JP2018523674A

JP2018523674A - 腸カルボキシルエステラーゼ２酵素活性を選択的に阻害するための組成物及び方法

Info

Publication number: JP2018523674A
Application number: JP2018507640A
Authority: JP
Inventors: レンコン; ホンチャオ; ステファンティー．シー．ウォン
Original assignee: ザメソディストホスピタル
Priority date: 2015-08-21
Filing date: 2016-08-18
Publication date: 2018-08-23
Also published as: CN107921282A; US20180235928A1; CA2995575A1; WO2017034919A1; TW201713362A; EP3337563A4; US10314811B2; EP3337563A1

Abstract

カルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤、すなわちヘスペレチン、ナリンゲニン、又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンを投与することによる、化学療法剤によって誘発される下痢を治療する方法。また、化学療法剤と一緒にヘスペレチン、ナリンゲニン、又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンを投与することによる、癌を治療する方法も開示されている。さらに、化学療法剤と、ヘスペレチン、ナリンゲニン、又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンとを含有する、癌を治療するための組成物が提供される。
【選択図】図２Ａ

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年８月２１日付で出願された米国仮特許出願第６２／２０８，２２５号の利益を主張し、その内容全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

カンプトテシン（ＣＰＴ）由来の薬剤、例えばイリノテカン（ＣＰＴ−１１）は、一般的に、脳、結腸、及び肺の充実性腫瘍を治療するために使用されるだけでなく、難治型の白血病及びリンパ腫を治療するために使用される（非特許文献１を参照）。

ＣＰＴ−１１の抗腫瘍効力は、投与から約２日後〜４日後に起こる遅延性下痢により制限される。ＣＰＴ−１１及びその他のカンプトテシン由来の薬剤によって誘発される重度の下痢は、特に高齢者にとってかなり否定的な医学的結果を招く。下痢の発生は、ＣＰＴ−１１投与量の低減どころか、患者の腸管機能が正常に戻るまで治療を完全に中止することさえも余儀なくさせる。

ＣＰＴ−１１に誘発される下痢のメカニズムは、集中的な研究対象となっている。プロドラッグであるＣＰＴ−１１は、肝臓中でカルボキシルエステラーゼによって加水分解されて、その治療的に有効な形、つまり７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）となる。ＳＮ−３８は、肝臓及び腸管の両方で更なる代謝を受け、そこでグルクロン酸と抱合されることで、不活性な化合物であるＳＮ−３８Ｇが形成される。ＣＰＴ−１１、ＳＮ−３８、及びＳＮ−３８Ｇは、その後に胃腸管を介して胆汁中に排泄される。

腸管内で高度に発現されるカルボキシルエステラーゼ（ＣＥＳ）２は、その肝臓ホモログＣＥＳ１より１００倍も高い効力で、ＣＰＴ−１１をＳＮ−３８へと効果的に変換する。その変換は、腸管腔内で高い局所濃度の毒性ＳＮ−３８をもたらし、こうして腸管上皮細胞に損傷を引き起こした後に、下痢を引き起こす。

ＣＥＳ１に比べてＣＥＳ２の阻害について高い選択性を示す幾つかの化合物が、最近同定された（非特許文献２、非特許文献３を参照）。しかしながら、これらの化合物は低い溶解度及び不十分な製剤特性を有する。

Pommier Nat. Rev. Cancer, 6(10):789 802 Stoddard et al. 2010, J. Pest. Sci., 35(3):240 249 Hatfield et al. 2011, Expert Opin. Ther. Pat., 21(8):1159 117

癌の治療のために投与されるＣＰＴ−１１によって誘発される下痢を寛解することができる改善された選択的ＣＥＳ２阻害剤を同定することに要求が存在する。

上述の要求を満たすために、化学療法剤によって誘発される下痢を治療する方法が提供される。該方法は、被験体に治療的有効量のカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤を投与することを含む。ＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択される。

また、化学療法剤と一緒にヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択されるＣＥＳ２阻害剤を投与することによる、癌を治療する方法も開示されている。

さらに、癌の治療のための組成物が提供される。該組成物は、化学療法剤と、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択されるＣＥＳ２阻害剤とを含有する。

本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、添付の図面及び以下の詳細な説明に示す。本発明のその他の特徴、課題及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

重要なことには、本明細書で引用された全ての参考資料は、引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。

以下の説明は、添付の図面について言及するものである。

示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスにおける相対腫瘍成長のプロット図である。エラーバーは、平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ＝ヘスペレチン、２，４−ＣＨＡＬ＝２’，４’−ジヒドロキシカルコン、ＮＡＲＩ＝ナリンゲニン。示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスにおける相対体重のプロット図である。エラーバーは、ＳＥＭを表す。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ＝ヘスペレチン、２，４−ＣＨＡＬ＝２’，４’−ジヒドロキシカルコン、ＮＡＲＩ＝ナリンゲニン。示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスの生存のプロット図である。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ＝ヘスペレチン、２，４−ＣＨＡＬ＝２’，４’−ジヒドロキシカルコン、ＮＡＲＩ＝ナリンゲニン。示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスにおける相対腫瘍成長のプロット図である。エラーバーは、ＳＥＭを表す。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ１００＝１００ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン、ＨＥＳ２０＝２０ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン。示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスにおける体重のパーセント変化のプロット図である。エラーバーは、ＳＥＭを表す。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ１００＝１００ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン、ＨＥＳ２０＝２０ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン。示されたレジメンでの処置の開始後の日数に対する、腫瘍保有マウスの生存のプロット図である。ＣＰＴ−１１＝イリノテカン、ＨＥＳ１００＝１００ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン、ＨＥＳ２０＝２０ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン。

上述のように、化学療法剤によって誘発される下痢を治療する方法が開示される。

化学療法剤は、例えばＣＥＳ２の酵素活性によって腸内を毒性にするあらゆる作用物質であってもよい。例えば、該化学療法剤は、カンプトテシン類似体であってもよい。

より具体的には、カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である。

その他には、化学療法剤は、カペシタビン又はＬＹ２３３４７３７、つまりゲムシタビンのプロドラッグであってもよい。

上記方法は、有効量のヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択されるＣＥＳ２阻害剤を投与することを必要とする。

上記方法の具体的な一実施形態においては、化学療法剤はイリノテカンであり、かつＣＥＳ２阻害剤はヘスペレチンである。

上記方法は、制吐剤、腸運動抑制剤、又はこれらの作用物質の組合せ物を投与することを更に含んでもよい。

上記方法で投与することができる制吐剤には、限定されるものではないが、５−ヒドロキシトリプタミン−３受容体拮抗薬（例えば、ドラセトロン、トロピセトロン、及びグラニセトロン）、ドーパミン拮抗薬（例えば、ドンペリドン及びオランザピン）、ニューロキニン−１受容体拮抗薬（例えば、アプレピタント）、抗ヒスタミン薬（例えば、ジフェンヒドラミン）、カンナビノイド類、ベンゾジアゼピン類、抗コリン作用薬、及びステロイド類が含まれる。

本発明の方法で使用することができる腸運動抑制剤は、例えばロペラミド、ジフェノキシラート、アヘン安息香チンキ、コデイン、及びモルヒネであってもよい。

一例においては、ＣＥＳ２阻害剤は、ロペラミドと一緒に投与される。もう一つの例においては、ＣＥＳ２阻害剤は、ドラセトロンと一緒に投与される。

上記方法は、２種の異なるＣＥＳ２阻害剤を投与することを含んでもよい。それらの２種の異なるＣＥＳ２阻害剤は、両方ともヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択され得る。例えば、ヘスペレチンを、２’，４’−ジヒドロキシカルコンと一緒に同時投与することができる。

あるいはヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択される１種のＣＥＳ２阻害剤を、細菌性β−グルクロニダーゼ（β−ＧＵＳ）阻害剤と一緒に投与することができる。理論に縛られるべきではないが、腸内細菌叢におけるβ−ＧＵＳ活性の阻害がＳＮ−３８Ｇからのグルクロニド基の除去を遮断することで、腸内での細胞毒性ＳＮ−３８の形成が妨げられると考えられる。

例示されるβ−ＧＵＳ阻害剤には、アモキサピン、メフロキン、ニアラミド、イソカルボキサジド、及びフェネルジンが含まれる（Ahmad et al. 2012, J. Biomol. Screen. 17: 957-965を参照）。具体的な一例においては、ヘスペレチンは、アモキサピンと一緒に投与される。

また、上記のように、化学療法剤及びＣＥＳ２阻害剤を用いて癌を治療する方法が提供される。

この方法で投与される化学療法剤は、カンプトテシン類似体であってもよい。より具体的には、カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、ＳＮ−３８、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、及びＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８であってもよい。

この方法で投与されるＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチン、ナリンゲニン、又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンであってもよい。

化学療法剤は、ＣＥＳ２阻害剤と同じ経路を介して投与されてよい。本発明の例示される一方法においては、化学療法剤及びＣＥＳ２阻害剤は両方とも経口投与される。

あるいは化学療法剤は、ＣＥＳ２阻害剤とは異なる経路を介して投与される。例示される一方法は、カンプトテシン類似体を注入によって投与し、かつＣＥＳ２阻害剤を経口投与することを含む。

上記方法の一実施形態においては、化学療法剤はイリノテカンであり、かつＣＥＳ２阻害剤はヘスペレチンである。一例においては、イリノテカンは注入によって投与され、かつヘスペレチンは経口投与される。もう一つの例においては、イリノテカン及びヘスペレチンは両方とも経口投与される。

また、癌を治療する方法は、化学療法剤及びＣＥＳ２阻害剤と一緒に、制吐剤、腸運動抑制剤、又はこれらの作用物質の組合せ物を投与することを含んでもよい。上記のあらゆる制吐剤及び腸運動抑制剤を投与することができる。

一例においては、化学療法剤及びＣＥＳ２阻害剤は、ロペラミドと一緒に投与される。もう一つの例においては、化学療法剤及びＣＥＳ２阻害剤は、ドラセトロンと一緒に投与される。

或る特定の実施形態においては、上記方法は、２種の異なるＣＥＳ２阻害剤を投与することを含む。それらの２種の異なるＣＥＳ２阻害剤は、両方ともヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択され得る。

その他には、化学療法剤、並びにヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択される１種のＣＥＳ２阻害剤は、β−ＧＵＳ阻害剤、例えば上記のβ−ＧＵＳ阻害剤と一緒に投与される。具体的な一例においては、イリノテカン及びヘスペレチンは、アモキサピンと一緒に投与される。

癌を治療するための組成物も提供される。該組成物は、化学療法剤と、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択されるＣＥＳ２阻害剤とを含有する。

化学療法剤は、好ましくはカンプトテシン類似体である。カンプトテシン類似体は、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、ＳＮ−３８、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、及びＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８であってもよい。

また、本発明は、化学療法に誘発される下痢の治療のための、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンから選択されるＣＥＳ２阻害剤の使用を包含する。

さらに、癌を治療するための、化学療法剤とヘスペレチン、ナリンゲニン、又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンとの併用も、本発明の範囲内である。

更なる詳細がなくても、当業者であれば、本明細書内の開示に基づき、本開示を十二分に利用することができるものと考えられる。以下の具体的な実施例は、単に説明のためだけとして解釈されるべきであり、如何なる場合にも決してその開示以外の部分を限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：下痢を治療するための薬剤のリポジショニング
ｉｎｓｉｌｉｃｏスクリーニング、酵素ベースアッセイ、及び動物試験を含む一体型プラットフォームを活用して、既知の薬剤のなかから特異的なＣＥＳ２阻害剤を同定した。

ＣＥＳ２のホモロジーモデリング構造に基づいて、Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋライブラリ、ＪｏｈｎｓＨｏｐｋｉｎｓＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｍｐｏｕｎｄライブラリ、ＬＯＰＡＣ１２８０、及びＭｉｃｒｏＳｏｕｒｃｅＳｐｅｃｔｒｕｍＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎを含む既知の薬剤の幾つかの化学的ライブラリに対するｉｎｓｉｌｉｃｏスクリーニングを容易にするために分子ドッキングアプローチを使用した。

ＣＥＳ２のタンパク質構造は現在入手することはできないが、アポ型又は基質との複合体におけるＣＥＳ１結晶構造のパネルは解明されている。ＣＥＳ１及びＣＥＳ２のアミノ酸配列は４７％の同一残基及び５８％の保存残基を共有しており、それは、ＣＥＳ２の信頼することができる構造モデルを、ＣＥＳ１構造に基づいて構築することができることを指摘している。ＣＥＳ２のホモロジー構造を、１ＭＸ１のｐｄｂコードを有するＣＥＳ１の複合体構造に基づいて構築した。エネルギー最小化を使用して、Schrodinger社製のＰｒｉｍｅモジュールを使用することによってホモロジーモデルを精密化した。この精密化された構造をバーチャルスクリーニングのための受容体として使用して、化学的に多種多様な推定ＣＥＳ２阻害性薬剤を同定した。

Ｇｌｉｄｅソフトウェアの標準精度モードを使用することで、全ての薬剤と、保存された触媒残基Ｓ２２８を中心とするＣＥＳ２の活性部位との結合を調査した。このようにして、経験的なＧｌｉｄｅスコアを導き出すことで、結合親和性を近似し、薬剤をランク付けした。さらに、補足的な分子力学法−一般化ボルン表面積法（ＭＭＧＢＳＡ）を含めて、推定阻害剤のスコア付けも行った（Hou et al. 2011, J. Chem. Inf. Model. 51(1): 69-82を参照）。

上位１０％にランク付けされた薬剤に対して目視検査を実施した。薬剤選択においては、幾つかの基準を考慮に入れた：１）Ｇｌｉｄｅスコア又はＭＭＧＢＳＡスコアのいずれかにおける高い順位、２）活性部位又はその近くで結合すること、及び３）選択された薬剤分子の間での構造多様性。選択された薬剤は、ｉｎｖｉｔｒｏ試験によって潜在的ＣＥＳ２阻害剤として確認されると予測された。

３種の化合物、すなわちヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンの結合ポーズを、ドッキング結果から抜き出した。３種全ての化合物は、触媒残基のＨ４５７及びＳ２２８の近くのＣＥＳ２の活性部位の内側に結合すると予想された。

実施例２：酵素ベースアッセイ
ＣＥＳ２及びＣＥＳ１酵素アッセイは、一次スクリーニング及び潜在的阻害剤のＩＣ_５０測定のために使用した。該アッセイは十分に確立されており、化合物の発見及びＣＥＳ阻害剤のためのリードオプティマイゼーションにおいて広く使用されている（例えば、Wadkins et al. 2004, Mol. Pharmacol. 65(6):1336 1343、Wadkins et al. 2005, J. Med. Chem. 48(8):2906 2915、Hicks et al. 2009, J. Med. Chem. 52(12):3742 3752、Hyatt et al. 2007, J. Med. Chem. 50(8):1876 1885、Hicks et al. 2007, Bioorg. Med. Chem. 15(11):3801 3817、Hyatt et al. 2007, J. Med. Chem., 50(23):5727 5734、Wadkins et al. 2007, Mol. Pharmacol. 71(3):713 723、及びYoung et al. 2010, J. Med. Chem., 53(24):8709 8715を参照）。ＣＥＳは、エステル類を相応のアルコール及びカルボン酸へと変換する。エステラーゼの基質である４−ニトロフェニルアセテート（４ＮＰＡ）を、酵素活性の検知のために使用した。組換え型の精製された腸ＣＥＳ２及びヒト肝臓ＣＥＳ１酵素及び４ＮＰＡは、Sigma Aldrich社から購入した（製品ＩＤは、それぞれＥ０４１２、Ｅ０１６２、及びＮ８１３０である）。全ての試験化合物を、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭで溶解させ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ中でＩＣ_５０測定のために種々の濃度に希釈した。アッセイは、３００μＬの全容量で９６ウェルマイクロタイタープレート中で行った。反応混合物は、以下の、１０単位の酵素を含む１００μＬの５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０μＬの化合物溶液（様々な濃度）、２μＬの３００ｍＭの４ＮＰＡ、及び１８８μＬの５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）からなっていた。試験化合物及び４ＮＰＡ溶液をまずはウェルに加えた後に、反応を酵素溶液の添加によって開始させた。２５℃で１５分間にわたりインキュベートした後に、４０５ｎｍでの吸光度を、マイクロプレートリーダーを使用して測定した。結果は、以下の表１に示されている。

上記酵素ベースアッセイにより、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンが、ＣＥＳ２活性をそれぞれ２．５４μＭ、９．７２μＭ、及び１．６６μＭのＩＣ_５０値で選択的に阻害することが示された。ＣＥＳ１の大幅な阻害は、ヘスペレチン及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンについて、これらの２種の薬剤の３００μＭ程の高さの濃度を使用しても見られなかった。このことは、ＣＥＳ２についての選択性がＣＥＳ１と比べて１００倍より高いことに相当する。ナリンゲニンは、比較的低いものの、１６．３３というなおもかなりの倍率の選択性を示した。

実施例３：止瀉活性のｉｎｖｉｖｏ試験
ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンの止瀉活性を、腫瘍保有マウスにおいて、これらの３種の薬剤を経口投与するとともに、ＣＰＴ−１１を毎日腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することによって試験した。

ＣＰＴ−１１は、Selleck Chemicals社から購入した。注射可能な製剤を得るために、ＣＰＴ−１１（２０ｍｇ／ｍＬ）を、ｄｄＨ_２Ｏ中にＤ−ソルビトール（４５ｍｇ／ｍＬ）及びＤ−乳酸（０．９ｍｇ／ｍＬ）を含む溶液中に溶解させ、約７０℃〜９０℃に５分〜１０分かけて加熱した（Trifan et al. 2002, Cancer Res., 62(20):5778 5784を参照）。その溶液のｐＨを３．５に調整した後に、滅菌濾過を行った。その溶液は、投与直前まで遮光して貯蔵した。

ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンは、MicroSource社から購入した。これらの化合物のそれぞれを、１００％のＤＭＳＯ中に別々に溶解させた後に、０．５％のカルボキシメチルセルロース溶液中に希釈した。ＤＭＳＯの最終濃度は、１％未満であった。

健康な６週齢〜８週齢の雌のＢａｌｂ／ｃＪマウスは、Jackson Laboratories社（米国メイン州、バーハーバー）から取得した。Ｂａｌｂ／ｃマウス結腸腺癌由来のＣＴ２６腫瘍細胞を使用して、マウスの後方正中背部（posterior mid-dorsum）中に腫瘍細胞を皮下注射することによって腫瘍形成させた。腫瘍が約５００ｍｍ^３に達したとき（移植から約１０日後、１日目として定義する）に、処置を開始した。マウスをそれぞれ３匹〜４匹の動物の５つの群に分け、以下のように処置した：
（１）ビヒクル群
マウスに同等の容量のＣＰＴ−１１ビヒクルを１日目から１０日間まで腹腔内投与し、同等の容量の化合物ビヒクルを０日目から１１日目まで経口投与した。
（２）ＣＰＴ−１１単独群
マウスにＣＰＴ−１１（５０ｍｇ／ｋｇ）を１日目から１０日間まで腹腔内投与し、同等の容量の化合物ビヒクルを０日目から１１日目まで経口投与した。
（３）ＣＰＴ−１１＋ヘスペレチン群
マウスにＣＰＴ−１１（５０ｍｇ／ｋｇ）を１日目から１０日間まで腹腔内投与し、ヘスペレチン溶液（４０ｍｇ／ｋｇ）を０日目から１１日目まで経口投与した。
（４）ＣＰＴ−１１＋ナリンゲニン群
マウスにＣＰＴ−１１（５０ｍｇ／ｋｇ）を１日目から１０日間まで腹腔内投与し、ナリンゲニン溶液（４０ｍｇ／ｋｇ）を０日目から１１日目まで経口投与した。
（５）ＣＰＴ−１１＋２’，４’−ジヒドロキシカルコン群
マウスにＣＰＴ−１１（５０ｍｇ／ｋｇ）を１日目から１０日間まで腹腔内投与し、２’，４’−ジヒドロキシカルコン溶液（４０ｍｇ／ｋｇ）を０日目から１１日目まで経口投与した。

ＣＰＴ−１１及びＣＥＳ２阻害剤を、それぞれ実験の間に一日一回投与した。

ＣＥＳ２阻害剤処置群を、ＣＰＴ−１１単独群及びビヒクル対照群と比較した。４つの主要なパラメータ、すなわち体重変化、下痢の存在、生存時間、及び平均腫瘍サイズを、ＣＥＳ２阻害剤の効果を測るために調査した。結果は、図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃ、並びに以下の表２に示されている。

ヘスペレチン又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンと組み合わせてＣＰＴ−１１を腫瘍保有マウスに投与した場合に、下痢を起こすまでに３日〜４日の大幅な遅延が観察された。より具体的には、ＣＰＴ−１１群においては９日目に下痢が起こったが、ＣＰＴ−１１＋ヘスペレチン又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンで処置された群は、それぞれ１２日目及び１３日目まで下痢を発症しなかった（表２を参照）。

下痢を発症したマウスの割合は、ＣＰＴ−１１及びＣＥＳ２阻害剤で処置された動物において、ＣＰＴ−１１単独と比べて低下した。ピーク効力は、ＣＰＴ−１１単独群のマウスのうち７５％に下痢による染みが生じる一方で、ヘスペレチン群のマウスのうち２５％だけが下痢を発症して、２’，４’−ジヒドロキシカルコン群のマウスが下痢を発症せずに留まっている１２日目に見られた（表２を参照）。

ＣＰＴ−１１単独群と、ＣＰＴ−１１＋ヘスペレチン群、ＣＰＴ−１１＋２’，４’−ジヒドロキシカルコン群、及びＣＰＴ−１１＋ナリンゲニン群との間に、腫瘍成長によって評価された抗腫瘍効力に大きな変化は見出されなかった（図１Ａを参照）。

ＣＰＴ−１１処置によって誘発される体重減少は、ＣＰＴ−１１及びヘスペレチンで処置された群において、又はＣＰＴ−１１及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンで処置された群において逆転された（図１Ｂでの処置１４日目〜１６日目を参照）。

処置された動物の生存率も、ヘスペレチン又は２’，４’−ジヒドロキシカルコンのいずれかと一緒にＣＰＴ−１１を投与することによって、ＣＰＴ−１１単独と比べて改善された（図１Ｃを参照）。

実施例４：ＣＰＴ−１１＋ヘスペレチンのｉｎｖｉｖｏ効力
ＣＰＴ−１１に誘発される下痢の発症に対する種々の用量のヘスペレチンの効果を、上記実施例３に記載されるのと同じ実験プロトコールを使用して試験した。ＣＰＴ−１１と一緒に、ヘスペレチンを２０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与した。結果は、図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃ、並びに以下の表３に示されている。

１００ｍｇ／ｋｇのヘスペレチン用量は、２０ｍｇ／ｋｇのより低い用量と比較して、下痢の発生を１０日目から１２日目に遅らせた（表３を参照）。重要なことには、両方のヘスペレチン用量はともに、ＣＰＴ−１１単独と比較して、下痢の開始を大きく遅らせただけでなく、下痢を示す動物の数を減らした（同上を参照）。

ＣＰＴ−１１の抗腫瘍効力は、どちらの用量のヘスペレチンと一緒に同時投与された場合にも改善された（図１Ａを参照）。

同様に、ＣＰＴ−１１投与によって誘発される体重減少は、ヘスペレチンを試験された両方の用量で同時投与することによって引き下げられた（図２Ｂを参照）。

最後に、動物の生存は、ヘスペレチン及びＣＰＴ−１１の同時投与によって、ＣＰＴ−１１単独と比較して両方のヘスペレチン用量で改善された（図２Ｃを参照）。

その他の実施形態
本明細書に開示される全ての特徴は、あらゆる組み合わせで組み合わされてよい。本明細書に開示される各々の特徴は、同じ目的、同等の目的又は同様の目的にかなう代替となる特徴によって置き換えられてよい。このように、特に明示的に述べられない限り、開示される各々の特徴は、包括的な一連の同等の特徴又は同様の特徴のうちの単なる一例である。

上記詳細な説明から、当業者であれば、本発明の本質的な特性を容易に特定することができ、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な使用法及び条件に適合するために本発明の様々な変更及び修正を行うことができる。このように、その他の実施形態も添付の特許請求の範囲の範囲内である。

Claims

化学療法剤によって誘発される下痢を治療する方法であって、治療を必要とする被験体を特定することと、該被験体に治療的有効量のヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択される第一のカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤を投与することとを含む、方法。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項１に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である、請求項２に記載の方法。
制吐剤、腸運動抑制剤、又はそれらの組合せ物を投与することを更に含む、請求項３に記載の方法。
前記第一のＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチンである、請求項１に記載の方法。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項５に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、ＳＮ−３８、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である、請求項６に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカンである、請求項７に記載の方法。
制吐剤、腸運動抑制剤、又はそれらの組合せ物を投与することを更に含む、請求項８に記載の方法。
前記第一のＣＥＳ２阻害剤とは異なる第二のＣＥＳ２阻害剤を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
癌を治療する方法であって、治療を必要とする被験体を特定することと、該被験体に治療的有効量の化学療法剤、並びにヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択されるカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤を投与することとを含む、方法。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項１１に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である、請求項１２に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は注入によって投与され、かつＣＥＳ２阻害剤は経口投与される、請求項１３に記載の方法。
細菌性β−グルクロニダーゼ阻害剤を投与することを更に含む、請求項１４に記載の方法。
前記ＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチンである、請求項１２に記載の方法。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカンである、請求項１６に記載の方法。
イリノテカンは経口で又は注入によって投与され、かつヘスペレチンは経口投与される、請求項１７に記載の方法。
細菌性β−グルクロニダーゼ阻害剤を投与することを更に含む、請求項１８に記載の方法。
前記ＣＥＳ２阻害剤は、２’，４’−ジヒドロキシカルコンである、請求項１４に記載の方法。
化学療法剤によって誘発される下痢を治療するためのカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤の使用であって、前記ＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択される、使用。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項２１に記載の使用。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である、請求項２２に記載の使用。
前記カンプトテシン類似体はイリノテカンであり、かつ前記ＣＥＳ２阻害剤はヘスペレチンである、請求項２３に記載の使用。
癌を治療するための化学療法剤及びカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤の使用であって、前記ＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択される、使用。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項２５に記載の使用。
前記カンプトテシン類似体は、イリノテカン、トポテカン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）、リポソーム封入型のＳＮ−３８、ポリエチレングリコール抱合型のＳＮ−３８、ＰＥＧ−ポリグルタミン酸ミセル封入型のＳＮ−３８、又はＰＥＧ−シクロデキストリン封入型のＳＮ−３８である、請求項２６に記載の使用。
前記カンプトテシン類似体はイリノテカンであり、かつ前記ＣＥＳ２阻害剤はヘスペレチンである、請求項２７に記載の使用。
癌を治療するための組成物であって、化学療法剤と、ヘスペレチン、ナリンゲニン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンからなる群から選択されるカルボキシルエステラーゼ２（ＣＥＳ２）阻害剤とを含む、組成物。
前記化学療法剤は、カンプトテシン類似体である、請求項２９に記載の組成物。
前記ＣＥＳ２阻害剤は、ヘスペレチンである、請求項３０に記載の組成物。