JP2017510600A - Ｈｓｐを含有しないアレルゲン製剤 - Google Patents

Abstract

アレルギー反応を誘発する抗原構造物の断片１０〜２００μｇ／ｍｌ、２〜６％（ｗ／ｖ）のマンニトール、０．５〜２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、水を含み、熱ショックタンパク質を本質的に含まない、医薬製剤。

Description

本発明は医薬製剤、特にアレルギー、自己免疫疾患又は移植片拒絶を治療するために有用な医薬製剤、に関する。

米国特許第６，３１２，７１１号は、ストレスタンパク質及び抗原構造物のエピトープの複合体の投与を含む、移植片拒絶又はアレルギー性自己免疫反応に関連する病態を治療することを意図した薬学的又は食品組成物を開示する。

国際公開第２０１３／０１１０９５号は、０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０、０．５〜１００μｇの抗原構造物の断片を含む皮下注射のための医薬製剤を開示する。

寛容誘導のための医薬製剤中に熱ショックタンパク質を含ませることに関連した多くの研究がなされてきたが、臨床結果は常に満足がいくものというわけではない。これらの製剤を改良することが、依然として求められている。

驚くべきことに、
−アレルギー反応を誘発する抗原構造物の断片１０〜２００μｇ／ｍｌ、
−２〜６％（ｗ／ｖ）のマンニトール、
−０．５〜２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、
−水
を含み、熱ショックタンパク質を本質的に含まない医薬製剤が、高効率で安全な治療のために用いられ得る、ということがここに判明した。

マンニトール及びトレハロースを含むが熱ショックタンパク質が添加されていない溶液中に溶解した抗原構造物の断片は、投与においては安全でありながら、関連抗原に対する寛容を誘発するための治療にも適している。

マンニトール及びトレハロースは、従来技術において医薬製剤の処方のために用いられてきたが、これは一般的には凍結乾燥品に関連して用いられてきたものである。
本発明の医薬製剤は、製造中に凍結乾燥されないが、にもかかわらず貯蔵時に高度の安定性をもたらす。
医薬製剤は、約２〜６％（ｗ／ｖ）のマンニトールを含む。トレハロースの適量は０．５〜２％（ｗ／ｖ）の量であり、ここで体積は２５℃で測定される。
前記製剤は緩衝剤も含み、リン酸塩緩衝剤が好ましい。

本発明の一実施形態では、医薬製剤は、皮下注射のための形態である。
本発明の製剤は、熱ショックタンパク質を本質的に含まない。熱ショックタンパク質を本質的に含まないとは、１μｇ／ｍｌ未満、好ましくは１．０ｎｇ／ｍｌ未満、さらに好ましくは０．５ｎｇ／ｍｌ未満の濃度を意味する。

抗原構造物の断片は、好ましくは、抗原構造物の酵素的加水分解により調製される。抗原構造物の断片を調製するための好ましい形態。加水分解アレルゲン断片、好ましくは抗原の非タンパク質成分を含まない加水分解アレルゲン断片、を得るための好ましい方法は、国際公開第２００８／０００７８３号、国際公開第２００９／０８３５８９号及び国際公開第２０１２／１７２０３７号に記載された方法であり、これらの方法は、参照により取り込まれる。

これらの方法の主なステップは、
・アレルゲンの供給源からのアレルゲンタンパク質の抽出、
・第一精製ステップと、その後の変性、好ましくは還元剤及びカオトロピック剤による変性、
・さらなる精製ステップ
・タンパク質の加水分解
である。
さらなる変性ステップを、加水分解前に用いてもよい。

抗原構造物は、アレルギー反応を誘発する抗原構造物から選択される。このような抗原構造物は、アレルゲンとも称す。好ましいアレルゲンは、天然タンパク質アレルゲンである。適切な例は、ミルクアレルゲン、毒液アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、草（ｇｒａｓｓ）アレルゲン、草（ｇｒａｓｓ）花粉アレルゲン、樹木（ｔｒｅｅ）アレルゲン、灌木（ｓｈｒｕｂ）アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、真菌アレルゲン、果実アレルゲン、ベリーアレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルギー、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、動物アレルゲン、動物鱗屑アレルゲン、パラゴムノキのアレルゲンから選択される。非常に好ましいアレルゲンは、草（ｇｒａｓｓ）花粉アレルゲン、ピーナッツアレルゲン、ハウスダストダニアレルゲン、ブタクサアレルゲン及びスギアレルゲンである。

本発明の一実施形態では、医薬製剤は、患者に別々の時に少なくとも２回の注射をすることを含む治療に用いられ、好ましくは、製剤は、製剤の量を漸次増やしつつ２〜２０回の注射を行うことを含む治療に用いるためのものである。
本発明のさらなる実施形態は、本発明の医薬製剤を０．２〜１．５０ｍｌ又は０．５〜１．５０ｍｌ含むバイアル又は投与具（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｄｅｖｉｃｅ）である。

本発明のさらなる実施形態は、２〜２０個又は２〜３０個のバイアル又は投与具を含むキットであり、前記投与具は、製剤を漸増量で注射することを含む治療に用いるために必要な量の本発明の医薬製剤を含む。
針表面に存在する有効成分が真皮中に拡散することが避けられるため、投与具はより好都合な形態である。
典型的実施形態では、投与具は注射器である。例えば投与具は、製剤の１００μｇ／ｍｌの溶液を含んでもよく、第一注射器が５０μｌを、他の器具が１００、２００、５００μｌ及び１０００μｌを含んでいてもよい。その利点は、製剤がすぐに使えることである。予め充填された投与具は、投与中の誤り率を低減する。

驚くべきことに、本発明の製剤は、少なくとも６か月間、好ましくは１年超の間、冷蔵庫温度で安定である。室温で保存された場合でも、安定性によりこれに近い期間の貯蔵が可能である。これらの特性により、使用前に凍結乾燥製剤を溶解することに関連した面倒な作業が避けられる。
マンニトール及びトレハロースにより製剤の高安定性が得られ、これにより製剤の安全性及び効能が増大する、と考えられる。

本発明のさらなる実施形態は、本発明の医薬製剤を用いて、抗原構造物の断片を累積用量４０〜１０００μｇで皮下注射により患者に投与することを含む、アレルギーの治療方法である。
注射機会（ｓｅｓｓｉｏｎ）間の好ましい間隔は、２〜１０日である。
好ましい一実施形態では、患者は、注射機会中に、例えば来院中に、患者の身体の異なる位置に２回の皮下注射を受ける。注射は、好ましくは３０〜６０分間隔で行われる。注射のための好ましい位置は、患者の左腕及び右腕である。

製剤の安全性及び効果を分析した。試験は、ドイツのドレスデンのカール・グスタフ・カルス大学病院及びドイツのケルンのケルン大学病院で実行した。

効果
試験材料として、以下の成分を含む、ホソムギ（Ｌｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅ）からのアレルゲン抽出物を用いた。
−国際公開第２００８／０００７８３号に従って調製された１００μｇ／ｍｌの加水分解花粉アレルゲン抽出物、
−４２ｍｇ／ｍｌのマンニトール、
−１０．２ｍｇ／ｍｌのトレハロース、
−０．６９ｍｇ／ｍｌのリン酸塩
−０．７０ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、及び
−水

投与スキームは、各腕において３０分間隔で投与される２回の注射を伴う６回の来院を包むものであった。６回の来院での合計１２回の皮下注射の中で、累積用量は４９０μｇであった。治療の前後に、付加の来院（来院１、来院８）が行われた。これは、草（ｇｒａｓｓ）花粉アレルゲンによるアレルギー性鼻炎又は鼻炎結膜炎を有する６１名の患者に関するモノセントリックな研究であった。この分析には、４４名の患者が含まれ、他の患者は依然として治療中である。

投薬レジメンは、１００μｇ／ｍｌの濃度で、５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、４０μｇ、７０μｇ及び１００μｇであった。これは各腕に投与されるので、来院当たりでは倍量が投与された。４４名の患者についてのこの中間分析から、３８名は研究の最後まで残り、６名が脱落した。１名は全身性反応のためであり、１名は個人的理由のためであり、４名の患者はもはや連絡不能となった。
脱落を含めて、患者に適用された累積用量は、表１から得られる。

治療前に、皮膚プリックテストを実行した。皮膚反応の結果（ｍｍで表される）は、表２に示される。陽性対照は、ヒスタミンの注射であった。

さらに、ＩｇＥの血清レベルを試験した。結果を、表３に報告する。

注射量を漸次増やし、来院１、来院６及び来院８での結膜誘発試験（ＣＰＴ）により、反応を試験した。ＣＰＴ段階を、表４のとおり定義した（Ｇｒｏｎｅｍｅｙｅｒ’ｓ ｇｒａｄｉｎｇ，Ｒｉｃｈｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ ２００３ Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０；５１−５９）。

結果を、表５〜７に報告する。

まとめると、１名の患者（２．７％）だけが、治療前に「Ｐｒｏｖｏｋａｔｉｏｎｓｌｏｓｕｎｇ」に対する応答を示していなかった。これは、治療中には２９名（７６．３％）、治療後には２４名（６４．９％）に改善した。ＣＰＴの改善は、来院８では全患者の９３．８％に関して達成されている。

安全性
２４名の患者はいかなる副作用にも言及せず、２０名の患者は１つ以上の副作用を有したが、重篤な副作用を経験した患者はいなかった。注射部位では、一般的に、発赤及び膨疹が注射部位に生じる。膨疹サイズは、重要な安全性指標である。これは、注射の約３０分後に測定される。

表８は、来院及び注射の間での発赤直径（ｃｍ）の変動を示す。驚くべきことに、また予想外にも、注射量を漸次増やした際に典型的に見られる発赤直径の増大は生じなかった。これに対して、治療の間、発赤直径はほとんど安定しているか、あるいはわずかに減少することさえあった。これは予想外のことであり、投与に対する耐性が良好であることの指標である。

さらに、典型的膨疹反応は１ｃｍ未満であった。ガイドラインによれば、局所反応が約５ｃｍの限界に到達した場合、治療を適合化が必要となる。本試験において、膨疹に関して観察された最大値は３．５ｃｍであった。
特に、膨疹直径は全身性反応の良好な指標である。

注射後３０分以内に発生する即時アレルギー性全身性反応は少数の患者でしか報告されず、その反応は、これらの反応の管理に関するＡＷＭＦの推奨に従って等級分けされた。

等級Ｉ（軽度）の即時アレルギー性全身性反応が２名の患者（患者の３．３％）で報告され、等級ＩＩ（中等度）の５即時アレルギー性全身性反応が４名の患者（患者の６．６％）で報告された。これらの頻度は、文献に報告されている頻度より低い（Ｃａｌｄｅｒｏｎ ＭＡ，Ａｌｖｅｓ Ｂ，Ｊａｃｏｂｓｏｎ Ｍ，Ｈｕｒｗｉｔｚ Ｂ，Ｓｈｅｉｋｈ Ａ，Ｄｕｒｈａｍ Ｓ Ａｌｌｅｒｇｅｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｓｅａｓｏｎａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ（Ｒｅｖｉｅｗ）Ｔｈｅ Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｌｉｂｒａｒｙ ２００７，Ｉｓｓｕｅ １のメタ分析においては等級ＩＩ全身性反応について２２％）。

結論
治療に対する耐性は良好であり、治療は高度に効率的であった。

本明細書中に引用された参考文献はすべて、参照により、本明細書中の明示的な教示と不整合を生じない範囲全体が取り込まれる。

比較研究
マンニトール／トレハロースを含む製剤の安全性を、技術的（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ）リン酸塩緩衝生理食塩水製剤と比較すること。この比較製剤は、
１００μｇ／ｍｌの第一試験で用いられた花粉ペプチド
０．３５ｍｇ／ｍｌのリン酸塩
０．５６ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ
０．０１ｍｇ／ｍｌのＫＣｌ
を含んでいた。
これらの研究は、製品が異なる調合であり、また各処置が２回の注射に分けられている、すなわちより多くのアレルゲンが適用される、という点で異なっていた。

予想外にも、トレハロース／マンニトール組成物の使用は、膨疹直径の低減を生じた。

Claims (19)

1. −アレルギー反応を誘発する抗原構造物の断片１０〜２００μｇ／ｍｌ、
   −２〜６％（ｗ／ｖ）のマンニトール、
   −０．５〜２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、
   −水
   を含み、熱ショックタンパク質を本質的に含まない医薬製剤。
2. アレルギー反応を誘発する前記抗原構造物の断片の濃度が５０〜２００μｇ／ｍｌである請求項１に記載の医薬製剤。
3. 緩衝剤、好ましくはリン酸塩緩衝剤、をさらに含む請求項１又は請求項２に記載の医薬製剤。
4. 皮下注射のための形態である請求項１〜請求項３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
5. 前記熱ショックタンパク質の量が１μｇ／ｍｌ未満、好ましくは０．５ｎｇ／ｍｌ未満である請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
6. 前記抗原構造物の断片が加水分解アレルゲン、好ましくは前記抗原構造物の酵素的加水分解により調製される加水分解アレルゲン、である請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
7. 前記断片のうち少なくとも７０重量％が１，０００〜１０，０００Ｄａである請求項１〜請求項６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
8. 前記加水分解アレルゲンが、
   ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲンの天然供給源を抽出して抽出物を形成するステップ、
   ｂ）前記抽出物を精製して非タンパク質成分を除去し、精製抽出物を形成するステップ、
   ｃ）前記精製抽出物を変性して、精製変性抽出物を形成するステップ、
   ｄ）精製変性抽出物を純化して不純物を除去し、純化変性抽出物を形成するステップ、
   ｅ）変性アレルゲンを加水分解して、前記加水分解アレルゲンを形成するステップ、
   ｆ）ペプチドの７０％、より好ましくは８０％、が１０，０００Ｄａ〜１，０００Ｄａである精製加水分解物を得るために、前記加水分解アレルゲンを精製して１０，０００Ｄａ超の分子量を有するペプチド及び１，０００Ｄａ未満の分子量を有するペプチドを除去するステップ、
   を含む方法により得られ、
   前記精製変性抽出物が複数のタンパク質を含み、前記複数のタンパク質のうち、合わせて全タンパク質の少なくとも６０％（ｗ／ｗ）を構成する最も量の多い（ｗ／ｗ）タンパク質は少なくとも２つのタンパク質であり、全タンパク質が前記精製変性抽出物の乾燥重量の少なくとも６０％（ｗ／ｗ）をなす、請求項６記載の医薬製剤。
9. 前記加水分解アレルゲンが、
   ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲンの供給源を抽出して抽出物を形成するステップ、
   ｂ）前記抽出物を精製して非タンパク質成分を除去し、精製抽出物を形成するステップ、
   ｃ）前記精製抽出物を第一変性剤で変性して、精製変性抽出物を形成するステップ、
   ｄ）前記精製変性抽出物を純化して不純物を除去し、純化変性抽出物を形成するステップ、
   ｅ）前記純化変性抽出物を第二変性剤で変性して、変性アレルゲン混合物を形成するステップ、及び
   ｆ）前記変性アレルゲン混合物を加水分解して、加水分解アレルゲンを形成するステップ
   を含む方法により得られる、請求項６記載の医薬製剤。
10. 前記抗原構造物が、ミルクアレルゲン、毒液アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、草（ｇｒａｓｓ）アレルゲン、草（ｇｒａｓｓ）花粉アレルゲン、樹木アレルゲン、灌木アレルゲン、花アレルゲン、穀物アレルゲン、真菌アレルゲン、果実アレルゲン、ベリーアレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚アレルゲン、甲殻類アレルギー、肉アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、動物アレルゲン、動物鱗屑アレルゲン及びパラゴムノキのアレルゲンである請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
11. 患者に別々の時に少なくとも２回の注射をすることを含むアレルギーの治療に用いるための、好ましくは、製剤の量を漸次増やしつつ２〜２０回の注射を行うことを含む治療に用いるための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
12. 請求項１〜請求項１１のいずれか一項に記載の医薬製剤を０．２〜１．５ｍｌ含むバイアル又は投与具。
13. 注射器である請求項１２に記載の投与具。
14. 請求項１２又は請求項１３に記載のバイアル又は投与具を２〜３０個含むキット。
15. １回以上の注射機会（ｓｅｓｓｉｏｎ）に、請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載の医薬製剤を用いて、抗原構造物の断片を４０μｇ〜１０００μｇの累積用量で皮下注射により患者に投与することを含む、アレルギーの治療方法。
16. 注射機会が３〜１０日の間隔で実施される請求項１５に記載の方法。
17. ２回の皮下注射が、同一注射機会に前記患者の身体の異なる位置で実施される、請求項１５又は請求項１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記２つの異なる位置が患者の両腕にある請求項１７に記載の方法。
19. 前記治療が毎年繰り返される、請求項１５〜請求項１８のいずれか一項に記載の方法。