JP2019516395A - 第xi因子の活性部位に対するモノクローナル抗体及びその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
定義
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、例えば抗体又はその断片、ユニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、特にFXI/FXIaに結合し、FXI/FXIaの機能的活性を阻害する四価若しくは他の多価抗体を特に包含する。用語「抗体」とは、ポリクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を持つ抗FXI/FXIa抗体組成物、ファージライブラリに由来する全長又は無傷なモノクローナル抗体を含めたモノクローナル抗体(mAb)、ヒト化抗体、ヒト抗体、合成抗体、キメラ抗体、単一ドメイン抗原結合タンパク質並びにFab、Fab’、F(ab’)2及びFv断片を含めた抗FXI/FXIa抗体の断片(下記参照)、ダイアボディ、単一ドメイン抗体(sdAb)、一本鎖Fvのことを指す。ラクダ科動物抗体又はその断片(「ナノボディ」)など他の動物種において作製される抗体も、この適用の範囲に該当する。更に、設計反復タンパク質様DARPins(設計アンキリン反復タンパク質)などの抗体様の結合特性を持つ分子は、この適用の範囲内である。これら抗体形態の全ては、所望の生物学的及び/又は免疫学的活性を呈する限り、本発明の範囲内である。用語「免疫グロブリン」(Ig)は、本明細書における抗体と交換可能で使用される。抗体は、ヒト及び/又はヒト化であり得る。
本発明の抗FXI抗体
本発明は、FXIを標的とする抗凝固療法の手段及び方法に関する。FXIは、正常な止血において果たす役割が小さいので、FXI阻害剤は、出血副作用のリスクがより少ない。実際、動物においてFXI欠損又はFXI阻害は、出血時間に対する効果がなく、出血時間を著しく延長し、診療における重篤な出血副作用と関連する高用量ヘパリンと対照的である。従って、病的血栓症におけるその活性な役割、及びあるとしても、正常な止血における小さい役割のため、FXIは、抗凝固療法に対する魅力的な標的である。本発明者らは、ヒトにおいてFXI活性を阻害するための固有の抗体を開発した。
本発明のMAbは、ヒトFXI/FXIa又はこれら分子の部分で免疫した動物から免疫細胞を単離することにより、及び免疫細胞を不死化してハイブリドーマなどの抗体分泌細胞株を得ることによって得られる。様々な精製方法によって単離された、ヒトFXI、FXIa、FXIの単離されたセリンプロテアーゼドメインなどその断片、及び/又はFXIアミノ酸配列を含む合成ペプチドを使用して、適当な宿主動物を免疫できる。所望の抗体を産生する細胞株は、抗体活性の存在について培養上清をスクリーニングし、FXIの機能的活性に対して選択した抗体の効果を確立することによって同定され得る。
第2の態様において、本発明は、本明細書において上で定義した抗体又は抗体断片を含む医薬組成物に関係する。医薬組成物は、少なくとも1つの薬学的に許容可能な担体を更に含むことが好ましい。アジュバント又は媒体などの薬学的に許容可能な担体は、対象に抗体又は抗体断片を投与するためのものある。前記医薬組成物は、それを必要とする対象に組成物の有効量を投与することにより本明細書において以下に記述される処置の方法に使用され得る。本明細書では用語「対象」とは、哺乳動物に分類され、霊長類及びヒトを含むがそれに制限されない全ての動物のことを指す。対象は、あらゆる年齢又は人種の男性若しくは女性であることが好ましい。
第3の態様において、本発明は、医薬として使用するための、本明細書において上で定義した抗体若しくは抗体断片、又は前記抗体若しくは抗体断片を含む医薬組成物に関する。
本発明の抗FXI抗体は、多くの従来通りの技術のいずれかにより調製され得る。抗FXI抗体は、当技術分野において公知の任意の技術を使用して、組換え発現系で通常産生されることになる。例えばShukla及びThommes(2010年、「Recent advances in large−scale production of monoclonal antibodies and related protein」、Trends in Biotechnol.28[5]:253〜261頁)、Harlow及びLane(1988年)「Antibodies:A Laboratory Manual」、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、NY、並びにSambrook及びRussell(2001年)「Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版)、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor Laboratory Press、NYを参照のこと。当技術分野において公知の任意の発現系を使用して、本発明の組換えポリペプチドを作ることができる。一般に、宿主細胞は、所望のポリペプチドをコードしているDNAを含む組換え発現ベクターで形質転換される。
1.1材料
ヒト凝固因子FXI、FX及びFIXを、Haematologic Technologies、 Inc.(Essex Junction、VT、USA)から購入した。血漿FXIも、LFB(Hemoleven;LFB、Les Ulis、France)から入手した。加えて、FXIの供給源は、下で開示する実験の成果とは無関係なので、他の供給源からのFXI(血漿から精製されたFXI又はProf JC Meijers、Amsterdamから入手した組換えヒトFXI)を使用した。プレカリクレイン(PK)を、Merck Millipore、Darmstadt、 Germanyから入手した。Pathromtin SL又はカオリン(Kaolin)STA(Stago)(aPTT試薬)、組換えイノビン(Innovin)及びFXI欠損血漿を、Siemens Healthcare Diagnostics(Marburg、Germany)から入手した。トロンビンキャリブレーター及びFluCaキットを、Thrombinoscope BV、Maastricht、Netherlandsから入手した。蛍光発生基質Z−Gly−Gly−Arg−AMCを、Bachem、Bubendorf、Switzerlandから購入した。リン脂質(PC/PS/PE、40/40/20)を、Avanti Polar Lipids、Alabaster、Alabamaから入手した。発色性基質S2366及びS2222を、Chromogenix(Milano、Italy)から入手した。tPA及びFXIの個々のアップルドメインの組換え融合タンパク質を、記述されている通り(van Montfoort MLら、Thromb Haemost 2013年;110:1065〜73頁)調製した。エノキサパリン(クレキサン[Clexane])を、Sanofi−Aventis(Paris、France)から入手した。
FXIに対するMAbを、精製ヒト血漿ヒトFXIによるマウスの注射後に従来の方法によって生成した。簡潔には、0日目に、BALB/cマウス(雌、6〜8週齢;Charles River Laboratories)を、完全フロイントアジュバント中の精製FXI(各マウスとも、完全フロイントアジュバント[Sigma]250μLと混合した、リン酸緩衝食塩水、pH7.4[PBS]250μL中のFXI 25μg)で皮下注射した。マウスにおける抗体応答を、21日目及び42日目における不完全フロイントアジュバント中の精製FXI(各マウスとも、不完全フロイントアジュバント[Sigma]250μLと混合したPBS 250μL中のFXI 25μg)の皮下注射、並びに63日目及び64日目におけるアジュバントを含まないFXI(各マウスとも、PBS 250μL中のFXI 25μg)の腹腔内注射により次いで追加免疫した。
表面プラズモン共鳴を、研究品質のcm5センサーチップを装着したビアコア2000(GE Healthcare)でFXIに対するmAbの親和定数を評価した。第XI因子を、アミンカップリング化学反応を使用して固定化した。表面を、0.1M N−ヒドロキシスクシンイミド及び0.1M 3−(N,N−ジメチルアミノ)プロピル−N−エチルカルボジイミドの1:1混合物で、流速10μL/分で7分間活性化した。10mM酢酸ナトリウム、pH5.5中で濃度10μg/mLのリガンドを、密度1000ruで固定化した。無処理のフローセルを、参照表面として使用した。全ての表面を、1Mエタノールアミン、pH8.0の7分間の導入によりブロッキングした。以下のプロトコールを使用して、FXIへのmAbの動力学的結合を評価した。分析物を、10mM HEPES、150mM NaCl、0.01%トゥイーン20、pH7.4中に濃度6.25〜100nMの範囲で、流速60μL/分、温度20℃で2つのフローセルに導入した。複合体を、それぞれ360及び600秒間結合及び解離させた。表面を、50mM NaOHの10秒間の導入により再生させた。各サンプル及び緩衝液ブランクの3つ組の導入(ランダムな順序)を、2つの表面に流した。データを、1Hzの率で収集した。データを、BiaEvaluation 4.1ソフトウェア内で利用可能なグローバルデータ分析オプションを使用して単純な1:1相互作用モデルに当てはめた。
FXIの個々のアップルドメインを、記述されているように(Meijers JCら、Biochemistry 1992年;31:4680〜4頁)tPAとの融合タンパク質として発現させた。これら融合タンパク質に対するmAbの結合を、4つの融合タンパク質及び精製血漿FXIを1μg/mLでELISAプレートにコーティングし、その後異なるmAb(van Montfoortら、Thromb Haemost 2013年;110:1065〜73頁)とインキュベートするELISAを使用して評価した。次いで融合タンパク質へのmAbの結合を、ペルオキシダーゼコンジュゲートした抗マウスIgGで測定し、プレートに結合している抗体を、オルト−フェニレンジアミン−二塩酸(OPD)とのインキュベーションによって検出した。結果を490nmでのODとして表示した。
プロトロンビン時間(PT)及び活性化部分トロンボプラスチン時間(aPTT)を、製造業者(Siemens Healthcare Diagnostics)の試薬及びプロトコールを用いて自動凝固分析器(Behring Coagulation System)で測定した。
リアルタイムでの血漿におけるトロンビン生成を、Hemkerら(Pathophysiol Haemost Thromb 2002年;32:249〜53頁)によって記述される通り、及び製造業者(Thrombinoscope、Maastricht、Netherlands)によって提供されるマニュアルにおいて測定した。簡潔には、凝固を、組換えヒト組織因子(イノビン、Siemens Healthcare Diagnostics)1若しくは5pM又はaPTT試薬(8倍希釈した;Pathromtin SL、Siemens Healthcare Diagnostics)のいずれか、4μMリン脂質及び417μM蛍光発生基質z−Gly−Gly−Arg−AMC(Bachem、Bubendorf、Switzerland)の存在下で血漿のカルシウム再沈着によって引き起こした。蛍光を、Fluoroskan Ascent Fluorometer(Thermolabsystems、Helsinki、Finland)を使用して監視し、内因性トロンビン産生能(ETP)、ピーク、ピークに至るまでの時間、遅延時間及び速度指数をトロンビノスコープ(Thrombinoscope)(登録商標)ソフトウェアを使用して算出した。
発色アッセイを、25mM Hepes、pH7.4、137mM NaCl、3.5mM KCl、3mM CaCl2及び0.1mg/mLウシ血清アルブミン(BSA)中で実行した。
FXIaの酵素活性に対する精製抗FXI mAbの効果を評価するために、FXIa及び精製mAbを、発色アッセイ緩衝液中にそれぞれ終濃度50nM及び500nMで、37℃で30分間インキュベートした。次いで、発色基質S2366を、終濃度0.5mMで添加し、基質の変換を405nmで測定した。FXIaの発色活性に対するmAb 抗FXI 34.2の効果を確認するいくつかの実験において、少し異なる条件、即ち2.5nM FXIa及び25nM抗FXI mAbを使用した。
動物の手順を、アカデミックメディカルセンター(Amsterdam、Netherlands)で実行し、機関の動物実験委員会によって承認された。
マウス尾部出血アッセイを、記述されている通り使用した(Wang Xら、J Thromb Haemost 2006年;4:1982〜8頁)。簡潔には、マウスを麻酔し、37℃電気パッド上に置いた。尾部直径約1mm(先端から2〜4mm)で尾部を切断し、満たした生理食塩水中に37℃で置いた。出血が停止するまでの時間を記録した。30分後、動物が、まだ出血していても実験を停止し、動物を屠殺した。失血を、出血尾部から血液を採集するために使用した生理食塩水の575nmのODを測定することによって評価した。
ハイブリドーマ細胞をPBSで洗浄し、分注し、ペレットとして−80℃で保存した。RNAを、RNeasyミニアイソレーションキット(RNeasy Mini Isolation Kit)(QIAGEN)を使用することによりこれらペレットから単離した。RNA濃度を、分光光度計(A260nm)で決定した。逆転写酵素によって、cDNAを、リバートエイドHマイナスファーストストランドcDNA合成キット(RevertAid H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit)(商標)(Fermentas)を使用してRNA 2μgから合成し、更なる使用まで−20℃で保存した。アイソタイプ特異的プライマー(センス及びアンチセンス)を設計して、マウスmAb抗FXI 34.2のV領域を増幅した(表4)。
マウスmAb抗FXI 34.2の配列を、コンポジットヒト抗体(Composite Human Antibody)技術(www.antitope.co.uk)を使用してヒト化し、脱免疫化した。コンポジットヒト抗体は、無関係なヒト抗体のV領域に由来する複数の配列セグメント(「コンポジット」)を含む。ヒトV領域データベースから得られた選択した配列セグメントの全てを、潜在的なT細胞エピトープの存在についてin silicoでフィルタリングした。
リード、完全なヒトコンポジットリード抗FXI mAbの免疫原性潜在性を、HLAタイピング済みドナーの末梢血単核細胞を使用してin vitroで評価した(エピスクリーン[EpiScreen][商標]技術;Antitope、Cambridge、UK)。簡潔には、末梢血単核細胞(PBMC)を、リンフォプレップ(Lymphoprep)(Axis−shield、Dundee、UK)密度遠心分離を使用して健康な群集ドナーの白血球層から単離し、続いてT細胞を除去した(CD8+ロゼットセップ[RosetteSep][商標];StemCell Technologies Inc、London、UK)。ドナーを、HLA SSP−PCRに基づく組織タイピングキット(Biotest、Solihull、UK)を使用してHLA−DRハプロタイプについてタイピングした。世界及びヨーロッパ/北アメリカ集団において発現されているHLA−DRアロタイプの数及び頻度を示す20名のドナーからPBMCを選択し、サンプル当たり50μg/mLの終濃度で精製コンポジット抗体とインキュベートした。各ドナーに対して、再現性対照(100μg/mLキーホールリンペットヘモシアニン[KLH]、Pierce[Perbio]、Cramlington、UK KLHとインキュベートした細胞)、臨床対照(50μg/mLヒト化A33抗体)、培養培地のみの対照及びキメラマウス−ヒトmAb抗FXI 34.2の対照も含めた。培養を、合計8日間インキュベートした。5、6、7及び8日目に、0.75μCi[3H]チミジン(Perkin ElmerR、Beaconsfield、UK)を含む丸底96ウェルプレートにアリコート3×100μLをパルスすることによって細胞の増殖を更に18時間測定した。次いで細胞を、フィルターマット(Perkin ElmerR)に採取し、各サンプルに対する1分間当たりのカウント(cpm)を、メルチレックス(Meltilex)(商標)(Perkin ElmerR)シンチレーション計数によって決定した。刺激指数(SI)を、試験サンプルとインキュベートしたPBMCの増殖(cpm)、対、培地だけとインキュベートしたPBMCの増殖の比を評価することによって次いで決定した。刺激指数≧2を、有意な反応を示すと考えた。
2.1 ヒトFXIに対する阻害抗体の生成
ELISAにおいてヒトFXIに結合するmAbを産生する32個のハイブリドーマを生成した。これらのハイブリドーマの上清を、ヒト血漿に添加し、aPTTにおける阻害活性について試験した。このaPTTにおいて、様々な量のFXIで補充したFXI欠損血漿を、参照として使用した。2つのハイブリドーマ上清、抗FXI mAb 34.2及び抗FXI mAb 15F8.3は、90%より高くFXIを阻害した。これらmAbを、限界希釈によってサブクローニングし、プロテインG親和性クロマトグラフィーによってハイブリドーマ上清から精製した。精製mAbを、ヒト血漿に添加し、aPTT及びPT凝固活性に対する効果を試験した(図1A及び1B)。MAb 34.2及び15F8.3は、aPTTを用量依存的に延長したが、PTに影響を及ぼさなかった。更に、対照(非阻害性抗FXI)mAbは、aPTT試験において効果が全くなかった。
FXIのドメイン上のエピトープをマップするために、mAbを、単一アップルドメインのtPAとの組換え融合タンパク質、又は血漿FXIでコーティングしたELISAウェル中でインキュベートした。ELISAプレートへのmAbの結合を、ペルオキシダーゼコンジュゲートした抗マウスIgGで評価した。この系を使用して、mAb抗FXI 15F8.3に対するエピトープが、アップル2ドメインに位置することが判明したが、mAb抗FXI 34.2が、アップルドメインのいずれにも結合せず、血漿FXIだけに結合したことは、そのエピトープがFXIのセリンプロテアーゼドメインに位置することを示唆した(図2)。
FXI活性に対する抗FXI mAbの効果を更に評価するために、トロンビンを、抗FXI mAbの有り無しで、様々な刺激、即ち高組織因子(TF;5pM)、低TF(1pM)又はaPTT試薬によってヒト血漿中に生成させ、リアルタイムで測定した。mAb抗FXI 34.2(図3A)及び抗FXI 15F8.3(データ不掲載)は、aPTT試薬によって誘導されたトロンビン生成を用量依存的に減少させ、このことは、それらmAbをヒト血漿に添加した場合にその両方がaPTTを延長するので予想される(図1Aを参照のこと)。低TF濃度によって誘導される血漿中でのトロンビン生成は、FXIに一部依存していることが公知である。トロンビン生成が、血漿中で低TFによって誘導された場合、mAb抗FXI 34.2だけが、30〜40%以下までトロンビンを用量依存的に減少させた(図3B)。それに対しmAb 15F8.3は、低TFによってトロンビン生成を減少させなかった(データ不掲載)。mAb抗FXI 34.2(図3C)とmAb抗FXI 15F8.3(データ不掲載)のどちらも、高TFによるトロンビン生成に効果がなかった。
ヒトFXI(van Montfoort Mら、Thromb Haemost 2013年;110:1065〜73頁)で補充したFXI−ノックアウトマウス(Wang Xら、J Thromb Haemost 2006年;4:1982〜8頁)における下大静脈(IVC)血栓症マウスモデルを使用して、mAb抗FXI 34.2の効果を評価した。外来性FXIなしでは、FXI−/−−マウスにおけるaPTTは、野生型マウスにおける25〜34秒に対して>150秒である。IVC血栓症を、IVCへの10%FeCl3の適用によって誘導した。IVCを通る血流の急速な低下が、10%FeCl3適用後1分以内に観察された(図5Aにおける生理食塩水群)。マウスのエノキサパリン処置は、45分間の観察時間の間にこのFeCl3誘導血流機能障害を完全に防止した(van Montfoort Mら、Thromb Haemost 2013年;110:1065〜73頁;本論文の図7を参照のこと)。塩化鉄による血栓症誘導前のmAb抗FXI 34.2の投与は、全観察時間の全体を通じて血流機能障害を防止した(図5A)。
mAb抗FXI 34.2のVH及びVκ領域を、上記方法の節に記載の通りクローニングした。mAb抗FXI 34.2のVH及びVκドメインのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号1及び2として配列表に示す。これらの配列を使用して、ヒトIgG4のCHドメイン及びヒトCκドメインに連結されたマウスVH及びVκ可変ドメインを持つキメラmAbを構築した。
mAbの配列に基づいて、あるとしても、最小の免疫原性である抗FXIコンポジットヒト抗FXI mAbを、コンポジットヒト抗体基盤(Antitope、Cambridge、UK)を使用して設計した。
mAb VH4Vκ4の免疫原性潜在性を、20名の健康なドナーのパネル由来PBMCとのインキュベーションによって試験し、細胞の増殖を時間内測定した。この試験において、mAb VH4Vκ4を、50μg/mLの終濃度で試験する。更にアッセイを改善するために、T細胞活性化の尺度として増殖の毎日の測定を4回、5〜8日目に評価した。6名のドナー由来の細胞及び培養7日後のPBMCのトリパンブルー色素排除によって決定した通り、MAb VH4Vκ4は、PBMC生存率に影響を及ぼさなかった(図7A)。加えて、図7Bは、マウス−ヒトキメラmAb抗FXI 34.2で観察された増殖結果を与える。示す通り、4名のドナー由来のPBMCで有意な増殖が観察され、別のドナー由来のPBMCで、境界線上の増殖が起こった。
ヒト血漿への精製mAb VH4Vκ4の添加は、aPTT試薬によって誘導されるトロンビン生成を事実上無効にした(図8A)が、TFによるトロンビン生成に対する効果は、血漿中でトロンビンを生成するために使用されたTFの用量に依存的であった(図8B〜D)。従って、MAb VH4Vκ4は、これらの実験においてFXI阻害剤の典型的な挙動を示し、その挙動は、aPTT試薬によって誘導されるトロンビン生成の完全阻害、低TF濃度によるトロンビン生成の部分的な阻害及び高TF濃度におけるトロンビン生成の阻害なしである。
MAb VH4VΚ4を、節2.5に記載の通り血栓症マウスモデルにおいてin vivoで試験した。FeCl3により血栓症を誘導する前のヒト化mAb VH4VΚ4の投与は、全観察の間血流機能障害を防止し、このことはMAB VH4VΚ4が、血栓症の形成を効果的に防止したことを示す(図9)。
Claims (26)
- 第XI因子(第XI因子)の軽鎖に結合し、L−ピログルタミル−L−プロリル−L−アルギニン−p−ニトロアニリンに対する活性化第XI因子(第XIa因子)の発色活性を減少させ、第XI因子への前記結合について、重鎖可変ドメインが配列番号1を含み、且つ軽鎖可変ドメインが配列番号2を含む抗体と交差競合する抗体。
- 前記抗体が、配列番号3の配列を含むHVR−H1、配列番号4の配列を含むHVR−H2、配列番号5の配列を含むHVR−H3、配列番号6の配列を含むHVR−L1、配列番号7の配列を含むHVR−L2及び配列番号8の配列を含むHVR−L3から選択される超可変領域(HVR)を少なくとも1つ含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号3の配列を含むHVR−H1、配列番号4の配列を含むHVR−H2、配列番号5の配列を含むHVR−H3、配列番号6の配列を含むHVR−L1、配列番号7の配列を含むHVR−L2及び配列番号8の配列を含むHVR−L3から選択される超可変領域(HVR)を2、3、4、5又は6個含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体が、マウス、キメラ又はヒト化抗体である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、Fv、一本鎖Fv(scFv)、Fab、Fab’、(Fab’)2及びナノボディから選択される抗体断片である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体の前記重鎖可変ドメインが、配列番号13〜16のうちの少なくとも1つと少なくとも95%の配列同一性があるアミノ酸配列を含み、前記抗体の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号17〜20のうちの少なくとも1つと少なくとも95%の配列同一性があるアミノ酸配列を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片。
- 前記抗体の前記重鎖可変ドメインが配列番号16のアミノ酸配列を含み、前記抗体の前記軽鎖可変ドメインが配列番号20のアミノ酸配列を含む、請求項6に記載の抗体又は抗体断片。
- 前記抗体が、ヒンジ領域に、前記重鎖の鎖内ジスルフィド架橋形成よりも鎖間ジスルフィド架橋に有利な突然変異を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記突然変異が、S241Pである、請求項8に記載の抗体。
- 前記抗体が、IgG4領域である重鎖定常領域を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、ヒトFXIaの軽鎖に結合する、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片及び任意選択で薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
- 医薬として使用するための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- i)FXI活性化が介在する疾患、障害又は状態;及びii)FXIの阻害が有益な効果を有する疾患、障害又は状態のうちの少なくとも1つの防止又は処置に使用するための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記疾患、障害又は状態が、凝固が関係する疾患、障害又は状態である、請求項14に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記疾患が、FXIを介する凝固活性化を伴う血栓塞栓性疾患又は炎症性疾患である、請求項14又は15に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 使用が、病理学的血栓症を防止若しくは処置するため又は医療手順が原因で血栓症を発症するリスクが増大している対象において血栓症を防止するためのものである、請求項15〜16のいずれか一項に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 使用が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、心房細動による心原性脳塞栓症、血管アクセス血栓症、深部静脈血栓症、動脈血栓、冠血栓症、アテローム性動脈硬化症、関節炎、脈管炎、呼吸障害症候群、虚血性心疾患、虚血性脳疾患、肺塞栓症、手術若しくは固定化に起因する静脈血栓塞栓症、人工血管移植、ステント、若しくは動静脈瘻の血栓症及び閉塞、人工心臓弁、汎発性血管内凝固(DIC)、血液透析、心房細動、敗血症、感染性ショック、臓器不全、腎不全、治療用タンパク質のin vivo投与によって誘導される毒性、多発性損傷、虚血−再灌流傷害、局所的な望ましくない線維素沈着並びに成人呼吸窮迫の間の肺胞における線維素沈着からなる群から選択される少なくとも1つの障害、疾患又は状態を防止又は処置するためのものである、請求項15〜17のいずれか一項に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記抗体が、静脈内、動脈内、筋肉内又は皮下投与される、請求項15〜18のいずれか一項に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記抗体、抗体断片又は組成物が、ボーラス注入又は2時間未満〜24時間にわたる持続注入として静脈内投与される、請求項19に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記抗体、抗体断片又は組成物が、定期的な透析を受けている腎臓患者における人工血管移植、ステント又は動静脈瘻の血栓症(及び閉塞)の防止、減少又は処置に使用するためのものであり、前記抗体、抗体断片又は組成物が、前記患者に戻される透析された体液中で前記患者に投与される、請求項18に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 前記抗体、抗体断片又は組成物が、心房細動、不安定狭心症、静脈血栓塞栓症、人工心臓弁、虚血性心疾患、虚血性脳疾患、人工血管、汎発性血管内凝固、敗血症の患者又は前立腺若しくは整形外科手術を受けている患者において血栓症を防止又は処置するのに使用するためのものであり、結合分子が、2週間に1回を超えては投与されない、請求項18に記載の使用のための、請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗体断片、又は請求項12に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の抗体又は抗体断片をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子。
- 前記核酸分子が、前記抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのうちの少なくとも1つをコードしているヌクレオチド配列を含む、請求項23に記載の核酸分子。
- 前記コーディングヌクレオチド配列が、宿主細胞において前記コーディングヌクレオチド配列を発現するために調節配列に作動可能に連結されている、請求項23又は24に記載の核酸分子。
- 請求項23〜25のいずれか一項に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
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