JP2021514646A - 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 - Google Patents
単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021514646A JP2021514646A JP2020545484A JP2020545484A JP2021514646A JP 2021514646 A JP2021514646 A JP 2021514646A JP 2020545484 A JP2020545484 A JP 2020545484A JP 2020545484 A JP2020545484 A JP 2020545484A JP 2021514646 A JP2021514646 A JP 2021514646A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target nucleic
- adapter
- nucleic acid
- primer
- stranded
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 title 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 143
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 137
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 137
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 56
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 19
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 19
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 12
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 8
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 4
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 claims description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 claims description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 54
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 40
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCOCCO IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- GUAHPAJOXVYFON-ZETCQYMHSA-N (8S)-8-amino-7-oxononanoic acid zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)CCCCCC(O)=O GUAHPAJOXVYFON-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 4
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 3
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025626 GTP-binding protein GEM Human genes 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010063362 DNA-(Apurinic or Apyrimidinic Site) Lyase Proteins 0.000 description 1
- 102100035619 DNA-(apurinic or apyrimidinic site) lyase Human genes 0.000 description 1
- 108010000577 DNA-Formamidopyrimidine Glycosylase Proteins 0.000 description 1
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 101000605639 Homo sapiens Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Proteins 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 102100030569 Nuclear receptor corepressor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710153660 Nuclear receptor corepressor 2 Proteins 0.000 description 1
- 208000005228 Pericardial Effusion Diseases 0.000 description 1
- 102100038332 Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Human genes 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001125046 Sardina pilchardus Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000007846 asymmetric PCR Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091092259 cell-free RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000007672 fourth generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 102000054767 gene variant Human genes 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 210000004912 pericardial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
- C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1068—Template (nucleic acid) mediated chemical library synthesis, e.g. chemical and enzymatical DNA-templated organic molecule synthesis, libraries prepared by non ribosomal polypeptide synthesis [NRPS], DNA/RNA-polymerase mediated polypeptide synthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
- C12Q1/6855—Ligating adaptors
Abstract
Description
以下の定義は、本開示の理解の一助となる。
「試料」という用語は、標的核酸を含有するか、またはこれを含有することが推測される、任意の組成物を指す。これは、個体から単離された組織または体液、例えば、皮膚、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、滑液、尿、泪、血液細胞、臓器、および腫瘍の試料を含み、また、個体から採取された細胞から確立されたin vitro培養物の試料であって、ホルマリン固定パラフィン包埋組織(FFPET)、およびFFPETから単離された核酸を含む試料も含む。試料はまた、無細胞DNA(cfDNA)または循環腫瘍DNA(ctDNA)を含有する無細胞血液画分などの無細胞物質も含みうる。
本発明は、単一分子長鎖読取り型シーケンシングに適する二本鎖配列鋳型を作出する方法である。既存のライブラリー調製法、例えば、環状鋳型を利用する調製法(米国特許第7,302,146号および同第8,153,375号を参照されたい)と比較して、本発明の方法は、とりわけ、長い単位複製配列に有利である。
一部の実施形態では、本発明は、標的エンリッチメントステップを含む。エンリッチメントは、1つまたは複数の標的特異的プローブを介して、標的配列を捕捉することによるエンリッチメントでありうる。試料中の核酸は、変性させられ、一本鎖標的特異的プローブと接触されうる。プローブは、アフィニティー捕捉部分をもたらすことにより、ハイブリダイゼーション複合体が形成された後で、それらが捕捉されるように、アフィニティー捕捉部分に対するリガンドを含みうる。一部の実施形態では、アフィニティー捕捉部分は、アビジンまたはストレプトアビジンであり、リガンドは、ビオチンである。一部の実施形態では、部分は、固体支持体に結合させる。下記で、さらに詳細に記載される通り、固体支持体は、DYNABEADS(商標)磁気ビーズなどの超常磁性球形ポリマー粒子、または磁性ガラス粒子を含みうる。
一部の実施形態では、アダプター分子は、in vitroにおいて合成された人工配列である。他の実施形態では、アダプター分子は、in vitroにおいて合成された天然に存在する配列である。さらに他の実施形態では、アダプター分子は、単離された天然に存在する分子である。
シーケンシングは、当技術分野で公知の、任意の方法により実施されうる。とりわけ有利なのは、環状標的核酸を読み取ることが可能な、ハイスループット単一分子シーケンシングである。このような技術の例は、SMRT(Pacific Biosciences、Menlo Park、Cal.)を利用するPacific BioSciencesプラットフォーム、またはOxford Nanopore Technologies(Oxford、UK)製もしくはRoche Sequencing Solutions(Genia)(Santa Clara、Cal.)製のプラットフォームなど、ナノポア技術を利用するプラットフォーム、および合成によるシーケンシングを伴うかまたは伴わない、他の任意の既存のDNAシーケンシング技術または将来のDNAシーケンシング技術を含む。シーケンシングステップは、プラットフォーム特異的シーケンシングプライマーを利用しうる。これらのプライマーのための結合性部位は、本明細書で記載される、本発明の方法に導入されうる、すなわち、第2のアダプターまたは増幅プライマーの一部であることを介して導入されうる。
解析およびエラーの補正
一部の実施形態では、シーケンシングステップは、配列をアライメントするステップを含む、配列解析を伴う。一部の実施形態では、アライメントするステップは、複数の配列、例えば、同じバーコード(UID)を有する複数の配列から、コンセンサス配列を決定するのに使用される。一部の実施形態では、バーコード(UID)は、全てが同一なバーコード(UID)を有する、複数の配列からコンセンサスを決定するのに使用される。他の実施形態では、バーコード(UID)は、アーチファクト、すなわち、同一なバーコード(UID)を有する、一部の配列ではあるが全ての配列ではない配列内に存在する変動を消失させるのに使用される。PCRエラーまたはシーケンシングエラーから生じる、このようなアーチファクトは、消失させられうる。
鋳型の調製
シーケンシング鋳型は、直鎖化pUC19プラスミドDNA(2.7kb)、または500bpおよび1.15kbのHIV単位複製配列であった。インプットDNAは、Qubit蛍光測定解析(ThermoFisher Scientific)を使用して定量した。DNA 12000キット(Agilent Technologies、Santa Clara、Cal.)を伴うバイオアナライザーを使用して、DNAのサイズ、品質、および数量を評価した。クリーンアップは、製造元の指示書に従い、KAPA PureBeads(KAPA Biosystems、Inc.、Wilmington、Mass.)による精製を使用して実施した。
Pacific Biosciences RSIIプラットフォーム上の、ライブラリーの調製およびシーケンシング
KAPA HyperPrepキットによるライブラリー調製を使用して、アダプターのライゲーションのために、鋳型DNA(1ugのプラスミドまたは単位複製配列)を調製した。略述すると、製造元の指示書に従い、精製された直鎖化プラスミドDNAを末端修復し、Aテール処理した。このステップの直後に、直鎖状アダプターまたはHEGアダプターを使用して、アダプターライゲーションを行った(図1または図4)。同じ試験管内で、ライゲーションマスターミックスおよびアダプターを添加し、反応混合物を、20℃で30分間にわたりインキュベートした。65℃で10分間にわたる、さらなるインキュベーションにより、リガーゼ酵素を不活化させた。全てのアダプターは、1:200の鋳型:アダプターライゲーション比で存在した。ライゲーションに続き、0.8倍濃度のKAPA PureBeadsによる、ビーズによる最終クリーンアップステップを行った。ライブラリーの収量は、Qubit蛍光測定解析(Life Technologies)を使用して定量し、Bioanalyzer HSキット(Agilent Technologies、Santa Clara、CA)を使用して、サイズについて点検した。精製されたアダプター付加鋳型は、製造元の指示書に従い、Pacific Biosciences RSIIプラットフォーム上でシーケンシングし、Rocheナノポアプラットフォーム上でもシーケンシングした。異なるサイズの単位複製配列を伴うRSII結果を表1に示し、表2は、Rocheナノポアプラットフォーム上の結果を示す。
新規のアダプターを使用する、コンカテネートされた直鎖状鋳型のシーケンシング
本実施例では、出発標的配列は、187bpの長鎖である、NRASエクソン3の単位複製配列であり、この単位複製配列を、新規のアダプター(図1)へとコンカテネートおよびライゲーションし、シーケンシングした。この実験の対照は、pUC2.7kbプラスミドであり、SMRTBell(商標)アダプターとライゲーションして、環状ライブラリーを作出した。コンカテネーションのロバスト性についてさらに調べるために、本発明者らは、異なるサイズの腫瘍学単位複製配列をコンカテネートした。11のさらなる腫瘍学単位複製配列(異なるサイズである)を、新規のアダプターへとコンカテネートおよびライゲーションし、ナノポアプラットフォーム上でシーケンシングした。11の単位複製配列は、NRASエクソン3、NRASエクソン4.1、NRASエクソン4.2、KRASエクソン2、KRASエクソン3、KRASエクソン4、BRAFエクソン11、PIK3CAエクソン9、EGFRエクソン18、EGFRエクソン20、EGFRエクソン21であった。鋳型は、RSIIプラットフォーム上およびRocheナノポアプラットフォームでシーケンシングした。RSII測定器からの結果を、表3に示し、Rocheナノポアプラットフォームからの結果を、表4に示す。
コンカテネートされた鋳型のシーケンシング
HEGアダプターライブラリーの構築およびシーケンシング
本実施例では、直鎖化プラスミドpUC19(2.7kb)を使用した。ヘキサエチレングリコール(HEG)による18炭素リンカー(図4)を使用する、新規のダンベル型アダプターを使用して、ライブラリーを作った。SMRTBellアダプターは、対照として使用した。50uMの直鎖状アダプターまたはHEGアダプターは、ライブラリーの調製時に使用した。HEG/直鎖状アダプターをライゲーションしたライブラリーを、ビオチニル化シーケンシングプライマーと共にインキュベートして、45℃で30秒間にわたりアニーリングし、0.1℃/秒の減温速度で20℃へと冷却した。これに続き、(ポリメラーゼおよび小孔)複合体へと結合させた。エンリッチメントは、ストレプトアビジンカップリングビーズを使用して、ビオチニル化プライマー複合体に結合させることにより達成し、シーケンシングの準備ができた複合体をエンリッチした。シーケンシングは、Rocheナノポアプラットフォーム上で実施した。結果を、表5に示す。
Claims (15)
- 二本鎖標的核酸の各鎖を個別にシーケンシングする方法であって、
a)反応混合物中で、二本鎖標的核酸を、アダプターへと接続して、アダプター付加標的核酸を形成するステップであって、アダプターが、一体にアニーリングされ、二本鎖領域と、1つだけの不対合鎖を含む一本鎖領域とを形成する短鎖と長鎖とを含み、一本鎖領域が、プライマー結合性部位を含むステップと;
b)プライマーを、各アダプター内の、プライマー結合性部位へとアニーリングするステップと;
c)プライマーを伸長させ、これにより、アダプター付加標的核酸の各鎖をシーケンシングするステップと
を含む方法。 - アダプターが、少なくとも1つのバーコードを含む、請求項1に記載の方法。
- アダプターが、二本鎖領域内に、少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項1に記載の方法。
- 修飾ヌクレオチドが、5’リン酸化末端ヌクレオチドである、請求項1に記載の方法。
- 修飾ヌクレオチドが、アダプターの二本鎖領域の融解温度を修飾する、請求項1に記載の方法。
- 標的エンリッチメントステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- エンリッチメントが、標的特異的プライマーを伴う増幅によるエンリッチメントである、請求項6に記載の方法。
- ステップb)の前に、反応混合物を、グリコシラーゼおよびエンドヌクレアーゼから選択されるDNA損傷特異的切断剤と接触させ、これにより、損傷したDNAを切断するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 標的核酸が、標的配列の、2つまたはこれを超えるコピーのコンカテネートを含む、請求項1に記載の方法。
- コンカテネートの配列から、標的核酸のコンセンサス配列を構築するステップをさらに含む、請求項9に記載の方法。
- 試料中の二本鎖標的核酸から、核酸のライブラリーを作る方法であって、反応混合物中で、二本鎖標的核酸を、アダプターへと接続して、アダプター付加標的核酸を形成するステップであって、アダプターが、一体にアニーリングされ、二本鎖領域と一本鎖領域とを形成する短鎖と長鎖とを含み、一本鎖領域が、単一の鎖だけを含み、一本鎖領域が、プライマー結合性部位を含むステップを含む方法。
- 試料中の標的核酸のライブラリーの配列を決定する方法であって、
a)請求項11に記載の方法により、一本鎖環状標的核酸のライブラリーを形成するステップと;
b)プライマーを、各アダプター付加標的核酸のプライマー結合性部位へとアニーリングするステップと;
c)プライマーを伸長させ、これにより、ライブラリー内の標的核酸の各鎖をシーケンシングするステップと
を含む方法。 - 二本鎖標的核酸をシーケンシングする方法であって、
a)反応混合物中で、標的特異的プライマーの対により、標的核酸を増幅し、これにより、単位複製配列を形成するステップと;
b)単位複製配列を、アダプターへと接続して、アダプター付加標的核酸を形成するステップであって、アダプターが、一体にアニーリングされ、二本鎖領域と一本鎖領域とを形成する短鎖と長鎖とを含み、一本鎖領域が、単一の鎖だけを含み、一本鎖領域が、プライマー結合性部位を含むステップと;
c)シーケンシングプライマーを、プライマー結合性部位へとアニーリングするステップと;
d)プライマーを伸長させ、これにより、標的核酸をシーケンシングするステップと
を含む方法。 - 標的核酸のライブラリーを作る方法であって、
a)反応混合物中で、標的特異的プライマーの対により、標的核酸を増幅し、これにより、単位複製配列を形成するステップと;
b)単位複製配列を、アダプターへと接続して、アダプター付加標的核酸を形成するステップであって、アダプターが、アニーリングされた短鎖と長鎖とを含み、一本鎖領域が、単一の鎖だけを含み、プライマー結合性部位をさらに含むステップと
を含む方法。 - 試料中の標的核酸のライブラリーの配列を決定する方法であって、
a)請求項14に記載の方法により、アダプター付加標的核酸のライブラリーを形成するステップと;
b)プライマーを、各アダプター付加標的核酸のプライマー結合性部位へとアニーリングするステップと;
c)プライマーを伸長させ、これにより、ライブラリー内の各標的核酸をシーケンシングするステップと
を含む方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023175986A JP2024009925A (ja) | 2018-03-02 | 2023-10-11 | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 |
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862638034P | 2018-03-02 | 2018-03-02 | |
US62/638,034 | 2018-03-02 | ||
US201862685817P | 2018-06-15 | 2018-06-15 | |
US62/685,817 | 2018-06-15 | ||
PCT/EP2019/055015 WO2019166565A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-02-28 | Generation of double-stranded dna templates for single molecule sequencing |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023175986A Division JP2024009925A (ja) | 2018-03-02 | 2023-10-11 | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021514646A true JP2021514646A (ja) | 2021-06-17 |
Family
ID=65628782
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020545582A Pending JP2021514651A (ja) | 2018-03-02 | 2019-02-28 | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
JP2020545484A Pending JP2021514646A (ja) | 2018-03-02 | 2019-02-28 | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 |
JP2022128118A Pending JP2022160661A (ja) | 2018-03-02 | 2022-08-10 | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
JP2023175986A Pending JP2024009925A (ja) | 2018-03-02 | 2023-10-11 | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020545582A Pending JP2021514651A (ja) | 2018-03-02 | 2019-02-28 | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022128118A Pending JP2022160661A (ja) | 2018-03-02 | 2022-08-10 | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
JP2023175986A Pending JP2024009925A (ja) | 2018-03-02 | 2023-10-11 | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11898204B2 (ja) |
EP (3) | EP3759251A1 (ja) |
JP (4) | JP2021514651A (ja) |
CN (2) | CN111936635A (ja) |
WO (2) | WO2019166530A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021514651A (ja) * | 2018-03-02 | 2021-06-17 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021180791A1 (en) * | 2020-03-11 | 2021-09-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Novel nucleic acid template structure for sequencing |
CN114763546B (zh) * | 2021-01-12 | 2024-04-12 | 香港城市大学深圳研究院 | 一种dU5`衔接子及其应用和构建的cDNA文库 |
JP2024509424A (ja) | 2021-03-03 | 2024-03-01 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | 生物学的試料からの核酸の電気泳動抽出のための装置および方法 |
WO2023175041A1 (en) * | 2022-03-15 | 2023-09-21 | Illumina, Inc. | Concurrent sequencing of forward and reverse complement strands on concatenated polynucleotides |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08299A (ja) * | 1994-06-17 | 1996-01-09 | Eiken Chem Co Ltd | 標的核酸に対する相補鎖核酸のハイブリダイゼーションの促進法及びこれを用いた核酸の検出法 |
US20070172839A1 (en) * | 2006-01-24 | 2007-07-26 | Smith Douglas R | Asymmetrical adapters and methods of use thereof |
US20160230222A1 (en) * | 2015-02-11 | 2016-08-11 | Zhitong LIU | Methods and compositions for reducing non-specific amplification products |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US656568A (en) | 1899-09-30 | 1900-08-21 | Truman Noble | Binder for loose sheets. |
FR2726277B1 (fr) | 1994-10-28 | 1996-12-27 | Bio Merieux | Oligonucleotide utilisable comme amorce dans une methode d'amplification basee sur une replication avec deplacement de brin |
DE19512361A1 (de) | 1995-04-01 | 1996-10-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Isolierung eines biologischen Materials |
DE19520398B4 (de) | 1995-06-08 | 2009-04-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Magnetisches Pigment |
KR100463475B1 (ko) | 1995-06-08 | 2005-06-22 | 로셰 디아그노스틱스 게엠베하 | 자기성피그먼트 |
DE19622885A1 (de) | 1996-06-07 | 1997-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagenzzubereitung enthaltend magnetische Partikel in Form einer Tablette |
US6958225B2 (en) * | 1999-10-27 | 2005-10-25 | Affymetrix, Inc. | Complexity management of genomic DNA |
GB2378245A (en) | 2001-08-03 | 2003-02-05 | Mats Nilsson | Nucleic acid amplification method |
US7476503B2 (en) | 2004-09-17 | 2009-01-13 | Pacific Biosciences Of California, Inc. | Apparatus and method for performing nucleic acid analysis |
US7393665B2 (en) | 2005-02-10 | 2008-07-01 | Population Genetics Technologies Ltd | Methods and compositions for tagging and identifying polynucleotides |
SG188101A1 (en) | 2008-02-15 | 2013-03-28 | Synthetic Genomics Inc | Methods for in vitro joining and combinatorial assembly of nucleic acid molecules |
CA2719747C (en) | 2008-03-28 | 2018-02-20 | Pacific Biosciences Of California, Inc. | Compositions and methods for nucleic acid sequencing |
CA2765427A1 (en) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Complete Genomics, Inc. | Methods and compositions for long fragment read sequencing |
EP2534263B1 (en) | 2010-02-09 | 2020-08-05 | Unitaq Bio | Methods and compositions for universal detection of nucleic acids |
WO2012012037A1 (en) * | 2010-07-19 | 2012-01-26 | New England Biolabs, Inc. | Oligonucleotide adaptors: compositions and methods of use |
ES2595433T3 (es) | 2010-09-21 | 2016-12-30 | Population Genetics Technologies Ltd. | Aumento de la confianza en las identificaciones de alelos con el recuento molecular |
WO2012092260A1 (en) | 2010-12-27 | 2012-07-05 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions and methods for producing single-stranded circular dna |
EP3578697B1 (en) * | 2012-01-26 | 2024-03-06 | Tecan Genomics, Inc. | Compositions and methods for targeted nucleic acid sequence enrichment and high efficiency library generation |
WO2017013005A1 (en) | 2015-07-17 | 2017-01-26 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Cloning of single-stranded nucleic acid |
WO2017162754A1 (en) * | 2016-03-22 | 2017-09-28 | Vib Vzw | Means and methods for amplifying nucleotide sequences |
JP6889769B2 (ja) * | 2016-07-18 | 2021-06-18 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 核酸配列決定の非対称な鋳型および非対称な方法 |
CN111936635A (zh) | 2018-03-02 | 2020-11-13 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于单分子测序的单链环状dna模板的产生 |
-
2019
- 2019-02-28 CN CN201980014448.XA patent/CN111936635A/zh active Pending
- 2019-02-28 WO PCT/EP2019/054938 patent/WO2019166530A1/en active Application Filing
- 2019-02-28 EP EP19708494.0A patent/EP3759251A1/en not_active Ceased
- 2019-02-28 JP JP2020545582A patent/JP2021514651A/ja active Pending
- 2019-02-28 US US16/977,421 patent/US11898204B2/en active Active
- 2019-02-28 WO PCT/EP2019/055015 patent/WO2019166565A1/en active Application Filing
- 2019-02-28 EP EP19708298.5A patent/EP3759241A1/en active Pending
- 2019-02-28 CN CN201980016038.9A patent/CN111868257A/zh active Pending
- 2019-02-28 EP EP23161950.3A patent/EP4230748A1/en active Pending
- 2019-02-28 JP JP2020545484A patent/JP2021514646A/ja active Pending
-
2022
- 2022-08-10 JP JP2022128118A patent/JP2022160661A/ja active Pending
-
2023
- 2023-10-11 JP JP2023175986A patent/JP2024009925A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08299A (ja) * | 1994-06-17 | 1996-01-09 | Eiken Chem Co Ltd | 標的核酸に対する相補鎖核酸のハイブリダイゼーションの促進法及びこれを用いた核酸の検出法 |
US20070172839A1 (en) * | 2006-01-24 | 2007-07-26 | Smith Douglas R | Asymmetrical adapters and methods of use thereof |
US20160230222A1 (en) * | 2015-02-11 | 2016-08-11 | Zhitong LIU | Methods and compositions for reducing non-specific amplification products |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021514651A (ja) * | 2018-03-02 | 2021-06-17 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 単一分子配列決定のための一本鎖環状dna鋳型の作成 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019166530A1 (en) | 2019-09-06 |
WO2019166565A1 (en) | 2019-09-06 |
JP2022160661A (ja) | 2022-10-19 |
EP3759251A1 (en) | 2021-01-06 |
CN111868257A (zh) | 2020-10-30 |
CN111936635A (zh) | 2020-11-13 |
JP2021514651A (ja) | 2021-06-17 |
EP4230748A1 (en) | 2023-08-23 |
JP2024009925A (ja) | 2024-01-23 |
US20230183797A1 (en) | 2023-06-15 |
US11898204B2 (en) | 2024-02-13 |
EP3759241A1 (en) | 2021-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11155855B2 (en) | Single stranded circular DNA libraries for circular consensus sequencing | |
JP2021514646A (ja) | 単一分子シーケンシングのための、二本鎖dna鋳型の作出 | |
EP3532635B1 (en) | Barcoded circular library construction for identification of chimeric products | |
US11168360B2 (en) | Circularization methods for single molecule sequencing sample preparation | |
US20210115510A1 (en) | Generation of single-stranded circular dna templates for single molecule sequencing | |
WO2019086531A1 (en) | Linear consensus sequencing | |
US20200308576A1 (en) | Novel method for generating circular single-stranded dna libraries | |
EP3682027A1 (en) | Hybridization-extension-ligation strategy for generating circular single-stranded dna libraries | |
US20210163927A1 (en) | Generation of double-stranded dna templates for single molecule sequencing | |
US20220033806A1 (en) | System and Method for Modular and Combinatorial Nucleic Acid Sample Preparation for Sequencing |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201006 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210924 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211207 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220415 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220610 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220819 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221115 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230112 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230614 |