乱用
・ 過去30日間の深刻な病気
・ 別の臨床治験に現在参加しているか、または何らかの以前の遺伝子療法
・ 急性注入反応
・ 注入後安全性追跡調査
・ 改変CD4 T細胞の数および頻度。
・ 改変CD4 T細胞の耐久性。
・ メモリーT細胞機能の尺度としてのGagペプチド再刺激に対するin vitro応答(ICSアッセイ)。
・ ワクチン接種前および後の時点と比較した多機能性の抗HIV CD8 T細胞応答。
・ in vitro刺激後に二重スプライシングされたHIV mRNAを作るCD4 T細胞の頻度。
・ 遺伝子改変CD4 T細胞の数および頻度。
・ マラビロク単独療法によるウイルス抑制の維持(1mlあたり<2,000個のvRNAコピー、ただし2回連続した毎週の採血で1mlあたりのvRNAコピーが5×104を超えない場合は許容される)。
・ マラビロク投与中および退薬後のウイルス抑制の持続。
・ 安定なCD4 T細胞数。
CD8+T細胞過剰成長は、標的CD4+T細胞の拡大増殖に著しい影響を及ぼしたため、CD8+T細胞を、細胞拡大増殖の始めに枯渇させて、それがCD4+T細胞の拡大増殖を改善させることになるか否かを決定した。現行のCD8+T細胞枯渇法では、細胞を磁気カラムに通すことが必要である。その手順が抗原提示細胞およびCD4+T細胞に及ぼす可能性のある影響を回避するために、ペプチド刺激後かつレンチウイルス形質導入前の、細胞が機械的ストレスにより良好に耐えることができる時点に、細胞枯渇を実施した。目的は、CD4+T細胞の最終収量を増加させること、また標的細胞(AGT103レンチウイルスベクターも形質導入したHIV gagタンパク質CD4+T細胞)の収量を増加させることであった。図8は、CD8+T細胞枯渇プロトコールの模式図を示す。CD8+T細胞を枯渇させるために使用される方法は、実施例8に記載されている。
PTID:01−006では、実施例8に記載のプロトコールを使用したCD8+T細胞枯渇は、50%未満のCD4+T細胞であり、Vδ1+γδT細胞の増大を含んでいた最終産物をもたらした(図10)。この結果は、CD8+T細胞およびVδ1+T細胞の両方の枯渇が、CD4+T細胞の収量を増加させることができ、標的細胞の収量も増加させることができることを示唆する。リンパ球のゲート制御データは、77.6%の蛍光強度を示した(図10の最も左側のグラフ)。CD3発現のパラメーターを使用すると、蛍光強度は75.3%であった(図10の中央左側のグラフ)。CD4発現のパラメーターを使用して、4つ別々の象限の蛍光を測定した(図10の中央グラフ)。左下象限は、45.3%(上限値)および45.5%(下限値)の蛍光強度を示した。右下象限は、44.9%の蛍光強度を示した。左上象限は、9.26%の蛍光強度を示した。左下象限は、0.35%の蛍光強度を示した。PANγδのパラメーターを使用すると、蛍光強度は73.8%であった(図10の中央右側のグラフ)。Vδ1のパラメーターを使用して、4つ別々の象限の蛍光を測定した。左下象限は、16.9%の蛍光強度を示した。右下象限は、82.8%の蛍光強度を示した。左上象限は、0.14%の蛍光強度を示した。右上象限は、0.12%の蛍光強度を示した。
CD8+T細胞枯渇は単独でVδ1およびCD56+NK細胞の増大をもたらしたため、様々な枯渇プロトコールを開発した。CD8+T細胞、CD56 NK細胞、CD19 B細胞、およびγδ細胞を全て枯渇させた枯渇プロトコールを開発した。このスキームのフロー図は図14に示されている。
図17は、CD8+T細胞、CD56+NK細胞、CD19+B細胞、およびγδT細胞を枯渇させる、4種細胞枯渇を使用した実験のためのフロー図を示す。LV−GFP代用ウイルスベクターを使用して、細胞で形質導入する。このベクターは、AGT103に対して同一の細胞向性を有するが、形質導入効率を容易に評価することができるように、緑色蛍光タンパク質マーカーを発現する。T細胞を、CD3/CD28ビーズで刺激して、形質導入効率を増加させた。インターフェロン−ガンマ発現を測定するアッセイを使用して、複数の細胞サブセットでの形質導入効率を測定した。
0日目:HIV陽性参加者の静脈血に由来するおよそ1×107個の生存可能な末梢血単核細胞(PBMC)を、24ウェルプレート中に5%ヒト血清(Gemini Bio Products、West Sacramento、CA)、10ng/mL IL7/IL15(Miltenyi Biotec、Auburn、CA)、および100nMサキナビル(NIH AIDS Reagent Program、Germantown、MD)を含む1mLのTexMACS GMP培地(Miltenyi Biotec、Auburn、CA)で培養した。細胞を、37℃で16〜18時間1μg/mL PepMix HIV−1(GAG)Ultra(JPT Peptide Technologies、Berlin、Germany)と共にインキュベートした。1μg/mLは、最終刺激条件での各々の個々のペプチドの濃度であった。
AGT103−Tを製造するための商業型のプロトコールでは、PBMC精製、ペプチド刺激、および細胞枯渇を上記に記載のように実施し、2日間培養してから、総培養液(200ml)を、IL−7およびIL−15サイトカインを含むおよそ5リットルの培養培地を含むGREX 500M静置培養フラスコまたは撹拌がないかもしくは最小限である細胞培養用の類似の容器に移した。充填したフラスコを37℃にて5%CO2で7日間撹拌せずにインキュベートし、次いで全量を収集し、細胞を洗浄し、1mL当たりおよそ1×108個の総有核細胞で凍結保存溶液に再懸濁し、次いで凍結させ、液体N2の気相に保管した。静的相培養を含めることにより、標的細胞の収量がさらに増加する。これは、この細胞サブセットが壊れやすく、非静的培養システムの機械的収集および/または培養撹拌中に枯渇しやすいことが、実験室研究で実証されているためである。
配列
本明細書では、以下の配列が参照される。
Claims (17)
- 末梢血単核細胞(PBMC)を供給源から精製するステップと、
前記PBMCを少なくとも1つのHIV特異的ペプチドで刺激するステップと、
少なくとも1サブセットの細胞を前記PBMCから枯渇させるステップであって、前記少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む、ステップと、
枯渇させた前記PBMCに、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと、
少なくとも1日間にわたって、形質導入された前記PBMCを培養するステップと、
培養された前記PBMCを採取するステップと
を含む、方法。 - 前記培養が、静置培養システムまたは半静置培養システムで行われる、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのHIV特異的ペプチドが、合成の重複ペプチドのプールを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記合成の重複ペプチドのプールが、HIV Gagポリタンパク質を含む、請求項3に記載の方法。
- 前記枯渇させるステップが、前記少なくとも1サブセットの細胞を、枯渇させた前記PBMCから分離することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記分離することが、磁気ビーズ分離を含む、請求項5に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの遺伝子エレメントが、ケモカイン受容体CCR5の産生を阻害することができる低分子RNA、またはHIV RNA配列をターゲティングすることができる少なくとも1つの低分子RNAを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記HIV RNA配列が、HIV Vif配列、HIV Tat配列、またはそれらのバリアントを含む、請求項7に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの遺伝子エレメントが、マイクロRNAまたはshRNAを含む、請求項7に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの遺伝子エレメントが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、または配列番号30の少なくとも1つと、少なくとも80%、または少なくとも85%、または少なくとも90%、または少なくとも95%の同一性を有するマイクロRNAを含む、請求項7に記載の方法。
- HIVに感染した被験体を処置するための遺伝子改変リンパ球であって、
末梢血単核細胞(PBMC)を前記被験体から精製するステップであって、前記PBMCが少なくとも1つのリンパ球を含む、ステップと、
前記少なくとも1つのリンパ球を、少なくとも1つのHIV特異的ペプチドで刺激するステップと、
少なくとも1サブセットの細胞を前記PBMCから枯渇させるステップであって、前記少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む、ステップと、
前記少なくとも1つのリンパ球に、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと、
少なくとも1日間にわたって、前記PBMCを培養するステップと、
培養された前記PBMCを採取するステップと
を含むプロセスによって調製される、遺伝子改変リンパ球。 - 予防用または治療用HIVワクチンで免疫した被験体を処置するための遺伝子改変リンパ球であって、
末梢血単核細胞(PBMC)を前記被験体から精製するステップであって、前記PBMCが少なくとも1つのリンパ球を含む、ステップと、
前記少なくとも1つのリンパ球を、少なくとも1つのHIV特異的ペプチドで刺激するステップと、
少なくとも1サブセットの細胞を前記PBMCから枯渇させるステップであって、前記少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む、ステップと、
前記少なくとも1つのリンパ球に、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと、
少なくとも1日間にわたって、前記PBMCを培養するステップと、
培養された前記PBMCを採取するステップと
を含むプロセスによって調製される、遺伝子改変リンパ球。 - HIVに曝露されたが感染していない被験体を処置するための遺伝子改変リンパ球であって、
末梢血単核細胞(PBMC)を前記被験体から精製するステップであって、前記PBMCが少なくとも1つのリンパ球を含む、ステップと、
前記PBMCを少なくとも1つのHIV特異的ペプチドで刺激するステップと、
少なくとも1サブセットの細胞を前記PBMCから枯渇させるステップであって、前記少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含む、ステップと、
前記少なくとも1つのリンパ球に、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと、
少なくとも1日間にわたって、前記PBMCを培養するステップと、
培養された前記PBMCを採取するステップと
を含むプロセスによって調製される、遺伝子改変リンパ球。 - PBMCを少なくとも1つのHIV特異的ペプチドで刺激するステップと、
少なくとも1サブセットの細胞を前記PBMCから枯渇させるステップであって、前記少なくとも1サブセットの細胞が、CD8+T細胞、γδ細胞、NK細胞、B細胞、T制御性細胞、およびNKT細胞のいずれか1つまたは複数を含むステップと、
枯渇させた前記PBMCに、少なくとも1つの遺伝子エレメントをコードするウイルス送達システムで形質導入するステップと
を含む、方法。 - 前記少なくとも1つのHIV特異的ペプチドが、HIV gagペプチドを含む、請求項14に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの遺伝子エレメントが、ケモカイン受容体CCR5の産生を阻害することができる低分子RNA、またはHIV RNA配列をターゲティングすることができる少なくとも1つの低分子RNAを含む、請求項14に記載の方法。
- 前記HIV RNA配列が、HIV Vif配列、HIV Tat配列、またはそれらのバリアントを含む、請求項16に記載の方法。
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