JP2019178096A

JP2019178096A - Compositions for inhibiting prostaglandin e2 production and compositions for inhibiting aggrecanase 1 (adamts-4) production

Info

Publication number: JP2019178096A
Application number: JP2018067981A
Authority: JP
Inventors: かずみ鍋島; Kazumi Nabeshima; 江里子三澤; Eriko Misawa; 美順田中; Yoshinori Tanaka
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 2018-03-30
Filing date: 2018-03-30
Publication date: 2019-10-17

Abstract

To provide functional materials which are safe for daily ingest and capable of inhibiting prostaglandin E2 production, and functional materials capable of inhibiting aggrecanase 1 production, as well as pharmaceutical compositions and food compositions utilizing them.SOLUTION: Disclosed herein is a prostaglandin E2 production inhibiting composition comprising, as an effective ingredient, one or more compounds selected from the group consisting of cyclolanostane compounds and lophenol compounds. Also disclosed is an aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production inhibiting composition comprising, as an effective ingredient, one or more compounds selected from the group consisting of cyclolanostane compounds and lophenol compounds.SELECTED DRAWING: None

Description

本発明は、プロスタグランジンＥ２産生抑制用組成物及びアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制用組成物に関する。 The present invention relates to a composition for inhibiting prostaglandin E2 production and a composition for inhibiting aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production.

変形性関節症（Osteoarthritis; OA）は、関節軟骨の変形や破壊により関節に炎症が起こり、痛みや腫れをきたす疾患である。変形性関節症では、関節の変形や運動痛、可動域制限等により、本来の関節の滑らかな動きが障害され、起立や歩行に大きな影響を与えるため、生活の質（Quality of Life; QOL）を著しく低下させる。 Osteoarthritis (OA) is a disease that causes inflammation and pain in the joints due to deformation and destruction of articular cartilage. In osteoarthritis, the smooth movement of the original joint is impaired due to joint deformation, movement pain, range of motion, etc., and this has a significant impact on standing and walking, so the quality of life (QOL) Is significantly reduced.

変形性関節症は、例えば、体内で炎症や痛み等を引き起こす物質であるプロスタグランジンＥ２（Prostaglandin E2; 以下、「ＰＧＥ２」とも記載する。）が関与することが知られている。ＰＧＥ２はサイトカイン、増殖因子等の存在によって様々な細胞から産生され、様々な生理活性を示す。ＰＧＥ２は破骨細胞に作用し、その分化や活性化を誘導して骨吸収作用を促進する（非特許文献１）。 It is known that osteoarthritis involves, for example, prostaglandin E2 (hereinafter also referred to as “PGE2”), which is a substance that causes inflammation and pain in the body. PGE2 is produced from various cells due to the presence of cytokines, growth factors and the like, and exhibits various physiological activities. PGE2 acts on osteoclasts and induces their differentiation and activation to promote bone resorption (Non-Patent Document 1).

また、関節軟骨の主要構成要素であるＩＩ型コラーゲンとアグリカンの分解に寄与している蛋白質分解酵素が、変形性関節症における関節軟骨の変形、破壊に関与していることが知られている。このような蛋白質分解酵素として、メタロプロテアーゼ類、とくにマトリックスメタロプロテアーゼ(matrix metalloproteinase: 以下、「ＭＭＰ」とも記載する。)及びアグリカナーゼ(a distintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like repeat: 以下、「ＡＤＡＭＴＳ」とも記載する。)が重要であることが知られている（非特許文献２）。 It is also known that proteolytic enzymes that contribute to the degradation of type II collagen and aggrecan, which are the main components of articular cartilage, are involved in the deformation and destruction of articular cartilage in osteoarthritis. As such proteolytic enzymes, metalloproteases, particularly matrix metalloproteinase (hereinafter also referred to as “MMP”) and aggrecanase (a distintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like repeat: hereinafter also referred to as “ADAMTS”) Is known to be important (Non-patent Document 2).

プロスタグランジンＥ２の産生を抑制する化合物として、例えばクービ、ハイビスカス等の植物の抽出物が知られている（特許文献１）。また、ＭＭＰと、アグリカナーゼのうちアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）及びアグリカナーゼ２（ＡＤＡＭＴＳ−５）の産生を抑制する化合物として、クスノキ科ゲッケイジュ属の葉の抽出物が知られている（特許文献２）。 As compounds that suppress the production of prostaglandin E2, for example, plant extracts such as coubi and hibiscus are known (Patent Document 1). Further, as a compound that suppresses the production of MMP and aggrecanase 1 (ADAMTS-4) and aggrecanase 2 (ADAMTS-5) among aggrecanases, an extract of the leaves of the genus Camphoraceae is known (Patent Document 2). .

ところで、植物ステロールのうち、シクロラノスタン骨格を有する化合物やロフェノール骨格を有する化合物が、ＭＭＰの産生を阻害し、ＭＭＰの活性により引き起こされる症状を予防又は改善するのに有効であることが知られている（特許文献３）。
しかしながら、これらの化合物のプロスタグランジンＥ２産生及びアグリカナーゼ産生に対する作用は一切知られていなかった。 By the way, among plant sterols, it is known that compounds having a cyclolanostane skeleton and compounds having a rophenol skeleton are effective in inhibiting MMP production and preventing or improving symptoms caused by MMP activity. (Patent Document 3).
However, the effects of these compounds on prostaglandin E2 production and aggrecanase production were not known at all.

日本内科学会雑誌，第８７巻，第１２号，第５８−６５頁，１９９８Journal of the Japan Society of Internal Medicine, Vol. 87, No. 12, pp. 58-65, 1998 ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＳｏｃｉｅｔｙｏｆＪａｐａｎｅｓｅＷｏｍｅｎＳｃｉｅｎｔｉｓｔｓ，Ｖｏｌ．９，ｐ．４６−５０，２００８Journal of the Society of Japan Women Sciences, Vol. 9, p. 46-50, 2008

特許第６２９０３５３号公報Japanese Patent No. 6290353 特開２０１６−１７９９４７号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2006-179947 国際公開第２０１６／０８４９５７号International Publication No. 2016/084957

特許文献１、２に開示されているように、プロスタグランジンＥ２産生抑制及びアグリカナーゼ１産生抑制の作用を示す素材が提案されている中、安全に摂取できる素材の開発が更に求められていた。 As disclosed in Patent Documents 1 and 2, materials that exhibit the effects of inhibiting prostaglandin E2 production and aggrecanase 1 production have been proposed, and further development of materials that can be safely ingested has been demanded.

本発明は前記事情に鑑みてなされたもので、日常的に安全に摂取でき、プロスタグランジンＥ２の産生を抑制し得る機能性素材、及びアグリカナーゼ１の産生を抑制し得る機能性素材、並びに、これらを利用した医薬組成物及び飲食品組成物を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, a functional material that can be safely ingested on a daily basis, can suppress the production of prostaglandin E2, a functional material that can suppress the production of aggrecanase 1, and It aims at providing the pharmaceutical composition and food-drinks composition using these.

前記課題を解決する本発明は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分とするプロスタグランジンＥ２産生抑制用組成物である。 This invention which solves the said subject is a composition for prostaglandin E2 production suppression which uses as an active ingredient one or more compounds selected from the group which consists of a cyclolanostane compound and a rophenol compound.

また、前記課題を解決する本発明は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される１又は複数の化合物を有効成分とするアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制用組成物である。 Moreover, this invention which solves the said subject is a composition for aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production suppression which uses as an active ingredient 1 or several compounds selected from the group which consists of a cyclolanostane compound and a rophenol compound. .

さらに、前記組成物において、シクロラノスタン化合物は９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールからなる群から選択される１又は複数の化合物であり、並びに、ロフェノール化合物は４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選択される１又は複数の化合物である。 Further, in the composition, the cyclolanostane compound is one or more selected from the group consisting of 9,19-cyclolanostan-3-ol and 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol. And the rophenol compound is 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, and 4-methylstigmast-7-en-3- One or more compounds selected from the group consisting of all.

前記組成物が医薬組成物又は飲食品組成物であることが好ましい。 The composition is preferably a pharmaceutical composition or a food / beverage composition.

本発明によれば、日常的に安全に摂取でき、プロスタグランジンＥ２の産生を抑制し得る機能性素材、及びアグリカナーゼ１の産生を抑制し得る機能性素材、並びに、これらを利用した医薬組成物及び飲食品組成物を提供することができる。 According to the present invention, a functional material that can be safely ingested on a daily basis and that can suppress the production of prostaglandin E2, a functional material that can suppress the production of aggrecanase 1, and a pharmaceutical composition using them. And the food-drinks composition can be provided.

次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。 Next, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely changed within the scope of the present invention. In the present specification, percentages are expressed by mass unless otherwise specified.

本発明の組成物は、シクロラノスタン化合物（化合物１）及びロフェノール化合物（化合物２）からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する。 The composition of the present invention contains, as an active ingredient, a compound selected from the group consisting of a cyclolanostane compound (Compound 1) and a rophenol compound (Compound 2).

［シクロラノスタン化合物］
シクロラノスタン化合物（シクロラノスタン骨格を有する化合物）は、以下の一般式（１）で表される。 [Cyclolanostan compound]
The cyclolanostan compound (compound having a cyclolanostane skeleton) is represented by the following general formula (1).

一般式（１）において、Ｒ１は炭素原子数６〜８の、直鎖状若しくは分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基、又はこれらのアルキル基及びアルケニル基の水素原子の１つ又は２つがヒドロキシル基及び／若しくはカルボニル基で置換された置換アルキル基又は置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は下記式の何れかである。 In the general formula (1), R1 is a linear or branched alkyl group having 6 to 8 carbon atoms, an alkenyl group having one or two double bonds, or these alkyl groups and alkenyl groups. 1 or 2 of the hydrogen atom is a substituted alkyl group or a substituted alkenyl group substituted with a hydroxyl group and / or a carbonyl group, R2 and R3 are each independently a hydrogen atom or a methyl group, and R4 constitutes a ring C = O is formed together with the carbon atom to be formed, or one of the following formulas.

前記一般式（１）において、Ｒ１は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。 In the general formula (1), R1 is preferably any one of groups represented by the following formulae.

好ましいシクロラノスタン化合物としては、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式（２）及び（３）で表される構造を有する。 Preferred cyclolanostane compounds include 9,19-cyclolanostan-3-ol and 24-methylene-9,19-cyclolanostane-3-ol. Each compound has a structure represented by the following formulas (2) and (3), respectively.

シクロラノスタン化合物は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。例えば、式（３）で表される２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（慣用名：２４−メチレンシクロアルタノール）は、特開昭５７−０１８６１７号公報に開示される方法にて製造することが可能である。また、シクロラノスタン化合物は、特開２００３−２７７２６９号公報に開示される方法にて、γ−オリザノールからのシクロアルテノールフェルレート（式（４））の加水分解物を出発物質として製造することが可能である。 The cyclolanostane compound can be chemically produced according to a known production method. For example, 24-methylene-9,19-cyclolanostane-3-ol (common name: 24-methylenecycloartanol) represented by the formula (3) is disclosed in JP-A-57-018617. It is possible to manufacture by a method. A cyclolanostane compound is produced by a method disclosed in JP-A-2003-277269 using a hydrolyzate of cycloartenol ferrate (formula (4)) from γ-oryzanol as a starting material. Is possible.

また、シクロラノスタン化合物は、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科及びバショウ科等の植物に含まれていることが知られている（〔フィトケミストリー（Phytochemistry）、米国、１９７７年、第１６巻、第１４０〜１４１ページ〕、〔ハンドブック・オブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants）、１９９２年、米国、シーアールシープレス〕、又は〔ハーゲルズ・ハントブーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Hager's Handbuch derPharmazeutischen Praxis）、第２〜６巻、１９６９〜１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン〕参照）。よって、これらの植物より、有機溶媒抽出法又は熱水抽出法等の方法を用いて抽出することも可能である。
また、シクロラノスタン化合物は、微生物等を利用して生物学的に製造してもよい。あるいは、微生物由来の酵素を用いて製造しても良い。
前記のようにして製造した化合物は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。 Cyclolanostane compounds are known to be contained in plants such as liliaceae, legumes, gramineae, solanaceae, and pepperaceae ([Phytochemistry, USA, 1977, No. 1). 16 pp. 140-141], [Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants], (1992, CA), or [Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, Vol. 2-6, 1969-1979, Springer Fairlag Berlin, Germany] reference). Therefore, it is also possible to extract from these plants using methods such as an organic solvent extraction method or a hot water extraction method.
The cyclolanostane compound may be biologically produced using a microorganism or the like. Or you may manufacture using the enzyme derived from microorganisms.
The molecular weight, structure, etc. of the compound produced as described above can be determined or confirmed by, for example, a mass spectrum (MS) method and a nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) method.

また、シクロラノスタン化合物は、医薬に許容される塩であってもよい。医薬に許容可能な塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、１９８５年、第１４１８頁」に掲載されているものが例示される。
具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、及び硫酸塩等の無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩、及びステアリン酸塩等の有機酸塩が非限定的に含まれる。
また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、前記化合物若しくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も使用できる。 The cyclolanostane compound may be a pharmaceutically acceptable salt. Pharmaceutically acceptable salts include both metal salts (inorganic salts) and organic salts, the list of which is “Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, 1985, What is published in "page 1418" is illustrated.
Specifically, inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, phosphate, diphosphate, hydrobromide, and sulfate, malate, maleate, fumarate, tartrate, Organic salts such as succinate, citrate, acetate, lactate, methanesulfonate, p-toluenesulfonate, pamoate, salicylate, and stearate are included without limitation.
Moreover, it can also be set as salts with amino acids, such as metals, such as sodium, potassium, calcium, magnesium, and aluminum, and a lysine. Moreover, solvates, such as a hydrate of the said compound or its pharmaceutically acceptable salt, can also be used.

［ロフェノール化合物］
ロフェノール化合物（ロフェノール骨格を有する化合物）は、以下の一般式（５）で表される。 [Rophenol compound]
The rophenol compound (compound having a rophenol skeleton) is represented by the following general formula (5).

一般式（５）中、Ｒ１は炭素原子数５〜１６の、直鎖状若しくは分枝鎖状のアルキル基、又は２重結合を１つ又は２つ含むアルケニル基である。尚、これらのアルキル基又はアルケニル基は、少なくとも１つの水素原子がヒドロキシル基及び／若しくはカルボニル基で置換された、置換アルキル基又は置換アルケニル基であってもよい。Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜３のアルキル基、又は置換アルキル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は−ＯＨ、−ＯＣＯＣＨ3の何れかである。尚、前記炭素原子数１〜３のアルキル基としては、メチル基、エチル基等が好ましく、メチル基が特に好ましい。 In general formula (5), R1 is a linear or branched alkyl group having 5 to 16 carbon atoms, or an alkenyl group containing one or two double bonds. These alkyl groups or alkenyl groups may be substituted alkyl groups or substituted alkenyl groups in which at least one hydrogen atom is substituted with a hydroxyl group and / or a carbonyl group. R2 and R3 each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, or a substituted alkyl group, and R4 forms C = O together with the carbon atoms constituting the ring, or -OH, -OCOCH3 Any of them. In addition, as said C1-C3 alkyl group, a methyl group, an ethyl group, etc. are preferable, and a methyl group is especially preferable.

前記一般式（５）において、Ｒ１は、下記式で表される基の何れかであることが好ましい。 In the general formula (5), R1 is preferably any one of groups represented by the following formulae.

好ましいロフェノール化合物としては、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールが挙げられる。各化合物は、それぞれ、以下の式（６）〜（８）で表される構造を有する。 Preferred rophenol compounds include 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol. . Each compound has a structure represented by the following formulas (6) to (8).

ロフェノール化合物は、シクロラノスタン化合物と同様に、植物に含まれていることが公知であり、植物を原料として公知のロフェノールの製造方法に準じて製造することができる（例えば、特許第３９０５９１３号公報参照）。さらに、ロフェノール化合物は、例えばVitali Matyash et al., PLOS BIOLOGY, Volume 2, Issue 10, e280, 2004に記載されたサプリメントデータに準じて合成することも可能である。
前記のようにして製造した化合物は、例えば、マススペクトル（ＭＳ）法、及び核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）法等によって、その分子量や構造等を決定又は確認することができる。 The rophenol compound is known to be contained in a plant, like the cyclolanostane compound, and can be produced according to a known method for producing rophenol using a plant as a raw material (for example, Japanese Patent No. 3905913). No. publication). Furthermore, rophenol compounds can be synthesized according to supplement data described in, for example, Vitali Matyash et al., PLOS BIOLOGY, Volume 2, Issue 10, e280, 2004.
The molecular weight, structure, etc. of the compound produced as described above can be determined or confirmed by, for example, a mass spectrum (MS) method and a nuclear magnetic resonance spectrum (NMR) method.

また、ロフェノール化合物は、医薬に許容される塩であってもよい。このような塩としては、シクロラノスタン化合物の場合と同様の塩が挙げられる。 The rophenol compound may be a pharmaceutically acceptable salt. Examples of such salts include the same salts as in the case of cyclolanostane compounds.

［本発明の組成物］
本発明の組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される化合物を、有効成分として含有する。該化合物は、１種でも、複数種でもよい。
化合物１又は化合物２を単独で用いる場合としては、化合物１（主に、９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール）、又は化合物２（主に、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、若しくは４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）の何れかであることが好ましい。
中でも化合物１としては、９，１９−シクロラノスタン−３−オールが特に好ましく、化合物２としては、４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール特に好ましい。
また、化合物１又は化合物２各々においても、１種の化合物を用いてもよいし、複数の化合物を混合して用いてもよい。
本発明の組成物は、好ましくは、９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールからなる群から選択される化合物を有効成分として含有する。 [Composition of the present invention]
The composition of the present invention contains a compound selected from the group consisting of a cyclolanostane compound and a rophenol compound as an active ingredient. The compound may be one kind or plural kinds.
When compound 1 or compound 2 is used alone, compound 1 (mainly 9,19-cyclolanostan-3-ol or 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol) or compound 2 (mainly 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, or 4-methylstigmast-7-en-3-ol) It is preferable that
Among them, 9,19-cyclolanostane-3-ol is particularly preferable as the compound 1, and 4-methylstigmast-7-en-3-ol is particularly preferable as the compound 2.
In each of Compound 1 or Compound 2, one type of compound may be used, or a plurality of compounds may be mixed and used.
The composition of the present invention is preferably 9,19-cyclolanostan-3-ol or 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol, 4-methylcholest-7-en-3-ol, A compound selected from the group consisting of 4-methylergost-7-en-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol is contained as an active ingredient.

本発明の組成物は、好ましくはシクロラノスタン化合物から選択される化合物、及びロフェノール化合物から選択される化合物の両者を組み合わせて含有することが可能である。シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物は、それぞれ１種でも、複数種でもよい。
この場合において、シクロラノスタン化合物とロフェノール化合物の質量比の範囲は、好ましくは以下の通りである。
シクロラノスタン化合物：ロフェノール化合物＝５：１〜１：５
該特定の質量比の範囲は、天然のアロエベラ中に含まれる、シクロラノスタン化合物（特に、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール）と、ロフェノール化合物（特に、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）の質量比にほぼ相当する。 The composition of the present invention can preferably contain a combination of both a compound selected from cyclolanostane compounds and a compound selected from rophenol compounds. Each of the cyclolanostane compound and the rophenol compound may be one kind or plural kinds.
In this case, the mass ratio range between the cyclolanostane compound and the rophenol compound is preferably as follows.
Cyclolanostane compound: Lophenol compound = 5: 1 to 1: 5
The specific mass ratio ranges include cyclolanostane compounds (particularly 9,19-cyclolanostan-3-ol and 24-methylene-9,19-cyclolanostane-3-) contained in natural aloe vera. All) and rophenol compounds (especially 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol) ).

本発明の組成物におけるシクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物から選ばれる化合物の含有量は、対象疾患、投与対象等に応じて適宜選択することができるが、総量で、好ましくは少なくとも０．０００１質量％、より好ましくは少なくとも０．００１質量％、さらに好ましくは少なくとも０．００５質量、特に好ましくは少なくとも０．０１質量％である。また本発明の医薬組成物における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。 The content of the compound selected from the cyclolanostane compound and the rophenol compound in the composition of the present invention can be appropriately selected according to the target disease, administration subject, etc., but is preferably a total amount, preferably at least 0.0001 mass. %, More preferably at least 0.001% by weight, even more preferably at least 0.005% by weight, particularly preferably at least 0.01% by weight. The upper limit of the amount in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but the total amount is 90% by mass or less, preferably 70% by mass or less, more preferably 50% by mass or less.

本発明の組成物は、医薬組成物、飲食品組成物等の態様で用いることができる。 The composition of this invention can be used in aspects, such as a pharmaceutical composition and a food-drinks composition.

本発明の組成物を医薬組成物として用いる形態では、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。
前記化合物が有効成分として機能し、プロスタグランジンＥ２の産生を抑制する。また、前記化合物が有効成分として機能し、アグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の産生を抑制する。そのため、本発明の組成物は、プロスタグランンジンＥ２及び／又はアグリカナーゼ１の活性に起因する症状の予防、改善、治療作用を有する。
プロスタグランジンＥ２の活性に起因する症状としては、例えば変形性関節症、軟骨の破壊、軟骨の損傷がある。
アグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の活性に起因する症状としては、例えば変形性関節症、軟骨の破壊、軟骨の損傷がある。 In the form of using the composition of the present invention as a pharmaceutical composition, it can be administered to mammals including humans orally or parenterally.
The compound functions as an active ingredient and suppresses the production of prostaglandin E2. Moreover, the said compound functions as an active ingredient, and suppresses the production of aggrecanase 1 (ADAMTS-4). Therefore, the composition of the present invention has preventive, ameliorating, and therapeutic effects on symptoms caused by the activities of prostaglandin E2 and / or aggrecanase 1.
Symptoms resulting from the activity of prostaglandin E2 include, for example, osteoarthritis, cartilage destruction, and cartilage damage.
Symptoms resulting from the activity of aggrecanase 1 (ADAMTS-4) include, for example, osteoarthritis, cartilage destruction, and cartilage damage.

本発明の医薬組成物の製剤形態は特に限定されず、治療目的、用法に応じて適宜選択できる。
具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。 The formulation form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected depending on the therapeutic purpose and usage.
Specific examples include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, syrups, suppositories, injections, ointments, patches, eye drops, nasal drops, etc. it can.

本発明の医薬組成物の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患に応じて、適宜選択することが可能である。また、投与量は製剤形態、用法、患者の年齢、性別、その他の条件、症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。
本発明の医薬組成物の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常、有効成分の量に換算して、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、より好ましくは、０．０１〜１０ｍｇ／日の範囲を目安とする。
従って、本発明の医薬組成物の好ましい形態の一つは、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される化合物を、総量で、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日投与されるように用いられる医薬組成物である。 The administration time of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the target disease. The dosage is preferably determined according to the preparation form, usage, patient age, sex, other conditions, the degree of symptoms, and the like.
The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is appropriately selected depending on the usage, patient age, sex, disease severity, other conditions and the like. Usually, it is preferably 0.001 to 50 mg / day, more preferably 0.01 to 10 mg / day in terms of the amount of the active ingredient.
Accordingly, one of the preferred forms of the pharmaceutical composition of the present invention is a total amount of a compound selected from the group consisting of a cyclolanostane compound and a rophenol compound, preferably 0.001 to 50 mg / day, more preferably It is a pharmaceutical composition used to be administered at 0.01 to 10 mg / day.

本発明の医薬組成物は、医薬組成物に汎用される添加剤を含有していてもよい。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等が挙げられる。また、本発明の医薬組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物のプロスタグランジンＥ２産生抑制効果及びアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制効果を損なわない限り、予防や治療の対象となる疾患や症状に応じた有効成分、例えば、変形性関節症、軟骨の破壊、軟骨の損傷の予防、改善、治療作用を有する他の成分を含有していてもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention may contain additives commonly used in pharmaceutical compositions. Examples of additives include excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, diluents, surfactants, solvents for injections, and the like. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention is a disease to be prevented or treated unless the prostaglandin E2 production inhibitory effect and aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production inhibitory effect of the cyclolanostane compound and the rophenol compound are impaired. It may contain an active ingredient according to the symptom, for example, other ingredients having osteoarthritis, cartilage destruction, cartilage damage prevention, improvement and therapeutic action.

本発明の医薬組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物から選ばれる化合物を有効成分として医薬組成物用担体に配合することで製造することができる。本発明の医薬組成物は、例えば、前記化合物を、前記の添加剤と共に製剤化することで製造することができる。
また、本発明の医薬組成物は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、前記の添加剤と共に製剤化することで製造することもできる。
特に、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物を前記特定の質量比の範囲で含む本発明の医薬組成物は、各化合物を前記質量比の範囲で混合することで製造することができる。また、このような医薬組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物が含まれている公知の植物等を原料として、各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出等の方法にて製造することも可能である。 The pharmaceutical composition of the present invention can be produced by blending a compound selected from a cyclolanostane compound and a rophenol compound into a carrier for a pharmaceutical composition as an active ingredient. The pharmaceutical composition of this invention can be manufactured by formulating the said compound with the said additive, for example.
In addition, the pharmaceutical composition of the present invention is obtained by extracting, using a known plant containing the compound as a raw material, extraction using hot water or various solvents, supercritical extraction, subcritical extraction, It can also be produced by formulating with additives.
In particular, the pharmaceutical composition of the present invention containing a cyclolanostane compound and a rophenol compound in the range of the specific mass ratio can be produced by mixing each compound in the range of the mass ratio. In addition, such a pharmaceutical composition is obtained by using a known plant or the like containing a cyclolanostane compound and a rophenol compound as a raw material by a method such as extraction using various solvents, supercritical extraction, subcritical extraction, or the like. It is also possible to manufacture.

本発明の医薬組成物は、例えば、アロエベラの葉皮を含まない葉肉（透明ゲル）部分を凍結乾燥又は熱風乾燥して調製した粉末アロエベラ葉肉を、超臨界抽出することによって製造することができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can be produced, for example, by supercritical extraction of powdered aloe vera mesophyll prepared by freeze-drying or hot-air drying of mesophyll (transparent gel) that does not contain aloe vera leaf bark.

この場合、抽出溶媒としては、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の抽出効率を向上させる観点からは、超臨界プロパン、超臨界エチレン、超臨界１，１，１，２−テトラフルオロエタン等を使用することも可能であるが、安全性を向上させる観点からは、炭酸ガスを使用することが好ましい。また、抽出温度としては、２８℃〜１２０℃の温度範囲で適宜選択することも可能であるが、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の抽出効率を向上させ、かつ緩下作用を有するアントラキノン系化合物（例えば、アロエエモジン）の抽出量を少なくする観点からは、５０〜６９℃の範囲が好ましく、５０〜５９℃の範囲がさらに好ましい。また、圧力としては、５．５〜６０ＭＰａの範囲で適宜選択することが可能であるが、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の抽出効率を向上させ、かつアントラキノン系化合物の含有量を少なくする観点からは、１５〜６０ＭＰａの範囲が好ましく、１５〜２４ＭＰａの範囲がさらに好ましい。また、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の抽出効率を向上させる観点からは、エタノール等のエントレーナーを使用することも可能であるが、アントラキノン系化合物の抽出量を少なくする観点からは、エントレーナーを使用しないことが好ましい。 In this case, supercritical propane, supercritical ethylene, supercritical 1,1,1,2-tetrafluoroethane or the like is used as an extraction solvent from the viewpoint of improving the extraction efficiency of cyclolanostane compound and rophenol compound. However, from the viewpoint of improving safety, it is preferable to use carbon dioxide gas. The extraction temperature can be appropriately selected within a temperature range of 28 ° C. to 120 ° C., but an anthraquinone compound that improves the extraction efficiency of the cyclolanostane compound and the rophenol compound and has a laxative action. From the viewpoint of reducing the amount of extraction (for example, aloe emodin), a range of 50 to 69 ° C is preferable, and a range of 50 to 59 ° C is more preferable. The pressure can be appropriately selected within the range of 5.5 to 60 MPa, but the viewpoint of improving the extraction efficiency of the cyclolanostane compound and the rophenol compound and reducing the content of the anthraquinone compound. Is preferably in the range of 15-60 MPa, more preferably in the range of 15-24 MPa. From the viewpoint of improving the extraction efficiency of the cyclolanostane compound and the rophenol compound, it is possible to use an entrainer such as ethanol, but from the viewpoint of reducing the extraction amount of the anthraquinone compound, the entrainer It is preferable not to use.

本発明の医薬組成物は、単独で使用しても良いが、公知の前記疾患の予防、改善、治療剤と併用して使用することも可能である。併用することによって、前記疾患の予防、改善、治療効果を高めることができる。併用する前記疾患の予防、改善、治療剤は、本発明の医薬組成物の成分として含有させても良いし、本発明の医薬組成物と別に製剤化し、本発明の医薬組成物と組み合わせて配置し、使用時に併用するタイプのキットとしても良い。 The pharmaceutical composition of the present invention may be used alone, but can also be used in combination with known prevention, amelioration, and treatment agents for the above-mentioned diseases. By using together, the prevention, improvement, and therapeutic effect of the said disease can be heightened. The preventive, ameliorating, or therapeutic agent for the disease used in combination may be contained as a component of the pharmaceutical composition of the present invention, or formulated separately from the pharmaceutical composition of the present invention and placed in combination with the pharmaceutical composition of the present invention. And it is good also as a kit of the type used together at the time of use.

本発明の医薬組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される化合物により、優れたプロスタグランジンＥ２産生抑制効果及び／又はアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制効果を発揮する。 The pharmaceutical composition of the present invention exhibits an excellent prostaglandin E2 production inhibitory effect and / or aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production inhibitory effect by a compound selected from the group consisting of cyclolanostane compounds and rophenol compounds. To do.

（本発明の飲食品組成物）
本発明の組成物を飲食品組成物として用いる形態（「本発明の飲食品組成物」という。）では、プロスタグランジンＥ２及び／又はアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の活性に起因する症状の予防、改善のために用いることができる。
本発明の飲食品組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物から選ばれる化合物を、有効成分として含有する。該化合物は、１種でも、複数種でもよい。
本発明において、「飲食品組成物」には、人間が摂取する飲食品の他、人間以外の動物が摂取する飼料も含まれる。
本発明の飲食品組成物は、好ましくはシクロラノスタン化合物から選ばれる化合物、及びロフェノール化合物から選ばれる化合物の両者を組み合わせて含有する。シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物は、それぞれ１種でも、複数種でもよい。
この場合において、シクロラノスタン化合物とロフェノール化合物の質量比の範囲は、好ましくは以下の通りである。
シクロラノスタン化合物：ロフェノール化合物＝５：１〜１：５ (Food and beverage composition of the present invention)
In the form using the composition of the present invention as a food / beverage product composition (referred to as “the food / beverage product composition of the present invention”), prevention of symptoms due to the activity of prostaglandin E2 and / or aggrecanase 1 (ADAMTS-4). Can be used for improvement.
The food-drinks composition of this invention contains the compound chosen from a cyclolanostane compound and a rophenol compound as an active ingredient. The compound may be one kind or plural kinds.
In the present invention, the “food / beverage product composition” includes foods / foods consumed by humans and feeds consumed by animals other than humans.
The food / beverage composition of the present invention preferably contains a combination of a compound selected from cyclolanostane compounds and a compound selected from rophenol compounds. Each of the cyclolanostane compound and the rophenol compound may be one kind or plural kinds.
In this case, the mass ratio range between the cyclolanostane compound and the rophenol compound is preferably as follows.
Cyclolanostane compound: Lophenol compound = 5: 1 to 1: 5

本発明の飲食品組成物におけるシクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される化合物の量は、飲食品の形態によって適宜設定されるが、総量で、好ましくは少なくとも０．０００１質量％、より好ましくは少なくとも０．００１質量％、さらに好ましくは少なくとも０．００５質量、特に好ましくは少なくとも０．０１質量％である。また本発明の飲食品組成物における当該量の上限は特に制限されないが、総量で、９０質量％以下、好ましくは７０質量％以下、より好ましくは５０質量％以下が例示される。
また、本発明の飲食品組成物における前記化合物の量は、飲食品の形態に応じて、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物からなる群から選択される化合物を、総量で、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日の範囲で摂取するのに適した量とすることもできる。従って、本発明の飲食品組成物の好ましい形態の一つは、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物から選ばれる化合物を、総量で、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ／日、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日摂取するように用いられる飲食品組成物である。 The amount of the compound selected from the group consisting of a cyclolanostane compound and a rophenol compound in the food / beverage product composition of the present invention is appropriately set depending on the form of the food / beverage product, but is preferably a total amount, preferably at least 0.0001% by mass. , More preferably at least 0.001% by mass, even more preferably at least 0.005% by mass, particularly preferably at least 0.01% by mass. Moreover, although the upper limit of the said quantity in the food-drinks composition of this invention is not restrict | limited in particular, 90 mass% or less, Preferably it is 70 mass% or less by a total amount, More preferably, 50 mass% or less is illustrated.
In addition, the amount of the compound in the food / beverage product composition of the present invention is a total amount of compounds selected from the group consisting of a cyclolanostane compound and a rophenol compound, preferably 0.001 depending on the form of the food / beverage product. It may be an amount suitable for ingestion in a range of ˜50 mg / day, more preferably 0.01 to 10 mg / day. Therefore, one of the preferable forms of the food / beverage composition of the present invention is a total amount of a compound selected from a cyclolanostane compound and a rophenol compound, preferably 0.001 to 50 mg / day, more preferably 0.01. It is the food-drinks composition used so that it may ingest -10 mg / day.

本発明の飲食品組成物は、好ましくは、さらに乳化剤を含む。このような乳化剤としては、食用として利用できるものであれば特に制限されない。例えば、日本において、食品添加剤として認可されているような、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、レシチン類等を使用することが好ましい。
さらに乳化剤を含有する飲食品組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物の分散性が高いため、効果の安定性に優れる。 The food and beverage product composition of the present invention preferably further contains an emulsifier. Such an emulsifier is not particularly limited as long as it can be used for food. For example, it is preferable to use glycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, lecithin and the like which are approved as food additives in Japan.
Furthermore, since the food / beverage product composition containing an emulsifier has high dispersibility of the cyclolanostane compound and the rophenol compound, the effect stability is excellent.

前記飲食品組成物は、好ましくは保健機能食品である。「保健機能食品」とは、疾患の予防効果、又は疾患の発生リスクの低減効果が、直接的又は間接的に表示された食品、及び事業者の責任で科学的根拠を基に商品パッケージに機能性を表示するものとして、消費者庁に届け出られた食品を意味する。例えば、現在、日本において、特定保健用食品、機能性表示食品、健康補助食品等の態様で販売される食品が挙げられる。 The food / beverage product composition is preferably a health functional food. “Health-function foods” are foods that are directly or indirectly labeled with a disease prevention effect or a disease risk reduction effect, and function on product packages based on scientific evidence at the responsibility of the operator. It means food that has been reported to the Consumer Affairs Agency as an indication of sex. For example, foods sold in the form of food for specified health use, functional indication food, health supplement food, etc. in Japan at present.

また、保健機能食品の形態としては、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントであることも、摂取者が有効成分の摂取量を把握し易いという点で好ましい。 In addition, the form of the health functional food is preferably a granular, tablet or liquid supplement from the viewpoint that the intaker can easily grasp the intake amount of the active ingredient.

また、このような保健機能食品には、「プロスタグランジンＥ２産生抑制のため」、「アグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制のため」の用途の表示が付された形態とすることも好ましい。すなわち、本発明の飲食品組成物は、例えば、「プロスタグランジンＥ２産生抑制のため」、「アグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制のため」、「変形性関節症の予防、改善のため」の用途が付された、化合物１及び化合物２からなる群から選択される化合物を有効成分として含有する、プロスタグランジンＥ２及び／又はアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の活性により引き起こされる症状の予防又は改善のための飲食品組成物として販売することが好ましい。 Moreover, it is also preferable that such health functional foods have a form in which the indications “for suppressing prostaglandin E2 production” and “for inhibiting aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production” are attached. That is, the food / beverage product composition of the present invention includes, for example, “for suppression of prostaglandin E2 production”, “for suppression of aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production”, “for prevention and improvement of osteoarthritis”. Prevention of symptoms caused by the activity of prostaglandin E2 and / or aggrecanase 1 (ADAMTS-4) containing as an active ingredient a compound selected from the group consisting of compound 1 and compound 2 to which It is preferable to sell it as a food / beverage product composition for improvement.

前記「表示」は、需要者に対して前記用途を知らしめる機能を有する全ての表示を含む。すなわち、前記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて前記「表示」に該当する。
また、前記「表示が付された」とは、前記表示と、飲食品（製品）を関連付けて認識させようとする表示行為が存在していることをいう。
表示行為は、需要者が前記用途を直接的に認識できるものであることが好ましい。具体的には、本発明の飲食品組成物に係る商品又は商品の包装への前記用途の記載行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類（電磁的方法により提供されるものを含む）への前記用途の記載行為が例示できる。 The “display” includes all displays having a function of informing the consumer of the use. In other words, any display capable of recalling / analyzing the application corresponds to the “display” regardless of the purpose of display, the content of display, the object / medium to be displayed, and the like.
In addition, the “display is attached” means that there is a display act that tries to recognize the display in association with the food or drink (product).
It is preferable that the display act is one in which the consumer can directly recognize the application. Specifically, to the product relating to the food / beverage composition of the present invention or the description of the use on the product packaging, the advertisement related to the product, the price list or transaction documents (including those provided by electromagnetic methods) The act of describing the use can be exemplified.

一方、表示される内容（表示内容）としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましい。
例えば、健康食品、機能性飲食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等の表示を例示することができる。特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。 On the other hand, the displayed content (display content) is a display approved by the government or the like (for example, a display that is approved based on various systems determined by the government and is performed in a mode based on such approval). Is preferred.
For example, the display of health foods, functional foods and drinks, enteral nutrition foods, special purpose foods, health functional foods, foods for specified health use, nutritional functional foods, functional display foods, quasi drugs, etc. it can. In particular, the display approved by the Consumer Affairs Agency, for example, the display approved by the food system for specific health use and a similar system can be exemplified. Examples of the latter can include a display as a food for specified health use, a display as a condition specific food for specified health use, a display that affects the structure and function of the body, a display for reducing disease risk, etc. Speaking of the health promotion law enforcement regulations (April 30, 2003 Ministry of Health, Labor and Welfare Ordinance No. 86) labeling as food for specified health use (especially labeling the use of health), and similar The display can be listed as a typical example.

前記用途を表す文言は、「プロスタグランジン産生抑制のため」、「アグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制のため」、「変形性関節症の予防、改善のため」という文言に限られるものでなく、それ以外の文言であっても、プロスタグランジンＥ２及び／又はアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）により起こる症状を予防、改善する作用又は効果を表現する文言であれば、本発明の範囲に包含されることは言うまでもない。
また、本発明の飲食品組成物は、前記用途の表示に加え、前記有効成分の表示、さらには、前記用途と前記有効成分の関連性を示す表示を含むことも好ましい。 The wording indicating the use is limited to the words “for inhibiting prostaglandin production”, “for inhibiting aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production”, and “for preventing and improving osteoarthritis”. However, any other language is also included in the scope of the present invention as long as it expresses the action or effect of preventing or improving symptoms caused by prostaglandin E2 and / or aggrecanase 1 (ADAMTS-4). It goes without saying that it is done.
Moreover, in addition to the display of the said use, it is also preferable that the food-drinks composition of this invention contains the display of the said active ingredient, and also the display which shows the relevance of the said use and the said active ingredient.

本発明の飲食品組成物の形態としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の氷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、乳飲料、発酵乳、バター等の乳製品；惣菜；パン類；その他、経腸栄養食品、流動食、育児用ミルク、スポーツ飲料が挙げられる。 Examples of the form of the food and beverage composition of the present invention include beverages such as soft drinks, carbonated drinks, nutrient drinks, fruit juice drinks, and lactic acid bacteria drinks (including concentrated concentrates and powders for preparation of these drinks); ice creams, ice sherbets, Ice confectionery such as shaved ice; noodles such as buckwheat, udon, harusame, gyoza skin, cucumber skin, Chinese noodles, instant noodles; rice cake, chewing gum, candy, gum, chocolate, tablet confectionery, snack confectionery, biscuits, jelly, jam, cream , Baked confectionery, etc .; fish and livestock processed foods such as kamaboko, ham, sausage; dairy products such as processed milk, milk drinks, fermented milk, butter; beet; bread; other enteral nutrition foods, liquid food , Baby milk and sports drinks.

本発明の飲食品組成物は、シクロラノスタン化合物及びロフェノール化合物から選ばれる化合物を、有効成分として配合することで製造することができる。本発明の飲食品組成物は、例えば、前記化合物を、飲食品原料に混合して、加工することで製造することができる。
また、本発明の飲食品組成物は、前記化合物を含む公知の植物等を原料として、熱水や各種溶媒を用いた抽出、超臨界抽出、亜臨界抽出することにより得た抽出物を、飲食品原料と共に加工することで製造することもできる。抽出物を得る具体的な方法については、「本発明の医薬組成物」の項で例示したとおりである。 The food-drinks composition of this invention can be manufactured by mix | blending the compound chosen from a cyclolanostane compound and a rophenol compound as an active ingredient. The food / beverage composition of this invention can be manufactured by mixing the said compound with food / beverage raw materials, and processing, for example.
Moreover, the food / beverage product composition of the present invention uses a known plant containing the compound as a raw material, extracts using hot water or various solvents, supercritical extraction, subcritical extraction, and extracts obtained by It can also be manufactured by processing together with raw materials. The specific method for obtaining the extract is as exemplified in the section “Pharmaceutical composition of the present invention”.

また、本発明の飲食品組成物の形態を、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントとする場合には、有効成分である前記化合物を、例えば、ラクチュロース、マルチトール、及びラクチトール等の糖類、及びそれ以外の糖類、例えばデキストリン、デンプン等；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等と共に、製剤化することも好ましい。 Moreover, when the form of the food or drink composition of the present invention is a granular, tablet or liquid supplement, the compound as an active ingredient is, for example, sugars such as lactulose, maltitol, and lactitol, and Other sugars such as dextrin and starch; proteins such as gelatin, soy protein and corn protein; amino acids such as alanine, glutamine and isoleucine; polysaccharides such as cellulose and gum arabic; soy oil and medium chain fatty acid triglycerides It is also preferable to formulate with oils and fats.

以下に実施例を用いて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

［製造例１］
（シクロラノスタン化合物（化合物１）の製造）
γ−オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水２５０ｍｌ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、エタノール１５０ｍｌ、メタノール１５０ｍｌを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後に、反応液を１３００ｍｌの水に添加し、生じた白色の析出物を吸引ろ過し、固形物を得た。残存するアルカリを洗浄するために、得られた残渣を１０００ｍｌの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇのシクロアルテノール、及び１５４３ｍｇの２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（化合物１）を得た。 [Production Example 1]
(Production of cyclolanostane compound (compound 1))
Distilled water (250 ml), sodium hydroxide (50 g), isopropanol (150 ml), ethanol (150 ml), and methanol (150 ml) were added to γ-oryzanol (Oryza Oil Chemical Co., Ltd.) (8.0 g), and the mixture was heated to reflux for 2 hours using a mantle heater. After the reaction, the reaction solution was added to 1300 ml of water, and the resulting white precipitate was subjected to suction filtration to obtain a solid. In order to wash away the remaining alkali, the obtained residue was suspended in 1000 ml of water, and then suction filtration was performed again. This operation was repeated twice, and the final residue was freeze-dried under reduced pressure to obtain 5.91 g of oryzanol hydrolyzate. The hydrolyzate was purified by HPLC to obtain 2435 mg of cycloartenol and 1543 mg of 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol (Compound 1).

次に、得られたシクロアルテノールを用いて、９，１９−シクロラノスタン−３−オール（化合物１）の合成を行った。
シクロアルテノールを３０２ｍｇ、イソプロパノールを１５０ｍｌ、及び粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉して、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。攪拌しながら加熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液について、ろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、９，１９−シクロラノスタン−３−オール２７５ｍｇを得た。 Next, 9,19-cyclolanostan-3-ol (Compound 1) was synthesized using the obtained cycloartenol.
302 mg of cycloartenol, 150 ml of isopropanol, and 1.0 g of a powdery 5% palladium-supported carbon catalyst were charged, sealed in an autoclave and replaced with nitrogen gas, and then a pressure of 3 kg / cm @ 2 of hydrogen gas was applied. Introduced while playing. The mixture was heated with stirring, and when the temperature reached 50 ° C., the hydrogen pressure was 5 kg / cm 2, and the reaction was performed for 6 hours while maintaining the pressure by supplementing the absorbed hydrogen. The reaction solution was filtered to remove the catalyst, concentrated, and then purified by silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform 100%) to obtain 275 mg of 9,19-cyclolanostan-3-ol.

［製造例２］
（ロフェノール化合物（化合物２）の製造）
アロエベラの葉肉（透明ゲル部分）１００ｋｇを、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００Ｌの酢酸エチル／ブタノール（３：１）混合液を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチル／ブタノール混合液を回収した。この酢酸エチル／ブタノール混合液を減圧下で濃縮した。回収された酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物の質量は、１３．５ｇであった。
シリカゲル６０（メルク社製）を４００ｇ充填したカラムに、当該抽出物１３ｇを１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解させた溶液を通液し、カラムに吸着させた後、クロロホルム／メタノール混合液（クロロホルム：メタノール＝１００：１、２５：１、１０：１、５：１及び１：１の各混合比）を使用して、メタノール濃度を段階的に上昇させるステップワイズグラジエント法により溶出し、前記混合液の混合比毎に溶出液を分画した。これらのフラクションのうち、クロロホルム：メタノール＝２５：１で溶出してきたフラクションに本発明のロフェノール化合物が存在することを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィー（メルク社製、シリカゲル６０Ｆ２５４及びＲＰ−１８Ｆ２５４３）にて確認した。 [Production Example 2]
(Production of rophenol compound (compound 2))
100 kg of aloe vera mesophyll (transparent gel portion) was liquefied using a homogenizer, and 100 L of ethyl acetate / butanol (3: 1) mixture was added thereto and stirred. After leaving overnight, the ethyl acetate / butanol mixture and the aqueous layer were separated to recover the ethyl acetate / butanol mixture. The ethyl acetate / butanol mixture was concentrated under reduced pressure. The mass of the recovered ethyl acetate / butanol mixed liquid extract was 13.5 g.
A column in which 400 g of silica gel 60 (manufactured by Merck) was packed was passed through a solution prepared by dissolving 13 g of the extract in a 1 ml chloroform / methanol (1: 1) mixed solution and adsorbed on the column. Using a methanol mixture (chloroform: methanol = 100: 1, 25: 1, 10: 1, 5: 1, and 1: 1 mixing ratio) by a stepwise gradient method in which the methanol concentration is increased stepwise. The eluate was fractionated for each mixing ratio of the mixed solution. Among these fractions, the presence of the rophenol compound of the present invention in the fraction eluted with chloroform: methanol = 25: 1 was confirmed by normal phase and reverse phase thin layer chromatography (Merck, silica gel 60F254 and RP- 18F2543).

このフラクションの溶媒を除去した後、１ｍｌのクロロホルム／メタノール（１：１）混合液に溶解し、シリカゲル６０を１００ｇ充填したカラムに通液し、カラムに吸着させた後、ヘキサン／酢酸エチル（４：１）混合液１１００ｍｌで溶出した。溶出フラクションを、順に３００ｍｌ（フラクションＡ）、３００ｍｌ（フラクションＢ）、５００ｍｌ（フラクションＣ）ずつ分取した。
本発明の化合物２であるロフェノール化合物が、フラクションＡに濃縮されたことを、順相及び逆相薄層クロマトグラフィーにて確認し、さらに、コスモシールＣ１８（ナカライテスク社製）を装着したＨＰＬＣを用いて、クロロホルム／ヘキサン（８５：１５）混合液にて分離し、４−メチルコレスト−７−エン−３−オール、４−メチルエルゴスト−７−エン−３−オール、及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールを、それぞれ１．３ｍｇ、１．２ｍｇ、１ｍｇ得た。各々の化合物の構造は質量（ＭＳ）分析及びＮＭＲにて確認した。 After removing the solvent of this fraction, it was dissolved in 1 ml of a chloroform / methanol (1: 1) mixed solution, passed through a column packed with 100 g of silica gel 60, adsorbed onto the column, and then hexane / ethyl acetate (4 1) Eluted with 1100 ml of the mixture. The elution fraction was fractionated in order of 300 ml (fraction A), 300 ml (fraction B), and 500 ml (fraction C).
An HPLC equipped with Cosmosil C18 (manufactured by Nacalai Tesque) was confirmed by normal-phase and reverse-phase thin-layer chromatography that the rophenol compound, which is compound 2 of the present invention, was concentrated in fraction A. In a chloroform / hexane (85:15) mixture, 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, and 4-methyls 1.3 mg, 1.2 mg, and 1 mg of tigmast-7-en-3-ol were obtained, respectively. The structure of each compound was confirmed by mass (MS) analysis and NMR.

［実施例１］
（１）目的
実施例１は、１Ｌ−１βによるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の産生量増加に対する、シクロラノスタン化合物又はロフェノール化合物を添加した場合のＰＧＥ２の産生量の変化に与える影響を検討した。 [Example 1]
(1) Purpose Example 1 examines the effect of 1L-1β on the increase in production of prostaglandin E2 (PGE2) on the change in production of PGE2 when a cyclolanostane compound or rophenol compound is added. did.

（２）試料の調製
実施例１では製造例１で製造したシクロラノスタン化合物（９，１９−シクロラノスタン−３−オール；試験試料１）、及び製造例２で製造したロフェノール化合物（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール；試験試料２）を用いた。なお、対照試料としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いた。 (2) Preparation of Sample In Example 1, the cyclolanostane compound (9,19-cyclolanostan-3-ol; test sample 1) produced in Production Example 1 and the rophenol compound (4) produced in Production Example 2 were used. -Methylstigmast-7-en-3-ol; test sample 2) was used. As a control sample, dimethyl sulfoxide (DMSO) was used.

（３）試験方法
（ａ）ＨＣＨ細胞培養及びＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズの作製
凍結されたヒト膝軟骨細胞（Human Chondrocytes; HCH）（Promocell社製、#C−12710）を解凍し、増殖培地（Promocell社製、#C−27101）にて３７℃、ＣＯ_２濃度５％の条件にて増殖させ、４週間経過後のものを実施例１に用いた。１バイアル中の凍結ＨＣＨ細胞の数は５×１０^５ｃｅｌｌｓ程度であったが、４週間経過後の１バイアル中のＨＣＨ細胞の数は約１×１０^８ｃｅｌｌｓ程度であった。
なお、ＨＣＨ細胞数は、ＨＣＨ細胞をトリパンブルー（gibco社製、Trypan Blue Stain(0.4%)）にて染色し、血球計算版にて測定した。
アルギン酸三次元培養キット（PGリサーチ社製、#ABC−KIT）のプロトコールに従い、アルギン酸ビーズ１球中に約１×１０^４ｃｅｌｌｓのＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズを作製した。
（ｂ）培養上清の回収
４８個のウェルを有する４８ウェルプレートに、前記（ａ）にて作製したＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズを５球／増殖培地０．５ｍｌ／１ウェルとなるように添加して３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で培養した。３日間培養後、基本培地（Promocell社製、＃Ｃ−２７１１１）０．５ｍｌ／１ウェルに培地交換を行い、無血清条件下にて馴化させた。１日間馴化後、培地を除去し、試験試料１（９，１９−シクロラノスタン−３−オール）、試験試料２（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）をそれぞれＤＭＳＯに溶解し、試験試料１、２の最終濃度が２μｇ／ｍｌ及び０．２μｇ／ｍｌ、並びにＤＭＳＯの最終濃度が０．１％となるようにウェルに添加し、４８時間培養した。試験試料１を使用した試験を試験群１とし、試験試料２を使用した試験を試験群２とした。
その後、基本培地にて１ｎｇ／μｌに調製した１Ｌ−１β（PEPROTECH社製、#2001−00B）を５μｌ／１ウェル添加し、ＨＣＨ細胞に炎症を惹起させた。１Ｌ−１βの最終濃度は０．１ｎｇ／μｌであった。
１Ｌ−１β添加した後、１８時間経過後に培養上清を回収した。
なお、コントロールとして対照試料（ＤＭＳＯ）を最終濃度が０．１％となるように添加して１Ｌ−１βを添加しないもの（対照群１）、対照試料（ＤＭＳＯ）を最終濃度が０．１％となるように添加し、さらに１Ｌ−１βを最終濃度が０．１ｎｇ／μｌとなるように添加したもの（対照群２）の２種類を作製した。
（ｃ）プロスタグランジンＥ２濃度の測定
回収した培養上清中のプロスタグランジンＥ２濃度は、PGE2 ELISA Kit（Enzo社製、ADI−900−001）を用いて測定した。 (3) Test method (a) HCH cell culture and preparation of alginate beads containing HCH cells Frozen human knee chondrocytes (HCH) (Promocell, # C-12710) were thawed, and growth medium (Promocell, # C-27101) was grown under the conditions of 37 ° C. and CO ₂ concentration of 5% and used after 4 weeks. The number of frozen HCH cells in one vial was about 5 × 10 ⁵ cells, but the number of HCH cells in one vial after about 4 weeks was about 1 × 10 ⁸ cells.
The number of HCH cells was measured with a hemocytometer by staining HCH cells with trypan blue (Gibco, Trypan Blue Stain (0.4%)).
Alginate beads containing about 1 × 10 ⁴ cells of HCH cells in one alginate bead were prepared according to the protocol of an alginate three-dimensional culture kit (# ABC-KIT, manufactured by PG Research).
(B) Collection of culture supernatant In a 48-well plate having 48 wells, the alginate beads containing the HCH cells prepared in (a) described above are 5 spheres / growth medium 0.5 ml / well. added to 37 ° C., and cultured under the conditions of 5% CO _2. After culturing for 3 days, the medium was changed to 0.5 ml / well of a basic medium (Promocell, # C-27111), and conditioned under serum-free conditions. After acclimatization for 1 day, the medium was removed, and test sample 1 (9,19-cyclolanostan-3-ol) and test sample 2 (4-methylstigmast-7-en-3-ol) were each added to DMSO. Dissolved, added to the wells so that the final concentrations of test samples 1 and 2 were 2 μg / ml and 0.2 μg / ml, and the final concentration of DMSO was 0.1%, and cultured for 48 hours. The test using test sample 1 was designated as test group 1, and the test using test sample 2 was designated as test group 2.
Thereafter, 1 L-1β (PEPROTECH, # 2001-00B) prepared at 1 ng / μl in a basic medium was added at 5 μl / well to induce inflammation in HCH cells. The final concentration of 1L-1β was 0.1 ng / μl.
After the addition of 1L-1β, the culture supernatant was recovered after 18 hours.
As a control, a control sample (DMSO) was added so that the final concentration was 0.1%, and 1L-1β was not added (control group 1), and a control sample (DMSO) was added at a final concentration of 0.1%. Then, two types were prepared (control group 2) in which 1L-1β was added to a final concentration of 0.1 ng / μl.
(C) Measurement of prostaglandin E2 concentration Prostaglandin E2 concentration in the collected culture supernatant was measured using PGE2 ELISA Kit (ADI-900-001, manufactured by Enzo).

（４）試験結果
実施例１の結果を表１に示す。表１のＰＧＥ２濃度は、検出キットに基づくＥＬＩＳＡ法により測定された実測値である。また、表中のｐ値は、ｔ検定による有意確率（^＃＃：ｐ＜０．０１ｖｓ対照群１、^＊：ｐ＜０．０５ｖｓ対照群２）を示す。 (4) Test results Table 1 shows the results of Example 1. The PGE2 concentration in Table 1 is an actual measurement value measured by an ELISA method based on a detection kit. Moreover, p value in a table | surface shows the significance probability ( ^## : p <0.01 vs control group 1, ^* : p <0.05 vs control group 2) by t test.

表１に示されるように、１Ｌ−１βを添加して炎症を惹起させた対照群２、試験群１、２では、１Ｌ−１βを添加しない対照群１と比べてＰＧＥ２濃度が増加した。
試験群１、２では、試料の最終濃度が２μｇ／ｍｌ及び０．２μｇ／ｍｌのいずれにおいても、対照群２と比較してＰＧＥ２濃度が顕著に減少した。特に、試料の最終濃度が２μｇ／ｍｌである場合はプロスタグランジンＥ２産生を有意に抑制していた。
以上より、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールはプロスタグランジンＥ２の産生を抑制する作用を有することが明らかとなった。 As shown in Table 1, PGE2 concentration increased in Control Group 2 and Test Groups 1 and 2 in which inflammation was induced by adding 1L-1β, compared to Control Group 1 in which 1L-1β was not added.
In Test Groups 1 and 2, the PGE2 concentration was significantly reduced compared to Control Group 2 at both the final sample concentration of 2 μg / ml and 0.2 μg / ml. In particular, when the final concentration of the sample was 2 μg / ml, prostaglandin E2 production was significantly suppressed.
From the above, it has been clarified that 9,19-cyclolanostan-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol have an action of suppressing the production of prostaglandin E2.

［実施例２］
（１）目的
実施例２は、１Ｌ−１βによるアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）遺伝子の発現量増加に対する、シクロラノスタン化合物又はロフェノール化合物を添加した場合のアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の発現量の変化に与える影響を検討した。 [Example 2]
(1) Purpose Example 2 shows the expression level of aggrecanase 1 (ADAMTS-4) when a cyclolanostane compound or a rophenol compound is added to increase the expression level of aggrecanase 1 (ADAMTS-4) gene by 1L-1β. The effect on changes in

（２）試料の調製
実施例２では、実施例１と同様、製造例１で製造したシクロラノスタン化合物（９，１９−シクロラノスタン−３−オール；試験試料１）及び製造例２で製造したロフェノール化合物（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール；試験試料２）を用いた。なお、対照試料としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を用いた。 (2) Preparation of sample In Example 2, as in Example 1, the cyclolanostane compound (9,19-cyclolanostan-3-ol; test sample 1) produced in Production Example 1 and Production Example 2 were produced. The rophenol compound (4-methylstigmast-7-en-3-ol; test sample 2) was used. As a control sample, dimethyl sulfoxide (DMSO) was used.

（３）試験方法
（ａ）ＨＣＨ細胞培養及びＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズの作製
前記実施例１と同様の方法により細胞培養及びＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズの作製を行った。
（ｂ）遺伝子発現解析用の細胞の回収
１２個のウェルを有する１２ウェルプレートに、前記（ａ）にて作製したＨＣＨ細胞が含まれるアルギン酸ビーズを２０球／増殖培地２ｍｌ／１ウェルとなるように添加して（ｎ＝３）、３７℃、５％ＣＯ_２の条件で培養した。３日間培養後、基本培地（Promocell社製、#C−27111）２ｍｌ／１ウェルに培地交換を行い、無血清条件下にて馴化させた。１日間の馴化後、培地を除去し、前記調製した試験試料１（９，１９−シクロラノスタン−３−オール）、試験試料２（４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オール）をそれぞれＤＭＳＯに溶解し、試験試料１、２の最終濃度が２μｇ／ｍｌ及び０．２μｇ／ｍｌ、並びにＤＭＳＯの最終濃度が０．１％となるようにウェルに添加し、４８時間培養した。試験試料１を使用した試験を試験群１とし、試験試料２を使用した試験を試験群２とした。
その後、基本培地にて１ｎｇ／μｌに調製したＩＬ−１β（PEPROTECH社製、#2001−00B）を２０μｌ／１ウェル添加し、ＨＣＨ細胞に炎症を惹起させた。１Ｌ−１βの最終濃度は０．１ｎｇ／μｌであった。
１Ｌ−１βを添加した後、４時間経過後に培養上清を除去した。さらに各ウェルにクエン酸ナトリウムを添加してアルギン酸を溶解させ、遠心分離（３００ｇ、１０分間）を行い、細胞を回収した。
なお、コントロールとして対照試料（ＤＭＳＯ）を最終濃度が０．１％となるように添加して１Ｌ−１βを添加しないもの（対照群１）、対照試料（ＤＭＳＯ）を最終濃度が０．１％となるように添加し、さらに１Ｌ−１βを最終濃度が０．１ｎｇ／μｌとなるように添加したもの（対照群２）の２種類を作製した。
（ｃ）ＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子の発現量の評価
前記回収した細胞からＲＮＡを抽出、精製し、リアルタイムＰＣＲにてＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子の発現量を評価した。ＲＮＡの抽出は、TRIZOL Reagentキット（Thermo Fisher SCIENTIFIC社製、15596-018）を用いて行った。
ＰＣＲの反応液はSYBR Green Real−Time PCR Master Mixes（Thermo Fisher SCIENTIFIC社製、#A25742）を用いた。ＰＣＲ装置は7500 Fast Real-Time PCR System（Applied Biosystems社製、型番4377354）を用いた。増幅条件は９５℃にて３秒保持し、その後６０℃にて３０秒間保持するサイクルを１サイクルとし、これを４０サイクル行った。
ＰＣＲのプライマーは以下のものを使用した。 (3) Test method (a) Production of alginate beads containing HCH cell culture and HCH cells Cell culture and alginate beads containing HCH cells were produced in the same manner as in Example 1.
(B) Collection of cells for gene expression analysis Alginate beads containing the HCH cells prepared in (a) above are placed in a 12-well plate having 12 wells so that 20 balls / growth medium / well 2 ml / well. (N = 3) and cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO ₂ . After culturing for 3 days, the medium was changed to 2 ml / well of a basic medium (Promocell, # C-27111), and conditioned under serum-free conditions. After acclimatization for 1 day, the medium was removed, and test sample 1 (9,19-cyclolanostan-3-ol) and test sample 2 (4-methylstigmast-7-en-3-ol) prepared above were prepared. Were dissolved in DMSO, added to wells so that the final concentrations of test samples 1 and 2 were 2 μg / ml and 0.2 μg / ml, and the final concentration of DMSO was 0.1%, and cultured for 48 hours. The test using test sample 1 was designated as test group 1, and the test using test sample 2 was designated as test group 2.
Thereafter, IL-1β (PEPROTECH, # 2001-00B) prepared at 1 ng / μl in a basic medium was added at 20 μl / well to induce inflammation in HCH cells. The final concentration of 1L-1β was 0.1 ng / μl.
After adding 1L-1β, the culture supernatant was removed after 4 hours. Furthermore, sodium citrate was added to each well to dissolve alginic acid, and centrifugation (300 g, 10 minutes) was performed to collect cells.
As a control, a control sample (DMSO) was added so that the final concentration was 0.1%, and 1L-1β was not added (control group 1), and a control sample (DMSO) was added at a final concentration of 0.1%. Then, two types were prepared (control group 2) in which 1L-1β was added to a final concentration of 0.1 ng / μl.
(C) Evaluation of expression level of ADAMTS-4 gene RNA was extracted from the collected cells and purified, and the expression level of ADAMTS-4 gene was evaluated by real-time PCR. RNA extraction was performed using a TRIZOL Reagent kit (Thermo Fisher SCIENTIFIC, 15596-018).
As a PCR reaction solution, SYBR Green Real-Time PCR Master Mixes (manufactured by Thermo Fisher SCIENTIFIC, # A25742) was used. As a PCR apparatus, 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, model number 4377354) was used. The amplification condition was maintained at 95 ° C. for 3 seconds, and then held at 60 ° C. for 30 seconds as one cycle, and this was performed for 40 cycles.
The following PCR primers were used.

＜プライマーの配列＞
ＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子増幅用のプライマーは以下の配列を有するものを用いた。
ＡＤＡＭＴＳ−４（フォワード）：ＧＧＴＣＡＡＧＧＴＣＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＣ
ＡＤＡＭＴＳ−４（リバース）：ＧＡＡＴＧＣＧＧＣＣＡＴＣＴＴＧＴＣＡＴＣ
ハウスキーピンク遺伝子として以下の配列を有するものを用いた。
ＨＰＲＴ１（フォワード）：ＧＧＣＡＧＴＡＴＡＡＴＣＣＡＡＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡ
ＨＰＲＴ１（リバース）：ＧＴＣＡＡＧＧＧＣＡＴＡＴＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＡＣ <Primer sequence>
As the primer for amplifying ADAMTS-4 gene, one having the following sequence was used.
ADAMTS-4 (forward): GGTCAAGGTCCCATGTGCAC
ADAMTS-4 (reverse): GAATGCGGCCATCTTGCATC
A house key pink gene having the following sequence was used.
HPRT1 (Forward): GGCAGTATAATCCAAAGATGGTCAA
HPRT1 (reverse): GTCAAGGGCATATCCTACAACAAAC

（４）試験結果
実施例２の結果を表２に示す。表２の「相対ＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現量」とは、対照試料１のＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現量を「１」とした場合の各試料のＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現量を意味する。表２のｐ値は、ｔ検定による有意確率（^＃＃：ｐ＜０．０１ｖｓ対照群１、^＊：ｐ＜０．０５ｖｓ対照群２）を示す。 (4) Test results Table 2 shows the results of Example 2. The “relative ADAMTS-4 gene expression level” in Table 2 means the ADAMTS-4 gene expression level of each sample when the ADAMTS-4 gene expression level of the control sample 1 is “1”. The p value in Table 2 indicates the significance probability ( ^## : p <0.01 vs control group 1, ^* : p <0.05 vs control group 2) by t test.

表２に示されるように、１Ｌ−１βを添加して炎症を惹起させた対照群２、試験群１、２では、１Ｌ−１βを添加しない対照群１と比べてＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現量が増加した。
一方、試験群１、２では、試料の最終濃度が２μｇ／ｍｌ及び０．２μｇ／ｍｌのいずれにおいても、対照群２と比較してＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現量が顕著に減少した。特に、試料の最終濃度が２μｇ／ｍｌである場合はアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）遺伝子発現を有意に抑制していた。
以上より、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び４−メチルスチグマスト−７−エン−３−オールはＡＤＡＭＴＳ−４遺伝子発現の抑制作用を有する、すなわちアグリカナーゼ１の産生抑制作用を有することが明らかとなった。 As shown in Table 2, ADAMTS-4 gene expression level was higher in Control Group 2 and Test Groups 1 and 2 in which inflammation was induced by adding 1L-1β than in Control Group 1 in which 1L-1β was not added. Increased.
On the other hand, in Test Groups 1 and 2, the ADAMTS-4 gene expression level was significantly reduced compared to Control Group 2 at both the final sample concentrations of 2 μg / ml and 0.2 μg / ml. In particular, when the final concentration of the sample was 2 μg / ml, aggrecanase 1 (ADAMTS-4) gene expression was significantly suppressed.
From the above, 9,19-cyclolanostan-3-ol and 4-methylstigmast-7-en-3-ol have an inhibitory action on ADAMTS-4 gene expression, that is, an inhibitory action on aggrecanase 1 production. It became clear.

本発明は、プロスタグランジンＥ２産生抑制、及びアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）産生抑制、並びにプロスタグランンジンＥ２及びアグリカナーゼ１（ＡＤＡＭＴＳ−４）の活性に起因する症状の予防、改善、治療に利用できる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention can be used for suppression of prostaglandin E2 production, suppression of aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production, and prevention, improvement and treatment of symptoms caused by prostaglandin E2 and aggrecanase 1 (ADAMTS-4) activities. .

Claims

A composition for inhibiting prostaglandin E2 production comprising one or more compounds selected from the group consisting of a cyclolanostane compound and a rophenol compound as an active ingredient.

A composition for suppressing aggrecanase 1 (ADAMTS-4) production comprising one or more compounds selected from the group consisting of cyclolanostane compounds and rophenol compounds as active ingredients.

The cyclolanostane compound is one or more compounds selected from the group consisting of 9,19-cyclolanostan-3-ol and 24-methylene-9,19-cyclolanostan-3-ol. Or the composition of 2.

The rophenol compound is selected from the group consisting of 4-methylcholest-7-en-3-ol, 4-methylergost-7-en-3-ol, and 4-methylstigmast-7-en-3-ol The composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the composition is one or more compounds.

The composition as described in any one of Claims 1-4 whose said composition is a pharmaceutical composition or a food-drinks composition.