JP2021084891A

JP2021084891A - 抗老化剤

Info

Publication number: JP2021084891A
Application number: JP2019215753A
Authority: JP
Inventors: 美和笹岡; Miwa Sasaoka; 健太新垣; Kenta Niigaki; 佑輔高原; Yusuke Takahara; 夏美大村; Natsumi Omura
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 2019-11-28
Filing date: 2019-11-28
Publication date: 2021-06-03

Abstract

【課題】真皮細胞に局在するコルチゾールによる菲薄化や老化を防止することができる、老化防止剤を提供する。【解決手段】Ｄ−パンテノールを有効成分として含有する、抗老化剤、ＨＳＤ１１Ｂ１産生抑制剤、コルチゾール産生抑制剤、コルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤、老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤。【選択図】図１

Description

本発明は、抗老化剤に関する。

Ｄ−パンテノールはＤ−パントテン酸（ビタミンＢ５）の前駆体であり、保湿効果や細胞賦活効果を期待して広く化粧品へ配合されている（非特許文献１）。また、Ｄ−パンテノールの新しい研究として、ミトコンドリア外膜に局在するユビキチンリガーゼであるＭＩＴＯＬ産生促進作用（特許文献１）、メラニン産生抑制作用（特許文献２）等が開示されている。

特開２０１９−５２１４５号公報国際公開２０１５−１５２３８４号

関根茂他，パーソナルケアハンドブック，日光ケミカルズ株式会社他，平成２８年６月７日，p.428-429

ストレスや老化によって真皮細胞に局在するコルチゾールによる菲薄化や老化を防止することができる、老化防止剤を提供することを課題とする。

本発明の課題を解決する手段は、下記のとおりである。
（１）
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、抗老化剤。
（２）
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、ＨＳＤ１１Ｂ１産生抑制剤。
（３）
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、コルチゾール産生抑制剤。
（４）
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、コルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤。
（５）
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤。
（６）
真皮線維芽細胞における、請求項１〜請求項５の１以上に記載の剤。

Ｄ−パンテノールは、ＨＳＤ１１Ｂ１産生抑制効果を有する。
Ｄ−パンテノールは、コルチゾール産生抑制効果を有する。
Ｄ−パンテノールはコルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する効果を有する。
Ｄ−パンテノールは、老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する効果を有する。

図１は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞におけるＨＳＤ１１Ｂ１の産生を抑制することを示す図である。図２は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞におけるコルチゾールによるＬＯＸの産生低下を改善することを示す図である。図３は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞におけるコルチゾールによるＬＯＸＬ１の産生低下を改善することを示す図である。図４は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞におけるコルチゾールによるＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進を改善することを示す図である。図５は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＣＯＬ１Ａ１の産生低下を改善することを示す図である。図６は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＣＯＬ３Ａ１の産生低下を改善することを示す図である。図７は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＭＭＰ１の産生亢進を改善することを示す図である。図８は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下を改善することを示す図である。図９は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＬＯＸの産生低下を改善することを示す図である。図１０は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＬＯＸＬ１の産生低下を改善することを示す図である。図１１は、Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化によるＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進を改善することを示す図である。図１２は、Ｄ−パンテノールが、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、濃度依存的にＣＯＬ１Ａ１の産生低下を改善することを示す図である。図１３は、Ｄ−パンテノールが、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、濃度依存的にＣＯＬ３Ａ１の産生低下を改善することを示す図である。図１４は、Ｄ−パンテノールが、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下を改善することを示す図である。図１５は、Ｄ−パンテノールが、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、濃度依存的にＬＯＸの産生低下を改善することを示す図である。図１６は、Ｄ−パンテノールが、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、濃度依存的にＬＯＸＬ１の産生低下を改善することを示す図である。図１７は、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生が亢進することを示す図である。

以下本発明を実施するための形態を説明する。

本発明の有効成分であるＤ−パンテノールは、Ｄ−パントテン酸（ビタミンＢ５）の前駆体である。

ＨＳＤ１１Ｂ１は、hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1の略であり、細胞内でコルチゾールを再活性化させる因子である。

ＣＯＬ１Ａ１は、collagen type I alpha 1 chainの略であり、真皮組織に存在するタイプＩコラーゲンの産生に関与する因子である。

ＣＯＬ３Ａ１は、collagen type III alpha 1 chainの略であり、真皮組織に存在するタイプＩＩＩコラーゲンの産生に関与する因子である。

ＳＥＲＰＩＮＨ１は、serpin family H member 1の略であり、コラーゲン３重らせん形成に関与する因子である。

ＬＯＸ、ＬＯＸＬ１は、lysyl oxidase、lysyl oxidase like 1の略であり、エラスチンやコラーゲンなどの架橋に関与する因子である。

ＭＭＰ１は、matrix metallopeptidase 1の略であり、タイプＩコラーゲンの分解に関与する因子である。

Ｄ−パンテノールは、真皮線維芽細胞におけるＨＳＤ１１Ｂ１の産生を抑制することにより、コルチゾールの産生を抑制し、抗老化効果を発揮する。
Ｄ−パンテノールは、真皮線維芽細胞におけるコルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する作用を有する。
Ｄ−パンテノールが、真皮線維芽細胞における老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する作用を有する。
Ｄ−パンテノールは、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下を、それぞれ改善する作用を有する。

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、これにより本発明の範囲が限定されるものではない。

（試験例１）
［真皮線維芽細胞におけるＤ−パンテノールによるＨＳＤ１１Ｂ１の産生抑制作用］
ヒト線維芽細胞を６×１０⁵個／ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。パンテノールを含有した培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅＲＮＡＣｕｌｔｕｒｅｄＣｅｌｌＨＣＫｉｔＳ）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。ｍＲＮＡ発現量は、Ｄ−パンテノール無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。

（試験例２）
［老化細胞におけるＣＯＬ１Ａ１産生、ＣＯＬ３Ａ１産生、ＭＭＰ１産生、ＳＥＲＰＩＮＨ１産生、ＬＯＸ産生、ＬＯＸＬ１産生、ＨＳＤ１１Ｂ１産生］
ヒト線維芽細胞を繰り返し２０回継代することで老化細胞を作成した。ヒト線維芽細胞を６×１０⁵個／ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。パンテノールを含有した培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅＲＮＡＣｕｌｔｕｒｅｄＣｅｌｌＨＣＫｉｔＳ）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。ｍＲＮＡ発現量は、5回継代培養したヒト線維芽細胞にＤ−パンテノール無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。

（試験例３）
［真皮線維芽細胞におけるコルチゾール添加による因子産生作用及びＤ−パンテノールとの併用による作用］
ヒト線維芽細胞を６×１０⁵個／ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。コルチゾールを含有した培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内で２４時間培養した。同様にコルチゾールとＤ−パンテノールを所定濃度添加した培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅＲＮＡＣｕｌｔｕｒｅｄＣｅｌｌＨＣＫｉｔＳ）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。ｍＲＮＡ発現量は、コルチゾール、Ｄ−パンテノール無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。

（試験例４）
［ＨＳＤ１１Ｂ１遺伝子導入が線維芽細胞における遺伝子発現に与える影響の評価］
ヒト線維芽細胞を６×１０⁵個／ウェルとなるように６ウェルプレートに播種し、０．５％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地にて一晩培養した。Ｏｐｔｉ−ＭＥＭおよびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（ともにＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の混合溶液と、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ、Ｐ３０００Ｒｅａｇｅｎｔ（ともにＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とＨＳＤ１１Ｂ１プラスミドＤＮＡの混合溶液を１：１の割合で混合し、１５分室温でインキュベートした後に０．５％ＦＢＳおよびパンテノールを含むＤＭＥＭ培地へ添加した。一晩培養した細胞の培地をＤＮＡおよびパンテノールを含有した培地に交換し、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内で２４時間培養した。採取した細胞から、市販のＲＮＡ抽出キット（ＱｕｉｃｋＧｅｎｅＲＮＡＣｕｌｔｕｒｅｄＣｅｌｌＨＣＫｉｔＳ）を使用してＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡ合成後に下記のプライマーを使用してサイバーグリーン法によるリアルタイムＰＣＲにより遺伝子発現を確認した。なお、内部標準としてＧＡＰＤＨを使用した。ｍＲＮＡ発現量は、コントロールプラスミドＤＮＡを導入し、Ｄ−パンテノール無添加の場合の発現量を１とした相対値で示した。

ＰＣＲプライマー配列を表１に示す。

図１に示したとおり、Ｄ−パンテノールは、真皮線維芽細胞におけるＨＳＤ１１Ｂ１の産生を抑制することにより、コルチゾールの産生を抑制し、抗老化効果を発揮した。

図２〜図４に示したとおり、Ｄ−パンテノールは、真皮線維芽細胞におけるコルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する効果を発揮した。

図５〜図１１に示したとおり、Ｄ−パンテノールは、真皮線維芽細胞における老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進をそれぞれ改善する効果を発揮した。

図１２〜図１６に示したとおりＤ−パンテノールは、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させた真皮線維芽細胞において、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下を、それぞれ改善する効果を発揮した。

図１７に示したとおり、ＨＳＤ１１Ｂ１を強制発現させることにより、真皮線維芽細胞において、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生が亢進した。

Claims

Ｄ−パンテノールを有効成分とする、抗老化剤。
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、ＨＳＤ１１Ｂ１産生抑制剤。
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、コルチゾール産生抑制剤。
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、コルチゾールによる、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤。
Ｄ−パンテノールを有効成分とする、老化による、ＣＯＬ１Ａ１の産生低下、ＣＯＬ３Ａ１の産生低下、ＭＭＰ１の産生亢進、ＳＥＲＰＩＮＨ１の産生低下、ＬＯＸの産生低下、ＬＯＸＬ１の産生低下、ＨＳＤ１１Ｂ１の産生亢進の改善剤。
真皮線維芽細胞における、請求項１〜請求項５の１以上に記載の剤。