JP2019165680A - Methods for stabilizing ascorbate oxidase - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、アスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法に関する。 The present invention relates to a method for stabilizing ascorbate oxidase.
生体成分を酵素的に測定する方法はこれまで種々開発されてきている。この中で、コレステロールオキシダーゼなどのオキシダーゼを用いる方法は、オキシダーゼの作用により生成した過酸化物をペルオキシダーゼの存在下、水素供与体の発色系に導き比色定量に供する。本測定系は生体成分中のアスコルビン酸の影響を受けやすいことから、過酸化水素測定前または測定時に生体成分中に存在するアスコルビン酸にアスコルビン酸オキシダーゼ（以下ＡＳＯと略す）を作用させ、デヒドロアスコルビン酸に変換せしめ影響を回避することが一般に行われている。しかし、溶液中のＡＳＯは非常に不安定であり、試薬保存中に失活し試薬の保存安定性を左右する要因となっている。 Various methods for enzymatically measuring biological components have been developed so far. Among them, the method using an oxidase such as cholesterol oxidase leads the peroxide generated by the action of the oxidase to the coloration system of the hydrogen donor in the presence of peroxidase for colorimetric determination. Since this measurement system is easily affected by ascorbic acid in the biological component, ascorbic acid oxidase (hereinafter abbreviated as ASO) is allowed to act on ascorbic acid present in the biological component before or at the time of measurement of hydrogen peroxide. It is common practice to avoid the effects of conversion to acid. However, ASO in the solution is very unstable and deactivates during storage of the reagent, which is a factor that affects the storage stability of the reagent.
これに対し、安定化剤としてカタラーゼ、ゼラチン、グロブリン、ペルオキシダーゼ、メトヘモグロビンまたはヘマチン等を用いることで効果があることが示されている。また、金属と陰性の酸基とからなる化合物およびカタラーゼ及び／またはペルオキシダーゼの添加でＡＳＯの保存安定性が向上することが開示されている（例えば、特許文献１参照。）。また、アスコルビン酸オキシダーゼを含む溶液に糖アルコールを添加する方法（例えば、特許文献２参照）、亜硝酸若しくはその塩又は亜硝酸エステルを水性媒体中で共存させる方法（例えば、特許文献３参照）、２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、５−クロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オンおよびこれらの塩より選ばれる物質を用いる方法（例えば、特許文献４参照）、ビリルビン酸（塩）を配合させる方法（例えば、特許文献５参照）が開示されている。しかしながら、これらの方法では液状試薬として耐えうる安定性には尚問題が残る。 On the other hand, it has been shown that the use of catalase, gelatin, globulin, peroxidase, methemoglobin, hematin or the like as a stabilizer is effective. Further, it has been disclosed that the storage stability of ASO is improved by the addition of a compound comprising a metal and a negative acid group and catalase and / or peroxidase (see, for example, Patent Document 1). In addition, a method of adding a sugar alcohol to a solution containing ascorbate oxidase (for example, see Patent Document 2), a method of allowing nitrous acid or a salt thereof or a nitrite ester to coexist in an aqueous medium (for example, see Patent Document 3), A method using a substance selected from 2-methyl-4-isothiazolin-3-one, 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one, 1,2-benzisothiazolin-3-one and salts thereof ( For example, Patent Document 4) and a method of blending bilirubic acid (salt) (for example, see Patent Document 5) are disclosed. However, these methods still have problems with the stability that can be tolerated as a liquid reagent.
本発明が解決しようとする課題は長期間安定な液状試薬として耐えうるようＡＳＯを安定化する方法を提供することにある。 The problem to be solved by the present invention is to provide a method for stabilizing ASO so that it can be endured as a liquid reagent that is stable for a long period of time.
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、ＡＳＯをある種の界面活性剤および緩衝液と共存させることにより、またＡＳＯをある種の緩衝液と共存させることにより、ＡＳＯを液状状態で安定に保つことを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下の構成からなる。 As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have made ASO coexist with certain surfactants and buffer solutions, and coexisting ASO with certain buffer solutions. The inventors have found that ASO can be stably maintained in a liquid state and have completed the present invention. That is, the present invention has the following configuration.
［項１］アスコルビン酸オキシダーゼを、オクチルフェノールエトキシレートおよびアミンを含む緩衝液と共存させることを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項２］前記アミンを含む緩衝液が、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、２−モルホリノエタンスルホン酸，一水和物（ＭＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸），二水和物（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）からなる群より選ばれる少なくとも１種である、項１に記載のアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項３］前記アミンを含む緩衝液が、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、およびピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）からなる群より選ばれる少なくとも１種である、項１または項２に記載のアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項４］アスコルビン酸オキシダーゼを、アミンを含む緩衝液と共存させることを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項５］前記アミンを含む緩衝液が、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、２−モルホリノエタンスルホン酸，一水和物（ＭＥＳ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸），二水和物（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）からなる群より選ばれる少なくとも１種である、項４に記載のアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項６］前記アミンを含む緩衝液が、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、およびピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）からなる群より選ばれる少なくとも１種である、項４または項５に記載のアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法。
［項７］アスコルビン酸オキシダーゼ、以下の（１）および以下の（２）を含む、アスコルビン酸オキシダーゼが安定化された組成物。
（１）オクチルフェノールエトキシレート
（２）アミンを含む緩衝液。
［項８］アスコルビン酸オキシダーゼ、以下の（２）を含む、アスコルビン酸オキシダーゼが安定化された組成物。
（２）アミンを含む緩衝液。
［項９］項７または項８に記載の組成物を含む、生体成分分析用キット。
[Item 1] A method for stabilizing ascorbate oxidase, wherein ascorbate oxidase is allowed to coexist with a buffer containing octylphenol ethoxylate and an amine.
[Item 2] The amine-containing buffer solution contains N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid (ACES), N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N, N-bis (2 -Hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine (Bicine), bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (Bis-Tris), N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (CAPS), 3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid (EPPS), 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1 -Piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES), 2-hydroxy-3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-pi Razinyl] propanesulfonic acid (HEPPSO), 2-morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate (MES), 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS), 2-hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPSO), piperazine- 1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), piperazine-1,4-bis (2-hydroxy-3-propanesulfonic acid), dihydrate (POPSO), N-tris (hydroxymethyl) Methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS), N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES), N- [tris (hydroxymethyl) methyl] glycine (Tricine) and tris (hydroxymethyl) ) Selected from the group consisting of aminomethane (Tris) Even without a one, method for stabilizing ascorbic acid oxidase according to claim 1.
[Item 3] The buffer containing the amine is N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), 2- [ 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES) and piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) are at least one selected from the group consisting of Item 3. The method for stabilizing ascorbate oxidase according to Item 1 or Item 2.
[Item 4] A method for stabilizing ascorbate oxidase, wherein ascorbate oxidase coexists with a buffer containing an amine.
[Item 5] The amine-containing buffer solution contains N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid (ACES), N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N, N-bis (2 -Hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine (Bicine), bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (Bis-Tris), N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (CAPS), 3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid (EPPS), 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1 -Piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES), 2-hydroxy-3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-pi Razinyl] propanesulfonic acid (HEPPSO), 2-morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate (MES), 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS), 2-hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPSO), piperazine- 1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), piperazine-1,4-bis (2-hydroxy-3-propanesulfonic acid), dihydrate (POPSO), N-tris (hydroxymethyl) Methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS), N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES), N- [tris (hydroxymethyl) methyl] glycine (Tricine) and tris (hydroxymethyl) ) Selected from the group consisting of aminomethane (Tris) Even without a one, method for stabilizing ascorbic acid oxidase according to claim 4.
[Item 6] The buffer containing the amine is N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), 2- [ 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES) and piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) are at least one selected from the group consisting of Item 6. The method for stabilizing ascorbate oxidase according to Item 4 or Item 5.
[Item 7] A composition in which ascorbate oxidase is stabilized, comprising ascorbate oxidase, the following (1) and the following (2).
(1) Octylphenol ethoxylate (2) Buffer containing amine.
[Item 8] A composition in which ascorbate oxidase is stabilized, comprising ascorbate oxidase and the following (2).
(2) A buffer containing amine.
[Item 9] A biological component analysis kit comprising the composition according to item 7 or item 8.
本発明により、安定なＡＳＯ含有液状製剤を提供でき、長期間または過酷な条件下での保管後の液状製剤においてもアスコルビン酸の影響を受けることなく、正確な測定値を得ることができる。 According to the present invention, a stable ASO-containing liquid preparation can be provided, and an accurate measurement value can be obtained without being affected by ascorbic acid even in a liquid preparation after storage under long-term or harsh conditions.
（界面活性剤と緩衝液との組合せによるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化）
本発明の実施態様は、アスコルビン酸オキシダーゼを、特定の界面活性剤（オクチルフェノールエトキシレート）及びアミンを含む緩衝液と共存させることを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法である。
(Stabilization of ascorbate oxidase by combination of surfactant and buffer)
An embodiment of the present invention is a method for stabilizing ascorbate oxidase, wherein ascorbate oxidase coexists with a buffer containing a specific surfactant (octylphenol ethoxylate) and an amine.
例えば、オクチルフェノールエトキシレートとして、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（「Ｔｒｉｔｏｎ」は登録商標。以下同様）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４、Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（「Ｎｏｎｉｄｅｔ」は登録商標。以下同様）、Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ−６３０（「Ｉｇｅｐａｌ」は登録商標。以下同様）が挙げられる。 For example, as octylphenol ethoxylates, Triton X-100 ("Triton" is a registered trademark, the same applies hereinafter), Triton X-114, Nonidet P-40 ("Nonidet" is a registered trademark, the same applies hereinafter), Igepal CA-630 (" “Igepal” is a registered trademark.
本発明の方法において、使用されるアミンを含む緩衝液は特に限定されないが、例えば、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸〔Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＡＣＥＳ）〕、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＡＤＡ）〕、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸〔Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＢＥＳ）〕、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン〔Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｇｌｙｃｉｎｅ（Ｂｉｃｉｎｅ）〕、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン〔Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｉｍｉｎｏｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈａｎｅ（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）〕、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸〔Ｎ−Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＣＡＰＳ）〕、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸〔３−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＥＰＰＳ）〕、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸〔２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＨＥＰＥＳ）〕、２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸〔２−Ｈｙｄｒｏｘｙ−３−［４−（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＨＥＰＰＳＯ）〕、２−モルホリノエタンスルホン酸，一水和物〔２−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ，ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ（ＭＥＳ）〕、３−モルホリノプロパンスルホン酸〔３−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＭＯＰＳ）〕、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸〔２−Ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＭＯＰＳＯ）〕、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）〔Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１，４−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）（ＰＩＰＥＳ）〕、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸），二水和物〔Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１，４−ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ），ｄｉｈｙｄｒａｔｅ（ＰＯＰＳＯ）〕、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸〔Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−３−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＴＡＰＳ）〕、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸〔Ｎ−Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＴＥＳ）〕、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン〔Ｎ−［Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ］ｇｌｙｃｉｎｅ（Ｔｒｉｃｉｎｅ）〕およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン〔Ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ（Ｔｒｉｓ）〕からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミンが挙げられる。 In the method of the present invention, the buffer containing an amine to be used is not particularly limited. For example, N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid [N- (2-Acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid ( ACES)], N- (2-acetamido) iminodiacetic acid [N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA)], N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid [N, N -Bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES)], N, N-bis (2-hydroxyethyl) glycine [N, N-Bis (2-hydroxyethyl) glycine (Bicine)], bis (2- (Droxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane [Bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane (Bis-Tris)], N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (N-Cyclohexyl-3-aminopropanesulfide) 3- [4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid [3- [4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid (EPPS)], 2- [4- (2 -Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid [2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazin l] etheresufonic acid (HEPES)], 2-hydroxy-3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid [2-Hydroxy-3- [4- (2-hydroxyethyl) -1- piperazinyl] propanesulphonic acid (HEPPSO)], 2-morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate [2-Morpholinoethanesulfonic acid, monohydrate (MES)], 3-morpholinopropanesulfonic acid (3-Morpholinopropolopropinosulfonic acid, Hydroxy-3-morpholinopropane sulfonic acid [2-Hydroxy-3-morpholinopropanes ulphonic acid (MOPSO)], piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) [Piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES)], piperazine-1,4-bis (2- Hydroxy-3-propanesulfonic acid), dihydrate [Piperazine-1, 4-bis (2-hydroxy-3-propanesulfonic acid), dihydrate (POPSO)], N-tris (hydroxymethyl) methyl-3-amino Propanesulfonic acid [N-Tris (hydroxymethyl) methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS)], N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfone [N-Tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfuric acid (TES)], N- [Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine [N- [Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine (Tricine)] and Tris (hydroxymethyl) And at least one amine selected from the group consisting of aminomethane [Tris (hydroxymethyl) aminomethane (Tris)].
本発明の方法において、前記アミンを含む緩衝液は、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＡＤＡ）〕、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸〔Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＢＥＳ）〕、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸〔２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＨＥＰＥＳ）〕およびピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）〔Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１，４−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）（ＰＩＰＥＳ）〕からなる群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましい。 In the method of the present invention, the amine-containing buffer is N- (2-acetamido) iminodiacetic acid [N- (2-Acetamido) iminodiacetic acid (ADA)], N, N-bis (2-hydroxyethyl)- 2-aminoethanesulfonic acid [N, N-Bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES)], 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid [2- [ 4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES)] and piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) [Piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfoni) acid) (which is preferably at least one selected from the group consisting of PIPES)].
本発明のＡＳＯの安定化方法において使用する前記アミンを含む緩衝液と前記界面活性剤の組合せは特に限定されない。 The combination of the buffer containing the amine and the surfactant used in the method for stabilizing ASO of the present invention is not particularly limited.
ＡＳＯを含む溶液中のアミンを含む緩衝液の濃度としては特に限定されるものではないが、範囲の上限は、好ましくは２００ｍＭさらに好ましくは１００ｍＭ、範囲の下限は２０ｍＭさらに好ましくは５ｍＭで、使用されるのが望ましい。 The concentration of the buffer containing amine in the solution containing ASO is not particularly limited, but the upper limit of the range is preferably 200 mM, more preferably 100 mM, and the lower limit of the range is 20 mM, more preferably 5 mM. Is desirable.
また、アミンを含む緩衝液のｐＨ調整範囲は特に限定されないが、一般に生体試料の測定に必要な酵素等がいずれも中性付近で安定な性質を示しており、本発明においても中性付近の緩衝液を用いることが好ましい。範囲の上限は、好ましくは９．５さらに好ましくは７．５、範囲の下限は、好ましくは４．５さらに好ましくは６．０で、調整されるのが望ましい。 Further, the pH adjustment range of the buffer solution containing amine is not particularly limited, but in general, any enzyme or the like necessary for the measurement of a biological sample shows a stable property near neutrality, and in the present invention, the pH is near neutral. It is preferable to use a buffer solution. The upper limit of the range is preferably 9.5, more preferably 7.5, and the lower limit of the range is preferably 4.5, more preferably 6.0, and is desirably adjusted.
本発明で用いられるＡＳＯとは、ＥＣ１．１０．３．３に分類される以下の反応を触媒する酵素である。
Ｌ−アスコルビン酸＋１／２Ｏ２→デヒドロアスコルビン酸＋Ｈ２Ｏ
上記酵素の由来は特に限定されないが、例えばキュウリ、カボチャ等の植物などから採取されるものなどを含有する。
また、本発明に用いられるＡＳＯには特開平６−２０９７７０に記載の以下の反応を触媒する酵素も含む。
Ｌ−アスコルビン酸＋１／２Ｏ２→デヒドロアスコルビン酸＋Ｈ２Ｏ２
上記酵素の由来は特に限定されないが、例えば微生物などから採取されるものなどを含有する。前記微生物としては特に限定されないが、例えばトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属またはユペニシリウム属（Ｅｕｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）が挙げられる。
ＡＳＯを含む溶液中のＡＳＯの濃度は、特に限定されないが、酵素の起源によっても異なり、通常０．１〜５０Ｕ／ｍＬの範囲で好適に用いられる。
ASO used in the present invention is an enzyme that catalyzes the following reactions classified as EC 1.10.3.3.
L-ascorbic acid + 1 / 2O 2 → dehydroascorbic acid + H 2 O
Although the origin of the said enzyme is not specifically limited, For example, what is extract | collected from plants, such as a cucumber and a pumpkin, is contained.
The ASO used in the present invention also includes an enzyme that catalyzes the following reaction described in JP-A-6-209770.
L-ascorbic acid + 1 / 2O 2 → dehydroascorbic acid + H 2 O 2
Although the origin of the said enzyme is not specifically limited, For example, what is extract | collected from microorganisms etc. is contained. Although it does not specifically limit as said microorganisms, For example, the Trichoderma (Trichoderma) genus, Mortierella (Mortierella) genus (Epenicillium) (Eupenicillium) is mentioned.
The concentration of ASO in the solution containing ASO is not particularly limited, but varies depending on the origin of the enzyme, and is usually suitably used in the range of 0.1 to 50 U / mL.
本発明のＡＳＯの安定化方法においては、さらに防腐剤などを共存させてもよい。防腐剤は特に限定されないが、例えば、アジ化物、キレート剤、抗生物質、抗菌剤などが挙げられる。 In the ASO stabilization method of the present invention, a preservative or the like may be further present. The preservative is not particularly limited, and examples thereof include azides, chelating agents, antibiotics, and antibacterial agents.
また、本発明のＡＳＯの安定化方法は、種々の生化学診断方法に適用できる。該生化学診断方法としては、例えば尿酸、遊離脂肪酸、グルコース、中性脂肪、コレステロール、リン脂質等を測定する方法が挙げられる。
具体的には、本発明のＡＳＯの安定化方法には、前記診断方法に必要な他の構成成分を共存させてもよい。例えば中性脂肪測定試薬を構成する成分には、一般にＡＳＯのほか、リパーゼ、グリセロールキナーゼ、ＡＴＰ、マグネシウム、ペルオキシダーゼ、色原体などが挙げられ、これらのすべてを共存させてもよいし、これらの中から適宜必要なものを選んで共存させてもよい。
Further, the ASO stabilization method of the present invention can be applied to various biochemical diagnostic methods. Examples of the biochemical diagnostic method include a method of measuring uric acid, free fatty acid, glucose, neutral fat, cholesterol, phospholipid and the like.
Specifically, in the ASO stabilization method of the present invention, other components necessary for the diagnostic method may coexist. For example, the components constituting the neutral fat measurement reagent generally include ASO, lipase, glycerol kinase, ATP, magnesium, peroxidase, chromogen, etc., all of which may coexist, You may choose the necessary ones from among them to coexist.
（アミンを含む緩衝液によるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化）
本発明の別の実施態様は、アスコルビン酸オキシダーゼを、アミンを含む緩衝液と共存させることを特徴とするアスコルビン酸オキシダーゼの安定化方法である。
(Stabilization of ascorbate oxidase with a buffer containing amine)
Another embodiment of the present invention is a method for stabilizing ascorbate oxidase, characterized in that ascorbate oxidase coexists with a buffer containing an amine.
本実施態様に用いるアミンを含む緩衝液の種類や濃度、ｐＨ調整範囲等は、前記の界面活性剤と緩衝液との組合せによるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化の項において説明したものと同じであり得る。 The type, concentration, pH adjustment range, and the like of the buffer solution containing amine used in the present embodiment can be the same as those described in the section on stabilization of ascorbate oxidase by the combination of the surfactant and the buffer solution. .
より効果的にアスコルビン酸オキシダーゼを安定化できるという観点から、好ましくは、本実施態様に用いるアミンを含む緩衝液は、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸〔Ｎ−（２−Ａｃｅｔａｍｉｄｏ）ｉｍｉｎｏｄｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＡＤＡ）〕、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸〔Ｎ，Ｎ−Ｂｉｓ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＢＥＳ）〕、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸〔２−［４−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ（ＨＥＰＥＳ）〕またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）〔Ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ−１，４−ｂｉｓ（２−ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）（ＰＩＰＥＳ）〕であり、より好ましくは、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）であり、中でも好ましくは、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）である。 From the viewpoint that ascorbate oxidase can be more effectively stabilized, a buffer containing an amine used in this embodiment is preferably N- (2-acetamido) iminodiacetic acid [N- (2-Acetamido) iminodiacetic acid ( ADA)], N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid [N, N-Bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES)], 2- [4- (2 -Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid [2- [4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES)] or piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) [Piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES)], more preferably 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES) or piperazine- 1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), and piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) is particularly preferable.
（アスコルビン酸オキシダーゼが安定化された組成物）
本発明の別の実施態様は、アスコルビン酸オキシダーゼ、および、以下の（１）よび以下の（２）を含む、アスコルビン酸オキシダーゼが安定化された組成物である。
（１）オクチルフェノールエトキシレート、
（２）アミンを含む緩衝液。
(Composition stabilized with ascorbate oxidase)
Another embodiment of the present invention is an ascorbate oxidase-stabilized composition comprising ascorbate oxidase and the following (1) and (2) below.
(1) octylphenol ethoxylate,
(2) A buffer containing amine.
前記界面活性剤（オクチルフェノールエトキシレート）およびアミンを含む緩衝液の詳細については、前記の界面活性剤と緩衝液との組合せによるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化の項で説明したとおりである。 The details of the buffer containing the surfactant (octylphenol ethoxylate) and the amine are as described in the section on stabilization of ascorbate oxidase by the combination of the surfactant and the buffer.
本発明の更に別の実施態様は、アスコルビン酸オキシダーゼ、および、以下の（２）を含む、アスコルビン酸オキシダーゼが安定化された組成物である。
（２）アミンを含む緩衝液。
Yet another embodiment of the present invention is an ascorbate oxidase-stabilized composition comprising ascorbate oxidase and the following (2).
(2) A buffer containing amine.
前記アミンを含む緩衝液の詳細については、前記のアミンを含む緩衝液によるアスコルビン酸オキシダーゼの安定化の項で説明したとおりである。
具体的に、本実施態様に用いるアミンを含む緩衝液としては、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）が好ましく、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）がより好ましく、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）が、なかでも好ましい。
The details of the buffer containing the amine are as described in the section on stabilization of ascorbate oxidase with the buffer containing the amine.
Specifically, the amine-containing buffer used in this embodiment includes N- (2-acetamido) iminodiacetic acid (ADA), N, N-bis (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES). ), 2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES) or piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) is preferred, and 2- [4- (2-Hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES) or piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES) is more preferred, piperazine-1,4-bis (2-ethane) Of these, sulfonic acid (PIPES) is particularly preferable.
本発明は、前記のいずれかに記載の組成物を含む、生体成分分析用キットであってもよい。
種々の生体成分測定方法が既に当該技術分野において確立されている。よって、公知の方法に従い、本発明のＡＳＯ安定化方法やＡＳＯ含有組成物を生体成分分析用キットに適用して、各種試料中の生体成分の量又は濃度を測定することができる。その組成は特に限定されない。
本発明の組成物またはキットは、汎用自動分析機への適用などを考慮して２つ以上に分包される態様をとる場合もあるが、その場合ＡＳＯは少なくともいずれかに含まれていればよく、その場合、ＡＳＯを含むほうの組成物にアミンを含む緩衝液を共存させればよい。また、本発明の組成物（キットに含まれる形態を含む）は、水溶液であっても凍結乾燥したものであってもよい。本発明によれば、ＡＳＯが経時的に失活し易い液状製剤においても長期的な保存安定性を示すことができる。かかる観点を考慮すれば、本発明は液状製剤（例えば、水溶液等の液状の組成物）において、より有効に用いられ得る。
The present invention may also be a biological component analysis kit including any of the compositions described above.
Various biological component measurement methods have already been established in the art. Therefore, according to a known method, the ASO stabilization method or ASO-containing composition of the present invention can be applied to a biological component analysis kit to measure the amount or concentration of biological components in various samples. Its composition is not particularly limited.
The composition or kit of the present invention may take a form of being packaged in two or more in consideration of application to a general-purpose automatic analyzer, in which case ASO is included in at least one of them. In that case, a buffer containing an amine may be allowed to coexist in the composition containing ASO. The composition of the present invention (including the form included in the kit) may be an aqueous solution or lyophilized. According to the present invention, long-term storage stability can be exhibited even in a liquid preparation in which ASO tends to be deactivated over time. In view of this viewpoint, the present invention can be used more effectively in a liquid preparation (for example, a liquid composition such as an aqueous solution).
（アスコルビン酸オキシダーゼの活性測定法）
ＡＳＯの活性測定は、以下の測定条件で行う。
＜反応液＞
１００ｍＭ リン酸緩衝液 ｐＨ５．６
０．５ｍＭ Ｌ−アスコルビン酸
＜測定条件＞
（１）上記反応液を１ｍＭキュベットにとり、３０℃で約５分間予備加温する。
（２）酵素溶液０．１ｍＬを添加し反応を開始する。正確に５分間反応させた後に、０．２Ｎ塩酸溶液３．０ｍＬを加えて反応を停止させる。この液を分光光度計で２４５ｎｍの吸光度を測定する。
（３）盲検は反応液を３０℃で５分放置後、０．２Ｎ塩酸溶液３．０ｍＬを加えて混和し、次いで酵素溶液０．１ｍＬを加えて調製する。この液を同様に急高度を測定する。
(Ascorbate oxidase activity measurement method)
ASO activity is measured under the following measurement conditions.
<Reaction solution>
100 mM phosphate buffer, pH 5.6
0.5 mM L-ascorbic acid <measurement conditions>
(1) Take the reaction solution in a 1 mM cuvette and preheat at 30 ° C. for about 5 minutes.
(2) Add 0.1 mL of enzyme solution to start the reaction. After reacting for exactly 5 minutes, the reaction is stopped by adding 3.0 mL of 0.2N hydrochloric acid solution. The absorbance of this liquid is measured with a spectrophotometer at 245 nm.
(3) The blind is prepared by leaving the reaction solution at 30 ° C. for 5 minutes, adding 3.0 mL of 0.2N hydrochloric acid solution and mixing, and then adding 0.1 mL of enzyme solution. The steep altitude of this liquid is measured in the same manner.
本発明において「アスコルビン酸オキシダーゼが安定である」とは、アスコルビン酸オキシダーゼの経時的な失活が抑制され、長期的な保存安定性が改善されていることをいう。具体的には、界面活性剤もアミンを含む緩衝液も含まない蒸留水（但し、塩化マグネシウムを１ｇ／Ｌを含んでいてもよい）で保存した場合に比べて、３５℃で７日間保存後のＡＳＯの残存酵素活性が高められていることをいう。 In the present invention, “ascorbate oxidase is stable” means that the inactivation of ascorbate oxidase over time is suppressed and long-term storage stability is improved. Specifically, after storage for 7 days at 35 ° C., compared to storage in distilled water containing neither surfactant nor amine-containing buffer (however, magnesium chloride may contain 1 g / L). This means that the residual enzyme activity of ASO is enhanced.
以下、本発明を実施例により具体的に説明する。なお、本発明は実施例により特に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples. In addition, this invention is not specifically limited by an Example.
実施例１：アスコルビン酸オキシダーゼの安定化
ＡＳＯ（東洋紡製ＡＳＯ−３１１）３Ｕ／ｍＬを塩化マグネシウム（１ｇ／Ｌ）を含む蒸留水、ＡＤＡ（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）、ＰＩＰＥＳ（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）、ＢＥＳ（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）、またはＨＥＰＥＳ（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解し、この水溶液にＴｒｉｔｏｎ Ｘ―１００を１ｇ／Ｌ加え、蒸留水にＴｒｉｔｏｎ Ｘ―１００を加えない場合を対照として、３７℃で７日間保存し、残存活性（溶解直後の活性値＝[スタート活性]に対する保存後の活性値の割合）を検討した。
Example 1 Stabilization of Ascorbate Oxidase ASO (Toyobo ASO-311) 3 U / mL of distilled water containing magnesium chloride (1 g / L), ADA (100 mM, pH 7.0), PIPES (100 mM, pH 7.0) ), BES (100 mM, pH 7.0), or HEPES (100 mM, pH 7.0), 1 g / L of Triton X-100 is added to this aqueous solution, and Triton X-100 is not added to distilled water. Were stored at 37 ° C. for 7 days, and the remaining activity (activity value immediately after dissolution = ratio of activity value after storage to [start activity]) was examined.
結果を表１に示す。
界面活性剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）およびアミンを含む緩衝液（ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＢＥＳ、またはＨＥＰＥＳ）の組み合せ効果を調べた。Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００単独での使用では、安定化効果−４％と安定化効果が見られないにも関わらず、アミンを含む緩衝液（ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＢＥＳ、またはＨＥＰＥＳ）と組み合わせて使用することにより、緩衝液単独の場合よりもアスコルビン酸オキシダーゼの安定性が向上することを見出した。また、本試験において、緩衝液単独でのアスコルビン酸オキシダーゼの安定化についてもデータを取得したところ、ＡＳＯをＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＢＥＳまたはＨＥＰＥＳに溶解することで、蒸留水に対し良好な安定性が得られることが確認された。この緩衝液単独でのアスコルビン酸オキシダーゼ安定化効果は、特に、緩衝液としてＰＩＰＥＳまたはＨＥＰＥＳを用いた場合に高いことが明らかとなった。
The results are shown in Table 1.
The combination effect of a surfactant (Triton X-100) and a buffer containing an amine (ADA, PIPES, BES, or HEPES) was examined. Triton X-100 alone should be used in combination with an amine-containing buffer (ADA, PIPES, BES, or HEPES) even though it does not show a stabilizing effect of -4%. Thus, it was found that the stability of ascorbate oxidase is improved as compared with the case of the buffer alone. In this test, we also acquired data on the stabilization of ascorbate oxidase with buffer alone. By dissolving ASO in ADA, PIPES, BES, or HEPES, good stability was obtained for distilled water. It was confirmed that It has been clarified that the ascorbate oxidase stabilizing effect of this buffer alone is particularly high when PIPES or HEPES is used as the buffer.
本発明により、ＡＳＯを含有する、より長期間安定な液状試薬を供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a liquid reagent that contains ASO and is stable for a longer period of time.
Claims (9)
（１）オクチルフェノールエトキシレート
（２）アミンを含む緩衝液。 A composition comprising ascorbate oxidase stabilized ascorbate oxidase, comprising the following (1) and the following (2).
(1) Octylphenol ethoxylate (2) Buffer containing amine.
（２）アミンを含む緩衝液。 A composition in which ascorbate oxidase is stabilized, comprising ascorbate oxidase and the following (2).
(2) A buffer containing amine.
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