JP2021147380A - Antioxidant composition - Google Patents

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ゴーナム マンドー
Ghoneum Mamdooh
ゴーナム マンドー
義江 薮本
Yoshie Yabumoto
義江 薮本
鐵美 薮本
Tetsumi Yabumoto
鐵美 薮本
陽子 末松
Yoko Suematsu
陽子 末松
百合子 吉田
Yuriko Yoshida
百合子 吉田
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Abstract

To provide novel antioxidant compositions containing a natural product or a primary processed product thereof as an active ingredient.MEANS FOR SOLVING THE PROBLEM: Provided is an antioxidant composition containing a fermented milk product of Lactobacillus kefiri or a processed product thereof as an active ingredient. This antioxidant composition can be used to reduce oxidative stress. Further, the Lactobacillus kefiri is preferably Lactobacillus Kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896).SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、抗酸化用組成物に関するものである。 The present invention relates to antioxidant compositions.

酸化ストレスは老化プロセスに関与しており、これは活性酸素種(ROS)の形成に密接に関連すると言われている。これらの活性酸素種(ROS)は非常に反応性が高く、核酸、タンパク質、脂質などの多くの生体高分子を酸化的に損傷する可能性があり、遺伝的変異や細胞老化を引き起こす可能性がある。 Oxidative stress is involved in the aging process, which is said to be closely related to the formation of reactive oxygen species (ROS). These reactive oxygen species (ROS) are highly reactive and can oxidatively damage many biopolymers such as nucleic acids, proteins and lipids, which can lead to genetic variation and cellular senescence. be.

老化したラットではより高いレベルのフリーラジカルが報告されている。これは抗酸化物質レベルの低下に起因している。抗酸化物質レベルの年齢依存的な低下は、ラット及びヒトで十分に実証されている。例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼなどの酵素的抗酸化物質のmRNAレベルは、老年ラットの肝臓で定量化され、減少していることが判明している。 Higher levels of free radicals have been reported in aged rats. This is due to lower antioxidant levels. Age-dependent reductions in antioxidant levels have been well demonstrated in rats and humans. For example, mRNA levels of enzymatic antioxidants such as superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase have been quantified and found to be reduced in the liver of aged rats.

加齢中に変化する細胞の酸化還元状態は、食事によって変更される場合がある。現在世界中で20億人を超える人々に影響を及ぼしている鉄やその他の栄養不足は、酸化ストレスを誘発することが示されている。これまでの研究は、フェリチンが内皮細胞並びにマウス及びヒト白血病細胞の酸化的損傷に対する保護剤として作用することを示唆している。我々は最近、二価及び三価の鉄酸塩に由来する鉄ベースのヒドロ鉄酸塩流体の抗酸化効果が、インビトロでのマウス脾細胞の酸化ストレス誘発アポトーシスに対する保護効果を示すことを示した(非特許文献1)。 The redox state of cells that changes during aging may be altered by diet. Iron and other undernourishments, which currently affect more than 2 billion people worldwide, have been shown to induce oxidative stress. Previous studies suggest that ferritin acts as a protective agent against oxidative damage to endothelial cells as well as mouse and human leukemia cells. We have recently shown that the antioxidant effect of iron-based hydroferrate fluids derived from divalent and trivalent ferrates exhibits a protective effect on oxidative stress-induced apoptosis of mouse splenocytes in vitro. (Non-Patent Document 1).

一方、乳酸菌は、人間の寿命を延ばす可能性があると長い間考えられてきたもう1つの天然の食事関連物質である。生物学者Eli Metchnikoffは、1900年代初期にこの効果を示唆した(非特許文献2)。乳酸菌は発酵乳や食品の製造によく使用され、発酵乳に含まれる乳酸菌株は腸内細菌叢に見られる通常の細菌である。乳酸菌は、プロバイオティクス細菌の健全なバランスを維持しながら、腸内の病原菌を減らすのに役立つことが示されている。さらに、乳酸菌は、関節リウマチ、クローン病、癌を含むさまざまな疾患に有益な効果があることが示されている。 Lactic acid bacteria, on the other hand, are another natural diet-related substance that has long been thought to have the potential to extend human lifespan. Biologist Eli Metchnikoff suggested this effect in the early 1900s (Non-Patent Document 2). Lactic acid bacteria are often used in the production of fermented milk and foods, and the lactic acid bacteria strain contained in fermented milk is a normal bacterium found in the intestinal flora. Lactic acid bacteria have been shown to help reduce intestinal pathogens while maintaining a healthy balance of probiotic bacteria. In addition, lactic acid bacteria have been shown to have beneficial effects on a variety of diseases, including rheumatoid arthritis, Crohn's disease, and cancer.

Badr El-Din NK, Noaman E, Fattah SM, Ghoneum M. Reversal of age-associated oxidative stress in rats by MRN-100, a hydro-ferrate fluid. In Vivo. 2010; 24(4):525-33.Badr El-Din NK, Noaman E, Fattah SM, Ghoneum M. Reversal of age-associated oxidative stress in rats by MRN-100, a hydro-ferrate fluid. In Vivo. 2010; 24 (4): 525-33. Metchinkoff E and Metchinkoff II: The Prolongation of Life: Optimistic Studies. Putnam, New York, NY, pp109-132, 1908.Metchinkoff E and Metchinkoff II: The Prolongation of Life: Optimistic Studies. Putnam, New York, NY, pp109-132, 1908.

抗酸化用組成物の新たな有効成分を提供できれば治療や処置の選択の幅が広がる。また、天然産物もしくはその一次的な処理物が有効成分であれば、副作用のリスクも少ないと考えられるので、望ましい。 If new active ingredients of antioxidant compositions can be provided, the range of treatment and treatment options will be expanded. Further, if the natural product or its primary processed product is an active ingredient, the risk of side effects is considered to be low, which is desirable.

したがって、本発明の目的は、天然産物もしくはその一次的な処理物を有効成分とした新規な抗酸化用組成物を提供することにある。 Therefore, an object of the present invention is to provide a novel antioxidant composition containing a natural product or a primary processed product thereof as an active ingredient.

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のとおりである。
[1]ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化用組成物。
[2]酸化ストレスを低減させるために使用する、[1]に記載の抗酸化用組成物。
[3]前記ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)を含む、[1]または[2]に記載の抗酸化用組成物。
The present inventors have diligently studied in order to achieve the above object, and have completed the present invention. That is, the present invention is as follows.
[1] An antioxidant composition containing a fermented milk product of Lactobacillus kefiri or a processed product thereof as an active ingredient.
[2] The antioxidant composition according to [1], which is used to reduce oxidative stress.
[3] The antioxidant used according to [1] or [2], wherein the Lactobacillus kefiri includes Lactobacillus Kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896). Composition.

本発明によれば、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を有効成分にするので、安全で副作用少なく抗酸化効果を得ることができる、新規な抗酸化用組成物を提供することができる。 According to the present invention, since the milk fermented product of Lactobacillus kefiri or a processed product thereof is used as an active ingredient, a novel antioxidant composition capable of obtaining a safe and antioxidant effect with few side effects is provided. can do.

試験例6において生化学的血清パラメーターの評価を行った結果を示す図表であり、図1(a)は血清中のALT(EC2.6.1.2)の酵素活性を測定した結果を示す図表であり、図1(b)は血清中のAST(EC2.6.1.1)の酵素活性を測定した結果を示す図表であり、図1(c)は血清中の総タンパク質の濃度を測定した結果を示す図表である。It is a chart showing the result of evaluating the biochemical serum parameters in Test Example 6, and FIG. 1 (a) is the chart showing the result of measuring the enzyme activity of ALT (EC 2.6.1.2) in serum. 1 (b) is a chart showing the results of measuring the enzyme activity of AST (EC 2.6.1.1) in serum, and FIG. 1 (c) is a chart showing the concentration of total protein in serum. It is a chart which shows the result of this. 試験例6において生化学的血清パラメーターの評価を行った結果を示す図表であり、図2(a)は血清中の総コレステロール(TC)の濃度を測定した結果を示す図表であり、図2(b)は血清中のトリグリセリド(TG)の濃度を測定した結果を示す図表であり、図2(c)は血清中の低密度リポタンパク質(LDL)の濃度を測定した結果を示す図表であり、図2(d)は血清中の高密度リポタンパク質(HDL)の濃度を測定した結果を示す図表である。FIG. 2A is a chart showing the results of evaluation of biochemical serum parameters in Test Example 6, and FIG. 2A is a chart showing the results of measuring the concentration of total cholesterol (TC) in serum, and FIG. 2 (a). b) is a chart showing the result of measuring the concentration of triglyceride (TG) in serum, and FIG. 2 (c) is a chart showing the result of measuring the concentration of low-density lipoprotein (LDL) in serum. FIG. 2D is a chart showing the results of measuring the concentration of high-density lipoprotein (HDL) in serum.

ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)としては、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)に属する微生物であればよく、特に制限はないが、好ましくはラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)を用いる。ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、公知の方法により、又はそれに準じて培養を行うことができ、例えば、市販のMRS培地(商品名「Lactobacilli MRS Broth」、Difco社製)を用いて嫌気静置培養することなどにより、大量培養が可能である。 The Lactobacillus kefiri may be a microorganism belonging to Lactobacillus kefiri, and is not particularly limited, but is preferably Lactobacillus Kefiri P-IF (accession number FERM). BP-10896) is used. Lactobacillus kefiri can be cultured by a known method or according to it, and is anaerobically allowed to stand using, for example, a commercially available MRS medium (trade name "Lactobacilli MRS Broth", manufactured by Difco). Mass culture is possible by culturing.

ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物は、乳原料にラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)をスターターとして接種して所定の発酵条件に曝すことによって得ることができる。 A milk fermented product of Lactobacillus kefiri can be obtained by inoculating a dairy raw material with Lactobacillus kefiri as a starter and exposing it to predetermined fermentation conditions.

乳発酵のための乳原料としては、例えば、牛乳、乳清、発酵乳、乳酸菌飲料、脱脂乳、脱脂粉乳、調製粉乳、全脂粉乳、濃縮乳、脱脂濃縮乳、練乳、脱脂練乳、加糖練乳、加糖脱脂練乳などが挙げられる。これらはそのまま、あるいは適宜水等に溶解又は希釈したり、濃縮したりした後、必要に応じてオートクレーブ滅菌等の処理を施して、乳発酵のための原料とすることができる。 Milk raw materials for milk fermentation include, for example, milk, milk boiled milk, fermented milk, lactic acid bacteria beverage, defatted milk, defatted powdered milk, prepared powdered milk, whole fat powdered milk, concentrated milk, defatted concentrated milk, condensed milk, defatted condensed milk, sweetened condensed milk. , Sweetened defatted condensed milk and the like. These can be used as raw materials for milk fermentation as they are, or after being appropriately dissolved, diluted, or concentrated in water or the like, and then subjected to a treatment such as autoclave sterilization as necessary.

発酵用微生物(スターター)の接種方法としては、MRS培地等による前培養液を添加する方法や、前に発酵を行ったときの残りの乳発酵物を添加する方法などが挙げられる。培養条件としては、20〜30℃、より好ましくは24〜26℃で、1〜10日、より好ましくは3〜7日間嫌気静置培養する方法などが好ましく採用される。 Examples of the method for inoculating the fermentation microorganism (starter) include a method of adding a pre-culture solution using an MRS medium or the like, and a method of adding the remaining milk fermented product from the previous fermentation. As the culture conditions, a method of anaerobically standing culture at 20 to 30 ° C., more preferably 24 to 26 ° C. for 1 to 10 days, more preferably 3 to 7 days is preferably adopted.

上記乳発酵のスターターとしては、複数の菌種を併用してもよい。これによれば、複数の微生物が共生的に生育することによって乳発酵が起こるので、味や外観がよい乳発酵物が得られる。例えば、カザツタニア ツリセンシス(Kazachstania turicensis)、カザツタニア ユニスポラ(Kazachstania unispora)、及びクリュイベロミセス マルシアヌス(Kluyveromyces marxianus)からなる群から選ばれた少なくとも1種の酵母菌を併用してもよい。あるいは、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)として、上記ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)に加えてラクトバチルス ケフィリP-B1(Lactobacillus kefiri P-B1)(受託番号FERM BP-11115)などを併用してもよい。 As the starter of the milk fermentation, a plurality of bacterial species may be used in combination. According to this, since milk fermentation occurs by the symbiotic growth of a plurality of microorganisms, a milk fermented product having a good taste and appearance can be obtained. For example, at least one yeast selected from the group consisting of Kazachstania turicensis, Kazachstania unispora, and Kluyveromyces marxianus may be used in combination. Alternatively, as Lactobacillus kefiri, in addition to the above-mentioned Lactobacillus Kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896), Lactobacillus kefiri P-B1 (Lactobacillus kefiri P-B1) ( The accession number FERM BP-11115) may be used together.

特に好ましい態様では、上記乳発酵のスターターとして、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)を主要微生物として、その他に副次的微生物として、ラクトバチルス ケフィリP-B1(Lactobacillus kefiri P-B1)(受託番号FERM BP-11115)、カザツタニア ツリセンシスP-Y3(Kazachstania turicensis P-Y3)(受託番号FERM BP-11116)、カザツタニア ユニスポラP-Y4(Kazachstania unispora P-Y4)(受託番号FERM BP-11117)、及びクリュイベロミセス マルシアヌスP-Y5(Kluyveromyces marxianus P-Y5)(受託番号FERM BP-11118)を少なくとも含む複合微生物を用いて、上記乳原料で発酵し、発酵後の乳発酵物の微生物群中に、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)が80菌数%以上、より好ましくは90菌数%以上占めるように調製して、そのように調製された乳発酵物を用いることが好ましい。 In a particularly preferred embodiment, as the starter of the milk fermentation, Lactobacillus kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896) is used as a main microorganism, and Lactobacillus kefiri P is used as a secondary microorganism. -B1 (Lactobacillus kefiri P-B1) (accession number FERM BP-11115), Kazachstania turicensis P-Y3 (accession number FERM BP-11116), Kazachstania unispora P-Y4 (Kazachstania unispora P-Y4) ) (Commissioned number FERM BP-11117) and Kluyveromyces marxianus P-Y5 (Commissioned number FERM BP-11118) Lactobacillus kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896) occupies 80% or more, more preferably 90% or more in the microbial community of the later milk fermented product. It is preferred to prepare and use the milk fermented product so prepared.

本発明においては、抗酸化用組成物の有効成分として、上記のように得られたラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を用いる。ここで「処理物」には、乳発酵物に対して加熱殺菌、濃縮、乾燥、菌体の分離、菌体の除去、菌体の破砕、水系溶媒や含水アルコール系溶媒等による希釈、水系溶媒や含水アルコール系溶媒等への抽出などの処理の1種又は2種以上の組み合わせを施して調製したものが含まれる。また、水系溶媒あるいは含水アルコール系溶媒等で抽出した抽出物に対して加熱殺菌、濃縮、乾燥、固形物の除去などの処理の1種又は2種以上の組み合わせを施して調製したものも含まれる。 In the present invention, the milk fermented product of Lactobacillus kefiri obtained as described above or a processed product thereof is used as the active ingredient of the antioxidant composition. Here, the "processed product" includes heat sterilization, concentration, drying, separation of bacterial cells, removal of bacterial cells, crushing of bacterial cells, dilution with an aqueous solvent, a hydroalcoholic solvent, etc., and an aqueous solvent. Includes those prepared by performing one or a combination of two or more treatments such as extraction into a hydroalcoholic solvent or the like. In addition, extracts prepared by subjecting an extract extracted with an aqueous solvent or a hydroalcoholic solvent to one or a combination of two or more treatments such as heat sterilization, concentration, drying, and removal of solids are also included. ..

例えば、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、その菌体に60〜120℃、より好ましくは、95〜120℃の加熱処理を施すことにより、死菌化される。よって、乳発酵物を噴霧乾燥により粉末化することができるが、それと同時に付加される熱で死菌化されていてもよい。あるいは、乳発酵物の粉末化は凍結乾燥によって行ってもよい。これによれば、乳発酵物の凍結乾燥物を水等で戻すことにより、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)を生きた状態で提供することも可能である。 For example, Lactobacillus kefiri is killed by subjecting its cells to a heat treatment at 60 to 120 ° C, more preferably 95 to 120 ° C. Therefore, the fermented milk product can be pulverized by spray drying, but it may be killed by the heat added at the same time. Alternatively, the milk fermented product may be pulverized by freeze-drying. According to this, it is also possible to provide Lactobacillus kefiri in a living state by reconstitution of the freeze-dried milk fermented product with water or the like.

本発明の抗酸化用組成物においては、上記有効成分以外に、他の素材を配合することに特に制限はなく、必要に応じて、薬学的に許容される基材や担体を添加して、公知の製剤方法によって、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、散剤、液剤、粉末剤、ゼリー状剤、飴状剤、注射剤、吸引剤、塗布剤等の形態にして利用することができる。 In the antioxidant composition of the present invention, there is no particular limitation on blending other materials other than the above active ingredients, and if necessary, a pharmaceutically acceptable base material or carrier is added. It can be used in the form of tablets, granules, capsules, pills, powders, liquids, powders, jelly-like agents, candy-like agents, injections, suction agents, coating agents and the like by a known formulation method. can.

本発明の抗酸化用組成物は、ヒト又は動物に投与すればよく、その投与形態に特に制限はない。例えば、経口投与、静脈内投与、脳内局所投与、腹腔内投与、吸引、経鼻投与などが挙げられる。なかでも、摂取者の負担の軽減や服用のし易さの観点からは、経口投与の形態が好ましい。 The antioxidant composition of the present invention may be administered to humans or animals, and the administration form thereof is not particularly limited. For example, oral administration, intravenous administration, local administration in the brain, intraperitoneal administration, aspiration, nasal administration and the like can be mentioned. In particular, the oral administration form is preferable from the viewpoint of reducing the burden on the ingestor and easiness of taking.

本発明の抗酸化用組成物を経口投与する場合、その1日当りの投与量としては、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物の乾燥物の状態の量で換算した量で0.01(g/kg体重)〜10(g/kg体重)であることが好ましく、0.05(g/kg体重)〜5(g/kg体重)であることがより好ましく、0.1(g/kg体重)〜1(g/kg体重)であることが更により好ましい。あるいは、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物中に含まれる該ケフィリ菌の菌数で換算した量で1×1013(個/kg体重)〜1×1016(個/kg体重)であることが好ましく、5×1013(個/kg体重)〜5×1015(個/kg体重)であることがより好ましく、1×1014(個/kg体重)〜1×1015(個/kg体重)であることが更により好ましい。投与量がそれらの範囲よりも少ないと、十分な効果が得られにくく、投与量がその範囲よりも多いと、何らかの副作用を生じるリスクが高まる。 When the antioxidant composition of the present invention is orally administered, the daily dose thereof is 0.01 (Lactobacillus kefiri) converted to the amount of the dried product of the milk fermented product (0.01). It is preferably g / kg body weight) to 10 (g / kg body weight), more preferably 0.05 (g / kg body weight) to 5 (g / kg body weight), and 0.1 (g / kg body weight). Body weight) to 1 (g / kg body weight) is even more preferred. Alternatively, the amount converted into the number of the kefili bacteria contained in the milk fermented product of Lactobacillus kefiri is 1 × 10 13 (pieces / kg body weight) to 1 × 10 16 (pieces / kg body weight). It is preferably 5 × 10 13 (pieces / kg body weight) to 5 × 10 15 (pieces / kg body weight), more preferably 1 × 10 14 (pieces / kg body weight) to 1 × 10 15 (pieces / kg body weight). / Kg body weight) is even more preferable. If the dose is less than those ranges, it is difficult to obtain a sufficient effect, and if the dose is higher than that range, the risk of causing some side effects increases.

なお、ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物の乾燥物中に含まれる該ケフィリ菌の菌数は、5×1012(個/g)〜3×1015(個/g)であることが好ましく、5×1013(個/g)〜2×1015(個/g)であることがより好ましく、5×1014(個/g)〜1×1015(個/g)であることが更により好ましい。 The number of the kefir bacteria contained in the dried product of the milk fermented product of Lactobacillus kefiri shall be 5 × 10 12 (pieces / g) to 3 × 10 15 (pieces / g). Is preferable, and 5 × 10 13 (pieces / g) to 2 × 10 15 (pieces / g) is more preferable, and 5 × 10 14 (pieces / g) to 1 × 10 15 (pieces / g). Is even more preferable.

本発明の抗酸化用組成物は、例えば、年齢に伴う酸化ストレスの改善のために好ましく用いることができる。典型的に、例えば30歳以上、より典型的には40歳以上、更により典型的には50歳以上、最も典型的には60歳以上のヒトの年齢に伴う酸化ストレスの改善のために、好ましく用いることができる。また、ペット動物等に適用してもよく、特に、上記ヒトの年齢に相当する高齢のペット動物等の年齢に伴う酸化ストレの改善のために、好ましく用いることができる。例えば、イヌの場合、4年齢以上、より典型的には6年齢以上、更により典型的には8年齢以上、最も典型的には10年齢以上のイヌの年齢に伴う酸化ストレスの改善のために、好ましく用いることができる。また、例えば、ネコの場合、4年齢以上、より典型的には6年齢以上、更により典型的には9年齢以上、最も典型的には11年齢以上のネコの年齢に伴う酸化ストレスの改善のために、好ましく用いることができる。 The antioxidant composition of the present invention can be preferably used, for example, for improving oxidative stress with age. Typically, for example, for the improvement of age-related oxidative stress in humans, eg, 30 years or older, more typically 40 years or older, even more typically 50 years or older, most typically 60 years or older. It can be preferably used. In addition, it may be applied to pet animals and the like, and in particular, it can be preferably used for improving the oxidative strain associated with the age of elderly pet animals and the like corresponding to the human age. For example, in the case of dogs, for the improvement of oxidative stress associated with the age of dogs over 4 years old, more typically over 6 years old, even more typically over 8 years old, most typically over 10 years old. , Can be preferably used. Also, for example, in the case of cats, improvement of oxidative stress associated with the age of cats of 4 years or older, more typically 6 years or older, even more typically 9 years or older, and most typically 11 years or older. Therefore, it can be preferably used.

本発明の抗酸化用組成物を投与するための製品の形態としては、その作用効果を損なわない限り、特に制限はない。例えば、医薬品、医薬部外品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、など各種の製品形態で、あるいはそれら製品と組み合わせて使用されることが可能である。あるいはペット動物等のための動物用製品であってもよい。 The form of the product for administering the antioxidant composition of the present invention is not particularly limited as long as its action and effect are not impaired. For example, it can be used in various product forms such as pharmaceuticals, quasi-drugs, health foods, functional foods, dietary supplements, supplements, etc., or in combination with these products. Alternatively, it may be an animal product for pet animals and the like.

以下に例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの例は本発明の範囲を限定するものではない。 The present invention will be specifically described below with reference to examples, but these examples do not limit the scope of the present invention.

[材料及び方法]
(1)抗酸化用組成物の調製
ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)をMRS液体培地に植菌して、25℃で前培養し、これを主要微生物として、その他に副次的微生物として、ラクトバチルス ケフィリP-B1(Lactobacillus kefiri P-B1)(受託番号FERM BP-11115)、カザツタニア ツリセンシスP-Y3(Kazachstania turicensis P-Y3)(受託番号FERM BP-11116)、カザツタニア ユニスポラP-Y4(Kazachstania unispora P-Y4)(受託番号FERM BP-11117)、及びクリュイベロミセス マルシアヌスP-Y5(Kluyveromyces marxianus P-Y5)(受託番号FERM BP-11118)を少なくとも含む複合微生物をスターターとして用いて、脱脂乳培地(イオン交換水90質量部に脱脂粉乳10質量部を混合し、オートクレーブ滅菌して調製した培地)に植菌して、25℃、5日間嫌気静置培養し発酵させた。得られた発酵培養物は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)が90菌数%以上を占める、黄褐色をしたヨーグルト状の液体であった。これを加熱処理後、凍結乾燥し、以下の動物実験に用いた。なお、乾燥物中の菌数濃度としては、およそ1×1015/gであった。また、以下簡略化のためこの調製物を「PFT」と称する。
[Materials and methods]
(1) Preparation of composition for antioxidant Lactobacillus kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896) was inoculated into MRS liquid medium and pre-cultured at 25 ° C. As a major microorganism and other secondary microorganisms, Lactobacillus kefiri P-B1 (accession number FERM BP-11115), Kazachstania turicensis P-Y3 (accession number FERM) BP-11116), Kazachstania unispora P-Y4 (trust number FERM BP-11117), and Kluyveromyces marxianus P-Y5 (trust number FERM BP-11118) Using at least the complex microorganism contained as a starter, the cells were inoculated into a defatted milk medium (a medium prepared by mixing 90 parts by mass of ion-exchanged water with 10 parts by mass of defatted powdered milk and sterilizing by autoclave), and anaerobic at 25 ° C. for 5 days. It was statically cultured and fermented. The fermented culture obtained was a yellowish brown yogurt-like liquid in which Lactobacillus kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896) accounted for more than 90% of the bacteria. This was heat-treated, freeze-dried, and used in the following animal experiments. The bacterial count concentration in the dried product was approximately 1 × 1015 / g. In addition, for the sake of brevity, this preparation will be referred to as "PFT" below.

(2)動物及び実験
10ヶ月齢の雄のスイスアルビノマウス(体重約23−28g:老年マウス)及び2ヶ月齢の雄のスイスアルビノマウス(体重約11−22g:若年マウス)を使用した。マウスは、グループ1(正常な若年マウス)、グループ2(正常な老年マウス)及びグループ3(PFT処置群)に分類した。PFT処置群では、水を自由に摂取できる状態で6週間毎日2mg/kg体重の用量でPFTを経口投与した。6週間後、一晩絶食した動物に麻酔をかけ、腹部大動脈から注射器を使用して血液を採取し、血清を分離して分析まで−80℃で保存した。また、肝臓及び脳組織を迅速に切除し、氷冷0.9%NaClで洗浄した後、液体窒素で凍結し、同様に−80℃で保存した。
(2) Animals and Experiments 10-month-old male Swiss albino mice (weight about 23-28 g: aged mice) and 2-month-old male Swiss albino mice (weight about 11-22 g: young mice) were used. Mice were classified into Group 1 (normal young mice), Group 2 (normal aged mice) and Group 3 (PFT treatment group). In the PFT-treated group, PFT was orally administered at a dose of 2 mg / kg body weight daily for 6 weeks with free water intake. Six weeks later, animals fasted overnight were anesthetized, blood was drawn from the abdominal aorta using a syringe, and serum was separated and stored at -80 ° C until analysis. In addition, the liver and brain tissue were rapidly excised, washed with ice-cooled 0.9% NaCl, frozen in liquid nitrogen, and stored at −80 ° C. in the same manner.

分析のためのサンプルとして、組織をPBS、0.1M、pH7.4(9mL/g組織)でホモジナイズし、4℃、6000rpmで、20分間遠心分離して、その上清を収集した。 As a sample for analysis, tissues were homogenized with PBS, 0.1 M, pH 7.4 (9 mL / g tissue) and centrifuged at 4 ° C., 6000 rpm for 20 minutes and the supernatant was collected.

[試験例1]
<脂質過酸化レベル及び一酸化窒素レベルの評価>
脂質過酸化レベルは、マロンジアルデヒド(MDA)含量を、チオバルビツール酸反応性物質(TBARS)の形で分析することにより評価した。具体的には、500μLのサンプルを1mLのトリクロロ酢酸(TCA、15%)に加え、3000rpmで10分間遠心分離した。1mLの上清を500μLのチオバルビツール酸(TBA、0.7%)と混合し、沸騰水浴で10分間加熱した後、冷却し、532nmの波長の光で吸光度を測定した。TBARSレベルは、下記式に従って計算して、測定サンプル用量中の量(nmol/mL)の単位で求めた(BROWN WD, TAPPEL AL「Fatty acid oxidation by carp liver mitochondria.」Arch Biochem Biophys. 1959 Nov; 85: pp149-58.)。
[Test Example 1]
<Evaluation of lipid peroxidation level and nitric oxide level>
Lipid peroxidation levels were assessed by analyzing malondialdehyde (MDA) content in the form of thiobarbituric acid-reactive material (TBARS). Specifically, a 500 μL sample was added to 1 mL of trichloroacetic acid (TCA, 15%) and centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes. 1 mL of the supernatant was mixed with 500 μL of thiobarbituric acid (TBA, 0.7%), heated in a boiling water bath for 10 minutes, cooled and measured for absorbance with light of a wavelength of 532 nm. The TBARS level was calculated according to the following formula and calculated in units of the amount (nmol / mL) in the measurement sample dose (BROWN WD, TAPPEL AL "Fatty acid oxidation by carp liver mitochondria." Arch Biochem Biophys. 1959 Nov; 85: pp149-58.).

TBARSレベル(nmol/mL)=サンプルの吸光度532nm/156 TBARS level (nmol / mL) = sample absorbance 532 nm / 156

一酸化窒素(NO)レベルは、グリース反応を利用して、次のようにして測定した。まず、100μLのサンプルを100μLの酸性グリース試薬(2.5%リン酸中に1%スルファニルアミド及び0.1%ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩を含む)に添加し、混合後、540nmの波長の光で吸光度を測定した。NOレベルは、別途、標準物質を用いて異なる濃度にわたる標準曲線を作成して測定結果をあてはめることで、測定サンプル用量中の濃度(μM)の単位で求めた。 Nitric oxide (NO) levels were measured using the grease reaction as follows. First, 100 μL of the sample was added to 100 μL of acidic grease reagent (containing 1% sulfanilamide and 0.1% naphthylethylenediamine dihydrochloride in 2.5% phosphoric acid), mixed, and then with light having a wavelength of 540 nm. The absorbance was measured. The NO level was determined in units of concentration (μM) in the measurement sample dose by separately creating standard curves over different concentrations using standard substances and applying the measurement results.

Figure 2021147380
Figure 2021147380

表1に示されるように、以下の(1)〜(2)のことが明らかとなった。
(1)TBARSレベル
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるTBARSレベルが有意に増加した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で55%、脳で81%、及び血清で73%と各組織におけるTBARSレベルが有意に減少した。
As shown in Table 1, the following (1) to (2) were clarified.
(1) TBARS level In aged mice, TBARS levels in liver, brain, and serum tissues were significantly increased as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, TBARS levels in each tissue were significantly reduced to 55% in the liver, 81% in the brain, and 73% in serum, as compared with the aged mice.

(2)NOレベル
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるNOレベルが有意に増加した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で47%、脳で60%、及び血清で82%と各組織におけるNOレベルが有意に減少した。
(2) NO level In aged mice, NO levels in liver, brain, and serum tissues were significantly increased as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, the NO level in each tissue was significantly reduced to 47% in the liver, 60% in the brain, and 82% in serum as compared with the aged mice.

以上から、PFT投与により、年齢に関連したTBARSレベル及びNOレベルの増加が打ち消されることが判明し、換言すれば、PFTにより酸化ストレスが低減されることが明らかとなった。 From the above, it was clarified that the administration of PFT counteracted the increase in TBARS level and NO level related to age, in other words, it was clarified that oxidative stress was reduced by PFT.

[試験例2]
<還元型グルタチオンレベル及びグルタチオンS−トランスフェラーゼ活性の評価>
還元型グルタチオン(GSH)レベルは、次のようにして測定した。まず、100μLのサンプルを100μLのスルホサリチル酸(4%)と混合した。その後、4℃で少なくとも1時間保持し、4℃で1200rpm、10分間遠心分離した。100μLの上清を2.7mLのリン酸緩衝液(0.1M、pH7.4)及び0.2mLのDTNB試薬(5,5’-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)と混合し、5分間インキュベートした。黄色の生成物について412nmの波長の光で吸光度を測定した。GSHレベルは、別途、標準物質を用いて異なる濃度にわたる標準曲線を作成して測定結果をあてはめることで、測定サンプル中のタンパク量に対する量(mg・mg−1タンパク量)の単位で求めた。
[Test Example 2]
<Evaluation of reduced glutathione level and glutathione S-transferase activity>
Reduced glutathione (GSH) levels were measured as follows. First, a 100 μL sample was mixed with 100 μL of sulfosalicylic acid (4%). Then, it was held at 4 ° C. for at least 1 hour and centrifuged at 1200 rpm for 10 minutes at 4 ° C. 100 μL of supernatant was mixed with 2.7 mL phosphate buffer (0.1 M, pH 7.4) and 0.2 mL DTNB reagent (5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid)) and incubated for 5 minutes. The absorbance of the yellow product was measured with light of a wavelength of 412 nm. The GSH level is the amount of protein in the measurement sample by separately creating standard curves over different concentrations using standard substances and applying the measurement results. It was determined in units of the amount (mg · mg-1 protein amount) with respect to.

グルタチオンS−トランスフェラーゼ(GST)活性は、1−クロロ−2、4−ジニトロベンゼン(CDNB)と還元型グルタチオン(GSH)との結合を利用して、次のようにして測定した。まず、100μLのGSH(5mM)と10μLのCDNB(エタノール中1mM)と25μLのサンプルとを1.365mLのリン酸緩衝液(0.1M、pH6.5)に添加し、室温で20分間インキュベートした。その後、310nmの波長の光で吸光度を測定し、常法の定式化によりGST活性(μmol・min−1・mg−1タンパク質)を求めた(Habig WH, Pabst MJ, Jakoby WB「Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation.」J Biol Chem. 1974; 249: pp7130-39.)。 Glutathione S-transferase (GST) activity was measured as follows using the binding of 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) to reduced glutathione (GSH). First, 100 μL of GSH (5 mM), 10 μL of CDNB (1 mM in ethanol) and 25 μL of sample were added to 1.365 mL of phosphate buffer (0.1 M, pH 6.5) and incubated for 20 minutes at room temperature. .. After that, the absorbance was measured with light having a wavelength of 310 nm, and the GST activity (μmol, min-1, mg-1 protein) was determined by a conventional formulation (Habig WH, Pabst MJ, Jakoby WB "Glutathione S-transferases". . The first absorbance step in mercapturic acid formation. ”J Biol Chem. 1974; 249: pp7130-39.).

Figure 2021147380
Figure 2021147380

表2に示されるように、以下の(1)〜(2)のことが明らかとなった。
(1)GSHレベル
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるGSHレベルが有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で122%、脳で126%、及び血清で167%と各組織におけるGSHレベルが有意に上昇した。
As shown in Table 2, the following (1) to (2) were clarified.
(1) GSH level In aged mice, GSH levels in liver, brain, and serum tissues were significantly decreased as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, GSH levels in each tissue were significantly increased to 122% in the liver, 126% in the brain, and 167% in serum as compared with the aged mice.

(2)GST活性
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるGST活性が有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で205%、脳で164%、及び血清で255%と各組織におけるGST活性が有意に上昇した。
(2) GST activity In aged mice, GST activity in liver, brain, and serum tissues was significantly reduced as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, GST activity in each tissue was significantly increased by 205% in the liver, 164% in the brain, and 255% in serum as compared with the aged mice.

以上から、PFT投与により、年齢に関連したGSHレベル及びGST活性の増加が打ち消されることが判明し、換言すれば、PFTにより酸化ストレスが低減されることが明らかとなった。 From the above, it was clarified that the administration of PFT counteracts the increase in GSH level and GST activity related to age, in other words, it was clarified that PFT reduces oxidative stress.

[試験例3]
<スーパーオキシドジスムターゼ活性、カタラーゼ活性、及びグルタチオンペルオキシダーゼ活性の評価>
スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)活性は、ピロガロール酸化の阻害率を利用して、次のようにして測定した。まず、20μLのサンプルと10μLの20mMピロガロール(10mM塩酸水溶液)とを1mLのバッファー液に加えて、試験液を調製した。試験液の吸光度は、30秒及び90秒後に420nmの波長の光で吸光度を測定した。ピロガロール酸化の阻害率は、次の式に従って計算した。
[Test Example 3]
<Evaluation of superoxide dismutase activity, catalase activity, and glutathione peroxidase activity>
Superoxide dismutase (SOD) activity was measured as follows using the inhibition rate of pyrogallol oxidation. First, a test solution was prepared by adding 20 μL of a sample and 10 μL of 20 mM pyrogallol (10 mM hydrochloric acid aqueous solution) to 1 mL of a buffer solution. The absorbance of the test solution was measured after 30 seconds and 90 seconds with light having a wavelength of 420 nm. The inhibition rate of pyrogallol oxidation was calculated according to the following formula.

阻害率(%)=[(100−ΔAt)/ΔAо]×100
(ΔAtは試験液の単位時間(1分間)及び単位用量(1mL)あたりの吸光度420nの変化量、ΔAоはリファレンス液の単位時間(1分間)及び単位用量(1mL)あたりの吸光度420nの変化量)
Inhibition rate (%) = [(100-ΔAt) / ΔAо] × 100
(ΔAt is the amount of change in absorbance 420n per unit time (1 minute) and unit dose (1 mL) of the test solution, and ΔAо is the amount of change in absorbance 420n per unit time (1 minute) and unit dose (1 mL) of the reference solution. )

カタラーゼ(CAT)活性は、サンプルキュベット内において、サンプル0.1mLをpH7.6の0.2Mリン酸ナトリウムバッファーの0.5mL及び0.5%H2O2の0.3mLを混合し、その混合物を蒸留水で希釈して合計3mLとした。H2O2の分解を240nmの波長の光の吸光度によって測定し、1分間あたりの吸光度の変化率(吸光度変化率%・min−1)を酵素活性として計算した。 For catalase (CAT) activity, 0.1 mL of sample is mixed with 0.5 mL of 0.2 M sodium phosphate buffer of pH 7.6 and 0.3 mL of 0.5% H2O2 in a sample cuvette, and the mixture is distilled. Dilute with water to give a total of 3 mL. The decomposition of H2O2 was measured by the absorbance of light having a wavelength of 240 nm, and the rate of change in absorbance per minute (absorbance rate of change% · min-1) was calculated as the enzymatic activity.

グルタチオンペルオキシダーゼ(GPx)活性は、50μLのサンプルと100μLのGSHとを750μLのTris−HCl溶液(50mM、pH7.6)に加え、37oCで10分間インキュベートした。次に、1mLのTCA(15質量%)と100μLのH2O2を加え、3000rpmで20分間遠心分離した。1mLの上清に2mLのTris−HCl溶液(0.4M、pH8.9)及び100μLのDTNB試薬(5,5’-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)に加え、5分間インキュベートした。得られた試験液の吸光度を412nmの波長の光で測定し、GPxの活性は次の式で計算した。 For glutathione peroxidase (GPx) activity, 50 μL of sample and 100 μL of GSH were added to 750 μL of Tris-HCl solution (50 mM, pH 7.6) and incubated at 37 oC for 10 minutes. Next, 1 mL of TCA (15% by mass) and 100 μL of H2O2 were added, and the mixture was centrifuged at 3000 rpm for 20 minutes. 1 mL of supernatant was added to 2 mL of Tris-HCl solution (0.4 M, pH 8.9) and 100 μL of DTNB reagent (5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoic acid)) and incubated for 5 minutes. The absorbance of the solution was measured with light having a wavelength of 412 nm, and the activity of GPx was calculated by the following formula.

GPx活性(mol・min−1・mg−1タンパク量)=(At−Ao)×6.2×[100/13.1]×0.05×10
(Atは試験液の吸光度412nm、A0はリファレンス液の吸光度412nm)
GPx activity (mol, min-1, mg-1 protein amount) = (At-Ao) x 6.2 x [100 / 13.1] x 0.05 x 10
(At is the absorbance of the test solution at 412 nm, A0 is the absorbance of the reference solution at 412 nm)

Figure 2021147380
Figure 2021147380

表3に示されるように、以下の(1)〜(3)のことが明らかとなった。
(1)GPx活性
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるGPx活性が有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で136%、脳で142%、及び血清で135%と各組織におけるGPx活性が有意に上昇した。
As shown in Table 3, the following (1) to (3) were clarified.
(1) GPx activity In aged mice, GPx activity in liver, brain, and serum tissues was significantly decreased as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, GPx activity in each tissue was significantly increased by 136% in the liver, 142% in the brain, and 135% in serum as compared with the aged mice.

(2)CAT活性
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるCAT活性が有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で141%、脳で155%、及び血清で140%と各組織におけるCAT活性が有意に上昇した。
(2) CAT activity In aged mice, CAT activity in liver, brain, and serum tissues was significantly reduced as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, CAT activity in each tissue was significantly increased by 141% in the liver, 155% in the brain, and 140% in serum as compared with the aged mice.

(3)SOD活性
老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるSOD活性が有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で289%、脳で170%、及び血清で212%と各組織におけるSOD活性が有意に上昇した。
(3) SOD activity In aged mice, SOD activity in liver, brain, and serum tissues was significantly reduced as compared with young mice. In contrast, in the PFT-treated group, SOD activity in each tissue was significantly increased to 289% in the liver, 170% in the brain, and 212% in serum as compared with the aged mice.

以上から、PFT投与により、年齢に関連したGPx活性及びCAT活性及びSOD活性の低下が打ち消されることが判明し、換言すれば、PFTにより酸化ストレスが低減されることが明らかとなった。 From the above, it was clarified that the decrease in GPx activity, CAT activity and SOD activity related to age was canceled by the administration of PFT, in other words, it was clarified that the oxidative stress was reduced by PFT.

[試験例4]
<総抗酸化能の評価>
総抗酸化能(Total Antioxidant Capacity:TAC)レベルは、次のようにして測定した。まず、1mLのサンプルを、硫酸(0.6M)、リン酸ナトリウム(28mmol)及びモリブデン酸アンモニウム(4mmol)を含む1mLの溶液に加え、混合物を95℃で90分間インキュベートし、常温に冷却後、695nmの波長の光で吸光度を測定した。TACレベルは、下記式に従って計算した。
[Test Example 4]
<Evaluation of total antioxidant capacity>
Total Antioxidant Capacity (TAC) levels were measured as follows. First, a 1 mL sample is added to a 1 mL solution containing sulfuric acid (0.6 M), sodium phosphate (28 mmol) and ammonium molybdate (4 mmol), the mixture is incubated at 95 ° C. for 90 minutes, cooled to room temperature and then cooled. The absorbance was measured with light having a wavelength of 695 nm. The TAC level was calculated according to the following formula.

TAC(%)=[(A0−At)/A0]×100
(A0はリファレンス液の吸光度695nm、Atは試験液の吸光度695nm)
TAC (%) = [(A0-At) / A0] × 100
(A0 is the absorbance of the reference solution at 695 nm, At is the absorbance of the test solution at 695 nm)

Figure 2021147380
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表4に示されるように、老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるTACレベルが有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で126%、脳で142%、及び血清で144%と各組織におけるTACレベルが有意に上昇した。 As shown in Table 4, aged mice had significantly reduced TAC levels in liver, brain, and serum tissues compared to young mice. In contrast, in the PFT-treated group, TAC levels in each tissue were significantly increased to 126% in the liver, 142% in the brain, and 144% in serum, as compared with the aged mice.

以上から、PFT投与により、年齢に関連したTACレベルの低下が打ち消されることが判明し、換言すれば、PFTにより酸化ストレスが低減されることが明らかとなった。 From the above, it was clarified that the administration of PFT canceled the decrease in TAC level related to age, in other words, it was clarified that oxidative stress was reduced by PFT.

[試験例5]
<抗ヒドロキシルラジカル活性の評価>
抗ヒドロキシルラジカル(anti-hydroxyl radical:AHR)活性は、次のようにして測定した。まず、10μLのサンプルを、100μLのH2O2、100μLのFeSO4、100μLの2−デオキシリボース−D−リボース、及び2.7mLのリン酸緩衝液(pH7.4)を混合してなる反応生成物に加え、37℃で60分間インキュベートした。次いで、0.2mLのEDTAと2mLのTBA試薬(5.2mLの過塩素酸、1.5gのチオバルビツール酸、60gのトリクロロ酢酸)を加え、生成したピンク色の複合体の吸光度を532nmの波長の光で測定した。結果は、常法の定式により「(U・mg−1タンパク量)」の単位で表した(Halliwell B1, Gutteridge JM, Aruoma OI「The deoxyribose method: a simple "test-tube" assay for determination of rate constants for reactions of hydroxyl radicals.」Anal Biochem. 1987; 165(1): pp215-219.)。
[Test Example 5]
<Evaluation of anti-hydroxyl radical activity>
Anti-hydroxyl radical (AHR) activity was measured as follows. First, a 10 μL sample is added to the reaction product consisting of a mixture of 100 μL H2O2, 100 μL FeSO4, 100 μL 2-deoxyribose-D-ribose, and 2.7 mL phosphate buffer (pH 7.4). , 37 ° C. for 60 minutes. Then 0.2 mL of EDTA and 2 mL of TBA reagent (5.2 mL of perchloric acid, 1.5 g of thiobarbituric acid, 60 g of trichloroacetic acid) were added and the absorbance of the resulting pink complex was 532 nm. Measured with light of wavelength. The results were expressed in the unit of "(U ・ mg-1 protein amount)" by a conventional formula (Halliwell B1, Gutteridge JM, Aruoma OI "The deoxyribose method: a simple" test-tube "assay for determination of rate". constants for reactions of hydroxyl radicals. ”Anal Biochem. 1987; 165 (1): pp215-219.).

Figure 2021147380
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表5に示されるように、老年マウスでは、若年マウスと比較して、肝臓、脳、及び血清の各組織におけるAHR活性が有意に低下した。これに対して、PFT処置群では、老年マウスと比較して、肝臓で119%、脳で118%、及び血清で119%と各組織におけるAHR活性が有意に上昇した。 As shown in Table 5, aged mice had significantly reduced AHR activity in liver, brain, and serum tissues compared to young mice. In contrast, in the PFT-treated group, AHR activity in each tissue was significantly increased by 119% in the liver, 118% in the brain, and 119% in serum as compared with the aged mice.

以上から、PFT投与により、年齢に関連したAHR活性の低下が打ち消されることが判明し、換言すれば、PFTにより酸化ストレスが低減されることが明らかとなった。 From the above, it was clarified that the administration of PFT counteracts the decrease in AHR activity associated with age, in other words, it was clarified that PFT reduces oxidative stress.

[試験例6]
<生化学的血清パラメーターの評価>
肝機能の指標であるALT(EC2.6.1.2)とAST(EC2.6.1.1)の酵素活性と、総タンパク質の濃度を測定した。また、血清脂質プロファイルとして、総コレステロール(TC)、トリグリセリド(TG)、低密度リポタンパク質(LDL)、及び高密度リポタンパク質(HDL)の濃度を測定した。これらの生化学的血清パラメーターは、市販のキットにより、キットの製造元の指示に従って分析した。なお、試験群には、老年マウスに対するPFT処置群とともに、若年マウスに対するPFT処置群を設けて血清を採取して分析に供した。
[Test Example 6]
<Evaluation of biochemical serum parameters>
The enzyme activity of ALT (EC 2.6.1.2) and AST (EC 2.6.1.1), which are indicators of liver function, and the concentration of total protein were measured. In addition, the concentrations of total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low-density lipoprotein (LDL), and high-density lipoprotein (HDL) were measured as serum lipid profiles. These biochemical serum parameters were analyzed with a commercially available kit according to the kit manufacturer's instructions. In the test group, a PFT-treated group for aged mice and a PFT-treated group for young mice were provided, and sera were collected and used for analysis.

その結果、図1(a)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べて肝機能の指標であるALT(EC2.6.1.2)の血清中濃度が高くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が若年マウスのレベルにまで低下した。 As a result, as shown in FIG. 1 (a), the serum concentration of ALT (EC 2.6.1.2), which is an index of liver function, was higher in the aged mice than in the young mice. In the PFT-treated group for aged mice, the concentration was reduced to the level of young mice.

また、図1(b)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べて肝機能の指標であるAST(EC2.6.1.1)の血清中濃度が高くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が大きく低下した。 In addition, as shown in FIG. 1 (b), the serum concentration of AST (EC 2.6.1.1), which is an index of liver function, was higher in the aged mice than in the young mice. In the PFT-treated group for aged mice, the concentration was significantly reduced.

また、図1(c)に示されるように、各試験群間で、血清中の総タンパク質の濃度に変化はみられなかった。 In addition, as shown in FIG. 1 (c), there was no change in the concentration of total protein in serum between the test groups.

以上から、老年マウスに対するPFT処置により肝臓に抗酸化作用がもたらされ、老年マウスにおける肝機能が改善したことが考えられた。 From the above, it was considered that the PFT treatment on the aged mice brought about an antioxidant effect on the liver and improved the liver function in the aged mice.

また、図2(a)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べて総コレステロール(TC)の血清中濃度が高くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が若年マウスのレベルにまで低下した。 In addition, as shown in FIG. 2 (a), the serum concentration of total cholesterol (TC) was higher in the aged mice than in the young mice, whereas the concentration was higher in the PFT-treated group for the aged mice. It dropped to the level of young mice.

また、図2(b)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べてトリグリセリド(TG)の血清中濃度が高くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が低下した。 In addition, as shown in FIG. 2 (b), the serum concentration of triglyceride (TG) was higher in the aged mice than in the young mice, whereas the concentration was lower in the PFT-treated group for the aged mice. bottom.

また、図2(c)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べて低密度リポタンパク質(LDL)の血清中濃度が高くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が大きく低下した。 In addition, as shown in FIG. 2 (c), the serum concentration of low-density lipoprotein (LDL) was higher in the aged mice than in the young mice, whereas in the PFT-treated group for the aged mice, the concentration was higher. The concentration dropped significantly.

また、図2(d)に示されるように、老年マウスでは若年マウスに比べて高密度リポタンパク質(HDL)の血清中濃度が低くなったのに対して、老年マウスに対するPFT処置群では、その濃度が若年マウスのレベルにまで増加した。 In addition, as shown in FIG. 2 (d), the serum concentration of high-density lipoprotein (HDL) was lower in the aged mice than in the young mice, whereas in the PFT-treated group for the aged mice, the concentration was lower. Concentration increased to the level of young mice.

以上から、老年マウスに対するPFT処置により肝臓に抗酸化作用がもたらされ、老年マウスにおける肝機能が改善したことにより、血清脂質プロファイルが改善したことが考えられた。 From the above, it was considered that the PFT treatment on the aged mice brought about an antioxidant effect on the liver, and the liver function in the aged mice was improved, so that the serum lipid profile was improved.

以上、本発明のいくつかの実施形態を説明したが、これらの実施形態は例として掲示したものであり、発明の範囲を限定することは意図していない。これら新規な実施形態は、その他の様々な形態で実施されることが可能であり、発明の要旨を逸脱しない範囲で、種々の省略、置き換え、変更を行うことができる。これら実施形態やその変形は、発明の範囲や要旨に含まれるとともに、特許請求の範囲に記載された発明とその均等の範囲に含まれる。 Although some embodiments of the present invention have been described above, these embodiments are shown as examples and are not intended to limit the scope of the invention. These novel embodiments can be implemented in various other embodiments, and various omissions, replacements, and changes can be made without departing from the gist of the invention. These embodiments and modifications thereof are included in the scope and gist of the invention, and are also included in the scope of the invention described in the claims and the equivalent scope thereof.

Claims (3)

ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化用組成物。 An antioxidant composition containing a fermented milk product of Lactobacillus kefiri or a processed product thereof as an active ingredient. 酸化ストレスを低減させるために使用する、請求項1に記載の抗酸化用組成物。 The antioxidant composition according to claim 1, which is used to reduce oxidative stress. 前記ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)である、請求項1又は2に記載の抗酸化用組成物。 The antioxidant composition according to claim 1 or 2, wherein the Lactobacillus kefiri is Lactobacillus Kefiri P-IF (accession number FERM BP-10896).
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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