JP2017200930A - HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 - Google Patents
HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017200930A JP2017200930A JP2017113232A JP2017113232A JP2017200930A JP 2017200930 A JP2017200930 A JP 2017200930A JP 2017113232 A JP2017113232 A JP 2017113232A JP 2017113232 A JP2017113232 A JP 2017113232A JP 2017200930 A JP2017200930 A JP 2017200930A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hmgb1
- box
- seq
- protease
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 73
- 102000055207 HMGB1 Human genes 0.000 claims abstract description 248
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 claims abstract description 248
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 241
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 240
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 170
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 170
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 170
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 47
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 38
- 101001025337 Homo sapiens High mobility group protein B1 Proteins 0.000 claims description 36
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 36
- 102000053637 human HMGB1 Human genes 0.000 claims description 36
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 22
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 16
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 13
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 claims description 11
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 claims description 11
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 claims description 4
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 4
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 claims description 4
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 4
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 claims description 3
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 2
- 101710151803 Mitochondrial intermediate peptidase 2 Proteins 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000430 cytokine receptor antagonist Substances 0.000 claims description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 14
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 148
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 123
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 123
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 120
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 106
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 85
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 77
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 74
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 71
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 71
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 71
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 19
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 13
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 9
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 9
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 7
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 7
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- 241000256186 Anopheles <genus> Species 0.000 description 6
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100022128 High mobility group protein B2 Human genes 0.000 description 6
- 102100022130 High mobility group protein B3 Human genes 0.000 description 6
- 101001045791 Homo sapiens High mobility group protein B2 Proteins 0.000 description 6
- 101001045794 Homo sapiens High mobility group protein B3 Proteins 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- 102000012607 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 6
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 6
- 108010027597 alpha-chymotrypsin Proteins 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 4
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 108010003914 endoproteinase Asp-N Proteins 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 3
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 3
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 208000027205 Congenital disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241001481166 Nautilus Species 0.000 description 3
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 3
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000503 lectinlike effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 3
- NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 7-imino-n,n-dimethylphenothiazin-3-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=C(N)C=C2SC3=CC(=[N+](C)C)C=CC3=NC2=C1 NALREUIWICQLPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 101001007348 Arachis hypogaea Galactose-binding lectin Proteins 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 208000036066 Hemophagocytic Lymphohistiocytosis Diseases 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 2
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 2
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 2
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 208000001606 epiglottitis Diseases 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 208000036260 idiopathic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 description 2
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 2
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000120 polyethyl acrylate Polymers 0.000 description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000013878 renal filtration Effects 0.000 description 2
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 2
- 102220198395 rs976164079 Human genes 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000723 toxicological property Toxicity 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033646 Acute and chronic pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 206010001889 Alveolitis Diseases 0.000 description 1
- 208000004881 Amebiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010001980 Amoebiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 101000609447 Beet necrotic yellow vein virus (isolate Japan/S) Protein P25 Proteins 0.000 description 1
- 208000027496 Behcet disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- 101100273751 Caenorhabditis elegans cdc-42 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 206010008088 Cerebral artery embolism Diseases 0.000 description 1
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009895 Colitis ischaemic Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 102000012437 Copper-Transporting ATPases Human genes 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004703 Cruciform DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 206010012441 Dermatitis bullous Diseases 0.000 description 1
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000013600 Diabetic vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010013554 Diverticulum Diseases 0.000 description 1
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 description 1
- 208000000289 Esophageal Achalasia Diseases 0.000 description 1
- XXRCUYVCPSWGCC-UHFFFAOYSA-N Ethyl pyruvate Chemical compound CCOC(=O)C(C)=O XXRCUYVCPSWGCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 1
- 208000035366 Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010016228 Fasciitis Diseases 0.000 description 1
- 208000002633 Febrile Neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 201000006353 Filariasis Diseases 0.000 description 1
- 206010058872 Fungal sepsis Diseases 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Natural products OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000002972 Hepatolenticular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 102000018802 High Mobility Group Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052512 High Mobility Group Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002291 Histiocytic Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032672 Histiocytosis haematophagic Diseases 0.000 description 1
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000024781 Immune Complex disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010022657 Intestinal infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010069698 Langerhans' cell histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000034486 Multi-organ failure Diseases 0.000 description 1
- 101100339426 Mus musculus Hmgb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000009869 Neu-Laxova syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 108010047956 Nucleosomes Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030136 Oesophageal achalasia Diseases 0.000 description 1
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 206010067633 Peripheral nerve lesion Diseases 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005384 Pneumocystis Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010073755 Pneumocystis jirovecii pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 208000006399 Premature Obstetric Labor Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101100177261 Rattus norvegicus Hbp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100339430 Rattus norvegicus Hmgb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102000005473 Secretory Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010031873 Secretory Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- 206010053879 Sepsis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010062164 Seronegative arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000009714 Severe Dengue Diseases 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 description 1
- 208000004732 Systemic Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 238000012338 Therapeutic targeting Methods 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- 206010053476 Traumatic haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027207 Whipple disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018839 Wilson disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000000397 acetylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000000621 achalasia Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000009056 active transport Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000002029 allergic contact dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006682 alpha 1-Antitrypsin Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 208000000594 bullous pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O.OC(O)=O HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000003167 cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013507 chronic prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002950 dengue hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 201000009101 diabetic angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 201000002249 diabetic peripheral angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 108091007735 digestive proteases Proteins 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000003401 eosinophilic granuloma Diseases 0.000 description 1
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940117360 ethyl pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 201000001155 extrinsic allergic alveolitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 201000008825 fibrosarcoma of bone Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 235000015220 hamburgers Nutrition 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 208000014752 hemophagocytic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000022098 hypersensitivity pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 208000024326 hypersensitivity reaction type III disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 201000010849 intracranial embolism Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 201000004614 iritis Diseases 0.000 description 1
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 201000008222 ischemic colitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 201000006812 malignant histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001623 nucleosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 208000012111 paraneoplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000009057 passive transport Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 206010035653 pneumoconiosis Diseases 0.000 description 1
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 208000030925 respiratory syncytial virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C([O-])=O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009962 secretion pathway Effects 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000025883 type III hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009852 uremia Diseases 0.000 description 1
- 208000000143 urethritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007879 vasectomy Methods 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/02—Antidotes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
Abstract
【課題】本発明は、HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリペプチド変異体の新規ポリマー複合体に関する。さらに、本発明は、HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)のポリペプチド変異体の新規ポリマー複合体に関する。さらに、本発明は、細胞外HMGB1と関連がある病状および/またはRAGEの発現の増大と関連がある病状を診断、予防、軽減および/または治療するための、HMGB1のBox-Aのポリペプチド分子の前記ポリマー複合体の使用に関する。【解決手段】ヒトおよび/または非ヒト野生型HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリマー複合体の提供。【選択図】なし
Description
本発明は、HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片の新規ポリマー複合体に関する。さらに、本発明は、HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリペプチド変異体の新規ポリマー複合体に関する。さらに、本発明は、細胞外HMGB1と関連がある病状および/またはRAGEの発現の増大と関連がある病状を診断、予防、軽減および/または治療するための前記ポリマー複合体の使用に関する。
HMGB1タンパク質は、高移動度グループ(HMG)タンパク質のファミリーに属する。ポリアクリルアミドゲル中でのその高い電気泳動移動度のためにそう呼ばれるHMGタンパク質は、真核生物細胞中で単離クロマチンと結合した最も偏在する非ヒストンタンパク質である。これらのタンパク質は、DNAの湾曲、ループ化、フォールディングおよびラッピングにおいて一般的な「構造上の」役割を果たす、何故ならそれらはDNA構造および転写因子またはヒストンとの複合体を変形させるか、湾曲または修飾するからである(Andersson et al、2002;Agresti et al、2003;Degryse et al、2003)。高移動度グループ1(HMGB1)タンパク質は通常は核因子、特にDNAを湾曲させ幾つかの転写複合体の結合を容易にする転写制御分子である。
構造上、HMGB1タンパク質は哺乳動物間で高度に保存された配列を有する約25kDaのタンパク質であり、214個のアミノ酸のうちの2個が全哺乳動物種で保存的置換を有する。HMGB1は全ての脊椎動物の核中の至る所に存在し、特に繊維芽細胞、ニューロン、肝細胞、グリア中、および単球/マクロファージ、好中球および血小板を含めた造血幹細胞由来の細胞中において見ることができる。HMGB1分子は、3つの異なるドメイン:HMGのbox-Aおよびbox-Bと呼ばれる2つのDNA結合ドメイン、およびそれを両極帯電状態にする酸性カルボキシル末端から構成される三部構造を有する。
2つのHMGB1ボックスは、非配列特異的な構造上のDNA結合要素としてタンパク質の機能に関与し、認識される変形DNA構造にDNAを結合させる能力をもたらし、ヌクレオソーム構築を安定させ、リモデリングおよびスライディングする。A-HMGboxとB-HMGboxの両方が、高度に保存された84のアミノ酸残基で構成されており、強く正に帯電しており、類似のL型フォールディングを有する3つのαらせん構造中に配置している。「L」の長いアームはN末端延長鎖およびらせん構造IIIを含み(Andersson et al、2002;Agresti et al、2003;Thomas、J.O.2001)、一方短いアームはらせん構造IおよびIIを含む。構造-機能分析は、HMGB1の前炎症性サイトカインドメインはB-Box、特にその最初の20アミノ酸の配列であることを明らかにする。A-BoxはHMGB1によって誘発される炎症性サイトカイン放出の非常に弱いアゴニストであり、B-Boxおよびタンパク質全体の前炎症性活性を競合的に阻害する。したがって、薬理学的観点から、A-BoxはB-BoxおよびHMGB1によって誘導および/または持続される病的状態のアンタゴニストとして作用する。
第三のドメイン、カルボキシル末端または酸性尾部は、極端に負に帯電している。何故ならそれは、30の反復アスパラギン酸およびグルタミン酸残基を含み、約20残基の塩基性領域によってボックスと結合しているからである。マウスとラットのHMGB1は、この連続的なC末端延長部分に局在するわずか2つの置換によってヒトの形と異なる。
その核局在性および転写因子制御物質としての役割以外に、HMGB1は細胞外培地において免疫系の活性化細胞(単球およびマクロファージ)によって能動的に放出され、あるいは損傷または壊死細胞によって受動的に放出されることも分かってきている(Andersson et al、2002;Scaffidi et al、2002;Bonaldi et a、2002;Taniguchi et al、2003;Friedman et al、2003;Palumbo et al、2004)。
細胞外に放出されたHMGB1は強力なサイトカインとして、および非常に強力なマクロファージ刺激因子として作用する。HMGB1は細胞膜と結合することによって直接作用し、シグナル伝達および走化性を誘導し、ケモカイン様機能を有し(Yang et al、2001)、かつ前炎症性サイトカインの発現および分泌を上方制御することによってさらに間接的に作用する。これによって細胞外HMGB1タンパク質は、有効な炎症免疫応答を促進する強力な走化性および免疫制御タンパク質となる。さらに、HMGタンパク質のファミリーに属し、DNAを湾曲させることができる他のタンパク質が、細胞外培地においてHMGB1と共に放出される。これらのタンパク質は、特にHMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4LおよびSP100-HMGである。それらは非常に相同的なアミノ酸配列をHMGB1と共有する。HMGB1と同様に、それらは同じ受容体と相互作用する炎症病状を誘発/持続し、相互作用の同じ下流経路に至る。
正常細胞において、HMGB1は受動輸送と能動輸送の両方によって細胞質に移動する。しかしながら、全ての培養細胞および休止状態の単球は核中に多数のHMGB1を含み、ベースライン状態では輸入は輸出よりはるかに有効であることを示す。HMGB1中に多量に存在するリシン残基をアセチル化することで細胞は核からHMGB1を輸送し得、それによってその塩基性電荷が中和され、それらを核局在シグナルとして機能することができなくなる。核HMGB1の高アセチル化は、(例えば、繊維芽細胞における)核から細胞質へのこのタンパク質の移動、または(例えば、活性化単球およびマクロファージにおける)分泌エンドリソソームへのその蓄積、および非古典的小胞介在型分泌経路を介した後の放出への切り換えを決定する。既に活性化された単球によるHMGB1分泌が生物活性リソホスファチジルコリン(LPC)によって次いで誘発され、これは活性化後数時間で単球によって生成される分泌性ホスホリパーゼsPLA2の作用によってホスファチジルコリンから炎症部位において後に生じる。したがって、HMGB1の分泌は2つのシグナルによって誘導され(Bonaldi et al、2003)、かつ3ステップで起こるようである:1)最初に、炎症シグナルはHMGB1のアセチル化および核から細胞質へのその移動を促進し(ステップ1)、および細胞質分泌小胞内への貯蔵(ステップ2)、次いで、分泌シグナル(細胞外ATPまたはリソホスファチジルコリン)がエキソサイトーシスを促進する(第三のステップ)(Andersson et al、2002;Scaffidi et al.2002;Gardella et al、2002;Bonaldi et al、2003;Friedman et al、2003)。
放出されるHMGB1は、RAGE受容体と結合するリガンドの1つとして同定されている。この受容体は大部分の細胞型で、かつ主に内皮細胞中、血管平滑筋細胞中、単球およびマクロファージ中、ならびに単核食細胞中において高レベルで発現される。認識はHMGB1のC末端を含む。HMGB1とRAGEの相互作用は、RAGEの上方制御および受容体依存性のシグナル伝達によって介在される持続的な細胞活性期間を誘発する。特に、HMGB1とRAGEの相互作用は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPK)、Cdc-42、p2lras、Racおよび核転移因子kB(NF-kB)といった、古典的に炎症プロセスと関係する転移因子を含めた、幾つかの細胞内シグナル伝達経路を活性化する(Schmidt et al、2001)。
幾つかの実験的証拠によれば、放出されるHMGB1は、トール様受容体のファミリーの1つまたは複数のサブクラスに属する受容体と相互作用する可能性もある。さらにHMGB1は、トロンボモジュリンの機能的N末端レクチン様ドメイン(D1)と相互作用する可能性もある。トロンボモジュリンの機能的D1ドメインが循環中のHMGB1を捕捉し結合できるため、RAGE受容体およびトール様受容体との相互作用は妨げられる。
in vivoで放出されるとき、HMGB1は非常に強力なサイトカインおよび強力なマクロファージ刺激因子である。実際、内毒素血症の他のサイトカインメディエーターと同様に、HMGB1はヒトマクロファージ由来の多数の前炎症性サイトカイン(TNF、IL-1α、IL-1β、IL-Ra、IL-6、IL-8、MIP-1αおよびMIP-1β)のカスケードをin vitroで活性化する。したがって、HMGB1は急性炎症中に後期メディエーターとして作用し、初期メディエーターの応答が消散した後に全身炎症の病原の重要な経路に関与する。
さらに、前炎症性環境において観察されたRAGEの上方制御、および様々な急性および慢性炎症疾患におけるこの受容体の証明済みの発現の増大は、炎症に関する将来の医学的介入の魅力的な標的としてRAGEを支援する。
in vitroで観察されたHMGB1の前炎症性効果、および循環HMGB1レベルとin vivoにおける病原性の一連の全身炎症の進展の間の相関関係は、このサイトカイン様分子を治療上標的化することは関連する臨床的価値があるに違いないことを示し、HMGB1の細胞外活性の(選択的)アンタゴニスト/阻害剤の「後期」投与による新規の治療手法を示唆する。
したがって、この細胞外HMGB1ケモ-サイトカインタンパク質を阻害するための幾つかの試みが実施された。幾つかの重要な手法は、HMGB1に対する抗体、RAGEに対する抗体のHMGB1断片(例えばHMGB1のBox)に対する抗体、可溶性RAGE(sRAGE)、ピルビン酸エチル(Czura et al、2003;Lotze et al、2003)およびトロンボモジュリンのN末端レクチン様ドメイン(D1)の投与に取り組んだ。
HMGB1中の2つのDNA結合ドメインの1つであるHMGB1のBox-Aは、HMGB1の特異的アンタゴニストとして同定されており、高度に精製された組換えA-Boxは、病状誘導後に24時間初期治療が遅れたときでさえ致死的実験的敗血症からマウスを保護しており、他の知られているサイトカインに使用するそれより広い治療関連範囲で、HMGB1アンタゴニストを首尾良く投与することができることがさらに示唆される(Yang et al、2004)。
HMGB1切断突然変異体の構造機能分析は、HMGB1のA-BoxドメインはHMGB1とマクロファージの飽和結合を競合的に置換し、特にHMGB1活性をアンタゴナイズすることを明らかにしている。抗HMGB1抗体の防御活性に関して既に見られているように、A-Boxの投与は、治療を敗血症の外科的誘導後24時間でようやく開始したときでさえ、敗血症からマウスを救済する(Yang H.et al、2004)。HMGB1タンパク質、HMGB1遺伝子のアンチセンス配列およびHMGB1受容体アンタゴニストと結合する抗体または抗体断片の群から選択されるHMGB1アンタゴニストまたは阻害剤は、米国特許第6,468,533号、WO02/074337およびUS2003/0144201から知られている。
したがって、細胞外HMGB1ケモ-サイトカインタンパク質を阻害および/またはアンタゴナイズするための有望な試みは、DNAに対する2つの高親和性結合ドメイン、すなわちHMGB1分子中に存在するHMGB1のBox-AおよびHMGB1のBox-Bは、細胞外空間に放出されるタンパク質において2つの相反する役割を有するという実験的証拠に基づく。HMGB1のBox-Bの主な活性は、HMGB1タンパク質に起因する炎症促進活性を媒介することである。他方でHMGB1のBox-Aは、Box-Bドメインの炎症促進活性と競合するアンタゴニストとして作用する。
特許出願WO2006/024547は、野生型HMGB1のBox-Aタンパク質の単一アミノ酸の系統的突然変異によって得られる、HMGB1のBox-A、またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリペプチド変異体を開示する。したがってWO2006/024547は、細胞外HMGB1の選択的阻害剤および/またはアンタゴニストとしての新たな作用物質、ならびに細胞外HMGB1ケモカインおよび/またはHMGB1ケモカインタンパク質の細胞外放出によって引き起こされる多数の炎症性サイトカインのカスケードと関連があり、それらによって誘導される広範囲の病的状態を予防、軽減および/または治療するためのそれらの使用を提供する。
合成タンパク質薬剤の投与の有効性は、生理的pHにおける溶解性、糸球体濾過による迅速な除去、細胞のクリアランスおよび代謝および容易な吸収などの要因によってin vivoで妨げられる可能性がある。経口摂取する場合タンパク質は消化されるため、例えば経口投与の有効性は妨げられる。他方で全身投与の有効性は、65〜70kDa未満のタンパク質は身体から迅速に除去されるため妨げられる。多くの場合、このような悪影響は低下した患者のコンプライアンスおよび低下した薬剤有効性をもたらし、このようなタンパク質作用物質の有効な治療用途を妨げる。
タンパク質作用物質の効果の有効性および期間を改善するため、および潜在的な毒性効果を低下させるための成功した戦略は、多様なポリマーと生物活性があるタンパク質作用物質の共有結合である。活性作用物質の薬理学的性質および毒性を改善するために、当技術分野で最もよく使用されるポリマーの1つは、ポリエチレングリコール、略してPEGである。ポリエチレングリコール(PEG)ポリマーは両親媒性、非毒性および免疫学的に不活性であり、薬剤と結合させて、薬理学的性質および毒性の多くを操作することが可能である。
当技術分野では、治療上有用なタンパク質とポリエチレングリコール(PEG)の多くの共有結合修飾が報告されている。PEGとタンパク質の共有結合(「ペグ化」)はタンパク質の循環半減期を延長するのに有用である。何故ならそれは、タンパク質の有効サイズを増大させ身体からの除去速度を低下させるからである。さらに、タンパク質のPEG修飾はタンパク質の溶解性、安定性を増大させ、かつタンパク質の免疫原性を低下させる。
Schagger and von Jagow、「Tricine-sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100kDa」、Anal.Biochem.166、368〜379、1987
したがって、本発明の根底にある課題は、細胞外HMGB1の選択的阻害剤および/またはアンタゴニストとして作用する、新規の治療上有用なタンパク質作用物質の提供であった。したがって、本発明の範囲は、幾つかのポリマー、特にPEGの独特な特徴を利用して、非複合体であるHMGB1のBox-Aのポリペプチドと比較して一層高い薬理学的活性、さらに改善された薬物動態的および毒物学的性質でない場合でも同じ状態を示し、様々な考えられる投与経路においてHMGB1のBox-Aまたはその生物活性断片の最高の利用性を得ることができる、HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)の新たな投与形態を開発することであった。
したがって本発明は、ヒトおよび/または非ヒト野生型HMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片の新規ポリマー複合体を対象とする。ヒトHMGB1のBox-Aのアミノ酸配列は配列番号1で示す。好ましい非ヒトHMGB1のBox-Aは、ガンビアハマダラカ(Anapheles gambia)HMGB1のBox-Aであり、その配列を配列番号301で示す。
本発明の他の態様は、ヒトおよび/または非ヒトHMGB1高親和性結合ドメインBox-AまたはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリペプチド変異体のポリマー複合体であって、前記ポリペプチド変異体のアミノ酸配列が、1つまたは複数の単一アミノ酸の突然変異によって野生型HMGB1のBox-Aのアミノ酸配列と異なるポリマー複合体を対象とする。
本発明の文脈では、「HMGB1」は、非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1を含む。同様に、「HMGB1相同タンパク質」は、非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1相同タンパク質を含む。好ましいHMGB1相同タンパク質は、HMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4Lまたは/およびSP100-HMGである。
本発明の新規ポリマー複合体は、非複合体であるHMGB1ポリペプチドまたはポリペプチド変異体と比較して、水溶性の向上、薬剤管理容易性の改善、薬物動態的および生物学的利用能の改善ならびに/または低下した毒性および/もしくは免疫原性の低下を示す。さらに、驚くべきことに、HMGB1のBox-Aのポリペプチドまたはポリペプチド変異体および/または断片の複合体形成はタンパク質の生物活性を変えないことが、分かった。
本発明によるポリマー部分は生体適合性でなければならず、天然または半合成または合成起源であってよく、かつ直鎖状または分岐状構造を有することができる。代表的なポリマーは、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、ポリアクリルアミドまたはそのN-アルキル誘導体、ポリメタクリル酸、ポリメタクリレート、ポリアクリル酸エチル、ポリエチルアクリレート、ポリビニルピロリドン、ポリ(ビニルアルコール)、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリ乳酸グリコール酸共重合体、デキストラン、キトサン、ポリアミノ酸を非制限的に含む。
本発明の非常に好ましい実施形態では、ポリマーはポリエチレングリコール(PEG)、または末端OH基を例えばC1〜C5アルキル基またはC1〜C5アシル基、好ましくはC1-、C2-またはC3アルキル基またはC1-、C2-またはC3アシル基で場合によっては修飾することができるポリエチレングリコールである。修飾ポリエチレングリコールは、メトキシ-ポリエチレン-グリコール(m-PEG)であることが好ましい。
本発明によって使用するポリマーは、100〜100,000Da、好ましくは5,000〜50,000Daの範囲の分子量を有する。本発明の非常に好ましい実施形態では、ポリマーは10,000〜40,000Daの、好ましくは20,000〜40,000Daの範囲の分子量を有する、末端OHおよび/またはメトキシ基を好ましくは有するPEGである。最も好ましい実施形態では、20,000Daまたは40,000Daの平均分子量を有する、末端OHおよび/またはメトキシ基を好ましくは有するPEGを、本発明において使用する。
本発明のポリマー複合体のポリマー部分は、共有化学結合によってHMGB1ポリペプチドまたはポリペプチド変異体と結合して、安定した複合体をもたらす。
HMGB1のBox-A部分上の好ましい結合部位は、リシン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、チロシン、セリン、スレオニン、アスパラギン酸およびグルタミン酸残基から、またはタンパク質部分のN末端アミノ基から選択される。
本発明のポリマー複合体は、モノ-、ジ-およびマルチペグ化複合体であってよい。本発明のポリマー複合体は、モノ-ペグ化であることが好ましい。
ポリマー部分は通常、リンカー基によってHMGB1のBox-A部分と共有結合する。特に、本発明の文脈では、用語リンカー基は、ポリペプチド部分とポリマー部分の間の化学反応によって得られる基を意味する。リンカー基は、HMGB1のBox-A部分のアミノ酸残基上の活性基とポリマーまたは反応基によって活性化されるポリマーの反応によって得られるポリマー複合体の、当業者に知られている任意の残基であってよい。代表的なリンカー基は、アルキレン、アミン、アミド、カルバメート、カルボキシレート、カルボニル、エステル、エーテル、チオエーテルおよびジスルフィド基を非制限的に含む。リンカー基は、N末端アミノ酸残基とアルデヒド反応基によって活性化されるポリマー部分の反応およびその後の還元によって得られる、アミン結合であることが好ましい。
さらにリンカー基は、1つまたは複数のスペーサー基を場合によっては含むことができる。本発明の文脈では、スペーサー基は、反応性官能末端基を両末端に有する二官能基として定義する。1つの反応性末端基によって、スペーサーはポリマー部分またはポリマー部分上の反応基と反応する。他の末端上の他の官能基によって、スペーサー基はHMGB1のBox-A部分のアミノ酸残基上の官能基と結合する。適切なスペーサー基は当業者に知られている。スペーサー基の例には、ヘテロ-、二官能性小分子またはポリマーがあるが、これらだけには限られない。例えば、スペーサー基は、N、SおよびOから選択される1〜3個のヘテロ原子または中間段階の短い二官能性PEG鎖を含む、二官能性C6〜C12アルキル基またはヘテロ二官能性アルキル基によって表すことができる。
本発明のポリマー複合体を得るためのポリマーとHMGB1のBox-A部分の共有結合は、知られている化学合成技法によって実施することができる。例えば、本発明の代表的な一実施形態では、ポリマー複合体形成は、N-ヒドロキシスクシンイミドポリマー(es.NHS-PEG)とアミノ酸残基上の、好ましくはリシン残基上の、またはHMGB1のBox-AポリペプチドのN末端アミノ酸における遊離アミン基を反応させることによって実施することが可能である。あるいは、ポリマー複合体形成は、還元的アミノ化によるPEGアルデヒドとポリペプチドのN末端の反応によって実施する。さらに、PEG-マレイミドとHMGB1のBox-Aポリペプチドまたはポリペプチド変異体のCys残基を反応させることによって、ポリマー複合体を得ることもできる。
本発明の文脈では、用語「HMGB1のBox-A部分」は、ポリマー複合体化合物内のポリペプチド部分を示す。したがって、この用語は、野生型HMGB1のBox-Aおよびその生物活性断片、ならびにHMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体およびその生物活性断片を指す。
本発明の文脈では、用語「HMGB1のBox-AまたはHMGB1のBox-Aのアミノ酸配列」を言及する場合、それはヒトHMGB1のBox-Aと非ヒトHMGB1のBox-Aの両方を指す。本発明の好ましい実施形態では、HMGB1のBox-A部分は、野生型のヒトHMGB1のBox-Aタンパク質、および野生型のガンビアハマダラカHMGB1のBox-Aタンパク質に由来する。
本明細書で使用する「HMGB1のBox-Aの生物活性断片」は、既知の試験を使用しているときに対応する成熟タンパク質の少なくとも1つの生物活性が依然として観察可能である、知られている野生型のHMGB1のBox-Aタンパク質の一部分を含むことを意味する。HMGB1のB-BoxおよびHMGB1タンパク質の炎症促進活性に対するアンタゴニスト活性を総じて決定することができる場合、成熟タンパク質の断片は生物活性があると考えることが好ましい。天然HMGB1のBox-Aの生物活性断片は、少なくとも20、25、30、35、45、50、55、60、65、70、75または80アミノ酸の断片である。本発明の文脈において使用する天然HMGB1のBox-Aの好ましい生物活性断片は、それぞれ少なくとも77または少なくとも54アミノ酸の断片を含む。
本発明の文脈において使用する用語「突然変異」は、標的配列中の単一アミノ酸の置換、欠失および/または付加として理解することができる。本発明における標的配列の突然変異は、置換であることが好ましい。置換は、遺伝的にコードされた異なるアミノ酸または遺伝的にコードされていないアミノ酸で起こり得る。遺伝的にコードされていないアミノ酸の例は、ホモシステイン、ヒドロキシプロリン、オルニチン、ヒドロキシリシン、シトルリン、カルニチンなどである。
本発明の最も好ましい実施形態では、HMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体またはその生物活性断片は、参照により本明細書に組み込まれている、いずれもNautilus Biotech S.A.(パリ、フランス)の名の下の、WO2004/7022593中および幾つかのさらなる特許出願(PCT/FR00/03503、PCT/FR01/01366、米国特許出願第10/022,249号、米国特許出願第10/022,390号、米国特許出願第10/375,192号、米国特許出願第60/409,898号、米国特許出願第60/457,135号、米国特許出願第60/410,258号および米国特許出願第60/410,263号)中にその技術が広く記載される、定方向進化の手法を使用することによって得る。
定方向進化の技術を使用することによって得られる本発明のポリペプチド変異体は、1つまたは複数の単一アミノ酸の突然変異によって野生型HMGB1のBox-Aのアミノ酸配列と異なる突然変異タンパク質である。本発明の非常に好ましい実施形態では、天然タンパク質の配列上でわずか1個のアミノ酸の置換が起こる。しかしながら、複数、例えば2個以上のアミノ酸置換の置換によって天然タンパク質をさらに最適化できることは、本発明の主題によって含まれる。したがって、修飾ポリペプチド変異体は、1〜10、好ましくは2、3、4、5および6個の異なるアミノ酸標的位置におけるアミノ酸置換によって野生型タンパク質配列と異なる可能性がある。
特に、本発明のポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分として使用する、HMGB1のBox-Aまたはその生物活性断片の非常に好ましいポリペプチド変異体は、出願WO2006/024547中に記載されたポリペプチド変異体である。
したがって、本発明の好ましい一実施形態では、ポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分はヒトHMGB1のBox-Aから始めて誘導する。特に、ポリペプチド変異体の1つの基は、ヒトHMGB1のBox-A由来の完全長アミノ酸配列(84アミノ酸)(配列番号1)に導入される1つの突然変異から誘導される(図1a)。これらの好ましいポリペプチド変異体は、配列番号2〜116の配列において定義する(図1b)。
他の好ましいポリペプチド変異体は、それぞれ77アミノ酸(配列番号117)(図2a)および54アミノ酸(配列番号223)(図3a)の、ヒトHMGB1のBox-Aの生物活性断片から始めて得る。77アミノ酸のヒトHMGB1断片のBox-Aのポリペプチド変異体は、配列番号118〜222の配列において定義する(図2b)。54アミノ酸のヒトHMGB1断片のBox-Aのポリペプチド変異体は、配列番号224〜300の配列において定義する(図3b)。
本発明の他の好ましい実施形態では、ポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分はガンビアハマダラカHMGB1のBox-Aから始めて誘導する。特に、ポリペプチド変異体の1つの基は、ガンビアハマダラカHMGB1のBox-A由来の完全長アミノ酸配列(84アミノ酸)(配列番号301)に導入される1つの突然変異から誘導される(図4a)。これらのポリペプチド変異体は、配列番号302〜418の配列において同定する(図4b)。他の好ましいポリペプチド変異体は、それぞれ77アミノ酸(配列番号419)(図5a)および54アミノ酸(配列番号529)(図6a)の、ガンビアハマダラカHMGB1のBox-Aの生物活性断片から始めて作成する。77アミノ酸のHMGB1断片のBox-Aのポリペプチド変異体は、配列番号420〜528の配列において定義する(図5b)。54アミノ酸のHMGB1のガンビアハマダラカ(XP_311154)断片のBox-Aのポリペプチド変異体は、配列番号530〜610の配列において定義する(図6b)。
本発明のポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分として使用する、HMGB1のBox-Aの最も好ましいポリペプチド変異体を同定するために、幾つかの試験を実施して、野生型HMGB1のBox-Aのタンパク質と比較して同等または一層改善された活性と増大したプロテアーゼ耐性の両方を示す、ポリペプチド変異体を決定している。この目的のために、HMGB1誘導型NIH/3T3細胞移動を阻害する際の、配列番号1のヒトHMGB1のBox-AのBox-Aポリペプチド変異体の活性を、ヒトHMGB1のBox-Aの野生型自体のアンタゴニスト活性と比較して走化性アッセイにおいて決定した(実施例1および図7.1〜7.9)。さらに、配列番号1の天然HMGB1のBox-Aのタンパク質と同等またはそれより一層高いアンタゴニスト活性を示すポリペプチド変異体に関して、プロテアーゼによる消化に対するin vitroでの耐性を、トリプシン、α-キモトリプシン、エンドプロテイナーゼAsp-NおよびエンドプロテイナーゼGlu-C(シグマ)の混合物と、これらのポリペプチド変異体のそれぞれのインキュベーションによって決定した。このプロテアーゼ耐性試験は実施例2中に記載し、天然HMGB1のBox-Aと比較した前記変異体のプロテアーゼ耐性プロファイルの結果は図9.1〜9.67中に示す。
これらの結果から、本発明のポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分として有用なHMGB1のBox-Aの好ましいポリペプチド変異体は、同等またはより高いアンタゴニスト活性および増大したプロテアーゼ耐性を示す変異体であると結論を下すことができる。特に、好ましいポリペプチド変異体は、配列番号33、35、37〜39、42〜45、47〜49、52、55、57、59、62、64、67、69および104のポリペプチドである。これらの好ましいポリペプチド変異体の中で、最も好ましい変異体は、配列番号45、49、52、55、59、64および67において定義する変異体である。これらの非常に好ましいポリペプチド変異体は、配列番号1の野生型ヒトHMGB1のBox-Aと比較して劇的に改善されたプロテアーゼ耐性プロファイルを示す(実施例2の結果を参照)。
本明細書に示す様々なアミノ酸配列中に存在するアミノ酸は、それらの知られている一文字コードの略語に従って同定されることに留意されたい。それらの一文字略語コードによって本明細書に表す全てのアミノ酸残基配列は、アミノ末端からカルボキシル末端の従来の方向で左から右への配向性を有することを、さらに留意すべきである。
本発明では、驚くべきことに、前に記載したポリマー複合体が、非複合体であるHMGB1のBox-Aポリペプチド部分と比較して、改善された薬物動態的および毒物学的性質を示し、改善された生物学的利用能をもたらすことが分かった。非複合体形態と比較した、HMGB1のBox-Aポリペプチドおよびその変異体のポリマー複合体形成、特にこれらのポリペプチドのペグ化の特に有利な効果は、タンパク質の流体力学的体積の増大である。これは、腎クリアランスの無効化、すなわち糸球体濾過率の低下が原因である複合体化合物の薬物動態的性質の有意かつ予想外の改善をもたらす。
さらに、本発明のポリマー複合体は、プロテアーゼおよび/またはペプチダーゼのタンパク質分解活性に対して増大した耐性を示し、特にヒトプロテアーゼおよび/またはペプチダーゼ、特にヒト血清プロテアーゼおよび/またはヒト胃腸プロテアーゼまたはペプチダーゼのタンパク質分解活性に対して増大した耐性を示す。
特に、タンパク質分解に対する耐性は、非複合体であるHMGB1のBox-Aと比較して、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、95%またはそれより高い。プロテアーゼ耐性は、20μgのBox-Aの野生型または変異体とタンパク質全体の1%w/wのプロテアーゼの混合物のインキュベーション後に25℃において、異なる時点(5分と8時間の間)で測定した。プロテアーゼの混合物は、エンドプロテイナーゼGlu-C(SIGMA)200μg/ml、トリプシン(SIGMA)400μg/mlおよびα-キモトリプシン(SIGMA)400μg/mlのストック溶液から、それぞれのアッセイにおいて新たに調製した。プロテアーゼのインキュベーション後、10μlのアンチプロテアーゼ溶液(Roche)を加えて反応を停止させ、生物活性アッセイ用にサンプルは-20℃で保存した。
プロテアーゼ活性に対して増大した耐性により安定性が増大した結果として、本発明のポリマー複合体は、非複合体であるHMGB1のBox-Aと比較して長い体液中半減期も示す。特に、血清中および/または血中半減期が増大し、それによって非複合体であるHMGB1のBox-Aと比較して少なくとも10分、20分、30分、60分またはさらに長い増大を観察する。
タンパク質の流体力学的体積の増大により、タンパク質分解に対する増大した耐性、したがってより高い安定性にもより、本発明のポリマー複合体は、改善された治療的および生物学的性質および活性も示す。実際それらは、非複合体であるHMGB1のBox-Aタンパク質およびタンパク質変異体より好ましい薬物動態的および薬力学的プロファイルを示す。
したがって、本発明は、医薬品中の活性作用物質としての、前述のHMGB1のBox-Aのポリマー複合体の使用を対象とする。
したがって、本発明のさらに他の態様は、細胞外HMGB1関連病状またはHMGB1相同タンパク質と関連がある病状を予防および/または治療するための医薬品を製造するための本発明のポリマー複合体の使用である。特に、HMGB1関連病状は、多数の炎症性サイトカインカスケードにより媒介される病状である。
HMGB1ケモカインおよび炎症性サイトカインのHMGB1誘導型カスケードによって誘導される広範囲の病的状態は、以下の範疇:炎症性疾患、自己免疫疾患、全身性炎症反応症候群、臓器移植後の再潅流障害、心臓血管疾患、産科および婦人科疾患、感染性(ウイルス性および細菌性)疾患、アレルギー性およびアトピー性疾患、固形および非固形腫瘍の病状、移植片拒絶反応疾患、先天性疾患、皮膚疾患、神経疾患、カヘキシー、腎疾患、医原性中毒状態、代謝性および突発性疾患に分類される。
本発明によるHMGB1関連病状は、炎症性サイトカインカスケードの活性化により媒介される病的状態であることが好ましい。本発明を使用して有効に治療することができる状態の非制限的な例には、以下の範疇:再狭窄および他の心臓血管疾患、再潅流障害、炎症性腸疾患などの炎症性疾患、全身性炎症反応症候群、例えば敗血症、成人呼吸窮迫症候群など、関節リウマチおよび変形性関節炎などの自己免疫疾患、産科および婦人科疾患、感染性疾患、例えば喘息、湿疹などのアトピー性疾患、腫瘍の病状、例えば臓器または組織移植、臓器移植後の再潅流障害、臓器拒絶反応および移植片対宿主病などと関係がある固形または非固形腫瘍の病状、先天性疾患、乾癬または脱毛症などの皮膚疾患、神経疾患、眼科疾患、腎疾患、代謝性または突発性疾患および中毒状態、例えば医原性毒性およびベーチェット病に分類される、HMGB1ケモカインおよび炎症性サイトカインのHMGB1誘導型カスケードによって誘導される広範囲の病的状態があり、前述の疾患はHMGB1タンパク質の放出によって引き起こされ、それと関係があり、および/またはそれに付随する。
特に、炎症性疾患および自己免疫疾患に属する病状には、関節リウマチ/血清反応陰性関節症、変形性関節炎、炎症性腸疾患、クローン病、腸梗塞、全身性エリテマトーデス、虹彩炎/ブドウ膜炎、視神経炎、特発性肺線維症、全身性血管炎/ウェグナー肉芽腫症、サルコイドーシス、睾丸炎/精管切除術、全身性硬化症および強皮症がある。全身性炎症反応症候群には、敗血症症候群(グラム陽性菌敗血症、グラム陰性菌敗血症、培養陰性敗血症、真菌性敗血症、好中球減少性発熱、尿性敗血症、敗血症結膜炎を含む)、髄膜炎菌血症、外傷性出血、口ごもり、電離放射線暴露、急性および慢性前立腺炎、急性および慢性膵炎、虫垂炎、消化管、胃および十二指腸潰瘍、腹膜炎、潰瘍性、偽膜性、急性および虚血性大腸炎、憩室炎、アカラシア、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)がある。再潅流障害には、ポンプ不全後症候群および虚血再潅流障害がある。心臓血管疾患には、心臓性失神症候群、心筋梗塞および虚血、アテローム性動脈硬化症、静脈血栓症、心内膜炎、心膜炎、うっ血性心不全および再狭窄がある。産科および婦人科疾患には、早期分娩、子宮内膜症、流産、膣炎および不妊症がある。感染性疾患には、HIV感染/HIVニューロパシー、髄膜炎、B型およびC型肝炎、単純ヘルペス感染、敗血症性関節炎、腹膜炎、大腸菌0157:H7、肺炎喉頭蓋炎、溶血性尿毒症症候群/血栓性血小板減少性紫斑病、カンジダ症、フィラリア症、アメーバ症、マラリア、デング出血熱、リーシュマニア症、らい病、毒素性ショック症候群、連鎖球菌性筋炎、ガス炭疽、ヒト型結核菌、細胞内トリ型結核菌、ニューモシスティスカリニ肺炎、骨盤内炎症性疾患、睾丸炎/精巣上体炎、レジオネラ、ライム病、インフルエンザA、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス、ウイルス関連血球貪食症候群、ウイルス性脳炎/無菌性髄膜炎がある。アレルギー性およびアトピー性疾患には、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合体病、花粉症、アレルギー性鼻炎、湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性結膜炎、過敏性肺炎がある。悪性腫瘍(液状および固形腫瘍の病状)には、ALL、AML、CML、CLL、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、結腸直腸癌、鼻咽腔癌、悪性組織球増殖症および腫瘍随伴症候群/悪性高カルシウム血症がある。移植病には、臓器移植拒否反応および移植片対宿主病がある。先天性疾患には、嚢胞性線維症、家族性血球食細胞性リンパ組織球症および鎌状赤血球貧血がある。皮膚疾患には、乾癬、乾癬性関節炎および脱毛症がある。神経疾患には、神経変性疾患(多発性硬化症、偏頭痛、頭痛、アミロイド関連病状、プリオン病/クロイツフェルト-ヤコブ病、アルツハイマー病およびパーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症)および末梢性ニューロパシー、偏頭痛、頭痛がある。腎疾患には、ネフローゼ症候群、血液透析および尿毒症がある。医原性中毒状態には、OKT3療法、抗CD3療法、サイトカイン療法、化学療法、放射線療法および慢性サリチル酸塩中毒がある。代謝性または突発性疾患には、ウィルソン病、ヘモクロマトーシス、α-1アンチトリプシン欠乏症、糖尿病および糖尿病の合併症、体重減少、食欲不振、カヘキシー、肥満、橋本甲状腺炎、骨粗鬆症、視床下部-下垂体-副腎系の評価および原発性胆汁性肝硬変がある。眼科疾患には、緑内障、網膜症およびドライアイがある。他の病状の雑集には、多臓器不全症候群、筋ジストロフィー、敗血性髄膜炎、アテローム性動脈硬化症、喉頭蓋炎、ウィップル病、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、臓器壊死、発熱、敗血症、エンドトキシンショック、超高熱、好酸球性肉芽腫、肉芽腫症、サルコイドーシス、感染流産、尿道炎、肺気腫、鼻炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、上皮バリア機能不全、塵肺症、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス感染、播種性菌血症、包虫嚢胞、皮膚筋炎、火傷、日焼け、蕁麻疹、ワースト(warst)、膨疹、血管炎、脈管炎、心筋炎、動脈炎、結節性動脈周囲炎、リウマチ熱、セリアック病、脳炎、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、医原性合併症/末梢神経病変、脊髄損傷、麻痺、ブドウ膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、滑膜炎、重症筋無力症、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、強直性脊椎炎、バーガー病、レティアー症候群、水疱性皮膚炎(水疱性類天疱瘡)、類天疱瘡および尋常性天疱瘡および脱毛症がある。
他の好ましい実施形態では、本発明のポリマー化合物を、RAGE関連病状を予防、軽減および/または治療するための活性作用物質として使用する。RAGE関連病状は、RAGEの発現の増大と関係がある病的状態として定義する。
RAGE(後期糖化最終産物受容体)は、細胞表面分子の免疫グロブリンスーパーファミリーのマルチリガンド構成要素である。それは3つの免疫グロブリン様領域(1つのV型免疫グロブリンドメイン、次に2つのC型免疫グロブリンドメイン)、膜貫通ドメインおよびRAGE後シグナル伝達に必要である高電荷の短い細胞質尾部から構成される。老化状態の血管組織中に、糖尿病では加速的に蓄積するAGEという非酵素的グリコシル化および酸化タンパク質の結合標的として、RAGEは1992年に初めて同定された。RAGEは内皮細胞、平滑筋細胞、単核食細胞およびニューロンを含めた広範囲の細胞で発現される。RAGEは特に中枢神経系において発生中は高レベルで存在するが、そのレベルは成熟中に低下する。
前に報告したように、RAGEは細胞外HMGB1に関して同定された最初の受容体であった。細胞表面上のHMGB1の結合は、RAGEの転写の上方制御を誘導する。RAGE関連病状の例は、糖尿病性血管障害、ニューロパシー、網膜症などの糖尿病、およびアルツハイマー病および血管壁の免疫/炎症反応を含めた他の障害と関係がある糖尿病および障害である。この文脈におけるRAGE関連病状の非常に好ましい例は、I型糖尿病および/またはII型糖尿病である。
本発明の他の態様では、前に記載したポリマー複合体のHMGB1のBox-Aの使用をさらなる活性作用物質と組み合わせる。
さらなる作用物質は、炎症性サイトカインカスケードの初期メディエーターを阻害することができる作用物質であることが好ましい。このさらなる作用物質は、TNF、IL-1α、IL-1β、IL-Ra、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-18、IFN-γ、MIP-1α、MIF-1β、MIP-2、MIFおよびPAFからなる群から選択されるサイトカインのアンタゴニストまたは阻害剤であることが好ましい。
ポリマー複合体と組み合わせて使用するさらなる作用物質は、RAGEの阻害剤、例えばRAGEを対象とする抗体、RAGE発現を阻害することができる核酸または核酸類似体、例えばアンチセンス分子、リボザイムまたはRNA干渉分子、またはHMGB1とRAGEの相互作用、好ましくは非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1とRAGE、または可溶性RAGE(sRAGE)の相互作用の合成小分子アンタゴニストであってもよい。RAGEに対する抗体は、好ましくはモノクローナル抗体、より好ましくはキメラまたはヒト化抗体または組換え抗体、単鎖抗体など、またはこのような抗体の抗原結合断片である。可溶性RAGE類似体が、例えばヒト抗体のFcドメインとの融合タンパク質として、場合によっては存在する可能性がある。HMGB1とRAGEの相互作用の合成小分子アンタゴニストは、1000ダルトン未満の分子量を有することが好ましい。合成小分子アンタゴニストは、非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1、および非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1相同タンパク質、特にHMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4Lまたは/およびSP100-HMGとRAGEの相互作用を阻害することが好ましい。
ポリマー複合体と組み合わせて使用するさらなる作用物質は、トール様受容体(TLR)、例えばTLR2、TLR4、TLR7、TLR8または/およびTLR9とHMGB1の相互作用の阻害剤であってもよく、この阻害剤はモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、TLR発現を阻害することができる核酸もしくは核酸類似体、例えばアンチセンス分子、リボザイムもしくはRNA干渉分子、または好ましくは1000ダルトン未満のサイズを有する合成分子であることが好ましい。阻害剤はトール様受容体、特にTLR2、TLR4、TLR7、TLR8または/およびTLR9の知られている阻害剤であってよい。阻害剤は、非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1、および非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1相同タンパク質、特にHMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4Lまたは/およびSP100-HMGとトール様受容体の相互作用を阻害することが好ましい。
さらに他の実施形態では、さらなる作用物質はトロンボモジュリンの機能的N末端レクチン様ドメイン(D1)である。トロンボモジュリンのD1ドメインは、非アセチル化型および/またはアセチル化型の放出されるHMGB1および放出されるHMGB1相同タンパク質、特にHMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4Lまたは/およびSP100-HMGを阻止することができ、したがってRAGEおよびトール様受容体とそれらの相互作用を妨げることができる。トロンボモジュリンのD1ドメインは、それをプロテアーゼ耐性にするために天然または突然変異型であってよい。
さらなる作用物質は、HMGB1タンパク質と結合することができる、湾曲形構造、特に二本鎖湾曲DNA、PNAまたはDNA/PNAキメラまたはハイブリッド、または二本鎖十字形DNA、PNAまたはDNA/PNAキメラまたはハイブリッド構造を有する合成二本鎖核酸または核酸類似体分子であってもよい。好ましい核酸および核酸類似体分子は、参照により本明細書に組み込まれている、(2004年7月2日に出願された米国仮出願第60/584,678号の優先権を主張する)2005年7月4日に出願された、共有に係る同時係属中の国際特許出願No.PCT/EP2005/007198中に開示されている。湾曲形構造を有する合成二本鎖核酸または核酸類似体分子は、非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1、および非アセチル化型または/およびアセチル化型のHMGB1相同タンパク質、特にHMGB2、HMGB3、HMG-1L10、HMG-4Lまたは/およびSP100-HMGと結合することができることが好ましい。
さらに他の実施形態では、ポリマー複合体と組み合わせて使用するさらなる作用物質は、K-252aまたは/およびその塩もしくは誘導体、あるいはK-252aのポリマー複合体または/およびその誘導体である。K-252aまたはK-252aのポリマー複合体およびその誘導体の使用は、参照により本明細書に組み込まれている、2005年8月25日に出願された共有に係る同時係属中の国際特許出願No.PCT/EP2005/008258中に開示されている。
したがって、本発明の他の態様は、HMGB1関連病状を治療するための活性成分として、有効量のHMGB1のBox-Aのポリペプチドまたはポリペプチド変異体またはその生物活性断片の少なくとも1つのポリマー複合体、ならびに薬剤として許容される担体、希釈剤および/またはアジュバントを含む医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、非アセチル化または/およびアセチル化型のHMGB1および/またはHMGB1相同タンパク質と関連がある病状の治療に適していることが好ましい。他の好ましい実施形態では、少なくとも1つのポリマー複合体を含む本発明の医薬組成物は、前に定義したさらなる作用物質も含む。本発明の医薬組成物は、診断用途または治療用途で使用することができる。
正確な配合、投与の経路および用量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択することができる。投与は1回用量または間隔を置いた反復用量で実施することができる。用量および間隔は、患者の症状を軽減し、または生存期間が延長する治療効果をもたらすように個別に調節することができる。投与する組成物の実際の量は、当然ながら、治療する対象、対象の体重、苦痛の重度、投与の形式および処方医師の判断に依存する。適切な1日当たりの用量は0.001mg/kgと10mg/kgの間、特に0.1〜5mg/kgである。
投与は知られている方法によって、例えば注射によって、特に静脈内、筋肉内、経粘膜、皮下または腹膜内注射によって、および/または経口、局所、鼻腔、吸入、エアロゾルおよび/または直腸施用などによって実施することができる。投与は局所または全身であってよい。
さらに、本発明の目的のHMGB1部分のBox-Aのポリマー複合体は、医療機器または薬剤放出/輸送システム(ミクロスフェア)の表面および/または内部に可逆的に固定化し、かつ/またはそこに吸着させることが可能である。医療機器またはミクロスフェアの表面、またはその表面をコーティングする層へのそれらの結合、含浸および/または吸着によって、本発明のポリマー複合体を医療機器およびミクロスフェアに可逆的に充填することが可能である。医療機器またはミクロスフェアが生体液と接触するとき、可逆的に固定化されたポリマー複合体が放出される。したがって、医療機器およびミクロスフェアは、治療により必要とされるとき、それらの放出動態を制御して制御放出または持続放出を確実にすることができるような方法で、本発明の目的の分子を溶出する薬剤放出ツールとして作用する。医療機器のコーティング/含浸およびミクロスフェアの充填のための方法は、これらの技術分野における専門家によってよく知られている。
したがって、本発明の他の態様は、複合体分子が医療機器またはミクロスフェアの表面上に可逆的に固定化されている、またはそれらの内部に吸着している、HMGB1のBox-Aのポリマー複合体の使用である。これらの医療機器は、外科手術器具、インプラント、カテーテルまたはステント、例えば血管形成術用ステント、および特に薬用薬剤溶出ステントであることが好ましい。
本発明の他の態様は、本発明の少なくとも1つのポリマー複合体で可逆的にコーティングされた医療機器に関する。このような医療機器は、外科手術器具、インプラント、カテーテルまたはステントから選択することができる。このような医療機器は、血管形成術に有用である可能性がある。
以下の図面によって本発明をさらに例示する:
(実施例)
1. IN VITRO活性試験:NIH/373細胞移動アッセイ
この試験の目的は、配列番号2〜116において定義するHMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体のそれぞれの活性を評価すること、およびそれらの活性を配列番号1のヒト野生型HMGB1のBox-Aの完全長断片の活性と比較して、野生型と同等または野生型より優れた活性を有する全ての変異体を選択することであった。
1. IN VITRO活性試験:NIH/373細胞移動アッセイ
この試験の目的は、配列番号2〜116において定義するHMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体のそれぞれの活性を評価すること、およびそれらの活性を配列番号1のヒト野生型HMGB1のBox-Aの完全長断片の活性と比較して、野生型と同等または野生型より優れた活性を有する全ての変異体を選択することであった。
HMGB1のBox-Aの活性は、HMGB1誘導型NIH/3T3細胞移動の阻害としてin vitroで評価する。
1.1 材料
HMGB1のBox-Aの野生型および変異体(Nautilus Biotech)
NIH/3T3細胞(ATCCn.CRL-1658)
D-MEM培地(GIBCO;カタログ番号31966-021)
ウシ胎児血清(GIBCO;カタログ番号10270-106)
ペニシリン-ストレプトマイシン10,000U/ml(GIBCO;カタログ番号15140-122)
L-グルタミン200mM(GIBCO;カタログ番号25030-024)
TrypLE Select(GIBCO;カタログ番号12563-011)
リン酸緩衝生理食塩水(0.138MのNaCl、0.0027MのKCl、0.01Mのリン酸、pH7.4)
PVP不含フィルター(8μmの孔径;13mmの全体径)(Neuro Probe;カタログ番号PFA8)
ヒトフィブロネクチン(Roche;カタログ番号1080938)
ブラインドウエル走化性チャンバー(Neuro Probe;カタログ番号BW25)
GIEMSA Stain Modified(Sigma;カタログ番号GS1L)
HMGB1のBox-Aの野生型および変異体(Nautilus Biotech)
NIH/3T3細胞(ATCCn.CRL-1658)
D-MEM培地(GIBCO;カタログ番号31966-021)
ウシ胎児血清(GIBCO;カタログ番号10270-106)
ペニシリン-ストレプトマイシン10,000U/ml(GIBCO;カタログ番号15140-122)
L-グルタミン200mM(GIBCO;カタログ番号25030-024)
TrypLE Select(GIBCO;カタログ番号12563-011)
リン酸緩衝生理食塩水(0.138MのNaCl、0.0027MのKCl、0.01Mのリン酸、pH7.4)
PVP不含フィルター(8μmの孔径;13mmの全体径)(Neuro Probe;カタログ番号PFA8)
ヒトフィブロネクチン(Roche;カタログ番号1080938)
ブラインドウエル走化性チャンバー(Neuro Probe;カタログ番号BW25)
GIEMSA Stain Modified(Sigma;カタログ番号GS1L)
1.2 フィルター調製
ポリカーボネート膜PVPを含まないフィルター(8μmの孔径、13mmの全体径)を、フィルターの不透明側に施す30μl/フィルターのフィブロネクチンの50μg/ml溶液でそれらをコーティングすることによって、実験を実施する前に約1時間調製する。フィブロネクチンのストック溶液は、1mg/mlの最終濃度までddH2Oに凍結乾燥フィブロネクチンを希釈すること、および完全に溶かすために37℃で約1時間溶液を保つことによって調製する。このストック溶液は-20℃で保存することができる。
ポリカーボネート膜PVPを含まないフィルター(8μmの孔径、13mmの全体径)を、フィルターの不透明側に施す30μl/フィルターのフィブロネクチンの50μg/ml溶液でそれらをコーティングすることによって、実験を実施する前に約1時間調製する。フィブロネクチンのストック溶液は、1mg/mlの最終濃度までddH2Oに凍結乾燥フィブロネクチンを希釈すること、および完全に溶かすために37℃で約1時間溶液を保つことによって調製する。このストック溶液は-20℃で保存することができる。
次いでフィルターを層流フード下で放置乾燥させる(約1時間)。
1.3 細胞調製
NIH/3T3細胞を実験前日に(実験を実施する約22〜24時間前に)細胞106個/プレートで接種する。
NIH/3T3細胞を実験前日に(実験を実施する約22〜24時間前に)細胞106個/プレートで接種する。
フィルターを使用する準備ができたときに、トリプシンを用いて細胞を脱着させ、計数し細胞106個/mlで無血清培養培地に再懸濁させる。
1.4 走化性アッセイ
それぞれの走化性の実験において、配列番号1のヒトHMGB1のBox-Aの完全長断片の14の異なるポリペプチド変異体を試験する。
それぞれの走化性の実験において、配列番号1のヒトHMGB1のBox-Aの完全長断片の14の異なるポリペプチド変異体を試験する。
血清添加剤を含まない増殖細胞培地(w/oFBS)を、自発的移動を表す陰性対照として使用する。
1nMのHMGB1は陽性対照として使用する。HMGB1のBox-A野生型または試験するポリペプチド変異体0.5/1nMを1nMのHMGB1に加えて、HMGB1誘導型NIH/3T3細胞移動を阻害する。
陰性対照(w/oFBS)および陽性対照(1nMのHMGB1)を、それぞれの実験において三連で試験する。
HMGB1誘導型細胞移動を阻害する際のHMGB1のBox-A野生型(配列番号1)の活性を、それぞれの実験において三連で試験する。
HMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体のそれぞれ(配列番号2〜116)を二連で試験する。
ブラインドウエル走化性チャンバーを使用する。それぞれのチャンバーのクリーンな、乾燥状態の下側ウエルに、適切な走化作用物質および阻害剤を加えたFBSを含まない50μlのDMEMを充填する。ウエル充填時にわずかに陽性のメニスカスが形成されるはずであり、これはフィルター施用時に気泡の捕捉を妨げるのを助長する。小さなかん子を用いて、気泡を捕捉せず指でフィルターを触らないように注意しながら、フィルターを充填ウエル上に置く(フィブロネクチン処理側が上)。フィルターリテーナーは手作業によってねじで取り付ける。細胞懸濁液(細胞50000個/50μl)を上側ウエルにピペットで移し、150μlの無血清培地を加えてチャンバーの上側ウエルを充填する。充填チャンバーは3時間(37℃、5%のC02)インキュベートして細胞を移動させる。インキュベーション後、流体をフィルターから除去する。リテーナーはねじを取りはずし冷却蒸留水に浸す。かん子を用いてフィルターを取り出し、クリーンな表面(固形パラフィン)上に置き(移動細胞側が上)、針で固定する(境界領域に置く)。
1.5 移動細胞のギムザ染色
フィルターをエタノールで1回固定し、次いで流水下で3回洗浄する。ddH2Oに1:10希釈したGIEMSA Stain Modifiedの希釈標準溶液を使用直前に調製する。フィルターを洗浄した後、染色液を加え、放置して20分間インキュベートする。染色液の洗浄を流水下で実施する。次いでフィルターを移動細胞側を下にしてスライド上に置き、フィルターを動かさないように注意しながら、非移動細胞側は湿った綿棒で軽く拭う(2本の綿棒または二先端綿棒の両端を使用して2回拭う)。クリーニング後、カバースライドをフィルター上に置き、顕微鏡下において40倍で10のランダムな領域/フィルター中の細胞を計数する。
フィルターをエタノールで1回固定し、次いで流水下で3回洗浄する。ddH2Oに1:10希釈したGIEMSA Stain Modifiedの希釈標準溶液を使用直前に調製する。フィルターを洗浄した後、染色液を加え、放置して20分間インキュベートする。染色液の洗浄を流水下で実施する。次いでフィルターを移動細胞側を下にしてスライド上に置き、フィルターを動かさないように注意しながら、非移動細胞側は湿った綿棒で軽く拭う(2本の綿棒または二先端綿棒の両端を使用して2回拭う)。クリーニング後、カバースライドをフィルター上に置き、顕微鏡下において40倍で10のランダムな領域/フィルター中の細胞を計数する。
1.6 データ表示および統計分析
実施したNIH/3T3移動アッセイの結果は、図および表7.1〜図および表7.9中に示す表および棒グラフ中に報告する。
実施したNIH/3T3移動アッセイの結果は、図および表7.1〜図および表7.9中に示す表および棒グラフ中に報告する。
データは平均±95%CIとして棒グラフで表す。
一元配置ANOVA次にDunnettの事後検定(対照列データ:1nMのHMGB1サンプル+HMGB1のBox-Aの野生型サンプル)統計分析を実施する。
結果のデータを評価すると、0.05未満の事後検定p値を有するHMGB1のBox-Aの変異体のデータは、HMGB1のBox-Aの野生型と有意に異なると考えられる。Box-Aのポリペプチド変異体の平均がBox-Aの野生型の平均より高い場合、図7.1〜7.9中に示す実験のグラフ中の列を赤で着色する。これらの赤い列は、HMGB1誘導型細胞移動を阻害する際の野生型より低い活性を示す、HMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体を表す。
ポリペプチド変異体の結果の平均が野生型Box-Aの平均より低い場合、図7.1〜7.9中に示す実験のグラフ中の列をライトブルーで着色する。これらの変異体は、HMGB1誘導型細胞移動を阻害する際のHMGB1のBox-Aの野生型より高い活性を示す、HMGB1のBox-Aの変異体を表す。
0.05を超える事後検定p値を有するHMGB1のBox-Aの変異体のデータは、HMGB1のBox-Aの野生型と有意に異ならないと考えられる。これらの変異体の棒グラフは緑色で着色する。これらの変異体は、HMGB1誘導型細胞移動を阻害する際の野生型と同じ活性を示す、HMGB1のBox-Aの変異体を表す。
1.7 結果
配列番号2〜116のヒトHMGB1高親和性結合ドメインBox-Aのポリペプチド変異体の活性を、HMGB1誘導型細胞移動の阻害として配列番号1のヒトHMGB1のBox-A野生型と比較して評価して、本発明の好ましいポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分として有用な好ましいポリペプチド変異体を決定した。
配列番号2〜116のヒトHMGB1高親和性結合ドメインBox-Aのポリペプチド変異体の活性を、HMGB1誘導型細胞移動の阻害として配列番号1のヒトHMGB1のBox-A野生型と比較して評価して、本発明の好ましいポリマー複合体のHMGB1のBox-A部分として有用な好ましいポリペプチド変異体を決定した。
走化性アッセイの結果は、26のポリペプチド変異体に関して、本発明による突然変異は、野生型ヒトHMGB1のBox-Aの活性と比較して細胞移動の阻害において、より高い活性をもたらす可能性があることを明らかにした(図7.1〜7.9)。特に、細胞移動の阻害におけるより高い活性は、配列番号30〜32、35、38、40〜41、43、48、51、57、63〜64、69、70、94、95、100、103〜104、106〜107、109〜111および113のポリペプチド変異体に関して示された。
さらに、走化性アッセイの結果は、41のポリペプチド変異体は、Box-Aの野生型ポリペプチドの活性と比較してHMGB1誘導型細胞移動を阻害する際に、それらの活性の変化を示さなかったことを明らかにした(図7.1〜7.9)。特に、これは配列番号2、7、9、11、15、18、22、26〜28、33、37、39、42、44〜47、49、52、55、59、61、62、66〜67、71、80〜84、86〜87、97〜99、101〜102、112および114のポリペプチド変異体の場合である。
Box-Aの野生型と同等またはそれより高い活性を示す、全てのこれらのBox-Aのポリペプチド変異体をin vitroプロテアーゼ耐性に関して試験して、少なくともBox-Aの野生型ほど活性がある最も耐性がある変異体を選択した(実施例2中のプロテアーゼ耐性試験を参照)。
2. IN VITROプロテアーゼ耐性試験
この試験の目的は、実施例1中に示すHMGB1のBox-Aの変異体のin vitroプロテアーゼ耐性を評価すること、およびその耐性と配列番号1の野生型HMGB1のBox-Aの耐性を比較して、野生型ポリペプチドに対して改善されたプロテアーゼ耐性を有する変異体を同定することであった。
この試験の目的は、実施例1中に示すHMGB1のBox-Aの変異体のin vitroプロテアーゼ耐性を評価すること、およびその耐性と配列番号1の野生型HMGB1のBox-Aの耐性を比較して、野生型ポリペプチドに対して改善されたプロテアーゼ耐性を有する変異体を同定することであった。
2.1 材料
HMGB1のヒスタグBox-Aの野生型および選択した変異体(Nautilus Biotech)
トリプシン(Sigma;カタログ番号T8658;ロット番号045K5113)
α-キモトリプシン(Sigma;カタログ番号C6423;ロット番号109H74858)、
エンドプロテイナーゼAsp-N(Sigma;カタログ番号P3303;ロット番号046K1049)
エンドプロテイナーゼGlu-C(Sigma;カタログ番号P6181;ロット番号075K5100)
完全、最少のEDTAを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche;カタログ番号11836170001)
Trizma基剤(Sigma;カタログ番号T6066)
アクリルアミド/ビス40%水溶液(Sigma;カタログ番号01709)
SDS(Sigma;カタログ番号71729)
グリセロール99%(Sigma;カタログ番号G9012)
Temed(Sigma;カタログ番号87689)
APS(Sigma;カタログ番号A3678)
ポリペプチドSDS-PAGE分子量標準(Bio-Rad;カタログ番号161-0326)
予め混合した10×トリス/トリシン/SDSバッファー(Bio-Rad;カタログ番号161-0744)
β-メルカプトエタノール(Sigma;カタログ番号M7154)
メタノール(VWR;カタログ番号20864.320)
酢酸(VWR;カタログ番号20104.323)
ブリリアントブルーR(Sigma;カタログ番号B0149)
ブロモフェノールブルー(Sigma;カタログ番号B0126)
塩酸(Merck;カタログ番号1.00319.2511)
トリシンゲル用の3×サンプルローディングバッファー(組成:150mMのトリス-HCl、pH6.8;12%SDS;36%グリセロール;6%β-メルカプトエタノール;0.04%ブロモフェノールブルー)
HMGB1のヒスタグBox-Aの野生型および選択した変異体(Nautilus Biotech)
トリプシン(Sigma;カタログ番号T8658;ロット番号045K5113)
α-キモトリプシン(Sigma;カタログ番号C6423;ロット番号109H74858)、
エンドプロテイナーゼAsp-N(Sigma;カタログ番号P3303;ロット番号046K1049)
エンドプロテイナーゼGlu-C(Sigma;カタログ番号P6181;ロット番号075K5100)
完全、最少のEDTAを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche;カタログ番号11836170001)
Trizma基剤(Sigma;カタログ番号T6066)
アクリルアミド/ビス40%水溶液(Sigma;カタログ番号01709)
SDS(Sigma;カタログ番号71729)
グリセロール99%(Sigma;カタログ番号G9012)
Temed(Sigma;カタログ番号87689)
APS(Sigma;カタログ番号A3678)
ポリペプチドSDS-PAGE分子量標準(Bio-Rad;カタログ番号161-0326)
予め混合した10×トリス/トリシン/SDSバッファー(Bio-Rad;カタログ番号161-0744)
β-メルカプトエタノール(Sigma;カタログ番号M7154)
メタノール(VWR;カタログ番号20864.320)
酢酸(VWR;カタログ番号20104.323)
ブリリアントブルーR(Sigma;カタログ番号B0149)
ブロモフェノールブルー(Sigma;カタログ番号B0126)
塩酸(Merck;カタログ番号1.00319.2511)
トリシンゲル用の3×サンプルローディングバッファー(組成:150mMのトリス-HCl、pH6.8;12%SDS;36%グリセロール;6%β-メルカプトエタノール;0.04%ブロモフェノールブルー)
2.2. プロテアーゼ混合物の調製
トリプシン、α-キモトリプシン、エンドプロテイナーゼAsp-NおよびエンドプロテイナーゼGlu-Cを含むプロテアーゼの混合物を使用する。表1は、この試験中で使用したプロテアーゼのそれぞれの特異性を報告する。
トリプシン、α-キモトリプシン、エンドプロテイナーゼAsp-NおよびエンドプロテイナーゼGlu-Cを含むプロテアーゼの混合物を使用する。表1は、この試験中で使用したプロテアーゼのそれぞれの特異性を報告する。
それぞれの凍結乾燥プロテアーゼを製造者の推奨に従い溶解し、ストック溶液を得て、それを等分し-80℃で保存する。
100μgのトリプシンを100μlのdH2Oに溶かして、1μg/μlのストック溶液を得る。25μgのα-キモトリプシンを50μlの溶液1mMHCl、2mMCaCl2に溶かして、0.5μg/μlのストック溶液を得る。2μgのエンドプロテイナーゼAsp-Nを50μlのdH2Oに溶かして、0.04μg/μlのストック溶液を得る。25μgのエンドプロテイナーゼGlu-Cを50μlのdH2Oに溶かして、0.5μg/μlのストック溶液を得る。
実験を実施する前に、それぞれのプロテアーゼストック溶液の1つのアリコートを放置して氷上で解凍する。
トリプシンおよびエンドプロテイナーゼGlu-CのストックアリコートをdH2Oに希釈して、0.1μg/μlの最終希釈標準溶液を得る。α-キモトリプシンのストックアリコートを溶液1mMHCl、2mMCaCl2に希釈して、最終0.1μg/μlの希釈標準溶液を得る。エンドプロテイナーゼAsp-Nのアリコートは希釈せずに使用する。実験を実施する直前に、(サンプル中に含まれる全Box-Aの重量当たりの重量で)1%のそれぞれのプロテアーゼを含むプロテアーゼの混合物を新たに調製し、消化するHMGB1のBox-Aにすぐに加える。
2.3. HMGB1のBox-Aの野生型および変異体のプロテアーゼによる消化
合計18μgのそれぞれのHMGB1のBox-A(野生型または変異体)を、それぞれの実験において消化する。
合計18μgのそれぞれのHMGB1のBox-A(野生型または変異体)を、それぞれの実験において消化する。
試験するHMGB1のBox-Aを放置して氷上で解凍し、18μgに相当する体積を得る。次いでこの溶液の体積はdH2Oを用いて90μlの最終体積にして、試験するそれぞれのHMGB1のBox-Aに関して同じ最終体積を得る。
(2μgのHMGB1のBox-Aに相当する)10μlのこの溶液を、プロテアーゼの混合物を加える前に得る。このサンプルは、「時間ゼロ」の未消化サンプルに相当する。
残りのサンプル(16μgのHMGB1のBox-A)を、8.8μlの(新たに調製した混合物;2.2参照のそれぞれのプロテアーゼの0.16μgに相当)消化用プロテアーゼ混合物と共に加える。
プロテアーゼによる消化は25℃で実施し、(混合物中に元来存在する)2μgのHMGB1のBox-Aに相当する体積を、定義した時点でサンプル採取する。(10mlのdH2Oに1つの錠剤を溶かした)完全最少のEDTAを含まないプロテアーゼ阻害剤カクテルの4μlの溶液を加えて消化を停止する。
サンプル採取の時点は、0、5分、15分、30分、1時間、1.5時間、2時間および4時間である。
プロテアーゼ阻害の直後に、サンプルを適量のサンプルローディングバッファー3×と共に加え、約3分間95℃でインキュベートする。
2.4. 消化されたHMGB1のBox-Aの野生型および変異体のトリシンSDS-PAGE
プロテアーゼによる消化およびサンプル調製後、それぞれのHMGB1のBox-Aの時点のサンプルを、トリシンSDSPAGEゲル上に載せる(参照文献:Schagger and von Jagow、「Tricine-sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100kDa」、Anal.Biochem.166、368〜379、1987を参照)。
プロテアーゼによる消化およびサンプル調製後、それぞれのHMGB1のBox-Aの時点のサンプルを、トリシンSDSPAGEゲル上に載せる(参照文献:Schagger and von Jagow、「Tricine-sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100kDa」、Anal.Biochem.166、368〜379、1987を参照)。
5μlのポリペプチドSDS-PAGE分子量標準(Bio-Rad)を、それぞれのゲル上に参照用に載せる。
ゲルのそれぞれのウエルに、10μlのサンプル(消化前の1μgのHMGB1のBox-Aに相当する体積)を充填する。
電気泳動は、ブロモフェノールブルーがゲルの分離部分に入るまでは30Vで、次いで作業の最後までは120V(Mini Protean 3 System;Bio-Rad)で実施する。
ゲルはクーマシーブリリアントブルーR染色溶液(0.1%w/v、50%メタノール、10%酢酸中)中に1時間浸すことによって染色し、脱染色溶液(30%メタノール、10%酢酸)中で一晩脱染色する。
ゲルの画像はGelDoc2000(Bio-Rad)画像システムを用いて得る。
2.5 結果
前に報告したアッセイ条件において、HGMB1の野生型タンパク質は完全なプロテアーゼによる消化に約30分間耐えた。図8中では、配列番号1のタンパク質のヒトHMGB1のBox-A野生型の84アミノ酸の完全長断片に相当するバンドは、プロテアーゼによる消化の30分まで目に見える。
前に報告したアッセイ条件において、HGMB1の野生型タンパク質は完全なプロテアーゼによる消化に約30分間耐えた。図8中では、配列番号1のタンパク質のヒトHMGB1のBox-A野生型の84アミノ酸の完全長断片に相当するバンドは、プロテアーゼによる消化の30分まで目に見える。
試験した21のBox-Aのポリペプチド変異体は、プロテアーゼに対して増大した耐性を示した(図10)。報告したアッセイ条件において、これらの変異体はプロテアーゼによる消化に1時間〜2時間耐える。配列番号33、35、37、38、39、42、43、44、47、48、57、62、69および104のポリペプチド変異体は、プロテアーゼによる消化に対して1時間の耐性を示した。図9.14、9.15、9.16、9.17、9.18、9.21、9.22、9.23、9.26、9.27、9.32、9.35、9.40および9.59は、84アミノ酸の非ヒスタグタンパク質に相当するバンドを示し、このバンドはプロテアーゼによる消化の1時間まで目に見える。
配列番号45、49、52、55および67のポリペプチド変異体は、プロテアーゼによる消化に対して1.5時間の耐性を示した。図9.24、9.28、9.30、9.31および9.39は、84アミノ酸の非ヒスタグタンパク質に相当するバンドを示し、このバンドはプロテアーゼによる消化後の1.5時間明らかに目に見える。配列番号59および64のポリペプチド変異体は、プロテアーゼによる消化に対して2時間までの耐性をさらに示す。図9.33および9.37は、84アミノ酸の非ヒスタグタンパク質のバンドを示し、このバンドはプロテアーゼによる消化後の2時間まで明らかに目に見える。
3. マウスにおける1回皮下投与後のBOXA(野生型および変異型)およびペグ化BOXA(野生型および変異型)の薬物動態試験。
3.1. 試験の目的
この試験の目的は、マウスにおける化合物の1回皮下投与後に、BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の薬物動態プロファイルを評価して比較することであった。
3.1. 試験の目的
この試験の目的は、マウスにおける化合物の1回皮下投与後に、BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の薬物動態プロファイルを評価して比較することであった。
3.2. 材料および方法
被験物質:BoxAの野生型および変異型および相当するペグ化分子。ペグ化分子は、還元的アミノ化により線状mPEG-アルデヒド(40kDa)とそれぞれのBoxA分子のN末端を反応させることによって得た。
被験物質:BoxAの野生型および変異型および相当するペグ化分子。ペグ化分子は、還元的アミノ化により線状mPEG-アルデヒド(40kDa)とそれぞれのBoxA分子のN末端を反応させることによって得た。
3.3 In vivo実験
動物:実験時に22.2〜22.4gの平均体重を有していた、マウス(Balb/c、オス、7〜9週齢、実験一週間前にCharles River Laboratories Italia SpA、Calcoによって供給された)。
動物:実験時に22.2〜22.4gの平均体重を有していた、マウス(Balb/c、オス、7〜9週齢、実験一週間前にCharles River Laboratories Italia SpA、Calcoによって供給された)。
動物の飼育:12時間の明/暗サイクルで、温度および相対湿度をそれぞれ22℃±2℃および55±15%に維持するように設定した換気型恒温コンテナ中に動物を収容した。マウスはケージ当たり10匹まで、透明ポリカーボネート製ケージ(Techniplast、Buguggiate、イタリア)中に収容し、水筒によって飲料水、および市販の実験用げっ歯類の餌(4RF21、Mucedola s.r.l.、Settimo Milanese、イタリア)を随意で与えた。
実験群:4(4つの被験物質)、20匹の動物/群、ランダムにグループ分け。
投与した用量:BoxAの野生型および変異型を皮下に1mg/kg投与した。ペグ化BoxAの野生型および変異型は皮下に5mg/kg投与した。これらの用量は試験化合物の等モル濃度を確実にした。
被験物質の投与:0.45×12mm(26G×1/2’’)の針を取り付けたインスリン用注射筒を使用することによって、0.25mL/マウス(10mL/体重1kg)の体積で被験物質を皮下投与した。
被験物質の配合物:リン酸緩衝生理食塩水溶液
動物の殺傷および血液採取:
血液サンプルは治療後に以下の時点で採取した:
BoxAの野生型および変異型:試験化合物の投与後5、20および40分、1.5および2.5時間;
ペグ化BoxAの野生型および変異型:試験化合物の投与後5、40分、1.5、5および10時間。
血液サンプルは治療後に以下の時点で採取した:
BoxAの野生型および変異型:試験化合物の投与後5、20および40分、1.5および2.5時間;
ペグ化BoxAの野生型および変異型:試験化合物の投与後5、40分、1.5、5および10時間。
試験化合物間の血液サンプル採取に関する異なる時点は、血流中でのペグ化分子の予想される長い耐久性に基づいて決定した。
それぞれのサンプル採取時間に、約0.4mLの血液サンプルを、深いエーテル麻酔下でインスリン用注射筒を使用して、それぞれの動物の腹側大動脈から採取し、5μLのヘパリン(5000Ul/mL)を含むポリエチレン製エッペンドルフチューブに移して血液凝固を防止した。血液サンプルは冷凍遠心器(2〜4℃)における5分間1400gでの遠心分離まで氷中に保った。それぞれのチューブから血漿サンプルを次いで回収し、新しいエッペンドルフチューブ中に置き、分析するまで-80℃に凍結した。
3.4 分析測定
BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の血漿中濃度を、ELISA法によってマウスの血漿において決定した。
BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の血漿中濃度を、ELISA法によってマウスの血漿において決定した。
簡単に言うと、100mM炭酸塩-重炭酸塩コーティングバッファー中にBoxAのN末端に対するモノクローナル抗体を10ng/mlに希釈することによって、コーティング溶液を調製した。100μLをNunc Maxisorp ELISAプレートのそれぞれのウエルに等分し、4℃で一晩インキュベートした。プレートはPBS0.05%Tweenで6回洗浄し、5%ミルクをPBS1%Tweenに溶かした300μLをそれぞれのウエルに加えて、プレート上の残りの結合部位を阻害した。プレートは300rpmで室温において1時間インキュベートした。サンプルはPBS1%Tween中に1:20に希釈した。
プレートは6回洗浄し、100μLの標準および希釈サンプルはコーティングプレートの指定のウエルに移し、300rpmで室温において1時間インキュベートした。BoxAのC末端に対する二次抗体(1:200)を加える前に、プレートを再度6回洗浄した。1時間のインキュベーションおよび6回の洗浄後、ビオチン-ヤギ抗-ウサギ複合体1:20000溶液をそれぞれのウエルに加えた(100μL/ウエル)。1時間のインキュベーション(室温で、300rpm)および6回の洗浄後、300rpmで25分間100μl/ウエルのストレプトアビジン-HRP溶液1:100000と共にプレートをインキュベートした。プレートは6回洗浄し、100μlの予め温めたTMB基質をそれぞれのウエルに加えた。シグナルを卓上において室温で現像し、30分後、100μL/ウエルの停止溶液を加え、プレートは450nmですぐに読み取った。
3.5 結果
BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の平均血漿中濃度を、前に記載したPKサンプルのそれぞれに関して計算し、薬物動態プロファイルを決定した。結果は図11および12中に示す。
BoxA(野生型および変異型)およびペグ化BoxA(野生型および変異型)の平均血漿中濃度を、前に記載したPKサンプルのそれぞれに関して計算し、薬物動態プロファイルを決定した。結果は図11および12中に示す。
実施例として、本明細書で以下に、BoxAの野生型および変異体番号64(M51I)およびペグ化BoxAおよびペグ化BoxAの変異体番号64(M51I)のPKプロファイルを報告する。結果は平均値±誤差(SEM)として報告する(それぞれの時点に関して4匹のマウス、二連で分析)。
以下の表中に、BoxAの野生型、BoxAの変異体番号64、ペグ化BoxAの野生型およびペグ化BoxAの変異体番号64の曲線に関する計算上のAUClast(最後の実験地点で計算した曲線下の領域)を報告する。
3.6 考察
突然変異によって野生型に与えられたAUClastの相対利得は、1.68X(野生型対64)であり、これはサブキュート(sub cute)区画における高いプロテアーゼ耐性による可能性が最も高い。ペグ化によって野生型に与えられたAUClastの相対利得は31X(野生型対PEG-野生型)であり、これは主に阻害されたPEG複合体の腎臓濾過だけでなく、プロテアーゼ作用からの保護にも原因がある。まとめて考えると、突然変異およびペグ化は37X(野生型対PEG-64)のAUClastの相対利得をもたらす。予想外に、この2つの修飾は1つになって、1つ修飾の貢献度の合計より優れた、タンパク質への動物の曝露に対するプラスの効果がある(すなわち、37X>1.68X+31X)。したがって、単一の点突然変異およびペグ化は、天然タンパク質の薬物動態プロファイルに対して相乗的、協同的効果がある。この現象について考えられる説明は、ペグ化タンパク質はsub cute区画においてタンパク質分解から完全には保護されないということであり得る。単一の点突然変異の導入はこの区画における耐性を高め、より多量のタンパク質が血液循環中に入り、したがっての大きなPEG鎖によって腎臓濾過から保護されるのを可能にする。
突然変異によって野生型に与えられたAUClastの相対利得は、1.68X(野生型対64)であり、これはサブキュート(sub cute)区画における高いプロテアーゼ耐性による可能性が最も高い。ペグ化によって野生型に与えられたAUClastの相対利得は31X(野生型対PEG-野生型)であり、これは主に阻害されたPEG複合体の腎臓濾過だけでなく、プロテアーゼ作用からの保護にも原因がある。まとめて考えると、突然変異およびペグ化は37X(野生型対PEG-64)のAUClastの相対利得をもたらす。予想外に、この2つの修飾は1つになって、1つ修飾の貢献度の合計より優れた、タンパク質への動物の曝露に対するプラスの効果がある(すなわち、37X>1.68X+31X)。したがって、単一の点突然変異およびペグ化は、天然タンパク質の薬物動態プロファイルに対して相乗的、協同的効果がある。この現象について考えられる説明は、ペグ化タンパク質はsub cute区画においてタンパク質分解から完全には保護されないということであり得る。単一の点突然変異の導入はこの区画における耐性を高め、より多量のタンパク質が血液循環中に入り、したがっての大きなPEG鎖によって腎臓濾過から保護されるのを可能にする。
Claims (2)
- ヒトHMGB1高親和性結合ドメインBox-A(HMGB1のBox-A)またはHMGB1のBox-Aの生物活性断片のポリペプチド変異体のポリマー複合体の、自己免疫疾患、全身性炎症反応症候群、皮膚疾患及び神経疾患からなる群から選択される病状を予防、軽減または治療するための医薬品を製造するための使用であって、
前記ポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号64によって規定され、
前記生物活性断片は少なくとも77または少なくとも54のアミノ酸の断片であり、それぞれ配列番号170または配列番号248で規定されるアミノ酸配列を含み、
前記ポリマー部分が、HMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体またはその生物活性断片と共有結合している、メトキシ-ポリエチレングリコール(m-PEG)であり、
HMGB1のBox-Aのポリペプチド変異体または生物活性断片上の結合部位が、リシン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、チロシン、セリン、スレオニン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸残基またはN末端アミノ基から選択され、
前記ポリマー部分は、10,000〜40,000Daの範囲の分子量を有する、使用。 - 炎症性サイトカインカスケードの初期メディエーターを阻害することができるさらなる作用物質と組み合わせた、請求項1に記載の使用であって、
さらなる作用物質が、
(i) TNF、IL-1α、IL-1β、IL-Ra、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-18、IFN-γ、MIP-1α、MIF-1β、MIP-2、MIFおよびPAFからなる群から選択されるサイトカインのアンタゴニストまたは阻害剤;
(ii) RAGEに対する抗体、RAGE発現を阻害することができる核酸または核酸類似体、例えばアンチセンス分子、リボザイムまたはRNA干渉分子、またはRAGEもしくは可溶性RAGE(sRAGE)とのHMGB1相互作用の合成小分子アンタゴニスト;
(iii) トール様受容体(TLR)、特にTLR2、TLR4、TLR7、TLR8または/およびTLR9とHMGB1の相互作用の阻害剤、好ましくはモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、TLR発現を阻害することができる核酸もしくは核酸類似体、例えばアンチセンス分子、リボザイムもしくはRNA干渉分子、または1000ダルトン未満のサイズを有する合成分子
から特に選択される、使用。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06019362.0 | 2006-09-15 | ||
EP06019362 | 2006-09-15 | ||
US90477607P | 2007-03-05 | 2007-03-05 | |
US60/904,776 | 2007-03-05 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015139496A Division JP2015193646A (ja) | 2006-09-15 | 2015-07-13 | HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017200930A true JP2017200930A (ja) | 2017-11-09 |
Family
ID=38969804
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009527748A Pending JP2010503630A (ja) | 2006-09-15 | 2007-09-14 | HMGB1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
JP2015139496A Pending JP2015193646A (ja) | 2006-09-15 | 2015-07-13 | HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
JP2017113232A Pending JP2017200930A (ja) | 2006-09-15 | 2017-06-08 | HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009527748A Pending JP2010503630A (ja) | 2006-09-15 | 2007-09-14 | HMGB1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
JP2015139496A Pending JP2015193646A (ja) | 2006-09-15 | 2015-07-13 | HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8546547B2 (ja) |
EP (1) | EP2068935B8 (ja) |
JP (3) | JP2010503630A (ja) |
AU (1) | AU2007296843C1 (ja) |
CA (1) | CA2663300C (ja) |
HK (1) | HK1134779A1 (ja) |
HR (1) | HRP20110487T1 (ja) |
IL (1) | IL197441A (ja) |
MX (1) | MX2009002820A (ja) |
PL (1) | PL2068935T3 (ja) |
WO (1) | WO2008031612A1 (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9919010B2 (en) | 2008-04-30 | 2018-03-20 | Genomix Co., Ltd. | Method for collecting functional cells in vivo with high efficiency |
US20120165244A1 (en) * | 2008-10-30 | 2012-06-28 | Hua-Lin Wu | Methods for binding lewis y antigen |
JP5467313B2 (ja) * | 2009-09-28 | 2014-04-09 | 国立大学法人 岡山大学 | アテローム動脈硬化抑制剤 |
CN101691580B (zh) * | 2009-09-28 | 2012-02-15 | 中国人民解放军第三军医大学 | 人HMGB1 A box和酸性尾端的新型融合蛋白及其应用 |
CN102711777B (zh) | 2009-10-28 | 2015-04-15 | 吉诺米克斯股份有限公司 | 利用骨髓间充质干细胞和/或多能干细胞的血中动员的组织再生促进剂 |
US20110123483A1 (en) * | 2009-11-23 | 2011-05-26 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Hmgb1 for cancer treatment |
US8981025B2 (en) | 2011-02-10 | 2015-03-17 | Corning Incorporated | Polymerizable catonic peptide monomers and polymers |
PT3358011T (pt) | 2011-04-26 | 2020-04-23 | Univ Osaka | Péptido para induzir a regeneração de um tecido e a sua utilização |
WO2014016417A1 (en) | 2012-07-26 | 2014-01-30 | Ospedale San Raffaele Srl | Hmgb1 variants and uses thereof |
GB201508337D0 (en) | 2015-05-15 | 2015-06-24 | Hmgbiotech S R L | Novel peptides |
US11274132B2 (en) | 2015-12-11 | 2022-03-15 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Combined preparations of PKM2 modulators and HMGB1 |
BR112019014921A2 (pt) | 2017-01-27 | 2020-03-31 | StemRIM Inc. | Agente terapêutico para miocardiopatia, infarto antigo do miocárdio e insuficiência cardíaca crônica |
US11298403B2 (en) | 2017-12-01 | 2022-04-12 | StemRIM Inc. | Therapeutic agent for inflammatory bowel disease |
JP2022504139A (ja) * | 2018-10-05 | 2022-01-13 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | バイオフィルムの除去のためのhmgb1タンパク質誘導体 |
CN113423466A (zh) * | 2018-10-25 | 2021-09-21 | 国立大学法人大阪大学 | 软骨病症的治疗剂 |
US11684653B2 (en) * | 2019-03-06 | 2023-06-27 | The Cleveland Clinic Foundation | Compositions and method for reducing virulence of microorganisms |
CN114829368B (zh) | 2019-12-18 | 2024-06-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 通过使用连续标记方案的合成进行测序的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002527491A (ja) * | 1998-10-16 | 2002-08-27 | バイオジェン インコーポレイテッド | インターフェロン−β−1aのポリマー結合体および使用 |
WO2004091517A2 (en) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Smithkline Beecham Corporation | Conjugates comprising human il-18 and substitution mutants thereof |
WO2006024547A2 (en) * | 2004-09-03 | 2006-03-09 | Creabilis Therapeutics S.P.A. | Protease resistant human and non-human hmgb1 box-a mutants and their therapeutic/diagnostic use |
JP2006510619A (ja) * | 2002-11-20 | 2006-03-30 | クリティカル セラピューティクス,インコーポレイテッド | 抗炎症剤としてのhmgb断片の使用 |
WO2006069220A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2524586B2 (ja) * | 1985-06-26 | 1996-08-14 | シタス コーポレイション | ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化 |
GEP20063916B (en) | 2001-02-01 | 2006-09-11 | Biogen Idec Inc | Polymer conjugates of neublastin and methods of using same |
ITMI20010562A1 (it) | 2001-03-16 | 2002-09-16 | Marco E Bianchi | Inibitori o antagonisti della proteina hmg1 per il trattamento di disordini vascolari |
US20030060410A1 (en) * | 2001-05-15 | 2003-03-27 | North Shore Long Island Jewish Research Institute | Use of HMG fragments as anti-inflammatory agents |
MXPA05006688A (es) | 2002-12-19 | 2006-02-22 | Nektar Therapeutics Al Corp | Conjugados de polimero con una variante de cianovirina. |
EP1814576A2 (en) * | 2004-07-20 | 2007-08-08 | Critical Therapeutics, Inc. | Combination therapies of hmgb and complement inhibitors against inflammation |
SI1919979T2 (sl) | 2005-08-25 | 2017-07-31 | Creabilis Therapeutics S.P.A. | Polimerni konjugati K-252A in njihovi derivati |
-
2007
- 2007-09-14 WO PCT/EP2007/008029 patent/WO2008031612A1/en active Application Filing
- 2007-09-14 PL PL07818168T patent/PL2068935T3/pl unknown
- 2007-09-14 JP JP2009527748A patent/JP2010503630A/ja active Pending
- 2007-09-14 MX MX2009002820A patent/MX2009002820A/es active IP Right Grant
- 2007-09-14 CA CA2663300A patent/CA2663300C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-09-14 EP EP07818168A patent/EP2068935B8/en not_active Revoked
- 2007-09-14 US US12/441,478 patent/US8546547B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-09-14 AU AU2007296843A patent/AU2007296843C1/en not_active Ceased
-
2009
- 2009-03-05 IL IL197441A patent/IL197441A/en active IP Right Grant
- 2009-12-18 HK HK09111955.1A patent/HK1134779A1/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-07-01 HR HR20110487T patent/HRP20110487T1/hr unknown
-
2012
- 2012-12-27 US US13/728,455 patent/US9707298B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-07-13 JP JP2015139496A patent/JP2015193646A/ja active Pending
-
2017
- 2017-04-28 US US15/581,358 patent/US20170304398A1/en not_active Abandoned
- 2017-06-08 JP JP2017113232A patent/JP2017200930A/ja active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002527491A (ja) * | 1998-10-16 | 2002-08-27 | バイオジェン インコーポレイテッド | インターフェロン−β−1aのポリマー結合体および使用 |
JP2006510619A (ja) * | 2002-11-20 | 2006-03-30 | クリティカル セラピューティクス,インコーポレイテッド | 抗炎症剤としてのhmgb断片の使用 |
WO2004091517A2 (en) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Smithkline Beecham Corporation | Conjugates comprising human il-18 and substitution mutants thereof |
WO2006024547A2 (en) * | 2004-09-03 | 2006-03-09 | Creabilis Therapeutics S.P.A. | Protease resistant human and non-human hmgb1 box-a mutants and their therapeutic/diagnostic use |
WO2006069220A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1134779A1 (en) | 2010-05-14 |
AU2007296843B2 (en) | 2012-02-23 |
CA2663300C (en) | 2014-10-07 |
JP2010503630A (ja) | 2010-02-04 |
HRP20110487T1 (hr) | 2011-08-31 |
IL197441A (en) | 2013-07-31 |
IL197441A0 (en) | 2009-12-24 |
EP2068935B8 (en) | 2011-09-14 |
US20090324677A1 (en) | 2009-12-31 |
AU2007296843A1 (en) | 2008-03-20 |
EP2068935B1 (en) | 2011-04-13 |
PL2068935T3 (pl) | 2011-11-30 |
US8546547B2 (en) | 2013-10-01 |
US9707298B2 (en) | 2017-07-18 |
JP2015193646A (ja) | 2015-11-05 |
US20170304398A1 (en) | 2017-10-26 |
CA2663300A1 (en) | 2008-03-20 |
MX2009002820A (es) | 2009-06-04 |
EP2068935A1 (en) | 2009-06-17 |
AU2007296843C1 (en) | 2012-08-16 |
WO2008031612A1 (en) | 2008-03-20 |
US20140065094A1 (en) | 2014-03-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2017200930A (ja) | HMBG1のBox−AおよびHMGB1のBox−A変異体のポリマー複合体 | |
US7635679B2 (en) | Protease resistant mutant of human HMGB1 high affinity binding domain Box-A (HMGB1 Box-A) | |
Cambier et al. | The chemokines CXCL8 and CXCL12: molecular and functional properties, role in disease and efforts towards pharmacological intervention | |
Aboye et al. | Design of a novel cyclotide-based CXCR4 antagonist with anti-human immunodeficiency virus (HIV)-1 activity | |
EP1768677B1 (en) | Nucleic acids for the treatment of hmgb1-related pathologies | |
US20180360977A1 (en) | Interleukin-15 Compositions and Uses Thereof | |
BRPI0613332A2 (pt) | isoformes de fator estimulante de colÈnia granulocìtica humana | |
US20230201355A1 (en) | Il-2 sequences and uses thereof | |
CN101528266B (zh) | Hmgb1的a盒和hmgb1的a盒变体的聚合体缀合物 | |
CA3189715A1 (en) | Glycosylated il-2 proteins and uses thereof | |
KR20110039274A (ko) | 기능화 폴리펩티드 | |
US10098960B2 (en) | Polymer conjugate | |
WO2001016166A2 (en) | Polypeptides, comprising il-6 ligand-binding receptor domains, and related nucleic acids, antibodies, compositions, and methods of use | |
ES2362244T3 (es) | Conjugados polímeros de la caja a de hmgb1 y variantes de la caja a de hmgb1. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180723 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181015 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190304 |