JP2017508475A - 成長分化因子１５（ｇｄｆ−１５）に対するモノクローナル抗体およびがん悪液質およびがんを処置するためのその使用 - Google Patents

成長分化因子１５（ｇｄｆ−１５）に対するモノクローナル抗体およびがん悪液質およびがんを処置するためのその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体に関する。抗体は、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む。本発明はまた、がん悪液質の処置のため、同様にがんの処置のため、の方法における使用のための、マウス抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む、モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体にも関する。本発明はまた、医薬組成物、キット、方法および使用ならびに本発明のモノクローナル抗体を産生可能な細胞株も提供する。

Description

本発明の分野
本発明は、モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体、医薬組成物、キット、方法および使用ならびに本明細書に記載のモノクローナル抗を産生可能な細胞株に関する。本発明はさらに、がん成長の阻害、がん誘発性減量およびがん悪液質の処置が可能な、ヒトＧＤＦ−１５に対する抗体に関する。
背景
今日まで、多くのがんは医療ニーズがまだ満たされていない領域であり、したがって、より効果的にがんを処置し、より広範囲のがんを処置する手段が、必要とされている。
がんそれ自体によって引き起こされる苦痛に加えて、多くの患者は、がんによって誘発される医学的状態であるがん悪液質を患うが、それは典型的には、減量および骨格筋量の減少を伴う。がん悪液質は、すべてのがん関連死の２０パーセント超の割合を占める（Murphy KT and Lynch GS: Update on emerging drugs for cancer cachexia. Expert Opin Emerg Drugs. 2009 Dec;14(4):619-32）。
よって、がん悪液質に繋がるがんの処置および予後を改善するために、これらの医学的状態の両方を標的にする処置レジメンが必要とされている。今日まで、がん悪液質の処置のための新生薬のほとんどは、悪液質を標的とするが、がんそれ自体は標的としない薬物である（Murphy KT and Lynch GS: Update on emerging drugs for cancer cachexia. Expert Opin Emerg Drugs. 2009 Dec;14(4):619-32を参照）ごくわずかな薬物しか、がんとがん悪液質との両方に対して効果的ではなく、したがって、抗がん薬と抗がん悪液質薬とを組み合わせる複合処置レジメン(complex treatment regimens)が必要となることが多い。それによって、広範囲のがんにおける、がんとがん悪液質との両方を効果的に処置するために使用され得る薬物は医療ニーズがまだ満たされていない。
多くの種類のがんは、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−βおよびＧＤＦ−１５などの因子を含む成長因子を発現することが知られている。
ＧＤＦ−１５、成長分化因子１５は、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの分岐メンバーである。これは前駆体として細胞内で発現され、続いて処理され、最終的に細胞から環境中へ分泌されるタンパク質である。活性があり十分に処理された（成熟）形態およびＧＤＦ−１５の前駆体の両方が、細胞外で見出され得る。前駆体は、そのＣＯＯＨ末端アミノ酸配列を介して細胞外マトリックスに共有結合し（Bauskin AR et al., Cancer Research 2005）、それ故、細胞の外側に存在する。ＧＤＦ−１５の活性で完全に処理された（成熟）形態は可溶性であり、血液の血清中に見出される。それ故、ＧＤＦ−１５の処理形態は、潜在的標的細胞が可溶性ＧＤＦ−１５リガンドに対する受容体を発現する場合、血液循環に連結されている体内の任意の標的細胞に潜在的に作用することができる。
妊娠中、ＧＤＦ−１５は生理的条件下で胎盤において見出される。しかしながら、多くの悪性がん（特に攻撃的な脳がん、黒色腫、肺がん、胃腸の腫瘍、結腸がん(colon cancer)、膵臓がん、前立腺がんおよび乳がん（Mimeault M and Batra SK, J. Cell Physiol 2010））は、腫瘍ならびに血清中でＧＤＦ−１５レベルの増加を示す。同様に、ＧＤＦ−１５の高発現と化学療法抵抗性との間（Huang CY et al., Clin. Cancer Res. 2009）およびＧＤＦ−１５の高発現と予後不良との間（Brown DA et al., Clin. Cancer Res. 2009）には夫々、相関関係が記載されている。
ＧＤＦ−１５は、免疫組織化学での査定によれば、種々のＷＨＯグレードの神経膠腫において発現される（Roth et al., Clin. Cancer Res. 2010）。さらに、Rothらは、ＳＭＡ５６０神経膠腫細胞において、内因性ＧＤＦ−１５を標的とする短いヘアピンＲＮＡを発現するＤＮＡ構築物または対照構築物を、安定的に発現した。これらの事前に確立された安定な細胞株を使用して、彼らは、ＧＤＦ−１５ノックダウンＳＭＡ５６０細胞を持ったマウスにおける腫瘍形成が、対照構築物を持ったマウスと比較して、遅延されたことを観察した。
特許出願PCT/EP2013/070127は、モノクローナル抗ＧＤＦ−１５抗体に、とりわけブダペスト条約の下、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託されたハイブリドーマ細胞株Ｂ１−２３に産生された抗体に、関する。PCT/EP2013/070127はまた、抗ＧＤＦ−１５抗体の使用にも関する。
特許出願WO 2005/099746およびWO 2009/021293は、マウスにおいてin vivoで腫瘍誘発性減量に対するヒトＧＤＦ−１５の効果を拮抗可能な抗ヒトＧＤＦ−１５抗体（Mab26）に関する：これらの文献において、免疫力低下マウスに、ヒトＧＤＦ−１５を過剰発現するプラスミドをトランスフェクトしたヒト腫瘍細胞（前立腺癌細胞ＤＵ１４５）が投与された。ＧＤＦ−１５の配列を欠くプラスミドを持つ腫瘍細胞が、陰性対照と働いた。異種移植ＧＤＦ−１５を発現するこれらのマウスは、腫瘍誘発性減量（臨床用語：悪液質）および食欲不振を呈した。WO 2005/099746からの、１ｍｇのMab26の単回腹腔内投与は、腫瘍誘発性減量の完全な逆転をもたらした。WO 2005/099746およびWO 2009/021293は、腫瘍成長に対する抗ヒトＧＤＦ−１５抗体の効果を開示していない。その上、これらの文献は、抗ヒトＧＤＦ−１５抗体が、処置されたマウスの体重における、悪液質の発病前のそれらの体重と比較した増加分をもたらし得たかに関して言及していない。
同様に、Johnen H et al.（Nature Medicine, 2007）には、抗ヒトＧＤＦ−１５モノクローナル抗体の、がん誘発性食欲不振および減量に対する効果が報告されているが、抗ヒトＧＤＦ−１５抗体の、がんにより形成された腫瘍のサイズへの効果は、抗体が１ｍｇの高投薬量で投与されたときでさえも観察されず、よって抗体は、がんの成長を阻害しなかった。
それによって今日まで、がんおよびがん悪液質を効果的に処置するための手段、ならびに、より広範囲のがんにおけるがんおよびがん悪液質を処置するための手段のニーズが、当該技術分野において依然として存在した。
したがって、本発明の目的は、がん悪液質を効果的に処置するためのみならず、がんもまた効果的に処置するために使用され得る手段、ならびに、がん悪液質を処置するためのみならず、より広範囲のがんにおけるがんもまた効果的に処置するために使用され得る手段を得ることである。
これらの目的を達成するための手段を見出す努力において、本発明者らは驚くべきことに、ヒトＧＤＦ−１５に対するモノクローナル抗体が、がん悪液質を処置するためのみならず、マウスにおけるヒト異種移植片腫瘍のがんもまた処置するために使用され得ることを見出した。
加えて、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に対する抗体は、組換えＧＤＦ−１５に対して約７９０ｐＭという平衡解離定数を、追加の親和性成熟なしであっても有し、それは、知られているほとんどの治療抗体よりも高い親和性である。
よって、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に対する抗体は、当該技術分野で知られている抗体と比較して優れた特性を有し、がんの成長およびがん悪液質の阻害にとりわけ有用である。したがって、本発明の抗体は、がんを処置するのに、および、がん悪液質を処置するのに、有用である。それによって、本発明が完成された。
本発明の簡単な説明
本発明は、上述の目的を、モノクローナル抗体、医薬組成物、キット、使用および本明細書に記載のモノクローナル抗体を産生可能な細胞株を提供することにより、解決する。
とりわけ、本発明者らは驚くべきことに、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に対するモノクローナル抗体およびその抗原結合部分が、がん悪液質および／またはがんの成長を阻害可能であることを示している。これは予想外のことであり、何故ならば、当該技術分野で以前から知られていたＧＤＦ−１５に対するこれらのモノクローナル抗体（WO 2005/099746、WO 2009/021293およびJohnen H et al., Nature Medicine, 2007）は、がん誘発性減量の逆転を引き起こすこと（すなわち、がんにより発現されるＧＤＦ−１５によって誘発される二次的症状の逆転）しか知られていないが、しかしこれらはがんの成長の阻害には失敗したことが示されているからである。
本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に対するモノクローナル抗体が、がん誘発性減量および／がん悪液質を処置するため、および、がんを処置するために使用され得ることを示すことによって、本発明者らはまた、驚くべきことに、ヒトＧＤＦ−１５タンパク質が、がん成長が阻害されるとともに、がん誘発性減量およびがん悪液質が処置されるような方法で、本発明の抗体により標的にされ得ることを示す。がん成長阻害ならびにがん誘発性減量およびがん悪液質の処置の同じメカニズムが、下に挙げられるがんを含む、ヒトＧＤＦ−１５を過剰発現する多数のがんに適用可能であることが予想される。
本発明に従うモノクローナル抗体およびその抗原結合部分は、PCT/EP2013/070127に記載され、および、ブダペスト条約の下ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された、マウス抗ＧＤＦ−１５抗体、ｍＡｂ−Ｂ１−２３に由来する。本発明に従う抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体は、マウス抗体ｍＡｂ−Ｂ１−２３の定常ドメインを、ヒトＩｇＧ１抗体の定常ドメインと置き換えることによって生成され得る。
驚くべきことに、本発明に従うキメラおよびヒト化Ｂ１−２３抗体が、凝集する傾向を示さないことが観察された。本発明に従うこれらの抗体特性は、これらの抗体のバイオアベイラビリティを向上させ、これらの抗体の臨床製剤(clinical formulation)にとって有利である
よって、本発明は、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
本発明はまた、哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分にも関し、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。方法は、該哺乳動物へ、抗体またはその抗原結合部分を投与することを含む。加えて、本発明は、処置のための対応する方法に関する。
さらに、本発明はまた、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分にも関し、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合であり、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
さらに、本発明はまた、哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分にも関し、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。方法は、該哺乳動物へ抗体またはその抗原結合部分を投与することを含む。加えて、本発明は、処置のための対応する方法に関する。
本発明はまた、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分を含む医薬組成物にも関する。
本発明はまた、医療における使用のための、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分にも関する。
さらに、本発明は、哺乳動物におけるがんを処置するための方法における使用のための、本発明に従う抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物に関する。方法は、該哺乳動物へ、抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物を投与することを含む。
さらに、本発明は、哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、本発明に従う抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物に関する。方法は、該哺乳動物へ、抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物を投与することを含む。
加えて、本発明は、本発明に従う医薬組成物を含むキットに関する。
本発明はまた、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターにも関する。
さらに、本発明は、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分を産生可能な細胞株に関する。
よって、ヒトＧＤＦ−１５に対するモノクローナル抗体を提供することによって、本発明は、がん悪液質の処置のための手段、および、当該技術分野における上で定義されたニーズを満たすがん成長インヒビターを提供する。
図面の簡単な説明
図１：ＧＤＦ−１５の有無での処置後のＮＫ細胞上のＮＫＧ２Ｄ発現。ＮＫＧ２Ｄの細胞表面発現は、抗ＧＤＦ−１５抗体ｍＡｂ Ｂ１−２３の存在下または不在下での、示されたサイトカインによる処置後のＮＫ細胞上で決定された。図は、フローサイトメトリーにより決定され、非特異的対照抗体に対して定量化された、特定の蛍光強度を表示する。
図２：卵巣癌細胞株ＳＫ−ＯＶ−３におけるＡｋｔリン酸化。卵巣癌細胞株ＳＫ−ＯＶ−３のためのウエスタンブロットを定量するために、リン酸化ＡｋｔのＡｋｔ総量に対する比率が算出され、未処置の対照に対して正規化された。
図３：免疫細胞におけるＪＮＫ１／２リン酸化。ウエスタンブロットを定量するために、リン酸化ＪＮＫ１／２のＪＮＫ総量に対する比率が算出され、未処置の対照に対して正規化された。
図４：in vivoでのマウスＢ１−２３の抗腫瘍効果。Ｂａｌｂ／ｃnu／nuヌードマウスが、黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−２５７を用いた異種移植片の設定で使用された。Ｂ１−２３（白四角）で処置された動物のコホートの腫瘍サイズは、ＰＢＳ対照群（黒丸）と比較して、有意に減少した。Wilcoxonのログランク検定での評価のように、有意性はｐ＜０．０５として定義された。
図５：抗ＧＤＦ−１５抗体によるがん悪液質の処置。図は、ＵＡＣＣ−２５７細胞を植え付けられた、処置されたすべてのＢａｌｂ／ｃｎｕ／ｎｕヌードマウスの平均体重の比較を示す。体重の変化は、３８日間の期間、第０日での開始体重と比較したパーセントで表現される。
図６：研究第140123号において使用された抗体のクーマシー染色。 図７：生理的ｐＨでのキメラのおよびヒト化の抗体の改善された溶解性。
本発明の詳細な説明
定義
下に特に定義されない限り、本発明において使用される用語は、当業者に知られているそれらの一般的な意味に従って理解されるべきである。
本明細書で使用される用語「抗体」は、目的の抗原に特異的に結合可能なあらゆる機能的抗体を意味し、これはPaul, W.E. (Ed.).: Fundamental Immunology 2nd Ed. Raven Press, Ltd., New York 1989の第7章に一般に概説されており、この文献は参照により本明細書に組み込まれる。特に限定することなく、用語「抗体」は、ニワトリならびにマウス、ヤギ、非ヒト霊長類およびヒトなどの哺乳動物を含むあらゆる適切なソースの種からの抗体を包含する。好ましくは、抗体はヒト化抗体である。
抗体は、好ましくは、当該技術分野において周知の方法によって調製され得るモノクローナル抗体である。用語「抗体」は、ＩｇＧ−１、−２、−３または−４、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＤのアイソタイプの抗体を包含する。用語「抗体」は、単量体抗体（ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧなど）またはオリゴマー抗体（ＩｇＡまたはＩｇＭなど）を包含する。用語「抗体」はまた−特に限定することなく−単離された抗体および改変抗体、例えばキメラ抗体などの遺伝的に操作された抗体をも包含する。
抗体のドメインの命名は、当該技術分野において知られている用語に従う。抗体の各単量体は、当該技術分野において一般に知られているように、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。これらのうち、各重鎖および軽鎖は、抗原結合のために重要である可変ドメイン（重鎖についてはＶＨ、軽鎖についてはＶＬと呼ぶ）を含む。これらの重鎖および軽鎖の可変ドメインは、（Ｎ末端からＣ末端の順に）領域ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む（ＦＲはフレームワーク領域；ＣＤＲは相補性決定領域であり、超可変領域としても知られる）。
抗体配列内の上述の抗体領域の同定および割り当ては、一般に、Kabat et al.（Sequences of proteins of immunological interest, U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. 1983）もしくはChothia et al.（Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature. 1989 Dec 21-28;342(6252):877-83）に従うか、または、Giudicelli et al.（IMGT/V-QUEST, an integrated software program for immunoglobulin and T cell receptor V-J and V-D-J rearrangement analysis. Nucleic Acids Res. 2004 Jul 1;32(Web Server issue):W435-40）に記載されたIMGT/V-QUESTソフトウェアを使用することによって実施されてもよく、これらの文献は参照により本明細書に組み込まれる。好ましくは、上で示された抗体領域は、IMGT/V-QUESTソフトウェアを使用することによって同定および割り当てられる。
「モノクローナル抗体」は、抗体の本質的に均一な集団からの抗体であり、ここで抗体は、その配列が実質的に同一である（すなわち、それらのＮ末端およびＣ末端におけるアミノ酸修飾などの、天然に生じる配列の修飾を含有するマイナーな断片を除いて、同一である）。多数のエピトープに指向される種々の抗体の混合物を含有するポリクローナル抗体とは異なり、モノクローナル抗体は、同じエピトープに指向され、したがって高度に特異的である。
用語「モノクローナル抗体」は（これらに限定はされないが）、単一細胞クローン由来のモノクローナル細胞集団から得られる抗体、例えばKoehlerとMilstein（Nature, 1975 Aug 7;256(5517):495-7）またはHarlowとLane（“Antibodies: A Laboratory Manual” Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 1988）に記載されたハイブリドーマ法によって生成された抗体などを含む。モノクローナル抗体はまた、ファージディスプレイ技術、例えばClackson et al.（Nature. 1991 Aug 15;352(6336):624-8）またはMarks et al.（J Mol Biol. 1991 Dec 5;222(3):581-97）に記載の技術などを含む、他の好適な方法からも得られてもよい。
モノクローナル抗体は、Ｋｄ値の減少、最適化された会合および解離速度などの抗原結合特性のために、当該技術分野において知られた方法によって最適化された抗体であってもよい。例えば、Ｋｄ値は、ファージディスプレイを含むディスプレイ方法によって最適化されてもよく、その結果、親和性成熟モノクローナル抗体が得られる。用語「モノクローナル抗体」は、特定の種由来または単一種のみに由来する抗体の配列に限定されるものではない。よって、用語「モノクローナル抗体」の意味は、ヒト化モノクローナル抗体などのキメラモノクローナル抗体を包含する。
「ヒト化抗体」は、ヒト配列と、目的の抗原（例としてヒトＧＤＦ−１５）に対する結合特異性を付与する非ヒト配列の小部分とを含有する抗体である。典型的には、ヒト化抗体は、ヒトアクセプター抗体からの超可変領域配列を、目的の抗原（例としてヒトＧＤＦ−１５）に結合する非ヒトドナー抗体（例として、マウス、ウサギ、ラットのドナー抗体）からの超可変領域配列で、置き換えることによって生成される。いくつかのケースにおいて、アクセプター抗体のフレームワーク領域の配列はまた、ドナー抗体の対応する配列によっても、置き換えられてもよい。
ドナーおよびアクセプター抗体由来の配列に加えて、「ヒト化抗体」は、他の（追加的または代替の）残基または配列を含有しても、含有しなくてもよい。かかる他の残基または配列は、結合特性（例としてＫｄ値を減少させる）および／または免疫原性特性（例としてヒトにおける抗原性を減少させる）などの抗体特性をさらに改善するよう機能することができる。ヒト化抗体を生成する方法のための非限定例は、当該技術分野において、例としてRiechmann et al.（Nature. 1988 Mar 24;332(6162):323-7）またはJones et al.（Nature. 1986 May 29-Jun 4;321(6069):522-5）から知られている。
用語「ヒト抗体」は、ヒト可変および定常ドメイン配列を含有する抗体に関する。この定義は、結合特性（例としてＫｄ値を減少させる）および／または免疫原性特性（例としてヒトにおける抗原性を減少させる）などの抗体特性をさらに改善するよう機能してもよい、単一のアミノ酸置換または修飾を持つヒト配列を有する抗体を包含する。用語「ヒト抗体」は、非ヒト配列の部分が目的の抗原に対する結合特異性を付与するヒト化抗体を除外する。
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」は、抗原（例としてＧＤＦ−１５）に特異的に結合する抗体の能力を保持している抗体の部分を指し、すなわち、「抗原結合部分」は、抗原への特異的結合のために抗体と競合することができる。「抗原結合部分」は、抗体の１以上の断片を含有していてもよい。特に限定するものではないが、それは、組換えＤＮＡ方法および抗体の化学的または酵素的断片化による調製を含む、当該技術分野において知られているいずれか好適な方法によって、製造され得る。抗原結合部分は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、二重特異性抗体、または、抗原への結合の保持を可能とする抗体のいずれの他の部分（単数または複数）であってもよい。
「抗体」（例としてモノクローナル抗体）または「抗原結合部分」は、誘導体化されているかまたは異なる分子に連結されていてよい。例えば、抗体に連結されてもよい分子は、他のタンパク質（例として他の抗体）、分子標識（例として蛍光、発光、着色または放射性分子）、医薬品および／または毒物である。抗体または抗原結合部分は、直接的に（例として２つのタンパク質間の融合の形態で）、または、リンカー分子（例として当該技術分野において知られている化学リンカーのいずれの好適なタイプ）を介して、連結されてよい。
本明細書で使用される用語「結合」または「結合する」は、目的の抗原（例としてヒトＧＤＦ−１５）に特異的に結合することを指す。好ましくは、Ｋｄ値は１００ｎＭ未満、より好ましくは５０ｎＭ未満、さらにより好ましくは１０ｎＭ未満、さらにより好ましくは５ｎＭ未満、および、最も好ましくは２ｎＭ未満である。
本明細書で使用される用語「エピトープ」は、抗体のための結合部位を形成する、抗原の小さな部分を指す。
本発明の文脈において、抗体またはそれらの抗原結合部分の、目的の抗原（例としてヒトＧＤＦ−１５）への結合または競合的結合は、下に記載のとおり、表面プラズモン共鳴測定を参照標準アッセイとして使用することによって測定される。
用語「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当該技術分野において知られている平衡解離定数に関する。本発明の文脈において、これらの用語は、目的の特定の抗原（例としてヒトＧＤＦ−１５）に関する、抗体の平衡解離定数に関連する。平衡解離定数は、複合体の、その構成要素（例として抗原と抗体）に可逆的に解離する傾向の尺度である。本発明に従う抗体について、ＫＤ値（例えば抗原ヒトＧＤＦ−１５についてのものなど）は一般に、下に記載のとおり、表面プラズモン共鳴測定を使用することによって決定される。
本明細書で使用される用語「がん成長」は、がんのあらゆる測定可能な成長に関する。固形腫瘍を形成するがんについて、「がん成長」は、経時的な腫瘍体積の測定可能な増加に関する。がんが単一の腫瘍しか形成しない場合、「がん成長」は、単一の腫瘍の体積の増加のみに関する。がんが、転移などの複数の腫瘍を形成している場合、「がん成長」は、全ての測定可能な腫瘍の体積の増加に関する。固形腫瘍について、腫瘍体積は、磁気共鳴画像法およびコンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）を含む、当該技術分野において知られているいずれの方法によっても測定され得る。
血液中の血液系のがん性細胞の存在によって特徴付けられる白血病について、「がん成長」は、血液容量あたりのがん細胞数の測定可能な増加に関する。かかる測定を行うために、がん細胞は血液試料から、細胞形態の測定、または、当該技術分野において知られているいずれの方法、例えば腫瘍マーカー細胞表面タンパク質などの腫瘍細胞マーカータンパク質の、例として特異的な抗体による染色を含む方法を使用することによって同定され得、および、がん細胞は計測され得る。
本明細書で使用される「がん成長を阻害する」などの用語は、抗体で処置された患者におけるがん成長の測定可能な阻害を指す。好ましくは、阻害は統計的に有意である。がん成長の阻害は、本発明に従って処置された患者の群におけるがん成長を、未処置患者の対照群と比較することによって、または、当該技術分野の標準的ながん処置に加えて本発明による処置を受けた患者の群を、当該技術分野の標準的ながん処置しか受けなかった患者の対照群と比較することによって、査定されてもよい。
がん成長の阻害を査定するためのかかる研究は、例として十分な統計的検出力を持つ二重盲検無作為化試験などの、臨床試験のために認められた基準に準拠して設計されている。用語「がん成長を阻害する」は、がん成長が部分的に阻害されている、がん成長の阻害（すなわち、患者におけるがん成長が、患者の対照群と比較して遅れている場合）、がん成長が完全に阻害されている阻害（すなわち、患者におけるがん成長が停止されている場合）、および、がん成長が逆転されている阻害（すなわち、がんが縮小する）を含む。
本明細書で使用される「単離された抗体」は、そのソースとなる環境からの構成要素の大部分（重量で）から、例としてハイブリドーマ細胞培養物またはその産生のために使用された異なる細胞培養物（例として組換え的に抗体を発現するＣＨＯ細胞などのプロデューサー細胞）の構成要素から、同定および分離された抗体である。分離は、そうしなければ所望の用途（例として本発明に従う抗ヒトＧＤＦ−１５抗体の治療的使用）のための抗体の好適性を妨害し得る構成要素を、十分に除去するように、実施される。
単離された抗体を調製する方法は、当該技術分野において知られており、プロテインＡクロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、ウイルス保持濾過および限外濾過を含む。好ましくは、単離された抗体調製物は、Lowryプロテインアッセイを使用することによって測定された、少なくとも７０％（ｗ／ｗ）純粋であり、より好ましくは少なくとも８０％（ｗ／ｗ）、さらにより好ましくは少なくとも９０％（ｗ／ｗ）、さらにより好ましくは少なくとも９５％（ｗ／ｗ）、および、最も好ましくは少なくとも９９％（ｗ／ｗ）純粋である。
本明細書で使用される「二重特異性抗体」は、二価の小さな抗原結合抗体部分であって、同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるペプチドリンカーによって連結された、同じポリペプチド鎖上の軽鎖可変ドメインに連結された重鎖可変ドメインを含むものである。これにより、別の鎖の相補的ドメインとの対形成と、２つの抗原結合部位を持つ二量体分子の集成とがもたらされる。二重特異性抗体は、二価および単一特異性であってもよく（ヒトＧＤＦ−１５への２つの抗原結合部位を持つ二重特異性抗体など）、または、二価および二重特異性であってもよい（例として、２つの抗原結合部位を持つ二重特異性抗体であって、１つがヒトＧＤＦ−１５への結合部位であり、他の１つは異なる抗原への結合部位である）。二重特異性抗体の詳細な説明は、Holliger P et al.（"Diabodies": small bivalent and bispecific antibody fragments.” Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8）に見出され得る。
本明細書で使用される「単一ドメイン抗体」（「ナノボディ（登録商標）」とも称される）は、単一の単量体の可変抗体ドメインからなる抗体断片である。単一ドメイン抗体を産生するための構造および方法は、当該技術分野から、例としてHolt LJ et al.（“Domain antibodies: proteins for therapy.” Trends Biotechnol. 2003 Nov;21(11):484-90）、Saerens D et al. （“Single-domain antibodies as building blocks for novel therapeutics.” Curr Opin Pharmacol. 2008 Oct;8(5):600-8. Epub 2008 Aug 22）、および、Arbabi Ghahroudi M et al.（“Selection and identification of single domain antibody fragments from camel heavy-chain antibodies.” FEBS Lett. 1997 Sep 15;414(3):521-6）から、知られている。
本明細書で使用される用語「より高い」は、患者試料中の値（例としてＧＤＦ−１５レベル）が、対応する対照試料または対照試料群の値よりも高いことを意味する。好ましくは、その差は統計的に有意である。
本明細書で使用される用語「上昇ＧＤＦ−１５レベル」は、ヒト患者が、本発明に従う抗体もしくはその抗原結合部分または医薬組成物の投与前に、基準としての健常ヒト対照個体の血液血清中のＧＤＦ−１５レベルの中央値と比べて、より高い血清中のＧＤＦ−１５レベルを有することを意味する。
健常ヒト対照個体の血液血清中のＧＤＦ−１５レベルの好ましい中央値の基準は、＜０．８ｎｇ／ｍｌである。予想される範囲は、健常ヒト対照において０．２ｎｇ／ｍｌと１．２ｎｇ／ｍｌとの間である（参照：Tanno T et al.: “Growth differentiation factor 15 in erythroid health and disease.” Curr Opin Hematol. 2010 May; 17(3): 184-190）。
好ましくは、レベルは１．２倍高く、より好ましくは１．５倍高く、さらに好ましくは２倍高く、最も好ましくは５倍高い。
本明細書で使用される用語「投与前」は、本発明に従う抗体、その断片または医薬組成物の投与の直前の期間を意味する。好ましくは、用語「投与前に」は、投与直前の３０日の期間を；最も好ましくは、投与直前の１週間の期間を意味する。
本明細書で使用される用語「有意な」、「有意に」などは、値の間の統計的に有意な差を指す。
用語「がん」および「がん細胞」は、本明細書において、当該該技術分野におけるそれらの一般的な意味に従って使用される（例えばWeinberg R. et al.: The Biology of Cancer. Garland Science: New York 2006. 850pを参照）。
用語「がん誘発性減量」は本明細書において、当該技術分野におけるその一般的な意味に従って使用される。がん誘発性減量は、がんを有する個体において有害事象として頻繁に見られる（例えばFearon K. et al.: Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus. Lancet Oncol. 2011 May; 12(5):489-95.; Tisdale MJ.: Mechanisms of cancer cachexia. Physiol Rev. 2009 Apr;89(2):381-410を参照）。用語「がん誘発性減量」は、がんによって誘発される体重減少に関する。
がん誘発性減量に加えて、追加の体重減少−例として外科手術、化学療法および放射線治療などのがん処置により誘発される体重減少−はまた、がんを有する個体にも起こり得る。用語「がん誘発性減量」の意味は、この追加の体重減少を含まないことが理解される。しかしながら、これは、本発明の抗体−がん誘発性減量およびがん成長に対するそれらの効果に加えて−が、例としてかかる追加の減量を戻すかまたは部分的に戻すことによって、あるいは、かかる追加の体重減少を予防するかまたは部分的に予防することによって、かかる追加の体重減少に対する有益な効果を有してもよいという可能性を除外しない。
体重は、重さを量ることによって容易に測定され得、体重は典型的には、ｋｇなどの質量の単位で表される。
用語「がん悪液質」は本明細書中、当該技術分野におけるその典型的な意味に従って使用される（例えば、Fearon K. et al.: Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus. Lancet Oncol. 2011 May; 12(5):489-95.; Tisdale MJ.: Mechanisms of cancer cachexia. Physiol Rev. 2009 Apr;89(2):381-410.を参照）。がん悪液質の最も一般的な症状は、がん誘発性減量である。よって、１つの定義に従うと、がん悪液質は、骨格筋量が減少し続けること（脂肪量減少の有無にかかわらず）によって特徴付けられ、これは、従来の栄養摂取によって完全には逆転させられない。
ヒト患者において、がん悪液質は、過去６カ月にわたり５％を超える減量によって、または、２０ｇ／ｍ２未満の体格指数(体格指数)および減量し続ける任意の度合いが２％より高いことによって、または、筋肉減少症（すなわち退行性の筋量の減少(degenerative loss of muscle mass)）および進行する減量が２％より高いことによって、定義され得る（Fearon K. et al.: Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus. Lancet Oncol. 2011 May; 12(5):489-95.を参照）。がん悪液質のさらなる症状は、脂肪組織の枯渇であり得る。
がん悪液質に関し、本発明に従う「処置」は、がん悪液質を、予防するための処置および／または阻害するためもしくは戻すための処置であってもよい。典型的には、がん悪液質を予防するための処置は、がん悪液質が未だ発症していないがん疾患ステージで予防的に施される処置である。がん悪液質を阻害するための処置は典型的には、がん悪液質のさらなる進行を阻害するために、相当ながん悪液質が発症したがん疾患ステージで施される処置である。
がん悪液質を戻すための処置は典型的には、相当ながん悪液質が発症したがんのステージで開始され、かつ、がん悪液質を戻す処置である。処置の効果は、部分的な効果、すなわちがん悪液質の部分的な予防、部分的な阻害または部分的な逆転、あるいは、完全な効果、すなわちがん悪液質の完全な予防、完全な阻害または完全な逆転、であり得る。好ましくは、本発明によると、処置の効果は、がん悪液質の完全な予防、完全な阻害または完全な逆転である。より好ましくは、本発明に従う処置の効果は、がん悪液質の完全な予防または完全な逆転である。
本発明に従うがん悪液質の処置に関連して本明細書で使用される用語「完全（に）」は、予防するための処置のケースにおいて、がん悪液質が、処置の間中および／または処置の後に、処置された個体において発症しないことを意味する。がん悪液質を阻害するための処置のケースにおいて、用語「完全（に）」は、がん悪液質のさらなる進行が、処置の間中および／または処置の後に、処置された個体において、生じないことを意味する。がん悪液質を戻すための処置のケースにおいて、用語「完全（に）」は、がん悪液質が、処置された個体に存在しないように、処置の間中またはその後、がん悪液質が完全に戻ることを意味する。
本発明に従う処置のこれらの効果に関し、用語「がん悪液質がない」は、当該技術分野において知られている測定のためのおよび診断のための標準的な方法を使用することによって、がん悪液質が検出可能ではないことを意味する。同様に、用語「がん悪液質のさらなる進行がない」は、当該技術分野において知られている測定のためのおよび診断のための標準的な方法を使用することによって、がん悪液質のさらなる進行が検出可能ではないことを意味する。当該技術分野において知られており、本明細書に参照される方法は、例えば、Fearon KC.: Cancer cachexia: developing multimodal therapy for a multidimensional problem. Eur J Cancer. 2008 May;44(8):1124-32；Fearon K. et al.: Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus. Lancet Oncol. 2011 May; 12(5):489-95.；またはTisdale MJ.: Mechanisms of cancer cachexia. Physiol Rev. 2009 Apr;89(2):381-410に記載されている。
がん悪液質を完全に予防するかまたは完全に戻すことに加えて、本発明に従うこれらの方法における使用のための処置の方法および製品は、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、処置された哺乳動物の体重を増加してもよい。本明細書に使用される用語「がん悪液質の発病前」は、がん疾患の経過中のある時点を意味し、その後、がん悪液質が、上で参照された方法などの当該技術分野において知られている方法によって測定可能なものになる。
好ましくは、本発明の従うがん悪液質の処置の上で定義された効果は、好適な対照群に対して査定されるとき、統計的に有意である一方で、処置された個々の患者が重篤な悪液質を示さないであろう。
本発明によれば、用語「含む」の各出現は、任意に、用語「からなる」で置換されてもよい。
方法および技術
一般に、本明細書において別に定義されない限り、本発明で使用される方法（例としてクローニング方法または抗体に関連する方法）は、当該技術分野において知られている手順に従って、例としてSambrook et al.（“Molecular Cloning: A Laboratory Manual.”, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 1989）、Ausubel et al.（“Current Protocols in Molecular Biology.” Greene Publishing Associates and Wiley Interscience; New York 1992）および Harlow and Lane（“Antibodies: A Laboratory Manual” Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 1988）に記載の手順などに従って実施される；これらの文献は参照により本明細書に組み込まれる。
分子量は、質量分析法などの、当該技術分野において知られている方法によって測定される。それは、ダルトン（Ｄａ）またはキロダルトン（ｋＤａ）で表される。
本発明に従うモノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体の結合は、例１に抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３について記載されるとおり、Bio-Rad（登録商標） ProteOn（登録商標） XPR36システムおよびBio-Rad（登録商標） GLCセンサーチップを使用する表面プラズモン共鳴測定を採用することによって、一般に査定される。
本発明に従う配列の配列アラインメントは、BLASTアルゴリズムを使用することによって実施される（Altschul et al.(1990) “Basic local alignment search tool.” Journal of Molecular Biology 215. p. 403-410；Altschul et al.: (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res. 25:3389-3402を参照）。好ましくは、以下のパラメータが使用される：最大標的配列１０；ワードサイズ３； BLOSUM 62マトリクス；ギャップコスト：存在１１、延長１；条件付きの組成スコアマトリックス調整。よって、配列に関連して使用されるとき、「同一性」または「同一の」などの用語は、BLASTアルゴリズムを使用することによって得られた識別値(identity value)を指す。
本発明に従うモノクローナル抗体は、当該技術分野において知られているいずれの方法によっても産生され得、これには、限定はされないが、Siegel DL（“Recombinant monoclonal antibody technology.” Transfus Clin Biol. 2002 Jan;9(1):15-22）において言及されている方法が含まれる。好ましい態様において、本発明に従う抗体は、ブダペスト条約の下ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託されたハイブリドーマ細胞株Ｂ１−２３によって産生される。寄託は、2011年9月29日に申請された。
細胞増殖は、当該技術分野において知られている好適な方法によって測定され得、これには（限定はされないが）、光学顕微鏡法、ミトコンドリアの酸化還元電位を測定するものなどの代謝アッセイ（例としてＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）アッセイ；Alamar Blue（登録商標）アッセイとしても知られているレザズリン染色、知られている内因性の増殖バイオマーカー（例としてＫｉ−６７）の染色、ならびに、細胞のＤＮＡ合成を測定する方法（例としてＢｒｄＵおよび［３Ｈ］−チミジン取り込みアッセイ）が含まれる。
免疫抑制は、当該技術分野において知られている好適な方法によって測定され得、これには（限定はされないが）、免疫細胞の成長、サイトカイン分泌、フローサイトメトリーによる細胞内サイトカイン染色、ｑＲＴ−ＰＣＲによるサイトカイン測定、リダイレクトされた標的細胞の溶解、さらなる細胞毒性または脱顆粒アッセイ、免疫細胞受容体の活性化の下方制御（ＮＫＧ２Ｄなど）、抑制免疫細胞受容体の上方制御、免疫学的シナプス形成、免疫細胞浸潤が含まれる。免疫抑制の用語を適用するためには、これらの少なくとも１つまたはいずれの他の好適なアッセイにおいても、効果が測定可能でなければならない。特定の試験における効果の欠如は、免疫抑制の一般的な不在を意味するものではない。
ヒトＧＤＦ−１５レベルは、当該技術分野において知られているいずれの方法によっても測定され得、これには、ＧＤＦ−１５ｍＲＮＡレベルの、（限定はされないが）以下を含む方法による測定：ヒトＧＤＦ−１５に特異的なプライマーを用いるヒトＧＤＦ−１５ｍＲＮＡの定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）、ヒトＧＤＦ−１５に特異的なプローブによるｍＲＮＡのin situハイブリダイゼーション、ｍＲＮＡの深い配列決定法（mRNA deep sequence method）；およびＧＤＦ−１５タンパク質レベルの、（限定はされないが）以下を含む方法による測定：ヒトＧＤＦ−１５に由来するタンパク質またはペプチドについての質量分析、ヒトＧＤＦ−１５に特異的な抗体を用いるウエスタンブロッティング、ヒトＧＤＦ−１５に特異的な抗体を用いるストリップ試験、または、ヒトＧＤＦ−１５に特異的な抗体を用いる免疫細胞化学、などを含む。
ヒトＧＤＦ−１５に特異的な抗体を使用するかかる方法について、本発明の抗ヒトＧＤＦ−１５抗体が好ましく、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託されたハイブリドーマ細胞株Ｂ１−２３によって産生される本発明の抗体が、最も好ましい。
本発明の態様
上記のとおり、本発明者らは、ヒトＧＤＦ−１５タンパク質が、がん悪液質およびがん誘発性減量が処置され得るのみならず、がん成長もまた阻害されるような様式で、本発明に従う抗体によって標的にされ得ることを示す。
本発明を考慮すると、WO 2005/099746、WO 2009/021293およびJohnen H et al., Nature Medicine, 2007から知られている抗ＧＤＦ−１５抗体は、ヒトＧＤＦ−１５の効果の１つ（すなわちがん誘発性減量）を阻害するのみであるが、がん成長に関するものなどのヒトＧＤＦ−１５の他の効果は阻害できないことが明らかである。本発明の観点からの、この失敗の１つの可能な説明は以下である：すなわち、上の文書から知られている抗体は、血液脳関門を通過するヒトＧＤＦ−１５の輸送のみを妨害するが（血液脳関門を横切って輸送することができない大きな複合体を形成することにより）、しかし、その受容体（例として脳の外部にある細胞に存在する受容体）と一般に相互作用できないような様式で、ヒトＧＤＦ−１５に結合することはできない、ということである。さらに、本発明の抗体とは異なり、WO 2005/099746、WO 2009/021293およびJohnen H et al., Nature Medicine, 2007から知られている抗ＧＤＦ−１５抗体は、哺乳動物の体重の、がん悪液質発病前のその体重と比較した、検出可能な増加につながらなかった。
それによって、本発明に従う使用のための抗体の効果は、当該技術を鑑みても予想外である。
本発明の抗体の以下の特性は、悪液質の処置およびがん成長の阻害を含む、ヒトＧＤＦ−１５の効果をより完全に阻害するそれらの能力に貢献することが、期待される。
ヒトＧＤＦ−１５の形態に対する幅広い結合特異性
本発明の抗体は、成熟組換えヒトＧＤＦ−１５（配列番号８によって表される）に結合可能であり、したがって活性で完全にプロセシングされた（成熟）ヒトＧＤＦ−１５に結合可能である。
加えて、ヒト細胞に対して、本発明に従うｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体で染色実験を実施することによって、本発明者らは、本発明に従うｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体が、ヒト細胞上でヒトＧＤＦ−１５前駆体に結合可能であることを示す。
よって、本発明に従う抗体の結合および効果、とりわけがん成長の阻害は、ヒトＧＤＦ−１５の特定の形態への効果に限定されないことが予想される。
がん悪液質に対するヒトＧＤＦ−１５の効果について、これらの効果は、ヒトＧＤＦ−１５の一部の形態(a subset of forms)に対して、例えば血液脳関門を通過可能なヒトＧＤＦ−１５の可溶型に対して、もたらされ得る。本発明の例において例示されているとおり、試験された本発明に従う抗ＧＤＦ−１５抗体のすべてが、がん誘発性悪液質を処置するために使用され得る。よって、本発明に従う抗体は、がん悪液質の原因となる形態のヒトＧＤＦ−１５を妨害し得る。
高い結合親和性
本発明に従う抗体およびその抗原結合部分は、高い結合親和性を有し、これは、組換えヒトＧＤＦ−１５に対して約７９０ｐＭの平衡解離定数を有する、本発明に従うｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体によって実証される。注目すべきは、かかる親和性の値は、ほとんどの既存の治療用抗体、例として約８ｎＭの平衡解離定数を有する治療用抗体リツキシマブよりも優れている。
高い結合親和性は、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に対する抗体が、ヒトＧＤＦ−１５に安定して結合することを確実にして、がん成長に対する効果を含むヒトＧＤＦ−１５の効果が、効果的に阻害されるようにするであろう。同様に、本発明に従う抗体の安定した結合は、がん悪液質を引き起こす形態のヒトＧＤＦ−１５が、それらの病理的機能を実行し得えないことを保証するものと予想される。これは、例えば、これらの形態のヒトＧＤＦ−１５の、それらが作用し得る脳中の部位から、抗体依存的に捕捉することに起因し得る。かかる結合および捕捉は、例えばがんの部位で起こってもよいし、または、本発明に従う抗体は、血液脳関門を通過するヒトＧＤＦ−１５の輸送を妨害してもよい。
不連続または立体構造エピトープへの結合
本発明に従う抗体およびその抗原結合部分は、本発明に従うｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体について下で実証されるとおり、不連続または立体構造エピトープに結合する。
本発明に従う抗体およびその抗原結合部分の、不連続または立体構造ＧＤＦ−１５エピトープへの結合は、ヒトＧＤＦ−１５を特定の立体構造に維持するのに役立ち得る。この立体構造の特異性は、ＧＤＦ−１５を、腫瘍から放出され得ない形態または血液脳関門を横断して脳中の作用し得る部位でがん悪液質を引き起こし得ない形態に維持するのに有利である。加えて、不連続または立体構造ＧＤＦ−１５エピトープへのかかる結合は、例としてその受容体には機能的に干渉し得ない立体構造にＧＤＦ−１５を維持することによって、がん成長に対する効果を含むヒトＧＤＦ−１５の効果の効果的な阻害に貢献してもよい。
よって、本発明は以下の態様に関する：
Ａ）抗体、ベクターおよび細胞株
具体的には、本発明は、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、ここで、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノを含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様において、最も好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
代替的態様において、本発明は、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関し、ここで、重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸配列と１アミノ酸以下でしか異ならないアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列または配列番号７のアミノ酸配列と１アミノ酸以下でしか異ならないアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、ここで、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様の別の好ましい側面において、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％および最も好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸を含み、ならびに、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
この態様において、最も好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
さらに、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供されるが、重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
好ましくは、このモノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、このモノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
より好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。さらにより好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
さらに、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供されるが、重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列または配列番号５のアミノ酸配列と１アミノ酸以下でしか異ならないアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列または配列番号７のアミノ酸配列と１アミノ酸以下でしか異ならないアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
好ましくは、このモノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、このモノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
より好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。さらにより好ましくは、重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
上の態様に従う第２態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含むか、あるいは、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
上の態様に従う第３態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
上の態様に従う第４態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域とアミノ酸配列ｓｅｒ−ａｌａ−ｓｅｒを含むＣＤＲ２領域とを含む。
上の態様に従う第５態様において、抗体は、ヒト化抗体である。好ましくは、ヒト化抗体の可変ドメインのすべてが、ヒト化可変ドメインである。
上の態様に従うさらなる態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。この態様の最も好ましい側面において、重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。
上の態様に従うさらに好ましい態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、および、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
上の態様に従う別の好ましい態様において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列またはこれと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。上の態様に従うこの態様の最も好ましい側面において、重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。
上の第１〜第３態様に従うさらに別の態様において、重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号１のアミノ酸配列またはこれと８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一の配列を含む前記領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号２のアミノ酸配列またはこれと８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一の配列を含む前記領域を含む。
上の第１〜第３態様に従う好ましい態様において、重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号１のアミノ酸配列またはこれと９５％同一の配列を含む前記領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号２のアミノ酸配列またはこれと９５％同一の配列を含む前記領域を含む。
上の第１〜第３態様に従うより好ましい態様において、重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号１のアミノ酸配列またはこれと９８％同一の配列を含む前記領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号２のアミノ酸配列またはこれと９８％同一の配列を含む前記領域を含む。
上の第１〜第３態様に従うさらにより好ましい態様において、重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号１のアミノ酸配列を含む前記領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域であって、かつ、配列番号２のアミノ酸配列を含む前記領域を含む。
さらに、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供されるが、重鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含む。この態様の好ましい側面において、抗体は、上記本発明の態様のいずれかにおいて定義されるＣＤＲ３配列を有していてもよい。
別の態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供されるが、抗体またはその抗原結合部分は、哺乳動物、好ましくはヒト患者におけるがん成長を阻害可能である。
上の態様に従う別の態様において、本発明は、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗原結合部分に関し、ここで抗原結合部分は、単一ドメイン抗体（「Nanobody（登録商標）」とも称される）である。この態様の一側面において、単一ドメイン抗体は、配列番号３、配列番号４および配列番号５の、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を夫々含む。この態様の一側面において、単一ドメイン抗体は、配列番号６、配列番号７および配列番号８の、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３アミノ酸配列を夫々含む。この態様の好ましい側面において、単一ドメイン抗体は、ヒト化抗体である。
好ましくは、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な本発明の抗体またはその抗原結合部分は、１００ｎＭ以下、２０ｎＭ未満、好ましくは１０ｎＭ未満、より好ましくは５ｎＭ未満および最も好ましくは０．１ｎＭと２ｎＭとの間の、ヒトＧＤＦ−１５に対する平衡解離定数を有する。
本発明の別の態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られるヒトＧＤＦ−１５に対する抗体と同じヒトＧＤＦ−１５エピトープに結合する。本明細書に記載のとおり、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に結合する抗体は、例１に記載された手順に従って、参照標準方法としての表面プラズモン共鳴測定によって査定される。ヒトＧＤＦ−１５上の同じエピトープへの結合は、細胞株Ｂ１−２３から得られるヒトＧＤＦ−１５に対する抗体と、細胞株Ｂ１−２３から得られるヒトＧＤＦ−１５に対する抗体と同じヒトＧＤＦ−１５エピトープに結合することが予想される抗体の、表面プラズモン共鳴の競合的結合実験によって、同様に査定され得る。
極めて好ましい態様において、抗体は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られる、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。
好ましい態様において、本発明に従うヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。本発明に従ういかなる非ヒト抗体配列（すなわちドナー抗体配列）に対しても、本発明のヒト化モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体またはその抗原結合部分は、上記のとおり当該技術分野において知られている技術に従って生成され得る。
極めて好ましい態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られる、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体由来のヒト化抗体またはその抗原結合部分である。この態様の非限定的な側面において、ヒト化抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
この態様のさらなる非限定的な側面において、ヒト化抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含むかまたはこれらをさらに含み、および、ヒト化抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含むかまたはこれらをさらに含む。
さらに、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分が提供されるが、結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。この態様の好ましい側面において、抗体またはその抗原結合部分は、上の態様のいずれか１つに定義される抗体またはその抗原結合部分である。
上の態様に従う本発明の別の態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、二重特異性抗体である。この態様の一側面において、二重特異性抗体は、二価の単一特異性で、ヒトＧＤＦ−１５のための２つの同一の抗原結合部位を持つ。この態様の第２の代替的側面において、二重特異性抗体は、二価の二重特異性であって、１つの抗原結合部位がヒトＧＤＦ−１５に対する結合部位であり、他の抗原結合部位が異なる抗原に対する結合部位である。
この態様の第２側面による異なる抗原の非限定例としては、ｉ）同じがんに高レベルでＧＤＦ−１５と共発現される、細胞表面抗原（例として同じ患者のがんの原発部位組織である組織の非がん性部分から得られた対照試料と比較して、より高いレベル）、および、ｉｉ）腫瘍に対する免疫系の細胞動員に有用な抗原として知られている、免疫系の細胞上の細胞表面抗原、が挙げられる。
上の態様に従う本発明のさらに別の態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、薬物に連結されている。この態様の非限定的な側面において、薬物は、知られている抗がん剤および／または免疫刺激分子であり得る。
知られている抗がん剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、およびイホスファミドなどのアルキル化剤；アザチオプリンおよびメルカプトプリンなどの抗代謝物；ビンカアルカロイド（例として、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシン）、タキサン（例として、パクリタキセル、ドセタキセル）、エトポシドおよびテニポシドなどのアルカロイド；カンプトテシン（例として、イリノテカンおよびトポテカン）などのトポイソメラーゼインヒビター；アクチノマイシン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンおよびマイトマイシンなどの細胞傷害性抗生物質；ならびに放射性同位元素が挙げられる。
本発明の抗体またはその抗原結合部分の抗がん剤への連結は、抗がん剤なしの抗体と比較して、より強力ながん腫瘍成長阻害をもたらすことが予想されるが、その理由は、得られたコンジュゲートが、腫瘍中のＧＤＦ−１５の存在のために腫瘍部位に蓄積して、腫瘍の部位での抗がん剤の蓄積および腫瘍に対する抗がん剤の効果の増強につながるからである。
上の態様に従うさらなる態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、アミノ酸タグによって修飾される。かかるタグの非限定的な例としては、ポリヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびｃ−ｍｙｃタグが挙げられる。タグは、様々な目的のために使用されてもよい。例えば、それらは、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分の精製を補助するために使用されてもよいし、抗体またはその抗原結合部分の検出のために使用されてもよい（例として診断アッセイにおいて使用されるとき）。好ましくは、かかるタグは、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分のＣ末端またはＮ末端に存在する。
上の態様に従う好ましい態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分は、哺乳動物、好ましくはヒト患者におけるがん成長を阻害可能である。
上の態様に従う別の好ましい態様において、ヒトＧＤＦ−１５は、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である。
上の態様に従うさらに別の好ましい態様において、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な抗体またはその抗原結合部分の結合は、ヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。
好ましくは、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能な本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、単離された抗体である。
本発明に従う上の抗体またはその抗原結合部分の好ましい態様において、抗体は、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する。好ましくは、抗体は、全長の抗体、より好ましくは全長のＩｇＧ抗体である。
本発明はまた、上で定義される抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターにも関する。
さらに、本発明はまた、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分を産生可能な細胞株をも提供する。
一態様において、細胞株は、その技術分野において知られており、抗体またはその抗原結合部分の産生に好適な、いずれの細胞株にも由来され得る。
好ましい態様において、細胞株は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３である。
別の好ましい態様において、細胞株は、上で定義される本発明に従う発現ベクターを含有する。
Ｂ）医薬組成物
さらなる態様において、本発明は、上で定義される抗体またはその抗原結合部分のいずれかを含む、医薬組成物に関する。
本発明に従う医薬組成物は、抗体およびその部分を含有する医薬組成物の調製のための知られている基準に従って調製される。
例えば、組成物は、例として担体、賦形剤または安定剤などの薬学的に許容し得る構成要素を使用することによって、など、それらが適切に保管および投与され得るような様式で、調製される。
かかる薬学的に許容し得る構成要素は、医薬組成物を患者へ投与するときに使用される量では、毒性ではない。医薬組成物へ加えられる薬学的に許容し得る構成要素は、医薬組成物の特定の意図された用途および投与経路に依存してもよい。
一般に、本発明に関連して使用される薬学的に許容し得る構成要素は、例としてRemington's Pharmaceutical Sciences, Ed. AR Gennaro, 20th edition, 2000, Williams & Wilkins, PA, USAからの、当該技術分野において利用可能な知識に従って使用される。
Ｃ）治療方法およびこれらの方法における使用のための製品
本発明はさらに、哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法に関する。方法は、上で定義される抗体もしくはその抗原結合部分または上で定義される医薬組成物を該哺乳動物へ投与することを含む。代わりに、本発明は、これらの方法における使用のための、上で定義される抗体またはその抗原結合部分または上で定義される医薬組成物に関する。これらの態様の極めて好ましい側面において、哺乳動物は、ヒト患者である。
本発明はさらに、哺乳動物におけるがんを処置するための方法に関する。方法は、上で定義される抗体もしくはその抗原結合部分または上で定義される医薬組成物を該哺乳動物へ投与することを含む。代わりに、本発明は、これらの方法における使用のための、上で定義される抗体またはその抗原結合部分または上で定義される医薬組成物に関する。これらの態様の極めて好ましい側面において、哺乳動物は、ヒト患者である。
本発明を考慮すると、WO 2005/099746、WO 2009/021293およびJohnen H et al., Nature Medicine, 2007から知られている抗ＧＤＦ−１５抗体は、がん誘発性減量しか阻害しないが、ヒトＧＤＦ−１５の他の効果（例えばがん成長に関連するものなど）を阻害しそこなうことが明らかとなる。
本発明は、当該技術分野において観察される効果と比較して、驚くべきいくつかの利点に関する。
とりわけ、本発明の１つの主要な恩恵は、本明細書に開示の抗ＧＤＦ−１５抗体が、がん誘発性減量および／またはがん悪液質をより効果的に処置するために使用され得ることにある。
例えば、本発明に従う抗体による処置は、がん悪液質を完全に予防し得る（予防的に施されるとき）か、または、がん悪液質を完全に戻し得る（がん悪液質の発病後に施されるとき）。
その上、本発明に従う抗体は、悪液質の予防のための予防的処置の間でさえも、処置された哺乳動物の体重を増加させ得る。同様に、がん悪液質の発病後に開始された治療的処置の過程において、本発明に従う抗体は、体重の減少を逆転し得るのみならず、がん悪液質発病前のその体重と比較して、処置された哺乳動物の体重もまた増加させ得ることが期待される。
本発明に従う抗体の、この予期しない効果は、様々な臨床的状況において有益であり得る。例えば、がんに対して薬学的に活性のある多くの成分（例として様々な化学療法薬）の投与によって、ヒト患者を含む哺乳動物の体重の減少がもたらされ得る。体重のかかる追加の減少は、本発明に従う抗体の投与に起因する体重の増加によって対抗され得た。
したがって、本発明に従う抗体の使用は、追加の化学療法薬との併用レジメンにとって、とくに有利かつ安全であり得る。同様に、本発明に従う抗体の使用は、がんの発病前および／またはがん悪液質の発病前に既に低体重であったヒト患者などの哺乳動物にとって、とくに有利であり得る。低体重の患者は、例えば悪液質患者、例として体格指数が１８ｋｇ／ｍ２未満の患者であり得る。
その上、予想外にも、本発明によると、抗体は、がん悪液質の処置に効果的であるのみならず、がんの処置にもまた効果的である。
よって、本発明に従う抗体の使用のための処置の方法および製品は、がん誘発性減量および／またはがん悪液質の夫々を患うがん患者下位群(sub-groups)の処置にとくに有益であることが期待される。
しかしながら、本発明に従う効果はまた、本明細書に言及されるがんの完全患者群(a complete patient group)の処置にも有利であると期待される：がんそれ自体と、がん誘発性減量および／またはがん悪液質との両方に対して効果的な本発明に従う抗体を使用することによって、がんおよびがん悪液質の処置は、すべてのがん患者に対し同じ処置を使用することで、彼らががん誘発性減量および／またはがん悪液質を患うか否かに関係なく、単純化されてもよい。これは、がんおよびがん悪液質に対する抗体の二重効果に起因して、これらの抗体が、がん悪液質の処置のための追加の薬物に対するニーズを不要なものとするであろうことが予想される理由である。
同様に、本発明に従う抗体の二重効果に起因して、がん誘発性減量および／またはがん悪液質を診断する必要性もまた、なくなる可能性がある。それ故に、治療および診断の全費用が低減されるであろうことが期待される。
したがって、上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、がん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防するかまたは完全に戻すための方法である。この方法またはこの方法における使用のための抗体、抗原結合部分もしくは医薬組成物のより好ましい態様において、がん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防するための方法である。この方法またはこの方法における使用のための抗体、抗原結合部分もしくは医薬組成物のより好ましい代替的態様において、がん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に戻すための方法である。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、
ｉ）がん、および
ｉｉ）がん悪液質
の両方を患っている哺乳動物しか、方法において処置されない。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、方法は、哺乳動物の体重を、がん悪液質発病前のその体重と比較して増加させる。好ましくは、哺乳動物の体重における増加分は、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、少なくとも１．５％、好ましくは少なくとも２．５％、より好ましくは少なくとも５％である。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、方法は、同じ哺乳動物において、がんを処置するのみならず、がん悪液質もまた処置するための方法である。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、抗体は、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する。好ましくは、抗体は、全長の抗体、より好ましくは全長のＩｇＧ抗体である。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物のさらに好ましい態様において、抗体は、Ｆｃ受容体に結合可能なＦｃ部分を有する。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、哺乳動物のがん細胞は、ＧＤＦ−１５を内因性発現するか、および／または、哺乳動物のがん細胞は、哺乳動物の非がん性細胞におけるＧＤＦ−１５の内因性発現を刺激する。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、哺乳動物のがん細胞は、それらがＧＤＦ−１５を内因性発現することにおいて特徴付けられる。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、哺乳動物は、ヒト患者である。
上の方法または本発明に従うこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、ヒトＧＤＦ−１５は、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、ヒト患者は、投与前に血清中のＧＤＦ−１５レベルが上昇している。血清中のＧＤＦ−１５レベルが上昇した患者の下位群において、本発明に従う処置方法は、がん成長を阻害するのにとくに有効であると期待される。この態様の最も好ましい側面において、ＧＤＦ−１５レベルは、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託されたハイブリドーマ細胞株Ｂ１−２３から得られる本発明に従う抗体を使用して測定された、好ましくは免疫化学によって測定された、ＧＤＦ−１５タンパク質レベルである。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の別の態様において、抗体またはその抗原結合部分は、方法において使用される、がんに対して薬学的に活性な唯一の成分である。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の代替的態様において、抗体またはその抗原結合部分は、がんに対して薬学的に活性な１以上のさらなる成分と組み合わせて使用される。この態様の一側面において、がんに対して薬学的に活性な１以上のさらなる成分は、上で定義された、知られている抗がん剤および／または免疫刺激分子である。
よって、抗がん剤は、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシルおよびイホスファミドなどのアルキル化剤；アザチオプリンおよびメルカプトプリンなどの抗代謝物；ビンカアルカロイド（例として、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシン）、タキサン（例として、パクリタキセル、ドセタキセル）、エトポシドおよびテニポシドなどのアルカロイド；カンプトテシン（例としてイリノテカンおよびトポテカン）などのトポイソメラーゼインヒビター；アクチノマイシン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンおよびマイトマイシンなどの細胞傷害性抗生物質；ならびに、放射性同位元素から選択され得る。
ヒト患者を含む哺乳動物の体重に対する本発明に従う抗体の効果を高めることに起因して、抗体またはその抗原結合部分と、がんに対して薬学的に活性のある成分とのこれらの併用は、とくに安全であることが期待される。なぜなら、それらは、がんに対して薬学的に活性のある成分の投与の結果もたらされ得る追加の減量を相殺するからである。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、がんは、神経膠腫を含む脳のがん、神経系のがん、黒色腫、肺がん、口唇および口腔がん、肝がん、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膀胱がん、子宮頸がん、子宮体がん、精巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、喉頭がん(larynx cancer)、咽頭がん(pharynx cancer)、食道がん、胃がんおよび結腸直腸(colorectal)がんを含む消化管の腫瘍、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がんおよび乳がんからなる群から、好ましくは、黒色腫、前立腺がん、乳がん、神経膠腫を含む脳のがん、結腸直腸がん、胃がん、食道がんおよび卵巣がんからなる群から選択され、および、最も好ましくは黒色腫である。
一態様において、がんは、子宮内膜癌などの子宮内膜がん、乳がんのサブタイプを含む乳がん、とりわけトリプルネガティブ乳がんおよび尿路上皮細胞癌などの膀胱がんをさらに含む、上の群から選択される。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の別の好ましい態様において、がんによって形成された１以上の腫瘍（単数または複数）は、同じ患者のがんの原発部位組織である組織の非がん性部から得た対照試料と比較して、投与前により高いヒトＧＤＦ−１５レベルを有し、好ましくは１．２倍高いレベル、より好ましくは１．５倍高いレベル、さらにより好ましくは２倍高いレベル、および、最も好ましくは５倍高いレベルを有する。上の対照試料と比較して、がんによって形成された１以上の腫瘍（単数または複数）においてより高いＧＤＦ−１５レベルを有する患者の下位群において、本発明に従う処置方法は、がん成長を阻害するのに特に有効であることが期待される。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の極めて好ましい態様において、がんを処置するための方法は、がん成長を阻害することを含む。この態様の好ましい側面において、がん成長は停止される。より好ましい側面においては、がんは縮小する。
上の方法またはこれらの方法における使用のための抗体、その抗原結合部分もしくは医薬組成物の好ましい態様において、がんを処置するための方法は、ヒト患者におけるＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるがん細胞の死滅の誘導を含む。ＧＤＦ−１５媒介性の知られている免疫学的監視レギュレータＮＫＧ２Ｄの下方制御を妨害するそれらの能力に起因して、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分は、免疫系とは独立した抗体またはその抗原結合部分の効果に加えて、免疫学的監視を回復し、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞によるがん細胞の死滅を誘導することが期待されている、
Ｄ）キット
本発明はまた、上で定義される医薬組成物を含むキットをも提供する。
一態様において、キットは、上で定義される本発明に従う方法における使用のためのキットである。
さらなる態様において、本発明はまた、本発明に従う抗体またはその抗原結合部分のいずれかを含む、診断キットをも提供する。
一態様において、診断キットは、がんによって形成されたがん患者の腫瘍（単数または複数）が、同じ患者のがんの原発部位組織である組織の非がん性部分から得られた対照試料と比較して、より高いヒトＧＤＦ−１５レベルを有するかどうかを検出するために使用されてもよい。
別の態様において、診断キットは、ヒトがん患者が血清中の上昇ＧＤＦ−１５レベルを有するかどうかを検出するために使用されてもよい。
Ｅ）配列
本出願において言及されるアミノ酸配列は以下である（Ｎ末端からＣ末端への順序；一文字のアミノ酸コードにより表される）：
配列番号１（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３のポリペプチド配列からの、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む重鎖可変ドメインの領域）：
QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYC
配列番号２（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３のポリペプチド配列からの、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む軽鎖可変ドメインの領域）：
DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC
配列番号３（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の重鎖ＣＤＲ１領域ペプチド配列）：
GFSLSTSGMG
配列番号４（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の重鎖ＣＤＲ２領域ペプチド配列）：
IYWDDDK
配列番号５（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の重鎖ＣＤＲ３領域ペプチド配列）：
ARSSYGAMDY
配列番号６（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の軽鎖ＣＤＲ１領域ペプチド配列）：
QNVGTN
モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の軽鎖ＣＤＲ２領域ペプチド配列：
SAS
配列番号７（モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の軽鎖ＣＤＲ３領域ペプチド配列）：
QQYNNFPYT
配列番号８（組換え成熟ヒトＧＤＦ−１５タンパク質）：
GSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
配列番号９（ヒトＧＤＦ−１５前駆体タンパク質）：
MPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
配列番号１０（ヒトＧＤＦ−１５前駆体タンパク質＋Ｎ末端およびＣ末端ＧＳＧＳリンカー）：
GSGSGSGMPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCIGSGSGSG
配列番号１１（Ｆｌａｇペプチド）：DYKDDDDKGG
配列番号１２（ＨＡペプチド）：YPYDVPDYAG
配列番号１３（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：ELHLRPQAARGRR
配列番号１４（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：LHLRPQAARGRRR
配列番号１５（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：HLRPQAARGRRRA
配列番号１６（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：LRPQAARGRRRAR
配列番号１７（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：RPQAARGRRRARA
配列番号１８（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：PQAARGRRRARAR
配列番号１９（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：QAARGRRRARARN
配列番号２０（ヒトＧＤＦ−１５由来ペプチド）：MHAQIKTSLHRLK
配列番号２５（Ｂ１−２３に結合するＧＤＦ−１５エピトープの部分を含むＧＤＦ−１５ペプチド）：
EVQVTMCIGACPSQFR
配列番号２６（Ｂ１−２３に結合するＧＤＦ−１５エピトープの部分を含むＧＤＦ−１５ペプチド）：
TDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI
本出願において言及される核酸配列は以下である（５’から３’への順序；標準の核酸コードに従い表される）：
配列番号２１（配列番号１で定義されたアミノ酸配列をコードするＤＮＡヌクレオチド配列）：
CAAGTGAAGCTGCAGCAGTCAGGCCCTGGGATATTGCAGTCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGTACTTCTGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGGGATGATGACAAGCGCTATAACCCAACCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATCCCTCCAGAAACCAGGTATTCCTCAAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGT
配列番号２２（配列番号２で定義されたアミノ酸配列をコードするＤＮＡヌクレオチド配列）：
GACATTGTGCTCACCCAGTCTCCAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTGGCCTGGTTTCTACAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAAGCACTTATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAACGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGT
配列番号２３（配列番号５で定義されたアミノ酸配列をコードするＤＮＡヌクレオチド配列）：
GCTCGAAGTTCCTACGGGGCAATGGACTAC
配列番号２４（配列番号７で定義されたアミノ酸配列をコードするＤＮＡヌクレオチド配列）：
CAGCAATATAACAACTTTCCGTACACG
配列番号２７（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖のアミノ酸配列）：
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTITKDPSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSSYGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号２８（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列）：
QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTITKDPSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSSYGAMDYWGQGTLVTVSS
配列番号２９（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖定常ドメインのアミノ酸配列）：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号３０（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖のアミノ酸配列）：
DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWFQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAAYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号３１（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列）：
DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWFQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAAYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKR
配列番号３２（Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列）：
APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号３３（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖のアミノ酸配列）：
QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYCARSSYGAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号３４（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列）：
QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYCARSSYGAMDYWGQGTSVTVSS
配列番号３５（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の重鎖定常ドメインのアミノ酸配列）：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号３６（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖のアミノ酸配列）：
DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号３７（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列）：
DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRTVA
配列番号３８（キメラＢ１−２３ 抗ＧＤＦ−１５抗体の軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列）：
APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｆ）例
本発明を、以下の非限定例によって例示する。
例１：マウスＧＤＦ−１５抗体Ｂ１−２３の生成および特徴付けならびにキメラおよびヒト化抗体の生成
抗体Ｂ１−２３を、ＧＤＦ−１５ノックアウトマウスで生成した。組換えヒトＧＤＦ−１５（配列番号８）を免疫原として使用した。
ｍＡｂ−Ｂ１−２３を産生するハイブリドーマ細胞株Ｂ１−２３を、ブダペスト条約に従って、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託した。
市販の試験ストリップシステムによって、Ｂ１−２３はＩｇＧ２ａ（カッパ鎖）アイソタイプであると同定された。表面プラズモン共鳴測定を使用して、解離定数（Ｋｄ）を次のように決定した：
モノクローナル抗ヒトＧＤＦ−１５抗体である抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の結合は、Bio-Rad（登録商標） ProteOn（商標） XPR36システムおよびBio-Rad（登録商標） GLCセンサーチップを使用する表面プラズモン共鳴測定を採用して測定した。
バイオセンサーを製造するために、組換え成熟ヒトＧＤＦ−１５タンパク質を、フローセル１および２の上に固定化した。１つのフローセル上では、バキュロウイルスをトランスフェクトした昆虫細胞（HighFive昆虫細胞）由来の組換えＧＤＦ−１５を、もう一方のフローセル上では、E. coliでの発現に由来する別の組換えタンパク質を用いた。ＧＬＣセンサーチップを、製造業者の推奨に従って、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド）およびＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩）（Bio-Rad（登録商標） ProteOn（商標） Amine Coupling Kit）を使用して活性化させ、センサー表面にその後、約６００ＲＵ（１Ｒｕ＝１ｐｇｍｍ−２）の密度までタンパク質をロードした。
未反応の結合基は、次いで、１ＭエタノールアミンｐＨ８．５で灌流することによりクエンチし、バイオセンサーは、ランニング緩衝液でチップを灌流することによって平衡化した（１０ＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３．４ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％のTween（登録商標）20、ｐＨ７．４、ＨＢＳ１５０と称する）。対照として２つのフローセルを用い、１つは空でタンパク質結合はなく、１つは非生理的なタンパク質パートナー（ヒトインターロイキン−５）に結合され、これは、同一のカップリング化学および同一のカップリング密度を使用して固定化した。相互作用の測定のために、抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３をＨＢＳ１５０に溶解し、分析物として６つの異なる濃度で使用した（濃度：０．４、０．８、３、１２、４９および９８ｎＭ）。
分析物は、間欠再生を回避するために、ワンショット速度設定を使用して、バイオセンサー上に灌流し、すべての測定は２５℃で行い、１００μｌ／分の流速を使用した。バルクフェイス効果(bulk face effect)を処理するために、センサーマトリックスへの非特異的な結合を、空のフローセル（フローセル３）のＳＰＲデータをすべての他のＳＰＲデータから減算することにより除去した。得られたセンサーグラム(sensogram)を、ソフトウェアProteon Managerバージョン３．０を用いて分析した。結合反応速度の解析のために、１：１ラングミュア型相互作用を仮定した。会合速度定数について、５．４±０．０６×１０５／Ｍｓ（ｋｏｎ）の値、および解離速度定数について、４．３±０．０３×１０−４／ｓ（ｋｏｆｆ）の値を決定することができた（値は、抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３と昆虫細胞発現に由来するＧＤＦ−１５の相互作用についてのもの）。
平衡解離定数は、式ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎを使用して計算し、約７９０ｐＭの値を得た。大腸菌発現由来のＧＤＦ−１５と抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の相互作用の親和性値は、２倍未満で異なり、昆虫細胞および大腸菌由来のＧＤＦ−１５の速度定数は、約４５％偏っており、よってＳＰＲ測定の精度内であり、実際の親和性の差を反映していない可能性が高い。使用した条件下で、抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３はヒトインターロイキン−５への結合を示しておらず、よって相互作用データおよび抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３の特異性を確認する。
組換えヒトGDF-15（Baculovirusをトランスフェクトした昆虫細胞において発現した）のアミノ酸配列は、以下である：
GSARNGDHCP LGPGRCCRLH TVRASLEDLG WADWVLSPRE VQVTMCIGAC PSQFRAANMH AQIKTSLHRL KPDTVPAPCC VPASYNPMVL IQKTDTGVSL QTYDDLLAKD CHCI
（配列番号８）
このように、表面プラズモン共鳴測定を使用して、７９０ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を決定した。比較として：治療的に使用する抗体リツキシマブは、有意により低い親和性を有する（Ｋｄ＝８ｎＭ）。
マウス抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３から、本発明に従うキメラ抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体を、マウス抗体の定常ドメインを、ヒトＩｇＧ１抗体の定常ドメイン（トラスツズマブ骨格）に置き換えることによって、生成した。このキメラ抗体の重鎖のアミノ酸配列を配列番号３３に示し、このキメラ抗体の軽鎖のアミノ酸配列を配列番号３６に示す。
キメラ抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３から、本発明に従うヒト化抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体を、キメラ抗体の可変ドメインをヒト化することによって、すなわちキメラ抗体のフレームワーク領域をヒト配列に置き換えることによって、開発した。このヒト化抗体の重鎖のアミノ酸配列を配列番号２７に示し、このヒト化抗体の軽鎖のアミノ酸配列を配列番号３０に示す。この抗体は、Ｈ１Ｌ５抗ＧＤＦ−１５抗体またはヒト化Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５抗体またはＨ１Ｌ５抗体とも称する。
上述のキメラ抗ヒトＧＤＦ−１５ ｍＡｂ−Ｂ１−２３抗体および上に示されるヒト化Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５抗体を生成するために、抗体配列をコードするｃＤＮＡを最適化し、遺伝子を合成した。次いで遺伝子配列をクローニング／発現ベクターシステム中へクローニングした。これらのベクターから、エンドトキシンレベルが低いプラスミドＤＮＡを合成した。
次にプラスミドＤＮＡを、ＣＨＯ細胞中へ一過的にトランスフェクトした後、プロテインＡバイオセンサーを使用する抗体発現の分析および定量を行った。抗体発現のための候補培養物のｃＤＮＡを配列決定した。得られたモノクローナル抗体を分析した（例７〜９を参照）。
例２：ＧＤＦ−１５媒介効果のｍＡＢ Ｂ１−２３による拮抗
ａ）ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上で発現されるＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２Ｄ）受容体は、腫瘍に対する免疫学的監視において重要な役割を果たすことが知られている。形質転換およびウイルス感染細胞はリガンドを発現し、これはＮＫＧ２Ｄ受容体に結合して、記載された免疫細胞の細胞傷害性エフェクター機能を活性化させる。こうして、形質転換された細胞を検出して、免疫系によって排除することができる。免疫細胞を、組換えヒトＧＤＦ−１５または腫瘍細胞分泌のＧＤＦ−１５のいずれかでin vitroで７２時間処置した後、リンパ球の細胞表面上のＮＫＧ２Ｄの発現レベルは、下方制御された（図１）。
７２時間のインキュベーション後、免疫細胞を以下のＦＡＣＳ抗体で染色した：抗ＣＤ３、抗ＣＤ５６、抗ＮＫＧ２Ｄ。この抗体の組合せを使用して、実験は、ＮＫ細胞およびそれらのＮＫＧ２Ｄ表面発現に焦点を当てた。免疫細胞上の低いＮＫＧ２Ｄレベルは、腫瘍／標的細胞の溶解の障害をもたらした。ＧＤＦ−１５媒介性のＮＫＧ２Ｄの下方制御は、ｍＡｂ Ｂ１−２３によって防止された。
したがって、ヒトＧＤＦ−１５は、リンパ球の細胞表面上のＮＫＧ２Ｄの発現を下方制御し、それによって腫瘍に対する免疫学的監視を下方制御すると結論される。ヒトＧＤＦ−１５に結合することにより、本発明の抗体は、ＮＫＧ２ＤのＧＤＦ−１５媒介性下方制御を防止することが可能であり、免疫学的監視を回復し、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞による癌細胞の死滅を誘導することができるはずである。ｍＡｂ Ｂ１−２３抗体のＣＤＲ領域が、キメラ抗体およびヒト化抗体のＣＤＲ領域に対応することを考えると、これらの抗体の結合特性を含む機能特性は同様であることが期待される。
ｂ）卵巣がん細胞株ＳＫ−ＯＶ−３の、組換えＧＤＦ−１５による処置は、ＡＫＴのリン酸化をもたらした。ＡＫＴは分子であって、ＰＩ３Ｋ経路の一部であり、細胞の活性化および成長に寄与する。この実験では、ＳＫ−ＯＶ−３細胞を、１０ｎｇ／ｍｌの組換えＧＤＦ−１５により３７℃、５％ＣＯ２で１０分間処置した。２μｇのｍＡｂ−Ｂ１−２３の１０ｎｇ／ｍｌのＧＤＦ−１５による３７℃でのプレインキュベーションは、ＧＤＦ−１５媒介性のＡＫＴリン酸化をブロックした（図２）。これは、ｍＡｂ−Ｂ１−２３の中和効果を示した。
ｃ）免疫細胞の、組換えＧＤＦ−１５による処置は、サイトカインまたはストレスのいずれかによって活性化されるところの、キナーゼであるＪＮＫのリン酸化をもたらした。１０ｎｇ／ｍｌのＧＤＦ−１５の、２μｇのｍＡｂ−Ｂ１−２３による拮抗（３７℃での５分間のプレインキュベーション）は、ＧＤＦ−１５媒介性のＪＮＫ１／２リン酸化をブロックした（図３）。
例３：ｍＡｂ Ｂ１−２３を使用するがん細胞成長の阻害
Ｂ１−２３が生成したデータは、抗体の、in vitroでのがん細胞に対する抗成長効果を示した。最も強力な抗成長効果は、多くのＧＤＦ−１５を生成する前立腺がん細胞株ＬｎＣａＰを使用して観察された。代謝アッセイ（Alamar Blue（登録商標）アッセイ）は、ｍＡｂ−Ｂ１−２３が存在する場合に、抗体が適用されない対照群と比べて、７２時間後に３０％の成長の減少を示した。抗体の細胞傷害性効果は異なるアッセイで除外されているため、この効果は、ＧＤＦ−１５の遮断後の、細胞分裂速度の顕著な減少を証明する。
例４：ｍＡｂ Ｂ１−２３はin vivoで腫瘍の成長を阻害する
以下のin vivo試験を行った。
in vivoでのＢ１−２３の抗腫瘍効果を評価するために、Ｂａｌｂ／ｃｎｕ／ｎｕヌードマウスを、黒色腫細胞株ＵＡＣＣ−２５７の異種移植片の設定で使用した。マウスは、抗体Ｂ１−２３またはＰＢＳのいずれかで処置した。各処置コホートには、１０匹のＢａｌｂ／ｃｎｕ／ｎｕヌードマウスが含まれていた。
注射前に、ＵＡＣＣ−２５７黒色腫細胞は、全ての汚染を除去した完全培地中で成長させた。細胞は、細胞培養フラスコ中で７０〜８０％のコンフルエンスに到達したときに回収した。次いで細胞をＰＢＳで洗浄して計測した。１×１０７の生存細胞をＰＢＳに懸濁させた。
最初の注射／処置は、６週齢のＢａｌｂ／ｃｎｕ／ｎｕヌードマウスに投与した。マウスの接種領域をエタノールで清浄にした。ＵＡＣＣ ２５７細胞を混合し、腫瘍細胞上の負圧を回避するために、針なしで注射器に引き入れた。ＰＢＳ中の１×１０７個の細胞を含む細胞懸濁液を、マウスの下脇腹に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。
Ｂ１−２３（２５ｍｇ／ｋｇ体重）または同量のＰＢＳのいずれかの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射は、腫瘍細胞接種の直後（１日目とする）に開始し、週２回投与した。腫瘍は４８日間成長させた。腫瘍の直径をノギスで測定し、ｍｍ３での腫瘍体積は、以下の式によって算出した。
体積＝（幅）２×長さ／２
試験から得られた結果を図４に示す。
図に実証されるとおり、Ｂ１−２３で処置された動物コホートの腫瘍サイズは、ＰＢＳ対照群と比較して、有意に減少した。
ｍＡｂ Ｂ１−２３抗体のＣＤＲ領域が、キメラ抗体およびヒト化抗体のＣＤＲ領域に対応することを考えると、これらの抗体の結合特性を含む機能特性は同様であることが期待される。
例５：ｍＡｂ Ｂ１−２３はヒトＧＤＦ−１５の立体構造エピトープまたは不連続エピトープを認識する
エピトープマッピング：ＧＤＦ−１５由来の１３マー直鎖ペプチドに対する、モノクローナルマウス抗体ＧＤＦ−１５
抗原：ＧＤＦ−１５：
（リンカー付き３２２アミノ酸）（配列番号１０）
タンパク質配列は、１つのアミノ酸のシフトを有する１３マーのペプチドに翻訳された。Ｃ末端およびＮ末端をニュートラルＧＳＧＳリンカーにより伸長して、切り詰められたペプチドを回避した（太字）。
対照ペプチド：
Ｆｌａｇ：DYKDDDDKGG（配列番号１３）、７８スポット；ＨＡ：YPYDVPDYAG（配列番号１４）、７８スポット（各アレイコピー）
ペプチドチップ識別子：
000264_01（10/90、Ala2Aspリンカー）
染色条件：
標準緩衝液：PBS、ｐＨ７．４＋０．０５％Tween（登録商標） 20
ブロッキング緩衝液：Rocklandブロッキング緩衝液MB-070
インキュベーション緩衝液：標準緩衝液と１０％のRocklandブロッキング緩衝液MB-070
一次試料：モノクローナルマウス抗体ＧＤＦ−１５（１μｇ/μｌ）：１：１００の希釈で、５００ｒｐｍでわずかに振盪しつつ、インキュベーション緩衝液中４℃で１６時間染色
二次抗体：ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）IRDye680、１：５０００の希釈で、インキュベーション緩衝液中室温（ＲＴ）で３０分間染色
対照抗体：モノクローナル抗ＨＡ（12CA5）-LL-Atto 680（１：１０００）、モノクローナル抗ＦＬＡＧ（Ｍ２）-FluoProbes752（１：１０００）；インキュベーション緩衝液中ＲＴで１時間染色。
スキャナー：
Odyssey（登録商標） Imaging System, LI-COR Biosciences
セッティング：オフセット：１ｍｍ；解像度：２１μｍ。赤／緑の強度：７／７
結果：
３０分間の標準的な緩衝液および３０分間のブロッキング緩衝液における予備膨潤の後、１０、１２および１５マーのＢ７Ｈ３由来の直鎖ペプチドを有するペプチドアレイを、１：５０００希釈の二次ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）IRDye680抗体と共に室温で１時間インキュベートして、二次抗体のバックグラウンドの相互作用を分析した。PEPperCHIP（登録商標）は、標準緩衝液で２×１分間洗浄し、蒸留水ですすぎ、空気流中で乾燥させた。Odyssey（登録商標） Imaging Systemを用いて２１μｍの解像度および７／７の緑／赤の強度でリードアウトを行った：高頻度バインダー(frequent binders)として知られている、アルギニンリッチペプチド（ELHLRPQAARGRR（配列番号１５）、LHLRPQAARGRRR（配列番号１６）、HLRPQAARGRRRA（配列番号１７）、LRPQAARGRRRAR（配列番号１８）、RPQAARGRRRARA（配列番号１９）、PQAARGRRRARAR（配列番号２０）およびQAARGRRRARARN（配列番号２１））と、塩基性ペプチドMHAQIKTSLHRLK（配列番号２２）との、荷電抗体染料とのイオン相互作用による、弱い相互作用が観察された。
標準的な緩衝液中での１０分間の予備膨潤後、ペプチドマイクロアレイを、１：１００希釈のモノクローナルマウス抗体ＧＤＦ−１５で、４℃で終夜インキュベートした。次に標準緩衝液（２×１分）で繰り返し洗浄し、続いて１：５０００希釈の二次抗体と共に室温で３０分間インキュベートした。標準緩衝液での２×１０秒間の洗浄と蒸留水での短時間のすすぎの後、PEPperCHIP（登録商標）を空気流中で乾燥させた。リードアウトは、Odyssey（登録商標） Imaging Systemを用いて２１μｍの解像度および７／７の緑／赤の強度で、対照ペプチドの抗ＨＡおよび抗ＦＬＡＧ（Ｍ２）抗体による染色の前後に行った。
ＧＤＦ−１５由来の直線状の１３マーペプチドのいずれもが、過剰制御された強度であっても、モノクローナルマウス抗体ＧＤＦ−１５と相互作用しないことが示された。しかしながらアレイをフレームするＦｌａｇおよびＨＡ対照ペプチドの染色は、良好かつ均一なスポット強度を生じさせた。
概要：
ＧＤＦ−１５に対するモノクローナルマウスＧＤＦ−１５抗体のエピトープマッピングにより、抗原由来の１３マーペプチドを持ついかなる線形エピトープも明らかにならなかった。この所見によれば、モノクローナルマウス抗体ＧＤＦ−１５は、部分的エピトープの低親和性立体構造エピトープまたは不連続エピトープを認識する可能性が、極めて高い。二次抗体のみによる、背景染色を超える任意のＧＤＦ−１５シグナルの明らかな欠如のため、PepSlide（登録商標）アナライザによるスポット強度の定量化およびその後のペプチド注釈(annotation)は省略した。
例６：質量分析エピトープ切除およびエピトープ抽出によるペプチドリガンドエピトープの構造同定
抗体Ｂ１−２３に結合する組換えヒトＧＤＦ−１５のエピトープを、エピトープ切除法およびエピトープ抽出法によって同定した（Suckau et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 December; 87(24): 9848-9852.; R.Stefanescu et al., Eur.J.Mass Spectrom. 13, 69-75 (2007)）。
抗体カラムの調製のために、抗体Ｂ１−２３を、セファロースに結合したＮＨＳ活性化６−アミノヘキサン酸に添加した。セファロース結合抗体Ｂ１−２３を次に０．８ｍｌのマイクロカラムに装填し、ブロッキング緩衝液および洗浄緩衝液で洗浄した。
エピトープ抽出実験：
組換えヒトＧＤＦ−１５を、トリプシンで、３７℃で２時間消化し（溶液中）、タンパク質中のトリプシン切断部位に応じて、異なるペプチドを得た。完全消化した後、ペプチドを、固定化抗体Ｂ１−２３を含むアフィニティカラムにロードした。ＧＤＦ−１５の未結合ペプチドおよび潜在的に結合したペプチドを、質量分析のために使用した。質量分析法によるペプチドの同定は不可能であった。これは、免疫複合体Ｂ１−２３におけるＧＤＦ−１５の結合領域が不連続または立体構造エピトープを含むことを、さらに指示した。連続した線形エピトープの場合、消化されたペプチドは、エピトープペプチドにトリプシン切断部位が存在する場合を除いて、その相互作用パートナーに結合するはずである。不連続または立体構造エピトープは、以下に記載のエピトープ切除法により確認することができた。
エピトープ切除実験：
アフィニティカラム上の固定化抗体Ｂ１−２３は、その後、組換えＧＤＦ−１５で２時間インキュベートした。アフィニティカラム上で形成された免疫複合体を次に、トリプシンを用いて３７℃で２時間インキュベートした。切断により、組換えＧＤＦ−１５由来の異なるペプチドがもたらされた。固定化抗体自体は、タンパク質分解的に安定である。抗体によって遮蔽され、したがってタンパク質分解的切断から保護された、消化されたＧＤＦ−１５タンパク質から得られたペプチドを、酸性条件下（ＴＦＡ、ｐＨ２）で溶出し、回収し、質量分析により同定した。
ＭＳ／ＭＳ同定を使用するエピトープ切除方法によって、以下のペプチドが得られた：

抗体Ｂ１−２３に結合するヒトＧＤＦ−１５の一部は、不連続または立体構造エピトープを含む。質量分析法は、免疫複合体の形成に関与している、ＧＤＦ−１５タンパク質における２つのペプチドを同定した。これらのペプチドは、ＧＤＦ−１５アミノ酸配列の位置４０〜５５（EVQVTMCIGACPSQFR）および９４〜１１４（TDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI）に限定されている。このように、これらの２つのペプチドは、抗体Ｂ１−２３に結合するＧＤＦ−１５タンパク質のエピトープを含む。
また一方で、ｍＡｂ Ｂ１−２３抗体のＣＤＲ領域が、キメラおよびヒト化抗体のＣＤＲ領域に対応することから、これらの抗体の結合特性が同様であることが予想される。
例７：抗ＧＤＦ−１５抗体による、がん誘発性減量の処置
基本的な動物研究第140123号において、１処置群につき１０匹のＢａｌｂ／ｃｎｕ／ｎｕマウスに対し、１動物につき１０×１０６個のＵＡＣＣ−２５７細胞を、マトリゲルと１：１の体積比（１００μｌの細胞＋１００μｌのマトリゲル）で、皮下に植え付けた。動物を、下に示される夫々の抗体で同日に処置した：
ダカルバジン群（群１）は、参照群／腫瘍成長アレストに対する陽性対照として働いた（ヒトにおける悪性黒色腫の処置のための細胞成長抑制薬）。
ＰＢＳ群（群２）は、他の群の使用された全物質をＰＢＳにおいて投与したため、成長制御／ビヒクル対照群として働いた。
マウスＢ１−２３リード候補抗体の群（群３）は、キメラＢ１−２３抗体およびヒト化Ｂ１−２３ Ｈ１Ｌ５（群４および５）との比較のための参照群として働いた。
群４は、ヒトＩｇＧ１抗体（トラスツズマブ骨格）のマウス可変ドメインおよび定常ドメインを含有するキメラ化Ｂ１−２３リード候補抗体の群である。
群５は、ヒトＩｇＧ１抗体（トラスツズマブ骨格）のマウス可変領域および定常ドメイン内に、ヒト化フレームワークを含有するＨ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３リード候補抗体の群である。
群６は、Ｂ１２アイソタイプ抗体の群である。このアイソタイプ対照群において、抗体Ｂ１２（Lot. No.: ID3195）は、会社Evitria AGによって製造されたものであった。Ｂ１２は、ＨＩＶ抗原に結合するため、ヌードマウス中の抗原にも、ヒト腫瘍の抗原にも、結合しないはずである。Ｂ１２の免疫グロブリン骨格もまた、ヒトＩｇＧ１抗体トラスツズマブから構成されるため、キメラＢ１−２３およびＨ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体と、それらの可変領域を除いて、ほぼ同一であることから、Ｂ１２を、極めて好適なアイソタイプ対照として選択した。
この研究は、抗体による処置およびＰＢＳによる処置について、二重盲検の様式で行った。
抗ＧＤＦ−１５抗体を受けなかった群１、２および６において、１０％超の体重減少が観察された（すなわち第０日と比較して、９０％未満の相対体重に対する減量）。対照的に、抗ＧＤＦ−１５抗体Ｂ１−２３、キメラＢ１−２３およびヒト化Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５の夫々による処置を受けなかった群において、体重の増加が観察された（図５）。
よって驚くべきことに、試験された抗ＧＤＦ−１５抗体すべてによる処置は、マウスにおけるがん誘発性減量を完全に予防する。この効果は、抗ＧＤＦ−１５抗体で処置された群のすべてについて、有意であった（双方向ANOVA；ｐ＜０．０５）。
抗ＧＤＦ−１５抗体による処置を受けなかった群のマウスが、１０％超の減量を呈したこともまた、注目に値する。ヒトにおいては、６カ月の期間にわってわずか５％の減量も、がん悪液質を示すと見なされている（Fearon K. et al.: Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus. Lancet Oncol. 2011 May; 12(5):489-95.）。１０％も超えたマウスのより大きな減量が、本研究において観察されたことを考えると、抗ＧＤＦ−１５抗体による処置を受けなかったこの研究におけるマウスが、減量のみならず、がん悪液質もまた表したことが予想される。この効果は、試験された抗ＧＤＦ−１５抗体によって、完全に予防される。したがって、本発明に従う抗ＧＤＦ−１５抗体が、がん誘導性減量およびがん悪液質の両方を処置することが可能であることが予想される。
注目すべきは、減量の程度が、夫々の腫瘍サイズに相関しなかったことである（ｒ２＝１０−６）。減量の予防が、がん成長の阻害およびより小さい腫瘍サイズの結果得られた二次効果でしかなかった場合、腫瘍サイズと減量との間の相関は予想されないであろう。よって、かかる相関がないことは、本発明に従う抗ＧＤＦ−１５抗体の使用によって、２つの無関係な処置効果がもたらされることを示す：
−がん成長の阻害、ならびに、
−がん成長の阻害と無関係であり、かつ、がん悪液質の予防を反映することが予想される、追加の効果としての減量の予防。
それらの機構的な独立性にかかわらず、これらの効果が、同じ動物において同時に生じ得ることが観察された。
マウスの平均体重の評価に加えて、マウスの飼料消費量を、この研究群の一対比較によって評価した（表１）。注目すべきは、抗ＧＤＦ−１５抗体群（Ｂ１−２３、キメラＢ１−２３およびヒト化Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５）におけるマウスの飼料消費量は、抗ＧＤＦ−１５抗体を受けなかった群のマウスの飼料消費量より有意に高かった。
表１：種々の処置群間の飼料消費量の比較評価。測定された時間間隔（第１７〜２０日、２０〜２４日、２４〜２７日、２７〜３１日、３１〜３４日）について、１マウスおよび１日あたりの飼料消費量の平均は、各夫々の群に対して算出した。値を、それらの標準偏差と一緒に示す。
この研究において使用されたヒト化抗ＧＤＦ−１５抗体Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５の質を、抗体のゲル電気泳動およびクーマシー染色を使用することによって試験した（図６を参照）。注目すべきは、ヒト化抗ＧＤＦ−１５抗体Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５のバンドがシャープかつクリアーであったのに対し、マウスＢ１−２３抗ＧＤＦ−１５抗体およびＢ１２対照抗体のバンドは、シャープではなく、より高い分子量であるように見えた。これは、ヒト化抗ＧＤＦ−１５抗体Ｂ１−２３−Ｈ１Ｌ５が凝集しがちではないこと、および、相当な凝集が、他の抗体の分子量からより高い値へシフトし得たことを示唆する。
加えて、比色分析を使用することによって、この研究において使用された全抗ＧＤＦ−１５抗体が、濃度依存的な様式でＧＤＦ−１５に結合したことが確認された。Ｂ１−２３抗体バリアントのＧＤＦ−１５への結合を決定するために、比色ＥＬＩＳＡ実験を実施した。Ｂ１２抗体は、ヒトＧＤＦ−１５に結合しなかったアイソタイプ抗体として働いた。したがって、Maxisorp 96ウェルプレート（Nunc）を、ｈｒＧＤＦ−１５（１ウェルあたり２５ｎｇタンパク質、５０μｌ体積）で、終夜４℃にてコートした。翌日、プレートを洗浄して非結合タンパク質を除去し（１５０μｌのＰＢＳ ０．０５％Tween（登録商標）で３回）、非特異的結合部位を、１５０μｌのＰＢＳ １％ＢＳＡで、２時間室温にて、ブロッキングした。
再度プレートを洗浄し、Ｂ１−２３試験抗体の種々のバリアントをアプライした（５０μｌ体積）。抗体結合の特異性を調査するために、限界希釈(endpoint dilution)を、３３３ｎｇ／ｍｌから開始し、１：３の段階希釈で実施した。バックグラウンド対照として、ＰＢＳ １％ＢＳＡをアプライした。室温にて１時間の結合の後、ウェルを、上記のように洗浄した。二次抗体として、ＨＲＰがコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ（Life technologies、１：５０００）を、室温にて１時間適用した。ウェルを上記のように洗浄して、非結合二次抗体を除去した。
検出のため、５０μｌの過酸化物基質（０．１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ６中、１：１００のＴＭＢ）を加えた後、１０分間インキュベートし、５０μｌの停止溶液（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）を加えた。陰性対照として、ＧＤＦ−１５コーティングなしのウェルおよび二次抗体なしのウェルを含んだ。分析のため、４５０ｎｍでの光学密度を、ＥＬＩＳＡリーダー（Tecan Sunrise）および対応するMagellanソフトウェアを使用して定量した。Ｂ１２抗体との比較において、ヒト化Ｈ１Ｌ５抗体、キメラＢ１−２３抗体およびマウスＢ１−２３抗体が、ＧＤＦ−１５に対して明らかな濃度依存的結合を呈したことが観察された。
例８：抗ＧＤＦ−１５抗体のＫｄ値の決定
種々の抗ＧＤＦ−１５抗体のＫｄ値を、Surface Acoustic Wave（SAW）金チップバイオセンサ技術（SAW Instruments GmbH, Schwertberger Str. 16, D-53177 Bonn, Germany）を使用して比較した。
マウス抗体（Ｂ１−２３）ならびにキメラＢ１−２３抗体は、精製された形態で存在していた。Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は、無血清ＣＨＯ細胞培養上清であった。マウスＢ１−２３のＫｄ値は、Biacore（登録商標）分析（表面プラズモン共鳴）によって決定されたＫｄ値から、３５倍逸脱する。
この逸脱は−測定方法における差異とは別にして−遊離のマウスＢ１−２３抗体の低減したアベイラビリティによって説明することができる。なぜなら、この抗体は、マウス抗体としてその形態で凝集体を形成し得ることが見出されたからである。したがって、マウスＢ１−２３抗体の溶液を、０．２％ＢＳＡの添加によって安定化させた。したがって、抗体のアルブミンへの結合によって、マウスＢ１−２５抗体のアベイラビリティが低減した可能性があり、種々の測定方法によって得られた親和性の値における差異を説明することができた。マウスＢ１−２３抗体と比較して、Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は驚くべきことに、凝集する傾向を示さなかった（下の例９もまた参照）。
本アッセイにおいて、キメラＢ１−２３抗ＧＤＦ−１５抗体およびＨ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は夫々、マウスＢ１−２３抗ＧＤＦ−１５抗体の親和性より約２倍および５倍高い、ヒトＧＤＦ−１５に対する親和性を呈した。よって、キメラＢ１−２３抗ＧＤＦ−１５抗体およびＨ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は、高親和性抗体である。
例９：抗ＧＤＦ−１５抗体の凝集研究
抗ＧＤＦ−１５抗体の凝集特性を試験するために、抗体試料を、微小遠心管中、室温にて４８時間振盪し、続いてその管を、凝集した抗体特性について視覚的に分析した。
マウスＢ１−２３抗体と比較すると、Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は驚くべきことに、抗体がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中にのみ存在したときでさえ、および、ＢＳＡなどの安定化タンパク質が存在しないときも、凝集する傾向を示さなかったことが観察された。
その上、凍結／融解および希釈実験において、Ｈ１Ｌ５ヒト化Ｂ１−２３抗体は、希釈ステップまたは凍結／融解サイクルのいずれの間も、凝集しなかったことが観察された。
加えて、以下の実験を行った（例７を参照）。
５ｍｇの抗体（Ｂ１−２３、キメラＢ１−２３＝「ＣｈｉｍＢ１−２３」、Ｈ１Ｌ５）を、Proteus（登録商標）プロテインＡカラム上にロードし、生理的ｐＨのＴＲＩＳ緩衝液で溶出および回収した。溶出後、精製抗体の質を、クーマシー・ブリリアント・ブルーゲル分析によって査定した。溶出された抗体の濃度を、測光法で、ならびに、ブラッドフォードアッセイ（Roti-Quant, Carl Roth, Karlsruhe, Germany）で、測定した。全３種類の抗体溶液（Ｂ１−２３、ＣｈｉｍＢ１−２３、Ｈ１Ｌ５）は、同様の濃度を示し、０．５ｍｇ／ｍｌへ調整した。次いで抗体を、スピンカラム（Centricon、ＭＷＣＯ３０）を介して１０倍に濃縮した。このステップの後、濁度は、Ｂ１−２３含有試料中、沈殿物の存在を示したが、ＣｈｉｍＢ１−２３およびＨ１Ｌ５は、凝集の兆候を示さなかった。次いで、すべての濃縮溶出物を、１３００ｒｐｍにて５分間遠心分離し、抗体凝集体を沈殿させた。残りの量の可溶性抗体を、上清からブラッドフォードアッセイを介して最後に決定した。
抗体のこれらの特性は、抗体の臨床製剤に有利であることが予想される。
Ｇ）産業上の利用可能性
本発明による抗体、その抗原結合部分、医薬組成物およびキットは、医薬品の製造のための知られている基準に従い、特許請求された方法および使用のための（例としてがん悪液質およびがんを処置するための）製品として、産業的に製造し販売することができる。それによって本発明は、産業的に利用可能である。
好ましい態様
１． ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
２． ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合であり、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
３． 項目１または２に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
４． 項目１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
５． 項目１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、ヒト化抗体である。
６． 項目５に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体の可変ドメインのすべてが、ヒト化可変ドメインである。
７． 項目１〜６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
８． 項目１〜７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。
９． 項目１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
１０． 項目１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列またはこれと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
１１． 項目１０に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。
１２． 項目１〜１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、アミノ酸配列ｓｅｒ−ａｌａ−ｓｅｒを含むＣＤＲ２領域とを含む。
１３． 項目２〜１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む。
１４． 項目１および３〜１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。
１５． 項目１〜１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する。
１６． 項目１５に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、全長の抗体である。
１７． 項目１６に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、全長のＩｇＧ抗体、好ましくは全長のＩｇＧ１抗体である。
１８． 項目１〜１７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、Ｆｃ受容体に結合可能なＦｃ部分を有する。
１９． 項目１〜１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでヒトＧＤＦ−１５は、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である。
２０． 医療における使用のための、項目１〜１９のいずれか一項に従う抗体またはその抗原結合部分。
２１． 哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、項目１〜１９のいずれか一項に従う抗体またはその抗原結合部分。
２２． 哺乳動物におけるがんを処置するための方法における使用のための、項目１〜１９のいずれか一項に従う抗体またはその抗原結合部分。
２３． 項目２１〜２２のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜２２のいずれか一項に従う抗体またはその抗原結合部分であって、ここで方法は、同じ哺乳動物において、がんを処置するのみならず、がん悪液質もまた処置するための方法である。
２４． 項目２１〜２３のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜２３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物は、ヒト患者である。
２５． 項目２１または２３〜２４に従う使用のための、項目２１または２３〜２４に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防または完全に戻すための方法である。
２６． 項目２５に従う使用のための、項目２５に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防するための方法である。
２７． 項目２５に従う使用のための、項目２５に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に戻すための方法である。
２８． 項目２１〜２７のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜２７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、
ここで方法において、
ｉ）がん、および、
ｉｉ）がん悪液質
の両方を患っている哺乳動物しか処置されない。
２９． 項目２１または２３〜２８のいずれか一項に従う使用のための、項目２１または２３〜２８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで方法は、哺乳動物の体重を、がん悪液質の発病前のその体重と比較して増加させる。
３０． 項目２９に従う使用のための、項目２９に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物の体重における増加分は、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、少なくとも１．５％、好ましくは少なくとも２．５％、より好ましくは少なくとも５％である。
３１． 項目２１〜３０のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物のがん細胞は、ＧＤＦ−１５を内因性発現するか、および／または、哺乳動物のがん細胞は、哺乳動物の非がん性細胞におけるＧＤＦ−１５の内因性発現を刺激する。
３２． 項目２１〜３１のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物のがん細胞は、ＧＤＦ−１５を内因性発現する。
３３． 項目２２〜３２のいずれか一項に従う使用のための、項目２２〜３２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんを処置するための方法は、がん成長の阻害を含む方法である。
３４． 項目２２〜３３のいずれか一項に従う使用のための、項目２２〜３３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんを処置するための方法は、ヒト患者におけるＮＫ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞によるがん細胞の死滅の誘導を含む。
３５． 項目２１〜３４のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでヒト患者は、投与前の血清におけるＧＤＦ−１５レベルが上がっている。
３６． 項目２１〜３５のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体またはその抗原結合部分は、
Ａ）方法において使用されるがんに対して薬学的に活性にある唯一の成分であるか、または、
Ｂ）がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分と併用される。
３７． 項目２１〜３６のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんは、神経膠腫を含む脳のがん、神経系のがん、黒色腫、肺がん、口唇および口腔がん、肝癌、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膀胱がん、子宮頸がん、子宮体がん、精巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、喉頭がん(larynx cancer)、咽頭がん(pharynx cancer)、食道がん、胃がんおよび結腸直腸がんを含む消化管の腫瘍、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がんおよび乳がんからなる群から、好ましくは黒色腫、前立腺がん、乳がん、神経膠腫を含む脳のがん、結腸直腸がん、胃がん、食道がんおよび卵巣がんからなる群から選択され、ならびに、最も好ましくは黒色腫である。
３８． 項目２１〜３７のいずれか一項に従う使用のための、項目２１〜３７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで投与に先立ち、がんによって形成された腫瘍または腫瘍は、がんの原発部位組織である組織の非がん性部分から得られた同じ患者の対照試料と比較して、より高いヒトＧＤＦ−１５レベルを有し、好ましくは１．２倍高いレベル、より好ましくは１．５倍高いレベル、さらにより好ましくは２倍高いレベルおよび最も好ましくは５倍高いレベルを有する。
３９． 項目３８に従う使用のための、項目３８に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、抗体またはその抗原結合部分は、がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分と併用され、および、がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分は、アルキル化剤；抗代謝物；アルカロイド、タキサン；トポイソメラーゼインヒビター；細胞障害性抗生物質；および放射性同位元素からなる群から選択される。
４０． 項目３９に従う使用のための、項目３９に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシルおよびイホスファミド；アザチオプリンおよびメルカプトプリン；ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドおよびテニポシド；イリノテカンおよびトポテカン；アクチノマイシン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンおよびマイトマイシンからなる群から選択される。
４１． 項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む、キット。
４２． 項目２１〜４０のいずれか一項に従う使用のための、項目４１に記載のキット。
４３． 項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
４４． 項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を産生可能な、細胞株。
４５． 哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
４６． 哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。
４７． 項目４５または４６に従う使用のための、項目４５または４６に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防するかまたはそれを完全に戻すための方法である。
４８． 項目４７に従う使用のための、項目４７に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に予防するための方法である。
４９． 項目４７に従う使用のための、項目４７に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがん悪液質を処置するための方法は、がん悪液質を完全に戻すための方法である。
５０． 項目４５〜４９のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜４９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで方法において、
ｉｉｉ）がん、および、
ｉｖ）がん悪液質
の両方を患っている哺乳動物しか処置されない。
５１． 項目４９〜５０のいずれか一項に従う使用のための、項目４９〜５０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで方法は、哺乳動物の体重を、がん悪液質の発病前のその体重と比較して増加させる。
５２． 項目５１に従う使用のための、項目５１に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物の体重の増加分は、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、少なくとも１．５％、好ましくは少なくとも２．５％、より好ましくは少なくとも５％である。
５３． 項目４５〜５２のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで方法は、同じ哺乳動物において、がんを処置するのみならず、がん悪液質もまた処置するための方法である。
５４． 項目４５〜５３のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する。
５５． 項目５４に従う使用のための、項目５４に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、全長の抗体である。
５６． 項目５５に従う使用のための、項目５５に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、全長のＩｇＧ抗体である。
５７． 項目４５〜５６のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部であって、ここで抗体は、Ｆｃ受容体に結合可能なＦｃ部分を有する。
５８． 項目４５〜５７のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物のがん細胞は、ＧＤＦ−１５を内因性発現するか、および／または、哺乳動物のがん細胞は、哺乳動物の非がん性細胞におけるＧＤＦ−１５の内因性発現を刺激する。
５９． 項目４５〜５８のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物のがん細胞は、ＧＤＦ−１５を内因性発現する。
６０． 項目４５〜５９のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜５９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで哺乳動物は、ヒト患者である。
６１． 項目４５〜６０のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでヒトＧＤＦ−１５は、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である。
６２． 項目４６〜６１のいずれか一項に従う使用のための、項目４６〜６１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
６３． 項目４５および４７〜６１のいずれか一項に従う使用のための、項目４５および４７〜６１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで結合は、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である。
６４． 項目５３〜６３のいずれか一項に従う使用のための、項目５３〜６３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんを処置するための方法は、がん成長の阻害を含む方法である。
６５． 項目５３〜６４のいずれか一項に従う使用のための、項目５３〜６４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんを処置するための方法は、ヒト患者におけるＮＫ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞によるがん細胞の死滅の誘導を含む。
６６． 項目４５〜６５のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、アミノ酸配列ｓｅｒ−ａｌａ−ｓｅｒを含むＣＤＲ２領域とを含む。
６７． 項目４５〜６６のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。
６８． 項目４５〜６７のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
６９． 項目４５〜６８のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖の定常ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖の定常ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
７０． 項目４５〜６９のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、ヒト化抗体であり、および、抗体の可変ドメインのすべてが、ヒト化可変ドメインである。
７１． 項目４５〜７０のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
７２． 項目４５〜７１のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。
７３． 項目４５〜７２のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。
７４． 項目４５〜６９のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列またはこれと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。
７５． 項目７４に従う使用のための、項目７４に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。
７６． 項目４５〜６６のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体は、
ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＭＳＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られるヒトＧＤＦ−１５に対する抗体またはその抗原結合部分である。
７７． 項目４５〜７５のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含むか、または、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
７８． 項目４５〜７５および７７のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７５および７７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、軽鎖可変ドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む。
７９． 項目４５〜６９および７７〜７８のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６９および７７〜７８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域を含み、および、配列番号１またはこれと９５％同一の配列のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域を含み、および、配列番号２またはこれと９５％同一の配列のアミノ酸配列を含む。
８０． 項目４５〜６９および７７〜７９のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜６９および７７〜７９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで重鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域を含み、および、配列番号１またはこれと９８％同一の配列のアミノ酸配列を含み、ならびに、軽鎖可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２およびＦＲ３領域を含む領域を含み、および、配列番号２またはこれと９８％同一の配列のアミノ酸配列を含む。
８１． 項目４５〜８０のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜８０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＧＤＦ−１５に対して、２０ｎＭ以下、好ましくは１０ｎＭ未満、より好ましくは５ｎＭ未満および最も好ましくは０．１ｎＭと２ｎＭとの間である平衡解離定数を有する。
８２． 項目４５〜７５および７７〜８１のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜７５および７７〜８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体またはその抗原結合部分は、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＭＳＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られるヒトＧＤＦ−１５に対する抗体と同じヒトＧＤＦ−１５のエピトープに結合する。
８３． 項目４５〜８２のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜８２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでヒト患者は、投与前の血清におけるＧＤＦ−１５レベルが上がっている。

８４． 項目４５〜８３のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜８３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで抗体またはその抗原結合部分は、
Ａ）方法において使用されるがんに対して薬学的に活性のある唯一の成分であるか、または、
Ｂ）がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分と併用される。
８５． 項目４５〜８４のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜８４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんは、神経膠腫を含む脳のがん、神経系のがん、黒色腫、肺がん、口唇および口腔がん、肝癌、白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膀胱がん、子宮頸がん、子宮体がん、精巣がん、甲状腺がん、腎臓がん、胆嚢がん、多発性骨髄腫、鼻咽頭がん、喉頭がん(larynx cancer)、咽頭がん(pharynx cancer)、食道がん、胃がんおよび結腸直腸がんを含む消化管の腫瘍、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がんおよび乳がんからなる群から、好ましくは黒色腫、前立腺がん、乳がん、神経膠腫を含む脳のがん、結腸直腸がん、胃がん、食道がんおよび卵巣がんからなる群から選択され、ならびに、最も好ましくは黒色腫である。
８６． 項目４５〜８５のいずれか一項に従う使用のための、項目４５〜８５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで投与に先立ち、がんによって形成された腫瘍または腫瘍は、がんの原発部位組織である組織の非がん性部分から得られた同じ患者の対照試料と比較して、より高いヒトＧＤＦ−１５レベルを有し、好ましくは１．２倍高いレベル、より好ましくは１．５倍高いレベル、さらにより好ましくは２倍高いレベルおよび最も好ましくは５倍高いレベルを有する。
８７． 項目８４に従う使用のための、項目８４に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここで、抗体またはその抗原結合部分は、がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分と併用され、および、がんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分は、アルキル化剤；抗代謝物；アルカロイド、タキサン；トポイソメラーゼインヒビター；細胞障害性抗生物質；および放射性同位元素からなる群から選択される。
８８． 項目８７に従う使用のための、項目８７に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、ここでがんに対して薬学的に活性のある１以上のさらなる成分は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシルおよびイホスファミド；アザチオプリンおよびメルカプトプリン；ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドおよびテニポシド；イリノテカンおよびトポテカン；アクチノマイシン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンおよびマイトマイシンからなる群から選択される。
参考文献

Claims (60)

  1. 重鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、
    重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む、
    ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
  2. 結合が、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合であり、
    重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む、
    ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
  3. 重鎖の定常ドメイン配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  4. 重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  5. 重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  6. 抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  7. 抗体の可変ドメインのすべてが、ヒト化可変ドメインである、請求項６に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  8. 重鎖可変ドメインが、配列番号２８のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列,またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  9. 重鎖可変ドメインが、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  10. 重鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  11. 重鎖可変ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列またはこれと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列,またはこれと少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  12. 重鎖可変ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、
    請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  13. 重鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および
    軽鎖可変ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、アミノ酸配列ｓｅｒ−ａｌａ−ｓｅｒを含むＣＤＲ２領域とを含む、
    請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  14. 重鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  15. 結合が、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である、請求項１および３〜１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  16. 抗体が、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  17. 抗体が、全長の抗体である、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  18. 抗体が、全長のＩｇＧ抗体、好ましくは全長のＩｇＧ１抗体である、請求項１７に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  19. 抗体が、Ｆｃ受容体に結合可能なＦｃ部分を有する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  20. ヒトＧＤＦ−１５が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  21. 医療における使用のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  22. 哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  23. 哺乳動物におけるがんを処置するための方法における使用のための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  24. 方法が、同じ哺乳動物において、がんの処置のみならず、がん悪液質の処置もまた行うための方法である、請求項２２または２３に従う使用のための、請求項２２または２３に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  25. 哺乳動物が、ヒト患者である、請求項２２〜２４のいずれか一項に従う使用のための、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  26. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む、キット。
  27. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
  28. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を産生可能な、細胞株。
  29. 重鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、
    哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
  30. 結合が、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である、
    哺乳動物におけるがん悪液質を処置するための方法における使用のための、ヒトＧＤＦ−１５に結合可能なモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
  31. がん悪液質を処置するための方法が、がん悪液質を完全に予防または完全に戻すための方法である、請求項２９または３０に従う使用のための、請求項２９または３０に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  32. がん悪液質を処置するための方法が、がん悪液質を完全に予防するための方法である、請求項３１に従う使用のための、請求項３１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  33. がん悪液質を処置するための方法が、がん悪液質を完全に戻すための方法である、請求項３１に従う使用のための、請求項３１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  34. 方法において、
    ｉ）がん、および、
    ｉｉ）がん悪液質
    の両方を患っている哺乳動物しか処置されない、
    請求項２９〜３３のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  35. 方法が、哺乳動物の体重を、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、増加させる、
    請求項３３または３４に従う使用のための、請求項３３または３４に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  36. 哺乳動物の体重の増加分が、がん悪液質の発病前のその体重と比較して、少なくとも１．５％、好ましくは少なくとも２．５％、より好ましくは少なくとも５％である、請求項３５に従う使用のための、請求項３５に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  37. 方法が、同じ哺乳動物において、がんの処置のみならず、がん悪液質の処置もまた行うための方法である、
    請求項２９〜３６のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  38. 抗体が、１００ｋＤａより大きい、好ましくは１１０ｋＤａより大きい、より好ましくは１２０ｋＤａより大きい、さらにより好ましくは１３０ｋＤａより大きい、および、最も好ましくは１４０ｋＤａより大きいサイズを有する、
    請求項２９〜３７のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜３７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  39. 抗体が、全長の抗体である、請求項３８に従う使用のための、請求項３８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  40. 抗体が、全長のＩｇＧ抗体である、請求項３９に記載の使用のための、請求項３９に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  41. 抗体が、Ｆｃ受容体に結合可能なＦｃ部分を有する、請求項２９〜４０のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  42. 哺乳動物のがん細胞が、ＧＤＦ−１５を内因性発現するか、および／または、哺乳動物のがん細胞が、哺乳動物の非がん性細胞におけるＧＤＦ−１５の内因性発現を刺激する、
    請求項２９〜４１のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  43. 哺乳動物のがん細胞が、ＧＤＦ−１５を内因性発現する、請求項２９〜４２のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  44. 哺乳動物が、ヒト患者である、請求項２９〜４３のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  45. ヒトＧＤＦ−１５が、配列番号８で表されるアミノ酸配列を有する組換えヒトＧＤＦ−１５である、請求項２９〜４４のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  46. 重鎖可変ドメインが、配列番号５のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、
    請求項３０〜４５のいずれか一項に従う使用のための、請求項３０〜４５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  47. 結合が、配列番号２５および配列番号２６のアミノ酸配列で構成されるヒトＧＤＦ−１５上の立体構造エピトープまたは不連続エピトープへの結合である、
    請求項２９および３１〜４５のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９および３１〜４５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  48. がんを処置するための方法が、がん成長の阻害を含む方法である、
    請求項３７〜４７のいずれか一項に従う使用のための、請求項３７〜４７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  49. がんを処置するための方法が、ヒト患者におけるＮＫ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞によるがん細胞の死滅の誘導を含む、
    請求項３７〜４８のいずれか一項に従う使用のための、請求項３７〜４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  50. 重鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域とを含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域と、アミノ酸配列ｓｅｒ−ａｌａ−ｓｅｒを含むＣＤＲ２領域とを含む、
    請求項２９〜４９のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜４９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  51. 重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５０のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  52. 重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５１のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  53. 重鎖の定常ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖の定常ドメインが、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５２のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  54. 抗体が、ヒト化抗体であり、および、
    抗体の可変ドメインのすべてが、ヒト化可変ドメインである、
    請求項２９〜５３のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  55. 重鎖可変ドメインが、配列番号２８のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列またはこれと少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５４のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  56. 重鎖可変ドメインが、配列番号２８のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５５のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  57. 重鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５６のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  58. 重鎖可変ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列またはこれと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列またはこれと少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、さらにより好ましくは少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、
    請求項２９〜５３のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  59. 重鎖可変ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を含み、および、
    軽鎖可変ドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、
    請求項５８に従う使用のための、請求項５８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  60. 抗体が、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＭＳＺ）に寄託番号DSM ACC3142として寄託された細胞株Ｂ１−２３から得られる、ヒトＧＤＦ−１５に対する抗体またはその抗原結合部分である、
    請求項２９〜５０のいずれか一項に従う使用のための、請求項２９〜５０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
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