JP2019523653A - 抗体、抗体を含む組成物およびキット、ならびにそれらの使用方法 - Google Patents

抗体、抗体を含む組成物およびキット、ならびにそれらの使用方法 Download PDF

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Abstract

ＩＬ６受容体に対して高い標的親和性を有する新規抗体が提供される。斯かる抗体を含有する組成物およびこれを使用する方法がさらに提供される。本発明の抗体は、（ａ）重鎖および軽鎖を含み、上記重鎖が、配列番号５などから選択される配列に対して約７０％またはそれを超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、上記軽鎖が、配列番号２などから選択される配列に対して約７０％またはそれを超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、上記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有し；（ｃ）（ａ）配列番号３および配列番号４ならびに（ｂ）配列番号１および配列番号２を含有しない。【選択図】図１

Description

相互参照
この出願は、２０１６年５月２７日出願されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０８３６５３号（この内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
配列表
この出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体が参考として本明細書に援用される配列表を含む。このＡＳＣＩＩコピーは、２０１６年６月２４日に作成され、４６１９８−７０１＿６０２＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、３３４，１５３バイトのサイズである。
肝細胞刺激因子、Ｂ細胞刺激因子２、細胞傷害性Ｔ細胞分化因子、Ｂ細胞分化因子、ハイブリドーマ／形質細胞腫増殖因子、単球顆粒球誘導因子２型およびトロンボポエチンとして以前に公知である、インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、骨芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、メサンギウム細胞および一部の腫瘍細胞等、様々な種類の細胞によって産生される多面的サイトカインである。ＩＬ−６は、その三次構造に必要な４個のシステイン残基のモチーフを有する４個のα−ヘリックスドメインを含む。ヒトＩＬ−６は、その遺伝子が第７染色体に存在する２６ｋＤａ糖タンパク質である。
ＩＬ−６は、膜結合型または可溶型ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に結合し、この複合体は、２分子のシグナル伝達タンパク質ｇｐ１３０と会合し、これにより、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ３経路およびｒａｓ媒介性ＭＡＰキナーゼシグナリングの活性化を含む細胞事象を惹起する。ＩＬ−６は、Ｂ細胞および単球の増殖および分化、Ｔ細胞活性化、造血、破骨細胞活性化、ケラチノサイト成長、ニューロン成長、肝細胞活性化、ならびに肝細胞からの急性期タンパク質誘導等、様々な効果を誘発する。
ＩＬ−６は、免疫調節、造血、炎症および腫瘍形成において重要な役割を果たす。ＩＬ−６は、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤腹膜炎、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、キャッスルマン病、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ぶどう膜炎、ペロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病（Ｐｉｌｏｎｉｄａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害、自己免疫性障害、膵炎、外科手術による外傷、移植片対宿主病、移植片拒絶、心疾患、骨吸収、熱傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝／肺線維症、歯周炎、低酸症（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｈｙｄｉａ）、固形腫瘍（腎細胞癌）、前立腺および膀胱がん、膵がん、神経学的がんならびにＢ細胞悪性疾患（例えば、キャッスルマン（Ｃａｓｔｅｌｅｍａｎ）病、ある特定のリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および多発性骨髄腫）等の疾患または障害に関与し、それらを処置するための創薬標的であった。間接的証拠は、ＩＬ−６と、慢性閉塞性肺疾患および２型糖尿病におけるインスリン抵抗性との間の関連も示唆する。
インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対するヒト化モノクローナル抗体である、トシリズマブ（配列番号１に示す重鎖、配列番号２に示す軽鎖）は、マウス抗体ＰＭ１をヒト化することにより得られるＩｇＧ１抗体である。トシリズマブは、ＩＬ−６関連疾患のための治療剤として有用であり、ＡｃｔｅｍｒａおよびＲｏＡｃｔｅｍｒａの商品名で販売されている。抗体として、標的検出感度（検出アッセイにおけるような）ならびに治療有効性および投薬は、抗体のその標的に対する親和性に関連付けられる。より高い親和性の抗体は、検出感度を増強し、用量要件を低減し、産生をより効率的にし、副作用のリスクを減少させることができる。
前述を考慮すると、改善された標的結合親和性を有する抗ＩＬ−６または抗ＩＬ６Ｒ抗体、これを含む組成物およびキット、ならびにその使用方法の必要が相当にある。本開示は、上述の必要に取り組み、また、追加的な利点を提供する。
本開示は、ＩＬ−６Ｒに結合することができる抗体、その使用およびこれを作製する方法を提供する。一態様では、本開示は、抗体を提供し、抗体は、（ａ）重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有し；（ｃ）（ａ）配列番号３および配列番号４ならびに（ｂ）配列番号１および配列番号２を含有しない。
別の態様では、本開示は、抗体を提供し、抗体は、（ａ）重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｃ）配列番号３および配列番号４を含有しない。
別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｂ）抗体は、ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて０．０３２μｇ／ｍＬまたはそれに満たない濃度で、７２時間後にＤＳ−１細胞の増殖を少なくとも４０％阻害する。
別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）重鎖は、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個もしくは複数の変異を含み；および／または（ｂ）軽鎖は、配列番号２に関する位置８９および９３に１個もしくは複数の変異を含み；（ｃ）抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、または配列番号８９の重鎖および配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号９０の軽鎖を含む抗体に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）重鎖は、配列番号１に関する１個または複数の変異を含み、残基５７は、メチオニン（Ｍ）へと変異され；（ｂ）軽鎖は、配列番号４もしくは配列番号２またはその両方に対して少なくとも９０％配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｃ）抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６Ｒに対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載されている抗体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。別の態様では、本開示は、容器内に本明細書に記載されている抗体を含むキットを提供する。別の態様では、本開示は、疾患または状態を処置する方法であって、本明細書に記載されている抗体または本明細書に記載されている抗体を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象の状態を処置するための医薬の製造のための、本明細書に記載されている抗体の使用を提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に記載されている抗体をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に記載されている単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に記載されているベクターを含む細胞を提供する。
参照による組込み
本明細書で言及されているあらゆる刊行物、特許および特許出願は、あたかも個々の刊行物、特許または特許出願のそれぞれが、参照により本明細書に組み込まれていると特にかつ個々に示されているのと同じ程度まで、参照により本明細書に組み込む。
本発明の新規特色は、添付の特許請求の範囲に詳細に記されている。本開示の特色および利点のより十分な理解は、本発明の原理が利用される説明的実施形態を表記する次の詳細な説明および次に説明する添付の図面の参照により得られるであろう。
図１は、ＩＬ−６の存在下でＤＳ−１細胞の増殖を阻害するＩＬ−６Ｒ抗体の例証である。
図２Ａおよび図２Ｂは、ＤＳ−１細胞増殖アッセイの結果を例証するグラフである。
図３Ａおよび図３Ｂは、ＤＳ−１細胞増殖における本明細書に記載されている例示的な抗体の阻害％を示すＤＳ−１細胞増殖アッセイの結果を例証するグラフである。
本明細書に記載されている本開示のシステムおよび方法は、他に断りがなければ、当業者の技量の範囲内で、分子生物学（組換え技法を含む）、細胞生物学、生化学、マイクロアレイおよび配列決定技術の従来技法および記載を用いることができる。斯かる従来技法は、ポリマーアレイ合成、オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションおよびライゲーション、オリゴヌクレオチドの配列決定、ならびに標識を使用したハイブリダイゼーションの検出を含む。適した技法の具体的例証は、本明細書における例の参照により得ることができる。しかし、当然ながら等価な従来手順を使用することもできる。斯かる従来技法および記載は、Ｇｒｅｅｎら編、Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ（Ｉ〜ＩＶ巻）（１９９９年）；Ｗｅｉｎｅｒら編、Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００７年）；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ， Ｄｖｅｋｓｌｅｒ編、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００３年）；ＢｏｗｔｅｌｌおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、ＤＮＡ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ： Ａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ（２００３年）；Ｍｏｕｎｔ， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ： Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ（２００４年）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００６年）；ならびにＳａｍｂｒｏｏｋおよびＧｒｅｅｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第４版（２０１２年）（全てＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓから出版）；Ｓｔｒｙｅｒ， Ｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第４版）Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ， Ｎ．Ｙ．（１９９５年）；Ｇａｉｔ「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏｎ（１９８４年）；ＮｅｌｓｏｎおよびＣｏｘ、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第６版、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０１２年）；Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第６版、Ｗｉｌｅｙ−Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（２０１０年）；ならびにＢｅｒｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第５版、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２００２年）等の標準研究室マニュアルに見出すことができ、これらは全て、あらゆる目的のためにそれらの全体を参照により本明細書に組み込む。本組成物の前には、研究ツールならびにシステムおよび方法が記載されているが、記載されている特異的なシステムおよび方法、組成物、標的ならびに使用は当然ながら変動し得るため、本開示が、これらに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用されている用語法が、単に特定の態様を記載することを目的としており、本開示の範囲の限定を意図せず、本開示の範囲が、添付の特許請求の範囲のみによって限定されるであろうことも理解されたい。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈がそれ以外を明らかに指示しない限り、複数形の参照を含む。例えば、用語「１つの細胞（ａ ｃｅｌｌ）」は、その混合物を含む複数の細胞を含む。
用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される、特定の値の許容される誤差範囲内を意味し、これは、一部には、値が測定または決定される仕方、すなわち、測定系の限界に依存するであろう。例えば、「約」は、当技術分野の実施にしたがって、１または１を超える標準偏差内を意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％または最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に生物学的系または過程に関して、この用語は、ある値の１桁以内、好ましくは、５倍以内、より好ましくは、２倍以内を意味することができる。本願および特許請求の範囲に特定の値が記載されている場合、他に記述がなければ、特定の値の許容される誤差範囲内を意味する用語「約」が仮定されるべきである。
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、いずれかの長さのアミノ酸のポリマーを指すように、本明細書において互換的に使用されている。ポリマーは、直鎖状であっても分枝状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでいてもよく、非アミノ酸によって中断されていてもよい。この用語は、天然にまたは介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する；例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識構成成分とのコンジュゲーション等、他のいずれかの操作もしくは修飾。この定義内には、例えば、アミノ酸の１種または複数のアナログ（例えば、非天然アミノ酸等を含む）および当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも含まれる。本明細書に記載されているポリペプチドは、抗体に基づくため、ポリペプチドが、単鎖または会合した鎖として発生し得ることが理解される。
用語「アミノ酸」は、ＤまたはＬ光学異性体、ならびにアミノ酸アナログおよびペプチド模倣物の両方が挙げられるがこれらに限定されない、天然、非天然および合成アミノ酸を指す。標準一文字または三文字コードが、アミノ酸の命名に使用される。
用語「天然Ｌ−アミノ酸」は、Ｌ光学異性体型のグリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ）、システイン（Ｃ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）を意味する。
配列に適用される場合、また、本明細書において、用語「天然に存在しない」は、哺乳動物に見出される野生型もしくは天然に存在する配列の対応物がない、それと相補的ではない、もしくはそれと高度な相同性を持たない、または天然に存在しない残基（例えば、ヌクレオチドアナログ）を含む、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、天然に存在しないポリペプチドまたは断片は、適切に整列された場合の天然配列と比較して、９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％以下またはさらに低いアミノ酸配列同一性を共有することができる。
用語「親水性」および「疎水性」は、物質が有する水との親和性の程度を指す。親水性物質は、水に対し強い親和性を有し、水に溶解する、水と混合する、または水で湿る傾向がある一方、疎水性物質は、水に対し親和性を実質的に欠き、水をはじき吸収しない傾向があり、水に溶解しないまたは水と混合しないまたは水で湿らない傾向がある。アミノ酸は、その疎水性に基づき特徴付けることができる。多数の尺度が開発された。一例は、Ｈｏｐｐ， ＴＰら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ（１９８１年）７８巻：３８２４頁に収載されているＬｅｖｉｔｔ， Ｍら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（１９７６年）１０４巻：５９頁によって開発された尺度である。「親水性アミノ酸」の例は、アルギニン、リジン、スレオニン、アラニン、アスパラギンおよびグルタミンである。親水性アミノ酸アスパラギン酸、グルタミン酸およびセリンならびにグリシンが特に興味深い。「疎水性アミノ酸」の例は、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、メチオニン、ロイシン、イソロイシンおよびバリンである。
タンパク質に適用される場合の「断片」は、治療および／または生物学的活性の少なくとも部分を保持していても保持していなくてもよい、ネイティブな生物学的に活性なタンパク質の切断型である。タンパク質に適用される場合の「バリアント」は、生物学的に活性なタンパク質の治療および／または生物学的活性の少なくとも部分を保持するネイティブな生物学的に活性なタンパク質に対し配列相同性を有するタンパク質である。例えば、バリアントタンパク質は、参照の生物学的に活性なタンパク質と比較して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％アミノ酸配列同一性を共有することができる。本明細書において、用語「生物学的に活性なタンパク質部分」は、例えば、部位特異的変異誘発、コード遺伝子の合成、挿入によって計画的に、または変異により偶発的に修飾されたタンパク質を含む。
ポリペプチドの文脈において、「直鎖状配列」または「配列」は、アミノからカルボキシル末端への方向でのポリペプチドにおけるアミノ酸の順序であり、この場合、配列において互いに隣接する残基は、ポリペプチドの一次構造において近接している。「部分的配列」は、一方向または両方向で追加的な残基を含むことが公知のポリペプチドの一部の直鎖状配列である。
「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１個の抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等、標的へ特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書において、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体のみならず、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ等）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質（ドメイン抗体等）、および抗原認識部位を含む他のいずれかの修飾された構成の免疫グロブリン分子も包含する。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそのサブクラス）等、いずれかのクラスの抗体を含み、抗体は、いずれか特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５種の主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらのうちいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、ｌｇＧ４、ｌｇＡ１およびｌｇＡ２へとさらに分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は周知である。
本明細書に提供される一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。本明細書において、「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。一般に、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対して指向される。さらに、様々な決定基（エピトープ）に指向される様々な抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原における単一の決定基に対して指向される。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるものとしての抗体の特徴を示し、いずれか特定の方法による抗体の産生を要求するものとして解釈するべきではない。例えば、本開示に従って使用されるべきモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製することができる、または米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているもの等の組換えＤＮＡ方法によって作製することができる。モノクローナル抗体は、例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁に記載されている技法を使用して作製されたファージライブラリーから単離することもできる。
本明細書に提供される一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。本明細書において、「ヒト化」抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、特異的キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列等）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。殆どの部分に関して、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、このレシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基は、所望の特異性、親和性および生物学的活性を有する、マウス、ラットまたはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置き換えられている。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも存在しないが、抗体性能をさらに洗練および最適化するために含まれる残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメインの実質的に全てを含み、この可変ドメインにおいて、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体は最適には、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも部分も含むであろう。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されている修飾されたＦｃ領域を有することができる。他の形態のヒト化抗体は、本来の抗体に関して変更された１個または複数のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有し、これは、本来の抗体由来の１個または複数のＣＤＲ「に由来する」１個または複数のＣＤＲとも命名される。
本明細書に提供される一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。本明細書において、「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味し、および／または当技術分野で公知のもしくは本発明のヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製されている。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１個のヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１個のヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。斯かる一例は、マウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技法を使用して産生することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、該ファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：３０９〜３１４頁；Ｓｈｅｅｔｓら、１９９８年、ＰＮＡＳ， （ＵＳＡ）９５巻：６１５７〜６１６２頁；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１頁；Ｍａｒｋｓら、１９９１年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１頁）。ヒト抗体は、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されたトランスジェニック動物、例えば、マウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することにより作製することもできる。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号に記載されている。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化することにより調製することができる（斯かるＢリンパ球は、個体から回収することができ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫化されていてよい）。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５年）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、１９９１年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻（１号）：８６〜９５頁；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、いずれかの長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはこれらのアナログ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに取り込むことができるいずれかの基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびそのアナログ等、修飾ヌクレオチドを含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーのアセンブリーの前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、標識構成成分とのコンジュゲーションによる等、重合後にさらに修飾することができる。他の種類の修飾は、例えば、「キャップ」、例えば、無電荷連結（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄａｔｅ）、カルバメート等）および荷電連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）を有するもの、例えばタンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ（ｐｌｙ）Ｌ−リジン等）等のペンダント部分を含有するもの、挿入剤（例えば、アクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレーター（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属等）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修飾連結（例えば、アルファアノマー核酸等）を有するもの、ならびに無修飾形態のポリヌクレオチド（複数可）等、アナログ、ヌクレオチド間修飾による天然に存在するヌクレオチドの１個または複数の置換を含む。さらに、糖に通常存在するヒドロキシル基のいずれかは、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置き換えられ、標準保護基によって保護することも、もしくは活性化して、追加的なヌクレオチドへの追加的な連結を調製することができる、または固体支持体にコンジュゲートすることができる。５’および３’末端ＯＨは、リン酸化され得る、または１〜２０個の炭素原子のアミンもしくは有機キャッピング基部分で置換され得る。他のヒドロキシルを、標準保護基へと誘導体化することもできる。ポリヌクレオチドは、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環糖アナログ、α−アノマー糖、アラビノース、キシロースまたはリキソース等のエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログ、およびメチルリボシド等の脱塩基ヌクレオシドアナログを含む、一般に当技術分野で公知の類似形態のリボースまたはデオキシリボース糖を含有することもできる。１個または複数のホスホジエステル連結を代替連結基によって置き換えることができる。これらの代替連結基として、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）」）（式中、各ＲまたはＲ’が独立して、Ｈまたはエーテル（−Ｏ−）連結を任意選択で含有する置換もしくは未置換アルキル（１〜２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）である）によって置き換えられた実施形態が挙げられるがこれらに限定されない。ポリヌクレオチドにおける全ての連結が、同一である必要がある訳ではない。先行する記載は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含む、本明細書で参照される全ポリヌクレオチドに当てはまる。
抗体の「可変領域」は、単独でのまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても公知の３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４個のフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲによってごく近接して一体に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２種の技法が存在する：（１）異種間配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、１９９１年、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ））；および（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）Ｊ． Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ．２７３巻：９２７〜９４８頁））。本明細書において、ＣＤＲは、いずれか一方のアプローチまたは両方のアプローチの組み合わせによって定義されるＣＤＲを指すことができる。
抗体の「定常領域」は、単独でのまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
抗体またはポリペプチドに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書において互換的に使用）エピトープは、当技術分野で十分に理解された用語であり、斯かる特異的または優先的結合を決定するための方法も当技術分野で周知である。分子は、代替細胞または物質よりも高頻度で、より迅速に、より優れた持続時間でおよび／または、より優れた親和性で特定の細胞または物質と反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われている。抗体は、他の物質に結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより優れた持続時間で結合する場合、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＩＬ−６Ｒエピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、他のＩＬ−６Ｒエピトープまたは非ＩＬ６Ｒエピトープに結合するよりも優れた親和性、アビディティーで、より容易に、および／またはより優れた持続時間で、このエピトープに結合する抗体である。さらに別の例として、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または他の部分）は、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合してもしなくてもよい。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を必ずしも要求しない（これを含み得るが）。一般に、ただし必ずそうとは限らないが、結合の参照は、優先的結合を意味する。
「宿主細胞」は、外来性ポリヌクレオチドを含むベクター（複数可）のレシピエントであり得るまたはそうであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然、偶発的または計画的変異により、本来の親細胞と必ずしも完全に同一でなくてよい（形態またはゲノムＤＮＡ総量（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）において）。宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチド（複数可）をｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトした細胞を含む。
用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、位置Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端へと伸びるものと定義される。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同様のＥＵ指標のナンバリングである。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１年。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に、２個の定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３を含む。
本明細書において、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。好まれるＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好まれるＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲであり（ガンマ受容体）、これらの受容体のアレルバリアントおよび選択的スプライス型を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、その細胞質ドメインが主に異なる同様のアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、１９９１年、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９巻：４５７〜９２頁；Ｃａｐｅｌら、１９９４年、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４巻：２５〜３４頁；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、１９９５年、Ｊ． Ｌａｂ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ．、１２６巻：３３０〜４１頁に概説されている。「ＦｃＲ」は、胎児への母体ＩｇＧの移行の原因となる新生児受容体ＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒら、１９７６年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７巻：５８７頁；およびＫｉｍら、１９９４年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：２４９頁）。
「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、同族抗原と複合体形成した分子（例えば、抗体）への補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）の結合によって惹起される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載されているＣＤＣアッセイを行うことができる。
「機能的Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域の少なくとも１種のエフェクター機能を保有する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節等を含む。斯かるエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを要求し、斯かる抗体エフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。
「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、自然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１個のアミノ酸修飾によってネイティブ配列Ｆｃ領域とは異なるアミノ酸配列を含むが、ネイティブ配列Ｆｃ領域の少なくとも１種のエフェクター機能を保持する。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、ネイティブ配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域における、少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、約１〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列Ｆｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％配列同一性を保有し、最も好ましくは、それと少なくとも約９０％配列同一性、より好ましくは、それと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％配列同一性を保有するであろう。
本明細書において、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）が、標的細胞における結合した抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているもの等、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを使用して評価することができる。斯かるアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞を含む。それに代えてまたはその上、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８年、ＰＮＡＳ （ＵＳＡ）、９５巻：６５２〜６５６頁に開示されているもの等の動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで評価することができる。
後述する通り最大一致のために整列した場合に２種の配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が同じである場合、２種のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、「同一」であると言われる。２種の配列の間の比較は典型的に、比較ウィンドウにわたって配列を比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することにより行われる。
比較のための配列の最適整列は、デフォルトパラメータを使用した、バイオインフォマティクスソフトウェアのＬａｓｅｒｇｅｎｅ一式におけるＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して行うことができる。このプログラムは、次の参考文献に記載されているいくつかの整列スキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ， Ｍ．Ｏ．（１９７８年）Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ − Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．、Ｄａｙｈｏｆｆ， Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ内、５巻、追補３号、３４５〜３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０年、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６〜６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ， Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ， Ｐ．Ｍ．、１９８９年、ＣＡＢＩＯＳ ５巻：１５１〜１５３頁；Ｍｙｅｒｓ， Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８年、ＣＡＢＩＯＳ ４巻：１１〜１７頁；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ， Ｅ．Ｄ．、１９７１年、Ｃｏｍｂ． Ｔｈｅｏｒ．１１巻：１０５頁；Ｓａｎｔｏｕ， Ｎ．， Ｎｅｓ， Ｍ．、１９８７年、Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． Ｅｖｏｌ．、４巻：４０６〜４２５頁；Ｓｎｅａｔｈ， Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ， Ｒ．Ｒ．、１９７３年、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ， Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ， Ｄ．Ｊ．、１９８３年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８０巻：７２６〜７３０頁。デフォルトパラメータの使用による等、配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）の評価に使用することもできるＢＬＡＳＴアルゴリズムが挙げられるがこれに限定されない、代替整列プログラムを利用することができる。
好ましくは、「配列同一性のパーセンテージ」は、比較のウィンドウ（例えば、少なくとも２０位置の）にわたって２種の最適に整列された配列を比較することにより決定され、比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２種の配列の最適整列のために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセントまたはそれに満たない（例えば、５〜１５パーセントまたは１０〜１２パーセントの）ギャップ等、付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含むことができる。パーセンテージは典型的に、両方の配列において同一核酸塩基またはアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を参照配列における位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で割り、この結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることにより計算される。
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物として、家畜、狩猟用動物（ｓｐｏｒｔ ａｎｉｍａｌ）、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットも挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「ベクター」は、宿主細胞に１種または複数の目的の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達し、好ましくはこれを宿主細胞で発現させることができる構築物を意味する。ベクターの例として、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に会合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに被包されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、ならびに産生用細胞等のある特定の真核細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
用語「有効量」または「治療有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な薬剤の量を指す。治療有効量は、次のうち１種または複数に応じて変動し得る：当業者であれば容易に決定することができる、処置されている対象および疾患状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与の様式その他。活性薬剤の有効量は、単一用量または複数用量で投与することができる。構成成分は、本明細書に記載されているいずれか等、特定の目標または目的に関連付けられた量等、少なくとも有効量、または少なくとも所望の結果の産生に有効な量を有すると本明細書に記載することができる。
用語「有効量」は、適切なイメージング方法による検出のための画像をもたらすであろう用量にも適用される。具体的な用量は、次のうち１種または複数に応じて変動し得る：選択された特定の薬剤、従うべき投薬レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるか否か、投与のタイミング、イメージングされる組織、およびこれを運ぶ物理的送達系。
本明細書において、「薬学的に許容される担体」または「許容される薬学的賦形剤」は、活性成分と組み合わされたときに、この成分が生物学的活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である、いずれかの材料を含む。例として、リン酸緩衝食塩水溶液、水、油／水エマルション等のエマルション、および様々な種類の湿潤剤等、標準薬学的担体のいずれかが挙げられるがこれらに限定されない。エアロゾルまたは非経口的投与に好まれる希釈剤は、リン酸緩衝食塩水または通常の（ｎｏｒｍａｌ）（０．９％）食塩水である。斯かる担体を含む組成物は、周知の従来方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ． Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９０年；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００年を参照）。
抗体
本開示は、ＩＬ−６Ｒに結合することができる抗体、その使用およびこれを作製する方法を提供する。一態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）重鎖は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、または配列番号８９の重鎖および配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号９０の軽鎖を含む抗体に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；（ｃ）軽鎖は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｄ）重鎖は、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み；（ｅ）軽鎖は、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含み；（ｆ）重鎖は、配列番号１に関する１個または複数の変異を含み、残基５７は、メチオニン（Ｍ）へと変異され；（ｇ）抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有し；（ｈ）抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｉ）抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｊ）抗体は、ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて０．０３２μｇ／ｍＬまたはそれに満たない濃度で、７２時間後にＤＳ−１細胞の増殖を少なくとも４０％阻害し；（ｋ）抗体は、ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて決定される場合、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体のＩＣ５０よりも低いＩＣ５０によってＤＳ−１細胞の増殖を阻害し；（ｌ）抗体は、ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて決定される場合、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体のＩＣ５０よりも低いＩＣ５０によってＤＳ−１細胞の増殖を阻害し；（ｍ）抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体のｐＨ依存性よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有し、ｐＨ依存性は、ｐＨ７．４におけるＩＬ−６Ｒに対する結合親和性と、ｐＨ６．０におけるＩＬ−６Ｒに対する結合親和性との間の比として定義され；（ｎ）（１）配列番号３および配列番号４および／または（２）配列番号１および配列番号２を含有しない；あるいは（ｏ）これらの任意の組み合わせである。
別の態様では、本開示は、抗体を提供し、抗体は、（ａ）重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有し；（ｃ）（ａ）配列番号３および配列番号４ならびに（ｂ）配列番号１および配列番号２を含有しない。
さらに別の態様では、本開示は、抗体を提供し、抗体は、（ａ）重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性（ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するアミノ酸配列を含み；（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｃ）配列番号３および配列番号４を含有しない。
またさらに別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；（ｂ）抗体は、ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて０．０３２μｇ／ｍＬまたはそれに満たない濃度で、７２時間後にＤＳ−１細胞の増殖を少なくとも４０％阻害する。
またさらに別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）重鎖は、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み；および／または（ｂ）軽鎖は、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含み；（ｃ）抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、または配列番号８９の重鎖および配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号９０の軽鎖を含む抗体に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
またさらに別の態様では、本開示は、重鎖および軽鎖を含む抗体を提供し、（ａ）重鎖は、配列番号１に関する１個または複数の変異を含み、残基５７は、メチオニン（Ｍ）へと変異され；（ｂ）軽鎖は、配列番号４もしくは配列番号２またはその両方に対して少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；（ｃ）抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６Ｒに対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。
配列同一性
本明細書で同定されるアミノ酸配列に関する配列同一性は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して、最大パーセント配列同一性を達成した後に、第２の参照ポリペプチド配列またはその部分のアミノ酸残基と同一であり、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮しない、問い合わせ配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的での整列は、当業者の技量の範囲内の様々な仕方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等、公開されているコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたる最大整列の達成に必要ないずれかのアルゴリズムを含む、整列の測定に適切なパラメータを決定することができる。パーセント同一性は、定義されるポリペプチド配列全体の長さにわたって測定することができる、またはより短い長さ、例えば、より大きい定義されるポリペプチド配列から得られた断片、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０もしくは少なくとも１５０個の近接する残基の断片の長さにわたって測定することができる。斯かる長さは、単に例示的であり、表、図または配列表において本明細書に示す配列によって支持されるいかなる断片長を使用して、パーセンテージ同一性を測定することができる長さを表してよいことが理解される。一部の実施形態では、パーセント同一性は、本明細書に提供される配列等、記述されている参照配列の全長に関して決定される。例えば、本開示の２種のアミノ酸配列（またはそのより短い長さ）の間の配列比較は、Ｎａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によってオンラインで提供されるコンピュータプログラムＢｌａｓｔｐ（タンパク質−タンパク質ＢＬＡＳＴ）によって行うことができる。所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのパーセンテージアミノ酸配列同一性（これはあるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対してある特定の％アミノ酸配列同一性を有する所与のアミノ酸配列Ａとして表現することができる）は、次式によって計算される：
（式中、Ｘは、配列整列プログラムＢＬＡＳＴによって、ＡおよびＢの該プログラムの整列において同一マッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、ＡまたはＢのどちらか短い方におけるアミノ酸残基の総数である）。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される参照に対して高度な配列同一性を示す重鎖、および／または配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して高度な配列同一性を示す軽鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９、ならびに配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０に例証されている重鎖および軽鎖の任意の組み合わせが本明細書に具体化されている。
本明細書に提供される一部の実施形態では、抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、または配列番号８９の重鎖および配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号９０の軽鎖を含む抗体に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２６の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号４の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２６の配列に対して７０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、８５％を超える、９０％を超える、９５％を超える、９６％を超える、９７％を超える、９８％を超える、９９％を超える、９９．５％を超えるおよび１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号４の配列に対して７０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、８５％を超える、９０％を超える、９５％を超える、９６％を超える、９７％を超える、９８％を超える、９９％を超える、９９．５％を超えるおよび１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２８の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号４の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２８の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、ならびに配列番号４の配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３および配列番号４を含有しない。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１および配列番号２を含有しない。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、（ａ）配列番号３および配列番号４ならびに（ｂ）配列番号１および配列番号２を含有しない。
変異
本明細書に提供される一部の実施形態では、本明細書に記載されている対象抗体は、参照配列に関する１個または複数の変異を有することができる。変異は、アミノ酸残基に対する欠失、挿入もしくは付加、または置き換えもしくは置換であり得る。「欠失」は、１個または複数のアミノ酸残基の非存在によるアミノ酸配列の変化を指す。「挿入」または「付加」は、参照配列と比較して１個または複数のアミノ酸残基の付加をもたらすアミノ酸配列の変化を指す。「置き換え」または「置換」は、異なるアミノ酸による１個または複数のアミノ酸の置き換えを指す。本開示の文脈において、参照配列に関する対象抗体またはその一部の変異は、参照配列と対象抗体またはその一部との比較によって決定することができる。比較のための配列の最適整列は、当技術分野の公知方法のいずれかに従って行うことができる。
変異は、変異部位によって同定することができる。変異部位は、欠失、付加または置換が起こる、参照配列における位置である。参照配列におけるアミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端へとナンバリングされ、変異部位は、欠失、付加または置換が起こるアミノ酸残基のナンバリングである。例えば、参照配列における位置２６は、Ｎ末端から開始して２６番目のアミノ酸残基が位置する位置である。
本開示の文脈において、特異的位置における１個の変異は、参照配列における、特異的位置における１個のアミノ酸残基の欠失、特異的位置におけるあるアミノ酸残基の別のアミノ酸残基による置換、または特異的位置および特異的位置の後の位置の間への（または特異的位置におけるアミノ酸残基が最後のアミノ酸残基である場合は特異的位置の後への）１個もしくは複数のアミノ酸残基の付加を意味するよう意図される。
参照配列に関する変異を記載する目的のため、一文字アミノ酸コードを使用することができる。この点において、例えば、対象抗体が、参照配列に関する「Ｇ２６Ｉ」と記載することができる、位置２６におけるＧからＩへの変異を含むと言われる場合、参照配列によるとグリシン（Ｇ）残基である２６番目のアミノ酸残基が、対象抗体またはその一部ではアラニン残基によって置換されていることを意味するよう意図される。本開示の文脈において、例えば、対象抗体が、参照配列に関する「Ｇ２６ｄｅｌ」と記載することができる、位置２６におけるグリシン（Ｇ）残基の欠失を含むと言われる場合、参照配列によるとグリシン（Ｇ）残基である２６番目のアミノ酸残基が、対象抗体またはその一部には存在しないことを意味するよう意図される。本開示の文脈において、例えば、対象抗体が、「Ｇ２６＿ｉｎｓ」に続く付加されたアミノ酸残基のリストで記載することができる、位置２６のグリシン（Ｇ）残基の後に１個または複数のアミノ酸残基の付加を含むと言われる場合、収載されている１個または複数のアミノ酸残基が、グリシン（Ｇ）である２６番目のアミノ酸残基および２７番目のアミノ酸の間に、または（参照配列による２６番目のアミノ酸残基が最後のアミノ酸残基である場合）グリシン（Ｇ）である２６番目のアミノ酸残基の後に付加されていることを意味するよう意図される。
一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、Ｆｖフレームワーク領域（ＦＲ）のうち１個もしくは複数および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）のうち１個もしくは複数に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３または４個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうち１、２または３個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３または４個に位置する１個または複数の変異、ならびにＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうち１、２または３個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＣＤＲ２、ＨＦＲ３、ＨＣＤＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３、４、５または６個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＦＲ３、ＨＣＤＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３、４または５個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３または４個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２、３または４個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＦＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうち１、２または３個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＨＦＲ４のうち１、２または３個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の重鎖は、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３のうち１または２個に位置する１個または複数の変異を含む。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれよりも多い変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置２５、４８、５１、５７、５８、５９、６９、７１、９９、１０３、１０６、１０８、１１６、１１９、１２３、１３６および２０９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置２５、５１、５７、５８、５９、６９、７１、９９、１０３、１０６、１０８、１１６、１１９、１２３、１３６および２０９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置２５、５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６、１０８、１１６、１１９、１２３、１３６および２０９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６、１０８、１１６、１１９、１２３、１３６および２０９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６、１０８、１１６、１１９、１２３、１３６および２０９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置２５、５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６、１０８、１１６および１１９における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置２５、５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６および１０８における１、２、３、４、５、６、７、８、９個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置５１、５７、５８、５９、９９、１０３、１０６および１０８における１、２、３、４、５、６、７個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置５１、５７、９９、１０３、１０６および１０８における１、２、３、４、５個またはそれよりも多い変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖の位置５１、５７、９９および１０３における１、２、３個またはそれよりも多い変異を含む。
一部の実施形態では、対象抗体は、Ｙ５１Ｆ、Ｙ５１Ｗ、Ｙ５１Ｋ、Ｙ５１ＲまたはＹ５１Ｈ；Ｉ５７Ｍ；Ｔ５８Ｉ；Ｐ６２Ａ；Ｔ６９Ｓ；Ｌ７１Ｖ；Ｓ９９Ｃ、Ｓ９９ＴまたはＳ９９Ｎ；Ｔ１０３Ｉ、Ｔ１０３Ａ、Ｔ１０３Ｇ、Ｔ１０３Ｌ、Ｔ１０３Ｍ、Ｔ１０３ＹまたはＴ１０３Ｒ；Ｍ１０６Ｉ；Ｙ１０８Ｆ；Ｔ１１６Ｉ；Ｓ１１９Ａ；Ｋ１２３Ｅ；Ｓ１３６Ｎ；およびＳ２０９Ｇから選択される、配列番号１に関する重鎖における１、２、３、４、５個またはそれよりも多い変異を含む。一部の実施形態では、対象抗体は、Ｙ５１Ｆ；Ｉ５７Ｍ；Ｔ５８Ｉ；Ｓ９９Ｃ；Ｔ１０３Ｉ；Ｍ１０６Ｉ；およびＹ１０８Ｆから選択される、配列番号１に関する重鎖における１、２、３、４、５個またはそれよりも多い変異を含む。一部の実施形態では、対象抗体は、Ｙ５１Ｆ；Ｉ５７Ｍ；Ｓ９９Ｃ；Ｔ１０３Ｉ；Ｍ１０６Ｉ；およびＹ１０８Ｆから選択される、配列番号１に関する重鎖における１、２、３、４個またはそれよりも多い変異を含む。
さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における変異Ｉ５７Ｍを含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する変異Ｔ５８Ｉを含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における変異Ｓ９９ＣまたはＳ９９Ｔを含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における変異Ｔ１０３Ｍ、Ｔ１０３Ｉ、Ｔ１０３Ｇ、Ｔ１０３Ｌ、Ｔ１０３ＹまたはＴ１０３Ｒを含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する変異Ｍ１０６Ｉを含む。さらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における変異Ｙ１０８Ｆを含む。
またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｔ５８Ｉ、Ｓ９９ＣおよびＴ１０３Ｉを含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９Ｃ、Ｔ１０３ＩおよびＴ１１６Ｉを含む。またさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＣおよびＴ１０３Ｉを含む。なおさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＴおよびＴ１０３Ｉを含む。またなおさらなる実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＮおよびＴ１０３Ｉを含む。
一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号２に関する軽鎖における１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、ＣＤＲのうち１個または複数に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のうち１、２または３個に位置する１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、ＬＣＤＲ１に１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、ＬＣＤＲ２に１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、ＬＣＤＲ３に１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は配列番号２に関して変異を含まない。
一部の実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する位置２７、３３、５０、５５、５６、８９、９２、９３および９７に１、２、３、４個またはそれよりも多い変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する位置５０、５５、５６、８９、９２、９３および９７に１、２、３、４個またはそれよりも多い変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する位置８９、９２、９３および９７に１、２、３個またはそれよりも多い変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する位置８９および９３に変異を含む。
一部の実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関するＱ２７Ｈ；Ｌ３３Ｐ；Ｙ５０Ｓ；Ｈ５５Ｙ、Ｈ５５ＱまたはＨ５５Ｒ；Ｓ５６Ｐ；Ｑ８９ＧまたはＱ８９Ｋ；Ｎ９２Ｄ；Ｔ９３Ｒ；およびＴ９７Ｎから選択される１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関するＹ５０Ｓ；Ｈ５５Ｙ、Ｈ５５ＱまたはＨ５５Ｒ；Ｓ５６Ｐ；Ｑ８９ＧまたはＱ８９Ｋ；Ｎ９２Ｄ；Ｔ９３Ｒ；およびＴ９７Ｎから選択される１個または複数の変異を含む。さらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関するＱ８９ＧまたはＱ８９Ｋ；Ｎ９２Ｄ；Ｔ９３Ｒ；およびＴ９７Ｎから選択される１個または複数の変異を含む。またさらなる実施形態では、対象抗体の軽鎖は、配列番号２に関する変異（ｉ）Ｑ８９ＧまたはＱ８９Ｋおよび（ｉｉ）Ｎ９２Ｄを含む。
一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１に関する重鎖における１個または複数の変異および配列番号２に関する軽鎖における１個または複数の変異を含む。この目的のため、重鎖における変異パターンおよび軽鎖における変異パターンは、いずれか望ましい様式で組み合わせることができる。
一部の実施形態では、対象抗体は、次の、１＃、２＃、３＃、５＃、６＃、７＃、８＃、９＃、１１＃、１２＃、１３＃、１４＃、１５＃、１６＃、１７＃、１８＃、２０＃、２４＃、２６＃、２７＃、２８＃、２９＃、３０＃、３１＃、３５＃、４５＃、４９＃、５０＃、５１＃、５６＃、５７＃、５８＃、６０＃、６１＃、６２＃、６４＃、６６＃、６８＃、２０１＃、２０２＃、２０３＃、２０４＃、２０５＃、２０６＃、２０８＃、５２＃、５４＃、５５＃、５９＃、６９＃、２０９＃、２１４＃、２１５＃、２１６＃、２１７＃、２１８＃、２１９＃、２２０＃、２２１＃、２２２＃、２２３＃、２２４＃、２２５＃、２２６＃、２２７＃、２２８＃、２２９＃、２３０＃、２３１＃、２３２＃、２３３＃、２３４＃、２３５＃、２３６＃、２３７＃、２３８＃、２３９＃、２４０＃、２４１＃、２４２＃、２４３＃、２４４＃、２４５＃、２４６＃、２４７＃、２４８＃、２４９＃、２５０＃、２５１＃、２５２＃、２５３＃、２５４＃、２５５＃、２５６＃、２５７＃、２５８＃、２５９＃、２６０＃、２６１＃、２６２＃、２６３＃、２６４＃、２６５＃および２６６＃のうちいずれか１種であり得る。
対象抗体は典型的に、ＩＬ−６受容体に対する高い結合親和性を示す。一部の実施形態では、ＩＬ−６受容体は、ヒトＩＬ−６Ｒである。本明細書に提供される一部の実施形態では、ＩＬ−６受容体は、配列番号９１のアミノ酸配列を有する。
溶液中のまたはアレイに固定化されたＩＬ−６Ｒに対する分子の結合親和性は、当技術分野で公知の検出技法を使用して検出することができる。斯かる技法の例として、競合的結合アッセイおよびサンドイッチアッセイ等の免疫学的技法；共焦点スキャナ、共焦点顕微鏡またはＣＣＤに基づくシステム等の機器を使用した蛍光検出、および蛍光、蛍光偏光（ＦＰ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、全反射照明蛍光（ＴＩＲＦ）、蛍光相関分光法（ＦＣＳ）等の技法；比色／分光測定技法；表面に吸着された材料の質量の変化が測定される、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）；従来の放射性同位元素結合およびシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を含む、放射性同位元素を使用した技法；マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ）およびＭＡＬＤＩ−飛行時間型（ＴＯＦ）質量分析等の質量分析；タンパク質フィルムの厚さを測定する光学的方法である楕円偏光法；表面に吸着する材料の質量を測定するための超高感度方法である、水晶振動子マイクロバランス（ＱＣＭ）；原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）、走査フォース顕微鏡（ＳＦＭ）または走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）等の走査型プローブ顕微鏡；ならびに電気化学的、インピーダンス、音響、マイクロ波およびＩＲ／ラマン検出等の技法が挙げられる。例えば、これらのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み込む、Ｍｅｒｅ Ｌら「Ｍｉｎｉａｔｕｒｉｚｅｄ ＦＲＥＴ ａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ： ｋｅｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｆｏｒ ｕｌｔｒａ−ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ」Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ４巻（８号）：３６３〜３６９頁（１９９９年）およびそこに引用されている参考文献；Ｌａｋｏｗｉｃｚ Ｊ Ｒ、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ、第２版、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ（１９９９年）またはＪａｉｎ ＫＫ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｏｍｉｃｓ， Ｐｈａｒｍａｃｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ， ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｂｏｄｙ Ｆｌｕｉｄｓ．：Ｔｈｏｎｇｂｏｏｎｋｅｒｄ Ｖ編（ｅｄ．， ｅｄ．）Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂｏｄｙ Ｆｌｕｉｄｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．、１巻内：Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、２００７年を参照されたい。
本明細書に提供される一部の実施形態では、ＩＬ−６Ｒに対する対象抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定される。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ ＩＬ）を使用して、対象抗体の結合親和性を測定することができる。例示的なＳＰＲ解析システムとして、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００またはＢｉａｃｏｒｅ ４０００機器、および商業的センサーチップシリーズが挙げられるがこれらに限定されない。Ｂｉａｃｏｒｅシステムの代表的な適用において、ある範囲の分析物濃度にわたる時間関数として相互作用をモニターし、次いで全データセットを、相互作用を記載する数学的モデルに適合させることにより、相互作用動態が解析される。会合相（試料注射中）は、会合および解離過程の両方に関する情報を含有するが、解離相（バッファー流動が、解離した分析物分子を除去する、試料注射後）では解離のみが発生する。当業者であれば、製造業者のマニュアルに従った結合親和性アッセイの実行に適切なパラメータおよび／または条件を選択または決定することができる。一部の実施形態では、対象抗体の結合親和性は、３７℃で表面プラズモン共鳴によって決定される。
ＩＬ−６受容体に対する対象抗体の結合親和性は、ｋａ、ｋｄまたはＫＤによって特徴付けることができる。用語「ｋａ」は、本明細書において、抗原への抗体の会合の速度定数を指すように意図される。用語「ｋｄ」は、本明細書において、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指すように意図される。用語「ＫＤ」は、本明細書において、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すように意図される。本開示の目的のため、ＫＤは、２種の動態速度定数の比ｋａ／ｋｄとして定義される。平衡解離定数が小さいほど、対象抗体およびＩＬ−６Ｒは互いに緊密に結合する。生物学的系において、優れた特異的結合剤は典型的に、１０−９〜１０−７Ｍの範囲内の解離定数を有する。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０５ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００５ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、ＩＬ−６Ｒは、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性の少なくとも２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００または１０００倍の、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。
本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性に匹敵する、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。本明細書に提供される一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性の少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、１００倍の、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。
一部の実施形態では、対象抗体の結合は、ｐＨ依存性を有する。本開示の文脈において、ｐＨ依存性は、ｐＨ７．４におけるＩＬ−６Ｒに対する結合親和性と、ｐＨ６．０におけるＩＬ−６Ｒに対する結合親和性との間の比として定義される。ｐＨ依存性は、ｐＨ７．４からｐＨ６．０への結合親和性の減少倍率、またはｐＨ７．４からｐＨ６．０への結合親和性の増加倍率の形態であり得る。一部の実施形態では、ｐＨ依存性は、ｐＨ６．０におけるＫＤ値と、ｐＨ７．４におけるＫＤ値との間の比として計算され、ｐＨ依存性、すなわち、比は、ｐＨ７．４からｐＨ６．０への親和性減少倍率を示す。本明細書に記載されている対象抗体のｐＨ依存性が、１を超える場合、これは、抗体が、ｐＨ７．４におけるＩＬ−６Ｒへのその結合がｐＨ６．０におけるよりも高いようなｐＨ依存性様式で、ＩＬ−６Ｒに結合することを意味する。本明細書に記載されている対象抗体のｐＨ依存性が、１よりも低い場合、これは、抗体が、ｐＨ６．０におけるＩＬ−６Ｒへのその結合がｐＨ７．４におけるよりも高いようなｐＨ依存性様式で、ＩＬ−６Ｒに結合することを意味する。結合を中性条件下で維持するが、酸性条件下で有意に低下させる能力は、酸性条件における抗原からの対象抗体の解離を可能にし、これにより、リソソームによる分解を回避し、プラズマへと戻り、そこで、再度抗原に結合することができる。斯かるｐＨ依存性結合パターンを有する対象抗体は、ｐＨ非依存的機序で結合するその対応物と比べて、抗原中和およびクリアランスの観点から優れた特性を有する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される対象抗体は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０またはそれよりも多い等、１よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有する。一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体よりも高い、ＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有する。一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍の、ＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有する。一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体よりも高い、ＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有する。一部の実施形態では、対象抗体は、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍の、ＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有する。
一部の実施形態では、対象抗体は、そのＩＬ−６受容体に対し阻害活性を示す。ＩＬ−６受容体の阻害は、下流バイオマーカーまたは細胞増殖を測定することにより評価することができる。ＩＬ−６受容体に対する対象抗体の阻害活性は、ＤＳ−１細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ １１１０２）増殖によって評価することができる。図１に示す通り、ＤＳ−１細胞増殖は、ＩＬ−６ＲへのＩＬ−６の結合およびその後の細胞シグナリング経路活性化に依存する。ＩＬ−６Ｒへの本明細書に提供される対象抗体の結合は、利用できるＩＬ−６Ｒの量を低下させ、よって、ＤＳ−１細胞増殖の阻害に相関する。
ＤＮＡ合成細胞増殖アッセイ、代謝性細胞増殖アッセイ、増殖マーカーを検出するアッセイ、およびＡＴＰ濃度を測定するアッセイが挙げられるがこれらに限定されない、異なる種類のアッセイが、細胞増殖の評価に利用できる。ＤＮＡ合成細胞増殖アッセイにおいて、増殖している細胞のＤＮＡは、放射性となるように標識され、標識を洗浄し、フィルターに接着し、次いでシンチレーションカウンターを使用して測定することができる。代謝性細胞増殖アッセイにおいて、代謝的に活性な細胞において還元され、ホルマザン色素を形成し、これがその後、培地の色を変化させる、ＭＴＴ、ＸＴＴ、ＭＴＳおよびＷＳＴ等、テトラゾリウム塩を使用することができる。増殖マーカーを検出するアッセイにおいて、モノクローナル抗体を使用して、Ｋｉ−６７、ＰＣＮＡ、トポイソメラーゼＩＩＢおよびホスホ−ヒストンＨ３等、細胞増殖および／または細胞周期調節の一般的マーカーを標的とすることができる。ＡＴＰ濃度の測定のため、酵素ルシフェラーゼおよびその基質ルシフェリンを使用して、ＡＴＰの生物発光に基づく検出を使用することができる。
ＭＴＳ細胞増殖アッセイを使用して、ＤＳ−１細胞の増殖を測定することができる。ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）は、フェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）の存在下で、発色したホルマザン産物を産生する。発色したホルマザン産物は、リン酸緩衝食塩水において４９０〜５００ｎｍで吸収最大を有し、この測定は、ＤＳ−１細胞の増殖の評価、よって、対象抗体の阻害活性の評価をもたらす。
一部の実施形態では、対象抗体は、少なくとも配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体と同じほど有効に、ＤＳ−１細胞の増殖を阻害する。さらなる実施形態では、対象抗体は、少なくとも配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体と同じほど有効に、ＤＳ−１細胞の増殖を阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている対象抗体は、０．５μｇ／ｍｌ、０．２５μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌ、０．０４μｇ／ｍｌ、０．０３５μｇ／ｍｌ、０．０３４μｇ／ｍｌ、０．０３３μｇ／ｍｌ、０．０３２μｇ／ｍｌ、０．０３１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．０２μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌまたはそれに満たない濃度において、ＤＳ−１細胞の増殖を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多く阻害する。
本明細書で具体化されている抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒトまたはヒト化抗体であり得る。用語「ヒト抗体」は、本明細書において、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むように意図される。さらに、抗体が、定常領域を含有する場合、定常領域も、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含むことができる（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるランダムもしくは部位特異的変異誘発またはｉｎ ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって導入された変異）。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むように意図されない。用語「ヒト化抗体」は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を指すように意図される。ヒトフレームワーク配列内に追加的なフレームワーク領域修飾が為されてよい。用語「キメラ抗体」は、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体等、可変領域配列がある１種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体を指すように意図される。
さらに、対象抗体は、いずれかのアイソタイプのものであり得る。アイソタイプの選択は典型的に、ＡＤＣＣ誘導等、所望のエフェクター機能によってガイドされるであろう。例示的なアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域のカッパーまたはラムダのいずれが使用されてもよい。所望であれば、抗体のクラスが公知方法によってスイッチされてよい。例えば、本来ＩｇＭであった抗体は、ＩｇＧ抗体へとクラススイッチされてよい。さらに、クラススイッチング技法を使用して、あるＩｇＧサブクラスを別のＩｇＧサブクラスへと、例えば、ＩｇＧ１からＩｇＧ２へと変換することができる。よって、本明細書に記載されている抗体のエフェクター機能は、様々な治療用途のため、アイソタイプスイッチングによって例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体へと変化させることができる。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
一部の実施形態では、本明細書に提供される対象抗体は、モノクローナル抗体である。対象抗体は、ハイブリドーマプロセスまたは組換えＤＮＡプロセスによって調製することができる。ハイブリドーマプロセスの典型例は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５年））の方法である。この方法の細胞融合ステップにおいて使用される抗体産生細胞は、抗原（ヒトＩＬ−６受容体、その部分的ペプチド、またはこれらを発現する細胞）で免疫化された動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、サル、ヤギ）の脾臓細胞、リンパ節細胞、末梢血白血球等である。抗原を、培養培地中で、免疫化されていない動物から先立って単離された上述の細胞またはリンパ球に作用させることにより得られる抗体産生細胞を使用することも可能である。骨髄腫細胞として、公に知られた様々な細胞系統を使用することができる。抗体産生細胞および骨髄腫細胞は、相互に融合可能であれば、異なる動物種に起源をもつことができる；しかし、同じ動物種起源のものであることが好ましい。例えば、ハイブリドーマは、抗原で免疫化したマウスから得られる脾臓細胞と、マウス骨髄腫細胞との間の細胞融合によって産生され、その後のスクリーニングにより、ヒトＩＬ−６Ｒに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる。ヒトＩＬ−６Ｒに対するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマの培養物によって、またはハイブリドーマを投与した哺乳動物の腹水から産生することができる。
一部の実施形態では、対象抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体の作製において、フレームワーク残基の選択は、高い結合親和性の保持において重大な意味を持ち得る。原則として、いずれかのＨｕＡｂ由来のフレームワーク配列は、ＣＤＲグラフトの鋳型として機能し得る；しかし、斯かるフレームワークへのストレートなＣＤＲ置き換えが、抗原に対する結合親和性の有意な損失をもたらし得ることが実証された。Ｇｌａｓｅｒら（１９９２年）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９巻：２６０６頁；Ｔｅｍｐｅｓｔら（１９９２年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９巻：２６６頁；およびＳｈａｌａｂｙら（１９９２年）Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．１７巻：２１７頁。本来のｍｕＡｂに対するＨｕＡｂの相同性が高いほど、ヒトフレームワークが、親和性を低下させ得る歪みをマウスＣＤＲに導入する可能性が低くなる。抗体配列データベースに対する配列相同性検索に基づき、ＨｕＡｂ ＩＣ４は、ｍｕＭ４ＴＳ．２２に対する優れたフレームワーク相同性をもたらすが、他の高度に相同なＨｕＡｂ、特に、ヒトサブグループＩ由来のカッパーＬ鎖またはヒトサブグループＩＩＩ由来のＨ鎖も同様に適するであろう。Ｋａｂａｔら（１９８７年）。ＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔら（１９８３年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１６８巻：５９５頁）等、様々なコンピュータプログラムが、Ｖ領域の理想的な配列の予測に利用できる。よって、本発明は、異なるＶ領域を有するＨｕＡｂを包含する。適したＶ領域配列を決定し、これらの配列を最適化することは、当業者の技量の範囲内である。低下した免疫原性を有する抗体を得るための方法は、米国特許第５，２７０，２０２号およびＥＰ６９９，７５５にも記載されている。
抗原に対する高い親和性および他の好都合な生物学的特性を保持しつつ、抗体がヒト化されることが重要である。この目標を達成するために、一例では、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用した、親配列および様々な概念的ヒト化産物の解析プロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、当業者が精通している。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性の高い三次元コンフォメーション構造を例証およびディスプレイするコンピュータプログラムを利用できる。このようなディスプレイの点検は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割、また、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響する残基の可能性のある役割の解析を可能にする。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性増加等、所望の抗体特徴が達成できるように、ＦＲ残基は、コンセンサスおよび移入配列から選択し組み合わせることができる。
一部の実施形態では、対象抗体またはその断片は、血清アルブミンに融合される。血清アルブミンへの融合は、本明細書に記載されている対象抗体の薬物動態を改善することができる。例えば、対象抗体またはその断片は、血清アルブミンと融合することができる。血清アルブミンは、哺乳動物における最も豊富な血液タンパク質である球状タンパク質である。血清アルブミンは、肝臓で産生され、血清タンパク質の約半分を構成する。これは、血液において単量体かつ可溶性である。一部の実施形態では、対象抗体またはその断片は、血清アルブミンに融合することができる。さらなる実施形態では、血清アルブミンは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片は、血清アルブミンへの結合活性を呈するアルブミン結合ペプチドに融合して、対象抗体またはその断片の半減期を増加させることができる。本明細書で使用することができるアルブミン結合ペプチドとして、例えば、Ｄｅｎｎｉｓら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２７７巻：３５０３５〜３５０４３頁、２００２年およびＭｉｙａｋａｗａら、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．１０２巻：３１１０〜３１１８頁、２０１３年に記載されているものが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片に遺伝学的に融合される。さらなる実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、化学的手段、例えば、化学的コンジュゲーションにより、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片に取り付けられている。一部の実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片のＮまたはＣ末端に融合することができる。アルブミン結合ペプチドのＣ末端は、ペプチド結合により、対象抗体のＮ末端に直接的に融合することができる。あるいは、アルブミン結合ペプチドのＮ末端は、ペプチド結合により、対象抗体またはその断片のＣ末端に直接的に融合することができる。さらなる実施形態では、アルブミン結合ペプチドのＣ末端のカルボン酸は、従来の化学的コンジュゲーション技法を使用して、対象抗体またはその断片の内部アミノ酸残基に融合することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片は、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に融合される。抗体またはその断片をペグ化して、例えば、抗体またはその断片の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させることができる。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片は典型的に、１個または複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に取り付けられる条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体等、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応される。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応により行われる。本明細書において、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミド等、他のタンパク質の誘導体化に使用されたＰＥＧの形態のいずれかを包含するように意図される。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４に開示されている方法等、タンパク質をペグ化するための方法を使用することができる。一部の実施形態では、ポリマー、例えば、ＰＥＧは、従来の化学的方法、例えば、化学的コンジュゲーションを使用して、ＮもしくはＣ末端または内部位置のいずれかに、本明細書に記載されている対象抗体またはその断片に共有結合により取り付けることができる。理論に制約されないが、ＰＥＧ部分は、本明細書に記載されている抗体に取り付けられると、水溶解度、溶液中の高移動度、毒性の欠如および低い免疫原性、循環寿命延長、安定性増加、身体からの容易なクリアランス、ならびに身体における分布変更に寄与し得る。
対象抗体またはその断片の血清半減期の増加に使用することができる他の半減期延長技術として、ＸＴＥＮ（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７巻：１１８６〜１１９２頁、２００９年）およびＡｌｂｕタグ（Ｔｒｕｓｓｅｌら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０巻：２２８６〜２２９２頁、２００９年）が挙げられるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、対象抗体またはその断片は、化学的に機能的な部分にコンジュゲートされる。典型的には、部分は、検出可能シグナルを産生することができる標識である。このようなコンジュゲートされた抗体またはその断片は、例えば、腫瘍負荷の定量化、ならびに転移巣のイメージングおよび腫瘍イメージング等の検出システムにおいて有用である。斯かる標識は、当技術分野で公知であり、そのようなものとして、放射性同位元素、酵素、蛍光化合物、化学発光化合物、生物発光化合物、基質補助因子および阻害剤が挙げられるがこれらに限定されない。斯かる標識の使用を記載する特許の例について、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号を参照されたい。部分は、本明細書に記載されている抗体またはその断片に共有結合により連結することができる、組換えにより連結することができる、または第２の抗体、プロテインＡもしくはビオチン−アビジン複合体等の二次試薬により、抗体またはその断片にコンジュゲートすることができる。
他の機能的部分は、シグナルペプチド、免疫的反応性を増強または低下させる薬剤、固体支持体へのカップリングを容易にする薬剤、ワクチン担体、生物応答修飾因子、常磁性標識および薬物を含む。シグナルペプチドは、細胞膜、通常、真核細胞では小胞体、細菌の内膜または内膜および外膜の両方のいずれかを通して、新たに合成されたタンパク質を方向づける短いアミノ酸配列である。シグナルペプチドは典型的に、ポリペプチドのＮ末端部分に存在し、典型的に、ポリペプチドの生合成および細胞からの分泌の間に酵素により除去される。斯かるペプチドは、対象抗体またはその断片に取り込んで、合成された分子の分泌を可能にすることができる。
免疫的反応性を増強する薬剤として、細菌スーパー抗原が挙げられるがこれらに限定されない。固体支持体へのカップリングを容易にする薬剤として、ビオチンまたはアビジンが挙げられるがこれらに限定されない。免疫原担体として、いずれかの生理学的に許容されるバッファーが挙げられるがこれに限定されない。生物応答修飾因子は、サイトカイン、特に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン−２、インターロイキン−４、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびガンマ−インターフェロンを含む。
免疫的反応性を低下させる薬剤として、抗炎症剤および免疫抑制薬が挙げられるがこれらに限定されない。抗炎症剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびコルチコステロイドを含む。ＮＳＡＩＤとして、アセチルサリチル酸等、サリチル酸塩；ジフルニサル、サリチル酸およびサルサラート；イブプロフェン等、プロピオン酸誘導体；ナプロキセン；デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、フェノプロフェン、ロキソプロフェンおよびケトプロフェン；インドメタシン、ジクロフェナク、トルメチン、アセクロフェナク、スリンダク、ナブメトン、エトドラクおよびケトロラク等、酢酸誘導体；ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、フェニルブタゾンおよびドロキシカム等、エノール酸（ｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ）誘導体；メフェナム酸、フルフェナム酸、メクロフェナム酸およびトルフェナム酸等、アントラニル酸誘導体；セレコキシブ、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、エトリコキシブ、バルデコキシブ、フィロコキシブ（ｆｉｒｏｃｏｘｉｂ）およびパレコキシブ等、選択的ＣＯＸ−２阻害剤；ニメスリド等、スルホンアニリド（ｓｕｌｆｏｎａｎｉｌｉｄｅ）；ならびにクロニキシンおよびリコフェロン（ｌｉｃｏｆｅｌｏｎｅ）等、その他が挙げられるがこれらに限定されない。コルチコステロイドとして、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾンおよびプレドニゾロンが挙げられるがこれらに限定されない。免疫抑制薬として、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、Ｄ−ペニシラミン、経口金化合物、注射用金化合物（筋肉内注射）、ミノサイクリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、Ｄ−ペニシラミン、ロベンザリット、ブシラミン、アクタリット、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、ミゾリビン、シクロスポリンおよびタクロリムスが挙げられるがこれらに限定されない。
適した薬物部分は、抗腫瘍剤を含む。非限定例は、放射性同位元素、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシン硫酸塩等のビンカアルカロイド、アドリアマイシン、ブレオマイシン硫酸塩、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン（ｄｕａｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩、エトポシド、フルオロウラシル、ロムスチン、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）塩酸塩、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキセート、マイトマイシン、ミトタン、ペントスタチン、ピポブロマン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｅ）塩酸塩、ストレプトゾトシン、タキソール、チオグアニンおよびウラシルマスタードである。
単鎖分子を含む免疫毒素は、組換え手段によって産生することができる。種々の免疫毒素が利用でき、方法は、例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ： Ａｉｍｉｎｇ ｔｈｅ Ｍａｇｉｃ Ｂｕｌｌｅｔ、Ｔｈｏｒｐｅら（１９８２年）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１６８〜１９０頁；Ｖｉｔａｔｔａ（１９８７年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８巻：１０９８〜１１０４頁；ならびにＷｉｎｔｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３４９巻：２９３〜２９９頁に見出すことができる。適した毒素として、リシン、放射性核種、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ、ジフテリア毒素、リシンＡ鎖、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）等の真菌毒素およびホスホリパーゼ酵素が挙げられるがこれらに限定されない。全般的には、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｔｏｘｉｎｓ」ＯｌｓｎｅｓおよびＰｉｈｌ、Ｐｈａｒｍａｃ． Ｔｈｅｒ．１５巻：３５５〜３８１頁（１９８１年）；ならびに「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ」ＢａｌｄｗｉｎおよびＢｙｅｒｓ編、１５９〜１７９頁、２２４〜２６６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８５年）を参照されたい。
化学的に機能的な部分は、例えば、抗体および機能的部分をコードする融合遺伝子を作出することにより、組換えにより作製することができる。あるいは、抗体またはその断片は、種々の十分に確立された化学的手順のいずれかによって、部分に化学結合することができる。例えば、部分がタンパク質である場合、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ）等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアネート等）およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）等、種々のカップリング剤を使用することができる。リンカーは、細胞における細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５２巻：１２７〜１３１頁（１９９２年））を使用することができる。部分は、第２の抗体、プロテインＡまたはビオチン−アビジン複合体等の二次試薬により、共有結合により連結することができる、またはコンジュゲートすることができる。常磁性部分およびそれの抗体へのコンジュゲーションの例については、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉら（１９９０年）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １１巻：２３１〜２３８頁を参照されたい。
一部の実施形態では、本明細書に提供される対象抗体は、二特異性抗体である。二特異性抗体は、少なくとも２種の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。本明細書に記載されている二特異性抗体は、ＩＬ−６受容体分子における異なるエピトープを認識する二特異性抗体であり得る、または抗原結合部位の一方がＩＬ−６受容体を認識し、他方の抗原結合部位がＩＬ−６受容体以外の抗原を認識する、二特異性抗体であり得る。ＩＬ−６受容体認識抗体を含む二特異性抗体の他方の抗原結合部位に結合する第２の抗原の例として、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＩＬ−１α、ＩＬ−β、ＩＬ−１Ｒ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−２３、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒ、ＢｌｙＳ、リンホトキシンα、リンホトキシンβ、ＬＩＧＨＴリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＶＬＡ−４、ＣＤ２５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＢＡＦＦ、ＣＤ５２、ＣＤ２２、ＩＬ−３２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２１Ｒ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦＲ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＩＦＮ−アルファ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＣＲ５、ＡＰＲＩＬおよびＡＰＲＩＬＲが挙げられる。二特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二特異性抗体）として調製することができる。
本開示の例証される抗体として、次表に示す抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
ハイブリドーマもしくはＢ細胞由来の対象抗体もしくはペプチドをコードするＤＮＡまたはいずれかの形態の抗体および／または抗体断片ライブラリーをクローニングし、クローンを適したベクターに組み込み、ベクターを宿主細胞に形質導入することにより、対象抗体は、組換え抗体として産生することができる（例えば、Ｐ． Ｊ． Ｄｅｌｖｅｓ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ： Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、１９９７年、ＷＩＬＥＹ， Ｐ． ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ． Ｄｅａｎ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、２０００年、ＯＸＦＯＲＤ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＰＲＥＳＳ、Ｖａｎｄａｍｍｅ Ａ． Ｍ．ら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９２巻：７６７〜７７５頁（１９９０年））。よって、一態様では、本開示の抗体またはその断片をコードする単離されたポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
既存の抗体のＬまたはＨ鎖の様々な領域に対応するヌクレオチド配列は、ハイブリダイゼーション、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定が挙げられるがこれらに限定されない、従来の技法を使用して、容易に得て配列決定することができる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、抗体ヌクレオチド配列の好まれる供給源として機能する。モノクローナル抗体のアレイを産生する莫大な数のハイブリドーマ細胞は、公共または非公式のリポジトリから得ることができる。最大の寄託機関は、十分に特徴付けされたハイブリドーマ細胞株の多様なコレクションを提供する、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎである。あるいは、抗体ヌクレオチドは、免疫化したまたは免疫化していない齧歯類またはヒト、ならびに脾臓等の臓器および末梢血リンパ球から得ることができる。抗体ヌクレオチドの抽出および合成に適用可能な具体的技法は、Ｏｒｌａｎｄｉら（１９８９年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ ８６巻：３８３３〜３８３７頁、Ｌａｒｒｉｃｋら（１９８９年）ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．１６０巻：１２５０〜１２５５頁；Ｓａｓｔｒｙら（１９８９年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， Ｕ．Ｓ．Ａ．８６巻：５７２８〜５７３２頁；および米国特許第５，９６９，１０８号に記載されている。
抗体ヌクレオチド配列は、例えば、相同非ヒト配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常領域をコード配列で置換することにより修飾されていてもよい。当該様式では、本来の抗体の結合特異性を保持するキメラ抗体が調製される。
その上、抗体またはその機能的断片の重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドをコドン最適化に付して、所望の宿主細胞における対象抗体またはその機能的断片の最適化された発現を達成することができる。例えば、コドン最適化の一方法において、ネイティブコドンは、遺伝子の参照セット由来の最も高頻度のコドンによって置換され、それによると、アミノ酸毎のコドン翻訳の比率は、高くなるように設計されている。抗体またはその機能的断片の重鎖および／または軽鎖に適用され得る、所望のタンパク質の発現のためにコドン最適化されたポリヌクレオチドを作製するための追加的な例示的な方法は、Ｋａｎａｙａら、Ｇｅｎｅ、２３８巻：１４３〜１５５頁（１９９９年）、Ｗａｎｇら、Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． Ｅｖｏｌ．、１８巻（５号）：７９２〜８００頁（２００１年）、米国特許第５，７９５，７３７号、米国特許出願公開第２００８／００７６１６１号およびＷＯ２００８／０００６３２に記載されている。
本開示のポリヌクレオチドは、例証されているポリペプチドの機能的等価物およびその断片をコードするポリヌクレオチドを含む。機能的等価物は、保存的アミノ酸置換、融合体を含むアナログ、および変異体を有するポリペプチドであり得る。
遺伝暗号の縮重のため、本開示のポリヌクレオチドおよびベクターの構築に適した、ＬおよびＨ配列ならびにヘテロ二量体化配列のヌクレオチドには、相当なバリエーションが存在し得る。このようなバリエーションは、本開示によって包含される。
所望であれば、組換えポリヌクレオチドは、遺伝子産物の発現の検出および精製を容易にする異種配列を含むことができる。斯かる配列の例として、β−ガラクトシダーゼ、β−ラクタマーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびこれらの誘導体等のレポータータンパク質をコードする配列が挙げられる。精製を容易にする他の異種配列は、Ｍｙｃ、ＨＡ（インフルエンザウイルス赤血球凝集素に由来する）、Ｈｉｓ−６、ＦＬＡＧまたは免疫グロブリンのＦｃ部分、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）およびマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）等のエピトープをコードすることができる。
ポリヌクレオチドは、上述の種々の化学的に機能的な部分にコンジュゲートすることができる。一般的に用いられる部分は、検出可能シグナルを産生することができる標識、シグナルペプチド、免疫的反応性を増強または低下させる薬剤、固体支持体へのカップリングを容易にする薬剤、ワクチン担体、生物応答修飾因子、常磁性標識および薬物を含む。部分は、組換えによりまたは当技術分野で公知の他の手段によって、ポリヌクレオチドに共有結合により連結することができる。
ポリヌクレオチドは、同じ転写ユニット内の追加的なコード配列、プロモーター、リボソーム結合部位およびポリアデニル化部位等の制御エレメント、同じまたは異なるプロモーターの制御下の追加的な転写ユニット、クローニング、発現および宿主細胞の形質転換を可能にする配列、ならびに本明細書に記載されている様々な実施形態のいずれかに従って望ましい可能性があるようないずれかの構築物等、追加的な配列を含むことができる。
ポリヌクレオチドは、化学合成、組換えクローニング方法、ＰＣＲまたはこれらの任意の組み合わせを使用して得ることができる。当業者は、ＤＮＡ合成機を用いるまたは商業サービスから発注することにより、本明細書に提供される配列データを使用して、所望のポリヌクレオチドを得ることができる。
所望の配列を含むポリヌクレオチドは、適したベクターに挿入し、次いでこれを、複製、増幅および発現のために適した宿主細胞に導入することができる。したがって、一態様では、本開示のポリヌクレオチドのうち１種または複数を含む種々のベクターが本明細書に提供される。対象抗体をコードする少なくとも１種のベクターを含む発現ベクターの選択可能ライブラリーも提供される。
本開示のベクターは一般に、クローニングおよび発現ベクターにカテゴリー化される。クローニングベクターは、それが含有するポリヌクレオチドの複製コピーを得るために、または将来的な回収のために寄託場所にポリヌクレオチドを貯蔵する手段として有用である。発現ベクター（およびこのような発現ベクターを含有する宿主細胞）を使用して、これが含有するポリヌクレオチドから産生されたポリペプチドを得ることができる。適したクローニングおよび発現ベクターは、当技術分野で公知のいずれか、例えば、細菌、哺乳動物、酵母、昆虫およびファージディスプレイ発現系における使用のためのベクターを含む。
適したクローニングベクターは、標準技法に従って構築することができる、または当技術分野で利用できる多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に応じて変動し得るが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有するであろう、特定の制限エンドヌクレアーゼの単一の標的を保有することができる、またはマーカー遺伝子を保持することができる。適した例として、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ｐＵＣ１８、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ファージＤＮＡ（糸状および非糸状ファージＤＮＡを含む）、ならびにｐＳＡ３およびｐＡＴ２８等のシャトルベクターが挙げられる。上述および他のクローニングベクターは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＢｉＯＲａｄ、ＳｔｒａｔａｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ等の商業的ベンダーから利用できる。
このような核酸を含有する発現ベクターは、宿主ベクター系を得て、タンパク質およびポリペプチドを産生するのに有用である。典型的には、このような発現ベクターは、エピソームとしてまたは染色体ＤＮＡの不可分の部分のいずれかとして、宿主生物において複製可能である。適した発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含むウイルスベクター、コスミド等を含む。酵母、鳥類および哺乳動物細胞を含む真核細胞における発現に適した多数の発現ベクターが利用できる。発現ベクターの一例は、転写がサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期プロモーター／エンハンサーによって駆動される、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）である。本明細書に記載されている対象抗体を発現するための２種類の特に有用な発現ベクターは、ファージディスプレイベクターおよび細菌ディスプレイベクターである。
ファージディスプレイベクターを構築するための技法の例については、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ Ｇ．ら（１９９４年）Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２巻：４３３〜５５頁による概説論文を参照されたい。糸状および非糸状ファージ配列の両方が、ディスプレイベクターの構築に適用可能である。糸状ファージベクターが好まれる。なぜなら、このクラスの多くの代表的ファージのゲノムが配列決定されており、それらのゲノムが、非糸状ファージのものよりもはるかに小さいことが判明したためである。このクラスの代表的ファージは、Ｍ１３、ｆ１、ｆｄ、Ｉｆ１、Ｉｋｅ、Ｘｆ、Ｐｆ１およびＰｆ３を含む。ファージベクターは典型的に、ファージコートタンパク質の一部または全体への融合によって、ヘテロ多量体、例えば、抗体ペプチドを発現するように構築される。適したコートタンパク質は、Ｍ１３のｐＩＩＩ、ＶＩＩＩ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＩＸを含む。ヘテロ多量体配列は典型的に、発現されたファージコートの完全性が蝕まれず、ヘテロ多量体が好ましくは生物学的に機能的であるような仕方で、ファージベクターに挿入される。
ｐＩＩＩ融合ベクターを構築するために、一般的に用いられる融合部位は、アミノ末端に、ｐＩＩＩの２個のドメインの間の可撓性スペーサーの間に（例えば、Ｓｍｉｔｈら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８８巻：１３１５〜１７頁を参照）、または米国特許第５，９６９，１０８号、同第５，８３７，５００号に記載されている他のいずれかの代替融合部位に位置する。ファージのｐＩＩＩ融合体および他のタンパク質は、完全に同じファージ（ｐａｇｅ）レプリコン内にまたは異なるレプリコンにコードされ得る。少なくとも２種のレプリコンが使用される場合、ｐＩＩＩ融合体は一般に、ファージミド、ファージ複製起点を含有するプラスミドにコードされる。ファージミドは、ｐＩＩＩを含む全ファージタンパク質をもたらす、Ｍ１３ＫＯ７等のヘルパーファージによる「レスキュー」によって、ファージ粒子にパッケージすることができるが、欠損のある起点のため、ファージミドとの競合において、それ自体は不十分にパッケージされる。パッケージ効率を増強するために変更されたｐＩＩＩを欠くまたはこれを含有する他の多価ヘルパーファージ（例えば、Ｍ１３．デルタ．ｇＩＩＩ）を用いることもできる（Ｒｏｎｄｏｔら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９巻：７５〜７８頁）。
他の糸状ファージを用いて同様の構築を為すことができる。Ｐｆ３は、ＩｎｃＰ−１プラスミドを有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｅｎｏｓａ細胞に感染する周知の糸状ファージである。ゲノム全体が配列決定されており、複製およびアセンブリーに関与する遺伝的シグナルが特徴付けられている。ＰＦ３の主要コートタンパク質は、その分泌を方向づけるシグナルペプチドがないという点が珍しい。配列は、荷電残基ＡＳＰ７、ＡＲＧ３７、ＬＹＳ４０およびＰＨＥ４４−ＣＯＯ−を有し、これは、アミノ末端が露出されていることと一致する。ディスプレイＰｆ３ベクターを構築するために、異種ポリペプチドをコードする遺伝子断片にインフレームで融合するように、Ｐ．ａｅｒｕｇｅｎｏｓａにおける分泌を引き起こすことが公知のシグナル配列を操作し、次いでこれを、成熟Ｐｆ３コートタンパク質をコードするＤＮＡとインフレームで融合することが一般に望ましい。
同じ一般構築スキームが、バクテリオファージＸ１７４、λ、Ｔ４およびＴ７ファージを含む非糸状ファージに由来する配列を含有するディスプレイベクターの作製に適用される。特有のヘテロ二量体化配列を使用して対象ヘテロ多量体を発現する、対応するディスプレイベクターを作製することができる。
ファージディスプレイベクターに加えて、好まれるベクターの別のクラスは、細菌ディスプレイベクターである。上に概要を述べる一般スキームは、斯かるベクターの構築に等しく適用可能である。簡潔に説明すると、このベクターは、ヘテロ多量体、特に本開示の抗体の、細菌表面タンパク質との融合体としての発現を容易にする。種々の細菌表面タンパク質が、斯かる融合体の発現に適用可能である。細菌表面タンパク質の非限定例として、ＬａｍＢ（Ｂｒｅｍｅｒら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８４年）８１巻：３８３０〜３４頁；Ｇｅｎｅ（１９８７年）５２巻：１６５〜７３頁）；ＯｍｐＡ（Ｐｒｏｇ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｍｏｌｅｃ Ｂｉｏｌ（１９８７年）４９巻：８９〜１１５頁）；ＯｍｐＣ；ＯｍｐＦ（Ｐａｇｅｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｍｉｅ（１９９０年）７２巻：１６９〜７６頁）；ＰｈｏＥ（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｅｙら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２６１巻：１２２２２〜５頁）；ピリン（Ｓｏら、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８５年）１１８巻：１３〜２８頁）；ｐｌｄＡ（ｄｅ Ｇｅｕｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．（１９８４年）３巻（８号）：１７９９〜１８０２頁）およびこれらのホモログが挙げられる。上述および他の表面タンパク質の特徴付け、ならびに異種ポリペプチドをディスプレイするためにこれらのタンパク質を使用する方法は、米国特許第５，８３７，５００号とそこに引用されている参考文献に詳述されている。
本開示のベクターは典型的に、コードされる抗体の発現に要求される転写または翻訳制御配列を含む。適した転写または翻訳制御配列として、複製起点、プロモーター、エンハンサー、リプレッサー結合領域、転写開始部位、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、ならびに転写および翻訳の終止部位が挙げられるがこれらに限定されない。
発現ベクターは、宿主細胞に移入することができ、次いでトランスフェクトされた細胞が培養されて、対象抗体またはその機能的断片を産生する。よって、一態様では、異種プロモーターに作動可能に連結された、対象抗体またはその機能的断片をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が本明細書に提供される。宿主細胞は、２種の発現ベクターを共トランスフェクトすることができ、第１のベクターは、重鎖由来ポリペプチドをコードし、第２のベクターは、軽鎖由来ポリペプチドをコードする。２種のベクターは、同一の選択可能マーカーを含有することができ、これにより、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現が可能になる。あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、これらを発現することができる、単一のベクターを使用することができる。斯かる状況において、軽鎖を重鎖の前に配置して、過剰な有毒遊離重鎖を回避することができる（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ ３２２巻：５２頁；およびＫｏｈｌｅｒ、１９８０年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７巻：２１９７〜２１９９頁）。
種々の宿主−発現ベクター系を利用して、対象抗体またはその機能的断片を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照）。斯かる宿主−発現系は、目的のコード配列を産生しその後に精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列により形質転換またはトランスフェクトされると、ｉｎ ｓｉｔｕで対象抗体分子を発現することができる細胞も表す。そのようなものとして、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡもしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターにより形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等の微生物；抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターにより形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したもしくは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）により形質転換された植物細胞系；または哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）を含有するもしくは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳＯおよび３Ｔ３細胞）が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要最初期（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ）遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと併せた、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳動物細胞が、抗体に有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、１９８６年、Ｇｅｎｅ ４５巻：１０１頁；およびＣｏｃｋｅｔｔら、１９９０年、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８巻：２頁）。一部の実施形態では、抗体またはその断片は、ＣＨＯ細胞において産生される。
細菌系のため、発現されている抗体分子に意図される使用に応じて、いくつかの発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、抗体分子の医薬組成物の作製のために多量の斯かる抗体またはその断片が産生されるべきである場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を方向づけるベクターが望ましい可能性がある。斯かるベクターとして、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列がｌａｃ Ｚコード領域とインフレームでベクターに個々にライゲーションされ得る、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、１９８３年、ＥＭＢＯ １２巻：１７９１頁）；ｐＩＮベクター（ＩｎｏｕｙｅおよびＩｎｏｕｙｅ、１９８５年、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３巻：３１０１〜３１０９頁；Ｖａｎ ＨｅｅｋｅおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ、１９８９年、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２４巻：５５０３〜５５０９頁）；その他が挙げられるがこれらに限定されない。ｐＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させることもできる。一般に、斯かる融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合と、続く遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解した細胞から容易に精製することができる。クローニングされた標的遺伝子産物が、ＧＳＴ部分から放出され得るように、ｐＧＥＸベクターは、トロンビンまたは第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
昆虫系において、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクターとして使用して、外来遺伝子を発現させることができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞において成長する。抗体または機能的断片コード配列を、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン（ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ）遺伝子）へと個々にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に配置することができる。
哺乳動物宿主細胞において、いくつかのウイルスに基づく発現系を利用することができる。発現ベクターとしてアデノウイルスが使用される場合、目的の抗体コード配列を、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三要素（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲーションすることができる。続いて、このキメラ遺伝子を、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）における挿入は、生存可能であり、感染した宿主において抗体分子を発現することができる組換えウイルスをもたらすであろう（例えば、ＬｏｇａｎおよびＳｈｅｎｋ、１９８４年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８ １巻：３５５〜３５９頁を参照）。挿入された抗体コード配列の効率的翻訳に、特異的開始シグナルを使用することもできる。このようなシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。さらに、挿入物全体の翻訳を確実にするために、開始コドンは、所望のコード配列の読み枠と同相である必要がある。このような外来性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成両方の、種々の起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等の包含によって増強させることができる（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒら、１９８７年、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３巻：５１〜５４４頁を参照）。
植物細胞のため、種々のベクター送達技法を当技術分野で利用できる。宿主細胞は、植物全体、単離された細胞またはプロトプラストの形態であり得る。植物細胞にベクターを導入するための説明的手順は、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ媒介性植物形質転換、プロトプラスト形質転換、花粉への遺伝子移入、生殖器官への注射、および未熟胚への注射を含む。当業者には明らかな通り、これらの方法はそれぞれ、別個の利点および不利益を有する。よって、特定の植物種にベクターを導入する特定の一方法は、別の植物種にとって必ずしも最も有効ではない場合がある。
加えて、挿入された配列の発現をモジュレートする、または所望の特異的様式で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞系統を選択することができる。タンパク質産物の斯かる修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、抗体または機能的断片の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングおよび修飾のための特徴的かつ特異的な機構を有する。発現される外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングを確実にするために、適切な細胞株または宿主系を選択することができる。この目的で、一次転写物の適正なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化およびリン酸化のための細胞の仕組みを保有する真核生物宿主細胞を使用することができる。斯かる哺乳動物宿主細胞として、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（いかなる免疫グロブリン鎖も内在性に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３ＯおよびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
組換えタンパク質の長期高収率産生のため、安定した発現が好まれる。例えば、抗体またはその機能的断片を安定に発現する細胞株を操作することができる。ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用するより寧ろ、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）および選択可能マーカーによって制御されるＤＮＡにより形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後に、操作された細胞を濃縮培地で１〜２日間成長させ、次いで選択培地にスイッチすることができる。組換えプラスミドにおける選択可能マーカーは、選択に対する抵抗性を付与し、細胞が、その染色体にプラスミドを安定に組み込み、フォーカスを形成するまで成長することを可能にし、次いでこれを細胞株へとクローニングし、増やすことができる。この方法を有利に使用して、抗体分子を発現する細胞株を操作することができる。
それぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞における単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、１９７７年、Ｃｅｌｌ １１巻：２２３頁）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＳｚｙｂａｌｓｋａおよびＳｚｙｂａｌｓｋｉ、１９９２年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ４８巻：２０２頁）およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら、１９８０年、Ｃｅｌｌ ２２巻：８〜１７頁）遺伝子を使用した系が挙げられるがこれらに限定されない、いくつかの選択系を使用することができる。また、次の遺伝子に対する選択の基盤として代謝拮抗薬抵抗性を使用することができる：メトトレキセートに対する抵抗性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒら、１９８０年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ．７７巻（６号）：３５６７〜７０頁；Ｏ’Ｈａｒｅら、１９８１年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７８巻：１５２７頁）；グルタメートおよびアンモニアを使用したグルタミンの生合成の原因となる酵素であるグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、１９９２年、Ｂｉｕｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０巻：１６９頁）；ミコフェノール酸に対する抵抗性を付与するｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ、１９８１年、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７８巻：２０７２頁）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する抵抗性を付与するｎｅｏ（ＷｕおよびＷｕ、１９９１年、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３巻：８７〜９５頁；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、１９９３年、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２巻：５７３〜５９６頁；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、１９９３年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０巻：９２６〜９３２頁；ならびにＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３年、Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２巻：１９１〜２１７頁；Ｍａｙ、１９９３年、ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１巻（５号）：１５５〜２１５頁）；およびハイグロマイシンに対する抵抗性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、１９８４年、Ｇｅｎｅ ３０巻：１４７頁）。組換えＤＮＡ技術方法は、所望の組換えクローンの選択に適用することができ、斯かる方法は、例えば、その全体を参照により本明細書に組み込む、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ（１９９３年）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ（１９９０年）；および第１２および１３章、Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ（１９９４年）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら、１９８１年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．１５０巻：１頁に記載されている。抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説については、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ、Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ、３巻（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７年）を参照）。抗体またはその機能的断片を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させるであろう。増幅された領域は、抗体遺伝子に関連するため、抗体の産生も増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅら、１９８３年、Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．３巻：２５７頁）。
組換え発現によって抗体分子が産生されたら、免疫グロブリン分子のいずれか適した精製方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性（特に、プロテインＡ後に特異的抗原に対する親和性による）およびサイズ分類カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解度、またはタンパク質の他のいずれかの標準精製技法によってこれを精製することができる。さらに、対象抗体またはその機能的断片は、本明細書に提供される異種ポリペプチド配列または当技術分野で公知のその他のものに融合して、精製を容易にすることができる。例えば、対象抗体またはその機能的断片は、とりわけ、市販のポリ−ヒスチジンタグ（Ｈｉｓ−タグ）、ＦＬＡＧ−タグ、赤血球凝集素タグ（ＨＡ−タグ）またはｍｙｃ−タグを組換えにより付加し、適した精製方法を利用することにより精製することができる。
処置方法
別の態様では、対象抗体またはその機能的断片を使用して、ＩＬ−６／ＩＬ−６受容体機能不全に関係づけられる状態、疾患または障害を処置する方法が、本明細書に提供される。
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする哺乳動物における炎症性障害を処置する方法であって、哺乳動物に治療有効量の本開示の抗体を投与するステップを含む方法を提供する。一部の事例では、炎症性障害は、多発性硬化症である。他の事例では、炎症性障害は、自己免疫性疾患である。自己免疫性疾患の例として、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、セリアック病、クローン病、真性糖尿病（１型）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本病、多発性硬化症、重症筋無力症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、視神経炎、オード（Ｏｒｄ’ｓ）甲状腺炎、天疱瘡（ｏｅｍｐｈｉｇｕｓ）、多発性関節炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても公知）、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症、全身性脱毛症、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、神経性筋強直症、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、白斑および外陰部痛が挙げられるがこれらに限定されない。他の障害は、骨吸収障害および血栓症（ｔｈｒｏｍｏｂｓｉｓ）を含む。
さらなる実施形態では、本開示は、それを必要とする哺乳動物におけるがんを処置する方法であって、哺乳動物に治療有効量の本開示の抗体を投与するステップを含む方法を提供する。一部の事例では、がんは、肝細胞癌である。他の事例では、がんは、急性骨髄性白血病、胸腺、脳、肺、扁平細胞、皮膚、眼、網膜芽細胞腫、眼球内黒色腫、口腔および中咽頭、膀胱、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）、膵、膀胱、乳房、子宮頸部（ｃｅｒｖｉｃａｌ）、頭部、頸部、腎、腎臓、肝臓、卵巣、前立腺、結腸直腸、食道、精巣、婦人科、甲状腺、ＣＮＳ、ＰＮＳ、ＡＩＤＳ関連（例えば、リンパ腫およびカポジ肉腫）またはウイルス誘導性がんである。
またさらなる実施形態では、本開示の抗体は、滑液包炎、ループス、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、セリアック病、クローン病、真性糖尿病（１型）、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本病、炎症性腸疾患、エリテマトーデス、重症筋無力症、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、変形性関節症（ｏｓｔｈｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、網膜ぶどう膜炎、天疱瘡、多発性関節炎、原発性胆汁性肝硬変、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症、全身性脱毛症、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、神経性筋強直症、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、白斑、外陰部痛、虫垂炎、動脈炎、関節炎、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、子宮頸管炎、胆管炎、胆嚢炎、絨毛羊膜炎、結腸炎、結膜炎、膀胱炎、涙腺炎、皮膚筋炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、結合織炎、胃炎、胃腸炎、歯肉炎、肝炎、汗腺炎、回腸炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、髄膜炎、脊髄炎、心筋炎、筋炎、腎炎、臍炎、卵巣炎、睾丸炎、骨炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心外膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、静脈炎、肺臓炎、直腸炎、前立腺炎、腎盂腎炎、鼻炎、卵管炎、副鼻腔炎、口内炎、滑膜炎、腱炎、扁桃炎、ぶどう膜炎、腟炎、血管炎または外陰炎の処置に使用される。
一部の実施形態では、本開示の抗体は、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤腹膜炎、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、キャッスルマン病、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ぶどう膜炎、ペロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害、自己免疫性障害、膵炎、外科手術による外傷、移植片対宿主病、移植片拒絶、心疾患、骨吸収、熱傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝／肺線維症、歯周炎、低酸症（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｈｙｄｉａ）、固形腫瘍（腎細胞癌）、前立腺および膀胱がん、膵がん、神経学的がんおよびＢ細胞悪性疾患（例えば、キャッスルマン（Ｃａｓｔｅｌｅｍａｎ）病、ある特定のリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および多発性骨髄腫）の処置に使用される。
一部の実施形態では、処置されるべき対象は、ヒト等、哺乳動物である。他の事例では、哺乳動物は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、スナネズミ、ハムスター、モルモット、サルまたは他のいずれかの哺乳動物である。多くの斯かる哺乳動物は、炎症性疾患、固形腫瘍および／または他のがんを含むある特定の疾患または障害の前臨床モデルとして当技術分野に公知の対象であり得る（例えば、Ｔａｌｍａｄｇｅら、２００７年、Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．１７０巻：７９３頁；Ｋｅｒｂｅｌ、２００３年、Ｃａｎｃ． Ｂｉｏｌ． Ｔｈｅｒａｐ．２巻（４追補１号）：Ｓ１３４頁；Ｍａｎら、２００７年、Ｃａｎｃ． Ｍｅｔ． Ｒｅｖ．２６巻：７３７頁；Ｃｅｓｐｅｄｅｓら、２００６年、Ｃｌｉｎ． ＴｒａｎｓＬ Ｏｎｃｏｌ．８巻：３１８頁）。
別の態様では、本開示は、第２の薬剤と併せて、本開示の抗体を使用して、哺乳動物における疾患、状態または障害を処置する方法を提供する。第２の薬剤は、抗体と共に、その前にまたはその後に投与することができる。一部の実施形態では、第２の薬剤は、抗ウイルス剤である。抗ウイルス剤として、テラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル（ｓｅｍｉｐｒｅｖｉｒ）、ソホスブビル、ダクラタスビル（ｄａｃｌａｓｔａｖｉｒ）、アスナプレビル、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テノホビル、テルビブジン、インターフェロンアルファおよびペグ化インターフェロンアルファが挙げられるがこれらに限定されない。他の実施形態では、第２の薬剤は、本明細書に記載されている炎症性状態の症状を軽減するように作用する薬剤である。抗炎症剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびコルチコステロイドを含む。ＮＳＡＩＤとして、アセチルサリチル酸等のサリチル酸塩；ジフルニサル、サリチル酸およびサルサラート；イブプロフェン等のプロピオン酸誘導体；ナプロキセン；デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、フェノプロフェン、ロキソプロフェンおよびケトプロフェン；インドメタシン、ジクロフェナク、トルメチン、アセクロフェナク、スリンダク、ナブメトン、エトドラクおよびケトロラク等の酢酸誘導体；ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、フェニルブタゾンおよびドロキシカム等のエノール酸誘導体；メフェナム酸、フルフェナム酸、メクロフェナム酸およびトルフェナム酸等のアントラニル酸誘導体；セレコキシブ、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、エトリコキシブ、バルデコキシブ、フィロコキシブおよびパレコキシブ等の選択的ＣＯＸ−２阻害剤；ニメスリド等のスルホンアニリド；ならびにクロニキシンおよびリコフェロン等のその他が挙げられるがこれらに限定されない。コルチコステロイドとして、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾンおよびプレドニゾロンが挙げられるがこれらに限定されない。
一部の実施形態では、第２の薬剤は、免疫抑制薬である。対象抗体と組み合わせて使用することができる免疫抑制薬として、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、Ｄ−ペニシラミン、経口金化合物、注射用金化合物（筋肉内注射）、ミノサイクリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、Ｄ−ペニシラミン、ロベンザリット、ブシラミン、アクタリット、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキセート、ミゾリビン、シクロスポリンおよびタクロリムスが挙げられるがこれらに限定されない。
さらなる実施形態では、第２の薬剤は、抗がん剤（例えば、化学療法剤）である。化学療法薬は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗薬、インターカレート抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、生物学的応答修飾因子、抗ホルモン薬、血管新生阻害剤および抗アンドロゲン薬からなる群より選択することができる。化学療法剤、細胞傷害性薬剤および非ペプチド小分子の非限定例として、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）、カソデックス（ビカルタミド）、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ゲフィチニブ）およびアドリアマイシン、ならびに多数の化学療法剤が挙げられる。化学療法剤の非限定例として、チオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミド（ｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン等のニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、Ｃａｓｏｄｅｘ（商標）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトロブシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗薬；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート等の葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン等のプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジンアナログ、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、ドロモスタノロンプロピオン酸塩、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎薬（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）等の葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）酢酸塩；エトグルシド；ガリウム硝酸塩；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ．Ｒ（商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキサン、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；ならびに上述のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。適した化学療法用細胞コンディショナーとして、例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（商標））、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ １１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびトレミフェン（フェアストン）を含む抗エストロゲン剤；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリドおよびゴセレリン等の抗アンドロゲン薬；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチンおよびカルボプラチン等の白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；カンプトテシン−１１（ＣＰＴ−１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）等、腫瘍におけるホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれる。所望であれば、対象抗体またはその断片は、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、ＡＢＶＤ、ＡＶＩＣＩＮＥ、アバゴボマブ（Ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アクリジンカルボキサミド、アデカツムマブ（Ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、１７−Ｎ−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、アルファラジン（Ａｌｐｈａｒａｄｉｎ）、アルボシジブ（Ａｌｖｏｃｉｄｉｂ）、３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒド（ｃａｒｂｏｘａｌｄｅｈｙｄｅ）チオセミカルバゾン、アモナフィド（Ａｍｏｎａｆｉｄｅ）、アントラセンジオン、抗ＣＤ２２免疫毒素、抗腫瘍薬、抗腫瘍性の薬草、アパジコン、アチプリモド、アザチオプリン、ベロテカン（Ｂｅｌｏｔｅｃａｎ）、ベンダムスチン、ＢＩＢＷ ２９９２、ビリコダル（Ｂｉｒｉｃｏｄａｒ）、ブロスタリシン（Ｂｒｏｓｔａｌｌｉｃｉｎ）、ブリオスタチン、ブチオニンスルホキシミン、ＣＢＶ（化学療法）、カリクリン、細胞周期非特異的抗腫瘍剤、ジクロロ酢酸、ディスコデルモリド、エルサミトルシン（Ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）、エノシタビン、エポチロン、エリブリン、エベロリムス、エキサテカン（Ｅｘａｔｅｃａｎ）、エクシスリンド、フェルギノール（Ｆｅｒｒｕｇｉｎｏｌ）、フォロデシン、ホスフェストロール、ＩＣＥ化学療法レジメン、ＩＴ−１０１、イメキソン（Ｉｍｅｘｏｎ）、イミキモド、インドロカルバゾール、イロフルベン、ラニキダル（Ｌａｎｉｑｕｉｄａｒ）、ラロタキセル（Ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、レナリドミド、ルカントン、ルルトテカン（Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、マホスファミド、ミトゾロミド（Ｍｉｔｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、ナフォキシジン、ネダプラチン、オラパリブ、オルタタキセル（Ｏｒｔａｔａｘｅｌ）、ＰＡＣ−１、ポウポウ（Ｐａｗｐａｗ）、ピクサントロン、プロテアソーム阻害剤、レベッカマイシン（Ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）、レシキモド、ルビテカン（Ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、ＳＮ−３８、サリノスポラミドＡ、サパシタビン（Ｓａｐａｃｉｔａｂｉｎｅ）、スタンフォードＶ、スウェインソニン、タラポルフィン、タリキダル（Ｔａｒｉｑｕｉｄａｒ）、テガフール−ウラシル、テモダル（Ｔｅｍｏｄａｒ）、テセタキセル（Ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、トリプラチン（Ｔｒｉｐｌａｔｉｎ）四硝酸塩、Ｔｒｉｓ（２−クロロエチル）アミン、トロキサシタビン、ウラムスチン（Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、バジメザン、ビンフルニン、ＺＤ６１２６およびゾスキダル（Ｚｏｓｕｑｕｉｄａｒ）等、一般的に処方される抗がん薬と組み合わせて使用することができる。
特異的用量は、選択された特定の抗体、従うべき投薬レジメン、これが他の薬剤と組み合わせて投与されるべきか否か、投与のタイミング、これが投与される組織、およびこれを運ぶ物理的送達系に応じて変動するであろう。一部の実施形態では、抗体は、処置サイクルの経過にわたって平均して１週間当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９または７０ｍｇの範囲内で対象に投与される。例えば、抗体は、１週間当たり約３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４または５５ｍｇの範囲内で対象に投与される。一部の実施形態では、抗体は、１週間当たり約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４または５５ｍｇの範囲内で対象に投与される。
一部の実施形態では、抗体は、処置サイクルの経過にわたって平均して１日当たり１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５または１０ｍｇを超える量で対象に投与される。例えば、抗体は、処置サイクルの経過にわたって平均して１日当たり約６〜１０ｍｇの間、約６．５〜９．５ｍｇの間、約６．５〜８．５ｍｇの間、約６．５〜８ｍｇの間または約７〜９ｍｇの間の量で対象に投与される。
一部の実施形態では、抗体は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇもしくは５０ｍｇ／ｋｇ、それらを下回る値、またはそれらを超える値等、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。一部の実施形態では、抗体は、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇもしくは４００ｍｇ／ｋｇ、それらを下回る値、またはそれらを超える値等、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜４００ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。一部の実施形態では、抗体は、１ヶ月当たり約０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇもしくは１０００ｍｇ／ｋｇ、それらを下回る値、またはそれらを超える値等、１ヶ月当たり約０．４ｍｇ／ｋｇ〜１５００ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。一部の実施形態では、抗体は、１週間当たり約１ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、３５ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、４５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、５５ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、６５ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２５ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２もしくは２００ｍｇ／ｍ２、それらを下回る値、またはそれらを超える値等、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｍ２〜２００ｍｇ／ｍ２の範囲内で対象に投与される。標的用量は、単一用量で投与することができる。あるいは、標的用量は、約１もしくはそれより多い、約２もしくはそれより多い、約３もしくはそれより多い、約４もしくはそれより多い、約５もしくはそれより多い、約６もしくはそれより多い、約７もしくはそれより多い、約８もしくはそれより多い、約９もしくはそれより多い、約１０もしくはそれより多い、約１１もしくはそれより多い、約１２もしくはそれより多い、約１３もしくはそれより多い、約１４もしくはそれより多い、約１５もしくはそれより多い、約１６もしくはそれより多い、約１７もしくはそれより多い、約１８もしくはそれより多い、約１９もしくはそれより多い、約２０もしくはそれより多い、約２５もしくはそれより多い、約３０もしくはそれよりも多いまたはそれらを超える用量で投与することができる。例えば、１週間当たり約１ｍｇ／ｋｇの用量は、週の経過にわたり、１週間毎に約１ｍｇ／ｋｇの用量で毎週送達することができる、２週間毎に約２ｍｇ／ｋｇを投与することができる、または４週間毎に約４ｍｇ／ｋｇを投与することができる。投与スケジュールは、本明細書に記載されているいずれかの投与スケジュールを含む、本明細書に記載されているいずれかのレジメンに従って反復することができる。一部の実施形態では、抗体は、約１ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、３５ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、４５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、５５ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、６５ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、１３５ｍｇ／ｍ２、１５５ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２２５ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、４２０ｍｇ／ｍ２、４５０ｍｇ／ｍ２または５００ｍｇ／ｍ２、それらを下回る値、またはそれらを超える値等、約０．１ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２の範囲で対象に投与される。
抗体の用量は、約、少なくとも約または多くとも約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｍｇもしくはｍｇ／ｋｇ、またはそこに導き出せるいずれかの範囲であり得る。ｍｇ／ｋｇの投薬量が、対象の総体重１ｋｇ当たりの抗体のｍｇ量を指すことが考慮される。複数用量が患者に与えられる場合、各用量が、その量が変動し得る、または同じであり得ることが考慮される。
医薬組成物
別の態様では、対象抗体またはその機能的断片と、不活性固体希釈剤および充填剤、希釈剤、無菌水溶液および様々な有機溶媒、浸透エンハンサー、可溶化剤およびアジュバントが挙げられるがこれらに限定されない、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤とを含む医薬組成物が本明細書に提供される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ， Ａ．編（１９８０年））。
対象医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸剤、粉末、徐放製剤、溶液、懸濁物として経口投与に、無菌溶液、懸濁物もしくはエマルションとして非経口的注射に、軟膏もしくはクリームとして外用投与に、または坐剤として直腸投与に適した形態であり得る。徐放調製物の適した例として、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形された物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放マトリックスの例として、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸およびγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよびリュープロリド酢酸塩で構成された注射用マイクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。一部の徐放製剤は、数週間から数ヶ月間またはさらには最大数年間にわたる分子の放出を可能にする。一部の実施形態では、対象医薬組成物は、少なくとも１週間、２週間、３週間または４週間等、少なくとも数週間、本明細書に記載されている対象抗体を放出する。さらなる実施形態では、対象医薬組成物は、少なくとも１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間または６ヶ月間等、数ヶ月間にわたって、本明細書に記載されている対象抗体を放出する。
医薬組成物は、正確な投薬量の単一の投与に適した単位剤形で存在し得る。医薬組成物は、活性成分として抗体またはその機能的断片をさらに含むことができ、従来の薬学的担体または賦形剤を含むことができる。さらに、医薬組成物は、他の薬用または医薬品薬剤、担体、アジュバント等を含むことができる。
例示的な非経口的投与形態は、無菌水溶液、例えば、水性プロピレングリコールまたはデキストロース溶液における活性ポリペプチドおよび／またはＰＥＧ修飾ポリペプチドの溶液または懸濁物を含む。斯かる剤形は、所望の場合、ヒスチジンおよび／またはリン酸塩等の塩により適切に緩衝することができる。
一部の実施形態では、本開示（ｄｉｓｃｌｓｏｕｒｅ）は、対象抗体またはその機能的断片および注射に適した薬学的賦形剤を含有する、注射のための医薬組成物を提供する。斯かる組成物における薬剤の構成成分および量の例は、本明細書に記載されている通りである。
注射によって投与のために本開示の組成物が取り込まれ得る形態は、水性もしくは油性懸濁物、またはゴマ油、トウモロコシ油、綿実油もしくはピーナッツ油を含むエマルションと共に、エリキシル剤、マンニトール、デキストロースまたは無菌水溶液および同様の薬学的ビヒクルを含む。
食塩水における水溶液は、注射に使用することができる。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールその他（およびこれらの適した混合物）、シクロデキストリン誘導体および植物油を用いることもできる。例えば、分散物の場合は要求される粒径の維持のためにレシチン等のコーティングの使用によって、また、界面活性物質の使用によって、適正な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールその他によってもたらすことができる。
無菌注射用溶液は、上に列挙する様々な他の成分を有する適切な溶媒に、所望の量の本開示の抗体またはその機能的断片を取り込み、続いて濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散物は、基礎分散媒および他の成分を含有する無菌ビヒクルに、様々な滅菌された活性成分を取り込むことにより調製される。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、ある特定の望ましい調製方法は、その以前に滅菌濾過された溶液から活性成分といずれか追加的な所望の成分との粉末を生じる、真空乾燥およびフリーズドライ技法である。
一部の実施形態では、本開示は、本開示の抗体またはその機能的断片、および経口投与に適した薬学的賦形剤を含有する、経口投与のための医薬組成物を提供する。
一部の実施形態では、（ｉ）有効量の本開示の抗体またはその機能的断片；任意選択で（ｉｉ）有効量の第２の薬剤；および（ｉｉｉ）経口投与に適した薬学的賦形剤を含有する、経口投与のための固体医薬組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、組成物は、（ｉｖ）有効量の第３の薬剤をさらに含有する。
一部の実施形態では、医薬組成物は、経口摂取に適した液体医薬組成物である。経口投与に適した医薬組成物は、粉末として、または顆粒中に、水性もしくは非水性液体における溶液もしくは懸濁物、水中油型エマルションまたは油中水型液体エマルションにおいて、所定量の活性成分をそれぞれ含有する、カプセル、カシェーまたは錠剤または液体もしくはエアロゾルスプレー等の別々の剤形として提示することができる。斯かる剤形は、薬学の方法のいずれかによって調製することができ、これは典型的に、１種または複数の必要成分を構成する、担体と活性成分を会合させるステップを含む。一般に、組成物は、液体担体もしくは微細に分割された固体担体またはその両方と活性成分とを均一かつ密接に混合し、次いで必要であれば、産物を所望の体裁に成形することにより調製される。
水は、一部のポリペプチドの分解を容易にし得るため、本開示は、活性成分を含む無水医薬組成物および剤形をさらに包含する。例えば、薬学的技術分野において、経時的な製剤の有効期間または安定性等の特徴を決定するために、長期貯蔵をシミュレートする手段として、水を添加することができる（例えば、５％）。無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有成分および低水分または低湿度条件を使用して調製することができる。製造、パッケージングおよび／または貯蔵における水分および／または湿度との実質的接触が予想される場合、ラクトースを含有する医薬組成物および剤形を無水にすることができる。無水医薬組成物は、その無水性質が維持されるように、調製および貯蔵することができる。したがって、無水組成物は、適した規定のキットに含まれ得るように、水への曝露を防止することが公知の材料を使用してパッケージングすることができる。適したパッケージングの例として、密封ホイル、プラスチックその他、単位用量容器、ブリスター・パックおよびストリップ・パックが挙げられるがこれらに限定されない。
本開示の抗体は、従来の薬学的配合技法に従って薬学的担体と密接な混合物において組み合わせることができる。担体は、投与に望まれる調製物の形態に応じて多種多様な形態をとることができる。一部の実施形態では、ラクトースの使用を用いることなく、経口剤形のための組成物の調製において、経口液体調製物（懸濁物、溶液およびエリキシル剤等）またはエアロゾルの場合は、例えば、水、グリコール、油、アルコール、矯味矯臭剤、保存料、着色料その他等、担体として通常の薬学的培地のいずれかを用いることができる；または経口固体調製物の場合は、デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤および崩壊剤等の担体を使用することができる。例えば、適した担体は、固体経口調製物と共に、粉末、カプセルおよび錠剤を含む。所望の場合、錠剤は、標準水性または非水性技法によってコーティングすることができる。
医薬組成物および剤形における使用に適した結合剤として、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたは他のデンプン、ゼラチン、アカシア等の天然および合成ガム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギン酸塩、粉末トラガント、グアーガム、セルロースおよびその誘導体（例えば、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロースならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
医薬組成物および剤形における使用に適した充填剤の例として、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒または粉末）、微結晶性セルロース、粉末セルロース、デキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）、カオリン、マンニトール、珪酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプンおよびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
崩壊薬を組成物中に使用して、水性環境に曝露されると崩壊する錠剤を提供することができる。多すぎる崩壊薬は、ボトル内で崩壊し得る錠剤を産生し得る。少なすぎると、崩壊の発生には不十分であり得、よって、剤形からの活性成分（複数可）の放出の速度および程度を変更し得る。よって、活性成分（複数可）の放出を有害に変更するほど少なすぎでも多すぎでもない十分な量の崩壊薬を使用して、剤形を形成することができる。使用される崩壊薬の量は、製剤の種類および投与様式に基づいて変動し得、当業者には容易に識別可能であり得る。約０．５〜約１５重量パーセントの崩壊薬または約１〜約５重量パーセントの崩壊薬を医薬組成物中に使用することができる。医薬組成物および剤形の形成に使用することができる崩壊薬として、寒天−寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリン（ｐｏｌａｃｒｉｌｉｎ）カリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、他のデンプン、アルファ化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン（ａｌｇｉｎ）、他のセルロース、ガム、またはこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
医薬組成物および剤形の形成に使用することができる滑沢剤として、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽鉱油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ）、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水素化植物油（例えば、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル（ｅｔｈｙｌ ｌａｕｒｅａｔｅ）、寒天またはこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。追加的な滑沢剤は、例えば、シロイド（ｓｙｌｏｉｄ）シリカゲル、合成シリカの凝固エアロゾルまたはこれらの混合物を含む。滑沢剤は、医薬組成物の約１重量パーセント未満の量で、任意選択で添加することができる。
水性懸濁物および／またはエリキシル剤が、経口投与に望まれる場合、その中の活性成分は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよびこれらの様々な組み合わせ等の希釈剤と共に、様々な甘味料もしくは矯味矯臭剤、着色物質または色素、また、所望の場合、乳化および／または懸濁剤と組み合わせることができる。
錠剤は、コーティングされていなくても、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、これにより、より長い期間にわたって持続した作用をもたらすための公知技法によってコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等、時間遅延材料を用いることができる。経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合された硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が水または油性媒体、例えば、ピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合された軟ゼラチンカプセルとして提示することもできる。
医薬組成物および剤形の形成に使用することができる界面活性物質として、親水性界面活性物質、親油性界面活性物質およびこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。すなわち、親水性界面活性物質の混合物を用いることができる、親油性界面活性物質の混合物を用いることができる、または少なくとも１種の親水性界面活性物質および少なくとも１種の親油性界面活性物質の混合物を用いることができる。
より低いＨＬＢ値を有する界面活性物質は、より親油性または疎水性であり、油におけるより大きい溶解度を有する一方、より高いＨＬＢ値を有する界面活性物質は、より親水性であり、水溶液におけるより大きい溶解度を有する。ＨＬＢ尺度が一般に適用不能であるアニオン性、カチオン性または双性イオン性化合物と同様に、親水性界面活性物質は一般に、約１０よりも大きいＨＬＢ値を有する化合物であると考慮される。同様に、親油性（すなわち、疎水性）界面活性物質は、約１０に等しいまたはそれよりも小さいＨＬＢ値を有する化合物である。しかし、界面活性物質のＨＬＢ値は単に、工業用、医薬品および化粧品エマルションの製剤を可能にするために一般に使用される大まかなガイドである。
親水性界面活性物質は、イオン性または非イオン性のいずれかであり得る。適したイオン性界面活性物質として、アルキルアンモニウム塩；フシジン酸塩；アミノ酸、オリゴペプチドおよびポリペプチドの脂肪酸誘導体；アミノ酸、オリゴペプチドおよびポリペプチドのグリセリド誘導体；レシチンおよび水素化レシチン；リゾレシチンおよび水素化リゾレシチン；リン脂質およびその誘導体；リゾリン脂質およびその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸の塩；脂肪酸塩；ナトリウムドキュセート；アシルラクチレート（ａｃｙｌ ｌａｃｔｙｌａｔｅ）；モノおよびジグリセリドのモノおよびジアセチル化酒石酸エステル；スクシニル化モノおよびジ−グリセリド；モノおよびジグリセリドのクエン酸エステル；ならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。
上述の群の内、イオン性界面活性物質は、例として：レシチン、リゾレシチン、リン脂質、リゾリン脂質およびその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸の塩；脂肪酸塩；ナトリウムドキュセート；アシルアクチレート（ａｃｙｌａｃｔｙｌａｔｅ）；モノおよびジグリセリドのモノおよびジアセチル化酒石酸エステル；スクシニル化モノおよびジグリセリド；モノおよびジグリセリドのクエン酸エステル；ならびにこれらの混合物を含む。
イオン性界面活性物質は、イオン化形態のレシチン、リゾレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルセリン、ＰＥＧ−ホスファチジルエタノールアミン、ＰＶＰ−ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸のラクチリック（ｌａｃｔｙｌｉｃ）エステル、ステアロイル−２−ラクチレート、ステアロイルラクチレート、スクシニル化モノグリセリド、モノ／ジグリセリドのモノ／ジアセチル化酒石酸エステル、モノ／ジグリセリドのクエン酸エステル、コリルサルコシン、カプロン酸塩、カプリル酸塩、カプリン酸塩、ラウリン酸塩、ミリスチン酸塩、パルミチン酸塩、オレイン酸塩、リシノール酸塩、リノール酸塩、リノレン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリル硫酸塩、テトラセシル硫酸塩、ドキュセート、ラウロイルカルニチン、パルミトイルカルニチン、ミリストイルカルニチン、ならびにその塩および混合物であり得る。
親水性非イオン性界面活性物質として、アルキルグルコシド；アルキルマルトシド；アルキルチオグルコシド；ラウリルマクロゴールグリセリド；ポリエチレングリコールアルキルエーテル等のポリオキシアルキレンアルキルエーテル；ポリエチレングリコールアルキルフェノール等のポリオキシアルキレンアルキルフェノール；ポリエチレングリコール脂肪酸モノエステルおよびポリエチレングリコール脂肪酸ジエステル等のポリオキシアルキレンアルキルフェノール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールグリセロール脂肪酸エステル；ポリグリセロール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル等のポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル；グリセリド、植物油、水素化植物油、脂肪酸およびステロールからなる群の少なくとも１メンバーとポリオールの親水性エステル転移反応産物；ポリオキシエチレンステロール、その誘導体およびアナログ；ポリオキシエチル化ビタミンおよびその誘導体；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；ならびにこれらの混合物；トリグリセリド、植物油および水素化植物油からなる群の少なくとも１メンバーとポリオールのポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルおよび親水性エステル転移反応産物を挙げることができるがこれらに限定されない。ポリオールは、グリセロール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、プロピレングリコール、ペンタエリスリトールまたはサッカライドであり得る。
他の親水性非イオン性界面活性物質は、ＰＥＧ−１０ラウリン酸塩、ＰＥＧ−１２ラウリン酸塩、ＰＥＧ−２０ラウリン酸塩、ＰＥＧ−３２ラウリン酸塩、ＰＥＧ−３２ジラウリン酸塩、ＰＥＧ−１２オレイン酸塩、ＰＥＧ−１５オレイン酸塩、ＰＥＧ−２０オレイン酸塩、ＰＥＧ−２０ジオレイン酸塩、ＰＥＧ−３２オレイン酸塩、ＰＥＧ−２００オレイン酸塩、ＰＥＧ−４００オレイン酸塩、ＰＥＧ−１５ステアリン酸塩、ＰＥＧ−３２ジステアリン酸塩、ＰＥＧ−４０ステアリン酸塩、ＰＥＧ−１００ステアリン酸塩、ＰＥＧ−２０ジラウリン酸塩、ＰＥＧ−２５グリセリルトリオレイン酸塩、ＰＥＧ−３２ジオレイン酸塩、ＰＥＧ−２０グリセリルラウリン酸塩、ＰＥＧ−３０グリセリルラウリン酸塩、ＰＥＧ−２０グリセリルステアリン酸塩、ＰＥＧ−２０グリセリルオレイン酸塩、ＰＥＧ−３０グリセリルオレイン酸塩、ＰＥＧ−３０グリセリルラウリン酸塩、ＰＥＧ−４０グリセリルラウリン酸塩、ＰＥＧ−４０パーム核油、ＰＥＧ−５０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ−４０ヒマシ油、ＰＥＧ−３５ヒマシ油、ＰＥＧ−６０ヒマシ油、ＰＥＧ−４０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ−６０水素化ヒマシ油、ＰＥＧ−６０トウモロコシ油、ＰＥＧ−６カプリン酸／カプリル酸グリセリド、ＰＥＧ−８カプリン酸／カプリル酸グリセリド、ポリグリセリル−１０ラウリン酸塩、ＰＥＧ−３０コレステロール、ＰＥＧ−２５植物ステロール、ＰＥＧ−３０ダイズステロール、ＰＥＧ−２０トリオレイン酸塩、ＰＥＧ−４０ソルビタンオレイン酸塩、ＰＥＧ−８０ソルビタンラウリン酸塩、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＯＥ−９ラウリルエーテル、ＰＯＥ−２３ラウリルエーテル、ＰＯＥ−１０オレイルエーテル、ＰＯＥ−２０オレイルエーテル、ＰＯＥ−２０ステアリルエーテル、トコフェリルＰＥＧ−１００コハク酸塩、ＰＥＧ−２４コレステロール、ポリグリセリル−１０オレイン酸塩、Ｔｗｅｅｎ ４０、Ｔｗｅｅｎ ６０、スクロースモノステアリン酸塩、スクロースモノラウリン酸塩、スクロースモノパルミチン酸塩、ＰＥＧ １０−１００ノニルフェノールシリーズ、ＰＥＧ １５−１００オクチルフェノールシリーズおよびポロクサマーを限定することなく含む。
適した親油性界面活性物質は、単なる例として：脂肪アルコール；グリセロール脂肪酸エステル；アセチル化グリセロール脂肪酸エステル；低級アルコール脂肪酸エステル；プロピレングリコール脂肪酸エステル；ソルビタン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル；ステロールおよびステロール誘導体；ポリオキシエチル化ステロールおよびステロール誘導体；ポリエチレングリコールアルキルエーテル；糖エステル；糖エーテル；モノおよびジグリセリドの乳酸誘導体；グリセリド、植物油、水素化植物油、脂肪酸およびステロールからなる群の少なくとも１メンバーとポリオールの疎水性エステル転移反応産物；油溶性ビタミン／ビタミン誘導体；ならびにこれらの混合物を含む。この群の内、好まれる親油性界面活性物質は、グリセロール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルおよびこれらの混合物を含む、または植物油、水素化植物油およびトリグリセリドからなる群の少なくとも１メンバーとポリオールの疎水性エステル転移反応産物である。
一実施形態では、組成物は、化合物の優れた可溶化および／または溶解を確実にし、化合物の沈殿を最小化するために可溶化剤を含む。これは、非経口使用のための組成物、例えば、注射のための組成物にとって特に有利であり得る。可溶化剤は、界面活性物質等の親水性薬物および／または他の構成成分の溶解度を増加させるために、または安定したもしくは均一な溶液もしくは分散物として組成物を維持するために添加することもできる。
適した可溶化剤の例として、次のものが挙げられるがこれらに限定されない：エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオールおよびその異性体、グリセロール、ペンタエリスリトール、ソルビトール、マンニトール、トランスクトール（ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ）、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、シクロデキストリンおよびシクロデキストリン誘導体等のアルコールおよびポリオール；テトラヒドロフルフリルアルコールＰＥＧエーテル（グリコフロール（ｇｌｙｃｏｆｕｒｏｌ））またはメトキシＰＥＧ等、約２００〜約６０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールのエーテル；２−ピロリドン、２−ピペリドン、ε−カプロラクタム、Ｎ−アルキルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシアルキルピロリドン、Ｎ−アルキルピペリドン、Ｎ−アルキルカプロラクタム、ジメチルアセトアミドおよびポリビニルピロリドン等のアミドおよび他の窒素含有化合物；プロピオン酸エチル、クエン酸トリブチル、アセチルクエン酸トリエチル、アセチルクエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、酪酸エチル、トリアセチン、プロピレングリコールモノアセテート、プロピレングリコールジアセテート、ε−カプロラクトンおよびその異性体、δ−バレロラクトンおよびその異性体、β−ブチロラクトンおよびその異性体等のエステル；ならびにジメチルアセトアミド、ジメチルイソソルビド、Ｎ−メチルピロリドン、モノオクタノイン（ｍｏｎｏｏｃｔａｎｏｉｎ）、ジエチレングリコールモノエチルエーテルおよび水等の当技術分野で公知の他の可溶化剤。
可溶化剤の混合物を使用することもできる。例として、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ポリエチレングリコール２００−１００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコールおよびジメチルイソソルビドが挙げられるがこれらに限定されない。特に好まれる可溶化剤は、ソルビトール、グリセロール、トリアセチン、エチルアルコール、ＰＥＧ−４００、グリコフロールおよびプロピレングリコールを含む。
含まれ得る可溶化剤の量は、特に限定されない。所与の可溶化剤の量は、当業者であれば容易に決定することができる、生体により許容される量に限定され得る。一部の状況では、例えば、薬物の濃度を最大化するために、生体により許容される量をはるかに超える可溶化剤の量を含むことが有利であり得、過剰な可溶化剤は、蒸留または蒸発等の従来技法を使用して、対象に組成物を与える前に除去される。よって、存在する場合、可溶化剤は、薬物および他の賦形剤の組み合わせた重量に基づき、重量で１０％、２５％、５０％、１００％または最大約２００％の重量比であり得る。所望の場合、５％、２％、１％またはさらに少ない等、ごく少量の可溶化剤を使用することもできる。典型的には、可溶化剤は、重量で約１％〜約１００％、より典型的には、約５％〜約２５％の量で存在することができる。
組成物は、１種または複数の薬学的に許容される添加剤および賦形剤をさらに含むことができる。斯かる添加剤および賦形剤は、剥離剤（ｄｅｔａｃｋｉｆｉｅｒ）、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、抗酸化剤、保存料、キレート剤、粘性修飾薬（ｖｉｓｃｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ）、浸透圧調節薬（ｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）、香味剤（ｆｌａｖｏｒａｎｔ）、着色剤、臭気剤、乳白剤、懸濁剤、結合剤、充填剤、可塑剤、滑沢剤およびこれらの混合物を限定することなく含む。
加えて、加工を容易にするため、安定性を増強するため、または他の理由で、組成物に酸または塩基を取り込むことができる。薬学的に許容される塩基の例として、アミノ酸、アミノ酸エステル、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、水酸化マグネシウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、合成ケイ酸アルミニウム、合成ハイドロカルサイト（ｈｙｄｒｏｃａｌｃｉｔｅ）、水酸化マグネシウムアルミニウム、ジイソプロピルエチルアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、トリイソプロパノールアミン、トリメチルアミン、ｔｒｉｓ（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）その他が挙げられる。酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、シュウ酸、パラ−ブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸、尿酸その他等の薬学的に許容される酸の塩である塩基も適している。リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム等、多塩基酸（ｐｏｌｙｐｒｏｔｉｃ ａｃｉｄ）の塩を使用することもできる。塩基が塩である場合、カチオンは、アンモニウム、アルカリ金属、アルカリ土類金属その他等、いずれか簡便かつ薬学的に許容されるカチオンであり得る。例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウムを挙げることができるがこれらに限定されない。
適した酸は、薬学的に許容される有機または無機酸である。適した無機酸の例として、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、ホウ酸、リン酸その他が挙げられる。適した有機酸の例として、酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラ−ブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸、尿酸その他が挙げられる。
本開示の別の態様では、本開示の抗体組成物を含有する単位用量と、使用のための指示とを含むキットが提供される。キットは、上述の免疫抑制試薬、細胞傷害性薬剤もしくは放射能毒性薬剤、または本明細書に記載されている１種もしくは複数の追加的な抗体（例えば、第１のヒト抗体とは別個の抗原におけるエピトープに結合する補完的活性を有するヒト抗体）等、１種または複数の追加的な試薬を含有する１または複数の単位用量をさらに含むことができる。キットは典型的に、キットの内容の意図される使用を示す標識を含む。標識という用語は、キットの上にもしくはそれに添えて供給されるまたは他の仕方でキットに付随するいずれか書面のまたは記録された材料を含む。
本開示のキットは、診断用薬剤および／または他の治療剤を含むこともできる。一実施形態では、キットは、本開示の抗体と、本明細書に記載されている対象における疾患、状態または障害の状況または存在を診断するための診断方法において使用することができる診断用薬剤とを含む。
次の実施例は、本発明の様々な実施形態を例証する目的で示されており、いかなる様式においても本開示の限定を意味するものではない。本実施例は、本明細書に記載されている方法と共に、現在好まれる実施形態を代表し、例示的であり、本発明の範囲の限定として意図されない。特許請求の範囲によって定義される本発明の精神内に包含されるその変化および他の使用も、当業者であれば思いつくであろう。
（実施例１：抗体の結合親和性アッセイ）
全ＳＰＲ測定は、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器（ＧＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）で行った。ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器の操作および制御のため、ＢＩＡｃｏｒｅソフトウェア − ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００ ＣｏｎｔｒｏｌソフトウェアＶ３．２を使用した。ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００機器由来のＳＰＲデータの解析のため、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアＶ４．１を使用し、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン５を使用してデータをプロットした。ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３．４ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％Ｐ２０）において２５℃で、ＩＬ−６Ｒに対する抗体の結合親和性を測定した。親和性研究のための流量は、３０μＬ／分であった。チップの参照チャネルの構築のためのリガンドとして、示されている抗体を使用した。固定化されたリガンドに結合している分析物（ｓＩＬ−６Ｒ；ＳＢＨ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ ０１７６０ ＵＳＡ）を測定し、ｓＩＬ−６Ｒの濃度は、１．２〜１００ｎＭ（３×希釈）である。流量３０μＬ／分で３分間、各試料を注射して、チップに結合した抗体に結合させた。次に、同じ流量でチップの上に分析物なしの結合バッファーを送って、結合した分析物を解離させた。５００秒後に、再生溶液（１Ｍギ酸）を注射することにより、残っている結合した分析物を除去した。両者共にＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアＶ４．１内に含まれるＫｉｎｅｔｉｃｓ Ｗｉｚａｒｄおよびマニュアル適合プログラムを使用することにより、データを解析した。トシリズマブ（試料番号２５）と比べたｋａ、ｋｄ、ＫＤおよび親和性を表２に示す。
（実施例２：ＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性の決定）
実施例１に詳述するプロトコールに従って、ｐＨ７．４およびｐＨ６．０におけるＳＰＲ測定を並行して行い、ＫＤ値を計算した。ｐＨ依存性は、ｐＨ６．０におけるＫＤ値と、ｐＨ７．４におけるＫＤ値との間の比として計算され、これは、ｐＨ７．４からｐＨ６．０への親和性減少倍率を示す。本明細書に記載されている対象抗体のｐＨ依存性が、１を超える場合、これは、抗体が、ｐＨ７．４におけるＩＬ−６Ｒへのその結合がｐＨ６．０におけるものよりも高いようなｐＨ依存性様式でＩＬ−６Ｒに結合することを意味する。本明細書に記載されている対象抗体のｐＨ依存性が、１よりも低い場合、これは、抗体が、ｐＨ６．０におけるＩＬ−６Ｒへのその結合がｐＨ７．４におけるものよりも高いようなｐＨ依存性様式でＩＬ−６Ｒに結合することを意味する。抗体＃２０２、＃２０５および＃２０６ならびに抗体＃２０９、＃２３１および＃２３７において２つのバッチのＳＰＲ測定を行い、両方のバッチにおける参照抗体として抗体＃２５を使用した。得られたＫＤ値をそれぞれ下表３−１から３−２に示す。ｐＨ７．４およびｐＨ６．０における結合親和性を比較することによってこのように決定されたｐＨ依存性を表３−３に示す。下表３−３から、示されている抗体が、トシリズマブよりもはるかに高いｐＨ依存性を有し、ｐＨ７．４からｐＨ６．０への結合親和性のより有意な減少、よって、抗原中和およびクリアランスの観点から優れた特性を示すことが分かる。
（実施例３：ＩＬ−６受容体中和活性の評価）
ＰＢＳによる２回の洗浄後に、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０（ＩＬ６なしの栄養補給）にＤＳ−１細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ １１１０２）を懸濁し、３７℃で１８時間培養した。細胞懸濁物を、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に２５，０００細胞／９０μｌ／ウェルで分注し、次いで、最終濃度１００μｇ／ｍＬに達するように８μｌ／ウェル（１．２５ｍｇ／ｍＬ）の示されている抗体を添加した。次に、懸濁物を３７℃で６時間培養した。２５０ｎｇ／ｍＬにおける最高最終濃度での３種の濃度のＩＬ６（５×希釈）を添加し、次いで懸濁物を３７℃で７２時間培養した。ＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＰＭＳを２０：１の比で混合し、２０μｌ／ウェルで添加し、次いで３７℃で４時間インキュベートした。Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ｆｃ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、４９０ｎｍにおける吸光度を記録した。図２Ａおよび図２Ｂに示す通り、一部の代表的抗体は、ＤＳ−１細胞の増殖を有意に阻害した。
（実施例４：ＤＳ−１細胞における代表的抗体に対する阻害％およびＩＣ５０の評価）
ＰＢＳによる２回の洗浄後に、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０（ＩＬ６なしの栄養補給）にＤＳ−１細胞を懸濁し、３７℃で１８時間培養した。９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に２５，０００細胞／９０μｌ／ウェルで細胞懸濁物を分注し、次いで、最高濃度１００μｇ／ｍＬでの９種の濃度にわたる４倍希釈で８μｌ／ウェルの抗ＩＬ６Ｒ−ｍＡｂを添加し、３７℃で６時間培養した。最終濃度２ｎｇ／ｍＬによる２μｌ／ウェルのＩＬ６および対照を添加し、３７℃で７２時間培養した。２０：１の比で混合されたＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＰＭＳを２０μｌ／ウェルで添加し、３７℃で４時間インキュベートした。Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ｆｃ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して４９０ｎｍにおける吸光度を記録する。一部の代表的抗体に対する阻害％曲線を図３Ａおよび図３Ｂに示す。ＩＣ５０値を計算し、下に示す。
本開示の好まれる実施形態を本明細書に示し記載してきたが、当業者から見れば、斯かる実施形態が、単なる例として示されていることが明らかとなるであろう。そこで当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多数の変種、変化および置換を想定するであろう。本発明の実施において、本明細書に記載されている本発明の実施形態の様々な代替を用いることができることを理解されたい。次の特許請求の範囲が、本発明の範囲を定義し、このような特許請求の範囲内の方法および構造ならびにこれらの均等物が、これによって包含されることが意図される。

Claims (82)

  1. （ａ）重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有し；
    （ｃ）（ａ）配列番号３および配列番号４ならびに（ｂ）配列番号１および配列番号２を含有しない、
    抗体。
  2. 前記重鎖が、配列番号２６に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記軽鎖が、配列番号４に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 前記重鎖が、配列番号２８に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含み、前記軽鎖が、配列番号４に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、請求項１に記載の抗体。
  5. 前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
  6. 前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０５ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
  7. 前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
  8. 前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００５ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
  9. 前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
  10. （ａ）重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
    （ｂ）配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；
    （ｃ）配列番号３および配列番号４を含有しない、
    抗体。
  11. 前記重鎖が、配列番号２６のアミノ酸を含む、請求項１０に記載の抗体。
  12. 前記軽鎖が、配列番号４のアミノ酸を含む、請求項１０に記載の抗体。
  13. 前記重鎖が、配列番号２８のアミノ酸を含み、前記軽鎖が、配列番号４のアミノ酸を含む、請求項１０に記載の抗体。
  14. ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する前記結合親和性（ＫＤ）が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項１０〜１３のいずれかに記載の抗体。
  15. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１０に記載の抗体。
  16. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０５ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１０に記載の抗体。
  17. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１０に記載の抗体。
  18. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００５ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１０に記載の抗体。
  19. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項１０に記載の抗体。
  20. 前記ＩＬ−６受容体が、ヒトＩＬ−６受容体である、請求項１０〜１９のいずれかに記載の抗体。
  21. 前記ＩＬ−６受容体が、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項１０〜１９のいずれかに記載の抗体。
  22. 重鎖および軽鎖を含む抗体であって、
    （ａ）配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体の親和性を超える、ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示し；
    （ｂ）ＭＴＳ細胞増殖アッセイにおいて、０．０３２μｇ／ｍＬまたはそれに満たない濃度で、７２時間後にＤＳ−１細胞の増殖を少なくとも４０％阻害する、
    抗体。
  23. 前記重鎖が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の抗体。
  24. 前記重鎖が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の抗体。
  25. 前記軽鎖が、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の抗体。
  26. 前記重鎖が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、および配列番号８９から選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、および配列番号９０から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の抗体。
  27. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項２２に記載の抗体。
  28. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０５ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項２２に記載の抗体。
  29. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．０１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項２２に記載の抗体。
  30. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００５ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項２２に記載の抗体。
  31. ３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、０．００１ｎＭまたはそれに満たないＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に対する結合親和性（ＫＤ）を示す、請求項２２に記載の抗体。
  32. 前記ＩＬ−６受容体が、ヒトＩＬ−６受容体である、請求項２２〜３１のいずれかに記載の抗体。
  33. 前記ＩＬ−６受容体が、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、請求項２２〜３１のいずれかに記載の抗体。
  34. 重鎖および軽鎖を含む抗体であって、
    （ａ）前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み；および／または
    （ｂ）前記軽鎖が、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含み；
    （ｃ）前記抗体が、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、または配列番号８９の重鎖および配列番号２、配列番号４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号９０の軽鎖を含む抗体に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    抗体。
  35. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に２個またはそれよりも多い変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  36. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に３個またはそれよりも多い変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  37. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に４個またはそれよりも多い変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  38. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に５個またはそれよりも多い変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  39. 前記重鎖の位置５１における前記変異が、ＹからＦ、ＹからＲ、ＹからＷおよびＹからＫからなる群より選択される、請求項３４〜３９のいずれかに記載の抗体。
  40. 前記重鎖の位置５７における前記変異が、ＩからＭである、請求項３４〜４０のいずれかに記載の抗体。
  41. 前記重鎖の位置５８における前記変異が、ＴからＩおよびＴからＭからなる群より選択される、請求項３４〜４１のいずれかに記載の抗体。
  42. 前記重鎖の位置９９における前記変異が、ＳからＣ、ＳからＴ、ＳからＮおよびＳからＶからなる群より選択される、請求項３４〜４２のいずれかに記載の抗体。
  43. 前記重鎖の位置１０３における前記変異が、ＴからＩ、ＴからＡ、ＴからＧ、ＴからＬ、ＴからＭ、ＴからＹおよびＴからＲからなる群より選択される、請求項３４〜４３のいずれかに記載の抗体。
  44. 前記重鎖の位置１０６における前記変異が、ＭからＩである、請求項３４〜４４のいずれかに記載の抗体。
  45. 前記重鎖の位置１１６における前記変異が、ＴからＩである、請求項３４〜４５のいずれかに記載の抗体。
  46. 前記軽鎖が、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含む、請求項３４〜４６のいずれかに記載の抗体。
  47. 位置８９における前記変異が、配列番号２に関してＱからＧである、請求項３４〜４７のいずれかに記載の抗体。
  48. 位置９３における前記変異が、配列番号２に関してＴからＲである、請求項３４〜４８のいずれかに記載の抗体。
  49. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み、前記軽鎖が、配列番号２に関する位置８９に変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  50. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み、前記軽鎖が、配列番号２に関する位置９３に変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  51. 前記重鎖が、配列番号１に関する位置５１、５７、５８、９９、１０３、１０６および１１６に１個または複数の変異を含み、前記軽鎖が、配列番号２に関する位置８９および９３に１個または複数の変異を含む、請求項３４に記載の抗体。
  52. 重鎖および軽鎖を含む抗体であって、
    （ａ）前記重鎖が、配列番号１に関する１個または複数の変異を含み、残基５７が、メチオニン（Ｍ）へと変異され；
    （ｂ）前記軽鎖が、配列番号４もしくは配列番号２またはその両方に対して少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
    （ｃ）前記抗体が、３７℃の表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１ｎＭまたはそれに満たないヒトＩＬ−６Ｒに対する結合親和性（ＫＤ）を示し、前記ＩＬ−６Ｒが、配列番号９１に示すアミノ酸配列を有する、
    抗体。
  53. 前記重鎖が、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３７、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８から選択される配列に対して約７０％またはそれを超える、約７５％またはそれを超える、約８０％またはそれを超える、約８５％またはそれを超える、約９０％またはそれを超える、約９５％またはそれを超える、約９６％またはそれを超える、約９７％またはそれを超える、約９８％またはそれを超える、約９９％またはそれを超える、約９９．５％またはそれを超えるおよび約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の抗体。
  54. 前記抗体が、５よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  55. 前記抗体が、１０よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  56. 前記抗体が、１５よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  57. 前記抗体が、２０よりも高いＩＬ−６Ｒに対する結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  58. 前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列の重鎖および配列番号２のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体のｐＨ依存性よりも高い、ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  59. 前記抗体が、配列番号３のアミノ酸配列の重鎖および配列番号４のアミノ酸配列の軽鎖を含む抗体のｐＨ依存性よりも高い、ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性のｐＨ依存性を有し、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  60. 前記結合親和性の前記ｐＨ依存性が、ヒトＩＬ−６受容体に対するものであり、前記ｐＨ依存性が、ｐＨ７．４における前記ヒトＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性と、ｐＨ６．０における前記ヒトＩＬ−６Ｒに対する前記結合親和性との間の比として定義される、請求項５５〜６０のいずれかに記載の抗体。
  61. （ａ）配列番号１に関する前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｔ５８Ｉ、Ｓ９９ＣおよびＴ１０３Ｉ；
    （ｂ）配列番号１に関する前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＴおよびＴ１０３Ｉ；
    （ｃ）配列番号１に関する前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＮおよびＴ１０３Ｉ；
    （ｄ）配列番号１に関する前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９Ｃ、Ｔ１０３ＩおよびＴ１１６Ｉ；
    （ｅ）前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７Ｍ、Ｓ９９ＣおよびＴ１０３Ｉ；ならびに配列番号１に関する前記軽鎖におけるＱ８９ＧおよびＴ９３Ｒ；ならびに
    （ｆ）前記重鎖におけるＹ５１Ｆ、Ｉ５７ＭおよびＴ１０３Ｉ；ならびに配列番号２に関する前記軽鎖におけるＱ８９ＧおよびＴ９３Ｒ
    から選択される変異を有する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  62. モノクローナル抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  63. ヒトまたはヒト化抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  64. ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡもしくはＩｇＤ分子である、またはこれらの１種に由来する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  65. Ｆｃ領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  66. 前記Ｆｃ領域が、損なわれたエフェクター機能を含む、請求項６６に記載の抗体。
  67. 血清アルブミン、アルブミン結合ペプチドまたはポリマーに取り付けられている、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  68. 前記ポリマーが、ポリエチレングリコールである、請求項６７に記載の抗体。
  69. 二特異性抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
  70. 前記二特異性抗体が、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＩＬ−１α、ＩＬ−β、ＩＬ−１Ｒ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−２３、ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒ、ＢｌｙＳ、リンホトキシンα、リンホトキシンβ、ＬＩＧＨＴリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＶＬＡ−４、ＣＤ２５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ｒ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＢＡＦＦ、ＣＤ５２、ＣＤ２２、ＩＬ−３２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２１Ｒ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦＲ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＩＦＮ−アルファ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＣＣＲ５、ＡＰＲＩＬおよびＡＰＲＩＬＲから選択される第２の抗原に結合する、請求項６９に記載の抗体。
  71. 疾患または状態を処置する方法であって、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
  72. 前記疾患または状態が、感染、感染に伴うエンドトキシンショック、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、喘息、骨盤腹膜炎、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ぶどう膜炎、ペロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣病、腹膜炎、乾癬、血管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢および末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害、自己免疫性障害、膵炎、外科手術による外傷、移植片対宿主病、移植片拒絶、心疾患、骨吸収、熱傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝／肺線維症、歯周炎、低酸症、固形腫瘍（腎細胞癌）、肝臓がん、多発性骨髄腫、前立腺がん、膀胱がん、膵がん、神経学的がん、ならびにＢ細胞悪性疾患（例えば、キャッスルマン病、ある特定のリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および多発性骨髄腫）を含む、請求項６８に記載の方法。
  73. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
  74. 容器内に請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体を含むキット。
  75. 対象の状態の処置における使用のための請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体。
  76. 対象の状態を処置するための医薬の製造のための、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  77. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離されたポリヌクレオチド。
  78. 請求項７４に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
  79. 請求項７５に記載のベクターを含む細胞。
  80. 真核細胞である、請求項７６に記載の細胞。
  81. 原核細胞である、請求項７６に記載の細胞。
  82. 哺乳動物細胞、細菌細胞、真菌細胞または昆虫細胞である、請求項７６に記載の細胞。
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