JP2019172579A - Sirtuin activity promoter - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、サーチュイン活性促進剤に関する。 The present invention relates to a sirtuin activity promoter.
サーチュインは、クロマチン構造の主要な構成因子であるヒストンの脱アセチル化を行う酵素（Histone Deacetylase、HDAC）の一種である。サーチュインとして知られる、HDACのクラスIII酵素は、ヒストンの脱アセチル化に、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）を必要とする。サーチュインとしては、ＳＩＲＴ１〜７が知られている。その中で核に存在するサーチュインとしてはＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ７が知られている。ＳＩＲＴ１は転写因子ｐ５３、Foxos（forkheadbox O），NF-κB（nuclear factor-kappa B），PGC-1α（peroxisomeproliferator-activated receptor gammacoactivator-1α）等の細胞の維持や増殖に関与するアセチル化蛋白質のアセチル基を取り除く働きをしている。またＳＩＲＴ６は、ＮＡＤ依存的ＨＤＡＣ活性を持ち、ヒストンＨ３の９番目と５６番目のリジンを脱アセチル化することなどが知られている。ＳＩＲＴ７はヒストンＨ３の１８番目のリジン特異的なヒストンデアセチラーゼとして機能し、転写抑制を促進することが知られている。中でも、視床下部における核中のＳＩＲＴ１等のサーチュインについては、その発現の増加又はサーチュイン蛋白質の活性化により、寿命延長に繋がることが確認されている。
特許文献１には、炭素数５及び１７のアルキル基を有するアルキルレゾルシノールによりインビトロでのＳＩＲＴ１酵素活性が高まったことが記載されている。
Sirtuins are a type of enzyme (Histone Deacetylase, HDAC) that deacetylates histones, which are the main components of chromatin structure. HDAC class III enzymes, known as sirtuins, require nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) for histone deacetylation. SIRT1 to 7 are known as sirtuins. Among them, SIRT1, SIRT6, and SIRT7 are known as sirtuins present in the nucleus. SIRT1 is an acetylated protein that is involved in the maintenance and proliferation of transcription factors such as p53, Foxos (forkheadbox O), NF-κB (nuclear factor-kappa B), and PGC-1α (peroxisomeproliferator-activated receptor gammacoactivator-1α). It works to remove the group. SIRT6 has NAD-dependent HDAC activity and is known to deacetylate the 9th and 56th lysines of histone H3. SIRT7 functions as an 18th lysine-specific histone deacetylase of histone H3 and is known to promote transcriptional repression. In particular, it has been confirmed that sirtuins such as SIRT1 in the nucleus in the hypothalamus lead to an increase in lifespan by increasing the expression or sirtuin protein activation.
Patent Document 1 describes that in vitro SIRT1 enzyme activity was increased by alkylresorcinol having an alkyl group having 5 and 17 carbon atoms.
一方、炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基を有するアルキルレゾルシノールは、例えば小麦のアルコール抽出物に含まれており（特許文献２及び特許文献３）、安全で、食品として摂取できる。 On the other hand, alkylresorcinol having a saturated or unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms is contained in, for example, an alcohol extract of wheat (Patent Document 2 and Patent Document 3), and is safe and can be taken as a food.
特許文献２には、炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基を有するアルキルレゾルシノールを含む小麦抽出物が、耐糖能異常改善作用を有すると記載されている。また、特許文献３には炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基を有するアルキルレゾルシノールを含む小麦抽出物が、抗肥満作用を有すると記載されている。しかしながら、炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基を有するアルキルレゾルシノールについて、更に新たな有効活用方法が望まれている。 Patent Document 2 describes that a wheat extract containing an alkylresorcinol having a saturated or unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms has an effect of improving abnormal glucose tolerance. Patent Document 3 describes that a wheat extract containing an alkylresorcinol having a saturated or unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms has an anti-obesity effect. However, a new effective utilization method is desired for alkylresorcinol having a saturated or unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms.
従って、本発明の目的は、哺乳類を対象とした新たなサーチュイン活性促進剤を提供することにある。 Accordingly, an object of the present invention is to provide a new sirtuin activity promoter for mammals.
本発明は下記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを含有する、サーチュイン活性促進剤を提供するものである。
本発明のサーチュイン活性促進剤は、これを哺乳類が摂取することにより、視床下部におけるサーチュインの酵素活性を増大させることができる。 The sirtuin activity promoter of the present invention can increase the enzyme activity of the sirtuin in the hypothalamus by ingesting the sirtuin activity promoter of the present invention.
本発明のサーチュイン活性促進剤は、上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを含有する。
上記一般式（Ｉ）におけるＲ1に関し、炭素原子数２５の飽和アルキル基としては、代表例として、ｎ−ペンタコシル等の直鎖状のものが挙げられ、これらの他に、分岐状又は環状のものでも良い。
The sirtuin activity promoter of the present invention contains an alkylresorcinol represented by the above general formula (I).
Regarding R 1 in the above general formula (I), typical examples of the saturated alkyl group having 25 carbon atoms include linear ones such as n-pentacosyl, and in addition to these, branched or cyclic Things can be used.
また、上記一般式（Ｉ）におけるＲ1に関し、炭素原子数２５の不飽和アルキル基としては、上記の炭素原子数２５の飽和アルキル基に対応するものが挙げられる。不飽和アルキル基に含まれる不飽和結合の数及び位置に特に制限はない。 Moreover, regarding R 1 in the above general formula (I), the unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms includes those corresponding to the above-mentioned saturated alkyl group having 25 carbon atoms. There is no restriction | limiting in particular in the number and position of the unsaturated bond contained in an unsaturated alkyl group.
また、上記一般式（Ｉ）におけるＲ2は水素原子であることが好ましく、また、Ｒ1はＲ2に対してパラ位に結合していることが好ましい。 In the general formula (I), R 2 is preferably a hydrogen atom, and R 1 is preferably bonded to R 2 at the para position.
上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールの具体例としては、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）が挙げられる。 Specific examples of the alkyl resorcinol represented by the general formula (I) include 1,3-dihydroxy-5-n-pentacosylbenzene (C25: 0).
上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールは、後述する特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは０．００１〜５．０質量％、更に好ましくは０．００５〜２．０質量％、より好ましくは０．０１〜１．５質量％、特に好ましくは０．１〜１．５質量％含まれる。上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールのサーチュイン活性促進剤中の質量割合は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中の好ましい質量割合と同様の範囲であってもよい。 The alkylresorcinol represented by the general formula (I) is preferably 0.001 to 5.0% by mass, more preferably 0.005 to 2.0% by mass, more preferably in the specific alkylresorcinol mixture described later. It is contained in an amount of 0.01 to 1.5 mass%, particularly preferably 0.1 to 1.5 mass%. The mass ratio of the alkylresorcinol represented by the general formula (I) in the sirtuin activity promoter may be in the same range as the preferable mass ratio in the specific alkylresorcinol mixture.
本発明のサーチュイン活性促進剤は、上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールに加えて、複数種の下記一般式（II）で表されるアルキルレゾルシノールを含む、特定アルキルレゾルシノール混合物を含有することがサーチュイン活性促進の点で好ましい。 The sirtuin activity promoter of the present invention contains a specific alkyl resorcinol mixture containing a plurality of types of alkyl resorcinol represented by the following general formula (II) in addition to the alkyl resorcinol represented by the above general formula (I). It is preferable in terms of promoting sirtuin activity.
上記一般式（II）におけるＲ3に関し、炭素原子数１５〜２４の飽和アルキル基としては、代表例として、ｎ−ペンタデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−ノナデシル基、ｎ−ヘンイコシル基、ｎ−トリコシル基等の直鎖状のものが挙げられ、これらの他に、分岐状又は環状のものでも良い。これらの中でも、炭素原子数１５〜２３の飽和アルキル基が好ましい。 With respect to R 3 in the general formula (II), examples of the saturated alkyl group having 15 to 24 carbon atoms include n-pentadecyl group, n-heptadecyl group, n-nonadecyl group, n-henicosyl group, n- Examples include straight chain groups such as a tricosyl group, and besides these, branched or cyclic groups may be used. Among these, a saturated alkyl group having 15 to 23 carbon atoms is preferable.
また、上記一般式（II）におけるＲ3に関し、炭素原子数１５〜２４の不飽和アルキル基としては、上記の炭素原子数１５〜２４の飽和アルキル基に対応するものが挙げられる。不飽和アルキル基に含まれる不飽和結合の数及び位置に特に制限はない。 Regarding R 3 in the general formula (II), examples of the unsaturated alkyl group having 15 to 24 carbon atoms include those corresponding to the above saturated alkyl group having 15 to 24 carbon atoms. There is no restriction | limiting in particular in the number and position of the unsaturated bond contained in an unsaturated alkyl group.
また、上記一般式（II）におけるＲ4は水素原子であることが好ましく、また、Ｒ3はＲ4に対してパラ位に結合していることが好ましい。 In the general formula (II), R 4 is preferably a hydrogen atom, and R 3 is preferably bonded to R 4 at the para position.
上記一般式（II）で表されるアルキルレゾルシノールの具体例としては、以下のものが挙げられる。
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）
１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）
Specific examples of the alkylresorcinol represented by the general formula (II) include the following.
1,3-dihydroxy-5-n-pentadecylbenzene (C15: 0)
1,3-dihydroxy-5-n-heptadecylbenzene (C17: 0)
1,3-dihydroxy-5-n-nonadecylbenzene (C19: 0)
1,3-dihydroxy-5-n-henicosylbenzene (C21: 0)
1,3-dihydroxy-5-n-tricosylbenzene (C23: 0)
上記特定アルキルレゾルシノール混合物の好ましい一例として、下記６種類のアルキルレゾルシノールを含有するものが挙げられる。本発明者らの知見によれば、下記６種類のアルキルレゾルシノールの混合物は、サーチュイン活性促進に特に有効である。
１）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数１５の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１５ともいう）。
２）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１７ともいう）。
３）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ１９ともいう）。
４）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２１ともいう）。
５）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２３ともいう）。
６）上記一般式（Ｉ）で表される炭素原子数２５の飽和又は不飽和のアルキル基を有するアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２５ともいう）。
A preferable example of the specific alkyl resorcinol mixture is one containing the following six types of alkyl resorcinol. According to the knowledge of the present inventors, a mixture of the following six types of alkylresorcinol is particularly effective for promoting sirtuin activity.
1) Alkyl resorcinol (hereinafter, also referred to as AR15) in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 15 carbon atoms.
2) Alkyl resorcinol (hereinafter, also referred to as AR17) in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 17 carbon atoms.
3) Alkyl resorcinol (hereinafter, also referred to as AR19) in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 19 carbon atoms.
4) Alkyl resorcinol (hereinafter, also referred to as AR21) in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 21 carbon atoms.
5) Alkyl resorcinol (hereinafter, also referred to as AR23) in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 23 carbon atoms.
6) Alkyl resorcinol having a saturated or unsaturated alkyl group having 25 carbon atoms represented by the above general formula (I) (hereinafter also referred to as AR25).
ＡＲ１５として特に好ましいものは、Ｒ3が炭素原子数１５の飽和アルキル基、Ｒ4が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）が挙げられる。
ＡＲ１７として特に好ましいものは、Ｒ3が炭素原子数１７の飽和アルキル基、Ｒ4が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）が挙げられる。
ＡＲ１９として特に好ましいものは、Ｒ3が炭素原子数１９の飽和アルキル基、Ｒ4が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）が挙げられる。
ＡＲ２１として特に好ましいものは、Ｒ3が炭素原子数２１の飽和アルキル基、Ｒ4が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）が挙げられる。
ＡＲ２３として特に好ましいものは、Ｒ3が炭素原子数２３の飽和アルキル基、Ｒ4が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）が挙げられる。
ＡＲ２５として特に好ましいものは上記で挙げた通りである。
Particularly preferred as AR15 is one in which R 3 is a saturated alkyl group having 15 carbon atoms and R 4 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-pentadecylbenzene (C15 : 0).
Particularly preferred as AR17 is one in which R 3 is a saturated alkyl group having 17 carbon atoms and R 4 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-heptadecylbenzene (C17 : 0).
Particularly preferred as AR19 is one in which R 3 is a saturated alkyl group having 19 carbon atoms and R 4 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-nonadecylbenzene (C19 : 0).
Particularly preferred as AR21 is one in which R 3 is a saturated alkyl group having 21 carbon atoms and R 4 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-henecosylbenzene ( C21: 0).
Particularly preferred as AR23 is one in which R 3 is a saturated alkyl group having 23 carbon atoms and R 4 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-tricosylbenzene (C23 : 0).
Particularly preferred as AR25 are as described above.
ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１及びＡＲ２３の好ましい含有量は、サーチュイン活性を効果的に向上させる観点から、それぞれ、下記範囲内にあることが好ましい。
ＡＲ１５の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは０．１〜１０．０質量％、更に好ましくは０．１〜５．０質量％、特に好ましくは０．５〜１．５質量％である。
ＡＲ１７の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは１．０〜２０．０質量％、更に好ましくは５．０〜１５．０質量％、特に好ましくは８．０〜１２．０質量％である。
ＡＲ１９の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは２５．０〜４０．０質量％、更に好ましくは２７．５〜３７．５質量％、特に好ましくは３０．０〜３５．０質量％である。
ＡＲ２１の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは４０．０〜５５．０質量％、更に好ましくは４２．５〜５２．５質量％、特に好ましくは４５．０〜５０．０質量％である。
ＡＲ２３の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは１．０〜１５．０質量％、更に好ましくは２．５〜１２．５質量％、特に好ましくは５．０〜１０．０質量％である。
The preferred contents of AR15, AR17, AR19, AR21 and AR23 are each preferably within the following ranges from the viewpoint of effectively improving sirtuin activity.
The content of AR15 is preferably 0.1 to 10.0% by mass, more preferably 0.1 to 5.0% by mass, and particularly preferably 0.5 to 1.5% by mass in the specific alkylresorcinol mixture. It is.
The content of AR17 is preferably 1.0 to 20.0% by mass, more preferably 5.0 to 15.0% by mass, and particularly preferably 8.0 to 12.0% by mass in the specific alkylresorcinol mixture. It is.
The content of AR19 is preferably 25.0 to 40.0% by mass, more preferably 27.5 to 37.5% by mass, and particularly preferably 30.0 to 35.0% by mass in the specific alkylresorcinol mixture. It is.
The content of AR21 is preferably 40.0 to 55.0% by mass, more preferably 42.5 to 52.5% by mass, and particularly preferably 45.0 to 50.0% by mass in the specific alkylresorcinol mixture. It is.
The content of AR23 is preferably 1.0 to 15.0% by mass, more preferably 2.5 to 12.5% by mass, and particularly preferably 5.0 to 10.0% by mass in the specific alkylresorcinol mixture. It is.
ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１及びＡＲ２３の各含有量と、ＡＲ２５の含有量を足し合わせると１００質量％以下となる。サーチュイン活性促進剤は、ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１及びＡＲ２３をそれぞれ上記のアルキルレゾルシノール混合物中の割合と同様の割合で含有していてもよい。 When each content of AR15, AR17, AR19, AR21, and AR23 is added to the content of AR25, the content becomes 100% by mass or less. The sirtuin activity promoter may contain AR15, AR17, AR19, AR21 and AR23, respectively, in a proportion similar to the proportion in the alkylresorcinol mixture.
上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、ＡＲ１５、ＡＲ１７、ＡＲ１９、ＡＲ２１、ＡＲ２３及びＡＲ２５以外の他のアルキルレゾルシノールの１種以上を含有していても良い。この他のアルキルレゾルシノールとしては、例えば、上記一般式（II）におけるＲ３が炭素原子数２７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノール（以下、ＡＲ２７ともいう）が挙げられる。ＡＲ２７として特に好ましいものは、Ｒ1が炭素原子数２７の飽和アルキル基、Ｒ2が水素原子であるものであり、具体的には、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタコシルベンゼン（Ｃ２７：０）が挙げられる。 The specific alkyl resorcinol mixture may contain one or more alkyl resorcinols other than AR15, AR17, AR19, AR21, AR23 and AR25. Examples of the other alkylresorcinol include alkylresorcinol (hereinafter, also referred to as AR27) in which R3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 27 carbon atoms. Particularly preferred as AR27 is one in which R 1 is a saturated alkyl group having 27 carbon atoms and R 2 is a hydrogen atom. Specifically, 1,3-dihydroxy-5-n-heptacosylbenzene ( C27: 0).
また、上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、アルキルレゾルシノール以外の他の成分を含んでいても良く、このアルキルレゾルシノール以外の他の成分の含有量は、上記特定アルキルレゾルシノール混合物中、好ましくは３０質量％以下である。 The specific alkyl resorcinol mixture may contain other components other than the alkyl resorcinol, and the content of other components other than the alkyl resorcinol is preferably 30% by mass or less in the specific alkyl resorcinol mixture. is there.
上記特定アルキルレゾルシノール混合物の好ましい一例として、次の組成を有するものが挙げられる。即ち、ＡＲ１５として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）を１．２質量％、ＡＲ１７として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）を１０．９質量％、ＡＲ１９として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）を３３．９質量％、ＡＲ２１として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）を４６．４質量％、ＡＲ２３として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）を７．５質量％、及びＡＲ２５として１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）を０．１質量％含有する特定アルキルレゾルシノール混合物である。 A preferable example of the specific alkyl resorcinol mixture is one having the following composition. That is, 1.2% by mass of 1,3-dihydroxy-5-n-pentadecylbenzene (C15: 0) as AR15 and 1,3-dihydroxy-5-n-heptadecylbenzene (C17: 0) as AR17 10.9% by mass, AR19 as 1,3-dihydroxy-5-n-nonadecylbenzene (C19: 0) 33.9% by mass, AR21 as 1,3-dihydroxy-5-n-heneicosylbenzene ( C21: 0) 46.4% by weight, AR23 as 1,3-dihydroxy-5-n-tricosylbenzene (C23: 0) as 7.5% by weight, and AR25 as 1,3-dihydroxy-5-n -A specific alkyl resorcinol mixture containing 0.1% by mass of pentacosylbenzene (C25: 0).
アルキルレゾルシノールは、天然の非イソテルぺノイド系フェノール性両親媒性化合物であるレゾルシノール脂質として、種々の植物に含まれていることが知られており、アルキルレゾルシノールの給源としては、イネ科植物以外にも、例えば、ウルシ科、イチョウ科、ヤマモガシ科、ヤブコウジ科、サクラソウ科、ニクズク科、アヤメ科、サトイモ科、キク科のヨモギ、マメ科等が知られている。これらの植物の中でも、本発明においては、一般式（I）で表されるアルキルレゾルシノール及び特定アルキルレゾルシノール混合物の給源として、イネ科植物を採用することが、効率良く目的のアルキルレゾルシノールを得られる点で好ましい。 Alkylresorcinol is known to be contained in various plants as a resorcinol lipid, which is a natural non-isoterpenoid phenolic amphiphilic compound. In addition, for example, Urushiaceae, Ginkgoaceae, Porcupineaceae, Yabukodiidae, Primulaceae, Stigmaceae, Iridaceae, Araceae, Artemisia, Asteraceae, Legume, and the like are known. Among these plants, in the present invention, as a source of the alkylresorcinol represented by the general formula (I) and the specific alkylresorcinol mixture, it is possible to efficiently obtain the target alkylresorcinol by adopting a gramineous plant. Is preferable.
一般式（I）で表されるアルキルレゾルシノール及び特定アルキルレゾルシノール混合物の給源として利用可能なイネ科植物としては、例えば、小麦、デュラム小麦、ライ麦、
ライ小麦、大麦、オーツ麦、はと麦、トウモロコシ、イネ、ヒエ、アワ、キビ等の穀類が挙げられ、これら１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの穀類の中でも、高い活性が得られる点から、特に小麦、デュラム小麦等のコムギ属の植物が好ましく、小麦が更に好ましい。イネ科植物種子としては、任意の形態のイネ科植物種子で良く、例えば、イネ科植物種子（好ましくは種子外皮；糟糠類）そのもの；当該イネ科植物種子を切断、粉砕若しくは粉末化したもの；当該イネ科植物種子を乾燥したもの；当該イネ科植物種子を乾燥後粉砕若しくは粉末化したもの等でも良い。イネ科植物種子外皮を含む好適な例としては、ふすま、末粉、籾殻、ぬか等が挙げられる他、外皮を伴った種子も挙げられる。
Examples of gramineous plants that can be used as a source of the alkylresorcinol represented by the general formula (I) and the specific alkylresorcinol mixture include wheat, durum wheat, rye,
Examples include rye wheat, barley, oats, corn, corn, rice, millet, millet, millet, and the like, and these can be used alone or in combination of two or more. Among these cereals, wheat plants such as wheat and durum wheat are particularly preferable, and wheat is more preferable because high activity is obtained. The gramineous plant seed may be any form of gramineous plant seed, for example, gramineous plant seed (preferably seed hull; moss) itself; a product obtained by cutting, crushing or pulverizing the gramineous plant seed; It may be a product obtained by drying the grass plant seed; a product obtained by drying or crushing or powdering the grass seed. Preferable examples including grass seed hulls include bran, powder, rice husk, bran and the like, and seeds with hulls.
イネ科植物種子から、一般式（I）で表されるアルキルレゾルシノール及び特定アルキルレゾルシノール混合物を効率よく得るために、アルコール抽出による方法が好ましい。アルコールによる抽出方法は特に制限されないが、例えば、上記各種形態のイネ科植物種子をアルコール中に浸漬、攪拌又は還流する方法の他、超臨界流体抽出法等が挙げられる。前者の方法の場合、抽出温度は２〜１００℃が好ましく、抽出時間は４時間以上であることで、一般式（I）で表されるアルキルレゾルシノールが所定量得られ、７２時間以下、特に１２〜２４時間が好ましい。アルコール使用量は、イネ科植物種子１００質量部に対し５０〜２０００質量部が好ましい。 In order to efficiently obtain the alkylresorcinol and the specific alkylresorcinol mixture represented by the general formula (I) from the grass seeds, a method by alcohol extraction is preferable. Although the extraction method in particular with alcohol is not restrict | limited, For example, the supercritical fluid extraction method etc. other than the method of immersing, stirring, or refluxing the grass seeds of the said various forms in alcohol are mentioned. In the case of the former method, the extraction temperature is preferably 2 to 100 ° C., and the extraction time is 4 hours or longer, whereby a predetermined amount of alkylresorcinol represented by the general formula (I) is obtained, and 72 hours or less, particularly 12 ~ 24 hours is preferred. As for the usage-amount of alcohol, 50-2000 mass parts is preferable with respect to 100 mass parts of gramineous plant seeds.
イネ科植物種子の抽出に用いられるアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコールが挙げられる。これらのアルコールの中でも、操作性や環境性の点から、エタノールが好ましい。尚、イネ科植物種子の抽出に用いられるアルコールとしては、アルコール以外の水性成分（水、純水、蒸留水、水道水、酸性水、アルカリ水、中性水等）が含まれている含水エタノールを用いることもできる。含水アルコール中のアルコール含有量は、通常７０体積％以上、好ましくは８０体積％以上、より好ましくは９０体積％以上である。 Examples of the alcohol used for the extraction of grass seeds include monovalent lower alcohols (preferably those having 1 to 4 carbon atoms) such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, and n-butanol, and 1 , 3-butylene glycol, propylene glycol, polyhydric alcohols such as glycerin, and the like, which are liquids at room temperature (25 ° C.). Among these alcohols, ethanol is preferable from the viewpoint of operability and environmental properties. In addition, as alcohol used for the extraction of gramineous plant seeds, water-containing ethanol containing aqueous components (water, pure water, distilled water, tap water, acidic water, alkaline water, neutral water, etc.) other than alcohol Can also be used. The alcohol content in the hydrous alcohol is usually 70% by volume or more, preferably 80% by volume or more, more preferably 90% by volume or more.
本発明において、イネ科植物種子のアルコール抽出物は、そのまままたは濃縮、乾燥してサーチュイン活性促進剤とすることができるが、公知の方法、例えば分配クロマトグラフィーで精製してもよい。イネ科植物種子のアルコール抽出物の精製に用いられる分配クロマトグラフィーは、一般式（I）でアルキルレゾルシノール及びそれを含む上記特定アルキルレゾルシノール混合物が得られる手法であればその種類は問わないが、移動相として非水系溶媒を用いる順相クロマトグラフィー法が好ましく、オープンカラム法、中圧カラム法、高速液体クロマトグラフィー等の公知の方法を適宜選択することができる。 In the present invention, the alcoholic extract of the grass plant seed can be used as it is or concentrated and dried to obtain a sirtuin activity promoter, but it may be purified by a known method such as partition chromatography. The partition chromatography used to purify the alcoholic extract of grass seeds is not limited as long as it is a technique that can obtain alkylresorcinol and the above-mentioned specific alkylresorcinol mixture containing the same by general formula (I). A normal phase chromatography method using a non-aqueous solvent as a phase is preferable, and a known method such as an open column method, a medium pressure column method, or a high performance liquid chromatography can be appropriately selected.
分配クロマトグラフィーにおける移動相としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の１価の低級アルコール（好ましくは炭素原子数１〜４のもの）、及び１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温（２５℃）で液体であるアルコール；ジエチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン；ヘキサン；塩化メチレン；アセトニトリル；並びにクロロホルム等が挙げられ、これら溶媒の１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。複数の溶媒を組み合わせて移動相とする場合、分配クロマトグラフィーの実施中（イネ科植物種子のアルコール抽出物の精製中）において、複数の溶媒の混合比を一定にするイソクラクティックモードでも良く、あるいは該混合比を変化させるグラジエントモードでも良い。 As a mobile phase in partition chromatography, monovalent lower alcohols (preferably having 1 to 4 carbon atoms) such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, and 1,3-butylene glycol, Alcohols that are liquid at room temperature (25 ° C.) such as polyhydric alcohols such as propylene glycol and glycerine; ethers such as diethyl ether and propyl ether; esters such as butyl acetate and ethyl acetate; ketones such as acetone and ethyl methyl ketone; hexane Methylene chloride; acetonitrile; and chloroform and the like. One of these solvents can be used alone, or two or more can be used in combination. When a plurality of solvents are combined into a mobile phase, an isocratic mode in which the mixing ratio of the plurality of solvents is constant during partition chromatography (purification of the alcoholic extract of the grass seed) may be used. Alternatively, a gradient mode in which the mixing ratio is changed may be used.
分配クロマトグラフィーにおける担体としては、目的とする有効成分を担持−放出できる担体であればいずれも用いることができるが、一般的にはシリカゲル、ポリアクリルアミドゲル、デキストランゲル等を挙げることができる。 Any carrier can be used as the carrier in the partition chromatography as long as it can carry and release the target active ingredient, and generally includes silica gel, polyacrylamide gel, dextran gel and the like.
イネ科植物種子のアルコール抽出物の分配クロマトグラフィーにおける検出波長は、１７０〜３２０ｎｍであれば良く、好ましくは１９０〜２８０ｎｍである。 The detection wavelength in the partition chromatography of the alcoholic extract of the grass plant seed may be 170 to 320 nm, preferably 190 to 280 nm.
イネ科植物種子（好ましくはコムギ属の植物）のアルコール抽出物（好ましくはエタノール抽出物）の精製に好適な分配クロマトグラフィーの例として、下記分配クロマトグラフィーＡ及びＢが挙げられる。
・分配クロマトグラフィーＡ：担体としてシリカゲル及び移動相としてヘキサン−酢酸エチル混合溶媒を用いた中圧カラム法（中圧クロマトグラフィー）を用い、且つその分配クロマトグラフィーの実施中に、移動相を「ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒においてヘキサンの含有割合が相対的に高いもの」から「ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒においてヘキサンの含有割合が相対的に低いもの」へと変化させ（即ち、「ヘキサン大−少」へのグラジエントモードで用い）、且つ検出波長２５４ｎｍでのピーク成分を分取する。
・分配クロマトグラフィーＢ：担体としてシリカゲル及び移動相としてメタノールを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用い、且つ検出波長２１５ｎｍでのピーク成分を分取する。
上記特定アルキルレゾルシノール混合物は、上述した分配クロマトグラフィーＡ及びＢーのピーク成分として得ることができる。
Examples of partition chromatography suitable for purification of an alcohol extract (preferably an ethanol extract) of a grass seed (preferably a plant of the genus Wheat) include the following partition chromatography A and B.
Partition chromatography A: using a medium pressure column method (medium pressure chromatography) using silica gel as a carrier and a hexane-ethyl acetate mixed solvent as a mobile phase, and during the execution of the partition chromatography, -Changed from "relatively high hexane content in ethyl acetate mixed solvent" to "relatively low hexane content in hexane-ethyl acetate mixed solvent" And a peak component at a detection wavelength of 254 nm is fractionated.
Partition chromatography B: Using high performance liquid chromatography (HPLC) using silica gel as a carrier and methanol as a mobile phase, a peak component at a detection wavelength of 215 nm is fractionated.
The said specific alkyl resorcinol mixture can be obtained as a peak component of the distribution chromatography A and B- mentioned above.
本発明のサーチュイン活性促進剤における、特定アルキルレゾルシノール混合物の含有量は、サーチュイン酵素活性作用が奏されれば特に限定はされないが当該作用をより確実に奏させるようにする観点から、本発明のサーチュイン活性促進剤中、５０質量％以上、好ましくは７０質量％以上、更に好ましくは７５質量％以上とするのが好適である。上記特定アルキルレゾルシノール混合物の含有量は１００質量％、即ち、本発明のサーチュイン活性促進剤は上記有効成分（特定アルキルレゾルシノール混合物）のみから構成されていても良い。 The content of the specific alkyl resorcinol mixture in the sirtuin activity promoter of the present invention is not particularly limited as long as the sirtuin enzyme activity is exerted, but from the viewpoint of more reliably exerting the sirtuin activity, In the activity accelerator, it is suitable to be 50% by mass or more, preferably 70% by mass or more, more preferably 75% by mass or more. Content of the said specific alkyl resorcinol mixture is 100 mass%, ie, the sirtuin activity promoter of this invention may be comprised only from the said active ingredient (specific alkyl resorcinol mixture).
本発明のサーチュイン活性促進剤は、上記一般式（I）で表されるアルキルレゾルシノール、特に上記特定アルキルレゾルシノール混合物、並びに必要に応じて薬学的又はサプリメント等の保健用食品において許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を含有するものである。本発明のサーチュイン活性促進剤は、常法により製剤化することができ、その場合、本発明のサーチュイン活性促進剤の剤型は、錠剤、散剤、液剤、シロップ剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口剤である。また、本発明のサーチュイン活性促進剤に含有可能な「その他の成分」としては、その他の薬効作用を有する成分や健康食品素材、各種ビタミン類、生薬、ミネラル類等が挙げられる。 The sirtuin activity promoter of the present invention is an alkylresorcinol represented by the above general formula (I), in particular, the above-mentioned specific alkylresorcinol mixture, and various carriers acceptable in health foods such as pharmaceuticals or supplements as necessary. , Excipients, other additives, and other ingredients. The sirtuin activity promoter of the present invention can be formulated by a conventional method. In that case, the dosage form of the sirtuin activity promoter of the present invention includes tablets, powders, liquids, syrups, granules, capsules and the like. It is an oral preparation. Examples of the “other components” that can be contained in the sirtuin activity promoter of the present invention include other components having medicinal effects, health food materials, various vitamins, herbal medicines, minerals, and the like.
本発明のサーチュイン活性促進剤中の特定アルキルレゾルシノール混合物の含有量は、サーチュイン活性促進剤の剤型、投与又は摂取する者の症状や年齢性別等によって適宜変化させることができ、人を対象とする場合、通常、本発明のサーチュイン活性促進剤の有効成分の投与量又は摂取量が１人（６０ｋｇ換算で）１日当たり０．５〜５０００ｍｇ、好ましくは１０〜４５００ｍｇ、より好ましくは４２〜４２００ｍｇとなるように含有させることが好適である。また、本発明のサーチュイン活性促進剤をイヌやネコ等の愛玩動物に投与又は摂取させる場合には、当該有効成分の１日の投与又は摂取量は、０．０１５〜１５０ｍｇ／体重１ｋｇ、好ましくは０．０５〜１５０ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは０．１３〜１３０ｍｇ／体重１ｋｇとなるように含有させることが好適である。 The content of the specific alkyl resorcinol mixture in the sirtuin activity promoter of the present invention can be appropriately changed depending on the dosage form of the sirtuin activity promoter, the symptoms or age sex of the person to be administered or ingested, etc. In general, the dose or intake of the active ingredient of the sirtuin activity promoter of the present invention is 0.5 to 5000 mg, preferably 10 to 4500 mg, more preferably 42 to 4200 mg per person (in terms of 60 kg) per day. It is suitable to contain. When the sirtuin activity promoter of the present invention is administered or ingested to a companion animal such as a dog or cat, the daily administration or intake of the active ingredient is 0.015 to 150 mg / kg body weight, preferably It is suitable to contain 0.05-150 mg / kg body weight, more preferably 0.13-130 mg / kg body weight.
本発明のサーチュイン活性促進剤は、前述のように医薬又は保健用食品として、人又は動物に直接投与若しくは摂取させても良いが、飲食品又はペットフード等の動物用飼料に添加・配合して摂取させても良い。この場合、サーチュイン活性促進剤を添加・配合する飲食品としては特に限定されないが、例えばパン類、ご飯類、麺類、タブレット、キャンディー等の菓子類、清涼飲料、ジュース、栄養ドリンク等の飲料等が挙げられる。また、ペットフードとしてはドライタイプ、セミドライ・セミモイストタイプ、モイストタイプの何れでも良いが、これらに限定されるものではなく、また、サーチュイン活性促進剤の飲食品又は動物用飼料への添加・配合方法も、特に制限されるものではなく、飲食品又は動物用飼料の製造前に原料・素材に直接配合しても良く、該製造工程中に添加しても良く、製造された飲食品又は動物用飼料に添加しても良い。また、本発明のサーチュイン活性促進剤を飲食品や動物用飼料に配合して摂取させる場合、本発明における特定アルキルレゾルシノール混合物に富む食品素材、例えば小麦ふすまや小麦等の全粒粉と組み合わせても良い。このとき飲食品や動物用飼料中の特定アルキルレゾルシノール混合物の量が前述の摂取量になるようにそれぞれの配合量を調整すれば良い。 The sirtuin activity promoter of the present invention may be directly administered or ingested to humans or animals as a pharmaceutical or health food as described above, but added to and blended with animal feed such as food and drink or pet food. May be ingested. In this case, the food and drink to which the sirtuin activity promoter is added / blended is not particularly limited, and examples thereof include confectionery such as breads, rice, noodles, tablets, and candy, beverages such as soft drinks, juices, and energy drinks. Can be mentioned. The pet food may be any of dry type, semi-dry semi-moist type, and moist type. However, the present invention is not limited to these, and addition / formulation of sirtuin activity promoters to food and drink or animal feed The method is not particularly limited, and may be added directly to the raw material / material before the production of the food / drink or animal feed, or may be added during the production process. It may be added to the feed. In addition, when the sirtuin activity promoter of the present invention is incorporated in food and drink or animal feed, it may be combined with a food material rich in the specific alkyl resorcinol mixture in the present invention, for example, whole wheat flour, wheat bran, wheat or the like. At this time, each blending amount may be adjusted so that the amount of the specific alkylresorcinol mixture in the food and drink or the animal feed becomes the above-mentioned intake.
本発明のサーチュイン活性促進剤は、後述する実施例に示すように、これを哺乳類が摂取することで、脳の視床下部、特に視床下部の核におけるサーチュインの脱アセチル酵素活性を高めることができる。本発明のサーチュイン活性促進剤の作用は、サーチュイン遺伝子の発現向上によるものであってもよく、サーチュイン酵素そのものの活性化によるものであってもよい。サーチュイン活性促進作用をより効果的なものとする点から、本発明のサーチュイン活性促進剤を好ましくは２０日間以上摂取し続けることが好ましく、４０日間以上摂取し続けることがより好ましい。 The sirtuin activity promoter of the present invention can enhance the deacetylase activity of sirtuin in the hypothalamus of the brain, particularly the nucleus of the hypothalamus, as it is ingested by mammals, as shown in the examples described later. The action of the sirtuin activity promoter of the present invention may be due to improved expression of the sirtuin gene or may be due to activation of the sirtuin enzyme itself. From the viewpoint of making the sirtuin activity promoting action more effective, the sirtuin activity promoting agent of the present invention is preferably continuously ingested for 20 days or more, and more preferably ingested for 40 days or more.
視床下部の核における、ＳＩＲＴ１等のサーチュインの発現上昇又は活性化は、マウス等の寿命を延ばし、老化を抑制することが知られている。従って、本発明のサーチュイン活性促進剤を摂取することにより、老化が抑制される、寿命を延ばすなどの効果が期待される。本明細書において老化としては、加齢とともに生じる動物個体の生理機能低下等が挙げられる。本発明のサーチュイン活性促進剤の対象者は、健常な個体であってもよく、或いは、加齢やストレスからくる各種疾患の患者であってもよい。サーチュイン活性促進剤は肥満症又は糖尿病の個体に対しても、サーチュイン活性を促進する。肥満症は、健康上の危険性を与える任意の程度の過剰の脂肪過多を意味する。 It is known that increased expression or activation of sirtuins such as SIRT1 in the nucleus of the hypothalamus prolongs the life of mice and suppresses aging. Therefore, by ingesting the sirtuin activity promoter of the present invention, effects such as suppression of aging and extension of life are expected. As used herein, aging includes, for example, a decrease in physiological function of an animal individual that occurs with aging. The subject of the sirtuin activity promoter of the present invention may be a healthy individual or a patient with various diseases resulting from aging or stress. Sirtuin activity promoters also promote sirtuin activity in obese or diabetic individuals. Obesity means any degree of excess adiposity that poses a health risk.
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。本発明は、以下の実施例により何ら制限されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. The present invention is not limited in any way by the following examples.
〔実施例１〕
下記＜抽出精製法＞により、小麦ふすま（イネ科植物種子）から特定アルキルレゾルシノール混合物を得、これを実施例１のサーチュイン活性促進剤とした。小麦ふすまから得られた特定アルキルレゾルシノール混合物（実施例のサーチュイン活性促進剤）の組成は次の通り。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）１．２質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）１０．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）３３．９質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）４６．４質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）７．５質量％。
・１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタコシルベンゼン（Ｃ２５：０）０．１質量％。
[Example 1]
A specific alkyl resorcinol mixture was obtained from wheat bran (Poaceae seed) by the following <Extraction and purification method>, and this was used as the sirtuin activity promoter of Example 1. The composition of the specific alkyl resorcinol mixture obtained from wheat bran (sirtuin activity promoter in Examples) is as follows.
-1,3-dihydroxy-5-n-pentadecylbenzene (C15: 0) 1.2 mass%.
-1,3-dihydroxy-5-n-heptadecylbenzene (C17: 0) 10.9 mass%.
-1,3-dihydroxy-5-n-nonadecylbenzene (C19: 0) 33.9 mass%.
-1,3-dihydroxy-5-n-henicosylbenzene (C21: 0) 46.4 mass%.
-7.5 mass% of 1, 3- dihydroxy-5-n-tricosyl benzene (C23: 0).
-1,3-dihydroxy-5-n-pentacosylbenzene (C25: 0) 0.1 mass%.
＜抽出精製法＞
小麦ふすまに質量で５倍量のエタノールを添加して、６００ｒｐｍ、室温の条件で、１６時間撹拌抽出した。抽出物を濾過して不要物を除きエタノール抽出液を回収した後、エタノールを留去し、小麦ふすま（イネ科植物種子）のエタノール抽出物を得た。次いで、このエタノール抽出物を中圧クロマトグラフィーによって精製した。中圧クロマトグラフィー条件は下記の通りである。溶出開始後３１〜３６分に出現するピーク成分を回収して、溶媒留去し、目的とする特定アルキルレゾルシノール混合物を得た。
（中圧クロマトグラフィーの条件）
・カラム：シリカゲル（インジェクトカラム３Ｌ、ハイフラッシュカラム５Ｌ、６０Å、４０μｍ、山善株式会社製）
・移動相：ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（体積比）＝９０／１０にて９分、８０／２０にて１５分、６０／４０にて１６分
・検出波長：２５４ｎｍ
<Extraction purification method>
Ethanol in an amount of 5 times by mass was added to wheat bran, and the mixture was extracted by stirring for 16 hours under conditions of 600 rpm and room temperature. The extract was filtered to remove unnecessary substances and an ethanol extract was collected, and then the ethanol was distilled off to obtain an ethanol extract of wheat bran (Poaceae seed). The ethanol extract was then purified by medium pressure chromatography. Medium pressure chromatography conditions are as follows. The peak component appearing 31 to 36 minutes after the start of elution was collected, and the solvent was distilled off to obtain the desired specific alkylresorcinol mixture.
(Medium pressure chromatography conditions)
Column: silica gel (injection column 3 L, high flash column 5 L, 60 mm, 40 μm, manufactured by Yamazen Corporation)
・ Mobile phase: Hexane / ethyl acetate mixed solvent (volume ratio) = 9/10 at 90/10, 15 minutes at 80/20, 16 minutes at 60/40 ・ Detection wavelength: 254 nm
尚、上記＜抽出精製法＞におけるエタノール抽出物の精製は、中圧クロマトグラフィーに代えて、ＨＰＬＣによって行うこともできる。その場合、エタノール抽出物にメタノールを添加して該エタノール抽出物の濃度が２００ｕｇ／ｍｌのメタノール添加液を調製し、該メタノール添加液を、孔径０．４５μｍのフィルターを通過させ、その通過分を、ＨＰＬＣの試料とする。ＨＰＬＣの条件は下記の通り。
（ＨＰＬＣの条件）
・カラム：シリカゲル（ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ、ジーエルサイエンス株式会社製）
・ガードカラム：ＯＤＳ−８０Ａ、５μｍ、４．６×５０ｍｍ
・カラム温度：３０℃
・移動相：メタノール１００％
・検出波長：２１５ｎｍ
The purification of the ethanol extract in <Extraction and purification method> can also be performed by HPLC instead of medium pressure chromatography. In that case, methanol is added to the ethanol extract to prepare a methanol addition solution having a concentration of 200 ug / ml, and the methanol addition solution is passed through a filter having a pore size of 0.45 μm. , HPLC sample. HPLC conditions are as follows.
(HPLC conditions)
Column: silica gel (ODS-80A, 5 μm, 4.6 × 250 mm, manufactured by GL Sciences Inc.)
Guard column: ODS-80A, 5 μm, 4.6 × 50 mm
-Column temperature: 30 ° C
-Mobile phase: 100% methanol
・ Detection wavelength: 215 nm
〔試験例〕
実施例のサーチュイン活性促進剤について、下記試験により、ob/obマウスの視床下部の核に存在するサーチュイン活性への影響を調べた。その結果を図１に示す。図１中、「実施例１」は、実施例１のサーチュイン活性促進剤を添加した飼料を摂取したマウス群における視床下部の核に存在するサーチュインの活性を示し、「比較例１」は、サーチュイン活性促進剤を非添加の飼料を摂餌したマウス群における視床下部の核に存在するサーチュインの活性を示す。実施例１のサーチュイン（ＳＩＲＴｓ）活性は、比較例１に対して、ｐ＜０．０５で有意差を有していた。下記試験では、視床下部の核に存在するＳＩＲＴ１等のサーチュイン（ＳＩＲＴｓ）をサンプル液として抽出し、このＳＩＲＴｓ含有サンプルにより基質を脱アセチル化させ、その生成物量を吸光度に基づき測定することでサーチュインの活性を測定した。視床下部の核には、一般にサーチュインとして、ＳＩＲＴ１、２、６，７が存在することが知られていることから、今般の測定により、これらの活性の合計を測定するものである。
[Test example]
About the sirtuin activity promoter of an Example, the influence on the sirtuin activity which exists in the nucleus of the hypothalamus of an ob / ob mouse | mouth was investigated by the following test. The result is shown in FIG. In FIG. 1, “Example 1” shows the activity of sirtuin present in the nucleus of the hypothalamus in a group of mice ingested with a feed supplemented with the sirtuin activity promoter of Example 1, and “Comparative Example 1” shows sirtuin. The activity of a sirtuin present in the nucleus of the hypothalamus in a group of mice fed with a diet not added with an activity promoter is shown. The sirtuin (SIRTs) activity of Example 1 was significantly different from that of Comparative Example 1 at p <0.05. In the following test, sirtuins such as SIRT1 (SIRTs) present in the nucleus of the hypothalamus are extracted as a sample solution, the substrate is deacetylated by the sample containing SIRTs, and the amount of the product is measured based on the absorbance. Activity was measured. Since it is known that SIRT1, 2, 6, 6 and 7 are generally present as sirtuins in the nucleus of the hypothalamus, the total of these activities is measured by this measurement.
＜ＳＩＲＴｓ活性測定試験＞
雄性ob/obマウス（日本エスエルシー社）5週齢を動物施設に搬入し、粉末飼料AIN-93M（オリエンタル酵母工業株式会社製）にて4日間馴化した。
その後、体重がそろうように比較例１群と実施例１群の２群、それぞれ６匹ずつに分けた。７週間、明期１２時間、暗期１２時間の明暗サイクルにて飼育した。比較例１群にはAIN-93Mを自由摂取させ、実施例１群には、AIN-93Mに上記のサーチュイン活性促進剤を0.4質量%添加したものを自由摂取させた。
マウスを５時間絶食後、視床下部を摘出し液体窒素にて凍結した。
EPIGENTEK社のEpiQuik Nuclear Extraction Kit I (#OP-0002)を用いて視床下部からプロトコール通りに核タンパク質を抽出した。具体的には以下の方法にて行った。
<SIRTs activity measurement test>
Male ob / ob mice (Japan SLC Co., Ltd.), 5 weeks old, were brought into the animal facility and acclimated for 4 days with powdered feed AIN-93M (Oriental Yeast Co., Ltd.).
Then, it divided | segmented into 2 groups of the comparative example 1 group and the Example 1 group, respectively 6 pieces so that body weight might match. The animals were reared in a light / dark cycle of 7 weeks, 12 hours light, 12 hours dark. The Comparative Example 1 group was allowed to freely ingest AIN-93M, and the Example 1 group was freely ingested with 0.4% by mass of the above sirtuin activity promoter added to AIN-93M.
After fasting the mice for 5 hours, the hypothalamus was removed and frozen in liquid nitrogen.
Nuclear protein was extracted from the hypothalamus according to the protocol using EpiQuik Nuclear Extraction Kit I (# OP-0002) from EPIGENTEK. Specifically, the following method was used.
（核タンパク質の抽出方法）
視床下部を細かく切り刻み、バイオマッシャーII（ニッピ社）に移した。組織１ｇあたり５．００５μＬ のNE1 buffer（０．１容量％DTT含有）を組織の入ったチューブに入れて50-60 strokesで組織を破砕した。氷上でチューブを１５分間静置した後に４℃、１２，０００ｒｐｍ、１０分間遠心させた後、上澄みを捨てた。沈殿物に対し、組織１ｍｇあたり、５μｌのNE2 buffer（DTT およびPICをそれぞれ０．１容量％含有）を添加した。
３分ごとに５秒間のボルテックスをしながら計１５分間氷上で静置させた。１０秒間のソニケーションを３回行った後、４℃、１４，０００ｒｐｍで１０分間の遠心を行った。上清を新しいチューブに移して、サンプル液とした。なお、得られたサンプル液の核タンパク質濃度をBio-Rad社のプロテインアッセイ染色液#500-0006を使用して測定した。
(Nucleoprotein extraction method)
The hypothalamus was finely chopped and transferred to Biomasher II (Nippi). 5.005 μL of NE1 buffer (containing 0.1 vol% DTT) per 1 g of tissue was placed in a tube containing the tissue, and the tissue was crushed with 50-60 strokes. The tube was allowed to stand on ice for 15 minutes and then centrifuged at 4 ° C., 12,000 rpm for 10 minutes, and then the supernatant was discarded. To the precipitate, 5 μl of NE2 buffer (containing 0.1% by volume each of DTT and PIC) was added per 1 mg of tissue.
The mixture was allowed to stand on ice for a total of 15 minutes while vortexing every 3 minutes for 5 seconds. After 10 seconds of sonication three times, centrifugation was performed at 4 ° C. and 14,000 rpm for 10 minutes. The supernatant was transferred to a new tube to obtain a sample solution. The nucleoprotein concentration of the obtained sample solution was measured using protein assay staining solution # 500-0006 of Bio-Rad.
サーチュイン活性は、EPIGENTEK社のEpigenase Universal SIRT Activity/Inhibition Assay Kit Colormetric (#P-4036)を用いてプロトコール通りに測定した。測定には、各サンプル10μgの核タンパク質を供した。測定方法は、具体的には以下の通りである。
（SIRT１活性の測定方法）
９６ウェルプレートにおいて、ブランク用のウェルに（SIRT Assay Buffer ４８μＬ、SIRT Substrate １μＬ、NAD １μＬ）を入れた。
No NAD Control ウェルに（SIRT Assay Buffer ４４μＬ、SIRT Substrate １μＬ、HDAC inhibitor １μＬ、サンプル液４μＬ）を入れた。
サンプル用のウェルに（SIRT Assay Buffer４３μＬ、SIRT Substrate １μＬ、HDAC inhibitor １μＬ、NAD１μＬ、サンプル液４μＬ）を入れた。
Adhesive covering filmでしっかりと密閉し、３７℃、９０分インキュベートした。
反応溶液を捨て、１５０μＬの Wash bufferにて３回洗浄した。
各ウェルに５０μＬ HO4 capture antibody solutionを加えアルミホイルで包み、室温にて６０分間反応させた。反応溶液を捨て、１５０μＬの Wash bufferにて３回washした後、５０μＬの HO5 detection antibody solutionを加え、アルミホイルで包み、室温にて３０分間反応させた。反応溶液を捨て、１５０μＬの Wash bufferにて３回washした。１００μＬのdeveloper solutionを加えた。遮光し、室温にて１０分間反応させた後、１００μＬのstop solutionを加えて反応を停止させ、１０分以内に４５０ｎｍと６５５ｎｍの吸光度を測定した。各ウェルについてＯＤ＝４５０ｎｍOD−６５５ｎｍODを測定した。サンプル用のウェルについて６連のODの平均値を測定した。サンプル用のウェルのODの平均値から、ブランクのODを引き、Sample ODとするとともに、No NAD Control ウェルのODからブランクのODを引き、NNC ODとした。サーチュイン活性は下記式にて求めた。
サーチュイン活性(OD/min/mg)= 1000×(Sample OD − NNC OD) / (Protein amount (μg)×90min)
Sirtuin activity was measured according to the protocol using Epigenase Universal SIRT Activity / Inhibition Assay Kit Colormetric (# P-4036) manufactured by EPIGENTEK. For the measurement, 10 μg of nucleoprotein was used for each sample. The measurement method is specifically as follows.
(Measurement method of SIRT1 activity)
In a 96-well plate, a blank well (SIRT Assay Buffer 48 μL, SIRT Substrate 1 μL, NAD 1 μL) was placed.
No NAD Control wells were placed (SIRT Assay Buffer 44 μL, SIRT Substrate 1 μL, HDAC inhibitor 1 μL, sample solution 4 μL).
(SIRT Assay Buffer 43 μL, SIRT Substrate 1 μL, HDAC inhibitor 1 μL, NAD 1 μL, sample solution 4 μL) were put into sample wells.
The film was tightly sealed with an adhesive covering film and incubated at 37 ° C. for 90 minutes.
The reaction solution was discarded and washed 3 times with 150 μL of Wash buffer.
50 μL HO4 capture antibody solution was added to each well, wrapped in aluminum foil, and allowed to react at room temperature for 60 minutes. After discarding the reaction solution and washing 3 times with 150 μL of Wash buffer, 50 μL of HO5 detection antibody solution was added, wrapped in aluminum foil, and allowed to react at room temperature for 30 minutes. The reaction solution was discarded and washed 3 times with 150 μL of Wash buffer. 100 μL developer solution was added. After light-shielding and reacting at room temperature for 10 minutes, 100 μL of stop solution was added to stop the reaction, and absorbance at 450 nm and 655 nm was measured within 10 minutes. OD = 450 nm OD−655 nm OD was measured for each well. An average of 6 ODs was measured for the sample wells. A blank OD was subtracted from the average value of the OD of the sample wells to obtain a Sample OD, and a blank OD was subtracted from the OD of the No NAD Control well to obtain an NNC OD. Sirtuin activity was determined by the following formula.
Sirtuin activity (OD / min / mg) = 1000 × (Sample OD − NNC OD) / (Protein amount (μg) × 90 min)
図１に示すように、実施例１のサーチュイン活性促進剤を摂取することで有意に脳の視床下部におけるサーチュインの活性を高めることができる。 As shown in FIG. 1, sirtuin activity in the hypothalamus of the brain can be significantly increased by ingesting the sirtuin activity promoter of Example 1.
Claims (9)
２）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数１７の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを１．０〜２０．０質量％、
３）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数１９の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを２５．０〜４０．０質量％、
４）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数２１の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを４０．０〜５５．０質量％、
５）上記一般式（II）におけるＲ3が炭素原子数２３の飽和又は不飽和のアルキル基であるアルキルレゾルシノールを１．０〜１５．０質量％、及び
６）上記一般式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノールを０．００１〜５．０質量％含有する請求項２に記載のサーチュイン活性促進剤。 1) 0.1 to 10.0% by mass of alkylresorcinol in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 15 carbon atoms,
2) 1.0 to 20.0% by mass of alkylresorcinol in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 17 carbon atoms,
3) 25.0-40.0% by mass of alkylresorcinol in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 19 carbon atoms,
4) 40.0-55.0% by mass of alkylresorcinol in which R 3 in the general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 21 carbon atoms,
5) 1.0 to 15.0% by mass of alkylresorcinol in which R 3 in the above general formula (II) is a saturated or unsaturated alkyl group having 23 carbon atoms, and 6) represented by the above general formula (I) The sirtuin activity promoter of Claim 2 which contains 0.001-5.0 mass% of alkylresorcinol.
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