JP2018518528A - 希ガス組成物を用いた治療的な免疫調節 - Google Patents

Abstract

炎症性の活動と関連した神経性障害および他の障害を治療するための有用な組成物およびプロトコルについて記述する。 いくつかの実施態様において、本発明は、希ガス含有組成物の投与によって神経炎症を調節する手段を提供する。他の態様において、本発明は、内因性の回復活動を増強するため、あるいは既存の治療に相乗効果を与えるために幹細胞の区画を調節する手段を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照としてその全体が本明細書に援用される２０１５年６月２３日出願の米国仮特許出願第６２／１８３，６２４号、２０１６年１月８日出願の米国仮特許出願第６２／２７６，７５３号の優先権を主張する。

本発明は、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の分野に関し、より具体的には、本発明は、ＡＳＤに関連する炎症性メディエーターを減少させるための希ガスのさまざまな混合物の使用に関する。

自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）は、コミュニケーション能力、相互的社会的関係、限局的で反復性のある常同行動における様々な程度の機能障害を特徴とする一群の疾患である。 疾患の違いは、発症時期、症状の進展度合い、症状の重症度と症状の正確な本質によって決まる。 これらの障害は、軽度から重度までの機能障害で、自閉症、アスペルガー症候群、ＰＤＤ−ＮＯＳ、レット症候群、小児期崩壊性障害、右半球コミュニケーション障害、非言語学習障害、高機能自閉症、過読症および注意欠如・多動症などの疾患を含む。

小児における自閉症スペクトラム障害の正確な患者数は不明であるが、米国の限局した地域によっては、発生率が１０００人につき３．４人から１０００人につき６．７人とさまざまである。 さらに、最近の研究によると、米国では、３歳から５歳までの１５，０００人の小児、また６歳から２１歳までの７８，０００人の若年者が自閉症に罹患していると推定されている。 欧州とアジアにおける発症率は類似していて、小児１０００人につき６人が少なくとも一つの自閉症スペクトラム障害を持つ。 さらに、自閉症スペクトラム障害にみられるものと類似の症状を示す不安障害、強迫性障害、社会性欠如障害、反復性障害と認知欠如障害を含む多くの関連した障害があり、こうした障害に罹患する人々がますます増えている。

ＡＳＤは、適切に相互的社会的関係およびコミュニケーションを築けないことを特徴とする重度の不均一な神経発達症群／神経発達障害群の種類と考えられている。 加えて、この疾患の患者は周囲の環境に対する関心がなく、反復性の常同的な言語および非言語的行動を伴う。 さらに自閉症スペクトラム障害の特徴として、社会的離脱（ひきこもり）、アイ・コンタクトがとれないなどの視線を避ける習性、反復行動と強迫観念、常同運動、不安、注意力欠如、多動性、抑うつ症、反社会的性格および感情の理解力欠如などが挙げられる。 自閉症スペクトラム障害に苦しむ患者は、愛情表現や身体的接触に対して嫌悪したり、他者からのコミュニケーションを無視したりすることがある。また、社会活動がある場合でも、他者とのコミュニケーションや関係の構築に困難を示す。 意思疎通が困難であるということは、単調な声、声量を制御できないこと、反響言語または会話が全くできないことから明らかになる場合がある。 自閉症スペクトラム障害を持つ個人は、視覚障害、理解困難、音や光に対する過敏性、知的障害がある場合もある。 特定の単独の原因として決定的なものはないものの、自閉症には多くの潜在的原因がある。 ＡＳＤ発症は、多因子および多遺伝子の影響であると考えられる。 複数の研究によると、自閉症は、感染性病原体、大気汚染、有機リン酸類、重金属類、母体免疫の活性化および予防接種に関係があるとしている。 これらの因子が、全身および局所の酸化ストレス、小胞体ストレス、メチル化能の減少、グルタチオンの限定的な産生、ミトコンドリア機能障害、腸内菌共生バランス失調、中毒性金属負荷の増加、免疫調節不全、神経膠細胞の免疫活性化を通して正常な神経発生的プロセスを操作するエフェクター機能を誘導することと関係しているものと考えられている。

ＡＳＤの治療のために、以下に示す多くの治療が試みられている。 メラトニン、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、ナルトレキソン、カルニチン、幹細胞治療、テトラヒドロビオプテリン、ビタミンＣ、グルタミン酸拮抗薬、特別な栄養補助食品、高圧酸素療法、免疫調節薬および抗炎症治療、オキシトシン、鍼治療、音楽療法および視覚療法。 従来の医師によって処方される自閉症に対する薬物は、不安症および抑うつ症のような特異的な症状に対処し、例えばフルオキセチン、フルボキサミン、セルトラリンおよびクロミプラミンを含む。 クロルプロマジン、チオリダジンおよびハロペリドールなどの抗精神病薬が行動問題を治療するのに投与される。 カルバマゼピン、ラモトリジン、トピラマートおよびバルプロ酸などの抗けいれん薬は、発作を予防するために投与される。 一部の状況で改善が報告されているにもかかわらず、広範囲にわたって受け入れられるほど、その効果は一貫したものではない。 したがって、本発明の目的は、希ガス系の治療混合薬の投与によって自閉症を治療する手段を提供することである。

本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する添付図面は、いくつかの実施態様を解説し、明細書と共に本発明の原理を説明するものである。

図１は、単球からのキセノン・ガスによる誘導性ＴＮＦ−ａｌｐｈａの産生の抑制を示す。

図２は、樹状細胞からのキセノン・ガスによる誘導性ＩＬ−１２の産生の抑制を示す。

発明の詳細な説明
本発明は、全身性および中枢神経系において局所性に生じる炎症性サイトカインを減少させるために希ガス含有混合物の使用を教示する。 本発明の１つの態様において、希ガス含有組成物の投与後のインターフェロンガンマ、ＩＬ−１２およびＩＬ−１７の減少を開示する。 １つの態様において、本発明は、炎症性サイトカインの産生が関連する病状を患う個体に投与される希ガス含有組成物の強度と持続時間を定量化する手段として、これらのサイトカインの全身レベルにおける評価を提供する。 １つの態様において、本発明は、希ガス含有組成物を使用する治療介入の必要性を示す指標として、マイトジェンによるｅｘ ｖｉｖｏの刺激後に末梢血単核細胞によって産生される炎症性サイトカイン・レベルの評価を教示する。 １つの特定の実施態様では、自閉症および自閉症スペクトラム障害の病状に対して、炎症性サイトカイン産生の評価およびそれに続く希ガス含有組成物の投与による調節が行われる。 １つの実施態様において、前記炎症性サイトカインが、 ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＣＤ４０ＬＧ（ＴＮＦＳＦ５）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ−６、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、Ｃ５、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＨＭＧＢ１、インターフェロンガンマ、ＩＬ−２、 ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ３３、 ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）（ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、補体成分Ｃ３とＣ５、２，３ａｌｐｈａ ｇａｌ、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３およびＩＬ８を含む群から選択される。

希ガス含有組成物は、キセノン、ヘリウム、アルゴン、ネオンおよびクリプトン・ガスから選択され、好ましい実施態様はキセノンである。 本発明の１つの実施態様において、亜酸化窒素および／または亜酸化窒素供与体が、前記希ガス含有組成物に加えられる。 特に重要なことに、希ガス組成物は、麻酔効果を誘導するのに必要な濃度未満で投与される。 本発明の１つの実施態様において、前記希ガス含有組成物は、吸入可能なガスの混合物を含み、そこにおいてキセノンまたはキセノン供与体が約５０％以下である。 別の実施態様において、キセノンは前記ガス状組成物の約１５〜４０％を構成し、好ましい濃度は他のガス、好ましくは酸素または空気で希釈された約２５％キセノンである。 いくつかの実施態様において、前記希ガス含有組成物は高圧室を使用して投与され、前記高圧室の前記圧力が３気圧（０．３ＭＰａ）を超えないものとする。

Ｎ．Ｆｒａｎｋｓ ｅｔ ａｌ等が以下に記述しているように、 Ｈｏｗ ｄｏｅｓ ｘｅｎｏｎ ｐｒｏｄｕｃｅ ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ ？ Ｎａｔｕｒｅ， ３９６， ３２４． （１９９８）、キセノンはNMDAとして作用し、 D. Ma 等が報告した、 Ｘｅｎｏｎ ｅｘｅｒｔｓ ａｇｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｉｓｃｈｅｒ ｒａｔｓ， Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ． １００， １３１３−８． （２００４）およびＳ． Ｐｅｔｅｒｓｅｎ−Ｆｅｌｉｘ 等による Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎａｌｇｅｓｉｃ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ｘｅｎｏｎ ａｎｄ ｎｉｔｒｏｕｓ ｏｘｉｄｅ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｉｎ； Ｂｒ Ｊ Ａｎａｅｓｔｈ． ８１， ７４２−７ （１９９８）により確かめられた。 国際公開第Ａ−０２／２２１４１号は、心血管保護剤、鎮静剤および鎮痛薬としてのキセノンの使用を教示する。 本特許は、ＡＳＤを治療するためにキセノンおよび希ガスの組合せの使用を出願する。

本発明の１つの実施態様において、希ガスの組合せは、強迫性障害、大食症、拒食症、広場恐怖症および閉所恐怖症などの神経系適応症の治療のために利用される。 発明の１つの実施態様において、希ガスの組合せは、全般性不安症、大うつ病、統合失調感情障害、統合失調症、ＰＴＳＤ、自閉症、パニック障害、アスペルガー症候群、器質脳症候群（アルツハイマー病、レビー小体、パーキンソン病、片頭痛、ハンチントン病および中毒）を治療するために利用される。

本発明は、ＡＳＤに罹患している患者を治療する手段を提供する。 特定のＡＳＤ患者が局所および全身性の免疫調節異常を呈し、結果として炎症性メディエーター産生と興奮毒性が増加する傾向を示すことを観察し、その観察に基づいて患者を選択する。

本発明の１つの実施態様において、ＡＳＤ患者に、アルゴンとキセノンなどの希ガスの混合物を、免疫学的異常を修正するのに十分な方法で投与する。

初期の研究によると、自閉症患者において、マイトジェンによる刺激後にＴ細胞が増殖能を欠如していることが実際にわかった。 １つの研究において、Ｓｔｕｂｂｓ等が１２例のＡＳＤ患者と１３例の対照患者を検査した。 研究者は、対照患者と比較して、Ｔ細胞マイトジェンであるフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）の種々の濃度に反応して、ＡＳＤ患者の末梢血単核細胞の増殖が抑制されたことを見出した[1]。 独立したグループによってこの試験が拡大され、３１例のＡＳＤ患者を調べ、コンカナバリンＡとアメリカヤマゴボウマイトジェンを加えたところ、年齢を適合させた対照と比較して、自閉症患者のリンパ球増殖の抑制が明らかになった[2]。 ＡＳＤにおいて、非特異的に低下することが報告された具体的なリンパ球のタイプとして、ＣＤ４ Ｔ細胞[3]およびナチュラルキラー細胞[4]が挙げられる。 経験に反するが、非特異的刺激物に対してリンパ球増殖活性が抑制されるということは、実際のところ自己免疫状態と関係している。 このことは、自己免疫患者[5-9]ならびに動物モデル[10-12]で立証されている。

Ｂ細胞の依存性とＴ細胞上で抗体産生が起こることを考慮すると、ＡＳＤ患者で免疫系の体液性群が欠乏していることが、複数の研究によっても示された。 Ｈｅｕｅｒ 等 自閉症の小児（ＡＵ； ｎ＝１１６）、自閉症ではない遅延発達（ＤＤ）小児（ｎ＝３２）、完全な自閉症ではない自閉症スペクトラム障害の小児（ｎ＝２７）および年齢を適合させた定型発達（ＴＤ）対照（ｎ＝９６）から血漿を集めた。 検体は、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡとＩｇＥ）の全身レベルを酵素免疫測定法によって測定した。 被験者は、自閉症スペクトラム観察検査および自閉症診断面接改定版に従って評価され、すべての被験者は両親によって異常行動チェックリスト（ＡＢＣ）を使ってスコア化された。 総スコアと同様、ＡＢＣサブスケールのそれぞれの数値スコアをＩｇレベルと相関させた。 ＡＵ小児の血漿ＩｇＧ（５．３９＋／−０．２９ｍｇ／ｍＬ）は、ＴＤ小児（７．７２＋／−０．２８ｍｇ／ｍＬ； Ｐ ＜ ０．００１）およびＤＤ小児（８．２３＋／−０．４９ｍｇ／ｍＬ； Ｐ ＜ ０．００１）と比較して有意に減少していることが判明した。 自閉症の小児の血漿ＩｇＭレベル（０．６７０．０６ ｍｇ／ｍＬ）もＴＤ（０．７９＋／−０．０５ｍｇ／ｍＬ； Ｐ ＜ ０．０５）と比較して有意に減少していた。 最も重要なことは、Ｉｇレベルが、すべての小児におけるＡＢＣスコアと負の相関があった（ＩｇＧ： ｒ＝−０．３３４、Ｐ ＜ ０．０００１； ＩｇＭ： ｒ＝−０．１６７、Ｐ＝０．０２８５）[13]。 それ以降の研究は、自閉症患者におけるＩｇＧとＩｇＭの抗体レベルの減少についての観察を繰り返したものであった [14]。 したがって、Ｔ細胞活性が減少した１つの説明として、抗原提示細胞と発達過程のＴ細胞との間の相互作用が不適切である可能性が考えられる。 自己免疫において抗原提示細胞が欠如していることが以前から立証されていた。そしてこれらが自己免疫寛容を破壊するＴ細胞受容体の不適正な生成と相関していている[15-17]。 マクロファージは抗原をＴ細胞に提示する免疫細胞の１種であり、患者のマクロファージ調節分子であるＭＩＦ−１の血漿濃度を示す研究によって、ＡＳＤにおいて炎症状態が常時あることが示唆されている [18]。 適切な抗原提示のために必要とされる分子がＡＳＤでは欠如していることが見つかっている。 例えば、Ｊｙｏｎｏｕｃｈｉ等は、インターロイキン１０の産生を促進するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の能力が減少していることを見出した [19]。 このサイトカインは、Ｔ細胞 [20-22] に作用する抗原提示細胞によって生成される基本的なシグナルであり、免疫系が自己免疫反応を開始しないようにするＴ調節性細胞の生成および維持において基本的な役割を果たす[23, 24]。 したがって、本発明の１つの態様において、本発明者は、ＡＳＤ患者の免疫系のリバランシングが誘導されるように、Ｔ調節性細胞活性を増強させるために希ガスの組合せの使用を開示する。

複数の研究によれば、神経病学的に関連のあるターゲットに反応する抗体が健常対照者には見つかっていないが、ＡＳＤ患者には見つかっており、これは自閉症が免疫に関連していることを支持するものである。 Ｓｉｌｖａ等は、１７１例の自閉症小児と彼らの両親および５４例の対照者の血漿中の脳組織抽出物に対する自己抗体レパートリーを定量的免疫ブロットによって分析した。 多パラメータ分析によって、患者と対照との間に有意差があることが明らかになり、こうした検体を識別することができるブロットの領域に対する反応性がみられた。 ターゲットタンパク質の分子量から、それがミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）のアイソフォームである可能性が示唆された。ミエリン塩基性タンパク質は、軸索の内側を覆っているタンパク質で、多発硬化においてターゲットとなる[25]。 別の研究において、Ｖｏｊｄａｎｉ等は、５０例の自閉症患者と５０例の健常対照者の血清を用いて、グリアジンと小脳由来の特異的ペプチドに対する反応性を調べた。 グリアジンは、多くのＡＳＤ患者の特徴であるグルテン不耐症と関連があるグルテンに見つかる抗原である。 自閉症患者において、グリアジンと小脳ペプチドに対する抗体が有意な割合で同時に上昇していることが示された。 著者は、自閉症患者のサブグループがプルキンエ細胞とグリアジン・ペプチドに対する抗体を産生し、それが自閉症における神経症状の原因の一部となっている可能性があると結論づけた [26]。別の研究では、Ｃａｂａｎｌｉｔ等が、１７２例の患者（自閉症（ＡＵ））、ｎ ＝ ６３、年齢の中央値：４３ヵ月、（定型発達（ＴＤ））対照、ｎ ＝ ６３、年齢の中央値：４８ヵ月、兄弟姉妹、ｎ ＝ ２５、年齢の中央値：６１ヵ月および（発達遅延（ＤＤ））対照、ｎ ＝ ２１、年齢の中央値：３８ヵ月）からの血清について検査した。 視床下部と視床を含むヒト成人の脳の特定領域から抽出したタンパク質抽出物に対するＩｇＧ抗体の有無を調べるために、血漿をウエスタンブロットによって分析した。 研究者は、ＡＵ被験者の血漿中に約５２ｋＤａの分子量バンドが存在し、ＴＤ対照からの血漿と比較して有意に高い発生率（それぞれ、視床において２９％ 対８％、Ｐ ＝ ０．００２７、視床下部において３０％ 対１１％、Ｐ ＝ ０．０１）であることを報告した。 ３つの脳タンパク質（分子量４２〜４８ｋＤａ）に対する反応性、特に視床下部に対する反応性が、ＡＵ被験者の３７％で増加していることが観察され、一方、ＴＤ対照では１３％（Ｐ ＝ ０．００４）であった。

ＡＵの小児には、脳特異的自己抗体が有意に高い頻度で存在した。 ＡＵで見られるこうした自己抗体の潜在的役割は現在のところ知られていないが、こうしたタンパク質が存在することは、幼少期に一つ以上の神経抗原に対する自己免疫寛容が失われたことを示唆している[27]。 したがって、本発明の１つの態様において、ＡＳＤの治療方法は、神経組織をターゲットとしている抗体の産生を低下させるために、希ガスを投与することによって提供される。 １つの実施態様において、本発明は、抗体の産生を変化させる他の薬剤と共に希ガスを利用することを教示していて、抗体を調整する前記手段が抗原特異的であってもよく、例えば抗原特異的免疫寛容誘導（例えば経鼻免疫寛容、経口免疫寛容、経静脈免疫寛容、免疫寛容性ワクチン）、あるいは化学療法薬、リツキシマブまたは血漿交換の実施などの抗原非特異的であってもよい。

別の実施態様において、キセノン・ガス含有混合物、好ましい態様では空気または酸素で希釈された２５％キセノンが、樹状細胞からのＩＬ−１２産生を減少させるために、ＩＬ−１２産生の減少が所望される免疫状態の悪い患者に投与される。 １つの実施態様では、酸素で希釈された２５％キセノンを投与一回につき１０リットル、一週間に３回投与する。

ＡＳＤの自己免疫の特徴は、抗体量の上昇のみならず炎症性タンパク質またはサイトカインの全身性発現としても見受けられる。 さまざまな炎症性物質が興奮毒性と関連しているという知見を考慮すると、ＡＳＤの特徴のいくつかが炎症性刺激によって誘導されるフェノタイプに似ており、ＡＳＤ患者において全身的に炎症性および抗炎症メディエーターを探索することには論理的根拠がある。 Ｓｉｎｇｈ等の初期の研究によると、ＡＳＤ患者の体循環のＩＬ−１２およびインターフェロンガンマのレベルが、対照と比較して有意に高いことが証明された。 免疫応答の抗原提示群によって産生されるＩＬ−１２がＴｈ１細胞を誘発することはよく知られており、後に炎症性であることが知られるようになったのは非常に興味深いものである[28]。 別の試験では、６５例の自閉症小児、８例の注意欠如障害小児、２例のレット症候群小児、２例のアスペルガー症候群小児について、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａｌｐｈａ）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）の血清濃度を測定した。 結果を、年齢、性別を適合させた対照小児と比較した。 自閉症小児、注意欠如障害小児、レット症候群小児およびアスペルガー症候群小児の血清におけるＴＮＦ−ａｌｐｈａ、ＩＬ−１およびＩＬ−６産生の有意な増加[29]。 ＴＮＦ−ａｌｐｈａ、ＩＬ−１およびＩＬ−６がすべて免疫系の抗原提示群、特にマクロファージによって産生される炎症誘発性のシグナルであることを考慮すると、研究は間接的にＡＳＤにおける免疫系のこの群に何らかの変更が存在していることを支持している。

別の試験において、２〜５歳のＡＳＤ小児から得られた血漿検体中の分化サイトカインの放出について臨床調査を行い、年齢を適合させた定型発達（ＴＤ）小児および 自閉症 以外の発達障害（ＤＤ）小児と比較した。 標準評価（ＤＳＭ ＩＶ基準とＡＤＯＳ、ＡＤＩ−Ｒ）によりＡＳＤと確定診断された９７例の参加者、ＴＤと確定した８７例の対照者およびＤＤと確定した３９例の対照者。 血漿を分離し、サイトカイン産生を複合ルミネックス（商標）分析によって評価した。 観察によると、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＩＬ−１２ｐ４０を含む多くのサイトカインの血漿濃度は、ＡＳＤ群においてＴＤ対照群と比較して有意な増加を示す。 さらに、ＡＳＤ群を発病時期に基づいて分けると、サイトカイン・レベルが上昇したのは大部分が退行型ＡＳＤ小児であった点が指摘された。 また、サイトカイン・レベルの増加は、コミュニケーション障害および異常行動の悪化程度と関係していた。 ＡＳＤの重症度が炎症マーカーと相関していたことから、この試験は特に重要であった[30]。 ＡＳＤにおいてさらに別のサイトカインについて記述があり、例えば、Ａｌ−Ａｙａｄｈｉｉ等は４５例のＡＳＤ小児および４０例の適合する健常対照者の血清ＩＬ−１７Ａレベルを詳しく調べた。 ＡＳＤ小児の血清ＩＬ−１７Ａレベルは健常対照者より有意に高く、自閉症患者群の４８．９％でＩＬ−１７Ａの血清レベルが増加していることが見つかった。 重度の自閉症患者の血清ＩＬ−１７Ａレベルは、軽度から中程度の自閉症患者より有意に高く、重度の自閉症小児では血清のＩＬ−１７Ａレベル増加が頻繁にみられ（６７．９％）、その頻度は中軽度の自閉症小児（１７．６％）に比較して有意（Ｐ＝０．００１）であった[31]。

ＡＳＤにおけるＩＬ−１７の上昇は、この疾患が自己免疫寛容の破壊時にサイトカインが根本的に重要な役割を果たすことが原因で起こる自己免疫の要素を持つことを特に暗示している[32-36]。 これは、患者同様、多数の自己免疫動物モデルでＩＬ−１７の上昇がみられることによって例証される[37-40]。

炎症性サイトカインのレプチンがＡＳＤ患者でも報告された。 例えばＢｌａｒｄｉ等は、若年の自閉症患者について研究し、１年間にわたって血漿レプチンとアディポネクチンレベルを調べた。 ３５例の患者（ベースライン時の平均年齢、１４．１＋／−５．４歳）を登録した。 対照は、性別および年齢を適合させた３５例の健常者であった。 血液検体は試験開始時および１年後の朝に採血した。 患者のアディポネクチンに有意な変化はみられなかったが、レプチン濃度は有意に増加した。 患者のレプチン値は、それぞれの検査時期で対照より有意に高かった。 それぞれの検査時期で、アディポネクチン値は、患者と対照の間で差がなかった。 患者が肥満でなかったことから、著者はレプチンが体重バランス以外の臨床症状に関与する可能性について仮説を立てた[41]。 別の試験によって、この知見が確認された。 具体的には、自閉症（３７例の退行性を含む）と診断された７０例の小児と、５０例の定型発達（ＴＤ）対照、自閉症 のない２６例の兄弟姉妹および２３例の発達障害（ＤＤ）小児を含む９９例の年齢を適合させた対照とを比較して、レプチン血漿レベルを評価した。 自閉症 の小児の血漿レプチン・レベルは、ＴＤ対照と比較して有意に高かった（ｐ ＜ ．００６）。 退行性または早期発症型 自閉症, にさらに分類すると、早期発症型 自閉症の小児の血漿レプチン・レベルは、退行性 自閉症 （ｐ ＜ ．０４２）、ＴＤ対照（ｐ ＜ ．００１５）およびＤＤ対照（ｐ ＜ ．００４）の小児と比較して有意に高かった。

より広範囲なサイトカイン分析が、Ｓｕｚｕｋｉ等によって行われた。Ｓｕｚｕｋｉ等は、高機能ＡＳＤ（ｎ＝２８）のある男性被験者および適合する対照（ｎ＝２８）からの血漿検体を調べるためにサイトカインとケモカインの多重分析を利用した。 調べられた合計４８検体の中で、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７とＧＲＯ−αの血漿濃度は、多重比較で補正した後、適合対照の値と比較したところ、ＡＳＤの被験者において有意に高かった[42]。 類似の結果が、別の独立試験で見つかった [43]。 これらの多くの炎症性メディエーターはＡＳＤの重症度と相関しており、ケモカインとの間にも相関がみられた。 別の研究において、Ａｓｈｗｏｏｄ等は、ＡＳＤ小児において血漿中のケモカインに違いがあるかどうかについて、年齢を適合させた定型発達の対照およびＡＳＤ以外の発達障害の小児と比較して検討した。 ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳおよびエオタキシンのレベルは両方の対照群と比較してＡＳＤ小児で増加がみられ（ｐ ＜ ０．０３）、ケモカインの産生が増加すると異常行動スコアが高くなり、発達上で適応可能な機能の障害の程度 [44] と関係していた。

自閉症と炎症性メディエーターの関連性は、ＡＳＤ患者で、血漿中の炎症誘発性分子ＨＭＧＢ１のレベルが増加していることによって説明することができるものと思われる。 例えば、一つの試験では、２２例の自閉症成人患者（平均年齢： ２８．１＋／−７．７歳）および２８例の年齢と性を適合させた健常対照者（平均年齢： ２８．７＋／−８．１歳）のＨＭＧＢ１濃度を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）にて測定した。 健常者と比較すると、ＨＭＧＢ１の血中レベルは自閉症患者で有意に高かった（それぞれ、１０．８＋／−２．６ｎｇ／ｍＬ対５．６＋／−２．５ｎｇ／ｍＬ、Ｐ ＜ ０．００１）。 潜在的交絡因子の調整の後、血清ＨＭＧＢ１のレベルは、相互的社会的関係における機能障害を反映する自閉症診断面接改定版における患者のドメインＡスコアと独立して関係していた[45]。 互いに矛盾するものではないが、ＡＳＤ患者で免疫抑制サイトカインのレベルの減少が見られるということを別の仮説として挙げることができる。 例えば、ＴＧＦ−ｂｅｔａは、炎症とＴｈ１／Ｔｈ１７サイトカインの強力なサプレッサーであることが知られている。 ７５例のＡＳＤの小児における活性化ＴＧＦ−ｂｅｔａ１の血漿レベルを６８例の対照と比較して評価した。 年齢と性を適合させた後に、ＡＳＤの小児の血漿ＴＧＦ−ｂｅｔａ１レベルを、定型発達の対照児（ｐ＝０．００１７）およびＡＳＤ以外の発達障害の小児（ｐ＝０．００３７）と比較したところ、有意に低くかった。 さらに、ＴＧＦ−ｂｅｔａ１のレベルの低下が適応行動の低下および行動上の症状の悪化と関係があるように、心理的尺度とＴＧＦ−ｂｅｔａ１レベルとの間に有意の相関がみられた[46]。

ＡＳＤにおけるサイトカイン調節不全の生物学的関連性についての証拠として、炎症の全身マーカーが上昇するという事実を挙げることができる。 例えば、活性化マクロファージによって産生される産物であるネオプテリンは、ＡＳＤ患者では対照より高い濃度で発現している[47-49]。 さらに、マクロファージ活性化の別のマーカーである一酸化窒素もＡＳＤ患者で上昇する[50]。

サイトカインの異常に加えて、ｉｎ ｖｉｔｒｏの刺激に応答してサイトカインを産生する免疫細胞能が変化するなどの細胞性異常も検出されている。 １つの試験では、１７例のＡＳＤの小児および１６例の年齢を適合させた定型発達（ＴＤ）対照から分離した末梢血単球を調べ、これらを含む細胞培養を異なるｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドでｉｎ ｖｉｔｒｏにて刺激し、細胞培養から上清を集め、ＩＬ−１ｂｅｔａ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ―ａｌｐｈａ、ＭＣＰ−１およびＧＭ−ＣＳＦに反応する炎症誘発性サイトカインを多重ルミネックス分析によって測定した。 ＴＬＲリガンドによるｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激の後、分化サイトカインの反応について、ＡＳＤ小児から分離した単球培養で観察し、ＴＤ対照小児と比較した。 特に、ＡＳＤ小児から分離した単球培養中に、炎症誘発性ＩＬ−１ｂｅｔａ、ＩＬ−６およびＴＬＲ ２に続くＴＮＦ―ａｌｐｈａの反応、ＴＬＲ ４刺激に続くＩＬ−１ｂｅｔａ反応に、ＴＤ対照に比較して著しい増加があった[51]。

Ｔ細胞レベルについて、確定診断がついた６６例のＡＳのＤ小児と定型発達（ＴＤ）と確定された７３例の２〜５歳の対照を対象に臨床試験を行った。 Ｉｎ ｖｉｔｒｏにてＰＨＡと破傷風で末梢血単核細胞を刺激して、グループ関連の細胞性応答を比較した。 ＡＳＤのＩＬ−１２ｐ４０がＰＨＡ刺激の後、ＴＤ対照と比較して減少したのに対して、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ-αおよびＩＬ−１３の産生が有意に増加した。 炎症誘発性またはＴ（Ｈ）１サイトカインの増加が、異常行動と同じく、ＡＳＤの中心的特徴において機能障害が大きく損なわれていることと関係があったように、誘発されたサイトカイン産生はＡＳＤ小児の行動変化と関係していた。 これとは対照的に、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴ（Ｈ）２サイトカインの産生は、より良好な認知機能および適応機能と関係があった。 刺激の後、活性化マーカーのうち、ＣＤ１３４およびＣＤ６９以外のＣＤ２５、ＨＬＡ−ＤＲまたはＣＤ１３７を発現しているＣＤ３（＋）、ＣＤ４（＋）およびＣＤ８（＋） Ｔ細胞の頻度は、ＡＳＤで有意に減少していた。これはＡＳＤのＴ細胞の活性化プロフィールが変化していることを示唆するものである[52]。 これは、以下の参考文献でも引用されている[53, 54]。

ＡＳＤが免疫を介した疾患であるという可能性は、免疫調節剤がＡＳＤを抑制またはその症状を減少するという研究によって支持されている。 例えば、抗炎症特性を持つ承認済みのＰＰＡＲ−γ抑制薬であるピオグリタゾンが、３０または６０ｍｇ／日、経口で投与された。 合計２５例の小児（平均年齢は７．９ ＋／− ０．７歳）が登録した。 行動上の症状を、多動、不適切な会話、興奮性、無気力および常同行動を測定する異常行動チェックリスト（ＡＢＣ）によって、試験開始時および治療後３〜４ヵ月に評価した。 ３０または６０ｍｇの経口ピオグリタゾンを３〜４ヵ月間、毎日投与すると、有害事象なしに顕著に臨床状態の改善がみられたと報告された。 特記する副作用がなく、行動測定については、５つのサブカテゴリ中４つ（興奮性、無気力、常同行動および多動）に有意の減少がみられたことが明らかになった[55]。 臨床診断でＡＳＤのＤＳＭ ＩＶＴＲと診断された４〜１２歳の間の４０例の小児に、抗炎症かつＮＦ−ｋＢ抑制薬であるペントキシフィリンをリスペリドンと混合投与して評価した。 重度の破壊的症状を主訴とする小児は、自閉症性障害と関係があった。 患者を１０週間の二重盲検プラセボ対照試験のために、ペントキシフィリン＋リスペリドン群またはプラセボ＋リスペリドン群にランダムに割り当てた。 リスペリドンの用量は、３ｍｇ／日まで増量し、ペントキシフィリンは６００ｍｇ／日まで増量した。 試験開始時のベースライン時、投薬の２、４、６、８および１０週後に患者を評価した。 転帰は、異常行動チェックリスト−コミュニティ（ＡＢＣ−Ｃ）によって計測した。 ペントキシフィリンを受けた群において、興奮性、無気力／引きこもり、常同行動、多動／不服従および不適切な言語[56]についてのＡＢＣ−Ｃサブスケール・スコアがより大きく減少し、２つのプロトコル間の差は有意だった。 ＩＶＩＧ [57]およびステロイド [58]などの炎症の抑制と関連する他の免疫調節成分によって、ある程度の改善がみられることが明らかになった。

調査のもう一つの領域は、ＨＬＡのような免疫関連遺伝子による遺伝子多型が疾患と関連があるという遺伝学的研究から得られたＡＳＤが炎症性／自己免疫疾患であるという仮説を支持している [59-69]。

全般的にみて、ＡＳＤに神経免疫の基盤があることが多数の証拠によって支持されており、これらは以下の参考文献でさらに詳細に再評価される[70-76]。

心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）は、単一または複数の恐ろしいイベントに曝された結果生じる消耗性の外傷関連の障害である。 大多数のＰＴＳＤ症例は戦闘状態と関係があるが[77]、他の誘発因子も報告されている[78-82]。 ＰＴＳＤの大部分の生物学的知見は、例えば中枢神経系内で副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）濃度が上昇およびカテコールアミンの減少などの慢性ストレス応答にみられるものと矛盾しない[83]。 患者は、断片的な記憶、宣言的記憶に関する問題、外傷に関連する情報に対する注意バイアスおよび侵入性記憶などを含む幅広い記憶に関する問題を呈する[84]。

ＰＴＳＤ患者で解剖学的な違いが見つかっている。例えば、Ｂｒｅｍｎｅｒ等は、ＰＴＳＤを呈する２６例のベトナム戦争退役軍人の海馬量を、年齢、性、人種、教育年数、社会経済的状態、体の大きさとアルコール乱用年数が患者と類似しているように選択された２２例の被験者と比較して調べた。 被験者と比較して、PTSD｝患者の右海馬量が８％少なく、これは統計的に有意であったが、他の脳領域（尾状核と側頭葉）量には差がなかったことが認められた[85]。 他の研究でも、海馬量の減少については類似の結果が見つかった[86, 87]。

ＰＴＳＤの治療は、すべての選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）の中でも最も強力なセロトニン再取り込み阻害薬である抗うつ薬、パロキセチン（Ｐａｘｉｌ）を含む[88]。Ｍａｒｓｈａｌｌ等は、二重盲検試験を行い、１８６例の患者をランダムに割り当ててプラセボを投与し、１８３例に２０ｍｇ／日のパロキセチン、１８２例の患者に４０ｍｇ／日のパロキセチンを投与した。 両方の用量群のパロキセチン治療を受けた患者は、治療企図解析によると、プラセボ治療を受けた患者と比較して主要転帰に有意な改善がみられた。 さらに、パロキセチン治療は、３つすべてのＰＴＳＤ症状の集合（再体験、回避／無感覚および過覚醒）および社会的機能障害と職業性機能障害および併発する抑うつ症について、プラセボと比較して統計的に有意な改善を来した。 治療に対する反応は、外傷のタイプ、外傷を受けてからの時間またはベースライン時のＰＴＳＤの重症度または抑うつ症状の重症度によって違いがなかった。 両方の用量は、認容性が高かった[89]。 これらの結果は、いくつかの他の研究によって追試された[90-93]。

ＰＴＳＤは、炎症マーカーの全身のアップレギュレーションと同様に[97, 98]神経炎症[94-96]を特徴とする。 興味深いことに、ミノサイクリンのような炎症を減少させる薬剤は、ＰＴＳＤまたはＰＴＳＤのモデルに対しても作用がある[99, 100]。 神経炎症および炎症を減少し、ＰＴＳＤおよび自閉症に関連する生物学的プロセスを改善するために利用される指針は、脳卒中、統合失調症および痴呆を含む他の精神疾患および神経学的障害にも適用できる。 本発明の１つの実施態様において、希ガス含有混合物は、ＰＴＳＤ患者の炎症を減少させるために利用される。 本発明の１つの実施態様において、神経新生の刺激は希ガス含有混合物の投与によって達成される。 １つの実施態様において、脳卒中、統合失調症および痴呆の治療のために希ガス含有混合物の使用が開示される。 １つの実施態様において、前記希ガス含有混合物は約１０〜４０容量％のキセノン濃度を含む。 別の実施態様において、キセノンの前記濃度は、約１５〜２５容量％である。 ガスの残りの濃度は、空気、酸素と窒素の混合物または他の希ガスを追加してもよい。

濃度決定のためのガイダンスおよび希ガス含有混合物の比率は当技術分野によって提供され、所望する効果に基づいて使われる。 神経学的／免疫学的効果を引き出すために有用な希ガス含有混合物の実施例は、本明細書の一部として援用する以下の参考文献に挙げる[101-106]。 １つの実施態様において、前記希ガスの混合物は、ガス状組成物として患者に吸入することによって生理的投与ができ、そこにおいてガス状組成物が、有効な容積比率のキセノンを含み、少なくとも１０％から５０容量％未満の範囲内にあり、治療を必要とする患者の免疫学的パラメータを調整するのに十分な量を含むものとする。 別の実施態様において、ガス状混合物は神経新生を誘発するために投与される。 別の実施態様において、前記ガス状混合物は興奮毒性を低下させるために投与される。 別の実施態様において、前記ガス状混合物は神経学的疾患を治療するために投与される。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物は、４０容量％未満のキセノンを含む。 １つの実施態様において、ガス状組成物は、３０容量％未満のキセノンを含む。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物はさらに酸素を含む。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物は、２１容量％の酸素を含む。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物がＮ_２Ｏ、Ａｒ、Ｋｒ、Ｎｅ、Ｈｅ、Ｎｅ、ＮＯ、ＣＯ、Ｈ_２ＳおよびＮ_２からなる群から選択される追加の合成物をさらに含む。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物は、１回の吸入時間が数分から１時間以上で、１日につき１回以上、患者に投与される。 １つの実施態様において、前記ガス状組成物は、２〜３００ｂａｒの範囲内の圧力のガス容器で提供される。 個々の症例によって、本発明による吸入可能なガス状組成物は、以下の特徴のうち１つまたは複数を含むことができる： 有効な体積比率のキセノンを含む。 ５〜７０容量％の範囲内のキセノンを含む。 少なくとも１０容量％のキセノンを含む。 ５０容量％未満のキセノンを含む。 ４０容量％未満のキセノン、好ましくは３０容量％未満のキセノンを含む。 酸素、好ましくは少なくとも２１容量％の酸素をさらに含む。 それは、Ｎ_２Ｏ、Ａｒ、Ｋｒ、Ｈｅ、Ｎｅ、ＮＯ、ＣＯ、Ｈ_２ＳおよびＮ_２からなる群から選択される追加の合成物をさらに含む。 数日から数年の間にわたる総治療期間中、キセノンは、１日につき１回以上の吸入によって、患者に投与される。 ガス状キセノンは、酸素を含むガスと混合され、特にキセノンは空気またはＮ_２／Ｏ_２混合物と混合される。

本発明の１つの実施態様において、ＰＴＳＤ関連の炎症は、空気または酸素で希釈された２５％のキセノンを約１０リットル量で投与することによって治療され、前記ガスの組合せは１週につき約３回、投与される。 例えばＰＴＳＤなどの中枢神経系の炎症が関係する病状について、炎症を減少させるための薬剤として使用されるガスまたはガス混合物の例は、以下を含む： １．） １００容量％のキセノン。 ２．） ７０容量％のキセノン／３０容量％の酸素。 ３．） ６５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／５容量％の窒素。 ４．） ６５容量％のキセノン／３５容量％の酸素。 ５．） ６０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／１０容量％の窒素。 ６．） ６０容量％のキセノン／３５容量％の酸素／５容量％の窒素。 ７．） ６０容量％のキセノン／４０容量％の酸素。 ８．） ５５容量％のキセノン／２５容量％の酸素／２０容量％の窒素。 ９．） ５５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／１５容量％の窒素。 １０．） ５５容量％のキセノン／３５容量％の酸素／１０容量％の窒素。 １１．） ５５容量％のキセノン／４０容量％の酸素／５容量％の窒素。 １２．） ５５容量％のキセノン／４５容量％の酸素。 １３．） ５０容量％のキセノン／５０容量％の酸素。 １４．） ５０容量％のキセノン／４５容量％の酸素／５容量％の窒素。 １５．） ５０容量％のキセノン／４０容量％の酸素／１０容量％の窒素。 １６．） ５０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／２０容量％の窒素。 １７．） ５０容量％のキセノン／２５容量％の酸素／２５容量％の窒素。 １８．） ４５容量％のキセノン／５５容量％の酸素。 １９．） ４５容量％のキセノン／５０容量％の酸素／５容量％の窒素。 ２０．） ４５容量％のキセノン／４５容量％の酸素／１０容量％の窒素。 ２１．） ４５容量％のキセノン／４０容量％の酸素／１５容量％の窒素。 ２２．） ４５容量％のキセノン／３５容量％の酸素／２０容量％の窒素。 ２３．） ４５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／２５容量％の窒素。 ２４．） ４５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／２５容量％の窒素。 ２５．） ４０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／３０容量％の窒素。 ２６．） ４０容量％のキセノン／５０容量％の酸素／１０容量％の窒素。 ２７．） ３５容量％のキセノン／２５容量％の酸素／４０容量％の窒素。 ２８．） ３５容量％のキセノン／６５容量％の酸素。 ２９．） ３０容量％のキセノン／７０容量％の酸素。 ３０．） ３０容量％のキセノン／５０容量％の酸素／２０容量％の窒素。 ３１．） ３０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／４０容量％の窒素。 ３２．） ２０容量％のキセノン／８０容量％の酸素。 ３３．） ２０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／５０容量％の窒素。 ３４．） １５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／５５容量％の窒素。 ３５．） １５容量％のキセノン／５０容量％の酸素／３５容量％の窒素。 ３６．） １０容量％のキセノン／９０容量％の酸素。 ３７．） １０容量％のキセノン／５０容量％の酸素／４０容量％の窒素。 ３８．） １０容量％のキセノン／３０容量％の酸素／６０容量％の窒素。 ３９．） １０容量％のキセノン／２５容量％の酸素／６５容量％の窒素。 ４０．） ５容量％のキセノン／２５容量％の酸素／７０容量％の窒素。 ４１．） ５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／６５容量％の窒素。 ４２．） ５容量％のキセノン／５０容量％の酸素／４５容量％の窒素。 ４３．） ５容量％のキセノン／３０容量％の酸素／６５容量％の窒素。 ４４．） ５容量％のキセノン／９５容量％の酸素。 ４５．） １容量％のキセノン／９９容量％の酸素。 ４６．） １容量％のキセノン／３０容量％の酸素／６９容量％の窒素。 ４７．） １容量％のキセノン／２５容量％の酸素／７４容量％の窒素。

本発明の１つの実施態様において、治療的希ガス組成物は、身体の免疫学的要因を変更するような方法で投与される。 具体的には、さまざまな濃度のキセノン・ガスは、吸入[107-109]またはエコー源性のキセノン・リポソーム[110, 111], の投与のいずれかによって血液循環に送達される場合、調節性Ｔ細胞フェノタイプの誘導およびＴｈ１７または他の関節炎を発生させる細胞の抑制を誘導するために利用できることを教示する。 キセノンの使用については、当技術分野の多数の研究者によって見直されていて、投与[112-114]の詳細に関するガイダンスを提供する。 重要なことに、本発明の新しいおよび非自明の態様は、他の希ガスと同様にキセノンが免疫調節を誘導し中枢神経系の炎症を抑制することができるということである。

本発明の１つの実施態様において、間葉系幹細胞などの新生細胞の集団は、最初に希ガス含有混合物で「プライム」される。 前記「プライム」は、新生細胞の活性を増強するために行われる。 治療目的の興味の対象となる活性として、遊走の増強、サイトカイン産生の増強または抗アポトーシス活性の増強が挙げられる。 そのような治療的活性を得るために有用な濃度および混合物は、目的とする遺伝子の刺激、すなわち前記治療的活性に関連した前記遺伝子の刺激によって決定される。 例えば、幹細胞遊走の増強が所望される場合には、ＣＸＣＲ４の産生について評価が行われる これを実施する手段は当技術分野でよく知られており、フローサイトメトリーによるＣＸＣＲ４の分析が挙げられる。 遊走に関して所望の結果を定量化する他の手段として、ＳＤＦ−１遊走分析が挙げられる。 希ガス含有組成物が投与された後に再生能を評価するために、当技術分野の１つの方法で、炎症または再生プロセスを変更することが知られているサイトカインを調べてもよい。 本発明の実施に適応するサイトカインとして、ＢＬＣ、エオタキシン−１、エオタキシン−２、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｉ−３０９、ＩＣＡＭ−１、ＩＬ−１ ｒａ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６ ｓＲ、 ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ＭＣＰ−１、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ−１ ａｌｐｈａ、ＭＩＰ−１ ｂｅｔａ、 ＭＩＰ−１ ｄｅｌｔａ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＮＦ ａｌｐｈａ、ＴＮＦ ｂｅｔａ、 ｓＴＮＦＲＩ、ｓＴＮＦＲＩＩＡＲ、ＢＤＮＦ、ｂＦＧＦ、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−７、ｂ−ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＧ−ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−７、ＧＤＦ−１５、ＧＤＮＦ、成長ホルモン、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＧＦＢＰ−６、ＩＧＦ−１、インスリン、Ｍ−ＣＳＦ Ｒ、ＮＧＦ Ｒ、ＮＴ−３、ＮＴ−４、オステオプロテグリン、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＩＧＦ、ＳＣＦ、ＳＣＦ Ｒ、ＴＧＦａｌｐｈａ、ＴＧＦ ｂｅｔａ １、ＴＧＦ ｂｅｔａ ３、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＶＥＧＦ−Ｄ ６Ｃｋｉｎｅ、Ａｘｌ、ＢＴＣ、ＣＣＬ２８、ＣＴＡＣＫ、ＣＸＣＬ１６、ＥＮＡ−７８、エオタキシン−３、ＧＣＰ−２、ＧＲＯ、ＨＣＣ−１、ＨＣＣ−４、ＩＬ−９、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１８ ＢＰａ、ＩＬ−２８Ａ、ＩＬ−２９、ＩＬ−３１、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＬＩＦ、Ｌｉｇｈｔ、リンホタクチン、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＤＣ、ＭＩＦ、ＭＩＰ−３ ａｌｐｈａ、ＭＩＰ−３ ｂｅｔａ、ＭＰＩＦ−１、ＭＳＰａｌｐｈａ、ＮＡＰ−２、オステオポンチン、ＰＡＲＣ、ＰＦ４、ＳＤＦ−１ ａｌｐｈａ、ＴＡＲＣ、ＴＥＣＫ、ＴＳＬＰ ４−１ＢＢ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１、ＢＣＭＡ、ＣＤ１４、ＣＤ３０、ＣＤ４０リガンド、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＤＲ６、Ｄｔｋ、エンドグリン、ＥｒｂＢ３、Ｅ−セレクチン、Ｆａｓ、Ｆｌｔ−３Ｌ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−３、ＩＬ−１ Ｒ４、ＩＬ−１ ＲＩ、ＩＬ−１０ Ｒｂｅｔａ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−２Ｒｇａｍｍａ、ＩＬ−２１Ｒ、ＬＩＭＰＩＩ、リポカリン−２、Ｌ−セレクチン、ＬＹＶＥ−１、 ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＲＧ１−ｂｅｔａ１、ＰＤＧＦ Ｒｂｅｔａ、ＰＥＣＡＭ−１、ＲＡＧＥ、ＴＩＭ−１、ＴＲＡＩＬ Ｒ３、Ｔｒａｐｐｉｎ−２、ｕＰＡＲ、ＶＣＡＭ−１、ＸＥＤＡＲＡｃｔｉｖｉｎ Ａ、ＡｇＲＰ、アンジオゲニン、アンジオポイエチン １、カテプシン Ｓ、ＣＤ４０、Ｃｒｉｐｔｏ−１、ＤＡＮ、ＤＫＫ−１、Ｅ−カドヘリン、ＥｐＣＡＭ、Ｆａｓ リガンド、Ｆｃｇ ＲＩＩＢ／Ｃ、ホリスタチン、ガレクチン−７、ＩＣＡＭ−２、ＩＬ−１３ Ｒ１、ＩＬ−１３Ｒ２、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−２ Ｒａ、ＩＬ−２ Ｒｂ、ＩＬ−２３、ＬＡＰ、ＮｒＣＡＭ、ＰＡＩ−１、ＰＤＧＦ−ＡＢ、レジスチン、ＳＤＦ−１ ｂｅｔａ、ｓｇｐ１３０、ＳｈｈＮ、Ｓｉｇｌｅｃ−５、ＳＴ２、ＴＧＦ ｂｅｔａ ２、Ｔｉｅ−２、ＴＰＯ、ＴＲＡＩＬ Ｒ４、ＴＲＥＭ−１、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦＲ１アディポネクチン、アジプシン、ＡＦＰ、ＡＮＧＰＴＬ４、Ｂ２Ｍ、ＢＣＡＭ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＥＡ、ＣＲＰ、ＥｒｂＢ２、ホリスタチン、ＦＳＨ、ＧＲＯ ａｌｐｈａ、ｂｅｔａ ＨＣＧ、ＩＧＦ−１ ｓＲ、ＩＬ−１ ｓＲＩＩ、ＩＬ−３、ＩＬ−１８ Ｒｂ、ＩＬ−２１、レプチン、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、 ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１３、ＮＣＡＭ−１、ニドゲン−１、ＮＳＥ、ＯＳＭ、プロカルシトニン、プロラクチン、ＰＳＡ、Ｓｉｇｌｅｃ−９、ＴＡＣＥ、サイログロブリン、ＴＩＭＰ−４、ＴＳＨ２Ｂ４、ＡＤＡＭ−９、アンジオポイエチン ２、ＡＰＲＩＬ、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−９、Ｃ５ａ、Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｌ、ＣＤ２００、ＣＤ９７、ケメリン、ＤｃＲ３、ＦＡＢＰ２、ＦＡＰ、ＦＧＦ−１９、ガレクチン−３、ＨＧＦ Ｒ、ＩＦＮ−ｇａｍｍａ aｌｐｈａ／ｂｅｔａ Ｒ２、ＩＧＦ−２、ＩＧＦ−２ Ｒ、ＩＬ−１Ｒ６、ＩＬ−２４、ＩＬ−３３、カリクレイン １４、レグマイン、ＬＯＸ−１、ＭＢＬ、ネリプラマイシン、Ｎｏｔｃｈ−１、ＮＯＶ、オステオアクチビン、ＰＤ−１、ＰＧＲＰ−５、セルピン Ａ４、ｓＦＲＰ−３、トロンボモジュリン、ＴＬＲ２、ＴＲＡＩＬ Ｒ１、トランスフェリン、ＷＩＦ−１ＡＣＥ−２、アルブミン、ＡＭＩＣＡ、アンジオポイエチン ４、ＢＡＦＦ、ＣＡ１９−９、ＣＤ１６３、クラステリン、ＣＲＴＡＭ、ＣＸＣＬ１４、シスタチン Ｃ、デコリン、 Ｄｋｋ−３、ＤＬＬ１、フェチュイン Ａ、ａＦＧＦ、ＦＯＬＲ１、フーリン、ＧＡＳＰ−１、ＧＡＳＰ−２、ＧＣＳＦ Ｒ、ＨＡＩ−２、ＩＬ−１７Ｂ Ｒ、ＩＬ−２７、ＬＡＧ−３、ＬＤＬ Ｒ、ペプシノーゲン Ｉ、 ＲＢＰ４、ＳＯＳＴ、シンデカン−１、ＴＡＣＩ、ＴＦＰＩ、ＴＳＰ−１、ＴＲＡＩＬ Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トロポニン Ｉ、ｕＰＡ、ＶＥ−カドヘリン、ＷＩＳＰ−１、およびＲＡＮＫが挙げられる。

本発明の実施のために、さまざまな集団の間葉系幹細胞を利用してもよく、骨髄、脂肪または間葉系幹細胞から派生した臍帯に加えて、羊膜間葉系幹細胞を免疫調節細胞として利用してもよい。 １つの具体的な実施態様において、羊膜の８＿８ ｃｍ２部分を得る。 それらを３００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび３００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ニューヨーク州、米国）添加１．０Ｍのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ； ｐＨ ７．２）で洗浄し、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）−高濃度ブドウ糖（Ｇｉｂｃｏ）に１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ； Ｇｉｂｃｏ） 、３００ＩＩＵ／ｍｌのペニシリンと３００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加し、その培地に直ちに浸した。 すべての検体は、捕集後の１２〜１５時間以内に処理する。 羊膜は１．０ＭのＰＢＳ（ｐＨ ７．２）中の０．１％のコラゲナーゼＩ（シグマ−アルドリッチ社、セントルイス、モンタナ州、米国）で処理し、３７＿Ｃで２０分間インキュベーションする。 それぞれの羊膜を低ブドウ糖含有ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）で洗浄し、羊膜をやさしくマッサージした後、剥離した細胞を捕集する。 細胞を３７＿Ｃで１０分間、３００ｇで遠心分離し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ １６４０培地に再懸濁し、続いて２５ｃｍ２のフラスコで１＿１０６細胞の密度で培養する。 インキュベーション２４時間後、非接着細胞を除去する。 培地は、３日毎に置き換える。 接着細胞は８０〜９０％コンフルエントになるまで培養する。 次に細胞は、純度（例えば、ＣＤ９０とＣＤ１０５陽性細胞が９０％を超える）、無菌状態（例えば、エンドトキシンおよびマイコプラズマ／細菌の汚染がない）および効力（例えば、ＩＦＮ−ｇａｍｍａなどの炎症性サイトカインの産生を抑制することによるｉｎ ｖｉｔｒｏにおける免疫調節能）を含む品質管理手順に基づいて選択される。 細胞は引き続き、外リンパまたは内リンパ腺投与をするために利用されてもよい。 本発明の要旨を逸脱しない範囲で、間葉系幹細胞は、最大の免疫調節特性を備えるように最適化されてもよい。 １つの実施態様において、それは間葉系幹細胞を低酸素状態に曝露することによって行われてもよく、特に低酸素状態は、１０％未満の酸素レベルを含むことができる。 いくつかの実施態様において、低酸素状態は、最高約７％の酸素を含む。 例えば、低酸素状態は、最高約７％まで、最高約６％まで、最高約５％まで、最高約４％まで、最高約３％まで、最高約２％まで、または最高約１％までの酸素を含むことができる。 別の例として、低酸素状態は、最高７％まで、最高６％まで、最高５％まで、最高４％まで、最高３％まで、最高２％までまたは最高１％までの酸素を含むことができる。 いくつかの実施態様において、低酸素状態は、約１％酸素から最高約７％までの酸素を含む。 例えば、低酸素状態は、約１％酸素から最高で約７％の酸素、 約２％酸素から約７％までの酸素、 約３％酸素から約７％までの酸素、 約４％酸素から約７％までの酸素、 約５％酸素から約７％までの酸素、 または約６％酸素から約７％までの酸素を含むことができる。 別の例として、低酸素状態は、１％酸素から最高７％の酸素、 ２％酸素から最高７％の酸素、 ３％酸素から最高７％の酸素、 ４％酸素から最高７％の酸素、 ５％酸素から最高７％の酸素、 または６％酸素から最高７％の酸素を含むことができる。 別の例として、低酸素状態は、約１％酸素から最高約７％の酸素、 約１％酸素から最高約６％の酸素、 約１％酸素から最高約５％の酸素、 約１％酸素から最高約４％の酸素、 約１％酸素から最高約３％の酸素、 または約１％酸素から最高約２％の酸素を含むことができる。 別の例として、低酸素状態は、１％酸素から最高７％の酸素、 １％酸素から最高６％の酸素、 １％酸素から最高５％の酸素、 １％酸素から最高４％の酸素、 １％酸素から最高３％の酸素、 または１％酸素から最高２％の酸素を含むことができる。 別の例として、低酸素状態は、約１％酸素から最高約７％の酸素、 約２％酸素から最高約６％の酸素、 または約３％酸素から最高約５％の酸素を含むことができる。 他の例として、低酸素状態は、約１％酸素から最高約７％の酸素、 ２％酸素から最高６％の酸素、 または約３％酸素から最高約５％の酸素を含むことができる。 いくつかの実施態様において、低酸素状態は、約２％を超えない酸素を含み得る。 例えば、低酸素状態は、２％を超えない酸素を含み得る。

精神障害においては、希ガス含有組成物を利用できる領域は、双極性障害、パニック発作、全般性不安、痴呆、器質脳症候群、脳性麻痺、昏睡、遷延性植物状態、わずかに意識がある状態、全脳虚血、外傷性脳損傷、脳卒中および脳卒中後の回復を含む。 本発明は、赤血球産生の不足または他の血液生成欠乏症を治療するために利用されてもよい。 実施例として、貧血、再生不良性貧血または骨髄異形成症候群が挙げられる。 再生不良性貧血の特定の例において、キセノン、キセノン／アルゴン、キセノン／アルゴン／窒素の濃度は血球新生を増強するために投与され、その一方で、ＴＮＦ−ａｌｐｈａの産生は抑制される。

実施例１： 小児自閉症の治療のためのキセノン／酸素吸入剤、アルゴン／キセノン吸入剤およびキセノン／アルゴン／酸素吸入剤の組み合わせ

自閉症は、１０，０００人あたり最高で１６人が罹患する重度の神経発達障害である。 自閉症は、常同的コンプレックスで手および身体を動かす行動、単調性への渇望、および狭い範囲の反復的関心を特徴とする、社会的、コミュニケーション上、および強迫的／反復行動に影響する広汎性発達障害である。 自閉症は、罹患した個人およびその家族に大きな影響を与える。

予定される試験は、ＤＳＭ−ＩＶおよび自閉症診断面接（ＡＤＩ）の基準を満たしている小児／青年自閉症において、キセノン／酸素吸入剤、アルゴン／酸素吸入剤およびキセノン／アルゴン／酸素吸入剤（後に、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤対プラセボ）による治療の効果を評価するためにデザインされる。

治療介入期の条件
自閉症
小児自閉症
薬剤： キセノン／アルゴン／酸素吸入剤

第一相
試験のタイプ： 治療介入性
試験デザイン割り当て：無作為化
エンドポイント分類：安全性／有効性試験
治療介入モデル：単回群割り付け
マスキング：二重盲検法
主目的：治療
公式表題：小児自閉症におけるキセノン／アルゴン／酸素吸入剤対プラセボ

主要評価項目：
自閉症診断観察検査―包括的（ＡＤＯＳ−Ｇ）―ベースラインから最終来院時までの変化
臨床全般改善度（ＣＧＩ）―ベースラインから最終来院時までの変化
異常行動チェックリスト（ＡＢＣ）（多動／興奮性の項）―ベースラインから最終来院時までの変化
ヴァインランド適応行動尺度―ベースラインから最終来院時までの変化
マッカーサーコミュニケーション発達質問紙（ＭＣＤＩ）―ベースラインから最終来院時までの変化
コナーズ親・教師評価尺度改訂版： 長い形式（ＣＰＲ−Ｒ：Ｌ）―ベースラインから最終来院時までの変化

仮登録： ４０

詳細な説明：

一旦本試験に登録されると、被験者は被験治療の入院のために必要な基準を満たすかどうかを決定するために評価と検査を受ける。 被験者は、この試験の一部として実施されるいかなる評価または検査の費用に対しても責任を負わないものとする。

最初に被験者は、この試験への参加を阻害するような精神疾患または内科的疾患があるかどうかを確認するために、治験担当の精神科医による精神鑑定および医学的評価を受ける。 これらの評価を完了するのに、最高１時間かかる場合がある。 加えて、被験者は、診断および現在の問題領域を決定するために精神医学的面接に参加するように依頼される。 被験者の親もまた、精神医学的質問票に記入するよう依頼される。 面接と質問を完了するのに、最高４時間かかる場合がある。

第２に、尿と血液検体は、この試験期間中に2回（試験関連のあらゆる検査が行われる前、および試験終了後）日常検査のために必要とされる。 小さじ２杯分の血液が、毎回採血される。 腎臓機能を評価するために尿検体を分析し、薬（例えば、コカイン、マリファナ、ヘロインなど）の有無について検査する。 薬物検査が陽性である場合は、小児はこの試験に参加できないことになる。 薬物検査の結果については、秘密を保持するものとする。 加えて、心拍を測定するために心電図測定を実施する。

最後に、小児が女性で思春期に達している場合は、尿検体にて妊娠試験を行う。 妊娠しているかまたは授乳婦である場合は、その小児はこの試験に参加してはならない。 尿の妊娠試験が陽性の場合は、その小児を本試験から除外する。 小児が性的に活発である場合、この試験への参加期間中、小児は有効な避妊法を使用していなければならない。 容認可能な避妊法として、経口避妊薬薬物（その投与は、親の監督下に行われなければならない）、ＩＵＤ、デポ剤薬物と卵管結紮術が挙げられる。

被験者は、活性薬剤のキセノン／アルゴン／酸素吸入剤またはプラセボ（室内の空気）のいずれかを１２週間にわたって、偶然の確率で（ちょうど硬貨を指ではじくような確率）投与されるよう割り当てられる。 親／小児または治験担当医のいずれも、小児が２つのうちどの治療薬を投与されているかわからない。 本試験の期間中、小児がプラセボまたは本試験の活性薬（キセノン／アルゴン／酸素吸入剤）を受けるよう割り当てられる可能性は２５％である。

小児は、１２週間の試験の最初の４週間は毎週、試験の残りの週については一週置きに治験担当精神科医によって診察されなければならない。 来院期間中に、治験担当精神科医は、悪心や頭痛などの考えられる副作用などの投薬に関連があると思われる小児の状態について、親に対して質問し、小児の状態を確認する。 精神科医はまた、彼（彼女）の体重も記録する。 これらの試験中の外来は、通常、約３０分かかる。

適格性
試験に適格な年齢：５歳〜１７歳
試験に適各な性別：男女両方
健康なボランティアを受け入れる：否

基準
自閉症についてのＤＳＭ−ＩＶ、ＡＤＩ−ＲおよびＡＤＯＳ−Ｇの基準を満たす
５歳〜１７歳
外来患者
インフォームドコンセントに署名する意志のある親または法的保護者。
男性または女性の患者

患者は、自閉性障害（ＣＧＩ ＡＤ）に対する臨床全般印象尺度の上で、スコアが少なくとも「４」（中等度の病気）である。

マッカーサーコミュニケーション発達質問紙で月齢１８ヵ月の５０％のスコアによって示されるように、最低限の会話ができるかまたは非会話である小児

除外基準：

過去または現在に、以下に述べるいずれかの精神障害を有する被験者： 精神病性障害、気分障害、双極性障害を含む。

重大な自傷行為（自分自身に目に見える危害を加える小児）を示す被験者。

活動性発作疾患（過去６ヵ月以内の発作）のある被験者。

現在、臨床的に有意な血液生成疾患または心血管疾患が明らかである患者を含む臨床的に有意または不安定な内科疾患を持つ被験者。

現在または過去に、以下の既往歴を持つ被験者：

薬の吸収、分布、代謝または排出を阻害する胃腸疾患、肝疾患、腎疾患または他の既知の疾患、

発作疾患（活動性）、自閉症的行動の病因となる脳血管疾患または頭部外傷、

甲状腺機能低下症または甲状腺機能亢進症もしくは糖尿病などの臨床的に著しく不安定な内分泌障害、

最近または現在の罹患歴があるあらゆる型の悪性腫瘍

現在の薬物に対する自閉症の症状および行動について有意な改善を報告した被験者、またはＣＧＩの包括的自閉症評価において、自閉症がないか、最低限または軽度である被験者、あるいは最低限以上の会話ができる被験者。

包括的自閉症評価において、自閉症がないか、最低限または軽度であると評価される被験者。

主要器官に対して明確に毒性の可能性があることが知られているいかなる薬による３０日以内の治療。

臨床的に有意な異常が臨床検査または身体診察で見つかる被験者。

試験期間中、他の向精神薬を必要とする可能性のある被験者。同様に、安定な発作疾患のための一定用量の抗けいれん薬および不眠症（本試験への参加の少なくとも１ヵ月前に発症）のためのクロニジンは、別段の許可がない限り除外する。

指定される場合、精神活性薬の漸減を許容することができない被験者。

キセノンまたはアルゴンの使用に伴う過敏性または重度の副作用の既往歴をもつ被験者。

６週間以内にキセノンおよびアルゴンによる治療の前歴をもつ被験者。

治療を開始する前に指示された期間内に以下の治療介入のいずれかを受けた被験者：

過去３０日以内の治験薬。

過去１４日以内のモノアミンオキシダーゼ阻害剤。

過去６週間以内の長時間作用型フェノチアジン。

別段の許可がない限り、過去７日以内の他の向精神薬。

特記のない限り、治験薬の安全性評価を混同させるような治療的介入を必要とする器質性または全身性疾患を持つ被験者。

地理的遠隔地域に住むか、あるいは臨床施設への輸送機関に定期的なアクセス手段を持たない被験者。

本試験の完了時

包括的自閉症の急性治療において、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤はプラセボより優れていた。

機能的能力の改善において、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤はプラセボより優れていた。

言語機能の改善において、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤はプラセボより優れていた。

興奮性および多動性行動の改善において、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤はプラセボより優れていた。

社会性の欠如の改善において、キセノン／アルゴン／酸素吸入剤はプラセボより優れていた。

実施例２： キセノン・ガスによるアルツハイマータンパク質の誘導による単球のＴＮＦ−ａｌｐｈａの産生抑制

ヘパリン添加血液１０ｍｌを健常ボランティアから採血し、末梢血単核細胞をフィコール勾配で遠心分離した。 その後、細胞をリン酸緩衝食塩水で２回洗浄し、１０％ウシ胎児血清添加ＲＰＭＩ培地で再懸濁した。 細胞は、１ｍｌにつき１０００万個の細胞濃度で、６穴プレートの１ウェルにつき２ｍｌを入れてインキュベートした。 細胞は、５％ＣＯ２を含む完全に加湿された空気で摂氏３７℃にて２４時間、培養し、その後、非接着細胞をＰＢＳにて洗浄することにより除去した。 その後、接着細胞を２枚のプレートに分け、一つは酸素正常状態の組織培養でインキュベートし、２番目のプレートは、３０容量％のキセノンで１時間、培養した。３番目の組織は３０容量％で２時間、培養した。 細胞をコントロール培地、１ｕｇ／ｍｌのＬＰＳおよび１０μＭのアミロイドβペプチドＡβ（１−４２）と共に２４時間、処理した。 上清を集め、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ−ａｌｐｈａ産生を評価した。 図１に示すように、誘導されたＴＮＦ−ａｌｐｈａ産生の抑制が、キセノン・ガスとのインキュベーションに反応して観察された。

実施例３： キセノン・ガスによるアルツハイマータンパク質による誘導樹状細胞のＩＬ−１２の産生抑制

実施例１に記述されているように、単球を接着ＰＢＭＣから分離した。 樹状細胞は、ＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＧＭ−ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）を７日間、培養することによって生成した。 培地は２日毎に変えた。 ７日目に、ＣＤ１ｃ樹状細胞の精製を行い、細胞をコントロール培地、１ｕｇ／ｍｌＬＰＳと１０μＭアミロイドβペプチドＡβ（１−４２）と共に２４時間、培養した。 上清を集め、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１２産生を評価した。 図２に示すように、誘発されたＩＬ−１２産生の抑制がキセノン・ガスとのインキュベーションに反応して観察された。

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Claims (17)

1. 中枢神経系における炎症性メディエーターの産生増加に関連する神経学的疾患を治療する方法であって、 ａ）全身性炎症反応が増強している患者を同定するステップ、 ｂ）前記全身性炎症反応を減少させるのに十分な濃度と頻度で希ガス含有組成物を投与するステップ、 および、ｃ）全身性の炎症反応の調節によって中枢神経系の炎症反応が減少するように、前記希ガス含有組成物の投与後の前記全身性炎症反応に基づいて前記希ガス含有組成の濃度または頻度を調整するステップを含んでいる、方法。
2. 前記中枢神経系における炎症性メディエーターの産生増加に関連する前記神経学的疾患が、自閉症スペクトラム障害、広汎性発達障害、自閉症、レット症候群、小児期崩壊性障害、アスペルガー症候群および特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤＮＯＳ）、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳損傷、慢性外傷性脳症、および脳卒中を含む群から選択される、請求項２に記載の方法。
3. 増強した前記全身性炎症反応は、免疫細胞を抽出することと、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの刺激されていないベースレベルにおいて、または、ｉｎ ｖｉｔｒｏで前記免疫細胞に対してマイトジェン特性を備えている薬剤により刺激される活性化されたレベルにおいて、ｉｎ ｖｉｔｒｏのサイトカイン産生を定量することとによって評価される、請求項１に記載の方法。
4. 前記炎症性サイトカインのレベルが、炎症性メディエーターの産生増加に関連する前記神経学的疾患に罹患していない患者における、年齢および性別を適合させた対照レベルと比較される、請求項３に記載の方法。
5. 前記炎症性サイトカインが、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＣＤ４０ＬＧ（ＴＮＦＳＦ５）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ−６、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、Ｃ５、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＨＭＧＢ１、インターフェロンガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ３３、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、補体成分Ｃ３とＣ５、２，３ ａｌｐｈａ ｇａｌ、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、およびＩＬ８を含む群から選択される、請求項４に記載の方法。
6. 前記希ガス含有組成物が、キセノンおよび／またはキセノン供与体と、ａ）酸素、ｂ）窒素、ｃ）アルゴン、ｄ）キセノン、ｅ）ヘリウム、ｆ）クリプトンおよびｇ）ネオンからなる群から選択される少なくとも１つのガス状成分とを含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記希ガス含有混合物が、酸素および／または空気と、２０〜７０容量％の割合の希ガスとを含んでいるガス混合物を含む、請求項１に記載の方法。
8. 前記希ガスがキセノンである請求項７に記載の方法。
9. 前記炎症性サイトカイン関連の神経変性疾患が、２５％キセノン―７５％空気の混合物の投与によって改善され、前記混合物が炎症性サイトカインの産生を減少させるために必要な量に基づいて投与される、請求項１に記載の方法。
10. 前記空気が、実質的な麻酔効果なしに呼吸することを十分に許容する他のガス状混合物によって置換されている、請求項９に記載の方法。
11. 脳の炎症性メディエーターを減少させるのに十分な濃度と頻度で、麻酔域未満の濃度の一つ以上の希ガスを単独でまたは他のガスと組み合わせて投与することを含む、脳の炎症性メディエーターを減少させる方法。
12. 前記炎症性メディエーターが、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＣＤ４０ＬＧ（ＴＮＦＳＦ５）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ−６、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ−１８、ＩＬ−３３、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、Ｃ５、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＨＭＧＢ１、インターフェロンガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ３３、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、補体成分Ｃ３およびＣ５、２，３ ａｌｐｈａ ｇａｌ、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、およびＩＬ８を含む群から選択される、請求項１１に記載の方法。
13. 前記希ガスが、キセノン、ヘリウム、ネオン、アルゴン、およびクリプトンを含む群から選択される、請求項１２に記載の方法。
14. 前記希ガスが、空気または酸素で希釈された１５〜４０％キセノンの形で投与される、請求項１１に記載の方法。
15. 前記キセノンが、空気または酸素で希釈された２５％の濃度で投与される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記キセノンが、１回の投与につき１０リットルの体積において、１週間につき３回投与され、前記キセノンは、空気または酸素で希釈された２５％キセノンの形で投与される、請求項１１に記載の方法。
17. 自閉症患者に、空気または酸素で希釈された２５％濃度のキセノン・ガスを投与することを含む、自閉症を治療する方法であって、前記投与は、１回の投与につき１０リットルのガス体積において、一週間につき３回の投与で行われる、方法。

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