JP2019522181A - 蛍光マーカーの新しい光学的特性 - Google Patents
蛍光マーカーの新しい光学的特性 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019522181A JP2019522181A JP2018559700A JP2018559700A JP2019522181A JP 2019522181 A JP2019522181 A JP 2019522181A JP 2018559700 A JP2018559700 A JP 2018559700A JP 2018559700 A JP2018559700 A JP 2018559700A JP 2019522181 A JP2019522181 A JP 2019522181A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- laser
- interest
- molecule
- excitation
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Description
本発明は、蛍光マーカーの分野、より具体的には、試料中の生物学的標的の検出のためのそれらの使用に関する。
1)著しい吸光係数
2)高い量子収率(0.8〜0.9)
3)不十分なトリプレット収率
4)励起状態(単数または複数)の短寿命
5)大きいストークスシフト
6)低い光退色
を満たす分子を除いて、特定の波長で光を吸収でき、次に光を再放出できる単純な分子を同一視しない。
i)試料を対象となる分子を特異的に結合するリガンドと接触させるステップであって、前記リガンドは、フィコエリトリンまたはその誘導体からなる蛍光色素に連結された、接触させるステップと、
ii)ステップi)の混合物を330nmおよび425nmの間の波長範囲をもつ少なくとも1つの光源によって励起するステップと、
iii)ステップii)において励起された混合物によって550nm以上の波長で放出された光を検出するステップと、
iv)ステップiii)において得られた結果に基づいて試料中の対象となる分子の有無を決定するステップと
を備える。
i)試料を対象となる分子を特異的に結合するリガンドと接触させるステップであって、前記リガンドは、フィコエリトリンまたはその誘導体からなる蛍光色素にコンジュゲートされた、接触させるステップと、
ii)ステップi)の混合物を330および425nmの間の波長範囲をもつ少なくとも1つの光源によって励起するステップと、
iii)ステップii)において励起された混合物によって550nm以上の波長で放出された光を検出するステップと、
iv)ステップiii)の結果に基づいて試料中の対象となる分子の有無を決定するステップと
を備える。
何気ない観測が本発明を喚起した。より具体的には、3つのレーザをもつこのタイプのフローサイトメータ(BC Gallios(商標))を扱う専門家によって行われた蛍光補償の設定に関連する典型的な経験の間に、本発明者らは、バイオレットレーザと関連する検出器のうちの1つ(FL10チャンネル)における低寄生漏れを観測した。この特定のケースでは、実施例2に記載するPEコンジュゲートのみで染色したタイプのマウスIgキャプチャービーズが、FL10(530および570nmの間の蛍光、550BP40フィルタ)において有意な信号レベルを提供したが、理論が予想したのは、この範囲の励起および放出波長と適合するフルオロフォアであるKrome−Orange(商標)で染色したコンジュゲートがない場合にFL10では蛍光が完全に欠如することであった。本発明者らは、この観測が些細であるとは感じず、この漏れの背後にある理由を収集することを目指した。
フローサイトメータまたはセルソータなどの、いくつかの分析デバイスは、405nmにおけるバイオレットレーザに加えて6つまでの追加のレーザを有することができる。今日、これらの機器は、3つのレーザ、すなわちi)時間参照を提供するレーザと見做され、複数の蛍光とともに散乱を解析する488nmにおける青色レーザ、ii)参照照明点の下/後で細胞を照明する640nmにおける赤色レーザ、iii)青色レーザの参照照明点の上/前で細胞を照明する405nmにおけるバイオレットレーザが現在は装備されている。複数点におけるこの照明は、各照明点からの蛍光の光学的および時間的な二重分離を可能にする。確かに、3つのレーザの各々からの信号がi)時間におけるおよそ数10マイクロ秒(典型的に30および40μsの間)のシフト、ならびにii)空間におけるおよそ数100マイクロメートル(典型的に100μm)に等しい距離のシフトを受けて、集光光学系を介した異なる光ファイバ(レーザごとに1つ)へのそれらの差次的な集束を可能にする。このように、多色FCMでは、通常、3つのレーザのうちの1つからの蛍光に本質的に他の2つのレーザのうちの1つからの光学的コンタミネーションはないと考えられる。
マルチレーザサイトメータの動作は、各レーザに対して空間的および時間的にシフトした分析されることになる粒子の励起を伴う。各細胞/粒子は、いくつかの光ビームを順次に通過する。(バイオレット−青色−赤色、すなわち、405−488−640nmにおける)3つのレーザが装備されたGALLIOS(商標)/NAVIOSサイトメータ(Beckman−Coulter,ヴィルパント,フランス)については、順序は、次の通り:バイオレット−青色−赤色であり、衝撃点間の距離が約100μmに等しく、時間が約30μsに等しい。光信号を90°で集光するレンズ(<ピックアップ・レンズ>)が3つの衝撃点で放出された光を差次的に集光し、3つの独立した光ファイバ入口へ集束させて、それらが次に光を各光ファイバからの波長を独立して分離することが可能な光システムの方へ導く。
様々な量のPEで覆った10μm直径のポリスチレンビーズがキャリブレータとしての役割を果たす:ビーズC1、C2、C3およびC4は、それぞれ900、7,500、115,000および1,250.000個のR−PE分子/ビーズを有する。ビーズの2つのロットを合成して、PBS+BSA 0.1%+アジ化ナトリウム0.1%からなる溶液中に懸濁させた。
青色レーザの信号は、1つの粒子に対してt0を与え、他のレーザによるこの同じ粒子と関連した信号がそれぞれt0−30μs(バイオレットレーザ)およびt0+30μs(赤色レーザ)にあると見做した。
・青色レーザ:22−20−10−5−3−1mW
・バイオレットレーザ:40−30−20−5−1mW
青色およびバイオレットレーザの公称パワーは、それぞれ22mWおよび40mWに等しい(図2、4デカードのスケールおよび図5、5デカードのスケール)。最初にビーズシングレットを2重散乱解析における<ビーズ>領域によって予め選択し、適宜に、それらのFL2およびFL10蛍光を解析する。
青色レーザの公称パワーを10mW(図3)および次に5mW(図4)へ減少させるのに対して、バイオレットレーザの公称パワーを40mWに維持する。
− FL2では、メジアン比が10以上の、4つのピークの極めて明確な分離。
− FL10では効果的であるが、わずかにより明白でなく(最大メジアン比=8であり)、特に最低PE密度レベルでは明白でない分離。
を観測することが可能である。
バイオレットレーザの公称パワーを10mW(図6)および次に5mW(図7)へ減少させるのに対して、青色レーザの公称パワーを22mWに維持する。
1)青色レーザの変調がFL2の分解能(青色レーザからのPE)のみに影響を与えること
2)バイオレットレーザの変調がFL10の分解能(バイオレットレーザからのPE)のみに影響を与えること
を示す。
3.1−原理
異なるPEコンジュゲートおよび/またはPEタンデムを用いてマウスIg(免疫グロブリン)キャプチャービーズを染色する。このようにして得た3つの染色レベルを、それぞれFL2、FL4またはFL5(それぞれPE、PE−Cy5およびPE−Cy7に対する、488nmにおける参照励起)上、ならびにFL10(それぞれPE、PE−Cy5およびPE−Cy7に用いたものと同じフィルタでフィルタした、405nmにおけるテスト励起)上で同じ通過帯域フィルタを用いることによって解析する。
SPHEROTECH Inc.によって市販される直径7μmのマウスIgキャプチャービーズ(H+L)(SPHERO−COMPtrol Particles、参照CMIgP−70−3K)を供給元の指示に従って用いる。3つのビーズ集団が陰性対照に対応し、ヤギ抗マウス抗体、従って、コンジュゲートマウスIgで1つのビーズを不十分に覆い、1つのビーズを大量に覆った。
キャプチャービーズを20μLのコンジュゲート(PEまたはその誘導体、PE−Cy5、PE−Cy5.5またはPE−Cy7のうちの1つに連結したマウス抗体)とともに周囲温度、暗所で1時間インキュベートする。次に、500μLのPBS−BSAバッファを加える。
図9に詳しく示すように、PE−Cy5.5タンデムにコンジュゲートされたマウス抗体に対して、FL4のみならず、FL10においてもすべての3つのピークの明確な分離を観測することが可能である。PE、PE−Cy5およびPE−Cy7にコンジュゲートされたマウス抗体に対して、同様の結果を得た。
− R1:強く染色した試料対軽く染色した試料、
− R1:軽く染色した試料対染色しない試料、
− R1:強く染色した試料対染色しない試料、
を区別するための能力を説明する。
4.1−試料
用いたモデルは、ここではLP1多発性骨髄腫細胞株によって代表される異常細胞タイプを含んだEDTA全血(WB:whole blood)にある。このモデルは、このケースでは芽球と同様の白血病造血細胞の検出のケースの概略を示す。
PEにコンジュゲートされた抗CD45モノクローナル抗体(BioCytex)により、試料中に存在する種々の細胞集団のキャラクタリゼーションを実行した。CD45の濃度は、それぞれ、およそ200,000分子/リンパ球対120,000分子/単球、BIKOUEら,(Cytometry,26:137−147(1996))によれば、217±64×103対103±44×103である。
本発明者らの経験および文献では、血球算定において、通常、探索される芽球は、特に、他のパラメータ(体積、FSC)がそれに寄与するならば、ほとんどの場合、この実施例のLP1細胞よりもこのCD45×SSCシステムによって良好に区別されるであろう。
正常血液
図10(A)〜(B)に示すように、CD45−PE対SSグラフの比較は、PEを青色レーザ(488nm/FL2)によって、またはバイオレットレーザ(405nm/FL10)によって励起するかどうかに係わらず、いくぶん同様の細胞分布を示す。この2つの条件が全血の主要な細胞亜集団の良好なCD45対SS区別を許容する。
白血病芽球(LP1)を明らかにするためにCD45対SS解析をプレコンディションするときに、PMNの雲形の変化が観測されることがあり、これは、両方のシステム、すなわち、488nm(図11(C))または405nm(図11(D))におけるCD45−PEの励起において同様であり、従って、CD45発現の異常なレベルによって特徴付けられる血液中に存在する病的細胞を検出する可能性を両方のシステムが提供することを示唆する。そのうえ、血液のCD45×SSグラフ上の変化は、LP1細胞が顆粒球のものと同様の雲の中に(部分的に重なって)置かれることを示唆する。
5.1−試料
用いたモデルは、ここではLAM HL60およびNB4株によって代表される2つの異常細胞タイプを含んだEDTA全血(WB)にある。これらのモデルは、このケースでは芽球と同様の白血病造血細胞の検出のケースの概略を示す。
PEにコンジュゲートされた抗CD45モノクローナル抗体(BioCytex)により、試料中に存在する種々の細胞亜集団のキャラクタリゼーションを行い、抗CD45モノクローナル抗体は、単独かまたは他の蛍光試薬の存在下で多色染色して用い、抗CD33モノクローナル抗体をそれらの蛍光試薬のうちでPE−Cy7にコンジュゲートさせた。
本発明者らの経験では、細胞亜集団(正常細胞および白血病芽球)は、多くの場合、CD45×SSCシステム(ここでは示さない)によって、またはCD33×SSCシステム(図12AおよびB)ならびにCD33×CD45システム(図12CおよびD)によって区別される。
図12(A)および(B)に示すように、CD33−PE−Cy7(CD33−PC7)対SSグラフの比較は、PE−Cy7(PC7)を青色レーザ(488nm/FL5)によって、またはバイオレットレーザ(405nm/FL10)によって励起するかどうかに係わらず、同様の細胞分布を呈する。全血ならびに白血病芽球(HL60およびNB4)の主要な細胞亜集団(リンパ球、単球、PMNおよび残存赤血球)の良好なCD33対SS区別をこれら2つの励起条件が可能にする。そのうえ、芽球もCD33発現のレベルによって区別され、すなわち、HL60細胞は、NB4細胞について観測されるよりも高いCD33発現のレベルを有する。
Claims (12)
- 試料中の対象となる少なくとも1つの分子を検出するための方法であって、
i)前記試料を対象となる前記分子を特異的に結合するリガンドと接触させるステップであって、前記リガンドは、フィコエリトリンまたはその誘導体からなる蛍光色素にコンジュゲートされた、前記接触させるステップと、
ii)ステップi)の混合物を330および425nmの間の波長範囲をもつ少なくとも1つの光源によって励起するステップと、
iii)ステップii)において励起された前記混合物によって550nm以上の波長で放出された光を検出するステップと、
iv)前記試料中の対象となる前記分子の有無をステップiii)の結果に基づいて決定するステップと
を備える方法。 - 対象となる前記少なくとも1つの分子は、タンパク質、脂質、炭水化物、脂質もしくは糖脂質構造または炭水化物ユニットである、請求項1に記載の方法。
- 前記試料は、細胞を備えるか、または備える可能性がある、請求項1または2に記載の方法。
- 対象となる前記少なくとも1つの分子の特異的リガンドは、抗体である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記蛍光色素は、R−フィコエリトリン(R−PE)である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- ステップi)の前記混合物を励起するために用いられる前記少なくとも1つの光源は、400および410nmの間の波長範囲を有する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- ステップi)の前記混合物を励起するために用いられる前記少なくとも1つの光源は、405nmの波長で放出するバイオレットレーザまたはバイオレットレーザダイオードである、請求項6に記載の方法。
- 前記試料中の対象となる少なくとも1つの第2の分子の同時同定をさらに備える、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- フローサイトメータ上で実施される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 試料中の対象となる少なくとも1つの分子を検出するためのフィコエリトリンまたはその誘導体からなる蛍光色素の使用であって、前記蛍光色素の励起波長が330および425nmの間であることを特徴とする、使用。
- 生体試料中の細胞または微粒子亜集団の分離、解析または計数のための、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法の使用。
- 前記細胞または微粒子亜集団は、造血起源である、請求項11に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR16/00792 | 2016-05-18 | ||
FR1600792A FR3051556A1 (fr) | 2016-05-18 | 2016-05-18 | Utilisation de marqueurs fluorescents pour la detection de cible biologique dans un echantillon |
PCT/EP2017/000593 WO2017198334A1 (fr) | 2016-05-18 | 2017-05-17 | Nouvelle propriete optique d'un marqueur fluorescent |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019522181A true JP2019522181A (ja) | 2019-08-08 |
Family
ID=56943569
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018559700A Pending JP2019522181A (ja) | 2016-05-18 | 2017-05-17 | 蛍光マーカーの新しい光学的特性 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230152225A1 (ja) |
EP (1) | EP3458843A1 (ja) |
JP (1) | JP2019522181A (ja) |
BR (1) | BR112018073696A2 (ja) |
FR (1) | FR3051556A1 (ja) |
WO (1) | WO2017198334A1 (ja) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003093795A2 (en) * | 2002-05-03 | 2003-11-13 | Immunivest Corporation | Device and method for analytical cell imaging |
US20060252150A1 (en) * | 2002-11-08 | 2006-11-09 | Linzhao Cheng | Human embryonic stem cell cultures, and compositions and methods for growing same |
EP1950566A1 (en) * | 2005-11-10 | 2008-07-30 | National University Corporation University Of Toyama | Method of evaluating binding properties of biosubstances and biosubstance-binding substances |
JP2009014729A (ja) * | 2006-02-24 | 2009-01-22 | Furukawa Electric Co Ltd:The | フローサイトメトリーによる細胞の検出・分取システム、及び検出・分取方法 |
JP2011501812A (ja) * | 2007-10-22 | 2011-01-13 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー | オルガノポリシロキサンを含む懸濁液においてタンパク質の凝集を評価するための方法、およびタンパク質溶液を含有する、オルガノポリシロキサンでコーティングされた医療用品 |
US20120324986A1 (en) * | 2009-12-04 | 2012-12-27 | The Trustees Of Columbia University In The City Of | Spectral and temporal laser fluorescence analysis such as for natural aquatic environments |
JP2013513109A (ja) * | 2009-12-04 | 2013-04-18 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | アコースティックフローサイトメトリーのための装置、システム、方法、およびコンピュータ読み取り可能な媒体 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4520110A (en) * | 1981-10-06 | 1985-05-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing a phycobiliprotein labeled ligand or receptor |
US5206143A (en) * | 1985-11-01 | 1993-04-27 | Smithkline Beecham Corporation | Method and reagents for performing subset analysis using quantitative differences in fluorescence intensity |
FR2664699B1 (fr) * | 1990-07-13 | 1995-08-18 | Cis Bio Int | Procede d'amplification du signal d'emission d'un compose luminescent. |
WO2000017650A1 (en) * | 1998-09-23 | 2000-03-30 | Molecular Probes, Inc. | Energy transfer compositions comprising phycobiliproteins |
US7738094B2 (en) * | 2007-01-26 | 2010-06-15 | Becton, Dickinson And Company | Method, system, and compositions for cell counting and analysis |
US9625387B2 (en) * | 2014-09-16 | 2017-04-18 | Lawrence Livermore National Security, Llc | System and method for controlling depth of imaging in tissues using fluorescence microscopy under ultraviolet excitation following staining with fluorescing agents |
-
2016
- 2016-05-18 FR FR1600792A patent/FR3051556A1/fr active Pending
-
2017
- 2017-05-17 US US16/302,213 patent/US20230152225A1/en not_active Abandoned
- 2017-05-17 BR BR112018073696A patent/BR112018073696A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2017-05-17 JP JP2018559700A patent/JP2019522181A/ja active Pending
- 2017-05-17 WO PCT/EP2017/000593 patent/WO2017198334A1/fr unknown
- 2017-05-17 EP EP17729005.3A patent/EP3458843A1/fr not_active Withdrawn
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003093795A2 (en) * | 2002-05-03 | 2003-11-13 | Immunivest Corporation | Device and method for analytical cell imaging |
JP2005524833A (ja) * | 2002-05-03 | 2005-08-18 | イムニベスト・コーポレイション | 分析細胞イメージング用のデバイスおよび方法 |
US20060252150A1 (en) * | 2002-11-08 | 2006-11-09 | Linzhao Cheng | Human embryonic stem cell cultures, and compositions and methods for growing same |
EP1950566A1 (en) * | 2005-11-10 | 2008-07-30 | National University Corporation University Of Toyama | Method of evaluating binding properties of biosubstances and biosubstance-binding substances |
JP2009014729A (ja) * | 2006-02-24 | 2009-01-22 | Furukawa Electric Co Ltd:The | フローサイトメトリーによる細胞の検出・分取システム、及び検出・分取方法 |
JP2011501812A (ja) * | 2007-10-22 | 2011-01-13 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー | オルガノポリシロキサンを含む懸濁液においてタンパク質の凝集を評価するための方法、およびタンパク質溶液を含有する、オルガノポリシロキサンでコーティングされた医療用品 |
US20120324986A1 (en) * | 2009-12-04 | 2012-12-27 | The Trustees Of Columbia University In The City Of | Spectral and temporal laser fluorescence analysis such as for natural aquatic environments |
JP2013513109A (ja) * | 2009-12-04 | 2013-04-18 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | アコースティックフローサイトメトリーのための装置、システム、方法、およびコンピュータ読み取り可能な媒体 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
RAY: "Single-Molecule Spectroscopic Study of Enhanced Intrinsic Phycoerythrin Fluorescence on Silver Nanos", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. Vol.80/Iss.18, JPN6021034437, 15 September 2008 (2008-09-15), pages 6942 - 6948, ISSN: 0004587726 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3458843A1 (fr) | 2019-03-27 |
BR112018073696A2 (pt) | 2019-02-26 |
FR3051556A1 (fr) | 2017-11-24 |
WO2017198334A1 (fr) | 2017-11-23 |
US20230152225A1 (en) | 2023-05-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Nolan et al. | Analysis of individual extracellular vesicles by flow cytometry | |
US5928949A (en) | Reagent and method for classifying leukocytes by flow cytometry | |
US7932503B2 (en) | Method for pre-identification of spectral overlaps within fluorescent dye and detector combinations used in flow cytometry | |
US11726031B2 (en) | Fluorescent spectrum correcting method and fluorescent spectrum measuring device | |
Flores-Montero et al. | Fluorochrome choices for multi-color flow cytometry | |
Wang et al. | Quantitating fluorescence intensity from fluorophores: practical use of MESF values | |
ES2914523T3 (es) | Usos, métodos, kits, composiciones y anticuerpos para identificar subtipos de células hematopoyéticas | |
Petrunkina et al. | Fluorescence technologies for evaluating male gamete (dys) function | |
JPH0565822B2 (ja) | ||
Tertel et al. | High‐resolution imaging flow cytometry reveals impact of incubation temperature on labeling of extracellular vesicles with antibodies | |
Chattopadhyay | Quantum dot technology in flow cytometry | |
Du et al. | The evolution of guidelines for the validation of flow cytometric methods | |
Gul et al. | Characterization of extracellular vesicles by flow cytometry: Challenges and promises | |
EP0259833B1 (en) | Reagent and method for classifying leukocytes by flow cytometry | |
Stewart et al. | Flow cytometer in the infrared: Inexpensive modifications to a commercial instrument | |
US20090246805A1 (en) | Method for classifying and counting basophils | |
JP2019522181A (ja) | 蛍光マーカーの新しい光学的特性 | |
Abrams et al. | Quantum dots in flow cytometry | |
Wang et al. | Flow cytometer performance characterization, standardization, and control | |
Schiemann et al. | Selection and combination of fluorescent dyes | |
Neukammer et al. | Concept for the traceability of fluorescence (beads) in flow cytometry: exploiting saturation and microscopic single molecule bleaching | |
Steinkamp | Identification of Single Cells by Fluorescent and Darkfield Optical Techniques | |
Mittag et al. | Sequential photobleaching for increasing the measurable fluorochromes by laser scanning cytometry | |
Zhang et al. | Use of Qdotо nanocrystal primary antibody conjugates in flow cytometry | |
Harkins et al. | Flow Cytometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190116 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200310 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201117 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20201118 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210217 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210907 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220405 |