JP2020515625A - 細胞死およびインターフェロン発現の差次的誘導のための組成物および方法 - Google Patents
細胞死およびインターフェロン発現の差次的誘導のための組成物および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020515625A JP2020515625A JP2019554667A JP2019554667A JP2020515625A JP 2020515625 A JP2020515625 A JP 2020515625A JP 2019554667 A JP2019554667 A JP 2019554667A JP 2019554667 A JP2019554667 A JP 2019554667A JP 2020515625 A JP2020515625 A JP 2020515625A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- cells
- composition
- oligonucleotide
- rna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 162
- 230000030833 cell death Effects 0.000 title claims abstract description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 61
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title description 34
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title description 34
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title description 33
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 20
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 81
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 80
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 27
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims abstract 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 416
- 101000653235 Homo sapiens Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Proteins 0.000 claims description 269
- 102100030944 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Human genes 0.000 claims description 269
- 101100018370 Arabidopsis thaliana ICR4 gene Proteins 0.000 claims description 244
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 156
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 96
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 74
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 60
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 55
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 42
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims description 27
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 16
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 claims description 12
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 11
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims description 11
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 11
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 9
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 claims description 4
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 4
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 117
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 88
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 53
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 53
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 47
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 46
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 45
- 101000952099 Homo sapiens Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 45
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 45
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 40
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 34
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 34
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 29
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 29
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 28
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 28
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 27
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 27
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 26
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 25
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 24
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 24
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 24
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 23
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 23
- 238000000719 MTS assay Methods 0.000 description 23
- 231100000070 MTS assay Toxicity 0.000 description 23
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 description 22
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 description 22
- 101001082073 Homo sapiens Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 22
- 102100027353 Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 22
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 22
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- 230000011542 interferon-beta production Effects 0.000 description 20
- 102100034170 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Human genes 0.000 description 19
- 101710089751 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Proteins 0.000 description 19
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 19
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 19
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 19
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 18
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 18
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 17
- TXUWMXQFNYDOEZ-UHFFFAOYSA-N 5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-sulfanylidene-4-imidazolidinone Chemical compound O=C1N(C)C(=S)NC1CC1=CNC2=CC=CC=C12 TXUWMXQFNYDOEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 15
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 15
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 15
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 14
- 101150071716 PCSK1 gene Proteins 0.000 description 14
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 14
- 230000037449 immunogenic cell death Effects 0.000 description 14
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 13
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 13
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 12
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 12
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 12
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 12
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 12
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 12
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 12
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 12
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 11
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 11
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 11
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 11
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 11
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 11
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 11
- OEDPHAKKZGDBEV-GFPBKZJXSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2r)-3-[2,3-di(hexadecanoyloxy)propylsulfanyl]-2-(hexadecanoylamino)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)CSCC(COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC OEDPHAKKZGDBEV-GFPBKZJXSA-N 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 10
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 10
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 10
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 10
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 10
- 101150023320 B16R gene Proteins 0.000 description 9
- -1 INF-β Proteins 0.000 description 9
- 101100316831 Vaccinia virus (strain Copenhagen) B18R gene Proteins 0.000 description 9
- 101100004099 Vaccinia virus (strain Western Reserve) VACWR200 gene Proteins 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 9
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 9
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 8
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 8
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 7
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 6
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 6
- 101100018369 Arabidopsis thaliana ICR3 gene Proteins 0.000 description 6
- 102100036621 Glucosylceramide transporter ABCA12 Human genes 0.000 description 6
- 101000929652 Homo sapiens Glucosylceramide transporter ABCA12 Proteins 0.000 description 6
- 101001011382 Homo sapiens Interferon regulatory factor 3 Proteins 0.000 description 6
- 101100264173 Homo sapiens XIAP gene Proteins 0.000 description 6
- 102100029843 Interferon regulatory factor 3 Human genes 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 108700031544 X-Linked Inhibitor of Apoptosis Proteins 0.000 description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 201000001289 autosomal recessive congenital ichthyosis 4A Diseases 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 5
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 5
- 102100037024 E3 ubiquitin-protein ligase XIAP Human genes 0.000 description 5
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 5
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 5
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 101001054334 Homo sapiens Interferon beta Proteins 0.000 description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 4
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 4
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 230000007120 differential activation Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 4
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 4
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 3
- 108090000365 Cytochrome-c oxidases Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 3
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 101100464256 Listeria monocytogenes serovar 1/2a (strain ATCC BAA-679 / EGD-e) plcA gene Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 101100481581 Mus musculus Tlr13 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 3
- 102000005747 Transcription Factor RelA Human genes 0.000 description 3
- 108010031154 Transcription Factor RelA Proteins 0.000 description 3
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 3
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 3
- 238000010598 annexinV-PE /7AAD assay Methods 0.000 description 3
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 3
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000032390 pattern recognition receptor signaling pathway Effects 0.000 description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 3
- 101150086837 pic gene Proteins 0.000 description 3
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100018371 Arabidopsis thaliana ICR5 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000021350 Caspase recruitment domains Human genes 0.000 description 2
- 108091011189 Caspase recruitment domains Proteins 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 2
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 2
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 2
- 230000005860 defense response to virus Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000021597 necroptosis Effects 0.000 description 2
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 102100024321 Alkaline phosphatase, placental type Human genes 0.000 description 1
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940088872 Apoptosis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101100034357 Arabidopsis thaliana RIPK gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024365 Arf-GAP domain and FG repeat-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 1
- 101710121713 B1 kinase Proteins 0.000 description 1
- 108020004513 Bacterial RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- AOCCBINRVIKJHY-UHFFFAOYSA-N Carmofur Chemical compound CCCCCCNC(=O)N1C=C(F)C(=O)NC1=O AOCCBINRVIKJHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 1
- 229940123169 Caspase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100021906 Cyclin-O Human genes 0.000 description 1
- 102100026810 Cyclin-dependent kinase 7 Human genes 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical class ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000897441 Homo sapiens Cyclin-O Proteins 0.000 description 1
- 101001025337 Homo sapiens High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 1
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 1
- 101001055145 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001109465 Homo sapiens NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 1
- 101150103227 IFN gene Proteins 0.000 description 1
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100026879 Interleukin-2 receptor subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N Lomustine Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1CCCCC1 GQYIWUVLTXOXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022691 NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010057150 Peplomycin Proteins 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 229940122907 Phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 108090000829 Ribosome Inactivating Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710202844 Serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101100215487 Sus scrofa ADRA2A gene Proteins 0.000 description 1
- 230000010782 T cell mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229930188522 aclacinomycin Natural products 0.000 description 1
- USZYSDMBJDPRIF-SVEJIMAYSA-N aclacinomycin A Chemical compound O([C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1[C@H](C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)N(C)C)[C@H]1CCC(=O)[C@H](C)O1 USZYSDMBJDPRIF-SVEJIMAYSA-N 0.000 description 1
- 229960004176 aclarubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 230000025164 anoikis Effects 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002583 anti-histone Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000158 apoptosis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229950008548 bisantrene Drugs 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229960000455 brentuximab vedotin Drugs 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 229960003261 carmofur Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 108091008878 cytoplasmic PRRs Proteins 0.000 description 1
- 230000005956 cytoplasmic translocation Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 231100000276 dose-dependent cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- XPYGGHVSFMUHLH-UUSULHAXSA-N falecalcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(O)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C XPYGGHVSFMUHLH-UUSULHAXSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 102000045716 human TLR3 Human genes 0.000 description 1
- 102000045715 human TLR7 Human genes 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 230000005746 immune checkpoint blockade Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000957 immunotolerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000010661 induction of programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- 229960005558 mertansine Drugs 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N mithramycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- NJSMWLQOCQIOPE-OCHFTUDZSA-N n-[(e)-[10-[(e)-(4,5-dihydro-1h-imidazol-2-ylhydrazinylidene)methyl]anthracen-9-yl]methylideneamino]-4,5-dihydro-1h-imidazol-2-amine Chemical compound N1CCN=C1N\N=C\C(C1=CC=CC=C11)=C(C=CC=C2)C2=C1\C=N\NC1=NCCN1 NJSMWLQOCQIOPE-OCHFTUDZSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000004987 nonapoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 231100001143 noxa Toxicity 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229940127255 pan-caspase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229950003180 peplomycin Drugs 0.000 description 1
- QIMGFXOHTOXMQP-GFAGFCTOSA-N peplomycin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCN[C@@H](C)C=1C=CC=CC=1)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1NC=NC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C QIMGFXOHTOXMQP-GFAGFCTOSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 description 1
- NJBFOOCLYDNZJN-UHFFFAOYSA-N pipobroman Chemical compound BrCCC(=O)N1CCN(C(=O)CCBr)CC1 NJBFOOCLYDNZJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000952 pipobroman Drugs 0.000 description 1
- 108010031345 placental alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229960003171 plicamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229940034080 provenge Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- WFWLQNSHRPWKFK-ZCFIWIBFSA-N tegafur Chemical compound O=C1NC(=O)C(F)=CN1[C@@H]1OCCC1 WFWLQNSHRPWKFK-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- 229960001674 tegafur Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940044655 toll-like receptor 9 agonist Drugs 0.000 description 1
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000014567 type I interferon production Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本特許出願は、2017年4月3日に出願された米国仮特許出願第62/480,780号の優先権の利益を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表の参照
本出願は、EFS−Web経由で電子的に出願されており、.txtフォーマットで電子的に提出された配列表を含む。.txtファイルは、2018年4月3日に作成された「2018−04−03_5667−00429_ST25.txt」と題された配列表を含有し、サイズは4,014バイトである。この.txtファイルに含有される配列表は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
開示された技術は、一般には細胞死の誘導のための組成物および方法を対象とする。より詳細には、技術は、細胞死および差次的なインターフェロン発現の誘導のためのRNA組成物およびその使用を対象とする。
いくつかの実施形態において、スペーサーは、RNAの一本鎖セグメントを含む。特定の実施形態においてスペーサーは、少なくとも8個のヌクレオチド対合の完全または部分的なハイブリダイゼーションから形成される第3のステムループを含む。他の実施形態において、スペーサーは、RNAの二本鎖セグメントを含む。
組成物は、1つまたは複数の治療剤をさらに含んでもよい。治療剤は、化学療法剤、抗癌生物製剤、免疫療法剤、またはそれらの任意の組み合わせから選択されてもよい。
組成物は、1つまたは複数の細胞質送達組成物をさらに含んでもよい。細胞質送達組成物は、リポソーム、合成ポリマー、細胞透過性ペプチド、ナノ粒子、ウイルス粒子、エレクトロポレーション緩衝液、ヌクレオフェクション試薬、またはそれらの任意の組み合わせから選択されてもよい。
本発明の別の態様は、細胞の増殖を阻害する、または細胞死を誘導する方法である。方法は、細胞の増殖を阻害する、または細胞の死を誘導するのに有効な量で、細胞の増殖を阻害する、または細胞死を誘導することができる上記に記載された組成物のいずれかと細胞を接触させるステップを含んでもよい。
上記に記載された方法のどちらかにおいて、細胞は癌細胞を含んでもよい。癌細胞は、メラノーマ、脳癌、前立腺癌、乳癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、白血病、リンパ腫、または卵巣癌細胞を含んでもよい。
上記に記載された方法のどちらかにおいて、組成物、または少なくともRNAは、少なくとも複数の細胞の細胞質に送達される。
サイトカインは、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、およびリンホカインなどの一連のタンパク質を含む免疫調節剤である。この後の例に示されるように、RNA組成物は、INF−β、TNF−α、またはIL−6などのサイトカインの産生を差次的に誘導することができる。
RNA組成物は、5’末端修飾を含んでもよい。5’末端修飾は、5’−三リン酸を含んでもよい。RNA組成物がdsRNAを含む場合、5’末端の一方または両方が5’−三リン酸を含むように修飾され得る。
本明細書で使用される場合、RNA組成物が、同じ条件下でpolyI:Cと少なくとも同程度のサイトカインの産生を誘導するならば、あるいは、サイトカイン産生が、未処理対照細胞におけるIFNの産生と比較して5、6、7、8、9、10倍またはそれ以上増加するならば、RNA組成物は相当量または多量のサイトカインを誘導する。いくつかの場合、測定されるサイトカインは、INF−β、TNF−α、またはIL−6である。
本明細書に記載されるRNA組成物は、1つまたは複数の治療剤と組み合わせることができる。治療剤は、対象における癌を治療するのに使用される抗癌治療剤であってもよい。適切な抗癌治療剤には、限定するものではないが、放射線、化学療法剤、抗癌生物製剤、または免疫療法剤が挙げられ得る。
最近の研究は、免疫原性細胞死誘導癌治療薬およびチェックポイント阻害剤、例えば、抗CTLA4および抗PD−L1の組み合わせが、抗腫瘍応答および抗腫瘍免疫を相乗的に増強することを示した。45 ICR2およびICR4は、ヒト癌に対する強力なPRR刺激細胞傷害性剤である。ICR2およびICR4は、特有の免疫刺激活性および止血活性を有する。チェックポイント阻害剤および本明細書に記載されるRNA組成物の組み合わせは、進行癌に対する強力および有効な抗癌療法となるであろう。
適切には、組成物は、細胞の細胞質に送達される。組成物は、上記に記載され、以下に限定されるものではないが、リポソーム、合成ポリマー、細胞透過性ペプチド、ナノ粒子、ウイルスカプセル化、受容体媒介エンドサイトーシス、電気穿孔、または細胞の細胞質に組成物を送達するための任意の他の手段を含む、細胞質送達機構を通じて送達することができる。
細胞は、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで直接または間接的に組成物と接触され得る。接触は、細胞、組織、哺乳動物、患者、またはヒトへの投与を包含する。さらに、細胞の接触には、細胞質送達機構による細胞培養物への組成物の添加、または任意の利用可能な手段による細胞の細胞質への組成物の導入が挙げられる。他の適切な方法には、以下に記載される投与の適当な手順および経路を用いた、細胞、組織、哺乳動物、または患者への組成物の導入または投与が挙げられ得る。
有効量または治療有効量は、本明細書で使用される場合、癌などの状況、障害または状態を治療するために対象に投与されるときに、治療(上記に定義された)を達成するのに十分な組成物の量を意味する。治療有効量は、組成物、疾患およびその重症度、ならびに治療される対象の年齢、体重、健康状態および反応性に応じて異なるであろう。
本開示は、本明細書に記載された構成要素、または方法ステップの構成、配置の特定の細部に限定されない。本明細書に開示された組成物および方法は、この後の本開示に照らして当業者に明らかとなる様々な方法で作成され、実践され、使用され、実施され、および/または形成されることができる。本明細書で使用される表現および用語は、説明の目的のみであり、特許請求の範囲の限定として見なされるべきではない。第1の、第2の、および第3のなどの序数標識は、説明および特許請求の範囲で使用される場合、様々な構造または方法ステップを指し、任意の特定の構造もしくはステップ、またはそのような構造もしくはステップの任意の特定の順序もしくは構成を示すと解釈されることを意味するものではない。本明細書に記載された全ての方法は、本明細書に特に指示のない限り、または文脈によって特に明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書に提供されるありとあらゆる例、または例示的用語(例えば、「など(such as)」)の使用は、本開示を容易にすることが単に意図され、特に主張されない限り、本開示の範囲に対するいかなる制限も意味するものではない。本明細書の用語、および図面に示された構造は、任意の特許請求されていない要素が、開示された発明の主題の実践に不可欠であることを示していると解釈されるべきではない。用語「含む(including)」、「含む(comprising)」または「有する(having)」およびそれらの変形形態の本明細書における使用は、その後に列挙された要素およびその同等物、ならびに追加の要素を包含することを意図している。特定の要素を「含む(including)」、「含む(comprising)」または「有する(having)」として記載された実施形態は、それらの特定の要素「から本質的になる」および「からなる」としても企図される。
以下の例は、例示することを意図するにすぎず、本発明の範囲または添付の特許請求の範囲に対する限定として意図するものではない。
参考文献
細胞培養
ヒトメラノーマ細胞株WM266−4(ATCC、マナッサス、VA)は、10%FBS、1×非必須アミノ酸(NEAA)および1mMピルビン酸ナトリウムを補充したイーグル最小必須培地で維持した(全てInvitrogen製、カールスバッド、CA)。ヒト前立腺癌細胞株DU145(ATCC)は、1×NEAAおよび1mMピルビン酸ナトリウム、10%FBSを補充したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)(Invitrogen)で培養した。ヒト肝細胞癌細胞株、Huh7.0およびHuh7.5は、Dr. Stacy M. Horner、デューク大学によって好意により提供された。Huh7.0、Huh7.5、ヒト膵臓癌細胞株PANC−1(ATCC)、マウス膵臓癌細胞株PANC−02(NIH)およびマウスメラノーマ細胞株B16.F0(ATCC)は、10%FBSを補充したDMEMで維持した。ヒト膵臓癌細胞株BxPC3細胞は、10%FBSおよび2mM L−グルタミンを含むRPMI 1640(Invitrogen)で維持した。TLRレポーター細胞株、HEK−Blue Null、HEK−Blue hTLR2、HEK−Blue hTLR3、HEK−Blue hTLR4およびHEK−Blue hTLR9細胞(全てInvivoGen、サンディエゴ、CAから購入)は、NF−kB/AP−1誘導性分泌型胎盤アルカリホスファターゼ(SEAP)および対応するTLRを安定に発現し、これらの細胞は製造者の指示書に従って維持された。ヒト正常末梢血単核細胞(PBMC)(Stemcell Technologies、バンクーバー、カナダ)は、10%FBSおよび2mM L−グルタミンを含むRPMI 1640で培養した。未成熟樹状細胞(DC)は、以前に記載されているようにPBMCから生成した。46 全ての細胞を37℃、5%CO2を含む加湿雰囲気でインキュベートした。
ICRの生成
全てのICRは、以前に記載されているように、Y639F変異体T7 RNAポリメラーゼを用いたDNA鋳型からのインビトロ転写と、その後のゲル精製によって産生した。28 ICR中の全てのピリミジンは2’フルオロ修飾される。
ICRおよびpolyI:Cに、どちらもDharmaFECT(登録商標)Duoリポソームトランスフェクション試薬(Thermo Scientific、ウォルサム、MA)をトランスフェクション試薬(μl):RNA(μg)比3:1で製造者の指示書に従ってトランスフェクトした。RNAは80〜90%のコンフルエント細胞にトランスフェクトした。細胞をRNAトランスフェクション剤複合体と4時間インキュベートし、その後新鮮な培養培地を補充した。細胞および培養上清を様々な時点で回収した。Pam3CSK4、CpG 2006、PolyI:C、R848(全てInvivoGen製)およびLPS(Sigma)を、対照TLRおよびPRRアゴニストとして使用した。
未処理細胞と比べた増殖阻害を、Celltiter 96(登録商標)MTS Cell Proliferation Assay Kit(Promega、マディソン、WI)を用いて処理後72時間時点で製造者の指示書に従って定量化した。増殖阻害パーセントは、以下の式:増殖阻害%=([O.D.]未処理−[O.D.]処理)/[O.D.]未処理×100を使用して計算した。細胞死はPE Annexin V Apoptosis Detection Kit I(BD Biosciences、サンノゼ、CA)を用いて測定した。
I型IFNデコイ受容体B18R(1μg/ml)(eBioscience、サンディエゴ、CA)、RIPキナーゼ阻害剤ネクロスタチン−1(100μM)(Sigma、セントルイス、MO)およびパン−カスパーゼ阻害剤Z−VAD−fmk(50μM)(InvivoGen)で細胞をRNA処理前および処理直後に6時間処理した。IFN−β依存性細胞死を誘導するために、細胞を組換えヒトIFN−β(100ng/ml)(Peprotech、ロッキーヒル、NJ)で処理した。
RIG−I、PKRおよびMDA5発現のsiRNAノックダウン
RIG−I、PKRおよびMDA5の一過性ノックダウンは、以前に記載されているように行った。28 2回目のsiRNAトランスフェクション後5時間時点で、細胞を回収し、96ウェルプレートに再播種し、一晩インキュベートした。細胞を、次いでPRR活性化RNAで処理した。
DAMPを生成するために、5×105 WM266−4細胞にRNA(1μg/ml)をトランスフェクトし、またはドキソルビシン(7.5μM)(Sigma)とインキュベートした。4時間後、細胞を新鮮な培養培地で5回洗浄し、1mlの培養培地で2〜3日間インキュベートした。死細胞はトリパンブルーを用いてカウントする。95%を超える細胞が死滅したら、培養上清を1200RPMで5分間、遠心分離によって回収し、使用まで−80℃で保管した。
食作用アッセイ
細胞をPKH67 Green Fluorescent Cell Linker Kit(Sigma)を用いて標識した。PKH67標識細胞をRNAまたはドキソルビシン(7.5μM)(Sigma)を用いて殺滅した。死んだ/死につつある細胞を処理後48時間時点で回収し、未成熟DCと1時間インキュベートした。PKH67標識した、死んだ/死につつある細胞の食作用を、フローサイトメトリーによって決定した。
DAMPを完全培地で25%(v/v)に希釈した。5×104TLRレポーター細胞または1×105未成熟DCを、希釈したDAMPと96ウェルプレートで一晩インキュベートした。TLR活性化を決定するために、SEAP放出のレベルを比色アッセイを用いて決定した。簡単には、40μl培養上清を回収し、180μl QUANTI−Blue(商標)(InvivoGen)と平底96ウェルプレートで3時間インキュベートした。SEAP活性は、光学密度(OD)をBioTek Power Wave XS2 ELISAプレートリーダー(BioTek、ウィヌースキ、VT)により650nmで読み取って得た。Pam3CSK4(TLR2アゴニスト)、CpG 2006(TLR9アゴニスト)、PolyI:C(TLR3アゴニスト)およびLPS(全てInvivoGen製)を、対照TLR刺激因子として使用した。DC刺激を決定するために、DCによるサイトカイン産生をELISAによって決定した。
5〜6週齢NU/JマウスをJackson Laboratory(バーハーバー、ME)から入手した。7×105WM266−4ヒトメラノーマ細胞をNU/Jヌードマウスの右側腹部に皮下移植した。マウスが触知可能な腫瘍を有する場合、in vivo−jetPEI(登録商標)(Polyplus Transfection、ニューヨーク、NY)を用いて、N/P=8で担腫瘍マウスに20μgのRNA分子を腫瘍内注射した。RNAを5日間連続で毎日注射した。腫瘍増殖は、キャリパーを用いて腫瘍の直径を1日おきに測定して評価した。腫瘍体積は、[(横)2×(縦)]/2として定義した。2000mm3を超える腫瘍体積を有するマウスを安楽死させた。マウスの使用を含む全ての実験手順は、ガイドラインに従って、およびデューク大学の動物実験委員会に準拠して行った。
TNF−α、IL−6およびIL−8は、BD OptEIA(商標)ELISAセット(BD Biosciences、フランクリンレイクス、NJ)を用いて決定した。IFN−β産生は、IFN−β ELISAキット(PBL Biomedical Laboratories、ピスカタウェイ、NJ)を用いて決定した。HMGB−1分泌は、HMGB1 ELISAキット(Tecan、モリスビル、NC)を用いて製造者の指示書に従って決定した。
ミトコンドリアおよび核画分を、それぞれMitochondria Isolation KitおよびNE−PER Nuclear Extraction試薬(両方ともThermo Scientific製)を用いて単離した。ミトコンドリア溶解物、核溶解物および全細胞溶解物を、完全プロテアーゼ阻害剤カクテルおよびホスファターゼ阻害剤カクテル(Sigma)の存在下、1×RIPA緩衝液(Sigma、セントルイス、MO)中で調製した。30μgのタンパク質溶解物を4〜20%Mini−PROTEAN(登録商標)TGX(商標)ポリアクリルアミドゲル(Bio−Rad、ハーキュリーズ、CA)で電気泳動分離し、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)膜(PolyScreen(登録商標)、PerkinElmer)に移した。TBST20ですすいだ後、膜をTBTS20中5%ドライミルクで1時間ブロッキングし、その後、一次抗体抗XIAP(1:1000)(3B6;Cell Signaling、ダンバーズ、MA)、抗TRAIL(1:1000)(C92B9;Cell Signaling)、抗ホスホ(p)−IRF−3(1:500)(4D4G;Cell Signaling)、抗切断カスパーゼ−3(1:200)(D3E9;Cell Signaling)、抗カスパーゼ−7(1:200)(Cell Signaling)、抗NF−κB p65(1:1,000)(L8F6;Cell Signaling)、抗RIP(1:1,000)(Cell Signaling)、抗RIG−I(1:500)(D14G6;Cell Signaling、Danvers、MA)、抗MDA5(1:500)(D74E4;Cell Signaling)および抗PKR(1:350)(カタログ番号3072;Cell Signaling)と一晩インキュベーションした。異なるタンパク質を同じ膜で順次検出する場合、Restore Western Blot Stripping Buffer(Thermo Scientific、ロックフォード、IL)で膜を8分間処理し、上記に記載したように洗浄し、ブロッキングし、再びプロービングした。西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合抗ウサギ(1:2,000)(Cell Signaling)または抗マウス(1:2,000)(Cell Signaling)二次抗体を用いて一次抗体を検出した。抗β−チューブリン(1:1,000)(9F3;Cell Signaling)、抗CoxIV(1:1,000)(3E11;Cell Signaling)および抗ヒストンH3(1:1,000)(D1H2;Cell Signaling)を、ローディング対照として使用した。HRP活性は、Western Lightning Plus Kit(PerkinElmer、ウォルサム、MA)を用いて可視化した。
表面カルレティキュリンの発現は、抗カルレティキュリン−PE(1/100希釈)(Abcam、ケンブリッジ、MA)および7−AAD(BD Biosciences)と共染色した後、フローサイトメトリーによって決定した。HMGB1の検出には、細胞を4%パラホルムアルデヒド溶液で固定し、その後5%BSA、PBS中0.2%Triton X−100でブロッキングおよび透過処理し、抗HMGB1(1/1000希釈)(Abcam)で一晩染色し、Alexa Fluor 488結合ヤギ抗ウサギIgG(1/1000希釈)(Abcam)を二次抗体として使用した。DAPI(4’,6−ジアミジノ−2−フェニルインドール)(Sigma)を、核対比染色剤として使用した。HMGB1およびDAPIの発現をZeiss Axio Observer顕微鏡下で観察し、MetaMorphソフトウェア(サニーベール、CA)を用いて画像を分析した。
5μl DAMPまたは培養培地を、50μL正常プールヒト血漿(George King Bio−Medical Inc.、オーバーランドパーク、KS)と混合した。混合物を37℃で3分間インキュベートし、その後50μL CaCl2(25mM)を添加した。STart(登録商標)Hemostasis Analyzer(Diagnostica Stago、パーシッパニー、NJ)を用いて凝固時間を記録した。
統計分析
実験群の細胞増殖、細胞死、サイトカイン産生および腫瘍体積の違いを、両側スチューデントt検定を用いて比較した。生存の有意性をログランク(Mantel−Cox)検定によって決定した。0.05未満の確率(P<0.05)を統計的有意性に使用した。
癌細胞死ならびにIFN−βおよび炎症促進性サイトカインの発現の差次的誘導に関するRNA分子のスクリーニング
鎖間または鎖内塩基対(10〜20bp)からなる5’(p)ppおよび短いRNA二本鎖は、RIG−Iによって認識される公知のモチーフである。23、24 MDA5およびTLR3は、それぞれ長いdsRNA(0.5〜6kb)25および短いdsRNA(>21bp)26によって配列非依存的に活性化され、一方TLR7は、AUおよびGUリッチな短いssRNAによって配列依存的に活性化される。27 しかし、RIG−I、MDA5、TLR3およびTLR7によって認識される他のモチーフが存在している可能性がある。本発明者らは近年、5’pppおよびステムループを含有するRNAアプタマーによるトランスフェクションが、ヒトメラノーマ細胞における細胞死およびIFN−β発現をRIG−IおよびIPS−I依存的に誘導することを見出した。28 これらのRNAリガンドの構造および配列情報を用いて、本発明者らは先ず、5’ppp、AUおよびGUモチーフならびに様々な長さおよび数のステムループを含有するssRNAを設計して、ヒト癌細胞におけるPRR媒介性免疫原性細胞死およびI型IFN発現の増強に最適なRNA構造を決定した(図1Aおよび表1)。RNAリガンドの安定性および細胞半減期を増加させるために、本発明者らは、2’フルオロ(2’F)ピリミジンをRNAに組み込んだ。これらのRNAは、免疫原性癌細胞殺滅RNA(Immunogenic Cancer cell−killing RNA)(ICR)と呼ばれる。
ICR2およびICR4は、ヒトおよびマウス癌細胞および自然免疫細胞において炎症促進性サイトカインおよびIFN−βの発現を差次的に誘導した
本発明者らは次に、ICR2およびICR4が、メラノーマ細胞以外の種々のタイプの癌細胞において細胞傷害性およびIFN−β発現を差次的に誘導するかどうかを問うた。ICR2およびICR4は両方とも、ヒト前立腺癌細胞(DU−145)およびヒト膵臓癌細胞(PANC−1およびBxPC3)の増殖の70%を超える減少を誘導した。ICR2は、これらの細胞におけるIFN−β発現のICR4より2倍以上高い増加を誘導した(図2F〜2G)。ICR2およびICR4によるIFN−β発現の差次的誘導はまた、ヒトPBMCおよびDCを含む自然免疫細胞でも観察された(図2B〜2C)。IFN−βに加えて、ヒトDCにおける炎症促進性サイトカイン、例えば、腫瘍壊死因子(TNF)αおよびインターロイキン(IL)−6の発現は、ICR2よりICR4によって有意に低く誘導された(図2D)。興味深いことに、ICR2によるトランスフェクションは、ヒト癌細胞およびDCにおいてpolyI:Cによるトランスフェクションより有意に高いIFN−β発現を誘導したが、ICR2によるトランスフェクションは、polyI:CによるトランスフェクションよりTNFαおよびIL−6の有意に低い発現を誘導した(図2A、2C、および2D)。癌細胞とは対照的に、ICR2およびICR4は、ヒトPBMCにおいて細胞傷害性を誘導しなかった(図2E)。驚くべきことに、ICR2は、マウス癌細胞において細胞傷害性もIFN−β、TNFαおよびIL−6の発現も誘導しなかった。ICR4は、マウスメラノーマ細胞およびマウス膵臓癌細胞において細胞傷害性およびIFN−β発現を誘導したが、細胞傷害性効果は、ヒト対応物と比べてマウス癌細胞ではるかに低かった(48.11±5.365%(B16)vs 92.7075±1.223%(WM266−4);41.59±7.809%(PANC−02)vs 88.39±4.470%(PANC−1)(図2F〜2Hおよび2I〜2L)。
ICR2は遅発性IFN依存性細胞死を誘導し、一方ICR4は急性IFN非依存性細胞死を誘導した
本発明者らは次に、ヒト癌細胞においてICR2およびICR4によって誘導される細胞傷害性の機構を解明した。アネキシンV単一陽性細胞は早期アポトーシスを表し、一方、アネキシンVおよび7−AAD二重陽性細胞は一次および二次壊死細胞である。29 早期アポトーシスは、ICR4またはpolyI:Cによるトランスフェクション後4時間時点で現れ、早期アポトーシスならびに一次および二次壊死は両方とも、培養中これらの細胞において徐々に増加した(図3A〜3G)。ICR2をトランスフェクトした細胞では、有意な細胞死は4時間時点で現れず、ほんのわずかな早期アポトーシスおよび壊死が24時間時点で現れた。興味深いことに、ICR2をトランスフェクトした細胞は、48時間時点で早期アポトーシス事象よりはるかに多くの壊死事象を示した(図3A〜3E)。T7 RNAポリメラーゼは、RNA依存性RNAポリメラーゼ活性を有し、T7 RNAポリメラーゼ誘導IVTは、非鋳型自己相補的産物を形成する可能性があることが示されている。23 本発明者らは、T7 RNAポリメラーゼ誘導IVTによって産生したICR2が、予想された長さのICR2 RNAおよび予想より長い長さのICR2 IVT産物の両方を含有することを観察した(図3I)。より長い長さのICR2 IVT産物によるトランスフェクションは、トランスフェクション後24時間時点で顕著な細胞死を誘導した(図3J〜3K)。IVT副産物によって誘導される非特異的細胞死を回避するために、予想された長さのICRをポリアクリルアミドゲル電気泳動によって精製した。細胞死とは異なり、ヒトメラノーマ細胞によるIFN−β産生は、ICR2、ICR4またはpolyI:Cによるトランスフェクション後4時間時点で観察されなかった。IFN−βは、トランスフェクション後24時間および48時間時点で継続的に検出した。ICR2をトランスフェクトした細胞は、ICR4をトランスフェクトした細胞より8〜10倍高い量のIFN−βを産生した(図3H)。IFN−βは、カスパーゼ依存性アポトーシス30およびネクロトーシスと呼ばれるプログラム壊死31を含む複数の機構を介した細胞死を誘導することが知られている。故に、本発明者らは、ICR2はIFN依存性癌細胞死を誘導し、一方ICR4はIFN非依存性癌細胞死を誘導すると推測した。ICR2およびICR4によるIFN依存性または非依存性細胞死の機構をさらに解明するために、ヒトメラノーマ細胞にICR2またはICR4のどちらかをトランスフェクトし、その後、ワクシニアウイルスコードインターフェロンαおよびβデコイ受容体B18Rで処理した。B18RはICR2およびIFN−β誘導細胞死を有意に阻害したが、ICR4誘導細胞死は有意に阻害しなかった(図3F〜3H)。このデータは、ICR2がIFN依存的に細胞死を少なくとも一部誘導し、一方ICR4はIFN非依存的にアポトーシスを誘導することを示唆している。
ICR2およびICR4は、ヒト癌細胞における異なる細胞死機構をトリガーした
本発明者らは次に、ICR2およびICR4で処理したヒト癌細胞における細胞死機構およびシグナル伝達経路を調べた。Z−VAD−fmkはパン−カスパーゼ阻害剤であり、故にアポトーシス阻害剤と見なされている。ネクロスタチン−1(Nec−1)は、受容体相互作用セリン/スレオニンタンパク質キナーゼ1(RIP1)の阻害剤であり、ネクロトーシス阻害剤として一般に使用されている。ICR4によって誘導される細胞死は、Nec−1よりz−VAD−fmkによって阻害され、一方ICR2については、細胞死はz−VAD−fmkよりNec−1によって阻害されることから、逆が当てはまる(図4A)。z−VAD−fmkおよびNec−1の両方による同時処理は、z−VAD−fmkまたはNec−1のどちらかによる単一治療より癌細胞死を大幅に阻害した(図4A)。これらのデータは、ICR2誘導細胞死はカスパーゼよりはるかにRIP1に依存性であり、一方、ICR4誘導細胞死はRIP1よりカスパーゼに依存性であることを示している。この結果と一致して、ICR4で処理したメラノーマ細胞における切断カスパーゼ3および7の発現レベルは、ICR2で処理した細胞よりはるかに高いことが見出された(図4B)。対照的に、ICR2で処理した細胞は、ICR4で処理した細胞よりミトコンドリアに移行したRIP1が有意に多かった(図4C)。興味深いことに、ICR2およびICR4は両方とも、ヒトメラノーマ細胞において抗アポトーシスタンパク質X連鎖アポトーシス阻害剤(anti−apoptotic protein X−linked inhibitor of apoptosis)(XIAP)を有意に下方制御し、アポトーシス促進性タンパク質TNF関連アポトーシス誘導リガンド(TNF−related apoptosis−inducing ligand)(TRAIL)を上方制御した(図4B)。これらの観察は、ICR2およびICR4は両方とも、XIAPの下方制御およびTRAILの上方制御によってヒト癌細胞をプログラム細胞死に対して感作させることを示唆している。
ICR2およびICR4で処理した癌細胞におけるNF−κBの差次的な活性化
ICR2で処理した細胞は、ICR4で処理した細胞よりはるかに多くのIFN−βおよび炎症促進性サイトカインを産生した(図2A〜2D)。本発明者らは、ICR2およびICR4が、それぞれ炎症性サイトカインおよびIFNの発現をもたらすNF−kBおよびIRFシグナル伝達経路を差次的に活性化すると推測した。NF−κBは、ICR2をトランスフェクトした細胞の核画分で高度に検出されたが、ICR4をトランスフェクトした細胞の核画分ではわずかに検出されたのみであり、一方リン酸化IRF3は、ICR2またはICR4のどちらかをトランスフェクトした細胞で同じように検出された(図4C)。IRF3の活性化は、抗ウイルス応答において、アポトーシスの誘導およびI型IFN遺伝子の発現を含む二重の役割を有することが知られている。32 IRF3は、ヒトメラノーマ細胞においてICR2およびICR4によって同様に活性化されたが、IRF3は、ICR2およびICR4をトランスフェクトした細胞において異なる役割を果たしている可能性がある。ICR2およびICR4をトランスフェクトした細胞におけるIRF3の機能的活性化を解明するために、さらなる研究が必要とされる。
ICR2およびICR4によるRNA感知PRRの活性化
本発明者らの最近の研究は、5’pppおよびステムループを含有する2’F修飾RNAアプタマーが、ヒトメラノーマおよび肝細胞癌細胞によるプログラム細胞死およびIFN−β産生をRIG−I依存的に誘導することを示した。28 ICR2およびICR4がヒト癌細胞のRIG−I依存性細胞死を誘導したかどうかに答えるために、本発明者らは、Huh7.0、RIG−I野生型ヒト肝細胞癌細胞株、およびHuh7.5、RIG−I変異体Huh7.0細胞株を、ICR2またはICR4のどちらかで処理した。ICR4は、Huh7.0細胞に対して細胞傷害性であったが、Huh7.5に対しては細胞傷害性でなかった(図5A)。興味深いことに、ICR2は、Huh7.0およびHuh7.5において類似した細胞傷害性を誘導した。さらに、ICR4は、siRNA媒介RIG−Iノックアウトを有するヒトメラノーマ細胞において細胞傷害性を有意に低減したが、ICR2では低減せず、一方ICR4およびICR2は、PKRおよびMDA5を含む他の細胞質RNA感知PRRのノックアウトを有するヒトメラノーマ細胞において類似したレベルの細胞傷害性をもたらした(図5B〜5C)。さらに、ヒトTLR3およびTLR7レポーター細胞は、ICR2およびICR4によって刺激されなかった(図5D)。細菌性アルカリホスファターゼ(BAP)誘導脱リン酸化によってICR2およびICR4の5’pppを除去すると、ヒトメラノーマ細胞による細胞死およびIFN−β産生を有意に妨げた(図5E〜5F)。興味深いことに、2’OHピリミジンを組み込んだICR4は、2’Fピリミジンを組み込んだICR4と比べて細胞傷害性を有意に減少させたが、IFN−β誘導活性は減少させず、一方2’OHピリミジンを組み込んだICR2は、細胞傷害性およびIFN−β誘導活性の両方を完全に抑制した(図5G〜5H)。故に、ICR4は、抗癌応答をRIG−I依存的だがPKRおよびMDA5非依存的に誘導した。対照的に、ICR2誘導抗癌応答は、RIG−I、MDA5またはPKRの喪失によって影響を受けないようであった。
ICR2およびICR4は、カルレティキュリンおよびHMGB1の移行を誘導した
特定のタイプの抗癌薬剤、例えば、ドキソルビシンは、DAMPの放出、「eat−me」シグナル(例えば、小胞体常在タンパク質カルレティキュリン)の表面発現、ならびにDCおよびNK細胞などの自然免疫細胞の活性化を特徴とする免疫原性細胞死を誘導することができる。33 この免疫原性細胞死は、抗腫瘍免疫応答の誘導による癌療法の全体的な治療転帰に大きく寄与する。ICR2およびICR4は両方とも、カルレティキュリンの表面移行をわずかに誘導した(図6A)。表面カルレティキュリンは、DCによるドキソルビシン処理癌細胞の食作用を促進することが示されている。34 DCによるICR2およびICR4処理癌細胞の食作用を研究するために、ヒト未成熟DCを、図6Bに示されているようにICR2およびICR4によって殺滅されたヒトメラノーマ細胞とインキュベートした。これらの死んだ/死につつある癌細胞は、ドキソルビシンによって殺滅された細胞と同じくらい有効にDCに取り込まれた。核から細胞質へのHMGB1の移行もまた、ICR2およびICR4で処理したヒトメラノーマ細胞において観察された(図6H)。興味深いことに、ICR2による処理は、ICR4またはドキソルビシンによる処理より有意に高いレベル、およびpolyI:Cによる処理と類似した高レベルの、ヒトメラノーマ細胞からのHMGB1放出を誘導した(図6C)。ICR4誘導細胞死によって放出されたDAMPは、ドキソルビシン誘導細胞死によって放出されたDAMPよりTLR4の刺激において有意に強力であったにもかかわらず、HMGB1放出の増加と一致して、ICR2誘導メラノーマ細胞死によって生成されたDAMPは、ICR4誘導細胞死によって生成されたDAMPより、HMGB1認識TLR4の有意に多い活性化を誘導した(図6D)。
ICR2およびICR4は、自然免疫刺激性および凝固促進性DAMPのヒト癌細胞からの放出を誘導した
ICR2およびICR4で処理した癌細胞から放出されたDAMPが、他のTLRを刺激するかどうかを解明するために、本発明者らは、死んだ/死につつあるヒトメラノーマ細胞から放出されたDAMPを回収し、TLR2、TLR3およびTLR9レポーター細胞とインキュベートした。これらのTLRレポーター細胞の活性化のレベルは、ICR2処理細胞から放出されたDAMPとpolyI:C処理細胞から放出されたDAMPの間で有意に異ならなかった。しかし、ICR2処理細胞から放出されたDAMPは、ICR4処理細胞から放出されたDAMPよりTLRレポーター細胞を強力に活性化した。ICR4処理細胞は、ドキソルビシン処理細胞より有意に高いTLR3活性化を誘導し(図6E)、一方ICR4処理細胞は、ドキソルビシン処理細胞より有意に少ないTLR2およびTLR9活性化を誘導した(図6F〜6G)。ICR2およびICR4処理癌細胞から放出されたこれらのDAMPは、未成熟ヒトDCを刺激してサイトカインを産生した(図6I)。免疫刺激活性に加えて、DAMPは止血および血栓症を促進することが知られており35、抗癌療法後の腫瘍再発および転移において重要な役割を果たしている可能性がある。36 興味深いことに、ICR2およびpolyI:C処理ヒトメラノーマ細胞から放出されたDAMPは、モックトランスフェクト細胞から放出されたDAMPと比べて血漿の凝固を活性化し、一方、ICR4およびドキソルビシン処理メラノーマ細胞から放出されたDAMPは、血漿凝固時間を有意に変化させなかった(図6J)。これらのデータは、ICR4処理癌細胞が、ICR2処理細胞より低い量の自然免疫刺激因子およびプロコアグラントを放出したことを示唆した。
ICR2およびICR4によるインビボトランスフェクションは、メラノーマ−保有マウスにおける生存を延長した
最後に、本発明者らは、ヒトメラノーマ異種移植モデルにおいてICR2およびICR4のインビボ治療有効性を評価した。ICR2またはICR4による反復腫瘍内治療は、腫瘍増殖を阻害し(図7A)、皮下ヒトメラノーマ異種移植片を有するヌードマウスにおける生存を有意に増強した(図7B)。ICR2およびゴールドスタンダートのPRR刺激RNAアゴニストpolyI:Cと比べて、ICR4の治療効果の低減傾向が観察された。しかし、ICR2、ICR4およびpolyI:Cの差は、統計的に有意ではなかった。B16マウスメラノーマを有する免疫応答性マウスにおいて、ICR4治療は、polyI:C治療より治療効果が有意に少ないようであった(図7C)。
Claims (45)
- 5’−三リン酸、2’−フルオロ修飾ピリミジン非直鎖状RNAを含む、細胞死を誘導することができる組成物であって、
RNAが、
(a)少なくとも8個のヌクレオチド対合の完全または部分的なハイブリダイゼーションから形成される第1のステムループと、
(b)少なくとも8個のヌクレオチド対合の完全または部分的なハイブリダイゼーションから形成される第2のステムループと、
(c)第1のステムループと第2のステムループの間のスペーサーと
を含む、組成物。 - RNAが、ICR2(配列番号8)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項1に記載の組成物。
- RNAが、ICR4(配列番号15)、ICR4A(配列番号16)、ICR5X(配列番号17)、またはICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項2に記載の組成物。
- RNAが、ICR4(配列番号15)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項3に記載の組成物。
- RNAが、ICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項3に記載の組成物。
- RNAが、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項3に記載の組成物。
- RNAが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項3に記載の組成物。
- RNAが、
ICR5X(配列番号17)またはICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドと、
第1のオリゴヌクレオチドの一部に完全または部分的にハイブリダイズされた第2のオリゴヌクレオチドと
を含む、請求項3に記載の組成物。 - 第1のオリゴヌクレオチドが、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含み、
第2のオリゴヌクレオチドが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、
請求項8に記載の組成物。 - 第1のステムループが、ICR2(配列番号8)から本質的になるオリゴヌクレオチドから形成される、請求項2から9までのいずれか1項に記載の組成物。
- RNAが、
(i)ICR4(配列番号15)またはICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するssRNAオリゴヌクレオチド、または
(ii)ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第2のオリゴヌクレオチドに完全または部分的にハイブリダイズされた、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドを含むdsRNA
から本質的になる、請求項1に記載の組成物。 - RNAが、ICR4(配列番号15)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから本質的になる、請求項11に記載の組成物。
- RNAが、ICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから本質的になる、請求項11に記載の組成物。
- RNAが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第2のオリゴヌクレオチドに完全または部分的にハイブリダイズされた、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドを含むdsRNAから本質的になる、請求項11に記載の組成物。
- 第1のステムループが、その相補体とハイブリダイズして第1のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含み、
第2のステムループが、その相補体とハイブリダイズして第2のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドまたは3’末端ヌクレオチドを含む、
請求項1から14までのいずれか1項に記載の組成物。 - 第1のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第1のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含み、
第2のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第2のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドまたは3’末端ヌクレオチドを含む、
請求項15に記載の組成物。 - 第1のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第1のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含み、
第2のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第2のステムループを形成することができる3’末端ヌクレオチドを含む、
請求項15に記載の組成物。 - 第1のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第1のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含み、
第2のステムループが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズして第2のステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含む、
請求項15に記載の組成物。 - スペーサーがRNAの一本鎖セグメントを含む、請求項1から18までのいずれか1項に記載の組成物。
- スペーサーが、少なくとも8個のヌクレオチド対合の完全または部分的なハイブリダイゼーションから形成される第3のステムループを含む、請求項1から19までのいずれか1項に記載の組成物。
- スペーサーが、RNAの二本鎖セグメントを含む、請求項1から20までのいずれか1項に記載の組成物。
- ICR2(配列番号8)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから形成されるステムループを含む2’−フルオロ修飾ピリミジン非直鎖状RNAを含む、細胞死を誘導することができる組成物であって、オリゴヌクレオチドが、その相補的ヌクレオチドとハイブリダイズしてステムループを形成することができる5’−三リン酸修飾末端ヌクレオチドを含む、組成物。
- RNAが、少なくとも8個のヌクレオチド対合の完全または部分的なハイブリダイゼーションから形成される第2のステムループと、ICR2(配列番号8)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから形成されるステムループと第2のステムループの間のスペーサーとをさらに含む、請求項22に記載の組成物。
- RNAが、ICR4(配列番号15)、ICR4A(配列番号16)、ICR5X(配列番号17)、またはICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項23に記載の組成物。
- RNAが、ICR4(配列番号15)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- RNAが、ICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- RNAが、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- RNAが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項24に記載の組成物。
- RNAが、
ICR5X(配列番号17)またはICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドと、
第1のオリゴヌクレオチドの一部に完全または部分的にハイブリダイズされた第2のオリゴヌクレオチドと
を含む、請求項24に記載の組成物。 - 第1のオリゴヌクレオチドが、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含み、
第2のオリゴヌクレオチドが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、
請求項29に記載の組成物。 - ステムループが、ICR2(配列番号8)から本質的になるオリゴヌクレオチドから形成される、請求項23から30までのいずれか1項に記載の組成物。
- RNAが、
(i)ICR4(配列番号15)もしくはICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するssRNAオリゴヌクレオチド、または
(ii)ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第2のオリゴヌクレオチドに完全または部分的にハイブリダイズされた、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドを含むdsRNA
から本質的になる、請求項23に記載の組成物。 - RNAが、ICR4(配列番号15)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから本質的になる、請求項32に記載の組成物。
- RNAが、ICR4A(配列番号16)に対して少なくとも80%の配列同一性を有するオリゴヌクレオチドから本質的になる、請求項32に記載の組成物。
- RNAが、ICR5Y(配列番号18)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第2のオリゴヌクレオチドに完全または部分的にハイブリダイズされた、ICR5X(配列番号17)に対して少なくとも80%の配列同一性を有する第1のオリゴヌクレオチドを含むdsRNAから本質的になる、請求項32に記載の組成物。
- 治療剤をさらに含む、請求項1から35までのいずれか1項に記載の組成物。
- 治療剤が、化学療法剤、抗癌生物製剤、免疫療法剤、およびそれらの任意の組み合わせから選択される群のメンバーを含む、請求項36に記載の組成物。
- 細胞質送達組成物をさらに含む、請求項1から37までのいずれか1項に記載の組成物。
- 細胞質送達組成物が、リポソーム、合成ポリマー、細胞透過性ペプチド、ナノ粒子、ウイルス粒子、エレクトロポレーション緩衝液、またはヌクレオフェクション試薬、およびそれらの任意の組み合わせからなる群のメンバーを含む、請求項38に記載の組成物。
- 請求項1から39までのいずれか1項に記載の組成物の治療有効量、および1つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む、医薬組成物。
- 細胞の増殖を阻害する、または細胞の死を誘導するのに有効な量で、請求項1から40までのいずれか1項に記載の組成物と細胞を接触させるステップを含む、細胞の増殖を阻害する、または細胞死を誘導する方法。
- 請求項1から41までのいずれか1項に記載の組成物を、細胞の増殖を阻害する、または細胞の死を誘導するのに有効な量で、そのような治療を必要とする対象に投与するステップを含む、対象における細胞の増殖を阻害する、または細胞死を誘導する方法。
- 細胞が癌細胞を含む、請求項41または請求項42に記載の方法。
- 癌細胞が、メラノーマ、脳癌、前立腺癌、乳癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、白血病、リンパ腫、または卵巣癌細胞を含む、請求項43に記載の方法。
- 組成物が、少なくとも複数の細胞の細胞質に送達される、請求項41から44のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762480780P | 2017-04-03 | 2017-04-03 | |
US62/480,780 | 2017-04-03 | ||
PCT/US2018/025884 WO2018187328A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-04-03 | Compositions and methods for differential induction of cell death and interferon expression |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020515625A true JP2020515625A (ja) | 2020-05-28 |
JP2020515625A5 JP2020515625A5 (ja) | 2021-05-13 |
Family
ID=63713525
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019554667A Pending JP2020515625A (ja) | 2017-04-03 | 2018-04-03 | 細胞死およびインターフェロン発現の差次的誘導のための組成物および方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11613756B2 (ja) |
EP (1) | EP3607063A4 (ja) |
JP (1) | JP2020515625A (ja) |
CN (1) | CN110709515A (ja) |
CA (1) | CA3059101A1 (ja) |
IL (1) | IL269760A (ja) |
MX (1) | MX2019011824A (ja) |
WO (1) | WO2018187328A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2019183415A1 (en) | 2018-03-21 | 2019-09-26 | Duke University | Compositions and methods for cellular reprogramming |
US20220168331A1 (en) * | 2019-02-18 | 2022-06-02 | Duke University | PRR-Activating and MicroRNA-Inhibiting Molecules and Methods of Using Same |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014169049A1 (en) * | 2013-04-09 | 2014-10-16 | Duke University | 2' fluoro-modified rnas as immunostimulators |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2609788A1 (en) | 2005-04-26 | 2006-11-02 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity |
PT2207787E (pt) | 2007-11-06 | 2015-02-17 | Adiutide Pharmaceuticals Gmbh | Análogos de oligorribonucleótidos imunoestimulantes contendo frações de oligofosfato modificadas |
WO2010028079A2 (en) | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Synthetic methods and derivatives of triphosphate oligonucleotides |
US9233997B2 (en) * | 2010-08-26 | 2016-01-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of prolyl hydroxylase domain 2 (PHD2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
CA3205596A1 (en) * | 2011-07-18 | 2013-01-24 | University Of Kentucky Research Foundation | Protection of cells from alu-rna-induced degeneration and inhibitors for protecting cells |
EP2712870A1 (en) | 2012-09-27 | 2014-04-02 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Novel RIG-I ligands and methods for producing them |
WO2014066915A2 (en) | 2012-10-26 | 2014-05-01 | Smith Larry J | Methods and compositions to produce ss-rnai activity with enhanced potency |
WO2016011324A2 (en) * | 2014-07-18 | 2016-01-21 | Oregon Health & Science University | 5'-triphosphate oligoribonucleotides |
DE102015008536A1 (de) * | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Diskontinuierliche Oligonukleotid-Liganden |
-
2018
- 2018-04-03 JP JP2019554667A patent/JP2020515625A/ja active Pending
- 2018-04-03 WO PCT/US2018/025884 patent/WO2018187328A1/en unknown
- 2018-04-03 CA CA3059101A patent/CA3059101A1/en active Pending
- 2018-04-03 EP EP18780963.7A patent/EP3607063A4/en not_active Withdrawn
- 2018-04-03 MX MX2019011824A patent/MX2019011824A/es unknown
- 2018-04-03 CN CN201880036523.8A patent/CN110709515A/zh active Pending
- 2018-04-03 US US16/499,991 patent/US11613756B2/en active Active
-
2019
- 2019-10-02 IL IL26976019A patent/IL269760A/en unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014169049A1 (en) * | 2013-04-09 | 2014-10-16 | Duke University | 2' fluoro-modified rnas as immunostimulators |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"Differential Induction of Immunogenic Cell Death and Interferon Expression in Cancer Cells by Struct", MOL. THER., JPN6022011469, March 2017 (2017-03-01), ISSN: 0004924303 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3607063A1 (en) | 2020-02-12 |
US20200109404A1 (en) | 2020-04-09 |
WO2018187328A1 (en) | 2018-10-11 |
CA3059101A1 (en) | 2018-10-11 |
IL269760A (en) | 2019-11-28 |
US11613756B2 (en) | 2023-03-28 |
CN110709515A (zh) | 2020-01-17 |
MX2019011824A (es) | 2020-01-09 |
EP3607063A4 (en) | 2021-01-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10350158B2 (en) | 2′ fluoro-modified RNAs as immunostimulators | |
JP6885867B2 (ja) | 組合せ腫瘍免疫療法 | |
Lee et al. | 2′ Fluoro modification differentially modulates the ability of RNAs to activate pattern recognition receptors | |
CN107412260B (zh) | cGAS-STING通路激活剂及其用途 | |
Munakata et al. | Lipid nanoparticles of Type-A CpG D35 suppress tumor growth by changing tumor immune-microenvironment and activate CD8 T cells in mice | |
JP7366057B2 (ja) | 合成rig-i様受容体アゴニスト | |
CA2987237A1 (en) | Intrapulmonary administration of polynucleotide toll-like receptor 9 agonists for treating cancer of the lung | |
JP7321489B2 (ja) | がん免疫アジュバント | |
WO2012014945A1 (ja) | アジュバント活性を有する新規核酸およびその利用 | |
ES2581480T3 (es) | Compuestos inhibidores de crecimiento tumoral y métodos de uso de los mismos | |
Zhao et al. | Toll‐like receptor 3 agonist poly I: C reinforces the potency of cytotoxic chemotherapy via the TLR3‐UNC93B1‐IFN‐β signaling axis in paclitaxel‐resistant colon cancer | |
JP2020515625A (ja) | 細胞死およびインターフェロン発現の差次的誘導のための組成物および方法 | |
WO2021231771A2 (en) | CANCER TREATMENT USING siRNA TO MODULATE EXPRESSION OF PRDM2/RIZ PROTEIN | |
Cho et al. | TLR5 activation by flagellin induces doxorubicin resistance via interleukin-6 (IL-6) expression in two multiple myeloma cells | |
US20110182880A1 (en) | Combination Therapies Against Cancer | |
Braun et al. | In vivo silencing of A20 via TLR9-mediated targeted SiRNA delivery potentiates antitumor immune response | |
WO2021235517A1 (ja) | 新規t細胞活性化剤 | |
CA3214965A1 (en) | Targeting multiple t cell types using spherical nucleic acid vaccine architecture | |
TW202245808A (zh) | 用於治療癌症之治療性rna | |
US20220370490A1 (en) | Synergistic immunostimulation through the dual activation of tlr3/9 with spherical nucleic acids | |
TWI763994B (zh) | 包含lrit2抑制劑作為活性成分之用於預防或治療癌症的藥學組成物 | |
Fernández Rodríguez | Targeting dendritic cells to improve antitumor immunity | |
Fu et al. | Feedback activation of CD73-Adenosine axis attenuates the antitumor immunity of STING pathway | |
WO2023240225A1 (en) | Constitutively active polymeric sting mimics for antitumor immunity | |
WO2021141862A1 (en) | Methods of modulating sting pathway activation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210402 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210402 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220323 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220621 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220823 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20221121 |