JP2021093927A - 細胞構造体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体であって、前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含み、前記細胞構造体に接触させて第2の細胞集団を培養したときに、前記第2の細胞集団を生体内と類似する状態で培養するために用いられる、細胞構造体。
[2]前記第1の細胞集団が、血管内皮細胞を更に含み、前記間質細胞は線維芽細胞である、[1]に記載の細胞構造体。
[3]前記第2の細胞集団が株化された細胞を含む、[1]又は[2]に記載の細胞構造体。
[4]前記第2の細胞集団ががん細胞を含む、[1]〜[3]のいずれかに記載の細胞構造体。
[5]前記細胞構造体の厚みが40μm以上である、[1]から[4]のいずれかに記載の細胞構造体。
[6]前記第1の細胞集団の細胞数と、前記第2の細胞集団の細胞数の比(前記第1の細胞集団の細胞数:前記第2の細胞集団の細胞数)が、3:1〜300:1である、[1]から[5]のいずれかに記載の細胞構造体。
[7]第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体に、第2の細胞集団を接触させて培養する工程を含み、前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含む、前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
[8]前記第1の細胞集団が、血管内皮細胞を更に含み、前記間質細胞が線維芽細胞である、[7]に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
[9]前記第2の細胞集団が株化された細胞を含む、[7]又は[8]に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
[10]前記第2の細胞集団ががん細胞を含む、[7]〜[9]のいずれかに記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
[11]前記細胞構造体が、前記第1の細胞集団をカチオン性物質、細胞外マトリックス成分及び高分子電解質と混合して混合物を得る工程と、得られた前記混合物中の細胞を培養して前記細胞構造体を得る工程と、を含む、方法により製造されたものである、[7]〜[10]のいずれかに記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
[12]被験物質の評価方法であって、前記被験物質の存在下で、[1]〜[6]のいずれかに記載の細胞構造体に接触させて細胞集団を培養し、前記細胞集団の状態を解析する工程と、前記被験物質の存在下における前記状態と、前記被験物質の非存在下における前記状態とを比較し、前記被験物質の効果を評価する工程と、を含む、評価方法。
一実施形態において、本発明は、第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体であって、前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含み、前記細胞構造体に接触させて第2の細胞集団を培養したときに、前記第2の細胞集団を生体内と類似する状態で培養するために用いられる、細胞構造体を提供する。
第1の細胞集団は、少なくとも間質細胞を含み、更に、間質細胞以外の細胞を含んでもよい。間質細胞以外の細胞としては、免疫細胞、神経細胞、肝細胞、膵細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、骨細胞、肺胞上皮細胞、脾臓細胞等が挙げられる。
本実施形態において、第1の細胞集団が含む細胞種は、特に限定されず、動物から採取された細胞であってもよく、動物から採取された細胞を培養した細胞であってもよく、動物から採取された細胞に各種処理を施した細胞であってもよく、培養細胞株であってもよい。動物から採取された細胞の場合、採取部位は特に限定されず、骨、筋肉、内臓、神経、脳、骨、皮膚、血液などに由来する体細胞であってもよく、生殖細胞であってもよく、胚性幹細胞(ES細胞)であってもよい。また、本実施形態に係る細胞構造体を構成する細胞が由来する生物種は、特に限定されず、例えば、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウシ、マウス、ラット等の動物に由来する細胞を用いることができる。動物から採取された細胞を培養した細胞としては、初代培養細胞であってもよく、継代培養細胞であってもよい。また、各種処理を施した細胞としては、誘導多能性幹細胞細胞(iPS細胞)や、分化誘導後の細胞が挙げられる。また、本実施形態に係る細胞構造体は、同種の生物種由来の細胞のみから構成されていてもよく、複数種類の生物種由来の細胞により構成されていてもよい。
細胞構造体に含まれる細胞外マトリックス成分としては、例えば、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、エラスチン、テネイシン、エンタクチン、フィブリリン、プロテオグリカン、又はこれらの改変体若しくはバリアント等が挙げられる。プロテオグリカンとしては、例えば、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ケラタン硫酸プロテオグリカン、デルマタン硫酸プロテオグリカン等が挙げられる。また、細胞の生育及び細胞構造体の形成に悪影響を及ぼさない限り、細胞構造体は、上述した細胞外マトリックス成分の改変体及びバリアントを含んでもよい。細胞構造体は、1種類の細胞外マトリックス成分を含んでも良く、2種類以上の細胞マトリックスを含んでもよい。細胞構造体は、コラーゲン、ラミニン、フィブロネクチンを含むことが好ましく、コラーゲンを用いることがより好ましい。上述のタンパク質は、細胞から抽出したものであってもよいし、ペプチド合成等により人工的に合成されたものであってもよい。
第2の細胞集団に含まれる細胞としては、特に限定されず、動物から採取された細胞であってもよく、動物から採取された細胞を培養した細胞であってもよく、動物から採取された細胞に各種処理を施した細胞であってもよく、培養細胞株であってもよい。動物から採取された細胞の場合、採取部位は特に限定されず、骨、筋肉、内臓、神経、脳、骨、皮膚、血液などに由来する体細胞であってもよく、生殖細胞であってもよく、胚性幹細胞(ES細胞)であってもよい。また、第2の細胞集団に含まれる細胞が由来する生物種は、特に限定されず、例えば、ヒト、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウシ、マウス、ラット等の動物に由来する細胞を用いることができる。動物から採取された細胞を培養した細胞としては、初代培養細胞であってもよく、継代培養細胞であってもよく、株化された細胞であってもよい。また、各種処理を施した細胞としては、誘導多能性幹細胞細胞(iPS細胞)や、分化誘導後の細胞が挙げられる。第2の細胞集団は、一種類の細胞のみから構成されていてもよく、複数種類の細胞により構成されていてもよい。
細胞構造体は、高分子電解質を含んでもよい。高分子電解質としては、例えば、ヘパリンや、コンドロイチン硫酸(例えば、コンドロイチン4−硫酸、コンドロイチン6−硫酸)、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヒアルロン酸等のグリコサミノグリカン;デキストラン硫酸や、ラムナン硫酸、フコイダン、カラギナン、ポリスチレンスルホン酸、ポリアクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸、及びポリアクリル酸、又はこれらの誘導体等が挙げられるが、これらに限定されない。細胞構造体は、1種類のみの高分子電解質を含んでもよく、2種類以上の高分子電解質を含んでもよい。高分子電解質としては、グリコサミノグリカンであることが好ましい。また、高分子電解質としては、ヘパリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン硫酸、及びデルマタン硫酸のうち少なくとも1つを用いることがより好ましい。高分子電解質はヘパリンであることがさらに好ましい。
細胞構造体は、カチオン性物質を含んでもよい。カチオン性物質としては、細胞の生育および細胞構造体に悪影響を及ぼさない限り、任意の正電荷を有する物質を用いることができる。カチオン性物質には、トリス−塩酸緩衝液、トリス−マレイン酸緩衝液、ビス−トリス−緩衝液、およびHEPESなどのカチオン性緩衝液、ならびにエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン、ポリリシン、ポリヒスチジン、およびポリアルギニンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、本発明で用いられるカチオン性物質はカチオン性緩衝液である。より好ましい実施形態では、本発明で用いられるカチオン性物質はトリス−塩酸緩衝液である。
一実施形態において、本発明は、第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体に、第2の細胞集団を接触させて培養する工程を含み、前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含む、前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法を提供する。
(b’−1)工程(a)で得られた混合物を細胞培養容器内に播種した後、混合物から液体成分を除去し、細胞粘稠体を得る工程と、
(b’−2)細胞培養容器内に細胞粘稠体を溶媒に懸濁する工程。
(c’):基材上で細胞構造体をインキュベートする工程。
一実施形態において、本発明は、被験物質の評価方法であって、被験物質の存在下で、上述の細胞構造体に接触させて細胞集団を培養し、細胞集団の状態を解析する工程と、被験物質の存在下における状態と、被験物質の非存在下における状態とを比較し、被験物質の効果を評価する工程と、を含む、評価方法を提供する。
の細胞集団と同様の細胞が挙げられる。
本実施形態に係る評価方法に用いられる抗がん剤は、がん治療に用いられる薬剤であればよく、細胞障害性を有する薬剤のようにがん細胞に直接的に作用する薬剤のみならず、細胞障害性を有さないが、がん細胞の増殖等を抑制する薬剤も含まれる。細胞障害性を有さない抗がん剤としては、がん細胞を直接的に攻撃することはせず、その他の薬剤との協働的な作用によって、がん細胞の増殖を抑制したり、がん細胞の活動を鈍らせたり、がん細胞を死滅させたりする機能を発揮する薬剤や、がん細胞以外の細胞や組織を障害することによってがん細胞の増殖を抑制する薬剤が挙げられる。本実施形態において用いられる抗がん剤は、抗がん作用を有することが既知である薬剤であってもよく、新規な抗がん剤の候補化合物であってもよい。本実施形態のがん細胞が免疫細胞と共培養される場合、抗癌剤は、生体内の免疫細胞と協働的に作用する薬剤であってもよい。
(細胞構造体によるがん細胞の増殖抑制効果)
繊維芽細胞と血管内皮細胞とからなり、血管網構造を備える細胞構造体を用いて、がん細胞の増殖抑制の効果を評価した。評価は、がん細胞を7日間培養した後に行った。
細胞構造体の形成において、以下の細胞を用いた。
NHDF:ヒト新生児由来皮膚線維芽細胞(Normal Human Dermal Fibroblasts、Lonza社製、製品番号:CC−2509)
HUVEC:ヒト臍帯静脈内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell、Lonza社製、製品番号:CC−2517A)
がん細胞として、以下のがん細胞を用いた。
HT29:ヒト結腸直腸腺がん細胞株(ATCC番号:CCL−247)
HCT116:ヒト結腸直腸腺がん細胞株(ATCC番号:CCL−247)
DLD−1:ヒト結腸直腸腺がん細胞株(ATCC番号:CCL−221)
A549:ヒト肺がん細胞株(ATCC番号:CCL−185)
NCI−H1975:ヒト肺がん細胞株(ATCC番号:CCL−5908)
MCF−7:ヒト乳がん細胞株(ATCC番号:HTB−22)
細胞培養容器、培養培地として、以下のものを用いた。
細胞培養容器:トランズウェルセルカルチャーインサート(Corning社製、製品番号:#3470)
培養培地:10容量%ウシ血清(Corning社製、製品番号:#35−010−CV)及び1容量%ペニシリン/ストレプトマイシン(和光純薬社製、製品番号:168−23191)を含有するD−MEM(和光純薬社製、製品番号:043−30085)
まず、2×106個のNHDFと3×104個のHUVECを、ヘパリンとコラーゲンを含有するトリス−塩酸緩衝液(0.1mg/mL ヘパリン、0.1mg/mL コラーゲン、50mM トリス、pH7.4)に懸濁し、細胞懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を、室温、1000×gで1分間、遠心処理し、上清を取り除いた後、適量の培養培地で再懸濁した。次いで、この細胞懸濁液を、トランズウェルセルカルチャーインサート内に播種した後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートを室温、400×gで1分間、遠心処理した。その後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートに、適量の培養培地を追加した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて24時間培養した。
構造体が形成されたトランズウェルセルカルチャーインサート内に、適量の培養培地に懸濁した2×104個のがん細胞を播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて7日間培養した。培養終了後、血管網構造を備えた層にがん細胞層が積層された細胞構造体が得られた。がん細胞は、予め、蛍光標識(SIGMA社製、製品番号:PKH26GL)しておいたものを用いた。
培養後の細胞構造体とがん細胞をトリパンブルー溶液に浸漬させてトリパンブルー染色した後、蛍光を発しておりかつトリパンブルー染色されていない細胞を、生きているがん細胞として計数した。細胞の計数は、セルカウンター「CountessII」(ライフテクノロジーズ社製)の蛍光モードを使用して行った。
(細胞構造体によるがん細胞の増殖抑制効果)
繊維芽細胞と血管内皮細胞とからなり、血管網構造を備える細胞構造体を用いて、がん細胞の増殖抑制の効果を評価した。評価は、がん細胞を4日間培養した後、7日間培養した後に行った。
細胞構造体の形成において、以下の細胞を用いた。
NHDF:ヒト新生児由来皮膚線維芽細胞(Normal Human Dermal Fibroblasts、Lonza社製、製品番号:CC−2509)
HUVEC:ヒト臍帯静脈内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell、Lonza社製、製品番号:CC−2517A)
がん細胞として、以下のがん細胞を用いた。
HT29:ヒト結腸直腸腺がん細胞株(ATCC番号:CCL−247)
NCI−H1975:ヒト肺がん細胞株(ATCC番号:CCL−5908)
MCF−7:ヒト乳がん細胞株(ATCC番号:HTB−22)
細胞培養容器、培養培地として、以下のものを用いた。
細胞培養容器:トランズウェルセルカルチャーインサート(Corning社製、製品番号:#3470)
培養培地:10容量%ウシ血清(Corning社製、製品番号:#35−010−CV)及び1容量%ペニシリン/ストレプトマイシン(和光純薬社製、製品番号:168−23191)を含有するD−MEM(和光純薬社製、製品番号:043−30085)
まず、2×106個のNHDFと3×104個のHUVECを、ヘパリンとコラーゲンを含有するトリス−塩酸緩衝液(0.1mg/mL ヘパリン、0.1mg/mL コラーゲン、50mM トリス、pH7.4)に懸濁し、細胞懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を、室温、1000×gで1分間、遠心処理し、上清を取り除いた後、適量の培養培地で再懸濁した。次いで、この細胞懸濁液を、トランズウェルセルカルチャーインサート内に播種した後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートを室温、400×gで1分間、遠心処理した。その後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートに、適量の培養培地を追加した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて24時間培養した。
構造体が形成されたトランズウェルセルカルチャーインサート内に、適量の培養培地に懸濁した2×104個のがん細胞を播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて4日間、又は7日間培養した。培養終了後、血管網構造を備えた層にがん細胞層が積層された細胞構造体が得られた。がん細胞は、予め、蛍光標識(SIGMA社製、製品番号:PKH26GL)しておいたものを用いた。
培養後の細胞構造体とがん細胞とをトリパンブルー溶液に浸漬させてトリパンブルー染色した後、蛍光を発しておりかつトリパンブルー染色されていない細胞を、生きているがん細胞として計数した。細胞の計数は、セルカウンター「CountessII」(ライフテクノロジーズ社製)の蛍光モードを使用して行った。
(細胞構造体の細胞層数とがん細胞増殖抑制効果の関係)
繊維芽細胞と血管内皮細胞とからなり、血管網構造を備える細胞構造体を用いて、がん細胞の増殖抑制の効果を評価した。細胞構造体として、細胞層が1.25層、2.5層、5層、10層、20層相当のものを形成し、用いた。
細胞構造体の形成において、以下の細胞を用いた。
NHDF:ヒト新生児由来皮膚線維芽細胞(Normal Human Dermal Fibroblasts、Lonza社製、製品番号:CC−2509)
HUVEC:ヒト臍帯静脈内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell、Lonza社製、製品番号:CC−2517A)
がん細胞として、以下のがん細胞を用いた。
NCI−H1975:ヒト肺がん細胞株(ATCC番号:CCL−5908)
細胞培養容器、培養培地として、以下のものを用いた。
細胞培養容器:トランズウェルセルカルチャーインサート(Corning社製、製品番号:#3470)
培養培地:10容量%ウシ血清(Corning社製、製品番号:#35−010−CV)及び1容量%ペニシリン/ストレプトマイシン(和光純薬社製、製品番号:168−23191)を含有するD−MEM(和光純薬社製、製品番号:043−30085)
まず、NHDFとHUVECを、ヘパリンとコラーゲンを含有するトリス−塩酸緩衝液(0.1mg/mL ヘパリン、0.1mg/mL コラーゲン、50mM トリス、pH7.4)に懸濁し、細胞懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を、室温、1000×gで1分間、遠心処理し、上清を取り除いた後、適量の培養培地で再懸濁した。次いで、この細胞懸濁液を、トランズウェルセルカルチャーインサート内に播種した後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートを室温、400×gで1分間、遠心処理した。その後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートに、適量の培養培地を追加した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて24時間培養した。播種する細胞数を調整して、細胞層数が1.25層、2.5層、5層、10層、20層相当の細胞構造体を形成した。1cm2の1層の細胞層に相当する細胞数を3×105個とみなして、細胞層数を計算した。また、本実験例の方法により作製された細胞構造体は、10層あたりの厚さが40μm程度となる。すなわち、1.25層、10層、20層相当の細胞構造体の厚さはそれぞれ、5μm程度、40μm程度、80μm程度となる。
構造体が形成されたトランズウェルセルカルチャーインサート内に、適量の培養培地に懸濁した2×104個のがん細胞を播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて7日間培養した。培養終了後、血管網構造を備えた層にがん細胞層が積層された細胞構造体が得られた。がん細胞は、予め、蛍光標識(SIGMA社製、製品番号:PKH26GL)しておいたものを用いた。
培養後の細胞構造体及びがん細胞をanti―Cytokeratin7抗体(Invitrogen:OV−TL 12/30)及び二次抗体(Invitrogen:A−21235)により処理して、がん細胞のみを蛍光染色して計測した。細胞の計測は、共焦点顕微鏡システム(PerkinElmer:Operetta CLS)の蛍光モードを使用して行い、容器上の蛍光発光領域をがん細胞が存在する領域としてがん細胞面積を算出した。
また、2D培養物に対しても同様に染色、計測した。各培養条件について、繰り返し3回ずつ測定した。
(血管網構造を備えていない細胞構造体によるがん細胞の増殖抑制効果)
繊維芽細胞と血管内皮細胞とからなり血管網構造を備える細胞構造体、及び、繊維芽細胞からなり血管網構造を備えていない細胞構造体用いて、がん細胞の増殖抑制の効果を評価した。評価は、がん細胞を7日間培養した後に行った。
細胞構造体の形成において、以下の細胞を用いた。
NHDF:ヒト新生児由来皮膚線維芽細胞(Normal Human Dermal Fibroblasts、Lonza社製、製品番号:CC−2509)
HUVEC:ヒト臍帯静脈内皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell、Lonza社製、製品番号:CC−2517A)
がん細胞として、以下のがん細胞を用いた。
HCT116:ヒト結腸直腸腺がん細胞株(ATCC番号:CCL−247)
細胞培養容器、培養培地として、以下のものを用いた。
細胞培養容器:トランズウェルセルカルチャーインサート(Corning社製、製品番号:#3470)
培養培地:10容量%ウシ血清(Corning社製、製品番号:#35−010−CV)及び1容量%ペニシリン/ストレプトマイシン(和光純薬社製、製品番号:168−23191)を含有するD−MEM(和光純薬社製、製品番号:043−30085)
まず、2×106個のNHDFと3×104個のHUVEC、又は、NHDFのみを、ヘパリンとコラーゲンを含有するトリス−塩酸緩衝液(0.1mg/mL ヘパリン、0.1mg/mL コラーゲン、50mM トリス、pH7.4)に懸濁し、細胞懸濁液を調製した。この細胞懸濁液を、室温、1000×gで1分間、遠心処理し、上清を取り除いた後、適量の培養培地で再懸濁した。次いで、この細胞懸濁液を、トランズウェルセルカルチャーインサート内に播種した後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートを室温、400×gで1分間、遠心処理した。その後、当該トランズウェルセルカルチャーインサートに、適量の培養培地を追加した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて24時間培養した。
構造体が形成されたトランズウェルセルカルチャーインサート内に、適量の培養培地に懸濁した2×104個のがん細胞を播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5%CO2)にて7日間培養した。培養終了後、血管網構造を備えた層にがん細胞層が積層された細胞構造体が得られた。がん細胞は、予め、蛍光標識(SIGMA社製、製品番号:PKH26GL)しておいたものを用いた。
培養後の細胞構造体とがん細胞をトリパンブルー溶液に浸漬させてトリパンブルー染色した後、蛍光を発しておりかつトリパンブルー染色されていない細胞を、生きているがん細胞として計数した。細胞の計数は、セルカウンター「CountessII」(ライフテクノロジーズ社製)の蛍光モードを使用して行った。
また、2D培養物についても同様にトリパンブルー染色した後、染色されていない細胞を生きているがん細胞として計数した。各培養条件について、繰り返し3回ずつ測定した。
Claims (12)
- 第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体であって、
前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、
前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含み、
前記細胞構造体に接触させて第2の細胞集団を培養したときに、前記第2の細胞集団を生体内と類似する状態で培養するために用いられる、細胞構造体。 - 前記第1の細胞集団が、血管内皮細胞を更に含み、前記間質細胞は線維芽細胞である、請求項1に記載の細胞構造体。
- 前記第2の細胞集団が株化された細胞を含む、請求項1又は2に記載の細胞構造体。
- 前記第2の細胞集団ががん細胞を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の細胞構造体。
- 前記細胞構造体の厚みが40μm以上である、請求項1から4のいずれか一項に記載の細胞構造体。
- 前記第1の細胞集団の細胞数と、前記第2の細胞集団の細胞数の比(前記第1の細胞集団の細胞数:前記第2の細胞集団の細胞数)が、3:1〜300:1である、請求項1から5のいずれか一項に記載の細胞構造体。
- 第1の細胞集団と細胞外マトリックス成分とを含む細胞構造体に、第2の細胞集団を接触させて培養する工程を含み、
前記第1の細胞集団は細胞間に前記細胞外マトリックス成分を含み、
前記第1の細胞集団は少なくとも間質細胞を含む、前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。 - 前記第1の細胞集団が、血管内皮細胞を更に含み、前記間質細胞が線維芽細胞である、請求項7に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
- 前記第2の細胞集団が株化された細胞を含む、請求項7又は8に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
- 前記第2の細胞集団ががん細胞を含む、請求項7〜9のいずれか一項に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。
- 前記細胞構造体が、
前記第1の細胞集団をカチオン性物質、細胞外マトリックス成分及び高分子電解質と混合して混合物を得る工程と、
得られた前記混合物中の細胞を培養して前記細胞構造体を得る工程と、を含む、方法により製造されたものである、請求項7〜10のいずれか一項に記載の前記第2の細胞集団の増殖速度を抑制する方法。 - 被験物質の評価方法であって、
前記被験物質の存在下で、請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞構造体に接触させて細胞集団を培養し、前記細胞集団の状態を解析する工程と、
前記被験物質の存在下における前記状態と、前記被験物質の非存在下における前記状態とを比較し、前記被験物質の効果を評価する工程と、を含む、評価方法。
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WO2023017800A1 (ja) * | 2021-08-11 | 2023-02-16 | 凸版印刷株式会社 | 立体的細胞組織の製造方法及び立体的細胞組織 |
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