JP2019094307A - β-D-GLUCOPYRANOSYL-(1→1)-D-FRUCTOSE AND USE THEREFOR - Google Patents

β-D-GLUCOPYRANOSYL-(1→1)-D-FRUCTOSE AND USE THEREFOR Download PDF

Info

Publication number
JP2019094307A
JP2019094307A JP2017226715A JP2017226715A JP2019094307A JP 2019094307 A JP2019094307 A JP 2019094307A JP 2017226715 A JP2017226715 A JP 2017226715A JP 2017226715 A JP2017226715 A JP 2017226715A JP 2019094307 A JP2019094307 A JP 2019094307A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
fructose
glucopyranosyl
glucose
food
mass
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2017226715A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP6588071B2 (en
Inventor
健太 相沢
Kenta Aizawa
健太 相沢
宏基 高木
Hiromoto Takagi
宏基 高木
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Japan Maize Products Co Ltd
Nihon Shokuhin Kako Co Ltd
Original Assignee
Japan Maize Products Co Ltd
Nihon Shokuhin Kako Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Japan Maize Products Co Ltd, Nihon Shokuhin Kako Co Ltd filed Critical Japan Maize Products Co Ltd
Priority to JP2017226715A priority Critical patent/JP6588071B2/en
Publication of JP2019094307A publication Critical patent/JP2019094307A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP6588071B2 publication Critical patent/JP6588071B2/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

To provide a novel disaccharide with glucose and fructose heled by glycosidic linkage.SOLUTION: The present invention provides β-D-glucopyranosyl-(1→1)-D-fructose. The β-D-glucopyranosyl-(1→1)-D-fructose is preferably crystaline one. The present invention also provides a food and drink composition containing β-D-glucopyranosyl-(1→1)-D-fructose, and a pharmaceutical composition. The present invention further provides a taste improver containing β-D-glucopyranosyl-(1→1)-D-fructose as an active ingredient, and an intestinal bacterial flora improver.SELECTED DRAWING: Figure 7

Description

本発明は、新規な二糖であるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトース及びその用途に関する。   The present invention relates to a novel disaccharide, β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof.

単糖2分子がグリコシド結合を形成して1分子となった糖のことを二糖という。主に知られている二糖として、グルコースとフルクトースが結合したスクロース、ガラクトースとフルクトースが結合したラクツロース、グルコース2分子が結合したマルトース、トレハロース等が挙げられる。   A sugar in which two monosaccharide molecules form a glycosidic bond to form one molecule is called a disaccharide. The mainly known disaccharides include sucrose in which glucose and fructose are bound, lactulose in which galactose and fructose are bound, maltose in which two glucose molecules are bound, and trehalose.

上記スクロースはグルコースとフルクトースがα−1,2グリコシド結合したものであるが、このようにグルコースとフルクトースが結合した二糖としては他にも、α−1,6−グリコシド結合したパラチノース(イソマルツロース)、α−1,3−グリコシド結合したツラノース、α−1,4−グリコシド結合したマルツロースが知られている。   The above-mentioned sucrose is an α-1, 2 glycosidic bond of glucose and fructose, and as a disaccharide in which glucose and fructose are bonded in this manner, α-1, 6-glycosidic-linked palatinose (isomalt (Loose), α-1,3-glycosidic linked turanose, α-1,4-glycosidic linked maltulose are known.

また、この他にもグルコースとフルクトースがグリコシド結合した二糖に関して報告例がある(特許文献1〜特許文献4)。   In addition to this, there are reports on disaccharides in which glucose and fructose are glycosidically linked (Patent Document 1 to Patent Document 4).

特許第4583505号公報Patent 4583505 gazette 特許第4485602号公報Patent No. 4485602 特許第4674828号公報Patent No. 4674828 特許第4684361号公報Patent No. 4684361

しかしながら、グルコースとフルクトースがβ−1,1−グリコシド結合した、つまり、グルコースの1位とフルクトースの1位がβ結合した二糖については報告例がない。   However, there has been no reported example of a disaccharide in which glucose and fructose are β-1, 1-glycosidic linked, that is, 1 position of glucose and 1 position of fructose are β linked.

したがって、本発明の目的は、グルコースとフルクトースがグリコシド結合した新規な二糖を提供することにある。   Therefore, an object of the present invention is to provide a novel disaccharide in which glucose and fructose are glycosidically linked.

本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、グルコースとフルクトースを基質としβ−グルコシダーゼを作用させて得られた生成物中より、新規な二糖であるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of earnest studies to achieve the above object, the present inventors have found that among the products obtained by acting glucose and fructose as a substrate and causing β-glucosidase to act, β-D-glucopyranosyl, which is a novel disaccharide, We found (1 → 1) -D-fructose and completed the present invention.

すなわち、本発明は、下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを提供するものである。   That is, the present invention provides β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose represented by the following formula (1).

Figure 2019094307
Figure 2019094307

本発明の好ましい態様においては、結晶状の上記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを提供する。   In a preferred embodiment of the present invention, a crystalline β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose represented by the above formula (1) is provided.

また、本発明は、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを含有することを特徴とする飲食品用組成物を提供するものである。   The present invention also provides a composition for food and drink characterized by containing β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose.

本発明の飲食品用組成物は、前記β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを0.5質量%以上含有することが好ましい。   The composition for food and drink of the present invention preferably contains 0.5% by mass or more of the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose.

更に、本発明は、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを含有することを特徴とする医薬品用組成物を提供するものである。   Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose.

本発明の医薬品用組成物は、前記β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを0.5質量%以上含有することが好ましい。   The pharmaceutical composition of the present invention preferably contains 0.5% by mass or more of the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose.

更にまた、本発明は、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを有効成分として含有することを特徴とする呈味改善剤を提供するものである。   Furthermore, the present invention provides a taste improving agent characterized by containing β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose as an active ingredient.

更にまた、本発明は、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを有効成分として含有することを特徴とする腸内菌叢改善剤を提供するものである。   Furthermore, the present invention provides an intestinal flora improving agent characterized by containing β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose as an active ingredient.

本発明によれば、グルコースの1位とフルクトースの1位がβ結合した新規な二糖であるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを提供することができる。   According to the present invention, it is possible to provide β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose which is a novel disaccharide in which position 1 of glucose and position 1 of fructose are β-linked.

β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースは、苦味を有する難消化性糖質であることから、飲食品用組成物、及び医薬品用組成物として有用である。   Since β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose is a bitter-digestible indigestible carbohydrate, it is useful as a composition for food and drink, and a composition for medicine.

特に、苦味を呈することから、呈味改善剤の有効成分として有用であり、難消化性糖質であることから、腸内菌叢改善剤の有効成分として有用である。   In particular, since it exhibits a bitter taste, it is useful as an active ingredient of a taste improving agent, and since it is a nondigestible carbohydrate, it is useful as an active ingredient of an intestinal flora improving agent.

また、本発明のβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースは、水への溶解度が低く容易に結晶化させることができるため、比較的簡単に高純度物を得ることができる。   In addition, the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose of the present invention has low solubility in water and can be easily crystallized, so a high purity product can be obtained relatively easily. .

製造例1で得られた結晶の質量検出器分析チャートを示す図である。It is a figure which shows the mass detector analysis chart of the crystal obtained by manufacture example 1. FIG. 製造例1で得られた結晶のH−NMRスペクトルのチャートを示す図である。It is a figure which shows the chart of the < 1 > H-NMR spectrum of the crystal obtained by the example 1 of manufacture. 製造例1で得られた結晶の13C−NMRスペクトルのチャートを示す図である。It is a figure which shows the chart of the < 13 > C-NMR spectrum of the crystal obtained by the example 1 of manufacture. 製造例1で得られた結晶のH−HCOSYスペクトルのチャートを示す図である。It is a figure which shows the chart of the H-HCOSY spectrum of the crystal obtained by manufacture example 1. FIG. 製造例1で得られた結晶のE−HSQCスペクトルのチャートを示す図である。It is a figure which shows the chart of the E-HSQC spectrum of the crystal obtained by manufacture example 1. FIG. 製造例1で得られた結晶のHMBCスペクトルのチャートを示す図である。It is a figure which shows the chart of the HMBC spectrum of the crystal obtained by manufacture example 1. FIG. 製造例1で得られたサンプルの主成分であるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースの構造式(β−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトピラノース型)を示す図である。Structural formula (β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructo) of β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose which is the main component of the sample obtained in Preparation Example 1 (A pyranose type). β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースとスクロースの人工胃液での残存率を示す図である。It is a figure which shows the residual ratio in artificial gastric juice of (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose and sucrose. β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースとスクロースの消化酵素での残存率を示す図である。It is a figure which shows the persistence by the digestive enzyme of (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose and sucrose. B. catenulatum JCM 1194を用いた、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースとスクロースとフルクトオリゴ糖の資化性試験を示す図である。It is a figure which shows the assimilation test of (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose, sucrose, and fructooligosaccharide using B. catenulatum JCM 1194. FIG. B. longum subsp. Longum JCM1217を用いた、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースとスクロースとフルクトオリゴ糖の資化性試験を示す図である。It is a figure which shows the assimilation test of (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose, sucrose, and fructooligosaccharide using B. longum subsp. Longum JCM1217. B. adolecentis JCM1275を用いた、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースとスクロースとフルクトオリゴ糖の資化性試験を示す図である。It is a figure which shows the assimilability test of (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose, sucrose, and fructo-oligosaccharide using B. adolecentis JCM1275.

本発明の下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトース(以下、「Gβ1−1F」ともいう。)は、グルコースの1位とフルクトースの1位がβ結合した二糖である。   In the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose (hereinafter also referred to as “Gβ1-1F”) represented by the following formula (1) of the present invention, the 1-position of glucose and the 1-position of fructose are It is a β-linked disaccharide.

Figure 2019094307
Figure 2019094307

本発明のGβ1−1Fの製造方法は特に制限はなく、酵素合成、化学合成、分解、抽出など様々な手法を用いることができるが、その簡便性や製造コスト等の点から、D−グルコース(以下、「グルコース」ともいう。)及びD−フルクトース(以下、「フルクトース」ともいう。)を含む糖質原料に酵素を作用させて製造することが好ましい。この場合に用いる酵素としてはβ−グルコシダーゼであることが好ましい。   The method for producing Gβ1-1F of the present invention is not particularly limited, and various methods such as enzyme synthesis, chemical synthesis, decomposition, extraction and the like can be used, but D-glucose ( Hereinafter, it is preferable that the enzyme is caused to act on a carbohydrate raw material containing "glucose".) And D-fructose (hereinafter also referred to as "fructose"). The enzyme used in this case is preferably β-glucosidase.

原料とするグルコースとフルクトースは、グルコース及びフルクトースを含有するものであれば特に制限はなく、グルコース及びフルクトースを任意で混合したものでもよく、例えば、スクロース等のグルコースとフルクトースとを構成糖として含む糖質を分解することにより生成させたものでもよく、例えば異性化酵素等の触媒によりグルコースまたはフルクトースをもう一方の糖質に異性化することにより生成させたものでもよい。このような糖として、入手のしやすさやコスト等を考慮すると、異性化糖(ブドウ糖果糖液糖、果糖ブドウ糖液糖、高果糖液糖)や転化糖を用いるのが好ましい。   Glucose and fructose as raw materials are not particularly limited as long as they contain glucose and fructose, and may be an arbitrary mixture of glucose and fructose, for example, a sugar containing glucose such as sucrose and fructose as a constituent sugar It may be produced by degrading the quality, for example, it may be produced by isomerizing glucose or fructose to the other carbohydrate with a catalyst such as an isomerase. As such sugars, it is preferable to use isomerized sugars (glucose fructose sugar, fructose glucose sugar, high fructose liquid sugar) and invert sugar in consideration of availability and cost.

用いるグルコースとフルクトースの質量比は、固形分換算でグルコースとフルクトースの質量比が0.1:10〜10:0.1とするのが好ましく、1:10〜10:1とするのがより好ましく、1:4〜4:1とするのがさらに好ましい。   The mass ratio of glucose to fructose to be used is preferably such that the mass ratio of glucose to fructose is 0.1: 10 to 10: 0.1 in terms of solid content, and more preferably 1:10 to 10: 1. And 1: 4 to 4: 1 are more preferable.

用いるβ−グルコシダーゼとしては、特に制限はなく、種々の起源の酵素を用いることができる。例えば、アーモンド由来、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)由来、トリコデルマ・リーゼイ(Trichoderma reesei)由来のβ−グルコシダーゼを用いることができ、培養した微生物などから分離精製した酵素を用いてもよく、市販の酵素製剤を用いてもよい。酵素製剤としてはβ-グルコシダーゼ製剤だけでなく、β-グルコシダーゼが混在したセルラーゼ製剤等を用いることもできる。   There is no restriction | limiting in particular as (beta) -glucosidase to be used, The enzyme of various origin can be used. For example, β-glucosidase derived from almond, Aspergillus niger, Trichoderma reesei may be used, or enzymes separated and purified from cultured microorganisms may be used, and commercially available enzymes A formulation may be used. As the enzyme preparation, not only the β-glucosidase preparation but also a cellulase preparation in which β-glucosidase is mixed can be used.

グルコースとフルクトースにβ−グルコシダーゼを作用させる条件としては、用いるβ−グルコシダーゼの至適条件などを考慮して適宜設定することができる。例えば、グルコース及びフルクトースを含有し、固形分濃度が好ましくは30〜90質量%、より好ましくは50〜80質量%である水溶液を調製し、pHを好ましくは4.0〜8.0、より好ましくは5.0〜7.0とし、上記固形分1g当たり、好ましくは0.1〜1000mg、より好ましくは1〜250mgとなるようにβ−グルコシダーゼを添加し、好ましくは30〜80℃、より好ましくは50〜70℃にて、好ましくは1〜100時間、より好ましくは24〜72時間保持することで作用させることができる。なお、上記水溶液の固形分当たりのグルコース及びフルクトースの合計含量は30質量%以上であることが好ましく、50質量%以上であることがより好ましく、70質量%以上であることがさらに好ましい。   The conditions for causing β-glucosidase to act on glucose and fructose can be appropriately set in consideration of the optimum conditions of β-glucosidase used and the like. For example, an aqueous solution containing glucose and fructose and having a solid concentration of preferably 30 to 90% by mass, more preferably 50 to 80% by mass, is prepared, and the pH is preferably 4.0 to 8.0, more preferably Is preferably 5.0 to 7.0, and preferably 0.1 to 1000 mg, more preferably 1 to 250 mg, per 1 g of the solid content, preferably 30 to 80 ° C., more preferably 30 to 80 ° C. Can be acted by holding at 50 to 70 ° C., preferably for 1 to 100 hours, more preferably for 24 to 72 hours. The total content of glucose and fructose per solid content of the aqueous solution is preferably 30% by mass or more, more preferably 50% by mass or more, and still more preferably 70% by mass or more.

グルコースとフルクトースにβ−グルコシダーゼを作用させて得られたGβ1−1F含有組成物は、液状のままであってもよいが、噴霧乾燥などの公知の方法により粉末状とすることができる。   The Gβ1-1F-containing composition obtained by causing β-glucosidase to act on glucose and fructose may remain in a liquid state, but can be powdered by a known method such as spray drying.

また、Gβ1−1F含有組成物は、必要に応じて、ろ過、脱色、脱臭、脱塩などの精製処理を常法により施すことができる。また、抽出、遠心分離、晶出、微生物資化、更に活性炭、多孔質担体、疎水性樹脂、親水性樹脂、イオン交換樹脂、吸着樹脂等を利用したクロマトグラフィーによる分画、透析、限界ろ過等の膜分画等の処理を施してGβ1−1Fの純度を高めることができる。   In addition, the Gβ1-1F-containing composition can be subjected to a purification treatment such as filtration, decolorization, deodorization, desalting and the like by a conventional method, as necessary. In addition, extraction, centrifugation, crystallization, microbial assimilation, further fractionation by chromatography using activated carbon, porous carrier, hydrophobic resin, hydrophilic resin, ion exchange resin, adsorption resin, etc., dialysis, ultrafiltration, etc. The treatment of membrane fractionation or the like can be performed to increase the purity of G.beta..sub.1-1F.

本発明のGβ1−1Fは、結晶状(結晶化した状態)であってもよい。結晶状とする方法としては、特に制限はなく、温度低下、濃縮、溶媒添加(エタノール、メタノール、アセトンなど)などによる方法が挙げられる。特に、Gβ1−1Fは水溶液中での溶解度が低いことから、Gβ1−1F含有組成物を冷却及び/又は濃縮することで容易に結晶化することが可能である。このように、Gβ1−1Fを結晶化することによって、比較的容易にGβ1−1Fの純度が高いものを得ることができる。   The Gβ1-1F of the present invention may be in a crystalline form (in a crystallized state). There is no particular limitation on the method of crystal formation, and methods such as temperature reduction, concentration, solvent addition (ethanol, methanol, acetone, etc.) and the like can be mentioned. In particular, Gβ1-1F can be easily crystallized by cooling and / or concentrating a Gβ1-1F-containing composition because the solubility in an aqueous solution is low. Thus, by crystallizing Gβ1-1F, it is possible to relatively easily obtain Gβ1-1F having a high purity.

本発明のGβ1−1Fは、高純度化されたものとして利用することもできるが、Gβ1−1Fを含有する糖組成物として利用することもできる。この場合、糖組成物中に含まれるGβ1−1Fの含有量は、特に制限はないが、例えば、固形分あたり0.5質量%以上とすることが好ましく、1質量%以上とすることがより好ましく、2質量%以上とすることがさらに好ましく、3質量%以上とすることが最も好ましい。固形分あたりのGβ1−1Fの含有量が0.5質量%未満では、Gβ1−1Fの特徴を十分に付与することができないというデメリットがある。   The Gβ1-1F of the present invention can also be used as a highly purified product, but can also be used as a sugar composition containing Gβ1-1F. In this case, the content of Gβ1-1F contained in the sugar composition is not particularly limited, but is preferably, for example, 0.5% by mass or more per solid content, and more preferably 1% by mass or more Preferably, it is more preferably 2% by mass or more, and most preferably 3% by mass or more. If the content of Gβ1-1F per solid content is less than 0.5% by mass, there is a disadvantage that the characteristics of Gβ1-1F can not be sufficiently imparted.

なお、Gβ1−1Fは主にβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトピラノースとして存在するが、後述の通り鎖状構造を介して構造が変化し、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−α−D−フルクトピラノース、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−α−D−フルクトフラノース、及びβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトフラノースとしても微量に存在する。   Gβ 1-1 F is mainly present as β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructopyranose, but as described later, the structure changes via a chain-like structure, β-D- Glucopyranosyl- (1 → 1) -α-D-fructopyranose, β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -α-D-fructofuranose, and β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β It is also present in trace amounts as D-fructofuranose.

本発明のGβ1−1F、又はそれを含有する糖組成物は、飲食品用組成物として利用することができる。対象となる飲食品としては、特に制限はなく、食することが可能なあらゆる飲食品を挙げることができる。例えば、下記飲食品が挙げられる。   Gβ1-1F of the present invention, or a sugar composition containing the same can be used as a composition for food and drink. There is no restriction | limiting in particular as food-drinks used as object, All food-drinks which can be eaten can be mentioned. For example, the following food and drink are mentioned.

・ノンアルコール飲料(果汁含有飲料、果汁ジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、アイソトニック飲料、アミノ酸飲料、スポーツ飲料、コーヒー、カフェオレ、ココア飲料、茶系飲料、乳酸菌飲料、乳飲料、栄養ドリンク、ノンアルコールビール、ノンアルコールチューハイ、ノンアルコールカクテル、ニアウォーター、フレーバーウォーターなど)、アルコール飲料(ビール、発泡酒、リキュール、チューハイ、清酒、ワイン、果実酒、カクテル、蒸留酒など)などの飲料類
・アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、かき氷、フラッペ、フローズンヨーグルト、ゼリー 、プリン、ババロア、水羊羹などの冷菓類
・水飴、果実のシロップ漬、氷みつ、チョコレートシロップ、カラメルシロップなどのシロップ類
・フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、バタークリーム、カスタードクリームなどのペースト類
・マーマレード、フルーツソース、ブルーベリージャム、苺ジャムなどのジャム類
・食パン、ロールパン、ブリオッシュ、蒸しパン、あんパン、クリームパンなどのパン類
・ビスケット、クラッカー、クッキー、ワッフル、マフィン、スポンジケーキ、パイなどの焼菓子類
・シュークリーム、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、ヌガー、キャンディなどの洋菓子類
・せんべい、あられ、おこし、求肥、餅類、まんじゅう、大福、ういろう、餡類、錦玉、カステラ、飴玉などの和菓子類
・醤油、魚醤、味噌、ひしお、マヨネーズ、ドレッシング、三杯酢、天つゆ、麺つゆ、ウスターソース、オイスターソース、ケチャップ、焼き鳥のタレ、焼き肉のタレ、漬け込みタレ、甘味料、粉飴、食酢、すし酢、カレールウ、中華の素、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルソルト、テーブルシュガーなどの各種調味料類
・パスタソース、ミートソース、トマトソース、ホワイトソース、デミグラスソース、カレーソース、ハヤシソース、グレービーソース、ハンバーグソース、サルサソース、ステーキソースなどのソース類
・糠漬け、粕漬け、味噌漬け、福神漬け、べったら漬、奈良漬け、千枚漬、梅干しなどの漬物類
・たくわん漬の素、白菜漬の素、キムチの素などの漬物の素
・ハム、ベーコン、ソーセージ、ハンバーグ、ミートボールなどの畜肉製品類
・魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ、チクワ、干物などの魚肉製品類
・塩ウニ、カラスミ、塩辛、なれずし、酢コンブ、さきするめ、田麩などの各種珍味類
・海苔、山菜、するめ、小魚、貝などで製造される佃煮類
・煮豆、煮魚、ポテトサラダ、コンブ巻などの惣菜食品
・乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜などの瓶詰類や缶詰類
・天ぷら、トンカツ、フリッター、唐揚げ、竜田揚げなどの揚げ物用衣類
・うどん、そば、中華麺、パスタ、春雨、ビーフン、餃子の皮、シューマイの皮などの麺類
・プリンミックス、ホットケーキミックス、即席ジュース、即席コーヒー、即席汁粉、即席スープなどの即席食品類。
Non-alcoholic beverages (fruit juice-containing beverages, fruit juices, vegetable juices, carbonated beverages, isotonic beverages, amino acid beverages, sports beverages, coffee, coffee, coffee beverages, cocoa beverages, tea beverages, lactic acid bacteria beverages, milk beverages, nutritional drinks, non-alcoholic beverages Beverages such as beer, non-alcohol chuihi, non-alcoholic cocktail, near water, flavored water, etc., alcoholic beverages (beer, low-malt beer, liqueur, chuihai, sake, wine, fruit liquor, cocktail, distilled liquor etc.) ・ Ice cream Iced candy, sherbet, shaved ice, flappe, frozen yogurt, jelly, pudding, bavaroa, frozen sweet potato such as water gourd-Water syrup, pickled syrup, ice syrup, chocolate syrup, caramel syrup syrup, etc.-Flower pe Pastes such as peanut paste, fruit paste, butter cream, custard cream, etc.-Jams such as marmalade, fruit sauce, blueberry jam, strawberry jam, etc.-Bread such as bread, rolls, brioche, steamed bread, bean paste, cream bread, etc.・ Biscuits, crackers, cookies, waffles, muffins, sponge cakes, pies, etc. • Creams such as puffs, donuts, chocolates, chewing gum, caramel, nougat, candy such as confections • Rice crackers, hail, scalding, fertilizers, potatoes , Manju, Daifuku, Uiro, Japanese sweets such as jasper, castella, jasper, soy sauce, fish sauce, fish paste, miso, hiyashi, mayonnaise, dressing, three cups vinegar, tempura soup, noodle soup, worcester sauce, oyster sauce, Chap, grilled chicken sauce, grilled pork sauce, pickled sauce, sweet potato, spice, vinegar, sushi vinegar, calairue, Chinese ingredients, stew ingredients, soup ingredients, dumpling ingredients, combined seasonings, mirin, new mirin, Table salt, various condiments such as table sugar ・ Pasta sauce, meat sauce, tomato sauce, white sauce, demi-grass sauce, curry sauce, curry sauce, hayashi sauce, gravy sauce, hamburger sauce, salsa sauce, sauces such as steak sauce ・ Pickles pickles, pickle pickles , Pickled miso pickles, Fukujin pickles, pickled radish pickles, Nara pickles, Senzuke pickles, pickled plums etc.-Pickled mackerel raw materials, Chinese cabbage pickled mackerel raw materials, pickled vegetables such as kimchi raw material · Ham, bacon, sausage, hamburg, meatballs etc Meat products of meat ・ Fish meat ham, fish meat sausage, kamaboko, chikuwa, dried fish Fish products such as sea urchins, sea urchins, sea urchins, sea urchins, salted radish, dried vinegar kelp, seaweed radish, delicacies such as rice bran ・ Nori seaweed, wild vegetables, sea urchins, sea urchin, small fish, shellfish etc. , Boiled fish, potato salad, sugar beet food such as kelp roll ・ Dairy products, fish meat, meat meat, fruit, vegetables and other bottling products such as canned foods ・ Tempura, ton cutlet, fritters, fried food such as fried chicken, fried Tatsuta ・ Udon noodles Noodles such as buckwheat noodles, Chinese noodles, pasta, vermicelli, rice vermicelli, eggplant skin, chumeyem skin ・ Pudding mix, hot cake mix, instant juice, instant coffee, instant soup powder, instant food such as instant soup.

また、飲食品としては、特定保健用食品、栄養機能食品、老人用食品、特別用途食品、機能性食品、健康補助食品(サプリメント)等も挙げられる。この場合の飲食品の形態は、例えば、粉末状、頼粒状、錠剤状、カプセル状、又は液状とすることができる。   Moreover, food and drink include food for specified health use, nutritive function food, food for elderly people, special purpose food, functional food, health supplement (supplement) and the like. The form of the food and drink in this case can be, for example, a powder form, a granular form, a tablet form, a capsule form, or a liquid form.

本発明の飲食品用組成物の飲食品への添加量は、Gβ1−1Fとして、0.002質量%以上となるようにすることが好ましく、0.02質量%以上となるようにすることがより好ましく、0.05質量%以上となるようにすることがさらに好ましく、0.1質量%以上となるようにすることが特に好ましい。Gβ1−1Fとしての添加量が、0.002質量%未満だと、Gβ1−1Fの特徴を十分に付与することができなくなる場合がある。   The additive amount of the composition for food and drink according to the present invention to food and drink is preferably 0.002% by mass or more as Gβ1-1F, and may be 0.02% by mass or more. More preferably, it is more preferably 0.05% by mass or more, particularly preferably 0.1% by mass or more. If the addition amount as Gβ1-1F is less than 0.002% by mass, the characteristics of Gβ1-1F may not be sufficiently imparted.

また、本発明のGβ1−1F、又はそれを含有する糖組成物は、後述する生理活性効果が期待されることから、医薬品用組成物として利用することができる。すなわち、後述する生理活性効果をもたらすための医薬品原料として利用することができる。この場合の医薬品は、経口投与用の医薬品であることが好ましいが、外用の医薬品にも適用することもできる。経口投与用の医薬品の剤形としては、具体的には、固形製剤として、粉末剤、頼粒剤、錠剤、カプセル剤、トローチ等、また、液状製剤として内用液剤、外用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等が挙げられる。   In addition, Gβ1-1F of the present invention or a sugar composition containing the same can be used as a pharmaceutical composition because a physiologically active effect described later is expected. That is, it can be used as a pharmaceutical raw material for producing the physiologically active effect described later. The medicine in this case is preferably a medicine for oral administration, but can also be applied to a medicine for external use. Specifically, as a dosage form of a pharmaceutical preparation for oral administration, a powder, a solid particle, a tablet, a capsule, a troche etc. as a solid preparation, and an internal solution, external solution, suspension as a liquid preparation , Emulsions, syrups and the like.

本発明の医薬品用組成物は、Gβ1−1Fの他、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、pH緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を適宜含有していてもよい。   The pharmaceutical composition of the present invention includes, in addition to Gβ1-1F, pharmaceutically acceptable common carriers, binders, stabilizers, excipients, diluents, pH buffers, disintegrants, solubilizers, You may contain suitably the mixing | blending component for various preparations, such as a solubilizing agent and an isotonic agent.

本発明の医薬品用組成物の医薬品への添加量は、Gβ1−1Fとして、0.02質量%以上となるようにすることが好ましく、0.1質量%以上となるようにすることがより好ましく、0.2質量%以上となるようにすることがさらに好ましく、1.0質量%以上となるようにすることが特に好ましい。Gβ1−1Fとしての添加量が、0.02質量%未満だと、Gβ1−1Fの特徴を十分に付与することができなくなる場合がある。   The amount of the pharmaceutical composition of the present invention to be added to the pharmaceutical is preferably 0.02% by mass or more as Gβ1-1F, more preferably 0.1% by mass or more It is more preferable to be 0.2 mass% or more, and it is particularly preferable to be 1.0 mass% or more. If the addition amount as Gβ1-1F is less than 0.02% by mass, it may not be possible to sufficiently impart the characteristics of Gβ1-1F.

また、Gβ1−1Fは、苦味を呈するという特徴から、本発明のGβ1−1F、又はそれを含有する組成物は、飲食品や医薬品用の呈味改善剤として利用することができる。本発明の呈味改善剤は、飲食品や医薬品に添加することで、コクの付与・増強、キレの付与・増強、果汁感の付与・増強、乳味感の付与・増強、エグ味低減、高甘味度甘味料の呈味改善などの呈味改良作用を発揮することが期待される。また、本発明の呈味改善剤は、苦味を呈することから、例えば苦味付与剤として利用することができる。なお、適用される飲食品としては、前述したような各種飲食品が挙げられる。呈味改善剤としての飲食品又は医薬品への添加量は、Gβ1−1Fとして、前述したような添加量となるようにすることが好ましい。   In addition, Gβ1-1F can be used as a taste improving agent for food and drink or pharmaceuticals because Gβ1-1F has a bitter taste. The taste improver of the present invention is added to foods, foods and medicines to impart and enhance richness, impart and enhance texture, impart and enhance a sense of fruit juice, impart and enhance a taste of milk, and reduce ag It is expected to exert taste improving action such as taste improvement of high sweetness degree sweeteners. Further, the taste improver of the present invention can be used, for example, as a bitter taste imparting agent because it exhibits a bitter taste. In addition, as food-drinks applied, the various food-drinks which were mentioned above are mentioned. It is preferable to make it the addition amount to the food-drinks or the pharmaceutical as a taste improving agent be the addition amount as mentioned above as G (beta) 1-1F.

また、Gβ1−1Fは、後述する実施例に示されるように、プレバイオティクス素材として知られるフルクトオリゴ糖と同等以上にBifidobacteriumに対する資化性を有していることから、本発明のGβ1−1F、又はそれを含有する糖組成物は、腸内菌叢改善剤、すなわち、腸内菌叢改善用の医薬品、飲食品として利用することができる。ここで、飲食品としては、特定保健用食品、栄養機能食品、老人用食品、特別用途食品、機能性食品、健康補助食品(サプリメント)等が含まれる。   In addition, as shown in Examples described later, Gβ1-1F has assimilability to Bifidobacterium more than or equal to fructooligosaccharide known as a prebiotics material, and thus Gβ1-1F of the present invention, Alternatively, the sugar composition containing it can be used as an intestinal flora improving agent, that is, a medicine for improving intestinal flora, food and drink. Here, the food and drink include food for specified health use, nutritive function food, food for elderly people, special purpose food, functional food, health supplement (supplement) and the like.

この場合、本発明の腸内菌叢改善剤の有効投与量は、特に限定されないが、Gβ1−1Fの投与量として、成人1日当たり0.5〜30gが好ましく、2〜10gがより好ましい。   In this case, the effective dosage of the agent for improving intestinal flora of the present invention is not particularly limited, but the dosage of Gβ1-1F is preferably 0.5 to 30 g per adult, and more preferably 2 to 10 g.

なお、Gβ1−1Fは、人や動物の栄養成分であるグルコース及びフルクトースを含有する原料にβ−グルコシダーゼを作用させて生成したものであることから、人や動物に対して安全性を有している。   Gβ 1-1 F is produced by the action of β-glucosidase on a raw material containing glucose and fructose which are nutritional components of humans and animals, so it has safety for humans and animals. There is.

また、Gβ1−1Fは、後述する実施例に示されるように、難消化性糖質であることから、ダイエット用の低カロリー素材として飲食品や医薬品に用いることができるだけでなく、脂肪蓄積抑制用、肥満改善及び/又は予防用、メタボリック症候群治療及び/又は予防用等の飲食品や医薬品に用いることができる。   In addition, as shown in the examples described later, since Gβ 1-1 F is a nondigestible carbohydrate, it can not only be used for food and drink or medicine as a low-calorie material for diets, but also for fat accumulation suppression It can be used for food and drink and medicine for obesity improvement and / or prevention, metabolic syndrome treatment and / or prevention, etc.

さらに、Gβ1−1Fは、腸内細菌の増殖を促進するという特徴から、難消化性オリゴ糖と同様に、整腸剤、便通改善剤、ミネラル吸収促進剤、腸管バリア機能亢進剤、脂質代謝改善剤、免疫調節剤、血糖上昇抑制剤として機能を発揮することが期待される。   Furthermore, Gβ 1-1 F, like indigestible oligosaccharides, is an intestinal adjusting agent, a bowel movement improving agent, a mineral absorption promoter, an intestinal barrier function enhancer, a lipid metabolism improving agent, and the like because it promotes the growth of enterobacteria. It is expected to exert functions as an immunomodulator and an inhibitor of blood sugar elevation.

本発明のGβ1−1Fを含有する飲食用組成物、医薬品用組成物、呈味改善剤、及び腸内菌叢改善剤は、本発明の効果を損なわない範囲で、Gβ1−1F以外の他の糖を含有してもよい。他の糖としては、単糖、二糖以上の糖質でもよい。また、原料に由来する糖質(原料として用いたグルコース源やフルクトース源、グルコース源やフルクトース源の分解により生じた糖、それらの糖同士が反応して副生した糖類等)を含有するものであってもよい。   The composition for food and drink, the pharmaceutical composition, the taste improving agent, and the agent for improving intestinal flora according to the present invention are other than G beta 1-1 F, as long as the effects of the present invention are not impaired. It may contain sugar. Other sugars may be monosaccharides or disaccharides or higher. In addition, it contains carbohydrates derived from raw materials (glucose sources used as raw materials, fructose sources, saccharides produced by the decomposition of glucose sources and fructose sources, saccharides produced by reaction of these saccharides, etc.) It may be.

なお、本発明においては、下記実施例に示したHPLC条件で保持時間37.8分、36.2分及び34.5分に検出されるピーク成分を二糖成分と判断した。また、本発明における糖組成は、固形分あたりの糖組成(各糖質の含量(質量%))を意味する。   In the present invention, peak components detected at retention times of 37.8 minutes, 36.2 minutes and 34.5 minutes under the HPLC conditions shown in the following examples were judged as disaccharide components. In addition, the sugar composition in the present invention means the sugar composition (content of each saccharide (mass%)) per solid content.

<製造例1>
D−グルコース(製品名:無水結晶ぶどう糖、日本食品化工株式会社製)(以下、「グルコース」ともいう。)、D−フルクトース(ナカライテスク株式会社製)(以下、「フルクトース」ともいう。)、及びグルコースとフルクトースを等重量混合したものをそれぞれ75w/w%となるように超純水に溶解した。1Mの酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.0)を10mMとなるように添加した。66℃下でβ−グルコシダーゼ(東洋紡株式会社製)を14mg/g−ds添加し、72時間保持し、反応させた。それぞれの保持時間後のサンプル溶液中の糖組成をHPLCにて分析した。
<Production Example 1>
D-glucose (product name: anhydrous crystalline glucose, manufactured by Nippon Shokuhin Kako Co., Ltd.) (hereinafter referred to as "glucose"), D-fructose (manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) (hereinafter referred to as "fructose"), And a mixture of equal weights of glucose and fructose were dissolved in ultrapure water so as to be 75 w / w% each. 1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) was added to 10 mM. 14 mg / g-ds of beta-glucosidase (made by Toyobo Co., Ltd.) was added under 66 degreeC, and it was made to react, hold | maintaining for 72 hours. The sugar composition in the sample solution after each retention time was analyzed by HPLC.

HPLC分析は、カラム(300mm×8.0mmI.D.)(製品名:ULTRON PS−80N.L、信和化工株式会社製)を二本連結し、カラム温度を50℃として超純水を流速0.5mL/minで通液し、示差屈折率検出器(株式会社島津製作所製)で検出を行った。   In HPLC analysis, two columns of column (300 mm × 8.0 mm ID) (product name: ULTRON PS-80 N. L, manufactured by Shinwa Kako Co., Ltd.) were connected, and the column temperature was set to 50 ° C. The solution was passed at 5 mL / min, and detection was performed using a differential refractive index detector (manufactured by Shimadzu Corporation).

結果を表1に示した。   The results are shown in Table 1.

Figure 2019094307
Figure 2019094307

グルコースを糖質原料とした場合は、保持時間34.5分に二糖、31.5+30.7分に三糖、及び30分よりも早い時間に四糖以上のピークが増加した。フルクトースを糖質原料とした場合は、糖組成は反応前後でほぼ変化しなかった。グルコースとフルクトース、それぞれ等量を糖質原料とした場合は、グルコースと同様に、保持時間34.5分に二糖、31.5+30.7分に三糖、及び30分よりも早い時間に四糖以上のピークが増加し、それ以外に保持時間36.2分、及び37.8分に二糖のピークが増加した。   When glucose was used as a carbohydrate source, the disaccharides at 34.5 minutes, the trisaccharides at 31.5 + 30.7 minutes, and the tetrasaccharide or higher peaks at 30 minutes earlier than 30 minutes increased. When fructose was used as a carbohydrate source, the sugar composition did not change substantially before and after the reaction. Similar to glucose, glucose and fructose, when using equal amounts of carbohydrates, respectively, are disaccharides at a retention time of 34.5 minutes, trisaccharides at 31.5 + 30.7 minutes, and four hours earlier than 30 minutes. The peaks above the sugar increased, and the peaks at the retention times 36.2 minutes and 37.8 minutes also increased.

それぞれ等量のグルコースとフルクトースを糖質原料として得られたサンプル溶液を、以降の試験の試料とした。   The sample solutions obtained using equal amounts of glucose and fructose as carbohydrate raw materials, respectively, were used as samples for the subsequent tests.

(1)分画処理
カーボン−セライトカラムクロマトグラフィーにより、サンプルの分画を行った。活性炭「精製白驚」(製品名、大阪ガスケミカル株式会社製)と、「セライト545」(製品名、関東化学株式会社製)とを等重量混合し、水に懸濁したスラリーをガラスカラム(型番:XK―26/40、ファルマシア製)(φ2.6×40cm)に充填し、これにBx50の試料10mLを負荷した。クロマトグラフィーは室温で行い、流速を5mL/minとした。まず超純水を通液して単糖類を溶出させた後、1.5v/v%エタノール及び3.0v/v%エタノールを通液して未知ピーク及び二糖を溶出させた。二糖の溶出が完了したことを確認後、50v/v%エタノールを通液して三糖以上のサンプルを溶出させた。
(1) Fractionation treatment Fractionation of the sample was performed by carbon-celite column chromatography. A slurry of activated carbon "purified white startle" (product name, manufactured by Osaka Gas Chemical Co., Ltd.) and "Celite 545" (product name, manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) in equal weights and suspended in water is a glass column ( Model No .: XK-26 / 40 (manufactured by Pharmacia) (φ2.6 × 40 cm) was loaded, to which a 10 mL sample of Bx50 was loaded. The chromatography was performed at room temperature and the flow rate was 5 mL / min. First, ultra pure water was passed through to elute monosaccharides, and then 1.5 v / v% ethanol and 3.0 v / v% ethanol were passed through to elute unknown peaks and disaccharides. After confirming that disaccharide elution was complete, 50 v / v% ethanol was passed through to elute the trisaccharide or more sample.

1.5v/v%エタノールを通液したときの溶出液を一定量ずつ分画し、ロータリーエバポレーター(東京理化器械株式会社製)でBx40程度に濃縮した。   The eluate after passing through 1.5 v / v% ethanol was fractionated by a fixed amount, and concentrated to about B x 40 with a rotary evaporator (manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.).

サンプルの糖組成を上記と同様にHPLCにて分析し、その結果を表2に示した。   The sugar composition of the sample was analyzed by HPLC as described above, and the results are shown in Table 2.

Figure 2019094307
Figure 2019094307

サンプルの濃縮液を一晩4℃保存したところ、保持時間36.2分の溶出物を多く含有する分画No.1〜3で白色結晶の生成が確認された。HPLCで分析したところ、白色結晶は保持時間36.2分の二糖の未知物質が主成分であった。   When the concentrated solution of the sample was stored overnight at 4 ° C., Fraction No. 3 containing a large amount of eluate having a retention time of 36.2 minutes. The formation of white crystals was confirmed in 1 to 3. As a result of analysis by HPLC, the white crystals were mainly composed of an unknown substance of disaccharide having a retention time of 36.2 minutes.

分画No.3の結晶を純水に再溶解し、Bx40程度に濃縮して再び一晩4℃保存したところ再び結晶が生成し、主成分の純度が向上した。さらにもう一度同じ操作を繰り返すことで純度は99.3%となった(表3)。   The crystals of fraction No. 3 were redissolved in pure water, concentrated to about B x 40, and stored again overnight at 4 ° C. When crystals were formed again, the purity of the main component was improved. The purity was 99.3% by repeating the same operation again (Table 3).

Figure 2019094307
Figure 2019094307

(2)結晶の同定
得られた結晶を質量検出器(製品名:5610質量検出器、日立ハイテクサイエンス製)で分析した結果、分子量365となり(ナトリウム分の23を減じて342)、二糖であることが確認された(図1)。
(2) Identification of Crystals As a result of analyzing the obtained crystals with a mass detector (product name: 5610 mass detector, manufactured by Hitachi High-Tech Science), it has a molecular weight of 365 (subtracting 23 of sodium) 342, disaccharide It has been confirmed that there is (Figure 1).

次に、400MHz核磁気共鳴分光計(NMR)(製品名:Ultrashield 400 PLUS、BRUKER社製)を用いて結晶の分析を行った。測定は一次元としてH(図2)、及び13C(図3)、二次元としてH−HCOSY(図4)、E−HSQC(図5)、及びHMBC(図6)により行った(表4)。なお、分析は結晶を重水に溶解して実施した。トリメチルシリルプロパン酸を内部基準物質として微量添加し、当該物質由来のピークを0ppmとした。 Next, the crystals were analyzed using a 400 MHz nuclear magnetic resonance spectrometer (NMR) (product name: Ultrashield 400 PLUS, manufactured by BRUKER). The measurements were performed with 1 H (FIG. 2) and 13 C (FIG. 3) as one dimension, H-HCOSY (FIG. 4), E-HSQC (FIG. 5) and HMBC (FIG. 6) as two dimensions (table 4). The analysis was carried out by dissolving the crystals in heavy water. A small amount of trimethylsilylpropanoic acid was added as an internal standard substance, and the peak derived from the substance was made 0 ppm.

Figure 2019094307
Figure 2019094307

分析と解析の結果、サンプルの主成分はβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトピラノースであった(図7)。NMRのデータには高純度のサンプルにも関わらず、複数の微小ピークが確認された。これはβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトピラノースが開環構造を経て、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−α−D−フルクトピラノース、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−α−D−フルクトフラノース、β−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトフラノースの異性体となっているものと考えられた。従って、本サンプルはβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−β−D−フルクトピラノースを主構造とするGβ1−1Fであることが明らかとなった。   As a result of analysis and analysis, the main component of the sample was β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructopyranose (FIG. 7). In spite of the high purity sample, multiple minute peaks were confirmed in the NMR data. This is because β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructopyranose undergoes a ring-opening structure, β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -α-D-fructopyranose, β- It was considered that D-glucopyranosyl- (1 → 1) -α-D-fructofuranose, β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructofuranose is an isomer. Therefore, it was revealed that this sample is Gβ1-1F having β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -β-D-fructopyranose as a main structure.

(3)味質の確認
Gβ1−1Fを超純水に10w/w%となるように溶解し、味質を確認したところ、苦味が感じられた。すなわち、Gβ1−1Fは苦味を有する糖質であることがわかった。
(3) Confirmation of Taste Quality Gβ1-1F was dissolved in ultrapure water so as to be 10 w / w%, and when the taste quality was confirmed, a bitter taste was felt. That is, it turned out that G (beta) 1-1F is a carbohydrate which has a bitter taste.

(4)人工胃液試験
Gβ1−1Fの人工胃液による分解を確認した。
(4) Artificial gastric fluid test The decomposition of Gβ 1-1 F by artificial gastric fluid was confirmed.

サンプルを0.73w/v%となるように、16.7mMHCl−KCl緩衝液(pH2.0)で溶解し、37℃で保持した。0、30、60、120分でサンプリングし、イオン交換樹脂(製品名:アンバーライトMB4、オルガノ株式会社)を加えて脱塩後、0.45μmフィルターろ過して、HPLCで分析した。得られたピーク面積を反応0分のピーク面積で除し、100を乗ずることで残存率を算出した。   The sample was dissolved in 16.7 mM HCl-KCl buffer (pH 2.0) to be 0.73 w / v% and kept at 37 ° C. The sample was sampled at 0, 30, 60 and 120 minutes, desalted by adding an ion exchange resin (product name: Amberlite MB4, Organo Corporation), filtered through a 0.45 μm filter, and analyzed by HPLC. The obtained peak area was divided by the peak area at 0 minutes of reaction, and the residual rate was calculated by multiplying by 100.

HPLC分析は、カラム(300mm×8.0mmI.D.)(製品名:ULTRON PS−80N.L、信和化工株式会社製)を使用し、カラム温度を50℃として超純水を流速0.9mL/minで通液し、示差屈折率検出器(株式会社島津製作所製)で検出を行った。   For HPLC analysis, using a column (300 mm × 8.0 mm ID) (product name: ULTRON PS-80 N. L, manufactured by Shinwa Kako Co., Ltd.) and setting the column temperature to 50 ° C., the flow rate of ultra pure water is 0.9 mL The liquid was allowed to flow at / min, and detection was performed using a differential refractive index detector (manufactured by Shimadzu Corporation).

この結果から、Gβ1−1Fはスクロースと同様に人口胃液によっても分解されないことがわかった(図8)。   From this result, it was found that Gβ1-1F was not degraded by artificial gastric juice as well as sucrose (FIG. 8).

(5)消化性試験
Gβ1−1Fの消化酵素による消化性を確認した。
(5) Digestibility test The digestibility by the digestive enzyme of G (beta) 1-1F was confirmed.

ラット小腸アセトンパウダー(製品名、シグマ社)2gを45mMマレイン酸ナトリウム緩衝液(pH6.6)20mLに懸濁後、遠心分離(19000g、10分間)して上清を回収した。得られた溶液の活性を測定し、消化酵素溶液として下記のインビトロ消化性試験に用いた。   After suspending 2 g of rat small intestine acetone powder (trade name, Sigma) in 20 mL of 45 mM sodium maleate buffer (pH 6.6), the supernatant was recovered by centrifugation (19000 g, 10 minutes). The activity of the resulting solution was measured and used as a digestive enzyme solution in the following in vitro digestibility test.

消化酵素溶液の活性は、マルターゼ活性として測定した。純水で適宜希釈した消化酵素溶液15μLに0.1M酢酸ナトリウム緩衝液(pH6.0)を40μL添加し、37℃に保持した。これに2w/v%マルトース溶液45μLを添加して反応を開始した。10分後、これに2MTris−HC1緩衝液(pH7.0)200μLを添加して反応を停止し、グルコースC−IIテストワコー(製品名、和光純薬工業社)80μLを添加して37℃に30分間程度保持して発色させた。A492を測定し、グルコースの標準曲線に基づき、遊離グルコース量を算出した。 The activity of the digestive enzyme solution was measured as maltase activity. 40 μL of 0.1 M sodium acetate buffer (pH 6.0) was added to 15 μL of the digestive enzyme solution appropriately diluted with pure water, and kept at 37 ° C. The reaction was initiated by adding 45 μL of a 2 w / v% maltose solution to this. After 10 minutes, the reaction was stopped by adding 200 μL of 2 M Tris-HC1 buffer (pH 7.0), and adding 80 μL of glucose C-II Test Wako (product name, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) to 37 ° C. The color was maintained by holding for about 30 minutes. A 492 was measured, and the amount of free glucose was calculated based on the glucose standard curve.

グルコースの標準曲線は、0〜0.01w/v%グルコース水溶液100μLに上記と同様に2MTris−HC1緩衝液(pH7.0)及び発色試薬を添加することにより作成した。酵素活性1Uを上記条件下で1分間に2μmolのグルコースを生成する酵素量と定義した。   A standard curve of glucose was prepared by adding 2 M Tris-HCl buffer solution (pH 7.0) and a coloring reagent to 100 μL of 0 to 0.01 w / v% glucose aqueous solution in the same manner as described above. The enzyme activity of 1 U was defined as the amount of enzyme that produces 2 μmol of glucose per minute under the above conditions.

45mMマレイン酸ナトリウム緩衝液(pH6.6)に終濃度0.45w/v%となるようにサンプルを溶解し、上記手法で調製した消化酵素溶液を86U/g−dsとなるように添加し、37℃で保持した。反応液20μLを2MTris−HC1緩衝液200μLと混合して反応を停止し、適宜サンプリングを行った。サンプリングした溶液のグルコース量はグルコースC−IIテストワコーを用いてグルコースオキシダーゼ法により測定した。分解率=グルコース質量×2/基質質量×100と定義した。   The sample is dissolved in 45 mM sodium maleate buffer (pH 6.6) to a final concentration of 0.45 w / v%, and the digestive enzyme solution prepared by the above method is added to give 86 U / g-ds, Hold at 37 ° C. The reaction was stopped by mixing 20 μL of the reaction solution with 200 μL of 2 M Tris-HC1 buffer, and sampling was appropriately performed. The glucose amount of the sampled solution was measured by the glucose oxidase method using a glucose C-II test Wako. The decomposition rate was defined as glucose mass × 2 / substrate mass × 100.

試験の結果、スクロースは速やかに分解されたのに対してGβ1−1Fはまったく分解されなかったことから、Gβ1−1Fが難消化性糖質であることが明らかとなった(図9)。   As a result of the test, sucrose was rapidly degraded while Gβ1-1F was not degraded at all, which revealed that Gβ1-1F is an indigestible carbohydrate (FIG. 9).

(6)資化性試験
供試菌株B. catenulatum JCM 1194、B. longum subsp. Longum JCM 1217、及びB. adolecentis JCM1275(いずれもビフィドバクテリウム属(Bifidobacterium)の菌株、JCMの番号は、国立研究開発法人 理化学研究所 バイオリソースセンター 微生物材料開発室の寄託番号である)を用い、唯一の炭素源としてグルコースを終濃度15%添加したIL培地にて、嫌気ジャー及びアネロペック・ケンキ(ともに製品名、三菱ガス化学社製)を使用した嫌気条件下にて37℃、24時間前培養を行った。次いで、Gβ1−1F又はフルクトオリゴ糖(和光純薬工業)を、それぞれ終濃度1%になるように添加したILS培地3.0mLに当該前培養液を1v/v%植菌し、37℃、嫌気条件化にて培養を行った。またネガティブコントロールとして炭素源の代わりに滅菌超純水を添加した。資化性は菌体増殖にて判断することとし、経時的に簡易ODモニター「mini photo 518R」(製品名、TAITEC社製)を用いて菌濁度(OD660)を測定し、増殖曲線を描いた。
(6) Assimilation test Test strains B. catenulatum JCM 1194, B. longum subsp. Longum JCM 1217, and B. adolecentis JCM 1275 (all are strains of Bifidobacterium (Bifidobacterium), JCM number is national Anaerobic jar and aneropeque / kenk (both product names, in the IL medium with glucose added at a final concentration of 15% as the sole carbon source, using R & D institute RIKEN BioResource Center, which is the deposit number of the Microbial Materials Development Office) The preculture was performed at 37 ° C. for 24 hours under anaerobic conditions using Mitsubishi Gas Chemical Co., Ltd.). Then, 1 v / v% of the preculture liquid is inoculated in 3.0 mL of ILS medium to which Gβ1-1F or fructo-oligosaccharide (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is added to a final concentration of 1%, respectively, 37 ° C., anaerobic Culture was performed under conditions. As a negative control, sterilized ultrapure water was added instead of the carbon source. The assimilability is determined by bacterial growth, and the bacterial turbidity (OD 660) is measured using a simple OD monitor "mini photo 518R" (product name, manufactured by TAITEC) over time, and a growth curve is drawn. The

B. catenulatum JCM 1194を用いた資化性試験では、Gβ1−1Fの資化性はフラクトオリゴ糖と同程度であった(図10)。B. longum subsp. Longum JCM 1217を用いた資化性試験では、フラクトオリゴ糖が資化性を示したのに対して、Gβ1−1Fはほとんど資化性を示さなかった(図11)。B. adolecentis JCM1275を用いた資化性試験では、Gβ1−1Fの資化性はフラクトオリゴ糖より高い資化性を示した(図12)。   In the assimilability test using B. catenulatum JCM 1194, the assimilability of Gβ1-1F was similar to fructooligosaccharide (FIG. 10). In the assimilability test using B. longum subsp. Longum JCM 1217, fructooligosaccharide showed assimilability, whereas Gβ1-1F showed little assimilation (FIG. 11). In the assimilability test using B. adolecentis JCM1275, the assimilability of Gβ1-1F showed higher assimilability than fructooligosaccharide (FIG. 12).

従って、Gβ1−1Fは、プレバイオティクス素材として知られるフルクトオリゴ糖と同等以上にBifidobacteriumに対する資化性を有していることから、プレバイオティクスとして利用できる可能性が示唆された。また、資化性を示さなかった菌株もあることから、特定の菌種を選択的に増殖させることができると示唆された。   Therefore, Gβ 1-1 F has assimilability to Bifidobacterium more than or equal to fructooligosaccharide known as a prebiotics material, suggesting the possibility that it can be used as prebiotics. In addition, some strains did not show assimilability, suggesting that specific bacterial species can be selectively grown.

<製造例2>
果糖ぶどう糖液糖(製品名:フジフラクト、日本食品化工株式会社)をpH5.0に調整し、66℃下でセルラーゼ製剤「スミチームACL」(製品名、新日本化学工業株式会社)を128mg/g−ds添加し、72時間保持し、反応させた。
<Production Example 2>
Adjust the pH of the cellulase preparation “Sumiteam ACL” (product name, Shin Nippon Chemical Industry Co., Ltd.) to 128 mg / g − Add ds, hold for 72 hours and let react.

その後、上記と同様の分画処理を行ったところ、白色結晶が得られた。得られた結晶をHPLCで分析した結果、Gβ1−1Fと同様の保持時間であった。   Thereafter, the same fractionation as described above was performed to obtain white crystals. As a result of analyzing the obtained crystals by HPLC, it was the same retention time as Gβ1-1F.

従って、本方法でもGβ1−1Fを製造可能であった。   Therefore, this method was also able to produce Gβ1-1F.

Claims (8)

下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトース。
Figure 2019094307
Β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose represented by the following formula (1).
Figure 2019094307
結晶状の請求項1記載のβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトース。   The crystalline β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose according to claim 1. 下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを含有することを特徴とする飲食品用組成物。
Figure 2019094307
The composition for food-drinks characterized by containing (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose shown by following formula (1).
Figure 2019094307
前記β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを0.5質量%以上含有する請求項3記載の飲食品用組成物。   The composition for food and drink according to claim 3, containing 0.5% by mass or more of the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose. 下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを含有することを特徴とする医薬品用組成物。
Figure 2019094307
A pharmaceutical composition comprising β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose represented by the following formula (1).
Figure 2019094307
前記β−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを0.5質量%以上含有する請求項5記載の医薬品用組成物。   The pharmaceutical composition according to claim 5, which contains 0.5% by mass or more of the β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose. 下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを有効成分として含有することを特徴とする呈味改善剤。
Figure 2019094307
The taste improving agent characterized by containing (beta) -D- glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose shown by following formula (1) as an active ingredient.
Figure 2019094307
下記式(1)で示されるβ−D−グルコピラノシル−(1→1)−D−フルクトースを有効成分として含有することを特徴とする腸内菌叢改善剤。
Figure 2019094307
The intestinal flora improvement agent characterized by containing (beta) -D-glucopyranosyl- (1-> 1) -D-fructose shown by following formula (1) as an active ingredient.
Figure 2019094307
JP2017226715A 2017-11-27 2017-11-27 β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof Active JP6588071B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2017226715A JP6588071B2 (en) 2017-11-27 2017-11-27 β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2017226715A JP6588071B2 (en) 2017-11-27 2017-11-27 β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2019094307A true JP2019094307A (en) 2019-06-20
JP6588071B2 JP6588071B2 (en) 2019-10-09

Family

ID=66970964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017226715A Active JP6588071B2 (en) 2017-11-27 2017-11-27 β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP6588071B2 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023150100A (en) * 2022-03-31 2023-10-16 日本食品化工株式会社 β-GLUCOSIDASE ACTIVITY ENHANCER, METHOD FOR PRODUCING AGLYCON-CONTAINING COMPOSITION, AGLYCON ABSORPTION PROMOTER, AND FOOD AND DRINK PRODUCTS

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023150100A (en) * 2022-03-31 2023-10-16 日本食品化工株式会社 β-GLUCOSIDASE ACTIVITY ENHANCER, METHOD FOR PRODUCING AGLYCON-CONTAINING COMPOSITION, AGLYCON ABSORPTION PROMOTER, AND FOOD AND DRINK PRODUCTS

Also Published As

Publication number Publication date
JP6588071B2 (en) 2019-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11572380B2 (en) Saccharide polycondensate, method for producing the same, and application therefor
EP2156751B1 (en) Novel sweetener having sugar-like taste and production method and use of the same
JP3896577B2 (en) Quercetin glycoside composition and preparation method thereof
EP0415720A2 (en) Beta-glucooligosaccharide-containing composition, and method of improving intestinal flora
KR20130014227A (en) NOVEL α-GLUCOSYL STEVIOSIDES AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME
JPS58149697A (en) Preparation of beta-1,3-glycosyl stevioside
JP2011205913A (en) Complex crystalline sugar of functional isomerized sugar and method for producing the same
WO2020096006A1 (en) Method for producing rare sugar-containing composition and rare sugar-containing composition
JP2018046762A (en) BRANCHED α-GLUCAN MIXTURE SYRUP AND APPLICATION THEREOF
JP4164367B2 (en) Branched cyclic tetrasaccharide, production method and use thereof
JP3510717B2 (en) Foods and beverages with active oxygen and free radical scavenging activity
WO2002088374A1 (en) Process for producing isomaltose and use thereof
JP2823640B2 (en) Intestinal flora improving substance
JP6588071B2 (en) β-D-glucopyranosyl- (1 → 1) -D-fructose and uses thereof
JP6636003B2 (en) Method for producing sugar composition and sugar composition
JP6382058B2 (en) Method for producing sugar condensate
JP5868931B2 (en) Method for stabilizing water-soluble dietary fiber, stabilized water-soluble dietary fiber composition, and method for producing the same
JPS647752B2 (en)
JP3650682B2 (en) Trehalulose-containing carbohydrate, production method and use thereof
JP2699470B2 (en) Food preservative and method for producing the same
JP4102573B2 (en) Method for producing cyclic tetrasaccharide
JPH08214895A (en) Caries suppressing agent, its production and use thereof
JP6040285B1 (en) Method for producing water-soluble dietary fiber-containing solution with reduced coloring and method for reducing coloration of water-soluble dietary fiber-containing solution
JP7503090B2 (en) β-glucosidase activity enhancer, method for producing aglycone-containing composition, aglycone absorption enhancer, and food and beverage
KR102122482B1 (en) Novel α-Glucosyl-Rebaudioside A and Method for Preparing The Same

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20190808

A871 Explanation of circumstances concerning accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871

Effective date: 20190808

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422

Effective date: 20190808

A975 Report on accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005

Effective date: 20190829

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20190910

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20190911

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6588071

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250