JP2020014452A - 濃縮発酵乳の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】筋肉合成促進のための濃縮発酵乳の製造方法等の提供。【解決手段】無脂乳固形分含量が１〜３０質量％に調製された調製発酵乳ミックスを、乳酸菌の存在下で発酵させることにより発酵乳を得て、その発酵乳を濃縮する濃縮発酵乳の製造方法を用いる。【選択図】なし
Description
本発明は、調製された調製発酵乳ミックスを、乳酸菌の存在下で発酵させることにより発酵乳を得て、その発酵乳を濃縮する濃縮発酵乳の製造方法に関する。
サルコペニアなどに伴う筋肉の低下は、近年注目を集めている。筋肉の萎縮は、要介護および要支援のリスクを増加させ、高齢者のＱＯＬや健康寿命を低下させる大きな要因といわれている。従って、サルコペニアなどに伴う筋肉の低下の予防は超高齢社会を迎えた日本の大きな課題である。
骨格筋などのたんぱく質合成は、一定レベルまでは摂取するたんぱく質量依存的に増大することが知られているが（非特許文献１参照）、例えば、食の細い高齢者などでは大量に摂取できないため、少ない量でより多くのたんぱく質を摂取できる食品が求められている。
Yang Y et al. Br J Nutr 2012, 108, 1780-8, Daniel R Moore et al. Am J Clin Nutr 2009, 89, 161-8
少ない量でより多くのたんぱく質を摂取できる発酵乳を得るために、例えば、遠心分離濃縮を行うと、遊離のアミノ酸やペプチドなどは水溶性低分子であるものが多く、それらが減少してしまうことから筋肉の合成促進作用が低下してしまう懸念があった。
しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、特定の製造方法により製造した濃縮発酵乳を対象へ摂取させることにより、対象の筋肉の合成を顕著に促進できることを見出した。また、本発明者らは、驚くべきことに、遊離必須アミノ酸の割合が低い濃縮発酵乳を対象へ摂取させることにより、対象の筋肉の合成を顕著に促進できることも見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。
本発明は、筋肉の合成を促進できる濃縮発酵乳の製造方法または濃縮発酵乳などを提供することを一つの目的とする。
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］無脂乳固形分含量が１〜３０質量％に調製された調製発酵乳ミックスを、乳酸菌の存在下で発酵させることにより発酵乳を得て、その発酵乳を濃縮する、濃縮発酵乳の製造方法。
［２］下記の工程を含んでなる、濃縮発酵乳の製造方法：
（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程、ここで、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分含量が１〜３０質量％であり、
（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程、
（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程、および
（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程。
［３］調製された調製発酵乳ミックス中のたんぱく質量が０．５〜１１質量％である、［１］または［２］に記載の製造方法。
［４］乳酸菌または乳酸菌スターターが、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricusおよび／またはStreptococcus thermophilusである、［１］〜［３］のいずれかに記載の製造方法。
［５］発酵乳を濃縮する工程が、発酵乳を遠心分離により濃縮する工程である、［１］〜［４］のいずれかに記載の製造方法。
［６］製造された濃縮発酵乳が筋肉合成促進用である、［１］〜［５］のいずれかに記載の製造方法。
［７］［１］〜［６］のいずれかに記載の製造方法により製造された、濃縮発酵乳。
［８］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
［９］たんぱく質総量に対する、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量以下である、［８］に記載の筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
［１０］［８］または［９］に記載の濃縮発酵乳を含む、筋肉合成促進用食品。
［１１］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳。
［１２］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳。
［１３］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、筋肉合成促進方法。
［１４］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸量増加方法。
［１５］対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、［１４］に記載の血中アミノ酸量増加方法。
［１６］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
［１７］対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、［１６］に記載の血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
［１］無脂乳固形分含量が１〜３０質量％に調製された調製発酵乳ミックスを、乳酸菌の存在下で発酵させることにより発酵乳を得て、その発酵乳を濃縮する、濃縮発酵乳の製造方法。
［２］下記の工程を含んでなる、濃縮発酵乳の製造方法：
（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程、ここで、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分含量が１〜３０質量％であり、
（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程、
（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程、および
（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程。
［３］調製された調製発酵乳ミックス中のたんぱく質量が０．５〜１１質量％である、［１］または［２］に記載の製造方法。
［４］乳酸菌または乳酸菌スターターが、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricusおよび／またはStreptococcus thermophilusである、［１］〜［３］のいずれかに記載の製造方法。
［５］発酵乳を濃縮する工程が、発酵乳を遠心分離により濃縮する工程である、［１］〜［４］のいずれかに記載の製造方法。
［６］製造された濃縮発酵乳が筋肉合成促進用である、［１］〜［５］のいずれかに記載の製造方法。
［７］［１］〜［６］のいずれかに記載の製造方法により製造された、濃縮発酵乳。
［８］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
［９］たんぱく質総量に対する、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量以下である、［８］に記載の筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
［１０］［８］または［９］に記載の濃縮発酵乳を含む、筋肉合成促進用食品。
［１１］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳。
［１２］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳。
［１３］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、筋肉合成促進方法。
［１４］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸量増加方法。
［１５］対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、［１４］に記載の血中アミノ酸量増加方法。
［１６］たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
［１７］対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、［１６］に記載の血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
本発明の製造方法を用いることにより、筋肉合成促進のための濃縮発酵乳を提供できる点で有利である。
［微生物の寄託］
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ＯＬＬ２０５０１３株は、２０１７年２月３日付け（原寄託日）で独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１の下でブダペスト条約に基づき国際寄託されている。
Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ＯＬＬ２０５０１３株は、２０１７年２月３日付け（原寄託日）で独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２２号室）に、受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１の下でブダペスト条約に基づき国際寄託されている。
Streptococcus thermophilus ＯＬＳ３２９０株は、２００４年１月１９日付け（原寄託日）で独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８ １２０号室）に、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８の下でブダペスト条約に基づき国際寄託されている。なお、本寄託菌株は２０１３年９月３０日（発行日）（移管請求は２０１３年９月６日に受領された）に、国内寄託（原寄託）からブダペスト条約に基づく国際寄託に移管された。
［発酵乳の製造方法］
本発明において、「発酵乳」とは、例えば、日本の食品衛生法に基づく省令である「乳及び乳製品の成分規格等に関する省令」（乳等省令、昭和２６年１２月２７日厚生省令第５２号）で定義されている「発酵乳」等が挙げられる。この省令において、「発酵乳」は、「乳又はこれと同等以上の無脂乳固形分を含む乳等を乳酸菌又は酵母で発酵させ、糊状又は液状にしたもの又はこれらを凍結したものをいう」と定義されている。したがって、本発明において、「発酵乳」には、例えば、ヨーグルト等の固形状発酵乳（セットタイプヨーグルト）、糊状発酵乳（ソフトタイプヨーグルト）、液状発酵乳（ドリンクタイプヨーグルト）等が含まれる。
本発明において、「発酵乳」とは、例えば、日本の食品衛生法に基づく省令である「乳及び乳製品の成分規格等に関する省令」（乳等省令、昭和２６年１２月２７日厚生省令第５２号）で定義されている「発酵乳」等が挙げられる。この省令において、「発酵乳」は、「乳又はこれと同等以上の無脂乳固形分を含む乳等を乳酸菌又は酵母で発酵させ、糊状又は液状にしたもの又はこれらを凍結したものをいう」と定義されている。したがって、本発明において、「発酵乳」には、例えば、ヨーグルト等の固形状発酵乳（セットタイプヨーグルト）、糊状発酵乳（ソフトタイプヨーグルト）、液状発酵乳（ドリンクタイプヨーグルト）等が含まれる。
本発明において、「発酵乳ミックス」とは、発酵乳の原材料の混合物をいうものとする。発酵乳ミックスは、少なくとも原料乳を含む。
本発明において、原料乳としては、牛乳、殺菌乳、脱脂乳、全脂粉乳、脱脂粉乳、全脂濃縮乳、脱脂濃縮乳、クリーム、バター、バターミルク、乳清、乳たんぱく質濃縮物（ＭＰＣ）、乳清たんぱく質濃縮物（ＷＰＣ）、乳清たんぱく質単離物（ＷＰＩ）、α−ラクトアルブミン（α−Ｌａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）等が挙げられる。
本発明において、発酵乳ミックスを調製するための他の材料は、当技術分野において既知の任意の材料を使用できるが、例えば、砂糖、甘味料、糖類、香料、水等が挙げられる。また、必要に応じて、ゼラチン、寒天、ペクチン、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等のゲル化剤、増粘剤、安定剤等を使用してもよい。
本発明の製造方法において、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分（ＳＮＦ）含量は、１〜３０質量％であり、好ましくは５〜２５質量％であり、より好ましくは１０〜２０質量％であり、さらに好ましくは１１〜２０質量％であり、特に好ましくは１２〜１６質量％である。調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分（ＳＮＦ）含量が５〜２５質量％である場合には、さらに筋肉の合成を促進でき、また血中アミノ酸量を増加させることができ、血中アミノ酸濃度の上昇を促進することができる。
本発明の製造方法において、調製された調製発酵乳ミックス中のたんぱく質量は、特に限定されるものではないが、好ましくは０．５〜１１質量％であり、より好ましくは１．５〜９質量％であり、さらに好ましくは３〜７質量％であり、特に好ましくは４〜６質量％である。
本明細書において、たんぱく質には、カゼインたんぱく質と乳清たんぱく質が含まれるものとする。カゼインたんぱく質としては、例えば、α−カゼインや、β−カゼイン等が挙げられ、乳清たんぱく質としては、例えば、α−ラクトアルブミンや、β−ラクトグロブリン、血清アルブミン等が挙げられる。
本発明の一つの態様によれば、下記の工程を含んでなる、濃縮発酵乳の製造方法が提供される：
（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程、ここで、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分含量が１〜３０質量％であり、
（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程、
（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程、および
（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程。
（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程、ここで、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分含量が１〜３０質量％であり、
（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程、
（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程、および
（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程。
本発明の一つの態様によれば、本発明の製造方法は、（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程を含む方法である。調製発酵乳ミックスは、発酵乳ミックスと他の材料とを混合することにより調製できる。混合条件は、特に限定されず、任意に決定すればよい。調製した調製発酵乳ミックスは、必要に応じて、均質化処理に供してもよい。均質化処理の条件は、特に限定されず、任意に決定すればよい。
本発明の製造方法は、（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程を含む方法である。殺菌処理は、特に限定されないが、通常、加熱処理により殺菌する。加熱処理の条件は、調製発酵乳ミックスが熱により過剰に変性しないことを条件として、特に限定されず、当技術分野において通常選択される条件を使用できる。
本発明の製造方法は、（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程を含む方法である。
本発明の製造方法に用いられる乳酸菌スターターとしては、例えば、ラクトバチルス・ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus salivarius subsp. thermophilus）の他に、ラクトバチルス・アシドフィルス（L. acidophilus）、ラクトバチルス・アミロボラス（L. amylovorus）、ラクトバチルス・ブレビス（L. brevis）、ラクトバチルス・ブヒネリ（L. buchneri）、ラクトバチルス・カゼイ（L. casei）、ラクトバチルス・カゼイ・サブスピーシーズ・ラムノーサス（L. casei subsp. rhamnosus）、ラクトバチルス・クリスパタス（L. crispatus）、ラクトバチルス・デルブリュッキー・サブスピーシーズ・ラクティス（L. delbrueckii subsp. lactis）、ラクトバチルス・ファーメンタム（L. fermentum）、ラクトバチルス・ガリナラム（L. gallinarum）、ラクトバチルス・ガセリ（L. gasseri）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（L. helveticus）、ラクトバチルス・ヘルベチカス・サブスピーシーズ・ユーグルティ（L. helveticus subsp. jugurti）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（L. johnsonii）、ラクトバチルス・ケフィア（L. kefir）、ラクトバチルス・オリス（L. oris）、バチルラクトス・パラカゼイ・サブスピーシーズ・パラカゼイ（L. paracasei subsp. paracasei）、ラクトバチルス・パラプランタラム（L. paraplantarum）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）ラクトバチルス・プランタラム（L. plantarum）、ラクトバチルス・ロイテリ（L. reuteri）、ラクトバチルス・サリバリウス（L. salivalius）、ラクトバチルス・ゼアエ（L. zeae）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（B. adolescentis）、ビフィドバクテリウム・アニマーリス（B. animalis）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（B. bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（B. breve）、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム（B. catenulatum）、ビフィドバクテリウム・グロボサム（B. globosum）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（B. infantis）、ビフィドバクテリウム・ラクチス（B. lactis）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（B. longum）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（B. pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・ズイス（B. suis）等、発酵乳の製造に一般的に用いられる乳酸菌や酵母から選ばれる１種又は２種以上を用いることができる。本発明の製造方法に用いられる乳酸菌スターターとしては、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricusおよび／またはStreptococcus thermophilusを用いることが好ましく、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricusとStreptococcus thermophilusとを組み合わせて用いることがより好ましい。さらに好ましくは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）ＯＬＬ２０５０１３株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＯＬＳ３２９０株（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８）の組み合わせを用いることができる。
スターターは、バルクスターターを調製して調製発酵乳ミックスに添加することができ、バルクスターターの添加量は、０．５〜５％とすることができ、１〜３％が好ましい。
バルクスターターは、脱脂粉乳を殺菌後、スターターに使用する菌体を添加し、発酵することにより、調製することができる。この発酵温度は３７〜４７℃が好ましく、４０〜４５℃が特に好ましい。この発酵は、発酵終了時のｐＨが４．０〜４．７となるまで行うことが好ましく、発酵終了時のｐＨが４．２〜４．５となるまで行うことがより好ましい。
本発明の製造方法は、（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程を含む方法である。発酵乳を濃縮する方法としては、特に限定されるものではないが、例えば、ＵＦ（Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｍｂｒａｎｅ）膜を使用するＵＦ膜濃縮法、圧縮によるホエイ排出法、遠心分離法などが挙げられ、これらの中でも遠心分離法により発酵乳を濃縮することが好ましい。
遠心分離法における遠心分離条件は、特に限定されるものではないが、８００Ｇ〜１００００Ｇ、好ましくは３０００Ｇ〜８０００Ｇで、軽液と重液に分離後、軽液を除去して濃縮することにより行うことができる。工業的にはクワルクセパレーター（例えば、GEA Westfalia Separator社製）などが好適に用いられる。重液は目的の商品設計にあわせて適宜、均質化される。脂肪ゼロヨーグルトの場合には、この均質化条件は高圧式ホモジナイザー（例えば三和エンジニアリング社製）を使用した場合、８〜２０ＭＰａ、好ましくは１２〜１７ＭＰａであり、超音波式やポリトロン式ホモジナイザーを利用する場合においても同等の均質化が得られる条件で実施できる。
得られた発酵乳カードは、フィルターによる破砕や均質機による均質化によって、液状発酵乳とすることもできる。
本発明の製造方法の好ましい態様によれば、製造される濃縮発酵乳は筋肉合成促進用濃縮発酵乳であり、好ましくは骨格筋合成促進用濃縮発酵乳である。ここで、「筋肉（骨格筋）合成促進」とは、本発明の筋肉（骨格筋）合成促進用濃縮発酵乳を対象が摂取しない場合と比較して、本発明の筋肉（骨格筋）合成促進用濃縮発酵乳を対象が摂取した場合に僅かでも多く筋肉（骨格筋）の合成がみられれば、筋肉（骨格筋）合成促進効果を有するとする。また、本発明のより好ましい態様によれば、「筋肉（骨格筋）合成促進」とは、同じ乳タンパク質濃度を有する発酵していない乳を摂取した場合と比較して、本発明の発酵乳を摂取した場合の方が、骨格筋合成速度の指標であるＦＳＲ（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｒａｔｅ）が高まった場合に、筋肉（骨格筋）合成促進効果をより顕著に有するとする。骨格筋とは、筋肉の中で骨格に付着し、関節の可動や姿勢制御などの役割を持つものであり、心筋以外の横紋筋を意味する。
本発明の製造方法の別の好ましい態様によれば、製造される濃縮発酵乳は血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳である。また、本発明の製造方法の別の好ましい態様によれば、製造される濃縮発酵乳は血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳である。血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳は、好ましくは血中必須アミノ酸量増加用濃縮発酵乳であり、より好ましくは血中分岐鎖アミノ酸量増加用濃縮発酵乳であり、さらに好ましくは血中ロイシン量増加用濃縮発酵乳である。また、血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳は、好ましくは血中必須アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳であり、より好ましくは血中分岐鎖アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳であり、さらに好ましくは血中ロイシン濃度上昇促進用濃縮発酵乳である。
［発酵乳］
本発明の一つ態様によれば、上記の本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳が提供できる。
本発明の一つ態様によれば、上記の本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳が提供できる。
本発明の一つの態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である筋肉合成促進用濃縮発酵乳（好ましくは、骨格筋合成促進用）が提供できる。遊離必須アミノ酸の種類は特に限定されるものではないが、好ましくは分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ、Branched Chain Amino Acid）であり、より好ましくはロイシンである。ここで、遊離必須アミノ酸とは、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、リジン、およびヒスチジンをいい、分岐鎖アミノ酸とはバリン、ロイシン、イソロイシンをいう。また、ここで、アミノ酸とは、Ｌ−アミノ酸（Ｌ体）を意味するが、Ｄ−アミノ酸（Ｄ体）やＤＬ−アミノ酸（ＤＬ体）が含まれていてもよい。「筋肉（骨格筋）合成促進」の定義等は、上記の本発明の製造方法と同様である。
本発明の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、かつ分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量％以下（好ましくは、０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）である筋肉合成促進用濃縮発酵乳（好ましくは、骨格筋合成促進用）が提供できる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量以下（好ましくは０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）であり、かつロイシンの割合が０．０５質量％以下（好ましくは０．０２５質量％以下、より好ましくは０．０２質量％以下、さらに好ましくは０．０１質量％以下）である、筋肉合成促進用濃縮発酵乳（好ましくは、骨格筋合成促進用）が提供できる。
本発明の他の態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳が提供できる。
本発明の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、かつ分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量％以下（好ましくは、０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）である血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳が提供できる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量以下（好ましくは０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）であり、かつロイシンの割合が０．０５質量％以下（好ましくは０．０２５質量％以下、より好ましくは０．０２質量％以下、さらに好ましくは０．０１質量％以下）である、血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳が提供できる。
本発明の他の態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳が提供できる。
本発明の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、かつ分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量％以下（好ましくは、０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）である血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳が提供できる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）であり、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量以下（好ましくは０．０６質量％以下、より好ましくは０．０５質量％以下、さらに好ましくは０．０３質量％以下）であり、かつロイシンの割合が０．０５質量％以下（好ましくは０．０２５質量％以下、より好ましくは０．０２質量％以下、さらに好ましくは０．０１質量％以下）である、血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳が提供できる。
［食品］
本発明の一つ態様によれば、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である筋肉合成促進用濃縮発酵乳を含む筋肉合成促進用食品が提供される。ここで、食品とは、本発明の濃縮発酵乳を含有できる食品であればどのような形態のものであってもよく、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、ペースト、半固体成形物、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されず、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、バー、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、ムース、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品、流動食などが挙げられる。ここで、筋肉合成促進用食品は、筋肉合成促進用食品組成物であってもよい。
本発明の一つ態様によれば、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である筋肉合成促進用濃縮発酵乳を含む筋肉合成促進用食品が提供される。ここで、食品とは、本発明の濃縮発酵乳を含有できる食品であればどのような形態のものであってもよく、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、ペースト、半固体成形物、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく特に限定されず、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、バー、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、ムース、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品、流動食などが挙げられる。ここで、筋肉合成促進用食品は、筋肉合成促進用食品組成物であってもよい。
本発明の別の態様によれば、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳を含む血中アミノ酸量増加用食品が提供される。また、本発明の別の態様によれば、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳を含む血中アミノ酸濃度上昇促進用食品が提供される。ここで、血中アミノ酸量増加用食品または血中アミノ酸濃度上昇促進用食品は、それぞれ血中アミノ酸量増加用食品組成物または血中アミノ酸濃度上昇促進用食品組成物であってもよい。
また、食品には、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、乳幼児用調製粉乳、妊産婦もしくは授乳婦用粉乳、または筋肉合成促進、血中アミノ酸量増加、もしくは血中アミノ酸濃度上昇促進のために用いられる物である旨の表示を付した食品のような分類のものも包含される。また、本発明において、食品とは飲料を含む概念である。
本発明の別の態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、筋肉合成促進方法（好ましくは、骨格筋合成促進方法）が提供される。本発明の別の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、筋肉合成促進方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。ここで、「ヒトに対する医療行為」とは、医師等の処方を必要として、ヒトに対して医薬品を摂取させる（投与する）行為などを意味する。また、上記実施態様において、対象は、好ましくは、スポーツ選手、スポーツ愛好者（アスリート）、生活習慣病の改善のために運動を必要とする者、高齢者などの健康増進のために運動を必要とする者、乳幼児及び／又は子供などの発育／成長の過程で筋肉を作っていく必要のある者、又は筋肉低下疾患（例えば、サルコペニア）を患い、運動により筋肉合成の促進を必要とする患者やそのような疾患を予防するために運動を必要とする者が挙げられる。本発明の筋肉合成促進方法は、本発明の発酵乳の製造方法について、本願明細書に記載された内容に従って実施することができる。
ここで、対象とは、筋肉の合成促進を必要とする対象であることが好ましく、筋肉合成促進効果、筋肉分解抑制効果、抗疲労・疲労回復効果、筋肉痛抑制効果、予備能力向上効果を期待または必要とする対象がより好ましい。例えば、健康増進、運動能力向上、潜在的もしくは顕在的な疲労の回復を目的として、高齢者、栄養失調者、病中・病後者、運動者などが挙げられる。また、この対象はヒト以外の動物（馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など）であってもよいが、ヒトであることが好ましい。
本発明の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸量増加方法が提供される。本発明の別の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸量増加方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。ここで、「ヒトに対する医療行為」とは、上記と同様の意味で用いられる。また、この実施態様において、対象は、上記の筋肉合成促進方法と同様の対象が挙げられ、ヒト以外の動物（馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など）であってもよいが、ヒトであることが好ましい。本発明の血中アミノ酸量増加方法は、本発明の発酵乳の製造方法について、本願明細書に記載された内容に従って実施することができる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中総アミノ酸変化濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）が８２０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬ以上（好ましくは、８２０００〜１２００００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬとなる血中アミノ酸量増加方法が提供される。ここで、ＡＵＣは、例えば、下記の実施例の記載と同様に、対象から経時的に採血を行って血中アミノ酸濃度を算出して求めることができる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中必須アミノ酸変化濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）が４５０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬ以上（好ましくは、４５０００〜６５０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬとなる血中アミノ酸量増加方法が提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中ＢＣＡＡ（分岐鎖アミノ酸）変化濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）が２５０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬ以上（好ましくは、２５０００〜３５０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬとなる血中アミノ酸量増加方法が提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中ロイシン変化濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）が９０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬ以上（好ましくは、９０００〜１４０００ｎｍｏｌ・ｍｉｎ／ｍＬとなる血中アミノ酸量増加方法が提供される。
本発明の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸濃度上昇促進方法が提供される。本発明の別の好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸濃度上昇促進方法（但し、ヒトに対する医療行為を除く）が提供される。ここで、「ヒトに対する医療行為」とは、上記と同様の意味で用いられる。また、この実施態様において、対象は、上記の筋肉合成促進方法と同様の対象が挙げられ、ヒト以外の動物（馬、牛などの家畜、犬、猫などの愛玩動物、動物園などで飼育されている鑑賞動物など）であってもよいが、ヒトであることが好ましい。本発明の血中アミノ酸濃度上昇促進方法は、本発明の発酵乳の製造方法について、本願明細書に記載された内容に従って実施することができる。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取対象の該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中総アミノ酸変化濃度のＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）が１２００ｎｍｏｌ／ｍＬ以上（好ましくは、１２００〜１７００ｎｍｏｌ／ｍＬ）となる血中アミノ酸濃度上昇促進方法が提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取対象の該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中必須アミノ酸変化濃度のＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）が６００ｎｍｏｌ／ｍＬ以上（好ましくは、６００〜１０００ｎｍｏｌ／ｍＬ）となる血中アミノ酸濃度上昇促進方法が提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取対象の該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中ＢＣＡＡ（分岐鎖アミノ酸）変化濃度のＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）が３５０ｎｍｏｌ／ｍＬ以上（好ましくは、３５０〜５００ｎｍｏｌ／ｍＬ）となる血中アミノ酸濃度上昇促進方法が提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなり、該濃縮発酵乳摂取対象の該濃縮発酵乳摂取直後から１８０分までの血中ロイシン変化濃度のＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）が１３０ｎｍｏｌ／ｍＬ以上（好ましくは、１３０〜２００ｎｍｏｌ／ｍＬ）となる血中アミノ酸濃度上昇促進方法が提供される。
上記の血中アミノ酸濃度上昇促進方法は、筋肉合成促進方法（好ましくは、骨格筋合成促進方法）であってもよい。
本発明の筋肉合成促進方法、血中アミノ酸量増加方法、または血中アミノ酸濃度上昇促進方法において、対象に本発明の濃縮発酵乳（例えば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳）を摂取させる量は、本発明の効果を奏する限りにおいて特に限定されるものではないが、一食あたり５０〜２００ｇ摂取することが好ましく、一食あたり８０〜１５０ｇ摂取することがより好ましい。
本発明の好ましい態様によれば、本発明の濃縮発酵乳は一食あたりの単位包装形態からなり、該単位包装形態中に、濃縮発酵乳が５０〜２００ｇ（好ましくは、８０〜１５０ｇ）含まれる。ここで、「一食あたりの単位包装形態」からなるとは、一食あたりの摂取量があらかじめ定められた形態のものであり、例えば、特定量を経口摂取し得る食品として、一般食品のみならず、飲料（ドリンク剤など）、健康補助食品、保健機能食品、サプリメントなどの形態を意味する。「一食あたりの単位包装形態」では、例えば、液状の飲料、ゲル状、糊状、若しくはペースト状のゼリー、粉末状、顆粒状、カプセル状、若しくはブロック状の固体状の食品などの場合には、金属缶、ガラスビン（ボトルなど）、プラスティック容器（ペットボトルなど）、パック、パウチ、フィルム容器、紙箱などの包装容器で特定量（用量）を規定できる形態、あるいは、一食あたりの摂取量（用法、用量）を包装容器やホームページなどに表示することで特定量を規定できる形態が挙げられる。あるいは、一食当たりの摂取量を量りとれるスプーン等の計量器具を添付する形態が挙げられる。
本発明の筋肉合成促進方法、血中アミノ酸量増加方法、または血中アミノ酸濃度上昇促進方法において、対象（好ましくは、ヒト）への本発明の濃縮発酵乳（例えば、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下（好ましくは、０．１質量％以下）である濃縮発酵乳）のヒトの一日摂取量は、本発明の濃縮発酵乳が５０〜６００ｇであることが好ましく、８０〜４５０ｇであることがより好ましい。
本発明の濃縮発酵乳を対象に摂取させる（投与する）時期は、特に限定されないが、血液中のアミノ酸濃度が低くなっている状態での摂取がとくに有効であると考えられ、朝、昼、晩の食事の際や、食間、また運動後に好適に用いることができる。
本発明の別の態様によれば、筋肉合成促進（好ましくは骨格筋合成促進）のための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である筋肉合成促進用濃縮発酵乳の使用が提供される。
本発明の別の態様によれば、血中アミノ酸量増加のための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳の使用が提供される。
本発明の別の態様によれば、血中アミノ酸濃度上昇促進のための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳の使用が提供される。
これらの使用において、本発明の一つの好ましい態様によれば、本発明の使用は、非治療的使用である。
本発明の別の態様によれば、筋肉（骨格筋）合成を促進するための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である筋肉合成促進用濃縮発酵乳が提供される。
本発明の別の態様によれば、血中のアミノ酸量を増加させるための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳が提供される。
本発明の別の態様によれば、血中のアミノ酸濃度の上昇を促進するための、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳またはたんぱく質総量に対する遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳が提供される。
本発明の筋肉合成促進方法等に用いられる濃縮発酵乳等や、本発明の食品に含まれる濃縮発酵乳等などは、上記の本発明の製造方法と同じであってもよい。
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
実施例１：各試験溶液（試験乳）の調製および各アミノ酸濃度の測定
試験溶液は「脱脂粉乳マルＱ」（株式会社 明治社製）を原材料（発酵乳ミックス）として、たんぱく質濃度が約６．０〜６．４質量％、比重を加味したとき、約６．４容量％となるよう以下の手順で作成されたものを用いた。調製後の各試験乳の性状を表１に示した。また、各サンプル中の遊離総アミノ酸（ＴＡＡ）、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）濃度をＬＣ−ＭＳＭＳ法にて測定した結果を図１に示した。
（１）脱脂乳：ＳＮＦ（無脂乳固形分）含量が１６質量％となるように水と混合して調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、均質化（１５ＭＰａ）後、６５℃で３０分間加温した。
（２）対照発酵乳：ＳＮＦ含量が１５．７質量％となるように水と混合して調製発酵乳ミックスを調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターター（ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）ＯＬＬ２０５０１３株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＯＬＳ３２９０株（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８）の組み合わせ）を０．３％添加して、４２℃で発酵（発酵終了時ｐＨは４．４〜４．３）した。冷却および均質化（１５ＭＰａ）し、殺菌（６５℃、３０分）した。
（３）試験発酵乳：ＳＮＦ含量が１５．７質量％となるように水と混合して調製発酵乳ミックスを調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターターを添加し、４２℃で発酵（発酵終了時ｐＨは４．４〜４．３）した。冷却および均質化（１５ＭＰａ）後、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ社製）によりたんぱく質濃度１２質量％（調製発酵乳ミックス時のおよそ２倍）まで濃縮した。その後、たんぱく質濃度が６．４容量％となるよう水で希釈し、殺菌（６５℃、３０分）した。
試験溶液は「脱脂粉乳マルＱ」（株式会社 明治社製）を原材料（発酵乳ミックス）として、たんぱく質濃度が約６．０〜６．４質量％、比重を加味したとき、約６．４容量％となるよう以下の手順で作成されたものを用いた。調製後の各試験乳の性状を表１に示した。また、各サンプル中の遊離総アミノ酸（ＴＡＡ）、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）濃度をＬＣ−ＭＳＭＳ法にて測定した結果を図１に示した。
（１）脱脂乳：ＳＮＦ（無脂乳固形分）含量が１６質量％となるように水と混合して調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、均質化（１５ＭＰａ）後、６５℃で３０分間加温した。
（２）対照発酵乳：ＳＮＦ含量が１５．７質量％となるように水と混合して調製発酵乳ミックスを調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターター（ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）ＯＬＬ２０５０１３株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＯＬＳ３２９０株（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８）の組み合わせ）を０．３％添加して、４２℃で発酵（発酵終了時ｐＨは４．４〜４．３）した。冷却および均質化（１５ＭＰａ）し、殺菌（６５℃、３０分）した。
（３）試験発酵乳：ＳＮＦ含量が１５．７質量％となるように水と混合して調製発酵乳ミックスを調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターターを添加し、４２℃で発酵（発酵終了時ｐＨは４．４〜４．３）した。冷却および均質化（１５ＭＰａ）後、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ社製）によりたんぱく質濃度１２質量％（調製発酵乳ミックス時のおよそ２倍）まで濃縮した。その後、たんぱく質濃度が６．４容量％となるよう水で希釈し、殺菌（６５℃、３０分）した。
各試験溶液（試験乳）は、調製後、−２０℃で保存し、投与の直前に解凍して常温にしたものを用いた。
図１によれば、対照発酵乳では遊離アミノ酸が原材料の脱脂乳（発酵乳ミックス）より増加する。しかし、遠心分離工程により濃縮した試験発酵乳（本発明の試験発酵乳）では、取り除いた軽液（試験発酵乳の製造過程で遠心分離により取り除いた部分）に遊離必須アミノ酸が移行しており、対照発酵乳より遊離必須アミノ酸量が低い。ただし、たんぱく質投与用量が約６．４容量％となるように設計していることから、試験発酵乳中のたんぱく質含量が減っている訳ではなく、たんぱく質総量に占める、遊離必須アミノ酸の割合が低い（本発明の試験発酵乳では、たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合は約０．１質量％であり、分岐鎖アミノ酸の割合は約０．０５質量％であり、ロイシンの割合は約０．０２質量％である）ことを意味するものである。
実施例２：ラットによる各試験溶液の筋合成亢進作用の評価（ＦＳＲ評価）
本実施例で用いる各試験溶液は、上記実施例１で調製した脱脂乳、対照発酵乳、および試験発酵乳を用いた。
本実施例で用いる各試験溶液は、上記実施例１で調製した脱脂乳、対照発酵乳、および試験発酵乳を用いた。
実験の内容を以下に詳述する。
日本クレアから７週齢の雄性ＳＤラットを計１３６匹購入し、馴化飼育終了後、全ての試験に供するラットを約１８時間絶食させた。ＦＳＲ評価試験当日、体重が全体の平均より大きく外れた４例を除外したあと、ラットを８匹ずつ以下の１６群に分ける（投与物が「なし」の群のみ１２匹で実施した）。除外したラットは二酸化炭素吸入により安楽死させた。
日本クレアから７週齢の雄性ＳＤラットを計１３６匹購入し、馴化飼育終了後、全ての試験に供するラットを約１８時間絶食させた。ＦＳＲ評価試験当日、体重が全体の平均より大きく外れた４例を除外したあと、ラットを８匹ずつ以下の１６群に分ける（投与物が「なし」の群のみ１２匹で実施した）。除外したラットは二酸化炭素吸入により安楽死させた。
１群：投与物：なし、解剖時間：約１８時間絶食させた後（０分）
２群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与３０分後
３群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与６０分後
４群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与９０分後
５群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与１２０分後
６群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与２４０分後
７群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与３０分後
８群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与６０分後
９群：投与物：対照発酵乳、剖時間：投与９０分後
１０群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与１２０分後
１１群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与２４０分後
１２群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与３０分後
１３群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与６０分後
１４群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与９０分後
１５群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与１２０分後
１６群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与２４０分後
２群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与３０分後
３群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与６０分後
４群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与９０分後
５群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与１２０分後
６群：投与物：脱脂乳、解剖時間：投与２４０分後
７群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与３０分後
８群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与６０分後
９群：投与物：対照発酵乳、剖時間：投与９０分後
１０群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与１２０分後
１１群：投与物：対照発酵乳、解剖時間：投与２４０分後
１２群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与３０分後
１３群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与６０分後
１４群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与９０分後
１５群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与１２０分後
１６群：投与物：試験発酵乳、解剖時間：投与２４０分後
第１群以外のラットに上記の試験溶液を経口投与し、全てのラットについて上記のタイミング（解剖時間）で解剖を実施した。解剖の１５分前には、骨格筋合成速度測定のトレーサーである重水素ラベルフェニルアラニン（Ｄ５−Ｐｈｅ）（ＣＩＬ社製）を尾静脈より注射した（４５ｍｇ／ｋｇＢＷ）。解剖はイソフルラン麻酔下で行い、門脈血を部分採血後、腹部大静脈より全採血し、安楽死させた。下腿三頭筋を摘出後、直ちに液体窒素で凍結させた。
評価項目
門脈血アミノ酸濃度および足底筋ＦＳＲ（時間と群を要因とする二元配置分散分析により統計解析を行った）
血中アミノ酸および試験乳中の遊離アミノ酸濃度は、各サンプルを３％スルホサリチル酸処理によって、たんぱく質を除いた後、Ｉｎｔｒａｄａ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄカラム（Ｉｎｔａｃｔ社製）を使用したＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより２０種のアミノ酸を外部標準法にて定量した。
門脈血アミノ酸濃度および足底筋ＦＳＲ（時間と群を要因とする二元配置分散分析により統計解析を行った）
血中アミノ酸および試験乳中の遊離アミノ酸濃度は、各サンプルを３％スルホサリチル酸処理によって、たんぱく質を除いた後、Ｉｎｔｒａｄａ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄカラム（Ｉｎｔａｃｔ社製）を使用したＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより２０種のアミノ酸を外部標準法にて定量した。
ＦＳＲ分析方法
（１）骨格筋のホモジナイズ
凍結保存した右足底筋全量（約２５０〜３００ｍｇ）をビーズ入りホモジナイズチューブ（ＣＫ Ｍｉｘ Ｋｉｔ Ｔｕｂｅ ７ｍＬ）に移し、氷冷した３ｍＬの０．３Ｍ過塩素酸溶液を加え、Ｃｒｙｏｌｙｓ（Ｍ＆Ｓ社製、液体窒素、ドライアイスを利用した気流冷却装置）による空冷下で高速細胞破砕装置Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（Ｍ＆Ｓ社製）を用いてホモジナイズした。破砕条件は以下のとおり行った。
・4500rpm 20sec→7500rpm 20sec×2→8500rpm 20sec×2
各破砕プロセス間に３０秒間の空冷時間を設けた。
（１）骨格筋のホモジナイズ
凍結保存した右足底筋全量（約２５０〜３００ｍｇ）をビーズ入りホモジナイズチューブ（ＣＫ Ｍｉｘ Ｋｉｔ Ｔｕｂｅ ７ｍＬ）に移し、氷冷した３ｍＬの０．３Ｍ過塩素酸溶液を加え、Ｃｒｙｏｌｙｓ（Ｍ＆Ｓ社製、液体窒素、ドライアイスを利用した気流冷却装置）による空冷下で高速細胞破砕装置Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（Ｍ＆Ｓ社製）を用いてホモジナイズした。破砕条件は以下のとおり行った。
・4500rpm 20sec→7500rpm 20sec×2→8500rpm 20sec×2
各破砕プロセス間に３０秒間の空冷時間を設けた。
（２）上清の分離と筋ホモジナイズサンプルの洗浄
筋ホモジナイズサンプル１ｍＬを遠心分離（４℃、８０００ｇ、１５ｍｉｎ）した後、上清を分離した。上清は０．２μｍフィルターでろ過し、「（５）ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによるフェニルアラニンの定量」に用いた（筋上清定量用サンプル）。
上清を分離した筋ホモジナイズサンプルは、ｍｉｌｌｉＱ１ｍＬで洗浄を２回行った後、０．１Ｎ ＨＣｌ１ｍＬに懸濁した。
筋ホモジナイズサンプル１ｍＬを遠心分離（４℃、８０００ｇ、１５ｍｉｎ）した後、上清を分離した。上清は０．２μｍフィルターでろ過し、「（５）ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによるフェニルアラニンの定量」に用いた（筋上清定量用サンプル）。
上清を分離した筋ホモジナイズサンプルは、ｍｉｌｌｉＱ１ｍＬで洗浄を２回行った後、０．１Ｎ ＨＣｌ１ｍＬに懸濁した。
（３）筋ホモジナイズサンプルのたんぱく質加水分解
９００μＬの６ＮＨＣｌ（１％フェノール）に洗浄後の筋ホモジナイズサンプル１００μＬを添加し、ＰＩＣＯ−ＴＡＧワークステーション（日本ウォーターズ株式会社製）を用いて、窒素置換後、減圧密封した。ヒートブロックを用いて１５０℃で１時間加熱し、筋たんぱく質の加水分解を行った（筋加水分解物）。
９００μＬの６ＮＨＣｌ（１％フェノール）に洗浄後の筋ホモジナイズサンプル１００μＬを添加し、ＰＩＣＯ−ＴＡＧワークステーション（日本ウォーターズ株式会社製）を用いて、窒素置換後、減圧密封した。ヒートブロックを用いて１５０℃で１時間加熱し、筋たんぱく質の加水分解を行った（筋加水分解物）。
（４）筋加水分解物定量用サンプルの調製
筋加水分解物２００μＬを遠心エバポレータ―を用いて濃縮した。濃縮物を２５ｕＭ内部標準含有１０％アセトニトリル８０μＬに溶解させ（原液）、また２５ｕＭ内部標準含有１０％アセトニトリルを用いて２０倍希釈した（２０倍希釈液）。原液、２０倍希釈液それぞれを０．２μｍフィルターでろ過し、筋加水分解物定量用サンプル（原液、２０倍希釈液）とした。
内部標準には１３Ｃ９，１５Ｎ，α，β１，β２，２，３，４，５，６−Ｄ８−Ｐｈｅ（ＩＣ−Ｐｈｅとする、Ｓｉｇｍａ社製）を用いた。
筋加水分解物２００μＬを遠心エバポレータ―を用いて濃縮した。濃縮物を２５ｕＭ内部標準含有１０％アセトニトリル８０μＬに溶解させ（原液）、また２５ｕＭ内部標準含有１０％アセトニトリルを用いて２０倍希釈した（２０倍希釈液）。原液、２０倍希釈液それぞれを０．２μｍフィルターでろ過し、筋加水分解物定量用サンプル（原液、２０倍希釈液）とした。
内部標準には１３Ｃ９，１５Ｎ，α，β１，β２，２，３，４，５，６−Ｄ８−Ｐｈｅ（ＩＣ−Ｐｈｅとする、Ｓｉｇｍａ社製）を用いた。
（５）ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによるフェニルアラニンの定量
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いて、筋上清定量用サンプルおよび筋加水分解物定量用サンプル（原液、２０倍希釈液）について、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）および重水素ラベルフェニルアラニン（Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５））のエンリッチメントを計測した。分析条件は以下の通りとした。
ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いて、筋上清定量用サンプルおよび筋加水分解物定量用サンプル（原液、２０倍希釈液）について、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）および重水素ラベルフェニルアラニン（Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５））のエンリッチメントを計測した。分析条件は以下の通りとした。
＜ＬＣ条件＞
・LC用カラム：ACQUITYUPLCBEHC181.7um
・移動相A：0.05%TFA/milliQ
・移動相B：0.05%TFA/アセトニトリル
・移動相流速：0.3mL/min
・カラム温度：40℃
・サンプル注入量：3μL
・移動相比率
0~3.4min：A100%→A85%B15%（グラジエント）
3.4~4.5min：A70% B30%
4.5~6.0min：A50% B50%
6.0~8.0min：A20% B80%
8.0~10.5min：A100%（Total running time：10.5min）
・LC用カラム：ACQUITYUPLCBEHC181.7um
・移動相A：0.05%TFA/milliQ
・移動相B：0.05%TFA/アセトニトリル
・移動相流速：0.3mL/min
・カラム温度：40℃
・サンプル注入量：3μL
・移動相比率
0~3.4min：A100%→A85%B15%（グラジエント）
3.4~4.5min：A70% B30%
4.5~6.0min：A50% B50%
6.0~8.0min：A20% B80%
8.0~10.5min：A100%（Total running time：10.5min）
＜ＭＳ／ＭＳ条件＞
・フラグメントイオン
Phe：m/z166.19 > 120.10
Phe(Ring-D5)：m/z171.19 > 125.10
IC-Phe：mz184.17 > 137.17
・CapillaryVoltage：3000V
・SourceTemperature：120℃
・DesolvationTemperature：400℃
・DesolvationGasFlow：849L/h
・ConeGasFlow：48L/h
・ConeVoltage：25V
・ConeEnergy：15eV
・フラグメントイオン
Phe：m/z166.19 > 120.10
Phe(Ring-D5)：m/z171.19 > 125.10
IC-Phe：mz184.17 > 137.17
・CapillaryVoltage：3000V
・SourceTemperature：120℃
・DesolvationTemperature：400℃
・DesolvationGasFlow：849L/h
・ConeGasFlow：48L/h
・ConeVoltage：25V
・ConeEnergy：15eV
・エンリッチメント測定
D5-Pheのエンリッチメント＝Res(D5-Phe) / (Res(D5-Phe)+Res(Phe))
Res(D5-Phe) = IC-Pheに対するD5-Pheの相対ピーク強度
Res(Phe) = IC-Pheに対するPheの相対ピーク強度
D5-Pheのエンリッチメント＝Res(D5-Phe) / (Res(D5-Phe)+Res(Phe))
Res(D5-Phe) = IC-Pheに対するD5-Pheの相対ピーク強度
Res(Phe) = IC-Pheに対するPheの相対ピーク強度
（６）骨格筋合成速度（ＦＳＲ）の算出
LC/MS/MSによって算出した足底筋のたんぱく質中および遊離のPhe(Ring-D5)のエンリッチメントを基に、次式によって骨格筋合成速度（FSR）を算出した（A. Kanda et al., Br J Nutr, Feb. 7, 1-7, 2013）。
LC/MS/MSによって算出した足底筋のたんぱく質中および遊離のPhe(Ring-D5)のエンリッチメントを基に、次式によって骨格筋合成速度（FSR）を算出した（A. Kanda et al., Br J Nutr, Feb. 7, 1-7, 2013）。
ＦＳＲ（％／ｄａｙ）＝（Ｅｂ×１００）／（Ｅａ×Ｔ）
Ｅａ：骨格筋中に遊離状態で存在するフェニルアラニンのエンリッチメント
（＝筋上清定量用サンプル中のエンリッチメント）
Ｅｂ：骨格筋中にたんぱく質に同化して存在するフェニルアラニンのエンリッチメント
（＝筋加水分解物定量用サンプル中のエンリッチメント）
Ｔ：Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５）を尾静脈投与してから、摘出した骨格筋を凍結保存するまでの時間（日）
エンリッチメント＝Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５）／（Ｐｈｅ＋Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５））
Ｅａ：骨格筋中に遊離状態で存在するフェニルアラニンのエンリッチメント
（＝筋上清定量用サンプル中のエンリッチメント）
Ｅｂ：骨格筋中にたんぱく質に同化して存在するフェニルアラニンのエンリッチメント
（＝筋加水分解物定量用サンプル中のエンリッチメント）
Ｔ：Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５）を尾静脈投与してから、摘出した骨格筋を凍結保存するまでの時間（日）
エンリッチメント＝Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５）／（Ｐｈｅ＋Ｐｈｅ（Ｒｉｎｇ−Ｄ５））
＜統計解析手法＞
統計手法は、階層的な解析を実施した。つまり、まず脱脂乳、対照発酵乳、試験発酵乳群（Ｆｏｏｄ）と投与後時間（Ｔｉｍｅ：反復計測ではない）およびＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅによる２元配置分散分析を実施し、Ｆｏｏｄの主効果、またはＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意であった場合、次のような手順で群間の対比較を実施した。まず、Ｆｏｏｄの主効果が有意でかつＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意でなかった場合は、ＦｏｏｄとＴｉｍｅでの分散分析モデルを再度構築して対比較を実施した。Ｆｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意であった場合は、単純主効果検定を実施し、有意差が認められた時間での対比較を実施した。対比較はＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較を実施し、Ｐ値が０．０５未満の場合を有意とした。更に、各群でどのＴｉｍｅポイントで投与なしの場合（ベースライン）との差異があるのかを検討するために、投与なし群と脱脂乳、対照発酵乳、および試験発酵乳群ごとのＤｕｎｎｅｔｔ検定を実施した。統計解析にはＪＭＰ１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．）を用いた。
統計手法は、階層的な解析を実施した。つまり、まず脱脂乳、対照発酵乳、試験発酵乳群（Ｆｏｏｄ）と投与後時間（Ｔｉｍｅ：反復計測ではない）およびＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅによる２元配置分散分析を実施し、Ｆｏｏｄの主効果、またはＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意であった場合、次のような手順で群間の対比較を実施した。まず、Ｆｏｏｄの主効果が有意でかつＦｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意でなかった場合は、ＦｏｏｄとＴｉｍｅでの分散分析モデルを再度構築して対比較を実施した。Ｆｏｏｄ×Ｔｉｍｅの交互作用が有意であった場合は、単純主効果検定を実施し、有意差が認められた時間での対比較を実施した。対比較はＴｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒの多重比較を実施し、Ｐ値が０．０５未満の場合を有意とした。更に、各群でどのＴｉｍｅポイントで投与なしの場合（ベースライン）との差異があるのかを検討するために、投与なし群と脱脂乳、対照発酵乳、および試験発酵乳群ごとのＤｕｎｎｅｔｔ検定を実施した。統計解析にはＪＭＰ１１（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．）を用いた。
門脈血アミノ酸濃度推移の結果を図２に示す。図２によれば、対照発酵乳群では投与後３０分の時点で脱脂乳群より有意にアミノ酸吸収量が多く、軽液を除去した試験発酵乳群（本発明の濃縮発酵乳）の場合、さらに３０分時点でのアミノ酸吸収量が脱脂乳群および対照発酵乳群に比べて増加することが分かった。すなわち、本発明の濃縮発酵乳は、原材料の脱脂乳（脱脂乳群）のみならず、濃縮していない通常の発酵乳（対照発酵乳群）と比較して、血中のアミノ酸濃度上昇ピークを上げるのに適していることが分かった。
足底筋ＦＳＲの結果を図３に示す。図３によれば、対照発酵乳群および試験発酵乳群では投与後早い時点で足底筋のＦＳＲを増加させる。さらに、軽液を除去した試験発酵乳の場合、ＦＳＲが高まるタイミングが速いだけでなく、高まっている時間が長く（例えば２４０分後でも投与なしより有意に高い）脱脂乳群だけでなく対照発酵乳群と比較しても、ＦＳＲが有意に高く推移することが明らかとなった。つまり、発酵させた後、濃縮工程（例えば、遠心分離工程）を経た本発明の濃縮発酵乳は、たんぱく質含量を均一とした場合、原材料の脱脂乳や濃縮していない通常の発酵乳と比較して、筋肉合成促進、特に骨格筋合成促進の観点から優れることが分かった。
実施例３：ヒトのたんぱく質吸収効果評価試験
試験発酵乳は、脱脂濃縮乳および乳たんぱく質を原材料（発酵乳ミックス）としてたんぱく質濃度が約１０．２質量％となるよう以下の手順で作成されたものを用いた。
試験発酵乳：たんぱく質含量が約５．１質量％となるように原材料（発酵乳ミックス）を水と混合して調製発酵乳ミックス（無脂乳固形分含量：１１．２質量％）を調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターター（ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）ＯＬＬ２０５０１３株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＯＬＳ３２９０株（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８）の組み合わせ）を３％添加して、４２℃で発酵した。冷却後、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ社製）によりたんぱく質濃度１０．２質量％（調製発酵乳ミックス時のおよそ２倍）まで濃縮した。
試験発酵乳は、脱脂濃縮乳および乳たんぱく質を原材料（発酵乳ミックス）としてたんぱく質濃度が約１０．２質量％となるよう以下の手順で作成されたものを用いた。
試験発酵乳：たんぱく質含量が約５．１質量％となるように原材料（発酵乳ミックス）を水と混合して調製発酵乳ミックス（無脂乳固形分含量：１１．２質量％）を調製した。調製後、９５℃達温にて殺菌し、発酵スターター（ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）ＯＬＬ２０５０１３株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１）およびストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）ＯＬＳ３２９０株（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８）の組み合わせ）を３％添加して、４２℃で発酵した。冷却後、遠心分離（ＨＩＴＡＣＨＩ社製）によりたんぱく質濃度１０．２質量％（調製発酵乳ミックス時のおよそ２倍）まで濃縮した。
比較対照として、試験発酵乳の原材料として使用した上記と同じ調製発酵乳ミックス（無脂乳固形分含量：１１．２質量％）を殺菌後、発酵や濃縮工程を経ていないものを用いた。
下記の表２に記載の試験発酵乳と、調製発酵乳ミックスを、ＢＭＩが１８．５以上２５．０ｋｇ／ｍ２未満である２０歳以上３０歳未満の男性１２名（平均年齢：２３．６歳、平均ＢＭＩ：２０．６）の被験者に対して摂取させた。
試験デザインは、ランダム化クロスオーバー試験により行った。具体的には、被験者をランダムに２群（Ａ群とＢ群）に分け、Ａ群に試験発酵乳を摂取させ、Ｂ群に比較対照の調製発酵乳ミックスを摂取させる。摂取後、７日間のウォッシュアウト期間を設け、その後Ａ群に比較対照の調製発酵乳ミックスを摂取させ、Ｂ群に試験発酵乳を摂取させることにより行う。上記ウォッシュアウト期間は、先に摂取した試験発酵乳または調製発酵乳ミックスの影響がなくなるのに十分な期間として、７日間とした。ウォッシュアウト期間中は、通常通りの生活を送ることとし、食事は日常範囲を大きく逸脱する過度な節食や過食を禁止し、さらに本試験に影響を及ぼす可能性がある医薬品（Ｈ２ブロッカー、プロトンポンプ阻害薬、消化酵素製剤）、医薬部外品（健胃薬、消化薬）、たんぱく質やアミノ酸含有のサプリメント、および健康食品の使用や摂取は禁止した。
試験は、試験発酵乳または比較対照の調製発酵乳ミックスの摂食前（０分）および摂食後（１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後、１２０分後、および１８０分後）に腕静脈から採血を行って、以下の主要評価項目および副次評価項目について分析した。また、血中アミノ酸濃度の測定は以下の通り行った。
血中アミノ酸濃度を、高速液体クロマトグラフィー質量分析計（ＬＣ／ＭＳ）（型式：ＬＣ２０シリーズＬＣ−ＭＳ２０２０、島津製作所製）により測定した。血漿を徐蛋白処理し測定試料とした。下記の反応式の通り、ＨＰＬＣ内部で反応試薬（ＡＰＤＳ：３−Ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ Ｃａｒｂａｍａｔｅ）と混合・加温し、目的成分である遊離アミノ酸を誘導化した。誘導化した試料をＯＤＳカラム（イナートシルＯＤＳ−３ ２．１×１００ｍｍ（ＧＬサイエンス製））で分離し、ＭＳで各アミノ酸の質量電荷比を検出することにより測定を行った。なお、測定試薬としては、ＡＰＤＳタグワコー用 アミノ酸自動分析用、ＡＰＤＳタグワコー用 溶離液、ＡＰＤＳタグワコー用 ホウ酸緩衝液、およびアセトニトリル（ＬＣ／ＭＳ用）を使用した（全て、富士フィルム和光純薬株式会社製）。
（１）主要評価項目
ＡＵＣ（血中アミノ酸変化濃度の曲線下面積）：摂食前（０分）から摂食後１８０分の間の血中アミノ酸変化濃度の曲線下面積を求めて算出した。
ここで、血中アミノ酸変化濃度は、摂食前（０分）に採血した血中アミノ酸濃度と、摂食後（１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後、１２０分後、および１８０分後）のそれぞれの血中アミノ酸濃度との差を求め、その差を血中アミノ酸変化濃度とした。下記の副次評価項目の血中アミノ酸変化濃度および最高血中アミノ酸変化濃度も同様に算出した。
（２）副次評価項目
経過時間ごと（１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後、１２０分後、および１８０分後）の血中アミノ酸変化濃度およびそのＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）を算出した。
ＡＵＣ（血中アミノ酸変化濃度の曲線下面積）：摂食前（０分）から摂食後１８０分の間の血中アミノ酸変化濃度の曲線下面積を求めて算出した。
ここで、血中アミノ酸変化濃度は、摂食前（０分）に採血した血中アミノ酸濃度と、摂食後（１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後、１２０分後、および１８０分後）のそれぞれの血中アミノ酸濃度との差を求め、その差を血中アミノ酸変化濃度とした。下記の副次評価項目の血中アミノ酸変化濃度および最高血中アミノ酸変化濃度も同様に算出した。
（２）副次評価項目
経過時間ごと（１５分後、３０分後、４５分後、６０分後、９０分後、１２０分後、および１８０分後）の血中アミノ酸変化濃度およびそのＣｍａｘ（最高血中アミノ酸変化濃度）を算出した。
上記の主要評価項目および副次評価項目の結果を図４〜１５に示す。これらの結果から、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳（試験発酵乳）の摂取は、同じ乳タンパク質を同量含む「調製発酵乳ミックス」（比較対照）を摂取した場合と比較して、若年男性における血中の総アミノ酸濃度、必須アミノ酸濃度、ＢＣＡＡ濃度およびロイシン濃度をより上昇させることが分かった（図６、９、１２、および１５のＣｍａｘの結果参照）。また、摂食前（０分）から摂食後１８０分の間のＡＵＣは、ＢＣＡＡおよびロイシンにおいて、本発明の発酵乳（試験発酵乳）の方が調製発酵乳ミックスと比較して有意に高い値を示すことが分かった（図１１および図１４のＡＵＣの結果参照）。また、摂食前（０分）から摂食後１８０分の間のＡＵＣは、必須アミノ酸についても同様の高い傾向が見られた（図８のＡＵＣの結果参照）。
上記の結果から、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳（試験発酵乳）は、発酵や濃縮工程を経ていない比較対照の調製発酵乳ミックスと比較して、血中のアミノ酸量を増加させることができ、かつ血中のアミノ酸濃度の上昇を促進させることができることが分かった。よって、本発明の製造方法により製造された濃縮発酵乳は、ヒトで「吸収されやすい」ことから、筋肉合成促進、特に骨格筋合成促進に寄与すると考えられる。
ＮＩＴＥ ＢＰ−０２４１１
ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８
ＦＥＲＭ ＢＰ−１９６３８
Claims (17)
- 無脂乳固形分含量が１〜３０質量％に調製された調製発酵乳ミックスを、乳酸菌の存在下で発酵させることにより発酵乳を得て、その発酵乳を濃縮する、濃縮発酵乳の製造方法。
- 下記の工程を含んでなる、濃縮発酵乳の製造方法：
（１）発酵乳ミックスを調製して調製発酵乳ミックスとする工程、ここで、調製された調製発酵乳ミックス中の無脂乳固形分含量が１〜３０質量％であり、
（２）前記調製発酵乳ミックスを殺菌処理に供する工程、
（３）前記殺菌処理後の調製発酵乳ミックスに乳酸菌スターターを添加して発酵させる工程、および
（４）前記発酵後の発酵乳を濃縮する工程。 - 調製された調製発酵乳ミックス中のたんぱく質量が０．５〜１１質量％である、請求項１または２に記載の製造方法。
- 乳酸菌または乳酸菌スターターが、Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricusおよび／またはStreptococcus thermophilusである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製造方法。
- 発酵乳を濃縮する工程が、発酵乳を遠心分離により濃縮する工程である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
- 製造された濃縮発酵乳が筋肉合成促進用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製造方法。
- 請求項１〜６のいずれか一項に記載の製造方法により製造された、濃縮発酵乳。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
- たんぱく質総量に対する、分岐鎖アミノ酸の割合がさらに０．１質量％以下である、請求項８に記載の筋肉合成促進用濃縮発酵乳。
- 請求項８または９に記載の濃縮発酵乳を含む、筋肉合成促進用食品。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸量増加用濃縮発酵乳。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である、血中アミノ酸濃度上昇促進用濃縮発酵乳。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、筋肉合成促進方法。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸量増加方法。
- 対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、請求項１４に記載の血中アミノ酸量増加方法。
- たんぱく質総量に対する、遊離必須アミノ酸の割合が０．２質量％以下である濃縮発酵乳を、対象に摂取させることを含んでなる、血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
- 対象への濃縮発酵乳の一日摂取量が５０〜６００ｇである、請求項１６に記載の血中アミノ酸濃度上昇促進方法。
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|---|---|---|---|---|
| WO2022065330A1 (ja) * | 2020-09-23 | 2022-03-31 | 雪印メグミルク株式会社 | 筋委縮予防剤 |
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-
2019
- 2019-01-21 JP JP2019008041A patent/JP2020014452A/ja active Pending
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