JP2017181423A - 肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット - Google Patents
肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017181423A JP2017181423A JP2016072476A JP2016072476A JP2017181423A JP 2017181423 A JP2017181423 A JP 2017181423A JP 2016072476 A JP2016072476 A JP 2016072476A JP 2016072476 A JP2016072476 A JP 2016072476A JP 2017181423 A JP2017181423 A JP 2017181423A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- skin
- nitrated
- index
- yellowing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 60
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 title claims description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 title abstract description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 96
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 96
- GIANIJCPTPUNBA-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-nitramidopropanoic acid Chemical compound [O-][N+](=O)N[C@H](C(=O)O)CC1=CC=C(O)C=C1 GIANIJCPTPUNBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims abstract description 9
- LLVUHQYJZJUDAM-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(2,4-dinitrophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O LLVUHQYJZJUDAM-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims abstract description 3
- OPOTYPXOKUZEKY-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-nitramido-3-phenylpropanoic acid Chemical compound [O-][N+](=O)N[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 OPOTYPXOKUZEKY-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 3
- DAWPREIESROKFQ-JTQLQIEISA-N (2s)-3-(1h-indol-3-yl)-2-nitramidopropanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)O)N[N+]([O-])=O)=CNC2=C1 DAWPREIESROKFQ-JTQLQIEISA-N 0.000 claims abstract description 3
- SAZOSDSFLRXREA-YFKPBYRVSA-N 3,5-dinitro-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC([N+]([O-])=O)=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 SAZOSDSFLRXREA-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 claims description 35
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 30
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 10
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 10
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 claims description 9
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 abstract description 15
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 87
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 42
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 41
- FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 3-nitro-L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 FBTSQILOGYXGMD-LURJTMIESA-N 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 11
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N Nitrogen dioxide Chemical compound O=[N]=O JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 3
- 235000019225 fermented tea Nutrition 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 108091006003 carbonylated proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 235000019224 Camellia sinensis var Qingmao Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000007339 Nerve Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- OMBRFUXPXNIUCZ-UHFFFAOYSA-N dioxidonitrogen(1+) Chemical compound O=[N+]=O OMBRFUXPXNIUCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007336 electrophilic substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 108091005996 glycated proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020333 oolong tea Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020339 pu-erh tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000007845 reactive nitrogen species Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
【解決手段】角層中に存在するニトロ化タンパクを指標とする肌の黄ぐすみ度を測定又は判定する方法。ニトロ化タンパクを指標とする肌の黄ぐすみを改善する素材をスクリーニングする方法であって、ニトロ化タンパクの分解率及び/又は残存率を指標とする方法。またニトロ化タンパクが、ニトロチロシンや3,5−ジニトロチロシン、ニトロトリプトファン、ニトロフェニルアラニン、2,4-ジニトロフェニルアラニンから選択される少なくとも1種以上を構成アミノ酸とする。
【選択図】なし
Description
発明者らは、以下の方法により黄ぐすみの原因が、角層中のタンパク質がニトロ化されることにより生成されるニトロ化タンパクであることを突き止めた。
事前に測定内容に同意を得た20、30、40、50代の女性(各4−5名)を被験者に、頬部の皮膚色を分光測色計(CM−700d、コニカミノルタ)にて測定し、頬部角層の採取を行った。角層の採取は、頬部に粘着テープ(スリーエム製)を接着し、角層を採取した。角層が接着したテープを約3 mm四方に細切し、溶出バッファー(100 mM Tris/HCl (pH 8.0)、140 mM NaCl、0.1% Tween−20、10 μg/mL アプロチニン、1 mM phenylmethylsulfonyL fluoride)が入ったチューブに混合した。この混合物を超音波処理することで、テープから角層タンパク質をバッファー中に溶出した。溶出溶液を新しいチューブに移して遠心操作を行い、上清を回収したものを角層抽出物サンプルとした。
角層抽出物サンプル中の3−ニトロチロシン量はNWLSSTM Nitrotyrosine ELISA(Northwest Life Science Specialities)を用いて定量し、角層抽出物サンプルのタンパク質量はBCA法にて定量した。3−ニトロチロシン量をタンパク質量で除したものを、角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量とした。
頬部の角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量と皮膚色の黄み(b*値)の関係について、ピアソンの相関関係の検定を行ったところ、これらに正の相関関係にあることが明らかとなり、角層にニトロ化タンパク質が多いほど、頬部の皮膚は黄色化することが強く示された(図1)。
このことから、ニトロ化タンパクを指標とするスクリーニング方法により選択された素材を使用すれば、肌の黄ぐすみを改善できることは勿論のこと、その素材の効果はより高い年齢層における肌の黄みの改善に期待出来ると言える。
本発明における「肌の黄ぐすみ度を測定又は判定する方法」は、角層中に含まれるニトロ化タンパク量を測定し、その量と過去の自分の角層中のニトロ化タンパクの量と比較したり、或いは予め収集した年齢別の角層中のニトロ化タンパクの量の分布(例えば、図1等)と比較することにより肌の黄ぐすみ度を測定又は判定することができる。
本発明における「肌の黄ぐすみを改善する素材をスクリーニングする方法」においては、ニトロ化タンパクと被験物質とを混合する前後のニトロ化タンパクの量を指標にすることによって、黄ぐすみを改善する効果のある素材をスクリーニングすることができる。
本発明における「評価キット」は、上記評価方法を用いたキットである。
本発明においては、ニトロ化タンパクと被験素材を混合する順番やタイミングは問わない。両者が試験系中で共存するタイミングがあればよい。
化合物ではなく、テープストリッピングや研磨材等により収集した角層や、ケラチノサイト等の培養細胞であっても良い。このようなものでも、ニトロ化タンパク含有物として使用することができる。
予めニトロ化されたタンパクでなくても、タンパク質或いはタンパク質含有物をニトロ化物にしてから使用することもできる。この場合、アルブミンやカゼイン、スキムミルク等のタンパク質試薬等を用いることができる。
ニトロ化方法としては、硝酸で化学的にニトロ化してもよいし、ペルオキシナイトライト等の活性窒素種によってニトロ化させてもよいし、ミエロペルオキシダーゼ(MPO)とNaNO2、過酸化水素等と混合し、活性窒素種を発生させてニトロ化させてもよい。ニトロ化自体は公知の手法を用いることができる。
従って、ニトロ化タンパクの量そのものを測定することで指標としてもよいし、ニトロ化タンパク中、実際にニトロ化されている構成アミノ酸の量を測定することで指標としてもよいし、ニトロ基そのものを指標とすることもできる。
ニトロ化タンパクの減少率、分解率、残存率等を指標とすることができる。ニトロ化タンパクの減少率、分解率を指標とする場合は、その率が高いほどニトロ化タンパクを分解する効果が高い素材を選択することができ、ニトロ化タンパクの残存率を指標とする場合は、その率が低いほどニトロ化タンパクを分解効果が高い素材を選択することができる。ニトロ化されている構成アミノ酸を指標とする場合、ニトロ基そのものを指標とする場合も同様である。
(1) 皮膚からテープストリッピング又は研磨材等を用いて角層を採取する。
(2) 採取した角層を溶出バッファーに溶出する。
(3) 前記溶出物から遠心分離器等を用いて角層と溶出物とを分離し、上清を角層抽出サンプルとする。
(4) 角層抽出サンプル中の3−ニトロチロシンの量をNWLSSTM Nitrotyrosine ELISA(Northwest Life Science Specialities)を用いて定量し、角層抽出物サンプルのタンパク質量はBCA法にて定量する。
(5) 3−ニトロチロシン量をタンパク質量で除したものを、角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量とする。
(6) 得られたニトロチロシンの量を過去の自己の角層中のニトロチロシン量や、年代別の角層中のニトロチロシン量のグラフ(図1)等と比較することで肌の黄ぐすみ度を測定、黄ぐすみ度の判定を行う。
更に詳しくは、段落0017〜0018に記載の方法に準じて行うことができる。
(1) 皮膚からテープストリッピング又は研磨材等を用いて角層を採取する。
(2) 採取した角層を溶出バッファーに溶出する。
(3) 前記溶出物から遠心分離器等を用いて角層と溶出物とを分離し、上清を角層抽出サンプルとする。
(4) 角層抽出サンプル中の3−ニトロチロシンの量をNWLSSTM Nitrotyrosine ELISA(Northwest Life Science Specialities)を用いて定量し、角層抽出物サンプルのタンパク質量はBCA法にて定量する。
(5) 3−ニトロチロシン量をタンパク質量で除したものを、当初の角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量とする。
(6) 前記角層サンプルに植物抽出物等の被験物質を混合する。
(7) 一定時間混合後、当該混合物中の3−ニトロチロシンの量を前記同様に測定し、試験後の角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量とする。
(8) 当初の角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量と試験後の角層タンパク質あたりの3−ニトロチロシン量を比較し、ニトロ化タンパクの量の変化から分解度や減少度として算出する。
(9) 目的に応じて、ニトロ化タンパクの量を減少させる素材を有効素材として選別する。
更に詳しくは、段落0017〜0018に記載の方法に準じて行うことができる。
尚、ニトロ化タンパクを構成する芳香族アミノ酸のニトロ化物を使用する場合は、上記方法の内、角層サンプルに換えて芳香族アミノ酸のニトロ化物にすることでスクリーニングを行うことができる。
<ニトロ化タンパク分解活性試験>
ニトロ化タンパク構成アミノ酸である3−ニトロチロシンをPBSに溶解し、0.005%(w/v)の濃度の溶液を調製した。PBSまたは3−ニトロチロシン溶液を96 well-plateに250 μLずつ分注し、被験物質および対照物質を各wellに終濃度が100 ppmになるよう添加した。37℃で72時間インキュベートしたのち、プレートリーダーにて450 nmの吸光度を測定した。
一方、後発酵茶である碁石茶抽出物は、ニトロ化タンパクの1種である3−ニトロチロシン分解率は20%を超えた。以上のことから、碁石茶抽出物には、ニトロ化タンパクを分解する効果があることが示され、本発明のスクリーニング方法を利用することにより黄ぐすみを改善する素材を選択することが可能であることが分かった。
Claims (8)
- ニトロ化タンパクを指標とする肌の黄ぐすみ度を測定又は判定する方法。
- ニトロ化タンパクを指標とする肌の黄ぐすみを改善する素材をスクリーニングする方法。
- ニトロ化タンパクの分解率及び/又は残存率を指標とする請求項2記載の方法。
- ニトロ化タンパクが、ニトロチロシンや3,5−ジニトロチロシン、ニトロトリプトファン、ニトロフェニルアラニン、2,4-ジニトロフェニルアラニンから選択される少なくとも1種以上を構成アミノ酸とする請求項1乃至請求項3記載の方法。
- 芳香族アミノ酸のニトロ化物を指標とする肌の黄ぐすみ度を測定又は判定する方法。
- 芳香族アミノ酸のニトロ化物を指標とする肌の黄ぐすみを改善する素材をスクリーニングする方法。
- 芳香族アミノ酸のニトロ化物の分解率及び/又は残存率を指標とする請求項2記載の方法。
- 請求項1乃至請求項7記載の方法を用いた評価キット。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016072476A JP6474752B2 (ja) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | 肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016072476A JP6474752B2 (ja) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | 肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017181423A true JP2017181423A (ja) | 2017-10-05 |
JP6474752B2 JP6474752B2 (ja) | 2019-02-27 |
Family
ID=60005995
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016072476A Active JP6474752B2 (ja) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | 肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6474752B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021156731A (ja) * | 2020-03-27 | 2021-10-07 | 株式会社ナリス化粧品 | 角層の水分保持能評価方法 |
JP2021162359A (ja) * | 2020-03-30 | 2021-10-11 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP2022046795A (ja) * | 2020-03-30 | 2022-03-23 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP2022064914A (ja) * | 2020-03-30 | 2022-04-26 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008120774A (ja) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | Koei Kogyo Kk | 美肌用皮膚外用剤 |
JP2012032287A (ja) * | 2010-07-30 | 2012-02-16 | Shiseido Co Ltd | 真皮黄色化の評価モデル |
JP2013133303A (ja) * | 2011-12-27 | 2013-07-08 | Noevir Co Ltd | アドバンスド・グリケーション・エンド・プロダクツ産生抑制剤 |
-
2016
- 2016-03-31 JP JP2016072476A patent/JP6474752B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008120774A (ja) * | 2006-11-13 | 2008-05-29 | Koei Kogyo Kk | 美肌用皮膚外用剤 |
JP2012032287A (ja) * | 2010-07-30 | 2012-02-16 | Shiseido Co Ltd | 真皮黄色化の評価モデル |
JP2013133303A (ja) * | 2011-12-27 | 2013-07-08 | Noevir Co Ltd | アドバンスド・グリケーション・エンド・プロダクツ産生抑制剤 |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2021156731A (ja) * | 2020-03-27 | 2021-10-07 | 株式会社ナリス化粧品 | 角層の水分保持能評価方法 |
JP7024003B2 (ja) | 2020-03-27 | 2022-02-22 | 株式会社ナリス化粧品 | 角層の水分保持能評価方法 |
JP2021162359A (ja) * | 2020-03-30 | 2021-10-11 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP7024004B2 (ja) | 2020-03-30 | 2022-02-22 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP2022046795A (ja) * | 2020-03-30 | 2022-03-23 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP2022064914A (ja) * | 2020-03-30 | 2022-04-26 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP7263573B2 (ja) | 2020-03-30 | 2023-04-24 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
JP7263574B2 (ja) | 2020-03-30 | 2023-04-24 | 株式会社ナリス化粧品 | 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6474752B2 (ja) | 2019-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6474752B2 (ja) | 肌の黄ぐすみ改善素材のスクリーニング方法及び評価キット | |
Deshmukh et al. | Proteomics-based comparative mapping of the secretomes of human brown and white adipocytes reveals EPDR1 as a novel batokine | |
Boselli et al. | An inhibitor of the proteasomal deubiquitinating enzyme USP14 induces tau elimination in cultured neurons | |
Husom et al. | Altered proteasome function and subunit composition in aged muscle | |
HD iPSC Consortium http://orcid. org/0000-0001-6156-5046 Kedaigle Amanda J Fraenkel Ernest Atwal Ranjit S Wu Min Gusella James F MacDonald Marcy E Kaye Julia A Finkbeiner Steven Mattis Virginia B Tom Colton M Svendsen Clive King Alvin R Chen Yumay Stocksdale Jennifer T Lim Ryan G Casale Malcolm Wang Ping H Thompson Leslie M Akimov Sergey S Ratovitski Tamara Arbez Nicolas Ross Christopher A caross@ jhu. edu | Bioenergetic deficits in Huntington’s disease iPSC-derived neural cells and rescue with glycolytic metabolites | |
TW201702597A (zh) | 經稀釋之活體樣品成分之分析方法 | |
Uribarri | Dietary AGEs and their role in health and disease | |
US20210100777A1 (en) | Heat shock protein (hsp) inhibition and monitoring effectiveness thereof | |
CA2890040A1 (en) | Erythroferrone and erfe polypeptides and methods of regulating iron metabolism | |
Liu et al. | The reactivity of human serum albumin toward trans‐4‐hydroxy‐2‐nonenal | |
WO2008017303A2 (de) | Biomarker für leberentzündung | |
JP4563764B2 (ja) | ペプチドの定量方法 | |
Tupe et al. | Zinc inhibits glycation induced structural, functional modifications in albumin and protects erythrocytes from glycated albumin toxicity | |
Su et al. | Transglutaminase 3 promotes skin inflammation in atopic dermatitis by activating monocyte-derived dendritic cells via DC-SIGN | |
Zbären et al. | A novel functional mast cell assay for the detection of allergies | |
Lee et al. | A pathogen‐derived metabolite induces microglial activation via odorant receptors | |
Lee et al. | Non-invasive proteomic analysis of human skin keratins: screening of methionine oxidation in keratins by mass spectrometry | |
Malard et al. | Analytical constraints for the analysis of human cell line secretomes by shotgun proteomics | |
Adeola et al. | No difference in the proteome of racially and geometrically classified scalp hair sample from a South African cohort: Preliminary findings | |
Acosta et al. | Unbiased characterization of the senescence-associated secretome using SILAC-based quantitative proteomics | |
Shimode et al. | Hair protein glycation reduces hair breaking strength | |
Carrette et al. | Age‐related proteome analysis of the mouse brain: a 2‐DE study | |
Min et al. | First detection of free D-amino acids in human nails by combination of derivatization and UPLC-ESI-TOF-MS | |
Imami et al. | Quantitative proteome and phosphoproteome analyses of cultured cells based on SILAC labeling without requirement of serum dialysis | |
EP3498286A1 (en) | Bleomycin hydrolase production promotor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180319 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20181026 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181113 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190108 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190129 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190130 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6474752 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |