JP2018064587A - 核酸増幅のための核酸 - Google Patents
核酸増幅のための核酸 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018064587A JP2018064587A JP2017250216A JP2017250216A JP2018064587A JP 2018064587 A JP2018064587 A JP 2018064587A JP 2017250216 A JP2017250216 A JP 2017250216A JP 2017250216 A JP2017250216 A JP 2017250216A JP 2018064587 A JP2018064587 A JP 2018064587A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- sequence
- nucleic acid
- oligonucleotide
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 161
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 132
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 132
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 120
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 118
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 168
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 59
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 45
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 45
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 45
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 28
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 25
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 21
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 19
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 14
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 claims description 5
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 claims description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 4
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 140
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 60
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 31
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 29
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 25
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 22
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 16
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 12
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 9
- -1 phosphotriester Chemical compound 0.000 description 8
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 6
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 6
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 4
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 4
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000005670 electromagnetic radiation Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 3
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 3
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 6-carboxy-x-rhodamine Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 WQZIDRAQTRIQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N Naphthofluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C(C=CC=1C3=CC=C(O)C=1)=C3OC1=C2C=CC2=CC(O)=CC=C21 IXQIUDNVFVTQLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- SYJGKVOENHZYMQ-UHFFFAOYSA-N Penoxsulam Chemical compound N1=C2C(OC)=CN=C(OC)N2N=C1NS(=O)(=O)C1=C(OCC(F)F)C=CC=C1C(F)(F)F SYJGKVOENHZYMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000271897 Viperidae Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[3-(ethylamino)-6-ethylimino-2,7-dimethylxanthen-9-yl]benzoate;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 2
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- JNGRENQDBKMCCR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-amino-6-iminoxanthen-9-yl)benzoic acid;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[NH2+])C=C2OC2=CC(N)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O JNGRENQDBKMCCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMBSZJBWYCGCJP-UHFFFAOYSA-N 3-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(N(CC)CC)=CC2=C1 SMBSZJBWYCGCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHNLXNKFRGMOPW-UHFFFAOYSA-N 3-amino-2-sulfanylpropanoic acid Chemical compound NCC(S)C(O)=O FHNLXNKFRGMOPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-1h-pyrrole Chemical compound [O-][N+](=O)C=1C=CNC=1 LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LAVZKLJDKGRZJG-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-1h-indole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=C1C=CN2 LAVZKLJDKGRZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-1h-indole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C2NC=CC2=C1 OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWOLRKMFAJUZGM-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyrhodamine 6G Chemical compound [Cl-].C=12C=C(C)C(NCC)=CC2=[O+]C=2C=C(NCC)C(C)=CC=2C=1C1=CC(C(O)=O)=CC=C1C(=O)OCC VWOLRKMFAJUZGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSWCIARYGITEOY-UHFFFAOYSA-N 6-nitro-1h-indole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C2C=CNC2=C1 PSWCIARYGITEOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182476 C-glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000000700 C-glycosides Chemical class 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 241000573218 Drosophila biarmipes Species 0.000 description 1
- 241001427604 Drosophila elegans Species 0.000 description 1
- 241000255604 Drosophila erecta Species 0.000 description 1
- 241001157800 Drosophila eugracilis Species 0.000 description 1
- 241001427602 Drosophila ficusphila Species 0.000 description 1
- 241001414876 Drosophila kikkawai Species 0.000 description 1
- 241000255312 Drosophila persimilis Species 0.000 description 1
- 241001272631 Drosophila rhopaloa Species 0.000 description 1
- 241000255317 Drosophila sechellia Species 0.000 description 1
- 241000255345 Drosophila simulans Species 0.000 description 1
- 241001157809 Drosophila takahashii Species 0.000 description 1
- 241000255293 Drosophila willistoni Species 0.000 description 1
- 241000255334 Drosophila yakuba Species 0.000 description 1
- QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O Ethidium cation Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 QTANTQQOYSUMLC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101800000684 Ribonuclease H Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013584 assay control Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N benzoic acid ethyl ester Natural products CCOC(=O)C1=CC=CC=C1 MTZQAGJQAFMTAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020302 erbB-2 Genes Proteins 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical class 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-L methylphosphonate(2-) Chemical compound CP([O-])([O-])=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 1
- 238000001921 nucleic acid quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001018 xanthene dye Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
Abstract
Description
本願は、その全体の内容が参照により本明細書に組み込まれている、2012年3月29日に出願された米国仮特許出願第61/617562号の優先権を主張するものである。
本願は、電子形式での配列表とともに出願されている。配列表は、サイズが15,257バイトである、2013年3月13日に作成された、2013年3月13日に最後に保存されたPCT_SEQLIST_GENOM_115WO.txtという表題のファイルとして提供されている。この情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
本明細書に開示のいくつかの実施形態は、NATアッセイ用の対照核酸配列を提供する。いくつかの実施形態では、対照配列は、検査試料と並行してプロセシングされる外部対照または標準物質として使用することができる。いくつかの実施形態では、対照配列は、内部対照として使用することができ、プロセシングの前に検査試料と組み合わされる。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド、例えば、プライマーおよび/またはプローブが提供される。本明細書において、用語「プライマー」および「プローブ」は、それだけに限らないが、オリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、本明細書に開示のオリゴヌクレオチドプライマーおよび/またはプローブは、長さが8から45ヌクレオチドの間であり得る。例えば、プライマーおよび/またはプローブは、長さが少なくとも8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、またはそれ以上のヌクレオチドであり得る。プライマーおよび/またはプローブは、例えば、固体支持体に結合したもの、液体、および凍結乾燥したものを含めた、任意の適当な形態で提供され得る。本明細書に開示のプライマー配列およびプローブ配列は、5’もしくは3’末端、または両方で追加のヌクレオチドを含有するように修飾することができる。しかし、増幅プライマー(必ずしもプローブではない)の3’末端への追加の塩基は、一般に、鋳型配列と相補的であることを、当業者は理解するであろう。本明細書に開示のプライマー配列およびプローブ配列は、5’末端または3’末端でヌクレオチドを除去するように修飾することもできる。増幅のために機能するために、プライマーまたはプローブは、本明細書に開示される最小限の長さおよびアニーリング温度のものとなることを、当業者は理解するであろう。
いくつかの実施形態では、増幅プライマーのセットが提供される。増幅プライマーのセットは、1つまたは複数の、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、またはそれ以上のプライマー対を含み得る。本明細書において、用語「プライマー対」は、標的核酸、例えば、定量的PCR内部対照配列の反対の鎖に個々にハイブリダイズする2つのプライマーを指すことができ、ここで、各プライマーは、例えば、PCRにおいて、その3’末端で伸長されて標的増幅産物を形成することができる。プライマー対は、順方向プライマーおよび逆方向プライマーを含み得る。
いくつかの実施形態では、配列特異的プローブが提供される。プローブには、それだけに限らないが、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の配列特異的プローブは、TCSなどの標的配列に特異的にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、配列特異的プローブは、本明細書に開示の順方向プライマーおよび逆方向プライマーの結合部位が隣接したヌクレオチド配列に特異的にハイブリダイズし、それと完全または実質的に相補的である。いくつかの実施形態では、配列特異的プローブは、配列番号3、4、5、または6の少なくとも5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、または25のヌクレオチドを含み、その結果、配列特異的プローブは、本明細書に開示の増幅プライマーの結合部位と重複する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される核酸配列(例えば、TCS)は、ベクター、例えば、プラスミドまたはウイルス内に存在する。ベクターは、当技術分野で周知であり、当業者は、多くのベクターを、核酸配列をもたらすのに使用することができることを理解するであろう。さらに、ベクターの多くのバリアントが存在し、追加のベクターを当業者によって生成することができる。ベクターを、部位特異的突然変異誘発によって、ランダム突然変異誘発によって、または1つまたは複数のクローニングステップによって修飾して、ベクターの少なくとも1つの核酸配列、例えば、複数のクローニング部位、抗生物質耐性遺伝子、起始部もしくは複製、またはベクターを担持する細胞の可視化を促進するマーカー、例えば、ベータガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、もしくは緑色蛍光タンパク質などをコードする遺伝子を付加、除去、および/または置換することができる。
列挙した核酸配列のバリアントは、当技術分野で公知の技法を使用して、例えば、ランダム突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発、または所望のバリアントの化学合成によって生成することができることを、当業者は理解するであろう。いくつかの実施形態では、列挙した配列のバリアントが提供され、ここで、各バリアントは、少なくとも1つのヌクレオチドが参照配列と異なる配列を有する。いくつかの実施形態では、バリアント核酸は、参照配列と少なくとも約70%、例えば、列挙される値の任意の2つの間の範囲を含めた、少なくとも約70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.3%、99.5%、99.7%、99.8%、99.9%、または99.99%のnt−nt同一性を有する実質的に相補的な配列を含む。
例えば、NATアッセイパフォーマンスの効率を監視するために、本明細書に開示の組成物を使用する方法が本明細書に提供されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示の組成物は、検査試料の調製、およびプロセシングの効率を監視するのに使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、検査試料と組合せ、核酸抽出および/またはプロセシング(例えば、増幅および/または検出)を監視するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される組成物は、検査試料と組み合わされないが、核酸抽出および/またはプロセシング(例えば、増幅および/または検出)を監視するために並行してプロセシングされる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示のプライマーおよび核酸鋳型は、様々な分析物の増幅の対照としてさらに機能を果たしながら、抽出効率、または様々な自動もしくはマニュアルプロセスの試料プロセシングシステムの他のパフォーマンス測定基準を判定するためのロバストで再現可能な方法をもたらす。例えば、本明細書に開示の組成物は、それだけに限らないが、NATアッセイにおいて試料を自動的に調製およびプロセシングする(例えば、核酸抽出および調製、ならびに増幅および検出を自動的に実施する)デバイスを含めた、NATアッセイを自動的に実行するデバイスとともに有利には使用することができる。
温度サイクリング条件は、使用されるサーマルサイクラー、および増幅のパフォーマンスを改変し得る他の変数に応じて、異なるステップのそれぞれについて時間および温度が多様となり得る。いくつかの実施形態では、2−ステッププロトコールが実施され、その中でこのプロトコールは、プライマーおよびプローブのアニーリングならびに伸長ステップの両方に最適な一般的な温度でアニーリングステップとエロンゲーションステップを組み合わせる。いくつかの実施形態では、3−ステッププロトコールが実施され、その中で、変性ステップ、アニーリングステップ、およびエロンゲーションステップが実施される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の組成物は、核酸の等温増幅を含む方法において使用することができる。等温増幅条件は、変数、例えば、使用される方法、酵素、鋳型、および1種または複数のプライマーなどに応じて時間および温度が多様となり得る。等温条件下で実施され得る増幅法の例としては、それだけに限らないが、LAMP、SDAなどのいくつかのバージョンがある。
いくつかの実施形態では、in situハイブリダイゼーションの方法が提供される。in situハイブリダイゼーションは、本明細書に記載の試料、またはその切片に対して実施することができる。いくつかの実施形態では、in situハイブリダイゼーションは、例えば、細胞内、細胞の集団の中、組織もしくは臓器内、および/または生物全体内の核酸標的配列の局在化を特定するのに使用することができる。いくつかの実施形態では、in situハイブリダイゼーションは、試料中の標的核酸のコピー数を定量化するのに使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプローブを、in situハイブリダイゼーションで使用することができる。いくつかの実施形態では、プローブは、配列番号2、またはそのバリアントおよび/もしくは部分配列から実質的になるオリゴヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、プローブは、配列番号3〜6のうちの1つ、またはそのバリアントおよび/もしくは部分配列を含み、またはそれから実質的になるオリゴヌクレオチドを含み得る。
いくつかの実施形態では、マスターミックスが提供される。マスターミックスは、NATアッセイにおける試薬の相対濃度に比例する相対濃度で提供されるアッセイ用の少なくとも2種の試薬を含み得る。したがって、単一量のマスターミックスを反応に添加して、2種以上の試薬の適切な相対濃度をもたらすことができる。いくつかの実施形態では、マスターミックスは、ポリメラーゼ、緩衝液、塩、例えば、マグネシウム、ヌクレオチド三リン酸、プライマー対、および水のうちの少なくとも2つを含み得る。いくつかの実施形態では、マスターミックスは、反応で使用されることになるより高い濃度で提供される場合がある。いくつかの実施形態では、マスターミックスは、凍結乾燥形態で提供され、反応で使用されることになるより高い濃度で再構成される。いくつかの実施形態では、マスターミックスは、反応濃度の少なくとも約2倍、例えば、2倍、2.5倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、40倍、50倍、100倍、200倍、250倍、または500倍の濃度の試薬を含む。
いくつかの実施形態では、キットが提供される。いくつかの実施形態では、キットは、プライマー対、1つのプローブ、鋳型ポリヌクレオチド、例えば、定量的NAT内部対照鋳型配列、ポリメラーゼ、緩衝液、1種または複数のヌクレオチド(例えば、dNTPミックス)、指示書、または包装のうちの1つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、キットの少なくとも1種の試薬は、マスターミックス中で提供される。
対照/標準配列としての本明細書に開示の組成物の感度、ロバスト性、および再現性を評価するために、一連のポリメラーゼ連鎖反応増幅反応を実施した。
細胞試料を収集する。RNAを細胞試料から単離する。単離した試料RNAを逆転写し、こうして試料cDNAを生成する。ポリメラーゼ、緩衝液、マグネシウム、およびヌクレオチド三リン酸を含む凍結乾燥したマスターミックスを、希釈剤を添加することによって2倍の濃度に再構成する。等分のマスターミックス、ならびに2倍濃度の試料cDNA(または陰性対照もしくは陽性対照);ウイルスRNAマーカーを増幅するためのプライマー、増幅されたウイルスマーカーの量を測定するためのSCORPION(商標)プローブ、および内部対照核酸を含む液体を、薄壁のプラスチックアッセイチューブ内で組み合わせる。
Claims (25)
- 配列番号1の配列またはその逆相補鎖と少なくとも97%の同一性を有する配列からなる核酸にハイブリダイズする単離核酸であって、50mMのKCl、10mMのTris−HCl緩衝液中で、少なくとも約50℃の温度でハイブリダイズする、単離核酸。
- 前記核酸が、少なくとも約55℃の温度でハイブリダイズする、請求項1に記載の単離核酸。
- 前記核酸が、配列番号1〜6のうちの少なくとも1つまたはその逆相補鎖と少なくとも約85%の相補性を有する配列を含む、請求項1に記載の単離核酸。
- 前記核酸が、配列番号1〜6のうちの少なくとも1つまたはその逆相補鎖と少なくとも約95%の相補性を有する配列を含む、請求項1に記載の単離核酸。
- 前記核酸が、配列番号1〜6のうちの少なくとも1つの配列またはその逆相補鎖を含む、請求項1に記載の単離核酸。
- 配列番号1またはその逆相補鎖と少なくとも約97%の同一性を有する配列を含む核酸増幅用単離核酸鋳型と、
配列番号3または配列番号5のうちの少なくとも1つと少なくとも約85%の同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む少なくとも第1のプライマーと、
配列番号4または配列番号6のうちの少なくとも1つと少なくとも約85%の同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む少なくとも第2のプライマーとを含むキット。 - 前記単離核酸鋳型が、配列番号1の配列またはその逆相補鎖を含む、請求項6に記載のキット。
- 前記単離核酸鋳型が、配列番号8の配列またはその逆相補鎖を含む、請求項6に記載のキット。
- 前記第1のプライマーが、配列番号3または配列番号5のうちの少なくとも1つと少なくとも約95%の同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項6に記載のキット。
- 前記第2のプライマーが、配列番号4または配列番号6のうちの少なくとも1つと少なくとも約95%の同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項6に記載のキット。
- 前記第1のプライマーが、配列番号3または配列番号5のうちの少なくとも1つを含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項6に記載のキット。
- 前記第2のプライマーが、配列番号4または配列番号6のうちの少なくとも1つを含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項6に記載のキット。
- 配列番号2またはその逆相補鎖の少なくとも約95%の同一性を有する配列を含むオリゴヌクレオチドプローブをさらに含む、請求項6に記載のキット。
- 前記第1のプライマーが配列番号3を含むオリゴヌクレオチドを含み、前記第2のプライマーが配列番号4を含むオリゴヌクレオチドを含む、または前記第1のプライマーが配列番号5を含むオリゴヌクレオチドを含み、前記第2のプライマーが配列番号6を含むオリゴヌクレオチドを含む、請求項6に記載のキット。
- 前記単離核酸鋳型が、配列番号1の配列またはその逆相補鎖を含み、
前記第1のプライマーが、配列番号3または配列番号5の配列を含み、前記第2のプライマーが、配列番号4または配列番号6の配列を含み、
配列番号2の配列を含むオリゴヌクレオチドを含む少なくとも1種のプローブをさらに含む、請求項6に記載のキット。 - 試料中の核酸の量を定量化するための方法であって、
配列番号1の配列と少なくとも約97%同一の配列を含む、ある量のポリヌクレオチドを提供するステップと、
該ポリヌクレオチドを順方向プライマーと接触させるステップであって、該順方向プライマーは、配列番号3または5のうちの1つと少なくとも約85%同一のオリゴヌクレオチドを含み、逆方向プライマーは、配列番号4または6のうちの1つと少なくとも約85%同一のオリゴヌクレオチドを含み、該接触させるステップは、標準的なPCR条件下で行われる、ステップと、
該順方向プライマーおよび逆方向プライマーを伸長し、それによって少なくとも1種の標的アンプリコンを生成するステップと、
該少なくとも1種の標的アンプリコンの量に比例する信号を検出するステップと、を含む、方法。 - 前記順方向プライマーが、配列番号3または5のうちの少なくとも1つと少なくとも約95%同一である、請求項16に記載の方法。
- 前記逆方向プライマーが、配列番号4または6のうちの少なくとも1つと少なくとも約95%同一である、請求項16に記載の方法。
- 前記順方向プライマーが、配列番号3の配列を有するオリゴヌクレオチドを含み、前記逆方向プライマーが、配列番号4の配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項16に記載の方法。
- 前記順方向プライマーが、配列番号5の配列を有するオリゴヌクレオチドを含み、前記逆方向プライマーが、配列番号6の配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、請求項16に記載の方法。
- 提供されるアンプリコンの量に比例する信号を検出する前記ステップが、前記アンプリコンを、標準的なPCR条件下で、少なくとも50℃の温度で前記アンプリコンにアニールする一本鎖オリゴヌクレオチドプローブと接触させることを含み、前記プローブが、実質的に相補的な核酸に結合しているとき検出可能な信号を放出するが、一本鎖であるとき該検出可能な信号を放出しないように構成されている、請求項16に記載の方法。
- 前記一本鎖オリゴヌクレオチドプローブが、配列番号2またはその逆相補鎖と少なくとも約95%同一の配列を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記一本鎖オリゴヌクレオチドプローブが、少なくとも1種のフルオロフォア、および少なくとも1種のクエンチャーをさらに含む、請求項22または22に記載の方法。
- 生体試料から核酸を抽出する前に、前記量のポリヌクレオチドを試料と接触させるステップをさらに含む、請求項16に記載の方法。
- 前記順方向プライマーおよび逆方向プライマーを伸長するステップが、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、鎖置換増幅(SDA)、ループ媒介性等温増幅(LAMP)、リガーゼ連鎖反応(LCR)、免疫増幅、転写媒介増幅(TMA)、核酸配列ベース増幅(NASBA)、自己持続配列複製(3SR)、およびローリングサークル増幅のうちの少なくとも1つを含む、請求項16に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261617562P | 2012-03-29 | 2012-03-29 | |
US61/617,562 | 2012-03-29 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015503279A Division JP6270814B2 (ja) | 2012-03-29 | 2013-03-13 | 核酸増幅のための核酸 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018064587A true JP2018064587A (ja) | 2018-04-26 |
JP6707072B2 JP6707072B2 (ja) | 2020-06-10 |
Family
ID=49261031
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015503279A Active JP6270814B2 (ja) | 2012-03-29 | 2013-03-13 | 核酸増幅のための核酸 |
JP2017250216A Active JP6707072B2 (ja) | 2012-03-29 | 2017-12-26 | 核酸増幅のための核酸 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015503279A Active JP6270814B2 (ja) | 2012-03-29 | 2013-03-13 | 核酸増幅のための核酸 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9822402B2 (ja) |
EP (2) | EP2831260B1 (ja) |
JP (2) | JP6270814B2 (ja) |
CN (1) | CN104540958B (ja) |
CA (1) | CA2869033C (ja) |
ES (2) | ES2948896T3 (ja) |
WO (1) | WO2013148212A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2948896T3 (es) * | 2012-03-29 | 2023-09-21 | Becton Dickinson Co | Acidos nucleicos para la amplificación de ácidos nucleicos |
KR20200145871A (ko) | 2019-06-11 | 2020-12-31 | 삼성전자주식회사 | 집적회로 소자 및 그 제조 방법 |
IT201900008781A1 (it) | 2019-06-12 | 2020-12-12 | AB Analitica S R L | Metodo di amplificazione di acidi nucleici |
JP2021048785A (ja) * | 2019-09-24 | 2021-04-01 | キヤノンメディカルシステムズ株式会社 | 内部コントロール核酸、内部コントロールキット及び核酸検出方法 |
WO2024054823A1 (en) * | 2022-09-07 | 2024-03-14 | Becton, Dickinson And Company | Hairpin internal control for isothermal nucleic acid amplification |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007500517A (ja) * | 2003-05-16 | 2007-01-18 | アメリカ合衆国 | 核酸増幅系に用いる内部コントロール核酸分子 |
JP2011155855A (ja) * | 2010-01-29 | 2011-08-18 | Toyobo Co Ltd | 内部コントロール組成物 |
WO2013148212A1 (en) * | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Becton, Dickinson And Company | Nucleic acids for nucleic acid amplification |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4458066A (en) | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US5849478A (en) | 1986-08-14 | 1998-12-15 | Cashman; Daniel P. | Blocked-polymerase polynucleotide immunoassay method and kit |
US4988617A (en) | 1988-03-25 | 1991-01-29 | California Institute Of Technology | Method of detecting a nucleotide change in nucleic acids |
US5130238A (en) | 1988-06-24 | 1992-07-14 | Cangene Corporation | Enhanced nucleic acid amplification process |
CA2020958C (en) | 1989-07-11 | 2005-01-11 | Daniel L. Kacian | Nucleic acid sequence amplification methods |
US5427930A (en) | 1990-01-26 | 1995-06-27 | Abbott Laboratories | Amplification of target nucleic acids using gap filling ligase chain reaction |
US5455166A (en) | 1991-01-31 | 1995-10-03 | Becton, Dickinson And Company | Strand displacement amplification |
US5854033A (en) | 1995-11-21 | 1998-12-29 | Yale University | Rolling circle replication reporter systems |
US20100267012A1 (en) * | 1997-11-04 | 2010-10-21 | Bergeron Michel G | Highly conserved genes and their use to generate probes and primers for detection of microorganisms |
US20030049636A1 (en) | 1999-05-03 | 2003-03-13 | Bergeron Michel G. | Species-specific, genus-specific and universal DNA probes and amplification primers to rapidly detect and identify common bacterial and fungal pathogens and associated antibiotic resistance genes from clinical specimens for diagnosis in microbiology laboratories |
US6794133B1 (en) | 1997-12-11 | 2004-09-21 | The General Hospital Corporation | Broad range PCR amplification techniques |
EP2287338B1 (en) | 1998-11-09 | 2012-09-05 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Process for synthesizing nucleic acid |
AU773638B2 (en) * | 1999-01-29 | 2004-05-27 | Kurokawa, Kiyoshi | MEG-4 protein |
US20040005561A1 (en) * | 2000-03-01 | 2004-01-08 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies |
AU2001245945A1 (en) | 2000-03-23 | 2001-10-03 | Pe Corporation (Ny) | Detection kits, such as nucleic acid arrays, for detecting the expression of 10,000 or more drosophila genes and uses thereof |
US6783934B1 (en) | 2000-05-01 | 2004-08-31 | Cepheid, Inc. | Methods for quantitative analysis of nucleic acid amplification reaction |
US6977148B2 (en) | 2001-10-15 | 2005-12-20 | Qiagen Gmbh | Multiple displacement amplification |
US20050095603A1 (en) | 2003-11-05 | 2005-05-05 | Cepheid | Universal control for nucleic acid amplification |
US9096638B2 (en) * | 2007-09-06 | 2015-08-04 | Geneohm Sciences Canada, Inc. | Detection of toxigenic strains of Clostridium difficile |
-
2013
- 2013-03-13 ES ES18193712T patent/ES2948896T3/es active Active
- 2013-03-13 EP EP13769167.1A patent/EP2831260B1/en active Active
- 2013-03-13 JP JP2015503279A patent/JP6270814B2/ja active Active
- 2013-03-13 ES ES13769167T patent/ES2705849T3/es active Active
- 2013-03-13 US US14/388,704 patent/US9822402B2/en active Active
- 2013-03-13 EP EP18193712.9A patent/EP3486332B1/en active Active
- 2013-03-13 WO PCT/US2013/031032 patent/WO2013148212A1/en active Application Filing
- 2013-03-13 CN CN201380026175.3A patent/CN104540958B/zh active Active
- 2013-03-13 CA CA2869033A patent/CA2869033C/en active Active
-
2017
- 2017-10-11 US US15/730,434 patent/US10308984B2/en active Active
- 2017-12-26 JP JP2017250216A patent/JP6707072B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007500517A (ja) * | 2003-05-16 | 2007-01-18 | アメリカ合衆国 | 核酸増幅系に用いる内部コントロール核酸分子 |
JP2011155855A (ja) * | 2010-01-29 | 2011-08-18 | Toyobo Co Ltd | 内部コントロール組成物 |
WO2013148212A1 (en) * | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Becton, Dickinson And Company | Nucleic acids for nucleic acid amplification |
JP6270814B2 (ja) * | 2012-03-29 | 2018-01-31 | ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーBecton, Dickinson And Company | 核酸増幅のための核酸 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
HOSKINS R. A. ET AL., DATABASE GENBANK [ONLINE], ACCESSION NO.FI342570, JPN6016047402, 15 January 2009 (2009-01-15), ISSN: 0004257501 * |
HOSKINS R. A. ET AL., DATABASE GENBANK [ONLINE], ACCESSION NO.FI463486, JPN6016047404, 15 January 2009 (2009-01-15), ISSN: 0004257502 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6707072B2 (ja) | 2020-06-10 |
JP6270814B2 (ja) | 2018-01-31 |
EP3486332B1 (en) | 2023-04-26 |
EP2831260A4 (en) | 2016-03-30 |
US10308984B2 (en) | 2019-06-04 |
EP3486332A1 (en) | 2019-05-22 |
ES2705849T3 (es) | 2019-03-26 |
EP2831260A1 (en) | 2015-02-04 |
ES2948896T3 (es) | 2023-09-21 |
CA2869033A1 (en) | 2013-10-03 |
WO2013148212A8 (en) | 2014-09-12 |
US9822402B2 (en) | 2017-11-21 |
US20180112262A1 (en) | 2018-04-26 |
CA2869033C (en) | 2021-06-01 |
CN104540958A (zh) | 2015-04-22 |
CN104540958B (zh) | 2018-10-30 |
EP2831260B1 (en) | 2018-10-17 |
WO2013148212A1 (en) | 2013-10-03 |
JP2015512638A (ja) | 2015-04-30 |
US20150050651A1 (en) | 2015-02-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6707072B2 (ja) | 核酸増幅のための核酸 | |
WO2015095225A1 (en) | Quantification of mutant alleles and copy number variation using digital pcr with nonspecific dna-binding dyes | |
JP2017136086A (ja) | 標的核酸の検出方法及びキット | |
US20200172958A1 (en) | Multiplex probes | |
JP2020092721A (ja) | ターゲット核酸検出のための二重プローブアッセイ | |
CA2925070C (en) | Detecting single nucleotide polymorphism using overlapped primer and melting probe | |
US20210269853A1 (en) | Restriction mediated quantitative polymerase chain reactions | |
JP6615744B2 (ja) | ナイセリア・ゴノレアの検出 | |
Wadle et al. | Mediator probe PCR: detection of real-time PCR by label-free probes and a universal fluorogenic reporter | |
US10443095B2 (en) | Helper oligonucleotide for improved efficiency of amplification and detection/quantitation of nucleic acids | |
EP3189159A1 (en) | Rapid detection of infectious agents |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180115 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180115 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181109 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190212 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190409 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190827 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20191118 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200226 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200428 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200519 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6707072 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |