JP2018508518A - Ｈｉｖ感染の処置のための方法及び医薬組成物 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ＨＩＶ感染の処置のための方法及び医薬組成物に関する。特に、本発明は、ＨＩＶ感染の処置を必要とする被検者におけるＨＩＶ感染を処置する方法であって、治療上有効量の配列番号：１に示す配列を含むオリゴヌクレオチドを当該被検者に投与することを含む方法に関する。

Description

本発明は、ＨＩＶ感染の処置のための方法及び医薬組成物に関する。
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）は、ＡＩＤＳを引き起こす免疫系の不全を誘発する世界的規模の流行病の原因となるレトロウイルスである。ＨＩＶ−１レトロウイルスは、ＣＤ４及びケモカイン受容体ＣＣＲ５又はＣＸＣＲ４の１つを担持する細胞に感染する。感染後、２つのＨＩＶ−１単鎖ＲＮＡはウイルス逆転写酵素によって二本鎖ＤＮＡに逆転写される。ウイルスＤＮＡはその後、感染された細胞のゲノム内に統合される。ホスト細胞機構はそのウイルス遺伝子を転写し、新しいウイルスタンパク質が合成され、そして新しいウイルスは最後に集結する。１９９０年終盤に、ウイルスのサイクルの異なる酵素をターゲティングする抗ウイルス治療の状況は、ＡＩＤＳとの闘いにおいて大いに前進した。しかしながら、この処置ではウイルスの決定的な撲滅に成功せず、またウイルスのゲノムでのいくつかの変異に起因して、これらの分子に対する耐性が起こり得る。事実、ＵＮＡＩＤＳによると、３４００万人の人々が現在ＨＩＶ−１に感染している。新しい抗ウイルス戦略の発見は、いまだ重要な問題である。
ヌクレオリンは、転写調節、細胞増殖及び成長の基本的な面に関わる遍在的な核小体のリン酸化タンパク質である。ヌクレオリンは、核、サイトゾル及び細胞表面の間のシャトル分子としても報告されている。研究により、表面ヌクレオリンは、種々の細胞外リガンドに対する受容体、たとえば細胞増殖、分化、接着、有糸分裂誘発及び血管新生に関係するものとしての機能を果たし得ることが実証されている。Nisole et al.（1999）、ＵＳ２００４０００２４５７Ａ１及びＵＳ２００２００７６６９３Ａ１は、ヌクレオリンがホスト細胞へのＨＩＶウイルスの結合に関わることを開示している。抗ヌクレオリンアプタマーＡＳ１４１１（ＡＧＲＯ１００としても公知である）は、潜在的なアポトーシス誘発活性を持つ２６塩基のグアニンリッチなオリゴデオキシヌクレオチドアプタマーであるが、ＨＩＶの複製の阻害に対するその役割は全く研究されてこなかった。
本発明は、ＨＩＶ感染の処置のための方法及び医薬組成物に関する。特に、本発明は、請求項によって規定される。
［発明の詳細な説明］
本発明は、ＨＩＶ感染の処置を必要とする被検者におけるＨＩＶ感染を処置する方法であって、治療上有効量の配列番号：１に示す配列を含むオリゴヌクレオチドを当該被検者に投与することを含む方法に関する。
本願明細書で使用する場合、「ＨＩＶ」又は「ヒト免疫不全ウイルス」という用語は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、及びＡＩＤＳ又はＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）の発生に寄与する当該ウイルスの他の任意の株をいう。
本願明細書で使用する場合、「ＨＩＶ感染」という用語は、無症候性の血清陽性から、ＡＩＤＳ関連症候群（ＡＲＣ）を経て後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）におよぶ、ＨＩＶ感染に伴う状態の任意のスペクトラムをいう。
本願明細書で使用する場合、「処置」又は「処置する」の用語は双方とも、疾患に罹るリスクにあるか又は疾患に罹っている疑いがある被検者や、病気の被検者又は疾患若しくは病状に罹病していると診断されている患者の処置を含め、予防的又は防止的処置や、治癒的又は疾患改善処置をいい、臨床的再発の抑制も含める。処置は、医学的障害を有する被検者又は最終的に当該障害がもたらされ得る被検者に対して、障害の一以上の症候若しくは再発する障害を防止、治癒、その発症の遅延、その重症度の低減、若しくは寛解させるために、又はこのような処置なしの場合に予測されるよりも被検者の余命を延長させるために施されてもよい。「治療計画」が意味するのは、疾病の処置のパターン、たとえば、治療の間に用いられる投薬のパターンである。治療計画は、導入計画及び維持計画を含み得る。「導入計画」又は「導入期間」の語は、疾患の初期処置に用いられる治療計画（又は治療計画の一部）をいう。導入計画の一般的な目標は、治療計画の初期の期間中は被検者に高レベルの薬物を与えることである。導入計画では、維持計画の間に医師が採用するであろうよりも多い用量の薬物を投与すること、維持計画の間に医師が薬物を投与するであろうよりも頻回に薬物を投与すること、又はその両方を含み得る「負荷計画」を（部分的に又は全体的に）採用してもよい。「維持計画」又は「維持期間」の語は、疾病の処置の間に被検者を維持するために用いられる、たとえば、長期間（月又は年）にわたって被検者を寛解状態に保つ、治療計画（又は治療計画の一部）をいう。維持計画には、持続的な治療（たとえば、薬物を定期的な間隔、たとえば毎週、毎月、毎年、などで投与すること）又は間欠的な治療（たとえば、断続的処置、間欠的処置、再発時の処置、又は特定の規定基準［たとえば、疾患徴候など］を満たした際の処置）を採用してもよい。
本発明は、ＡＳ１４１１と称されるグアノシンリッチなオリゴヌクレオチドの使用を企図する。ＡＳ１４１１（ＷＯ２００９０９８４６４に記載）は配列５’−GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG−３’（配列番号：１）を有しており、ＧＲ０２６Ｂ及びＡＧＲＯ１００としても公知である。ＡＳ１４１１は、２６マーのＤＮＡアプタマーであって、未修飾ホスホジエステル結合を有しており、血清酵素による分解に耐性の（Dapic, V. et al. 2002）Ｇ−四重鎖構造を形成する（Dapic, V. et al. 2003）。その構造は最近解明された（Chung WJ, Heddi B, Schmitt E, Lim KW, Mechulam Y, Phan AT. Structure of a left-handed DNA G-quadruplex. Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Feb 18. pii: 201418718）。
本発明において使用するために、本発明のオリゴヌクレオチドは、当技術分野において周知のいくつかの手法の任意のものを用いてde novo合成される。化学合成は、市場にて入手可能である様々な自動核酸合成機によって実施されることができる。これらの核酸は、合成核酸と呼ばれることがある。あるいは、本発明のオリゴヌクレオチドは、プラスミドにて大規模に生成されることができる。本発明のオリゴヌクレオチドは、制限酵素、エキソヌクレアーゼ類又はエンドヌクレアーゼ類を採用するものなど、公知の技術を用いて既存の核酸配列から調製されることができる。
別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ナノ粒子に接合されてナノ粒子−オリゴヌクレオチド接合体を形成する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ＷＯ２００５１１３８１７、Dam et al., 2015及びMalik et al., 2015に記載のものなど、金、銀、銅及び白金等の金属粒子である。
「治療上有効量」によって意味するのは、任意の医療処置に適用可能な、妥当な効果／リスク比での、本発明のオリゴヌクレオチドのＨＩＶ感染を処置する十分な量である。本発明の化合物及び組成物の１日の合計使用量は、信頼できる医学的判断の範囲で担当医によって決定されるはずであることは理解されるであろう。特定の被検者に対する具体的な治療上有効な用量レベルは、処置される障害及び障害の重症度；採用される特有の化合物の活性；採用される特有の組成物、被検者の年齢、体重、一般的な健康、性別及び食事；用いられる具体的な化合物の投与の時間、投与経路、及び排泄速度；処置の継続期間；用いられる具体的なポリペプチドと組み合わせられるか又は同時に使用される薬物；医学分野で周知のその他の因子などを含む様々な因子に依存するであろう。たとえば、所望の治療効果を成し遂げるのに必要なレベルよりも低いレベルで化合物の用量を開始し、所望の効果が成し遂げられるまで徐々に投薬量を増加することは、十分に当該技術分野の技術の範囲にある。しかしながら、産物の１日の投薬量は、成人１名、１日あたり０．０１から１，０００mgまでの広い範囲にわたって変動され得る。好ましくは、処置すべき被検者への投薬量の対症調整のため、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０及び５００mgの有効成分を、組成物は含有する。医薬は、典型的には約０．０１mgから約５００mgまでの有効成分、好ましくは１mgから約１００mgまでの有効成分を含有する。通常は、薬物の有効量は、１日あたり体重について０．０００２mg/kgから約２０mg/kgまで、とりわけ１日あたり体重について約０．００１mg/kgから７mg/kgまでの投薬量レベルで供給される。
本発明のオリゴヌクレオチドは、静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳室内、皮下、関節内、滑膜内、髄腔内、経口、局所、又は吸入経路を含む、投与の公知経路によって投与されることができる。アンタゴニスト又はアゴニストを投与するための有効な投薬量及び投薬計画は、当業者によって一般的に認識されるガイドラインに従って経験的に決定される。単回又は複数回の投薬量が採用され得る。
上記のとおり、本発明のオリゴヌクレオチドは、哺乳動物などの動物への投与に好適な医薬組成物に組み入れられることができる。このような組成物を製剤化するための方法は、一般的に周知である。指針は、たとえばRemington: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, 19th Edition, Gennaro （ed.） 1995, Mack Publishing Company, Easton, Pa.から入手可能である。このような組成物は典型的には、少なくとも１つの本発明のオリゴヌクレオチド及び薬学的に許容し得る担体を含む。「薬学的に許容し得る担体」の用語は、医薬投与に適合し得る、任意且つあらゆるコーティング、賦形剤、溶媒、分散媒、吸収遅延剤などをいう。このような担体には、たとえば塩化ナトリウム、コロイドシリカ、タルクや、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース又はメチルセルロース等のセルロース系化合物、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、及びポリエチレングリコールを含む種々のポリマー担体も含まれる。剤形は、たとえば、経口又は舌下錠剤、ペレット、マイクロカプセル及びナノカプセル、リポソーム、吸入形態、鼻噴霧薬、及び持続放出調剤を含む。本発明の核酸を投与するために使用される液剤又は懸濁剤は、以下の成分の一以上、すなわち、注射用水、生理食塩水溶液などの無菌希釈剤；不揮発性油、ポリエチレングリコール類、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌薬；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化物質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；酢酸塩、クエン酸又はリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの等張性を調整するための薬剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、身体内の部位又はその周辺における本発明の核酸の発現に好適な、本発明の核酸又はＤＮＡ構築物を含む徐放製剤又はマトリックスを介して送達されることができる。
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、殺菌薬を適用して、粘膜を介したＨＩＶの感染を効果的に防止するために、より詳細にはＨＩＶの性行為感染又は膣感染を防止するために使用することができる医薬組成物に製剤化され得る。したがって、それら組成物は、生殖器、膣、外陰部、子宮頸部、直腸、口、手、下腹部、上腿などの、性交又は関連する親密な接触が起こる部位、とりわけ膣、外陰部、子宮頸部、及び肛門直腸粘膜に適用されるのに適合する形態にある。適切な局所組成物としては、たとえばゲル、ゼリー、クリーム、ペースト、エマルション、懸濁液、軟膏、フィルム、スポンジ、泡、エアロゾル、粉体、腟内リング若しくは他の腟内薬物送達システム、子宮頚部キャップ、インプラント、パッチ、座薬若しくは直腸用ペッサリー、又は膣内塗布薬（vaginal application）、膣内若しくは直腸若しくは口腔内錠剤、口腔洗浄薬を挙げ得る。本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤は、たとえば、手、座薬、又は従来のタンポン若しくはシリンジ技術によって膣の中に適用されることができよう。膣の中にゲルを適用又は送達する方法は、ゲルの有効量が膣の中に送達される限りにおいて重要でない。本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤は、肛門性交の際の防御のために使用されてもよく、類似の技術を用いて適用され得る。異性間の膣性交に対しては、性交に先駆けて膣の中に、本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤が適用され得る。異性間又は同性間の肛門性交に対しては、性交に先駆けて直腸の中に、本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤が挿入され得る。膣又は肛門性交のいずれかに対しては、本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤は潤滑剤としても作用し得る。防御追加のためには、性交又は他の性行為の前に本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤を適用すること、そして適切な場合、コンドームを使用することが一般的に好ましい。さらに一層の防御のためには、性行為の終了後できる限り速やかに、本願明細書に記載されるゲル製剤などの本局所製剤が適用され得る。性行為後のみの適用はあまり推奨されないが、その適用が何らかの理由で（たとえば、強姦の場合）性行為に先駆けて実施されなかったのであれば、後ででもやはり望ましいであろう。
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、すべての好適な製剤において、抗ウイルス剤、抗生物質、免疫調整剤若しくはワクチンなどの他の有効成分と組み合わせて、又は単独で使用されてもよい。それらは、ウイルス感染の防止のための他の予防薬と組み合わせて、又は単独で使用され得る。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、ワクチンで従来採用される、薬学的に許容し得るアジュバントと組み合わせられ、ＨＩＶ−１感染に対して長期間にわたり個体を防御すべく予防的有効量で投与され得る。本発明のオリゴヌクレオチドと組み合わせて使用され得る抗ウイルス化合物は、ペンタミジン、チモペンチン、カスタノスペルミン、デキストラン（デキストランサルフェート）、ホスカルネット−ナトリウム（ホスホノホルメート三ナトリウム）；ヌクレオシド系逆転写酵素インヒビター、たとえばジドブジン（３’−アジド−３’−デオキシチミジン、ＡＺＴ）、ジダノシン（２’，３’−ジデオキシイノシン；ｄｄＩ）、ザルシタビン（ジデオキシシチジン、ｄｄＣ）又はラミブジン（２’−３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン、３ＴＣ）、スタブジン（２’，３’−ジデヒドロ−３’−デオキシチミジン、ｄ４Ｔ）、アバカビルなど；ネビラピン（１１−シクロプロピル−５，１１−ジヒドロ−４−メチル−６Ｈ−ジピリド−［３，２−ｂ：２’，３’−ｅ］［１，４］ジアゼピン−６−オン）、エファビレンツ、デラビルジン等の非ヌクレオシド系逆転写酵素インヒビターなど；ホスホネート逆転写酵素インヒビター、たとえばテノホビルなど；ＴＩＢＯ（テトラヒドロ−イミダゾ［４，５，１−ｊｋ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−２（１Ｈ）−オン及びチオン）型の化合物、たとえば（Ｓ）−８−クロロ−４，５，６，７−テトラヒドロ−５−メチル−６−（３−メチル−２−ブテニル）イミダゾ−［４，５，１−ｊｋ］［１，４］ベンゾ−ジアゼピン−２（１Ｈ）−チオン；［アルファ］−ＡＰＡ（［アルファ］−アニリノフェニルアセトアミド）型の化合物、たとえば［アルファ］−［（２−ニトロフェニル）アミノ］−２，６−ジクロロベンゼン−アセトアミドなど；ＴＡＴ−インヒビター、たとえばＲＯ−５−３３３５、又はＲＥＶインヒビター等のトランス活性化タンパク質のインヒビターなど；プロテアーゼインヒビター、たとえばインジナビル、リトナビル、サキナビル、ロピナビル（ＡＢＴ−３７８）、ネルフィナビル、アンプレナビル、ＴＭＣ−１２６、ＢＭＳ−２３２６３２、ＶＸ−１７５など；融合インヒビター、たとえばＴ−２０、Ｔ−１２４９など；ＣＸＣＲ４レセプターアンタゴニスト、たとえばＡＭＤ−３１００など；ウイルスインテグラーゼのインヒビター；リボヌクレオチドレダクターゼインヒビター、たとえばヒドロキシ尿素、などの公知の抗レトロウイルス化合物であってよい。組み合わせは、その成分がＨＩＶ複製の異なる部位又は同じ部位に作用する場合、好ましくは異なる部位に作用する場合にはまた、ＨＩＶ複製の阻害において相乗的効果を奏し得る。このような組み合わせの使用は、所望の予防効果に必要とされることになるであろう従来の抗レトロウイルス剤の所与の投薬量を、その薬剤が単一有効成分として投与される場合と比べて低減し得る。これらの組み合わせは、単一薬剤に対する耐性の潜在性を低減し、一方で随伴する任意の毒性を最小にとどめる。これらの組み合わせは、随伴する毒性を高めることなく、従来の薬剤の有効性の増大ももたらし得る。
本発明はさらに、以下の図面及び実施例によって例証される。しかしながら、これらの実施例及び図面は、本発明の範囲をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではない。
Ａ：４つのグアニンヌクレオシドからなるテトラッドの概略図である。Ｂ：３つのテトラッドのスタッキングに基づくＧ−四重鎖構造の例。Ｃ：ウイルス複製を、β−ガラクトシダーゼ活性により感染後２４時間モニターした。数値は、オリゴヌクレオチドの非存在でのβ−ガラクトシダーゼ活性が１００％に相当するように標準化された。服用効果は、ＡＳ１４１１（菱形）、Ｔ３０９２３（クロス）、Ｔ３０１７７（円）、ＩＳＩＳ３０５２（四角形）の存在下で実施される。 Ａ：グアノシン残基のテトラッドの配置。このテトラッドを安定化させる一価のカチオンを、プラス記号によって表す。Ｂ：細胞系アッセイにおいて得られる代表的な阻害曲線。Ｃ：ＡＳ１４１１及び他のＧ−四重鎖形成インヒビターの抗ウイルス活性。ホスホロチオエート位置を星印で示す。ＥＣ５０及び標準偏差（ＳＤ）は、文献（ａ）からの報告を除き、四つの独立した実験に由来する。斜体で示すデータは、本研究で使用されたものとは異なる実験設定に由来する。
実施例１
材料及び方法
オリゴヌクレオチドの調製：オリゴヌクレオチドは、Eurogentec（Seraing, Belgium）から「Reverse-Phase Cartridge Gold精製」で購入された。濃度は、製造業者によって提供された吸光係数を用いて紫外（ＵＶ）吸収により求められた。７０mM ＫＣｌを含有する２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７にすべてのオリゴヌクレオチドを溶解させた。
細胞系及びウイルス：１０％不活性化ＦＣＳ、１mg/mlジェネティシン（Ｇ４１８、Gibco-BRL）、ゲンタマイシンを追加したＤＭＥＭ培地（Invitrogen）中に、Ｔａｔ誘導性β−ガラクトシダーゼをエンコードするＨｅＬａ Ｐ４細胞を維持した。ＭＴ４及びＨ９Ｌａｉ細胞は、１０％不活性化ＦＣＳを追加したＲＰＭＩ １６４０ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地（Invitrogen）中で成長させた。ＨＩＶ−１ウイルスは、１０％不活性化ＦＣＳを追加したＲＰＭＩ １６４０ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地において、ＭＴ４細胞（０．５×１０６／ｍｌ）及びＨ９Ｌａｉ細胞（１×１０６／ｍｌ）（ＨＩＶ−１Ｌａｉ単離物により慢性的に感染）を、３７℃にて加湿雰囲気及び５％ＣＯ２下で４８時間共培養させた後に得られた。培養物はその後遠心分離され、上清を−８０℃で凍結させる前に０．４５μmの膜での濾過により清澄にした。
ウイルス感染力試験：オリゴヌクレオチドを１００mMカリウム溶液においてプレインキュベートしてＧ４形成を助けた。添加される場合、感染前の２０分間、ＨｅｌａＰ４細胞及び存在下にそれらはインキュベーションされる。ＨＩＶ−１ＬＴＲの制御下にあるβ−ガラクトシダーゼ遺伝子及びＣＤ４レセプターを発現しているＨｅＬａ Ｐ４細胞で感染力をアッセイした。９６−マルチウェルプレートにおいてＨｅＬａ Ｐ４を、１０％不活性化ＦＣＳを追加した２００μLのＤＭＥＭ培地を用いて１ウェル当たり１００００細胞で蒔いた。３７℃にて加湿雰囲気及び５％ＣＯ２下で一晩インキュベーションした後、上清を廃棄して２００μLのウイルス調製物を段階希釈で添加した。２４時間感染の後、上清を廃棄してウェルを２００μLのＰＢＳで３回洗浄した。各ウェルに、５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．５、１００mM β−メルカプトエタノール、０．０５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００及び５mM ４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（４−ＭＵＧ）（Sigma）を含有する２００μLの反応緩衝液を再度満たした。２４時間後に、蛍光マイクロプレートリーダー（Cytofluor II, Applied Biosystems）において３６０／４６０nm Ｅｘ／Ｅｍで反応を測定した。
結果
多様なＧ４形成アプタマー（９３ｄｅｌ、Ｔ３０１７７等）についての文献において報告された抗ＨＩＶ特性に促されて、本発明者らはＡＳ１４１１抗ガンG4アプタマーもＨＩＶ−１感染力を阻害できるか否かについての試験を行った。方法のセクションに記載したとおりに、ＨｅＬａ Ｐ４細胞をウイルス上清ＨＩＶ−１によって感染させた。アプタマーの阻害効果を評定するため、０．００５μMから１０μMまでの範囲で濃度を増加させたＩＳＩＳ３０５２、Ｔ３０１７７、Ｔ３０９２３及びＡＳ１４１１の存在下に、ＨｅＬａ Ｐ４細胞をＨＩＶ−１に感染させた。すべてのＧ４が、２５〜２５００nMの範囲のＩＣ５０でＨＩＶ−１感染力を阻害することができた（図１）。興味深いことに、ＡＳ１４１１は２５nMのＩＣ５０で最も強力なＨＩＶ−１インヒビターであった。
実施例２
材料及び方法
オリゴヌクレオチド
オリゴヌクレオチドは、Eurogentec（Seraing, Belgium）から「Reverse-Phase Cartridge Gold精製」で購入され、７０mM ＫＣｌを含有する２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．０に溶解された。
抗ウイルス活性
伴複製ＨＩＶ−１粒子の感染力は、以前報告されたとおりにモニターされた［３０］。簡潔に述べると、ＨｅＬａＰ４細胞は、それらのゲノムに組み込まれたＬａｃＺ遺伝子を含むレポーター細胞であり、このＬａｃＺ遺伝子の発現はウイルスＬＴＲプロモーターの制御下にある。分子の抗ウイルス活性は、感染後２４時間モニターされた。反応産物に伴う蛍光を、Cytofluor-IIプレートリーダー（Applied Biosystems, Foster City, CA）を使用し、３６０／４６０nmで励起／発光フィルターを用いてモニターした。データ解析（非線形回帰、ＩＣ５０決定及び標準偏差）は、Prism 5.0c（GraphPad）を用いて実施した。
結果
本発明において、本発明者らは細胞状況でＡＳ１４１１がＨＩＶ−１複製を阻害することができるか否かを評定した。興味深いことに、ＡＳ１４１１は、わずか１５．４±３．４nMのＥＣ５０で、低ナノモル濃度にて抗ＨＩＶ−１活性を呈した（図２Ｂ−Ｃ）。Ｔ３０９２３−ｉは、Ｔ３０９２３に近い誘導体で、単一のグアノシンのイノシンへの置換を持ち（図２Ｃ）ＮＭＲにより示されるようにＧ−四重鎖を形成している（Do et al., 2011）。Ｔ３０９２３−Ｉもまた、強力な抗ウイルス性で８３±１４nMのＥＣ５０であり（図２Ｂ−Ｃ）、これはＴ３０９２３を用いて得られた以前の結果に整合している（Ojwang et al., 1995; Jing et al., 20001; Rando et al., 1995）。ジンテビル（zintevir）は、具体的には抗ウイルス薬として開発され、臨床試験にて評価されたが、ＡＳ１４１１はこれまでに試験されたジンテビルの誘導体のいずれよりもウイルス複製の阻害効率が５〜６倍高かった（図２Ｃ）。平行して、本発明者らは、ＩＳＩＳ５３２０から由来し、明確なＧ−四重鎖構造を形成する（Caceres et al., 2004）ＩＳＩＳ５３２０−ＤＴも試験した。同じ細胞アッセイにおいて、ＩＳＩＳ５３２０−ＤＴはナノモル濃度でＨＩＶ−１複製を阻害することはなく（４．２±０．６mMのＥＣ５０、図２Ｂ−Ｃ）、これは以前に報告された親分子ＩＳＩＳ５３２０の抗ウイルス活性に類似していた（Stoddart et al., 1998）。したがって、ＡＳ１４１１はジンテビル及びアンデビル（andevir）を含めこれまでに試験された核酸／Ｇ−四重鎖形成オリゴヌクレオチドファミリーのうち最も強力な抗ウイルス分子である（図２Ｃ）。
潜在的な抗ガン適用についてのＡＳ１４１１の臨床試験では、その分子は安全であるが人体から速やかに除去されるようであった（Bates et al., 2009）。これは、抗ウイルス薬物としてのＡＳ１４１１の使用に対して限定的な因子となり得るかもしれない。しかしながら本発明者らは、有効な抗ガン活性を得るために必要な濃度よりもＡＳ１４１１は１０００倍低濃度にて強力な抗ウイルス性であることを本願で示した。このように、ＡＳ１４１１は現在のその形式で、抗ＨＩＶ剤としての卓越した治療的価値を示し得るであろう。あるいは、最近の研究ではＡＳ１４１１の金粒子との会合がin vivoのガンのモデルでその有効性を増強し（Dam et al., 2015; Malik et al., 2015）、バイオアベイラビリティーの増強を伴うが毒性は増加しないことが示された。それゆえ、ＡＳ１４１１は単独で、又はナノ粒子と接合して、抗ＨＩＶ適用への重大な候補となる。
参照：
本出願全体をとおして、種々の参照文献で本発明の属する技術分野の水準を記載している。これらの参照文献の本開示は、参照により本開示に組み入れられる。

Claims (4)

  1. ＨＩＶ感染の処置を必要とする被検者におけるＨＩＶ感染を処置する方法であって、治療上有効量の配列番号：１に示す配列を含むオリゴヌクレオチドを該被検者に投与することを含む方法。
  2. 前記オリゴヌクレオチドが、ナノ粒子に接合される請求項１記載の方法。
  3. 前記ナノ粒子が、金ナノ粒子である請求項２記載の方法。
  4. オリゴヌクレオチドが、ペンタミジン、チモペンチン、カスタノスペルミン、デキストラン、ホスカルネットナトリウム；ヌクレオシド系逆転写酵素インヒビター、非ヌクレオシド系逆転写酵素インヒビター ＴＩＢＯの化合物；［アルファ］−ＡＰＡ（［アルファ］−アニリノフェニルアセトアミド）の化合物；ＴＡＴ−インヒビターなどのトランス活性化タンパク質のインヒビター、プロテアーゼインヒビター融合インヒビター、ウイルスインテグラーゼのインヒビター；及びリボヌクレオチドレダクターゼインヒビターからなる群より選択される少なくとも１つの抗レトロウイルス化合物と組み合わせて使用される請求項１記載の方法。
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