JP2021020876A - がん療法用のｔ−ＰＡ含有ポリマー組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】より効果的な抗がん及びがんの転移抑制のための手段を提供する。【解決手段】下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体とポリアニオン性ポリマーとｔ−ＰＡを含んでなるがん療法用組成物が開示される。【選択図】なし

Description

本発明は、組織プラスミノーゲンアクチベータ―（ｔ−ＰＡ）を含有するレドックス活性型ポリマー組成物及びｔ−ＰＡそれ自体のがん療法での使用又は用途に関し、より具体的にはｔ−ＰＡとカチオン荷電性ポリマー化環状ニトロキシドラジカルとポリアニオン性ポリマーを含む組成物、特に、当該組成物に由来するナノ粒子、並びにｔ−ＰＡそれ自体のがん療法での使用又は用途に関する。

がん性表現型に必須の持続的に高まる細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）は、生存、増殖及び転移過程で重要な役割を演ずることにより正のフィードバック様式でがんに影響を及ぼすことが知られている。それゆえ、ＲＯＳの消去は細胞生存シグナリング経路を抑制することから種々のがんの進行を緩和する可能性のある治療プログラムを提供する。本発明者らは、例えば、生体内ＲＯＳを消去することのできるレドックス活性を有する、高分子化環状ニトロキシドラジカルのセグメントとポリ（エチレングリコール）のセグメントを含むブロック共重合体又はそれらのナノ粒子を提供し（特許文献１、特許文献２、参照。）、また、当該共重合体とドキソルビシン等の抗がん剤との組み合わせ使用（特に、前者を投与した後に後者を投与する）は抗がん剤の活性を増強できることを開示した（非特許文献１）。

ところで、薬物キャリアーの低い腫瘍内分散性及び腫瘍への不十分な薬物送達性は、抗がん性ナノ医薬を成功裏に使用する上で意義深い挑戦事項である。腫瘍周辺の血管は、急速に分裂している細胞及び多量の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）によって奏される固体圧力（ｓｏｌｉｄ ｓｔｒｅｓｓ）の下で圧迫されている。これらの構成物及び構造は分子の移動を遅くし、かつ、充実性腫瘍の薬剤耐性の一因となる場合がある。一方、広範に使用されている血栓崩壊性薬物の組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）はＥＣＭ構成物を崩壊させ、血管の性質を改善し、腫瘍組織への血液の供給を高めることが予想されることから、抗がん剤（例えば、パクリタキセル）内包ナノ粒子をｔ−ＰＡと共投与することにより腫瘍への前記ナノ粒子の送達性を向上させることが提案されている（非特許文献２、非特許文献３）。

しかしながら、未だ、抗腫瘍及び転移抑制に有効な抗がん剤の開発に対するニーズは尽きることなく存在する。

ＷＯ ２００９／１３３６４７ ＷＯ ２０１６／０５２４６３

Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏ．１７２，Ｎｏ．１，ｐｐ．１３７−１４３（２０１３）（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｃｏｎｒｅｌ．２０１３．０８．０１１ Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ９６（２０１６）６４‐７１ Ｋｉｒｔａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ：７７（６）Ｍａｒｃｈ １５，２０１７

本発明の目的はより効果的な抗がん及びがんの転移抑制のための手段を提供することにある。本発明者らは、前記特許文献１〜２、及び非特許文献１に記載されているようなレドックス活性型ブロック共重合体それ自体及び当該組成物と他の薬剤との組合せ使用等について研究し、かつ、それらの成果を公表してきた。このような研究の一端として、心臓発作の治療薬として承認されているｔ−ＰＡを、それ固有の生物活性に悪影響を及ぼすことなくレドックス活性型ブロック共重合体に内包できる薬剤キャリアー系を開発し、公表した（Ｔ．Ｍｅｉ，Ａ．Ｋｉｍ，Ｌ．Ｂ．Ｖｏｎｇ，Ａ．Ｍａｒｕｓｈｉｍａ，Ｓ．Ｐｕｅｎｔｅｓ，Ｙ．Ｍａｔｓｕｍａｒｕ，Ａ．Ｍａｔｓｕｍｕｒａ，Ｙ．Ｎａｇａｓａｋｉ，Ｅｎｃａｐｓｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎ ｐＨ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｅｌｆａｓｓｅｍｂｌｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔａｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｉｓｃｈｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−Ｓｙｎｅｒｕｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ−，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２１５（２０１９）１１９２０９．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１９．０５．０２０．）。この論文は、ここに引用することによってその記載内容は本明細書の内容となる。

驚くべきことに、このようなレドックス活性型ブロック共重合体とアニオン性ポリマーとｔ−ＰＡとを含んでなる組成物又はこの組成物から水性媒体中で自己組織化されることにより形成されるナノ粒子を含むｔ−ＰＡ内包薬剤キャリアー系は、特に、ＥＣＭを崩壊させるとともに、腫瘍への血液灌流を改善して標的腫瘍組織へのレドックスナノ粒子のデリバリー及び免疫細胞浸透を向上させること等により、抗がん剤を共投与することなく抗がん作用を発揮することが確認された。

したがって、限定されるものではないが、本明細書により開示される主たる態様としては次のもが挙げられる。
態様１：有効成分として、下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体とポリアニオン性ポリマーと組織プラスミノーゲンアクチベータ―（ｔ−ＰＡ）を含んでなるがん療法用組成物。

上式中、各変動可能な基等の略号は次のとおり定義される。
Ａは、非置換又は置換Ｃ₁−Ｃ₁₂アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は、ホルミル基、式Ｒ’Ｒ^"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ’及びＲ^"は独立してＣ₁−Ｃ₄アルコキシ又はＲ’とＲ^"は一緒になって−ＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ₂）₃Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ₂）₄Ｏ−を表す。
Ｌ₁は、直接結合又は二価の連結基を表す。
Ｘは、Ｌ₂−Ｒ₁であるか又は水素原子若しくはハロゲン原子若しくはヒドロキシル基であ
り、かつ、Ｌ₂は−（ＣＨ₂）_p−ＮＨ−（ＣＨ₂）_p−であり、ｐは独立して、整数０又は１〜３であり、Ｒ₁は、次式で表される環状ニトロキシドラジカル残基のいずれかであり、

（式中、Ｒ’はメチルである。）
Ｌ₂−Ｒ₁はｎの付された反復単位の総数ｎの５０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、最も好ましくは１００％を占める。
Ｚは、ＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルである。
ｍは、５〜１０，０００、好ましくは、１０〜５００、より好ましくは２０〜３００の整数である。
ｎは、２〜５００、好ましくは４〜２００、より好ましくは６〜８０の整数を表す。
ポリアニオン性ポリマーは、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリスルホン酸、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸から選ばれる。
態様２：ナノ粒子の形態にある、態様１のがん療法用組成物。
態様３：がん療法において、予防又は治療対処のがんが、脳腫瘍、頭頸部がん、唾液腺がん、甲状腺がん、肺がん、小細胞肺がん、乳がん、肝臓・胆のうがん、膵臓がん、肝臓がん、胆道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、大腸がん、腎臓がん、腎盂・尿管がん、膀胱がんから選ばれる、態様１又は２のがん療法用組成物。
態様４：がん療法において、他のがん又は腫瘍治療剤が併用される、態様１〜３のいずれかに記載のがん療法用組成物。
態様５：ｔ−ＰＡを有効成分として含んでなるがん療法剤。
態様６：ｔ−ＰＡを有効成分とするがん療法剤
なお、本発明で用いるブロック共重合体の構造式中のＬ₁等の方向性を持ち得る結合の方向性は、特記しない限り表示されているままの方向性を有する（以下、同じ。）。

本発明の組成物、副作用が弱いか殆ど無視でき、一方で、特有の作用機序による抗がん又は抗腫瘍作用及び効果を奏する。したがって、当該組成物は、それ単独で効果的な抗がん剤又は抗腫瘍剤として有用であり、また、他のがん又は悪性腫瘍療法手段と組合せて都合よく使用できる。

製造例１に記載のＰＥＧ−ｂ−ＣＴＡの¹Ｈ ＮＭＲスペクトル 製造例１に記載のＰＥＧ−ｂ−ＣＴＡのゲル透過クロマトグラフィーによる分離スペクトル 製造例２に記載のＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳの¹Ｈ ＮＭＲスペクトル 製造例２に記載のＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳのゲル透過クロマトグラフィーによる分離スペクトル 製造例３に記載のＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴの¹Ｈ ＮＭＲスペクトル 製造例３に記載のＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴのゲル透過クロマトグラフィーによる分離スペクトル 製造例４に記載のｔ−ＰＡ、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＭＰ、ｉＲＭＰ（ｔ−ＰＡ不含ナノ粒子）の動的光散乱（ＤＬＳ）測定結果の図表表示及び関連する物理的性質をまとめた表 動物実験１における実験プロトコールの図表表示 動物実験１におけるモデル動物の体重変化のグラフ表示 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍サイズ変動のグラフ表示 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍中のＲＯＳのグラフ表示 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍組織切片の組織学的顕微鏡写真 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍組織中のフィブリンの免疫蛍光写真 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍組織中のフィブリン発現量のグラフ表示 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍組織切片のＮＦ−κＢ（緑）及びＤＡＰＩ（青）による蛍光染色像の写真 図１５のＮＦ−κＢ（緑）シグナルに基づいて決定されたＮＦ−κＢの発現量のグラフ表示 動物実験１におけるモデル動物の腫瘍微環境下のフィブリン崩壊物に関するグラフ表示 モデル動物の種々の器官のＨ＆Ｅ染色による病理学的データの反映する組織写真 動物実験２における実験プロトコールの図表表示 動物実験２における腫瘍モデル動物にｔ−ＰＡを投与したときに腫瘍増殖プロファイルのグラフ表示 動物実験２における各処置モデル動物の体重変化のグラフ表示 動物実験２におけるモデル動物の腫瘍組織の免疫蛍光染色像の写真（Ａ）及び蛍光強度のグラフ表示（Ｂ）

発明の詳細な説明

本明細書で開示されるがん療法用組成物又はそれから形成されるナノ粒子は、その抗がん作用について後述するモデル動物の実験例及び当該技術分野で周知の知見に照らすと、広範ながんの処理に有効であるものと理解できる。具体的には、理論に拘束されるものではないが、次の様な作用機序が有するものと思われる：レドックス活性型ブロック共重合体とアニオン性ポリマーとｔ−ＰＡを含んでなる組成物又はその組成物から水性媒体中で自己組織化されることにより形成されるナノ粒子（例えばｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ）は、ｉＲＮＰのコアにおいてｔ−ＰＡが遮蔽されることによりｔ−ＰＡの酵素活性が著しく遮蔽され一方で、その活性は、酸により開始されるイオンコンプレックスの崩壊を通じて酸性環境下で回復する。細胞外ｐＨは正常な組織より腫瘍組織において低くなることが当該技術分野で周知である。それ故、腫瘍組織の酸性領域において、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰは、強いプロトネーションに起因してポリカチオン間の電荷の斤力により崩壊する傾向にある。こうして、腫瘍組織領域では内包されたｔ−ＰＡが迅速に放出され、ＥＣＭの崩壊を開始するとともに、より多くの環状ニトロキシドラジカルが腫瘍組織に浸透し、過剰なＲＯＳを消去して細胞生存シグナリング経路を廃棄すると共に、免疫細胞も腫瘍組織に浸透することを可能にするものと理解できる。さらに、ナノサイズの構築物たるｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰは健常細胞中への非特異的な取り込みが防止されるので、腫瘍組織領域に蓄積される傾向がある。

したがって、本明細書で開示される主題たる、がん療法用組成物又はそれから形成されるナノ粒子は、上記のような機序の関与する広範ながんの予防又は治療に利用できる。これらのがんとしては、限定されるものではないが、脳腫瘍、頭頸部がん、唾液腺がん、甲状腺がん、肺がん、小細胞肺がん、乳がん、肝臓・胆のうがん、膵臓がん、肝臓がん、胆道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、大腸がん、腎臓がん、腎盂・尿管がん、膀胱がん
を挙げることができる。

また、上記のような作用機序に悪影響を及ぼさない限り、それ自体公知の上記のがん又は悪性腫瘍の療法手段（治療薬物の使用に限定されない）と都合よく併用できる。

式（Ｉ）で表されるブロック共重合体はポリアニオン性ポリマーと共に自己組織化してナノ粒子を形成することができ、また、このような自己組織化に際してｔ−ＰＡをナノ粒子に内包若しくは搭載若しくは装着若しくは充填若しくは固定化できる。本明細書において、内包（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）、搭載若しくは充填（ｌｏａｄｅｄ）、装着（ｉｎｓｔａｌｌｅｄ）、固定化（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）は夫々互換可能な用語として使用されている。再度、理論に拘束されるものでないが、前記組成物は、水性媒体中での自己組織化を介して、高い可溶性及び高い可動性を有するポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）セグメントをシェルとし、ｔ−ＰＡを、主として、ＰＭＮＴセグメントとポリアニオン性ポリマーとのポリイオンコンプレックス領域（コア）中に含有するコア−シェル型ナノ粒子を形成するものと理解できる。そのため、このようなナノ粒子は水性媒体中に均一に可溶化又は分散でき、血管内投与用等をはじめとする非経口用を本願する広範な剤型の製剤原薬として適する特性を有する。

本発明に関して記述された用語等は、特に言及しない限り、当該技術分野で常用されている意味又は内容を有するものとして使用されている。一般的に、本発明について以下の追加の説明をすることができる。

組織プラスミノーゲンアクチベータ―（ｔ−ＰＡ）は、既に臨床上実用されているアルテプラーゼ（ａｌｔｅｐｌａｓｅ）をはじめとするｔ−ＰＡであれば、天然物由来の調製物、遺伝子組み換えにより作製された、所謂、ｔ−ＰＡ又はｔ−ＰＡ活性物質と称されているものを包含し、また、本発明の課題解決（又は目的を達成するために）に使用できるものであれば、これらの改変体をも包含する概念である。

式（Ｉ）で表されるブロック共重合体において、Ｌ₁を定義する二価の連結基は、ポリ（エチレングリコール）（以下、ＰＥＧと略記する場合あり。）セグメントと側鎖としての環状ニトロキシドラジカルが結合したポリ（メチルスチレン）（以下、ＰＭＮＴと略記する場合あり。）セグメントの機能が本発明の目的に沿うものであれば、限定されるものでない。しかし、二価の連結基は、一般的には、最大３４個、好ましくは１８個、より好ましくは最大１０個の炭素、並びに任意に酸素及び窒素原子を含有する基を意味する。かような連結基として、具体的には次の基を挙げることができる：

で表される基から選ばれるか、又は−（ＣＨ₂）_cＳ−、−ＣＯ（ＣＨ₂）_cＳ−、−（ＣＨ₂）_cＮＨ−、−（ＣＨ₂）_cＣＯ−、−ＣＯ−、−ＯＣＯＯ−、−ＣＯＮＨ−からなる群より選ばれ、ここで、それぞれ独立してｂは２〜６の整数であり、ｃは１〜５の整数である、ことができる。このような共重合体は、上記の特許文献１又は特許文献２に記載の方法、また、必要により、これらの方法を改変した方法により製造できる。典型的な共重合体
の製造方法については後述する製造例に示ように実施するのが便宜である。

ポリアニオン性ポリマーは、式（Ｉ）のブロック共重合体と一緒になって、水性媒体中でナノ粒子を形成でき、かつ、ｔ−ＰＡ及びブロック共重合体のレドックス活性に悪影響を及ぼさないものであれば、限定されるものでないが、一般的に、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリスルホン酸、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸等を挙げることができる。これらの中、好ましく使用できるものは、ポリ（メタ）アクリル酸（ポリ（アクリル酸）若しくはポリ（メタクリル酸））であり、これらの数平均分子量（Ｍｎ）は５００〜１００００００、好ましくは１０００〜１０００００、より好ましくは１０００〜１００００であることができる。これらは、市販のものをそのまま、又は必要に応じて精製して使用することができる。

前記の組成物における各成分の含有割合は、本発明の目的の沿った組成物を提供できるものであれば限定されないが、一般的には、式（Ｉ）の共重合体対ポリアニオン性ポリマーの配合割合は、形成されるｔ−ＰＡ内包ナノ粒子の水性媒体中での安定性を考慮すれば、式（Ｉ）のポリマーのカチオン荷電性基（−ＮＨ−）の総電荷対後者のポリアニオン性基（例えば、−ＣＯＯＨ）の総電荷が、１：１０〜１０：１、好ましくは１：５〜５：１、より好ましくは１：２〜２：１、最も好ましくは１：１となるように選ばれる。こうして形成されるポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）とｔ−ＰＡとの配合割合は、ｔ−ＰＡ内包ナノ粒子の水性媒体の分散溶液又は可溶化溶液中、室温（約２０℃〜約２５℃）〜３７℃下で、ｔ−ＰＡが当該粒子から、少なくとも、１時間、実質的に溶離若しくは溶出しないことを基準に選ばれる。限定されるものでないが、アルテプラーゼについて例示すると、式（Ｉ）の共重合体に対し、重量基準で、一般に０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇとなるように選ばれる。共重合体は５ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇとなるように選ばれる。

こうして提供される組成物は、水性媒体中形成されるナノ粒子として存在することができる。本明細書にいう、水性媒体とは水（例えば、脱イオン水）、そのリン酸緩衝化溶液、必要により、エチルアルコール、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の水可溶性有機溶媒を含有する水等を挙げることができる。このようなナノ粒子の形成方法は、組成物の各成分を必要により、前記のような有機溶媒を用いて溶解し、所定の分子量（例えば、３．５ｋＤ〜５０ｋＤ）カットオフ能を有する透析膜を介して水に対して透析することにより各成分が一体に自己組織化したナノ粒子を提供できる。ナノ粒子とは、水性媒体中の粒子の動的光散乱（ＤＬＳ）測定により平均粒径がナノオーダー、一般的に、１０ｎｍ〜５００ｎｍ，好ましくは１０ｎｍ〜２００ｎｍ、より好ましくは１５ｎｍ〜１５０ｎｍ、最も好ましくは１５ｎｍ〜５０ｎｍにある粒子を意味する。

このようナノ粒子は、水性媒体中から遠心、又はその水溶液を凍結乾燥することにより固形物として提供できる。凍結乾燥品又は上記の透析物を、前述の水性媒体や、生理食塩水、必要により、マクロゴール、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジン等のアミノ酸、緩衝剤リン酸緩衝液等を製薬学的賦形剤と混合して血管内投与用製剤とすることができる。当該ナノ粒子は、ｔ−ＰＡを内包した状態で被験動物（患者を含む）に効果的に静脈若しくは動脈からの投与又は血管内投与療法（例えば、動注療法）に使用でき、当該ナノ粒子からのニトロオキシドラジカルがＲＯＳを消去することによりニューロンの障害を防止すると同時に、ｔ−ＰＡの半減期を延長し、抗腫瘍又は抗がん作用及び効果を奏する。

当該製剤は、前述した各種のがん又は腫瘍の予防又は治療に際し、所期の効果を発揮す
る様な用量で患者に投与されるが、このような用量は、必要があれば動物実験及び／又は臨床試験を行い、専門医により製剤中に含有されるｔ−ＰＡの量や、投与方法等を考慮して決定することができる。

以下、記載を簡潔にするため、本発明で使用するブロック共重合体の典型的な製造例、ポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）組成物の調製例、ナノ粒子の調製例、さらには、ナノ粒子の作用、効果を例証するための具体的な試験例を開示するが、本発明はこれらの例に限定されるものでない。

＜製造例１＞ ブロック共重合体ＰＥＧ−ｂ−ＣＴＡの合成
５ｇのポリ（エチレングリコール）モノメチルエーテル（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＨ，ＭＷ＝５，０００，Ｆｌｕｋａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を減圧下で水及び水分がなくなるまで、１１０℃にて，２〜１２時間撹拌した。安定化のため窒素雰囲気下、撹拌しながら６５℃で１時間インキュベーションした。窒素流条件下で、脱水ポリマーにテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）２０ｍＬをゆっくり加え、次いで、１．２５ｍＬのブチルリチウム（ＢｕＬｉ）を加えることによりポリマー末端ヒドロキシル基をリチウムオキシドへ転化した（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＨ：ＢｕＬｉ＝１：２（モル比））。得られたＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＬｉ溶液に１０倍過剰量のα、α−ジクロロ−ｐ−キシリレン（ＤＣＰＸ，Ｃ₈Ｈ₈Ｃｌ₂，１．７ｇ）を加え、撹拌しながら６５℃で、２４時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を冷イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）へ投入し、ＤＣＰＸ及び他の不純物を除去するためにポリマーを沈殿させ、遠心分離にて回収した（１４９，０００×ｇ、３分間、−４℃）。冷ＩＰＡを用いる再沈殿を３度繰り返した。こうして精製されたポリマーＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＣＨ₂ＰｈＣＨ₂Ｃｌを室温（約２５℃）で２４〜４８時間減圧下で乾燥させた（収量＝４．９ｇ，９８％）。

氷冷水浴中の丸底フラスコ中で窒素雰囲気下、溶媒として５ｍＬのＴＨＦ中で０．４ｍＬの二硫化硫黄（ＣＳ₂）と０．６７ｍＬの臭化フェニルマグネシウム（ＰｈＭｇＢｒ，３．０Ｍ）ジエチルエーテル溶液を混合することによりＣ₆Ｈ₅ＣＳ₂ＭｇＢｒを生成した。この溶液の色は数分中に黄色から暗赤色に変化した。次のステップで使用するためにこの溶液混合物を室温（約２５℃）でさらに３０分間撹拌した。別に、を窒素雰囲気下で純ＴＨＦ（２０ｍＬ）に４ｇの乾燥ポリマーＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＣＨ₂ＰｈＣＨ₂Ｃｌを溶解させた。続いて、上記のＣ₆Ｈ₅ＣＳ₂ＭｇＢｒのＴＨＦ溶液を、直ちにポリマーＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＣＨ₂ＰｈＣＨ₂Ｃｌ溶液に加え、混合物を撹拌しながら４０℃で７２時間反応させた。７２時間の反応後、混合物を冷ＩＰＡを用いて再沈殿させ、遠心した（１４９，０００×ｇ、３分間、−４℃）。未反応化合物を完全に除去するためこの操作を６度繰り返し、完全に精製されたポリマーＭｅＯ−ＰＥＧ−ＯＣＨ₂ＰｈＣＨ₂ＳＣ（＝Ｓ）Ｐｈ（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＣＴＡ）を得た。次いで、コポリマーを室温（約２５℃）の減圧下で３６時間乾燥した（収量＝４ｇ，１００％）。

ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＣＴＡの¹Ｈ ＮＭＲスペクトルを図１に、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）の結果を図２に示す。ＧＰＣは２ｍｇのポリマーを０．５％のテトラエチルアンモニュウムを含むＴＨＰの１ｍＬに溶解して行った。

＜製造例２＞ ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳブロック共重合体の合成：
連鎖移動剤（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＣＴＡ）とともにテローゲンとしてクロロメチルスチレン（ＣＭＳ）のラジカルテロメリゼーションによりメトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（クロロメチルスチレン）（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ）を合成した。

このＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳのポリマー主鎖は親水性セグメントとしてのＰＥＧ
と疎水性セグメントしての反復単位２２のＰＣＭＳから構成されていることが¹Ｈ ＮＭＲデータから確認された。要約すると、ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＣＴＡ（３６ｇ）をフリーラジカル開始剤、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）の２４０ｍｇ及びＣＭＳ５６ｍＬと混合して高純度トルエン（２００ｍＬ）に溶解した。この混合物を窒素雰囲気下２４時間７０℃で撹拌した。反応後、得られたポリマーを、冷ＩＰＡを用いる３度の沈殿／遠心（−４℃、１４９，０００×ｇ，３分）により完全に精製した後、室温（約２５℃）で減圧乾燥した（収量＝４ｇ，１００％）。

ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳの¹Ｈ ＮＭＲスペクトルを図３に、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）の結果を図４に示す。

ＧＰＣは、ポリマー２ｍｇを０．５％のＴＥＡ（テトラエチルアンモニウム）を含むテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１ｍＬに溶解して行った。

＜製造例３＞ ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴブロック共重合体の合成：
ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳブロック共重合体のベンジルクロライドと４−アミノ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル フリーラジカル（ＮＨ₂−ＴＥＭＰＯ；東京化学工業株式会社）とのアミノ化反応を介して、ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳのＣＭＳ基のクロロ原子をニトロキシドラジカルに転化した。要約すると、ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳ（４ｇ）及びＮＨ₂−ＴＥＭＰＯ（９ｇ＝５ｘ ｅｑ．）を別々に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の５０ｍＬに撹拌しながら２４時間室温で溶解させた。２つの溶液を混合し、２４時間室温で反応させた。反応終了後、反応混合物からポリマーを、冷ＩＰＡを用いて沈殿させ、−４℃で３分間１４９，０００×ｇの遠心を各度行い、完全に精製されたＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴポリマーを得た。得られたポリマーを室温（約２５℃）で２４時間減圧乾燥した（収量＝４ｇ，１００％）。

４−アミノ−ＴＥＭＰＯを含まない対照ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ｎＰＭＮＴポリマーは、ジメチルスロホキシド（ＤＭＳＯ）中でのアミネーション反応を介してＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＣＭＳのクロロメチル基の２−ヒドロキシエチルアミノ部への転化によって得た。得られた、ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴとＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ｎＰＭＮＴを、それぞれ、０．１Ｍ ＨＣｌ溶液中でプロトン化して、１２時間凍結乾燥した。得られた各ポリマーを¹Ｈ ＮＭＲ及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いて分析した。ＭｅＯ−ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴの¹Ｈ ＮＭＲスペクトルを図５に示す。このポリマー２ｍｇを０．５％のＴＥＡ（テトラエチルアンモニウム）を含むテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１ｍＬに溶解したときの、ゲル透過クロマトグラフィーの結果を図６に示す。

＜製造例４＞ ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰの作製：
ｔＰＡ内包レドックス活性型ナノ粒子は、側鎖としてＲＯＳ消去部分を保持するカチオン性ジブロック両親媒性共重合体（ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴ）、アニオン性ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡｃ）、及びｔ−ＰＡ（田辺三菱製薬株式会社から入手，ａｂ９２６３７）から構成されるポリイオンコンプレックス（ＰＩＣ）ミセルの形成を介して作製した。

簡潔には、ＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴとＰＡＡｃ（分子量：５，０００）を、それぞれ５ｍｇ／ｍＬの濃度でリン酸緩衝（ＰＢ）溶液（５０ｍＭ，ｐＨ６．２）に溶解した。ｔ−ＰＡ内包ニトロオキシドラジカル含有ＲＮＰｓは、３．５ｍＬのＰＥＧ−ｂ−ＰＭＮＴ溶液を、０．５ｍＬのＰＡＡｃ及び１ｍｇ（４ｍｇ／ｍＬ，０．２５ｍＬ）のｔ−ＰＡの混合物に１：１のモル比（ｒ＝ＰＥＧ−ＰＭＮＴのカチオン性アミン基のモルユニット：ＰＡＡｃのアニオン性カルボキシル基のモルユニット）にて滴下することにより調製した。

ｔ−ＰＡ＠ＲＮＰはＤＭＦ溶液を３０分間撹拌した後透析膜を介して水に対して透析す
ることによって自己組織化することにより形成された。

・遊離ＲＮＰ又はｉＲＮＰ（ｔ−ＰＡ不含）及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ（５ｍｇ／ｍＬ）の物理的性質：
平均粒径（ｎｍ）及びζ（ゼータ）電位は、動的光散乱（ＤＬＳ）技法を用いて測定した。平均粒径及びζ（ゼータ）電位の測定結果を図７に示す。

＜動物実験１＞ ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果の確認
基本となる試験方法は、図８に示される実験プロトコールに従って実施した。

マウス結腸癌細胞株Ｃ−２６（ＲＣＢ２６５７）は理研バイオリソース研究センター（理化学研究所 筑波、茨城県）から入手した。Ｃ−２６細胞株は、使用に供する前は供給元により推奨されるように保持した。すべての実験は、筑波大学ガイドライン（実験プラン承認＃１８−４５２）に厳密にしたがって実施した。

５週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスを購入し、２−３日間の馴化飼育の後に実験に用いた。ＢＡＬＢ／ｃマウスの右大腿にＣ−２６細胞株の懸濁液（１×１０⁶ｃｅｌｌｓ／マウス（ｎ＝７））を皮下投与することで作製した異種移植マウス（Ｃ−２６結腸癌モデルともいう。）を用いてｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰの抗腫瘍効果及びその他の特性を決定した。

簡潔には、腫瘍の体積が一定のサイズ（１００ｍｍ³）に達したとき、マウスを無作為に次の６群に分けた。健常対照（健常）、腫瘍担持対照（生理食塩水）、ｔ−ＰＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、ｉＲＮＰ（ＴＥＭＰＯ；１８ｍｇ／ｋｇ）、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ（ｔ−ＰＡ；１ｍｇ／ｋｇ）及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ（ｔ−ＰＡ；１ｍｇ／ｋｇ，ＴＥＭＰＯ；１８ｍｇ／ｋｇ）
ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰは、上記製造例４で作製されたナノ粒子を、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰは、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰにおいて、ＴＥＭＰＯが２−ヒドロキシエチルに転化されたナノ粒子を（上記製造例３参照。）、ｉＲＮＰはｔ−ＰＡ不含ナノ粒子（ＲＮＰ（ＴＥＭＰＯ：１８ｍｇ／ｋｇ））を、それぞれ用いる例であり、ｔ−ＰＡは遊離ｔ−ＰＡ（１ｍｇ／ｋｇ）を用いる例であり、これらのサンプルは図８に示される実験プロトコールの投与スケジュールに従いマウスの尾静脈を介して２日毎に静注（ｉ．ｖ．）された。

上記実験をベースとする各種試験結果：
（１）動物の体重の変化
実験動物の体重はＣ−２６細胞を接種した後２日毎に測定した。試験結果として試験中の動物の平均体重（ｎ＝５）（平均±ＳＤ）変化を図９に示す。いずれの群も体重減少が見られず、強い毒性がないことが示された。

（２）腫瘍サイズの変化
上記試験にしたがい、生理食塩水、上記のｔ−ＰＡ、ｉＲＮＰ、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰを、それぞれ腫瘍担持マウス（各ｎ＝５）に投与後２日毎に腫瘍サイズを１７日間測定した。マウスを１７日目に安楽死させ、組織／器官を採取し、−８０℃で保存した後分析した。腫瘍サイズは、次の等式を用いて算出した。

腫瘍サイズ（ｃｍ³）＝０．５×Ｌ×Ｗ² （ここで、Ｌ及びＷは、それぞれ、デジタルカリパスにより測定される腫瘍の長径及び短径である。）
結果を図１０に示す。データは平均±ＳＤとして表示されている。なお、図中、＊及び＃：^*Ｐ＜０．０５、^#Ｐ＜０．００１を意味する。

ｉＲＮＰ処置はＲＯＳ消去効果により腫瘍増殖が有意に抑制され、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ
処置はｉＲＮＰのものに比べより高い抗腫瘍効果を示し、これはそのより長い血液循環中での半減期に起因する可能性がある（上記のＴ．Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．参照。）。この延長されたｔ−ＰＡの半減期は、ｔ−ＰＡが腫瘍細胞の移動及び増殖の足場を提供するフィブリン崩壊を促進し、腫瘍の増殖を抑制したものと理解できる。

（３）腫瘍中のＲＯＳレベルの変化
腫瘍組織におけるｉＲＮＰ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰのＲＯＳ消去効果を評価した。生理食塩水を用いた対照の結果を１００％と、各サンプルｔ−ＰＡ、ｉＲＮＰ、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ、ｔ−ＰＡ＠ｉＲＮを投与した系についてジヒドロエチジウムを用いるＲＯＳ測定キットを用い腫瘍組織中のＲＯＳレベルを決定した。結果を図１１に示す。データは平均±ＳＤとして表示されている。なお、図中、＊及び^**：^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．００１（ｎ＝３）を意味する。腫瘍中のＲＯＳレベルは生理食塩水及びｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰに比べ、ｉＲＮＰ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰにおいて有意に低下している。

（４）組織学的評価
マウスの組織／器官を採取し、採取後直ちに４％パラホルムアルデヒドにより１日間固定した。次いで、７０％エタノール中で１日インキュベートしてパラフィン切片標本を作製した。５μｍ厚の切片標本をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色に供した。器官の組織学は共焦点顕微鏡を用いて評価した。染色された代表的な組織学的切片標本の図に代わる写真を図１２に示す。上部の写真は４倍拡大したものであり、下部の写真は２０倍拡大したものである。矢印は腫瘍中のフィブリンマトリックスを示す。腫瘍組織中には高レベルのフィブリンが見られるものの、ｔ−ＰＡ、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ処理では腫瘍組織中のフィブリンが顕著に崩壊されていること判る。

（５）免疫蛍光染色
５．１ フィブリンの分布を評価するため、腫瘍パラフィン切片標本を脱パラフィン処理し、ウサギポリクローナルフィブリ（ノーゲン）抗体（ａｂｃａｍ；ａｂ３４２６６９；１：１００）（一次抗体）で染色し、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８結合型ヤギ−ウサギＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：４００）（二次抗体）で染色した。腫瘍切片標本中のフィブリ（ノーゲン）堆積を共焦点顕微鏡下で分析した。代表的な腫瘍組織中のフィブリンの免疫蛍光染色画像（写真）を図１３に示す。フィブリン蛍光密度を、イメージＪソフトウエア―を用いてフィブリンシグナルの平均グリーン値を測定した。結果を図１４に示す。図中、＊について：^*Ｐ＜０．０５、^**Ｐ＜０．００１（ｎ＝３）を意味し、データは平均±ＳＤとして表示されている。定量化蛍光強度は腫瘍組織中に高レベルのフィブリンが観察される傾向が見られる。

これらの結果からも、ｔ−ＰＡ、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ処理では腫瘍組織中のフィブリンが顕著に崩壊されていること判る。

５．２ ｔ−ＰＡ、ｉＲＮＰ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰの抗腫瘍効果の機序を評価するため、ＮＦ−κＢ（ＲＯＳ調節の転写因子）及び免疫細胞の浸透を、免疫蛍光試験によりそれぞれ決定した。

簡潔には、腫瘍パラフィン切片標本を脱パラフィン化し、それぞれ、ＮＦ−κＢ ｐ６５ウサギｍＡｂ（ＸＰ；Ｄ１４Ｅ１２；１：４００）、ラット抗−マウスＣＤ１６／３２抗体（５５３１４２；１：５００）及びヤギ抗−マウスＭＭＲ／ＣＤ２０６抗体（ＡＦ２５３５；１：１００）を用いて染色した。次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８−結合型ヤギ抗−ウサギＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：４００）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８−結合型ヤギ抗−ラットＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１：５００）、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８−結合型ロバ抗−ヤギＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
；１：５００）で、それぞれ染色した。共焦点顕微鏡下の染色画像（写真）を図１５に示す。図中のスケールバーは１０μｍを表す。このような顕微鏡下で腫瘍切片標本中のＮＦ−κＢシグナル及び免疫細胞浸透の発現について分析した。

ＮＦ−κＢレベルは、イメージＪソフトウエア―を用いてＮＦ−κＢシグナル緑の平均値を測定することにより決定した。結果を図１６に示す。図中、＊＊＊は^***Ｐ＜０．００１を意味し、印の不存在は有意差がないことを意味する。データは平均±ＳＤで表示されている。ＲＮＰｓ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰの抗腫瘍効果の機序は、腫瘍中の腫瘍転写因子（ＮＦ−κＢ）により確認された。ＲＮＰｓ及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰは、Ｃ−２６結腸癌（又は腫瘍）の増殖を生理食塩水対照よりも有意に強く抑制した。これは、おそらく，ＲＯＳのモジュレーションされるＮＦ−κＢのダウンレギュレーションによるのかも知れない。

５．３ Ｄ−ダイマー（フィブリン崩壊産物）のレベルを腫瘍微環境に対するＥＬＩＳＡにより表示する。

結果を図１７に示す。データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．で表示している。＊印：^**Ｐ＜０．０１，^***Ｐ＜０．００１（ｎ＝５）ｔ−ＰＡ群、ｔ−ＰＡ＠ｎｉＲＮＰ群及びｔ−ＰＡ＠ｉＲＮＰ群で有意にＤ−ダイマー量が上昇しており、フィブリンが効果的に切断されていることが確認される。

５．４ マウスにおける薬剤の毒性
被験薬剤のマウスにおける毒性を評価するために、各種器官のＨ＆Ｅ染色を行い、顕微鏡下でモニターした。結果を図１８に示す。これらの図から、本試験にも用いた各薬剤は明確な毒性を示さないことが判る。

＜動物実験２＞ ｔ−ＰＡの抗腫瘍効果の確認
基本となる試験方法は、図１９に示される実験プロトコールに従って実施した。

ｔ−ＰＡそれ自体の各腫瘍進行ステージでの抗腫瘍効果評価するために本試験方法は、図１９に示される実験スキームに従って実施した。簡潔には、ｔ−ＰＡそれ自体の各腫瘍進行ステージでの抗腫瘍効果評価するために、試験例１に記載したＣ−２６結腸癌モデルの腫瘍サイズが３０ｍｍ³に達したとき（初期ステージ）に、１００ｍｍ³に達したとき（中期ステージ））に、
処置グループ１：対照（非処置）、
処置グループ２：初期ステージ、１ｍｇ／ｋｇ用量のｔ−ＰＡの投与（Ｅ ｔ−ＰＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、
処置グル―プ３：中期ステージ、０．１５ｍｇ／ｋｇ用量のｔ−ＰＡの投与（Ｍ ｔ−ＰＡ（０．１５ｍｇ／ｋｇ）、
処置グループ４：中期ステージ、０．５ｍｇ／ｋｇ用量のｔ−ＰＡの投与（Ｍ ｔ−ＰＡ（０．５ｍｇ／ｋｇ）、
処置グループ５：中期ステージ、１ｍｇ／ｋｇ用量のｔ−ＰＡの投与（Ｍ ｔ−ＰＡ（１ｍｇ／ｋｇ）、
処置グループ６：中期ステージ、２ｍｇ／ｋｇ用量のｔ−ＰＡの投与（Ｍ ｔ−ＰＡ（２ｍｇ／ｋｇ）
が、それぞれ、動物の静脈内に行われた。

（１）腫瘍の体積（又はサイズ）は、＜試験例１＞の（２）に従って決定した。これらの処置による効果（Ｃ−２６結腸癌モデルへの各サンプルの投与による腫瘍増殖のプロファイル）を図２０に示す。図中、データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表示する。各グループ
は１群５匹（ｎ＝５）である。＊は、^*Ｐ＜０．０５である。図２０−Ａは、用量１ｍｇ／ｋｇのｔ−ＰＡの投与は、初期及び中期ステージおける腫瘍の増殖を抑制することを示す。図２０−Ｂは、腫瘍抑制のためのｔ−ＰＡの処置は用量依存的な効果を示し、１ｍｇ／ｋｇ以上で有意に優れた抗腫瘍効果を示す。

（２）Ｃ−２６結腸癌モデルへサンプルの投与による体重変化のプロファイルを、図２１に示す。データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表示する。各グループは１群５匹（ｎ＝５）である。図２１−Ａは、初期及び中期ステージにおける腫瘍の進行ステージにかかわりなく、ｔ−ＰＡ処置は、モデル動物の体重変化の差異を無視できることを示す。

（３）ｔ−ＰＡは、腫瘍組織中への免疫細胞Ｍ１マクロファージ（ＣＤ１６／３２）の浸透を高める。図２２−Ａは、前述のＣＤ１６／３２（緑）及びＤＡＰＩ（青）染色による染色図である。図中のスケールバーは、１０μｍを表す。ＣＤ１６／３２レベルをイメージＪソフトウエア―を用い緑の平均値を測定することにより決定した。結果を図２２−Ｂに示す。各グループは、１群５匹（ｎ＝５）である。データは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表示する。＊印：^*Ｐ＜０．０５を意味する。図から、ｔ−ＰＡ処置は抗腫瘍効果のための免疫細胞（Ｍ１マクロファージ）の腫瘍組織への浸透を高めている。

Claims (6)

1. 有効成分として、下記式（Ｉ）で表されるブロック共重合体とポリアニオン性ポリマーとｔ−ＰＡを含んでなるがん療法用組成物。
   上式中、各変動可能な基等の略号は次のとおり定義される。
   Ａは、非置換又は置換Ｃ₁−Ｃ₁₂アルコキシを表し、置換されている場合の置換基は、ホルミル基、式Ｒ’Ｒ^"ＣＨ−基を表し、ここで、Ｒ’及びＲ^"は独立してＣ₁−Ｃ₄アルコキシ又はＲ’とＲ^"は一緒になって−ＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ−、−Ｏ（ＣＨ₂）₃Ｏ−もしくは−Ｏ（ＣＨ₂）₄Ｏ−を表す。
   Ｌ₁は、直接結合又は二価の連結基を表す。
   Ｘは、Ｌ₂−Ｒ₁であるか又は水素原子若しくはハロゲン原子若しくはヒドロキシル基であり、かつ、Ｌ₂は−（ＣＨ₂）_p−ＮＨ−（ＣＨ₂）_p−であり、ｐは独立して、整数０又は１〜３であり、Ｒ₁は、次式で表される環状ニトロキシドラジカル残基のいずれかであり、
   （式中、Ｒ’はメチルである。）
   Ｌ₂−Ｒ₁はｎの付された反復単位の総数ｎの５０％以を占める。
   Ｚは、ＨまたはＳ（Ｃ＝Ｓ）−Ｐｈであり、Ｐｈは１または２個のメチルまたはメトキシで置換されていてもよいフェニルである。
   ｍは、５〜１０，０００の数である。
   ｎは、２〜５００数である。
   ポリアニオン性ポリマーは、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリスルホン酸、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸から選ばれる。
2. ナノ粒子の形態にある、請求項１に記載のがん療法用組成物。
3. がん療法において、予防又は治療対処のがんは、脳腫瘍、頭頸部がん、唾液腺がん、甲状腺がん、肺がん、小細胞肺がん、乳がん、肝臓・胆のうがん、膵臓がん、肝臓がん、胆道がん、食道がん、胃がん、小腸がん、大腸がん、腎臓がん、腎盂・尿管がん、膀胱がんから選ばれる、請求項１又は２に記載のがん療法用組成物。
4. がん療法において、他のがん又は腫瘍治療剤が併用される、請求項１〜３のいずれかに記載のがん療法用組成物。
5. ｔ−ＰＡを有効成分として含んでなるがん療法剤。
6. ｔ−ＰＡを有効成分とするがん療法剤