JP4640400B2 - Component measurement reagent using catalase stabilizer - Google Patents

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Description

本発明は、カタラーゼ安定化剤を用いた成分測定用試薬、成分測定方法及びキットに関する。   The present invention relates to a component measuring reagent, a component measuring method and a kit using a catalase stabilizer.

カタラーゼは、主に過酸化水素を水と酸素へ分解する作用をもつ自然界に広く分布する酵素の一つであり、臨床診断薬をはじめ、医学、食品、その他工業分野に於いて広く使用されている。   Catalase is one of the naturally distributed enzymes that mainly decompose hydrogen peroxide into water and oxygen, and is widely used in clinical diagnostics, medicine, food, and other industrial fields. Yes.

臨床検査の分野では、カタラーゼは、特定成分の測定に於いて、特定成分以外から産生する不要な過酸化水素を消去する目的で使用されることが多く、例えば中性脂肪測定用試薬中では内因性遊離グリセリンの消去系に、クレアチニン測定用試薬中ではクレアチンの消去系に、更に、HDL-コレステロール又はLDL-コレステロール測定用試薬中では目的成分以外のリポ蛋白中のコレステロールの消去系に使用されている。   In the field of clinical laboratory tests, catalase is often used for the purpose of eliminating unnecessary hydrogen peroxide produced from non-specific components in the measurement of specific components. It is used for the elimination system of free glycerin, in the creatine elimination reagent, in the creatine elimination system, and in the HDL-cholesterol or LDL-cholesterol measurement reagent, in the elimination system of cholesterol in lipoproteins other than the target component. Yes.

しかし、臨床検査用試液中でのカタラーゼの使用量は通常低濃度であり、このような希薄溶液中でのカタラーゼの安定性が良くないことは一般に知られている。   However, it is generally known that the amount of catalase used in clinical test solutions is usually low, and the stability of catalase in such dilute solutions is not good.

一方、近年の臨床診断薬の動向として、従来の凍結乾燥状態で供給される臨床検査用試薬は、試薬調製の煩雑さ、作業効率の低下等の問題点を有し、緊急検査時に迅速な対応が難しい等の理由により、試薬の調製が不要な液状試薬が、臨床診断薬の主流になってきている。   On the other hand, as a trend of clinical diagnostics in recent years, conventional reagents for clinical testing supplied in a lyophilized state have problems such as complicated reagent preparation and reduced work efficiency, and can respond promptly during emergency testing. However, liquid reagents that do not require reagent preparation have become the mainstream of clinical diagnostics because of the difficulty of the drug.

この様な現状に於いて、試液中に添加される酵素の安定性は、長期にわたって測定の正確さ、精密さを確保する上で特に重要視されてきており、臨床検査用試薬で多用されているカタラーゼについても同様に、試液中での長期安定化が要望されている。   Under such circumstances, the stability of the enzyme added to the test solution has been regarded as particularly important for ensuring the accuracy and precision of measurement over a long period of time, and is frequently used in clinical laboratory reagents. Similarly, long-term stabilization of the catalase in the test solution is also demanded.

カタラーゼの試液中の安定化法としては、カタラーゼ溶液にグリセリン、クエン酸ソーダ、エタノール及び食塩を共存させる方法(特許文献1)等が報告されている。しかしながら、この方法は、カタラーゼそのものを安定化するのに好適な方法かもしれないが、臨床検査薬中のカタラーゼを安定化する方法としては、必ずしも好ましいものではなかった。即ち、この方法で使用されるグリセリンは、中性脂肪測定試薬に於いては直接の反応基質となってしまい、またエタノールは、当該試薬保存中に揮発して含量が減少してしまうため、この方法に於ける長期間に及ぶカタラーゼの安定化効果は期待できない等の問題を有しているからである。   As a method for stabilizing a catalase in a test solution, a method of coexisting glycerol, sodium citrate, ethanol and sodium chloride in a catalase solution (Patent Document 1) has been reported. However, this method may be a suitable method for stabilizing catalase itself, but it is not always preferable as a method for stabilizing catalase in a clinical test drug. That is, glycerin used in this method becomes a direct reaction substrate in the neutral fat measurement reagent, and ethanol volatilizes during storage of the reagent and its content decreases. This is because there is a problem that the stabilization effect of catalase over a long period of time in the method cannot be expected.

従って、臨床検査用測定試薬等にも使用可能であり、且つ長期保存安定性に優れたカタラーゼの安定化方法の開発が要望されている現状にある。   Accordingly, there is a demand for the development of a method for stabilizing catalase that can be used for measurement reagents for clinical tests and the like and has excellent long-term storage stability.

特開昭53-24093公報JP-A-53-24093

本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、新規なカタラーゼ安定化剤、これを含んで成る成分測定用試薬、及びこれを用いたカタラーゼ安定化方法を提供することを課題とする。   This invention is made | formed in view of the above situations, and makes it a subject to provide the novel catalase stabilizer, the reagent for a component measurement containing this, and the catalase stabilization method using the same.

本発明は、上記課題を解決する目的でなされたものであり、
(1)一般式[1]
The present invention has been made for the purpose of solving the above problems,
(1) General formula [1]

Figure 0004640400
Figure 0004640400

Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)とカタラーゼとを含んでなる過酸化水素消去用組成物、
(2)過酸化水素に、一般式[1]で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下、カタラーゼを作用させることを特徴とする、過酸化水素を消去する方法、
(3)一般式[1]で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)とカタラーゼとを含んでなる生体試料中の成分測定用試薬、
(4)一般式[1]で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下にカタラーゼを用いることを特徴とする、生体試料中の成分測定方法、
(5)一般式[1]で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下、生体試料中に、当該試料中の測定妨害成分から過酸化水素を発生せしめることにより消去し得る成分とカタラーゼとを接触させ、次いで測定対象成分を測定することを特徴とする、生体試料中の成分測定方法、及び
(6)一般式[1]で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)、カタラーゼ及び生体試料中に共存する測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分とを含んでなる第1試液と、カタラーゼ阻害剤を含んでなる第2試液とからなる、生体試料成分測定用キット、に関する発明である。
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 A hydrogen peroxide scavenging composition comprising a compound represented by the formula (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) and catalase,
(2) Catalase is allowed to act on hydrogen peroxide in the presence of a compound represented by the general formula [1] (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline). How to remove hydrogen peroxide,
(3) A reagent for measuring a component in a biological sample comprising a compound represented by the general formula [1] (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) and catalase,
(4) In a biological sample, wherein catalase is used in the presence of a compound represented by the general formula [1] (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) Component measurement method,
(5) In the presence of the compound represented by the general formula [1] (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) , the measurement interfering component in the sample A method for measuring a component in a biological sample, characterized in that a component that can be eliminated by generating hydrogen peroxide is brought into contact with catalase, and then a component to be measured is measured; and
(6) A compound represented by the general formula [1] (excluding N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) , catalase and a measurement interfering component coexisting in a biological sample, and hydrogen peroxide. This is an invention relating to a biological sample component measurement kit comprising a first test solution containing a component having an action of eliminating by generating a second test solution containing a catalase inhibitor.

本発明は、容易に且つ簡便にカタラーゼを安定化させる新規なカタラーゼ安定化剤を含んで成る成分測定用試薬、成分測定方法及び測定用キットを提供するものであり、本発明を利用することにより、溶液中でカタラーゼを長期間保存することが可能である。
また、本発明は、従来の安定化方法では使用できる成分測定試薬の種類が限られていたのに対して、あらゆる成分測定試薬に使用可能である。
The present invention provides a reagent for component measurement, a component measurement method and a measurement kit comprising a novel catalase stabilizer that easily and easily stabilizes catalase. By using the present invention, the present invention provides It is possible to store catalase in solution for a long time.
Further, the present invention can be used for any component measurement reagent, whereas the types of component measurement reagents that can be used in the conventional stabilization method are limited.

即ち、本発明者等は、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、カタラーゼ含有試薬中に、一般式[1]で示される化合物を共存させることにより、カタラーゼの安定性が飛躍的に向上することを見出し、本発明を完成するに至った。   That is, as a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have dramatically improved the stability of catalase by allowing the compound represented by the general formula [1] to coexist in the catalase-containing reagent. As a result, the present invention has been completed.

一般式[1]に於いて、R及びRで示される低級アルキル基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数1〜6、好ましくは1〜3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチル基,エチル基,n-プロピル基,n-ブチル基,n-ペンチル基,n-ヘキシル基等の直鎖状低級アルキル基、例えばイソプロピル基,イソブチル基,sec-ブチル基,tert-ブチル基,イソペンチル基,sec-ペンチル基,tert-ペンチル基,ネオペンチル基,イソヘキシル基,3-メチルペンチル基,2-メチルペンチル基,1,2-ジメチルブチル基等の分枝状低級アルキル基、例えばシクロプロピル基,シクロブチル基,シクロペンチル基,シクロヘキシル基等の環状低級アルキル基等が挙げられ、中でも直鎖状のものが好ましい。 In the general formula [1], the lower alkyl group represented by R 1 and R 2 may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms. Specific examples include linear lower alkyl groups such as methyl group, ethyl group, n-propyl group, n-butyl group, n-pentyl group and n-hexyl group, such as isopropyl group and isobutyl group. Group, sec-butyl group, tert-butyl group, isopentyl group, sec-pentyl group, tert-pentyl group, neopentyl group, isohexyl group, 3-methylpentyl group, 2-methylpentyl group, 1,2-dimethylbutyl group Branched lower alkyl groups such as cyclopropyl group, cyclobutyl group, cyclopentyl group, cyclohexyl group and the like, and straight chain ones are preferred.

尚、Rで示される低級アルキル基としては、メチル基がより好ましく、Rで示される低級アルキル基としては、エチル基がより好ましい。 The lower alkyl group represented by R 1 is more preferably a methyl group, and the lower alkyl group represented by R 2 is more preferably an ethyl group.

及びRで示される低級アルコキシ基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数1〜6、好ましくは1〜3、より好ましくは炭素数1のものが挙げられ、具体的には、例えばメトキシ基,エトキシ基,n-プロポキシ基,n-ブトキシ基,n-ペンチルオキシ基,n-ヘキシルオキシ基等の直鎖状低級アルコキシ基、例えばイソプロポキシ基,イソブトキシ基,sec-ブトキシ基,tert-ブトキシ基,イソペンチルオキシ基,sec-ペンチルオキシ基,tert-ペンチルオキシ基,ネオペンチルオキシ基,イソヘキシルオキシ基,3-メチルペンチルオキシ基,2-メチルペンチルオキシ基,1,2-ジメチルブトキシ基等の分枝状低級アルコキシ基、例えばシクロプロポキシ基,シクロブトキシ基,シクロペンチルオキシ基,シクロヘキシルオキシ基等の環状低級アルコキシ基等が挙げられ、中でも直鎖状のものが好ましい。 The lower alkoxy group represented by R 1 and R 2 may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 3 carbon atoms, more preferably 1 carbon atom. Specifically, for example, a linear lower alkoxy group such as methoxy group, ethoxy group, n-propoxy group, n-butoxy group, n-pentyloxy group, n-hexyloxy group, for example, isopropoxy group, Isobutoxy group, sec-butoxy group, tert-butoxy group, isopentyloxy group, sec-pentyloxy group, tert-pentyloxy group, neopentyloxy group, isohexyloxy group, 3-methylpentyloxy group, 2-methyl Branched lower alkoxy groups such as pentyloxy group, 1,2-dimethylbutoxy group, such as cyclopropoxy group, cyclobutoxy group, cyclopentyloxy , And cyclic lower alkoxy group such as a cyclohexyl group, and among them those linear is preferred.

で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。 Examples of the halogen atom represented by R 1 include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.

尚、Rとしては、低級アルキル基又は低級アルコキシ基がより好ましく、Rとしては、低級アルキル基がより好ましい。 R 1 is more preferably a lower alkyl group or a lower alkoxy group, and R 2 is more preferably a lower alkyl group.

で示されるアルキレン基としては、直鎖状、分枝状或いは環状の何れでもよく、通常炭素数1〜10、好ましくは1〜6、より好ましくは2〜4、更により好ましくは3のものが挙げられ、具体的には、例えばメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基、ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖状アルキレン基、例えばプロピレン基、ブチレン基、2−メチルプロピレン基、ペンチレン基、2−メチルテトラメチレン基、2,2−ジメチルトリメチレン基、2−エチルトリメチレン基、ヘキシレン基、2−メチルペンタメチレン基、3−メチルペンタメチレン基、ヘプチレン基、オクチレン基、2−エチルへキシレン基、ノニレン基、デシレン基等の分枝状アルキレン基、例えばシクロプロピレン基、シクロペンチレン基、シクロヘキシレン基、シクロヘプチレン基、シクロオクチレン基、シクロノニレン基、シクロデシレン基等の環状アルキレン基等が挙げられ、中でも直鎖状アルキレン基が好ましい。 The alkylene group represented by R 3 may be linear, branched or cyclic, and usually has 1 to 10 carbon atoms, preferably 1 to 6, more preferably 2 to 4, and still more preferably 3. Specifically, for example, linear chain such as methylene group, ethylene group, trimethylene group, tetramethylene group, pentamethylene group, hexamethylene group, heptamethylene group, octamethylene group, nonamethylene group, decamethylene group, etc. Alkylene groups such as propylene, butylene, 2-methylpropylene, pentylene, 2-methyltetramethylene, 2,2-dimethyltrimethylene, 2-ethyltrimethylene, hexylene, 2-methylpentamethylene Group, 3-methylpentamethylene group, heptylene group, octylene group, 2-ethylhexylene group, nonylene group, Branched alkylene groups such as decylene group, for example, cyclic alkylene groups such as cyclopropylene group, cyclopentylene group, cyclohexylene group, cycloheptylene group, cyclooctylene group, cyclononylene group, cyclodecylene group, etc. An alkylene group is preferred.

一般式[1]及び[2]に於いて、Mで示されるアルカリ金属としては、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウム等が挙げられ、中でもナトリウム、カリウムが好ましい。   In the general formulas [1] and [2], examples of the alkali metal represented by M include lithium, sodium, potassium, rubidium, cesium and the like, and sodium and potassium are particularly preferable.

Mで示されるアルカリ土類金属としては、例えばベリリウム、マグネシウム、カルシウム、スカンジウム、バリウム等が挙げられ、中でもカルシウムが好ましい。   Examples of the alkaline earth metal represented by M include beryllium, magnesium, calcium, scandium, barium and the like, among which calcium is preferable.

また、Mとしては、アルカリ金属が好ましい。   Moreover, as M, an alkali metal is preferable.

nは、通常1〜5、好ましくは1〜3、より好ましくは1〜2の整数を表す。   n represents the integer of 1-5 normally, Preferably it is 1-3, More preferably, it is 1-2.

一般式[1]で示される化合物の具体例としては、例えばN-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)アニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3,5-ジメトキシアニリン、N-(3-スルホプロピル)アニリン、N-(3-スルホプロピル)-3,5-ジメトキシアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3,5-ジメチルアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3-メチルアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-4-フルオロ-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-(3-スルホプロピル)-4-フルオロ-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-エチル-N-(3-スルホプロピル)-3,5-ジメトキシ-4-フルオロアニリン、N-(3-スルホプロピル)-3,5-ジメトキシ-4-フルオロアニリン、これらのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩及びアンモニウム塩等が挙げられ、中でも一般式[2]   Specific examples of the compound represented by the general formula [1] include N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxyaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) aniline, N- Ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N- (3-sulfopropyl) aniline, N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5 -Methylaniline, N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -4-fluoro-3-methoxy-5-methylaniline, N- (3-sulfopropyl) -4-fluoro-3-methoxy-5-methylaniline, N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3,5-dimethoxy-4-fluoroaniline, N- (3-sulfo Propyl) -3,5-dimethoxy-4-fluoroa Nilin, alkali metal salts thereof, alkaline earth metal salts, ammonium salts, and the like, among which general formula [2]

Figure 0004640400
Figure 0004640400

(式中、Mは前記に同じ。)で示されるN-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン又はその塩が好ましい。 N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline represented by the formula (wherein M is the same as above) or a salt thereof is preferred.

上記の如き一般式[2]で示される化合物は、新規化合物であり、カタラーゼの安定化効果に特に優れている。   The compound represented by the general formula [2] as described above is a novel compound and particularly excellent in the catalase stabilizing effect.

また、一般式[1]で示される化合物は、水分子と結合した水和物の形を構成していてもよい。   In addition, the compound represented by the general formula [1] may constitute a hydrate form bonded to water molecules.

一般式[1]で示される化合物は、市販品を用いても、例えば特公昭57-27106号公報に記載された如き方法に従って、以下の如くして製造してもよい。   The compound represented by the general formula [1] may be a commercially available product, or may be produced as follows, for example, according to a method described in JP-B-57-27106.

即ち、一般式[1]で示される化合物を製造するには、例えばJ.C.S.Perkin II, 829(1980)、J.Chem.Soc., 123, 2982(1923)、Osaka Kogyo Daigaku Kiyo, Rikohen, 28(1)33-42(1983)等の文献に記載された如き方法に準じて合成された一般式[3]   That is, in order to produce the compound represented by the general formula [1], for example, JCSPerkin II, 829 (1980), J. Chem. Soc., 123, 2982 (1923), Osaka Kogyo Daigaku Kiyo, Rikohen, 28 ( 1) General formula [3] synthesized according to the method described in the literature such as 33-42 (1983)

Figure 0004640400
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(式中、R、R及びnは前記に同じ。)で示される化合物を、適当な溶媒中、アルカリ存在下、一般式[4] (Wherein R 1 , R 2 and n are the same as defined above), a compound represented by the general formula [4] in an appropriate solvent in the presence of an alkali:

Figure 0004640400
Figure 0004640400

(式中、X’はハロゲン原子を表し、R及びMは前記に同じ。)で示されるハロアルキルスルホン酸又はその塩(ハロアルキルスルホン酸類)、或いは一般式[5] (Wherein X ′ represents a halogen atom, R 3 and M are the same as above), or a salt thereof (haloalkylsulfonic acids), or a general formula [5]

Figure 0004640400
Figure 0004640400

(式中、Rは前記に同じ。)で示されるスルトンと反応させることにより容易に得られる。 (Wherein R 3 is the same as above) and can be easily obtained by reacting with sultone.

一般式[4]に於いて、X’で示されるハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。   In the general formula [4], examples of the halogen atom represented by X ′ include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.

一般式[3]で示される化合物の具体例としては、例えばアニリン、N-エチルアニリン、3-メチルアニリン、N-エチル-3-メチルアニリン、3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-エチル-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-エチル-4-フルオロ-3-メトキシ-5-メチルアニリン、N-エチル-4-フルオロ-3-メトキシ-5-メチルアニリン、4-フルオロ-3-メトキシ-5-メチルアニリン、3,5-ジメチルアニリン、N-エチル-3,5-ジメチルアニリン、N-エチル-3-メトキシアニリン、3-メトキシアニリン、3,5-ジメトキシアニリン、N-エチル-3,5-ジメトキシアニリン、3,5-ジメトキシ-4-フルオロアニリン、N-エチル-3,5-ジメトキシ-4-フルオロアニリン、これらのアルカリ金属塩(例えばナトリウム塩、カリウム塩等)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩等)、アンモニウム塩等が挙げられる。   Specific examples of the compound represented by the general formula [3] include, for example, aniline, N-ethylaniline, 3-methylaniline, N-ethyl-3-methylaniline, 3-methoxy-5-methylaniline, N-ethyl- 3-methoxy-5-methylaniline, N-ethyl-4-fluoro-3-methoxy-5-methylaniline, N-ethyl-4-fluoro-3-methoxy-5-methylaniline, 4-fluoro-3-methoxy -5-methylaniline, 3,5-dimethylaniline, N-ethyl-3,5-dimethylaniline, N-ethyl-3-methoxyaniline, 3-methoxyaniline, 3,5-dimethoxyaniline, N-ethyl-3 , 5-dimethoxyaniline, 3,5-dimethoxy-4-fluoroaniline, N-ethyl-3,5-dimethoxy-4-fluoroaniline, alkali metal salts thereof (for example, sodium salt, potassium salt, etc.), alkaline earths Metal salts (such as calcium salts), ammonium salts, etc. .

一般式[4]で示されるハロアルキルスルホン酸類としては、例えばフルオロエタンスルホン酸、クロロエタンスルホン酸、ブルモエタンスルホン酸、ヨードエタンスルホン酸、3-フルオロプロパンスルホン酸、3-クロロプロパンスルホン酸、3-ブロモプロパンスルホン酸、3-ヨードプロパンスルホン酸、4-フルオロブタンスルホン酸、4-クロロブタンスルホン酸、4-ブロモブタンスルホン酸、4-ヨードブタンスルホン酸、及びこれらのアルカリ金属塩(例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等)、アルカリ土類金属塩(例えばカルシウム塩等)、アンモニウム塩等が挙げられる。   Examples of the haloalkylsulfonic acids represented by the general formula [4] include fluoroethanesulfonic acid, chloroethanesulfonic acid, bromoethanesulfonic acid, iodoethanesulfonic acid, 3-fluoropropanesulfonic acid, 3-chloropropanesulfonic acid, 3- Bromopropanesulfonic acid, 3-iodopropanesulfonic acid, 4-fluorobutanesulfonic acid, 4-chlorobutanesulfonic acid, 4-bromobutanesulfonic acid, 4-iodobutanesulfonic acid, and alkali metal salts thereof (for example, sodium Salt, potassium salt, etc.), alkaline earth metal salts (eg calcium salt, etc.), ammonium salts and the like.

一般式[5]で示されるスルトンの具体例としては、例えばエタンスルトン、1,3-プロパンスルトン、1,4-ブタンスルトン等が挙げられる。   Specific examples of the sultone represented by the general formula [5] include ethane sultone, 1,3-propane sultone, 1,4-butane sultone, and the like.

反応溶媒としては、例えばトルエン,キシレン,ベンゼン,シクロヘキサン,n-ヘキサン,n-オクタン等の炭化水素類、例えばメタノール,エタノール,n-プロパノール,イソプロパノール,n-ブタノール,イソブタノール,tert-ブタノール等のアルコール類、例えば四塩化炭素,クロロホルム,塩化メチレン,ジクロロエタン,トリクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、例えば酢酸エチル,酢酸ブチル,プロピオン酸メチル等のエステル類、例えばアセトン,エチルメチルケトン,ジエチルケトン等のケトン類、例えば、ジエチルエーテル,テトラヒドロフラン,ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、水等が挙げられ、一般式[4]で示されるハロアルキルスルホン酸類を反応させる場合は、好ましくはアルコール類、より好ましくはエタノール、イソプロパノール等が挙げられ、一般式[5]で示されるスルトン類を反応させる場合は、好ましくはエーテル類、より好ましくはテトラヒドロフラン、ジオキサン等が挙げられる。これらは夫々単独で用いても、二種以上適宜組み合わせて用いてもよい。   Examples of the reaction solvent include hydrocarbons such as toluene, xylene, benzene, cyclohexane, n-hexane and n-octane, such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol and tert-butanol. Alcohols such as halogenated hydrocarbons such as carbon tetrachloride, chloroform, methylene chloride, dichloroethane, and trichloroethane, esters such as ethyl acetate, butyl acetate, and methyl propionate such as acetone, ethyl methyl ketone, and diethyl ketone Ketones, for example, ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran and dioxane, acetonitrile, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, water and the like can be mentioned, and haloalkylsulfonic acids represented by the general formula [4] are reacted. In the case of reacting, preferably alcohols, more preferably ethanol, isopropanol and the like are mentioned, and when reacting the sultone represented by the general formula [5], preferably ethers, more preferably tetrahydrofuran, dioxane and the like are mentioned. It is done. These may be used alone or in appropriate combination of two or more.

アルカリとしては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化物等を水に溶解したアルカリ溶液が挙げられる。これらは夫々単独で用いても、二種以上適宜組み合わせて用いてもよい。   Examples of the alkali include an alkaline solution in which a hydroxide such as sodium hydroxide or potassium hydroxide is dissolved in water. These may be used alone or in appropriate combination of two or more.

一般式[4]で示されるハロアルキルスルホン酸類又は一般式[5]で示されるスルトンの使用量は、使用するハロアルキルスルホン酸類或いはスルトン、及び一般式[3]で示される化合物の種類によって異なるが、一般式[3]で示される化合物に対して、通常0.5〜3倍モル、好ましくは0.5〜1.5倍モルである。   The amount of the haloalkylsulfonic acid represented by the general formula [4] or the sultone represented by the general formula [5] varies depending on the type of the haloalkylsulfonic acid or sultone used and the compound represented by the general formula [3]. It is 0.5-3 times mole normally with respect to the compound shown by General formula [3], Preferably it is 0.5-1.5 times mole.

反応温度は、特に限定されないが、通常20〜150℃、好ましくは50〜120℃、より好ましくは60〜105℃である。   Although reaction temperature is not specifically limited, Usually, 20-150 degreeC, Preferably it is 50-120 degreeC, More preferably, it is 60-105 degreeC.

反応時間は、一般式[3]で示される化合物及びハロアルキルスルホン酸類又はスルトンの種類によって異なるが、通常1〜18時間である。   While the reaction time varies depending on the type of the compound represented by the general formula [3] and the haloalkylsulfonic acids or sultone, it is generally 1 to 18 hours.

上記以外の反応操作及び後処理方法等は、通常行われる同種反応に準じて行われる。   Reaction operations and post-treatment methods other than those described above are performed according to the same type of reactions that are usually performed.

また、本発明に係るカタラーゼ安定化剤の使用濃度としては、試薬や標準溶液等の溶液中に存在するカタラーゼを安定化し得る濃度であれば特に限定されないが、一般式[1]で示される化合物の種類、カタラーゼの量、溶解溶媒の純度等により若干変動し、本発明に係る一般式[1]で示される化合物の濃度が、試薬や標準溶液中の濃度として、通常0.001〜100mM、好ましくは0.01〜10mMとなるように添加される。   In addition, the concentration of the catalase stabilizer according to the present invention is not particularly limited as long as it is a concentration that can stabilize catalase present in a solution such as a reagent or a standard solution, but the compound represented by the general formula [1] The concentration of the compound represented by the general formula [1] according to the present invention is usually 0.001 to 100 mM as the concentration in the reagent or standard solution, preferably It is added so as to be 0.01 to 10 mM.

尚、カタラーゼの使用濃度としては、この分野で使用される濃度範囲から適宜選択すればよいが、通常1〜100000IU/mL、好ましくは10〜10000IU/mLである。   The concentration of catalase used may be appropriately selected from the concentration range used in this field, but is usually 1 to 100,000 IU / mL, preferably 10 to 10,000 IU / mL.

本発明に係る一般式[1]で示される化合物は、単独で用いても、二種以上適宜組み合わせて用いてもよい。   The compounds represented by the general formula [1] according to the present invention may be used alone or in appropriate combination of two or more.

本発明に係るカタラーゼ安定化剤は、本発明に係る一般式[1]で示される化合物をカタラーゼ含有溶液に溶解して得られる組成物の型をとることができ、この組成物は、使用に供されるまで、凍結処理、凍結乾燥処理等を施した状態、或いは溶液等の状態等、多種の形態で保存し得るものであり、中でも溶液状態で保存されるのが好ましい。   The catalase stabilizer according to the present invention can take the form of a composition obtained by dissolving the compound represented by the general formula [1] according to the present invention in a catalase-containing solution. Until it is provided, it can be stored in various forms such as a state subjected to a freezing process, a freeze-drying process, etc., or a state of a solution or the like, and it is preferably stored in a solution state.

本発明の安定化剤により溶液中のカタラーゼを安定化するには、カタラーゼ含有溶液に、一般式[1]で示される化合物を上記した如き濃度となるように添加、共存させればよい。また、上記した如き一般式[1]で示される化合物とカタラーゼとを含んでなる組成物を水や適当な緩衝液等に溶解してもよい。   In order to stabilize catalase in the solution with the stabilizer of the present invention, the compound represented by the general formula [1] may be added to the catalase-containing solution so as to have the concentration as described above and coexist. Further, a composition comprising the compound represented by the general formula [1] and catalase as described above may be dissolved in water, a suitable buffer solution or the like.

カタラーゼを溶解する溶媒としては、カタラーゼを溶解し得るものなら特に限定されないが、通常緩衝液として用いられているものが好ましい。緩衝液を構成する緩衝剤の具体例としては、例えばN-(2-アセトアミド)-2-アミノエタンスルホン酸(ACES),N-(2-アセトアミドイミノ二酢酸(ADA),N,N-Bis(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸(BES),N,N-Bis(2-ヒドロキシエチル)グシリン(Bicine),Bis(2-ヒドロキシエチル)イミノトリス(ヒドロキシエチル)メタン(Bis−Tris),N-シクロヘキシル-3-アミノプロパンスルホン酸(CAPS),N-シクロヘキシル-2-ヒドロキシ-3-アミノプロパンスルホン酸(CAPSO),N-シクロヘキシル-2-アミノエタンスルホン酸(CHES),3-[N,N-Bis(2-ヒドロキシエチル)アミノ]-2-ヒドロキシプロパンスルホン酸(DIPSO),3-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]プロパンスルホン酸(EPPS),2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルホン酸(HEPES),2-ヒドロキシ-3-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]プロパンスルホン酸(HEPPSO),2−モルホリノエタンスルホン酸(MES),3−モルホリノプロパンスルホン酸(MOPS),2-ヒドロキシ-3-モルホリノプロパンスルホン酸(MOPSO),ピペラジン-1,4-bis(2-エタンスルホン酸)(PIPES),ピペラジン-1,4-bis(2-ヒドロキシ-3-プロパンスルホン酸(POPSO),N-Tris(ヒドロキシメチル)メチル-3-アミノプロパンスルホン酸(TAPS),2-ヒドロキシ-N-Tris(ヒドロキシメチル)メチル-3-アミノプロパンスルホン酸(TAPSO),N-Tris(ヒドロキシメチル)メチル-2-アミノエタンスルホン酸(TES),N-[Tris(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン(Tricine)等のグッド緩衝剤、例えばりん酸塩,酢酸塩,クエン酸塩,トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン等の緩衝剤、ベロナール緩衝剤、ホウ酸緩衝剤等通常この分野で用いられる緩衝剤は全て挙げられる。   The solvent for dissolving catalase is not particularly limited as long as it can dissolve catalase, but a solvent usually used as a buffer is preferable. Specific examples of the buffer constituting the buffer include N- (2-acetamido) -2-aminoethanesulfonic acid (ACES), N- (2-acetamidoiminodiacetic acid (ADA), N, N-Bis. (2-hydroxyethyl) -2-aminoethanesulfonic acid (BES), N, N-Bis (2-hydroxyethyl) gucline (Bicine), Bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxyethyl) methane (Bis-Tris) ), N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (CAPS), N-cyclohexyl-2-hydroxy-3-aminopropanesulfonic acid (CAPSO), N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid (CHES), 3- [N, N-Bis (2-hydroxyethyl) amino] -2-hydroxypropanesulfonic acid (DIPSO), 3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid (EPPS), 2- [4- (2-hydroxy Til) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid (HEPES), 2-hydroxy-3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propanesulfonic acid (HEPPSO), 2-morpholinoethanesulfonic acid (MES) , 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS), 2-hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPSO), piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) (PIPES), piperazine-1,4-bis (2-hydroxy-3-propanesulfonic acid (POPSO), N-Tris (hydroxymethyl) methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS), 2-hydroxy-N-Tris (hydroxymethyl) methyl-3-aminopropane Such as sulfonic acid (TAPSO), N-Tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES), N- [Tris (hydroxymethyl) methyl] glycine (Tricine), etc. Good buffering agents such as phosphates, acetates, citrates, buffers such as tris (hydroxymethyl) aminomethane, veronal buffers, borate buffers and the like usually used in this field are all included.

該緩衝液のpHとしては、通常pH3〜12、好ましくはpH5〜10の範囲から適宜選択される。   The pH of the buffer is appropriately selected from the range of usually pH 3 to 12, preferably pH 5 to 10.

また、本発明の過酸化水素消去用組成物は、一般式[1]で示される化合物とカタラーゼとを含んでなるものであり、使用に供されるまで凍結処理、凍結乾燥処理等を施した状態、或いは溶液等の状態等、多種の形態で保存し得るものである。   The hydrogen peroxide scavenging composition of the present invention comprises a compound represented by the general formula [1] and catalase, and was subjected to freezing treatment, lyophilization treatment, etc. until use. It can be stored in various forms such as a state or a solution state.

過酸化水素消去用組成物に於ける使用濃度としては、試薬や標準溶液等の溶液中に存在する、生体試料中の成分に由来する過酸化水素を消去し得る濃度であれば特に限定されないが、一般式[1]で示される化合物の種類、カタラーゼの量、溶解溶媒の純度等により若干変動し、試薬や標準溶液中に、当該一般式[1]で示される化合物の濃度が、通常、0.001〜100mM、好ましくは0.01〜10mMとなるように添加される。また、カタラーゼの濃度としては、通常1〜100000IU/mL、好ましくは10〜10000IU/mLの範囲から適宜選択される。   The concentration used in the composition for eliminating hydrogen peroxide is not particularly limited as long as it is a concentration capable of eliminating hydrogen peroxide derived from components in a biological sample present in a solution such as a reagent or a standard solution. The concentration of the compound represented by the general formula [1] in the reagent or standard solution usually varies depending on the kind of the compound represented by the general formula [1], the amount of catalase, the purity of the dissolving solvent, and the like. It is added so as to be 0.001 to 100 mM, preferably 0.01 to 10 mM. The concentration of catalase is appropriately selected from the range of usually 1 to 100,000 IU / mL, preferably 10 to 10,000 IU / mL.

本発明に係る一般式[1]で示される化合物は、単独で用いても、二種以上適宜組み合わせて用いてもよい。   The compounds represented by the general formula [1] according to the present invention may be used alone or in appropriate combination of two or more.

また、本発明に係る過酸化水素消去用組成物は、生体試料成分測定用に用いられる。   Moreover, the composition for eliminating hydrogen peroxide according to the present invention is used for measuring biological sample components.

本発明の過酸化水素消去用組成物により溶液中の過酸化水素を消去するには、過酸化水素含有溶液に当該組成物を上記した如き濃度となるように添加、共存させるか或いは、当該組成物を予め水や適当な緩衝液等に溶解したものを、過酸化水素含有溶液に添加、共存させればよい。   In order to erase the hydrogen peroxide in the solution by the hydrogen peroxide erasing composition of the present invention, the composition is added to the hydrogen peroxide-containing solution so as to have the concentration as described above, or the composition is allowed to coexist. What was previously dissolved in water or a suitable buffer solution may be added to and coexisted with the hydrogen peroxide-containing solution.

過酸化水素消去用組成物を溶解する溶媒としては、カタラーゼ及び一般式[1]で示される化合物を溶解し得るものなら特に限定されないが、通常の緩衝液として用いられているものが好ましい。緩衝液を構成する緩衝剤の具体例、緩衝液のpHとしては、上記したものと同様のものが挙げられる。   The solvent for dissolving the hydrogen peroxide erasing composition is not particularly limited as long as it can dissolve catalase and the compound represented by the general formula [1], but a solvent used as a normal buffer is preferable. Specific examples of the buffer constituting the buffer solution and the pH of the buffer solution include the same ones as described above.

本発明の生体試料中の成分測定用試薬は、一般式[1]で示される化合物とカタラーゼとを含んでなるものであり、例えば自体公知の生体試料成分測定法に用いられるカタラーゼ含有試薬中に、一般式[1]で示される化合物を直接添加、共存させるか、或いは一般式[1]で示される化合物を適当な溶媒に含有させて溶液状態とし、これを当該測定用試薬に添加、共存させることにより容易に調製し得る。この場合のカタラーゼの濃度としては、通常1〜100000IU/mL、好ましくは10〜10000IU/mLである。   The reagent for measuring a component in a biological sample of the present invention comprises a compound represented by the general formula [1] and catalase. For example, in a catalase-containing reagent used in a biological sample component measuring method known per se. The compound represented by the general formula [1] is directly added and coexisted, or the compound represented by the general formula [1] is contained in an appropriate solvent to form a solution state, which is added to the measuring reagent and coexisted. Can be easily prepared. The concentration of catalase in this case is usually 1 to 100,000 IU / mL, preferably 10 to 10,000 IU / mL.

本発明に於いて、一般式[1]で示される化合物を含有させる溶媒としては、上記したものと同様のものが挙げられ、その使用濃度も、上記した如きカタラーゼ安定化剤として用いる場合の濃度範囲から適宜選択すればよい。   In the present invention, examples of the solvent containing the compound represented by the general formula [1] include the same solvents as described above, and the concentration of the solvent used is also the concentration when used as a catalase stabilizer as described above. What is necessary is just to select suitably from the range.

自体公知の生体試料成分測定法としては、測定対象となる成分以外に測定妨害成分を含有する生体試料に、該妨害成分にそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分を作用させ、次いで生成した過酸化水素にカタラーゼを作用させた後、(1)測定対象となる当該成分を測定するための試薬類を反応させるか、或いは(2)カタラーゼ阻害剤及び例えばオキシダーゼ系酵素等の測定対象成分を測定するための試薬類を作用させ、測定対象となる当該成分を定量的に測定する方法が全て挙げられる。オキシダーゼ系酵素を使用する場合を例にとってこれを図示すれば、例えば下記の如き反応系で示される。   As a biological sample component measurement method known per se, a biological sample containing a measurement interfering component in addition to the component to be measured is allowed to act on the interfering component by a component that has an action of eliminating hydrogen peroxide from it. Then, after catalase is allowed to act on the generated hydrogen peroxide, (1) the reagents for measuring the component to be measured are reacted, or (2) a catalase inhibitor and, for example, an oxidase enzyme, etc. Examples include all methods for quantitatively measuring the component to be measured by causing reagents for measuring the component to be measured to act. If this is illustrated by taking the case of using an oxidase enzyme as an example, it is shown by the following reaction system, for example.

Figure 0004640400
Figure 0004640400

ここに於いて用いられるカタラーゼ阻害剤としては、この分野で通常使用されるもの全てが挙げられ、具体的には、例えばNaN、3-アミノ-1,2,4-トリアゾール等が挙げられる。その使用濃度は通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよい。 Examples of the catalase inhibitor used herein include all those commonly used in this field, and specific examples include NaN 3 , 3-amino-1,2,4-triazole and the like. The concentration used may be appropriately selected from the range usually used in this field.

自体公知の生体試料成分の測定法の具体例としては、例えば下記の如き中性脂肪(トリグリセリド)測定法、クレアチニン測定法、HDL−又はLDL−コレステロール測定法等が挙げられる。   Specific examples of methods for measuring biological sample components known per se include, for example, the following neutral fat (triglyceride) measurement method, creatinine measurement method, HDL- or LDL-cholesterol measurement method, and the like.

〔中性脂肪(トリグリセリド)測定法〕

Figure 0004640400
[Method for measuring neutral fat (triglyceride)]
Figure 0004640400

〔クレアチニン測定法〕

Figure 0004640400
[Creatinine measurement method]
Figure 0004640400

〔HDL−又はLDL−コレステロール測定法〕

Figure 0004640400
[HDL- or LDL-cholesterol measurement method]
Figure 0004640400

上記の如き測定法は、当該測定妨害成分が目的の測定を行う際の反応系の1成分である場合であり、測定対象成分の測定を過酸化水素の定量により行う自体公知の測定法では、当該妨害成分由来の過酸化水素を1次反応に於いて消去しておく必要がある。   The measurement method as described above is a case where the measurement interfering component is one component of the reaction system when performing the target measurement. In the measurement method known per se for measuring the measurement target component by quantifying hydrogen peroxide, It is necessary to eliminate hydrogen peroxide derived from the interfering component in the primary reaction.

また、上記の如き場合以外に、当該測定妨害成分が目的の測定を行う際の反応系の1成分を消費するものである場合があり、このような測定妨害成分としては、例えば、還元作用を有するアスコルビン酸等が挙げられる。アスコルビン酸の反応系を下記に示す。   In addition to the above cases, the measurement interfering component may consume one component of the reaction system when performing the target measurement. As such a measurement interfering component, for example, a reducing action may be used. Examples include ascorbic acid. The reaction system of ascorbic acid is shown below.

Figure 0004640400
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上記の如き反応系に於いて、アスコルビン酸は、生成される過酸化水素或いは通常臨床分野で多用される被酸化性呈色試薬から産生される色素を還元する作用を有している為、当該測定対象である成分の測定値に負誤差を与える。   In the reaction system as described above, ascorbic acid has a function of reducing generated hydrogen peroxide or a dye produced from an oxidizable color reagent usually used in clinical fields. A negative error is given to the measured value of the component to be measured.

従来、アスコルビン酸は、これにアスコルビン酸オキシダーゼを作用させることによって、過酸化水素を発生することなく不活化させた。しかし、例えばトリコデルマ属又はモルティエレラ属由来のアスコルビン酸オキシダーゼ(特許第3031517号公報参照。)を作用させる場合は、当該反応系に於いて過酸化水素を発生させる為、カタラーゼによる消去法を組み合わせることが必要である。   Conventionally, ascorbic acid was inactivated without generating hydrogen peroxide by causing ascorbate oxidase to act on it. However, when an ascorbate oxidase derived from Trichoderma or Mortierella (see Patent No. 3031517) is used, for example, hydrogen peroxide is generated in the reaction system, and therefore an elimination method using catalase is combined. is required.

本発明の測定方法に於ける生体試料としては、測定対象である当該成分と、これ以外に測定妨害成分を含有する可能性のあるものであり、且つこの妨害成分はそれから過酸化水素を発生せしめることにより消去されるものが挙げられ、具体的には、例えば血液、血漿、血清、髄液、尿、糞便等が挙げられる。   The biological sample in the measurement method of the present invention includes the component to be measured and the possibility of containing a measurement interfering component in addition to this, and the interfering component generates hydrogen peroxide therefrom. Specific examples include blood, plasma, serum, spinal fluid, urine, stool, and the like.

測定対象である当該成分は、上記の如き生体試料中に含まれる成分であって、通常の臨床検査用測定試薬の中でもカタラーゼの消去法を組み合わせた測定試薬に於いて、測定し得る測定項目が全て挙げられる。   The component to be measured is a component contained in the biological sample as described above, and there are measurement items that can be measured in a measurement reagent combined with a catalase elimination method among normal clinical measurement reagents. All are listed.

測定妨害成分としては、測定対象である当該成分を測定する際に影響を与えるものであり、具体的には、(1)当該反応系の1成分となるもの、即ち測定妨害成分が当該反応系により過酸化水素を発生させ、その結果、測定対象である成分の測定値に正誤差を与えるもの、或いは(2)当該反応系の1成分を消費するもの、即ち当該反応系に於いて生成する測定対象となる成分由来の過酸化水素量や当該過酸化水素により産生する色素量を消費するものが挙げられる。これら測定妨害成分の具体例としては、例えば中性脂肪測定法に於いてはグリセリン、クレアチニン測定法に於いてはクレアチン、LDL−又はHDL−コレステロール測定法に於いてはLDL−又はHDL−コレステロール以外のコレステロール等の反応系の1成分になり得るもの、例えばアスコルビン酸等の反応系の1成分を消費し得るものが挙げられる。   The measurement interfering component has an influence upon measurement of the component to be measured. Specifically, (1) one component of the reaction system, that is, the measurement interfering component is the reaction system. To generate hydrogen peroxide, and as a result, give a positive error to the measured value of the component to be measured, or (2) consume one component of the reaction system, that is, generate in the reaction system Examples include those that consume the amount of hydrogen peroxide derived from the component to be measured and the amount of pigment produced by the hydrogen peroxide. Specific examples of these measurement interfering components include, for example, glycerin in the neutral fat measurement method, creatine in the creatinine measurement method, and other than LDL- or HDL-cholesterol in the measurement method of LDL- or HDL-cholesterol. Those that can be one component of the reaction system such as cholesterol, for example, those that can consume one component of the reaction system such as ascorbic acid.

測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分としては、上記の如き生体試料中の成分測定方法に用いる試薬中に存在する測定妨害成分に作用して過酸化水素を発生させるものであれば特に限定されないが、例えば、中性脂肪(トリグリセリド)測定法に於いてはATP(アデノシン5'-三りん酸)、グリセロールキナーゼ(GK)、Mg2+及びグリセロール-3-りん酸オキシダーゼ(GPO)とからなる成分、クレアチニン測定法に於いてはクレアチナーゼ及びザルコシンオキシダーゼとからなる成分、HDL−又はLDL−コレステロール測定法に於いてはコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼとからなる成分が挙げられる。また、上記の如き全ての測定法に於いて、アスコルビン酸オキシダーゼ(測定妨害成分はアスコルビン酸)等が挙げられる。 As a component having an action of eliminating the measurement interfering component by generating hydrogen peroxide from the measurement interfering component, it acts on the measurement interfering component present in the reagent used in the component measuring method in the biological sample as described above, so that hydrogen peroxide is removed. For example, in the neutral fat (triglyceride) measurement method, ATP (adenosine 5′-triphosphate), glycerol kinase (GK), Mg 2+ and glycerol-3- A component comprising phosphate oxidase (GPO), a component comprising creatinase and sarcosine oxidase in the creatinine measurement method, and a component comprising cholesterol esterase and cholesterol oxidase in the HDL- or LDL-cholesterol measurement method. Can be mentioned. Moreover, in all the above measuring methods, ascorbic acid oxidase (a measurement interfering component is ascorbic acid), etc. are mentioned.

本発明の生体試料中の成分測定用試薬は、例えば血液、血清、血漿、髄液等の生体試料中の測定対象となる成分を測定するために使用されるもので、一般式[1]で示される化合物、カタラーゼ及び測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分とを含んでなるものであり、構成要件の好ましい態様や使用濃度等は、上で述べたとおりである。   The reagent for measuring a component in a biological sample of the present invention is used for measuring a component to be measured in a biological sample such as blood, serum, plasma, and cerebrospinal fluid, and is represented by the general formula [1]. And the components having the action of eliminating the indicated compounds, catalase and measurement-interfering components by generating hydrogen peroxide from them, and preferred aspects of the constituent requirements, use concentrations, etc. are as described above. It is.

また、本発明に係る成分測定用試薬としては、カタラーゼの消去法を組み合わせた使用される自体公知の成分測定方法等に用いられる試薬が全て挙げられ、具体的には、例えば中性脂肪測定用試薬、クレアチニン測定用試薬、HDL−コレステロール及びLDL−コレステロール測定用試薬、総コレステロール測定用試薬、尿酸測定用試薬等が挙げられる。   Examples of the component measurement reagent according to the present invention include all reagents used in a known component measurement method used in combination with a catalase elimination method. Specifically, for example, for neutral fat measurement Examples include reagents, creatinine measurement reagents, HDL-cholesterol and LDL-cholesterol measurement reagents, total cholesterol measurement reagents, uric acid measurement reagents, and the like.

尚、上記した如きカタラーゼを利用した、測定妨害成分の消去系を組み合わせてなる生体試料成分測定用試薬は通常2試薬系となっており、第1試薬にはカタラーゼを用いた消去系に必要な試薬等が含まれ、第2試薬には、カタラーゼ阻害剤が含まれているのが一般的である。   A biological sample component measuring reagent using a catalase as described above combined with a measurement interfering component elimination system is usually a two-reagent system, and the first reagent is necessary for an elimination system using catalase. In general, the second reagent contains a catalase inhibitor.

また、測定対象成分を測定するのに必要な試薬類は、第1試薬と第2試薬とが混合された時点で目的の成分測定の為の反応が開始されるように、第1試薬及び第2試薬の何れかに適宜含有させればよい。   In addition, the reagents necessary for measuring the component to be measured include the first reagent and the first reagent so that the reaction for measuring the target component is started when the first reagent and the second reagent are mixed. What is necessary is just to contain suitably in either of 2 reagents.

カタラーゼ阻害剤としては、上記したものと同様のものが挙げられる。   Examples of the catalase inhibitor include those described above.

本発明に係るカタラーゼ安定化剤は、これらカタラーゼが用いられる自体公知の成分測定方法に用いられる試薬中に、カタラーゼ安定化剤として添加して使用することが可能であり、その使用濃度も、上記した如きカタラーゼ安定化剤として用いる場合の濃度範囲から適宜選択すればよい。   The catalase stabilizer according to the present invention can be added and used as a catalase stabilizer in the reagents used in the component measuring methods known per se in which these catalases are used. What is necessary is just to select suitably from the density | concentration range in the case of using as a catalase stabilizer like this.

尚、本発明のカタラーゼ安定化剤は、ペルオキシダーゼ(POD)−H存在下、4−アミノアンチピリン(4−AA)と結合して色素を生成する性質を有しているので、これをカタラーゼ安定化剤としてだけではなく4−AAとのカップリング試薬として用いてもよい。このような目的で使用する場合の使用濃度としては、通常0.001〜100mM、好ましくは0.01〜10mMである。 The catalase stabilizer of the present invention has the property of binding to 4-aminoantipyrine (4-AA) to form a dye in the presence of peroxidase (POD) -H 2 O 2. It may be used not only as a catalase stabilizer but also as a coupling reagent with 4-AA. The concentration used for this purpose is usually 0.001 to 100 mM, preferably 0.01 to 10 mM.

本発明の生体試料中の成分測定用キットは、例えば血清、血液、血漿、尿、糞便等の生体試料中の測定対象成分の測定を実施するために使用される、長期間保存可能な試薬キットで、一般式[1]で示される化合物、カタラーゼ及び生体試料中の測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分とを含んでなる第1試液と、カタラーゼ阻害剤を含んでなる第2試液とを組み合わせてなるものであり、夫々の構成要素の好ましい態様、具体例等については先に述べた通りである。   The kit for measuring a component in a biological sample of the present invention is a reagent kit that can be stored for a long period of time, for example, for measuring a component to be measured in a biological sample such as serum, blood, plasma, urine, stool, etc. A first test solution comprising a compound represented by the general formula [1], a catalase, and a component having an action of eliminating a measurement-interfering component in a biological sample by generating hydrogen peroxide therefrom, and a catalase inhibitor And a preferred embodiment, specific examples and the like of each component are as described above.

また、第1試液と第2試液中には、測定対象成分を測定する為に必要な試薬類も含有させるが、これら試薬類は、第1試液と第2試液とを混合した時点で目的の成分測定の反応が開始されるように第1試薬及び第2試薬の何れかに適宜分散させて含有させればよい。これら試薬類の使用濃度は、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよい。   In addition, the first reagent solution and the second reagent solution also contain reagents necessary for measuring the component to be measured. These reagents are used when the first reagent solution and the second reagent solution are mixed. What is necessary is just to disperse | distribute suitably to either the 1st reagent and the 2nd reagent so that the reaction of a component measurement may be started. The concentration of these reagents used may be appropriately selected from the range usually used in this field.

また、当該キットには、必要に応じて、生体試料中の成分標準品等が組み合わされていてもよい。   Moreover, the component standard goods in a biological sample, etc. may be combined with the said kit as needed.

以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

実施例1.N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン ナトリウム塩の合成
J.C.S.Perkin II, 829(1980)に記載の方法に準じて合成した3-メトキシ-5-メチルアニリン 10g(73mmol)と3-ブロモプロパンスルホン酸ナトリウム 13.7g(61mmol)(東京化成工業(株)製)を1N水酸化ナトリウム溶液 73mL及びイソプロピルアルコール 73mLの混合溶液に加え、60℃で3時間加熱撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣を酢酸エチル 300mLで3回洗浄した。次いで水層を減圧濃縮し、得られた粗結晶を水−メタノール混合溶媒(1:10) 5mLで再結晶し、目的物 4.65gを白色結晶として得た。(収率27%)
Example 1. Synthesis of N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline sodium salt
10 g (73 mmol) of 3-methoxy-5-methylaniline synthesized according to the method described in JCSPerkin II, 829 (1980) and 13.7 g (61 mmol) of sodium 3-bromopropanesulfonate (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) Was added to a mixed solution of 73 mL of 1N sodium hydroxide solution and 73 mL of isopropyl alcohol, and heated and stirred at 60 ° C. for 3 hours. After completion of the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was washed with 300 mL of ethyl acetate three times. Next, the aqueous layer was concentrated under reduced pressure, and the resulting crude crystals were recrystallized with 5 mL of a water-methanol mixed solvent (1:10) to obtain 4.65 g of the desired product as white crystals. (Yield 27%)

分解点:200℃
元素分析値:C1116NSONa
実測値(%):C 46.66, H 6.18, N 4.54
計算値(%):C 46.78, H 6.11, N 4.60
IRスペクトル(KBr)〔cm-1〕:3457.8(-NH-), 1596.5(-Ar), 1059.3(-SO3)
H-NMRスペクトル(400MHz)(CD3OD)δ〔ppm〕:2.06(2H,dt,J=14.4,7.2Hz), 2.19(3H,s), 2.90(2H,t,J=7.2Hz), 3.20(2H,t,J=6.8Hz), 3.31(1H,bs), 3.70(3H,s), 6.03(2H,s), 6.09(1H,s)
IRスペクトルのデータを図1に、H-NMRスペクトルのデータを図2に夫々示す。
Decomposition point: 200 ° C
Elemental analysis value: C 11 H 16 NSO 4 Na
Actual value (%): C 46.66, H 6.18, N 4.54
Calculated value (%): C 46.78, H 6.11, N 4.60
IR spectrum (KBr) [cm -1 ]: 3457.8 (-NH-), 1596.5 (-Ar), 1059.3 (-SO 3 )
1 H-NMR spectrum (400 MHz) (CD 3 OD) δ [ppm]: 2.06 (2H, dt, J = 14.4,7.2 Hz), 2.19 (3H, s), 2.90 (2H, t, J = 7.2 Hz) , 3.20 (2H, t, J = 6.8Hz), 3.31 (1H, bs), 3.70 (3H, s), 6.03 (2H, s), 6.09 (1H, s)
FIG. 1 shows IR spectrum data, and FIG. 2 shows 1 H-NMR spectrum data.

実施例2.カタラーゼ安定化効果の検討
(1)検討用試薬の調製
本発明の一般式[1]で示される化合物 0.5mMを含有する、下記組成のカタラーゼ試薬を調製し、30℃、2ヶ月間保存したものを、検討用試薬とした。また、比較のため本発明の化合物無添加の試薬についても同様にして調製した。
Example 2 Examination of catalase stabilization effect (1) Preparation of examination reagent A catalase reagent having the following composition containing 0.5 mM of the compound represented by the general formula [1] of the present invention was prepared and stored at 30 ° C. for 2 months. Was used as a reagent for examination. For comparison, a reagent without addition of the compound of the present invention was prepared in the same manner.

50mM PIPES緩衝液(pH 7.0)
30IU/mL GK(グリセロールキナーゼ)
10mM 塩化マグネシウム
4.0mM ATP(アデノシン-5'-三りん酸二ナトリウム)
3.8IU/mL GPO(グリセロール-3-りん酸オキシダーゼ)
200IU/mL カタラーゼ
2.4IU/mL AOD(アスコルビン酸オキシダーゼ)
0.5mM カタラーゼ安定化剤(本発明の一般式[1]で示される化合物)
50 mM PIPES buffer (pH 7.0)
30IU / mL GK (glycerol kinase)
10mM magnesium chloride
4.0 mM ATP (adenosine-5'-diphosphate disodium salt)
3.8 IU / mL GPO (glycerol-3-phosphate oxidase)
200IU / mL catalase
2.4IU / mL AOD (ascorbate oxidase)
0.5 mM catalase stabilizer (compound represented by the general formula [1] of the present invention)

(2)カタラーゼ安定化効果の検討
(1)の検討用試薬を0.1mM りん酸緩衝液(pH 7.0)で50倍希釈して調製したサンプル液 0.5mLを、30℃で、5分間予備加温した。次いで30℃で予備加温した0.4% 過酸化水素(H)水溶液 0.5mLを添加し反応をスタートさせた。5分後、0.1mM 過塩素酸(HClO)水溶液 2.5mLを添加し反応を停止させ、OD240nmを測定した(ODtest)。ブランク(盲検)として、0.4% H水溶液 0.5mLを30℃で、5分間加温したものに、0.1mM HClO水溶液 2.5mmLを添加し、最後にサンプル液 0.5mL加えたもののOD240nmを測定した(ODblank)。
ODtestとODblankとから、以下の計算式よりカタラーゼ活性を算出した。
(2) Examination of catalase stabilization effect 0.5 mL of sample solution prepared by diluting the reagent for examination in (1) 50-fold with 0.1 mM phosphate buffer (pH 7.0) is pre-warmed at 30 ° C for 5 minutes did. Subsequently, 0.5 mL of 0.4% hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) aqueous solution pre-warmed at 30 ° C. was added to start the reaction. After 5 minutes, 2.5 mL of 0.1 mM perchloric acid (HClO 4 ) aqueous solution was added to stop the reaction, and OD 240 nm was measured (OD test ). As a blank (blind test), 0.5 mL of 0.4% H 2 O 2 aqueous solution was heated at 30 ° C. for 5 minutes, 2.5 mm L of 0.1 mM HClO 4 aqueous solution was added, and finally OD of 0.5 mL sample solution was added. 240 nm was measured (OD blank ).
Catalase activity was calculated from OD test and OD blank by the following formula.

カタラーゼ(IU/mL)= △OD(OD test −OD blank )× 3.5 × 50
0.04 × 0.5 × 1.0 × 5
Catalase (IU / mL) = △ OD (OD test −OD blank ) × 3.5 × 50
0.04 x 0.5 x 1.0 x 5

3.5 :反応総液量(mL)
50 :希釈倍率
0.04:H22ミリモル吸光係数
0.5 :サンプル液量(mL)
1.0 :光路長(cm)
5 :反応時間(分)
試薬調製直後のカタラーゼ活性を100%とした場合の検討用試薬中のカタラーゼ活性残存率(%)を求めた結果を表1に示す。
3.5: Total reaction volume (mL)
50: Dilution ratio
0.04: H 2 O 2 mmol extinction coefficient
0.5: Sample liquid volume (mL)
1.0: Optical path length (cm)
5: Reaction time (minutes)
Table 1 shows the results of the determination of the remaining rate (%) of catalase activity in the examination reagent when the catalase activity immediately after preparation of the reagent is 100%.

Figure 0004640400
Figure 0004640400

表1の結果から明らかなように、本発明に係る安定化剤を添加すると、無添加の場合と比較して、カタラーゼを安定化し得ることが判る。特にN-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン(本発明の一般式[2]で示される化合物に相当。)は、カタラーゼを安定化させる効果が最も高い。即ち、本発明に係る安定化剤、中でもN-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリンは、優れたカタラーゼ安定化効果を奏するものである。   As is apparent from the results in Table 1, it can be seen that when the stabilizer according to the present invention is added, catalase can be stabilized as compared with the case where no stabilizer is added. In particular, N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline (corresponding to the compound represented by the general formula [2] of the present invention) has the highest effect of stabilizing catalase. That is, the stabilizer according to the present invention, particularly N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline, exhibits an excellent catalase stabilizing effect.

実施例3.中性脂肪(トリグリセリド)の測定
日立7170形自動分析装置 〔(株)日立製作所製〕を使用して、本発明の測定用試薬を用いて、血清中の中性脂肪(トリグリセリド、TG)量を測定した。
〔試料〕
新鮮ヒト血清10検体
〔試薬〕
第1試薬;GK(グリセロールキナーゼ) 30IU/mL、塩化マグネシウム 10mM、、ATP(アデノシン-5'-三りん酸二ナトリウム) 4.0mM、GPO(グリセロール-3-りん酸オキシダーゼ) 3.8IU/mL、カタラーゼ 200IU/mL、AOD(アスコルビン酸オキシダーゼ) 2.4IU/mL、N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン 0.5mMを含有するPIPES緩衝液 50mM(pH 7.0)を第1試薬とした。
第2試薬;LPL(リポプロテインリパーゼ) 150IU/mL、POD(ペルオキシダーゼ) 13.5IU/mL、4−AA(4−アミノアンチピリン) 3.4mM、アジ化ナトリウム 0.1(w/v)%を含有するPIPES緩衝液(pH 7.1) 50mMを第2試薬とした。
Example 3 Measurement of neutral fat (triglyceride) Using the Hitachi 7170 automatic analyzer [manufactured by Hitachi, Ltd.], the amount of neutral fat (triglyceride, TG) in the serum was determined using the measurement reagent of the present invention. It was measured.
〔sample〕
10 samples of fresh human serum [reagents]
First reagent: GK (glycerol kinase) 30 IU / mL, magnesium chloride 10 mM, ATP (adenosine-5′-triphosphate disodium) 4.0 mM, GPO (glycerol-3-phosphate oxidase) 3.8 IU / mL, catalase PIPES buffer solution 50 mM (pH 7.0) containing 200 IU / mL, AOD (ascorbate oxidase) 2.4 IU / mL, N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline 0.5 mM was used as the first reagent. did.
Second reagent; PIPES buffer containing LPL (lipoprotein lipase) 150 IU / mL, POD (peroxidase) 13.5 IU / mL, 4-AA (4-aminoantipyrine) 3.4 mM, sodium azide 0.1 (w / v)% Solution (pH 7.1) 50 mM was used as the second reagent.

〔測定条件〕
測定パラメータを以下のように設定して測定を行った。
(分析)
分析法/反応時間;[2ポイントエンド][10]
測定ポイント ;[16][34][0][0]
波長(副/主);[700][600]
検体量 ;[2.0]
試薬分注量(R1);[180]
試薬分注量(R2);[0]
試薬分注量(R3);[90]
試薬分注量(R4);[0]
(キャリブ)
キャリブレーション法;[リニア]
ポイント/スパンポイント;[2][2]
収束許容吸光度;[999.9]
ばらつき許容吸光度;[500]
感度許容吸光度;[0]
〔Measurement condition〕
Measurement was performed with the measurement parameters set as follows.
(analysis)
Analytical method / reaction time; [2 point end] [10]
Measurement point: [16] [34] [0] [0]
Wavelength (Sub / Main); [700] [600]
Specimen amount; [2.0]
Reagent dispensing volume (R1); [180]
Reagent dispensing volume (R2); [0]
Reagent dispensing volume (R3); [90]
Reagent dispensing volume (R4); [0]
(Caribbean)
Calibration method: [Linear]
Point / span point; [2] [2]
Convergence acceptable absorbance; [999.9]
Variation acceptable absorbance; [500]
Sensitivity allowable absorbance; [0]

〔結果〕
結果を表2に示す。
〔result〕
The results are shown in Table 2.

参考例1.
実施例3で用いたヒト血清10検体について、市販のTG測定用試薬〔LタイプワコーTG・H 酵素発色液A及びB:和光純薬工業(株)製〕を用いて、同様にTG量を測定した。
〔測定条件〕
実施例3と同様。
〔結果〕
結果を表2に併せて示す。
Reference Example 1
Using 10 commercially available reagents for TG measurement [L type Wako TG / H enzyme coloring solution A and B: manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.], the amount of TG was similarly determined for 10 human serum samples used in Example 3. It was measured.
〔Measurement condition〕
Same as Example 3.
〔result〕
The results are also shown in Table 2.

Figure 0004640400
Figure 0004640400

表2の結果から、実施例3に於ける本発明の測定試薬によるトリグリセリド(TG)測定値は、参考例1に於ける市販の試薬によるTG測定値と良好な相関を示すこと、言い換えれば、本発明のカタラーゼ安定化剤は測定値に影響を与えないことが判る。   From the results in Table 2, the triglyceride (TG) measurement value by the measurement reagent of the present invention in Example 3 shows a good correlation with the TG measurement value by the commercially available reagent in Reference Example 1, in other words, It can be seen that the catalase stabilizer of the present invention does not affect the measured value.

このように、本発明に係る生体試料中の成分測定用試薬は、市販の測定用試薬と同等の測定を行うことが可能である。   Thus, the component measurement reagent in the biological sample according to the present invention can perform the same measurement as that of a commercially available measurement reagent.

実施例1で得られた、N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン ナトリウム塩のIRスペクトルを測定した結果を示す。The result of having measured the IR spectrum of the sodium salt of N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline obtained in Example 1 is shown. 実施例1で得られた、N-(3-スルホプロピル)-3-メトキシ-5-メチルアニリン ナトリウム塩のH-NMRスペクトルを測定した結果を示す。The result of having measured the 1 H-NMR spectrum of N- (3-sulfopropyl) -3-methoxy-5-methylaniline sodium salt obtained in Example 1 is shown.

Claims (15)

一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)とカタラーゼとを含んでなる過酸化水素消去用組成物。
General formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 A composition for eliminating hydrogen peroxide comprising a compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) and catalase.
過酸化水素に、一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下、カタラーゼを作用させることを特徴とする、過酸化水素を消去する方法。
Hydrogen peroxide has the general formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 Which eliminates hydrogen peroxide, characterized by allowing catalase to act in the presence of a compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline). how to.
一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)とカタラーゼとを含んでなる生体試料中の成分測定用試薬。
General formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 A reagent for measuring a component in a biological sample, comprising a compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) and catalase.
生体試料が、測定対象である当該成分以外に測定妨害成分を含有し、且つこの妨害成分がそれから過酸化水素を発生せしめることにより消去されるものである、請求項3に記載の試薬。 The reagent according to claim 3, wherein the biological sample contains a measurement interfering component in addition to the component to be measured, and the interfering component is eliminated by generating hydrogen peroxide therefrom. 更に、生体試料中に共存する測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分を含んでなる、請求項4に記載の試薬。 Furthermore, the reagent of Claim 4 which comprises the component which has the effect | action which eliminates the measurement interfering component which coexists in a biological sample by generating hydrogen peroxide from it. 当該測定対象成分が、中性脂肪、クレアチニン、HDL−コレステロール又はLDL−コレステロールである、請求項5に記載の試薬。 The reagent according to claim 5 , wherein the component to be measured is neutral fat, creatinine, HDL-cholesterol or LDL-cholesterol. 当該測定対象成分が中性脂肪であり、当該測定妨害成分が遊離グリセリンであり、且つそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分がグリセロールキナーゼ(GK)、Mg2+、アデノシン 5'-三りん酸(ATP)及びグリセロール-3-りん酸オキシダーゼ(GPO)からなるものである、請求項5に記載の試薬。 The measurement target component is neutral fat, the measurement interfering component is free glycerin, and components having an action of eliminating hydrogen peroxide from glycerol kinase (GK), Mg 2+ , adenosine 5 ′ The reagent according to claim 5 , which comprises triphosphate (ATP) and glycerol-3-phosphate oxidase (GPO). 当該測定対象成分がクレアチニンであり、当該測定妨害成分がクレアチンであり、且つそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分がクレアチナーゼ及びザルコシンオキシダ−ゼからなるものである、請求項5に記載の試薬。 A the measurement target component is creatinine, are the measured interference components creatine, component having an effect of erasing by causing and generating hydrogen peroxide therefrom creatinase and sarcosine oxy da - is made of zero, claims 5. The reagent according to 5 . 当該測定対象成分がHDL−コレステロールであり、当該測定妨害成分がHDL−コレステロール以外のコレステロールであり、且つそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分がコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼからなるものである、請求項5に記載の試薬。 The measurement target component is HDL-cholesterol, the measurement interfering component is cholesterol other than HDL-cholesterol, and the component having an action of eliminating it by generating hydrogen peroxide therefrom comprises cholesterol esterase and cholesterol oxidase The reagent according to claim 5 , wherein 当該測定対象成分がLDL−コレステロールであり、当該測定妨害成分がLDL−コレステロール以外のコレステロールであり、且つそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分がコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼからなるものである、請求項5に記載の試薬。 The measurement target component is LDL-cholesterol, the measurement interfering component is cholesterol other than LDL-cholesterol, and the component having an action of eliminating hydrogen peroxide from it is composed of cholesterol esterase and cholesterol oxidase The reagent according to claim 5 , wherein 当該測定妨害成分がアスコルビン酸であり、それから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分がアスコルビン酸オキシダーゼである、請求項5に記載の試薬。 The reagent according to claim 5 , wherein the measurement interfering component is ascorbic acid, and the component having an action of eliminating hydrogen by generating hydrogen peroxide is ascorbic acid oxidase. 一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下にカタラーゼを用いることを特徴とする、生体試料中の成分測定方法。
General formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 Component measurement in a biological sample, characterized by using catalase in the presence of a compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) Method.
生体試料が、測定対象である当該成分以外に測定妨害成分を含有し、且つこの妨害成分がそれから過酸化水素を発生せしめることにより消去されるものである、請求項12に記載の方法。 The method according to claim 12 , wherein the biological sample contains a measurement interfering component in addition to the component to be measured, and the interfering component is eliminated by generating hydrogen peroxide therefrom. 一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)の存在下、生体試料中に、当該試料中の測定妨害成分から過酸化水素を発生せしめることにより消去し得る成分とカタラーゼとを接触させ、次いで測定対象成分を測定することを特徴とする、生体試料中の成分測定方法。
General formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 In the presence of a compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline), a peroxidation from a measurement interfering component in the sample is carried out. A method for measuring a component in a biological sample, which comprises contacting a component that can be eliminated by generating hydrogen with catalase and then measuring the component to be measured.
一般式[1]
Figure 0004640400
(式中、n個のRは、夫々独立して水素原子、炭素数1〜6のアルキル基、炭素数1〜6のアルコキシ基又はハロゲン原子を表し、Rは、水素原子、炭素数1〜6のアルキル基又は炭素数1〜6のアルコキシ基を表し、R炭素数1〜10のアルキレン基を表し、Mは水素原子、アルカリ金属又はアンモニウムイオンを表し、nは1〜5の整数を表す。)で示される化合物(N−エチル−N−(3−スルホプロピル)−3−メチルアニリンを除く)、カタラーゼ及び生体試料中に共存する測定妨害成分をそれから過酸化水素を発生させることにより消去する作用を有する成分とを含んでなる第1試液と、カタラーゼ阻害剤を含んでなる第2試液とからなる、生体試料中の成分測定用キット。
General formula [1]
Figure 0004640400
(In the formula, n R 1 s each independently represent a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, or a halogen atom, and R 2 represents a hydrogen atom or carbon number. R 1 represents an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms or an alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms , R 3 represents an alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, M represents a hydrogen atom, an alkali metal, or an ammonium ion, and n represents 1 to 5 A compound represented by (except for N-ethyl-N- (3-sulfopropyl) -3-methylaniline) , catalase and a measurement interfering component coexisting in a biological sample, and hydrogen peroxide is generated therefrom. A kit for measuring a component in a biological sample, comprising: a first test solution comprising a component having an action of eliminating the first test solution and a second test solution comprising a catalase inhibitor.
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