JP2018134086A - 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 - Google Patents
免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018134086A JP2018134086A JP2018072015A JP2018072015A JP2018134086A JP 2018134086 A JP2018134086 A JP 2018134086A JP 2018072015 A JP2018072015 A JP 2018072015A JP 2018072015 A JP2018072015 A JP 2018072015A JP 2018134086 A JP2018134086 A JP 2018134086A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- cell population
- protein
- multiple sclerosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 title claims abstract description 76
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 256
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 84
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 81
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 61
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims abstract description 59
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 68
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 claims description 56
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 claims description 18
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 18
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 claims description 16
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 claims description 15
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 claims description 15
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 13
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 13
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 13
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 claims description 12
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 12
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 11
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 11
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 claims description 11
- 102100028682 Claudin-11 Human genes 0.000 claims description 10
- 108050007280 Claudin-11 Proteins 0.000 claims description 10
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 claims description 8
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000055324 Myelin Proteolipid Human genes 0.000 claims description 5
- 101710094913 Myelin proteolipid protein Proteins 0.000 claims description 5
- 108010077641 Nogo Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102100035917 Peripheral myelin protein 22 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710199257 Peripheral myelin protein 22 Proteins 0.000 claims description 5
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 claims description 5
- 102100029831 Reticulon-4 Human genes 0.000 claims description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 28
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 abstract description 22
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 abstract description 13
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 abstract description 13
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 abstract description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 abstract description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 abstract 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 33
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 21
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 20
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 20
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 16
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- -1 variants Substances 0.000 description 10
- 102100029647 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Human genes 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 9
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 101001015006 Homo sapiens Integrin beta-4 Proteins 0.000 description 6
- 102100033000 Integrin beta-4 Human genes 0.000 description 6
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 6
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 6
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 5
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001046687 Homo sapiens Integrin alpha-E Proteins 0.000 description 4
- 102100022341 Integrin alpha-E Human genes 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 3
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 3
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000011198 co-culture assay Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 2
- 241001631457 Cannula Species 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 2
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 2
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100034195 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Valproic acid Chemical compound CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000003035 hyaline cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 2
- RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N (2s)-2-(3-phenoxyphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RDJGLLICXDHJDY-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPOAOTPXWNWTSH-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-3-methylglutaric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C)CC(O)=O NPOAOTPXWNWTSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- PFWLFWPASULGAN-UHFFFAOYSA-N 7-methylxanthine Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1N=CN2C PFWLFWPASULGAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N Aldosterone Chemical compound C([C@@]1([C@@H](C(=O)CO)CC[C@H]1[C@@H]1CC2)C=O)[C@H](O)[C@@H]1[C@]1(C)C2=CC(=O)CC1 PQSUYGKTWSAVDQ-ZVIOFETBSA-N 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 101000766307 Gallus gallus Ovotransferrin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101000728679 Homo sapiens Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001002470 Homo sapiens Interferon lambda-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000853002 Homo sapiens Interleukin-25 Proteins 0.000 description 1
- 101000853000 Homo sapiens Interleukin-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001128431 Homo sapiens Myeloid-derived growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101000622137 Homo sapiens P-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108050009288 Interleukin-19 Proteins 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N Nabumetone Chemical compound C1=C(CCC(C)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 BLXXJMDCKKHMKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010071384 Peptide T Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 102100032350 Protransforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 208000007400 Relapsing-Remitting Multiple Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- 101710113649 Thyroid peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N Trichostatin A Natural products ONC(=O)C=CC(C)=CC(C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940125388 beta agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 description 1
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 1
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGLYKWWBQGJZGM-ISLYRVAYSA-N diethylstilbestrol Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1C(/CC)=C(\CC)C1=CC=C(O)C=C1 RGLYKWWBQGJZGM-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960001419 fenoprofen Drugs 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 230000008102 immune modulation Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 108090000681 interleukin 20 Proteins 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 108090000237 interleukin-24 Proteins 0.000 description 1
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 1
- OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N ketorolac Chemical compound OC(=O)C1CCN2C1=CC=C2C(=O)C1=CC=CC=C1 OZWKMVRBQXNZKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000012577 media supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004270 nabumetone Drugs 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000012177 negative regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229960002739 oxaprozin Drugs 0.000 description 1
- OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N oxaprozin Chemical compound O1C(CCC(=O)O)=NC(C=2C=CC=CC=2)=C1C1=CC=CC=C1 OFPXSFXSNFPTHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N rofecoxib Chemical compound C1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C1=C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)OC1 RZJQGNCSTQAWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000371 rofecoxib Drugs 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000894 sulindac Drugs 0.000 description 1
- MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N sulindac Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(F)=CC=C2\C1=C/C1=CC=C(S(C)=O)C=C1 MLKXDPUZXIRXEP-MFOYZWKCSA-N 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N thromboxane Chemical compound CCCCCCCC[C@H]1OCCC[C@@H]1CCCCCCC RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960005294 triamcinolone Drugs 0.000 description 1
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 description 1
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0637—Immunosuppressive T lymphocytes, e.g. regulatory T cells or Treg
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46433—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
- C12N2502/1352—Mesenchymal stem cells
- C12N2502/1382—Adipose-derived stem cells [ADSC], adipose stromal stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】免疫調節性細胞は、多発性硬化症の免疫調節において、驚くべき効力を有する。該免疫調節性細胞は、調節性T-細胞であり、特に、該免疫調節性細胞は、Foxp3+CD4+CD25+T-reg及び/又はIL-10/TGF-β-産生性調節性Trl細胞である。本発明の免疫調節性細胞の調製、増殖及び/又は生成のための方法は、MSC及び/又は線維芽細胞を含む細胞集団を、1以上の多発性硬化症-関連抗原の存在下において、PBLと接触させることを含む。
【選択図】図1
Description
本発明は、免疫調節性細胞、免疫調節性細胞の提供方法、及び、それを必要とする哺乳
動物の免疫調節のための、該細胞の治療的使用に関する。
調節性T細胞:全ての免疫応答はT細胞によって制御されている。自己免疫応答を誘発す
る潜在能力を備えた自己反応性細胞には、正常なT細胞レパートリーの一部が含まれるが
、健全な状態においては、免疫抑制細胞によって、それらの活性化が阻止されている。最
初は、1970年代に、抑制性T細胞について記述がなされたが、ごく最近になって、T-細胞
サブセットの特徴付けが大きく前進し、このときに、調節性T細胞(Treg細胞)として改名
されている。
胞サブセットが存在する。2種の主要なタイプのTreg細胞が、CD4+集団において特徴付け
られている。すなわち、内在性の、胸腺で生成されるTreg細胞、及び、末梢-誘導性の、I
L-10又はTGF-β分泌性T-reg細胞(TrI細胞)である。胸腺で生成される、CD4+CD25+で、Fox
p3を発現する内在性T-reg細胞は、遊走し、末梢に維持される。
ための該調製法)は、当技術分野において公知である。例えば、国際特許出願WO2011/0482
22は、間葉系幹細胞を末梢血白血球と接触させることによりTreg細胞を調製する方法を提
供している。
スI分子を発現するが、HLAクラスII、CD40、CD80又はCD86分子を欠いている、低免疫原性
の間葉型細胞に分化することができる多能性成体幹細胞の供給源である。さらには、増殖
させたhASCは、細胞接触-依存的メカニズム、及び、活性化された免疫系細胞によって放
出されるサイトカインに応答して分泌される可溶性因子の双方によって、免疫系細胞の活
性化、増殖、及び機能を阻害することが報告されている。関節リウマチ(RA)及びクローン
病の実験モデルは、hASC治療の潜在的な標的である、自己免疫疾患/炎症性疾患のモデル
としての研究対象である。コラーゲン誘発関節炎(CIA)マウス及び炎症性腸疾患(IBD)マウ
スの双方において明らかとなったデータは、hASCの注入によって、両疾患の発生率及び重
症度が大いに低減されることを報告した。hASC治療がその後の疾患ピークの誘導が誘発さ
れる場合に保護効果を有することが実証された。この重症度の臨床的低減には、Th1応答
の下方制御によって媒介される、局所及び全身性の抗炎症性作用が伴っていた。これらの
データには、hASCが短い期間の間にリンパ系器官まで遊走し、さらに消失可能であるとい
う事実が随伴した。さらなる分析により、前記治療後に起こる自己反応性Tエフェクター
応答を抑制する能力を有する、抗原特異的CD4+CD25+FoxP3+調節性T細胞(Treg)のデノボ生
成が実証された。RA患者において実施された該エクスビボ研究は、hASCが、様々なメカニ
ズムでコラーゲン-反応性T細胞に強い抑制性反応を働かせることを示した。そのうちの1
つは、自己反応性T細胞の増殖を阻害するコラーゲン特異的Treg細胞の生成であった。hAS
Cは、自己-PBMCに対する用量依存的様式の抑制能力を備えたCD4+CD25brightFOXP3+Tregの
選択的誘導によって、その免疫抑制活性を発揮しているようである。
ising)プロセスを介して、免疫系がCNSを攻撃する、自己免疫状態である。MSにおける寛
解の誘導は、自己免疫の予防において重要な役割を果たすCD4+CD25+FOXP3+Tregの刺激と
関連付けられている。多数の研究が、CNSの炎症性疾患及び脱髄性疾患を含む様々なヒト
自己免疫疾患における、Tregの数的又は機能的欠損を報告している。MS患者の研究は、Tr
eg機能の回復が、ヒトにおける将来有望な治療的アプローチであるという仮説を、さらに
支持している。実際、再発-寛解性MSを有する患者において、Tregの最適以下の抑制能力
が観察されている。例えば、臨床的に使用される免疫調節薬、酢酸グラチラマーに応答す
る患者は、末梢血及び脳脊髄液中のCD4+CD25+FoxP3+Treg細胞のレベルが高いことが報告
されている。MS用に使用される別の臨床薬であるインターフェロンβは、療法の開始後、
Tregのデノボ生成の刺激を介して、Treg活性の再正常化を誘導する。MSの動物モデルであ
る、実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)において、疾患経過はTreg欠乏によって悪化し、E
AEのいくつかのモデルにおける疾患に対する自然防御は、抗原特異的Tregと関連している
。これらのデータは、MS患者における免疫機能障害が、抑制に対するエフェクターT細胞
の抵抗性の結果ではなく、Tregに固有のものであり得ることを示唆している。
一態様において、本発明は、受容対象の治療において使用するのに適した免疫調節性細
胞の調製、増殖、及び/又は生成に関する。該免疫調節性細胞、並びに、それを含むキッ
トは、本発明のさらなる態様を構成する。
性硬化症の治療用医薬の調製における、該免疫調節性細胞の使用に関する。本発明は、併
用療法における前記方法の使用にも関するものであり、言い換えれば、本発明の免疫調節
性細胞は、第2の若しくは更なる薬剤と同時に又は別々に(例えば、逐次的に)、1以上の薬
剤とともに共投与される。
関する。
本発明は、免疫調節特性を有する免疫調節性細胞の調製、増殖、及び/又は生成のため
の方法を提供する。該免疫調節性細胞及びその使用は、本発明のさらなる態様を構成する
。
本願明細書の理解を促進するために、本発明の文脈におけるいくつかの用語及び表現の
意味を以下に説明する。必要に応じ、説明全体にわたって、さらなる定義が含められるだ
ろう。
体からのものを意味するように解釈されるものとする。2以上の個体は、1以上の遺伝子座
の遺伝子が同一でない場合に、互いにアロジェネイックであると言われる。
本願明細書において使用される「自己の」という用語は、同一の個体からのものを意味
するように解釈されるものとする。
表面外来抗原を提示する細胞集団を意味する。体内のほぼ全ての細胞が、T細胞に抗原を
提示することができるが、「抗原提示細胞」(APC)という用語は、表面MHC II(HLA DP、DQ
、DR)を発現する分化した細胞に本願明細書では限定され、この発現が誘導される細胞(例
えば、限定されないが、B-細胞及びCD4 PHA芽球)及び単球-マクロファージ系統に由来す
る細胞(例えば、限定されないが、樹状細胞)の両方を含む。
細胞集団であって、インビボ又はインビトロで前記細胞集団に関連する1以上の細胞集団
を、実質的に含まないものを意味する。
ードする遺伝子のサブセットを意味する。ヒトにおいては、これらの遺伝子は、ヒト白血
球抗原(HLA)遺伝子と称される。本願明細書において、略語MHC又はHLAは、互換的に使用
される。「対象」という用語は、動物、好ましくは、非霊長類(例えば、ウシ、ブタ、ウ
マ、ネコ、イヌ、ネズミ、又はマウス)及び霊長類(例えば、サル又はヒト)を含む、哺乳
動物を意味する。好ましい実施態様において、該対象はヒトである。
、これには、免疫応答及び炎症性状態の下方制御、並びに、サイトカインプロファイル、
細胞障害活性及び抗体産生における変化が含まれるが、これらに限定されない。
抗原及び自己抗原の両方を含む特異的抗原(複数可)と関連する又はそれによって活性化
される免疫系の1以上の生物学的活性(限定されないが、T-細胞増殖など)を阻害又は低減
させる能力を有する細胞を意味する。
とする。
本願明細書において使用される「免疫調節性作用物」、「免疫調節性細胞集団」、又は
「免疫調節性細胞(複数可)」という用語は、1以上の免疫系細胞(例えば、限定されない
が、T細胞)の1以上の生物学的活性(例えば、限定されないが、増殖、分化、プライミング
、エフェクター機能、サイトカインの産生又は抗原の発現)を阻害又は低減させる、作用
物、細胞(複数可)、又はその集団を意味するように解釈されるものとする。
免疫系の細胞を意味する。「調節性T細胞」という用語(本願明細書において、T-reg細胞
とも称される)は、免疫系の活性化を能動的に抑制し、病理学的な自己反応性、即ち自己
免疫疾患を予防する、T細胞サブセットを意味する。「調節性T細胞」又は「T-reg細胞」
という用語は、内在性T-細胞(CD4+CD25+FoxP3+T-reg細胞としても知られる)及びFoxP3分
子を発現しない適応性T-細胞(Tr1細胞又はTh3細胞としても知られる)の両方を含むように
解釈されるものとする。
の集団は、調節性T細胞であるが、前記方法の別の実施態様において、それらは、調節性T
細胞の免疫抑制機能を果たすことができるように改変された、他の表現型の細胞であって
もよい。例えば、他の表現型の細胞は、前記改変に先立って、次の能力の1以上を欠いて
いてもよい:混合リンパ球反応の抑制;細胞傷害性T細胞反応の抑制;DC成熟の阻害;炎
症性サイトカインのT細胞産生の阻害。
又は「-」は、ある細胞集団において、20%未満、10%未満、好ましくは、9%未満、8%未満
、7%未満、6%未満、5%未満、4%未満、3%未満、2%未満、1%未満の細胞が当該マーカーを発
現するか、又はいずれの細胞も当該マーカーを発現しないことを意味するように解釈され
るものとする。細胞表面マーカーの発現は、例えば、従来の方法及び装置(例えば、市販
の抗体及び当技術分野で公知の標準的なプロトコルとともに使用される、Beckman Coulte
r Epics XL FACSシステム)を使用する、特定の細胞表面マーカーのフローサイトメトリー
によって、測定することができる。
いて、「MSC」とも称される)は、間充織に元々由来する多能性細胞型を意味するように解
釈されるものとする。
有意な発現」という表現又はそれと均等な用語である「陽性」及び「+」は、ある細胞集
団において、20%超、好ましくは、30%超、40%超、50%超、60%超、70%超、80%超、90%超、
95%超の細胞、又は、全ての細胞が、当該マーカーを発現することを意味するように解釈
されるものとする。
技術分野において公知の標準的なプロトコルとともに使用される、Beckman Coulter Epic
s XL FACSシステム)を使用する、特定の細胞表面マーカーのフローサイトメトリーによっ
て測定することができ、それは、従来の方法及び装置(例えば、市販の抗体及び当技術分
野で公知の標準的なプロトコルとともに使用される、Beckman Coulter Epics XL FACSシ
ステム)を使用し、バックグラウンドシグナルを超える、フローサイトメトリーにおける
特定の細胞表面マーカーのシグナルを示す。該バックグラウンドシグナルは、従来のFACS
解析において、各表面マーカーを検出するために使用されている特異的抗体と同じアイソ
タイプの非特異的抗体によってもたらされるシグナル強度として定義される。陽性とみな
されるマーカーについては、従来の方法及び装置(例えば、市販の抗体及び当技術分野で
公知の標準的なプロトコルとともに使用される、Beckman Coulter Epics XL FACSシステ
ム)を使用して、観察される特定のシグナルが、バックグラウンドシグナル強度よりも、2
0%強く、好ましくは、30%強く、40%強く、50%強く、60%強く、70%強く、80%強く、90%強
く、500%強く、1000%強く、5000%強く、10000%強く、或いはそれを上回る。
市販の公知のモノクローナル抗体を、関連細胞の同定に使用することができる。
「結合組織」という用語は、間充織に由来する組織を意味し、その組織の細胞が、細胞
外基質の中に含まれるという点で特徴付けられる、いくつかの組織を含む。結合組織の例
には、脂肪及び軟骨組織が含まれるが、これらに限定されない。
細胞を含むように解釈されるものとする。
本願明細書において使用されるように、直接、患者又は対象について使用される場合、
「治療する(treat)」、「治療(treatment)」及び「治療すること(treating)」という用語
は、多発性硬化症に関連する1以上の症状の寛解を意味するように解釈されるものとし、
ここで、該寛解は、本発明の免疫調節性細胞の投与に起因する。
織の拒絶反応を含む免疫学的に媒介される疾患を含むがこれらに限定されない障害に関連
する、1以上の症状の寛解のための本発明にならって、本発明の免疫調節性細胞又はそれ
を含む医薬組成物を、他の活性薬剤又は治療様式とともに使用することを意味する。これ
らの他の薬剤又は治療には、前記障害の治療のための公知の薬物及び療法、例えば、限定
されないが、コルチコステロイド及び非ステロイド性抗炎症性化合物などが含まれ得る。
「PBL」という用語は、末梢血白血球、リンパ球又は単球を意味するように解釈される
ものとする。
抗炎症性化合物、又は炎症の治療に有用な他の薬剤と併用することもできる。本発明の作
用物の、これらの他の療法又は治療様式との併用は、同時であってもよく、あるいは、逐
次的に与えられてもよい。すなわち、該免疫調節性細胞又はそれを含む医薬組成物が、他
の療法又は治療様式の前に又は後に与えられ得るように、該2つの治療を分けることがで
きる。担当医は、免疫調節性細胞又はそれを含む医薬組成物を、他の薬剤、療法又は治療
様式と組み合わせて施す適切な順序を判断するだろう。
一態様において、本発明は、単離された免疫調節性細胞、その集団及び組成物を提供す
る。本発明の免疫調節性細胞は、多発性硬化症の免疫調節において驚くべき効力を有する
。
態様において、該免疫調節性細胞は、Foxp3+CD4+CD25+T-reg及び/又はIL-10/TGFb-産生性
調節性Tr1細胞である。本発明の単離された免疫調節性細胞は、好ましくは、細胞表面マ
ーカー、CD62-L、CD127、FOXP3、CTLA4、CD104及びGITRのうちの少なくとも1つ、2つ、3
つ、4つ、5つ、又は、好ましくはそれらの全てを発現する(すなわち、それ(ら)につい
て陽性である)ことを特徴とする。好ましくは、前記MSCは、前記細胞表面マーカー(CD62
-L、CD127、FOXP3、CTLA4、CD104及びGITR)のうちの少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、及
び、好ましくはそれらの全ての、有意な発現レベルを有することを特徴とする。
FOXP3及びCTLA4の少なくとも1つ、2つ、又は、好ましくは全てを発現する(すなわち、そ
れ(ら)について陽性である)ことを特徴とする。好ましくは、前記MSCは、前記細胞表面
マーカー(CD62-L、FOXP3及びCTLA4)の少なくとも1つ、2つ、又は、好ましくは全ての、有
意な発現レベルを有することを特徴とする。それらがCD127を発現しない(すなわち、それ
について陰性である)ことがさらに好ましい。
好ましい。本発明の免疫調節性細胞は、限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質、ミ
エリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質、プロテオリピドタ
ンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴプロテイン、ミエリン関連オリゴデンド
ロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ヒートショックタ
ンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質群、NOGO A、糖タンパク質Po、末梢ミ
エリンタンパク質22、2'3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ、並びに、それら
の断片、バリアント及び混合物などの、1以上の多発性硬化症関連抗原に抗原特異的であ
る(又は、それ(ら)によって活性化される免疫応答を優先的に調節する)ことが好ましい
。本発明の免疫調節性細胞は、限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質ペプチド、ミ
エリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、及びプロテオリピドタンパク質、並びに、そ
れらの断片、バリアント及び混合物など、例えば、限定されないが、配列番号1〜7によっ
て表されるものなどの、1以上の多発性硬化症関連抗原に抗原特異的である(又は、それ(
ら)によって活性化される免疫応答を優先的に調節する)ことが好ましい。
疫応答の調節における改善された効力を有することが実証されている。本発明の一実施態
様において、本発明の免疫調節性細胞は、限定されないが、ミエリン塩基性タンパク質、
ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質、プロテオリピド
タンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴプロテイン、ミエリン関連オリゴデン
ドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、ヒートショック
タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質群、NOGO A、糖タンパク質Po、末梢
ミエリンタンパク質22、2'3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラーゼ、並びに、それ
らの断片、バリアント及び混合物などの、1以上の多発性硬化症関連抗原への曝露によっ
て、エクスビボで生成される。本発明の免疫調節性細胞は、限定されないが、ミエリン塩
基性タンパク質ペプチド、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、及びプロテオリ
ピドタンパク質、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物など、例えば、限定され
ないが、配列番号1〜7によって表されるものなどの、1以上の多発性硬化症関連抗原への
曝露によって、エクスビボで生成されることが好ましい。
5%、90%、95%の該免疫調節性細胞を含む、本発明の免疫調節性細胞の集団を、さらに提供
する。
めの方法に関する。一実施態様において、該免疫調節性細胞は、調節性T細胞であり、特
に好ましい実施態様において、該免疫調節性細胞は、Foxp3+CD4+CD25+T-reg及び/又はIL-
10/TGFb-産生性調節性Tr1細胞である。前記方法は、MSC及び/又は線維芽細胞を含む細胞
集団を、1以上の多発性硬化症関連抗原の存在下で、PBLと接触させることを含む。
らなる態様を構成する。
該免疫調節性細胞は、細胞表面マーカー、CD62-L、FOXP3及びCTLA4を発現することが特
に好ましい。それらが、CD127を発現しない、すなわち、それについて陰性であることが
さらに好ましい。
する対象の治療方法を提供する:
i)PBL集団を用意する工程;
ii)該PBLを、1以上の多発性硬化症関連抗原の存在下で、MSC及び/又は線維芽細胞を含
む細胞集団と接触させる工程;
iii)該免疫調節性細胞集団を単離する工程;及び
iv)該免疫調節性細胞集団を前記対象に投与する工程。
用されるものとする:本質的に間葉系幹細胞を含む複数の細胞;本質的に線維芽細胞を含
む複数の細胞;本質的に間葉系幹細胞及び線維芽細胞を含む複数の細胞。該MSC及び/又は
線維芽細胞集団中の細胞数と、単離される調節性T細胞との比は、それぞれ、1:1〜1:150
であることが好ましい。該MSC及び/又は線維芽細胞における細胞数と、PBLとの比は、1:3
0〜1:5であることがさらに好ましい。したがって、一実施態様において、これはおよそ、
PBL25個につき1個のMSC、PBL25個につき1個のMSC及び1個の線維芽細胞、又はPBL10個につ
き1個のMSCとなり得る。
(例えば、限定されないが、MSC及び/又は線維芽細胞集団)は、PBLとともにインビトロで
培養される。培養期間は、好ましくは、2時間〜21日、より好ましくは、5〜17日である。
さらなる実施態様において、該培養は、少なくとも2、4、5、若しくは6日間、又はそれよ
り長く行われる。培養期間は、約15日であることが特に好ましい。この共培養は、免疫調
節性細胞の生成をもたらし、対象の治療に使用することができる前記PBLの増殖された集
団を提供する。
ば、インキュベーターで実施される。該方法は、好ましくは、地域差を考慮して、およそ
哺乳動物の体温で、例えば、摂氏37度で実施される。二酸化炭素濃度が0%〜10%、より好
ましくは、1%〜5%である環境で、本発明の方法が行われることも好ましい。
上述の本発明の方法によって調製される免疫調節性細胞の、意図されるレシピエントに
関して、該方法に使用するPBLは、自己由来又はアロジェネイックな由来のいずれのもの
であってもよい。しかしながら、それらが自己由来のものであること(すなわち、それら
が、後に前記免疫調節性細胞、又は、その何らかの治療、医薬若しくは医薬組成物を与え
られる対象から得られていたこと)が好ましい。全血から末梢血白血球を単離する方法は
、当技術分野において公知であり、フィコール・ハイパック及び/又は赤血球溶解手順又
は市販の手段、例えばLeucoPREP(商標)細胞分離装置(Becton Dickinson & Co.)及びHIS
TOPAQUE(商標)(Sigma Diagnostics)溶液などの使用が含まれる。
本発明の方法に使用される線維芽細胞は、細胞外基質の合成及び維持に関連する、間充
織由来の結合組織であり、滑膜細胞のような線維芽細胞を含むように解釈されるものとす
る。該線維芽細胞は、任意の好適な動物から、最も好ましくは、ヒトから得ることができ
る。
本発明の方法に使用されるMSCは、好ましくは、結合組織に由来する。好ましい実施態
様において、該MSCは、脂肪組織に由来し、さらに好ましい実施態様においては、脂肪組
織の間質画分に由来する。別の実施態様において、前記MSCは、硝子軟骨の軟骨細胞から
得られる。さらなる実施態様において、前記MSCは、皮膚から得られる。別の実施態様に
おいて、前記MSCは、骨髄から得られる。
の好適な供給源から得ることができる。該細胞は、病的ではない哺乳動物供給源から、好
ましくは、出生後のもの(例えば、げっ歯類;霊長類)から得られることが好ましい。好ま
しい実施態様において、前記MSCは、限定されないが、脂肪組織の間質画分、硝子軟骨、
骨髄又は皮膚などの結合組織の供給源から得られる。最も好ましくは、前記方法のMSCは
、病的ではない、出生後の、ヒトの間質脂肪組織から得られる。
、上述の方法に使用するMSC及び/又は線維芽細胞は、アロジェネイックな(ドナー)由来又
は自己(対象)由来のいずれのものであってもよい。該方法の一実施態様において、前記MS
C及び/又は線維芽細胞は、アロジェネイックな由来のものである。
マーカーを発現しないこと、(ii)IDOを構成的には発現しないこと、(iii)IFN-γによる刺
激時にIDOを発現すること、及び、MSCについては、(iv)少なくとも2つの細胞系統に分化
する能力を示すことを特徴とする。
本発明の方法に使用されるMSCは、好ましくは、APC表現型に関連するマーカーについて
陰性である。したがって、前記MSCは、次のマーカー、CD 11b;CD 11c;CDl 14;CD45;HLAIl
のうちの少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、又は、好ましくはその全てについて陰性である
ことが好ましい。さらには、前記MSCは、好ましくは、次の細胞表面マーカー、CD31;CD34
;CD133のうちの少なくとも1つ、2つ、又は、好ましくはその全てについて陰性である。
カー、CD9、CD44、CD54、CD90及びCD105のうちの少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、又は、
好ましくはその全てを発現する(すなわち、それ(ら)について陽性である)ことを特徴と
する。好ましくは、前記MSCは、前記細胞表面マーカー(CD9、CD44、CD54、CD90及びCD105
)のうちの少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、及び、好ましくはその全ての、有意な発現レ
ベルを有することを特徴とする。
発明の方法において使用するのに好適なMSCの例は、当技術分野において、例えば、その
全体が引用により本願明細書に組み込まれている、国際特許出願WO2007/039150において
、説明されている。
本発明の方法において使用するのに好適なMSCは、増殖して、少なくとも2つ、より好ま
しくは、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ又はそれを上回る数の細胞系統に分化する能力を示し
得る。前記MSCが分化することができる細胞系統の、説明のための非限定的な例には、骨
細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、腱細胞、筋細胞、心筋細胞、造血支持間質細胞、内皮細胞、
神経細胞、星状細胞、及び肝細胞が含まれる。MSCは、従来の方法により、増殖して他の
系統の細胞に分化することができる。分化した細胞を、それらの未分化の対応物から特定
し、次いで単離する方法は、当技術分野において周知の方法によって、行うこともできる
。
前記MSCは、エクスビボで増殖させることもできる。すなわち、単離後、前記MSCを、培
地においてエクスビボで維持して増殖させることができる。そのような培地は、例えば、
抗生物質(例えば、100単位/mlのペニシリン及び100μg/mlのストレプトマイシン)を添加
した、又は、抗生物質を添加しない、ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)及び2mMグルタ
ミンで構成され、これに2〜20%のウシ胎仔血清(FBS)を補う。使用する細胞に合わせて、
培地及び/又は培地サプリメントの濃度を必要に応じて変更又は調節することは、当業者
の技術の範囲内である。血清は、生存能及び増殖に必要な、細胞性及び非細胞性の因子及
び成分を含むことが多い。血清の例には、ウシ胎仔血清(FBS)、ウシ血清(BS)、仔ウシ血
清(CS)、ウシ胎仔血清(FCS)、ウシ新生仔血清(NCS)、ヤギ血清(GS)、ウマ血清(HS)、ブタ
血清、ヒツジ血清、ウサギ血清、ラット血清(RS)などが含まれる。前記MSCがヒト由来の
ものである場合に、前記細胞培養培地にヒト血清を、好ましくは、自己由来のヒト血清を
補うことも、本発明の範囲内である。補体カスケードの成分を不活性化するのに必要であ
ると考えられる場合、血清を、55〜65℃で熱失活させ得ることが理解される。血清濃度の
調節、培地からの血清の除去を利用して、1以上の所望の細胞型の生存を促進することも
できる。好ましくは、前記MSCには、約2%〜約25%のFBS濃度が、有益となるだろう。別の
実施態様において、前記MSCは、血清が、血清アルブミン、血清トランスフェリン、セレ
ニウム、及び組換えタンパク質の組み合わせで置き換えられ、限定されないが、当技術分
野において公知の、インスリン、血小板由来増殖因子(PDGF)、及び塩基性線維芽細胞増殖
因子(bFGF)を含む、限定組成の培地で増殖させることができる。
のもある。そのようなアミノ酸には、限定されないが、L-アラニン、L-アルギニン、L-ア
スパラギン酸、L-アスパラギン、Lシステイン、L-シスチン、L-グルタミン酸、L-グルタ
ミン、L-グリシンなどが含まれる。
コンタミネーションを軽減する。典型的には、使用される抗生物質又は抗真菌化合物は、
ペニシリン/ストレプトマイシンの混合物であるけれども、限定されないが、アンホテリ
シン(Fungizone(登録商標))、アンピシリン(ampicilhn)、ゲンタマイシン、ブレオマイシ
ン、ハイグロマイシン(hygromacin)、カナマイシン、マイトマイシンなども含み得る。
、D-アルドステロン、ジエチルスチルベストロール(DES)、デキサメタゾン、b-エストラ
ジオール、ヒドロコルチゾン、インスリン、プロラクチン、プロゲステロン、ソマトスタ
チン/ヒト成長ホルモン(HGH)などが含まれる。
一実施態様において、前記MSC及び/又は線維芽細胞は、本発明の方法における使用の前
に増殖されていてもよい。細胞増殖のための方法は、当技術分野において公知である。
一実施態様において、前記MSC及び/又は線維芽細胞は、本発明の方法におけるそれらの
使用の前に照射されていてもよい。細胞の照射は、その増殖能力及び生存時間を低減させ
る。
行うことができる。照射条件は、当業者が実験的に調整して、前記MSC及び/又は線維芽細
胞の長期間の増殖停止を引き起こす照射量を与えるのに必要な曝露時間を決定しなければ
ならない。一実施態様において、前記照射量は、1〜100Gy;5〜85Gy、10〜70Gy、12〜60Gy
からなる群から選択される範囲内であるが、該照射量が、15〜45Gyの範囲内であることが
特に好ましい。
一実施態様において、前記MSC及び/又は線維芽細胞は、本発明の方法における使用の前
に、インターフェロンγで刺激することができる。MSCの、その刺激のためのIFN-γ処理
は、当技術分野において公知であり、当業者によって行われ得る。
一実施態様において、前記MSC及び/又は線維芽細胞は、本発明の方法における使用の前
に、マイトマイシンCで処理することができる。MSCのマイトマイシンC処理は、当技術分
野において公知であり、当業者によって行われ得る。
前に、照射、IFN-γ及びマイトマイシンCからなる群から選択される複数の処理に供する
ことができる。
化の前に、細胞の分化を阻害するサプリメントを培地から除去しなければならないことは
、当業者にとって明らかである。全ての細胞がこれらの因子を必要とするわけではないこ
とも明らかである。実際、これらの因子は、細胞型によっては好ましくない効果を誘発す
ることがある。
(抗原(複数可))
免疫調節性細胞の調製及び/又は生成のための前記方法において使用される多発性硬化
症関連抗原は、単一抗原、複数の抗原、又は、該抗原(複数可)を発現及び/又は提示す
る細胞型であってよい。一実施態様において、該抗原は、以下を含む群から選択される:
自己免疫患者由来の自己抗原の混合物、ペプチド抗原、核酸、改変ペプチドリガンド、組
換えタンパク質又はそれらの断片。
一実施態様において、前記抗原は、関節炎に関連している(限定されないが、コラーゲ
ン抗原など)。
エリン塩基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタ
ンパク質、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴプロテイン
、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タ
ンパク質、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、NOGO A
、糖タンパク質Po、末梢ミエリンタンパク質22、2'3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエス
テラーゼ、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物。
る:ミエリン塩基性タンパク質ペプチド、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質及
びプロテオリピドタンパク質、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物。
る:ミエリン塩基性タンパク質(MBP13-32、MBP83-99、MBP111-119、MBP146-170)、ミエリ
ンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG1-20、MOG35-55)及びプロテオリピドタンパク
質(PLP139-154)、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物。
そのような抗原の選択、単離、精製及び調製のための方法は、当業者に公知である。
発明の方法によって調製、増殖及び/又は生成される、全ての免疫調節性細胞を意味する
ように解釈されるものとし、これには、免疫調節性細胞及び抗原特異的免疫調節性細胞の
双方が含まれる。一実施態様において、前記免疫調節性細胞は、調節性T細胞であり、特
に好ましい実施態様において、前記免疫調節性細胞は、Foxp3+CD4+CD25+T-reg及び/又はI
L-10/TGFb-産生性調節性Tr1細胞である。
本発明の好ましい実施態様において、免疫調節性細胞の調製、増殖又は生成のための前
記方法は、本発明の免疫調節性細胞の収率を高めるのに適した1以上の薬剤の存在下にお
いて行われる。好ましくは、MSC及び/又は線維芽細胞をPBLと接触させる工程は、該薬剤
の存在下において行われる。そのような薬剤は、好ましくは、限定されないが、小分子な
どのMSC刺激因子、サイトカイン及び/又は増殖因子である。好適な薬剤には、限定されな
いが、以下からなる群から選択されるものが含まれる:IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、
IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、
IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-
30、LPS、G-CSF、M-CSF、GMC-SF、Kit-L、VEGF、Flt-3リガンド、PDGF、FGF-2、TPO、IL-
11、IGF-1、MGDF、NGF、TGF-b、HMG、サリドマイド、5-アザシチジン、トリコスタチン-A
、バルプロ酸、成長ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、下垂体アデニル酸シクラーゼ
活性化ポリペプチド(PACAP)、セロトニン、骨形態形成タンパク質(BMP)、上皮増殖因子(E
GF)、トランスフォーミング増殖因子α(TGF.α)、線維芽細胞増殖因子(FGF)。
多糖)である。前記LPS濃度が、0.01〜100μg/mlであることが好ましく、該濃度が、1〜50
μg/ml、例えば、約10μg/mlであることがさらに好ましい。
-4は、ともにサイトカインである。その濃度は、1〜2000IU/mlであることが好ましく、該
濃度は、500〜1000IU/mlであることがさらに好ましい。
法に使用する。GM-CSFの濃度とIL-4の濃度との比が、5:1〜1:1であること、及び、前記薬
剤の各々の濃度が、1〜2000IU/mlであることが好ましく、該濃度が、500〜1000IU/mlであ
ることがさらに好ましい。したがって、一実施態様において、これはおよそ、500IU/mlの
IL-4に対して、1000IU/mlのGM-CSFとすることができる。
いくつかの態様において、本発明は、受容対象への投与に好適な免疫調節性細胞を提供
する。したがって、前記免疫調節性細胞は、相対的な表現型均一性を有することが好まし
い。したがって、本発明の方法の任意の工程において、本発明の免疫調節性細胞は、不均
一な細胞培養から選択される。本発明の免疫調節性細胞及び抗原特異的免疫調節性細胞は
、当業者に公知の従来の手段によって、選択及び単離することができる。そのような手法
の例には、FACS及び免疫磁気細胞選別が含まれる。
供する。該方法は:
i)単離された細胞集団を用意すること;
ii)CD62-L、FOXP3及びCTLA4からなる群から選択される、1つ、2つ又は全てのマーカー
の発現を測定すること;及び
iii)前記マーカーの少なくとも1つ、2つ又は34について陽性である細胞を選択すること
、を含む。
ある。ii)及びiii)による細胞の検出及び選択の方法は、先に述べたとおり、当技術分野
において周知である(例えば、FACS)。さらなる実施態様においては、工程ii)で、マー
カーCD127の発現も測定し、工程iii)で、該マーカーの発現について陰性である細胞を選
択する。
前記方法の一実施態様において、本発明の免疫調節性細胞は、その後、当技術分野にお
いて公知の培養技術、又は本願明細書に開示されている方法を用いて、エクスビボで数を
増殖させることができる。別の処理方法として、前記発明の免疫調節性細胞を、直接イン
ビボで投与することができる。
前記細胞は、当技術分野において公知の任意の手段によって保存することができ、これ
には、限定されないが、密封容器における室温での貯蔵、又は凍結保存が含まれる。
本発明は、本発明の方法に従って調製、増殖及び/又は生成される免疫調節性細胞の、
多発性硬化症の治療、最も好ましくは、前記PBLを得た対象の治療における使用も、提供
する。
において、「本発明の免疫調節性細胞」という用語は、本願明細書に記載の本発明の方法
によって調製、増殖及び/又は生成される全ての免疫調節性細胞を意味するように解釈さ
れるものとし、これには、増殖させた、及び、増殖させていない、免疫調節性細胞、及び
、抗原特異的免疫調節性細胞の双方が含まれる。
本発明は、多発性硬化症に関連する1以上の症状の、治療、予防、及び寛解のための医
薬組成物を提供する。
したがって、別の態様において、本発明は、本発明の免疫調節性細胞及び医薬担体を含
む、医薬組成物(以下、本発明の医薬組成物という)に関する。前記細胞型の2以上の組
み合わせは、本発明により提供される医薬組成物の範囲内に含まれている。
わち、本発明の免疫調節性細胞)、及び、医薬担体を含む。好適な医薬担体は、当技術分
野において公知であり、好ましくは、米国連邦政府又は州政府の規制当局によって承認さ
れているもの、又は、米国薬局方、若しくは、欧州薬局方、若しくは、動物、特にヒトに
おいて使用するための、他の一般的に認識されている薬局方に収載されているものである
。「担体」という用語は、前記治療因子とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形
剤、又はビヒクルを意味する。所望ならば、前記組成物は、少量のpH緩衝剤を含むことも
できる。好適な医薬担体の例は、E W Martinによる「Remington's Pharmaceutical Scien
ces」に記載されている。そのような組成物は、好ましくは精製された形態の、予防的又
は治療的有効量の予防因子又は治療因子を、対象への適切な投与のための形態を提供する
ように、好適な量の担体とともに含む。処方は、投与様式に適合すべきである。好ましい
実施態様において、前記医薬組成物は、無菌であり、かつ、対象、好ましくは動物対象、
より好ましくは哺乳動物対象、最も好ましくはヒト対象への投与に好適な形態である。
、液体溶液又は懸濁液、注射可能な及び注入可能な溶液などの、固体、半固体、及び液体
剤形などが含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療用途による。
本発明の免疫調節性細胞集団、又は、それを含む医薬組成物の、それを必要とする対象
への投与は、従来の手段によって行うことができる。一実施態様において、本発明の組成
物は、全身投与(例えば、経直腸、経鼻、頬側、経膣、植込みリザーバー経由、又は吸入
経由)用に調製することができる。別の実施態様において、本発明の組成物は、局所投与
用に調製することができる。本発明の組成物は、非経口的な経路により投与することがで
きる。組成物は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、病巣
内、リンパ内及び頭蓋内経路により、投与することができる。
植片として)又はインビボのいずれかで、所望の組織に移植すること、直接、動物組織に
移植することを含む方法によって、前記細胞集団を、前記対象に局所投与する。前記細胞
は、任意の適切な方法によって所望の組織に移植することができ、そのような方法は、一
般に、組織の種類によって異なる。例えば、移植片を、細胞を含む培地に浸すこと(又は
それを注入すること)によって、該細胞を該移植片に移植することができる。あるいは、
細胞を組織内の所望の部位に播種して集団を確立することができる。細胞は、(細胞を播
種することができる)カテーテル、トロカール、カニューレ、ステントなどの装置などを
使用して、インビボの部位へ移植することができる。
実施態様において、前記併用療法は、1以上の抗炎症薬に対して不応性である炎症性疾患
を有する対象に施される。別の実施態様において、前記併用療法は、限定されないが、以
下のものなどの、他の種類の抗炎症薬と共に使用される:非ステロイド性抗炎症薬(NSAID
)、ステロイド性抗炎症薬、β-アゴニスト、抗コリン薬(anticholingeric agents)、及び
メチルキサンチン。NSAIDの例には、限定されないが、以下のものが含まれる:イブプロ
フェン、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、インドメタシ
ン、ケトロラク(ketoralac)、オキサプロジン、ナブメントン(nabumentone)、スリンダク
(suhndac)、トルメチン(tolmentin)、ロフェコキシブ、ナプロキセン、ケトプロフェン、
ナブメトンなど。そのようなNSAIDは、シクロオキシゲナーゼ酵素(例えば、COX-I及び/又
はCOX-2)を阻害することによって機能する。ステロイド性抗炎症薬の例には、限定されな
いが、以下のものが含まれる:グルココルチコイド、デキサメタゾン、コルチゾン、ヒド
ロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、アザルフィ[オタ]ジ
ン(azulf[iota]dine)、並びに、トロンボキサン及びロイコトリエンなどのエイコサノイ
ド。インフリキシマブなどのモノクローナル抗体も、使用することができる。
又は、その後に、使用することができる。さらに、そのような抗炎症薬は、リンパ組織イ
ンデューサー及び/又は免疫調節薬として本願明細書に特徴付けられる薬剤を、包含しな
い。
さらなる実施態様において、本発明は、本発明の免疫調節性細胞によって対象を治療す
るのに有用なキットを提供する。該キットは、i)本発明の方法に従って調製、増殖及び/
又は生成される免疫調節性細胞集団、又は、その医薬若しくは医薬組成物、並びに、ii)
限定されないが、シリンジ、注射装置、カテーテル、トロカール、カニューレ及びステン
トなどの、前記細胞を投与するための装置、を含む。さらなる実施態様において、本発明
の前記キットは、iii)対象の治療において使用するための説明書を含んでもよい。
本発明の様々な実施態様を、以下の実施例によって説明するが、これは、本願明細書に
記載されている発明を説明するものであって、限定するものではない。
存在下において、中枢神経系関連のタンパク質に由来するペプチドを使用して、抗原特異
的Treg細胞を「インビトロ」で生成すること、さらには、ポリクローナルTregによる抑制
活性又は駆動性ペプチドの存在下で生成される抗原特異的T-regによる抑制活性の比較に
よって、特異性を実証することであった。
健全ドナーサンプル:吸引脂肪組織を、健全成人ドナー由来のヒト脂肪組織から得て、
DelaRosaらの文献「Requirement of IFN-gamma mediated Indoleamine 2,3 dioxygenase
expression in the modulation of lymphocyte proliferation by human adipose-derive
d stem cells.」Tissue Eng Part A (2009)に記載されているように処理した。該hASCを
継代数4〜12で使用した。バフィーコートは、マドリード自治州の国立輸血センターによ
って提供された。末梢血リンパ球は、Ficoll Paque Plus(GE Healthcare Biosciences AB
、ウプサラ)を用いる密度勾配遠心により、該バフィーコートから単離した。
ペプチドは、その免疫原性及びMHC IIで提示される能力に基づいて選択した。これらの
要件に基づいて7種のペプチドを選択し、各ドナーにつき1種のペプチドを使用するのでは
なく、該7種のペプチドのプールを、Treg誘導について低アフィニティ条件(0.1μMの低濃
度を意味する。)下で使用した。
ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG1-20、MOG35-55)及びプロテオリピドタ
ンパク質(PLP139-154)を等濃度でプールし、DMSO中、1mMの最終ストック濃度とした。培
養において、プールペプチドを0.1μMで使用した。
特異的Tregの生成に使用する反応性ペプチドのプールを選択したら、hASC-媒介性MS-特
異的Treg増殖を実施した。
PBMCを、MSプールペプチドの存在下及び非存在下で、完全培地及びIL-2(100UI/ml)で、
hASCと共培養した。実験開始の48時間前に、FBSを補ったDMEM培地を使用して、ASCを、1
ウェル当たり40000個の細胞でプレーティングした。実験開始の24時間前に、PBMCを解凍
し、(単球の付着を避けるために)完全RPMIを含む非接着性ウェルプレート上で静止状態に
しておいた。0日目にASCから培地を回収し、PBMCを、前記ASCウェルプレートに、1ml当た
り100万個で、RPMIとともに添加した。各ウェルは2mlの体積であった。ASCとPBMCの比は
、PBMC 200万個につき40000個であった(1:50)。RPMI完全培地及びIL-2(100UI/ml)によるh
ASCとの該共培養を、インキュベーターにおいて、37℃、5%CO2で、0.1μMのMSプールペプ
チドの存在下及び非存在下で行った。培地は3日ごとに新しくした。共培養の15日後に、
細胞を回収し、表現型及び機能の特性評価に使用した。
るために、表現型の特性評価を行った。残りの細胞を使用して、CFSE染色した自己PMCSに
対する増殖アッセイを行った。hASC及びMSプールペプチドとの共培養から単離されたTreg
細胞を、TR1と名付けた。ペプチドの非存在下でのhASCとの共培養から単離されたTreg細
胞を、TR2と名付けた。hASCの非存在下かつプールペプチドの存在下で単離されたTreg細
胞を、TR3とした。hASC及びプールペプチドの非存在下で単離されたTreg細胞を、TR4と名
付けた。
2つの異なる特性評価実験を行った。
1. PBMC + hASC + IL-2 (TR2)
2. PBMC + hASC + ペプチドプール + IL-2 (TR1)
3. PBMC + ペプチドプール + IL-2 (TR3)
4. PBMC + IL-2 (TR4)。
な免疫蛍光法により、表面マーカー(CD25、CD4、CD103、GITR、CD127、細胞内FOXP-3、..
.)について特徴付けし、TR1及びTR2共培養細胞について、CD4+CD25brightサブセットを、
免疫磁気分離法を使用することにより単離し、これらを、以下の機能性実験において、さ
らに分析した。
1. PBMC + hASC + ペプチドプール + IL-2:単離されたTreg(TR1)
培養を15日間維持した。その後、細胞を、マルチパラメトリックな免疫蛍光法により、
表面マーカー(CD25、CD4、及び細胞内FOXP-3)について特徴付けし、CD4+CD25brightサブ
セットを、免疫磁気分離法を使用して単離した。
CFSE染色:3体のドナーからのPBMCを、30μMのCFSE(Sigma Aldrich)で染色し、37℃で15分
間インキュベートした。未結合のCFSEを、等量のFCS(Invitrogen)を使用してクエンチし
、その後、細胞をPBSで2回洗浄した。CFSE標識した自己PBMC 2 x 105細胞/ウェルを、平
底96-ウェルプレートのウェルにおいて、1:1、1:4、1:20及び1:50のサプレッサー(S)比で
、インキュベートした。TR1及びTR2集団は、共培養アッセイにおいてPBMCの増殖を有意に
阻害した場合に、抑制を媒介するとみなした。CFSEのデータは全て、Cell Quest(商標)
ソフトウェアを使用して分析した。
前記ミエリン特異的Treg細胞の抑制性能力は、自己PBMCのCFSE増殖アッセイにより試験
した。
抑制率は、100%増殖又は0%抑制の対照培養を基準とする、1世代より多く分裂した細胞
の百分率を使用することにより計算した。
前記PBMC細胞を、96-ウェルプレートにおいて、最終数200,000細胞/ウェルまでの、上
昇していく濃度の単離Treg細胞(TR1及びTR2)とともに培養した。共培養を6日にわたって
放置した。
激を使用して、それぞれ2通りにした:ポリクローナル刺激(Pan T細胞活性化/増殖キット)
及び抗原特異的刺激(MS特異的Tregの生成に使用したプールペプチドを使用する。)。最後
に、細胞を回収し、CFSEの変化をFACSによって分析した。
100,000個の自己PBMCを、1ml当たり50UIのIL-2、及び、前記プールMSペプチド又は無関
係なペプチド(FLU-HA)のいずれかの下で、上昇していく数のMS特異的Treg(TR1)の存在下
、6日にわたって培養して、自己PBMCの増殖を誘導した。その後、細胞を回収し、CD3につ
いて染色した。CFSEの変化をFACSによって分析した。
Treg数及び表現型に対するペプチド特異性の効果
hASC及びMSプールペプチドとの共培養から単離されたTreg細胞を、TR1と名付けた。ペ
プチドの非存在下でのhASCとの共培養から単離されたTreg細胞を、TR2と名付けた。hASC
の非存在下かつプールペプチドの存在下で単離されたTreg細胞を、TR3とした。hASC及び
プールペプチドの非存在下で単離されたTreg細胞を、TR4と名付けた。
よりも、有意に高いTreg細胞率を示した。これらのデータは、抗原駆動性PBMC培養が、非
駆動性培養とほぼ同等のTreg率を誘導することを示し、前記ペプチドが、ASCの調節性T細
胞を生成する能力に影響を及ぼさなかったことを意味している。
前記抗原駆動性Treg(TR1)が、ポリクローナルTreg(TR2)と同じ集団に属することを実証
するために、本発明者らは、Treg細胞に特徴的な3つのマーカー、CD103、CD127及びFOXP3
を、表現型的に分析した。図2に示すとおり、TR1及びTR2細胞については、ほぼ同じ表現
型が見られたが、非ASC誘導性Treg(TR3及びTR4)は、FOXP3及びCD103の割合が低かった。
あらゆる調節性T細胞種についてこれまで記載されてきたとおり、全ての場合において、C
D127の発現は陰性であった。
本発明者らは、単離されたTreg細胞の機能性を実証することを目指した。この目的のた
めに、TR1及びTR2条件由来のCD4+CD25+調節性T細胞を単離した。
アッセイ1用に、自己PBMC 2 x 105細胞/ウェルを、平底96-ウェルプレートにおいて、1
:1、1:4、1:20及び1:50のサプレッサー(S)比で、インキュベートした。TR1及びTR2集団は
、共培養アッセイにおいてPBMCの増殖を有意に阻害した場合に、抑制を媒介するとみなし
た。
上昇していく数のTreg細胞の存在下におけるPBMC増殖の百分率は、PBMC単独の場合に見
られる100%の増殖に対する相対百分率で表現した。3つの個別実験の結果が、図3〜8に示
されており、これは、TR1細胞が、MSプールペプチドを使用した場合に、自己PBMCの増殖
を抑制することができたということを示している。抗CD3/CD28のような強力な増殖誘導原
と比べると、MSペプチドを使用する抑制は、より低かったが、ポリクローナル刺激で達す
る増殖及び活性化のレベルは、ペプチドによるものよりも高いものである。
予想したとおり、TR2ポリクローナルTregは、プールペプチドを刺激因子として使用し
た場合、増殖の有意な減少を誘導しなかった。
これらの結果は、TR1細胞が、より高い割合のMS特異的T細胞を効果的に含んでいること
を示している。
アッセイ2用に、PBMC 1 x 105細胞/ウェルを、平底96-ウェルプレートにおいて、1:5、
1:11及び1:21のサプレッサー(S)比でインキュベートした。TR1細胞のみを使用した。TR1
は、共培養アッセイにおいてPBMCの増殖を有意に阻害した場合に、抑制を媒介するとみな
した。MS特異的Tregが、特異的ペプチドの存在下においてのみ、自己T細胞の増殖を抑制
できるのかどうかを調査するために、本発明者らは、無関係なペプチドの存在下での共培
養を行った。MS誘導自己リンパ球におけるMS特異的Tregの抑制能力を、flu誘導自己リン
パ球におけるMS特異的Tregと比較する。図9は、達した最大増殖を基準とする、MS及びflu
ペプチドの存在下における増殖の百分率を示す。PBMCに加えられるプールMSペプチドにお
けるMS特異的Tregの存在は、自己T細胞コンパートメントの増殖を阻害することが、結果
により確認される。この阻害は、無関係なペプチドを使用した場合、有意に低かった。
れる自己T細胞増殖を優先的に阻害するTregの集団を含んでいることを示している。
まとめると、これらの結果は、Treg生成のための前記方法は、抗原特異的Tregを含むTr
eg細胞集団を生成できたが、該細胞集団は、有意に低い程度に、非特異的免疫抑制能力を
保持していたということを示している。概して、hASC/PBMC共培養から単離されたポリク
ローナルTregは、自己PBMCの増殖を抑制できると結論づけることもできる。しかしながら
、MS特異的Tregの生成は、他のペプチド(前記無関係なペプチド、FLU-HAなど)ではなくMS
ペプチドに対して反応する自己T細胞を優先的に阻害する。
中枢神経系のタンパク質由来のプールMSペプチド(ミエリン塩基性タンパク質ペプチド
(MBP13-32、MBP83-99、MBP111-119、MBP146-170)、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タン
パク質(MOG1-20、MOG35-55)及びプロテオリピドタンパク質(PLP139-154))を、Treg誘導
系に添加し、MS特異的Tregを、ポリクローナルTregとほぼ同等の割合で生成した。MS特異
的Treg(本願明細書においてTR1と称される)は、ポリクローナルTreg細胞のように、表現
型的にCD4+CD25highFOXP3lowCD127negCD103low/negであると特徴付けられた。MS特異的Tr
egは、前記ペプチドプール及び低IL-2濃度で誘導される自己PBMCの増殖を抑制することが
できた。PBMCは、抗CD3/CD28マイクロビーズで刺激された場合の、MS特異的調節性T細胞
による阻害にも感受性であった。
れ、したがって、本発明の細胞集団は、MSペプチドT細胞増殖の調節において、より高い
効力を示す点において「抗原特異的」であるが、該細胞集団は、非MS関連T細胞応答を調
節する(低減された)能力をなお保持していると結論づけることができる。
言及し得る本発明の更なる特徴は、以下のとおりである:
a)本質的に、CD62-L、CD127、FOXP3、CTLA4、CD104及びGITRを発現する細胞から成る、
単離された免疫調節性細胞集団
b)エクスビボで生成される、単離された免疫調節性細胞集団であって、本質的に、多発
性硬化症関連抗原に対して指向化された(directed)細胞、又は、該エクスビボ生成の間
に1以上の多発性硬化症関連抗原に曝露された細胞から成る、前記細胞集団
c)前記細胞が、CD62-L、CD127、FOXP3、CTLA4、CD104及びGITRを発現することを特徴と
する、b)の細胞集団
d)単離された調節性T細胞又はその細胞集団を、1以上の多発性硬化症関連抗原の存在下
において、間葉系幹細胞集団と接触させることを含む、免疫調節性細胞の調製、増殖及び
/又は生成のための方法
e)前記多発性硬化症関連抗原が、以下を含む群から選択される、d)の方法:ミエリン塩
基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質
、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴプロテイン、ミエリ
ン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質
、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質群、NOGO A、糖タ
ンパク質Po、末梢ミエリンタンパク質22、2'3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラー
ゼ、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物
f)前記多発性硬化症関連抗原が、以下を含む群から選択される、e)の方法:ミエリン塩
基性タンパク質ペプチド、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質及びプロテオリピ
ドタンパク質、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物
g)前記抗原が、配列番号:1〜7並びにそれらの断片、バリアント及び混合物からなる群
から選択される、f)の方法
h) a)からc)の細胞、又は、d)からg)の方法に従って調製される細胞を含む、医薬組成
物
i)多発性硬化症の治療における、a)からc)の細胞集団、d)〜g)の方法に従って調製され
る細胞、又はh)の医薬組成物の使用
j)多発性硬化症の治療用組成物の製造における、a)〜c)の細胞集団、d)〜g)の方法に従
って調製される細胞、又はh)の医薬組成物の使用。
XP3、CTLA4、CD104及びGITR)のうちの少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、及び、好ましくは
それらの全ての、有意な発現レベルを有することを特徴とする。
Claims (15)
- 本質的に、CD62-L、FOXP3及びCTLA4の1以上を発現する、多発性硬化症関連抗原に特異
的な免疫調節性細胞から成る、単離された細胞集団。 - 前記細胞が、CD62-L、FOXP3及びCTLA4の各々を発現する、請求項1記載の細胞集団。
- 前記細胞がCD127を発現しない、請求項1又は2記載の細胞集団。
- 前記細胞が、調節性T細胞である、請求項1〜3のいずれか1項記載の細胞集団。
- 前記細胞が、エクスビボで生成され、かつ該エクスビボ生成の間に、1以上の抗原に指
向化又は曝露される、請求項1〜4のいずれか1項記載の細胞集団。 - 単離された調節性T細胞又はその細胞集団を、1以上の多発性硬化症関連抗原の存在下に
おいて、間葉系幹細胞(MSC)集団と接触させることを含む、抗原特異的免疫調節性細胞の
、調製、増殖及び/又は生成のための方法。 - i)単離された細胞集団を用意すること、
ii)CD62-L、FOXP3及びCTLA4からなる群から選択される1以上のマーカーの発現を測定す
ること、及び
iii)該マーカーのうちの少なくとも1つ、2つ又は3つについて陽性である細胞を選択す
ること、
を含む、細胞集団の選択方法。 - 以下の工程を含む、多発性硬化症を有する対象の治療方法:
i)PBL集団を用意する工程;
ii)該PBLを、1以上の多発性硬化症関連抗原の存在下において、MSC及び/又は線維芽細
胞を含む細胞集団と接触させる工程;
iii)該免疫調節性細胞集団を単離する工程;及び
iv)該免疫調節性細胞集団を該対象に投与する工程。 - 前記MSC集団が脂肪組織に由来する、請求項6又は8記載の方法。
- 前記多発性硬化症関連抗原が、以下からなる群から選択される、請求項1〜5のいずれか
1項記載の細胞集団、又は、請求項6、8若しくは9のいずれか1項記載の方法:ミエリン塩
基性タンパク質、ミエリン関連糖タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質
、プロテオリピドタンパク質、オリゴデンドロサイトミエリンオリゴプロテイン、ミエリ
ン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質
、ヒートショックタンパク質、オリゴデンドロサイト特異的タンパク質、NOGO A、糖タン
パク質Po、末梢ミエリンタンパク質22、及び2'3'-環状ヌクレオチド3'-ホスホジエステラ
ーゼ、並びに、それらの断片、バリアント及び混合物。 - 前記多発性硬化症関連抗原が、ミエリン塩基性タンパク質ペプチド、ミエリンオリゴデ
ンドロサイト糖タンパク質及びプロテオリピドタンパク質、並びに、それらの断片、バリ
アント及び混合物を含む群から選択される、請求項10記載の方法。 - 請求項1〜5のいずれか1項記載の細胞、又は、請求項6、9、10若しくは11のいずれか1項
記載の方法に従って調製される細胞を含む、医薬組成物。 - 多発性硬化症の治療において使用するための、請求項1〜5のいずれか1項記載の細胞集
団、請求項6、9、10若しくは11のいずれか1項記載の方法に従って調製される細胞、又は
請求項12記載の医薬組成物。 - 多発性硬化症の治療用医薬の製造における、請求項1〜5のいずれか1項記載の細胞集団
、請求項6、9、10若しくは11のいずれか1項記載の方法に従って調製される細胞、又は請
求項12記載の医薬組成物の使用。 - 多発性硬化症の治療方法であって、それを必要とする対象に、請求項1〜5のいずれか1
項記載の細胞集団、請求項6、9、10若しくは11のいずれか1項記載の方法に従って調製さ
れる細胞、又は請求項12記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP11166808.3 | 2011-05-19 | ||
EP11166808 | 2011-05-19 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014510832A Division JP2014515258A (ja) | 2011-05-19 | 2012-05-18 | 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018134086A true JP2018134086A (ja) | 2018-08-30 |
JP6592551B2 JP6592551B2 (ja) | 2019-10-16 |
Family
ID=46149436
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014510832A Pending JP2014515258A (ja) | 2011-05-19 | 2012-05-18 | 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 |
JP2018072015A Active JP6592551B2 (ja) | 2011-05-19 | 2018-04-04 | 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014510832A Pending JP2014515258A (ja) | 2011-05-19 | 2012-05-18 | 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20140348808A1 (ja) |
EP (1) | EP2710122B1 (ja) |
JP (2) | JP2014515258A (ja) |
KR (1) | KR20140071277A (ja) |
ES (1) | ES2487465T1 (ja) |
WO (1) | WO2012156522A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9290736B2 (en) * | 2009-11-04 | 2016-03-22 | Case Western Reserve University | Compositions and methods of treating T cell mediated disorder |
FR2976580B1 (fr) * | 2011-06-14 | 2013-05-31 | Coatex Sas | Epaississants non ioniques associatifs contenant des alkyls cyclohexylols, formulations les contenant et leurs utilisations. |
US11384336B2 (en) | 2016-12-07 | 2022-07-12 | East Carolina University | Compositions and methods for in vitro cultivation and/or expansion of regulatory T cells |
US20210023137A1 (en) * | 2018-03-27 | 2021-01-28 | Smith Therapeutics Inc. | Car-treg-based therapies for treating neurodegenerative diseases |
CN109913415B (zh) * | 2019-03-26 | 2020-05-22 | 广东先康达生物科技有限公司 | Treg细胞的培养液及其培养方法与应用 |
KR20240052776A (ko) * | 2021-09-03 | 2024-04-23 | 상가모 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | Mog-결합 단백질 및 이의 용도 |
WO2024046355A1 (en) * | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Medical And Pharmaceutical Industry Technology And Development Center | Use of composition including mesenchymal stem cells for alleviating myelofibrosis |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011048222A1 (en) * | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Cellerix S.A. | Cell populations having immunoregulatory activity, methods for the preparation and uses thereof |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030147865A1 (en) * | 2002-02-07 | 2003-08-07 | Benoit Salomon | Cell therapy using immunoregulatory T-cells |
CA2552891A1 (en) * | 2004-01-08 | 2005-08-04 | Regents Of The University Of California | Regulatory t cells suppress autoimmunity |
US7947464B2 (en) * | 2005-08-02 | 2011-05-24 | Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology | Method for identifying regulatory T cells |
LT1926813T (lt) | 2005-09-23 | 2016-11-10 | Tigenix, S.A.U. | Ląstelių populiacijos, pasižyminčios imunoreguliaciniu aktyvumu, izoliavimo būdas ir panaudojimas |
EP2050814A1 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-22 | Txcell | Compositions for treating multiple sclerosis |
WO2010135255A1 (en) * | 2009-05-18 | 2010-11-25 | Therakos, Inc. | Method for ex-vivo expansion of regulatory t cells with enhanced suppressive function for clinical application in immune mediated diseases |
-
2012
- 2012-05-18 JP JP2014510832A patent/JP2014515258A/ja active Pending
- 2012-05-18 ES ES12723442.5T patent/ES2487465T1/es active Pending
- 2012-05-18 KR KR1020137030844A patent/KR20140071277A/ko active Search and Examination
- 2012-05-18 WO PCT/EP2012/059313 patent/WO2012156522A1/en active Application Filing
- 2012-05-18 US US14/118,741 patent/US20140348808A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-18 EP EP12723442.5A patent/EP2710122B1/en active Active
-
2018
- 2018-04-04 JP JP2018072015A patent/JP6592551B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011048222A1 (en) * | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Cellerix S.A. | Cell populations having immunoregulatory activity, methods for the preparation and uses thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20140071277A (ko) | 2014-06-11 |
EP2710122B1 (en) | 2021-03-31 |
EP2710122A1 (en) | 2014-03-26 |
JP6592551B2 (ja) | 2019-10-16 |
JP2014515258A (ja) | 2014-06-30 |
ES2487465T1 (es) | 2014-08-20 |
US20140348808A1 (en) | 2014-11-27 |
WO2012156522A1 (en) | 2012-11-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6592551B2 (ja) | 免疫調節活性を有する細胞集団、その調製方法、及び、その使用 | |
Badillo et al. | Murine bone marrow stromal progenitor cells elicit an in vivo cellular and humoral alloimmune response | |
EP2561066B1 (en) | Adherent stromal cells derived from plancentas of multiple donors and uses thereof | |
US8221741B2 (en) | Methods for modulating inflammatory and/or immune responses | |
IL228670A (en) | Their cell populations are immunoregulatory activity, a method of isolation and uses | |
JP5431146B2 (ja) | 免疫学的寛容および調節性前駆細胞 | |
WO2020146874A1 (en) | Fibroblast regenerative cells | |
WO2006107101A1 (ja) | 制御性t細胞の製造方法 | |
JP2013507945A (ja) | 免疫調節活性を有する細胞集団、その製造方法及び使用 | |
US20140154227A1 (en) | Cell populations having immunoregulatory activity, method for isolation and uses | |
JP5745419B2 (ja) | 細胞、核酸構築物、前記構築物を含む細胞、及び疾患の治療において前記細胞を利用する方法 | |
JP5089389B2 (ja) | 移植における免疫応答の予防および治療のための肝臓間質細胞 | |
US20150306149A1 (en) | Methods for Modulating Inflammatory Responses | |
JP2008526891A (ja) | 移植された神経幹細胞の免疫防御のための骨髄間質細胞 | |
MX2008003881A (en) | Cell populations having immunoregulatory activity, method for isolation and uses |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180501 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180501 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190402 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190627 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190903 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190920 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6592551 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02 |