JP2021130656A

JP2021130656A - ペプチド合成法

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Publication number: JP2021130656A
Application number: JP2021024252A
Authority: JP
Inventors: 求金井; Motomu Kanai; 幸之助生長; Konosuke Oisaki; 晃生笹本; Akio Sasamoto; 遼平野; Ryo Hirano; 拓也松本; Takuya Matsumoto
Original assignee: University of Tokyo NUC
Current assignee: University of Tokyo NUC
Priority date: 2020-02-18
Filing date: 2021-02-18
Publication date: 2021-09-09

Abstract

【解決課題】ペプチド供給プロセスにおける縮合剤及び主鎖保護基の使用を回避することができ、エピメリ化を抑制することができ、更に、無保護のアミノ酸素子の溶解度を向上し、反応を加速することができる、新規なペプチド合成法を提供すること。【解決手段】以下の式（I）で表される化合物と、以下の式（II）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、式（V）の化合物を調製する方法。【選択図】なし

Description

本発明は新規のペプチド合成法に関わる。より具体的には、チオカルボン酸中間体を経由するＮ末端からＣ末端へとペプチド鎖を伸長させる方法に関わる。

中分子ペプチド化合物は次世代の医薬候補として注目を集めている。探索段階では固相合成によって供給されるが、大規模試験や市販を見据えた場合に供給量が不足するため、液相合成による量的供給が必要になる。

非天然アミノ酸を含む様々なアミノ酸を自在に組み込める化学合成法は、Ｃ末端からＮ末端へと伸長させる手法（Ｃ→Ｎ末端伸長法）が従来からの主流であるが、当量以上の縮合剤や、高価で原子効率の良くない保護アミノ酸素子を利用することが必須であった。このため、主鎖アミノ基の保護基と縮合剤由来の廃棄物が大量に産生するという問題があり、ペプチド供給プロセスのコストや環境負荷の上昇につながっていた（図１参照）。

一方、逆方向のＮ末端からＣ末端へと伸長させる手法（Ｎ→Ｃ末端伸長法）は、この問題を解決できる可能性を持つが、エピメリ化が併発してしまうため、生成物の純度に優れる合成法の実現はこれまで困難であった。

Holanders, K.; Mars, B. U. W.; Ballet, S. Synthesis 2019, 51, 2261. de Figueiredo, R. M.; Suppo, J.-S.; Campagne, J.-M. Chem. Rev. Crich, D.; Sana, K.; Guo, S. Org. Lett. 2007, 9, 4423. Crich, D.; Sharma, I. Angew. Chem. Int. Ed. 2009, 48, 7591. Wu, W.; Zhang, Z.; Liebeskind, L. S. J. Am. Chem. Soc 2011, 133, 14256-14259. Mali, S. M.; Jadhav, S. V.; Gopi, H. N. Chem. Commun. 2012, 48, 7085. Wang, P.; Danishefsky, S. J. J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 13167. Review: Narenda N, Thimmalapura VM, Hosamani B, Prabhu G, Kumar LR, Sureshbabu VV. Org. Biomol. Chem. 2018, 16, 3524.

本発明は、ペプチド供給プロセスにおける縮合剤及び主鎖保護基の使用を回避することができ、エピメリ化を抑制することができ、更に、無保護のアミノ酸素子の溶解度を向上し、反応を加速することができる、新規なペプチド合成法を提供することを目的とする。

本発明者らは、鋭意検討した結果、以下の３要素からなる新規ペプチド合成法により、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
(1)ペプチドチオカルボン酸を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法。
(2)新たに見出したエピメリ化抑制剤。
(3)主鎖無保護アミノ酸素子の可溶化剤。

即ち、本発明は、
［１］以下の式（I）で表される化合物と、以下の式（II）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、式（V）の化合物を調製する方法。

（式中、

は、
保護基を表すか、Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドを表し、
Ｒ_１は、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、Ｒ_２は、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、及びアミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、水素、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）

（式中、

、Ｒ_１及びＲ_２は、上記で定義した通りである。）
［２］反応溶媒として、ＤＭＳＯとトルエンの混合溶媒を用いる、［１］に記載の方法。
［３］前記カップリング反応の前に、以下の式（VI）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させることにより、式（I）で表される化合物を調製する工程を含む、［１］又は［２］に記載の方法。

（式中、Ｒ_１は、式（I）で定義した通りである。）

（式中、Ｒ_７は、炭素数１〜４のアルキル基又は置換又は無置換のアリ-ル基である。）
［４］ＰＧ−（ＡＡ）_ｎ−ＳＨ：
（ＰＧは、Ｎ末端の保護基を表し、
ＡＡは、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｎは、１〜４の整数である。）
で表される化合物と、
Ｈ−（ＡＡ’）_ｍ−ＯＨ：
（ＡＡは、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｍは、１〜４の整数である。）
で表されるアミノ酸又はペプチドを、
以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、ＰＧ−（ＡＡ）_ｎ（ＡＡ’）_ｍ−ＯＨで表される化合物を調製する方法。

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、及びアミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）
［５］［１］〜［３］のいずれか１項に記載の方法に続けて、
（ｉ）以下の式（V）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させることにより、式（VII）で表される化合物を調製する工程：

（式中、

、Ｒ_１、Ｒ_２は、式（I）及び（II）で定義した通りである。）

（式中、Ｒ_７は、炭素数１〜４のアルキル基又は置換又は無置換のアリ-ル基である。）

（ｉｉ）式（VII）で表される化合物と、以下の式（VIII）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させる工程：
を含む、式（VIIII）の化合物を調製する方法。

（式中、Ｒ_３ａは、α-アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、

、Ｒ_１〜Ｒ_２、Ｒ_３ａは、上記で定義した通りである。）
［６］以下の式（IV）で表される化合物をペプチド合成において可溶化剤として使用する方法。

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）
を提供するものである。

本発明により、ペプチド供給プロセスにおける縮合剤及び主鎖保護基の使用を回避することができ、エピメリ化を抑制することができ、更に、無保護のアミノ酸素子の溶解度を向上し、反応を加速することができる、新規ペプチド合成法を提供することができる。

カップリング剤を使用する従来のＣ→Ｎ末端伸長法の概略図。本発明のペプチド合成法の基本的な反応スキ-ム。式（I）で表される化合物を得る非限定的な方法の反応スキ-ムの概要。

１．ペプチド合成法
本発明の１つの実施態様は、式（I）で表される化合物と、式（II）で表されるアミノ酸を、式（III）で表される化合物及び式（IV）で表される化合物の存在下でカップリング反応させることにより、式（V）の化合物を調製する方法である（以下「本発明のペプチド合成法」ともいう）。

本発明のペプチド合成法の基本的な反応スキ-ムを図２に示す。本発明においては、(1)ペプチドチオカルボン酸を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法、(2)新たに見出したエピメリ化抑制剤、(3)主鎖無保護アミノ酸素子の可溶化剤の３つの要素を備えることが重要である。以下、これら３つの要素の詳細を含めて本発明のペプチド合成法について説明する。

（１）チオカルボン酸化合物を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法
本発明のペプチド合成法は、式（I）で表される化合物であるペプチドチオカルボン酸を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法を用いる。

式（I）において、

は、
保護基を表すか、Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドを表す。

保護基としては、アミノ酸のＮ末端の保護基として慣用されている保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、アセチル基（Ａｃ）、ベンゾイル基（Ｂｚ）等が挙げられる。

Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸とは、上記の保護基でＮ末端が保護されたアミノ酸を意味する。
アミノ酸としては、特に限定なく使用することができる。例としては、α-アミノ酸、β−アミノ酸があげられる。α−アミノ酸として、例えば、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、オルニチン、シトルリン、Ｎ-メチルグリシン（サルコシン）、Ｎ-メチルロイシン、２，３−ジアミノプロパン酸、２，４−ジアミノ酪酸、α−ヒドロキシロイシン、ホモセリン、ホモシステイン、ｔｅｒｔ−ロイシン、α−アミノイソ酪酸などが挙げられるが、これらに限定されない。また、β−アミノ酸として、β−アラニンなどが挙げられるがこれに限定されない。
上記のアミノ酸は、Ｌ型及びＤ型のいずれの光学異性体であってもよい。
これらアミノ酸の側鎖が官能基を有する場合は、Ｒ_１について後述する保護基で保護してもよい。

Ｎ末端が保護基で保護されたペプチドとは、上記の保護基でＮ末端が保護されたペプチドを意味する。ここで、ペプチドは、上記のアミノ酸の残基が２〜９、好ましくは、２〜６、更に好ましくは２〜４個結合した構造を有する。

Ｒ_１は、α−アミノ酸の側鎖である。Ｒ_１は、ＳＨに結合しているα−アミノ酸残基の種類によって決まる。例えば、当該アミノ酸残基がグリシンの場合、Ｒ_１は水素であり、アラニンの場合はメチル基である。
即ち、式（I）におけるＳＨに結合しているα−アミノ酸残基；ＮＨ−ＣＨ（Ｒ_１）−Ｃ（＝Ｏ）は、フェニルグリシン以外の任意のα−アミノ酸の残基でよい。ここで、α−アミノ酸として、例えば、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、オルニチン、シトルリン、Ｎ−メチルグリシン（サルコシン）、Ｎ−メチルロイシン、２，３−ジアミノプロパン酸、２，４−ジアミノ酪酸、α−ヒドロキシロイシン、ホモセリン、ホモシステイン、ｔｅｒｔ−ロイシン、α−アミノイソ酪酸などが挙げられるが、これらに限定されない。Ｒ_１は、これらから選択されるアミノ酸の側鎖である。
上記のα−アミノ酸は、Ｌ型及びＤ型のいずれの光学異性体であってもよい。

Ｒ_１で表される上記α−アミノ酸残基の側鎖は、保護基で保護されていてもよい。
例えば、Ｒ_１がリジン側鎖（アミノ基を有する）である場合は、保護基として、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）を用いることができる。
Ｒ_１がグルタミン酸側鎖やアスパラギン酸側鎖でありカルボキシ基を有する場合は、保護基として、ベンジルエステル（Ｂｚｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ｔ−Ｂｕ）を用いることができる。
また、Ｒ_１がセリンやトレオニン側鎖（ヒドロキシ基を有する）である場合は、保護基として、ベンジル基やｔｅｒｔ−ブチル基を用いることができる。
Ｒ_１がチロシン側鎖（フェノ−ル性ヒドロキシ基を有する）である場合は、保護基として、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（Ｚ（２Ｂｒ））やｔｅｒｔ−ブチル基を用いることができる。
Ｒ_１がシステイン側鎖（スルフヒドリル基を有する）である場合は、保護基として、４−メチルベンジル基（Ｂｚｌ（４Ｍｅ））、トリチル基（Ｔｒｔ）、ｔｅｒｔ−ブチル基、Ｎ−（アセチル）アミノメチル基（Ａｃｍ）を用いることができる。
Ｒ_１がアルギニン側鎖（グアニジノ基を有する）である場合は、保護基として、ｐ−トルエンスルホニル基（ｐ−Ｔｓ）などを用いることができる。
また、Ｒ_１がヒスチジン側鎖（イミダゾ−ル環を有する）である場合は、π−窒素をベンジルオキシメチル基（Ｂｏｍ）やｔｅｒｔ−ブトキシメチル基（Ｂｕｍ）で保護することができ、τ−窒素を２，４−ジニトロフェニル基（Ｄｎｐ）、トリチル基などで保護することができる。

式（I）で表されるチオカルボン酸化合物は、本発明者らのグル-プが報告した１工程変換条件（Chem. Commun. 2018, 54, 1222）、または、既存のいかなる手法を用いて得ることができる。

本発明の１つの好ましい側面においては、式（I）で表される化合物は、以下の式（VI）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させて得ることができる。

式（１）中、Ｒ_７は、炭素数１〜４のアルキル基又は置換又は無置換のアリ-ル基であり、好ましくはメチル基又はエチル基であり、更に好ましくはメチル基である。

式（VI）において、

は、
保護基を表すか、Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドを表し、Ｒ_１は、α−アミノ酸の側鎖であり、これらの詳細については式（I）において説明したのと同様である。

上記の式（I）で表される化合物を得る方法の反応スキ-ムの概要を図３に示す。この反応では、触媒としてアセチルスルフィドを用いる。
この反応は、溶媒としてＤＭＦを用い、反応温度は、通常０℃〜室温で行う。

本発明のペプチド合成法では、式（I）で表されるチオカルボン酸化合物と、以下の式（II）表される化合物とを反応させる。

式（II）表される化合物は、無保護のα−アミノ酸であり、α−アミノ酸として、天然アミノ酸に加えて、任意のα−アミノ酸を用いることができる。例えば、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、システイン、メチオニン、オルニチン、２，３−ジアミノプロパン酸、２，４−ジアミノ酪酸、α−ヒドロキシロイシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、フェニルグリシン、α−アミノイソ酪酸などが挙げられるが、これらに限定されない。
上記のα−アミノ酸は、Ｌ型及びＤ型のいずれの光学異性体であってもよい。

式（II）におけるＲ_２は、α−アミノ酸の側鎖であり、α−アミノ酸の種類によって決まる。例えば、当該アミノ酸がグリシンの場合、Ｒ_２は水素であり、アラニンの場合はメチル基である。

Ｒ_２で表される上記α−アミノ酸の側鎖は、保護基で保護されていてもよい。保護基については、式（I）のＲ_１について説明したのと同様のものを用いることができる。

本発明のペプチド合成法では、伸長させるペプチド又はアミノ酸を式（I）で表されるようにチオカルボン酸へと変換しておくことで、原料である式（I）の化合物のＣ末端と式（II）の無保護アミノ酸素子のＣ末端を必要最小限に区別可能になるとともに、原料化合物のＣ末端の選択的な活性化によって一アミノ酸ずつペプチド伸長させることができる。
また、チオカルボン酸を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法を用いることで、等量以上の縮合剤を必要とせず、伸長過程で生じる廃棄物は溶媒と硫黄単体だけに原理上低減可能であり、安価な無保護アミノ酸を合成素子として用いることができるため、従来型ペプチド伸長法に比べて、大幅な廃棄物の低減およびコストの低減が期待できる。
また、生成物としては、Ｃ末端無保護のペプチド鎖が得られるため、チオカルボン酸変換→ペプチド鎖連結の繰り返しによって、速やかにペプチド鎖を伸長することが可能である。

（２）エピメリ化抑制剤
本発明のペプチド合成法においては、以下の式（III）で表される化合物である新規なエピメリ化抑制剤を用いる。

従来通りの考え方でＮ→Ｃ末端伸長を行うと、環化中間体を経るエピメリ化（立体化学の消失）が引き起こされ、純度に優れる生成物の供給が不可能であった。本発明者らは、エピメリ化抑制能期待される様々な添加剤を合成・スクリ-ニングした結果、Ｎ−ヒドロキシピリドン型添加剤が本発明のペプチド合成法でのエピメリ化の問題を解決することを見出した。

式（III）において、Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、アミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択される。

エステル基は、−ＣＯ_２Ｒで表され、Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基である。アルキル基は、無置換であってもよく、置換基を有していてもよい。
アルキル基は、直鎖アルキル基、分岐アルキル基のいずれでもよい。分岐アルキル基の場合、炭素総数が３０程度に大きくなっても、再結晶により生成物からの添加剤の回収がし易くなるという利点がある。
分岐アルキル基としては、−（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２）_ｓ−Ｈ（ｓは、１〜４）の分岐アルキル基が、再結晶による生成物からの添加剤の回収率が高くなる点から好ましい。直鎖アルキル基の場合は、炭素数が大きくなっても収率、エピメリ化度は良好であるが、結晶化度が上がり、生成物からの回収がしにくくなる場合がある。直鎖アルキルでは、炭素数１〜４のアルキルが、収率、エピメリ化度、生成物からの添加剤の回収のしやすさの点から好ましく、特に好ましくは、メチル基（即ち、エステル基としてはメチルエステル基（−ＣＯ_２ＣＨ_３））である。

アミノ基で置換されていてもよいアミド基としては好ましくは、ジメチルアミノエチルアミド基（-ＣＯＮＨＣ_２Ｈ_４Ｎ（ＣＨ_３）_２）である。

アリ−ル基としては、フェニル基が挙げられ、置換されていても無置換でもよい。アリ−ル基の置換基としては、アルキル基、エステル基等が挙げられるが、好ましくはエステル基（例えば、メチルエステル基（-ＣＯ_２ＣＨ_３））である。

ベンゾイル基の置換基としては、アルキル基、アミノ基等が挙げられるが、好ましくはアミノ基（例えば、ジメチルアミノ基）である。

アシル基は、−ＣＯＲ_ａ’（Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）で表され、好ましくは、アセチル基である。

Ｌとして、上記した基から選択されることが好ましいが、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよい。この場合には、Ｌとしてエステル基などの基がある場合に比べて、エピメリ度が若干高くなる傾向があるものの、高い収率で生成物を得ることが可能である。

式（III）において、Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。ハロゲンとしては、塩素が好ましい。エステル基としてはメチルエステル基（−ＣＯ_２ＣＨ_３）が好ましい。

本発明の１つの好ましい側面において、Ｒ_３及びＲ_４の何れもが水素原子である。
また、本発明の別の好ましい側面において、Ｒ_３及びＲ_４の一方が塩素であり、他方が水素原子である。
また、本発明の別の好ましい側面において、Ｒ_３及びＲ_４の一方がメチルエステル基であり、他方が水素原子である。

（３）主鎖無保護アミノ酸の可溶化剤
本発明のペプチド合成法においては、式（IV）で表される化合物である可溶化剤を用いる。

主鎖が無保護のアミノ酸素子（原料）は、一般に有機溶媒で不要であるため、これを用いるペプチド伸長法は反応効率が悪く、一工程完結までに長時間を要していた。本発明者らは、無保護アミノ酸素子を可溶化する添加剤の探索を行ったところ、ホスファイト系添加剤が無保護アミノ酸素子の溶解度向上に寄与し、液相での反応効率を向上させることで反応時間短縮を実現することが可能となる。

式（IV）において、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表す。但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない。
アルキル基としては、ｎ−ブチル基が好ましい。アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基が好ましい。

本発明の１つの好ましい側面においては、式（IV）の化合物は、以下の式（IVa）で表される。

式（IVa）において、Ｒ_５’及びＲ_６’は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、置換基を有していてもよいベンジル基又は水素を表す。但し、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方が水素になることはない。

本発明の１つの好ましい側面においては、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方がメチル基である。
また、本発明の１つの好ましい側面においては、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方がエチル基である。
また、本発明の１つの好ましい側面においては、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方がｉ−プロピル基である。
また、本発明の１つの好ましい側面においては、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方がｎ−ブチル基である。
また、本発明の１つの好ましい側面においては、Ｒ_５’及びＲ_６’の両方がベンジル基である。

式（IV）において、Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。
このようなヘテロシクリルとしては、５員環又は６員環の構造が好ましく、６員環の構造がより好ましい。
置換基としては、１〜４のアルキル基が挙げられ、置換基は１つでも２以上であってもよい。アルキル基としては、好ましくはメチル基、エチル基である。

本発明の方法で用いられる式（IV）の非限定的例を以下に示すが、これらに限定されるものではない。

本発明のペプチド合成法により、以下の式（V）で表される化合物を得ることができる。

式（V）において、

、Ｒ_１及びＲ_２は、式（I）、（II）について説明した通りである。

本発明のペプチド合成法においては、通常、式（I）の化合物のモル量に対して、式（II）の化合物を１〜２等量、式（ＩＩＩ）の化合物を１等量、式（ＩＶ）の化合物を１等量で反応させる。

本発明のペプチド合成法は、ペプチドの液相合成に通常用いられる溶媒を使用することができるが、ＤＭＳＯ系の溶媒を用いるとチオ酸の活性化を効率化できて好ましい。更に、ＤＭＳＯとトルエン等の混合溶媒を用いると、極性を下げることができ、エピメリ化を有効に抑制することができる点から好ましい。
本発明の方法の１つの好ましい側面において、ＤＭＳＯ：トルエン＝１：１（体積比）の混合溶媒が用いられる。

本発明のペプチド合成法は、通常、室温程度で、３〜６時間反応させることにより行われる。

本発明のペプチド合成法は、上記で説明したように、ペプチド又はアミノ酸のチオカルボン酸化合物を経由するＮ→Ｃ末端方向へのペプチド鎖伸長法に基づくが、本発明の方法を、ペプチドのフラグメントカップリング、反復カップリングに適用することができる。

２．フラグメントカップリング
本発明のもう１つの実施態様は、
ＰＧ-（ＡＡ）_ｎ-ＳＨ：
（ＰＧは、Ｎ末端の保護基を表し、
ＡＡは、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｎは、１〜４の整数である。）
で表される化合物と、
Ｈ-（ＡＡ’）_ｍ-ＯＨ：
（ＡＡ’は、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｍは、１〜４の整数である。）
で表されるペプチドを、
以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、ＰＧ-（ＡＡ）_ｎ（ＡＡ’）_ｍ-ＯＨで表される化合物を調製する方法である（以下「本発明のフラグメントカップリング」ともいう）。

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ-ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、アミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、アシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（-ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい

ＰＧのＮ末端の保護基は、本発明のペプチド合成法で説明したのと同様のＮ末端の保護基を用いることができる。
ＡＡ及びＡＡ’の任意のアミノ酸残基としては、α−アミノ酸、β−アミノ酸の残基があげられ、α−アミノ酸の残基として、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、トリプトファン、チロシン、システイン、メチオニン、プロリン、オルニチン、Ｎ−メチルロイシン、２，３−ジアミノプロパン酸、２，４−ジアミノ酪酸、α−ヒドロキシロイシンなどのアミノ酸残基が挙げられる。また、β−アミノ酸として、β−アラニンなどのアミノ酸残基である。但し、ＡＡのアミノ酸残基のうちＳＨに結合しているアミノ酸残基は、フェニルグリシン以外の任意のアミノ酸残基であり、ＡＡ’のアミノ酸残基のうちＮ末端のアミノ酸残基はプロリン、Ｎ−メチルアミノ酸以外のアミノ酸残基である。
これらアミノ酸残基の側鎖が保護されている場合は、本発明のペプチド合成法で説明したのと同様の保護基を用いることができる。
ＡＡ及びＡＡ’の任意のアミノ酸残基は、Ｌ型及びＤ型のいずれの光学異性体であってもよい。

本発明のフラグメントカップリングにおいては、好ましくはｎとｍは同じである。ｎ及びｍは、好ましくは、２又は３である。

本発明のフラグメントカップリングにおいては、本発明のペプチド合成法で説明した溶媒、温度及び時間などの反応条件を同様に用いることができる。

３．反復カップリング
本発明のもう１つの実施態様は、上記で説明した本発明のペプチド合成法を実施し、これに続けて、
（ｉ）以下の式（V）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させることにより、式（VII）で表される化合物を調製する工程：

（式中、

（ｉｉ）式（VII）で表される化合物と、以下の式（VIII）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させる工程：
を含む、式（VIIII）の化合物を調製する方法である（以下「本発明の反復カップリング」ともいう）。

（式中、Ｒ_３ａは、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、Ｌ、Ｒ_３〜Ｒ_４は、上記で定義した通りである。）

（式中、Ｒ_５〜Ｒ_６は、上記で定義した通りである。）

（式中、

、Ｒ_１〜Ｒ_２、Ｒ_３ａは、上記で定義した通りである。）

式（VIII）におけるＲ_３ａはα−アミノ酸の側鎖であるが、当該α−アミノ酸については、式（II）のアミノ酸について説明したのと同様である。また、当該側鎖は保護基で保護されていてもよく、保護基についても式（II）について説明したのと同様である。

本発明の反復カップリングは、上記で記載した方法を繰り返し用いて、ペプチド鎖を伸長させることができる。ペプチド鎖の伸長は、通常２〜５個のアミノ酸残基を有するペプチドを得るまで行うことが可能である。

本発明の反復カップリングにおいては、本発明のペプチド合成法で説明した溶媒、温度及び時間などの反応条件を同様に用いることができる。

上記した本発明のペプチド合成法、本発明のフラグメントカップリング、本発明の反復カップリングは、ペプチドの液相合成に適用することが可能である。

また、本発明のもう１つの態様は、以下の式（IV）で表される化合物をペプチド合成において可溶化剤として使用する方法である。

以下本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

１．一般的方法
（１）一般論
エレクトロスプレイイオン化（ＥＳＩ）質量スペクトルをＳｈｉｍａｄｚｕＬＣＭＳ-２０２０スペクトロメ-タ（ＬＲＭＳの場合）で測定した。分析ＨＰＬＣチャ-トは、ＵＶ-２０７５分光計、ＰＵ-２０８０ポンプ、ＤＧ-２０８０-５４脱ガス装置、及びＭＸ-２０８０-３２ミキサ-を備えたＪＡＳＣＯＨＰＬＣシステムを用いて得られた。

（２）分析用ＨＰＬＣ
ペプチド組成を、アセトニトリル対０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の水溶液の勾配を用いる分析逆相ＨＰＬＣによって評価した。
逆相分析ＨＰＬＣは以下のようにして行った：ＹＭＣ-Ｔｒｉａｒｔ-Ｃ_１８（内径４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ）カラムを用い、０．１％ＴＦＡ水溶液中０〜１００％アセトニトリルの直線勾配を用い、室温で４０分間以上、流速１ｍＬ／分^-１で行った。溶離液を２３０ｎｍの吸光度でモニタ-した。

（３）分取ＨＰＬＣ
アセトニトリル対０．１％ＴＦＡ水溶液の勾配を用いた分取逆相ＨＰＬＣにより、より長いペプチドを精製した。分取ＨＰＬＣは以下のように行った：４０℃で流速１０．０ｍＬｍｉｎ^-１でのＹＭＣ-ＴｒｉａｒｔＣ１８（内径２０ｎｍ×２５０ｍｍ）カラム。勾配条件は各ペプチドで修正した。溶離液を２３０ｎｍでの吸光度によりモニタ-した。

（４）ペプチドについての検量線の作成
真正ペプチド（５μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２５０μＬ）に溶解して、２０ｍＭのペプチド溶液を作製した。この溶液を１５ｍＭ，１０ｍＭ，８ｍＭ，５ｍＭ，２ｍＭに希釈した。Ｔｒｔ又はＰｂｆを含むペプチドについては、真正ペプチド（１μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５００μＬ）に溶解して２ｍＭのペプチド溶液とし、この溶液を１ｍＭ、０．５ｍＭ、０．２５ｍＭ、０．１２５ｍＭに希釈した後、これらの溶液を２３０ｎｍでの吸光度による分析ＨＰＬＣで分析した。各溶液について、ペプチドに対応するピ-ク面積を測定し、これらの値から検量線を作成した。

（５）チオ酸のエピマ-化レベルの計算方法
ペプチドチオ酸をｐ-メトキシベンジルクロリドによりｐ-メトキシベンジルチオエステルに変換した。そして、チオエステルを含む反応混合物を、順相キラルＨＰＬＣにより分析し、チオエステルの異性体に対応するピ-ク面積を測定し、次式によりエピマ-化速度を算出した。

（６）カップリング反応後のペプチドのエピマ-化レベルの算出方法
ペプチドカップリング反応後、反応混合物を逆相ＨＰＬＣで分析した。ＬＬＬ異性体及びＬＤＬ異性体に対応するピ-ク面積を測定し、見かけのエピマ-化レベル（ＡＥＬ）を次式に基づいて算出した。

このＡＥＬは基質として用いたペプチドチオ酸のエピマ-化レベルを含む。したがって、チオ酸（ＴＥＬ）のエピマ-化レベルを用いて以下の式に基づいて計算したカップリング反応においてエピマ−化レベルが生じた。

＜合成実施例＞
１．ペプチドチオ酸の調製
ペプチドチオ酸はChem. Commun., 2018,54, 12222に記載の方法により得た。以下に各ペプチドチオ酸の調製方法について記載する。

（１）Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｖａｌ-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥フラスコに、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＨ（１．１９ｇ、３．０ミリモル）及びＤＭＦ（２０ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで，ＡｃＳＫ（３．４３ｇ、３０ミリモル）とＡｃ_２Ｓ（１６１μＬ、１．５ミリモル）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、自動ＲＰ-カラムクロマトグラフィ-により精製して、黄色固体としてＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＳＨ（８７０ｍｇ、７０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４１５．５３（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４１５．１０）。保存時間：２９．７５分。

（２）Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｐｈｅ-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥フラスコに、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ（４４６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１０ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（３４２ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（２１μＬ、０．２ミリモル）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、自動ＲＰ-カラムクロマトグラフィ-により精製して、白色固体としてＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＳＨ（２５４ｍｇ、５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４８５．１５（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝４８５．５５）。保存時間：３１．６７分。

（３）Ｂｏｃ-Ｐｈｅ-Ｖａｌ-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥フラスコに、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＯＨ（１０９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（１７１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（１８μＬ、０．１５ミリモル）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製して、Ｂｏｃ-Ｐｈｅ-Ｖａｌ-ＳＨ（５７ｍｇ、５０％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４０３．１５（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝４０３．４９）。保存時間：３０．１６分。

（４）Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥試験管に、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（１２９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（１１４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（１０μＬ、０．１ミリモル）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を減圧下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、自動ＲＰ-カラムクロマトグラフィ-により精製して、黄色固体としてＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＳＨ（２５ｍｇ、１９％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６８３．１５（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６８３．８４）。保存時間：３７．８９分。

（５）Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥試験管に、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（１０５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（６８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（５μＬ、４０μｍｏｌ）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を還元圧力下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、自動ＲＰ-カラムクロマトグラフィ-により精製して、黄色固体としてＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＳＨ（３０ｍｇ，２８％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５６６．１０（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝５６６．６７）。保存時間：３１．８０分。

（６）Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ａｌａ-Ｖａｌ-ＳＨの合成
フレ-ム乾燥試験管に、Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＯＨ（４７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１ｍＭ）をアルゴン大気下で添加した。次いで，ＡｃＳＫ（５７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（５μＬ、５０μｍｏｌ）を溶液に添加した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌した後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を還元圧力下で濃縮した。残渣をアセトニトリルに溶解し、分取ＨＰＬＣにより精製して、黄色固体としてＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−ＳＨ（１１ｍｇ、２５％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０８．１５（ｃａｌｃｄ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝５０８．５９）。保存時間：２９．３４分。

２．Ｎ-ヒドロキシ-ピリドン添加剤の調製
（１）メチル１−ヒドロキシ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキシレ−ト（化合物１）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物１を合成した。

この化合物を文献（Ando, M.; Sato, N.; Nagase, T.; Nagai, K.; Ishikawa, S.; Takahashi, H.; Ohtake, N.; Ito, J.; Hirayama, M.; Mitobe, Y.; et al. Bioorganic Med. Chem. 2009, 17, 6106-6122.）に記載の方法で合成した。Ｓ１（１０．２ｇ、６０ミリモル）とＤＣＭ（８０ｍＬ）の攪拌溶液に、尿素過酸化水素（１２．０ｇ、１２２ミリモル）とＴＦＡＡ（１７．１ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を０℃で連続的に滴下し、反応混合物を室温に温め、３時間攪拌した。０℃に冷却した後、反応混合物にＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を添加し、濃縮した。混合物をＤＣＭで抽出し、ＮａＨＣＯ_３水溶液及び食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。有機層を濃縮して粗Ｓ２を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝３：１）で精製して、黄色固体としてＳ２を得た（７．８ｇ、７０％）。

Ｓ２（７．８ｇ、４１．７ミリモル）及びＭｅＣＮ（３ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡＡ（７ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）を室温で添加し、混合物を３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣に固体ＮａＨＣＯ_３及びメタノ-ルを添加した。ろ過後、ろ液を濃縮して粗生成物１を得た。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、淡黄色固体として１（３．０ｇ、４３％）を得た。
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 3.86 (3H, s), 6.62 (1H. d, J = 9.2 Hz), 7.92 (1H, dd, J = 2.4, 9.2 Hz), 8.56 (1H, d, J = 2.4 Hz); MS (ESI): m/z 170.10 (calcd [M+H]⁺= 170.14).

（２）１−ヒドロキシ−５−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物２）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物２を合成した。

Ｓ３（２４１μＬ、２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（１０ｍＬ）の撹拌溶液に、ｍＣＰＢＡ（９８６ｍｇ、４ｍｍｏｌ、３０％Ｈ_２Ｏを含む）を０℃で添加し、混合物を２時間撹拌した。１ＭのＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を反応混合物に添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ_３水溶液及び塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。濾過後、有機層を濃縮して粗生成物Ｓ４を得た。粗生成物Ｓ４をフラッシュカラムクロマトグラフィ−（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、白色固体としてＳ４（３２０ｍｇ，７９％）を得た。

Ｓ４（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（５００μＬ）の撹拌溶液に、フェニルボロン酸（４５ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１４ｍｇ、２．５μｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（６９ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で一晩撹拌し、反応混合物をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮して粗生成物Ｓ５を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ−（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、白色固体としてＳ５を得た（３４ｍｇ，６７％）。

Ｓ５（２０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及び乾燥ＤＣＭ（５００μＬ）の撹拌溶液に、ＢＣｌ_３（１Ｍヘプタン溶液、１５０μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）をアルゴン大気下で、-１０℃で滴下し、反応混合物を室温に温め、一晩撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を添加した後、反応混合物を濃縮して粗生成物２を得た。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製して、白色固体として２（５ｍｇ，２７％）を得た。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 6.84 (1H, d, J = 9.2), 7.36 (1H, m), 7.44 (4H, m), 7.67 (1H, d, J = 10.3), 8.02 (1H, s); MS (ESI): m/z 188.10 (calcd [M+H]⁺=188.21).

（３）メチル１−ヒドロキシル−２−オキソ−５−フェニル−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルボキシレ−ト（化合物３）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物３を合成した。

フレ-ム乾燥した５０ｍＬフラスコに、Ｎａ（３４０ｍｇ、１４ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）をアルゴン大気下、０℃で添加し、溶液にＳ６（１．０ｇ、４ミリモル）を添加し、混合物を３時間攪拌した。酢酸を中和するまで反応混合物に添加し、混合物を減圧下で濃縮した。酢酸エチル及びＨ_２Ｏを残渣に加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層をＨ_２Ｏ及び食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮して粗生成物Ｓ７を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製して、無色油状物としてＳ７を得た（８００ｍｇ，７７％）。

３０ｍＬのフラスコに、Ｓ７（３９０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（２７２ｍｇ，２．２５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（８６ｍｇ、７５μｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（４１４ｍｇ，３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（８ｍＬ）をアルゴン大気下で加え、混合物を１００℃で一晩撹拌した。酢酸エチル及びＨ_２Ｏを反応混合物に加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏで洗浄し、食塩水でＮａ_２ＳＯ_４上に乾燥し、粗生成物Ｓ８に濃縮した。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製して、白色固体としてＳ８を得た（２８０ｍｇ、７７％）。

試験管にＳ８（１２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、過酸化水素尿素（２９４ｍｇ、６．１ｍｍｏｌ）、及びＭｅＣＮ（２ｍＬ）を添加した。ＴＦＡＡ（４５０μＬ、６ｍｍｏｌ）を０℃の溶液に滴下し、反応物を室温に温め、混合物を一晩攪拌した。反応混合物にＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を添加し、混合物を濃縮した。酢酸エチル及びＨ_２Ｏを残渣に加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮して粗生成物Ｓ９を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝３：１）で精製して、白色固体としてＳ９を得た（５０ｍｇ、３８％）。

試験管にＳ９（２５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（５００μＬ）をアルゴン大気下で添加した。ＡｃＣｌ（７２μＬ、１ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、混合物を１時間加熱還流した。反応混合物を濃縮した。メタノ-ルを加え、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮して粗生成物３を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ−（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、白色固体として３を得た（１１ｍｇ、４５％）。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ3.97 (3H, s), 7.39 (2H, m), 7.46 (3H, m), 8.26 (1H, s), 8.47 (1H, s); MS (ESI): m/z 246 (calcd [M+H]⁺= 246.24).

（４）メチル２−（１−ヒドロキシ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）ベンゾエ−ト（化合物４）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物４を合成した。

１００ｍＬのフラスコに、Ｓ３（４８２ｍｇ、４ｍｍｏｌ）、２-（メトキシカルボニル）-フェニルボロン酸（１０７４ｍｇ、６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２３１ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（１１００ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２０ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で加え、混合物を１００℃で一晩撹拌した。酢酸エチル及びＨ_２Ｏを反応混合物に加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏ及び食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮して粗生成物Ｓ１０を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製して、白色固体としてＳ１０を得た（８００ｍｇ、８２％）。

５０ｍＬフラスコ中のＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＳ１０（６００ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）に、ｍＣＰＢＡ（１．８５ｇ、７．５ｍｍｏｌ、３０％Ｈ_２Ｏを含む）を０℃下で添加し、混合物を室温まで温め、一晩撹拌した。１ＭＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液を反応混合物に添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ_３水溶液及び食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。有機層を濃縮して粗生成物Ｓ１１を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、白色固体としてＳ１１（５８０ｍｇ、９０％）を得た。

反応混合物を濃縮し、メタノ-ルを加え、室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮して粗生成物３を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１９：１）で精製して、白色固体として４を得た（１２５ｍｇ、５１％）。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 3.65 (3H, s), 6.79 (1H, s), 7.41 (4H, m), 7.84 (1H, d, J = 8.0), 8.10 (1H, s); MS (ESI): m/z 246 (calcd [M+H]⁺= 246.24).

（５）メチル１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−カルビキシレ−ト（化合物５）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物５を合成した。

この化合物は、化合物１について記載した手順を用いて、黄色固体として調製した（７２ｍｇ、８５％）。
(500 MHz, (CD₃)₂SO): δ 3.74 (3H, s), 6.25 (1H, dd, J = 6.7, 7.4), 7.96 (1H, d, J = 7.4), 8.23 (1H, d, J = 6.7); MS (ESI): m/z 170.10 (calcd [M+H]⁺= 170.14).

（６）Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−１−ヒドロキシ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−カルボキサミド（化合物６）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物６を合成した。

化合物１（３．０ｇ、１７．７５ミリモル）、Ｋ_２ＣＯ_３（７．３ｇ、５３．２５ミリモル）、ＤＭＦ（４０ｍＬ）の攪拌溶液に、ＢｎＢｒ（２．５ｍＬ、２１．３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間攪拌し、反応混合物を濃縮した。得られた混合物に酢酸エチル及びＨ_２Ｏを加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物Ｓ１３を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製して、白色固体としてＳ１３（２．０ｇ、４４％）を得た。

Ｓ１３（２．０ｇ、８ミリモル）及びＭｅＯＨ（８ｍＬ）の撹拌溶液に、３ＭＮａＯＨ水溶液（８ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物に、１ＭＨＣｌ水溶液を中和するまで添加した。生成物を濃縮した。得られた残渣に酢酸エチル及び１ＭＨＣｌ水溶液を加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、そして濃縮して白色固体としてＳ１４（１．７ｇ、８７％）を得た。

Ｓ１４（４９ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（４３μＬ、０．４ミリモル）、及びＤＣＭ（１ｍＬ）の撹拌溶液に、ＷＳＣＩ（７６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、及びＨＯＢｔ（５４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を室温に温め、３時間撹拌した。得られた混合物に、ＤＣＭ及びＮａＨＣＯ_３水溶液を添加した。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮して粗生成物Ｓ１５を得た。この粗混合物を、さらなる精製なしで、次の反応に使用した。

粗生成物Ｓ１５及びＤＣＭ（１ｍＬ）の撹拌溶液に、ＢＣｌ_３（１Ｍヘプタン溶液２４０μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濃縮して粗生成物６を得た。粗混合物を分取ＨＰＬＣで精製して、白色固体として６（１１ｍｇ、２４％，２段階）を得た。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 2.25 (6H, s), 2.44 (2H, t, J = 5.7), 3.39 (2H, t, J = 5.7), 6.67 (1H, d, J = 9.7), 7.58 (1H, d, J = 9.7), 7.88 (1H, s); MS (ESI): m/z 259 (calcd [M+H]⁺= 259.28).

（７）５−（３−（ジメチルアミノ）ベンジル）−１−ヒドロキシピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７）
以下の合成スキ-ムに則り、化合物７を合成した。

ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＳ１４（４９０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びｐ-トルエンチオ-ル（２９８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＷＳＣＩ（４５８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（２７０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を室温に温め、３時間撹拌した。得られた混合物を濃縮した。酢酸エチル及びＮａＨＣＯ_３水溶液を加え、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上に乾燥し、濾過し、そして濃縮して粗生成物Ｓ１６を得た。粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ−（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）によって精製して、白色固体としてＳ１６（４８０ｍｇ、６８％）を得た。

Ｓ１６（７０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２ｍＬ）の撹拌溶液に、２-ジメチルアミノフェニルボロン酸（９９ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３・ＣＨＣｌ_３（５ｍｇ、４μｍｏｌ）、トリ（２-フリル）ホスフィン（３．５ｍｇ、１５μｍｏｌ）、及びＣｕＴＣ（１１５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を加熱還流し、一晩撹拌した。セライトで濾過した後、濾液を濃縮してＳ１７を得た。この粗混合物をさらに精製することなく次の反応に用いた。

Ｓ１７及びＤＣＭ（１ｍＬ）の撹拌溶液に、ＢＣｌ_３（６９０μＬ、０．７ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応溶液を濃縮して粗生成物７を得た。粗混合物を分取ＨＰＬＣで精製して、無色油状物として７（６ｍｇ、１２％、２段階）を得た。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 3.28 (6H, s), 6.73 (1H, s), 7.28-7.43 (4H, m), 7.75 (1H, d, J = 8.0), 7.99 (1H, d, J = 8.0); MS (ESI): m/z 259 (calcd [M+H]⁺= 259.28).

（８）化合物８の合成
以下の合成スキ-ムに則り、化合物７を合成した。

Ｓ１８（４ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ（７．２ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．６ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（８０ｍＬ）の混合溶液に、３,７,１１,１５―テトラメチルヘキサデカン−１−オール（１０．８ｍＬ、３０．２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７．２ｍＬ、３７．８ｍｍｏｌ）を室温で添加し、アルゴン雰囲気下、室温で２５時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。残渣に酢酸エチル及び１ＭＨＣl水溶液を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水で洗浄を二回行い、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去して粗生成物Ｓ１９を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝２０：８０ → ４０：６０）で精製して、Ｓ１９を得た（８．８５ｇ、８０％）。

Ｓ１９（８．８５ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）、尿素過酸化水素（３．９５ｇ、４２．４ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（５０ｍＬ）の混合溶液にトリフルオロ酢酸無水物（５．７ｍＬ、４０．４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、アルゴン雰囲気下、室温で１６時間攪拌した。０℃に冷却し、反応溶液に飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（５．５ｍＬ）を添加し、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重曹水で洗浄を二回行い、食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去して粗生成物Ｓ１９を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝１０：９０ → １００：０）で精製して、Ｓ２０を得た（７．５１ｇ、８２％）。

Ｓ２０（７．５１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１５ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡＡ（３０ｍｌ）を室温で添加し、アルゴン雰囲気下、室温で１４時間撹拌した。溶媒を減圧除去しを、残渣に固体ＮａＨＣＯ_３及びクロロホルムを添加した。ろ過後、溶媒を減圧除去して粗生成物８を得た。粗生成物を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝４０：６０ → １００：０）で精製して黄色液体８（５．８２ｇ、８１％）を得た。
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ 0.83-0.89 (12H, m), 0.96 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.02-1.44 (20H, m), 1.45-1.66 (3H, m), 1.70-1.82 (1H, m), 4.24-4.40 (2H. m), 6.63 (1H, d, J = 9.2 Hz),7.92 (1H, dd, J = 2.3, 9.7 Hz), 8.52 (1H, d, J =2.9 Hz); MS (ESI): m/z 436.30 (calcd [M+H]⁺= 436.34).

（９）化合物９の合成
以下の合成スキ-ムに則り、化合物９を合成した。

この化合物は、化合物８について記載した手順を用いて、黄色液体９を得た（１．５３ｇ、９６％）。
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ0.87 (6H, d, J = 6.3 Hz), 0.94 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.08-1.20 (3H, m), 1.23-1.38 (3H, m), 1.44-1.64 (3H, m), 1.70-1.82 (1H, m), 4.28-4.38 (1H, m), 6.73 (1H, d, J =9.7 Hz), 7.96 (1H, dd, J =2.9, 9.7 Hz), 8.55 (1H, d, J =2.3 Hz); MS (ESI): m/z 296.20 (calcd [M+H]⁺= 296.19).

（１０）化合物１０の合成
以下の合成スキ-ムに則り、化合物１０を合成した。

この化合物は、化合物８について記載した手順を用いて、黄色固体１０を得た（２０５ｍｇ、９２％）。
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ0.91 (3H, t, J =7.4 Hz), 1.30-1.38 (4H, m), 1.40-1.46 (2H, m),1.70-1.76 (2H, m), 4.26 (3H, t, J =6.9 Hz), 6.61 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.90-7.92 (1H, m), 8.48-8.54 (1H, m); MS (ESI): m/z 240.15 (calcd [M+H]⁺= 240.12).

（１１）化合物１１の合成
以下の合成スキ-ムに則り、化合物１１を合成した。

この化合物は、化合物８について記載した手順を用いて、黄色液体１１を得た（１３１ｍｇ、４８％）。
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ0.93 (6H, t, J = 7.4 Hz), 1.60-1.75 (4H, m), 4.90-4.95 (1H. m), 6.63 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.93 (1H, dd, J = 2.3 Hz, 9.2 Hz), 8.53 (1H, d, J = 2.3 Hz); MS (ESI): m/z 226.40 (calcd [M+H]⁺=226.11).

（１２）化合物１２の合成
以下の合成スキ-ムに則り、化合物１２を合成した。

Ｓ１８（６３２ｍｇ、４ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ_２Ｏ（１．３１ｇ、６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４８．９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）の混合溶液をアルゴン雰囲気下、加熱還流しながら３時間撹拌し、溶媒を減圧除去した。残渣にジエチルエーテル及び水を添加し、混合物をジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水の順に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去して粗生成物Ｓ２７を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝５：９５ → ３０：７０）で精製して、Ｓ２７を得た（６２２ｍｇ、７３％）。

Ｓ２７（２８５ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）、尿素過酸化水素（２６３ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（１３．３ｍＬ）の混合溶液にトリフルオロ酢酸無水物（３７４μＬ、２．６６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、アルゴン雰囲気下、室温で７時間攪拌した。０℃に冷却し、反応溶液に飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液及び水を添加し、反応混合物をクロロホルムで抽出した。有機層を飽和重曹水で洗浄を二回行い、食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去して粗生成物Ｓ２８を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝２０：９０ → １００：０）で精製して、Ｓ２８を得た（２８０ｍｇ、９２％）。

Ｓ２８（２８０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１２．２ｍＬ）の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸無水物（３４４μＬ、２．４４ｍｍｏｌ）を室温で添加し、アルゴン雰囲気下、反応溶液を１時間２０分撹拌した。反応溶液にトリフルオロ酢酸無水物（１７５μＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、室温で１４時間３０分攪拌した。混合物を１時間２０分撹拌した。反応溶液にトリフルオロ酢酸無水物（１７５μＬ、１．２２ｍｍｏｌ）を室温で添加し、室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧除去し、残渣に固体ＮａＨＣＯ_３及びクロロホルムを添加した。ろ過後、溶媒を減圧除去して粗生成物１２を得た。粗生成物を中性シリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／メタノール＝１００：０ → ８５：１５）で精製して、白色固体１２（１１９ｍｇ、４６％）を得た
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD): δ1.56 (9H,s), 6.60 (1H, d, J = 9.2 Hz), 7.84--7.90 (1H, m), 8.43 (1H, d, J =2.3 Hz); MS (ESI): m/z 240.12 (calcd [M+H]⁺= 240.15).

［合成実施例１］
ジペプチドチオ酸と種々のアミノ酸との縮合
以下の反応スキ-ムにより、ジペプチドチオ酸と種々のアミノ酸との縮合を行った。

Ｈ-ＡＡ-ＯＨは任意のアミノ酸を示す。

Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤、二次亜リン酸及びペプチドチオ酸を原液として用いた。１．５ｍＬのマイクロチュ-ブに、Ｎ-ヒドロキシピリドン添加物、二次亜リン酸、アミノ酸を添加した。次いで、ペプチドチオ酸の溶液を添加し、３０℃で所定の反応時間撹拌した。反応混合物を１％ＴＦＡのＤＭＳＯ溶液で希釈し、ＨＰＬＣで分析した。収率は検量線により決定した。

得られた結果（収率、エピメリ度）を以下の表１に示す。

上記で得られたペプチドの特性を調べた結果を以下に記載する。
Cbz-Phe-Val-Gly-OH MS (ESI): m/z 478.15 (calcd [M+Na]⁺ = 478.50)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 25.10 min
Cbz-Phe-Val-Ala-OH MS (ESI): m/z 470.10 (calcd [M+H]⁺ = 470.23)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 24.69 min
Cbz-Phe-Val-Val-OH MS (ESI): m/z 520.10 (calcd [M+Na]⁺ = 520.24)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 26.72 min
Cbz-Phe-Val-Ile-OH MS (ESI): m/z 512.20 (calcd [M+H]⁺ = 512.28)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.56 min
Cbz-Phe-Val-Phe-OH MS (ESI): m/z 568.15 (calcd [M+Na]⁺ = 568.24)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.21 min
Cbz-Phe-Val-Met-OH MS (ESI): m/z 552.10 (calcd [M+Na]⁺ = 552.21)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 27.59 min
Cbz-Phe-Val-Pro-OH MS (ESI): m/z 518.10 (calcd [M+Na]⁺ = 518.23)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 25.52 min
Cbz-Phe-Val-Trp(Boc)-OH MS (ESI): m/z 707.20 (calcd [M+Na]⁺ = 707.31)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 33.68 min
Cbz-Phe-Val-Lys(Boc)-OH MS (ESI): m/z 649.25 (calcd [M+Na]⁺ = 649.32)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.58 min
Cbz-Phe-Val-Tyr(O^tBu)-OH MS (ESI): m/z 584.40 (calcd [M+Na]⁺ = 584.24)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 30.46 min
Cbz-Phe-Val-Cys(Trt)-OH MS (ESI): m/z 766.20 (calcd [M+Na]⁺ = 766.29)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 34.59 min
Cbz-Phe-Val-Asp(^tBu)-OH MS (ESI): m/z 592.10 (calcd [M+Na]⁺ = 592.64)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.25 min
Cbz-Phe-Val-Asn(Trt)-OH MS (ESI): m/z 777.25 (calcd [M+Na]⁺ = 777.87)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 33.25 min
Cbz-Phe-Val-Ser(O^tBu)-OH MS (ESI): m/z 564.20 (calcd [M+Na]⁺ = 564.27)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 29.08 min
Cbz-Phe-Val-Thr(O^tBu)-OH MS (ESI): m/z 500.10 (calcd [M+Na]⁺ = 500.24)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 29.47 min
Cbz-Phe-Val-Arg(Pbf)-OH MS (ESI): m/z 807.05 (calcd [M+H]⁺ = 807.37)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 29.87 min
Cbz-Phe-Val-His(Trt)-OH MS (ESI): m/z 778.20 (calcd [M+H]⁺ = 778.93)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 30.87 min
Cbz-Phe-Val-tertLeu-OH MS (ESI): m/z 512.10 (calcd [M+H]⁺ = 512.63)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.53 min
Cbz-Phe-Val-Aib-OH MS (ESI): m/z 484.15 (calcd [M+H]⁺ = 484.57)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 25.31 min
Cbz-Phe-Val-Pg-OH MS (ESI): m/z 532.15 (calcd [M+H]⁺ = 532.62)

［合成実施例２］
保護基の検討
ペプチド合成にて汎用されるＦｍｏｃ、およびＢｏｃを有する末端Ｖａｌジペプチドを用いて検討を行った。結果を以下に示す。

上記で得られたペプチドの特性を調べた結果を以下に記載する。
Fmoc-Phe-Val-Ala-OH MS (ESI): m/z 580.15 (calcd [M+Na]⁺ = 580.64)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time 29.83 min
Boc-Phe-Val-Ala-OH MS (ESI): m/z 458.15 (calcd [M+Na]⁺ = 458.51)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 24.62 min

表２で示されるように、Ｃｂｚを用いた場合と同様に反応は高収率および低エピメリ化率にて進行した。

［合成実施例３］
Ｃ末端残基の検討
Ｃ末端残基がＶａｌ以外のジペプチドチオ酸を用いた検討を行った。結果を以下に示す。

上記で得られたペプチドの特性を調べた結果を以下に記載する。
Cbz-Phe-Phe-Ala-OH MS (ESI): m/z 540.05 (calcd [M+Na]⁺ = 540.21)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 27.56 min
Cbz-Phe-Phe-Val-OH MS (ESI): m/z 568.10 (calcd [M+Na]⁺ = 568.24)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 29.28 min
Cbz-Phe-Lys(Boc)-Ala-OH MS (ESI): m/z 621.20 (calcd [M+Na]⁺ = 621.69)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 27.95 min
Cbz-Phe-Lys(Boc)-Val-OH MS (ESI): m/z 649.25 (calcd [M+Na]⁺ = 649.74)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 29.53 min
Cbz-Phe-Cys(Trt)-Ala-OH MS (ESI): m/z 738.15 (calcd [M+Na]⁺ = 738.85)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 34.15 min
Cbz-Phe-Cys(Trt)-Val-OH MS (ESI): m/z 766.10 (calcd [M+Na]⁺ = 766.91)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 35.33 min

Ｃ末端として、疎水性アミノ酸Ｐｈｅを用いた場合および親水性アミノ酸Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）を用いた場合のどちらにおいても反応は高い収率で進行し、またエピメリ化率も１％未満に抑えられていた。一方、エピメリ化が起きやすいとされているＣｙｓ（Ｔｒｔ）を用いた場合では、Ａｌａとのカップリングで４％、バリンとのカップリングで２％程度のエピメリ化が認められた。

［合成実施例４］
添加剤（エピメリ化抑制剤）の検討（１）
Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｖａｌ-ＳＨとアラニンとの以下の縮合反応において、添加剤の種類を変更した。その結果を以下にまとめる。

メチルエステルの部分をアミド構造にし、塩基性部位であるピリジンを持たせたものは、おそらくは活性エステルの段階で脱プロトン化が促進し、かつ活性エステルの反応性もエステル型より悪いために、収率/エピ化率ともに悪い結果を与えた。塩素置換体はヒドロキシ基の求核力が低く、活性エステル形成が適切な速度で行われないため、収率が低下する傾向にあった。

［合成実施例５］
添加剤（エピメリ化抑制剤）の検討（２）
Ｃｂｚ-Ｐｈｅ-Ｖａｌ-ＳＨとアラニンとの以下の縮合反応において、添加剤の種類を変更した。その結果を以下にまとめる。

反応時間を２２時間にして、各種添加剤（エピメリ化抑制剤）を用いた場合の結果（収率、エピメリ度）を以下に示す。

一般式(III)において、Ｒ_４がエステル基であり、Ｌが水素である化合物５は、化合物１等に比べてエピメリ度が若干高いものの、高い収率で生成物を得ることができた。

反応時間を６時間にして、各種添加剤を用いた場合の結果（収率、エピメリ度）を以下に示す。

Ｈ−Ａｌ−ＯＨを２当量に、添加剤を２当量にして、各種添加剤を用いた場合の結果（収率、エピメリ度）を以下に示す。

メチルエステルの部分のアルキル鎖を伸長したものは、収率、エピメリ度とも良好であった。ただし、エステル部分のアルキル鎖の炭素数が６である化合物１１では、結晶化度が高く、生成物２ｂａから分離するのは困難であった。これに対して、アルキル鎖の炭素数が化合物１１よりも大きいが分岐型のアルキル鎖を有する化合物１２、１３では、再結晶することにより、夫々、７６％、７３％の添加剤を回収することができた。

［合成実施例６］
ジペプチドチオ酸と種々のアミノ酸との縮合
以下の反応スキ-ムにより、ジペプチドチオ酸と種々のアミノ酸との縮合を行った。

試験管にＮ-ヒドロキシピリドン（７８．４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ジペプチドチオ酸（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、Ｌ−バリン（２８．１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、トルエン（６００μＬ）、ジメチルスルホキシド（６００μＬ）を添加し、反応溶液を３０℃で６時間撹拌した。反応溶液（１２μＬ）を１％トリフルオロ酢酸のジメチルスルホキシド溶液（６８μＬ）で希釈し、ＨＰＬＣで分析した。収率、エピメリ度は検量線により決定した（収率 <99%、エピメリ度 <1%）。残りの反応溶液の溶媒を減圧除去し、残渣に酢酸エチル及び１ＭＨＣｌ水溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧除去して粗生成物トリペプチドを得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ-（酢酸エチル／ヘキサン＝３０：７０ → １００：０）で精製して、トリペプチド（５０ｍｇ、８４％）を得た。

［合成実施例７］
可溶化剤の検討
Ｃｂｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−ＳＨとアラニンとの以下の縮合反応において、可溶化剤の種類を変更した。その結果を以下にまとめる。

ジアルキルホスファイトが良好な結果をあたえ、特にジエチルホスファイトを用いた時最も高い反応加速効果が見られた。反応開始から６時間の時点での収率は非添加の５９％から８４％に向上した。エトキシ基からさらに嵩高い官能基を持つジアルキルホスファイトを用いた場合、収率の低減が見られたことから、ホスファイト上の立体が反応性に寄与していることが考えられる。また、アルキル基がリン上に直接導入されているホスファイトを用いた場合にも反応性が低下したことから、立体効果に加え、電子状態も反応性に寄与していることが示唆された。また、ジエチルチオホスファイトを用いた場合には、チオ酸とチオホスファイトが直接反応しているためか系が複雑化し、トリペプチドの収率も３４％まで低下した。

［合成実施例８］
フラグメントカップリング反応の一般的方法
Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤１（１２μｍｏｌ）、亜りん酸ジエチル（１２μｍｏｌ），ＤＩＰＥＡ（２４μｍｏｌ）及びペプチドチオ酸（１２μミリモル）を、それぞれ原液として用いた。１．５ｍＬマイクロチュ-ブに、ペプチド断片（１４．４μｍｏｌ）を添加した。次いで，Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤１（ＤＭＳＯ中１２μｍｏｌ、１２μＬ）、亜リン酸ジエチル（ＤＭＳＯ中１２μｍｏｌ、１２μＬ）、及びＤＩＰＥＡ（ＤＭＳＯ中１２μｍｏｌ、１２μＬ）の原液をマイクロチュ-ブに添加した。最後に、ペプチドチオ酸（ＤＭＳＯ中１２μｍｏｌ、４８μＬ）の溶液を加え、指示された反応時間の間、３０℃で撹拌した。反応混合物をＤＭＳＯ（６８０μＬ）の１％ＴＦＡ溶液で希釈し、ＨＰＬＣで分析した。検量線に基づいてＨＰＬＣにより収率を測定した。

［合成実施例９］
連続ペプチド合成
（１）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＯＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＳＨ
フレ-ム乾燥した試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＯＨ（７４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（２ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（１１４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（１２μＬ、０．１ミリモル）を溶液に添加した。反応混合物を０℃で５時間攪拌し、混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を１ＭＨＣｌ水溶液及び食塩水で洗浄し、次いでＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。乾燥剤を濾取した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を凍結乾燥し、さらなる精製なしに次の反応に使用した。

（２）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＳＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＨ
試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＳＨ及びＤＭＳＯ：トルエン＝１：１（２ｍＬ）の混合溶媒液を加えた。次いで、Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤１（３４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｇｌｙ（１８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル（２６μＬ）を加え、３０℃で６時間攪拌し、反応混合物を１．５ｍＭに希釈し、分析用ＨＰＬＣで分析したところ、ＨＰＬＣ収率は８９％であった。次いで、シリンジフィルタ-で不溶性物質を除去し、反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製した。Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＨを６６ｍｇ（７７％）得た。
Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＨの特性を調べた結果は以下の通りである。
MS (ESI): m/z 451.15 (calcd [M+Na]⁺ = 451.47)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 26.87 min

（３）Ｃｂｚ-Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）-Ｇｌｙ-ＯＨ -＞Ｃｂｚ-Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）-Ｇｌｙ-ＳＨ
フレ-ム乾燥した試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＨ（８５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（１１４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（１２μＬ、０．１ミリモル）を溶液に添加した。反応混合物を０℃で５時間攪拌し、混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を１ＭＨＣｌ水溶液及び食塩水で洗浄し、次いでＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。乾燥剤を濾取した後、濾液を還元圧力下で濃縮した。残渣を凍結乾燥し、さらなる精製なしに次の反応に使用した。

（４）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＳＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ
試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＳＨ及びＤＭＳＯ：トルエン＝１：１（２ｍＬ）の混合溶媒液を加えた。次いで、Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤１（３４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｇｌｙ（１８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル（２６μＬ）を加え、３０℃で６時間攪拌し、反応混合物を１．５ｍＭに希釈し、分析用ＨＰＬＣで分析したところ、ＨＰＬＣ収率は９４％であった。次いで、シリンジフィルタ-で不溶性物質を除去し、反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製した。Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨを７１ｍｇ（７３％）得た。
Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨの特性を調べた結果は以下の通りである。
MS (ESI): m/z 508.15 (calcd [M+Na]⁺ = 508.21)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 26.87 min

（５）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＳＨ
フレ−ム乾燥試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（４９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）をアルゴン雰囲気下で添加した。次いで、ＡｃＳＫ（３４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（２．１μＬ、０．０２ミリモル）を溶液に添加した。反応混合物を０℃で３時間攪拌し、混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を１ＭＨＣｌ水溶液及び食塩水で洗浄し、次いでＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。乾燥剤を濾取した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を凍結乾燥し、さらなる精製なしに次の反応に使用した。

（６）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＳＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ
試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＳＨ及びＤＭＳＯ：トルエン＝１：１（１ｍＬ）の混合溶媒液を加えた。次いで、Ｎ-ヒドロキシピリドン添加剤１（１７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、Ｐｈｅ（２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル（１３μＬ）を加え、３０℃で６時間攪拌し、反応混合物を１．５ｍＭに希釈し、分析用ＨＰＬＣで分析したところ、ＨＰＬＣ収率は８７％であった。次いで、シリンジフィルタ-で不溶性物質を除去し、反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製した。Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨを４０ｍｇ（６３％）た。
Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨの特性を調べた結果は以下の通りである。
MS (ESI): m/z 655.25 (calcd [M+Na]⁺ = 655.27)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 28.39 min

（７）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＳＨ
フレ−ム乾燥試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＯＨ（１３ｍｇ、２０μｍｏｌ）及びＤＭＦ（２００μＬ）をアルゴン雰囲気下で添加した。次いで，ＡｃＳＫ（１１ｍｇ、１００μｍｏｌ）とＡｃ_２Ｓ（１μＬ、１０μｍｏｌ）を溶液に添加した。反応混合物を０℃で５時間攪拌し、混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を１ＭＨＣｌ水溶液及び食塩水で洗浄し、次いでＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥した。乾燥剤を濾取した後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を凍結乾燥し、さらなる精製なしに次の反応に使用した。

（８）Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＳＨ −＞Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ
試験管に、Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＳＨ及びＤＭＳＯ：トルエン＝１：１（２００μＬ）の混合溶媒液を加えた。次いで、Ｎ−ヒドロキシピリドン添加剤１（４ｍｇ、２０μｍｏｌ）、Ｌｅｕ（４ｍｇ、２４μｍｏｌ）、亜リン酸ジエチル（１３μＬ）を加え、３０℃で６時間攪拌し、反応混合物を１．５ｍＭに希釈し、分析用ＨＰＬＣで分析したところ、ＨＰＬＣ収率は５４％であった。次いで、シリンジフィルタ−で不溶性物質を除去し、反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製した。Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨを７ｍｇ（４７％）得た。
Ｃｂｚ-Ｔｙｒ（Ｏ^ｔＢｕ）-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｐｈｅ-ＬｅｕＯＨの特性を調べた結果は以下の通りである。
MS (ESI): m/z 768.25 (calcd [M+Na]⁺ = 768.36)
Purity: >95% (HPLC analysis at 230 nm) Retention time: 30.00 min

Claims

以下の式（I）で表される化合物と、以下の式（II）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、式（V）の化合物を調製する方法。

（式中、

は、
保護基を表すか、Ｎ末端が保護基で保護されたアミノ酸又はペプチドを表し、
Ｒ_１は、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、Ｒ_２は、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、アミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、水素、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）

（式中、

、Ｒ_１及びＲ_２は、上記で定義した通りである。）
反応溶媒として、ＤＭＳＯとトルエンの混合溶媒を用いる、請求項１に記載の方法。
前記カップリング反応の前に、以下の式（VI）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させることにより、式（I）で表される化合物を調製する工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。

（式中、Ｒ_１は、式（I）で定義した通りである。）

（式中、Ｒ_７は、炭素数１〜４のアルキル基又は置換又は無置換のアリ-ル基である。）
ＰＧ−（ＡＡ）_ｎ−ＳＨ：
（ＰＧは、Ｎ末端の保護基を表し、
ＡＡは、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｎは、１〜４の整数である。）
で表される化合物と、
Ｈ−（ＡＡ’）_ｍ−ＯＨ：
（ＡＡ’は、任意のアミノ酸残基を表し、各出現において同一又は異なっていてもよく、アミノ酸残基の一部又は全ての側鎖は保護基で保護されていてもよく、
ｍは、１〜４の整数である。）
で表されるアミノ酸又はペプチドを、
以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させることにより、ＰＧ−（ＡＡ）_ｎ（ＡＡ’）_ｍ−ＯＨで表される化合物を調製する方法。

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、アミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、又はハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法に続けて、
（ｉ）以下の式（V）で表される化合物を、以下の式（１）の化合物と反応させることにより、式（VII）で表される化合物を調製する工程：

（式中、

、Ｒ_１、Ｒ_２は、式（I）及び（II）で定義した通りである。）

（式中、Ｒ_７は、炭素数１〜４のアルキル基又は置換又は無置換のアリ-ル基である。）

（ｉｉ）式（VII）で表される化合物と、以下の式（VIII）で表されるアミノ酸を、以下の式（III）で表される化合物及び以下の式（IV）で表される化合物の存在下で反応させる工程：
を含む、式（VIIII）の化合物を調製する方法。

（式中、Ｒ_３ａは、α−アミノ酸の側鎖であり、当該側鎖は保護基で保護されていてもよい。）

（式中、
Ｌは、エステル基（−ＣＯ_２Ｒ；Ｒは炭素数１〜３０のアルキル基）、置換又は無置換のアリ−ル基、置換又は無置換のベンゾイル基、アミノ基で置換されていてもよいアミド基（−ＣＯＮＲ’Ｒ’’；Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、水素原子又は炭素数１〜４の置換又は無置換のアルキル基であり、Ｒ’及びＲ’’の少なくとも一方はアミノ基で置換されているアルキル基である）、及びアシル基（−ＣＯＲ_ａ’；Ｒ_ａ’は炭素数１〜４のアルキル基）からなる群から選択され、但し、Ｒ_３及びＲ_４の少なくとも１つがエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）である場合は、Ｌは水素（Ｈ）であってもよく、
Ｒ_３及びＲ_４は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、ハロゲン又はエステル基（−ＣＯ_２Ｒ_ａ；Ｒ_ａは炭素数１〜４のアルキル基）を表す。）

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）

（式中、

、Ｒ_１〜Ｒ_２、Ｒ_３ａは、上記で定義した通りである。）
以下の式（IV）で表される化合物をペプチド合成において可溶化剤として使用する方法。

（式中、Ｒ_５及びＲ_６は、各々独立に、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、置換基を有していてもよいベンジルオキシ基又はヒドロキシ基を表し（但し、Ｒ_５及びＲ_６の両方がヒドロキシ基になることはない）、
Ｒ_５及びＲ_６は一緒になってＲ_５及びＲ_６が結合しているリン原子を含む４〜７員の置換又は無置換のヘテロシクリルを形成してもよい。）