JP2021507689A - 抗体産生をモジュレートするための生体分子の細胞内送達 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年12月5日出願の米国仮出願第62/594,981号に基ずく優先権を主張し、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般に、細胞懸濁物に細胞変形性狭窄を通過させることによって細胞中に化合物を送達することによって、抗体産生をモジュレートするための方法に関する。
抗体は、多数の診断、研究および治療目的のために一般に使用され、有効な免疫応答の媒介において重要な役割を有する。体液性免疫応答の間、シグナル伝達事象の複雑なセットが、抗体産生を調和させる。十分なin−vivo抗体産生は、感染性疾患と戦うため、がんの間の抗腫瘍応答を媒介するため、および有効なワクチン媒介性免疫を生成するために重要である。逆に、内因性抗原に対する抗体の産生は、病原性自己免疫応答に寄与する。
特許出願および公報を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明のある特定の態様は、抗体産生細胞における内因性抗体産生を変更するための方法であって、抗体産生細胞を含む細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が細胞を変形させ、それによって、抗体産生を変更する化合物が抗体産生細胞に進入するような細胞の乱れを引き起こし、前記抗体産生細胞における内因性抗体産生が変更される、方法を提供する。一部の実施形態では、内因性抗体産生は、増強される。一部の実施形態では、内因性抗体産生は、減少される。一部の実施形態では、狭窄は、マイクロ流体チャネル内に含まれる。一部の実施形態では、狭窄は、孔であるか、または孔内に含まれる。一部の実施形態では、孔は、表面中に含まれる。一部の実施形態では、表面は、フィルターである。一部の実施形態では、表面は、メンブレンである。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、狭窄のサイズは、細胞の直径の約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%または約99%である。
本発明は、細胞懸濁物に狭窄を通過させることによって、抗体産生をモジュレートする方法であって、抗体産生をモジュレートする化合物の細胞への送達を可能にする方法を提供する。本発明は、抗体産生細胞を含む細胞懸濁物に狭窄を通過させることによって、抗体産生細胞における内因性抗体産生を変更するための方法であって、狭窄が細胞を変形させ、それによって、抗体産生を変更する化合物が抗体産生細胞に進入するような細胞の乱れを引き起こし、抗体産生細胞における内因性抗体産生が変更される、方法を提供する。本発明は、細胞懸濁物に狭窄を通過させることによって、細胞におけるde novo抗体産生を誘導するための方法であって、狭窄が細胞を変形させ、それによって、抗体産生を開始させる化合物が細胞に進入するような細胞の乱れを引き起こし、細胞におけるde novo抗体産生が誘導される、方法もまた提供する。例えば、抗体をコードする核酸は、抗体を産生することが可能な細胞に送達され得る。
I.一般技術
II.定義
III.内因性抗体産生
IV.de novo抗体産生
V.細胞変形性狭窄を提供するためのマイクロ流体チャネル
VI.細胞変形性狭窄を提供するための孔を有する表面
VII.細胞の乱れ
VIII.送達パラメーター
IX.抗体の産生のための細胞懸濁物
X.抗体産生を変更または誘導するための化合物
XI.適用
XII.システムおよびキット
XIII.例示的な実施形態
以下の実施例は、本開示の種々の実施形態を説明することを目的として与えられ、本開示を限定する意図は決してない。当業者は、本開示が、目標を達成し、言及された目的および利点、ならびに本明細書に固有の目標、目的および利点を得るために、十分に適応されることを容易に理解する。特許請求の範囲によって規定される本開示の精神の範囲内に包含される、本明細書における変化および他の使用は、当業者に想起される。
(実施例1)
de novo B細胞抗体産生を誘導するための、抗体をコードするmRNAの狭窄媒介性送達
(実施例2)
B細胞抗体産生を増強するための、化合物の狭窄媒介性送達
Claims (146)
- 抗体産生細胞における内因性抗体産生を変更するための方法であって、前記抗体産生細胞を含む細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が前記細胞を変形させ、それによって、抗体産生を変更する化合物が前記抗体産生細胞に進入するような前記細胞の乱れを引き起こし、前記抗体産生細胞における内因性抗体産生が変更される、方法。
- 前記内因性抗体産生が増強される、請求項1に記載の方法。
- 前記内因性抗体産生が減少される、請求項1に記載の方法。
- 前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含まれる、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄が、孔であるか、または孔内に含まれる、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記孔が、表面中に含まれる、請求項5に記載の方法。
- 前記表面がフィルターである、請求項6に記載の方法。
- 前記表面がメンブレンである、請求項6に記載の方法。
- 前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の関数である、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%または約99%である、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、混合された細胞集団を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が全血である、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、精製された細胞集団を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、哺乳動物細胞を含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、サル、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヒツジ、ヤギまたはウサギの細胞を含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、ヒト細胞を含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、非哺乳動物細胞を含む、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、細菌、酵母、ニワトリ、カエル、昆虫または線形動物の細胞を含む、請求項1から13または17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、末梢血単核細胞を含む、請求項1から17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体産生細胞が免疫細胞である、請求項1から19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体産生細胞が、B細胞またはB細胞先駆体である、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体産生細胞が、B細胞先駆体、ナイーブB細胞、活性化されたB細胞、メモリーB細胞、形質細胞、B−1細胞、辺縁帯B細胞、濾胞B細胞、調節性B細胞またはB細胞リンパ腫細胞である、請求項21に記載の方法。
- 前記抗体産生細胞が骨髄由来B細胞先駆体である、請求項21または22に記載の方法。
- 前記化合物が、核酸を含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸が、siRNA、mRNA、miRNA、lncRNA、tRNA、saRNAまたはshRNAをコードする、請求項24に記載の方法。
- 前記核酸がプラスミドである、請求項24に記載の方法。
- 前記化合物が、ペプチド核酸を含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、タンパク質−核酸複合体を含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質−核酸複合体が、Cas9タンパク質およびガイドRNAを含む、請求項28に記載の方法。
- ドナーDNAをさらに含む、請求項29に記載の方法。
- 前記核酸が、Cas9タンパク質およびガイドRNAをコードする、請求項24に記載の方法。
- ドナーDNAをさらに含む、請求項31に記載の方法。
- 前記化合物が、タンパク質またはポリペプチドを含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質が、TALENタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはCREリコンビナーゼである、請求項33に記載の方法。
- 前記タンパク質が転写因子である、請求項33に記載の方法。
- 前記タンパク質が、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、請求項33に記載の方法。
- 前記タンパク質が抗アポトーシスタンパク質である、請求項33に記載の方法。
- 前記化合物がB細胞活性化因子である、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が増殖誘導性リガンドである、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、B細胞受容体シグナル伝達分子のアクチベーターである、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物がATPである、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が細胞活性化因子である、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が細胞分化因子である、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が小分子である、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物がナノ粒子中にある、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物がリポソーム中にある、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、ウイルス、ウイルス粒子、またはウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、請求項24に記載の方法。
- 前記化合物が、アデノ随伴ウイルス、アデノ随伴ウイルス粒子、またはアデノ随伴ウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、請求項24に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項1から48のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗原結合性抗体バリアントである、請求項1から49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体のクラスが、IgM、IgG、IgA、IgEまたはIgDである、請求項1から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗原結合性抗体断片である、請求項1から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、Fab、Fab’、Fab’−SH、Fab2、F(ab’)2、Fv、scFv、scFabまたはdsFv断片である、請求項52に記載の方法。
- 前記抗体が全長抗体である、請求項1から51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、単一ドメイン抗体、ナノボディ、VHHまたはVNAR抗体断片である、請求項1から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が単鎖抗体である、請求項1から50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が多特異性抗体である、請求項1から51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗体融合タンパク質である、請求項1から51のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、前記狭窄を通過させるステップの前に、それと同時に、またはその後に、前記化合物と接触される、請求項1から58のいずれか一項に記載の方法。
- 前記チャネルが、約30μmの狭窄長さおよび約4μmの狭窄幅を含む、請求項1から2のいずれか一項に記載の方法。
- 前記チャネルが、約10μmの狭窄長さおよび約4μmの狭窄幅を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記孔のサイズが、約0.4μm、約4μm、約5μm、約8μm、約10μm、約12μmまたは約14μmである、請求項1から3または5のいずれか一項に記載の方法。
- 約−5℃と約45℃との間で実施される、請求項1から62のいずれか一項に記載の方法。
- 前記内因性抗体産生が、少なくとも約25%、約50%、約75%、約100%、約150%、約200%、または約200%よりも大きく変更される、請求項1から63のいずれか一項に記載の方法。
- 前記内因性抗体産生が、前記狭窄を通過しなかった細胞による抗体産生よりも、約25%、約50%、約75%、約100%、約150%、約200%長く、または約200%を超えて長く持続される、請求項1から63のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1から16または19から65のいずれか一項に従って改変された前記抗体産生免疫細胞を患者に導入することによって、前記患者を処置する方法。
- 前記細胞が、患者から単離され、請求項1から16または19から65のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記患者中に戻し導入される、請求項66に記載の方法。
- 前記細胞が、異なる個体から単離され、請求項1から16または19から65のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、患者中に導入される、請求項66に記載の方法。
- 請求項1から16または19から65のいずれか一項に従って改変された前記抗体産生免疫細胞を個体に導入することによって、前記個体における抗体産生を増強する方法。
- 前記細胞が、個体から単離され、請求項1から16または19から65のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記個体中に戻し導入される、請求項69に記載の方法。
- 前記細胞が、個体から単離され、請求項1から16または19から65のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、異なる個体中に導入される、請求項69に記載の方法。
- 前記細胞を、少なくとも1つの電極によって生成された電場と接触させるステップをさらに含む、請求項1から71のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1から72のいずれか一項に記載の方法における使用のための、前記狭窄、細胞懸濁物および化合物を含むシステム。
- 電場を生成するための少なくとも1つの電極をさらに含む、請求項73に記載のシステム。
- 細胞におけるde novo抗体産生を誘導するための方法であって、細胞懸濁物に狭窄を通過させるステップを含み、前記狭窄が前記細胞を変形させ、それによって、抗体産生を開始させる化合物が前記細胞に進入するような前記細胞の乱れを引き起こし、前記細胞におけるde novo抗体産生が誘導される、方法。
- 前記狭窄が、マイクロ流体チャネル内に含まれる、請求項75に記載の方法。
- 前記狭窄が、孔であるか、または孔内に含まれる、請求項75に記載の方法。
- 前記孔が、表面中に含まれる、請求項77に記載の方法。
- 前記表面がフィルターである、請求項78に記載の方法。
- 前記表面がメンブレンである、請求項78に記載の方法。
- 前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の関数である、請求項75から80のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄のサイズが、前記細胞の直径の約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%または約99%である、請求項75から81のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、混合された細胞集団を含む、請求項75から82のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が全血である、請求項75から83のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、精製された細胞集団を含む、請求項75から84のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、哺乳動物細胞を含む、請求項75から85のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、サル、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヒツジ、ヤギまたはウサギの細胞を含む、請求項75から86のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、ヒト細胞を含む、請求項75から86のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、非哺乳動物細胞を含む、請求項75から85のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、細菌、酵母、ニワトリ、カエル、昆虫または線形動物の細胞を含む、請求項75から85または89のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、末梢血単核細胞を含む、請求項75から89のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が、免疫細胞、幹細胞、骨髄由来前駆細胞、赤血球先駆体、線維芽細胞、心臓細胞または細胞株細胞である、請求項75から91のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が、B細胞、T細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、樹状細胞、好塩基球、NK細胞、NKT細胞、マスト細胞または幹細胞である、請求項75から92のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が、B細胞またはB細胞先駆体である、請求項75から93のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が、B細胞先駆体、ナイーブB細胞、活性化されたB細胞、メモリーB細胞、形質細胞、B−1細胞、辺縁帯B細胞、濾胞B細胞、調節性B細胞またはB細胞リンパ腫細胞である、請求項94に記載の方法。
- 前記細胞が骨髄由来B細胞先駆体である、請求項94または95に記載の方法。
- 前記化合物が、核酸を含む、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸が、免疫グロブリンをコードする、請求項97に記載の方法。
- 前記核酸が、前記細胞のゲノム中に組み込まれる、請求項98に記載の方法。
- 前記核酸が、前記細胞のゲノム中に組み込まれない、請求項98に記載の方法。
- 前記核酸が、siRNA、mRNA、miRNA、lncRNA、tRNA、saRNAまたはshRNAをコードする、請求項97に記載の方法。
- 前記核酸がプラスミドである、請求項97に記載の方法。
- 前記化合物が、ペプチド核酸を含む、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、タンパク質−核酸複合体を含む、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質−核酸複合体が、Cas9タンパク質およびガイドRNAを含む、請求項104に記載の方法。
- ドナーDNAをさらに含む、請求項105に記載の方法。
- 前記核酸が、Cas9タンパク質およびガイドRNAをコードする、請求項97に記載の方法。
- ドナーDNAをさらに含む、請求項107に記載の方法。
- 前記化合物が、タンパク質またはポリペプチドを含む、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記タンパク質が、TALENタンパク質、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼまたはCREリコンビナーゼである、請求項109に記載の方法。
- 前記タンパク質が転写因子である、請求項109に記載の方法。
- 前記タンパク質が、トランスポザーゼまたはインテグラーゼ酵素である、請求項109に記載の方法。
- 前記化合物がB細胞活性化因子である、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が増殖誘導性リガンドである、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、B細胞受容体シグナル伝達分子のアクチベーターである、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が細胞活性化因子である、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が細胞分化因子である、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が小分子である、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物がナノ粒子中にある、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物がリポソーム中にある、請求項75から96のいずれか一項に記載の方法。
- 前記化合物が、ウイルス、ウイルス粒子、またはウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、請求項97に記載の方法。
- 前記化合物が、アデノ随伴ウイルス、アデノ随伴ウイルス粒子、またはアデノ随伴ウイルスカプシドを含むビヒクル中にある、請求項97に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項75から122のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗原結合性抗体バリアントである、請求項75から123のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体のクラスが、IgM、IgG、IgA、IgEまたはIgDである、請求項75から124のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗原結合性抗体断片である、請求項75から124のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、Fab、Fab’、Fab’−SH、Fab2、F(ab’)2、Fv、scFv、scFabまたはdsFv断片である、請求項126に記載の方法。
- 前記抗体が全長抗体である、請求項75から125のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、単一ドメイン抗体、ナノボディ、VHHまたはVNAR抗体断片である、請求項75から124のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が単鎖抗体である、請求項75から124のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が多特異性抗体である、請求項75から125のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が抗体融合タンパク質である、請求項75から125のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞懸濁物が、前記狭窄を通過させるステップの前に、それと同時に、またはその後に、前記化合物と接触される、請求項75から132のいずれか一項に記載の方法。
- 前記チャネルが、約30μmの狭窄長さおよび約4μmの狭窄幅を含む、請求項75から76のいずれか一項に記載の方法。
- 前記チャネルが、約10μmの狭窄長さおよび約4μmの狭窄幅を含む、請求項75から76のいずれか一項に記載の方法。
- 前記孔のサイズが、約0.4μm、約4μm、約5μm、約8μm、約10μm、約12μmまたは約14μmである、請求項75または77のいずれか一項に記載の方法。
- 約−5℃と約45℃との間で実施される、請求項75から136のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項75から88または91から137のいずれか一項に従って改変された前記細胞を患者に導入することによって、前記患者を処置する方法。
- 前記細胞が、患者から単離され、請求項75から88または91から137のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記患者中に戻し導入される、請求項138に記載の方法。
- 前記細胞が、異なる個体から単離され、請求項75から88または91から137のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、患者中に導入される、請求項138に記載の方法。
- 請求項75から88または91から137のいずれか一項に従って改変された前記細胞を個体に導入することによって、前記個体におけるde novo抗体産生を誘導する方法。
- 前記細胞が、個体から単離され、請求項75から88または91から137のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、前記個体中に戻し導入される、請求項141に記載の方法。
- 前記細胞が、個体から単離され、請求項75から88または91から137のいずれか一項に記載の方法に従って改変され、異なる個体中に導入される、請求項141に記載の方法。
- 前記細胞を、少なくとも1つの電極によって生成された電場と接触させるステップをさらに含む、請求項75から143のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項75から144のいずれか一項に記載の方法における使用のための、前記狭窄、細胞懸濁物および化合物を含むシステム。
- 電場を生成するための少なくとも1つの電極をさらに含む、請求項145に記載のシステム。
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